KR20180106023A - 해조류 추출물 및 로즈마리 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents
해조류 추출물 및 로즈마리 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 해조류 추출물 및 로즈마리 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 해조류 추출물; 및 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물;을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 해조류 추출물; 및 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함함으로써, 쉽고 간단하게 제조할 수 있으며 약효가 우수한 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공할 수 있다.
또한 본 발명은 장기간 복용 시 체중 증가, 두통, 고혈압, 우울증 등의 부작용을 최소화할 수 있는 골다공증 예방 또는 치료용 식품 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명은 해조류 추출물; 및 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함함으로써, 쉽고 간단하게 제조할 수 있으며 약효가 우수한 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공할 수 있다.
또한 본 발명은 장기간 복용 시 체중 증가, 두통, 고혈압, 우울증 등의 부작용을 최소화할 수 있는 골다공증 예방 또는 치료용 식품 조성물을 제공할 수 있다.
Description
본 발명은 해조류 추출물 및 로즈마리 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 해조류 추출물; 및 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물;을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
해조류는 오래전부터 식용이나 산업용으로 다양하게 이용되고 있는데, 아시아에서는 해조류를 주로 음식 재료로 사용하는 반면 서양에서는 새로운 화합물을 제조하기 위해 해조류를 사용하고 있다.
해조류를 구성하고 있는 주요성분은 폴리페놀이며, 이들 폴리페놀은 음식, 화장품, 의학 및 해조 공업의 원료 등으로 다양하게 이용될 뿐 아니라 최근 건강과 웰빙에 대한 관심이 깊어지면서 생체조절 기능을 갖는 다기능성 올리고당의 소재로 각광받고 있다.
로즈마리는 살균작용, 소독작용, 방충작용, 산화방지작용이 있어 각종 식품의 보존기간을 증가시킬 수 있고, 감기, 신경통, 활력 증진, 노화 방지에 효과가 있으며, 특히 로즈마리 향은 뇌의 활동을 높이고 기억력, 집중력을 개선할 수 있다.
한편 국내뿐 아니라 전 세계적으로 비만 유병율이 급증하고 있으며, 특히 성인 비만인구는 지속적으로 증가하고 있어 다양한 성인병의 원인이 될 수 있을 뿐 아니라 이로 인해 삶의 질이 크게 저하되기 때문에 이를 예방하고 치료하기 위한 생리활성물질의 개발이 요구된다.
이와 관련하여 한국등록특허 제10-0878331호, 한국등록특허 제10-1594979호, 한국등록특허 제10-1072904호 등은 생리활성물질을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 개시하고 있다.
그러나 상기 문헌에 개시된 기술은 각종 생약 추출물을 활용한 것으로서, 제조방법이 복잡하고 약효가 우수하지 않다.
또한 장기간 복용 시 체중 증가, 두통, 고혈압, 우울증 등의 부작용을 초래하는 문제점이 있다.
본 발명은 상기 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 해조류 추출물; 및 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함함으로써, 쉽고 간단하게 제조할 수 있으며 약효가 우수한 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명은 장기간 복용 시 체중 증가, 두통, 고혈압, 우울증 등의 부작용을 최소화할 수 있는 비만 예방 또는 치료용 식품 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 해조류 추출물; 및 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물;을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 해조류 추출물은 (A) 해조류를 열수 추출하여 폴리사카라이드 함유 추출액을 제조하는 폴리사카라이드 추출액 제조단계; (B) 폴리사카라이드 분해효소 생산 미생물을 배양한 후 균체 제거하여 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액을 제조하는 폴리사카라이드 분해효소 배양액 제조단계; 및 (C) 상기 (A) 단계에서 제조된 폴리사카라이드 함유 추출액과 상기 (B) 단계에서 제조된 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액을 혼합하여 효소 반응시키는 효소 반응단계를 포함하는 방법에 의하여 제조되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 해조류는 감태, 다시마, 미역, 곰피 및 대황을 포함하고, 상기 감태, 다시마, 미역, 곰피 및 대황의 중량비는 50~80:5~10:5~10:5~10:5~10인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 열수 추출은 해조류 100중량부에 대하여 물 500~2,000중량부를 가하고 70~95℃에서 1~3시간 가열하여 추출하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 폴리사카라이드 함유 추출액과 상기 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액은 30~70:30~70의 중량비로 혼합되는 것을 특징으로 한다.
또한 본 발명은 해조류 추출물; 및 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물;을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 해조류 추출물은 (A) 해조류를 열수 추출하여 폴리사카라이드 함유 추출액을 제조하는 폴리사카라이드 추출액 제조단계; (B) 폴리사카라이드 분해효소 생산 미생물을 배양한 후 균체 제거하여 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액을 제조하는 폴리사카라이드 분해효소 배양액 제조단계; 및 (C) 상기 (A) 단계에서 제조된 폴리사카라이드 함유 추출액과 상기 (B) 단계에서 제조된 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액을 혼합하여 효소 반응시키는 효소 반응단계를 포함하는 방법에 의하여 제조되는 것을 특징으로 한다.
본 발명은 해조류 추출물; 및 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함함으로써, 쉽고 간단하게 제조할 수 있으며 약효가 우수한 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공할 수 있다.
또한 본 발명은 장기간 복용 시 체중 증가, 두통, 고혈압, 우울증 등의 부작용을 최소화할 수 있는 골다공증 예방 또는 치료용 식품 조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 해조류 추출물(UJW 8575)의 지방세포 분화억제 활성을 나타내고 있다.
도 2는 로즈마리 추출물, 프로폴리스 추출물 및 닥나무 뿌리껍질 추출물의 지방세포 분화억제 활성을 나타내고 있다.
도 3은 해조류 추출물, 로즈마리 추출물 및 프로폴리스 추출물을 포함하는 혼합 추출물의 지방세포 분화억제 활성을 나타내고 있다.
도 4는 해조류 추출물 및 로즈마리 추출물을 포함하는 혼합 추출물의 지방세포 단백질의 발현 정도를 나타내고 있다.
도 2는 로즈마리 추출물, 프로폴리스 추출물 및 닥나무 뿌리껍질 추출물의 지방세포 분화억제 활성을 나타내고 있다.
도 3은 해조류 추출물, 로즈마리 추출물 및 프로폴리스 추출물을 포함하는 혼합 추출물의 지방세포 분화억제 활성을 나타내고 있다.
도 4는 해조류 추출물 및 로즈마리 추출물을 포함하는 혼합 추출물의 지방세포 단백질의 발현 정도를 나타내고 있다.
이하 실시예를 바탕으로 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명에 사용된 용어, 실시예 등은 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고 통상의 기술자의 이해를 돕기 위하여 예시된 것에 불과할 뿐이며, 본 발명의 권리범위 등이 이에 한정되어 해석되어서는 안 된다.
본 발명에 사용되는 기술 용어 및 과학 용어는 다른 정의가 없다면 이 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 나타낸다.
본 발명은 해조류 추출물; 및 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물;을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물 또는 비만 예방 또는 치료용 식품 조성물로 사용될 수 있다.
상기 해조류 추출물은 (A) 해조류를 열수 추출하여 폴리사카라이드 함유 추출액을 제조하는 폴리사카라이드 추출액 제조단계; (B) 폴리사카라이드 분해효소 생산 미생물을 배양한 후 균체 제거하여 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액을 제조하는 폴리사카라이드 분해효소 배양액 제조단계; 및 (C) 상기 (A) 단계에서 제조된 폴리사카라이드 함유 추출액과 상기 (B) 단계에서 제조된 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액을 혼합하여 효소 반응시키는 효소 반응단계를 포함하는 방법에 의하여 제조될 수 있다.
해조류에 함유된 폴리사카라이드를 추출하여 폴리사카라이드 분해 효소 생산 미생물이 생산한 폴리사카라이드 분해 효소를 함유하는 배양액과 혼합하여 효소반응시킴으로써, 폴리페놀을 함유하는 해조류 추출물을 용이하게 제조할 수 있다.
상기 해조류는 감태, 다시마, 미역, 곰피 및 대황을 포함할 수 있다.
상기 해조류를 구성하는 감태, 다시마, 미역, 곰피 및 대황의 중량비는 50~80:5~10:5~10:5~10:5~10인 것이 비만 예방 또는 치료를 위해 바람직하다.
상기 열수 추출은 해조류 100중량부에 대하여 물 500~2,000중량부를 가하고 70~95℃에서 1~3시간 가열하여 추출할 수 있다.
폴리사카라이드 추출은 물을 용매로 이용하는 열수 추출에 의하므로 용매로 인한 문제를 피할 수 있다.
즉, 물 이외의 용매의 경우 안전성의 이유로 용매를 제거하여야 하는 등의 문제가 있을 수 있으나, 물을 용매로 사용하는 열수추출의 경우 이와 같은 문제를 피할 수 있다.
또한 열수 추출에 의하므로 해조류로부터 폴리사카라이드를 효과적으로 추출할 수 있다.
상기 폴리사카라이드 함유 추출액은 상기 열수 추출에 의해 추출된 열수 추출액을 기공의 직경이 0.2~1㎛인 여과막으로 여과한 여액일 수 있다.
상기 미생물은 슈도모나스속 균(Pseudomonas sp.), 탈라소모나스속 균(Thalassomonas sp.), 아가리보란스 알부스(Agarivorans albus), 슈도알터로모나스속 균(Pseudoalteromonas sp.), 및 슈도알테오모나스 카라기노보어(Pseudoalteomonas carrageenovor)에서 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있다.
바람직하게는 슈도모나스 안규라타(Pseudomonas angulata), 탈라소모나스 피스시시다(Thalassomonas piscicida), 아가리보란스 알부스(Agarivorans albus), 슈도알터로모나스 시트리아(Pseudoalteromonas citrea) 및 슈도알테오모나스 카라기노보어(Pseudoalteomonas carrageenovor)를 포함할 수 있다.
이와 같이 다양한 폴리사카라이드 분해효소를 생산할 수 있는 미생물 조합에 의해 다양한 폴리페놀을 제조할 수 있다. 즉, 5종의 미생물은 상이한 폴리사카라이드 분해 효소를 생산하고, 각각의 효소는 폴리사카라이드의 여러 부위를 잘라내어 간단히 여러 종류의 폴리페놀을 생산할 수 있다.
폴리사카라이드 분해 효소 생산 미생물을 배지에서 배양함으로써, 폴리사카라이드 분해 효소가 함유되는 배양액을 제조할 수 있다.
이때 배양액 중 미생물로 이루어진 균체를 제거함으로써 해조류 추출물 중 미생물이 함유되는 것을 방지하고, 효과적으로 효소반응이 일어나도록 할 수 있다.
상기 균체 제거는 배양 종결 후 배양액의 pH를 8~9로 조절한 후 원심 분리하여 상등액을 수득하여 이루어질 수 있다. pH는 수산화나트륨 등으로 조절될 수 있으며, 원심분리는 4000rpm에서 30분간 실시할 수 있다.
상기 폴리사카라이드 분해 효소 함유 배양액은 상기 상등액의 pH를 6~7로 조절하여 수득할 수 있다. 이때 pH는 35% 염산 등의 산으로 조절할 수 있다. 이와 같이 pH를 조절함으로써 균체 분리 후 남은 효소의 활성을 유지할 수 있다.
상기 폴리사카라이드 함유 추출액과 상기 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액은 30~70:30~70의 중량비로 혼합되는 것이 바람직하다.
상기 효소 반응은 30~40℃에서 10~30시간 수행될 수 있다.
상기 해조류 추출물의 제조방법은 (D) 상기 효소 반응 종결 후 효소 반응액을 90~99℃에서 20~40분 처리한 후 여과하여 여액을 수득하는 정제단계를 추가로 포함할 수 있다.
상기 여액을 농축하여 농축액을 제조할 수 있다. 농축은 회전농축장비 등을 이용하여 60℃에서 감압 농축하여 바람직하게는 초기 부피 대비 20% 이하로 농축할 수 있으며, 보다 바람직하게는 10% 이하로 농축할 수 있다.
농축액은 동결건조 등에 의해 분말화할 수 있다. 동결건조는 진공 동결건조장치 등을 이용할 수 있으며, -40℃에서 건조함으로써 폴리페놀이 함유된 해조류 추출물을 분말 형태로 제조할 수 있다.
상기 해조류 추출물은 폴리페놀을 함유하며, 그 함량은 해조류 추출물 총 중량 대비 30중량% 이상일 수 있다.
상기 로즈마리 추출물 및 프로폴리스 추출물은 로즈마리 또는 프로폴리스를 분쇄한 후 용매로 가열 추출하고 감압 농축하여 수득된다.
상기 로즈마리 또는 프로폴리스를 분쇄하여 건조한 후, 건조분말을 500~700mesh 크기로 다시 분쇄하여 수득한 분말 100g에 5~20배수의 용매(50% 에탄올 등)를 가하여 30~95℃에서 1~10시간 환류한다.
상기 용매는 에탄올, 메탄올, 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트 및 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
가열 추출한 후 감압 농축하여 용매를 모두 제거한 다음 로즈마리 추출물 또는 프로폴리스 추출물을 수득한다.
본 발명은 해조류 추출물; 및 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물;을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
상기 조성물은 지방세포의 주요 바이오마커인 아디포넥틴(adiponectin) 단백질의 발현을 현저히 감소시키고, 지방세포 분화의 주요 전사인자(transcription factor)인 C/EBPα, C/EBPβ 및 PPARγ 단백질의 발현을 억제함으로써 지방세포 분화 억제 효과를 나타내며, 항비만 활성을 증가시킬 수 있다.
상기 해조류 추출물; 및 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물의 중량비는 50~70:30~50인 것이 비만 예방 또는 치료를 위해 바람직하다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 텍스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀롤로즈, 메틸 셀롤로즈, 미정질 셀롤로즈, 폴리비닐 피톨리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로, 예를 들면, 경구, 정맥, 근육 또는 피하 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 국소로 투여 또는 적용될 수 있다. 국소투여 또는 국소적용은 피부 또는 모발에 대한 조성물의 직접적인 적용을 의미한다.
본 발명의 국소용 조성물은 용액, 로숀, 납고, 크림, 연고, 리포좀, 스프레이, 젤, 폼(foam), 롤러스틱(roller stick) 또는 피부과에서 일상적으로 사용되는 그 밖의 모든 제형의 형태일 수 있다.
본 발명은 상기 추출물을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 식품 조성물에 관한 것이다.
상기 식품은 각종 식품류, 캔디, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등의 형태일 수 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 음료 등의 형태로 제공될 수 있다.
이하 실시예 및 비교예를 통해 본 발명을 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 실시를 위하여 예시된 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
(실시예 1) 해조류 추출물 제조
수분함량 5% 미만으로 열풍 건조된 감태, 다시마, 미역, 곰피, 대황을 준비하였다.
산업용 건식 분쇄기를 이용하여 각각의 해조류를 20mesh 크기로 분쇄하였다.
중량 기준으로 감태:다시마:미역:곰피:대황=75:5:5:5:10의 비율로 감태, 다시마, 미역, 곰피, 및 대황을 혼합하였다.
상기 혼합된 해조류 100중량부에 대하여 물 1,000중량부를 가한 후, 95℃에서 3시간 가열하여 열수 추출하였다.
상기 열수 추출액을 기공의 직경이 0.45㎛인 여과막으로 여과하여 분자량 1,000kDa 이하를 갖는 폴리사카라이드를 함유하는 수용액을 얻었다.
폴리사카라이드 분해효소 생산 미생물은 ATCC(American Type Culture Collection)와 KCCM(한국미생물보존센터)로부터 분양받아 사용하였다.
분양받은 미생물은 Pseudomonas sp. N7151-6, Thalassomonas sp. JAMB-A33, Agarivorans albus YKW-34, Pseudoalteromonas sp. AG4, Pseudoalteomonas carrageenovora 이었다.
5종의 폴리사카라이드 분해효소 생산 미생물 모두를 5L 배양기에서 working volume 3L, 30℃, 300rpm, pH 6.5, 배지 조성(sodium alginate 1%, agarose 1%, peptone 0.5%, yeast extract 0.3%, NaCl 1.5%)으로 배양하였으며, 구체적으로 같은 조성의 배지에서 종 배양된 균체 2%를 접종하여 48 시간 동안 배양하였다.
배양 종결 후 NaOH를 이용하여 배양액의 pH를 8.5로 조절하였다. 이와 같이 pH를 조절함으로써 미생물과 효소가 물리적 결합에 의해 배양액으로부터 함께 분리되는 것을 방지할 수 있다. 이 후, 고속원심분리기를 이용하여 4,000rpm에서 30분간 원심분리를 실시하고, 상등액을 취하여 균체를 제거하였다.
상기 상등액의 pH를 묽은 염산(35%)을 이용하여 pH 6.5로 조절하였다. 이와 같이 pH를 조절함으로써 효소 활성을 극대화하고 유지하도록 할 수 있다.
이와 같은 과정에 의해 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액을 제조하였다.
제조된 폴리사카라이드 함유 추출액과 폴리사카라이드 분해 효소 함유 배양액을 1:1의 중량비로 혼합하고, 35℃에서 30시간 동안 효소 반응시켰다.
효소반응을 종결한 효소 반응액을 95℃에서 30분간 처리하여 효소 및 단백질을 엉기게 하여 응결시켰다. 이 후, 응결된 효소 반응액을 기공의 직경이 0.1㎛인 여과막으로 여과하였다. 여과된 용액은 회전농축기를 이용하여 60℃에서 농축하여 초기 부피 대비 10% 이하로 농축하였다.
농축액은 진공 동결건조장치를 이용하여 -40℃에서 48시간 동안 건조하여 해조류 추출물 분말을 제조하였다.
(실시예 2) 로즈마리 추출물 및 프로폴리스 추출물 제조
로즈마리를 분쇄하여 건조한 후, 건조분말을 600mesh 크기로 다시 분쇄하여 수득한 분말 100g에 50% 에탄올 1,000g를 가하여 50℃에서 2시간 추출하였다.
추출액을 원심분리기에서 원심분리한 후, 상등액을 필터로 여과한 다음 여과액을 감압 농축하여 용매를 모두 제거하고 동결 건조하여 로즈마리 추출물을 수득하였다.
또한 로즈마리 추출물의 제조방법과 동일한 방법으로 프로폴리스 추출물을 수득하였다.
(실시예 3) 해조류 추출물의 지방세포 분화억제 활성
Oil-Red-O staining은 3T3-L1 세포를 60mm dish에 confluence 될 때 까지 BCS 10%, antibiotics 1%를 포함하는 DMEM으로 pre-incubation 하고, confluence 되고 2일 후에 분화유도배지(Differentiation media) [5㎍/㎖ insulin, 1μM dexamethasone, 0.5mM 1-methyl-3-methylxanthine, 10% FBS, 1% antibiotics]와 함께 해조류 추출물(UJW 8575)을 농도별로 처리하였다.
2일 후에 Post-differentiation media [5㎍/㎖ insulin, 10% FBS, 1% antibiotics]와 함께 해조류 추출물(UJW 8575)을 농도별로 처리한 뒤, 매 2일마다 10% FBS, 1% antibiotics를 포함하는 DMEM으로 교환하여 총 8일간 배양하였다.
지방세포로 분화되면 Media를 제거하고 4mL PBS(pH 7.4)로 2회 세척한 후 3.7% formaldehyde가 포함된 phosphate buffer로 4℃에서 30분 동안 고정 시킨 다음, distilled water로 2회 세척 후 0.3% oil red solution (oil red 시약 0.5g를 100% isopropanol 100mL에 녹인 뒤 distilled water와 6:4로 혼합) 4mL을 이용하여 15분간 실온에서 염색한 뒤 distilled water를 이용하여 염색되지 않은 oil red solution을 세척하였다.
염색된 oil red solution을 100% isopropanol 2mL을 이용하여 녹여낸 뒤 510nm에서 흡광도를 측정하여 지방세포의 분화 정도를 분석하였다.
도 1은 해조류 추출물(UJW 8575)의 지방세포 분화억제 활성을 나타내고 있다.
해조류 추출물을 처리하지 않은 TC(treat control)의 경우 지방세포의 분화가 활발하게 일어나는 반면, 해조류 추출물을 1~100㎍/㎖의 농도로 처리하는 경우 지방세포의 분화가 현저하게 감소함을 확인할 수 있다.
분화유도 물질을 처리한 대조군 TC(436.85%)에 비해, 해조류 추출물을 처리한 경우 1㎍/㎖은 439.34%, 10㎍/㎖은 399.64%, 50㎍/㎖은 368.13%, 100㎍/㎖은 350.00% 수준으로 감소되었다.
따라서 상기 해조류 추출물은 지방세포의 분화를 억제함으로써 항비만 활성을 증가시킬 수 있고 비만의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.
(실시예 4) 로즈마리 추출물 및 프로폴리스 추출물의 지방세포 분화억제 활성
실시예 3의 방법과 동일한 방법으로 로즈마리 추출물, 프로폴리스 추출물 및 닥나무 뿌리껍질 추출물(10~100㎍/㎖)을 시료로 하여 Oil-Red-O staining을 통해 지방세포 분화억제 분석을 실시하였다.
도 2는 로즈마리 추출물, 프로폴리스 추출물 및 닥나무 뿌리껍질 추출물의 지방세포 분화억제 활성을 나타내고 있다.
추출물을 처리하지 않은 TC(treat control)의 경우 지방세포의 분화가 활발하게 일어나는 반면, 추출물을 10~100㎍/㎖의 농도로 처리하는 경우 지방세포의 분화가 현저하게 감소함을 확인할 수 있다.
분화유도 물질을 처리한 대조군 TC(298.43%)에 비해 닥나무 뿌리껍질 추출물의 경우 10㎍/㎖은 178.65%, 50㎍/㎖은 171.91%, 100㎍/㎖은 137.08% 수준으로 감소되었고, 로즈마리 추출물의 경우 10㎍/㎖은 289.44%, 50㎍/㎖은 263.15%, 100㎍/㎖은 218.43% 수준으로 감소되었으며, 프로폴리스 추출물의 경우 10㎍/㎖은 223.60%, 50㎍/㎖은 185.17%, 100㎍/㎖은 167.42% 수준으로 감소되었다.
닥나무 뿌리껍질 추출물의 경우 독성으로 인해 지방세포의 사멸을 유도하므로 비만 예방 또는 치료의 용도로 적합하지 않은 것으로 판단된다.
따라서 상기 로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물은 지방세포의 분화를 억제함으로써 항비만 활성을 증가시킬 수 있고 비만의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.
(실시예 5) 혼합 추출물의 지방세포 분화억제 활성
실시예 3의 방법과 동일한 방법으로 해조류 추출물, 로즈마리 추출물 및 프로폴리스 추출물을 포함하는 혼합 추출물(50㎍/㎖)을 시료로 하여 Oil-Red-O staining을 통해 지방세포 분화억제 분석을 실시하였다.
로즈마리 추출물 또는 프로폴리스 추출물의 함량은 전체 추출물의 중량에 대하여 30, 50, 100%로 조절하여 분석을 수행하였다.
도 3은 해조류 추출물, 로즈마리 추출물 및 프로폴리스 추출물을 포함하는 혼합 추출물의 지방세포 분화억제 활성을 나타내고 있다.
추출물을 처리하지 않은 TC(treat control)의 경우 지방세포의 분화가 활발하게 일어나는 반면, 로즈마리 추출물을 30~50%의 함량으로 혼합하는 경우 및 프로폴리스 추출물을 30~50%의 함량으로 혼합하는 경우 지방세포의 분화가 현저하게 감소함을 확인할 수 있다.
분화유도 물질을 처리한 대조군 TC(303.22%)에 비해, 로즈마리 추출물을 혼합한 경우 30%는 256.11%, 50%는 218.39%, 100%는 203.76% 수준으로 감소되었으며, 프로폴리스 추출물을 혼합한 경우 30%는 266.58%, 50%는 239.87%, 100%는 190.47% 수준으로 감소되었다.
따라서 상기 해조류 추출물에 로즈마리 추출물 및/또는 프로폴리스 추출물을 혼합하는 경우 지방세포의 분화를 억제함으로써 항비만 활성을 증가시킬 수 있고 비만의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다.
(실시예 6) 지방세포 분화 억제 작용기전
3T3-L1 세포를 60mm dish에 confluence 될 때 까지 BCS 10%, antibiotics 1%를 포함하는 DMEM으로 pre-incubation 하고, confluence 되고 2일 후에 분화유도배지(Differentiation media) [5㎍/㎖ insulin, 1μM dexamethasone, 0.5mM 1-methyl-3-methylxanthine, 10% FBS, 1% antibiotics]와 함께 해조류 추출물(UJW 8575) 또는 해조류 추출물과 로즈마리 추출물의 혼합 추출물을 농도별로 처리하였다.
Media를 제거한 후 1mL PBS(pH 7.4)로 2회 세척 후 150㎕ RIPA lysis buffer를 처리한 후 4℃에서 5분간 반응시킨 후 세포를 모았다.
원심분리기를 이용하여 14,000 rpm, 4℃에서 20분간 원심분리한 후 상등액 120㎕를 취하고 Bradford assay를 사용하여 단백질을 정량하였다.
정량한 단백질에 loading buffer 20㎕씩 넣고 불활성화 시킨 후 gel에 로딩하여 80V로 30분, 120V로 90분 동안 전기영동하고, 100V에서 85분 동안 transfer시킨 후에 2% skim milk로 60분 동안 처리하였다.
Blocking이 끝나면 첫 번째 항체를 4℃에서 12시간 동안 노출시킨 후 TBST로 15분씩 6번 세척하고, 두 번째 항체를 상온에서 90분간 노출시킨 후 TBST로 15분씩 6번 세척하였다. 세척이 끝나면 ECL solution을 상온에서 5분간 노출시킨 후 LAS 4000 mini(FUJIFILM, Japan)로 측정하였다.
도 4는 해조류 추출물 및 로즈마리 추출물을 포함하는 혼합 추출물의 지방세포 단백질의 발현 정도를 나타내고 있다.
분화유도배지에 의해 분화 유도된 지방세포에서 western blot assay를 통해 지방세포의 주요 바이오마커인 아디포넥틴(adiponectin) 단백질 발현을 확인한 결과, 추출물을 처리하지 않은 대조군(TC)에서 가장 발현이 많으며, 로즈마리 추출물을 30~50%의 함량으로 혼합하는 경우 단백질의 발현이 현저히 감소함을 알 수 있다.
또한 지방세포 분화의 주요 전사인자(transcription factor)인 C/EBPα, C/EBPβ 및 PPARγ 단백질은 추출물을 처리하지 않은 대조군(TC)에서 가장 발현량이 많으며, 로즈마리 추출물을 30~50%의 함량으로 혼합하는 경우 단백질의 발현이 현저히 감소함을 알 수 있다.
따라서 해조류 추출물 및 로즈마리 추출물을 포함하는 혼합 추출물은 지방세포의 주요 바이오마커인 아디포넥틴(adiponectin) 단백질의 발현을 현저히 감소시키고, 지방세포 분화의 주요 전사인자(transcription factor)인 C/EBPα, C/EBPβ 및 PPARγ 단백질의 발현을 억제함으로써 지방세포 분화 억제 효과를 나타내며, 항비만 활성을 증가시킬 수 있다.
Claims (7)
- 해조류 추출물; 및
로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물;을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 해조류 추출물은
(A) 해조류를 열수 추출하여 폴리사카라이드 함유 추출액을 제조하는 폴리사카라이드 추출액 제조단계;
(B) 폴리사카라이드 분해효소 생산 미생물을 배양한 후 균체 제거하여 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액을 제조하는 폴리사카라이드 분해효소 배양액 제조단계; 및
(C) 상기 (A) 단계에서 제조된 폴리사카라이드 함유 추출액과 상기 (B) 단계에서 제조된 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액을 혼합하여 효소 반응시키는 효소 반응단계를 포함하는 방법에 의하여 제조되는 것을 특징으로 하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제2항에 있어서,
상기 해조류는 감태, 다시마, 미역, 곰피 및 대황을 포함하고,
상기 감태, 다시마, 미역, 곰피 및 대황의 중량비는 50~80:5~10:5~10:5~10:5~10인 것을 특징으로 하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제2항에 있어서,
상기 열수 추출은 해조류 100중량부에 대하여 물 500~2,000중량부를 가하고 70~95℃에서 1~3시간 가열하여 추출하는 것을 특징으로 하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제2항에 있어서,
상기 폴리사카라이드 함유 추출액과 상기 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액은 30~70:30~70의 중량비로 혼합되는 것을 특징으로 하는 비만 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 해조류 추출물; 및
로즈마리 추출물과 프로폴리스 추출물에서 선택되는 하나 이상의 추출물;을 유효성분으로 포함하는 비만 예방 또는 치료용 식품 조성물.
- 제6항에 있어서,
상기 해조류 추출물은
(A) 해조류를 열수 추출하여 폴리사카라이드 함유 추출액을 제조하는 폴리사카라이드 추출액 제조단계;
(B) 폴리사카라이드 분해효소 생산 미생물을 배양한 후 균체 제거하여 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액을 제조하는 폴리사카라이드 분해효소 배양액 제조단계; 및
(C) 상기 (A) 단계에서 제조된 폴리사카라이드 함유 추출액과 상기 (B) 단계에서 제조된 폴리사카라이드 분해효소 함유 배양액을 혼합하여 효소 반응시키는 효소 반응단계를 포함하는 방법에 의하여 제조되는 것을 특징으로 하는 비만 예방 또는 치료용 식품 조성물.
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- 2017-03-17 KR KR1020170033560A patent/KR101976839B1/ko active IP Right Grant
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| KR20140136326A (ko) * | 2013-05-20 | 2014-11-28 | 주영엔에스(주) | 체중 감소용 감태 추출물 및 이의 제조방법 |
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Current Opinion in Food Science, 2015, 제2권, 페이지 58-70* * |
| 이명숙 등, "해조류의 섭취가 비만과 식이섭취에 미치는 영향", 2014, 한국콘텐츠학회논문지, 제14권, 제12호, 페이지 478-485* * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR101976839B1 (ko) | 2019-05-09 |
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