KR20200038672A

KR20200038672A - 피부에 대한 플라즈마 처리와 엑소좀 처리를 병용한 피부 상태의 개선 방법

Info

Publication number: KR20200038672A
Application number: KR1020180118172A
Authority: KR
Inventors: 조병성; 김광일; 이용원
Original assignee: 주식회사 엑소코바이오
Priority date: 2018-10-04
Filing date: 2018-10-04
Publication date: 2020-04-14

Abstract

본 발명은 (a) 포유동물의 피부에 플라즈마를 분사하는 단계와, (b) 상기 플라즈마 분사 전 또는 후에, 상기 플라즈마 분사 대상이 되는 포유동물의 피부에 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물을 적용하는 단계를 포함하는 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법을 제공한다. 본 발명의 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법은 피부에 대한 플라즈마 분사와 함께 엑소좀을 피부에 처리하여 플라즈마로 인한 부작용을 완화 내지 정상 상태로 회복시키면서 플라즈마에 의한 피부 상태 개선의 시너지 효과를 가져오는 장점이 있다.

Description

피부에 대한 플라즈마 처리와 엑소좀 처리를 병용한 피부 상태의 개선 방법 {Method for improving skin condition by spraying and penetrating plasma into skin along with treating exosomes onto skin}

본 발명은 피부에 대한 플라즈마 처리와 엑소좀 처리를 병용한 피부 상태의 개선 방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 피부에 대한 플라즈마 분사와 함께 엑소좀을 피부에 처리하여 플라즈마로 인한 부작용을 완화 내지 정상 상태로 회복시키면서 플라즈마에 의한 피부 상태 개선의 시너지 효과를 가져오는 방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 전술한 바와 같은 방법을 이용하여, 치료용을 제외한 포유동물 피부의 상태를 조절하는 미용방법 또는 피부질환 치료방법에 관한 것이다.

얼굴이나 신체 등의 외모에 대한 관심이 증가함에 따라 피부 상태를 개선하고 외모의 부족한 부분을 보완하고자 하는 미용 수요가 늘어나고 있다. 특히, 피부 주름이나 그 밖의 피부 외관 상태를 개선하고 피부질환을 치료하는 것을 목적으로 하는 코스메틱 시술에 대한 관심이 높아지고 있다. 최근에는 노령층의 증가에 따라 피부 노화를 방지하고 피부 재생을 도와주는 항노화 기술이 주목을 받고 있다.

기체 상태의 물질에 에너지를 더 가해주면 전자가 원자나 분자에서 떨어져 나와 전자와 양이온들이 독립적으로 존재하는 플라즈마 상태가 된다. 플라즈마 내에는 양이온, 음이온, 전자 및 중성입자들이 동시에 존재하는 것이 일반적이다. 플라즈마는 물질의 제4상태라고도 불린다. 플라즈마에는 예컨대 옥시-, 하이드록실-, 및 질소 라디칼, 전자적으로 여기된 원자나 분자, 및 자외선(UV) 광자, 이온, 라디칼 등의 화학적 활성종이 포함되어 있으며 이들은 전기장을 따라 운동한다. 또한, 플라즈마는 온도적 특성에 따라 고온 플라즈마와 저온 플라즈마로 나뉜다. 저온 플라즈마는 강력한 침투력과 과산화수소 증기를 생성하는 특징이 있다.

현재, 플라즈마는 살균 뿐만아니라 피부 상태 개선을 위해 사용되고 있다. 피부에 대한 플라즈마의 주기적 처리는 피부 세포를 자극시켜 진피층의 콜라겐을 증가시키고, VEGF의 분비 증대로 인해 신생혈관들이 피부세포들의 영양공급을 담당하여 노화 방지 효과를 나타낼 수 있다. 예를 들어, 에너지 조절이 쉬운 질소 가스에 고주파 에너지를 통과시켜 고에너지의 플라즈마 가스를 형성한 뒤 기계를 통해 피부에 분사하여 피부 내에 직접적인 열에너지를 전달하는 방식으로 진피 부위에 새로운 콜라겐 재생을 유도할 수 있다. 이러한 원리를 이용하여 플라즈마는 피부재생, 피부주름 제거, 검버섯, 잡티 등의 제거, 광선 각화증의 치료에 사용되고 있다.

그러나, 플라즈마 장치의 전력 전극과 접지 전극 사이에 방전을 수행하여 생성된 플라즈마를 피부에 분사할 때 피부에 전기적 화상을 줄 수 있고, 레이저, 초음파, 고주파 시술과 마찬가지로 플라즈마 시술 역시 통증 발생, 염증후 과색소침착 등의 부작용이 발생할 수 있다.

한편, 최근 세포 분비물(secretome)에 세포의 행동(behavior)을 조절하는 다양한 생체활성인자가 포함되어 있다는 연구가 보고되고 있으며, 특히 세포 분비물 내에는 세포 간 신호전달 기능을 갖는 '엑소좀(exosome)'이 포함되어 있어 그 성분과 기능에 대한 연구가 활발히 진행 중에 있다.

세포는 세포외 환경에 다양한 막(membrane) 유형의 소포체를 방출하는데, 통상 이러한 방출 소포체들을 세포외 소포체(Extracellular vesicles, EV)라고 부르고 있다. 세포외 소포체는 세포막 유래 소포체, 엑토좀(ectosomes), 쉐딩 소포체(shedding vesicles), 마이크로파티클(microparticles), 엑소좀 등으로 불려지기도 하며, 경우에 따라서는 엑소좀과는 구별되어 사용되기도 한다.

엑소좀은 세포막의 구조와 동일한 이중인지질막으로 이루어진 수십 내지 수백 나노미터 크기의 소포체로서 내부에는 엑소좀 카고(cargo)라고 불리는 단백질, 핵산(mRNA, miRNA 등) 등이 포함되어 있다. 엑소좀 카고에는 광범위한 신호전달 요소들(signaling factors)이 포함되며, 이들 신호전달 요소들은 세포 타입에 특이적이고 분비세포의 환경에 따라 상이하게 조절되는 것으로 알려져 있다. 엑소좀은 세포가 분비하는 세포 간 신호전달 매개체로서 이를 통해 전달된 다양한 세포 신호는 표적 세포의 활성화, 성장, 이동, 분화, 탈분화, 사멸(apoptosis), 괴사(necrosis)를 포함한 세포 행동을 조절한다고 알려져 있다. 엑소좀은 유래된 세포의 성질 및 상태에 따라 특이적인 유전물질과 생체활성 인자들이 포함되어 있다. 증식하는 줄기세포 유래 엑소좀의 경우 세포의 이동, 증식 및 분화와 같은 세포 행동을 조절하고, 조직 재생과 관련된 줄기세포의 특성이 반영되어 있다(Nature Review Immunology 2002 (2) 569-579).

그러나 엑소좀을 이용한 특정 질환의 치료에 대한 가능성 제시 등 다양한 연구가 이루어지고 있음에도 불구하고, 엑소좀을 안정적으로 유지·보관할 수 있는 새로운 제형 개발과 엑소좀의 사용 편의성 및 효능 증대 등을 위한 다양한 의료 내지는 미용기술과의 접목은 상대적으로 주목받고 있지 못하고 있다.

본 발명자들은 엑소좀의 새로운 응용분야 및 의료 내지는 미용기술과의 접목에 대해 예의 연구를 거듭하던 중, 피부에 대한 플라즈마 분사와 함께 엑소좀을 피부에 처리하면 플라즈마로 인한 부작용을 완화 내지 정상 상태로 회복시키면서 플라즈마에 의한 피부 상태 개선 효과에 대한 시너지 효과가 있는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

한편, 상기한 배경기술로서 설명된 사항들은 본 발명의 배경에 대한 이해 증진을 위한 것일 뿐, 본 발명의 "선행 기술"로서 이용될 수 있다는 승인으로서 인용한 것은 아님을 이해하여야 한다.

대한민국 등록특허공보 제10-1407672호 (2014.06.13) 대한민국 등록특허공보 제10-1822916호 (2018.01.31)

본 발명의 목적은 피부에 대한 플라즈마 처리와 엑소좀 처리를 병용한 피부 상태의 개선 방법을 제공하는데 있다. 예를 들어, 본 발명의 목적은 피부에 대한 플라즈마 분사와 함께 엑소좀을 피부에 처리하여 플라즈마로 인한 부작용을 완화 내지 정상 상태로 회복시키면서 플라즈마에 의한 피부 상태 개선의 시너지 효과를 가져오는 방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 전술한 바와 같은 방법을 이용하여, 치료용을 제외한 포유동물 피부의 상태를 조절하는 미용방법 또는 피부질환 치료방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 방법들에 적합한 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물, 엑소좀의 동결건조 제제, 및 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물이 도포되거나 침적된 마스크팩, 마스크시트 또는 패취와 이온토포레시스 디바이스를 포함하는 엑소좀 키트를 제공하는데 있다.

그러나, 전술한 바와 같은 본 발명의 과제는 예시적인 것으로, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 포유동물의 피부에 플라즈마를 분사하는 단계와, 상기 플라즈마 분사 전(前), 상기 플라즈마 분사 동안, 또는 상기 플라즈마 분사 후(後), 상기 플라즈마 분사 대상이 되는 피부에 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 조성물을 적용하는 단계를 포함하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 피부 상태의 개선 방법을 이용하여, 치료용을 제외한 포유동물 피부의 상태를 조절하는 미용방법 또는 피부질환 치료방법을 제공한다.

본 명세서에서 용어, "플라즈마 분사"란 플라즈마 가스를 형성한 후 형성된 플라즈마 가스를 피부에 분사하여 피부 내에 직접적인 열에너지를 전달하고 이를 통해 진피 부위에 새로운 콜라겐을 생성시켜 피부의 외관 및/또는 느낌에 있어 시각적 및/또는 촉각적으로 지각할 수 있는 긍정적인 변화를 가져오게 하는 작업을 의미한다. 본 발명을 제한하지 않는 예시로서, 피부 트리트먼트에서 플라즈마 분사는 피부 재생, 주름 제거 또는 개선, 흉터 제거, 피부 텍스쳐(skin texture) 개선, 일광손상 제거 또는 개선, 검버섯, 잡티 등의 색소 제거, 미백 등을 목적으로 수행된다.

본 명세서에서 용어, "피부 상태의 개선"이란 피부의 외관 및/또는 느낌에 있어 시각적 및/또는 촉각적으로 지각할 수 있는 긍정적인 변화로서, 피부 조직 재생을 포함하며, 예를 들어 노화와 관련된 피부 상태를 개선하거나 피부 노화를 예방하거나, 또는 피부 상태가 병적 상태인 것을 완화, 개선 내지는 정상 상태로 회복시켜 주는 것을 포함한다. 본 발명을 한정하지 않는 예시로서, "피부 상태의 개선"은 피부처짐, 피부 주름, 피부 탄력감소, 잔주름, 주름살, 거칠고 깊은 주름, 균열, 융기(bumps) 및 모공 확대 등의 완화, 개선 또는 제거; 피부의 두꺼워짐 감소(예를 들어, 피부의 표피층, 진피층, 피하층, 손발톱 및 모간의 각질층 제거); 기능성 피부 엘라스틴의 손실, 손상 및/또는 불활성화로 인한 피부 또는 모발 탄력성 손실의 방지; 셀룰라이트의 감소; 창백함, 기미, 주근깨, 잡티, 피부, 모발 또는 손발톱에 대한 변색, 예를 들어 흑자, 눈밑 다크서클, 홍반, 점, 까페오레반점, 베커반점, 오타모반, 색소성 모반, 표피모반, 멜라닌 색소반점, 색소침착, 모세혈관 확장증 또는 거미상 혈관에 의해 야기된 변색 등의 완화, 개선 또는 제거; 피부 건조 및 푸석푸석함(brittleness)의 개선, 완화 또는 방지를 포함할 수 있다.

본 명세서에서 용어, "피부 미용"은 피부처짐, 움푹 들어간 뺨, 패인 눈, 피부 주름, 피부 탄력감소, 잔주름, 모공 확대 등의 피부노화를 감소, 완화 또는 개선시키는 것 또는 이러한 피부노화에 의해 나빠진 피부 상태를 정상상태로 회복시키는 것; 피부 박피, 피부 재생, 미백, 주근깨, 다크써클, 기미, 문신, 여드름, 엘라스틴층 자국, 튼살, 흉터, 확대된 모공, 창백함, 잡티, 흑자, 눈밑 다크서클, 홍반, 점, 까페오레반점, 베커반점, 오타모반, 색소성 모반, 표피모반, 멜라닌 색소반점, 색소침착 등의 다양한 피부 결점들의 제거 내지는 보정; 탈모 예방, 발모 촉진, 두피 관리, 셀룰라이트 감소, 얼굴 축소, 윤곽교정, 연부조직의 결함 보정, 조직확대, 볼륨업(volume-up), 피부팽만, 피부 보습 및 진정(soothing), 홍조 및 혈관확장증의 감소 내지 개선 등을 의미한다. 그러나, 본 발명에 있어서 "피부 미용"은 전술한 것에 제한되지 않고 다양한 피부결점들을 제거 내지는 보정하는 것을 포함하는 것임은 물론이다.

본 명세서에서 용어, "엑소좀(exosomes)"은 세포막의 구조와 동일한 이중인지질막으로 이루어진 수십 내지 수백 나노미터(바람직하게는 대략 30~200 nm) 크기의 소포체를 의미한다(단, 분리 대상이 되는 세포 종류, 분리방법 및 측정방법에 따라 엑소좀의 입자 크기는 가변될 수 있음)(Vasiliy S. Chernyshev et al., "Size and shape characterization of hydrated and desiccated exosomes", Anal Bioanal Chem, (2015) DOI 10.1007/s00216-015-8535-3). 엑소좀에는 엑소좀 카고(cargo)라고 불리는 단백질, 핵산(mRNA, miRNA 등) 등이 포함되어 있다. 엑소좀 카고에는 광범위한 신호전달 요소들(signaling factors)이 포함되며, 이들 신호전달 요소들은 세포 타입에 특이적이고 분비세포의 환경에 따라 상이하게 조절되는 것으로 알려져 있다. 엑소좀은 세포가 분비하는 세포 간 신호전달 매개체로서 이를 통해 전달된 다양한 세포 신호는 표적 세포의 활성화, 성장, 이동, 분화, 탈분화, 사멸(apoptosis), 괴사(necrosis)를 포함한 세포 행동을 조절한다고 알려져 있다.

한편, 본 명세서에서 사용된 "엑소좀"이란 용어는 다양한 동물, 식물, 세균(bacteria), 균류(fungi), 조류(algae) 등의 세포, 바람직하게는 줄기세포에서 분비되어 세포외 공간으로 방출된 나노 크기의 베지클 구조를 갖고 있고 엑소좀과 유사한 조성을 갖는 베지클(예를 들어, 엑소좀-유사 베지클)을 모두 포함하는 것을 의미한다.

상기 줄기세포의 종류는 제한되지 않으나, 본 발명을 한정하지 않는 하나의 예시로서, 바람직하게는 중간엽 줄기세포, 예를 들어 지방, 골수, 제대 또는 제대혈 유래 줄기세포일 수 있으며, 보다 바람직하게는 지방 유래 줄기세포일 수 있다. 상기 지방 유래 줄기세포의 종류는 병원체에 의한 감염의 위험이 없고 면역 거부 반응을 일으키지 않는 것이라면 제한되지 않으나, 바람직하게는 인간지방 유래 줄기세포일 수 있다.

본 명세서에서 용어, "이온토포레시스(iontophoresis)"는 유효물질이 적용된 피부에 미세전류를 흐르게 하여 전위차를 주어 피부의 전기적 환경을 변화시킴으로써 이온화된 유효성분을 전기적 반발력으로 피부를 투과하게 하는 방법을 의미한다. 본 발명의 일 구체예에 사용되는 이온토포레시스(iontophoresis)는 피부 위의 전극 패치에 외부전원으로부터의 전류가 흘러들어가 피부에 미세전류가 도입되는 방식, 전극 패치 자체에 배터리가 장착되어 피부에 미세전류가 도입되는 방식, 고농도 전해질 용액 및 저농도 전해질 용액 간의 이온 농도 차이를 통해 전류를 발생시키는 역전기투석(Reversed Electrodialysis) 수단이 장착된 패치를 통해 피부에 미세전류가 도입되는 방식 등을 포함할 수 있다. 그러나, 본 발명은 이에 제한되는 것이 아니며, 다양한 방식의 이온토포레시스가 사용될 수 있음은 물론이다.

본 발명의 일 구체예의 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법은, (a) 포유동물의 피부에 플라즈마를 분사하는 단계와, (b) 상기 플라즈마 분사 전 또는 후에, 상기 플라즈마 분사 대상이 되는 포유동물의 피부에 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물을 적용하는 단계를 포함한다.

본 발명의 일 구체예의 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법은, 피부 재생, 염증후 과색소침착 감소, 통증 완화, 또는 이들의 조합을 나타낼 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 조성물은 엑소좀과, 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스를 유효성분으로 포함하는 동결건조제제를 포함할 수 있다. 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스의 중량비는 1:1:1이다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 동결건조제제는 아스코르브산 및 레티놀을 추가로 함유할 수 있다. 예를 들어, 메티오닌, 만니톨, 트레할로오스, 아스코르브산 및 레티놀의 중량비는 9:9:9:0.5:0.5이다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 조성물은 상기 동결건조제제와, 희석제를 포함한다. 예를 들어, 상기 희석제는 주사용수, 생리적 식염수, 인산염 완충용액, 정제수, 또는 탈이온수일 수 있다. 또한, 상기 희석제는 히알루론산 또는 히알루론산염(예를 들어, 히알루론산 나트륨)을 추가로 포함할 수 있다. 일례로서, 상기 조성물은 현탁액일 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물 또는 피부 외용제일 수 있다. 예를 들어, 화장료 조성물은 크림 또는 로션일 수 있다.

그러나 본 발명에서 사용되는 엑소좀은 피부 상태의 개선 효과가 있고 인체에 불리한 작용을 일으키지 않는 것이라면 당업계에서 사용되고 있거나 향후 사용될 수 있는 다양한 엑소좀을 사용할 수 있음은 물론이다. 따라서, 후술하는 실시예들의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀은 본 발명에서 사용될 수 있는 엑소좀의 일례로서 이해되어야 하며, 본 발명은 이에 제한되는 것이 아님을 명백히 밝혀 둔다.

상기 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물은 피부외용제 및/또는 화장료 조성물로 제조될 수 있다. 상기 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물이 피부외용제 및/또는 화장료 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 효과를 손상하지 않는 범위내에서 통상 화장품이나 피부외용제에 이용되는 성분, 예를 들면 보습제, 산화방지제, 유성성분, 자외선 흡수제, 유화제, 계면활성제, 증점제, 알콜류, 분말성분, 색재, 수성성분, 물, 각종 피부영양제 등을 필요에 따라 적절히 배합할 수 있다.

또한, 상기 조성물은 엑소좀 이외에, 그 작용(피부 상태의 개선, 피부 재생 등)을 손상시키지 않는 한도에서 종래부터 사용된 피부 개선제 및/또는 보습제를 함께 혼합하여 사용할 수 있다. 예를 들어, 엑소좀은 하이드로겔, 히알루론산, 히알루론산 염(예를 들어 히알루론산 나트륨 등), 또는 히알루론산 겔 중 적어도 1종에 담지되거나 혼합될 수 있다. 상기 하이드로겔의 종류는 제한되지 않으나, 바람직하게는 겔화 고분자를 다가 알코올에 분산시켜 얻은 하이드로겔일 수 있다. 상기 겔화 고분자는 플루로닉, 정제한천, 아가로오스, 젤란검, 알긴산, 카라기난, 카시아검, 잔탄검, 갈락토만난, 글루코만난, 펙틴, 셀룰로오스, 구아검 및 로커스트빈검으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종일 수 있고, 상기 다가 알코올은 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 이소부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 소르비톨, 자일리톨 및 글리세린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종일 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부외용제 및/또는 화장료 조성물은 예를 들면, 패취, 마스크팩, 마스크시트, 크림, 토닉, 연고, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 로션, 젤, 오일, 팩, 스프레이, 에어졸, 미스트, 파운데이션, 파우더, 기름 종이 등의 다양한 형태에 적용할 수 있다. 예를 들어, 상기 피부외용제 및/또는 화장료 조성물은 패취, 마스크팩 또는 마스크시트의 적어도 일면(一面)에 도포되거나 침적될 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부외용제가 화장료 조성물로 제조되는 경우, 예를 들어, 피부 상태의 개선 등의 목적으로 사용될 수 있으며, 화장품 제형은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어 패취, 마스크팩, 마스크시트, 유연화장수, 영양화장수, 수렴화장수, 영양크림, 마사지크림, 아이크림, 클렌징크림, 에센스, 아이에센스, 클렌징로션, 클렌징폼, 클렌징워터, 선스크린, 립스틱, 비누, 샴푸, 계면활성제-함유 클렌징, 입욕제, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 바디세정제, 염모제, 헤어토닉 등으로 제형화할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 구체예의 피부외용제 및/또는 화장료 조성물은 피부외용제 및/또는 화장품에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 그리고 담체를 포함할 수 있다. 또한, 피부외용제 및/또는 화장료 조성물에 대한 각각의 제형에 있어서, 다른 성분들은 피부외용제 및/또는 화장료 조성물의 종류 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 (b) 단계는 상기 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물이 도포되거나 침적된 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취와, 상기 조성물이 적용된 포유동물의 피부에 미세전류를 흘려 주는 이온토포레시스 디바이스를 포함하는 엑소좀 키트를 이용하여 수행될 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 이온토포레시스 디바이스는 가요성 배터리, 리튬이온 이차 전지, 알칼리 전지, 건전지, 수은 전지, 리튬 전지, 니켈-카드뮴 전지, 및 역전기 투석 전지로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 1종의 전지를 포함하거나, 상기 적어도 1종의 전지가 장착된 제2 마스크팩, 마스크시트 또는 패취일 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취 위에 상기 제2 마스크팩, 마스크시트 또는 패취가 적층되어 사용될 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취의 적어도 일면(一面)에는 하이드로겔, 히알루론산, 히알루론산 염(예를 들어 히알루론산 나트륨), 또는 히알루론산 겔 중 적어도 1종이 도포될 수 있다. 상기 하이드로겔의 종류는 제한되지 않으나, 바람직하게는 겔화 고분자를 다가 알코올에 분산시켜 얻은 하이드로겔일 수 있다. 상기 겔화 고분자 및 다가 알코올은 앞선 설명들에서 예시된 것일 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 이온토포레시스 디바이스로부터 미세전류가 흐름으로써 엑소좀이 표피를 효과적으로 통과하고 피부 내부 깊숙이 침투할 수 있게 된다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법은, (c) 상기 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물이 적용된 포유동물의 피부에 미세전류를 흐르게 하여 이온토포레시스(iontophoresis)를 수행하는 단계와, (d) 상기 미세전류를 통하여 상기 엑소좀을 포유동물 피부 내부로 전달하는 단계를 추가로 포함한다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 조성물은 예를 들면, 패취, 마스크팩, 마스크시트, 크림, 토닉, 연고, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 로션, 젤, 오일, 팩, 스프레이, 에어졸, 미스트, 파운데이션, 파우더, 기름 종이 등의 다양한 형태에 적용할 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물은 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취의 적어도 일면(一面)에 도포되거나 침적될 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 (b) 단계는 (b1) 상기 조성물을 상기 포유동물의 피부에 직접 도포하는 것, (b2) 상기 조성물이 도포되거나 침적된 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취를 상기 포유동물의 피부에 접촉 또는 부착하는 것, 또는 상기 (b1) 및 (b2)를 순차적으로 진행하는 것에 의해 수행될 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취의 적어도 일면(一面)에는 하이드로겔, 히알루론산, 히알루론산 염(예를 들어 히알루론산 나트륨 등), 또는 히알루론산 겔 중 적어도 1종이 도포될 수 있다. 상기 하이드로겔의 종류는 제한되지 않으나, 바람직하게는 겔화 고분자를 다가 알코올에 분산시켜 얻은 하이드로겔일 수 있다. 상기 겔화 고분자 및 다가 알코올은 앞선 설명에서 예시된 것일 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 (c) 단계는 이온토포레시스 디바이스를 상기 포유동물의 피부에 접촉 또는 부착시켜 수행될 수 있다.

본 발명의 일 구체예의 피부 상태의 개선 방법에 있어서, 상기 이온토포레시스 디바이스는 가요성 배터리, 리튬이온 이차 전지, 알칼리 전지, 건전지, 수은 전지, 리튬 전지, 니켈-카드뮴 전지, 및 역전기 투석 전지로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 1종의 전지를 포함하거나, 상기 적어도 1종의 전지가 장착된 제2 마스크팩, 마스크시트 또는 패취일 수 있다. 상기 (c) 단계는 상기 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취 위에 상기 제2 마스크팩, 마스크시트 또는 패취를 적층하여 수행될 수 있다.

본 발명의 다른 구체예는 상기 피부 상태의 개선 방법을 이용하여, 치료용을 제외한 포유동물 피부의 상태를 조절하는 미용방법을 제공한다. 본 발명의 미용방법에 있어서, 피부의 상태 조절이란 피부의 상태를 개선시키고/시키거나 피부의 상태를 예방적으로 조절하는 것을 의미하고, 피부의 상태 개선이란 피부 조직의 외관 및 느낌의 시각적 및/또는 촉각적으로 지각할 수 있는 긍정적인 변화를 의미한다. 예를 들어, 피부의 상태 개선이란 피부 재생, 주름 제거 또는 개선, 미백, 염증후 과색소침착 감소, 흉터 제거, 피부 텍스쳐(skin texture) 개선, 홍조 감소, 통증 감소, 시술 후 피부가 붉어지거나 붓는 현상인 다운 타임(Downtime) 감소 등일 수 있다.

본 발명의 또 다른 구체예는 상기 피부 상태의 개선 방법을 이용하여, 피부질환을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 피부 상태의 개선 방법은 피부에 대한 플라즈마 분사와 함께 엑소좀을 피부에 처리하여 플라즈마로 인한 부작용을 완화 내지 정상 상태로 회복시키면서 플라즈마에 의한 피부 상태 개선의 시너지 효과를 가져오는 장점이 있다. 예를 들어, 피부에 대한 플라즈마 분사 후에 엑소좀을 처리하면 피부 재생에 도움을 주는 시너지 효과가 있고, 플라즈마 시술에 의한 부작용(예를 들어, 시술 후 피부가 붉어지거나 붓는 현상인 다운 타임(Downtime), 염증후 과색소침착 등)을 줄이고 통증을 완화시키는 효과가 있다.

그리고, 본 발명의 피부 상태의 개선 방법을 이용한 피부 미용 방법 및 치료 방법은 피부 재생, 주름 제거 또는 개선, 미백, 염증후 과색소침착 감소, 흉터 제거, 피부 텍스쳐(skin texture) 개선, 홍조 감소, 통증 완화, 시술 후 피부가 붉어지거나 붓는 현상인 다운 타임(Downtime) 감소 등의 효과를 나타낼 수 있다.

또한, 본 발명에서 피부에 대한 플라즈마 분사와 함께 엑소좀 키트를 이용할 경우 이온토포레시스 작용에 의해 엑소좀을 피부 내부 깊숙이 침투시킬 수 있어 전술한 피부 미용 효과 내지는 치료 효과를 보다 극대화시킬 수 있다.

한편, 전술한 바와 같은 효과들에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다.

도 1은 본 발명의 일 구체예에 따라 얻어진 엑소좀의 물리적 특성 분석 결과를 도시한 것이다. "도 1A"는 NTA(nanoparticle tracking analysis)에 의해 얻어진 입자 크기 분포와 입자수를 나타낸다. "도 1B"는 TEM(transmitted electron microscopy)으로 촬영된 입자 이미지 사진이다. "도 1C"는 본 발명의 일 구체예에 따라 얻어진 엑소좀의 포지티브 마커에 대한 웨스턴 블랏 결과를 나타낸다. "도 1D"는 본 발명의 일 구체예에 따라 얻어진 엑소좀의 네거티브 마커에 대한 웨스턴 블랏 결과를 나타낸다. "도 1E"는 본 발명의 일 구체예에 따라 얻어진 엑소좀에 대한 마커 분석에 있어서 CD63 및 CD81에 대한 유세포분석 결과를 나타낸다.
도 2는 인체 피부섬유아세포인 HS68 세포에 본 발명의 일 구체예에 따라 수득된 엑소좀을 처리한 후 세포 독성이 없음을 확인한 결과를 도시한다.
도 3은 본 발명의 일 구체예의 방법에 따라 동결건조된 엑소좀의 양호한 성상을 나타내는 사진이다.
도 4는 PKH67로 염색된 엑소좀을 확인한 형광강도 측정 결과를 도시한다.
도 5는 돼지 피부조직 내부로, 형광염색된 엑소좀이 전달된 정도를 확인한 형광현미경 이미지이다.
도 6은 생쥐 피부조직 내부로, 형광염색된 엑소좀이 전달된 정도를 확인한 공초점형광현미경 이미지이다.
도 7은 도 6의 각 이미지 상의 형광강도를 측정하여 얻은 총 형광강도를 비교하여 도시한 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일 구체예에 따른 엑소좀 키트(100)의 구성을 나타내는 사시도이다.

이하 본 발명을 하기 실시예에서 보다 상세하게 기술한다. 다만, 하기 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 권리범위를 제한하거나 한정하는 것이 아니다. 본 발명의 상세한 설명 및 실시예로부터 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 용이하게 유추할 수 있는 것은 본 발명의 권리범위에 속하는 것으로 해석된다. 본 발명에 인용된 참고문헌들은 본 발명에 참고로서 통합된다.

명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

실시예

실시예 1: 세포의 배양

인체 피부 섬유아세포(human dermal fibroblast)인 HS68 세포는 ATCC에서 구입하여, 10% 우태아 혈청 (fetal bovine serum: ThermoFisher Scientific에서 구입) 및 1% 항생제-항진균제 (antibiotics-antimycotics: ThermoFisher Scientific에서 구입)가 함유된 DMEM (ThermoFisher Scientific에서 구입) 배지에 5% CO₂, 37℃ 조건에서 계대 배양하였다.

당해 발명이 속하는 기술분야에 알려진 세포배양 방법에 따라 5% CO₂, 37℃ 조건에서 지방 유래 줄기세포를 배양하였다. 그 다음, 인산염 완충용액(phosphate-buffered saline)(ThermoFisher Scientific에서 구입)으로 세척 후, 무혈청, 무페놀레드 배지로 교체하여 1일 내지 10일간 배양하고 그 상층액(이하, 배양액)을 회수하였다.

엑소좀의 분리 과정에서 입자크기 분포가 균일하고 순도가 높은 엑소좀을 수득하기 위하여 배양액에 트레할로오스를 2 중량% 첨가하였다. 트레할로오스를 첨가한 후 배양액을 0.22 ㎛ 필터로 여과하여 세포 잔해물, 노폐물 및 거대 입자 등의 불순물을 제거해 주었다. 여과된 배양액은 즉시 분리 과정을 통해 엑소좀을 분리하였다. 또한, 여과된 배양액은 냉장고(영상 10℃ 이하)에서 보관한 후 엑소좀 분리에 사용하였다. 또한, 여과된 배양액은 -60℃ 이하의 초저온 냉동고에서 동결 보관하였다가 해동시킨 후 엑소좀 분리를 수행하였다. 이후, 배양액으로부터 접선흐름여과장치(Tangential Flow Filtration; TFF)를 이용하여 엑소좀을 분리하였다.

실시예 2: TFF 방법에 의한 엑소좀의 분리 및 정제

실시예 1에서 0.22 ㎛ 필터로 여과된 배양액으로부터 엑소좀을 분리, 농축, 탈염과 버퍼교환(diafiltration)을 위해 TFF(Tangential Flow Filtration) 방법을 사용하였다. TFF 방법을 위한 필터로는 카트리지 필터(cartridge filter, 일명 hollow fiber filter; GE Healthcare에서 구입) 또는 카세트 필터(cassette filter; Pall 또는 Sartorius 또는 Merck Millipore에서 구입)를 사용하였다. TFF 필터는 다양한 분자량 차단(molecular weight cutoff;MWCO)에 의해 선택될 수 있다. 선택된 MWCO에 의해 선별적으로 엑소좀을 분리, 농축하였고, MWCO보다 작은 입자나 단백질, 지질, 핵산, 저분자 화합물 등은 제거하였다.

엑소좀을 분리, 농축하기 위하여 MWCO 100,000 Da(Dalton), 300,000 Da, 또는 500,000 Da의 TFF 필터를 사용하였다. 배양액을 TFF 방법을 이용하여 1/100 내지 1/25 정도의 부피가 될 때까지 농축하면서, MWCO보다 작은 물질들은 제거하여 엑소좀을 분리하였다.

분리, 농축된 엑소좀 용액은 TFF 방법을 이용하여 추가로 탈염과 버퍼교환(diafiltration)을 수행하였다. 이때, 탈염과 버퍼교환은 연속적으로 수행(continuous diafiltration)하거나 단속적으로 수행(discontinuous diafiltration)하였으며, 시작 부피(starting volume)에 대하여 적어도 4배, 바람직하게는 6배 내지는 10배 이상, 보다 바람직하게는 12배 이상의 부피를 갖는 완충용액을 이용하여 수행하였다. 완충용액에는 입자크기 분포가 균일하고 순도가 높은 엑소좀을 수득하기 위하여 PBS에 녹인 2 중량%의 트레할로오스를 첨가하였다.

실시예 3: 분리된 엑소좀의 특성 분석

분리된 엑소좀은 나노입자 트랙킹 분석(nanoparticle tracking analysis:　NTA; Malvern에서 구입)에 의해 입자의 크기와 농도를 측정하였다. 분리된 엑소좀의 균일도와 크기는 투과전자현미경(transmitted electron microscopy: TEM)을 이용하여 분석하였다. 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀의 NTA, TEM 분석 결과는 도 1A 및 도 1B에 도시하였다.

도 1C는 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀의 포지티브 마커에 대한 웨스턴 블랏을 수행한 결과로서, CD63, CD9, CD81, Alix 및 TSG101 마커의 존재를 확인하였다. 각 마커에 대한 항체로는 각각 항-CD63, 항-CD9, 항-CD81, 항-Alix 및 항-TSG101을 사용하였다.

도 1D는 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀의 네거티브 마커에 대한 웨스턴 블랏을 수행한 결과이다. 각 마커에 대한 항체로는 각각 항-GM130 및 항-칼넥신(Calnexin)을 사용하였다. GM130 및 칼넥신(Calnexin)은 엑소좀의 특성 분석 시 엑소좀에 존재하지 않아야 하는 네거티브 마커이다. 도 1D에 도시된 바와 같이 GM130 및 칼넥신(Calnexin)은 지방줄기세포의 파쇄물에서는 존재하는 것으로 확인되었지만, 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀에서는 존재하지 않는 것으로 확인되었다. 따라서, 도 1C 및 도 1D의 결과를 종합할 때, 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀은 포지티브 마커 및 네거티브 마커 특성분석을 만족하는 엑소좀임을 알 수 있다.

도 1E는 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀에 대해 유세포분석기를 이용하여 분석한 결과로서 CD63 및 CD81 마커의 존재를 확인하였다. CD63에 대해 양성(positive)인 엑소좀을 분리하기 위하여 엑소좀-휴먼 CD63 분리/검출 키트(ThermoFisher Scientific에서 구입)를 제조사의 방법에 따라 사용하였고, PE-마우스 항-인간 CD63 (PE-Mouse anti-human CD63)(BD에서 구입) 및 PE-마우스 항-인간 CD81 (PE-mouse anti-human CD81)(BD에서 구입)을 사용하여 마커를 염색한 후, 유세포분석기 (ACEA Biosciences)를 이용하여 분석하였다.

한편, 본 발명에서 사용되는 엑소좀은 전술한 바와 같은 실시예들의 엑소좀에 제한되는 것이 아니며, 당업계에서 사용되고 있거나 향후 사용될 수 있는 다양한 엑소좀을 사용할 수 있음은 물론이다. 상기 실시예들에 따라 분리된 엑소좀은 본 발명에서 사용될 수 있는 엑소좀의 일례로서 이해되어야 하며, 본 발명은 이에 제한되는 것이 아님을 명백히 밝혀 둔다.

실시예 4: 엑소좀 처리에 따른 세포 독성 측정

인체 피부 섬유아세포인 HS68 세포에서 본 발명의 일 구체예의 분리 방법에 따라 수득된 엑소좀의 독성을 평가하기 위해 세포에 농도별로 엑소좀을 처리하고 세포의 증식률을 확인하였다. HS68 세포를 10% FBS를 포함한 DMEM에 세포를 현탁시킨 후 80 내지 90%의 밀집도(confluency)를 갖도록 분주하고 37℃, 5% CO₂인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 24시간 후, 배양액을 제거하고 실시예 2에서 준비된 엑소좀을 농도 별로 처리하여 24 내지 72시간 동안 배양하면서 세포 생존율을 평가하였다. 세포 생존율을 WST-1 시약(WST-1 reagent)(Takara에서 구입), MTT 시약(Sigma에서 구입), 셀타이터-글로 시약(CellTiter-Glo reagent)(Promega에서 구입), 또는 아라마르 블루 시약(alamarBlue reagent)(ThermoFisher Scientific에서 구입)과 마이크로플레이트 리더(microplate reader)(Molecular Devices에서 구입)를 이용하여 측정하였다.

비교군은 엑소좀이 처리되지 않은 일반 세포배양배지에서 배양된 세포수를 기준으로 하였고, 시험된 농도 범위 내에서 엑소좀에 의한 세포 독성이 나타나지 않음을 확인하였다(도 2).

실시예 5: 엑소좀의 동결건조

엑소좀의 동결건조를 위해 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스를 포함하는 동결건조 보호제를 준비하였다. 아스코르브산 및 레티놀을 각각 0.5 mg/mL로 함유하고 있는 1mL의 수용액[(주)바이오에프디엔씨(대한민국 전남 화순군 소재)에서 외주 제작]에 상기 동결건조 보호제를 첨가한 수용액을 준비하였다. 본 실시예에서는 동결건조 보호제를 아스코르브산 및 레티놀을 함유하고 있는 용액에 첨가하였으나, 주사용수, 정제수, 생리적 식염수, 또는 탈이온수에 동결건조 보호제를 첨가하여 수용액을 준비할 수도 있다. 상기 수용액 내의 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스의 농도는 각각 9 mg/mL가 되도록 하였다.

동결건조 보호제가 함유된 수용액에 실시예 2에서 준비된 엑소좀(5×10⁸ 입자)을 혼합한 후 동결건조 장비(제조사: VIRTIS, ITME No.: 34424)를 이용하여 하기 표 1의 조건으로 동결건조를 수행하였다. 동결건조는 하기 표 1의 조건 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8의 순서로 진행하였다.

동결건조 조건

총 시간 (min)	4320
조건	시간 (min)	온도 (℃)	압력 (mmHg)
1	700	-50	760
2	60	-50	760
3	999	-50	0
4	999	-50	0
5	999	-50	0
6	370	-50	0
7	120	-20	0
8	73	10	0

메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스를 포함하는 동결건조 보호제를 처리하여 엑소좀을 동결건조 후 성상을 확인한 결과, 색은 유백색이며 다공성의 스폰지 형상을 유지하는 양호한 성상을 나타내는 것을 확인할 수 있었다(도 3). 즉, 본 발명의 엑소좀의 동결건조 방법에서는 감압 하에서의 건조 시간을 길게 하고 동결건조 보호제를 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스의 조합으로 구성함으로써 우수한 성상을 나타내는 동결건조 제품을 수득할 수 있었다.

실시예 6: 엑소좀의 피부 투과 능력 시험

형광염색된 엑소좀을 제조하기 위하여 PKH67 염료(Sigma에서 구입)를 사용하였다. 1 mM의 PKH67을 Diluent C (Sigma에서 구입)에 희석하여 10 μM의 PKH67 용액을 제조한 후, 적정 농도의 엑소좀 용액과 혼합하여 상온에서 빛을 차단한 상태로 10분간 반응시켰다. 반응이 끝난 후, PKH67로 염색된 엑소좀(이하, "PKH-엑소좀"으로 약칭)으로부터 잔여 PKH67 염료를 제거하기 위하여 MW3000 스핀 컬럼(ThermoFisher Scientific에서 구입)을 사용하였다. 형광측정기(Molecular Devices에서 구입)를 이용하여 확인한 결과 엑소좀과 반응하지 않은 PKH67을 제거한 후, PKH-엑소좀에서 충분한 강도의 형광이 검출됨을 확인하였다(도 4).

PKH-엑소좀을 적정 농도, 예를 들어 1×10⁵ 입자/mL 내지 1×10⁹ 입자/mL 농도로 인산완충용액(PBS)에 분산시킨 후, 돼지 피부 바깥면에 도포하였다. 도포된 PKH-엑소좀의 건조를 막기 위하여 부직포를 덮어 준 후 적정 시간, 예를 들어 30분 내지 1시간 동안 반응시켜 PKH-엑소좀이 피하 조직에 전달되도록 하였다. 또한, PKH-엑소좀을 돼지 피부 바깥면에 도포하고 부직포를 덮어 준 후, 일정 시간, 예를 들어 30분 내지 1시간 동안 미세 전류를 흘려주었다. 반응이 종료된 후, 돼지 피부조직을 3.7% 포름알데히드 용액에 담궈 하룻밤 동안 반응시키고, 인산완충용액으로 5분씩 3회 세척하였다. 세척된 돼지 피부조직을 30% 수크로오스 용액에 담가 처리한 후, OCT 화합물을 처리하였다. 다시 인산완충용액으로 5분씩 3회 세척한 후, 마이크로톰을 이용하여 종단면으로 절편을 제작하여 슬라이드글라스 위에 조직 절편을 위치시켰다. 한편 조직 절편의 제작은 포름알데히드 용액으로 조직을 고정하기 전에 진행할 수도 있다. 조직 절편에서 PKH-엑소좀으로부터 검출되는 형광은 형광현미경을 이용하여 관찰하였다. 이상의 방법으로 돼지 피부조직의 표피를 투과하여 피하 조직으로 전달된 PKH-엑소좀을 확인하였다. 그 결과, 미세 전류를 흘려주는 경우(active transdermal delivery), 엑소좀이 표피를 보다 효과적으로 통과하여 피부조직 내부로 깊숙이 전달되었고, 피부에 대해 보다 효과적으로 흡수되는 것을 확인할 수 있었다(도 5 참조).

다음으로, 헤어리스 마우스의 피부조직을 적출하여 프란츠 확산셀(Franz Diffusion Cell)의 챔버 위쪽에 위치시켰다. 이때, 확산셀의 내부는 인산완충용액으로 채워주었다. PKH-엑소좀을 적정 농도, 예를 들어 1×10⁵ 입자/mL 내지 1×10⁹ 입자/mL 농도로 인산완충용액(PBS)에 분산시킨 후, 생쥐의 피부조직 바깥쪽에 도포하였다. 이때, PKH-엑소좀의 건조를 막기 위하여 부직포를 생쥐 피부조직 바깥쪽에 미리 위치시키고, 부직포와 피부조직 사이에 PKH-엑소좀을 주입하였다. 그 후 30분 내지 1시간 동안 반응시켰다. 또한, PKH-엑소좀을 부직포와 피부조직 사이에 주입한 후, 일정 시간, 예를 들어 30분 내지 1시간 동안 미세 전류를 흘려주었다. 반응이 끝난 후, 즉시 공초점형광현미경(Leica, SP8X)을 이용하여 피부조직 내부로 전달된 PKH-엑소좀을 확인하거나, 1시간 내지 6시간 동안 피부조직과 PKH-엑소좀 용액을 추가로 반응시킨 후, 공초점형광현미경으로 PKH-엑소좀을 확인하였다. 그 결과, 미세 전류를 흘려주는 경우(active transdermal delivery), 엑소좀이 표피를 보다 효과적으로 통과하여 피부조직 내부로 깊숙이 전달되었고, 피부에 대해 보다 효과적으로 흡수되는 것을 확인할 수 있었다(도 6 및 도 7 참조).

이상의 실험결과들을 종합하면, 이온토포레시스에 의해 피부에 미세 전류를 흘려주면서 엑소좀을 피부에 적용할 경우, 엑소좀이 표피를 효과적으로 통과하여 피부조직 내부로 깊숙이 전달될 수 있고, 피부에 대해 효과적으로 흡수될 수 있다. 따라서, 이온토포레시스 디바이스(피부에 대해 미세전류를 흐르게 하는 장치)를 포함하는 엑소좀 키트를 이용하여 엑소좀을 피부에 적용할 경우 피부 침투능력이 보다 향상되어 피부 미용 효과 내지는 치료 효과를 보다 극대화시킬 수 있다.

실시예 7: 피부에 대한 플라즈마 분사와 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물의 처리

피부 상태 개선의 목적에 따라 적합한 플라즈마 분사를 자발적 실험 대상자의 피부에 대해 시행하고, 플라즈마 분사 전 또는 후에 실시예 2에서 준비된 엑소좀을 포함하는 조성물을 병용처리하였다. 그리고 피부 재생의 시너지 효과가 있는지와, 플라즈마 시술에 의한 부작용(예를 들어, 시술 후 피부가 붉어지거나 붓는 현상인 다운 타임(Downtime), 염증후 과색소침착 등)을 줄이고 통증을 완화시키는 효과가 있는지를 확인하였다.

당업계에서 통상적으로 구입가능하고 피부과에서 널리 사용되는 플라즈마 분사 장비를 이용하여 실험 대상자의 피부에 대해 플라즈마를 분사하였다. 그리고 플라즈마 분사 전 또는 후에, 실험 대상자의 피부에 실시예 2에서 준비된 엑소좀을 함유하는 조성물(5 μg/mL 농도의 엑소좀을 함유하는 조성물)을 도포하거나, 엑소좀이 함유된 동결건조 제품(실시예 5에 따라 제조되고 5×10⁸입자/vial의 농도로 엑소좀을 함유)을 정제수와 혼합한 수용액을 적용하였다. 이후 엑소좀을 함유하는 조성물이 처리된 경우와 처리되지 않은 경우의 피부 상태를 비교하였다.

또한, 실험 대상자 중 일부는 플라즈마 분사 전 또는 후에, 5×10⁵ 입자의 엑소좀(12)이 포함된 액상 침적 시트 마스크(10)를 눈과 입 부분에 맞추어 사람의 얼굴 전체에 고르게 밀착시킨 다음, 약 0.3~0.4 mA의 미세 전류가 흐르도록 액티베이션된 경피투과 촉진 시트 마스크(20)를 액상 침적 시트 마스크(10) 위에 적층시켜 25~30분 정도 사용하였다. 그리고 액상 침적 시트 마스크(10) 및 경피투과 촉진 시트 마스크(20)를 적용하지 않고 플라즈마 분사 만을 시행한 음성 대조군의 실험 대상자의 피부 상태와 비교하였다.

그 결과, 본 발명의 엑소좀을 피부에 처리할 때 플라즈마로 인한 부작용을 완화 내지 정상 상태로 회복시켜 주는 효과가 얻어짐을 확인할 수 있었다. 플라즈마 분사와 엑소좀의 병용 처리군의 경우, 엑소좀 미처리 실험군에 비해 플라즈마 분사의 부작용인 통증 및 다운 타임 등이 감소한 것이 확인되었다. 또한, 실험 대상자에 대해 통증정도와 실험 후 피부개선에 대한 만족도에 대해 설문 조사를 실시한 결과, 통증, 다운 타임 및 피부 개선 항목 등에 대해 만족도가 높게 나타났다.

상기 실험결과들을 종합하면, 본 발명의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물, 엑소좀의 동결건조 제제, 및/또는 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물이 도포되거나 침적된 마스크팩, 마스크시트 또는 패취와 이온토포레시스 디바이스를 포함하는 엑소좀 키트를 플라즈마 처리와 병용할 경우 플라즈마로 인한 부작용을 완화 내지 개선시킬 수 있음을 알 수 있다.

이상, 본 발명을 상기 실시예를 들어 설명하였으나, 본 발명은 이에 제한되는 것이 아니다. 당업자라면 본 발명의 취지 및 범위를 벗어나지 않고 수정, 변경을 할 수 있으며 이러한 수정과 변경 또한 본 발명에 속하는 것임을 알 수 있을 것이다.

100: 엑소좀 키트
10: 액상 침적 시트 마스크 12: 엑소좀
20: 경피투과 촉진 시트 마스크 22: 전지
24: 도전성 패턴

Claims

(a) 포유동물의 피부에 플라즈마를 분사하는 단계와,
(b) 상기 플라즈마 분사 전 또는 후에, 상기 플라즈마 분사 대상이 되는 포유동물의 피부에 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물을 적용하는 단계를 포함하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제1항에 있어서,
피부 재생, 염증후 과색소침착 감소, 통증 완화, 또는 이들의 조합을 나타내는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 엑소좀과 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스를 유효성분으로 포함하는 동결건조제제를 포함하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제3항에 있어서,
상기 동결건조제제는 아스코르브산 및 레티놀을 추가로 함유하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제3항 또는 제4항에 있어서,
상기 조성물은 상기 동결건조제제와, 희석제를 포함하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제5항에 있어서,
상기 희석제는 주사용수, 생리적 식염수, 인산염 완충용액, 정제수, 또는 탈이온수인 것을 특징으로 하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제6항에 있어서,
상기 희석제는 히알루론산 또는 히알루론산염을 추가로 포함하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 현탁액인 것을 특징으로 하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물 또는 피부 외용제인 것을 특징으로 하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제9항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 크림 또는 로션인, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 (b) 단계는 상기 조성물이 도포되거나 침적된 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취와, 상기 조성물이 적용된 포유동물의 피부에 미세전류를 흘려 주는 이온토포레시스 디바이스를 포함하는 엑소좀 키트를 이용하여 수행되는 것을 특징으로 하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제11항에 있어서,
상기 이온토포레시스 디바이스는 가요성 배터리, 리튬이온 이차 전지, 알칼리 전지, 건전지, 수은 전지, 리튬 전지, 니켈-카드뮴 전지, 및 역전기 투석 전지로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 1종의 전지를 포함하거나, 상기 적어도 1종의 전지가 장착된 제2 마스크팩, 마스크시트 또는 패취인, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제12항에 있어서,
상기 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취 위에 상기 제2 마스크팩, 마스크시트 또는 패취가 적층되어 사용되는 것을 특징으로 하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
(c) 상기 조성물이 적용된 포유동물의 피부에 미세전류를 흐르게 하여 이온토포레시스(iontophoresis)를 수행하는 단계와, (d) 상기 미세전류를 통하여 상기 엑소좀을 포유동물 피부 내부로 전달하는 단계를 추가로 포함하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제14항에 있어서,
상기 조성물은 패취, 마스크팩, 마스크시트, 크림, 토닉, 연고, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 로션, 젤, 오일, 팩, 스프레이, 에어졸, 미스트, 파운데이션, 파우더 및 기름 종이로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 1종의 형태에 적용하는 것을 특징으로 하는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제15항에 있어서,
상기 조성물은 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취의 적어도 일면(一面)에 도포되거나 침적되는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제16항에 있어서,
상기 (b) 단계는 (b1) 상기 조성물을 상기 포유동물의 피부에 직접 도포하는 것, (b2) 상기 조성물이 도포되거나 침적된 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취를 상기 포유동물의 피부에 접촉 또는 부착하는 것, 또는 상기 (b1) 및 (b2)를 순차적으로 진행하는 것에 의해 수행되는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제17항에 있어서,
상기 (c) 단계는 이온토포레시스 디바이스를 상기 포유동물의 피부에 접촉 또는 부착시켜 수행되는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제18항에 있어서,
상기 이온토포레시스 디바이스는 가요성 배터리, 리튬이온 이차 전지, 알칼리 전지, 건전지, 수은 전지, 리튬 전지, 니켈-카드뮴 전지, 및 역전기 투석 전지로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 1종의 전지를 포함하거나, 상기 적어도 1종의 전지가 장착된 제2 마스크팩, 마스크시트 또는 패취인, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제19항에 있어서,
상기 (c) 단계는 상기 제1 마스크팩, 마스크시트 또는 패취 위에 상기 제2 마스크팩, 마스크시트 또는 패취를 적층하여 수행되는, 치료용을 제외한 피부 상태의 개선 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 기재된 피부 상태의 개선 방법을 이용하여, 치료용을 제외한 포유동물 피부의 상태를 조절하는 미용방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 기재된 피부 상태의 개선 방법을 이용하여, 피부질환을 치료하는 방법.