KR20200029823A - 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 유효성분으로 함유하는 모발 및 두피 상태 개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 함유하는 모발 및 두피 상태 개선용 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 포함함으로써 두피의 가려움, 비듬 생성을 완화시키는 효과가 있으며, 탈모방지와 모발 생장 촉진 효과를 나타내는 모발 및 두피 상태 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 모발 및 두피 상태 개선용 조성물은 약학, 식품 또는 화장료 조성물로서 사용될 수 있다.

Description

흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 유효성분으로 함유하는 모발 및 두피 상태 개선용 조성물{Composition For Improving of Scalp and Hair Condition Comprising Agaricus blazei Murill, Inonotus Obliquus, Grifola frondosa, Phellinus linteus and Sparasis crispa as Active Ingredient}

본 발명은 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 함유하는 모발 또는 두피 상태 개선용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 사용함으로써 두피에 대한 자극이 완화되고, 비듬, 두피 염증 등이 억제되어 전반적인 모발 상태가 개선되고 탈모 방지 효과가 우수한 조성물에 관한 것이다.

두피는 표피(epidermis), 진피(dermis), 피하조직(subcutaneous tissue)으로 구성되어 있으며, 두피의 가장 바깥조직이 표피이다. 표피는 신체의 민감한 조직이 손상 받지 않도록 보호해주는 기능을 한다. 그러나 외부의 온도, 습도의 변화, 공해물질 등의 여러 가지 물리적·화학적 외부 자극 및 스트레스, 영향 결핍 등으로 인해 두피의 기능이 상실될 수 있으며, 나아가서는 탈모에도 영향을 미칠 수 있다. 탈모는 자연적으로 발생하거나, 암과 같은 증상들을 경감시키기 위해 고안된 특정 치료 약물의 사용을 통하여 화학적으로 촉진되는 문제이다. 이러한 탈모는 부분적 또는 완전한 대머리를 유발하는 모발 재성장의 결여를 수반한다.

최근 활성산소가 현대인의 질병 중 90%에 관여한다고 알려져 있다. 활성산소는 유해산소로 부르기도 하며, 우리가 호흡하는 산소와는 완전히 다르게 불안정한 상태에 있는 산소이다. 환경오염과 화학물질, 자외선, 혈액순환장애, 스트레스 등으로 산소가 과잉 생산되고 이렇게 과잉 생산된 활성산소는 사람 몸 속에서 산화작용을 일으킨다. 이렇게 되면 세포막, DNA, 그 외의 모든 세포 구조가 손상되고 손상의 범위에 따라 세포가 기능을 잃거나 변질된다. 이러한 유해성이 시력저하, 근육 손상, 아토피, 당뇨, 염증성 질환, 암 등을 일으키기도 하고, 뿐만 아니라 현대인의 큰 골칫거리인 탈모가 더욱 촉진될 수 있어 활성산소를 저해하는 일명 항산화제가 급부상하고 있다.

한국등록특허 제10-0863890호는 차가버섯, 말굽잔나비버섯, 신령버섯 및 노루궁뎅이버섯의 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관하여 개시되어 있고, 한국공개특허 제10-2014-0101875호는 잎새버섯 추출물 및 이를 함유하는 피지 산생을 촉진하기 위한 조성물에 관하여 개시되어 있다. 또한, 한국 등록특허 제10-0348155호는 자연산 상황버섯 추출물을 함유하는 발모제 조성물에 관하여 개시되어 있다.

이에 본 발명자들은 활성산소로 인한 모발의 노화를 억제할 수 있는 물질을 검색하기 위해 여러 식물 추출물을 대상으로 연구한 결과 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 함유함으로써 활성산소로 인한 모발의 노화를 억제하는 것을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명은 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 유효성분으로 함유하는 모발 및 두피 상태 개선용 조성물에 관한 것이다.

바람직하게는, 상기 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물은 조성물의 전체 함량에 대하여 0.0001 내지 10중량% 함유될 수 있다.

바람직하게는 상기 조성물은 스트레스성 탈모 또는 두피질환을 방지하는 것이고, 상기 스트레스성 탈모 또는 두피질환은 가려움증, 비듬, 탈모, 원형탈모, 스트레스성 염증 및 민감성 두피로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 이유로 발생되는 것일 수 있다.

바람직하게는 상기 조성물은 스트레스성 염증반응의 억제 효과 및/또는 모유두 세포의 보호 효과를 갖는다.

본 발명에 따른 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 함유하는 모발 및 두피 상태 개선용 조성물은 스트레스성 염증 반응 억제 및 모유두 세포의 보호 효과가 우수하고, 나아가 탈모방지와 모발 생장 촉진 효과를 나타내는 모발 및 두피 상태 개선용 조성물에 관한 것이다.

구체적으로, 본 발명에 따른 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 포함하는 조성물은 가려움증, 비듬, 탈모, 원형탈모, 스트레스성 염증 또는 민감성 두피로 인해 발생되는 스트레스성 탈모 또는 두피 질환을 방지할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 모발 및 두피 상태 개선용 조성물은 약학, 식품 또는 화장료 조성물로서 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명에 따른 추출물의 스트레스에 의한 염증반응 억제 효과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 추출물의 스트레스로부터 모유두 세포 보호 효과를 나타내는 그래프이다.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다. 용어 약이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, 포함하다 및 포함하는 이란 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.

본 발명의 화장료 조성물 중 유효 성분으로 사용되는 흰들버섯(Agaricus blazei Murill)은 브라질에서 자생하는 주름버섯목 주름버섯과의 버섯으로서 항암효과 등이 우수한 것으로 알려지면서 한국, 일본, 중국 등지에서 인공 재배되고 있다. 여러 균주의 자실체와 균사 배양물에서 항암기능을 확인하는 등 이들이 생성하는 단백질 및 다당류에 대한 많은 연구가 이루어져 왔다. β-글루칸(β-Glucan) 등 담자균 유래의 다당류들은 생체의 저하된 면역기능을 회복 또는 증강시키고 특별한 부작용이 거의 없는 것으로 알려져 있다. 본 발명의 흰들버섯은 흰들버섯의 다양한 기관 또는 부분 중 전초를 사용한다.

차가버섯(Inonotus Obliquus)은 시베리아와 북아메리카, 북유럽 등 북위 45도 이상 지방의 자작나무에 기생하는 버섯으로 암 등 성인병 치료에 효능이 뛰어나다. 바이러스에 의해 착생하여 수액을 먹고 자라는데, 대개 15~20년 동안 성장한다. 여러 가지 물질이 들어 있는데, 다른 버섯에 비해 베타글루칸이 많이 함유되어 있다. 본 발명의 차가버섯은 차가버섯의 다양한 기관 또는 부분 중 전초를 사용한다.

잎새버섯(Grifola frondosa (Dicks.) S. F.)은 은행나뭇잎처럼 생긴 갓들이 여러겹 겹쳐져 자실체 다발을 이루고 색은 흑색, 흑갈색, 회갈색, 백색이다. 갓 표면에는 방사상의 섬유무늬와 희미한 고리무늬가 있고 밑면의 관공은 백색, 길이 1~3mm, 자루에 내린형이고, 구멍은 원형이다. 가을에 참나무류 등 활엽수류 생입목, 고사목의 밑동부위에서 사물기생하여 다발로 발생한다. 맛과 향기가 좋아 식용할 수 있다. 본 발명의 잎새버섯은 잎새버섯의 다양한 기관 또는 부분 중 자실체를 사용한다.

상황버섯(Phellinus linteus)은 목질진흙버섯이라고도 하며, 동의보감에서는 상목이(桑木耳)라는 이름으로 탕액편에 기록되어 있다. 갓은 지름 6~12cm, 두께 2~10cm로, 반원 모양, 편평한 모양, 둥근 산 모양, 말굽 모양 등 여러 가지 모양을 하고 있다. 표면에는 어두운 갈색의 털이 짧고 촘촘하게 나 있다가 자라면서 없어지고 각피화한다. 검은빛을 띤 갈색의 고리 홈이 나 있으며 가로와 세로로 등이 갈라진다. 가장자리는 선명한 노란색이고 아랫면은 황갈색이며 살도 황갈색이다. 자루가 없고 포자는 연한 황갈색으로 공 모양이다. 항암 효과가 뛰어난 것으로 알려져 있으며, 귀중한 약재로서 한국에서는 대량으로 재배하고 있다. 약용하기 위해 달이면 노란색이거나 연한 노란색으로 맑게 나타나며, 맛과 향이 없는 것이 특징이다. 맛이 순하고 담백하여 먹기에도 좋다. 본 발명의 상황버섯은 상황버섯의 다양한 기관 또는 부분 중 전초를 사용한다.

꽃송이버섯(Sparasis crispa (Wulf.) Fr.)은 여름에서 가을까지 침엽수의 자른 그루터기나 죽은 나무의 언저리에서 자생한다. 자실체는 높이 10~25cm로 육질이고 밑부분은 굵은 줄기로 공통의 자루가 되어 있으며, 여러 차례 가지를 쳐서 꼭대기는 편평하게 되고 그 가장자리가 물결 모양이다. 자실층은 꽃잎 뒷면에 발달하였다. 버섯대는 길이 2~5cm, 나비 2~4cm로 짧고 뭉툭하며 단단하다. 버섯대의 살은 흰색이다. 홀씨는 길이 5~7㎛, 나비 3~5㎛로 달걀 모양 또는 타원형이고 표면은 편평하며 홀씨 무늬는 흰색이다. 식용버섯이다. 본 발명의 꽃송이버섯은 꽃송이버섯의 다양한 기관 또는 부분 중 전초를 사용한다.

본 발명에 따른 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있다.

본 발명의 조성물의 유효성분인 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물은 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 사용하여 추출되는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 에틸알코올로, 보다 더 바람직하게는 70% 에틸알코올로 추출될 수 있다.

본 발명의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물은 다음의 단계를 포함하는 과정에 의해 제조될 수 있다: (a) 건조 및 분쇄한 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯에 물, 탄소수 1~4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 첨가하여 침적시키는 단계; (b) 단계 (a)의 용매 첨가된 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯을 여과한 뒤 40~100℃에서 농축하는 단계; 및 (c) 상기 단계 (b)에서 농축한 성분을 여과 및 건조하여 1,3-부틸렌 글리콜에 용해하는 단계.

본 발명의 구체적인 일 실시예에 따르면, 상술한 추출 과정은 다음과 같이 실시된다: 우선, 원료가 되는 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯을 세척, 건조 및 작은 조각으로 파쇄한 다음 70%(v/v) 에틸알코올을 첨가하여 5일 동안 침적시킨다. 이어, 300 메쉬에 여과한 다음, 진공 감압 농축기를 이용하여 80℃에서 농축하여 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물 파우더를 얻은 다음 제품에 적용하기 위해 1,3-부틸렌 글리콜에 용해시킴으로써 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 제조한다.

한편, 본 발명의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물은 상술한 추출법에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물에 포함된다고 해석된다.

본 발명의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물은 용매를 이용한 추출물 뿐 아니라, 초음파 추출법으로 추출된 추출물을 포함한다. 초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출효율을 증가시키게 된다.

초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. 화장료 조성물일 경우에는, 본 발명의 조성물은 상술한 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 상술한 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물 이외에, 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물에 의한 모발 및 두피 개선의 작용을 손상시키지 않는 한도에서 당해 기술분야에서 사용될 수 있는 성분을 추가로 포함할 수 있다.

흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 유효 성분으로 배합할 수 있는 모발 및 두피 개선용 화장료 제형의 예로서 헤어토닉, 헤어로션, 헤어린, 헤어컨디셔너, 헤어스프레이, 헤어에어졸, 포마드, 분발, 젤과 같이 용액, 솔겔, 에멀젼, 오일, 왁스, 에어졸 등 다양한 형태로 제조될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 10 중량%일 수 있고, 바람직하게는 0.5 내지 5 중량%일 수 있으며, 보다 바람직하게는 1.0 내지 3 중량%일 수 있다. 상기 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물의 함량이 0.0001 중량% 미만이면 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물에 의한 모발 및 두피 개선 효과가 크게 감소되고, 10 중량%를 초과하는 경우에는 오히려 피부 자극을 초래할 수 있으며 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있다.

본 발명에 따른 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물은 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯을 1~3:1~3:1~3:1~3:1~3의 중량 혼합비로 포함할 수 있고, 바람직하게는 1:1:1:1:1의 중량 혼합비로 포함할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

[ 실시예 1] 흰들버섯 , 차가버섯, 잎새버섯 , 상황버섯 및 꽃송이버섯의 용매(에탄올) 추출물 제조

세절하여 음건한 흰들버섯(전초), 차가버섯(전초), 잎새버섯(자실체), 상황버섯(전초) 및 꽃송이버섯(전초)를 각각 60g씩 혼합한 후 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 감압 농축물 및 동결건조물이 1%(w/v)가 되게 30% 1,3-부틸렌글리콜 용액에 분산/용해하여 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 제조하였다.

[ 실시예 2] 흰들버섯 , 차가버섯, 잎새버섯 , 상황버섯 및 꽃송이버섯의 초음파 추출물을 이용한 추출물의 제조

흰들버섯(전초), 차가버섯(전초), 잎새버섯(자실체), 상황버섯(전초) 및 꽃송이버섯(전초)의 시료로 선별하여 충분히 세척한 다음 300메시 체를 통과할 수 있도록 분쇄물을 미세하게 만들었다. 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 분쇄물을 100g/L가 되도록 70% 에탄올을 첨가하여 실온에서 초음파추출기(내추럴솔루션)로 4시간 동안 추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman) #3 여과지로 여과 후, 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 동결건조물을 30% 1,3-부틸렌글리콜 용액을 이용하여 1%(w/v)가 되게 녹여 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 초음파 추출물을 제조하였다.

[ 비교예 1] 흰들버섯의 용매 추출물 제조

세절하여 음건한 흰들버섯의 전초를 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 감압 농축물 및 동결건조물이 1%(w/v)가 되게 30% 1,3-부틸렌글리콜용액에 분산/용해하여 흰들버섯의 추출물을제조하였다.

[ 비교예 2] 차가버섯의 용매 추출물 제조

세절하여 음건한 차가버섯의 전초를 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 감압 농축물 및 동결건조물이 1%(w/v)가 되게 30% 1,3-부틸렌글리콜용액에 분산/용해하여 차가버섯의 추출물을 제조하였다.

[ 비교예 3] 상황버섯의 용매 추출물 제조

세절하여 음건한 상황버섯의 전초를 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 감압 농축물 및 동결건조물이 1%(w/v)가 되게 30% 1,3-부틸렌글리콜용액에 분산/용해하여 상황버섯의 추출물을 제조하였다.

[ 비교예 4] 잎새버섯의 용매 추출물 제조

세절하여 음건한 잎새버섯의 자실체를 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 감압 농축물 및 동결건조물이 1%(w/v)가 되게 30% 1,3-부틸렌글리콜용액에 분산/용해하여 잎새버섯의 추출물을 제조하였다.

[ 비교예 5] 꽃송이버섯의 용매 추출물 제조

세절하여 음건한 꽃송이버섯의 전초(1:1 중량비)를 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 감압 농축물 및 동결건조물이 1%(w/v)가 되게 30% 1,3-부틸렌글리콜용액에 분산/용해하여 꽃송이버섯의 추출물을 제조하였다.

[ 비교예 6] 차가버섯 및 상황버섯의 용매 추출물 제조

세절하여 음건한 차가버섯 및 상황버섯 전초((1:1:1 중량비)를 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 감압 농축물 및 동결건조물이 1%(w/v)가 되게 30% 1,3-부틸렌글리콜용액에 분산/용해하여 차가버섯 및 상황버섯의 추출물을 제조하였다.

[ 비교예 7] 차가버섯, 상황버섯 및 흰들버섯의 용매 추출물 제조

세절하여 음건한 차가버섯, 상황버섯 및 흰들버섯의 전초(1:1:1 중량비)를 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 감압 농축물 및 동결건조물이 1%(w/v)가 되게 30% 1,3-부틸렌글리콜용액에 분산/용해하여 차가버섯, 상황버섯 및 흰들버섯의 추출물을 제조하였다.

[ 실험예 1] 세포 배양

면역세포인 비만세포(mast cell) 세포주 RBL-2H3(KCLB(한국세포주은행) 22256)를 DMEM 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)에 배지의 총 중량을 기준으로 소태아혈청(fetal bovine serum) 10 중량%, 페니실린 100mg/ml, 스트렙토마이신(streptomycin) 100mg/ml을 첨가하여 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

또한, 모낭을 구성하며 모발을 생성하는 인체 모유두 세포(human hair dermal papilla cell, hDPC) 세포주(promocell, C-12071)를 DMEM 배지에 소태아혈청 20 중량%, 페니실린 100mg/ml, 스트렙토마이신 100mg/ml을 첨가하여 37℃, 5% CO₂ 조건에서 배양하였다.

[ 실험예 2] 스트레스성 염증반응 억제의 in vitro 평가

흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물의 스트레스성 염증반응 억제효과를 평가하기 위해서 비만세포를 이용한 염증반응 유도와 억제 효능을 평가하였다. 96웰(well) 배양 플레이트에 실험예 1에 따라서 배양된 비만세포를 웰당 5x10⁴개 접종하여 하루 동안 부착시켰다. 이 때 배양 배지는 DMEM에 배지 총 중량을 기준으로 소태아혈청 10 중량%, 페니실린(penicillin) 100mg/ml 및 스트렙토마이신 100mg/ml을 첨가하여 사용하였다.

하루 뒤 스트레스성 염증반응을 일으키기 위해 스트레스를 받았을 때, 신경말단에서 분비되는 신경펩티드인 물질 P(Substance P)(BachemFechemikalien, Bubendorf, Switzerland) 10 μM을 처리하였고, 이때 배지는 DMEM(phenol red free)에 페니실린 100 mg/ml, 스트렙토마이신 100 mg/ml을 첨가한 것을 사용하였다.

흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물의 염증반응 억제 효능을 보기 위한 실험군에는 물질 P에 더하여 실시예 1의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 20 ppm, 50 ppm 농도로 처리하였다.

양성 대조군으로는 비만세포 안정제(stabilizer)로 잘 알려진 케토티펜(Ketotifen)을 13 ppm 농도로 사용하였다. 세포 내 약물 흡수와 염증반응을 위해 하루(24시간) 동안 처리한 뒤 염증반응 평가법 중 하나인 비만세포 탈과립 반응 분석(β-hexosaminidase assay)을 실시하였다.

비만세포 탈과립 반응을 위해 탈과립 활성제로 칼슘이온 운반체(A23187 (시그마 알드리치) 1 μM + PMA 40nM)를 세포에 추가로 처리하였다. 2시간 뒤 세포를 반응시키고 있는 96웰 배양 플레이트로부터 세포 배양 및 반응 산물을 50㎕씩 덜어내어 새로운 96-웰 플레이트에 분주하였다. 여기에 탈과립 산물의 발색반응에 필요한 기질 버퍼(substrate buffer, 1mM p-nitrophenyl-N-acetyl-b-D-glucosaminide in 0.1M sodium citrate, pH4.5) 50㎕를 첨가하여 37℃에서 1시간 반응하였다. 이후 정지 버퍼(stop buffer, 0.1M Na₂CO₃, NaHCO₃, pH 10) 150㎕를 첨가하여 반응을 정지, 발색을 유도하였다.

비만세포의 탈과립 산물은 반응 결과 노랗게 발색되며 이를 측정하기 위해 분광 광도계(spectrophotometer)에서 410nm 파장으로 흡광도를 측정하였다.

도 1을 보면, 물질 P를 처리한 스트레스 처리군에서 비만세포의 탈과립 반응이 일어나지만, 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 처리한 경우는 비만세포 탈과립 반응이 현저하게 억제되는 것을 확인하였다. 이러한 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물에 의한 비만세포 탈과립 반응의 억제는 비만세포 안정제인 케토티펜과 거의 유사한 수준의 효과를 나타내는 것이다. 이를 통해 본 발명의 일 측면인 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물이 스트레스에 의한 염증 반응을 억제하는데 현저한 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 3] 스트레스로부터 모유두 세포 보호의 in vitro 평가

흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물의 스트레스로부터 모유두 세포 보호 효능을 평가하기 위해 인체 모유두 세포의 증식 억제 정도를 실험하였다. 실험예 1에 따라서 배양한 인체 모유두 세포를 웰당 2x10³ 개씩 96웰 배양 플레이트에 접종한 뒤 하루 동안 배양 플레이트 바닥에 부착시켰다. 이때 배양 배지는 DMEM 배지에 배지 총 중량을 기준으로 소태아혈청 20 중량%, 페니실린 100 mg/ml, 스트렙토마이신 100 mg/ml 첨가한 것을 사용하였다.

하루 뒤 실시예 1의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 50 ppm 농도로 세포에 처리하였고, 양성 대조군으로 비만세포 안정제(stabilizer)인 케토티펜 13 ppm 과 발모 의약품인 미녹시딜(Minoxidil)을 50μM 사용하였다. 이때 배지는 DMEM 배지에 페니실린 100 mg/ml, 스트렙토마이신 100 mg/ml 첨가한 것을 사용하였다. 약물 처리 1일 뒤 인체 모유두 세포에 스트레스 환경을 주기 위해 실험예 2에서 제조한 스트레스 배양액(비만세포에 물질 P, A23187+PMA 처리한 뒤의 배양액)을 웰 전체 부피를 기준으로 최종 25% 농도가 되도록 첨가하여 이틀 동안(48시간) 반응시켰다.

모유두 세포의 증식능을 평가하기 위해 WST-1 분석을 실시하였다. 세포를 반응시킨 96-웰 배양 플레이트에 WST-1 용액을 10㎕ 첨가한 뒤 37℃에서 1시간 반응시켰다. 이후 배양 배지 색이 붉은색에서 오렌지색으로 변화하였으며, 모유두 세포의 증식 변화를 측정하기 위해 분광 광도계에서 490nm 파장으로 흡광도를 측정하였다.

도 2를 보면, 스트레스 배양액 처리군에서 모낭세포의 증식 정도가 72%인 것으로 미루어 보아 스트레스 배양액에서 모유두 세포증식이 억제되는 것을 알 수 있다. 이에 반해, 본 발명의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 처리한 경우에는 모낭세포의 증식 정도가 104%까지 상승한 것을 확인할 수 있으며, 이로부터 본 발명에 따른 추출물에 의해 스트레스 반응으로 인한 모유두 세포 증식 억제 반응을 저해하여 세포 증식이 정상적으로 일어나는 것을 확인할 수 있다. 이러한 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물은 비만세포의 안정제인 케토티펜보다 우수한 효과를 나타내었으며 발모 의약품인 미녹시딜과 비슷한 정도의 효과를 나타낸다는 것을 확인하였다.

[ 실험예 4] 비교예의 스트레스성 염증반응 억제 및 스트레스로부터 모유두 세포 보호의 in vitro 평가

본 발명에 따른 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물의 효과를 확인하기 위하여 실시예 1을 20 ppm 사용한 것을 대신하여 비교예 1 내지 7을 20 ppm 사용한 것을 제외하고는 실험예 2와 동일한 방법으로 스트레스성 염증 반응 억제 실험을 진행하였다. 또한, 실시예 1을 50 ppm 사용한 것을 대신하여 비교예 1 내지 7을 50 ppm 사용한 것을 제외하고는 실험예 3과 동일한 방법으로 스트레스로부터 모유두 세포 보호 평가를 진행하였다. 그 결과는 아래의 표 1에 나타내었다.

	물질 P무처리	비교예1	비교예2	비교예3	비교예4	비교예5	비교예6	비교예7	실시예1
스트레스성염증반응	90%	160	153%	156%	151%	148%	132%	120%	130%
스트레스로 부터모유두세포보호	100%	101	101	101	101	102	102	102	104

상기 표 1에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물(실시예 1)은 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯 각각의 추출물(비교예 1 내지 5) 그리고 차가버섯과 상황버섯의 추출물(비교예 6), 차가버섯, 상황버섯 및 흰들버섯의 추출물(비교예 7)에 비하여 스트레스성 염증반응의 억제 효과 및 모유두 세포의 보호 효과가 우수하여 모발 및 두피 상태를 효과적으로 개선하는 것을 알 수 있다.

[ 제형예 1] 탈모방지 영양화장수

실시예 1의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 함유한 화장료 중 영양 화장수의 제형예는 다음과 같다.

성분	함량 (중량%)
흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물(실시예 1)	1.0
밀납	4.0
폴리솔메이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	0.7
유동파라핀	5.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	5.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
트리에탄올아민	0.2
방부제	미량
색소	미량
향료	미량
정제수	미량
계	100

[제형예 2] 탈모방지 헤어토닉

실시예 1의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 함유한 화장료 중 헤어토닉의 제형예는 다음과 같다.

성분	함량 (중량%)
흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물(실시예 1)	3.0
에탄올	55.0
피마자유	5.0
글리세린	3.0
피록톤아민	0.1
색소	미량
향료	미량
정제수	미량
계	100

[ 제형예 3] 탈모방지 헤어로션

실시예 1의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 함유한 화장료 중 헤어로션의 제형예는 다음과 같다.

성분	함량 (중량%)
흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물(실시예1)	3.0
세토스테아릴알코올	2.0
염화스테아릴트리에틸암모늄	2.0
히드록시에틸셀룰로오즈	0.5
피록톤아민	1.0
색소	미량
향료	미량
정제수	미량
계	100

[ 제형예 4] 탈모방지 영양크림

실시예 1의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 함유한 화장료 중 영양크림의 제형예는 다음과 같다.

성분	함량 (중량%)
흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물(실시예 1)	2.0
글리세린	5.0
소듐히아루로네이트	4.0
폴리솔베이트 60	1.2
경화식물유	1.0
광물유	5.0
스쿠알란	3.0
트리옥타노인	5.0
디메치콘	1.0
트리에탄올아민	1.0
친유형모노스테아린산글리세린	2.0
세테아릴알콜	2.2
스테아린산	1.5
밀납	1.0
솔비탄스테아레이트	0.6
소듐마그네슘실리케이트	0.1
베타인	3.0
방부제	미량
색소	미량
향료	미량
정제수	미량
계	100

[ 제형예 5] 탈모방지 헤어비누

실시예 1의 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 함유한 화장료 중 헤어비누의 제형예는 다음과 같다.

성분	함량 (중량%)
흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물(실시예 1)	3.0
이산화티탄	2.0
폴리에틸렌글리콜	0.8
글리세린	3.0
에틸렌디아민테트라아세트산	0.05
나트륨	1.0
색소	미량
향료	미량
화장비누베이스(수분 13중량%)	잔량
계	100

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (4)

1. 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물을 유효성분으로 함유하는 모발 및 두피 상태 개선용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 흰들버섯, 차가버섯, 잎새버섯, 상황버섯 및 꽃송이버섯의 추출물은 조성물의 전체 함량에 대하여 0.0001 내지 10 중량% 함유되는 것인, 모발 및 두피 상태 개선용 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 스트레스성 염증반응의 억제 효과를 갖는, 모발 및 두피 상태 개선용 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 모유두 세포의 보호 효과를 갖는, 모발 및 두피 상태 개선용 조성물.

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