KR20200145383A - 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 - Google Patents
정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 조성물은 오메가-7 및 홍삼 복합물을 유효성분으로 함에 따라 우수한 피부 개선 효과를 나타냄을 특징으로 한다. 본 발명에 따른 피부 상태 개선용 조성물은 정제어유 유래 오메가-7 및 사포닌, 다당체 등을 유효성분으로 함유하는 홍삼을 최적화된 농도로 포함하여, 높은 안정성을 기반으로 피부 보습도 개선, 피부보호 장벽 개선 및 산화적 스트레스에 의한 세포손상 저해 효과를 가져 미세먼지와 같은 외부 자극에 의한 피부의 손상에 대하여 종합적인 피부 상태 개선 효과를 발휘한다. 뿐만 아니라, 항산화, 항염증, 피부 탄력 및 주름 개선 효과를 가지고 있어 우수한 피부 노화 억제 효과를 나타낸다. 본 발명에 따른 조성물은 종합적으로 근본적인 피부 상태 개선 효과를 나타냄에 따라 식품, 건강기능식품, 식품 첨가물 및 화장품 등으로 다양하게 활용될 것으로 기대된다.
Description
본 발명은 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부 상태 개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 조성물은 오메가-7 및 홍삼 복합물을 유효성분으로 함에 따라 우수한 피부 개선 효과를 나타냄을 특징으로 한다.
피부는 인체의 대부분을 차지하며 체온조절, 분비, 배설, 흡수 등의 다양한 작용을 하고, 특히 인체의 최외부에 존재함으로써 외부로부터 물리적, 화학적, 생물학적으로 인체를 보호하는 기능을 가진다. 피부는 표피, 진피, 피하지방으로 이루어져 있으며, 표피는 인체의 외부와 내부로부터 방어작용을 하고, 진피는 피부의 탄력 및 지지 역할, 피하지방은 체온을 유지하는 기능을 가진다.
피부는 또한 다양한 물리적 및 화학적 외부 자극으로부터 우리 몸을 보호하는 첫 번째 장벽으로 중요한 역할을 하고 있다. 피부는 표피, 진피 및 피하 조직으로 이루어져 있으며, 표피는 주로 각화 세포로 구성되어있다. 이 각화 세포는 자외선, 환경 독소, 열과 같은 외부 자극에 민감한데(Fisher, Kang et al. 2002), 특히 자외선에 의한 자극은 H2O2를 발생시켜 세포 내 산화스트레스의 증가를 야기한다(Halliwell and Gutteridge 1985, Ozben 2007). 그 결과, 피부 재생 단백질과 피부 탄력 단백질의 발현이 감소하여 주름 형성을 촉진시키고 피부 노화를 촉진시킨다(Talwar, Griffiths et al. 1995).
콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소는 노화방지 및 상처개선에 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되거나 자외선 조사에 의해 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한 콜라겐을 분해하는 기질 금속 단백질 분해 효소의 발현이 감소되면 상처가 잘 아물지 않게 된다.
한편, 활성 산소종은 산소분자가 호흡과정을 통해 불완전하게 환원되어 생기는 매우 활성이 높은 중간산물로, 여러 신호전달 과정을 변경하여 유전자 발현, 세포흡착, 물질대사, 세포주기, 세포사멸에 영향을 주는 것으로 알려져 있으며, 활성 산소종이 유도하는 신호전달에는 MAPK(mitogen-activated protein kinase), NF-κB(nuclear factor-κB), PI3K(phosphatidylinositol 3-kinase), p53, β-catenin/Wnt를 매개로 하는 신호전달이 알려져 있다. 최근, 활성 산소종에 의한 인체 내 손상을 보호하는 항산화를 통한 노화방지에 대한 연구가 다양하게 이루어지고 있다.
껍질을 벗기지 않은 인삼을 증기로 찐 뒤 건조하여 숙성하는 과정을 반복해 가공한 것을 홍삼(Korean red ginseng)이라 말한다. 홍삼은 중추신경에 대해 진정 및 흥분작용을 나타내며, 순환계에 작용하여 고혈압 또는 동맥경화에 대한 예방효과를 나타낸다. 이에 더해 조혈작용과 혈당을 저하시키며, 간의 보호, 내분비계에 작용해 성행동이나 생식효과에 간접적인 유효 작용을 하며, 항염 또는 항종양작용까지 있고, 피부를 보호하고 부드럽게 하는 효과도 있다고 알려져 있다.
홍삼은 사포닌이라는 생리활성물질을 30여종이나 포함하고 있으며, 이 중 진세노사이드(ginsenoside) Rb1, Rb2, Rh1, Rh2, Rg2, Rg3, Rg5 및 Rf 등의 홍삼 특유의 14종 성분은 뛰어난 약리효과를 나타낸다고 알려져 있다. 사포닌은 카테콜아민(Cartecholamine)의 분비를 촉진시키며, 지질의 과산화 과정을 저해하는 항산화 활성을 지니며 배양세포에서의 돌연변이 및 세포변형에 대한 감소 효과 외에도 방사선 방어효과, 알킬화에 의한 염색체 이상 또는 미세핵의 방어효과가 있음이 보고된 바 있다. 또한, 홍삼은 사포닌 뿐 아닌 다당체, 탄수화물, 질소화합물, 폴리아세틸렌, 페놀산 및 비타민 등의 많은 생리활성물질을 포함하고 있다.
잘 먹고 잘사는 웰빙(well-being) 트렌드에 부응하여, 상기와 같이 보호, 탄력 및 지지역할을 하는 피부에 이용하기 위한 건강기능식품 및 화장품은 선택이 아닌 필수 요소로서 부가가치가 높은 산업으로 자리 잡아가고 있고, 고품질의 제품을 선호하는 현상이 두드러지고 있다.
이에, 피부상태를 개선하기 위한 물질로서 레티노익산(retinoic acid), 동물 태반 유래의 단백질 등을 이용하여 콜라겐 합성을 촉진하고자 하는 시도가 있었으나, 레티노익산은 불안정하여 제형화하기 어려울 뿐만 아니라 안정성의 측면에서 제한이 있고, 동물 태반 유래 단백질은 광우병에 걸린 소의 적출물을 사용할 수 있다는 치명적인 단점이 있다.
따라서, 본 발명자들은 피부 상태를 개선시킬 수 있는 물질을 발견하고자 많은 연구를 수행한 끝에, 정제어유로부터 획득한 오메가-7과 홍삼을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물이 우수한 피부상태 개선 효과를 가짐을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부상태 개선용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부상태 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부상태 개선용 식품 첨가물을 제공한다.
또한, 본 발명은 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부상태 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 피부 상태 개선용 조성물은 정제어유 유래 오메가-7 및 사포닌, 다당체 등을 유효성분으로 함유하는 홍삼을 최적화된 농도로 포함하여, 높은 안정성을 기반으로 피부 보습도 개선, 피부보호 장벽 개선 및 산화적 스트레스에 의한 세포손상 저해 효과를 가져 미세먼지와 같은 외부 자극에 의한 피부의 손상에 대하여 종합적인 피부 상태 개선 효과를 발휘한다. 뿐만 아니라, 항산화, 항염증, 피부 탄력 및 주름 개선 효과를 가지고 있어 우수한 피부 노화 억제 효과를 나타낸다. 본 발명에 따른 조성물은 종합적으로 근본적인 피부 상태 개선 효과를 나타냄에 따라 식품, 건강기능식품, 식품 첨가물 및 화장품 등으로 다양하게 활용될 것으로 기대된다.
도 1은 오메가-7과 홍삼 단독, 복합에서 세포 독성이 없음을 확인한 도이다.
도 2는 피부손상 개선 평가 시스템 및 HaCaT 세포(피부 각질형성세포)를 사용하여 오메가-7과 홍삼 단독, 복합에서 엘라스타제(Elastase) / 콜라게나제(Collagenase) 저해활성 및 MMP-1, MMP-3 생성능 확인 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 오메가-7과 복합물 소재로 선정된 홍삼의 최적 배합비를 선정하기 위해 배합비를 달리한 각 실험군에서 엘라스타제(Elastase) / 콜라게나제(Collagenase) 저해활성 및 MMP-1, MMP-3 생성능을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명에 따른 조성물(오메가-7 및 홍삼을 3:7로 혼합)의 세포 독성을 확인한 도이다.
도 5는 DPPH 및 HaCaT 세포주에서의 ROS, SOD, GSH 변화량을 통하여 본 발명에 따른 조성물의 항산화 효과를 확인한 도이다. 구체적으로, 도 5a는 DPPH에 관한 결과, 도 5b는 ROS에 관한 결과, 도 5c는 SOD에 관한 결과, 도 5d는 GSH에 관한 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 염증 사이토카인 발현 변화를 통하여 본 발명에 따른 조성물의 항염증 효과를 확인한 도이다. 구체적으로, ELISA 분석법을 통한 IL-1β(도 6a) 및 TNF-α(도 6b)의 농도 변화를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 염증성 인자 관련 단백질 발현 변화를 통하여 본 발명에 따른 조성물의 항염증 효과를 나타낸 도이다. 구체적으로, 웨스턴 블롯을 통해 COX-2(도 7a) 및 PGE2(도 7b)의 염증인자 발현량 변화를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명 조성물의 피부재생인자 활성 효과를 확인한 도이다. 구체적으로, 웨스턴 블롯 분석을 통한 MMP-1(도 8a), MMP-3(도 8b), PCOLA1(도 8c) 및 Elastin(도 8d)의 발현량 변화 확인 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 피부손상 개선 평가 시스템 및 HaCaT 세포(피부 각질형성세포)를 사용하여 오메가-7과 홍삼 단독, 복합에서 엘라스타제(Elastase) / 콜라게나제(Collagenase) 저해활성 및 MMP-1, MMP-3 생성능 확인 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 오메가-7과 복합물 소재로 선정된 홍삼의 최적 배합비를 선정하기 위해 배합비를 달리한 각 실험군에서 엘라스타제(Elastase) / 콜라게나제(Collagenase) 저해활성 및 MMP-1, MMP-3 생성능을 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 본 발명에 따른 조성물(오메가-7 및 홍삼을 3:7로 혼합)의 세포 독성을 확인한 도이다.
도 5는 DPPH 및 HaCaT 세포주에서의 ROS, SOD, GSH 변화량을 통하여 본 발명에 따른 조성물의 항산화 효과를 확인한 도이다. 구체적으로, 도 5a는 DPPH에 관한 결과, 도 5b는 ROS에 관한 결과, 도 5c는 SOD에 관한 결과, 도 5d는 GSH에 관한 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 염증 사이토카인 발현 변화를 통하여 본 발명에 따른 조성물의 항염증 효과를 확인한 도이다. 구체적으로, ELISA 분석법을 통한 IL-1β(도 6a) 및 TNF-α(도 6b)의 농도 변화를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 염증성 인자 관련 단백질 발현 변화를 통하여 본 발명에 따른 조성물의 항염증 효과를 나타낸 도이다. 구체적으로, 웨스턴 블롯을 통해 COX-2(도 7a) 및 PGE2(도 7b)의 염증인자 발현량 변화를 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명 조성물의 피부재생인자 활성 효과를 확인한 도이다. 구체적으로, 웨스턴 블롯 분석을 통한 MMP-1(도 8a), MMP-3(도 8b), PCOLA1(도 8c) 및 Elastin(도 8d)의 발현량 변화 확인 결과를 나타낸 도이다.
본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
본 발명은 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부상태 개선용 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 용어 “오메가-7”은 사슬 말단에서 7번째 탄소에 이중결합 하나를 가지는 단일 불포화지방산으로 본 명세서에서 상기 오메가-7은 이에 제한되지는 않으나 정제어유로부터 수득한 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, “정제어유”는 고도 불포화 지방산을 다량 함유하고 있는 어유(魚油, Fish oil)로 정제된 것을 의미하며, 상기 정제어유는 산자나무(sea buckthorn) 열매 오일에서 일반적으로 수득할 수 있는 것보다 오메가-7을 더 많은 양으로 포함하는 것이 특징이다.
본 발명에 있어서, 상기 정제어유는 정제어유(생선기름)이면 제한 없이 사용할 수 있으나, 바람직하게는 상기 정제어유는 정제된 폴락 오일(refined pollock oil)일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서는 상기 정제어유로 7-MEGATM 500(알래스카 정제어유)을 사용하고 있으며, 상기 7-MEGATM 500의 주요 성분은 팔미톨레산(Palmitoleic acid, PLA)로 팔미톨레산이 총 중량의 50 내지 60 중량부를 차지하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 “오메가-7”은 오메가-7 함유 정제어유의 형태로 상기 조성물에 포함되는 것을 특징으로 한다. 상기 정제어유는 오메가-7 외에 올레산(Oleic acid, 오메가-9), 리놀렌산(α-Lenoleic acid, ALA, 오메가-3), DHA(오메가-3)와 같은 그 외 불포화 지방산을 더 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명은 상기 오메가-7 외에 복합 소재로서 홍삼을 더 포함하는 것을 특징으로 한다. 즉, 본 발명은 오메가-7 및 홍삼을 복합물로 포함하여 오메가-7 및 홍삼의 조합에 따른 시너지 효과로서의 우수한 피부 상태 개선 효과를 가지는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 오메가-7 및 홍삼은 1:9 내지 9:1(w/w)의 중량비로 혼합될 수 있고, 바람직하게는 2:8 내지 8:2(w/w)의 중량비로 혼합될 수 있고, 보다 바람직하게는 2:8 내지 5:5(w/w)의 중량비로 혼합될 수 있고, 가장 바람직하게는 3:7(w/w)의 중량비로 혼합될 수 있으나, 이에 본 발명이 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 실시예에서는, 오메가-7 및 홍삼을 3:7(w/w) 중량비로 혼합하는 경우 엘라스타제(Elastase), 콜라게나제(Collagenase) 저해 활성이 다른 중량비로 혼합한 군에 비하여 현저히 높음을 확인하여, 오메가-7 및 홍삼을 혼합한 복합물의 시너지 효과로서 피부 개선 효과를 최대화할 수 있는 최적 비율을 확인하였다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 “홍삼”은 수삼을 정선하여 망상조직인 껍질을 벗기지 않은 채 증기로 쪄서 건조시킨 담황갈색 또는 담적갈색의 인삼을 의미하고, 수십 종의 진세노사이드로 분류되는 사포닌과 다당체 단백질을 유효성분으로 한다. 본 발명에 있어서 용어 “홍삼”은 상기 유효성분을 포함하는 홍삼 추출물, 홍삼 농축물 또는 홍삼 분말을 모두 포함하는 개념이다.
본 발명에 있어서, 상기 홍삼 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급알코올, 에틸아세테이트, 아세톤, 부틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜, 메틸렌클로라이드, 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 추출한 것일 수 있다. 상기 추출물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 예컨대, 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 감압 농축기, 건조는 동결건조법 등을 수행할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 홍삼 농축물은 홍삼을 물이나 주정 또는 물과 주정을 혼합한 물질과 같은 용매로 추출·여과한 가용성 홍삼 성분을 농축한 것을 말한다. 상기 홍삼 농축물은 액체 상태 및 고체, 구체적으로 분말 상태를 모두 포함하는 개념이다.
홍삼은 별다른 부작용이 없으며 그 효과로는 항암, 노화억제, 항당뇨, 항스트레스, 뇌기능 강화, 빈혈 회복 효과, 피로 회복, 혈행 개선, 간기능 보호, 위장 기능 강화, 면역기능 증진 및 소염 작용 등이 알려져 있다(김낙두 외, 고려인삼학회지 20(4) 416-430, 1996, 정노팔 외, 고려인삼학회지 20(4) 431-471, 1996). 알려져 있는 홍삼의 주요 성분으로는 배당체(glycosides), 폴리아세틸렌계 화합물, 인삼향 성분(panacen), 함질소 성분, 항산화물질, 플라보노이드, 비타민 B군효소, 유기산, 아미노산 및 미량원소 등이 있다.
본 발명에 있어서, 용어 “개선”은 조성물의 투여에 의해 피부상태가 개선, 보다 구체적으로 피부 보습도 개선, 피부보호 장벽 개선, 세포손상의 저해 또는 주름의 개수를 줄이거나 피부 표면이 보다 탄력성 있도록 하는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에 있어서, 용어 “피부상태 개선”은 피부 관능성 평가시 피부의 밝기, 투명도 등 피부 상태 전반에 대한 개선에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 피부 자극에 의한 피부 손상 억제나 피부 표면 막 개선에 의한 것, 주름 개선 또는 피부 노화 억제에 의한 것을 모두 포함한다.
본 발명에 있어서, 용어 “피부 자극에 의한 피부 손상 억제 또는 피부 표면막 개선”은 외부적 또는 내부적 요인에 의하여 피부의 진피를 포함한 전층에서 발생하는 피부 손상을 개선시키는 것을 말하며, 특히 피부의 표피로 나타내는 손상을 개선시키는 것을 말한다.
본 발명에 있어서, 용어 “주름 개선 또는 피부 노화 억제”는 피부가 쇠하여 생긴 잔줄을 억제시키거나 이의 발생을 지연시키고, 피부가 보다 탄력적으로 보이도록 하는 모든 행위를 의미하는 것으로, 항산화 또는 다양한 요인들에 의한 MMP-1, 콜라겐 또는 엘라스틴의 분해를 억제함으로써 주름 개수 또는 피부 탄력성 증가 효과를 가지는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 용어 “피부 자극”은 물리적 자극 또는 화학적 자극인 것을 모두 포함하는 개념으로, 보다 구체적으로 상기 물리적 자극은 전기적 자극, 기계적 자극, 열적 자극, 빛, 소리 등을 포함하고, 화학적 자극은 산, 알칼리, 화학물질 등에 의한 자극을 포함한다. 이에 본 발명에 있어서 피부 자극은 바람직하게는 화학적 자극일 수 있으며, 보다 바람직하게는 미세먼지 등에 포함되는 화학물질에 의한 자극인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 식품 조성물, 건강기능식품 조성물 또는 식품 첨가물인 것을 특징으로 할 수 있다. 즉, 본 발명은 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부 상태 개선용 식품 조성물, 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부 상태 개선용 건강기능식품 조성물 및 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부 상태 개선용 식품 첨가물을 제공한다.
본 발명에 있어서, “식품”이란 인간이 먹기 위하여 요리하거나 또는 그대로 먹을 수 있는 모든 재료를 총칭하며, 이에 건강기능식품, 식품첨가물 등이 포함된다.
본 발명에 있어서, “건강기능식품”은 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병 방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품으로, 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해하여야 한다.
본 발명에 있어서, “식품 첨가물”은 식품을 제조, 가공 또는 보존을 함에 있어 식품에 첨가, 혼합, 침윤, 기타의 방법으로 사용되는 물질에 관한 것으로, 건강기능식품과 같이 장기적으로 복용하였을 때 인체에 무해하여야 한다.
본 발명에 있어서, 상기 건강기능식품의 종류에 특별한 제한은 없다. 구체적으로, 본 발명의 조성물(오메가-7 + 홍삼)을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 특히 통상적인 의미에서의 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병 방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계된 식품을 모두 포함한다.
본 발명에 있어서, 상기 식품첨가물은 본 발명의 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물에는 식품학적으로 허용 가능한 다양한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
보다 구체적으로 상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 더 포함할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명에 따른 조성물은 화장료 조성물인 것을 특징으로 할 수 있다. 즉, 본 발명은 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 용어 “화장료”는 인체의 외관을 아름답게 하는 모든 물건을 포함하는 개념이다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 피부상태 개선 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 포함할 수 있으며, 더욱이, 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 물질 1종 이상을 더 포함할 수 있다. 구체적으로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속 이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부 과학 분야 에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가로 함유할 수 있다. 또한, 상기의 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 보다 구체적으로, 본 발명의 조성물은 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 유탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 마스크팩, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산 제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이, 페이스트, 팩, 세안제, 비누, 계면활성제 함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 목욕용 파우더, 유탁액 파운데이션, 왁스, 파운데이션 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말 (foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.
상기 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 포함될 수 있다.
상기 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 등이 포함될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄, 디메틸 에테르 등의 추진체를 포함할 수 있다.
상기 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로 용매, 용해화제, 유탁화제 등이 포함될 수 있고, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프 로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테 르 등이 포함될 수 있다.
상기 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올, 프로필렌글리콜 등의 액상 희석제; 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등의 현탁제; 미 소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라칸트 등이 포함될 수 있다.
상기 조성물의 제형이 계면활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시 네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄 올아미드, 식물성유, 라놀린유도체, 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 상기 예시로 제한되는 것은 아니며, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.01 내지 10% 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 내지 5% 중량 백분율로 배합된다.
중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생락하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예, 실험예 및 제조예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예, 실험예 및 제조예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
실시예 1. 오메가-7과의 최적 복합물 도출
오메가-7과의 최적 복합물을 도출하기 위하여 복합 소재로 홍삼을 선정하고 피부 개선 효과를 평가하였다. 오메가-7은 7-MEGATM 500(알래스카 정제어유; Organic technologies, 미국)을 사용하고 홍삼은 멸균증류수로 희석 후에 EtOH(94.5%)과 섞은 홍삼 농축물(한국인삼공사)을 사용하여 5:5 비율로 혼합하였다. 한편, 상기 7-MEGATM 500의 구체적인 구성성분 및 각 구성성분의 함량을 하기 표 1에 나타내었다.
[표 1]
최종 용적에 맞추어 용매를 채워준 뒤, 실린지 필터를 사용하여 여과 후 실험에 사용하였다. 대조군으로는 단독 오메가-7 또는 단독 홍삼을 동량으로 사용하였다.
실험예 1. 세포 독성 확인
XTT assay kit(Roche, Indianapolis, IN, USA) 분석을 통하여 각질형성세포인 HaCaT 세포주의 증식효과를 확인하여 오메가-7 및 홍삼의 세포 독성을 확인하였다. 상기 HaCaT 세포주는 American Type Culture Collection(ATCC, USA)에서 구매하여 실험을 진행하였고, 세포는 DMEM 배지, 10% 소태아혈청, 50 U/ml P/S (페니실린/스트렙토마이신)에서 37℃, 습도 95%, 5%의 CO2, CO2 인큐베이터(Sanyo, Japan) 조건 하에서 배양한 세포주를 실험에 사용하였다.
먼저, HaCaT 세포를 96-웰 플레이트에 1×104 세포/웰이 되도록 분주하고 24시간 동안 안정화한 후, 상기 실시예 1의 조성물을 100 μg/ml 농도로 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 배양이 끝난 후 50 ㎕의 XTT 용액을 각각의 웰에 첨가하고 4시간 배양 후 ELISA reader(Molecular Devices, CA, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 사멸 정도를 분석하였다. 그 결과는 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타낸 바와 같이, 오메가-7 및 홍삼 복합물(5:5)을 처리한 경우, 피부각질세포인 HaCaT 세포주에서 세포 독성이 나타나지 않음을 확인하였다.
실험예 2. 엘라스타제, 콜라게나제 저해활성 및 MMP-1, 3 활성 확인
2-1. 엘라스타제(Elastase) 저해활성
엘라스타제 저해활성 측정은 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 8.0) 용액 100 ㎕에 2mM N-succinyl-(Ala)3-p-nitroaniline을 20 ㎕씩 분주하고, 각 시료를 20 ㎕씩 가하여 수행하였다. 여기에 0.2U 엘라스타제 효소 20 ㎕를 분주한 후 반응액을 37℃에서 30분 동안 배양하여 410 nm에서 흡광도(Molecular Devices, CA, USA)를 측정하였다. 양성 대조군으로는 100 mg/ml/의 아스코르브산을 사용하였으며, 대조군은 시료 대신 버퍼 용액을 사용하였다. 저해활성도 계산은 inhibitory activity (%) = [1 - (sample-blank)] X 100으로 계산하였다.
그 결과, 도 2(상단 패널)에 나타낸 바와 같이, 오메가-7 및 홍삼 복합물(5:5)은 오메가-7 또는 홍삼 단독 처리시와 비교하여 엘라스타제 저해 활성이 현저히 우수함을 확인하였다.
2-2. 콜라게나제(Collagenase) 저해활성
0.1M Tris-HCl 버퍼(pH 7.5)에 4 mM CaCl2를 첨가하고, 4-phenylazoben zyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg(0.3 mg/ml)를 녹인 기질액 250 ㎕ 및 시료용액 100 ㎕의 혼합액에 콜라게나제(collagenase)(0.2 mg/ml) 150 ㎕를 첨가하여 실온에서 20분 간 방치한 후 6% 시트르산 500 ㎕을 넣어 반응을 정지시켰다. 그 후, 에틸 아세테이트 1.5 ml를 첨가하여 320 nm에서 형광분광광도계(BioSpectrometer fluorescence, Eppendorf)를 사용하여 측정하였다. 저해활성도 계산은 inhibitory activity (%) = [1 - (sample-blank)] X 100으로 계산하였다.
그 결과, 도 2(상단 패널)에 나타낸 바와 같이, 오메가-7 및 홍삼 복합물(5:5)은 오메가-7 또는 홍삼 단독 처리시와 비교하여 콜라게나제 저해 활성이 현저히 우수함을 확인하였다.
2-3. MMP-1과 MMP-3 활성
MMP(matrix metalloproteinase)는 세포외기질(extracellular matrix)과 기저막 분해에 관여하는 효소군으로써, MMP-1 또는 MMP-3은 콜라겐 분해와 관여하여 가장 중요하게 작용하는 것으로 알려져 있다. 따라서, MMP-1, MMP-3 발현 억제 분석을 통하여 본 발명에 따른 복합물의 주름개선 효과를 확인하고자 하였다. 구체적으로, HaCaT세포의 배양액에서 분비되는 MMP-1과 MMP-3의 양을 R&D system에서 구입한 ELISA kit을 이용하여 측정하였다. HaCaT 세포 배양액은 세포를 1×104 cells/웰의 밀도로 96-웰 플레이트에 분주하고 각 시료들을 처리하고 24시간 동안 배양한 후에 얻어진 것으로 배양액 100 ㎕를 넣고 실온에 2시간, 컨쥬게이트(conjugate)를 200 ㎕ 넣고 실온에서 2시간, 기질 용액(substrate solution) 200 ㎕를 넣고 실온에서 20분간 방치하였다. 각각의 과정 사이에 세척을 수행하였으며 마지막 단계에서는 세척하지 않은 채로 50 ㎕의 정지 용액(stop solution)을 넣고 450 nm에서 흡광도 (Molecular Devices, CA, USA)를 측정하였다.
그 결과, 도 2(하단 패널)에 나타낸 바와 같이, 오메가-7 및 홍삼 복합물(5:5)은 오메가-7 또는 홍삼 단독 처리시와 비교하여 MMP-1 및 MMP-3의 발현 저해 효과가 우수함을 확인하였다. 상기 결과를 통해, 오메가-7 및 홍삼 복합물은 내인성 또는 광노화에 의해 발생하는 피부조직 분해효소인 MMP-1 및 MMP-3의 생합성을 저해하여 피부노화를 억제하고 피부 주름 개선에 효과적임을 확인하였다.
실시예 2. 본 발명에 따른 오메가-7 및 홍삼 복합 조성물의 제조
상기 실시예 1 및 실험예 1 내지 2를 통해 홍삼이 오메가-7과의 최적 복합 소재가 될 수 있음을 확인하였다. 이에, 이번에는 실험을 통해 오메가-7과 홍삼의 최적 배합비를 도출하고자 하였다. 오메가-7과 홍삼의 최적 배합비를 도출하기 위하여 오메가-7 및 홍삼을 1:9 내지 9:1로 중량비를 달리하여 혼합하고(1:9, 3:7, 5:5, 7:3, 9:1), 각 혼합물에 대하여 엘라스타제, 콜라게나제 저해활성 및 MMP-1, MMP-3 저해활성을 측정하였다. 실험은 상기 실험예 2와 동일한 방법을 사용하여 수행하였다.
그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 모든 실험군에서 오메가-7 및 홍삼 혼합물은 엘라스타제, 콜라게나제 저해 활성 및 MMP-1, 3 활성이 우수한 것으로 나타났으며, 특히, 오메가-7:홍삼을 3:7 중량비로 혼합한 실험군에서 다른 실험군에 비해 저해활성이 현저히 높게 나타남을 확인하여 오메가-7:홍삼을 3:7로 혼합하는 것이 최적의 배합비임을 확인하였다. 이에, 이후 실험에서는 3:7로 혼합한 오메가-7 및 홍삼 복합물(이하, 본 발명의 조성물)을 사용하여 실험을 진행하였다.
실험예 3. 세포 독성 확인
오메가-7 및 홍삼을 3:7로 혼합한 본 발명의 조성물이 HaCaT 세포의 세포 생존률에 미치는 영향을 MTT assay 방법을 응용하여 측정하였다. HaCaT 세포에서의 증식 효과는 HaCaT 세포를 48-웰 플레이트에 2x105 cells/웰이 되도록 분주하고 시료를 각각 농도별로(5, 10, 50, 100 μg/ml) 처리한 뒤 control(CON)을 제외한 나머지 처리군에 H2O2를 처리하고 24시간 배양하였다. 그 후에 250 μg/ml MTT 용액을 첨가하여 4시간 동안 배양한 후 배양액을 제거하고 200 ㎕의 dimethyl sulfoxide를 가하여 10분간 실온에서 반응 후 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 조성물(오메가-7 및 홍삼의 3:7 복합물) 처리 농도 증가에 따라 농도 의존적으로 세포생존율이 증가함을 확인하였고, 100 μg/ml 처리 농도에서 H2O2 단독처리군 대비 세포생존율이 33% 증가됨을 확인하였다. 동일농도(100 μg/ml)의 홍삼 단독처리군과 비교할 때에는 세포생존율이 28% 증가함을 확인하였다. 상기 결과를 통해, 본 발명의 조성물은 산화적 스트레스에 의한 세포손상 저해 효과가 있고, 그 효과는 홍삼보다 뛰어남을 확인하였다.
실험예 4. 본 발명 조성물의 항산화 효과 확인
항산화 관련 인자, 즉 DPPH 자유 라디칼 소거능 및 HaCaT 세포주에서의 ROS, SOD, GSH의 농도 변화를 통한 본 발명 조성물의 우수한 항산화 효과를 확인하였다. 상기 HaCaT 세포주는 American Type Culture Collection(ATCC, USA)에서 구매하여 실험을 진행하였고, 세포는 DMEM 배지, 10% 소태아혈청, 50 U/ml P/S (페니실린/스트렙토마이신)에서 37℃, 습도 95%, 5%의 CO2, CO2 인큐베이터(Sanyo, Japan) 조건 하에서 배양한 세포주를 실험에 사용하였다.
4-1. DPPH(α, α-diphenyl-β-picrylhydrazyl) 자유라디칼 소거능
대표적인 항산화 지표로 널리 알려진 아스코르브산(비타민C, VitC, Asc)을 양성 대조군으로 하여 본 발명의 조성물의 농도를 1 mg/mL로 맞추었다. 이 후 상기 실험군 10 ㎕와 DPPH 용액(126 μg/mL) 90 ㎕를 섞은 후 상온에서 10분간 방치하여 배양하였으며, 517 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 5a에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 조성물은 아스코르브산 대비 46.83±2.19%의 DPPH 자유 라디칼 소거능을 가짐을 확인하였다. 또한, 동일농도(100 μg/ml)의 홍삼 단독처리군과 비교할 때에는 DPPH 자유라디칼 소거능이 33% 증가하는바, 본 발명의 복합처리군의 효과가 홍삼 단독처리군보다 뛰어남을 확인하였다.
4-2. ROS(reactive oxygen species) 저해 활성
HaCaT 세포를 48-웰 플레이트에 2×105 세포/웰이 되도록 분주하였다. 48시간 동안 배양한 후, 본 발명의 조성물을 처리하여 1시간 동안 배양하였고, 이 후 정상대조군(Vehicle)을 제외한 나머지 실험군에 1 mM H2O2를 처리하여 10분 동안 배양하였다. 이후, PBS와 DCFDA(2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate)를 5000:1로 희석시킨 용액을 배지와 동량으로 처리하여 20분 동안 반응시킨 후 형광발광량을 측정하였다.
그 결과, 도 5b에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 조성물 처리 농도 증가에 따라 농도 의존적으로 ROS 생성이 감소되는 경향을 보이며, 100 μg/ml 농도에서 H2O2 단독처리군 대비 ROS 발현이 34% 감소함을 확인하였다. 동일농도(100 μg/ml)의 홍삼 단독처리군과 비교할 때에는 ROS 감소능이 24% 증가함을 확인하였다. 상기 결과를 통해, 산화적 스트레스로 인하여 증가하는 것으로 알려진 ROS의 농도가 본 발명의 조성물의 처리에 의하여 농도 의존적으로 유의성 있게 감소하며, 그 효과는 홍삼 단독처리군보다 뛰어남을 확인하였다.
4-3. SOD(Superoxide Dismutase) 증가 활성
HaCaT 세포를 세포배양용 플레이트(SPL사, 100 cm2)에 5×106 세포/ml가 되도록 분주하였다. 48시간 동안 배양한 후, 본 발명의 조성물을 처리하였고, 이 후 정상대조군(Vehicle)을 제외한 나머지 실험군에 1 mM H2O2를 처리한 후 48시간 동안 배양하였다. 그 후 세포 분쇄액이 희석된 완충액을 샘플로 하여 샘플 10 ㎕에 radical detector 200 ㎕, 잔틴 산화효소(Xanthine oxidase) 20 ㎕를 넣고 상온에서 30분 동안 반응시킨 후, 440~460 nm 범위에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 5c에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 조성물 처리 농도 증가에 따라 농도 의존적으로 SOD 발현이 증가하는 경향을 보이며, 100 μg/ml 농도에서 H2O2 단독처리군 대비 SOD 발현이 29% 증가됨을 확인하였다. 동일농도(100 μg/ml)의 홍삼 단독처리군과 비교할 때에는 SOD 발현이 26% 증가함을 확인하였다. 상기 결과를 통해, 항산화 방어기작으로 발현이 증가하는 SOD가 본 발명의 조성물에 의하여 증가하며, 그 효과는 홍삼 단독처리군보다 뛰어남을 확인하였다.
4-4. GSH(Glutathione) 증가 활성
HaCaT 세포를 세포배양용 플레이트(SPL사, 100 cm2)에 5×106 세포/ml이 되도록 분주하였다. 48시간 동안 배양한 후, 본 발명의 조성물을 처리하였고, 이 후 정상대조군(Vehicle)을 제외한 나머지 실험군에 1 mM H2O2를 처리한 후 48시간 동안 배양하였다. 그 후 세포 분쇄액이 희석된 완충액을 샘플로 하여 샘플 50 ㎕에 MES 버퍼, 보조인자 믹스(cofactor mixture), 효소 믹스, DTNB를 혼합한 반응 버퍼(reaction buffer) 150 ㎕를 넣고 암실에서 가볍게 섞어준 후, 30분 이내로, 405~414 nm 범위에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 5d에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 조성물 처리 농도 증가에 따라 농도 의존적으로 GSH 발현이 증가하는 경향을 보이며, 100 μg/ml 농도에서 H2O2 단독처리군 대비 GSH 발현이 23% 개선됨을 확인하였다. 동일농도(100 μg/ml)의 홍삼 단독처리군과 비교할 때에는 GSH 발현이 23% 증가함을 확인하였다. 상기 결과를 통해, 항산화 방어기작으로 발현이 증가하는 GSH가 본 발명의 조성물에 의하여 증가하며, 그 효과는 홍삼 단독처리군보다 뛰어남을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 본 발명의 조성물은 항산화 효과가 우수하며, 오메가 7 및 홍삼의 시너지 효과에 의해 단독물질 처리 시보다 그 효과가 뛰어남을 확인하였다.
실험예 5. 본 발명 조성물의 항염증 효과 확인
5-1. IL-1β, TNF-α 저해 활성
ELISA 키트를 이용하여 HaCaT 세포에서 분비되는 항염증 인자, 즉 IL-1β, TNF-α의 농도 변화를 통한 본 발명 조성물의 우수한 항염증 효과를 확인하였다. 상기 HaCaT 세포주는 ATCC에서 구매하여 실험을 진행하였고, 세포는 DMEM 배지, 10% 소태아혈청, 50 U/ml P/S(페니실린/스트렙토마이신)에서 37℃, 습도 95%, 5%의 CO2, CO2 인큐베이터(Sanyo, Japan) 조건 하에서 배양한 세포주를 실험에 사용하였다.
구체적으로, 우선 상기 HaCaT 세포를 2×105 세포/웰의 농도로 분주하여 배양하였다. 24시간 동안 배양한 후, 본 발명의 조성물을 100 nl/ml 농도로 처리하였고, 이후 정상대조군(Vehicle)을 제외한 나머지 실험군에 1 mM H2O2를 처리한 후, 24시간 동안 배양하였다. HaCaT 세포 배양액을 샘플로 하여 IL-1β 및 TNF-α 생성량을 측정 하였다.
IL-1β 및 TNF-α 생성량은 인간 IL-1β ELISA 키트(Abcam, Cambridge, MA)와 인간 TNF-α ELISA 키트 (Abcam, Cambridge, MA)를 이용하여 수행하였다. 구체적으로, 96-웰 플레이트에 차례대로 HaCaT 세포 배양액 100 ㎕를 넣고 실온에서 2시간 30분 동안 배양하였다. 이 후 바이오틴으로 표지된 IL-1β 및 TNF-α 검출 항체(각 항체는 키트에서 제공하는 항체를 사용)를 100 ㎕ 첨가한 후 1시간 동안 배양하였다. 이후, 상기 배양물을 세척한 후, HRP-스트렙타비딘 용액 100 ㎕를 첨가하였으며, 추가적으로 실온에서 30분간 배양하였다. 이 후 50 ㎕의 정지 용액(stop solution)을 첨가한 후, 450 nm의 흡광도에서 실험 결과를 측정하였다. TNF-α에 대한 결과는 도 6a에 나타내었고, IL-1β에 대한 결과는 도 6b에 나타내었다.
도 6a 및 도 6b에 나타낸 바와 같이, H2O2에 의한 활성산소 증가로 인하여 염증반응이 일어나며, 본 발명의 조성물 처리 농도 증가에 따라 농도 의존적으로 TNF-α, IL-1β의 농도가 감소하고, 100 μg/ml 농도에서 H2O2 단독처리군 대비 TNF-α, IL-1β 저해 활성이 각각 46%, 33% 증가함을 확인하였다. 동일농도(100 μg/ml)의 홍삼 단독처리군과 비교할 때에는 TNF-α, IL-1β 저해 활성이 각각 25%, 12% 증가함을 확인하였다. 상기 결과를 통해, 본 발명의 조성물이 우수한 항염증 효과를 가짐을 확인하였다.
5-2. COX-2, PGE2 저해 활성
웨스턴 블로팅을 통해 염증인자인 COX-2, PGE2 단백질 발현량을 측정하여 본 발명 조성물의 항염증 활성을 확인하고자 하였다. HaCaT 세포를 5×106 cell/ml의 농도로 10% FBS를 첨가한 DMEM 배양액에 분주한 후, 세포를 12시간 동안 안정화시켰다. 세포에 시료를 처리한 후 1시간 동안 유지하고, H2O2 (1mM) 처리 또는 자외선조사를 진행한 후, 10% FBS가 함유된 DMEM 배지와 함께 24시간 배양하였다. 배양한 세포에 RIPA 버퍼를 처리하고, 4℃, 15,000 RPM, 15분의 조건으로 원심분리하였다. 분리한 단백질 샘플은 아크릴아마이드 젤(acrylamide gel) 8-12%에서 전기영동 후 PVDF(Polyvinylidene Difluoride) 막에 옮기고, 실온에서 블로킹 버퍼(PBS-T에 5% 탈지분유)를 사용하여 블로킹한 뒤 COX-2, PGE2를 1:1,000 비율로 희석하여 4℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 반응이 끝나면, 세척 후 실온에서 2차 항체와 1시간동안 반응시킨 후, SWDED 기질(Supersignal West Dura extended duration substrate; Thermo, Rockford, CA, USA)을 사용한 화학발광 방법(Chemi Imager analyzer system; Alpha Innotech, San Leandro, CA, USA)을 통하여 결과를 확인하였다.
그 결과, 도 7a에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 조성물을 처리한 경우, 처리 농도가 증가할수록 COX-2의 발현량이 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보이며, 50~100 μg/ml 농도 범위에서 H2O2 단독처리군 대비 유의하게 발현이 저해됨을 확인하였다. 100 μg/ml 농도에서는 H2O2 단독처리군 대비 COX-2 발현이 55% 감소함을 확인하였다.
또한, 도 7b에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 조성물을 처리한 경우 처리 농도가 증가할수록 PGE2의 발현량이 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보이며, 100 μg/ml 농도에서 H2O2 단독처리군 대비 유의하게 발현이 저해됨을 확인하였다. 100 μg/ml 처리 농도에서는 H2O2 단독처리군 대비 PGE2 발현이 79% 감소함을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 본 발명의 조성물은 산화적 스트레스에 의한 항염증 인자(COX-2, PGE2)의 단백질 발현을 현저히 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.
5-3. MMP-1, MMP-3 저해 활성 및 PCOLA1, Elastin 증가 활성
웨스턴 블로팅을 통해 HaCaT 세포에서 분비되는 단백질인 MMP-1, MMP-3, PCOLA1(프로콜라겐 유형 1), Elastin(엘라스틴)의 발현량을 측정하여 본 발명 조성물의 우수한 피부 탄력 및 주름 개선 효과를 확인하고자 하였다. 본 실험은 COX-2 및 PGE2에 대한 항체를 사용하는 것 대신, MMP-1, 프로콜라겐 유형 1(PCOLA1) 및 엘라스틴에 대한 항체(cell signalling)를 사용하여 실험을 수행한 것 외에는 상기 실험예 5-2와 동일한 방식으로 수행하였다. 그 결과를 도 8에 나타내었다.
도 8a 및 8b에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 조성물을 처리한 경우 처리 농도가 증가할수록 MMP-1, MMP-3의 발현량이 농도 의존적으로 감소하는 경향을 보이며, 100 μg/ml 처리 농도에서 H2O2 단독처리군 대비 각각 74%, 48% 감소됨을 확인하였다. 홍삼 단일처리군과 비교할 때에는 MMP-1, MMP-3 발현 저해 효과가 각각 19%, 16% 높은 것으로 확인하였다.
또한, 도 8c 및 8d에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 조성물을 처리한 경우 처리 농도가 증가할수록 PCOLA1, Elastin의 발현량이 농도 의존적으로 증가하는 경향을 보이며, 100 μg/ml 처리 농도에서 H2O2 단독처리군 대비 각각 44%, 59% 증가함을 확인하였다. 홍삼 단일처리군과 비교할 때에는 PCOLA-1, Elastin 발현 증가 효과가 각각 17%, 14% 높은 것으로 확인하였다.
상기 결과를 통해, H2O2에 의한 활성산소 증가로 인하여 염증반응이 발생한 세포에 본 발명의 조성물을 처리하는 경우 상기 화학적 자극에 의해 발생한 MMP-1, MMP-3의 발현 수준이 현저히 감소하고, 피부에서 콜라겐을 합성하고 피부 탄성 유지 역할을 하는 PCOLA1, Elastin의 수준이 현저하게 증가함을 확인하였다. 이는 본 발명의 조성물이 피부 탄력 및 주름 개선 효과를 가지고 있어, 종합적으로 피부 상태를 개선시키는 효과를 가짐을 나타낸다.
상기 실험 결과는 Student's t-test와 ANOVA를 동시에 수행하여 나타낸 것이며, p값이 0.05 미만일 경우, 통계학적으로 유의성이 있다고 판정하였다.
상기 결과를 통해, 본 발명의 조성물은 높은 안정성을 기반으로 하여, 오메가-7과 홍삼을 혼합함에 따른 시너지 효과로서 피부 보습도, 피부보호장벽 개선, 산화적 스트레스에 의한 세포손상 저해 효과를 가져 미세먼지와 같은 외부 자극에 의한 피부의 손상에 대하여 종합적인 피부 상태 개선 효과를 가짐을 확인하였다. 뿐만 아니라, 본 발명의 조성물은 상기 효과들과 더불어 항산화, 항염증 효과, 피부 탄력 및 주름 개선 효과를 가지고 있어, 우수한 피부 노화 억제 효과를 가진다. 이에 따라 본 발명의 조성물은 단순한 식품부터 건강기능식품 및 화장품 등으로 다양하게 활용할 수 있다.
이하 본 발명의 조성물을 포함하는 식품 조성물 및 화장료 조성물의 제제예를 설명한다.
제제예 1. 식품 제제의 제조
1. 건강식품의 제조
본 발명의 조성물 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 g
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 g
비타민 C 10 mg
비오틴 10 g
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 g
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
2. 건강음료의 제조
본 발명의 조성물 100 mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3 g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85 에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
제제예 2. 화장료 제제의 제조
1. 유연화장수 제조
본 발명의 조성물 0.1중량%
1,3-부틸렌글리콜 5.2중량%
올레일알코올 1.5중량%
에탄올 3.2중량%
폴리솔베이트 20 3.2중량%
벤조페논-9 2.0중량%
카르복실비닐폴리머 1.0중량%
글리세린 3.5중량%
미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 유연화장수를 제조하였다.
2. 밀크로션 제조
본 발명의 조성물 0.1중량%
글리세린 5.1중량%
프로필렌글리콜 4.2중량%
토코페릴아세테이트 3.0중량%
유동파라핀 4.6중량%
트리에탄올아민 1.0중량%
스쿠알란 3.1중량%
마카다미아너트오일 2.5중량%
폴리솔베이트 60 1.6중량%
솔비탄세스퀴롤레이트 1.6중량%
프로필파라벤 0.6중량%
카르복실비닐폴리머 1.5중량%
미량의 향, 미량의 방부제, 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 밀크로션을 제조하였다.
3. 영양크림 제조
본 발명의 조성물 0.5중량%
글리세린 4.0중량%
바셀린 3.5중량%
트리에탄올아민 2.1중량%
유동파라핀 5.3중량%
스쿠알란 3.0중량%
밀납 2.6중량%
토코페릴아세테이트 5.4중량%
폴리솔베이트 60 3.2중량%
카르복실비닐폴리머 1.0중량%
솔비탄세스퀴올레이트 3.1중량%
미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 영양크림을 제조하였다.
4. 마사지크림 제조
본 발명의 조성물 0.5중량%
글리세린 4.0중량%
바셀린 3.5중량%
트리에탄올아민 0.5중량%
유동파라핀 24.0중량%
스쿠알란 3.0중량%
밀납 2.1중량%
토코페릴아세테이트 0.1중량%
폴리솔베이트 60 2.4중량%
카르복실비닐폴리머 1.0중량%
솔비탄세스퀴올레이트 2.3중량%
미량의 향, 미량의 방부제 및 잔량의 정제수를 혼합하여 통상의 방법으로 마사지크림을 제조하였다.
Claims (11)
- 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부 상태 개선용 건강기능식품 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 오메가-7 및 홍삼은 1:9 내지 9:1(w/w)의 중량비로 혼합되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 오메가-7 및 홍삼은 2:8 내지 8:2(w/w)의 중량비로 혼합되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 오메가-7 및 홍삼은 2:8 내지 5:5(w/w)의 중량비로 혼합되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 오메가-7은 오메가-7 함유 정제어유의 형태로 상기 조성물에 포함되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제5항에 있어서,
상기 정제어유는 정제된 폴락 오일(refined pollock oil)인 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 피부상태 개선은 피부 자극에 의한 피부 손상 억제 또는 피부 표면막 개선에 의한 것인, 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 피부 자극은 물리적 자극 또는 화학적 자극인 것을 특징으로 하는, 조성물.
- 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부 상태 개선용 식품 첨가물.
- 정제어유 유래 오메가-7 및 홍삼을 포함하는 피부 상태 개선용 화장료 조성물.
- 제10항에 있어서, 상기 조성물은 마스크팩, 유연 화장수, 영양 화장수, 겔, 크림, 에센스, 에멀전, 팩, 세안제 및 목욕용 파우더로 구성된 군으로부터 선택된 제형인 것인, 조성물.
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한방안이비인후피부과학회지 제27권 제3호 (통권 57호), 106_114쪽. * |
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