KR20190124214A - 자가 t 세포를 사용하여 다발성 경화증을 치료하는 방법 - Google Patents

자가 t 세포를 사용하여 다발성 경화증을 치료하는 방법 Download PDF

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KR20190124214A
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autologous
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ctl
peptide
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KR1020197023752A
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라지브 칸나
코리 스미스
블레이크 토루 애프탭
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아타라 바이오테라퓨틱스 인크.
더 카운실 오브 더 퀸즐랜드 인스티튜트 오브 메디컬 리서치
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Abstract

본원은 대상체에서 다발성 경화증의 치료 또는 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하기 위해 엡스타인 바 바이러스(EBV)에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하거나 CD107a, TNF, IFN-감마 또는 IL-2를 발현하는 자가 세포독성 T 세포를 포함하는 방법을 제공한다.

Description

자가 T 세포를 사용하여 다발성 경화증을 치료하는 방법
관련 출원
본 출원은 2017년 1월 20일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/448707호 및 2017년 10월 24일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/576349호의 우선권의 이익을 주장하며, 이들 각각은 그 전체가 본원에 참고로 포함된다.
배경
자가면역 질환, 예컨대 다발성 경화증(multiple sclerosis)(MS)은 신체의 자체 조직에 대한 이상 면역 반응으로부터 발생하는 병리학이다. MS는 신체의 자체 면역 세포에 의한, 신경 섬유를 감싸는 보호 지질 외피인 미엘린의 저하가 특징이다.
인간 헤르페스바이러스 4로도 알려진 엡스타인 바 바이러스(Epstein Barr Virus)(EBV)는 매우 흔한 헤르페스 바이러스이다. 최근에, EBV에 대한 노출이 MS를 포함한 자가면역 질환을 발병하게 하거나 아니면 발병에서 역할을 수행할 수 있다는 것이 나타났다. 예를 들어, 최근 연구는 MS로 진단받은 사람이 건강한 사람에 비해 신경 조직에서의 응집된 B 세포에서 EBV 관련 단백질의 더 높은 수준을 나타낸다는 것을 보여주었다. EBV-감염된 B 세포의 증가 및/또는 이러한 세포의 결함적 제거는 사람이 다발성 경화증에 걸리게 할 수 있다는 가설이 세워진다.
요약
본원은 MHC(예를 들어, 클래스 I MHC) 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 T 세포(예를 들어, 세포독성 T 세포, 또는 CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, MS(예를 들어, 재발-이장성(relapsing-remitting) MS, 2 차 진행성 MS, 1 차 진행성 MS, 또는 진행적 재발성(progressively relapsing) MS)를 치료하기 위한 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, MS는 1 차 진행성 MS이다. 일부 실시양태에서, 방법은 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것에 의해 대상체에서 MS의 증상을 개선 또는 안정시키는 것을 포함한다. 또한, 본원은 클래스 I MHC 분자 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것에 의해 MS에 걸린 대상체에서 CSF 내 항-EBV IgG 수준을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 적어도 1%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 또는 적어도 20%의 CTL은 CD107a, IFNγ, TNF, 또는 IL-2를 발현한다. 일부 실시양태에서, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 또는 적어도 80%의 CTL은 CD107a, IFNγ, TNF, 및 IL-2를 발현한다. 적어도 5%, 적어도 7%, 적어도 8%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 또는 적어도 30%의 CTL은 EBV 반응도를 갖는다.
일부 실시양태에서, EBV 펩티드는 LMP1 펩티드 또는 이의 단편, LMP2A 펩티드 또는 이의 단편, 및/또는 EBNA1 펩티드 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, EBV 펩티드는 표 1에 열거된 서열을 포함한다. 특정 양태에서, 본원은 대상체로부터 T 세포(예를 들어, CTL)를 포함하는 샘플을 단리시키는 것, MHC(예를 들어, 클래스 I MHC) 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 T 세포를 생성하는 것 및 그 다음에 T 세포를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 다발성 경화증(예를 들어, 재발-이장성 MS, 2 차 진행성 MS, 1 차 진행성 MS, 또는 진행적 재발성 MS)을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 자가 T 세포(예를 들어, PBMC 샘플)를 포함하는 샘플을 MHC(예를 들어, 클래스 I MHC) 상에 EBV 펩티드를 제시하는 항원 제시 세포(APC)와 함께 항온처리하여, 샘플에서 펩티드-특이적 T 세포(예를 들어, 펩티드-특이적 자가 CTL)의 증식을 유도하는 것에 의해 생성된다. 일부 실시양태에서, APC는 이들을 EBV 펩티드를 코딩하는 핵산 구축물(예를 들어, AdE1-LMPpoly)과 함께 항온처리하여, EBV 펩티드를 제시하도록 APC를 유도하는 것에 의해 EBV 펩티드를 제시하도록 제조한다. 일부 실시양태에서, APC는 B 세포, 항원-제시 T 세포, 수지상 세포, 또는 인공 항원-제시 세포(예를 들어, CD80, CD83, 41BB-L 및/또는 CD86를 발현하는 세포주, 예컨대 aK562 세포)일 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL에 의해 CD107a, IFNγ, TNF, 또는 IL-2의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 또는 적어도 20%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 CD107a, IFNγ, TNF, 또는 IL-2를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 CTL을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 또는 적어도 80%의 펩티드-특이적 자가 CTL은 CD107a, IFNγ, TNF, 및 IL-2를 발현한다. 펩티드-특이적 자가 CTL은 EBV 반응도를 갖는 적어도 5%, 적어도 7%, 적어도 8%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 또는 적어도 30%의 펩티드-특이적 자가 CTL을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, EBV 펩티드는 LMP1 펩티드 또는 이의 단편, LMP2A 펩티드 또는 이의 단편, 및/또는 EBNA1 펩티드 또는 이의 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, EBV 펩티드는 표 1에 열거된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, MS는 1 차 진행성 MS이다.
일부 실시양태에서, 5 × 106, 1 × 107, 1.5 × 107 또는 2 × 107 세포(예를 들어, CTL)가 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 초기 용량의 T 세포(예를 들어, 자가 CTL)가 투여되고, 1 회분 이상의 추가 용량의 T 세포(예를 들어, 자가 CTL)가 후속적으로 예를 들어, 치료의 과정에 걸쳐 증가하는 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 2 회분 이상, 3 회분 이상, 4 회분 이상, 또는 5 회분 이상의 용량이 투여된다. T 세포(예를 들어, 자가 CTL)의 양은 초기 용량으로부터 추가 용량까지 달라질 수 있다. 예를 들어, 저용량이 초기에 투여된 후, 고용량이 어이질 수 있다. 일부 실시양태에서, 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3 적어도 4 또는 적어도 5 회분 용량이 대상체에게 투여된다. 용량은 매주 또는 격주로 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 T 세포(예를 들어, 자가 CTL) 투여의 결과로서 임의의 부작용을 겪지 않는다. 일부 실시양태에서, 방법은 연속적으로 더 높은 수의 CTL의 4 회분 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 5 × 106 CTL의 제1 용량, 1 × 107 CTL의 제2 용량, 1.5 × 107 CTL의 제3 용량, 및 2 × 107 CTL의 제4 용량을 투여하는 것을 포함한다.
일부 양태에서, 방법은 대상체로부터 뇌 척수액(cerebral spinal fluid)(CSF)의 제1 샘플을 얻는 것, 바람직하게는 CTL 투여 전에 제1 샘플에서의 CSF 내 항-EBV IgG의 양을 분석하는 것, 및 일정 기간 후에, 바람직하게는 CTL 투여 이후 대상체로부터 CSF의 제2 샘플을 얻는 것, 제2 샘플에서의 CSF 내 항-EBV IgG의 상대량을 분석하는 것에 의해 다발성 경화증에 걸린 대상체에서 입양 면역요법의 효능을 평가하는 것을 추가로 포함하며, 제2 샘플에서의 항-EBV IgG의 양이 제1 샘플에 비해 적은 경우, 질환이 안정되고/되거나 진행하지 않는다. 일정 기간은 1 주, 2 주, 3 주, 4 주, 5 주, 6 주, 3 개월, 6 개월, 또는 1 년일 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상체는 진단 검사, 예컨대 EDSS 검사를 받는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 T 세포 투여 전 및 후에 EDSS 스코어를 받는다. T 세포 투여 이후 EDSS 스코어는 동일하게 머물 수 있거나, EDSS 스코어는 감소(예를 들어, 적어도 0.5 또는 적어도 1.0)될 수 있다.
일부 양태에서, 본원은 대상체로부터 T 세포(예를 들어, CTL)를 포함하는 샘플을 얻는 것, 자가 T 세포를 단리시키는 것, 샘플에서 자가 T 세포의 EBV 반응도를 결정하는 것, 및 적어도 임계 퍼센트(예를 들어, 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%)의 자가 T 세포가 EBV-반응성인 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것에 의해 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본원은 대상체로부터 T 세포(예를 들어, CTL)를 포함하는 샘플을 얻는 것, 자가 T 세포를 단리시키는 것, 자가 T 세포의 CD107a, IFNγ, TNF, 및/또는 IL-2 발현을 결정하는 것, 및 적어도 임계 퍼센트(예를 들어, 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%)의 자가 T 세포가 CD107a, IFNγ, TNF, 및/또는 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것에 의해 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 MS(예를 들어, 재발-이장성 MS, 2 차 진행성 MS, 1 차 진행성 MS, 또는 진행적 재발성 MS)를 갖는다.
도면의 간단한 설명
도 1은 2 개의 패널(a-b)을 갖고, 4 년 전 치료의 제1 과정 이후 및 올해 최근 시험에서의 재치료 이후, 원래 환자에서의 자가 EBV-특이적 T 세포 요법 전 및 후의 CSF를 나타낸다. (a) 정상 범위의 상한을 나타내는 점선의 수평선을 이용한 CSF IgG 색인. (b) 척추강내 IgG 생성물(IgG(loc))을 라이버와 펠겐하우어(Reiber and Felgenhauer)의 식(ref. 16)으로 계산하였다: IgG(loc) (mg/L) = {(CSF IgG ÷ 혈청 IgG) - [0.8 × (√((CSF 알부민 ÷ 혈청 알부민)2 + 15))] + 1.8} × 혈청 IgG. 수직선은 5 × 106, 1 × 107, 1.5 × 107 및 2 × 107 세포의 연속적인 T 세포 융합을 나타낸다.
도 2는 2 개의 부분(a-b)을 갖고, T 세포 생성물의 EBV-특이적 CD8+ T 세포 반응도와 T 세포 요법에 대한 임상 반응 사이의 상관관계를 나타낸다.
도 3은 뇌의 MRI 상에서의 질환 활성도를 나타낸다.
상세한 설명
일반론
본원은 1 이상의 EBV 에피토프(예를 들어, 본원에 개시된 EBV 에피토프)를 인식하는 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 사용하여 대상체에서의 다발성 경화증(예를 들어, 재발-이장성 MS, 2 차 진행성 MS, 1 차 진행성 MS, 또는 진행적 재발성 MS)을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 방법은 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 단리시키는 것, T 세포를 EBV 펩티드(예를 들어, 본원에 개시된 EBV 펩티드)를 제시하는 APC와 함께 항온처리하여, MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드를 인식하는 T 세포를 생성하는 것을 추가로 포함한다. 또한, 본원은 T 세포 투여 전 및 후 둘 다에서 대상체로부터 뇌 척수액(CSF)의 샘플을 얻는 것, 및 CSF에서 항-EBV IgG의 상대량을 분석하는 것에 의해, 다발성 경화증에 걸린 대상체에서 입양 면역요법의 효능을 평가하는 방법을 제공한다.
정의
편의를 위해, 본 명세서, 실시예, 및 첨부된 청구항에서 사용된 특정 용어는 여기에 수집된다.
관사 "하나" 및 "한"은 하나 또는 하나 초과(즉, 적어도 하나)의 관사의 문법적 대상을 지칭하기 위해 사용된다. 예로서, "하나의 요소"는 하나의 요소 및 하나를 초과하는 요소를 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "투여하는"은 약제 또는 약학 조성물을 대상체에게 제공하는 것을 의미하며, 비제한적으로, 전문 의료진이 투여하는 것 및 자가-투여하는 것을 포함한다. 이러한 약제는 예를 들어, 본원에 기재된 펩티드, 본원에 제공된 항원 제시 세포 및/또는 본원에 제공된 T 세포를 함유할 수 있다.
용어 "아미노산"은 자연 또는 합성이든, 아미노 작용기 및 산 작용기 둘 다를 포함하고 자연-발생 아미노산의 중합체에 포함될 수 있는 모든 분자를 포괄하는 것으로 의도된다. 예시적 아미노산은 자연-발생 아미노산; 이의 유사체, 유도체 및 동질체; 변이 측쇄를 갖는 아미노산 유사체; 및 상술한 것 중 임의의 것의 모든 입체이성질체를 포함한다.
용어 "결합하는" 또는 "상호작용하는"은 2 개의 분자 사이의, 예를 들어, TCR과 펩티드/MHC 사이의, 예를 들어, 생리학적 조건 하에서 정전기, 소수성, 이온성 및/또는 수소-결합 상호작용으로 인한 안정된 회합(association)일 수 있는 회합을 지칭한다.
용어 "생물학적 샘플", "조직 샘플", 또는 간단하게는 "샘플" 각각은 대상체의 조직으로부터 얻어진 세포의 집합체를 지칭한다. 조직 샘플의 공급원은 신선한, 동결된 및/또는 보존된 장기, 조직 샘플, 생검, 또는 흡입물로부터의 고형 조직; 혈액 또는 임의의 혈액 성분, 혈청, 혈액; 체액, 예컨대 뇌 척수액, 양수, 복막액 또는 간질액, 소변, 침, 대변, 눈물; 또는 대상체의 임신 또는 발달 중 임의의 시점의 세포일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "사이토카인"은 세포의 기능에 영향을 미치고 면역, 염증 또는 조혈 반응에서 세포 사이의 상호작용을 조절하는 분자인 임의의 분비된 폴리펩티드를 지칭한다. 사이토카인은, 비제한적으로, 이들을 생산하는 세포에 관계 없이 모노카인 및 림포카인을 지칭한다. 예를 들어, 모노카인은 일반적으로 단핵 세포, 예컨대 대식세포 및/또는 단핵구에 의해 생산되고 분비되는 것으로서 지칭된다. 그러나, 많은 다른 세포는 또한 모노카인, 예컨대 천연 킬러 세포, 섬유아세포, 호염구, 호중구, 내피 세포, 뇌 별아교세포, 골수 기질 세포, 표피 케라티노사이트 및 B-림프구를 생산한다. 림포카인은 일반적으로 림프구 세포에 의해 생산되는 것으로서 지칭된다. 사이토카인의 예는, 비제한적으로, 인터류킨-1(IL-1), 인터류킨-2(IL-2), 인터류킨-6(IL-6), 인터류킨-8(IL-8), 종양 괴사 인자-알파(Tumor Necrosis Factor-alpha)(TNFα), 및 종양 괴사 인자 베타(TNFβ)를 포함한다.
용어 "에피토프"는 항체 또는 TCR에 특이적으로 결합할 수 있는 단백질 결정인자를 의미한다. 에피토프는 보통 아미노산 또는 당 측쇄와 같은 분자의 화학적으로 활성인 표면 군체(grouping)로 구성된다. 특정 에피토프는 항체가 결합할 수 있는 아미노산의 특정 서열에 의해 정의될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "약학적 허용"은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 합리적인 편익/위험 비(benefit/risk ratio)에 비례하여, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 그의 약제, 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여 형태를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 어구 "약학적-허용 담체"는 인체의 하나의 장기, 또는 부위로부터 인체의 다른 장기, 또는 부위로 약제를 운반 또는 수송하는데 관련된 약학적-허용 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 또는 용매 캡슐화 물질을 의미한다. 각각의 담체는 제형의 다른 성분과 상용성이고 환자에게 유해하지 않다는 의미에서 "허용가능"해야 한다. 약학적-허용 담체로서 제공될 수 있는 물질의 일부 예는 다음을 포함한다: (1) 당, 예컨대 락토오스, 글루코오스 및 수크로오스; (2) 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로오스 및 이의 유도체, 예컨대 소듐 카복시메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 셀룰로오스 아세테이트; (4) 분말 트라가칸트(tragacanth); (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 탈크; (8) 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌약 왁스; (9) 오일, 예컨대 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참기름, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; (10) 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; (11) 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; (12) 에스터, 예컨대 에틸 올리에이트 및 에틸 라우레이트; (13) 한천; (14) 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; (15) 알긴산; (16) 발열원 없는 물; (17) 등장성 식염수; (18) 링거액(Ringer's solution); (19) 에틸 알코올; (20) pH 완충액; (21) 폴리에스터, 폴리카보네이트 및/또는 폴리안하이드라이드; 및 (22) 약학 제형에 사용되는 다른 비-독성 상용성 물질.
용어 "폴리뉴클레오티드", 및 "핵산"은 상호교환적으로 사용된다. 이들은 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합 형태인, 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드, 또는 이의 유사체를 지칭한다. 폴리뉴클레오티드는 임의의 3-차원 구조를 가질 수 있으며, 임의의 기능을 수행할 수 있다. 다음은 폴리뉴클레오티드의 비제한적 예이다: 유전자 또는 유전자 단편의 코딩 또는 비-코딩 영역, 연관 분석으로부터 정의된 좌위들(좌위), 엑손, 인트론, 메신저 RNA(mRNA), 전달 RNA, 리보솜 RNA, 리보자임, cDNA, 재조합 폴리뉴클레오티드, 분지된 폴리뉴클레오티드, 플라스미드, 벡터, 임의의 서열의 단리된 DNA, 임의의 서열의 단리된 RNA, 핵산 프로브, 및 프라이머. 폴리뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 메틸화된 뉴클레오티드 및 뉴클레오티드 유사체를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 뉴클레오티드 구조에 대한 변형은 중합체의 조립 전 또는 후에 전달될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 예컨대, 표지 성분과의 컨쥬게이션에 의해 추가로 변형될 수 있다. 본원에 제공된 모든 핵산 서열에서, U 뉴클레오티드는 T 뉴클레오티드와 상호교환 가능하다.
본원에 사용된 바와 같이, 병태를 "예방하는" 치료는 장애 또는 병태의 개시 전에 통계적 샘플에 투여되었을 때, 미치료된 대조군 샘플에 비해 치료된 샘플에서 장애 또는 병태의 발생을 감소시키거나, 미치료된 대조군 샘플에 비해 장애 또는 병태의 1 이상의 증상의 개시를 지연시키거나 이의 중증도를 감소시키는 화합물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, "특이적 결합"은 MHC(예를 들어, 클래스 I MHC 또는 클래스 II MHC) 상에 제시되는 펩티드에 결합하는 TCR의 능력을 지칭한다. 전형적으로, TCR은 적어도 약 10-4 M 이하의 KD의 친화도로 이의 펩티드/MHC에 특이적으로 결합하며, 비-특이적이고 관련 없는 펩티드/MHC 복합체(예를 들어, BSA 펩티드 또는 카세인 펩티드를 포함하는 것)에 결합하기 위한 이의 친화도에 비해 적어도 10 배 작은, 적어도 100 배 작은 또는 적어도 1000 배 작은 친화도(KD에 의해 표현됨)로 소정의 항원/결합 파트너에 결합한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 치료 또는 요법을 위해 선택된 인간 또는 비-인간 동물을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은 어구 "치료적-유효량" 및 "유효량"은 임의의 의학적 치료에 적용가능한 타당한 편익/위험 비에서 대상체의 세포의 적어도 부분 집단에서 소망하는 치료 효과를 생산하기 위해 효과적인 약제의 양을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 대상체에서 질환을 "치료하는" 또는 질환을 갖거나 가진 것으로 의심되는 대상체를 "치료하는"은 질환의 적어도 하나의 증상이 감소되거나 악화되는 것을 예방하도록, 대상체가 약학적 치료, 예를 들어 본원에 기재된 CTL의 투여를 받게하는 것을 지칭한다.
용어 "벡터"는 핵산이 유기체, 세포, 또는 세포 성분 사이에서 전파되고/되거나 전달될 수 있는 수단을 지칭한다. 벡터는 자체적으로 복제되거나 숙주 세포의 염색체 내로 통합될 수 있거나 없는 플라스미드, 바이러스, 박테리오파지, 프로-바이러스, 파지미드, 트랜스포손(transposon) 및 인공 염색체 등을 포함한다.
펩티드
특정 양태에서, 본원은 MHC(예를 들어, 클래스 I MHC) 상에 제시되는 EBV 에피토프를 포함하는 펩티드에 특이적으로 결합하는 TCR을 발현하는 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 사용하여 다발성 경화증(예를 들어, 재발-이장성 MS, 2 차 진행성 MS, 1 차 진행성 MS, 또는 진행적 재발성 MS)을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원은 예를 들어, T 세포(예를 들어, 자가 T 세포)를 포함하는 샘플을 본원에 기재된 1 이상의 EBV 에피토프를 제시하는 항원-제시 세포(APC)(예를 들어, 클래스 I MHC 복합체 상에 EBV 에피토프를 포함하는 본원에 기재된 펩티드를 제시하는 APC)와 함께 항온처리하는 것에 의해 이러한 자가 T 세포를 생성하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 임의의 EBV 바이러스 단백질의 서열(예를 들어, 임의의 EBV 단백질의 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 개의 인접 아미노산의 서열)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 EBV 바이러스 단백질의 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 또는 10 개 이하의 인접 아미노산을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 LMP1의 서열(예를 들어, LMP1의 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 개의 인접 아미노산의 서열)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 LMP1의 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 또는 10 개 이하의 인접 아미노산을 포함한다. 예시적 LMP1 아미노산 서열이 하기에 제공된다(서열번호 1):
Figure pct00001
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 LMP2A의 서열(예를 들어, LMP2A의 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 개의 인접 아미노산의 서열)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 LMP2A의 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 또는 10 개 이하의 인접 아미노산을 포함한다. 예시적 LMP2A 아미노산 서열이 하기에 제공된다(서열번호 2):
Figure pct00002
Figure pct00003
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 EBNA1의 서열(예를 들어, EBNA1의 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 개의 인접 아미노산의 서열)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 EBNA1의 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11 또는 10 개 이하의 인접 아미노산을 포함한다. 예시적 EBNA1 아미노산 서열이 하기에 제공된다(서열번호 3):
Figure pct00004
일부 실시양태에서, 펩티드는 표 1에 열거된 에피토프의 서열을 포함한다.
Figure pct00005
Figure pct00006
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 2 이상의 EBV 에피토프를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 개의 EBV 에피토프를 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 링커(예를 들어, 폴리펩티드 링커)에 의해 연결된 2 이상의 EBV 에피토프를 포함한다.
일부 실시양태에서, 펩티드의 서열은 1 이상(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 이상)의 보존적 서열 변형을 제외한 EBV 바이러스 단백질 서열을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "보존적 서열 변형"은 TCR과 MHC 상에 제시되는 아미노산 서열을 함유하는 펩티드 사이의 상호작용에 유의한 영향을 미치지 않거나 변경시키지 않는 아미노산 변형을 지칭하는 것으로 의도된다. 이러한 보존적 변형은 아미노산 치환, 첨가(예를 들어, 펩티드의 N 또는 C 말단에 대한 아미노산의 첨가) 및 결실(예를 들어, 펩티드의 N 또는 C 말단으로부터의 아미노산의 결실)을 포함한다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 교체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에 정의되어 있다. 이들 패밀리는 기본 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지된 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 따라서, 본원에 기재된 펩티드의 1 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 패밀로부터의 다른 아미노산 잔기로 교체될 수 있으며, 변경된 펩티드는 당업계에 알려진 방법을 사용하여 TCR 결합의 보유에 대해 시험될 수 있다. 변형은 당업계에 알려진 표준 기술, 예컨대 부위-특이적 돌연변이 유발 및 PCR-매개된 돌연변이 유발에 의해 항체 내로 도입될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 EBV 바이러스 단백질 서열(예를 들어, EBV 바이러스 단백질의 단편의 서열)과 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 2 개의 아미노산 서열의 퍼센트 동일성을 결정하기 위해, 서열은 최적의 비교 목적을 위해 정렬된다(예를 들어, 최적의 정렬을 위해 제1 및 제2 아미노산 서열 중 하나 또는 둘 다에 갭이 도입될 수 있으며, 비-동일 서열은 비교 목적을 위해 무시될 수 있음). 그 다음에, 상응하는 아미노산 위치의 아미노산 잔기가 비교된다. 제1 서열의 위치가 제2 서열의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기에 의해 채워질 때, 분자는 상기 위치에서 동일하다. 2 개의 서열 사이의 퍼센트 동일성은 2 개의 서열의 최적의 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 수, 및 각각의 갭의 길이를 고려한, 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다.
일부 실시양태에서, 펩티드는 키메라 또는 융합 펩티드이다. 본원에 사용된 바와 같이, "키메라 펩티드" 또는 "융합 펩티드"는 자연에서는 연결되지 않는 서열을 갖는 별개의 펩티드에 연결된 본원에 제공된 서열을 갖는 펩티드를 포함한다. 예를 들어, 별개의 펩티드는 펩티드 결합을 통해 직접적으로, 또는 화학적 링커를 통해 간접적으로 본원에 제공된 펩티드의 N-말단 또는 C-말단에 융합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 별개의 EBV 에피토프를 포함하는 다른 펩티드에 연결된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 펩티드는 다른 바이러스 및/또는 감염 질환으로부터의 에피토프를 포함하는 펩티드에 연결된다.
본원에 제공된 키메라 또는 융합 펩티드는 표준 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, 상이한 펩티드 서열을 코딩하는 DNA 단편은 종래의 기술에 따라, 예를 들어 결찰을 위한 블런트(blunt)-종료 또는 스태거(stagger)-종료 말단, 제한 효소 분해를 사용하는 것에 의해 인-프레임(in-frame)으로 함께 결찰되어, 소망하지 않는 결합, 및 효소 결찰을 회피하기 위해, 적절한 알카라인 포스파타아제 치료로서 응집성 종점을 채우는 적절한 말단을 제공한다. 다른 실시양태에서, 융합 유전자는 자동 DNA 합성기를 포함한 종래의 기술에 의해 합성될 수 있다. 대안적으로, 유전자 단편의 PCR 증폭은 후속적으로 소결되고 재-증폭되어 키메라 유전자 서열을 생성할 수 있는 2 개의 연속 유전자 단편 사이의 상보적 오버행(overhang)을 발생시키는 앵커(anchor) 프라이머를 사용하여 수행될 수 있다(예를 들어, Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons: 1992 참고). 또한, 융합 모이어티를 이미 코딩하는 많은 발현 벡터가 상업적으로 이용가능하다.
본원에 제공된 펩티드는 표준 단백질 정제 기술을 사용하는 적절한 정제 계획에 의해 세포 또는 조직 공급원으로부터 단리될 수 있으며, 재조합 DNA 기술에 의해 생산될 수 있고/있거나 표준 펩티드 합성 기술을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다. 본원에 기재된 펩티드는 본 발명의 펩티드(들)를 코딩하는 뉴클레오티드의 발현에 의해 원핵 또는 진핵 숙주 세포에서 생산될 수 있다. 대안적으로, 이러한 펩티드는 화학적 방법에 의해 합성될 수 있다. 재조합 숙주에서 이종 펩티드의 발현, 펩티드의 화학적 합성, 및 시험관내(in vitro) 번역을 위한 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 문헌[Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1989), 2nd Ed., Cold Spring Harbor, N. Y.; Berger and Kimmel, Methods in Enzymology, Volume 152, Guide to Molecular Cloning Techniques (1987), Academic Press, Inc., San Diego, Calif.; Merrifield, J. (1969) J. Am. Chem. Soc. 91:501; Chaiken I. M. (1981) CRC Crit. Rev. Biochem. 11:255; Kaiser et al. (1989) Science 243:187; Merrifield, B. (1986) Science 232:342; Kent, S. B. H. (1988) Annu. Rev. Biochem. 57:957; 및 Offord, R. E. (1980) Semisynthetic Proteins, Wiley Publishing]에 추가로 기재되어 있고, 이들은 본원에 참고로 포함된다.
특정 양태에서, 본원은 본원에 기재된 펩티드를 코딩하는 핵산 분자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 벡터이다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 본원에 기재된 핵산 분자를 포함하는 바이러스 벡터, 예컨대 아데노바이러스계 발현 벡터이다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 벡터는 본원에 제공된 복수의 에피토프(예를 들어, 폴리에피토프)를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 벡터는 본원에 제공된 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 개의 에피토프(예를 들어, 표 1에 제공된 에피토프)를 코딩한다.
일부 실시양태에서, 벡터는 AdE1-LMPpoly이다. AdE1-LMPpoly 벡터는 Gly-Ala 반복-고갈된 EBNA1 서열에 융합된 LMP1 및 LMP2로부터 정의된 CTL 에피토프의 폴리에피토프를 코딩한다. AdE1-LMPpoly 벡터는 예를 들어, 문헌[Smith et al., Cancer Research 72:1116 (2012); Duraiswamy et al., Cancer Research 64:1483-9 (2004); 및 Smith et al., J. Immunol 117:4897-906]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본원에 참고로 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "벡터"는 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 벡터의 하나의 유형은 "플라스미드"이며, 이는 추가 DNA 세그먼트가 결찰될 수 있는 원형 이중-가닥 DNA 루프를 지칭한다. 벡터의 다른 유형은 바이러스 벡터이되, 추가 DNA 세그먼트가 바이러스 게놈 내로 결찰될 수 있다. 특정 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포에서 자가 복제할 수 있다(예를 들어, 박테리아 기원의 복제를 갖는 박테리아 벡터, 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포 내로 도입시 숙주 세포의 게놈 내로 통합되어, 숙주 게놈과 함께 복제될 수 있다. 또한, 특정 벡터는 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터"(또는 간략하게는, "발현 벡터")로서 지칭된다. 일부 실시양태에서, 본원은 발현 벡터 내의 1 이상의 조절 서열(예를 들어, 프로모터)에 작동가능하게 연결된 핵산을 제공한다. 일부 실시양태에서, 세포는 본원에 제공된 핵산을 번역하여, 본원에 기재된 펩티드를 발현한다. 핵산 분자는 세포의 게놈 내로 통합되거나 이는 염색체외일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원은 본원에 기재된 핵산(예를 들어, 본원에 기재된 펩티드를 코딩하는 핵산)을 함유하는 세포를 제공한다. 세포는 예를 들어, 원핵, 진핵, 포유동물, 새, 뮤린 및/또는 인간일 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포는 포유동물 세포이다. 일부 실시양태에서, 세포는 APC(예를 들어, 항원-제시 T 세포, 수지상 세포, B 세포, 또는 aK562 세포)이다. 본 방법에서, 본원에 기재된 핵산은 예를 들어, 전달 비히클 없이, 전달 시약과 조합된 핵산으로서 세포에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 당업계에 알려진 임의의 핵산 전달 방법이 본원에 기재된 방법에서 사용될 수 있다. 적합한 전달 시약은, 비제한적으로, 예를 들어 Mirus Transit TKO 친유성 시약; 리포펙틴; 리포펙타민; 셀펙틴; 다양이온(polycation)(예를 들어, 폴리라이신), 아텔로콜라겐, 나노플렉스 및 리포솜을 포함한다. 본원에 기재된 방법의 일부 실시양태에서, 리포솜은 세포 또는 대상체에게 핵산을 전달하기 위해 사용된다. 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위해 적합한 리포솜은 일반적으로 중성 또는 음성적으로 하전된 인지질 및 스테롤, 예컨대 콜레스테롤을 포함하는 표준 소수포-형성 지질로부터 형성될 수 있다. 지질의 선택은 일반적으로 인자, 예컨대 소망하는 리포솜 크기 및 혈류에서 리포솜의 반감기의 고려에 의해 안내된다. 리포솜을 제조하기 위한 다양한 방법이 예를 들어, 문헌[Szoka et al. (1980), Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9:467]; 및 미국 특허 제4,235,871호, 제4,501,728호, 제4,837,028호, 및 제5,019,369호에 기재된 바와 같이 알려져 있으며, 이들의 전체 개시내용은 본원에 참고로 포함된다.
자가 T 세포
본원은 MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것에 의해 다발성 경화증(예를 들어, 재발-이장성 MS, 2 차 진행성 MS, 1 차 진행성 MS 또는 진행적 재발성 MS)을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, MHC는 클래스 I MHC이다. 일부 실시양태에서, MHC는 클래스 II MHC이다.
일부 실시양태에서, 본원은 본원에 기재된 펩티드(예를 들어, LMP1, LMP2A, 또는 EBNA1 에피토프 서열을 포함하는 펩티드)를 제시하는 APC를 제공한다. 일부 실시양태에서, APC는 B 세포, 항원 제시 T-세포, 수지상 세포, 또는 인공 항원-제시 세포(예를 들어, aK562 세포)이다.
과정에서 사용하기 위한 수지상 세포는 환자 샘플로부터 PBMC를 취하는 것 및 이들을 플라스틱에 부착하는 것에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로 단핵구 집단은 붙이고 모든 다른 세포는 세척될 수 있다. 부착된 집단은 그 다음에 IL-4 및 GM-CSF로 분화되어 단핵구 유래된 수지상 세포를 생산한다. 이들 세포는 IL-1β, IL-6, PGE-1 및 TNF-α(이는 수지상 세포의 표면 상의 중요한 공동-자극 분자를 상향조절함)의 첨가에 의해 성숙될 수 있으며, 그 다음에 본원에 제공된 1 이상의 펩티드로 형질도입된다.
일부 실시양태에서, APC는 인공 항원-제시 세포, 예컨대 aK562 세포이다. 일부 실시양태에서, 인공 항원-제시 세포는 CD80, CD83, 41BB-L, 및/또는 CD86을 발현하도록 조작된다. aK562 세포를 포함한 예시적 인공 항원-제시 세포는 미국 특허 공개 제2003/0147869호에 기재되어 있으며, 이는 본원에 참고로 포함된다.
특정 양태에서, 본원은 APC를 EBV 에피토프를 포함하는 펩티드 및/또는 EBV 에피토프를 코딩하는 핵산과 접촉시키는 것을 포함하는, 본원에 기재된 1 이상의 EBV 에피토프를 제시하는 APC를 생성하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, APC는 방사능처리된다. 일부 실시양태에서, APC는 본원에 기재된 펩티드(예를 들어, LMP1, LMP2A, 또는 EBNA1 에피토프 서열을 포함하는 펩티드)를 제시한다. 본원에 기재된 펩티드를 제시하는 세포는 당업계에 알려진 표준 기술에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, 세포는 펄스되어(pulsed), 펩티드 흡수를 부추길 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포는 본원에 제공된 펩티드를 코딩하는 핵산으로 형질감염된다. 본원은 세포를 본원에 기재된 펩티드로 펄스시키는 것을 포함하는, 항원-제시 세포(APC)를 생산하는 방법을 제공한다. 항원 제시 세포를 생산하는 예시적 실시예는 그 전체가 본원에 포함되는 WO2013088114에서 찾아볼 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원은 MHC 상에 제시되는 본원에 기재된 펩티드를 인식하는 TCR(예를 들어, αβ TCR 또는 γδ TCR)을 발현하는 T 세포(예를 들어, CD4 T 세포 및/또는 CD8 T 세포)를 제공한다. 일부 실시양태에서, T 세포는 클래스 I MHC 상에 제시되는 본원에 기재된 펩티드를 인식하는 TCR을 발현하는 CD8 T 세포(예를 들어, CTL)이다. 일부 실시양태에서, T 세포는 클래스 II MHC 상에 제시되는 본원에 기재된 펩티드를 인식하는 CD4 T 세포(예를 들어, 헬퍼 T 세포)이다.
일부 실시양태에서, 본원은 본원에 기재된 1 이상의 EBV 에피토프를 인식하는 T 세포(예를 들어, 자가 CTL)의 증식을 생성, 활성화 및/또는 유도하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 자가 T 세포(예를 들어, PBMC 샘플)를 포함하는 샘플은 본원에 제공된 APC(예를 들어, 클래스 I MHC 복합체 상에 EBV 에피토프를 포함하는 펩티드를 제시하는 APC)와 함께 배지에서 항온처리된다. 일부 실시양태에서, APC는 T 세포가 얻어진 대상체에 대해 자가이다. 일부 실시양태에서, APC는 T 세포가 얻어진 대상체에 대해 자가가 아니다. 일부 실시양태에서, T 세포를 함유하는 샘플은 본원에 제공된 APC와 함께 2 회 이상 항온처리된다. 일부 실시양태에서, T 세포는 적어도 하나의 사이토카인의 존재 하에서 APC와 함께 항온처리된다. 일부 실시양태에서, 사이토카인은 IL-4, IL-7 및/또는 IL-15이다. APC를 사용하여 T 세포의 증식을 유도하기 위한 예시적 방법은 예를 들어, 미국 특허 공개 제2015/0017723호에서 제공되며, 이는 참고로 본원에 포함된다.
일부 실시양태에서, 본원은 유효량의 조성물을 대상체에게 투여하는 것에 의해 대상체에서 자가면역 질환을 치료 및/또는 예방하기 위해 사용되는 본원에 제공된 T 세포 및/또는 APC를 포함하는 조성물(예를 들어, 치료 조성물)을 제공한다. 일부 양태에서, 본원은 조성물(예를 들어, 약학 조성물, 예컨대 자가 CTL을 포함하는 조성물)을 사용하여 다발성 경화증을 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 본원에 제공된 다중(예를 들어, 2 이상) CTL의 조합을 포함한다.
치료 방법
일부 실시양태에서, 본원은 본원에 제공된 자가 T 세포(예를 들어, 자가 CTL)를 대상체에게 투여하는 것에 의해 대상체에서 MS(예를 들어, 1 차 진행성 MS)를 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, MS는 재발-이장성 MS, 2 차 진행성 MS, 1 차 진행성 MS 또는 진행적 재발성 MS이다. 일부 실시양태에서, 자가 T 세포는 말초 단핵구 혈액 샘플로부터 단리된다. 자가 T 세포에 의한 바이오마커의 발현은 임의의 적합한 방법, 예컨대 유세포분석에 의해 평가될 수 있다. 일부 실시양태에서, 자가 T 세포는 EBV 바이러스 펩티드(예를 들어, AdE1-LMPpoly)를 포함하는 벡터에 의해 자극된다. 일부 실시양태에서, 자가 T 세포는 바이러스 벡터에 의해 자극되며 유세포분석을 통해 분류된다. 예를 들어, 자가 T 세포는 실시예 2에 예시된 프로토콜에 따른 표면 염색을 겪을 수 있다. 일부 실시양태에서, 자가 T 세포는 CD107A에 대해 특이적인 1 이상의 항체와 함께 항온처리되고, 후속적으로 유세포분석에 의해 분류된다. 일부 실시양태에서, 자가 T 세포는 세포내 사이토카인에 결합하는 1 이상의 항체, 예컨대 IFNγ, IL-2, 및/또는 TNF에 대해 특이적인 항체와 함께 항온처리된다. 일부 실시양태에서, 자가 T 세포는 세포내 사이토카인에 대한 항체와 함께 항온처리되고 후속적으로 유세포분석을 통해 분류된다.
일부 양태에서, 본원은 대상체로부터 PMBC 샘플을 얻는 것, 자가 T 세포를 단리시키는 것, 자가 T 세포의 EBV 반응도를 결정하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%의 자가 T 세포가 EBV 반응성인 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것에 의해 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
일부 양태에서, 본원은 대상체로부터 T 세포(예를 들어, CTL)를 포함하는 샘플을 얻는 것, 자가 T 세포를 단리시키는 것, 및 자가 T 세포의 CD107A 발현을 결정하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%의 자가 T 세포가 CD107A를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것에 의해 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본원은 대상체로부터 T 세포(예를 들어, CTL)를 포함하는 샘플을 얻는 것, 자가 T 세포를 단리시키는 것, 자가 T 세포의 IFNγ 발현을 결정하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%의 자가 T 세포가 IFNγ를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것에 의해 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본원은 대상체로부터 T 세포(예를 들어, CTL)를 포함하는 샘플을 얻는 것, 자가 T 세포를 단리시키는 것, 자가 T 세포의 TNF 발현을 결정하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%의 자가 T 세포가 TNF를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것에 의해 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법을 제공한다.
일부 양태에서, 본원은 대상체로부터 T 세포(예를 들어, CTL)를 포함하는 샘플을 얻는 것, 자가 T 세포를 단리시키는 것, 자가 T 세포의 IL-2 발현을 결정하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%의 자가 T 세포가 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것에 의해 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 방법은 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 얻는 것(예를 들어, 대상체로부터 PBMC 샘플을 얻는 것)을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 자가 T 세포(예를 들어, CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포)는 샘플로부터 단리된다. 일부 실시양태에서, 샘플은 주로 또는 완전히 자가 T 세포로 구성된다.
본원은 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 세포독성 T 세포(CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 다발성 경화증(MS)을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 CD107A를 발현한다. 일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 IFNγ를 발현한다. 일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 TNF를 발현한다. 일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 IL-2를 발현한다.
일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 CD107A 및 IFNγ를 발현한다.
일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 CD107A 및 TNF를 발현한다.
일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 CD107A 및 IL-2를 발현한다.
일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 IFNγ 및 TNF를 발현한다.
일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 IFNγ 및 IL-2를 발현한다.
일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 TNF 및 IL-2를 발현한다.
일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 IFNγ, TNF, 및 IL-2를 발현한다.
일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 CD107A, TNF, 및 IL-2를 발현한다.
일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 CD107A, IFNγ, 및 IL-2를 발현한다.
일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 CD107A, IFNγ, 및 TNF를 발현한다.
일부 실시양태에서, 샘플에서 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 CD107A, IFNγ, TNF, 및 IL-2를 발현한다.
일부 실시양태에서, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 T 세포(예를 들어, CTL)는 EBV 반응성이다.
T 세포 바이오마커 발현 및/또는 EBV 반응도는 본원에 개시된 핵산 구축물, 본원에 개시된 폴리펩티드, 또는 APC를 이용한 T 세포 증식 전 또는 후에 측정 및/또는 분석될 수 있다.
일부 양태에서, 본원은 항원-제시 세포(APC)를 EBV 펩티드를 코딩하는 핵산 구축물과 함께 항온처리하여, EBV 펩티드를 제시하도록 APC를 유도하는 것, 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 포함하는 샘플을 항원-제시 세포(APC)와 함께 항온처리하여, 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 증식하도록 유도하는 것에 의해 펩티드-특이적 T 세포(예를 들어, CTL) 증식을 유도하는 것 및 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것에 의해 대상체에서 MS를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도 및 바이오마커 발현은 바이러스 벡터(예를 들어, 본원에 개시된 바이러스 벡터) 및/또는 APC(예를 들어, 본원에 개시된 APC)를 이용한 자가 T 세포의 자극 전에 정량화된다. 대안적으로 또는 추가적으로, EBV 반응도 및 바이오마커 발현은 바이러스 벡터(예를 들어, 본원에 개시된 바이러스 벡터) 및/또는 APC(예를 들어, 본원에 개시된 바이러스 벡터로 형질감염된 APC)를 이용한 자가 T 세포의 자극 후에 정량화될 수 있다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 CD107A를 발현하는 샘플에서의 T 세포의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 IFNγ를 발현하는 샘플에서의 T 세포의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 TNF를 발현하는 샘플에서의 T 세포의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 IL-2를 발현하는 샘플에서의 T 세포의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 다중 바이오마커(예를 들어, CD107A, IFNγ, TNF, 및 IL-2 중 2 이상, 바람직하게는 4 개 전부)를 발현하는 T 세포의 퍼센트로서 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 CD107A, IFNγ, TNF, 및 IL-2를 발현하는 샘플에서의 자가 T 세포의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 계산된다. T 세포는 EBV 반응도 퍼센트 정량화 전 또는 후에 샘플(예를 들어, PBMC 샘플 또는 T 세포를 포함하는 샘플)로부터 단리될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 주로 T 세포를 포함하는 샘플에서 소망하는 특징(들)을 갖는 T 세포의 퍼센트이다.
일부 실시양태에서, EBV 반응도는 CD107A를 발현하는 샘플에서의 CD8+ 림프구의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 IFNγ를 발현하는 샘플에서의 CD8+ 림프구의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 TNF를 발현하는 샘플에서의 CD8+ 림프구의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 IL-2를 발현하는 샘플에서의 CD8+ 림프구의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 다중 바이오마커(예를 들어, CD107A, IFNγ, TNF, 및 IL-2 중 2 이상, 바람직하게는 4 개 전부)를 발현하는 CD8+ 림프구의 퍼센트로서 측정된다. CD8+ 림프구는 EBV 반응도 퍼센트 정량화 전 또는 후에 샘플(예를 들어, PBMC 샘플 또는 CD8+ 림프구의 샘플)로부터 단리될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 주로 CD8+ 림프구를 포함하는 샘플에서 소망하는 특징(들)을 갖는 CD8+ 림프구의 퍼센트이다.
일부 실시양태에서, EBV 반응도는 CD107A를 발현하는 샘플에서의 CD3+ 림프구의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 IFNγ를 발현하는 샘플에서의 CD3+ 림프구의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 TNF를 발현하는 샘플에서의 CD3+ 림프구의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 IL-2를 발현하는 샘플에서의 CD3+ 림프구의 퍼센트를 정량화하는 것에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 다중 바이오마커(예를 들어, CD107A, IFNγ, TNF, 및 IL-2 중 2 이상, 바람직하게는 4 개 전부)를 발현하는 CD3+ 림프구의 퍼센트로서 측정된다. CD3+ 림프구는 EBV 반응도 퍼센트 정량화 전 또는 후에 샘플(예를 들어, PBMC 샘플 또는 CD3+ 림프구의 샘플)로부터 단리될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, EBV 반응도는 주로 CD3+ 림프구를 포함하는 샘플에서 소망하는 특징(들)을 갖는 CD3+ 림프구의 퍼센트이다.
일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)에 의한 CD107a, IFNγ, TNF, 또는 IL-2의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 CD107a, IFNγ, TNF, 또는 IL-2를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)에 의한 CD107a 및 TNF의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 CD107a 및 TNF를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)에 의한 CD107a 및 IFNγ의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 CD107a 및 IFNγ를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)에 의한 CD107a 및 IL-2의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 CD107a 및 IL-2를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)에 의한 TNF 및 IL-2의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 TNF 및 IL-2를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)에 의한 IFNγ 및 IL-2의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 IFNγ 및 IL-2를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)에 의한 IFNγ 및 TNF의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 IFNγ 및 TNF를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)에 의한 CD107a, IFNγ, 및 TNF의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 CD107a, IFNγ, 및 TNF를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)에 의한 CD107a, IFNγ, 및 IL-2의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 CD107a, IFNγ, 및 IL-2를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)에 의한 CD107a, IL-2, 및 TNF의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 CD107a, IL-2, 및 TNF를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)에 의한 IFNγ, IL-2, 및 TNF의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 증식된 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 IFNγ, IL-2, 및 TNF를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 CD107a, IFNγ, TNF, 및 IL-2를 발현하는 경우, 자가 T 세포(예를 들어, CTL)가 대상체에게 투여된다.
펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)는 EBV 반응도를 갖는 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80% 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 또는 90%의 펩티드-특이적 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, T 세포의 용량 당 약 1 × 105 내지 약 1 × 108 T-세포가 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, T 세포의 용량 당 약 1 × 106 내지 약 1 × 107 T 세포가 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 5 × 106, 1 × 107, 1.5 × 107, 또는 2 × 107 T 세포(예를 들어, CTL)가 대상체에게 투여된다. 다중 용량(multiple doses)이 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 초기 용량의 T 세포(예를 들어, 자가 CTL)가 투여되고, 1 회분 이상의 추가 용량의 T 세포(예를 들어, 자가 CTL)가 예를 들어, 치료의 과정을 따라 증가하는 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 2 회분 이상, 3 회분 이상, 4 회분 이상, 5 회분 이상, 6 회분 이상, 7 회분 이상, 8 회분 이상, 9 회분 이상, 또는 10 회분 이상의 용량이 투여된다. 대상체는 초기 용량과 동일하거나 상이한 추가 용량을 투여받을 수 있다. 예를 들어, 저용량이 투여된 후, 고용량이 이어질 수 있다. 용량은 매일, 매주 2회, 매주, 격주, 매월 1 회, 2 개월마다 1 회, 3 개월마다 1 회, 또는 6 개월마다 1 회 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 T 세포(예를 들어, 자가 CTL) 투여의 결과로서 임의의 부작용을 겪지 않는다.
일부 양태에서, 방법은 대상체로부터 뇌 척수액(CSF)의 제1 샘플을 얻는 것, (바람직하게는 CTL 투여 전에) 제1 샘플에서의 CSF 내 항-EBV IgG의 양을 분석하는 것 및, 일정 기간 후에, (바람직하게는 CTL 투여 이후) 대상체로부터 CSF의 제2 샘플을 얻는 것, 제2 샘플에서의 CSF 내 항-EBV IgG의 양을 분석하는 것에 의해 다발성 경화증에 걸린 대상체에서 입양 면역요법의 효능을 평가하는 것을 추가로 포함하며, 제2 샘플에서의 항-EBV IgG의 양이 제1 샘플에 비해 적은 경우, 질환이 안정되고/되거나 진행하지 않는다. CTF의 추가 샘플이 얻어지고 이전 샘플과 비교될 수 있다. 또한, 본원은 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 T 세포(예를 들어, CTL)를 대상체에게 투여하는 것에 의해 MS에 걸린 대상체에서 CSF 내 항-EBV IgG 수준을 감소시키는 방법을 제공한다. CSF 내 항-EBV IgG 수준의 감소는 CSF IgG 색인에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, CSF IgG 수준은 라이버와 펠겐하우어 식에 의해 계산될 수 있다(즉, 도 1 참고). 항-EBV IgG 수준은 T 세포의 투여 후 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 또는 50% 감소될 수 있다.
일부 실시양태에서, 방법은 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 T 세포(예를 들어, CTL, 예컨대 본원에 기재된 펩티드 특이적 자가 CTL)를 대상체에게 투여하는 것에 의해 대상체에서 MS의 증상(예를 들어, 시각 손실, 시력의 손실, 손 기민성에서의 손실 또는 감소, 피로 증가, 및/또는 급뇨)를 개선 또는 안정시키는 것을 포함한다. 또한, 본원은 자가 T 세포(예를 들어, CTL, 예컨대 본원에 기재된 펩티드 특이적 자가 CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, MS에 걸린 대상체에서 시력을 개선하거나, 색각을 개선하거나, 시각 손실을 안정시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원은 본원에 기재된 자가 T 세포를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, MS에 걸린 대상체에서 운동 기능, 균형, 또는 손 기민성을 개선하는 방법을 제공한다. 또한, 본원은 자가 T 세포(예를 들어, CTL, 예컨대 본원에 기재된 펩티드 특이적 자가 CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 수면을 개선하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 대상체는 진단 검사, 예컨대 EDSS를 받는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 T 세포 투여 전 및/또는 후에 EDSS 검사를 받고 EDSS 스코어를 받는다. T 세포 투여 이후 EDSS 스코어는 동일하게 머물 수 있거나, EDSS 스코어는 감소(예를 들어, 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 또는 5.0)될 수 있다.
본원에 개시된 다양한 방법은 대상체, 예컨대 다발성 경화증에 걸린 대상체에서의 보행, 시각, 균형, 인지, 또는 다른 증상을 개선하기 위한 방법, 및/또는 대상체, 예컨대 다발성 경화증에 걸린 대상체에서의 다발성 경화증 기능 구성(multiple sclerosis functional composite)(MSFC), EDSS, 또는 MSSS 스코어를 개선하기 위한 방법일 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 치료 방법은 환자에서의 장애 또는 병태(예를 들어, 운동 기능/균형/손 기민성, 수면, 시력 또는 색각, 피로, 급뇨)를 안정 또는 개선하여, 요법 1 주, 2 주, 4 주, 6 주, 8 주, 10 주, 3 개월, 6 개월, 1 년, 또는 2 년 후 환자의 장애 스코어(이들 시험 또는 다른 적합한 시험에 의해 측정되는 바와 같음)가 T 세포 요법 전의 EDSS 스코어에 비해 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 25%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60% 높아지는 방법을 포함한다.
예를 들어, 대상체의 EDSS 스코어는 예를 들어, 다른 시점, 예컨대 0 개월(기준선), 1 개월, 2 개월, 3 개월, 6 개월, 1 년, 및 2 년에서의 시험에 대한 대상체의 수행을 평가하여 시험될 수 있다. 특정 실시양태에서, T 세포의 투여 이후 대상체의 스코어에서 감소가 기록되는 경우, MS는 안정되고/되거나 진행하지 않은 것으로 여겨진다. 다른 실시양태에서, T 세포의 투여 이후 대상체 스코어에서의 증가 또는 감소가 없는 경우, MS는 안정되고/되거나 진행하지 않은 것으로 여겨진다. EDSS 검사는 CTL 치료의 시작부터 임의의 시점에(예를 들어, CTL 치료의 시작부터 1 주, 2 주, 3 주, 4 주, 1 개월, 2 개월, 3 개월에) 반복되어, 치료가 운동 기능/균형/손 기민성에서의 임의의 추가 악화를 늦추거나 중단시켰는지, 수면을 개선하였는지, 시력 또는 색각, 피로, 급뇨를 개선하였는지 여부를 평가할 수 있다.
일부 실시양태에서, 보행 장애의 진행은 보행 시험을 사용하여, 예를 들어 상이한 시점에 25-발자국 보행 시험에서 대상체의 수행을 평가하여 시험될 수 있다. 특정 실시양태에서, 보행에서 기록된 악화가 없는 경우, 대상체는 보행에서의 진행성 악화를 갖지 않는 것으로 여겨진다. T 세포 요법을 이미 받지 않은 이러한 환자에 대해, 진행성 보행 장애를 나타내는 대상체는 T 세포, 예를 들어 CTL을 이용한 치료를 시작한다. 보행 시험은 (예를 들어, 치료의 시작부터 1 주, 2 주, 3 주, 4 주, 1 개월, 2 개월, 3 개월에) 반복되어, 치료가 예를 들어, 보행 시험에 의해 측정된 바와 같이 보행 수행에서의 임의의 추가 악화를 늦추거나 중단시켰는지 여부를 평가할 수 있다.
MS 요법과 연관된 인지 결과에서의 개선, 인지력 감퇴의 지연, 인지력 감퇴의 안정, 또는 인지 기능의 개선 여부는 PASAT(예를 들어, PASAT 2 또는 PASAT 3) 또는 SDMT 시험, 또는 대안적으로 MS-COG 시험을 사용하여 평가될 수 있다(Erlanger et al., J Neuro Sci 340: 123-129 (2014) 참고).
본원에 제공된 약학 조성물 중 활성 성분의 실제 투여량 수준은 환자에 대한 독성 없이, 특정 환자, 조성물, 및 투여 방식에 대한 소망하는 치료 반응을 달성하기 위해 효과적인 활성 성분의 양을 얻기 위해 달라질 수 있다.
선택된 투여량 수준은 사용되는 특정 약제의 활성, 투여 경로, 투여 시간, 사용되는 특정 화합물의 배설률 또는 대사율, 치료 기간, 사용되는 특정 화합물과 조합되어 사용되는 다른 약물, 화합물 및/또는 물질, 치료되는 환자의 연령, 성별, 체중, 병태, 일반 건강 및 이전 병력을 포함한 다양한 인자, 및 의학 분야에 잘 알려진 유사 인자에 의지할 것이다.
예시 :
실시예 1: MS 환자 및 MS에 대한 EBV-특이적 T 세포 요법을 이용한 다중 치료의 연구
참가자는 200-400 mL의 혈액 샘플을 헌혈하였다. 이 샘플로부터의 말초 혈액 단핵 세포는 임상 등급의 생리 식염수에 현탁된 자가 잠재성 막 단백질(LMP1&2)/엡스타인-바 바이러스 핵 항원 1(EBNA1)-특이적 T 세포의 실험 생성을 위해 사용하였다. 조사 생성물은 EBV 핵 항원-1(EBNA1), 잠재성 막 단백질 1(LMP1) 및 LMP2A로부터의 다중 CD8+ T 세포 에피토프를 코딩하는 아데노바이러스 벡터인 재조합 아데노바이러스 벡터 AdE1-LMPpoly로 감염된 감마-방사능처리된 자가 말초 혈액 단핵 세포를 이용한 자극에 의해 생산한다. 그 다음에, T 세포 배지를 세포 수율, 생존도 및 T 세포 빈도에 대해 평가한다. 200-400 mL의 혈액 샘플의 수집과 제1 세포 투여 사이에 보통 대략 5 주가 지나갈 것이다.
각각의 환자는 EBNA1, LMP1 및 LMP2A에 대한 반응도를 향상시키도록 생체외(ex vivo) 자극된 그들 자신의 T 세포를 투여받았으며, 26 주에 걸쳐 추적되었다. 환자들은 T 세포 요법을 격주 간격으로 정맥내로 투여받았다. 각각의 용량은 1 회 투여하였으며, 5 × 106 T 세포인 초기 용량 후, 1 × 107, 1.5 × 107, 및 2 × 107 세포의 용량이 이어졌다. 4 회의 총 용량을 8 주의 기간에 걸쳐 투여하였다. 세포의 각각의 용량은 정맥내 라인 드립(line drip)을 통해 투여하여, 대량의 세포보다는 혈액 내로의 T 세포의 느린 투여를 허용하였다.
13 명의 환자를 등록하였다. 3 명의 환자를 세포 요법 투여 전에 취소시켰다: 악성 종양의 관련 없는 진단으로 1 명, 및 EBV-특이적 T 세포 생성 장애로 2 명. 나머지 10 명의 환자 각각은 프로토콜 당 4 회의 T 세포 주입을 투여받았다(하기 표 1 참고).
자가 EBV-CTL은 잘 용인되었으며, 유의한 부작용 발생(adverse event)(AE)은 관찰되지 않았다. 1 명의 환자만이 관련된 또는 아마도 관련된 AE를 겪었으며, 이는 DMSO 용매로 인한 것으로 판단된 일시적 등급 1인 "입맛 변화"였다. 등급 4 또는 5인 AE는 보고되지 않았다.
6 명의 환자는 증상이 있고 객관적인 임상 개선을 겪었으며, 이는 제1 주입 후 2-14 주에 시작되었다(표 1). 피로 감소는 임상 개선을 갖는 환자에서 두드러지는 특징이었다. EBV 반응도와 임상 반응 사이의 상관관계를 관찰하였다. 높은 EBV 반응도를 갖는 T 세포를 투여받은 환자는 큰 임상 반응을 겪었다. 연구에서 6 명의 환자는 ≥7% EBV 반응도를 갖는 T 세포를 투여받았으며; 이들 환자 중 5 명이 임상 개선을 겪었고, 3명의 환자가 EDSS 스코어에서의 개선을 겪었다. 4 명의 환자는 ≤3% EBV 반응도를 갖는 T 세포를 투여받았으며; 이들 중 1 명만이 임상 개선을 가졌고, 1 명은 EDSS의 악화를 가졌으며, 2 명은 변화 없음이 보고되었다. 6 개월의 연구 기간 동안의 임상 개선, 또는 이의 결여는 또한 투여된 T 세포의 EBV-특이적 T 세포 기능의 바이오마커와 연관성이 있었다(도 2). 관찰된 편익이 없는 환자와 비교하면, 임상 편익을 겪은 환자는 CD107a, IFNγ 및 TNFα를 발현하는 EBV-특이적 CD8+ T 세포로 상당히 풍부화된 요법을 투여받았다. 또한, 임상 편익은 투여된 T 세포의 다기능성(CD107a, IFNγ, TNFα, 및 IL-2의 발현)과 연관성이 있었다.
본 연구에서 MS 환자에 대한 자가 T 세포 요법은 심각한 AE 없이, 안전하고 잘 용인되었으며, 치료와 관련된 유일한 AE는 T 세포가 아닌 제조에서의 DMSO와 관련된 듯한 미각장애였다.
SPMS 및 PPMS 환자에서의 임상 개선은 비교적 고정된 기준선으로부터 이루어졌으며(최대 5년 동안) 급성 MS 플레어(flare)의 해결은 나타내지 않았다. ≥7%의 EBV 반응도를 갖는 T 세포를 투여받은 6 명의 환자 중, 5 명은 임상 개선을 나타내었으며, 3 명의 환자는 이들의 EDSS 스코어가 개선되었다.
EBV-특이적 T 세포의 작용의 가설이 세워진 메커니즘과 일치하여, T 세포 생성물의 EBV 반응도와 임상 개선 사이에 용량-반응 상관관계가 있는 것으로 나타난다.
피로에서의 감소는 응답자에서 일치하며 두드러지는 특징이었다. 피로는 MS의 가장 장애성인 증상이며 임상 MS 개시에 보통 수년 앞설 수 있다.
본 발명자들의 데이터는 MS에서 EBV 감염의 병원성 역할에 대한 증가하는 증거에 추가된다. T 세포는 모든 CNS 구획에 접속하기 때문에, EBV-감염된 B 세포만을 표적화하는 T 세포 요법은 유리한 안전성 및 오래가는 효능을 제공할 수 있는 새로운 치료 양식이다.
실시예 2: LMP 및 EBNA1 특이적 T 세포의 다중-파라미터 세포내 사이토카인 염색 및 탈과립 분석을 위한 예시적 방법
1. 시험될 LMP/EBNA1 CD8 펩믹스(pepmix)(100 ㎍/mL 스톡), EBNA1 펩믹스(100 ㎍/mL 스톡) 및 임의의 HLA-매칭된 펩티드 에피토프(200 ㎍/mL 스톡)를 RPMI1640-10% FCS 중 2 ㎍/mL로 희석한다(어세이에서 최종 농도는 1 ㎍/mL일 것임).
2. 세포 자극 칵테일(Cell Stimulation Cocktail)을 RPMI1640-10% FCS 중 1:50으로 희석한다. (이는 어세이에서 1:100의 최종 희석액이 될 것임).
주의: eBioscience 세포 자극 칵테일은 RPMI 중 1 대 5로 희석하여 100x의 스톡 농도를 제조한 후, -20℃에서 저장한다.
3. 100 μL의 적절한 펩믹스, 펩티드 에피토프 또는 세포 자극 칵테일, 또는 100 μL RPMI1640-10%FCS(펩티드 대조군 없음)를 96-웰 V-바텀 플레이트(bottom plate)의 적절한 웰에 첨가한다.
4. PBMC 또는 T 세포를 RPMI1640-10%FCS 중 5x106 세포/mL로 희석한다(이는 어세이 당 5x105 세포를 제공할 것임).
5. GolgiPlug(브레펠딘 A)를 2 μL/mL의 세포의 최종 비로 세포에 첨가한다(어세이에서 GolgiPlug의 최종 농도는 1 μL/mL일 것임).
6. GolgiStop(모넨신)을 1.4 μL/mL의 세포의 최종 비로 세포에 첨가한다(어세이에서 GolgiStop의 최종 농도는 0.7 μL/mL일 것임).
7. FITC 콘쥬게이트된 항-CD107a를 50 μL/mL의 최종 비로 세포에 첨가한다(항-CD107a의 최종 농도는 5 μL/시험 임).
8. 웰 당 100 μL의 세포 현탁액을 96-웰 V-바텀 플레이트의 필요한 웰에 첨가한다.
9. 37℃/6.5%CO2에서 4 시간 동안 항온처리한다.
10. 플레이트를 2300 rpm에서 2 분 동안 원심분리한다.
11. 상청액을 폐기한다. 웰 당 200 μL의 PBS-2%FCS를 첨가하는 것에 의해 세포를 세척하고 플레이트를 2300 rpm에서 2 분 동안 원심분리한다. 이 단계를 반복한다.
12. 웰 당 PBS-2% FCS 200 μL/세척액으로 세포를 2 회 세척하고, 튜브를 1000 g(2300 rpm)에서 2 분 동안 원심분리한다.
표면 세포 항원 염색
13. 0.125의 perCP-Cy5.5 콘쥬게이트된 항-CD8, 0.25 μL의 퍼시픽 블루(Pacific Blue) 콘쥬게이트된 항-CD4 및 0.2 μL의 Live/Dead Near IR을 함유한 50 μL/웰의 PBS-2%FCS에 세포를 재현탁한다. 30 분 동안 4℃에서 항온처리한다.
14. 플레이트를 2300 rpm에서 2 분 동안 원심분리한다. 상청액을 폐기한다. 웰 당 200 μL의 PBS-2%FCS를 첨가하는 것에 의해 세포를 세척한다. 플레이트를 2300 rpm에서 2 분 동안 원심분리한다. 이 단계를 반복한다.
15. BD 사이토픽스(cytofix)/사이토펌(cytoperm) 용액의 웰 당 100 μL에서 세포를 재현탁하고 4℃에서 20 분 동안 항온처리한다.
16. 플레이트를 2300 rpm에서 2 분 동안 원심분리한다. 상청액을 폐기한다. 웰 당 200 μL의 BD Perm/Wash를 첨가하는 것에 의해 세포를 세척한다. 플레이트를 2300 rpm에서 2 분 동안 원심분리한다. 이 단계를 반복한다.
세포내 사이토카인 염색
17. 1 μL의 PE-콘쥬게이트된 항-IL-2, 1 μL의 AF700 콘쥬게이트된 항-IFNγ 및 0.25 μL의 APC 콘쥬게이트된 항-TNF를 함유하는 50 μL/웰의 BD Perm/Wash에 고정/투과성 세포를 재현탁한다. 30 분 동안 4℃에서 항온처리한다.
18. 플레이트를 2300 rpm에서 2 분 동안 원심분리한다. 상청액을 폐기한다. 웰 당 200 μL의 Perm/Wash를 첨가하는 것에 의해 세포를 세척한다. 플레이트를 2300 rpm에서 2 분 동안 원심분리한다. 이 단계를 반복한다.
19. 200 μL의 PBS-2% 파라포름알데하이드에 세포를 재현탁하고 4℃에서 저장한다.
20. BD Fortessa를 사용하여 세포를 얻는다. Flow Jo 소프트웨어를 사용하여 사이토카인 생산/탈과립을 분석한다.
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009

Claims (130)

  1. 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 세포독성 T 세포(CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 다발성 경화증(multiple sclerosis)(MS)을 치료 또는 예방하는 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    적어도 5%의 CTL이 CD107a를 발현하는 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    적어도 10%의 CTL이 CD107a를 발현하는 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    적어도 15%의 CTL이 CD107a를 발현하는 방법.
  5. 제1항에 있어서,
    적어도 20%의 CTL이 CD107a를 발현하는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 5%의 CTL이 IFNγ를 발현하는 방법.
  7. 제6항에 있어서,
    적어도 10%의 CTL이 IFNγ를 발현하는 방법.
  8. 제7항에 있어서,
    적어도 15%의 CTL이 IFNγ를 발현하는 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    적어도 20%의 CTL이 IFNγ를 발현하는 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 5%의 CTL이 TNF를 발현하는 방법.
  11. 제10항에 있어서,
    적어도 10%의 CTL이 TNF를 발현하는 방법.
  12. 제11항에 있어서,
    적어도 15%의 CTL이 TNF를 발현하는 방법.
  13. 제12항에 있어서,
    적어도 20%의 CTL이 TNF를 발현하는 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
    적어도 1%의 CTL이 IL-2를 발현하는 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    적어도 5%의 CTL이 IL-2를 발현하는 방법.
  16. 제15항에 있어서,
    적어도 10%의 CTL이 IL-2를 발현하는 방법.
  17. 제16항에 있어서,
    적어도 15%의 CTL이 IL-2를 발현하는 방법.
  18. 제1항에 있어서,
    적어도 30%의 CTL이 CD107a, IFNγ, TNFa, 및 IL-2를 발현하는 방법.
  19. 제1항에 있어서,
    적어도 40%의 CTL이 CD107a, IFNγ, TNFa, 및 IL-2를 발현하는 방법.
  20. 제1항에 있어서,
    적어도 50%의 CTL이 CD107a, IFNγ, TNFa, 및 IL-2를 발현하는 방법.
  21. 제1항에 있어서,
    적어도 70%의 CTL이 CD107a, IFNγ, TNFa, 및 IL-2를 발현하는 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
    CTL이 적어도 5% EBV 반응도를 갖는 방법.
  23. 제22항에 있어서,
    CTL이 적어도 7% EBV 반응도를 갖는 방법.
  24. 제23항에 있어서,
    CTL이 적어도 10% EBV 반응도를 갖는 방법.
  25. 제24항에 있어서,
    CTL이 적어도 15% EBV 반응도를 갖는 방법.
  26. 제25항에 있어서,
    CTL이 적어도 20% EBV 반응도를 갖는 방법.
  27. 제26항에 있어서,
    CTL이 적어도 30% EBV 반응도를 갖는 방법.
  28. a) 대상체로부터 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 세포독성 T 세포(CTL)를 포함하는 샘플을 단리시키는 것;
    b) CTL을 대상체에게 투여하는 것
    을 포함하는, 대상체에서 다발성 경화증(MS)을 치료 또는 예방하는 방법.
  29. a) 자가 세포독성 T 세포(CTL)를 포함하는 샘플을 EBV 펩티드를 제시하는 항원-제시 세포(APC)와 함께 항온처리하여, 샘플에서 펩티드-특이적 T 세포의 증식을 유도하는 것;
    b) 펩티드-특이적 자가 CTL을 대상체에게 투여하는 것
    을 포함하는, 대상체에서 MS를 치료 또는 예방하는 방법.
  30. a) 항원-제시 세포(APC)를 EBV 펩티드를 코딩하는 핵산 구축물과 함께 항온처리하여, EBV 펩티드를 제시하도록 APC를 유도하는 것;
    b) 자가 CTL을 포함하는 샘플을 항원-제시 세포(APC)와 함께 항온처리하여, 자가 CTL이 증식하도록 유도하는 것에 의해 펩티드-특이적 CTL 증식을 유도하는 것; 및
    c) 펩티드-특이적 자가 CTL을 대상체에게 투여하는 것
    을 포함하는, 대상체에서 MS를 치료 또는 예방하는 방법.
  31. 제30항에 있어서,
    핵산 구축물이 바이러스 벡터인 방법.
  32. 제31항에 있어서,
    바이러스 벡터가 AdE1-LMPpoly인 방법.
  33. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    방법이 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL에 의한 CD107a의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 5%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 CD107a를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 CTL을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  34. 제33항에 있어서,
    샘플에서 적어도 10%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 CD107a를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서,
    샘플에서 적어도 15%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 CD107a를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  36. 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    샘플에서 적어도 20%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 CD107A를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  37. 제29항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
    방법이 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL에 의한 IFNγ의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 5%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 IFNγg를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 CTL을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  38. 제37항에 있어서,
    샘플에서 적어도 10%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 IFNγ를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  39. 제37항 또는 제38항에 있어서,
    샘플에서 적어도 15%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 IFNγ를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  40. 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
    샘플에서 적어도 20%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 IFNγ를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  41. 제29항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
    방법이 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL에 의한 TNF의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 5%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 TNF를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 CTL을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  42. 제41항에 있어서,
    샘플에서 적어도 10%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 TNF를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  43. 제41항 또는 제42항에 있어서,
    샘플에서 적어도 15%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 TNF를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  44. 제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
    샘플에서 적어도 20%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 TNF를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  45. 제29항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서,
    방법이 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL에 의한 IL-2의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 1%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 IL-2를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 CTL을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  46. 제45항에 있어서,
    샘플에서 적어도 5%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 IL-2를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  47. 제45항 또는 제46항에 있어서,
    샘플에서 적어도 10%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 IL-2를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  48. 제45항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서,
    샘플에서 적어도 15%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 IL-2를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  49. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    방법이 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL에 의한 CD107a, TNF, IFNγ, 및 IL-2의 발현을 분석하는 것, 및 적어도 20%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 CD107a, TNF, IFNγ, 및 IL-2를 발현하는 경우, 펩티드-특이적 자가 CTL을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  50. 제49항에 있어서,
    샘플에서 적어도 30%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 CD107a, TNF, IFNγ, 및 IL-2를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  51. 제49항 또는 제50항에 있어서,
    샘플에서 적어도 40%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 CD107a, TNF, IFNγ, 및 IL-2를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  52. 제49항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서,
    샘플에서 적어도 50%의 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL이 CD107a, TNF, IFNγ, 및 IL-2를 발현하는 경우, CTL이 투여되는 방법.
  53. 제29항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
    방법이 증식된 펩티드-특이적 자가 CTL의 EBV 반응도를 분석하는 것, 및 반응도가 소정의 임계치를 초과하는 경우, 펩티드-특이적 자가 CTL을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  54. 제53항에 있어서,
    임계치가 5%인 방법.
  55. 제53항에 있어서,
    임계치가 7%인 방법.
  56. 제53항에 있어서,
    임계치가 10%인 방법.
  57. 제53항에 있어서,
    임계치가 20%인 방법.
  58. 제53항에 있어서,
    임계치가 30%인 방법.
  59. 제53항에 있어서,
    임계치가 50%인 방법.
  60. 제29항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서,
    샘플이 단계 (a)에서 1 이상의 사이토카인과 함께 항온처리되는 방법.
  61. 제29항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서,
    APC가 B 세포를 포함하는 방법.
  62. 제29항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서,
    APC가 항원-제시 T-세포를 포함하는 방법.
  63. 제29항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서,
    APC가 수지상 세포를 포함하는 방법.
  64. 제29항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서,
    APC가 인공 항원-제시 세포를 포함하는 방법.
  65. 제64항에 있어서,
    인공 항원-제시 세포가 aK562 세포인 방법.
  66. 제28항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
    샘플이 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell)(PBMC)를 포함하는 방법.
  67. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서,
    대상체로부터 샘플을 얻는 것을 추가로 포함하는 방법.
  68. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
    EBV 펩티드가 표 1에 열거된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  69. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
    EBV 펩티드가 LMP1 펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 방법.
  70. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
    EBV 펩티드가 LMP2A 펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 방법.
  71. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
    EBV 펩티드가 EBNA1 펩티드 또는 이의 단편을 포함하는 방법.
  72. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서,
    약 5 × 106 CTL을 1회분 용량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  73. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서,
    약 1 × 107 CTL을 1회분 용량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  74. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서,
    약 1.5 × 107 CTL을 1회분 용량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  75. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서,
    약 2 × 107 CTL을 1회분 용량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  76. 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서,
    다중 용량의 CTL이 예를 들어, 증가하는 용량으로 대상체에게 투여되는 방법.
  77. 제76항에 있어서,
    용량이 매주 투여되는 방법.
  78. 제76항에 있어서,
    용량이 격주로 투여되는 방법.
  79. 제78항에 있어서,
    연속적으로 더 높은 수의 CTL의 4 회 용량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  80. 제79항에 있어서,
    5 × 106 CTL의 제1 용량, 1 × 107 CTL의 제2 용량, 1.5 × 107 CTL의 제3 용량, 및 2 × 107 CTL의 제4 용량을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  81. 제1항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서,
    대상체가 CTL 투여의 결과로서 유의한 부작용을 겪지 않는 방법.
  82. 제1항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 대상체로부터 뇌 척수액(cerebral spinal fluid)(CSF)의 제1 샘플을 얻는 것,
    (b) CTL 투여 전에 제1 샘플에서의 CSF 내 항-EBV IgG의 양을 결정하는 것,
    (c) 일정 기간 후에, CTL 투여 이후 대상체로부터 CSF의 제2 샘플을 얻는 것,
    (d) 제2 샘플에서의 CSF 내 항-EBV IgG의 양을 결정하는 것
    을 포함하는, 다발성 경화증에 걸린 대상체에서 입양 면역요법의 효능을 평가하는 것을 추가로 포함하는 방법으로,
    제2 샘플 내 항-EBV IgG의 양이 제1 샘플에 비해 적은 경우, 질환이 안정되고/되거나 진행하지 않는 것인 방법
  83. 제1항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서,
    MS가 재발-이장성(relapsing-remitting) MS, 2 차 진행성 MS, 1 차 진행성 MS, 또는 진행적 재발성(progressively relapsing) MS인 방법.
  84. 제83항에 있어서,
    MS가 1 차 진행성 MS인 방법.
  85. 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서,
    CTL 투여 이후 대상체의 운동 기능/균형/손 기민성, 수면, 시력 또는 색각, 피로, 및/또는 급뇨가 개선된 방법.
  86. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서,
    CTL 투여 이후 대상체의 EDSS 스코어가 동일하게 유지되는 방법.
  87. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서,
    CTL 투여 이후 대상체의 EDSS 스코어가 적어도 0.5 감소되는 방법.
  88. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서,
    CTL 투여 이후 대상체의 EDSS 스코어가 적어도 1.0 감소되는 방법.
  89. 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 세포독성 T 세포(CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, MS에 걸린 대상체에서 CSF 내 항-EBV IgG 수준을 감소시키는 방법.
  90. 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 세포독성 T 세포(CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, MS에 걸린 대상체에서 시력을 개선하거나, 색각을 개선하거나, 시력 손실을 안정시키는 방법.
  91. 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 세포독성 T 세포(CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, MS에 걸린 대상체에서 운동 기능, 균형, 또는 손 기민성을 개선하는 방법.
  92. 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 세포독성 T 세포(CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, MS에 걸린 대상체에서 수면을 개선하는 방법.
  93. 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 세포독성 T 세포(CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, MS에 걸린 대상체에서 피로를 치료 또는 예방하는 방법.
  94. 클래스 I MHC 상에 제시되는 EBV 펩티드에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체를 발현하는 자가 세포독성 T 세포(CTL)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, MS에 걸린 대상체에서 급뇨를 치료 또는 예방하는 방법.
  95. 제1항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서,
    MS가 재발-이장성 MS인 방법.
  96. 제1항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서,
    MS가 2 차 진행성 MS인 방법.
  97. 제1항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서,
    MS가 1 차 진행성 MS인 방법.
  98. 제1항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서,
    MS가 1 차 진행성 진행적 재발성 MS인 방법.
  99. (a) 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 얻는 것,
    (b) 샘플에서 자가 T 세포를 단리시키는 것,
    (c) 샘플에서 자가 T 세포의 EBV 반응도를 결정하는 것, 및 적어도 임계 퍼센트의 자가 T 세포가 EBV 반응성인 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것
    을 포함하는, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  100. 제99항에 있어서,
    임계치가 1%인 방법.
  101. 제99항에 있어서,
    임계치가 2%인 방법.
  102. 제99항에 있어서,
    임계치가 3%인 방법.
  103. 제99항에 있어서,
    임계치가 5%인 방법.
  104. 제99항에 있어서,
    임계치가 10%인 방법.
  105. 제99항에 있어서,
    임계치가 20%인 방법.
  106. (a) 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 얻는 것,
    (b) 샘플에서 자가 T 세포를 단리시키는 것,
    (c) 샘플에서 CD107A를 발현하는 자가 T 세포의 퍼센트를 결정하는 것, 및 적어도 특정 퍼센트의 자가 T 세포가 CD107A를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것
    을 포함하는, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  107. 제106항에 있어서,
    적어도 1%의 자가 T 세포가 CD107A를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  108. 제106항에 있어서,
    적어도 3%의 자가 T 세포가 CD107A를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  109. 제106항에 있어서,
    적어도 5%의 자가 T 세포가 CD107A를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  110. 제106항에 있어서,
    적어도 10%의 자가 T 세포가 CD107A를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  111. (a) 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 얻는 것,
    (b) 샘플에서 자가 T 세포를 단리시키는 것,
    (c) 샘플에서 TNF를 발현하는 자가 T 세포의 퍼센트를 결정하는 것, 및 적어도 특정 퍼센트의 자가 T 세포가 TNF를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것
    을 포함하는, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  112. 제111항에 있어서,
    적어도 1%의 자가 T 세포가 TNF를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  113. 제111항에 있어서,
    적어도 3%의 자가 T 세포가 TNF를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  114. 제111항에 있어서,
    적어도 5%의 자가 T 세포가 TNF를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  115. 제111항에 있어서,
    적어도 10%의 자가 T 세포가 TNF를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  116. (a) 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 얻는 것,
    (b) 샘플에서 자가 T 세포를 단리시키는 것,
    (c) 샘플에서 IFNγ를 발현하는 자가 T 세포의 퍼센트를 결정하는 것, 및 적어도 특정 퍼센트의 자가 T 세포가 IFNγ를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것
    을 포함하는, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  117. 제116항에 있어서,
    적어도 1%의 자가 T 세포가 IFNγ를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  118. 제116항에 있어서,
    적어도 3%의 자가 T 세포가 IFNγ를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  119. 제116항에 있어서,
    적어도 5%의 자가 T 세포가 IFNγ를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  120. 제116항에 있어서,
    적어도 10%의 자가 T 세포가 IFNγ를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  121. (a) 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 얻는 것,
    (b) 샘플에서 자가 T 세포를 단리시키는 것,
    (c) 샘플에서 IL-2를 발현하는 자가 T 세포의 퍼센트를 결정하는 것, 및 적어도 특정 퍼센트의 자가 T 세포가 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것
    을 포함하는, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  122. 제116항에 있어서,
    적어도 1%의 자가 T 세포가 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  123. 제116항에 있어서,
    적어도 3%의 자가 T 세포가 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  124. 제116항에 있어서,
    적어도 5%의 자가 T 세포가 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  125. 제116항에 있어서,
    적어도 10%의 자가 T 세포가 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  126. (a) 대상체로부터 PMBC 샘플을 얻는 것,
    (b) 샘플에서 자가 T 세포를 단리시키는 것,
    (c) 샘플에서 CD107a, IFNγ, TNFa, 및 IL-2를 발현하는 자가 T 세포의 퍼센트를 결정하는 것, 및 적어도 특정 퍼센트의 자가 T 세포가 CD107a, IFNγ, TNFa, 및 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 것
    을 포함하는, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  127. 제126항에 있어서,
    적어도 1%의 자가 T 세포가 CD107a, IFNγ, TNFa, 및 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  128. 제126항에 있어서,
    적어도 3%의 자가 T 세포가 CD107a, IFNγ, TNFa, 및 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  129. 제126항에 있어서,
    적어도 5%의 자가 T 세포가 CD107a, IFNγ, TNFa, 및 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
  130. 제126항에 있어서,
    적어도 10%의 자가 T 세포가 CD107a, IFNγ, TNFa, 및 IL-2를 발현하는 경우, 입양 면역요법을 위한 대상체를 선택하는 방법.
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