KR20180073678A - 신규 크립토피신 화합물 및 접합체, 그의 제조법 및 그의 치료 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 화학식 (I)의 크립토피신 화합물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 크립토피신 페이로드, 크립토피신 접합체, 그를 함유하는 조성물, 및 특히 항암제로서의, 그의 치료 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이들 접합체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 신규 크립토피신 화합물, 신규 크립토피신 페이로드, 신규 크립토피신 접합체, 그를 함유하는 조성물, 및 특히 항암제로서의, 그의 치료 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이들 접합체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
크립토피신은, 노스톡(Nostoc) 속의 시아노박테리아에 의해 생산되는 뎁시펩티드 마크로사이클의 클래스에 속하는 2차 대사물이다. 이러한 클래스의 분자의 최초 대표예인 크립토피신-1 (C-1)은 1990년에 시아노박테리움 노스톡(cyanobacterium Nostoc) 종으로부터 단리되었다 (ATCC 53789; 문헌 [Eissler S., et al., Synthesis 2006, 22, 3747-3789] 참조). 에폭시드 관능기를 특징으로 하는 크립토피신 C-1 및 C-52는, 1990년대 초반에 시험관내 및 생체내 항종양 활성을 갖는 것으로 발견되었다. 이들 중 클로로히드린인 C-8 및 C-55는 현저하게 더 활성이었지만, 안정한 용액으로서 제제화될 수 없었다 (Bionpally R.R., et al., Cancer Chemother Pharmacol 2003, 52, 25-33). 그의 더 높은 활성은 세포 내에서 상응하는 에폭시드를 생성시키는 그의 추정 능력과 상관관계가 있었다. 당시에는 클로로히드린을 적절하게 안정화시키는 방법 없이, 크립토피신 C-52 (LY355703)가 임상 시험에 들어갔으며, 2회의 II상 폐암 시험에서 30-40% 안정 질환으로 미미한 항종양 활성을 유발하여, 치료중단되었다 (Edelman M.J., et al., Lung Cancer 2003, 39, 197-99 및 Sessa C., et al., Eur J Cancer 2002, 38, 2388-96).
그의 높은 효력, 및 항체-약물 접합체 (ADC)용으로 임상에서 검증된 2종의 세포독성 분자인 메이탄시노이드 및 아우리스타틴과 공통되는 작용 메카니즘을 고려하여, 이러한 계열은 ADC용으로의 잠재적 튜불린 결합제로서 간주되었다. 따라서, 마크로사이클의 파라-벤질 위치에서의 유도체화로부터 출발하여 크립토피신 계열의 접합체가 개발되었다 (Al-Awar R.S., et al., J Med Chem 2003, 46, 2985-3007).
WO2011/001052는, 세포독성 모이어티가 다양한 종류의 링커를 사용하여 파라-벤질 위치를 통해 항체에 연결된 것인 크립토피신 항체-약물 접합체를 기재하고 있다. 이들은 절단가능하거나, 디술피드 또는 프로테아제-감수성이거나, 또는 절단가능하지 않을 수 있다.
WO2011/001052에 기재된 크립토피신 항체-약물 접합체를 추가로 최적화하여 강력한 크립토피신 접합체로 이르렀으며, 이는 유망한 항종양 활성을 나타내었지만, 마우스의 혈장 중에서 불안정하며 비-설치류 종의 혈장 중에서 안정한 것으로 밝혀졌다. 따라서, 개선된 안정성 특성을 나타내는 크립토피신 접합체가 필요하였다.
본 발명의 목적은, 일단 항체에 접합되면 마우스 혈장 중에서 안정한 신규 크립토피신 마크로사이클, 및 이들 안정한 마크로사이클로 구성된 신규 크립토피신 접합체를 제안하는 것이다.
이와 관련하여, 본 발명은 화학식 (I)의 크립토피신 화합물에 관한 것이다.
여기서
또는 대안적으로 R2 및 R3은 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 또는 (C3-C6)헤테로시클로알킬 기를 형성하고;
또는 대안적으로 R4 및 R5는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 또는 (C3-C6)헤테로시클로알킬 기를 형성하고;
또는 대안적으로 R7 및 R8은 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 기 또는 (C3-C6)헤테로시클로알킬 기를 형성하고;
을 나타내며;
W는 페닐 핵의 오르토 (o), 메타 (m) 또는 파라 (p) 위치에 위치하고;
본 발명은 추가로 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드에 관한 것이다.
여기서
또는 대안적으로 Y는 C(=O)O, C(=O)NH, (C1-C6)알킬-C(=O)O 또는 (C1-C6)알킬-C(=O)NH를 나타내거나;
또는 대안적으로 Y는 (C1-C6)알킬-트리아졸-유사 
를 나타내며;
Y는 페닐 핵의 오르토 (o), 메타 (m) 또는 파라 (p) 위치에 위치하고;
본 발명은 또한 화학식 (III)의 접합체에 관한 것이다.
여기서
각각의 치환기 R1 내지 R11은 또한 실시예에 기재된 바와 같은 공간적 배위 중 1종 (예를 들어, R 또는 S 또는 대안적으로 Z 또는 E)을 채택할 수 있다.
화학식 (I), (II) 및 (III)의 화합물은 1개 이상의 비대칭 탄소 원자를 함유할 수 있다. 따라서, 이들은 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체의 형태로 존재할 수 있다. 이들 거울상이성질체 및 부분입체이성질체, 및 또한 라세미 혼합물을 포함한 그의 혼합물은 본 발명의 일부를 형성한다.
예시된 화합물을 포함한 화학식 (I)의 화합물은, 염기, 또는 산-부가염, 특히 제약상 허용되는 산의 형태로 존재할 수 있다.
정의
본 발명의 문맥에서, 특정 용어는 하기 정의를 갖는다:
본원에 사용된 용어 "항체"는 통상적인 (전장) 항체 및 그의 단편 둘 다, 뿐만 아니라 단일 도메인 항체 및 그의 단편, 특히 단일 도메인 항체의 가변 중쇄를 나타낸다. (통상적인) 항체의 단편은 전형적으로 무손상 항체의 일부분, 특히 무손상 항체의 항원 결합 영역 또는 가변 영역을 포함하고, 통상적인 항체의 생물학적 기능을 보유한다. 이러한 단편의 예는 Fv, Fab, F(ab')2, Fab', dsFv, (dsFv)2, scFv, sc(Fv)2 및 디아바디를 포함한다.
항체의 기능은 세포독성 화합물로서의 생물학적 활성 화합물이 생물학적 표적을 향하도록 하는 것이다.
약어
ADC: 항체-약물 접합체; AcOH: 아세트산; AIBN: 아조비스이소부티로니트릴; ALK: (C1-C12)알킬렌 기, 보다 특히 (C1-C6)알킬렌, 보다 특히 형태 -(CH2)n-의 것 (n은 1 내지 12, 바람직하게는 1 내지 6의 정수임); aq.: 수성; Ar: 아르곤; AUC: 곡선하 면적; BEMP: 2-tert-부틸이미노-2-디에틸아미노-1,3-디메틸퍼히드로-1,3,2-디아자포스포린; BF3: 삼플루오린화붕소; Boc2O: 디-tert-부틸-디카르보네이트; BuLi: 부틸 리튬; CAN: 질산세륨암모늄; Cbz: 카르복시벤질; CHCl3: 클로로포름; CH3CN: 아세토니트릴; CH3I: 메틸 아이오다이드; CO2: 이산화탄소; CL: 클리어런스; m-CPBA: m-클로로퍼벤조산; CR: 완전 반응; 크립토는 화학식 
의 단위를 나타내며, 크립토는 특히 하기 기재된 D1-D19 크립토피신 화합물 또는 실시예에서의 크립토피신 화합물 중 1종을 나타냄; D1은 1의 DAR을 갖는 ADC를 지칭하고, D2는 2의 DAR을 갖는 ADC를 지칭하는 등임; d: 일; DAR: 약물-대-항체 비; DBU: 8-디아자비시클로[5.4.0]운데스-7-엔; DCC: N,N'-디시클로헥실카르보디이미드; DCE: 디클로로에탄; DCM: 디클로로메탄; DDQ: 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논; DIC: N,N'-디이소프로필카르보디이미드; DIAD: 디이소프로필아조디카르복실레이트; DIEA: N,N-디이소프로필에틸아민; DMA: 디메틸아세트아미드; DMAP: 4-(디메틸아미노)피리딘; DME: 디메톡시에탄; DMEM: 둘베코(Dulbecco) 변형 이글 배지; DMEM/F12: 둘베코 변형 이글 배지 영양 혼합물 F-12; DMF: 디메틸포름아미드; DMSO: 디메틸술폭시드; DPBS: 둘베코 포스페이트-완충 염수; DPPA: 디페닐포스포르아지드 (PhO)2P(=O)N3; DSC: N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트; EDA: 에틸렌디아민; EDC: 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드; EDTA: 에틸렌디아민테트라아세트산; EEDQ: N-에톡시카르보닐-2-에톡시-1,2-디히드로퀴놀린; ELSD: 증발 광 산란 검출기; eq.: 당량; ES: 전기분무; EtOAc: 에틸 아세테이트; Et2O: 디에틸 에테르; EtOH: 에탄올; Ex.: 실시예; FCS: 소 태아 혈청; Fmoc: 9-플루오레닐메톡시카르보닐; FmocOSu: N-(9-플루오레닐메톡시카르보닐옥시) 숙신이미드; GI: 전자유도 기; 그럽스(Grubbs) I: 벤질리덴-비스(트리시클로헥실포스핀)디클로로루테늄; 그럽스 II: (1,3-비스(2,4,6-트리메틸페닐)-2-이미다졸리디닐리덴)디클로로(페닐메틸렌)(트리시클로헥실포스핀)루테늄; h: 시간; H2O: 물; Hal: 할로겐; HATU: 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트; HCl: 염화수소산; HEPES: 4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산; HIC: 소수성 상호작용 크로마토그래피; HOAt: 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸; HOBt: 1-히드록시-벤조트리아졸; HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피; HRMS: 고해상도 질량 분광측정법; IC50: 중앙 억제 농도; i.e.: id est는 즉을 의미함; IEC: 이온 교환 크로마토그래피; iPrOH: 2-프로판올; iPr2O: 디이소프로필 에테르; i.v.: 정맥내; K2CO3: 탄산칼륨; LDA: 리튬 디이소프로필아미드; LiOH: 수산화리튬; marg.: 미미하게; MeOH: 메탄올; MeTHF: 2-메틸-테트라히드로푸란; MgSO4: 황산마그네슘; min: 분; MNBA: 2-메틸-6-니트로벤조산 무수물; MTBE: 메틸 tert-부틸 에테르; MTD: 최대 허용 용량; NaH: 수소화나트륨; NaHSO4: 중황산나트륨; Na2S2O3: 티오황산나트륨; NaCl: 염화나트륨; NaHCO3: 탄산수소나트륨; NaHSO3: 중아황산나트륨; NaHSO4: 황산수소나트륨; NaOH: 수산화나트륨; NH4Cl: 염화암모늄; NHS: N-히드록시숙신이미드; NMP: 1-메틸-2-피롤리돈; NMR: 핵 자기 공명; P2-Et: 1-에틸-2,2,4,4,4-펜타키스(디메틸아미노)-2λ5,4λ5-카테나디(포스파젠); PBS: 포스페이트-완충 염수; PEG: 폴리에틸렌 글리콜; PK: 약동학; PMB: 파라-메톡시벤질; PNGase F: 펩티드-N-글리코시다제 F; PPh3: 트리페닐포스핀; ppm: 백만분율; PR: 부분 반응; QS: quantum satis는 필요한 양을 의미함; Q-Tof: 사중극자 비행 시간; quant.: 정량적 수율; RCG: 반응성 화학적 기; RT: 실온; sat.: 포화; s.c.: 피하로; SCID: 중증 복합 면역결핍; SEC: 크기 배제 크로마토그래피; TBAF: 테트라부틸암모늄 플루오라이드; tBuOK: 포타슘 tert-부톡시드; TCEP: 트리스(2-카르복시에틸)포스핀 히드로클로라이드; TEA: 트리에틸아민; TEMPO: (2,2,6,6-테트라메틸피페리딘-1-일)옥실; TFA: 트리플루오로아세트산; TFS: 무종양 생존자; THF: 테트라히드로푸란; THP: 테트라히드로피란; TLC: 박층 크로마토그래피; t1/2: 반감기; tR: 체류 시간; p-TsOH: 파라-톨루엔술폰산; UPLC: 초고성능 액체 크로마토그래피; UV: 자외선; Vss: 정상 상태에서의 분포의 겉보기 부피.
도 1: Ex.3의 고해상도 질량 스펙트럼
도 2: Ex.7의 고해상도 질량 스펙트럼
도 3: Ex.10의 고해상도 질량 스펙트럼
도 4: Ex.14의 고해상도 질량 스펙트럼
도 5: Ex.20의 고해상도 질량 스펙트럼
도 6: Ex.23의 고해상도 질량 스펙트럼
도 7: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.3의 생체내 효능
도 8: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.7의 생체내 효능
도 9: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.10의 생체내 효능
도 10: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.14의 생체내 효능
도 11: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.20의 생체내 효능
도 12: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.23의 생체내 효능
도 13: SCID 마우스에서의 단일 i.v. 투여 후 ADC1의 생체내 PK 프로파일
도 14: 비-설치류 종에서의 단일 i.v. 투여 후 ADC1의 생체내 PK 프로파일
도 15: SCID 마우스에서의 단일 i.v. 투여 후 Ex.3의 생체내 PK 프로파일
도 16: SCID 마우스에서의 단일 i.v. 투여 후 Ex.7의 생체내 PK 프로파일
도 17: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 탈글리코실화 ADC1의 HRMS 스펙트럼
도 18: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 ADC2 경쇄의 HRMS 스펙트럼
도 19: 비-설치류 종에서 단일 i.v. 투여하고 나서 6일 후의 탈글리코실화 ADC1의 HRMS 스펙트럼
도 20: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.3의 HRMS 스펙트럼
도 21: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.7의 HRMS 스펙트럼
도 22: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.10의 HRMS 스펙트럼
도 23: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.14의 HRMS 스펙트럼
도 24: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.20의 HRMS 스펙트럼
도 25: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.23의 HRMS 스펙트럼
도 2: Ex.7의 고해상도 질량 스펙트럼
도 3: Ex.10의 고해상도 질량 스펙트럼
도 4: Ex.14의 고해상도 질량 스펙트럼
도 5: Ex.20의 고해상도 질량 스펙트럼
도 6: Ex.23의 고해상도 질량 스펙트럼
도 7: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.3의 생체내 효능
도 8: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.7의 생체내 효능
도 9: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.10의 생체내 효능
도 10: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.14의 생체내 효능
도 11: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.20의 생체내 효능
도 12: SCID 마우스에서의 MDA-MB-231 이종이식편에 대한 Ex.23의 생체내 효능
도 13: SCID 마우스에서의 단일 i.v. 투여 후 ADC1의 생체내 PK 프로파일
도 14: 비-설치류 종에서의 단일 i.v. 투여 후 ADC1의 생체내 PK 프로파일
도 15: SCID 마우스에서의 단일 i.v. 투여 후 Ex.3의 생체내 PK 프로파일
도 16: SCID 마우스에서의 단일 i.v. 투여 후 Ex.7의 생체내 PK 프로파일
도 17: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 탈글리코실화 ADC1의 HRMS 스펙트럼
도 18: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 ADC2 경쇄의 HRMS 스펙트럼
도 19: 비-설치류 종에서 단일 i.v. 투여하고 나서 6일 후의 탈글리코실화 ADC1의 HRMS 스펙트럼
도 20: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.3의 HRMS 스펙트럼
도 21: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.7의 HRMS 스펙트럼
도 22: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.10의 HRMS 스펙트럼
도 23: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.14의 HRMS 스펙트럼
도 24: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.20의 HRMS 스펙트럼
도 25: SCID 마우스에서 단일 i.v. 투여하고 나서 96시간 후의 Ex.23의 HRMS 스펙트럼
본 발명은 화학식 (I)의 크립토피신 화합물에 관한 것이다.
여기서
R1은 (C1-C6)알킬 기를 나타내고;
또는 대안적으로 R2 및 R3은 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 또는 (C3-C6)헤테로시클로알킬 기를 형성하고;
또는 대안적으로 R4 및 R5는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 또는 (C3-C6)헤테로시클로알킬 기를 형성하고;
또는 대안적으로 R7 및 R8은 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 기 또는 (C3-C6)헤테로시클로알킬 기를 형성하고;
을 나타내며;
W는 페닐 핵의 오르토 (o), 메타 (m) 또는 파라 (p) 위치에 위치하고;
크립토피신 화합물은 하기 D1-D19 중 1종일 수 있다.
여기서
또는 크립토피신 화합물은 실시예 중 하나에 기재된 등가의 단위일 수 있다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제1 군은 R1은 (C1-C6)알킬, 특히 메틸 기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제2 군은 각각의 R2 및 R3은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제3 군은 R2 및 R3 중 1개는 (C1-C6)알킬, 특히 메틸 기를 나타내고, 다른 1개는 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제4 군은 R2 및 R3은 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 기, 특히 시클로프로필 기를 형성하는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제5 군은 각각의 R4 및 R5는 (C1-C6)알킬, 특히 메틸 기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제6 군은 R6은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제7 군은 R7 및 R8은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제8 군은 R9는 메톡시 기 및 염소 원자로부터 선택된 2개의 치환기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다. 보다 특히, 페닐 핵은 페닐 핵 상의 위치 3 및 4에서 2개의 치환기를 포함한다. 바람직하게는, 이는 3-Cl 및 4-메톡시이다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제9 군은 R10은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제10 군은 W는 페닐 핵의 파라 위치에 위치하는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제11 군은 W는 (C1-C6)알킬-NHR11, 특히 (C1-C3)알킬-NHR11, 특히 CH2-NH2 기, (C1-C6)알킬-OH, 특히 (C1-C3)알킬-OH, 특히 CH2-OH 기, (C1-C6)알킬-SH, 특히 (C1-C3)알킬-SH 및 (C1-C6)알킬-CO2H, 특히 (C1-C3)알킬-CO2H로부터 선택된 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제12 군은 R1은 (C1-C6)알킬, 특히 메틸 기를 나타내고, 각각의 R2 및 R3은 수소 원자를 나타내고, R6은 수소 원자를 나타내고, R9는 메톡시 기 및 염소 원자로부터 선택된 2개의 치환기를 나타내고, 보다 특히 페닐 핵은 페닐 핵 상의 위치 3 및 4에서 2개의 치환기를 포함하고, 바람직하게는 이는 3-Cl 및 4-메톡시이고, R10은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제13 군은 R1은 (C1-C6)알킬, 특히 메틸 기를 나타내고, R2 및 R3 중 1개는 (C1-C6)알킬, 특히 메틸 기를 나타내고, 다른 1개는 수소 원자를 나타내고, R6은 수소 원자를 나타내고, R9는 메톡시 기 및 염소 원자로부터 선택된 2개의 치환기를 나타내고, 보다 특히 페닐 핵은 페닐 핵 상의 위치 3 및 4에서 2개의 치환기를 포함하고, 바람직하게는 이는 3-Cl 및 4-메톡시이고, R10은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
대안적으로, W는 (CH2)nNHR11, (CH2)nSH 및 (CH2)nOH로부터 선택되고, 여기서 n은 1 내지 6의 정수를 나타낸다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제14 군은 하기 구조 (베타 에폭시드 배위)의 화합물로 구성된다.
단독으로의 또는 조합된 모든 이들 하위군은 본 발명의 일부이다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 특히 하기 화합물이 언급될 수 있다.
본 발명은 추가로 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드에 관한 것이다.
여기서
또는 대안적으로 Y는 C(=O)O, C(=O)NH, (C1-C6)알킬-C(=O)O 또는 (C1-C6)알킬-C(=O)NH를 나타내거나;
또는 대안적으로 Y는 (C1-C6)알킬-트리아졸-유사 
를 나타내며;
Y는 페닐 핵의 오르토 (o), 메타 (m) 또는 파라 (p) 위치에 위치하고;
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제1 군은 R1은 (C1-C6)알킬, 특히 메틸 기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제2 군은 각각의 R2 및 R3은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제3 군은 R2 및 R3 중 1개는 (C1-C6)알킬 기, 특히 메틸 기를 나타내고, 다른 1개는 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제4 군은 R2 및 R3은 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 기, 특히 시클로프로필 기를 형성하는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제5 군은 각각의 R4 및 R5는 (C1-C6)알킬 기, 특히 메틸 기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제6 군은 R6은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제7 군은 R7 및 R8은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제8 군은 R9는 메톡시 기 및 염소 원자로부터 선택된 2개의 치환기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다. 보다 특히, 페닐 핵은 페닐 핵 상의 위치 3 및 4에서 2개의 치환기를 포함한다. 바람직하게는, 이는 3-Cl 및 4-메톡시이다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제9 군은 R10은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제10 군은 Y는 페닐 핵의 파라 위치에 위치하는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제11 군은 Y는 (C1-C6)알킬-NR11, 특히 (C1-C3)알킬-NR11, 보다 특히 CH2-NH를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제12 군은 R1은 (C1-C6)알킬, 특히 메틸 기를 나타내고, 각각의 R2 및 R3은 수소 원자를 나타내고, R6은 수소 원자를 나타내고, R9는 메톡시 기 및 염소 원자로부터 선택된 2개의 치환기를 나타내고, 보다 특히 페닐 핵은 페닐 핵 상의 위치 3 및 4에서 2개의 치환기를 포함하고, 바람직하게는 이는 3-Cl 및 4-메톡시이고, R10은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제13 군은 R1은 (C1-C6)알킬, 특히 메틸 기를 나타내고, R2 및 R3 중 1개는 (C1-C6)알킬, 특히 메틸 기를 나타내고, 다른 1개는 수소 원자를 나타내고, R6은 수소 원자를 나타내고, R9는 메톡시 기 및 염소 원자로부터 선택된 2개의 치환기를 나타내고, 보다 특히 페닐 핵은 페닐 핵 상의 위치 3 및 4에서 2개의 치환기를 포함하고, 바람직하게는 이는 3-Cl 및 4-메톡시이고, R10은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제14 군은 하기 구조 (베타 에폭시드 배위)의 화합물로 구성된다.
단독으로의 또는 조합된 모든 이들 하위군은 본 발명의 일부이다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 특히 하기 화합물이 언급될 수 있다.
본 발명은 또한 화학식 (III)의 접합체에 관한 것이다.
여기서
본 발명의 대상인 화학식 (III)의 화합물 중에서, 화합물의 제1 군은 R1은 (C1-C6)알킬, 특히 메틸 기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (III)의 화합물 중에서, 화합물의 제2 군은 각각의 R2 및 R3은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (III)의 화합물 중에서, 화합물의 제3 군은 R2 및 R3 중 1개는 (C1-C6)알킬 기, 특히 메틸 기를 나타내고, 다른 1개는 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (III)의 화합물 중에서, 화합물의 제4 군은 R2 및 R3은 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 기, 특히 시클로프로필 기를 형성하는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (III)의 화합물 중에서, 화합물의 제5 군은 각각의 R4 및 R5는 (C1-C6)알킬 기, 특히 메틸 기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (III)의 화합물 중에서, 화합물의 제6 군은 R6은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (III)의 화합물 중에서, 화합물의 제7 군은 R7 및 R8은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (III)의 화합물 중에서, 화합물의 제8 군은 R9는 메톡시 기 및 염소 원자로부터 선택된 2개의 치환기를 나타내는 것인 화합물로 구성된다. 보다 특히, 페닐 핵은 페닐 핵 상의 위치 3 및 4에서 2개의 치환기를 포함한다. 바람직하게는, 이는 3-Cl 및 4-메톡시이다.
본 발명의 대상인 화학식 (III)의 화합물 중에서, 화합물의 제9 군은 R10은 수소 원자를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (II)의 화합물 중에서, 화합물의 제10 군은 Y는 페닐 핵의 파라 위치에 위치하는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (III)의 화합물 중에서, 화합물의 제11 군은 Y는 (C1-C6)알킬-NR11, 특히 (C1-C3)알킬-NR11, 보다 특히 CH2-NH를 나타내는 것인 화합물로 구성된다.
본 발명의 대상인 화학식 (I)의 화합물 중에서, 화합물의 제12 군은 하기 구조 (베타 에폭시드 배위)의 화합물로 구성된다.
단독으로의 또는 조합된 모든 이들 하위군은 본 발명의 일부이다.
본 발명의 대상인 화학식 (III)의 화합물 중에서, 특히 하기 화합물이 언급될 수 있다.
화학식 (III)의 접합체를 수득하기 위한 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드와 항체 사이의 부착은, 항체 상에 존재하는 반응성 기 RCG2에 대해 반응성인, 페이로드 상에 존재하는 반응성 화학적 기 RCG1에 의해 유발된다. RCG1과 RCG2 사이의 반응은 공유 결합의 형성에 의한 화학식 (II)의 화합물의 항체에의 부착을 보장한다. 화학식 (III)의 접합체에서, RCG1 및 RCG2의 일부는 링커와 항체 사이의 부착을 형성하도록 유지될 수 있다.
언급될 수 있는 RCG1의 예는
(i) Za가 단일 결합, O 또는 NH, 보다 특히 O를 나타내고, Ra가 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬, (C3-C7)시클로알킬, 알케닐, 아릴, 헤테로아릴 또는 (C3-C7)헤테로시클로알킬 기를 나타내며, 아릴 기는 할로겐, 특히 F, 알킬, 알콕시, 니트로 및 시아노 기로부터 선택된 1 내지 5개의 기에 의해 치환될 수 있는 것인 -C(=O)-ZaRa 반응성 기;
(ii) 하기 반응성 기 중 1종: 말레이미도 
기; R13이 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기, 보다 특히 Me를 나타내는 것인 할로아세트아미도 
기; -Cl; -N3; -OH; -SH; -NH2; -C≡CH 또는 활성화된 C≡C 예컨대 시클로옥틴 모이어티 유사 
; O-알킬 히드록실아민 또는 문헌 [Agarwal P., et al., Bioconjugate Chem 2013, 24, 846-851]에 기재된 픽테트-스펭글러(Pictet-Spengler) 반응 기재 예컨대 
를 포함한다.
보다 특히, -ZaRa는 -OH, -OCH3, -OCH2CH=CH2, 
(O-NHS) 또는 
(여기서 양이온은 예를 들어 나트륨, 칼륨 또는 세슘을 나타냄) 또는 
또는 
기 (여기서 GI는 적어도 1개의 전자유도 기 예컨대 -NO2 또는 -Hal, 특히 -F를 나타냄)를 나타낼 수 있다. 이들은, 예를 들어 하기 기: 
또는 
일 수 있다. -C(=O)ZaRa 기의 또 다른 유형은 하기: 
이다. 보다 특히, RCG1은 실시예에 기재된 것들 중 1종으로부터 선택될 수 있다.
언급될 수 있는 RCG2의 예 (Garnett M.C., et al., Advanced Drug Delivery Reviews 2001, 53, 171-216)는,
(i) 항체의 표면에 존재하는 리신 잔기의 측쇄에 의해 함유된 ε-아미노 리신;
(ii) 항체 중쇄 및 경쇄의 N-말단 아미노산의 α-아미노 기;
(iii) 힌지 영역의 사카라이드 기;
(iv) 쇄내 디술피드 결합을 환원시킴으로써 생성된 시스테인의 티올, 또는 조작된 시스테인의 티올;
(v) 항체의 표면에 존재하는 일부 글루타민 잔기의 측쇄에 의해 함유된 아미드 기;
(vi) 포르밀글리신 생성 효소를 사용하여 도입된 알데히드 기
를 포함한다.
더 최근에는, 다른 접합 접근법, 예를 들어 돌연변이에 의한 시스테인의 도입 (Junutula J.R., et al., Nature Biotechnology 2008, 26, 925-932), 다른 유형의 화학을 가능하게 하는 비천연 아미노산의 도입 (Axup J.Y., et al., PNAS 2012, 109, 40, 16101-16106) 또는 항체 글리칸 상의 접합 (Zhou Q., et al., Bioconjugate Chem. 2014, 25, 510-520)이 고려된 바 있다. 항체의 부위-특이적 변형에 대한 또 다른 접근법은, 예를 들어 박테리아 트랜스글루타미나제 (Jeger S., et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 9995-9997; Strop P., et al., Chem. Biol. 2013, 20, 161-167) 또는 포르밀글리신 생성 효소 (Hudak J.E., et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2012, 51, 4161-4165)를 사용하는 효소 표지에 기초한다. 부위-특이적 접합 전략의 검토에 대해, 문헌 [Agarwal P. and Bertozzi C.R., Bioconjugate Chem 2015, 26, 176-192]을 참조한다. 이들 접합 기술은 본 발명에 기재된 크립토피신 페이로드에도 적용될 수 있다.
신규 반응성 화학적 기 RCG2를 도입하기 위해 항체를 화학적으로 변형시키는 것이 또한 가능하다. 따라서, 예를 들어 활성화된 디술피드, 티올, 말레이미도 또는 할로아세트아미도 기를 도입하는 변형제의 보조 하에 항체를 변형시키는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다 (특히 WO2005/077090 페이지 14 및 WO2011/001052 참조). 변형은, 접합 반응을 개선시키고 더욱 다양한 기 RCG1을 사용하는 것을 가능하게 한다.
보다 특히, RCG1이 상기 유형 (ii)의 것인 경우에, 적절한 변형제를 사용하여 항체를 화학적으로 변형시키거나, 또는 1개 이상의 비천연 아미노산을 도입하여 적절한 관능기 RCG2를 도입하는 것이 가능하다. 예를 들어,
- RCG1이 N-히드록시숙신이미딜 에스테르를 나타내는 경우에, RCG2는 -NH2 기를 나타내고;
- RCG1이 말레이미도 또는 할로아세트아미도 관능기 또는 -Cl 기를 나타내는 경우에, RCG2는 -SH 기일 수 있고;
- RCG1이 -N3 기를 나타내는 경우에, RCG2는 -C≡CH 기 또는 활성화된 C≡C 예컨대 시클로옥틴 모이어티일 수 있고;
- RCG1이 -OH 또는 -NH2 기를 나타내는 경우에, RCG2는 카르복실산 또는 아미드 관능기일 수 있고;
- RCG1이 -SH 기를 나타내는 경우에, RCG2는 말레이미도 또는 할로아세트아미도 관능기일 수 있고;
- RCG1이 -C≡CH 관능기 또는 활성화된 C≡C를 나타내는 경우에, RCG2는 -N3 기일 수 있고;
- RCG1이 -O-알킬 히드록실아민 관능기 또는 픽테트-스펭글러 반응 기재를 나타내는 경우에, RCG2는 알데히드 또는 케톤 관능기일 수 있다.
언급될 수 있는 G의 예는 하기를 포함한다.
본 발명은 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드 및 화학식 (III)의 접합체에 관한 것이다.
여기서 링커 L은 화학식 (IV)의 것이며,
여기서
를 나타내고;
AA는 배위 D 또는 L의 천연 또는 비천연 아미노산을 나타내며, 보다 특히 알라닌 (Ala), β-알라닌, γ-아미노부티르산, 2-아미노-2-시클로헥실아세트산, 2-아미노-2-페닐아세트산, 아르기닌 (Arg), 아스파라긴 (Asn), 아스파르트산 (Asp), 시트룰린 (Cit), 시스테인 (Cys), α,α-디메틸-γ-아미노부티르산, β,β-디메틸-γ-아미노부티르산, 글루타민 (Gln), 글루탐산 (Glu), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 류신 (Leu), 리신 (Lys), ε-아세틸-리신 (AcLys), 메티오닌 (Met), 오르니틴 (Orn), 페닐알라닌 (Phe), 프롤린 (Pro), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr), 발린 (Val)으로부터 선택된다. 보다 특히, AA는 알라닌 (Ala), 시트룰린 (Cit), 글루타민 (Gln), 글리신 (Gly), ε-아세틸-리신 (AcLys), 발린 (Val)으로부터 선택된다.
서열 (AA)w는 하기 화학식을 갖는다.
여기서 R23은 상기 기재된 아미노산 중 1개의 측쇄를 나타낸다. 서열의 예는 하기와 같다: Gly-Gly, Phe-Lys, Val-Lys, Val-AcLys, Val-Cit, Phe-Phe-Lys, D-Phe-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys, Ala-Lys, Val-Ala, Phe-Cit, Leu-Cit, Ile-Cit, Trp-Cit, Phe-Ala, Ala-Phe, Gly-Gly-Gly, Gly-Ala-Phe, Gly-Val-Cit, Gly-Phe-Leu-Cit, Gly-Phe-Leu-Gly, Ala-Leu-Ala-Leu.
Y = (C1-C6)알킬-N(R11), 보다 특히 CH2NH인 경우에, RCG1-L은 하기 (IV1-17) 중 1종일 수 있다.
여기서
Y = (C1-C6)알킬-O 또는 (C1-C6)알킬-S, 보다 특히 CH2O 또는 CH2S인 경우에, RCG1-L은 하기 (IV18-34) 중 1종일 수 있다.
여기서
Y = (C1-C6)알킬-N(R11), 보다 특히 CH2NH인 경우에, RCG1-L은 또한 하기 (IV35-51) 중 1종일 수 있다.
여기서
Y = (C1-C6)알킬-O 또는 (C1-C6)알킬-S, 보다 특히 CH2O 또는 CH2S인 경우에, RCG1-L은 또한 하기 (IV52-68) 중 1종일 수 있다.
여기서
Y = C(=O)O, C(=O)NH, (C1-C6)알킬-C(=O)O 또는 (C1-C6)알킬-C(=O)NH, 보다 특히 C(=O)O 또는 CH2-C(=O)O인 경우에, RCG1-L은 하기 (IV69-85) 중 1종일 수 있다.
여기서
Y = C(=O) 또는 (C1-C6)알킬-C(=O)인 경우에, 본 발명은 또한 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드 및 화학식 (III)의 접합체에 관한 것이다.
여기서 링커 L은 화학식 (V)의 것이며,
여기서
AA는 배위 D 또는 L의 천연 또는 비천연 아미노산을 나타내며, 보다 특히 알라닌 (Ala), β-알라닌, γ-아미노부티르산, 2-아미노-2-시클로헥실아세트산, 2-아미노-2-페닐아세트산, 아르기닌 (Arg), 아스파라긴 (Asn), 아스파르트산 (Asp), 시트룰린 (Cit), 시스테인 (Cys), α,α-디메틸-γ-아미노부티르산, β,β-디메틸-γ-아미노부티르산, 글루타민 (Gln), 글루탐산 (Glu), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 류신 (Leu), 리신 (Lys), ε-아세틸-리신 (AcLys), 메티오닌 (Met), 오르니틴 (Orn), 페닐알라닌 (Phe), 프롤린 (Pro), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr), 발린 (Val)으로부터 선택된다. 보다 특히, AA는 알라닌 (Ala), 시트룰린 (Cit), 글루타민 (Gln), 글리신 (Gly), ε-아세틸-리신 (AcLys), 발린 (Val)으로부터 선택된다
서열 (AA)'w는 하기 화학식을 갖는다.
여기서 R26은 상기 기재된 아미노산 중 1개의 측쇄를 나타낸다. 서열의 예는 하기와 같다: Gly-Gly, Lys-Phe, Lys-Val, AcLys-Val, Cit-Val, Lys-Phe-Phe, Lys-Phe-DPhe, Lys-Phe-Gly, Lys-Ala, Ala-Val, Cit-Phe, Cit-Leu, Cit-Ile, Cit-Trp, Ala-Phe, Phe-Ala, Gly-Gly-Gly, Phe-Ala-Gly, Cit-Val-Gly, Cit-Leu-Phe-Gly, Gly-Leu-Phe-Gly, Leu-Ala-Leu-Ala.
Y = C(=O) 또는 (C1-C6)알킬-C(=O), 보다 특히 C(=O) 또는 CH2-C(=O)인 경우에, RCG1-L은 하기 (V86-101) 중 1종일 수 있다.
여기서
링커 L은 또한 예시된 화합물로부터 선택될 수 있다.
본 발명에 따르면, 화학식 (I), (II) 및 (III)의 화합물은 하기 방법에 의해 제조될 수 있다.
크립토피신 화합물을 제조하는 방법
W=CH2N3 또는 CH2NH2인 경우의 화학식 (I)의 화합물의 제조에 대한 일반적 경로 A
반응식 1
단편 A, B, C 및 D는 하기 상세화된 단계의 보조 하에 크립토피신 화합물 P1 내지 P3의 제조를 가능하게 한다:
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 HOAt 및 HATU의 존재 하의, 단편 AD1과 BC 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 예를 들어 TFA를 사용하는 산성 조건에서의 탈보호, 및 커플링 시약 예컨대 예를 들어 HOAt 및 HATU의 존재 하의 마크로고리화;
단계 (iii): 예를 들어 m-CPBA를 사용하는, 에폭시드를 형성하기 위한 올레핀의 산화;
단계 (v): 예를 들어 TCEP를 사용하는, 아지도 기의 환원.
단편 A 및 B는 하기 기재된 합성에 따라 제조되었다. 메틸 에스테르로서 보호된 단편 C는 R4=H, R5=Me (R), R2=R3=H인 경우 (CAS 번호 [92535-26-7]); R4=H, R5=Me (S), R2=R3=H인 경우 (CAS 번호 [118138-56-0]); R4=R5=Me, R2=R3=H인 경우 (CAS 번호 [25307-82-8]); R2=H, R3=Me (R), R4=H, R5=Me (R)인 경우 (CAS 번호 [86544-92-5]); R2=H, R3=Me (S), R4=H, R5=Me (R)인 경우 (CAS 번호 [86544-93-6]); R2=H, R3=Me (R), R4=R5=Me인 경우 (CAS 번호 [1315052-25-5]); R2=H, R3=Me (S), R4=R5=Me인 경우 (CAS 번호 [1315050-96-4]); R2=H, R3=iPr (R), R4=R5=Me인 경우 (CAS 번호 [1314999-06-8]); R2=H, R3=iPr (S), R4=R5=Me인 경우 (CAS 번호 [1315054-33-1]); R2=R3=R4=R5=Me인 경우 (CAS 번호 [90886-53-6]); R4 및 R5가 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 시클로프로필 기를 형성하는 경우 (CAS 번호 [914226-26-9])에 상업적으로 입수가능하다. 이들은 또한 실시예에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 상업적으로 입수가능하지 않은 단편 C는 실시예에 기재된 바와 같이 제조되었다. 모든 단편 D는 상업적으로 입수가능하다: L-Fmoc-Ala-OH (CAS 번호 [35661-39-3]); L-Fmoc-Val-OH (CAS 번호 [68858-20-8]); L-Fmoc-tert-Leu-OH (CAS 번호 [132684-60-7]); L-Fmoc-Leu-OH (CAS 번호 [35661-60-0]); L-Fmoc-NMe-Leu-OH (CAS 번호 [103478-62-2]); L-Fmoc-3-디메틸아미노-Ala-OH (CAS 번호 [587880-86-2]); L-Fmoc-(O알릴)Asp-OH (CAS 번호 [146982-24-3]); L-Fmoc-4-메틸-Leu-OH (CAS 번호 [139551-74-9]). 빌딩 블록 AD1 및 BC는 하기 기재된 합성에 따라 제조되었다.
W=CH2OH 또는 CH2N3 또는 CH2NH2인 경우의 화학식 (I)의 화합물의 제조에 대한 일반적 경로 B
반응식 2
단편 A, B, C 및 D는 하기 상세화된 단계의 보조 하에 크립토피신 화합물 P2 내지 P4의 제조를 가능하게 한다:
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 HOAt 및 HATU의 존재 하의, 단편 AD1과 BC 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 예를 들어 TFA를 사용하는 산성 조건에서의 탈보호, 커플링 시약 예컨대 예를 들어 HOAt 및 HATU의 존재 하의 마크로고리화, 및 예를 들어 물 및 AcOEt의 혼합물 중 NaOH를 사용하는, pH 6-7에서의 아세테이트 가수분해;
단계 (iii): 염기 예컨대 예를 들어 이미다졸의 존재 하에 클로로트리이소프로필실란을 사용하는, 실릴 에테르로서의 벤질계 알콜 보호; 예를 들어 m-CPBA를 사용하는, 에폭시드를 형성하기 위한 올레핀의 산화; 예를 들어 TBAF 용액을 사용하는, 실릴 에테르의 탈보호;
단계 (iv): DPPA 및 염기 예컨대 예를 들어 DBU의 존재 하의 아지드화;
단계 (v): 예를 들어 TCEP를 사용하는, 아지도 기의 환원.
단편 A 및 B는 하기 기재된 합성에 따라 제조되었다. 단편 C는 상기 섹션에 보고된 바와 같이 상업적으로 입수가능하였거나, 또는 실시예에 기재된 바와 같이 제조되었다. 모든 단편 D는 상기 섹션에 기재된 바와 같이 상업적으로 입수가능하다. 빌딩 블록 AD2 및 BC는 하기 기재된 합성에 따라 제조되었다.
W= CH2OH 또는 CH2N3 또는 CH2NH2인 경우의 화학식 (I)의 화합물의 제조에 대한 일반적 경로 C
반응식 3
사쿠라이(Sakurai) 알콜 및 단편 B, C 및 D는 하기 상세화된 단계의 보조 하에 크립토피신 화합물 P2 내지 P4의 제조를 가능하게 한다:
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 HOAt 및 HATU의 존재 하의, 단편 AD3과 대안적 BC 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 촉매 예컨대 예를 들어 그럽스 I 촉매의 존재 하의, 폐환 복분해에 의한 마크로고리화;
단계 (iii): 산성 조건 예컨대 예를 들어 10% TFA에서의, p-메톡시벤질 에테르의 탈보호;
단계 (iv): 차아염소산나트륨의 존재 하에 산화제 예컨대 예를 들어 TEMPO를 사용하는, 알콜의 산화;
단계 (v): 염기 예컨대 예를 들어 포스파젠 염기 P2-Et의 존재 하에 적절하게 치환된 이소티오시네올-유래 키랄 술포늄을 사용하는, 비대칭 코리-차이코프스키(Corey-Chaykovsky) 반응에 의한 에폭시드의 도입;
단계 (vi): 예를 들어 TCEP를 사용하는, 아지도 기의 환원.
사쿠라이 알콜 및 단편 B는 하기 기재된 합성에 따라 제조되었다. 단편 C는 상기 섹션에 보고된 바와 같이 상업적으로 입수가능하였거나, 또는 실시예에 기재된 바와 같이 제조되었다. 모든 단편 D는 상기 섹션에 기재된 바와 같이 상업적으로 입수가능하다. 빌딩 블록 AD3 및 대안적 BC는 하기 기재된 합성에 따라 제조되었다.
W=CH2SH인 경우의 화학식 (I)의 화합물의 제조
반응식 4
P4는 하기 상세화된 단계의 보조 하에 다른 크립토피신 화합물 P5 및 P6의 제조를 가능하게 한다:
단계 (i): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 메탄술포닐 클로라이드를 사용하는, 클로로 기의 도입;
단계 (ii): 문헌 [Hu J., et al., J. Org. Chem. 1999, 64, 4959-496]에 따라 TBAF 및 헥사메틸디실라티안으로부터 계내 제조된 테트라부틸암모늄 트리메틸실릴티올레이트를 사용하는 관능화: 이러한 반응 과정에서, 반응식 3에 도시된 중간체 이량체가 통상적으로 형성됨;
단계 (iii): 포스핀 예컨대 예를 들어 TCEP를 사용하는, 이량체의 환원.
반응식 1, 2, 3 및 4는 n=1인 경우를 기재하고 있지만, 하기 상세화되고 WO2011/001052의 반응식 2에 기재된 단계의 보조 하에 P2, P3 또는 P4로부터 출발하는 n>1인 경우의 화학식 (I)의 화합물의 제조에도 적용될 수 있다:
반응식 5
단계 (i): 디올 관능기를 수득하기 위한, 산성 매질에서의 에폭시드 고리의 개환; 예를 들어 진한 과염소산이 사용될 수 있음;
단계 (ii): 예를 들어 과아이오딘산나트륨을 사용하는, 디올의 산화성 절단;
단계 (iii): 적합한 포스포늄 할라이드, 예를 들어 브로마이드, 및 강염기, 예를 들어 BuLi를 사용하는 비티히(Wittig) 반응;
단계 (iv): 예를 들어 m-CPBA를 사용하는, 에폭시드를 형성하기 위한 올레핀의 산화;
단계 (v): 예를 들어 TBAF 용액을 사용하는, 실릴 에테르의 탈보호.
W=CO2H인 경우의 화학식 (I)의 화합물의 제조
반응식 6
P4는 하기 상세화된 단계의 보조 하에 다른 크립토피신 화합물 P7 및 P8의 제조를 가능하게 한다:
단계 (i): 데스-마르틴(Dess-Martin) 시약을 사용하는 산화;
단계 (ii): 2-메틸-2-부텐의 존재 하의 피닉(Pinnick) 유형의 산화 (Pinnick H.W., Tetrahedron 1981, 37, 2091-2096).
반응식 6은 n=0인 경우를 기재하고 있지만, (CH2)n+1OH 기를 보유하는 P4의 유사체로부터 출발하는 W=(CH2)nCO2H인 경우의 화학식 (I)의 화합물의 제조에도 적용될 수 있다. 반응식 1, 2, 3, 4, 5 및 6에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이들은 크립토피신 화합물에 대해 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
크립토피신 페이로드를 제조하는 방법
화학식 (II)의 화합물은 화학식 (I)의 크립토피신 화합물 및 링커 전구체 (LP)로 출발하여 반응식 7에 따라 제조될 수 있다:
반응식 7
W는
을 나타낸다.
여기서 R11은 수소 원자 또는 기 (C1-C6)알킬, 보다 특히 메틸 기를 나타낸다.
링커 전구체 LP는, 기 W와 LP 상에 존재하는 화학적 관능기 사이의 반응 후에 링커 L의 전구체를 크립토피신 화합물에 도입하는 기능을 갖는다.
반응식 7에서, 크립토피신 화합물 (I)로부터 출발하여 크립토피신 페이로드 (II)를 제조하기 위해서는 여러 단계 및/또는 반응이 필요할 수 있다. 예를 들어, ZaRa = -O-NHS인 경우에, 상응하는 링커 전구체를 사용하여 ZaRa = -O-알릴인 링커 L을 도입하고, 이어서 에스테르 관능기를 탈보호하고, -O-NHS를 도입할 수 있다. 탈보호는 스캐빈저 아민, 예를 들어 모르폴린의 존재 하에 팔라듐 촉매, 예를 들어 Pd(PPh3)4로 처리함으로써 수행될 수 있고; 활성화는 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 DSC를 사용하거나 또는 커플링제 예컨대 예를 들어 DCC의 존재 하에 NHS를 사용하여 수행될 수 있다. 기 ZaRa의 또 다른 기 ZaRa로의 이러한 전환 (예를 들어 -O-알릴 → -O-NHS)은 다른 기 ZaRa, 특히 상기 기재된 것들을 수득하기 위해 적용될 수 있다.
반응식 7'는 유사하게 각각 말레이미도, 할로아세트아미도, 아미노 또는 아지도 기를 보유하는 링커를 포함하는 크립토피신 화합물의 제조를 예시하고 있다 (L*는 L= -L*-말레이미도이거나, 또는 L= -L*-할로아세트아미도이거나, 또는 L= -L*-NH2-이거나, 또는 L= -L*-N3이도록 하는 링커의 단편을 나타냄).
반응식 7'
이들 화합물은 아미노 기를 포함하는 링커 L'를 포함하는 크립토피신 화합물과, 각각 말레이미도, 할로아세트아미도, 아미노 또는 아지도 기를 도입하기 위한 변형제 사이의 반응에 의해 수득된다.
화학식 (II)의 화합물은 대안적으로 화학식 (I)의 동일한 크립토피신 화합물 및 또 다른 링커 전구체 (LP')로 출발하여 반응식 8에 따라 제조될 수 있다:
반응식 8
반응식 8에서, 크립토피신 화합물 (I)로부터 출발하여 크립토피신 페이로드 (II)에 도달하기 위해서는 여러 단계 및/또는 반응이 필요할 수 있다. 예를 들어, ZaRa = -O-NHS인 경우에, 보호된 링커 전구체 L'를 도입하고, 이어서 탈보호하고, 링커 전구체 L"와 커플링하여, 카르복실산 관능기를 도입할 수 있으며, 이를 ZaRa = -O-NHS로 직접 활성화시킬 수 있거나, 또는 먼저 탈보호하고 후속적으로 활성화시킬 수 있다 (L' 및 L"는 L=L'-L"이도록 하는 링커의 단편임). 탈보호는 염기 예를 들어 피페리딘으로 처리함으로써 수행될 수 있고; 링커 L"와의 커플링은 시클릭 무수물, 예를 들어 글루타르산 무수물의 개환을 통해 진행될 수 있고; 활성화는 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 DSC를 사용하거나 또는 커플링제 예컨대 예를 들어 DCC의 존재 하에 NHS를 사용하여 수행될 수 있다.
기 W와 LP 상에 존재하는 화학적 관능기 사이의 반응의 예는, 카르복실산 관능기를 보유하는 링커 전구체 LP와 W=(CH2)nNH2 사이의, 또는 아민 관능기를 보유하는 링커 전구체 LP와 W=CO2H 또는 (CH2)nCO2H 사이의 아미드화이며, 이러한 반응은 커플링제 예컨대 예를 들어 EDCI 또는 HOBt의 존재 하에 수행될 수 있다. 하기 반응식에 따라 아민 관능기를 보유하는 링커 전구체 LP와, W=(CH2)nOH 및 p-니트로페닐 클로로포르메이트 (카르보네이트 형태로의 알콜의 활성화)로부터 수득된 W'=(CH2)nO-C(=O)-O-(4-니트로페닐)을 반응시키는 것이 또한 가능하다 (R17 = H 또는 (C1-C6)알킬) :
-NHR17 + 크립토-(CH2)nO-C(=O)-O-(4-니트로페닐) → 크립토-(CH2)nO-C(=O)-NR17-
동일한 종류의 반응이 또한 카르보네이트로서 활성화된 알콜 관능기를 보유하는 링커 전구체 LP와 W=(CH2)nNH2 사이에서 수행될 수 있다. 반응의 또 다른 예는 알콜 관능기를 보유하는 링커 전구체와 W=CO2H 또는 (CH2)nCO2H 사이의 에스테르화이며, 이러한 반응은 커플링제 예컨대 예를 들어 MNBA의 존재 하에 수행될 수 있다. 반응의 또 다른 예는 알킨 관능기를 보유하는 링커 전구체와 W=(CH2)N3 사이의 구리-촉매된 아지드-알킨 고리화첨가이며, 이러한 반응은 황산구리 및 아스코르브산나트륨의 존재 하에 수행될 수 있다.
반응식 7에 기초하는, W=(CH2)nNH2이고, L=(IV1)이고, 여기서 n=1이고, R15=H이고, ALK=(CH2)3인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 9
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 EDC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 촉매 예컨대 예를 들어 테트라키스-(트리페닐포스핀)팔라듐의 존재 하의, 알릴 에스테르의 탈보호;
단계 (iii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
반응식 8에 기초하는, W=(CH2)nNH2이고, L=(IV1)이고, 여기서 n=1이고, R11=H이고, ALK=(CH2)3인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 10
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 EDC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하의, Fmoc 아민의 탈보호;
단계 (iii): 글루타르산 무수물과의 커플링;
단계 (iv): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
반응식 9 및 10은 n=1이고, R11=H이고, ALK=(CH2)3인 L(IV1)의 경우를 기재하고 있지만, 이들은 또한 RCG1=C(=O)ONHS를 갖는 다른 링커 L, 즉 n≠1이고/거나, R11≠H이고/거나, ALK≠(CH2)3인 L(IV1)의 경우, 및 L(IV2) 및 L(IV3)의 경우에도 적용될 수 있다. 이들에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이들은 크립토피신 화합물에 대해 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
W=(CH2)nNH2이고, 여기서 n=1이고, R11=H이고, RCG1=말레이미도, 할로아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 경우, 즉 링커 L(IV4) 내지 L(IV17)인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 11
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 EDC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하의, Fmoc 아민의 탈보호.
반응식 11은 n=1이고, R11=H이고, ALK=(CH2)5인 L(IV4), n=1이고, R11=H인 L(IV8), n=1이고, R11=H이고, ALK=(CH2)4인 L(IV12), n=1이고, R11=H이고, ALK=(CH2)3인 L(IV14), 및 n=1이고, R11=H이고, ALK=(CH2)3이고, ALK'=(CH2)2인 L(IV16)의 경우를 기재하고 있지만, 이는 또한 RCG1=말레이미도, 아이오도아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 다른 링커 L(IV4) 내지 L(IV17)에도 적용될 수 있다. 이는 아이오도아세트아미도 반응성 기에 대해 도시되어 있지만, 브로모아세트아미도 반응성 기에 대해서도 동일하게 적용될 수 있다. 이에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이에는 크립토피신 화합물이 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
반응식 7에 기초하는, W=(CH2)nX이고, 여기서 X=O 또는 S이고, L=(IV18)이고, 여기서 n=1이고, R17 및 R18=H이고, ALK=(CH2)3인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 12
단계 (i): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜 또는 벤질계 티올의 p-니트로페닐-(티오)카르보네이트로서의 활성화;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 아민과 반응시키는 것에 의한, (티오)카르바메이트의 형성;
단계 (iii): 촉매 예컨대 예를 들어 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐의 존재 하의, 알릴 에스테르의 탈보호;
단계 (iv): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
반응식 8에 기초하는, W=(CH2)nX이고, 여기서 X=O 또는 S이고, L=(IV18)이고, 여기서 n=1이고, R17 및 R18=H이고, ALK=(CH2)3인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 13
단계 (i): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 아민과 반응시키는 것에 의한, (티오)카르바메이트의 형성;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하의, Fmoc 아민의 탈보호;
단계 (iii): 글루타르산 무수물과의 커플링;
단계 (iv): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
반응식 12 및 13은 n=1이고, R17 및 R18=H이고, ALK=(CH2)3인 L(IV18)의 경우를 기재하고 있지만, 이들은 또한 RCG1=C(=O)ONHS인 다른 링커 L, 즉 n≠1이고/거나, R17, R18≠H이고/거나, ALK≠(CH2)3인 L(IV18)의 경우, 및 L(IV19) 및 L(IV20)의 경우에도 적용될 수 있다. 이들에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이들은 크립토피신 화합물에 대해 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
W=(CH2)nX이고, 여기서 X=O 또는 S이고, RCG1=말레이미도, 할로아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 경우, 즉 링커 L(IV21) 내지 (IV34)인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 14
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 수행되는 것인, (티오)카르바메이트의 형성;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하의, Fmoc 아민의 탈보호.
반응식 14는 n=1이고, R17 및 R18=H이고, ALK=(CH2)5인 L(IV21)의 경우, n=1 및 R17 및 R18=H인 L(IV25)의 경우, n=1이고, R17 및 R18=H이고, ALK=(CH2)4인 L(IV29)의 경우, n=1이고, R17 및 R18=H이고, ALK=(CH2)3인 L(IV31)의 경우, 및 n=1이고, R17, R18 및 R22= H, ALK=(CH2)3이고, ALK'=(CH2)2인 L(IV33)의 경우를 기재하고 있지만, 이는 또한 RCG1=말레이미도, 아이오도아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 다른 링커 L(IV21 내지 34)에도 적용될 수 있다. 이는 아이오도아세트아미도 반응성 기에 대해 도시되어 있지만, 브로모아세트아미도 반응성 기에 대해서도 동일하게 적용될 수 있다. 이에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이에는 크립토피신 화합물이 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
반응식 7에 기초하는, W=(CH2)nNH2이고, L=(IV35)이고, 여기서 n=1이고, R11=R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH이고, ALK=(CH2)3인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 15
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 수행되는 것인, 카르바메이트의 형성;
단계 (ii): 촉매 예컨대 예를 들어 테트라키스-(트리페닐포스핀)팔라듐의 존재 하의, 알릴 에스테르의 탈보호;
단계 (iii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
반응식 8에 기초하는, W=(CH2)nNH2이고, L=(IV35)이고, 여기서 n=1이고, R11=R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH이고, ALK=(CH2)3인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 16
단계 (i): 반응이 적합한 p-니트로페닐카르보네이트 시약의 존재 하에 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 수행되는 것인, 카르바메이트의 형성;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하의, Fmoc 아민의 탈보호;
단계 (iii): 글루타르산 무수물과의 커플링;
단계 (iv): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
반응식 15 및 16은 n=1이고, R11=R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)3인 L(IV35)의 경우를 기재하고 있지만, 이들은 또한 RCG1=C(=O)ONHS인 다른 링커 L, 즉 n≠1이고/거나, R11, R14, R15, R16≠H이고/거나, J1, J2, J3, J4≠CH 및/또는 오르토-벤질계 알콜이고/거나, ALK≠(CH2)3인 L(IV35)의 경우, 및 L(IV36) 및 L(IV37)의 경우에도 적용될 수 있다. 이들에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이들은 크립토피신 화합물에 대해 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
W=(CH2)nNH2이고, 여기서 n=1이고, R11=R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH이고, RCG1=말레이미도, 할로아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 경우, 즉 링커 L(IV38) 내지 L(IV151)인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 17
단계 (i): 반응이 적합한 p-니트로페닐카르보네이트 시약의 존재 하에 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 수행되는 것인, 카르바메이트의 형성;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하의, Fmoc 아민의 탈보호.
반응식 17은 n=1이고, R11=R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)5인 L(IV38), n=1이고, R11=R14=R15=R16=H 및 J1=J2=J3=J4=CH 및 파라-벤질계 알콜인 L(IV42), n=1이고, R11=R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)4인 L(IV46), n=1이고, R11=R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)3인 L(IV48), 및 n=1이고, R11=R14=R15=R16=R22=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)3이고, ALK'=(CH2)2인 L(IV50)의 경우를 기재하고 있지만, 이는 또한 RCG1=말레이미도, 아이오도아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 다른 링커 L(IV38) 내지 L(IV51)에도 적용될 수 있다. 이에는 파라-벤질계 알콜이 주어져 있지만, 이는 또한 오르토-벤질계 알콜에도 적용될 수 있다. 이는 아이오도아세트아미도 반응성 기에 대해 도시되어 있지만, 브로모아세트아미도 반응성 기에 대해서도 동일하게 적용될 수 있다. 이에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이에는 크립토피신 화합물이 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
반응식 7에 기초하는, W=(CH2)nX이고, 여기서 X=O 또는 S이고, L=(IV52)이고, 여기서 n=1이고, R14=R15=R16=R17=R18=H이고, J1=J2=J3=J4=CH이고, ALK=(CH2)3인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 18
단계 (i): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 아민과 반응시키는 것에 의한, (티오)카르바메이트의 형성;
단계 (ii): 촉매 예컨대 예를 들어 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐의 존재 하의, 알릴 에스테르의 탈보호;
단계 (iii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
반응식 8에 기초하는, W=(CH2)nX이고, 여기서 X=O 또는 S이고, L=(IV52)이고, 여기서 n=1이고, R14=R15=R16=R17=R18=H이고, J1=J2=J3=J4=CH이고, ALK=(CH2)3인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 19
단계 (i): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 아민과 반응시키는 것에 의한, (티오)카르바메이트의 형성;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하의, Fmoc 아민의 탈보호;
단계 (iii): 글루타르산 무수물과의 커플링;
단계 (iv): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
반응식 18 및 19는 n=1이고, R14=R15=R16=R17=R18=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)3인 L(IV52)의 경우를 기재하고 있지만, 이들은 또한 RCG1=C(=O)ONHS인 다른 링커 L, 즉 n≠1이고/거나, R14, R15, R16, R17, R18≠H이고/거나, J1, J2, J3, J4≠CH 및/또는 오르토-벤질계 알콜이고/거나, ALK≠(CH2)3인 L(IV52)의 경우, 및 L(IV53) 및 L(IV54)의 경우에도 적용될 수 있다. 이들에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이들은 크립토피신 화합물에 대해 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
W=(CH2)nX이고, 여기서 X=O 또는 S이고, RCG1=말레이미도, 할로아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 경우, 즉 링커 L(IV55) 내지 (IV68)인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 20
단계 (i): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 아민과 반응시키는 것에 의한, (티오)카르바메이트의 형성;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하의, Fmoc 아민의 탈보호.
반응식 20은 n=1이고, R14=R15=R16=R17=R18=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)2이고, ALK'=(CH2)5인 L(IV55)의 경우, n=1이고, R14=R15=R16=R17=R18=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)2인 L(IV59)의 경우, n=1이고, R14=R15=R16=R17=R18=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)2이고, ALK'=(CH2)4인 L(IV63)의 경우, n=1이고, R14=R15=R16=R17=R18=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)2이고, ALK'=(CH2)3인 L(IV65)의 경우, 및 n=1이고, R14=R15=R16=R17=R18=R22=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)2이고, ALK'=(CH2)5이고, ALK"=(CH2)2인 L(IV67)의 경우를 기재하고 있지만, 이는 또한 RCG1=말레이미도, 아이오도아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 다른 링커 L(IV55 내지 68)에도 적용될 수 있다. 이는 아이오도아세트아미도 반응성 기에 대해 도시되어 있지만, 브로모아세트아미도 반응성 기에 대해서도 동일하게 적용될 수 있다. 이에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이에는 크립토피신 화합물이 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
반응식 7에 기초하는, W=C(=O)O이고, L=(IV69)이고, 여기서 R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH이고, ALK=(CH2)3인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 21
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 MNBA 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP 및 DIEA의 존재 하의 에스테르화;
단계 (ii): 촉매 예컨대 예를 들어 테트라키스-(트리페닐포스핀)팔라듐의 존재 하의, 알릴 에스테르의 탈보호;
단계 (iii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
반응식 8에 기초하는, W=C(=O)O이고, L=(IV69)이고, 여기서 R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH이고, ALK=(CH2)3인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 22
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 MNBA 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP 및 DIEA의 존재 하의 에스테르화;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하의, Fmoc 아민의 탈보호;
단계 (iii): 글루타르산 무수물과의 커플링;
단계 (iv): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
반응식 21 및 22는 R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)3인 L(IV69)의 경우를 기재하고 있지만, 이들은 또한 RCG1=C(=O)ONHS인 다른 링커 L, 즉 R14, R15, R16≠H이고/거나, J1, J2, J3, J4≠CH 및/또는 오르토-벤질계 알콜이고/거나, ALK≠(CH2)3인 L(IV69)의 경우, 및 L(IV70) 및 L(IV71)의 경우에도 적용될 수 있다. 이들에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이들은 크립토피신 화합물에 대해 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
W=C(=O)O이고, 여기서 R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH이고, RCG1=말레이미도, 할로아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 경우, 즉 링커 L(IV72) 내지 L(IV85)인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 23
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 MNBA 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP 및 DIEA의 존재 하의 에스테르화;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하의, Fmoc 아민의 탈보호.
반응식 23은 n=1이고, R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)5인 L(IV72), n=1이고, R14=R15=R16=H 및 J1=J2=J3=J4=CH 및 파라-벤질계 알콜인 L(IV76), n=1이고, R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)4인 L(IV80), n=1이고, R14=R15=R16=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)3인 L(IV82), 및 n=1이고, R14=R15=R16=R22=H이고, J1=J2=J3=J4=CH, 파라-벤질계 알콜이고, ALK=(CH2)3이고, ALK'=(CH2)2인 L(IV84)의 경우를 기재하고 있지만, 이는 또한 RCG1=말레이미도, 아이오도아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 다른 링커 L(IV72) 내지 L(IV85)에도 적용될 수 있다. 이에는 파라-벤질계 알콜이 주어져 있지만, 이는 또한 오르토-벤질계 알콜에도 적용될 수 있다. 이는 아이오도아세트아미도 반응성 기에 대해 도시되어 있지만, 브로모아세트아미도 반응성 기에 대해서도 동일하게 적용될 수 있다. 이에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이에는 크립토피신 화합물이 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
W=C(=O)O이고, L=(V86)이고, 여기서 R25=H이고, ALK=(CH2)7인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 24
단계 (i): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 DSC로의 처리에 의한, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
반응식 24는 R25=H이고, ALK=(CH2)7인 L(V86)의 경우를 기재하고 있지만, 이들은 또한 RCG1=C(=O)ONHS인 다른 링커 L, 즉 R25≠H이고/거나, ALK≠(CH2)7인 L(V86)의 경우, 및 L(V87) 및 L(V88)의 경우에도 적용될 수 있다. 이들에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이들은 크립토피신 화합물에 대해 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
W=C(=O)O이고, 여기서 R30=H이고, RCG1=말레이미도, 할로아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 경우, 즉 링커 L(V89) 내지 L(V101)인 경우의 화학식 (II)의 화합물의 제조
반응식 25
단계 (i): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 환원제 예컨대 예를 들어 TCEP로의 처리에 의한, 아지도의 환원.
반응식 25는 R25=H이고, ALK=(CH2)5인 L(V89), R25=H이고, ALK=(CH2)3인 L(V93), R25=H이고, ALK=(CH2)4인 L(V96), R25=H이고, ALK=(CH2)3인 L(V98), 및 R22=R25=H이고, ALK=(CH2)3이고, ALK'=(CH2)2인 L(V100)의 경우를 기재하고 있지만, 이는 또한 RCG1=말레이미도, 아이오도아세트아미도, NH2, N3 또는 시클로옥틴인 다른 링커 L(V89) 내지 L(V101)에도 적용될 수 있다. 이는 아이오도아세트아미도 반응성 기에 대해 도시되어 있지만, 브로모아세트아미도 반응성 기에 대해서도 동일하게 적용될 수 있다. 이에는 파라 위치에 링커가 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에도 동일하게 적용될 수 있다. 유사하게, 이에는 크립토피신 화합물이 주어져 있지만, 화학식 (I)의 다른 화합물, 특히 D1-D19의 제조에도 적용될 수 있다.
크립토피신 접합체를 제조하는 방법
화학식 (III)의 화합물은 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드 및 항체 (Ab)로부터 출발하여 반응식 26에 따라 제조될 수 있다:
반응식 26
여기서
또는 대안적으로 Y는 C(=O)O 또는 O (C1-C6)알킬-C(=O)O를 나타내거나;
또는 대안적으로 Y는 (C1-C6)알킬-트리아졸-유사 
를 나타내며;
Y는 페닐 핵의 오르토 (o), 메타 (m) 또는 파라 (p) 위치에 위치하고;
화학식 (I)의 크립토피신 화합물의 합성을 위한 빌딩 블록을 제조하는 방법
단편 A의 일반적 합성
반응식 27
단편 A는 하기 상세화된 단계의 보조 하에 적절한 히드록시 에스테르로부터 출발하여 12 단계로 제조될 수 있다:
단계 (i): 촉매량의 산 예컨대 예를 들어 p-TsOH의 존재 하에 트리클로로아세트이미데이트로서 활성화된 p-메톡시벤질 알콜을 사용하는, 알콜의 p-메톡시벤질 에테르로서의 보호;
단계 (ii): 환원제 예컨대 예를 들어 수소화붕소리튬을 사용하는, 에스테르의 환원;
단계 (iii): 차아염소산나트륨의 존재 하에 산화제 예컨대 예를 들어 TEMPO를 사용하는, 알콜의 산화;
단계 (iv): 사염화주석의 존재 하에 알릴트리부틸주석을 사용하는 부분입체선택적 알릴화;
단계 (v): 촉매 예컨대 예를 들어 그럽스 II 촉매의 존재 하에 tert-부틸아크릴레이트를 사용하는 교차 복분해;
단계 (vi): 촉매량의 산 예컨대 예를 들어 p-TsOH의 존재 하에 CAN 및 에탄디티올로의 후속 처리를 사용하는, p-메톡시벤질 에테르의 탈보호;
단계 (vii): 염기 예컨대 예를 들어 이미다졸의 존재 하에 클로로트리에틸실란을 사용하는, 알콜의 실릴 에테르로서의 보호;
단계 (viii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 DMSO 및 옥살릴 클로라이드를 사용하는 스원(Swern) 산화;
단계 (ix): 적합한 포스포늄 할라이드, 예를 들어 브로마이드, 및 강염기 예컨대 예를 들어 BuLi를 사용하는 비티히 반응;
단계 (x): 예를 들어 TBAF 용액을 사용하는, 실릴 에테르의 탈보호;
단계 (xi): 산화제 예컨대 예를 들어 산화망가니즈를 사용하는, 벤질계 알콜의 산화;
단계 (xii): 벤젠티올의 존재 하에 AIBN을 사용하는, 이중 결합의 이성질화.
히드록시 에스테르는 R1=Me인 경우 (CAS 번호 [72657-23-9]), Et인 경우 (CAS 번호 [72604-81-0]) 및 iPr인 경우 (CAS 번호 [72604-82-1])에 상업적으로 입수가능하다. 포스포늄 할라이드의 제조는 WO2011/001052에 기재되어 있다.
단편 B의 일반적 합성
반응식 28
단편 B는 하기 상세화된 단계의 보조 하에 적절한 아미노산으로부터 출발하여 2 단계로 제조될 수 있다:
단계 (i): 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하의 Boc2O로의 처리에 의한, 아민의 보호;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 LiOH를 사용하는, 메틸 에스테르의 비누화.
메틸 에스테르로서 보호된 아미노산은 R9=3-Cl, 4-OMe인 경우 (CAS 번호 [704870-54-2]); 3-Cl, 4-OEt인 경우 (CAS 번호 [1256963-00-9]); 3-Cl, 4-OPr인 경우 (CAS 번호 [1259709-59-9]); 3-Cl, 4-OMe, 5-F인 경우 (CAS 번호 [1213670-98-4]); 3-Cl, 4-OMe, 5-Cl인 경우 (CAS 번호 [1259701-42-2]); 3-Cl, 4-OMe, 5-OMe인 경우 (CAS 번호 [1212820-34-2]); 3-Cl, 4-OH, 5-OMe인 경우 (CAS 번호 [1213426-93-7]); 3-Cl, 4-NH2인 경우 (CAS 번호 [1213672-64-0]); 2-Cl, 3-Cl, 4-NH2인 경우 (CAS 번호 [1213607-49-8]); 3-Cl, 4-NH2, 5-F인 경우 (CAS 번호 [1213400-66-8]); 3-Cl, 4-NH2, 5-Cl인 경우 (CAS 번호 [1213480-30-8])에 상업적으로 입수가능하다.
빌딩 블록 AD1의 일반적 합성
반응식 29
단편 A 및 D는 하기 상세화된 단계의 보조 하에 빌딩 블록 AD1의 제조를 가능하게 한다:
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 MNBA 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP 및 DIEA의 존재 하의, 단편 D와 단편 A의 에스테르화;
단계 (ii): 환원제 예컨대 예를 들어 소듐 트리메톡시보로히드라이드를 사용하는, 알데히드의 알콜로의 환원;
단계 (iii): 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하의 메탄술포닐 클로라이드로의 처리에 의한, 알콜의 메실레이트로서의 활성화; 아지드화나트륨으로의 처리에 의한, 메실레이트의 아지도 기에 의한 치환;
단계 (iv): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘으로의 처리에 의한, 아민의 탈보호.
빌딩 블록 AD2의 일반적 합성
반응식 30
단편 A 및 D는 하기 상세화된 단계의 보조 하에 빌딩 블록 AD2의 제조를 가능하게 한다:
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 MNBA 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP 및 DIEA의 존재 하의, 단편 D와 단편 A의 에스테르화;
단계 (ii): 환원제 예컨대 예를 들어 소듐 트리메톡시보로히드라이드를 사용하는, 알데히드의 알콜로의 환원;
단계 (iii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘으로의 처리에 의한, 아민의 탈보호.
빌딩 블록 AD3의 일반적 합성
반응식 31
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 MNBA 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP 및 DIEA의 존재 하의, 단편 D의 사쿠라이 알콜로의 에스테르화;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘으로의 처리에 의한, 아민의 탈보호.
빌딩 블록 BC의 일반적 합성
반응식 32
단편 B 및 C는 하기 상세화된 단계의 보조 하에 빌딩 블록 BC의 제조를 가능하게 한다:
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 HOBt 및 EDC 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의, 단편 B와 단편 C의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 LiOH를 사용하는, 메틸 에스테르의 비누화.
대안적 빌딩 블록 BC의 일반적 합성
반응식 33
단편 B 및 C는 하기 상세화된 단계의 보조 하에 대안적 빌딩 블록 BC의 제조를 가능하게 한다:
단계 (i): 커플링 시약 예컨대 예를 들어 HOBt 및 EDC 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의, 단편 B와 단편 C의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 예를 들어 TFA를 사용하는 산성 조건에서의, Boc 기의 탈보호;
단계 (iii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 아크릴로일 클로라이드로의 처리에 의한, 아크릴아미드의 형성;
단계 (iv): 염기 예컨대 예를 들어 tBuOK를 사용하는, 메틸 에스테르의 비누화.
링커 전구체 LP의 제조
LP는 하기 중 1종일 수 있으며; LP1 내지 LP101은 L 아미노산을 사용하여 기재되어 있지만, D 아미노산에도 적용될 수 있다. 이들은 w=2인 경우에 대해 주어져 있지만, 필요에 따라 펩티드 커플링 단계를 수회 반복함으로써 w>2인 경우에 대해서도 유사하게 적용될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 실온에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 알릴 에스테르로서 단일보호된 이산은 n=2 (모노알릴 숙시네이트)인 경우에 상업적으로 입수가능하거나, 또는 n=2 내지 6인 경우에 상업적으로 입수가능한 메틸 또는 tert-부틸 모노에스테르의 에스테르교환에 의해 제조될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 지지된 DCC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 알릴 에스테르로서 단일보호된 PEG 이산은 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
ALK=CH2CH2인 경우
ALK≠CH2CH2인 경우
단계 (i): 반응이 불포화 보호된 산의, 촉매량의 나트륨의 작용에 의해 생성된 알콕시드로의 처리에 의해 무수 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 또는 DMF 중에서 수행되는 것인, PEG 쇄의 신장;
단계 (ii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호. 후자의 경우에, 구조 상에 존재하는 알콜 관능기의 트리플루오로아세테이트가 형성될 수 있음. 이러한 트리플루오로아세테이트는 하기 단계 (iii) 동안 절단됨;
단계 (iii): 반응이 트리메틸실릴디아조메탄으로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 MeOH 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 메틸 에스테르로서의 보호;
단계 (iv): 반응이 LiOH의 존재 하에 극성 용매의 혼합물 예컨대 THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, 메틸 에스테르의 비누화;
단계 (v): 반응이 알릴 알콜, 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP의 존재 하에 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 알릴 에스테르로서의 보호;
단계 (vi): 반응이 할로겐화 에스테르의, THP 에테르로서 단일보호된 PEG 디올의 알콕시드로의 처리에 의해 무수 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 또는 DMF 중에서 수행되는 것인, PEG 쇄의 신장. 이러한 유형의 단일보호된 PEG 디올의 제조는 문헌에 널리 기재되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Richard A., et al., Chem. Eur. J. 2005, 11, 7315-7321 또는 Sakellariou E.G., et al., Tetrahedron 2003, 59, 9083-9090]을 참조함.
출발 PEG 디올은 i=3 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 혼합물 DMF/H2O 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 실온에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 알릴 에스테르로서 단일보호된 술포 이산은 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
ALK=CH2CH2인 경우의 대안
단계 (i): 반응이 알릴 알콜, 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP의 존재 하에 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 알릴 에스테르로서의 보호;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 클로로술폰산으로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCE 중에서 75℃에서 수행되는 것인, 카르복실산의 α-술폰화;
단계 (iii): 반응이 수산화나트륨으로의 처리에 의해 수행되는 것인, 카르복실산 모이어티의 형성;
단계 (iv): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 티오아세트산을 사용하여 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 중에서 -20℃에서 수행되는 것인, 브로마이드의 티오아세틸에 의한 치환;
단계 (v): 반응이 과산화수소 및 아세트산으로의 처리에 의해 실온에서 수행되는 것인, 술폰산 모이어티의 형성.
시아노 카르복실산은 n=1 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 카르복실산은 n=1 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 지지된 DCC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 산은 ALK=ALK'=CH2CH2이고, i=1 내지 7인 경우에 상업적으로 입수가능하고, 그렇지 않은 경우에는 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
ALK=ALK'=CH2CH2이고, i>7인 경우
ALK≠CH2CH2이고, ALK'=CH2CH2인 경우
ALK=CH2CH2이고, ALK'≠CH2CH2인 경우
ALK 및 ALK'≠CH2CH2인 경우
단계 (i): 반응이 불포화 보호된 산의, 촉매량의 나트륨의 작용에 의해 생성된 알콕시드로의 처리에 의해 무수 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 또는 DMF 중에서 수행되는 것인, PEG 쇄의 신장;
단계 (ii): 반응이 PPh3 및 DIAD의 존재 하의 말레이미드의 PEG 히드록시산에 의한 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 중에서 수행되는 것인, 말레이미드 상에서의 미츠노부(Mitsunobu) 반응;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호;
단계 (iv): 반응이 할로겐화 에스테르의, THP 에테르로서 단일보호된 PEG 디올의 알콕시드로의 처리에 의해 무수 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 또는 DMF 중에서 수행되는 것인, PEG 쇄의 신장. 이러한 유형의 단일보호된 PEG 디올의 제조는 문헌에 널리 기재되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Richard A., et al., Chem. Eur. J. 2005, 11, 7315-7321 또는 Sakellariou E.G., et al., Tetrahedron 2003, 59, 9083-9090]을 참조함;
단계 (v): 반응이 촉매량의 아세틸 클로라이드를 사용하여 극성 양성자성 용매 예컨대 MeOH 중에서 수행되는 것인, THP 에테르의 선택적 탈보호;
단계 (vi): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하의 메탄술포닐 클로라이드로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 알콜의 메실레이트로서의 활성화;
단계 (vii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 수소화나트륨의 존재 하에 극성 비양성자성 용매 예컨대 DMF 중에서 수행되는 것인 친핵성 치환;
단계 (viii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 수소화나트륨의 존재 하의 벤질 브로마이드로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 중에서 수행되는 것인, 알콜의 벤질 에테르로서의 보호;
단계 (ix): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, 알콜의 탈보호;
단계 (x): 촉매 예컨대 예를 들어 탄소 상 팔라듐의 존재 하의 가수소분해에 의한, 알콜의 탈보호.
출발 PEG 디올은 i=3 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다. 출발 ALK 디올은 n=1 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 혼합물 DMF/H2O 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 시클로헥산카르복실산은 ALK=CH2인 경우에 상업적으로 입수가능하고, 그렇지 않은 경우에는 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
n=2 내지 4인 경우
n>4인 경우
단계 (i): 반응이 수소의 압력, 예를 들어 60 psi 하에 촉매 예컨대 산화백금의 존재 하에 아세트산 중에서 60℃에서 수행되는 것인 수소화;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 NaOH의 존재 하의 벤질클로로포르메이트로의 처리에 의해 극성 양성자성 용매 예컨대 디옥산/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 보호;
단계 (iii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 EDC 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP의 존재 하의 tert-부탄올로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 보호;
단계 (iv): 반응이 촉매 예컨대 예를 들어 팔라듐의 존재 하의 극성 양성자성 용매 예컨대 MeOH 중 가수소분해에 의해 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (v): 반응이 NHS 및 커플링 시약 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 말레산 무수물로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DMF 중에서 수행되는 것인, 말레이미도 모이어티의 도입;
단계 (vi): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호;
단계 (vii): 반응이 염화리튬, 아연 및 트리메틸클로로실란 및 촉매 예컨대 예를 들어 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐의 존재 하의 브로모-ALK-시아노 유도체로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 중에서 수행되는 것인, 팔라듐-촉매된 커플링.
적합한 브로모-ALK-시아노 유도체는 n=1 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 클로로술폰산으로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCE 중에서 75℃에서 수행되는 것인, 카르복실산의 α-술폰화;
단계 (iv): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 혼합물 DMF/H2O 중에서 실온에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (v): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 실온에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 산은 n=1 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
LP8 
는 하기 반응식에 따라 제조되었다:
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트는 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트와 아미노 카르복실산의 커플링이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/DMF 혼합물 중에서 실온에서 수행되고, 이어서 N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트 및 염기, 예컨대 예를 들어 DIEA가 첨가되는 것인, 커플링 및 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트, 또한 n=1 내지 12인 경우에 아미노 카르복실산, 및 n=1 내지 7인 경우에 N-메틸화 아미노 카르복실산은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트와 아미노 카르복실산의 커플링이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/DMF 혼합물 중에서 수행되고, 이어서 N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA가 첨가되는 것인, 커플링 및 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트는 상업적으로 입수가능하고; ALK=CH2CH2이고, R20=H인 경우에, 아미노 PEG 카르복실산은 i=1 내지 6인 경우에 상업적으로 입수가능하고, 그렇지 않은 경우에는 tert-부틸 아크릴레이트 및 상응하는 아미노-PEG-알콜로부터 제조될 수 있고; ALK≠CH2CH2인 경우에, 이들은 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
ALK= CH2CH2이고, R20≠H인 경우
ALK≠CH2CH2인 경우
R20=H인 경우
R20≠H인 경우
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 아민을 디-tert-부틸 디카르보네이트로 처리함으로써 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 아민의 보호;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 EDC 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP의 존재 하의 tert-부탄올로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 보호;
단계 (iii): 반응이 이탈기 예컨대 할라이드 보유 시약의 존재 하의 염기 예컨대 수소화나트륨로의 처리에 의해 무수 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 중에서 수행되는 것인, 질소 원자의 알킬화;
단계 (iv): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호;
단계 (v): 반응이 할로겐화 에스테르의, WO2007/127440에 기재된 바와 같은 수소화나트륨 또는 칼륨 나프탈레니드의 작용을 통해 생성된 벤조페논-이민-PEG-알콜의 알콕시드로의 처리에 의해 무수 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 또는 DMF 중에서 수행되는 것인, PEG 쇄의 신장;
단계 (vi): 반응이 H2O의 존재 하에 에스테르를 LiOH와 반응시킴으로써 수행되는 것인, 에스테르의 비누화.
아미노-PEG-알콜은, 예를 들어 i=3, 4, 7, 8인 경우에 상업적으로 입수가능하거나, 또는 i=3 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능한 PEG 디올로부터, US7230101에 기재된 절차에 따라 제조될 수 있다. 벤조페논으로의 아민 관능기의 보호는 루이스 산 예컨대 BF3 에테레이트의 존재 하의 공비 탈수에 의해 수행될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-NHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민 Fmoc의 탈보호;
단계 (iii): N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트와 아미노 카르복실산의 커플링이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/DMF 혼합물 중에서 실온에서 수행되고, 이어서 N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA가 첨가되는 것인, 커플링 및 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 실온에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트는 상업적으로 입수가능하고; 아미노-(헤테로)아릴-카르복실산, 예컨대 예를 들어 4-아미노-2-벤조산, 6-아미노-3-피리딘 카르복실산, 5-아미노-2-피라진 카르복실산, 2-아미노-5-피리미딘 카르복실산 또는 6-아미노-1,2,4,5-테트라진 카르복실산은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 아미노 카르복실산은 n=1 내지 11인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 지지된 DCC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; ALK=CH2CH2인 경우에, Fmoc-보호된 아미노 PEG 카르복실산은 i=1 내지 6인 경우에 상업적으로 입수가능하고, 그렇지 않은 경우에는 tert-부틸 아크릴레이트 및 상응하는 아미노-PEG-알콜로부터 제조될 수 있고; ALK≠CH2CH2인 경우에, 이들은 링커 전구체 LP10에 대해 기재된 반응식에 따라 제조될 수 있다. Fmoc 기로의 아민 관능기의 보호는 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 FmocOSu (CAS 번호 [82911-69-1])로의 처리에 의해 실현될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 아지드화나트륨으로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 아세톤/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아지도 기의 도입;
단계 (iv): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (v): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 브로모 카르복실산은 n=1 내지 11인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 지지된 DCC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 아지도 PEG 산은 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
ALK=CH2CH2인 경우
ALK≠CH2CH2인 경우
단계 (i): 반응이 불포화 보호된 산의, 촉매량의 나트륨의 작용에 의해 생성된 알콕시드로의 처리에 의해 무수 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 또는 DMF 중에서 수행되는 것인, PEG 쇄의 신장;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 메탄술포닐 클로라이드를 사용하여 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 알콜 관능기의 활성화;
단계 (iii): 반응이 아지드화나트륨으로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 아세톤/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, 메실레이트의 아지도 기에 의한 치환;
단계 (iv): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는 탈보호;
단계 (v): 반응이 할로겐화 에스테르의, 예를 들어 수소화나트륨을 사용하여 생성된 알콕시드인 THP 에테르로서 단일보호된 PEG 디올의 알콕시드로의 처리에 의해 무수 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 또는 DMF 중에서 수행되는 것인, PEG 쇄의 신장. 이러한 유형의 단일보호된 PEG 디올의 제조는 문헌에 널리 기재되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Richard A. et al. Chem. Eur. J. 2005, 11, 7315-7321 또는 Sakellariou E.G., et al. Tetrahedron 2003, 59, 9083-9090]을 참조함;
단계 (vi): 반응이 LiOH의 존재 하에 극성 용매의 혼합물 예컨대 THF/H2O 혼합물 중에서 실온에서 수행되는 것인, 메틸 에스테르의 비누화.
출발 PEG 디올은 i=3 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하고; 브로모 메틸 에스테르는 n=1 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 시클로옥틴 커플링;
단계 (iv): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (v): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 시클로옥틴은 n'=1, 2, 3 및 5인 경우에 상업적으로 입수가능하고; NHS 에스테르로서 단일활성화된 이산은 n=1 내지 3인 경우에 상업적으로 입수가능하고, n=4 내지 10인 경우에 이들은 커플링제 예컨대 예를 들어 DCC 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP의 존재 하에 상업적으로 입수가능한 이산을 NHS로 활성화시킴으로써 제조될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Fmoc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 시클로옥틴 커플링;
단계 (iv): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는 탈보호;
단계 (v): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 시클로옥틴-PEG 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (vi): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 시클로옥틴은 n'=1, 2, 3 및 5인 경우에 상업적으로 입수가능하고; NHS 에스테르로서 단일활성화된 PEG 이산은 하기 반응식에 따라 제조된다:
ALK=CH2CH2인 경우
ALK≠CH2CH2인 경우
단계 (i): 반응이 불포화 보호된 산의, 촉매량의 나트륨의 작용에 의해 생성된 알콕시드로의 처리에 의해 무수 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 또는 DMF 중에서 수행되는 것인, PEG 쇄의 신장;
단계 (ii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 DCC 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP의 존재 하에 NHS를 사용하여 극성 용매 예컨대 THF 중에서 수행되는 것인, 일산의 NHS 에스테르로서의 단일활성화;
단계 (iv): 반응이 할로겐화 에스테르의, THP 에테르로서 단일보호된 PEG 디올의 알콕시드로의 처리에 의해 무수 극성 비양성자성 용매 예컨대 THF 또는 DMF 중에서 수행되는 것인, PEG 쇄의 신장. 이러한 유형의 단일보호된 PEG 디올의 제조는 문헌에 널리 기재되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Richard A., et al., Chem. Eur. J. 2005, 11, 7315-7321 또는 Sakellariou E.G., et al., Tetrahedron 2003, 59, 9083-9090]을 참조함;
단계 (v): 반응이 트리메틸실릴디아조메탄으로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 MeOH 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 메틸 에스테르로서의 보호;
단계 (vi): 반응이 LiOH의 존재 하에 극성 용매의 혼합물 예컨대 THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, 메틸 에스테르의 비누화;
단계 (vii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 DCC 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP의 존재 하에 NHS를 사용하여 극성 용매 예컨대 THF 중에서 수행되는 것인, 산의 NHS 에스테르로서의 활성화.
출발 PEG 디올은 i=3 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하다. 알릴 에스테르로서 단일보호된 이산은 n=2 (모노알릴 숙시네이트)인 경우에 상업적으로 입수가능하거나, 또는 n'=2 내지 6인 경우에 상업적으로 입수가능한 메틸 또는 tert-부틸 모노에스테르의 에스테르교환에 의해 제조될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; 알릴 에스테르로서 단일보호된 PEG 이산은 링커 전구체 LP2에 대해 기재된 반응식에 따라 제조된다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; 알릴 에스테르로서 단일보호된 술포 이산은 링커 전구체 LP3에 대해 기재된 반응식에 따라 제조된다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 카르복실산은 n=1 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 지지된 DCC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 PEG 산은 ALK=ALK'=CH2CH2이고, i=1 내지 7인 경우에 상업적으로 입수가능하고, 그렇지 않은 경우에는 링커 전구체 LP5에 대해 기재된 반응식에 따라 제조된다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 시클로헥산카르복실산은 ALK=CH2인 경우에 상업적으로 입수가능하고, 그렇지 않은 경우에는 링커 전구체 LP6에 대해 기재된 반응식에 따라 제조될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 클로로술폰산으로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCE 중에서 75℃에서 수행되는 것인, 카르복실산의 α-술폰화;
단계 (iv): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (v): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (vi): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 산은 n=1 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (iv): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트는 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트와 아미노 카르복실산의 커플링이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/DMF 혼합물 중에서 수행되고, 이어서 N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA가 첨가되는 것인, 커플링 및 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트는 상업적으로 입수가능하고; n=1 내지 12인 경우에 아미노 카르복실산, 및 n=1 내지 7인 경우에 N-메틸화 아미노 카르복실산은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트와 아미노 카르복실산의 커플링이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/DMF 혼합물 중에서 수행되고, 이어서 N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA가 첨가되는 것인, 커플링 및 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트는 상업적으로 입수가능하고; ALK=CH2CH2이고, R20=H인 경우에, 아미노 PEG 카르복실산은 i=1 내지 6인 경우에 상업적으로 입수가능하고, 그렇지 않은 경우에는 tert-부틸 아크릴레이트 및 상응하는 아미노-PEG-알콜로부터 제조될 수 있고; ALK≠CH2CH2인 경우에, 이들은 링커 전구체 LP10에 대해 기재된 반응식에 따라 제조될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트와 아미노 카르복실산의 커플링이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/DMF 혼합물 중에서 수행되고, 이어서 N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA가 첨가되는 것인, 커플링 및 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트는 상업적으로 입수가능하고; 아미노-(헤테로)아릴-카르복실산, 예컨대 예를 들어 4-아미노-2-벤조산, 6-아미노-3-피리딘 카르복실산, 5-아미노-2-피라진 카르복실산, 2-아미노-5-피리미딘 카르복실산 또는 6-아미노-1,2,4,5-테트라진 카르복실산은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; 아미노 카르복실산은 n=1 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 지지된 DCC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; Fmoc-보호된 아미노 PEG 카르복실산은 i=1 내지 6인 경우에 상업적으로 입수가능하고, 그렇지 않은 경우에는 tert-부틸 아크릴레이트 및 상응하는 아미노-PEG-알콜로부터 제조될 수 있고; ALK≠CH2CH2인 경우에, 이들은 링커 전구체 LP10에 대한 반응식에 따라 제조될 수 있다. Fmoc 기로의 아민 관능기의 보호는 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 FmocOSu (CAS 번호 [82911-69-1])로의 처리에 의해 실현될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EDC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; 아지도 카르복실산은 링커 전구체 LP14에 대해 기재된 반응식에 따라 제조될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 지지된 DCC의 존재 하의 NHS로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (v): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; 아지도 PEG 카르복실산은 링커 전구체 LP15에 대해 기재된 반응식에 따라 제조될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (iv): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; NHS 에스테르로서 활성화된 시클로옥틴 링커는 링커 전구체 LP16에 대해 기재된 반응식에 따라 제조될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 또는 커플링 시약 예컨대 프로필포스폰산 무수물 및 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 아민의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인, 디펩티드와 NHS 에스테르 사이의 펩티드 커플링;
단계 (iv): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
Fmoc-L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 단일보호된 디아민은 n=2 내지 4이고, R17 및 R18 = H 또는 Me인 경우에 서로 독립적으로 상업적으로 입수가능하고; NHS 에스테르로서 활성화된 시클로옥틴 링커는 링커 전구체 LP17에 대해 기재된 반응식에 따라 제조될 수 있다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP1과 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예를 들어 4-(히드록시메틸)-아닐린 (CAS 번호 [623-04-1]), 4-(1-히드록시에틸)-아닐린 (라세미 (CAS 번호 [14572-89-5]) 또는 거울상이성질체적으로 순수한 (R) (CAS 번호 [210754-25-9]) 또는 (S) (CAS 번호 [500229-84-5])), 4-아미노-α,α-디메틸-벤젠-메탄올 (CAS 번호 [23243-04-1]), 4-아미노-α-메톡시-α-메틸-벤젠메탄올 (CAS 번호 [1379318-81-6]), 4-아미노-α-메틸-α-트리플루오로메틸-벤젠메탄올 (CAS 번호 [851652-56-7]), 2-아미노-벤젠메탄올 (CAS 번호 [5344-90-1]), 2-아미노-α-메틸-벤젠메탄올 (라세미 (CAS 번호 [10517-50-7]) 또는 거울상이성질체적으로 순수한 (R) (CAS 번호 [3205-21-8]) 또는 (S) (CAS 번호 [3205-21-8])), 6-아미노-3-피리딘메탄올 (CAS 번호 [113293-71-3]), 6-아미노-α-메틸-3-피리딘메탄올 (CAS 번호 [1335054-83-5]), 6-아미노-α-에틸-3-피리딘메탄올 (CAS 번호 [1355225-85-2]), 6-아미노-α,α-디메틸-3-피리딘메탄올 (CAS 번호 [843646-03-8]), 5-아미노-3-피리딘메탄올 (CAS 번호 [873651-92-4]), 2-아미노-3-피리딘메탄올 (CAS 번호 [23612-57-9]), 2-아미노-α-메틸-3-피리딘메탄올 (라세미 (CAS 번호 [869567-91-9]) 또는 거울상이성질체적으로 순수한 (R) (CAS 번호 [936718-01-3]) 또는 (S) (CAS 번호 [936718-00-2])), 2-아미노-α-에틸-3-피리딘메탄올 (CAS 번호 [914223-90-8]), 2-아미노-α,α-디메틸-3-피리딘메탄올 (CAS 번호 [213666-96-7]), 3-아미노-4-피리딘메탄올 (CAS 번호 [152398-05-5]), 3-아미노-α-메틸-4-피리딘메탄올 (CAS 번호 [1242470-88-7]), 3-아미노-α,α-메틸-4-피리딘메탄올 (CAS 번호 [13357-81-8]), 4-아미노-3-피리딘메탄올 (CAS 번호 [138116-34-4]), 4-아미노-α-메틸-3-피리딘메탄올 (CAS 번호 [741223-49-4]), 4-아미노-α,α-메틸-3-피리딘메탄올 (CAS 번호 [1339013-26-1]), 3-아미노-2-피리딘메탄올 (CAS 번호 [52378-63-9]), 3-아미노-α-메틸-2-피리딘메탄올 (CAS 번호 [954240-54-1]), 3-아미노-α,α-메틸-2-피리딘메탄올 (CAS 번호 [899438-57-4])은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP2와 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP3과 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예를 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP4와 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP5와 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP6과 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP7과 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP8과 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP9와 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP10과 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP11과 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP12와 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP13과 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP14와 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP15와 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP16과 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링제 예컨대 예를 들어 EEDQ의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/MeOH 혼합물 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP17과 아닐린 유도체 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 p-니트로페닐-클로로포르메이트로의 처리에 의한, 벤질계 알콜의 p-니트로페닐-카르보네이트로서의 활성화.
많은 아닐린 유도체 예컨대 예들 들어 LP35에 대해 열거된 것들은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP35와 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP36과 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP37과 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP38과 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP39와 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP40과 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP41과 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP42와 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP43과 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP44와 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP45와 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP46과 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP47과 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP48과 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP49와 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 링커 전구체 LP50과 단일보호된 디아민 사이의 카르바메이트의 형성; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 카르바메이트의 형성; 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인; 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호.
단계 (i): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DIC 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 에스테르화에 의한 왕(Wang) 수지에 대한 산의 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘으로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 DMF 중에서 수행되는 것인, Fmoc 기의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 HOBt 및 HATU 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DMF 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (iv): 반응이 산 예컨대 예를 들어 TFA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, 수지의 절단.
Fmoc 보호된 알킬-아미노산은 n=1 내지 9인 경우에 상업적으로 입수가능하고; Fmoc L-아미노산은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DIC 및 염기 예컨대 예를 들어 DMAP의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM 중에서 수행되는 것인, 에스테르화에 의한 왕 수지에 대한 산의 커플링;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 피페리딘으로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 DMF 중에서 수행되는 것인, Fmoc 기의 탈보호;
단계 (iii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 HOBt 및 HATU 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DMF 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (iv): 반응이 산 예컨대 예를 들어 TFA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DCM/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, 수지의 절단.
Fmoc-보호된 아미노 PEG 카르복실산은 i=1 내지 6인 경우에 상업적으로 입수가능하고, 그렇지 않은 경우에는 tert-부틸 아크릴레이트 및 상응하는 아미노-PEG-알콜로부터 제조될 수 있고; ALK≠CH2CH2인 경우에, 이들은 링커 전구체 LP10에 대해 기재된 반응식에 따라 제조될 수 있다. Fmoc 기로의 아민 관능기의 보호는 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 FmocOSu (CAS 번호 [82911-69-1])로의 처리에 의해 실현될 수 있고; Fmoc L-아미노산은 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 술포 아미노산과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
L-아미노산은 상업적으로 입수가능하고; Boc-보호된 L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 술포 아미노산은 n=1 및 2에 상업적으로 입수가능하거나, 또는 그렇지 않은 경우에는 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 티오아세트산을 사용하여 극성 비양성자성 용매 예컨대 예를 들어 THF 중에서 수행되는 것인, 브로마이드의 티오아세틸에 의한 치환;
단계 (ii): 반응이 과산화수소 및 아세트산으로의 처리에 의해 수행되는 것인, 술폰산 모이어티의 형성;
단계 (iii): 반응이 아지드화나트륨으로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 예를 들어 DMA 중에서 수행되는 것인, 브로마이드의 아지도에 의한 치환;
단계 (iv): 반응이 산성 조건 예컨대 예를 들어 HCl 및 AcOH의 혼합물 중에서 수행되는 것인, 메틸 에스테르 탈보호;
단계 (v): 반응이 촉매 예컨대 탄소 상 팔라듐의 존재 하의 극성 용매 예컨대 H2O 중 가수소분해에 의해 수행되는 것인, 아지도의 환원.
디브로모 유도체는 n=3, 4 및 9인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 말레이미도 아민과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
L-아미노산은 상업적으로 입수가능하고; Boc-보호된 L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 아민은 n=2 내지 6인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 말레이미도 PEG 아민과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
L-아미노산은 상업적으로 입수가능하고; Boc-보호된 L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 PEG 아민은 ALK=ALK'=CH2CH2이고, i=0 및 1인 경우에 상업적으로 입수가능하거나, 또는 그렇지 않은 경우에는 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
ALK=ALK'=CH2CH2이고, i>1인 경우
ALK≠CH2CH2이고, ALK'=CH2CH2인 경우
ALK=CH2CH2이고, ALK'≠CH2CH2인 경우
ALK 및 ALK'≠CH2CH2인 경우
단계 (i): 반응이 PPh3 및 DIAD의 존재 하의 말레이미드의 PEG 히드록시산에 의한 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 예를 들어 THF 중에서 수행되는 것인, 말레이미드 상에서의 미츠노부 반응;
단계 (ii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호;
단계 (iii): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하의 토실 클로라이드로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 예를 들어 DCM 중에서 수행되는 것인, 알콜의 토실레이트로서의 활성화;
단계 (iv): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 수소화나트륨의 존재 하에 극성 비양성자성 용매 예컨대 예를 들어 THF 중에서 수행되는 것인, 토실 기의 치환;
단계 (v): 반응이 촉매량의 촉매 예컨대 예를 들어 탄소 상 팔라듐의 존재 하의 극성 용매 예컨대 예를 들어 MeOH 중 가수소분해에 의해 수행되는 것인, 벤질 기의 탈보호;
단계 (vi): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하의 메탄술포닐 클로라이드로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 예를 들어 DCM 중에서 수행되는 것인, 알콜의 메실레이트로서의 활성화;
단계 (vii): 반응이 염기 예컨대 수소화나트륨의 존재 하에 극성 비양성자성 용매 예컨대 예를 들어 DMF 중에서 수행되는 것인 친핵성 치환.
출발 Boc-보호된 PEG 아미노 알콜은 i=2 내지 4인 경우에 상업적으로 입수가능하거나, 또는 i=5 내지 8인 경우에 상업적으로 입수가능한 PEG 아미노 알콜을 Boc2O에 의해 처리함으로써 제조될 수 있고; 출발 ALK 아미노 알콜은 n=1 및 3 내지 10인 경우에 상업적으로 입수가능하고; 벤질 기로 단일보호된 출발 PEG 디올은 i=1 내지 9인 경우에 상업적으로 입수가능하고; 출발 ALK' 디올은 n=1 내지 12인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 말레이미도 아민과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
L-아미노산은 상업적으로 입수가능하고; Boc-보호된 L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 아민은 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 혼합물 DMF/H2O 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (ii): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
말레이미도 시클로헥산카르복실산은 ALK=CH2인 경우에 상업적으로 입수가능하거나, 또는 그렇지 않은 경우에는 LP6에 대해 기재된 반응식에 따라 제조될 수 있고; Boc 기로 단일보호된 디아민은 n=1 내지 10인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 말레이미도 PEG 아민과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
L-아미노산은 상업적으로 입수가능하고; Boc-보호된 L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 말레이미도 PEG 아민은 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하의 N,N'-디숙신이미딜 카르보네이트로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 혼합물 DMF/H2O 중에서 수행되는 것인, 카르복실산의 NHS 에스테르로서의 활성화;
단계 (ii): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
말레이미도 시클로헥산카르복실산은 ALK=CH2인 경우에 상업적으로 입수가능하거나, 또는 그렇지 않은 경우에는 LP6에 대해 기재된 반응식에 따라 제조될 수 있고; Boc 기로 단일보호된 PEG 디아민은 i=1 내지 9인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 할로게노아세트아미도 PEG 아민과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
L-아미노산은 상업적으로 입수가능하고; Boc-보호된 L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 할로게노아세트아미도 아민은 n=2 내지 4 및 8인 경우에 상업적으로 입수가능하거나, 또는 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
단계 (ii): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트는 상업적으로 입수가능하고; Boc 기로 단일보호된 디아민은 n=1 내지 10인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 할로게노아세트아미도 PEG 아민과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
L-아미노산은 상업적으로 입수가능하고; Boc-보호된 L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 할로게노아세트아미도 아민은 n=2 내지 4 및 8인 경우에 상업적으로 입수가능하거나, 또는 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
단계 (ii): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
N-숙신이미딜 브로모- 및 아이오도-아세테이트는 상업적으로 입수가능하고; Boc 기로 단일보호된 PEG 디아민은 i=1 내지 9인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 할로게노아세트아미도 아민과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
L-아미노산은 상업적으로 입수가능하고; Boc-보호된 L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 할로게노아세트아미도 아민은 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
단계 (ii): 반응이 극성 비양성자성 용매 예컨대 DCM/CH3CN 혼합물 중에서 수행되는 것인 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
할로게노아세트아미드의 NHS 에스테르는 링커 전구체 LP11에 대해 기재된 바와 같이 제조될 수 있고; Boc 기로 단일보호된 디아민은 n=1 내지 10인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 아지도 아민과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
L-아미노산은 상업적으로 입수가능하고; Boc-보호된 L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; 아지도 아민은 n=2 내지 8 및 10인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 아지도 PEG 아민과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
L-아미노산은 상업적으로 입수가능하고; Boc-보호된 L-아미노산의 NHS 에스테르는 상업적으로 입수가능하고; ALK=CH2CH2인 경우에, 아지도 PEG 아민은 i=1 내지 8 및 10인 경우에 상업적으로 입수가능하고, ALK≠CH2CH2인 경우에, 아지도 PEG 아민은 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하의 메탄술포닐 클로라이드로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 예를 들어 DCM 중에서 수행되는 것인, 알콜의 메실레이트로서의 활성화;
단계 (ii): 반응이 아지드화나트륨으로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 아세톤/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, 메실레이트의 아지도 기에 의한 치환;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
출발 PEG 아미노 알콜은 링커 전구체 LP90에 대해 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 시클로옥틴 아민과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
시클로옥틴 아민은 n=1, 2, 3 및 5인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 중탄산나트륨의 존재 하에 극성 용매 예컨대 DME/THF/H2O 혼합물 중에서 수행되는 것인, Boc-L-아미노산-ONHS와 L-아미노산 사이의 펩티드 커플링;
단계 (ii): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 DCC 및 HOBt 및 염기 예컨대 예를 들어 DIEA의 존재 하에 극성 용매 예컨대 CH3CN 중에서 수행되는 것인, 시클로옥틴 PEG 아민과의 펩티드 커플링;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액)을 사용하는, Boc 기의 탈보호.
시클로옥틴 PEG 아민은 하기 반응식에 따라 제조될 수 있다:
단계 (i): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하의 메탄술포닐 클로라이드로의 처리에 의해 극성 비양성자성 용매 예컨대 예를 들어 DCM 중에서 수행되는 것인, 알콜의 메실레이트로서의 활성화;
단계 (ii): 반응이 염기 예컨대 수소화나트륨의 존재 하에 극성 비양성자성 용매 예컨대 예를 들어 DMF 중에서 수행되는 것인 친핵성 치환;
단계 (iii): 염산의 용액 (예를 들어 디옥산 중 용액) 또는 트리플루오로아세트산의 용액을 사용하는 탈보호;
단계 (iv): 반응이 염기 예컨대 예를 들어 TEA의 존재 하의 Boc2O로의 처리에 의해 극성 용매 예컨대 예를 들어 DCM 중에서 수행되는 것인, Boc 기로의 아민의 보호;
단계 (v): 반응이 커플링 시약 예컨대 예를 들어 HOBt 및 EDC의 존재 하에 극성 용매 예컨대 예를 들어 DCM 중에서 수행되는 것인, 펩티드 커플링.
출발 ALK 아미노 알콜은 n=1 내지 10인 경우에 상업적으로 입수가능하고; 시클로옥틴은 n=1, 2, 3 및 5인 경우에 상업적으로 입수가능하다.
표 I
1 예는 특정한 크립토피신 화합물에 대해 주어져 있지만, 화학식 (I)의 임의의 크립토피신 화합물, 특히 D1-D19에도 적용될 수 있음.
2 표 I에서, L은 여기서 파라 위치에 주어져 있지만, 오르토 또는 메타 위치에 L을 갖는 화합물을 유사한 방식으로 수득하는 것도 가능함.
화학식 (III)의 접합체를 제조하는 방법
본 발명의 접합체는 하기로 이루어진 단계를 포함하는 방법을 통해 수득될 수 있다:
(i) 임의로 변형제에 의해 1차 변형된, 항체의 임의로 완충된 수용액과, 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드의 용액을 접촉시키고 반응하도록 하여, 공유 결합의 형성에 의해 화학식 (II)의 화합물을 항체에 부착시키는 단계이며, 여기서 화학식 (II)의 화합물의 화학적 기 RCG1는 항체 상에 존재하는 화학적 기 RCG2에 대해, 특히 항체 상에 존재하는 아미노 기에 대해 반응성이고, 상기 화학적 기 RCG2는 적절한 경우에 변형제에 의해 도입된 것인 단계;
(ii) 및 이어서 임의로, 크립토피신 페이로드 및/또는 미반응 항체 및/또는 형성된 임의의 응집체로부터, 단계 (i)에서 형성된 접합체를 분리하는 단계.
하나의 변형에 따르면, 보다 특히, 단계 (ii)에서, 단계 (i)로부터의 접합체를 단지 미반응 크립토피신 페이로드 및 형성된 임의의 응집체로부터 분리하고, 임의의 미반응 항체는 용액 중에 남아있다.
접촉시키는 것의 기능은, 공유 결합의 형성에 의한 크립토피신 페이로드의 항체에의 부착을 보장하기 위해 화학적 기 RCG1 및 RCG2를 반응시키기 위한 것이며; 바람직하게는,
용어 "응집체"는, 2개 이상의 항체 사이에서 형성될 수 있는 회합을 의미하며, 상기 항체는 가능하게는 접합에 의해 변형된 것이다. 응집체는 용액 중 항체의 높은 농도, 용액의 pH, 높은 전단력, 그라프팅된 약물의 수 및 그의 소수성 성질, 온도와 같은 매우 다양한 파라미터의 영향 하에 형성되기 쉽지만 (문헌 [J. Membrane Sci. 2008, 318, 311-316]의 도입부에 인용된 참고문헌 참조), 이들 중 일부의 영향은 명확하게 설명되지는 않았다. 단백질 또는 항체의 경우에, 문헌 [AAPS Journal, "Protein Aggregation and Bioprocessing" 2006, 8(3), E572-E579]을 참조할 수 있다. 응집체 함량은 공지된 기술 예컨대 SEC를 통해 결정될 수 있다 (이와 관련하여, 문헌 [Analytical Biochemistry 1993, 212 (2), 469-480] 참조).
항체의 수용액은 완충제 예컨대 예를 들어 인산칼륨 또는 HEPES 또는 완충제의 혼합물 예컨대 하기 기재된 완충제 A로 완충될 수 있다. 완충제는 항체의 성질에 따라 달라진다. 크립토피신 페이로드는 극성 유기 용매 예컨대 예를 들어 DMSO 또는 DMA 중에 용해된다.
반응은 일반적으로 20℃ 내지 40℃의 온도에서 수행된다. 반응 시간은 1 내지 24시간으로 달라질 수 있다. 항체와 크립토피신 페이로드 사이의 반응은 그의 진행도를 결정하기 위해 SEC와 굴절계 및/또는 자외선 검출기 및/또는 HRMS에 의해 모니터링될 수 있다. 치환도가 불충분한 경우에는, 반응을 더 장시간 동안 둘 수 있고/거나, 크립토피신 화합물을 첨가할 수 있다. 특정한 조건에 관한 추가의 세부사항에 대해 실시예 섹션을 참조할 수 있다. 특정한 실시양태는 실시예 3, 7, 10, 14, 20 및 23에 기재되어 있다.
관련 기술분야의 통상의 기술자는 단계 (ii)의 분리를 위해 다양한 크로마토그래피 기술을 자유롭게 이용하며, 접합체는, 예를 들어 입체 배제 크로마토그래피 (SEC)에 의해, 흡착 크로마토그래피 (예를 들어 이온 교환, IEC)에 의해, 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC)에 의해, 친화성 크로마토그래피에 의해, 혼합된 지지체 예컨대 세라믹 히드록시아파타이트 상의 크로마토그래피에 의해, 또는 HPLC에 의해 정제될 수 있다. 투석 또는 투석여과에 의한 정제가 또한 사용될 수 있다.
단계 (i) 또는 (ii) 후, 접합체의 용액은 한외여과 및/또는 투석여과 단계 (iii)을 겪을 수 있다. 이들 단계 후, 이와 같이 하여 수용액의 접합체가 수득된다.
항체
항체는 뮤린, 키메라, 인간화 및 인간 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 모노클로날 항체일 수 있다.
한 실시양태에서, 항체는 단일특이적 항체, 즉 1종의 단일 표적에 특이적으로 결합하는 항체이다. 대안적으로, 이는 다중특이적 항체일 수 있다.
한 실시양태에서, 항체는 IgG 항체, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 항체이다.
본 발명에 따른 항체는, 표적에 특이적으로 결합하여, 세포독성 화합물로서의 생물학적 활성 화합물이 상기 표적을 향하도록 한다. 본원에 사용된 "특이적으로 결합한다" 또는 "에 특이적으로 결합한다" 또는 "결합한다" 등은, 항체 또는 그의 항원-결합 단편이 생리학적 조건 하에 비교적 안정한 항원과 복합체를 형성하는 것을 의미한다. 특이적 결합은 적어도 약 1x10-8 M 이하의 평형 해리 상수 (KD) (예를 들어, 더 작은 KD는 더 긴밀한 결합을 나타냄)를 특징으로 할 수 있다. 2개의 분자가 특이적으로 결합하는지를 결정하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 예를 들어 평형 투석, 표면 플라즈몬 공명 등을 포함한다. 본원에 기재된 항체는, 예를 들어 표면 플라즈몬 공명, 예를 들어 비아코어(BIACORE)™를 사용하여 표적 및/또는 표적 항원에 대한 그의 특이적 결합에 의해 특징화되었다.
표적은 전형적으로 세포 표면에서 발현되는 단백질, 예를 들어 종양 세포의 표면에서 발현되는 단백질에 상응한다.
한 실시양태에서, 표적은 EphA2 수용체이다. EphA2 수용체는 에프린 수용체이며, "EPH 수용체 A2" 또는 "상피 세포 수용체 단백질-티로신 키나제"로도 지칭된다 (예를 들어, omim.org/entry/176946 월드 와이드 웹 사이트, 2016년 7월 21일에 업데이트된 버전에서 입수가능한 OMIM 엔트리 *176946 참조). EphA2 수용체에 특이적으로 결합하는 항체는, 예를 들어 WO2008/010101 또는 WO2011/039724에 기재된 항체 중 1종에 상응할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 표적은 CD19이다. CD19는 B 림프구 및 조혈계의 여포성 수지상 세포에서 특이적으로 발현되는 세포 표면 분자이며, "B-림프구 항원 CD19"로도 지칭된다 (예를 들어, omim.org/entry/107265 월드 와이드 웹 사이트, 2015년 5월 11일에 최종 업데이트된 버전에서 입수가능한 OMIM 엔트리 *107265 참조). CD19에 특이적으로 결합하는 항체는, 예를 들어 콜툭시맙, 즉 콜툭시맙 라브탄신의 항체 부분 (모이어티)에 상응할 수 있다.
항체는 상기 기재된 바와 같은 크립토피신 페이로드의 부착을 촉진하기 위해 변형제에 의해 임의로 변형될 수 있다. 항체는 특히 모노클로날, 폴리클로날 또는 다중특이적 항체일 수 있다. 이는 또한 항체 단편일 수 있다. 이는 또한 뮤린, 인간, 인간화 또는 키메라 항체일 수 있다. 본 발명의 실시예에 사용된 항체는 EphA2 수용체에 대한 길항제 항체인 hu2H11_R3574이다. hu2H11_R3574의 서열은 WO2011/039724 (중쇄에 대해 서열식별번호: 18 및 경쇄에 대해 서열식별번호: 16)에 기재되어 있다.
접합체
접합체는 일반적으로 항체에 공유 부착된 약 1 내지 10개의 크립토피신 화합물을 포함한다 (이것이 그라프팅도 또는 "약물-대-항체 비" 또는 "DAR"임). 이러한 수치는 항체 및 크립토피신 화합물의 성질, 및 또한 접합 과정에 사용된 작업 조건 (예를 들어 항체에 대해 상대적인 크립토피신 화합물의 당량수, 반응 시간, 용매 및 임의의 공용매의 성질)에 따라 달라진다. 항체 및 크립토피신 화합물을 접촉시키는 것은, 개별적으로 상이한 DAR에 의해 서로 구별되는 여러 접합체; 임의로 미반응 항체; 임의로 응집체를 포함하는 혼합물로 이어진다. 따라서, 최종 용액에 대해 결정되는 DAR은 평균 DAR에 상응한다. DAR은 접합체의 SEC-HRMS 스펙트럼의 디컨볼루션으로부터 계산될 수 있다. DAR (HRMS)은 바람직하게는 0.5 초과, 보다 특히 1 내지 10, 보다 더 특히 2 내지 7이다.
접합체는 항암제로서 사용될 수 있다. 항체의 존재로 인해, 접합체는 건강한 세포가 아니라 종양 세포에 대해 고도로 선택적이게 된다. 이는 그와 유사한 환경에 또는 그에서 직접 크립토피신 화합물을 향하게 하는 것을 가능하게 한다 (이와 관련하여, 암 치료에서의 모노클로날 항체 접합체의 용도를 기재하고 있는 하기 간행물 참조: "Antibody-drug conjugates for cancer therapy" Carter P.J., et al., Cancer J. 2008, 14, 154-169; "Targeted cancer therapy: conferring specificity to cytotoxic drugs" Chari R., Acc. Chem. Res. 2008, 41, 98-107). 고형 또는 액상 암을 치료하는 것이 가능하다. 접합체는 단독으로 또는 적어도 1종의 다른 항암제와 조합되어 사용될 수 있다.
접합체는 완충된 수용액의 형태로 일반적으로 1 내지 10 mg/mL 농도로 제제화된다. 이러한 용액은 그 자체로 관류 형태로 주사될 수 있거나, 또는 관류 용액을 형성하기 위해 재희석될 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본 발명에 따른 특정 화합물의 제조를 기재한다. 이들 실시예는 제한적인 것이 아니며, 단지 본 발명을 예시할 뿐이다.
사용된 분석 방법
고압 액체 크로마토그래피 - 질량 분광측정법 (LCMS)
방법 A1
스펙트럼은 ELSD 및 UV (210-400 nm) 검출을 사용하여 워터스(Waters) UPLC-SQD 시스템 상에서 양성 및/또는 음성 전기분무 모드 (ES+/-)로 수득되었다. 크로마토그래피 조건은 하기와 같았다:
칼럼: 액퀴티(ACQUITY) BEH C18 - 1.7 μm - 2.1 x 50 mm; 용매: A: H2O (0.1% 포름산), B: CH3CN (0.1% 포름산); 칼럼 온도: 50℃; 유량: 0.8 mL/분; 구배 (2.5분): 1.8분 이내에 5에서 100%로의 B; 2.4분: 100%의 B; 2.45분: 0.05분 이내에 100에서 5%로의 B.
방법 A2
스펙트럼은 ELSD 및 UV (210-400 nm) 검출을 사용하여 워터스 제보(XeVo)-QTof 시스템 상에서 양성 전기분무 모드 (ES+)로 수득되었다. 크로마토그래피 조건은 하기와 같았다:
칼럼: 액퀴티 BEH C18 - 1.7 μm - 2.1 x 100 mm; 용매: A: H2O (0.1% 포름산), B: CH3CN (0.1% 포름산); 칼럼 온도: 70℃; 유량: 0.55 mL/분; 구배 (11분): 8.3분 이내에 5에서 97%로의 B; 8.6분: 97%의 B; 9분: 0.7분 이내에 97에서 5%로의 B, 및 2분 동안 5%의 B.
방법 A3
스펙트럼은 워터스 제보-QTof 시스템 상에서 양성 전기분무 모드 (ES+)로 수득되었다. 크로마토그래피 조건은 하기와 같았다:
칼럼: 액퀴티 BEH C18 - 1.7 μm - 2.1 x 100 mm; 용매: A: H2O (0.1% 포름산), B: CH3CN (0.1% 포름산); 칼럼 온도: 45℃; 유량: 0.6 mL/분; 구배 (5.3 min): 0.3분 동안 5%의 B; 3.7분 이내에 5에서 100%로의 B; 4.6분: 100%의 B; 5.3분 5%의 B.
방법 A4
스펙트럼은 ELSD 및 UV (210-400 nm) 검출을 사용하여 워터스 UPLC-SQD 시스템 상에서 양성 및/또는 음성 전기분무 모드 (ES+/-)로 수득되었다. 크로마토그래피 조건은 하기와 같았다:
칼럼: 액퀴티 BEH C18 - 1.7 μm - 2.1 x 50 mm; 용매: A: H2O (0.1% 포름산), B: CH3CN (0.1% 포름산); 칼럼 온도: 45℃; 유량: 0.8 mL/분; 구배 (10분): 8.6분 이내에 5에서 100%로의 B; 9.6분: 100%의 B; 9.8분: 5%의 B.
방법 A5
스펙트럼은 ELSD 및 UV (210-400 nm) 검출을 사용하여 워터스 UPLC-SQD 시스템 상에서 양성 및/또는 음성 전기분무 모드 (ES+/-)로 수득되었다. 크로마토그래피 조건은 하기와 같았다:
칼럼: 액퀴티 CSH C18 - 1.7 μm - 2.1 x 50 mm; 용매: A: H2O (0.1% 포름산), B: CH3CN (0.1% 포름산); 칼럼 온도: 40℃; 유량: 0.85 mL/분; 구배 (2.5분): 1.8분 내의 5에서 100%로의 B; 2.4분: 100%의 B; 2.45분: 0.05분 이내에 100에서 5%로의 B.
1H 핵 자기 공명 (NMR)
1H NMR 스펙트럼은 브루커 아반스(Bruker Avance) 분광계, 모델 DRX-300, DRX-400 또는 DRX-500 상에서 획득되었다. 화학적 이동 (δ)은 ppm 단위로 주어진다.
크기 배제 크로마토그래피 - 고해상도 질량 분광측정법 (SEC-HRMS)
크로마토그래피 분석은 애질런트(Agilent) HP1100 기계 및 워터스 BEH SEC 200 1.7 μm (2.1 x 150 mm) 칼럼 상에서 30℃에서 0.5 mL/분의 유량 및 15분 동안 (A) 25 mM 포름산암모늄 + 1% 포름산/(B) CH3CN + 0.1% 포름산 70/30의 등용매 용리를 사용하여 수행되었다. 질량 분광측정법은 워터스 QTOF-II 기계 상에서 전기분무 이온화를 사용하여 양성 모드 (ES+)로 수행되었다. 질량 스펙트럼은 워터스 MaxEnt1 소프트웨어로 디컨볼루션되었다.
분석용 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)
분석은 포토다이오드 어레이 검출기 및 도소 바이오사이언스(Tosoh Bioscience) TSK겔 G3000 SWXL 5 μm (7.8 × 300 mm) 칼럼이 구비된 워터스 얼라이언스(Alliance) HPLC 시스템 또는 히타치 라크롬(Hitachi Lachrom) 시스템 상에서 0.5 mL/분의 유량 및 0.2 M의 KCl, 0.052 M의 KH2PO4, 0.107 M의 K2HPO4 및 20 부피%의 이소프로판올을 함유하는 pH 7 완충제로의 30분의 등용매 용리를 사용하여 수행되었다.
완충제
항체-약물 접합체 (ADC)의 제조에 사용된 일반적 방법
완충제 A 및 1 N HEPES의 96:4 혼합물로 구성된 수성 완충제 중 항체의 용액을, 최종 항체 농도가 3 mg/mL가 되고 수성 완충제 중 DMA의 백분율이 20%이 되도록 과량의 DMA 중 크립토피신 페이로드의 대략 10 mM 용액으로 처리하였다. 2시간 동안 교반한 후, 혼합물을 SEC-HRMS에 의해 분석하여 단량체 항체 집단에 대해 DAR을 결정하였다. DAR이 불충분한 것으로 발견된 경우에는, 혼합물을 추가로 과량 (1 내지 5 당량)의 DMA 중 크립토피신 용액으로 교반 하에 실온에서 추가로 2시간 동안 처리하였다. 혼합물을 10 내지 20%의 NMP를 함유하는 수성 완충제 pH 6.5 (완충제 B 또는 DPBS)로 사전-평형화된 슈퍼덱스(Superdex) 200 pg 매트릭스 (하이로드(HiLoad) 16/60 또는 26/60 탈염 칼럼, 지이헬스케어(GEHealthcare))를 사용하여 겔 여과에 의해 정제하였다. 단량체 접합 항체를 함유하는 분획을 모으고, 아미콘(Amicon) 울트라(Ultra)-15 (10k 또는 50k 울트라셀(Ultracel) 막, 밀리포어(Millipore)) 상에서 2 내지 5 mg/mL의 농도로 농축시켰다. 이어서, 적절한 완충제로의 완충제 교환 또는 희석을 수행하여, 최종 완충제 중에 접합체를 제제화하였다. 완충제 교환의 경우에, 이는 그 조성 및 pH가 각각의 접합체에 대해 적합화된 최종 수성 완충제로 사전-평형화된 세파덱스(Sephadex)™ G25 매트릭스 (NAP-5, NAP-10, NAP-25/PD-10 또는 하이프렙(Hiprep) 26/10 탈염 칼럼, 지이헬스케어)를 사용하여 겔 여과에 의해 실현되었다. 접합체를 최종적으로 스테리플립(Steriflip)® 필터 유닛 (0.22 μm 듀라포어(Durapore)® PVDF 막, 밀리포어)을 통해 여과하였다. 최종 접합체를, 접합체 농도를 측정하기 위해서는 UV 분광측정법 또는 SEC-HPLC에 의해, 단량체 순도를 결정하기 위해서는 SEC-HPLC에 의해, 및 접합체의 질량 스펙트럼의 디컨볼루션으로부터 DAR을 결정하기 위해서는 SEC-HRMS에 의해 평가하였다.
단편 A의 합성: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 8-(4-포르밀페닐)-5-히드록시-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트
화합물 1: (2E,5S,6R)-tert-부틸 5-히드록시-7-((4-메톡시벤질)옥시)-6-메틸헵트-2-에노에이트
아르곤 하에, DCM (350 mL) 중 (2R,3S)-1-[(4-메톡시페닐)메톡시]-2-메틸-5-헥센-3-올 또는 사쿠라이 알콜 (CAS 번호 [203926-55-0], 100 g, 399.5 mmol)의 용액에 tert-부틸 아크릴레이트 (354.7 mL, 2.435 mol) 및 그럽스 촉매 (4.849 g, 2.435 mol)를 첨가하였다. 실온에서 17시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 실리카 230 g 상에서 여과하고, 헵탄/AcOEt의 혼합물 (50/50, 6 x 300 mL)로 용리시켰다. 농축시킨 후, 잔류물을 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/EtOAc) 1.2 kg 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 갈색 오일 140.8 g을 수득하였다. 오일을 무수 DCM (550 mL) 중에 용해시키고, 쿼드라퓨어(quadraPure)™ TU 수지 10 g을 첨가하여 과량의 촉매를 제거하였다. 혼합물을 35℃에서 3시간 동안 교반하였다. 수지를 여과하고, DCM으로 세척하고, 여과물을 농축시키고, 진공 하에 건조시켜 화합물 1 135.75 g (97%)을 갈색 오일로서 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.42 (s, 9 H); 1.72 (m, 1 H); 2.18 (m, 1 H); 2.30 (m, 1 H); 3.24 (dd, J = 7.0 및 9.3 Hz, 1 H); 3.46 (dd, J = 7.7 및 9.3 Hz, 1 H); 3.49 (m, 1 H); 3.73 (s, 3 H); 4.35 (s, 2 H); 4.65 (d, J = 5.8 Hz, 1 H); 5.76 (td, J = 1.5 및 15.6 Hz, 1 H); 6.83 (td, J = 7.4 및 15.6 Hz, 1 H); 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2 H); 7.23 (d, J = 8.8 Hz, 2 H).
화합물 2: (2E,5S,6R)-tert-부틸 5,7-디히드록시-6-메틸헵트-2-에노에이트
CH3CN (910 mL) 중 화합물 1의 용액 (90 mL)에 H2O를 첨가하고, 혼합물을 12℃에서 냉각시킨 후 25분 내에 H2O (300 mL) 중 CAN (196.7 g, 358.9 mmol)의 용액을 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반을 계속하였다. CH3CN (70 mL) 및 H2O (30 mL)의 혼합물 중에 용해시킨 추가의 CAN (18.83 g, 34.36 mmol)을 첨가하고 1시간 동안 실온에서 교반하여 반응을 완결시켰다. 혼합물을 수성 층이 포화될 때까지 NaCl로 켄칭한 다음, MTBE (400 mL)를 첨가하였다. 경사분리 후, 수성 층을 MTBE (2 x 80 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 5% NaHCO3/H2O (3 x 200 mL), 포화 염수 (2 x 130 mL)의 3:1 혼합물로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 수성 층을 2N HCl을 사용하여 pH 4까지 산성화시킨 다음, NaCl을 사용하여 포화시키고, MTBE (2 x 150 mL)로 추출하였다. 이 제2 유기 층을 5% NaHCO3 (60 mL), 포화 염수 (60 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 제1 유기 층과 합하여 갈색 오렌지색 오일을 수득하였다.
혼합물을 MeTHF (300 mL) 중에 용해시킨 다음, 1,2-에탄디티올 (22 mL, 0.260 mol) 및 p-TsOH (1.651 g, 8.590 mmol)를 첨가하였다. 60℃에서 5시간 동안 교반한 후, MTBE (200 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 이것을 5% NaHCO3 (2 x 120 mL), 포화 염수 (120 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MTBE) 520 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 2를 황색 오일로서 29.48 g (75%) 수득하였다.
화합물 3: (2E,5S,6R)-tert-부틸 6-메틸-5,7-비스((트리에틸실릴)옥시)헵트-2-에노에이트
아르곤 하에 무수 DCM (500 mL) 중 화합물 2 (39.38 g, 0.171 mol)의 용액에 이미다졸 (51.540 g, 0.749 mol)을 첨가하였다. 황색 혼합물을 0℃에서 냉각시킨 다음 트리에틸클로로실란 (63.99 mL, 0.374 mol)을 첨가하고, 용액을 밤새 실온으로 가온되도록 하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (400 mL), MTBE (300 mL) 및 얼음으로 켄칭하였다. 2M NaHSO4를 사용하여 pH를 4로 조정하고, 격렬한 교반 후 층을 분리하였다. 수성 층을 MTBE (200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 반포화 NH4Cl (2 x 250 mL), 인산염 완충액 pH 7 (150 mL), 포화 염수 (150 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/Et2O) 490 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 3을 연황색 오일로서 74.52 g (95%) 수득하였다.
화합물 4: (2E,5S,6S)-tert-부틸 6-메틸-7-옥소-5-((트리에틸실릴)옥시)헵트-2-에노에이트
아르곤 하에, DCM (300 mL) 중 DMSO (102.400 mL, 1.427 mol)의 용액에 -75℃에서 옥살릴 클로라이드 (63 mL, 0.719 mol)를 1시간 내에 적가하고, 15분 동안 교반을 계속한 후, 온도를 -70℃ 미만으로 유지하면서, -75℃에서 DCM (150 mL) 중 화합물 3의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -40℃로 가온되도록 하고, 교반을 2시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 다시 -75℃에서 냉각시킨 다음, 온도를 -65℃ 미만으로 유지하면서 75분 내에 DIEA (425 mL, 2.432 mol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 한 다음, MTBE (500 mL), 얼음, 포화 NH4Cl (200 mL) 및 2M NaHSO4로 켄칭하여 pH 4까지 도달하도록 하였다. 격렬한 교반 후에 층을 분리하였다. 수성 층을 MTBE (200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 NH4Cl (3 x 300 mL), 인산염 완충액 pH 7 (300 mL), 포화 염수 (300 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/Et2O)의 1.25 kg 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 4를 오렌지색 오일로서 51.74 g (93%) 수득하였다.
화합물 5: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 5-히드록시-8-(4-(히드록시메틸)페닐)-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트
아르곤 하에 무수 THF (1.5 L) 중 포스포늄 브로마이드 (WO2011/001052에 기재된 합성, 147 g, 0.237 mol)의 현탁액에 -50℃에서 헥산 중 n-BuLi의 2.5 M 용액 (90 mL, 0.225 mol)을 첨가하였다. 온도를 -40℃로 가온되도록 하고, 교반을 15분 동안 계속하였다. 실온으로 가온한 후, 적색 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 매질을 -70℃에서 냉각시킨 후, 온도를 -65℃로 유지하면서 THF (200 mL) 중 화합물 4 (51.63 g, 126.6 mmol)의 용액을 첨가하였다. 첨가가 완결되면, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 교반을 밤새 계속하였다. 반응 혼합물을 여과하여 불용성 물질을 제거하고, 이를 MTBE (500 mL)로 세척하였다. 여과물을 부분적으로 42℃ (1/3)에서 농축시킨 다음, 얼음, NH4Cl (500 mL), MTBE (500 mL) 및 2M NaHSO4로 켄칭하여 pH 4에 도달하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 MTBE (200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 반포화 NH4Cl (250 mL), 인산염 완충액 pH 7 (250 mL), 포화 염수 (250 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 진공 하에 250 mbar까지 반농축시켰다. 현탁액을 빙조에서 냉각된 50:50 헵탄/MTBE (600 mL)으로 희석하고, 여과하고, 50:50 헵탄/MTBE로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 100.05 g을 갈색 오일로서 수득하였다.
조 화합물을 무수 THF (320 mL) 중에 용해시킨 다음 TBAF 3수화물 (90 g, 282.40 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 진공 하에 농축시킨 후, 조 물질을 10:1 MTBE/THF (770 mL)로 희석하고, 반포화 NH4Cl (3 x 200 mL), 1M NaHSO4 (200 mL), 인산염 완충액 pH 7 (200 mL), 포화 염수 (200 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 수성 층을 MTBE로 추출하였다. 경사분리 후, 유기 층을 인산염 완충액 pH 7 (30 mL), 포화 염수 (30 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 농축시킨 후, 합한 유기 층을 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/Et2O)의 1.25 kg 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 5를 갈색-적색 오일로서 36.91 g (88%) 수득하였다.
단편 A: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 8-(4-포르밀페닐)-5-히드록시-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트
아르곤 하에, 무수 DCM (600 mL) 중 화합물 5 (30.3 g, 91.7 mmol)의 용액에 10℃에서 산화망가니즈 (175 g, 3.013 mol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 35℃에서 4시간 동안 교반하였다. 산화제를 셀라이트의 플러그를 통해 여과하고, 따뜻한 아세톤으로 세척하였다. 여과물을 농축시켜 적색-오렌지색 오일 30.43 g을 수득하였다.
아르곤 하에, 오일을 벤젠 (800 mL)으로 희석하고 AIBN (880 mg, 4.58 mmol) 및 티오페놀 (2.81 mL, 27.51 mmol)의 존재 하에 1시간 동안 환류하였다. 추가의 AIBN (530 mg, 0.03 당량) 및 티오페놀 (1.03 mL, 10.087 mmol)을 첨가하고, 환류를 추가로 1시간 동안 계속하였다. 추가의 AIBN (530 mg, 0.03 당량) 및 티오페놀 (1.03 mL, 10.087 mmol)을 첨가하고, 환류를 3시간 동안 계속하였다. 추가의 AIBN (353 mg, 1.834 mmol) 및 티오페놀 (468 μL, 4.58 mmol)을 첨가하고, 환류를 1시간 동안 계속하였다. 전환율 E/Z는 92/8이었고, AIBN 352.6 mg을 첨가하고, 환류를 1시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시켜 단편 A를 98/2보다 우월한 E/Z 비율을 갖는 오렌지색 오일 (92%) 28.03 g로서 수득하였다.
단편 B의 합성: (R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시-페닐)프로판산
THF (225 mL) 중 메틸 (R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시필)-프로파노에이트 (CAS 번호 [162465-44-3], 30 g, 87.26 mmol)의 용액에 H2O (30 mL) 및 LiOH 1수화물 (4.4 g, 104.85 mmol)을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 매질을 H2O (200 mL)로 희석한 다음 5N HCl (20 mL)로 pH 2에서 산성화시키고, EtOAc (2 x 250 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 H2O (500 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, Et2O로 희석하고, 진공 하에 농축시켜 단편 B를 백색 고체로서 26.9 g (94%) 수득하였다.
RMN 1H (300 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 1.21 내지 1.37 (m, 9 H); 2.74 (dd, J = 11.0 및 14.3 Hz, 1 H); 2.96 (dd, J = 5.0 및 14.3 Hz, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 4.04 (m, 1 H); 6.99 내지 7.09 (m, 2 H); 7.18 (dd, J = 2.3 및 8.7 Hz, 1 H); 7.29 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 12.60 (넓은 m, 1 H).
단편 C1의 합성: 메틸 3-아미노-2,2-디메틸프로파노에이트 히드로클로라이드
화합물 6: 메틸 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2,2-디메틸프로파노에이트
아르곤 하에, DCM (6 mL) 및 MeOH (2 mL) 중 3-([(tert-부톡시)카르보닐]아미노)-2,2-디메틸프로판산 (CAS 번호 [180181-02-6], 250 mg, 1.09 mmol)의 용액에 0℃에서 (트리메틸실릴)디아조메탄 (819.86 μL, 1.64 mmol)을 황색 색상일 때까지 지속적으로 적가하였다. 이어서, AcOH를 완전한 변색이 될때까지 첨가하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시킨 다음 H2O로 희석하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 6을 무색 오일로서 260 mg 수득하였다 (정량적).
단편 C1: 메틸 3-아미노-2,2-디메틸프로파노에이트 히드로클로라이드
1,4-디옥산 (10 mL) 중 화합물 6 (260 mg, 1.12 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 4N HCl (2.81 mL, 11.24 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 진공 하에 농축시켜 단편 C1을 200 mg 수득하였다 (정량적).
단편 C2의 합성: 메틸 3-아미노-2,2-디메틸부타노에이트 히드로클로라이드
화합물 7: 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)부탄산
H2O (76 mL) 중 DL-3-아미노부티르산 (CAS 번호 [541-48-02], 18.72 g, 176.09 mmol)의 용액에 H2O (96 mL) 중 디-tert-부틸 디카르보네이트 (39.62 g, 176.09 mmol) 및 NaOH (8.03 g, 200.74 mmol)에 이어서 tert-부틸 알콜 (132 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 반응 매질을 진공 하에 농축시킨 다음, EtOAc (200 mL)로 희석하고 묽은 HCl을 사용하여 pH 3으로 산성화하였다. 침강 후, 수성 상을 EtOAc (200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 7을 무색 오일로서 34.5 g (82%) 수득하였다.
RMN 1H (300 MHz, ppm 단위 δ, CDCl3-d1): 1.25 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.45 (s, 9 H); 2.55 (m, 2 H); 4.04 (m, 1 H); 4.93 (넓은 m, 1 H); 8,41 (넓은 m, 1 H).
화합물 8: 메틸 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)부타노에이트
아르곤 하에 톨루엔 (350 mL) 및 MeOH (100 mL) 중 화합물 7 (10 g, 49.20 mmol)의 용액을 +5℃에서 교반하였다. +5℃ 및 +10℃ 사이에서, (트리메틸실릴)디아조메탄 (73.81 mL, 147.61 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 교반한 다음 진공 하에 증발시켜 화합물 8을 연황색 오일로서 10.8 g 수득하였다 (정량적).
RMN 1H (300 MHz, ppm 단위 δ, CDCl3-d1): 1.20 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.45 (s, 9 H); 2.50 (m, 2 H); 3.69 (s, 3 H); 4.03 (m, 1 H); 4.90 (넓은 m, 1 H).
화합물 9: 메틸 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸부타노에이트
아르곤 하에, -70℃에서 THF (48 mL) 중 LDA (THF 중 2M, 25.32 mL, 50.63 mmol)의 용액에 THF (62 mL) 중 화합물 8 (5 g, 23.01 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 -75℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 아이오도메탄 (5.79 mL, 92.05 mmol)을 -70℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 -75℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 20% NH4Cl (100 mL) 및 Et2O (125 mL)의 수성 용액을 첨가하였다. 침강 후, 유기 상을 포화 NaHCO3 (80 mL)에 이어서 포화 NaCl (80 mL)로 세척하였다. 합한 수성 상을 Et2O (125 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 오일 5.49 g을 수득하였다. 펜탄 (15 mL)을 사용한 결정화와 진공 하에 건조 후 화합물 9를 2.65 g 수득하였다. 펜탄 용액을 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/Et2O) 100 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 9 1.98 g을 수득하였다. 2개의 배치를 풀링하고 (87%) 하기 단계에 그대로 사용하였다.
화합물 10: 메틸 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-,2-디메틸부타노에이트
아르곤 하에, THF (46 mL)를 -72℃에서 냉각시킨 다음, LDA (THF 중 2M, 22 mL, 44.0 mmol)를 첨가하고 -72℃ (+/- 2℃)에서 THF (64 mL) 중 화합물 9 (4.60 g, 19.89 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 -75℃에서 1h15 교반한 다음 아이오도메탄 (5 mL, 79.55 mmol)을 -72℃ (+/- 2℃)에서 적가하였다. 반응 매질을 -75℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 20% NH4Cl (50 mL) 및 Et2O (80 mL)의 수성 용액을 첨가하였다. 침강 후, 유기 상을 포화 NaHCO3 (50 mL) 및 포화 염수 (50 mL)로 세척하였다. 합한 수성 상을 Et2O (80 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 오일 6.5 g을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/iPr2O) 200 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 10을 무색 오일로서 1.9 g (39%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.92 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 1.02 (s, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.48 (s, 9 H); 3.58 (s, 3 H); 3.88 (m, 1 H); 6.62 (넓은 d, J = 10.5 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 146, m/z = 246 [M+H]+; tR = 1.2분.
단편 C2: 메틸 3-아미노-2,2-디메틸부타노에이트 히드로클로라이드
둥근 바닥 플라스크에서, 자기 교반 하에 화합물 10 (0.3 g, 1.22 mmol)을 도입하고, 이어서 1,4-디옥산 (5 mL) 및 1,4-디옥산 중 4N HCl (5 mL)을 도입하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 수득된 조 고체를 iPr2O (15 mL) 중에 침전시키고, 여과하고, 건조시켜 백색 고체로서의 단편 C2를 210 mg 수득하였다 (95%)
LCMS (A1): ES m/z = 146 [M+H]+; tR = 0.8분.
단편 C3의 합성: 에틸 2-(1-아미노시클로프로필)-2,2-디메틸프로파노에이트
아르곤 하에, Et2O (48 mL) 중 에틸 2-시아노-2-메틸프로피오네이트 (CAS 번호 [1572-98-1], 2 g, 13.88 mmol)의 용액에 티타늄 (IV) 이소프로폭시드 (4.63 g, 15.97 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, -5℃에서 냉각시켰다. Et2O 중 3M 에틸마그네슘 브로마이드 용액 (9.72 mL, 29.16 mmol)을 25분 내에 -5℃-0℃에서 적가한 다음, 반응 혼합물을 냉각 조 없이 40분 동안 교반하였다. 이 때, TLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 반응 매질을 0℃에서 냉각시키고, 삼플루오린화붕소 디에틸 에테레이트 (Et2O 중 3M, 3.6 mL, 29.16 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 냉각 조 없이 30분 동안 교반하였다. 그 후, 1N HCl을 pH 1-2까지 0℃에서 첨가한 다음 (8 mL), pH 8까지 2N NaOH를 첨가하고 (28 mL), 반응 혼합물을 EtOAc (3 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 황색 오일 2.4 g을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 70 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 단편 C3을 연황색 오일로서 915 mg (39%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, CDCl3-d1): 0.52 (m, 2 H); 0.70 (m, 2 H); 1.11 (s, 6 H); 1.27 (t, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.64 (넓은 s, 2 H); 4.18 (q, J = 7.2 Hz, 2 H).
단편 C4의 합성: 메틸 3-아미노-2-(히드록시메틸)-2-메틸프로파노에이트 히드로클로라이드
화합물 11: 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸프로판산
냉수조를 사용하여 반응 매질 온도를 30℃ 미만으로 유지하면서, 2 N NaOH (24.7 mL) 중 DL-3-아미노이소부티르산 (CAS 번호 [10569-72-9], 5 g, 47.52 mmol)의 용액에 THF (75 mL) 중 Boc2O (11.73 g, 53.22 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 매질을 실온에서 18시간 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축시키고, H2O (75 mL)로 희석하고, MTBE (3 x 150 mL)로 세척하였다. 수성 상을 100 g/L (150 mL)에서 시트르산 용액의 첨가에 의해 pH 3으로 산성화시키고, EtOAc (3 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 H2O (3 x 45 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 11을 무색 오일로서 9.4 g (97%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 1.01 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.38 (s, 9H); 2.48 (m, 1H); 2.91 (dt, J = 6.1, 6.5 및 13.5 Hz, 1H); 3.15 (ddd, J = 6.1, 7.4 및 13.5 Hz, 1H); 6.80 (t, J = 6.1 Hz, 1H); 12.15 (넓은 s, 1H).
화합물 12: 메틸 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-메틸프로파노에이트
아세톤 (300 mL) 중 화합물 11 (9.4 g, 46.25 mmol)의 용액에 K2CO3 (16.14 g, 115.63 mmol) 및 CH3I (13.26 g, 92.5 mmol)를 첨가하였다. 황색 현탁액인 반응 매질을 실온에서 20시간 동안 교반한 다음, 클라셀 상에서 여과하였다. 이와 같이 하여 수득한 케이크를 아세톤으로 세척하고, 여과물을 진공 하에 농축시키고, DCM (100 mL)으로 희석하고, 클라셀을 통해 여과하고, 그와 같이 하여 수득한 케이크를 DCM으로 세척하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 화합물 12를 황색 액체로서 9.4 g (93%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 1.01 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.37 (s, 9H); 2.54 (m, 1H); 2.91 (dt, J = 6.2 및 13.5 Hz, 1H); 3.15 (ddd, J = 6.2, 6.9 및 13.5 Hz, 1H); 3.59 (s, 3H); 6.90 (t, J = 6.2 Hz, 1H).
화합물 13: 메틸 3-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-2-(((4-메톡시벤질)옥시)메틸)-2-메틸프로파노에이트
-75℃에서 냉각시킨 THF (10 mL) 중 DIEA (3.2 mL, 22.45 mmol)의 용액에 THF 중 1.6 M n-BuLi (14 mL, 22.4 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 매질을 -75℃에서 20분 동안 교반하고; 이어서 -75℃에서 THF (16 mL) 중 화합물 12 (2 g, 9.21 mmol)의 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 -75℃에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, THF (16 mL) 중 1-((클로로메톡시)메틸)-4-메톡시벤젠 (1.72 g, 9.21 mmol)의 용액을 신속하게 반응 혼합물에 첨가하고, 교반을 -25℃에서 4시간 동안 수행하였다. 반응 매질을 DCM (100 mL)으로 희석한 후, 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 100 g/L (50 mL)로 시트르산 용액을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 유기 상을 100 g/L (2 x 50 mL)로의 시트르산 용액, H2O (3 x 50 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 황색빛 오렌지색 오일 4.08 g을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/EtOAc) 150 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 13을 무색 오일로서 2.05 g (60%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 1.03 (s, 3H); 1.37 (s, 9H); 3.14 (d, J = 6.8 Hz, 2H); 3.31 (d, J = 9.1 Hz, 1H); 3.48 (d, J = 9.1 Hz, 1H); 3.58 (s, 3H); 3.73 (s, 3H); 4.38 (s, 2H); 6.76 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.9 Hz, 2H); 7.20 (m, 2H).
단편 C4: 메틸 3-아미노-2-(히드록시메틸)-2-메틸프로파노에이트 히드로클로라이드
화합물 13 (1.5 g, 4.08 mmol)을 디옥산 중 4 M HCl 용액 (24 mL)으로 실온에서 1시간 동안 처리하였다. 이어서, 반응 매질을 진공 하에 농축시키고 톨루엔의 존재 하에 공-증발시켜 점성 오일로서의 단편 C4를 794 mg 수득하였다 (정량적).
AD1의 합성: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 5-(((S)-2-아미노-4-메틸펜타노일)옥시)-8-(4-(아지도메틸)페닐)-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트
화합물 14: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 5-(((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-4-메틸펜타노일)옥시)-8-(4-포르밀페닐)-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에서 자기 교반 하에, Fmoc-Leu-OH (4.9 g, 13.86 mmol)를 도입하고, 이어서 DCM (100 mL) 중 단편 A (3.5 g, 10.59 mmol) 및 DIEA (6.6 mL, 38.13 mmol)를 도입하였다. 이어서, MNBA (5 g, 14.52 mmol) 및 DMAP (620 mg, 5.07 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 반응 매질을 H2O (100 mL) 및 포화 염수 (100 mL)로 세척하였다. 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 오렌지색 오일 9.1 g을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 400 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 14를 연황색 오일로서 5 g (71%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.77 (d, J = 6.8 Hz, 6 H); 1.05 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.33 내지 1.64 (m, 4 H); 1.38 (s, 9 H); 2.39 내지 2.63 (부분적으로 가려진 m, 2 H); 4.01 (m, 1 H); 4.13 내지 4.31 (m, 3 H); 4.95 (m, 1 H); 5.81 (d, J = 15.9 Hz, 1 H); 6.37 (dd, J = 8.8 및 16.2 Hz, 1 H); 6.52 (d, J = 16.2 Hz, 1 H); 6.70 (td, J = 7.3 및 15.9 Hz, 1 H); 7.29 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.40 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.67 (dd, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.74 내지 7.82 (m, 3 H); 7.87 (d, J = 7.9 Hz, 2 H); 9.93 (s, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 666 [M+H]+, m/z = 689 [M+Na]+; tR = 1.92분.
화합물 15: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 5-(((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-4-메틸펜타노일)옥시)-8-(4-(히드록시메틸)페닐)-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트
아르곤 하에, MeTHF (60 mL) 중 화합물 14 (5 g, 7.51 mmol)의 용액에 소듐 트리메톡시보로히드라이드 (1.2 g, 8.91 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 그 후, 포화 NH4Cl (100 mL) 및 아세톤 (20 mL)을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 침강 후, 유기 상을 H2O에 이어서 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 황색 오일 5.3 g을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 300 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 15를 백색 반고체로서 3.15 g (63%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.80 (m, 6 H); 1.02 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.35 내지 1.66 (m, 4 H); 1.38 (s, 9 H); 2.35 내지 2.56 (부분적으로 가려진 m, 2 H); 4.02 (m, 1 H); 4.15 내지 4.32 (m, 3 H); 4.43 (d, J = 5.5 Hz, 2 H); 4.92 (m, 1 H); 5.12 (t, J = 5.5 Hz, 1 H); 5.80 (d, J = 15.9 Hz, 1 H); 6.10 (dd, J = 8.8 et 16.2 Hz, 1 H); 6.39 (d, J = 16.2 Hz, 1 H); 6.69 (m, 1 H); 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.28 내지 7.33 (m, 4 H); 7.41 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.69 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.80 (d, J = 8.2 Hz, 1 H); 7.88 (d, J = 7.9 Hz, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 668 [M+H]+; m/z = 690 [M+Na]+; m/z = 712 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.84분.
화합물 16: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 5-(((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐) 아미노)-4-메틸펜타노일)옥시)-8-(4-(아지도메틸)페닐)-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트
아르곤 하에, 화합물 15 (3.15 g, 4.72 mmol) 및 DCM (50 mL)을 둥근 바닥 플라스크에 도입했다. 0℃에서, TEA (987 μL, 7.08 mmol)에 이어서 메탄술포닐 클로라이드 (438 μL, 5.66 mmol)를 첨가한 다음, 반응 매질을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 실온에서 13시간 동안 교반하였다. 그 후, DCM (50 mL) 및 물 (50 mL)을 첨가하였다. 침강 후, 유기 상을 포화 염수 (3 x 25 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 아르곤 하에, 그와 같이 하여 수득한 조 생성물을 DMF (50 mL) 중에 용해시키고, 아지드화나트륨 (644 mg, 9.91 mmol)을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, DMF를 진공 하에 농축시키고, AcOEt를 첨가하였다. 수득된 혼합물을 0.1N HCl (25 mL), 포화 NaHCO3 (25 mL) 및 포화 염수 (25 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 물질 3.3 g을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 200 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 16을 무색 검 (55%)으로서 1.8 g 및 화합물 AD1 740 mg (33%)을 수득하였다.
LCMS (A2): ES m/z = 715 [M+Na]+; tR = 8.95분.
화합물 AD1: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 5-(((S)-2-아미노-4-메틸펜타노일)옥시)-8-(4-(아지도메틸)페닐)-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에서 자기 교반 하에, 화합물 16 (1.8 g, 2.6 mmol) 및 DCM (50 mL)을 도입하고, 이어서 피페리딘 (1.6 mL, 16.2 mmol)을 도입하였다. 반응 매질을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 이것을 1N HCl에 이어서 포화 NaHCO3, 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 물질 2 g을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 130 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 AD1을 연황색 오일로서 1.48 g 수득하였다 (정량적).
LCMS (A3): ES m/z = 471 [M+H]+; tR = 2.65분.
AD2의 합성: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 5-(((S)-2-아미노-4,4-디메틸펜타노일)옥시)-8-(4-(히드록시메틸)페닐)-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트 히드로클로라이드
화합물 17: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 5-(((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-4,4-디메틸펜타노일)옥시)-8-(4-포르밀페닐)-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에 DCM (60 mL) 중 화합물 A (1.633 g, 4.94 mmol)의 용액에 L-Fmoc-tert-Leu-OH (1.82 g, 4.94 mmol), DIEA (2.57 mL, 14.83 mmol), MNBA (1.70 g, 4.94 mmol) 및 DMAP (241.51 mg, 1.98 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응 매질을 H2O (50 mL)로 희석하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 시트르산 (2 x 50 mL), 포화 NaHCO3 (50 mL) 및 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 화합물 17을 3.24 g 수득하였으며 (96%), 이를 직접 후속 환원에 사용하였다.
화합물 18: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 5-(((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-4,4-디메틸펜타노일)옥시)-8-(4-(히드록시메틸)페닐)-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에 MeTHF (60 mL) 중 화합물 17 (3.24 g, 4.77 mmol)의 용액에 소듐 트리메톡시보로히드라이드 (670.56 mg, 5.24 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 추가의 소듐 트리메톡시보로히드라이드 (304 mg, 2.38 mmol)를 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 매질을 0℃에서 냉각시키고, 아세톤 (18 mL) 및 포화 NH4Cl (36 mL)로 희석하고, AcOEt로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 헵탄/AcOEt) 100 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 18을 무색 무정형 고체로서 2.61 g (80%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 1.02 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.35 내지 1.60 (m, 4 H); 1.38 (s, 9 H); 2.37 내지 2.58 (부분적으로 가려진 m, 2 H); 4.04 (m, 1 H); 4.16 내지 4.33 (m, 3 H); 4.45 (d, J = 5.7 Hz, 2 H); 4.91 (m, 1 H); 5.12 (t, J = 5.7 Hz, 1 H); 5.80 (d, J = 16.0 Hz, 1 H); 6.10 (dd, J = 8.8 및 16.2 Hz, 1 H); 6.39 (d, J = 16.2 Hz, 1 H); 6.69 (m, 1 H); 7.21 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.25 내지 7.33 (m, 4 H); 7.40 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.68 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.78 (d, J = 8.3 Hz, 1 H); 7.88 (d, J = 7.9 Hz, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 608; m/z = 682 [M+H]+; m/z = 726 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.85분.
화합물 AD2: (2E,5S,6R,7E)-tert-부틸 5-(((S)-2-아미노-4,4-디메틸펜타노일)옥시)-8-(4-(히드록시메틸)페닐)-6-메틸옥타-2,7-디에노에이트 히드로클로라이드
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에, DCM (40 mL) 중 화합물 18 (2.61 g, 3.83 mmol)의 용액에 피페리딘 (7.60 mL, 76.56 mmol)을 첨가하고, 반응 매질을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 이것을 농축시키고, AcOEt로 추출하였다. 합한 유기 층을 1N HCl, H2O 및 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 iPr2O (50 mL)로 희석하고, 실온에서 40시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 여과하고, iPr2O로 세척하고, 진공 하에 40℃에서 3시간 동안건조시켜 화합물 AD2를 무색 무정형 고체로서 1.706 g (90%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.88 (s, 9 H); 1.10 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.39 내지 1.49 (m, 1 H); 1.42 (s, 9 H); 1.75 (dd, J = 6.1 및 15.1 Hz, 1 H); 2.47 내지 2.64 (부분적으로 가려진 m, 2 H); 3.92 (t, J = 5.5 Hz, 1 H); 4.47 (d, J = 5.7 Hz, 2 H); 5.02 (m, 1 H); 5.15 (t, J = 5.7 Hz, 1 H); 5.90 (d, J = 15.9 Hz, 1 H); 6.15 (dd, J = 8.3 및 16.1 Hz, 1 H); 6.44 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 6.77 (td, J = 7.3 및 15.9 Hz, 1 H); 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 8.10 (넓은 m, 3 H). LCMS (A1): ES m/z = 460 [M+H]+; tR = 0.95분.
AD3의 합성: (2R,3S)-1-((4-메톡시벤질)옥시)-2-메틸헥스-5-엔-3-일 (S)-2-아미노-4,4-디메틸펜타노에이트
화합물 19: (2R,3S)-1-((4-메톡시벤질)옥시)-2-메틸헥스-5-엔-3-일 (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-4,4-디메틸펜타노에이트
THF (15 mL) 중 사쿠라이 알콜 (1.02 g, 4.08 mmol) 및 (S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-4,4-디메틸펜탄산 (1.5 g, 4.08 mmol)의 용액에 2,4,6-트리클로로벤조일 클로라이드 (1.02 g, 4.08 mmol), TEA (1.14 mL, 8.16 mmol) 및 DMAP (126.0 mg, 1.02 mmol)를 적가하였다. 반응 매질을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음 빙조를 사용하여 냉각시킨 후, 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 1N HCl (60 mL)을 첨가하였다. 생성된 매질을 실온에서 15분 동안 교반하고, EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 NaHCO3 (15 mL), 포화 염수 (3 x 15 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (150 g, 구배 용리 헵탄/EtOAc; 150 g 및 20 g, 구배 용리 DCM/MeOH) 상에서 3회 연속적 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 19를 무색 오일로서 1.78 g (72%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.85 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 0.89 (s, 9H); 1.51 (dd, J = 2.8 및 14.3 Hz, 1H); 1.61 (dd, J = 9.0 및 14.3 Hz, 1H); 1.95 (m, 1H); 2.21 (m, 1H); 2.31 (m, 1H); 3.20 (dd, J = 6.5 및 9.6 Hz, 1H); 3.35 (m, 1H); 3.73 (s, 3H); 4.04 (m, 1H); 4.18 내지 4.34 (m, 5H); 4.83 (m, 1H); 5.00 (dq, J = 2.1 및 10.3 Hz, 1H); 5.05 (dq, J = 2.1 및 7.3 Hz, 1H); 5.70 (m, 1H); 6.87 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.17 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.30 (m, 2H); 7.41 (t, J = 7.8 Hz, 2H); 7.70 (d, J = 7.8 Hz, 2H); 7.75 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 7.90 (d, J = 7.8 Hz, 2H). LCMS (A5): ES m/z = 600 [M+H]+; m/z = 617 [M+H+NH3]+; m/z = 644 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.86분.
화합물 AD3: (2R,3S)-1-((4-메톡시벤질)옥시)-2-메틸헥스-5-엔-3-일 (S)-2-아미노-4,4-디메틸펜타노에이트
DCM (63 mL) 중 화합물 19 (1.78 g, 2.98 mmol)의 용액에 피페리딘 (1.77 mL, 17.9 mmol)을 적가하였다. 반응 매질을 실온에서 4시간 동안 교반하고, DCM (150 mL)으로 희석하고, 1 N HCl (2 x 20 mL), 포화 NaHCO3 (20 mL), 포화 염수 (3 x 20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 50 g 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/EtOAc) 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 무색 오일로서 화합물 AD3 644 mg을 수득하였다 (57%).
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.88 (s, 9H); 0.89 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.21 (dd, J = 6. 9 및 13.9 Hz, 1H); 1.56 (dd, J = 5.0 및 13.9 Hz, 1H); 1.66 ( 넓은 s, 2H); 2.00 (m, 1H); 2.24 (m, 1H); 2.33 (m, 1H); 3.26 (m, 2H); 3.38 (dd, J = 5.5 및 9.4Hz, 1H); 3.74 (s, 3H); 4.36 (s, 2H); 4.84 (m, 1H); 5.00 내지 5.10 (m, 2H); 5.72 (m, 1H); 6.89 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 7.22 (d, J = 8.8 Hz, 2H). LCMS (A5): ES m/z = 378 [M+H]+; tR = 0.88분.
BC1의 합성: 3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2,2-디메틸프로판산
화합물 20: 메틸 3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2,2-디메틸프로파노에이트
아르곤 하에, 둥근 바닥 플라스크에 단편 C1 (981.45 mg, 4.00 mmol) 및 DCM (50 mL)에 이어서 DIEA (1.84 mL, 10.92 mmol), 단편 B (1.2 g, 3.64 mmol), HOBt (563.40 mg, 4.00 mmol) 및 EDC (1.45 mL, 8.01 mmol)를 도입하였다. 반응 매질을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 반응 매질을 H2O (30 mL)로 희석하고, DCM으로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 오일 2.5 g을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 110 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 20을 백색 머랭으로서 1.06 g (66%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 1.06 (s, 3 H); 1.07 (s, 3 H); 1.30 (s, 9 H); 2.65 (dd, J = 11.6 및 13.9 Hz, 1 H); 2.82 (dd, J = 4.0 및 13.9 Hz, 1 H); 3.18 (dd, J = 6.1 및 13.4 Hz, 1 H); 3.29 (부분적으로 가려진 m, 1 H); 3.60 (s, 3 H); 3.81 (s, 3 H); 4.11 (m, 1 H); 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.19 (dd, J = 2.3 및 8.6 Hz, 1 H); 7.33 (넓은 s, 1 H); 7.75 (큰 t, J = 6.1 Hz, 1 H).
화합물 BC1: 3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2,2-디메틸프로판산
아르곤 하에, 둥근 바닥 플라스크에 화합물 20 (1.06 g, 2.39 mmol) 및 THF (25 mL)에 이어서 LiOH (70.18 mg, 2.87 mmol) 및 H2O (1 mL)를 도입하였다. 반응 매질을 수시간 동안 교반한 후 LiOH 70 mg을 첨가하고 밤새 실온에서 교반하였다. 그 후, 앰버라이트 수지를 pH 4가 될 때까지 첨가하고, 여과한 다음 THF로 세척하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 BC1를 백색 고체로서 1 g 수득하였다 (97%).
BC2의 합성: 3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2,2-디메틸부탄산
화합물 21: 메틸 3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2,2-디메틸부타노에이트
아르곤 하에, 둥근 바닥 플라스크에 단편 B (1.02 g, 2.78 mmol) 및 DCM (25 mL)에 이어서 EDC (592 mg, 3.03 mmol) 및 HOBt (478 mg, 3.03 mmol)를 도입하였다. 반응 매질을 15분 동안 교반한 다음, 단편 C2 (0.5 g, 2.75 mmol) 및 DIEA (1.7 mL, 9.73 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 반응 매질을 진공 하에 농축시킨 다음, AcOEt로 희석하였다. 유기 층을 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 오일 1.45 g을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 100 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 21을 백색 발포체로서 845 mg (67%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 부분입체이성질체 혼합물 50:50; 0.87 (d, J = 6.8 Hz, 1.5 H); 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 1.5 H); 1.01 (s, 1.5 H); 1.03 (s, 1.5 H); 1.07 (s, 3 H); 1.31 (s, 9 H); 2.58 내지 2.87 (m, 2 H); 3.59 (s, 1.5 H); 3,60 (s, 1.5 H); 3.81 (s, 3 H); 3.99 내지 4.20 (m, 2 H); 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 0.5 H); 6.97 (d, J = 9.0 Hz, 0.5 H); 7.05 (넓은 d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.19 (분할된 dd, J = 2.4 및 8.6 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 2.4 Hz, 0.5 H); 7.34 (d, J = 2.4 Hz, 0.5 H); 7.54 (d, J = 10.1 Hz, 0.5 H); 7.62 (d, J = 10.1 Hz, 0.5 H). LCMS (A3): 부분입체이성질체 혼합물 50:50; ES m/z = 457 [M+H]+; m/z = 479 [M+Na]+; tR = 3.19-3.2분.
화합물 21 입체이성질체 1 및 2: 메틸 3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2,2-디메틸부타노에이트 입체이성질체 1 및 2
DCM (30 mL) 중 아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에 단편 B (1.17 g, 3.55 mmol)의 용액에 EDC (741.75 mg, 3.87 mmol), HOBt (592.57 mg, 3.87 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 15분 동안 교반한 후, 단편 C2 (639 mg, 3.52 mmol) 및 DIEA (2.17 mL, 12.31 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 4시간 동안 교반한 다음, 농축시키고, AcOEt (100 mL)로 희석하였다. 유기 층을 H2O (2 x 10 mL) 및 포화 염수 (2 x 10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 50 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 부분입체이성질체의 혼합물 1.306 g을 수득하였으며 (81%), 이를 2회의 연속적 플래쉬 크로마토그래피에 의해 분리하였으며, 제1은 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 100g 상이며, 화합물 21 입체이성질체 1 376 mg (23%)을 수득하고, 제2는 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 70g 상이며, 화합물 21 입체이성질체 1 181 mg (11%), 화합물 21 입체이성질체 2 279 mg (17%) 및 부분입체이성질체 476 mg을 수득하였다.
화합물 21 입체이성질체 1
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.85 (d, J = 6.8 Hz, 3 H); 1.07 (s, 6 H); 1.31 (s, 9 H); 2.57 (m, 1H); 2.80 (dd, J = 5.2 및 13.8 Hz, 1 H); 3.60 (s, 3 H); 3.81 (s, 3 H); 4.05 (m, 1 H); 4.16 (m, 1 H); 6.99 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.0 및 8.6 Hz, 1 H); 7.34 (d, J=2.0 Hz, 1 H); 7.57 (d, J=10.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 381; m/z = 401; m/z = 455 [M-H]-; m/z = 457 [M+H]+; tR = 1.29분.
화합물 21 입체이성질체 2
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.95 (d, J = 6.8 Hz, 3 H); 1.00 (s, 3 H); 1.03 (s, 3 H); 1.31 (s, 9 H); 2.55 (m, 1H); 2.80 (dd, J = 5.0 및 14.3 Hz, 1 H); 3.59 (s, 3 H); 3.81 (s, 3 H); 4.09 내지 4.22 (m, 2 H); 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.0 및 8.6 Hz, 1 H); 7.34 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.64 (d, J = 10.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 381; m/z = 401; m/z = 455 [M-H]-; m/z = 457 [M+H]+; tR = 1.29분.
화합물 BC2: 3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2,2-디메틸부탄산
화합물 21 (0.845 g, 1.85 mmol) 및 MeOH (20 mL)에 이어서 10M NaOH 1.8 mL를 둥근 바닥 플라스크에 도입하였다. 용액을 교반하고, 50℃에서 밤새 가열하였다. 반응 매질을 진공 하에 증발시킨 다음, H2O (20 mL)로 희석하고, 5N HCl로 중화시켰다. 용액을 AcOEt로 2회 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 BC2를 백색 발포체로서 800 mg (97%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 부분입체이성질체 혼합물 50:50; 0.91 (d, J = 6.8 Hz, 1.5 H); 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 1.5 H); 1.00 (s, 3 H); 1.03 (s, 1.5 H); 1.07 (s, 1.5 H); 1.31 (s, 9 H); 2.57 (m, 1 H); 2.83 (m, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 4.01 내지 4.16 (m, 2 H); 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 0.5 H); 6.95 (d, J = 9.0 Hz, 0.5 H); 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.20 (넓음, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.31 (넓은 s, 1 H); 7.49 (d, J = 10.1 Hz, 0.5 H); 7.54 (d, J = 10.1 Hz, 0.5 H); 11.94 (넓은 m, 1 H). LCMS (A1): 부분입체이성질체 혼합물 50:50; ES m/z = 387; m/z = 443 [M+H]+; tR = 1.20-1.21분.
화합물 BC2 입체이성질체 1: 3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시 페닐)프로판아미도)-2,2-디메틸부탄산 입체이성질체 1
화합물 21 입체이성질체 1 (0.325 g, 1.85 mmol) 및 MeOH (8 mL)에 이어서 10M NaOH 0.692 mL를 둥근 바닥 플라스크에 도입하였다. 황색 용액을 교반하고, 50℃에서 밤새 가열하였다. 반응 매질을 진공 하에 증발시킨 다음, H2O (20 mL)로 희석하고, AcOEt (3 x 5 mL)로 추출하였다. 수성 층을 5N HCl을 사용하여 산성화시키고, AcOEt (3 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 염수 (5 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 BC2 입체이성질체 1을 백색 발포체로서 303 mg (96%) 수득하였으며, 이를 직접 후속 반응에 사용하였다.
화합물 BC2 입체이성질체 2: 3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시 페닐)프로판아미도)-2,2-디메틸부탄산 입체이성질체 2
화합물 21 입체이성질체 2 (1.094 g, 2.39 mmol), THF (5 mL) 및 H2O (5 mL)에 이어서 LiOH (301 mg, 7.18 mmol)를 둥근 바닥 플라스크에 도입하였다. 용액을 실온에서 44시간 동안 교반하였다. 반응이 완결되지 않았고, LiOH (301 mg)를 첨가하였다. 혼합물을 48시간 동안 교반한 다음, LiOH 301 mg을 THF (10 mL) 및 H2O (5 mL) 중에 첨가하고, 반응 매질을 60℃에서 40시간 동안 교반하였다. 반응 매질을 진공 하에 증발시켰다. 1M 시트르산을 pH 2까지 첨가하고, 혼합물을 AcOEt (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 H2O로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 BC2 입체이성질체 2를 백색 무정형 고체로서 1.096 g 수득하였으며 (정량적), 이를 직접 후속 반응에 사용하였다.
BC3의 합성: 에틸 2-((R)-1-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)시클로프로필)-2-메틸프로판산
화합물 22: 에틸 2-((R)-1-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)시클로프로필)-2-메틸프로파노에이트
아르곤 하에, 둥근 바닥 플라스크에 단편 C3 (1.2 g, 7.01 mmol) 및 THF (16.5 mL)에 이어서 단편 B (2.54 g, 7.71 mmol), HOBt (1.77g, 8.76 mmol), EDC (1.23 g, 8.06 mmol) 및 DIEA (1.35 mL, 7.71 mmol)를 도입하였다. 반응 매질을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 매질을 H2O (25 mL)로 희석하고, AcOEt (250 mL)로 추출하였다. 유기 층을 H2O (2 x 25 mL), 포화 염수 (2 x 25 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였으며, 제1은 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 200 g에 의해 무색 발포체로서의 화합물 22 2.16 g 및 목적 화합물을 함유하는 혼합물 343 mg을 수득하였으며 (64%), 이를 추가로 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 30 g에 의해 정제하여 화합물 22를 무색 발포체로서 160 mg (4.7%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.62 (m, 1 H); 0.74 내지 0.99 (m, 3 H); 1.03 (s, 3 H); 1.10 (s, 3 H); 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.42 (s, 9 H); 2.90 (m, 2 H); 3.88 (s, 3 H); 4.08 (m, 1 H); 4.10 (q, J = 7.2 Hz, 2 H); 4.96 (m, 1 H); 6.33 (넓은 s, 1 H); 6.85 (d, J = 8.5 Hz, 1 H); 7.03 (dd, J = 2.4 및 8.5 Hz, 1 H); 7.17 (d, J = 2.4 Hz, 1 H).
화합물 BC3: 2-((R)-1-(2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)시클로프로필)-2-메틸프로판산
화합물 22 (2.09 g, 4.33 mmol), THF (10 mL) 및 H2O (8 mL)에 이어서 LiOH (726.33 mg, 17.31 mmol)를 둥근 바닥 플라스크에 도입하였다. 용액을 교반하고, 65℃에서 가열하였다. 16시간 후, 반응이 완결되지 않았고, 10 mL H2O 중 LiOH 726.33 mg을 첨가하였다. 혼합물을 65℃에서 48시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 반응 매질을 H2O (20 mL)로 희석한 다음, AcOEt (3 x 40 mL)로 추출하였다. 유기 층을 H2O (2 x 10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 혼합물 에스테르/산 1.29 g을 수득하였다. 수성 층을 5N HCl을 사용하여 pH 3까지 산성화시킨 다음, AcOEt (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 H2O (2 x 10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 BC3을 베이지색 발포체로서 787 mg (40%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.50 내지 0.90 (m, 4 H); 1.03 (s, 6 H); 1.30 (s, 9 H); 2.60 (dd, J = 10.5 및 14.1 Hz, 1 H); 2.78 (dd, J = 5.0 및 14.1 Hz, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 3.97 (m, 1 H); 6.80 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.0 및 8.5 Hz, 1 H); 7.31 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.86 (s, 1 H); 12.11 (넓은 m, 1 H).
BC4의 합성: (S)-3-((R)-2-아크릴아미도-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)프로판아미도)-2,2-디메틸부탄산
화합물 23: 메틸 (S)-3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2,2-디메틸부타노에이트
DCM (60 mL) 중 단편 B (2 g, 6.06 mmol)의 용액에 EDC (1.13 mL, 7.06 mmol) 및 HOBt (948 mg, 6.67 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 15분 동안 교반한 다음, 메틸 (S)-3-아미노-2,2-디메틸부타노에이트 (881 mg, 6.06 mmol) 및 DIEA (1.53 mL, 9.10 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시키고, EtOAc (100 mL) 및 H2O (20 mL)로 희석하였다. 수성 상을 EtOAc (20 mL)로 추출하고; 합한 유기 상을 포화 염수 (2 x 20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/EtOAc) 150 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 23을 무색 래커로서 2.21 g (79%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.88 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.08 (s, 6H); 1.32 (s, 9H); 2.67 (dd, J = 9.9 및 13.6 Hz, 1H); 2.82 (dd, J = 5.2 및 13.6 Hz, 1H); 3.62 (s, 3H); 3.83 (s, 3H); 4.06 (m, 1H); 4.77 (m, 1H) 6.97 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.4 및 8.6 Hz, 1H); 7.33 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 7.55 (d, J = 9.8 Hz, 1H).
화합물 24: 메틸 (S)-3-((R)-2-아미노-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)프로판아미도)-2,2-디메틸부타노에이트 2,2,2-트리플루오로아세테이트
DCM (25 mL) 중 화합물 23 (2.2 g, 4.81 mmol)의 용액에 TFA (3.6 mL, 48.1 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 밤새 교반하고, 진공 하에 농축시키고 톨루엔의 존재 하에 공-증발시켜 부분입체이성질체 혼합물로서의 화합물 24를 2.0 g 수득하였다 (88%).
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.80 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.04 (s, 3H); 1.10 (s, 3H); 2.95 (d, J = 7.0 Hz, 2H); 3.62 (s, 3H); 3.84 (s, 3H); 4.00 (m, 1H); 4.15 (m, 1H); 7.10 내지 7.30 (m, 3H); 8.00 (d, J = 9,5 Hz, 1H); 8.22 (넓은 s, 3H).
화합물 25: 메틸 (S)-3-((R)-2-아크릴아미도-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)프로판아미도)-2,2-디메틸부타노에이트
DCM (20 mL) 중 화합물 24 (2.0 g, 4.25 mmol)의 용액에 아크릴로일 클로라이드 (536 μL, 6.37 mmol) 및 DIEA (2.5 mL, 12.74 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, H2O (20 mL)로 희석하였다. 수성 상을 DCM (2 x 20 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염수 (2 x 20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/EtOAc) 100 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 25를 85:15 부분입체이성질체 혼합물로서 850 mg (68%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.85 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.03 (s, 3H); 1.04 (s, 3H); 2.72 (dd, J = 9.7 및 13.9 Hz, 1H); 2.86 (dd, J = 5.8 및 13.9 Hz, 1H); 3.58 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.15 (m, 1H); 4.56 (m, 1H); 5.56 (dd, J = 2.3 및 10.2 Hz, 1H); 6.03 (dd, J = 2.3 및 17.2 Hz, 1H); 6.28 (dd, J = 10.2 및 17.2 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.5 Hz, 1H); 7.17 (dd, J = 2.2 및 8.5 Hz, 1H); 7.31 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.72 (d, J = 9.8 Hz, 1H); 8.36 (d, J = 8.6 Hz, 1H).
화합물 BC4: (S)-3-((R)-2-아크릴아미도-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)프로판아미도)-2,2-디메틸부탄산
0℃에서 냉각시킨 THF (4 mL) 중 tBuOK (1.11 g, 9.86 mmol)의 용액에 H2O (47 μL) 및 화합물 25 (450 mg, 1.10 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 1N HCl (5 mL)로 산성화시켰다. 수성 상을 DCM (2 x 20 mL)으로 추출하고; 합한 유기 상을 H2O (30 mL), 포화 염수 (20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 2개의 부분입체이성질체를 키랄팩 AS 10 μm 칼럼 (85/15 CO2/[MeOH + 0.1% TEA]에서 등용매 용리) 상에서 초임계 유체 크로마토그래피에 의해 분리하여 화합물 BC4를 무정형 고체로서 385 mg (89%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.88 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.00 (s, 3H); 2.71 (dd, J = 9.4 및 13.7 Hz, 1H); 2.88 (dd, J = 5.3 및 13.7 Hz, 1H); 3.80 (s, 3H); 4.10 (m, 1H); 4.54 (m, 1H); 5.55 (dd, J = 2.3 및 10.2 Hz, 1H); 6.01 (dd, J = 2.3 및 17.1 Hz, 1H); 6.28 (dd, J = 10.2 및 17.1 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.17 (dd, J = 2.4 및 8.7 Hz, 1H); 7.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 7.80 (d, J = 9.8 Hz, 1H); 8.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 12.00 (넓은 s, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 395 [M-H]-; m/z = 397 [M+H]+; tR = 0.92분.
BC5의 합성: (S)-3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2,2-디메틸부탄산
화합물 BC5를 메틸 (3S)-3-아미노-2,2-디메틸부타노에이트 (MFCD09256689) 및 반응식 32에 도시된 빌딩 블록 BC 일반적 합성 및 화합물 BC1 및 BC2에 기재된 것으로부터 제조하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.89 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.02 (s, 3H); 1.04 (s, 3H); 1.30 (s, 9H); 2.68 (dd, J = 13.6 및 10.2 Hz, 1H); 2.82 (dd, J = 5.2 및 13.6 Hz, 1H); 3.80 (s, 3H); 4.05 (m, 1H); 4.12 (m, 1H); 7.00 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.2 및 8.7 Hz, 1H); 7.32 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.52 (d, J = 9.9 Hz, 1H); 12.35 (넓은 s, 1H). LCMS (A1): ES m/z = 441 [M-H]-; m/z = 443 [M+H]+; m/z = 883 [2M-H]-; tR = 1.16분.
BC6의 합성: 3-((R)-2-아크릴아미도-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)프로판아미도)-2-(히드록시메틸)-2-메틸프로판산
화합물 26: 메틸 3-((R)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2-(히드록시메틸)-2-메틸프로파노에이트
THF (60 mL) 중 단편 C4 (1.059 g, 5.77 mmol)의 용액에 DIEA (2.06 mL, 11.76 mmol), 단편 B (1.90 g, 5.77 mmol), HOBt (935 mg, 6.92 mmol) 및 EDC (1.23 mL, 6.92 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 48시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (등용매 용리 헵탄/EtOAc) 200 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 26을 무색 오일로서 1.05 g (39%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.98 (s, 3H); 1.30 (s, 9H); 2.63 (m, 1H); 2.83 (m, 1H); 3.18 내지 3.48 (m, 4H); 3.60 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.10 (m, 1H); 4.81 (m, 1H); 6.98 (d, J = 8.9 Hz, 1H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.1 및 8.7 Hz, 1H); 7.35 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 7.83 (m, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 457 [M-H]-; m/z = 459 [M+H]+; m/z = 503 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.1분.
화합물 27: 메틸 3-((R)-2-아미노-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)프로판아미도)-2-(히드록시메틸)-2-메틸프로파노에이트 히드로클로라이드
화합물 26 (1.05 g, 2.29 mmol)을 디옥산 중 4M HCl (16 mL, 64 mmol)로 실온에서 1시간 동안 처리하였다. 반응 매질을 진공 하에 농축시키고 톨루엔의 존재 하에 2회 공-증발시켰다. 조 생성물을 iPr2O (10 mL)로 연화처리하고, 여과하고, iPr2O (5 mL)로 2회 세척하였다. 이어서, 케이크를 DCM 중에 용해시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 27을 백색 발포체로서 809 mg (90%) 수득하였으며, 이를 추가로 정제 없이 사용하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.92 (s, 1.5H); 0.97 (s, 1.5H); 2.88 (m, 1H); 3.00 (m, 1H); 3.19 내지 3.47 (m, 4H); 3.60 (s, 3H); 3.85 (s, 3H); 4.05 (m, 1H); 4.89 (m, 1H); 7.11 (분할된 d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.19 (분할된 dd, J = 2.0 및 8.6 Hz, 1H); 7.38 (분할된 d, J = 2.0 Hz, 1H); 8.15 (넓은 s, 3H); 8.39 (m, 1H).
화합물 28: 메틸 3-((R)-2-아미노-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)프로판아미도)-2-메틸-2-(((트리에틸실릴)옥시)메틸)프로파노에이트
빙조로 냉각된 DCM (4 mL) 중 화합물 27 (809 mg, 2.05 mmol)의 용액에 온도를 4℃ 미만으로 유지하면서 TEA (1.43 mL, 10.23 mmol) 및 클로로트리에틸실란 (1.37 mL, 8.19 mmol)을 첨가하였다. 4℃에서 10분 동안 교반을 수행한 다음, 반응 매질을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 포화 염수 (20 mL) 및 DCM을 매질에 첨가하였으며, 이를 10분 동안 교반하였다. 유기 상을 포화 염수 (3 x 10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 70 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 28을 연황색 오일로서 706 mg (73%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.52 (q, J = 8.0 Hz, 6H); 0.89 (t, J = 8.0 Hz, 9H); 0.98 (s, 3H); 1.70 (넓은 s, 2H); 2.54 (m, 1H); 2.82 (m, 1H); 3.18 내지 3.45 (m, 3H); 3.58 (m, 2H); 3.60 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.14 (dd, J = 2.3 및 8.7 Hz, 1H); 7.28 (분할된 d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.78 (m, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 471 [M-H]-; m/z = 473 [M+H]+; m/z = 517 [M-H+HCO2H]-; tR = 0.97분.
화합물 29: 메틸 3-((R)-2-아크릴아미도-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)프로판아미도)-2-메틸-2-(((트리에틸실릴)옥시)메틸)프로파노에이트
얼음/아세톤 조를 사용하여 냉각된 DCM (19 mL) 중 화합물 28 (704 mg, 1.49 mmol)의 용액에 DIEA (780 μL, 4.46 mmol) 및 아크릴로일 클로라이드 (181 μL, 2.23 mmol)를 적가하였다. 반응 매질을 0-5℃에서 1시간 동안 교반한 다음, EtOAc (38 mL)를 첨가하고, 매질을 1N HCl (5 mL), 포화 NaHCO3 (5 mL), 포화 염수 (3 x 15 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 30 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 29를 무색 오일로서 742 mg (94%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.52 (분할된 q, J = 8.0 Hz, 6H); 0.89 (분할된 t, J = 8.0 Hz, 9H); 0.99 (s, 1.5H); 1.01 (s, 1.5H); 2.69 (m, 1H); 2.87 (m, 1H); 3.20 (m, 1H); 3.28 (m, 1H); 3.50 (dd, J = 3.1 및 9.9 Hz, 1H); 3.58 (s, 3H); 3.68 (d, J = 9.9 Hz, 1H); 3.80 (s, 3H); 4.59 (m, 1H); 5.55 (d, J = 10.3 Hz, 1H); 6.00 (d, J = 17.3 Hz, 1H); 6.25 (분할된 dd, J = 10.3 및 17.3 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.5 Hz, 1H); 7.18 (분할된 dd, J = 2.0 및 8.5 Hz, 1H); 7.31 (분할된 d, J = 2.0 Hz, 1H); 7.96 (m, 1H); 8.39 (d, J = 8.9 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 525 [M-H]-; m/z = 527 [M+H]+; m/z = 571 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.54분.
화합물 BC6: 3-((R)-2-아크릴아미도-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)프로판아미도)-2-(히드록시메틸)-2-메틸프로판산
얼음/아세톤 조를 사용하여 냉각된 THF (7 mL) 중 tBuOK (1.42 g, 12.65 mmol)의 현탁액에 H2O (50 μL)을 첨가하고, 매질을 10분 동안 교반한 후, THF (7 mL) 중 화합물 29 (741 mg, 1.41 mmol)의 용액을 첨가하였다. 0℃에서 10분에 이어서 실온에서 1시간 동안 교반을 수행하였다. 반응 매질을 빙조로 냉각시킨 후, 1N HCl (16.9 mL)을 첨가하였다. 15분 동안 교반한 후, 반응 매질을 DCM (3 x 25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 염수 (2 x 15 mL), H2O (15 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 BC6을 황색 발포체로서 656 mg 수득하였다 (정량적).
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.91 (s, 3H); 2.69 (m, 1H); 2.90 (dd, J = 4.8 및 13.6 Hz, 1H); 3.18 내지 3.42 (m, 4H); 3.80 (s, 3H); 4.59 (m, 1H); 4.73 (넓음, 1H); 5.55 (d, J = 2.3 및 10.3 Hz, 1H); 6.00 (dd, J = 2.3 및 17.2 Hz, 1H); 6.24 (dd, J = 10.3 및 17.2 Hz, 1H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.19 (dd, J = 2.0 및 8.7 Hz, 1H); 7.35 (d, J = 2.0 Hz, 1H); 8.00 (m, 1H); 8.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 12.30 (넓은 s, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 397 [M-H]-; m/z = 399 [M+H]+; tR = 0.77분.
실시예 1 내지 3의 합성: 아자-C52의 벤질계 아민, 글루타릴-Val-Ala-아자-C52 벤질계 아민의 NHS 에스테르 및 상응하는 ADC
화합물 30: (6R,13S)-(1E,3R,4S,6E)-1-(4-(아지도메틸)페닐)-8-(tert-부톡시)-3-메틸-8-옥소옥타-1,6-디엔-4-일 6-(3-클로로-4-메톡시벤질)-13-이소부틸-2,2,10,10-테트라메틸-4,7,11-트리옥소-3-옥사-5,8,12-트리아자테트라데칸-14-오에이트
아르곤 하에, 둥근 바닥 플라스크에 DMF (25 mL) 중 화합물 BC1 (899.55 mg, 2.10 mmol), HATU (861 mg, 2.20 mmol) 및 HOAt (302 mg, 2.20 mmol)를 도입하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 그 후, 화합물 AD1 (940 mg, 2 mmol) 및 DIEA (1.05 mL, 5.99 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 매질을 H2O (50 mL)로 희석하고, AcOEt (2 x 40 mL)로 추출하였다. 유기 층을 포화 염수 (25 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 80 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 30을 황색 반고체로서 1.011 g (57%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.76 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.78 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.07 (s, 6 H); 1.39 (s, 9 H); 1.37 내지 1.63 (m, 3 H); 1.41 (s, 9 H); 2.36 내지 2.60 (부분적으로 가려진 m, 3 H); 2.64 (dd, J = 9.5 및 14.1 Hz, 1 H); 2.86 (dd, J = 5.6 및 14.1 Hz, 1 H); 3.18 (dd, J = 6.1 및 13.5 Hz, 1 H); 3.25 (dd, J = 6.9 및 13.5 Hz, 1 H); 3.79 (s, 3 H); 4.09 (m, 1 H); 4.26 (m, 1 H); 4.40 (s, 2 H); 4.92 (m, 1 H); 5.81 (d, J = 15.9 Hz, 1 H); 6.17 (dd, J = 8.4 및 16.1 Hz, 1 H); 6.44 (d, J = 15.9 Hz, 1 H); 6.70 (m, 1 H); 6.94 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.3 및 8.9 Hz, 1 H); 7.31 (m, 3 H); 7.42 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.59 (t, J = 6.3 Hz, 1 H); 7.77 (d, J = 7.9 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 879 [M-H]-; m/z = 881 [M+H]+; m/z = 925 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.89분.
화합물 31: (3S,10R,16S,E)-16-((R,E)-4-(4-(아지도메틸)페닐)부트-3-엔-2-일)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6-디메틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
화합물 31을 두 단계로 제조하였다.
단계 1
둥근 바닥 플라스크에 DCM (10 mL) 중 화합물 30 (1.011 g, 1.15 mmol)을 도입하였다. 0℃로 냉각시킨 후, TFA (1.72 mL, 22.94 mmol) 및 H2O 100 μL를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 72시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 톨루엔을 매질에 첨가하고, 이것을 진공 하에 농축시켜 아미노/산 중간체 900 mg을 수득하였다 (정량적).
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.76 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.78 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.07 (s, 3 H); 1.08 (s, 3 H); 1.38 내지 1.62 (m, 3 H); 2.35 내지 2.58 (부분적으로 가려진 m, 3 H); 2.79 (dd, J = 11.0 및 13.8 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 4.1 및 13.8 Hz, 1 H); 3.16 (dd, J = 5.9 및 13.5 Hz, 1 H); 3.28 내지 3.39 (가려진 m, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 4.03 (m, 1 H); 4.26 (m, 1 H); 4.40 (s, 2 H); 4.92 (m, 1 H); 5.82 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 6.16 (dd, J = 8.8 및 16.4 Hz, 1 H); 6.42 (d, J = 16.4 Hz, 1 H); 6.73 (m, 1 H); 7.09 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.0 및 8.6 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 2 H); 7.37 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.41 (d, J = 8.6 Hz, 2 H); 7.84 (d, J = 7.9 Hz, 1 H); 8.01 (넓은 s 큰, 3 H); 8.10 (t, J = 6.4 Hz, 1 H); 12.2 (넓은 s, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 723 [M-H]-; m/z = 725 [M+H]+; tR = 1.09분.
단계 2
둥근 바닥 플라스크에, CH3CN 200 mL 중 아미노/산 중간체 (840 mg, 1.16 mmol)의 용액에 DIEA (1.95 mL, 11.58 mmol), HOAt (159.23 mg, 1.16 mmol) 및 HATU (499.40 mg, 1.27 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 진공 하에 농축시킨 후, 조 물질을 AcOEt (200 mL)로 희석하고, 0.5M 시트르산 (12 mL) 및 1N HCl (6 mL)로 중화시켰다. 유기 층을 분리하고, 포화 NaHSO3, 포화 NaHCO3, 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 40 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 31을 백색 고체로서 558 mg (68%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.60 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.61 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.07 (s, 3 H); 1.09 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.15 (m, 1 H); 1.33 내지 1.48 (m, 2 H); 2.24 (m, 1 H); 2.53 내지 2.70 (m, 2 H); 2.88 (큰 d, J = 13.6 Hz, 1 H); 3.01 (dd, J = 3.5 및 14.5 Hz, 1 H); 3.23 내지 3.32 (가려진 m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 4.18 (m, 1 H); 4.35 (m, 1 H); 4.40 (s, 2 H); 4.95 (m, 1 H); 5.86 (dd, J = 1.7 및 15.8 Hz, 1 H); 6.13 (dd, J = 8.8 및 16.1 Hz, 1 H); 6.40 (m, 1 H); 6.47 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.0 및 8.6 Hz, 1 H); 7.29 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 2 H); 7.41 (넓은 d, J = 8.6 Hz, 3 H); 7.89 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 8.1 (d, J = 8.2 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 705 [M-H]-; m/z = 707 [M+H]+; tR = 1.58분.
화합물 32: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(아지도메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6-디메틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
둥근 바닥 플라스크에서, DCM (50 mL) 중 화합물 31 (410 mg, 0.579 mmol)의 용액에 0℃에서 m-CPBA (259 mg, 1.16 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 16시간 동안 교반한 후, m-CPBA (130 mg)를 24시간 내에 2회 첨가하였다. 반응이 완료되면, 조 혼합물을 포화 NaHCO3 (15 mL) 및 포화 Na2S2O3 (15 mL)로 1시간 동안 교반한 다음, DCM (3 x 15 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 포화 염수 (15 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 알파 및 베타 에폭시드의 혼합물 440 mg을 황색 반고체로서 수득하였다. 알파 및 베타 에폭시드를 80:20 헵탄/EtOH의 등용매 용리를 사용한 10 μm 키랄팩 AD (실리카 겔 지지체 상에 코팅된 아밀로스 트리스-3,5-디메틸페닐카르바메이트, 키랄 테크놀로지스 유럽(Chiral Technologies Europe)) 1.1 kg으로 패킹된 76 x 350 mm 칼럼 상에서 수행된 키랄 액체 크로마토그래피에 의해 분리하였다. 농축시킨 후, 화합물 32 185 mg (44%)을 백색 고체로서 수득하고, 및 알파 에폭시드 118 mg (28%)을 백색 고체로서 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.72 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.74 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.96 (s, 3 H); 1.04 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.08 (s, 3 H); 1.11 (m, 1 H); 1.40 내지 1.55 (m, 2 H); 1.79 (m, 1 H); 2.26 (m, 1 H); 2.64 (m, 2 H); 2.85 (넓은 d, J = 13.2 Hz, 1 H); 3.00 (m, 2 H); 3.25 (dd, J = 10.2 및 13.2 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.17 (m, 1 H); 4.35 (m, 1 H); 4.46 (s, 2 H); 5.12 (m, 1 H); 5.80 (dd, J = 1.7 및 16.0 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.8, 11.6 및 16.0 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.0 및 8.6 Hz, 1 H); 7.29 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.31 내지 7.40 (m, 5 H); 7.94 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.40 (d, J = 8.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 723 [M+H]+; tR = 1.48분.
실시예 1
(3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(아미노메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6-디메틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
둥근 바닥 플라스크에서, DCM (6 mL), MeOH (6 mL) 및 H2O (0.8 mL) 중 화합물 32 (185 mg, 255.79 μmol)의 용액에 TCEP (81,47 mg, 281,37 μmol)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료되면, 조 혼합물을 포화 NaHCO3 (15 mL)으로 희석하고, DCM (2 x 30 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 15 g 상에서 2회의 연속적 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 실시예 1을 백색 고체로서 90 mg (51%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.72 (d, J = 6.6 Hz, 3 H); 0.75 (d, J = 6.6 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 1.07 (s, 3 H); 1.14 (m, 1 H); 1.42 내지 1.57 (m, 2 H); 1.77 (m, 1 H); 1.92 (넓은 m, 2 H); 2.26 (m, 1 H); 2.64 (m, 2 H); 2.86 (넓은 d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.94 (dd, J = 2.0 및 8.0 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.6 및 14.4 Hz, 1 H); 3.27 (dd, J = 10.2 및 13.0 Hz, 1 H); 3.70 (s, 2 H); 3.80 (s, 3 H); 3.84 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.18 (m, 1 H); 4.34 (m, 1 H); 5.11 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.7 및 15.6 Hz, 1 H); 6.38 (ddd, J = 4.1, 11.6 및 15.6 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.0 및 8.6 Hz, 1 H); 7.22 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.28 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.31 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.35 (d, J = 10.2 Hz, 1 H); 7.91 (d, J = 9.0 Hz, 1 H); 8.38 (d, J = 8.0 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 695 [M-H]-; m/z = 697 [M+H]+; tR = 0.83분.
화합물 33: (S)-2-아미노-N-((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6-디메틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)-3-메틸부탄아미드
아르곤 하에, 둥근 바닥 플라스크에 DCM (20 mL) 중 실시예 1 (90 mg, 129.01 μmol)의 용액에 (S)-2-((S)-2-((((9H-플루오렌-9-일)메톡시)카르보닐)아미노)-3-메틸부탄-아미도)프로판산 또는 FmocValAla (CAS 번호 [150114-97-9], 79.47 mg, 193.61 μmol), EDC (34.27 μL, 193.61 μmol) 및 HOBt (20.93 mg, 154.9 μmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 밤새 교반하였다. 그 후, 피페리딘 (129 μL, 1.29 mmol)을 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 조 잔류물을 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 15 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 33 (45%)을 백색 고체로서 50 mg 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.75 (m, 9 H); 0.88 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 0.96 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 1.08 (s, 3 H); 1.18 (m, 1 H); 1.23 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.42 내지 1.57 (m, 2 H); 1.70 (넓은 m, 2 H); 1.79 (m, 1 H); 1.92 (m, 1 H); 2.26 (m, 1 H); 2.63 (m, 2 H); 2.86 (넓은 d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.99 (m, 3 H); 3.22 내지 3.33 (부분적으로 가려진 m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.86 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.18 (m, 1 H); 4.28 (d, J = 6.3 Hz, 2 H); 4.33 (m, 2 H); 5.11 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.7 및 15.6 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 4.1, 11.6 및 15.6 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.0 및 8.6 Hz, 1 H); 7.24 (s, 4 H); 7.28 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.37 (d, J = 10.2 Hz, 1 H); 7.92 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.07 (넓은 d, J = 8.3 Hz, 1 H); 8.38 (d, J = 8.1 Hz, 1 H); 8.42 (t, J = 6.3 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 434 [M+2H]2+; m/z = 865 [M-H]-; m/z = 867 [M+H]+; m/z = 911 [M-H+HCO2H]-; tR = 0.88분.
화합물 34: 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6-디메틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-5-옥소펜탄산
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, DMF (5 mL) 중 화합물 33 (54 mg, 57.64 μmol)의 용액에 글루타르산 무수물 (8 mg, 69.17 μmol)을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. 그 후, 용매를 제거하고, 조 잔류물을 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 1.8 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 34를 백색 고체로서 51 mg (90%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.73 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.76 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.81 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.05 (s, 3 H); 1.15 (m, 1 H); 1.22 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.43 내지 1.52 (m, 2 H); 1.70 (m, 2 H); 1.77 (m, 1 H); 1.97 (m, 1 H); 2.17 (m, 2 H); 2.24 (m, 1 H); 2.55 내지 2.68 (m, 2 H); 2.85 (넓은 d, J = 12.7 Hz, 1 H); 2.96 (dd, J = 1.8 및 7.7 Hz, 1 H); 2.99 (dd, J = 3.0 및 14.6 Hz, 1 H); 3.23 내지 3.40 (부분적으로 가려진 m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.85 (d, J = 1.8 Hz, 1 H); 4.22 내지 4.38 (m, 4 H); 5.11 (m, 1 H); 5.79 (d, J = 14.9 Hz, 1 H); 6.37 (ddd, J = 4.1, 11.3 및 14.9 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15 (dd, J = 2.0 et 8.7 Hz, 1 H); 7.23 (넓은 s, 4 H); 7.28 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.37 (넓은 d, J = 10.7 Hz, 1 H); 7.87 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.93 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 8.06 (m 큰, 1 H); 8.37 ( 넓은 m, 1 H); 8.41 (넓은 m, 1 H); 12.03 (넓은 m, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 979 [M-H]-; m/z = 981 [M+H]+; tR = 1.17분.
실시예 2
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6-디메틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-5-옥소펜타노에이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, THF (5 mL) 중 화합물 34 (30 mg, 30.56 μmol)의 용액에 DIEA (5.34 μL, 30.56 μmol) 및 DSC (16.31 mg, 61.13 μmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 용매를 제거하고, 조 잔류물을 실리카 겔 (구배 용리 DCM/iPrOH) 1.3 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 실시예 2를 백색 고체로서 9 mg 수득하였다. 목적 화합물뿐만 아니라 불순물을 함유하는 제2 배치를 MeTHF로 희석하고, H2O, 포화 염수로 2회 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 실시예 2를 백색 고체로서 15 mg 수득하였다 (전반적 수율 73%).
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.73 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.77 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.96 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.07 (s, 3 H); 1.15 (m, 1 H); 1.23 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.43 내지 1.56 (m, 2 H); 1.78 (m, 1 H); 1.81 (m, 1 H); 1.97 (m, 1 H); 2.20 내지 2.33 (m, 3 H); 2.58 내지 2.69 (m, 4 H); 2.80 (s, 4 H); 2.85 (넓은 d, J = 12.7 Hz, 1 H); 2.98 (dd, J = 2.1 및 7.9 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.2 및 14.7 Hz, 1 H); 3.22 내지 3.34 (부분적으로 가려진 m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.85 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 4.15 (m, 2 H); 4.22 내지 4.38 (m, 4 H); 5.11 (m, 1 H); 5.79 (d, J = 15.1 Hz, 1 H); 6.38 (ddd, J = 3.9, 11.2 및 15.1 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15 (dd, J = 2.2 및 8.7 Hz, 1 H); 7.22 (넓은 s, 4 H); 7.29 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.36 (넓은 d, J = 10.3 Hz, 1 H); 7.89 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.92 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 8.04 (d, J = 7.4 Hz, 1 H); 8.32 (t, J = 6.1 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 8.0 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 540; m/z = 1076 [M-H]-; m/z = 1078 [M+H]+; m/z = 1122 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.23분.
실시예 3
mAb-Ex2
사전에 기재된 일반적 방법을 사용하여 실시예 3을 제조하였다. hu2H11_R35-74 60 mg을 DMA (1.733 mg, 4 당량) 중 실시예 2의 9.96 mM 용액 161 μL과 2시간 동안 반응시켰다. 이 때, 실시예 2 (3 당량)의 용액 121 μL를 첨가하고, 매질을 2시간 동안 교반하였다. 이 때, 실시예 2 (3 당량)의 용액 121 μL를 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. DPBS pH 6.5 + 20% NMP 중 슈퍼덱스(Superdex) 200 pg 상에서 정제한 후, 아미콘 울트라(Amicon Ultra)-15 상에서 농축시키고, 완충제 B pH 6.5 + 5% NMP 중 PD-10 상에서 완충제 교환하고, 스테리플립(Steriflip) 상에서 여과하여, 실시예 3을 DAR 4.6 (HRMS)과 함께 2.28 mg/mL의 농도로 무색 맑은 용액으로서 39.9 mg 수득하였으며, 단량체 순도 99%이고 전반적 수율 66%이다.
SEC-HRMS: 도 1에서 무손상 ADC에 대한 스펙트럼; m/z = 150346 (D1); m/z = 151307 (D2); m/z = 152274 (D3); m/z = 153240 (D4); m/z = 154200 (D5); m/z = 155165 (D6); m/z = 156133 (D7); m/z = 157095 (D8).
실시예 4 내지 7의 합성: (S)-3-네오펜틸-아자-C52의 벤질계 아민, 글루타릴-Val-Ala-(S)-3-네오펜틸-아자-C52 벤질계 아민의 NHS 에스테르 및 상응하는 ADC
화합물 35: (6R,13S)-(1E,3R,4S,6E)-8-(tert-부톡시)-1-(4-(히드록시메틸)페닐)-3-메틸-8-옥소옥타-1,6-디엔-4-일 6-(3-클로로-4-메톡시벤질)-2,2,10,10-테트라메틸-13-네오펜틸-4,7,11-트리옥소-3-옥사-5,8,12-트리아자테트라데칸-14-오에이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에, DCM (60 mL) 중 단편 BC1 (1.32 g, 3.08 mmol)의 용액에 DIEA (1.53 mL, 9.25 mmol), HOAt (503.75 mg, 3.70 mmol) 및 HATU (1.41 g, 3.70 mmol)를 첨가하였다. 황색 현탁액을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 단편 AD2 (1.7 g, 3.08 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, DIEA 1.53 mL를 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 1M 시트르산 (50 mL)으로 중화시키고, AcOEt (2 x 80 mL)로 추출하였다. 유기 층을 1M NaHSO4, H2O로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 100 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 35를 무색 고체로서 1.475 g (57%) 수득하였다.
화합물 36: (2E,5S,6R,7E)-5-(((S)-2-(3-((R)-2-아미노-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2,2-디메틸프로판아미도)-4,4-디메틸펜타노일)옥시)-8-(4-(히드록시메틸)-페닐)-6-메틸옥타-2,7-디엔산
둥근 바닥 플라스크에서, DCM (20 mL) 중 화합물 35 (1.475 g, 1.69 mmol)의 용액에 TFA (8 mL, 52.27 mmol) 및 H2O (2 mL)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하였다. 잔류물을 H2O (20 mL) 및 AcOEt (20 mL)로 희석하고, 실온에서 2M NaOH (2 mL)로 2시간 동안 처리하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 AcOEt (2 x 10 mL)로 추출하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 무색 고체 1.24 g을 수득하였다. 고체를 AcOEt (10 mL) 및 H2O (10 mL) 중에 용해시키고, 실온에서 2M NaOH (400 μL)로 2시간 동안 처리하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 AcOEt (2 x 10 mL)로 추출하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 100 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 36을 백색 고체로서 990 mg (82%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 0.99 (s, 3 H); 1.02 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.05 (s, 3 H); 1.52 (dd, J = 2.0 및 14.8 Hz, 1 H); 1.69 (dd, J = 9.9 및 14.8 Hz, 1 H); 2.36 내지 2.61 (부분적으로 가려진 m, 4 H); 2.84 (dd, J = 5.0 및 13.9 Hz, 1 H); 3.18 (d, J = 7.5 Hz, 2 H); 3.40 (dd, J = 5.1 및 8.1 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 4.29 (m, 1 H); 4.45 (s, 2 H); 4.90 (m, 1 H); 5.12 (넓은 m, 1 H); 5.81 (d, J = 15.5 Hz, 1 H); 6.10 (dd, J = 8.4 및 15.9 Hz, 1 H); 6.40 (d, J = 15.9 Hz, 1 H); 6.70 (td, J = 7.5 및 15.5 Hz, 1 H); 7.01 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.11 (dd, J = 2.4 및 8.7 Hz, 1 H); 7.25 (m, 3 H); 7.32 (d, J = 8.2 Hz, 2 H); 7.72 (t, J = 6.5 Hz, 1 H); 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 712 [M-H]-; m/z = 714 [M+H]+; tR = 0.94분.
화합물 37: (3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((R,E)-4-(4-(히드록시메틸)-페닐)부트-3-엔-2-일)-6,6-디메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에, 화합물 36 (990 mg, 1.39 mmol) 및 CH3CN (150 mL)을 도입하고, 완전히 가용화될 때까지 50℃에서 수조에서 가열하고 10분 동안 교반하였다. DIEA (687.20 μL, 4.16 mmol), HOAt (207.51 mg, 1.52 mmol) 및 HATU (579.7 mg, 1.52 mmol)를 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 매질을 1M 시트르산 (30 mL)으로 중화시켰다. 용매를 제거하고, 수성 층을 AcOEt (2 x 40 mL)로 추출하였다. 유기 층을 1M NaHSO4, H2O로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 고체를 H2O (200 mL)로 희석하고, 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과한 다음, AcOEt로 희석하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 화합물 37 및 HATU의 혼합물을 수득하였다. 고체를 MeTHF (50 mL) 및 H2O (50 mL)와 함께 교반하였다. 유기 층을 분리하고, H2O (4 x 20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 10 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 37을 무색 고체로서 680 mg (70%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.68 (s, 9 H); 0.98 (s, 3 H); 1.03 (s, 3 H); 1.09 (d, J = 6.9 Hz, 3 H); 1.19 (넓은 d, J = 14.5 Hz, 1 H); 1.58 (dd, J = 10.3 및 14.5 Hz, 1 H); 2.23 (m, 1 H); 2.52 내지 2.70 (m, 3 H); 2.86 (넓은 d, J = 12.7 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.3 및 14.8 Hz, 1 H); 3.22 내지 3.33 (부분적으로 가려진 m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 4.18 (m, 1 H); 4.42 (m, 1 H); 4.46 (d, J = 6.0 Hz, 2 H); 4.91 (m, 1 H); 5.13 (t, J = 6.0 Hz, 1 H); 5.85 (넓은 d, J = 15.0 Hz, 1 H); 6.05 (dd, J = 8.4 및 15.9 Hz, 1 H); 6.40 (m, 2 H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.2 및 8.7 Hz, 1 H); 7.25 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.29 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 7.31 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.42 (d, J = 10.6 Hz, 1 H); 7.94 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.41 (d, J = 8.2 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 694 [M-H]-; m/z = 696 [M+H]+; tR = 1.36분.
화합물 38: (3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6-디메틸-3-네오펜틸-16-((R,E)-4-(4-(((트리이소프로필실릴)옥시)메틸)페닐)부트-3-엔-2-일)-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에, 0℃에서, CHCl3 (10 mL) 중 화합물 37 (680 mg, 0.976 mmol)의 용액에 1H-이미다졸 (305.84 mg, 4.49 mmol) 및 클로로트리이소프로필실란 (480.13 μl, 2.25 mmol)을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, 포화 NH4Cl 및 MTBE (30 mL)로 희석하였다. 유기 층을 1M NaHSO4, 포화 NaHCO3, 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 화합물 38을 오렌지색 무정형 고체로서 970 mg 수득하였다 (정량적).
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.63 (s, 9 H); 0.87 a 1.17 (m, 31 H); 1.53 (dd, J = 10.9 및 14.3 Hz, 1 H); 2.22 (m, 1 H); 2.51 내지 2.70 (m, 3 H); 2.86 (넓은 d, J = 13.0 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.2 및 14.9 Hz, 1 H); 3.24 내지 3.35 (부분적으로 가려진 m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 4.18 (m, 1 H); 4.41 (m, 1 H); 4.76 (s, 2 H); 4.91 (m, 1 H); 5.87 (넓은 d, J = 15.4 Hz, 1 H); 6.06 (dd, J = 8.9 및 15.9 Hz, 1 H); 6.40 (m, 2 H); 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1 H); 7.18 (넓은 d, J = 8.5 Hz, 1 H); 7.25 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.28 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.30 (넓은 s, 1 H); 7.42 (d, J = 10.5 Hz, 1 H); 7.93 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 8.42 (d, J = 8.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 850 [M-H]-; m/z = 852 [M+H]+; m/z = 896 [M-H+HCO2H]-; tR = 2.15분.
실시예 4
(3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(히드록시-메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-6,6-디메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
실시예 4를 2 단계로 제조하였다.
단계 1
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, DCM (10 mL) 중 화합물 38 (832 mg, 0.976 mmol)의 용액을 첨가하고, m-CPBA (339.15 mg, 1.51 mmol)를 3회 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 50시간 동안 교반한 다음, DCM (10 mL)으로 희석하고, 포화 NaHCO3 (30 mL) 및 Na2S2O3 (30 mL)을 사용하여 15분 동안 교반하였다. 유기 층을 분리하고, 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 알파 및 베타 에폭시드의 혼합물 1.1 g을 무색 발포체로서 수득하였다 (정량적).
단계 2
알파 및 베타 에폭시드의 혼합물을 THF (30 mL)로 희석하고, 1M TBAF (952.32 μL)을 첨가하였다. 2시간 동안 교반한 후, TBAF 952 μL를 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후, 혼합물을 H2O (50 mL)로 희석하고, AcOEt (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 알파 및 베타 에폭시드의 혼합물 770 mg을 황색 고체로서 수득하였다 (정량적). 알파 및 베타 에폭시드를 75:25 헵탄/EtOH를 사용한 등용매 용리를 사용하여 10 μm 키랄팩 AD (실리카 겔 지지체 상에 코팅된 아밀로스 트리스-3,5-디메틸페닐카르바메이트, 키랄 테크놀로지스 유럽) 1.1 kg으로 패킹된 76 x 350 mm 칼럼 상에서 수행된 키랄 액체 크로마토그래피에 의해 분리하였다. 농축시킨 후, 실시예 4 190 mg을 백색 고체로서 수득하고 (31%), 알파 에폭시드 125 mg을 백색 고체로서 수득하였다 (20%).
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.81 (s, 9 H); 0.98 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.05 (s, 3 H); 1.26 (m, 1 H); 1.71 (dd, J = 10.4 및 14.5 Hz, 1 H); 1.82 (m, 1 H); 2.26 (m, 1 H); 2.52 (m, 2 H); 2.84 (d, J = 12.8 Hz, 1 H); 2.92 (dd, J = 2.1 및 7.8 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.1 및 14.5 Hz, 1 H); 3.24 내지 3.36 (부분적으로 가려진 m, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 4.17 (ddd, J = 3.4, 8.0 및 11.7 Hz, 1 H); 4.42 (m, 1 H); 4.50 (d, J = 6.0 Hz, 2 H); 5.10 (m, 1 H); 5.20 (t, J = 6.0 Hz, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.8 및 15.4 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.8, 11.5 및 15.4 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.1 및 8.6 Hz, 1 H); 7.26 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.29 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.41 (d, J = 10.3 Hz, 1 H); 8.02 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 8.38 (d, J = 8.2 Hz, 1H). LCMS (A1): ES m/z = 710 [M-H]-; m/z = 712 [M+H]+; tR = 1.28분.
화합물 39: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(아지도메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6-디메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, THF (5 mL) 중 실시예 4 (100 mg, 140 μmol)의 용액에 DPPA (156.82 μl, 701.98 μmol) 및 DBU (110.22 μl, 701.98 μmol)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 6시간 동안 교반한 다음, H2O로 희석하고, AcOEt (3 x 30 mL)로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/iPrOH) 15 g에 의해 정제하여 화합물 39를 백색 고체로서 100 mg (40%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 0.97 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.28 (d, J = 14.5 Hz, 1 H); 1.69 (dd, J = 10.7 및 14.5 Hz, 1 H); 1.84 (m, 1 H); 2.28 (m, 1 H); 2.62 (m, 2 H); 2.84 (d, J = 12.8 Hz, 1 H); 2.93 내지 3.03 (m, 2 H); 3.22 내지 3.34 (부분적으로 가려진 m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.92 (넓은 s, 1 H); 4.17 (m, 1 H); 4.40 내지 4.49 (m, 3 H); 5.10 (m, 1 H); 5.80 (d, J = 15.8 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.8, 11.7 및 15.8 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.2 및 8.7 Hz, 1 H); 7.28 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.39 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.41 (m, 1 H); 8.00 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.36 (d, J = 8.2 Hz, 1H). LCMS (A1): ES m/z = 735 [M-H]-; m/z = 737 [M+H]+; tR = 1.54분.
실시예 5
(3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(아미노메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6-디메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
둥근 바닥 플라스크에서, DCM (2.5 mL) 및 MeOH (2.5 mL) 중 화합물 39 (100 mg, 122.07 μmol)의 용액에 H2O (500 μL) 중 TCEP (38.88 mg, 134.28 μmol)의 용액을 적가하였다. 반응 매질을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 H2O 및 포화 NaHCO3으로 희석하고, DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 실시예 5를 백색 고체로서 73 mg (84%) 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.82 (s, 9 H); 0.97 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.29 (d, J = 14.4 Hz, 1 H); 1.70 (dd, J = 10.2 및 14.4 Hz, 1 H); 1.80 (m, 1 H); 2.02 (넓은 m, 2 H); 2.25 (m, 1 H); 2.62 (m, 2 H); 2.83 (d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.93 (dd, J = 2.2 및 7.8 Hz, 1 H); 2.99 (dd, J = 3.4 및 14.5 Hz, 1 H); 3.23 내지 3.35 (부분적으로 가려진 m, 1 H); 3.71 (s, 2 H); 3.80 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.17 (ddd, J = 3.5, 8.5 및 11.5 Hz, 1 H); 4.41 (m, 1 H); 5.09 (m, 1 H); 5.79 (d, J = 15.7 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.7, 11.4 및 15.7 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.3 및 8.7 Hz, 1 H); 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.28 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.40 (d, J = 10.3, 1 H); 8.02 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 8.38 (d, J = 8.2 Hz, 1H). LCMS (A1): ES m/z = 709 [M-H]-; m/z = 711 [M+H]+; tR = 0.86분.
화합물 40: (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6-디메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
아르곤 하에, 둥근 바닥 플라스크에 실시예 5 (73 mg, 82.10 μmol) 및 DMF (1 mL)에 이어서 FmocValAla (50.55 mg, 123.16 μmol), HOBt (17.75 mg, 131.37 μmol), DCM (10 mL) 및 EDC (14.53 μl, 82.10 μmol)를 도입하였다. 용액을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, H2O (10 mL)로 희석하고, DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, H2O로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/iPrOH) 15 g에 의해 정제하여 화합물 40을 무색 고체로서 90 mg (99%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 0.84 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 0.86 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 0.93 (s, 3 H); 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.24 (d, J = 7.3 Hz, 3 H); 1.29 (d, J = 14.5 Hz, 1 H); 1.70 (dd, J = 10.5 및 14.5 Hz, 1 H); 1.81 (m, 1 H); 1.99 (m, 1 H); 2.25 (m, 1 H); 2.60 (m, 2 H); 2.82 (d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.91 (dd, J = 1.9 및 7.6 Hz, 1 H); 2.99 (dd, J = 3.4 및 14.5 Hz, 1 H); 3.29 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 1.9 Hz, 1 H); 3.90 (m, 1 H); 4.16 (ddd, J = 3.4, 8.0 및 11.8 Hz, 1 H); 4.20 내지 4.35 (m, 6 H); 4.41 (m, 1 H); 5.09 (m, 1 H); 5.79 (d, J = 15.7 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.7, 11.6 및 15.7 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.15 (dd, J = 2.5 및 8.6 Hz, 1 H); 7.21 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.24 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.28 (d, J = 2.5 Hz, 1 H); 7.32 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.38 내지 7.47 (m, 4 H); 7.73 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.89 (d, J = 7.9 Hz, 2 H); 8.03 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.05 (d, J = 7.9 Hz, 1 H); 8.39 (m, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 1103 [M+H]+; m/z = 1147 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.71분.
화합물 41: (S)-2-아미노-N-((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6-디메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)-3-메틸부탄아미드
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에, DCM (5 mL) 중 화합물 40 (104 mg, 76.65 μmol)에 이어서 피페리딘 (138.87 μl, 1.40 mmol)을 도입하였다. 용액을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH/H2O) 10 g에 의해 정제하여 화합물 41을 무색 고체로서 50 mg (60%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.76 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.81 (s, 9 H); 0.88 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.22 (d, J = 7.3 Hz, 3 H); 1.29 (d, J = 14.6 Hz, 1 H); 1.66 (넓은 m, 2 H); 1.70 (dd, J = 10.6 및 14.6 Hz, 1 H); 1.81 (m, 1 H); 1.92 (m, 1 H); 2.25 (m, 1 H); 2.60 (m, 2 H); 2.83 (d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.93 (dd, J = 1.9 및 7.4 Hz, 1 H); 2.99 (m, 2 H); 3.28 (dd, J = 10.4 및 13.0 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 1.9 Hz, 1 H); 4.16 (ddd, J = 3.2 및 8.2 et 11.8 Hz, 1 H); 4.29 (d, J = 6.0 Hz, 2 H); 4.34 (m, 1 H); 4.41 (m, 1 H); 5.09 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.7 및 15.5 Hz, 1 H); 6.38 (ddd, J = 3.8, 11.3 및 15.5 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.2 및 8.7 Hz, 1 H); 7.25 (m, 4 H); 7.29 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.40 (d, J = 10.4 Hz, 1 H); 8.02 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.08 (d 큰, J = 7.7 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 8.2 Hz, 1 H); 8.45 (t, J = 6.0 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 441 [M+2H]2+; m/z = 879 [M-H]-; m/z = 881 [M+H]+; m/z = 925 [M-H+HCO2H]-; tR = 0.99분.
화합물 42: 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시-벤질)-6,6-디메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-5-옥소펜탄산
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에, DCM (10 mL) 중 화합물 41 (50 mg, 51.05 μmol)에 이어서 글루타르산 무수물 (10.48 mg, 91.89 μmol)을 도입하였다. 반응 매질을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH/H2O) 10 g에 의해 정제하여 화합물 42를 무색 고체로서 42 mg (82%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.02 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.23 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.29 (d, J = 14.2 Hz, 1 H); 1.70 (m, 3 H); 1.81 (m, 1 H); 1.96 (m, 1 H); 2.18 내지 2.25 (m, 5 H); 2.61 (m, 2 H); 2.83 (d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.93 (dd, J = 2.0 및 7.4 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.1 및 14.5 Hz, 1 H); 3.29 (dd, J = 10.4 및 13.0 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.16 (m, 2 H); 4.25 내지 4.31 (m, 3 H); 4.42 (m, 1 H); 5.09 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.9 및 15.5 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.8, 11.6 et 15.5 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15 (dd, J = 2.1 및 8.7 Hz, 1 H); 7.23 (m, 4 H); 7.28 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 7.40 (d, J = 10.4 Hz, 1 H); 7.83 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 8.02 (m, 2 H); 8.35 (t, J = 6.1 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 8.0 Hz, 1 H); 12.04 (넓은 m, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 498 [M+2H]2+; m/z = 993 [M-H]-; m/z = 995 [M+H]+; tR = 1.27분.
실시예 6
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6-디메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-5-옥소펜타노에이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에, DCM (5 mL) 중 화합물 42 (23 mg, 23.10 μmol)에 이어서 DSC (8.29 mg, 32.34 μmol) 및 DIEA (5.63 μL, 32.34 μmol)를 도입하였다. 반응 매질을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, DSC 2 mg, DIEA 1μL 및 DCM (2 mL)을 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 조 잔류물을 실리카 겔 (구배 용리 DCM/iPrOH) 10 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 실시예 6을 무색 고체로서 20 mg (79%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.02 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.23 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.30 (d, J = 14.2 Hz, 1 H); 1.70 (dd, J = 10.7 및 14.7 Hz, 1 H); 1.81 (m, 3 H); 1.97 (m, 1 H); 2.21 내지 2.32 (m, 3 H); 2.61 (m, 2 H); 2.68 (t, J = 7.8 Hz, 2 H); 2.80 (넓은 s, 4 H); 2.83 (d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.94 (dd, J = 2.0 et 7.6 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.4 및 14.9 Hz, 1 H); 3.28 (dd, J = 10.5 및 13.0 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.16 (m, 2 H); 4.23 내지 4.31 (m, 3 H); 4.42 (m, 1 H); 5.10 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.9 및 15.3 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.8, 11.4 및 15.3 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.2 및 8.8 Hz, 1 H); 7.23 (m, 4 H); 7.28 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.40 (d, J = 10.5 Hz, 1 H); 7.89 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 8.02 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.06 (d, J = 7.5 Hz, 1 H); 8.34 (t, J = 6.1 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 8.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 546.5 [M+2H]2+; m/z = 1090 [M-H]-; m/z = 1092 [M+H]+; m/z = 1136 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.34분.
실시예 7
mAb-Ex6
사전에 기재된 일반적 방법을 사용하여 실시예 7을 제조하였다. hu2H11_R35-74 60 mg을 DMA (5 당량) 중 실시예 6의 10.6 mM 용액 233 μL과 2시간 동안 반응시켰다. DPBS pH 6.5 + 20% NMP 중 슈퍼덱스 200 pg 상에서 정제한 후, 아미콘 울트라-15 상에서 농축시키고, 완충제 B pH 6.5 + 5% NMP 중 NAP-25 상에서 완충제 교환하고, 스테리플립 상에서 여과하여, 실시예 7을 DAR 4.1 (HRMS)과 함께 1.98 mg/mL의 농도로 무색 맑은 용액으로서 39 mg 수득하였으며, 단량체 순도 100%이고 전반적 수율 66%이다.
SEC-HRMS: 도 2에서 무손상 ADC에 대한 스펙트럼; m/z = 149370 (네이키드 mAb); m/z = 150357 (D1); m/z = 151330 (D2); m/z = 152307 (D3); m/z = 153285 (D4); m/z = 154262 (D5); m/z = 155238 (D6); m/z = 156222 (D7).
실시예 8 내지 10의 합성: 7-Me-아자-C52 입체이성질체 1의 벤질계 아민, 글루타릴-Val-Ala-7-Me-아자-C52 벤질계 아민 입체이성질체 1의 NHS 에스테르 및 상응하는 ADC
화합물 43: (6R,13S)-(1E,3R,4S,6E)-1-(4-(아지도메틸)페닐)-8-(tert-부톡시)-3-메틸-8-옥소옥타-1,6-디엔-4-일 6-(3-클로로-4-메톡시벤질)-13-이소부틸-2,2,9,10,10-펜타메틸-4,7,11-트리옥소-3-옥사-5,8,12-트리아자테트라데칸-14-오에이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크에, DMF (5 mL) 중 단편 BC2 (1.10 g, 2.48 mmol)에 이어서 HATU (950 mg, 2.5 mmol) 및 HOAt (340 mg, 2.5 mmol)를 도입하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 단편 AD1 (1.24 g, 2.18 mmol) 및 DIEA (1.2 mL, 6.87 mmol)를 첨가하였다. 황색 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하고, H2O로 켄칭하고, AcOEt (3 x 30 mL)로 추출하였다. 유기 층을 H2O, 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/AcOEt) 200 g에 의해 정제하여 화합물 43을 백색 머랭으로서 1.55 g (77%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 55/45 부분입체이성질체 혼합물; 0.82 내지 0.89 (m, 6 H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 1.65 H); 0.91 (d, J = 7.0 Hz, 1.35 H); 0.99 내지 1.09 (m, 9 H); 1.30 (s, 9 H); 1.40 (s, 10 H); 1.50 내지 1.70 (m, 2 H); 2.38 내지 2.59 (부분적으로 가려진 m, 3 H); 2.68 (m, 1 H); 2.84 (m, 1 H); 3.79 (s, 1.35 H); 3.81 (s, 1.65 H); 4.00 내지 4.18 (m, 2 H); 4.30 (m, 1 H); 4.40 (넓은 s, 2 H); 4.92 (m, 1 H); 5.81 (d, J = 15.7 Hz, 1 H); 6.18 (dd, J = 8.3 및 16.1 Hz, 1 H); 6.45 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 6.71 (td, J = 7.3 및 15.7 Hz, 1 H); 6.94 (d, J = 8.1 Hz, 0.45 H); 6.96 (d, J = 8.1 Hz, 0.55 H); 7.04 (분할된 d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.19 (넓은 d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.30 (d, J = 7.8 Hz, 2 H); 7.32 (넓은 s, 1 H); 7.41 (d, J = 8.7 Hz, 2 H); 7.52 (d, J = 10.1 Hz, 0.45 H); 7.59 (d, J = 10.1 Hz, 0.55 H); 7.74 (m, 1 H). LCMS (A1): 55/45 부분입체이성질체 혼합물; ES m/z = 895 [M+H]+; m/z = 917 [M+Na]+; tR = 6.94-6.98분.
화합물 44 & 45: (3S,10R,16S,E)-16-((R,E)-4-(4-(아지도메틸)페닐)부트-3-엔-2-일)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6,7-트리메틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
화합물 44 & 45를 두 단계로 수득하였다.
단계 1
0℃에서 둥근 바닥 플라스크 중, DCM 11 mL 중 화합물 43 (1.50 g, 1.67 mmol)의 용액에 TFA (2.6 mL, 34.65 mmol) 및 H2O 100 μL를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 실온에서 6.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 매질을 진공 하에 증발시키고 톨루엔의 존재 하에 공-증발시켜 오렌지색 고체로서 탈보호된 중간체 1.7 g을 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 55/45 부분입체이성질체 혼합물; 0.70 내지 0.80 (m, 7.65 H); 0.90 (s, 1.35 H); 0.95 (m, 3 H); 1.01 내지 1.09 (m, 6 H); 1.38 내지 1.68 (m, 3 H); 2.40 내지 2.60 (부분적으로 가려진 m, 3 H); 2.80 내지 3.02 (m, 2 H); 3.81 (s, 1.35 H); 3.82 (s, 1.65 H); 3.96 내지 4.08 (m, 1 H); 4.18 (m, 1 H); 4.28 (m, 1 H); 4.41 (s, 2 H); 4.91 (m, 1 H); 5.83 (d, J = 15.7 Hz, 0.45 H); 5.85 (d, J = 15.7 Hz, 0.55 H); 6.18 (m, 1 H); 6.43 (d, J = 16.1 Hz, 0.45 H); 6.46 (d, J = 16.1 Hz, 0.55 H); 6.74 (m, 1 H); 7.08 내지 7.20 (m, 2 H); 7.30 (가려진 m, 0.45 H); 7.32 (d, J = 7.8 Hz, 2 H); 7.37 (d, J = 2.0 Hz, 0.55 H); 7.42 (m, 2 H); 7.76 (d, J = 8.00 Hz, 0.45 H); 7.79 (d, J = 8.00 Hz, 0.55 H); 7.86 (d, J = 10.1 Hz, 0.55 H); 8.00 (d, J = 10.1 Hz, 0.45 H); 8.11 (넓은 m, 3 H); 12.22 (넓은 m, 1 H). LCMS (A1): 55/45 부분입체이성질체 혼합물; ES m/z = 737 [M-H]-; m/z = 739 [M+H]+; tR = 1.07-1.09분.
단계 2
둥근 바닥 플라스크 중, CH3CN 25 mL 중 탈보호된 중간체 (1.43 g, 1.68 mmol)의 용액에 DIEA (3 mL, 16.23 mmol), HOAt (250.91 mg, 1.84 mmol) 및 HATU (700.91 mg, 1.84 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 용매를 제거하고, 매질을 AcOEt (200 mL)로 희석하고, 0.5 M 시트르산 및 HCl로 중화시켰다. 유기 층을 분리하고, 포화 NaHSO3, 포화 NaHCO3, 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 100 g에 의해 정제하여 화합물 44 & 45를 황색 고체로서 640 mg (53%) 수득하였다.
C7에서 부분입체이성질체를 50:50 헵탄/EtOH의 등용매 용리를 사용한 10 μm 웰크 01 SS (4-(3,5-디니트로벤즈아미도) 테트라히드로페난트렌, 레지스 테크놀로지스) 1.1 kg으로 패킹된 76.5 x 350 mm 칼럼 상에서 수행된 키랄 액체 크로마토그래피에 의해 분리하였다. 농축시킨 후, 화합물 44 (입체이성질체 1) 210 mg을 백색 고체로서 수득하고 (17%), 화합물 45 (입체이성질체 2)를 백색 고체로서 236 mg 수득하였다 (19%).
화합물 44 (입체이성질체 1):
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.60 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.62 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.98 (s, 3 H); 1.05 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.10 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.14 (s, 3 H); 1.18 (m, 1 H); 1.40 내지 1.54 (m, 2 H); 2.24 (m, 1 H); 2.48 내지 2.61 (부분적으로 가려진 m, 2 H); 2.65 (dd, J = 11.8 및 14.5 Hz, 1 H); 3.04 (dd, J = 3.2 및 14.5 Hz, 1 H); 3.55 (m, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 4.19 (m, 2 H); 4.40 (s, 2 H); 4.96 (m, 1 H); 5.91 (dd, J = 1.4 및 15.5 Hz, 1 H); 6.13 (dd, J = 8.9 및 16.1 Hz, 1 H); 6.40 (ddd, J = 3.9, 11.3 및 15.5 Hz, 1 H); 6.46 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.19 (dd, J = 2.1 및 8.7 Hz, 1 H); 7.30 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.87 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 8.36 (d, J = 9.9 Hz, 1 H); 8.40 (d, J = 8.0 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 719 [M-H]-; m/z = 721 [M+H]+; tR = 1.61분
화합물 45 (입체이성질체 2):
RMN 1H (ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.59 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.67 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.88 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 1.03 (s, 3 H); 1.10 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H); 1.21 (m, 1 H); 1.49 내지 1.60 (m, 2 H); 2.23 (m, 1 H); 2.46 내지 2.61 (부분적으로 가려진 m, 2 H); 2.71 (dd, J = 11.3 및 14.5 Hz, 1 H); 2.98 (dd, J = 3.7 및 14.5 Hz, 1 H); 3.48 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 4.05 (m, 1 H); 4.11 (ddd, J = 3.7, 7.6 및 11.3 Hz, 1 H); 4.40 (s, 2 H); 4.90 (m, 1 H); 5.93 (d, J = 15.7 Hz, 1 H); 6.14 (dd, J = 8.7 및 16.1 Hz, 1 H); 6.47 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 6.51 (ddd, J = 5.2, 10.3 및 15.5 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.21 (dd, J = 2.4 및 8.7 Hz, 1 H); 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.37 (d, J = 2.4 Hz, 2 H); 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.87 (d, J = 6.9 Hz, 1 H); 7.89 (d, J = 9.0 Hz, 1 H); 8.51 (d, J = 7.6 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 719 [M-H]-; m/z = 721 [M+H]+; tR = 1.61분.
화합물 46: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-(3-(4-(아지도메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6,7-트리메틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
0℃에서, 아르곤 하에, 둥근 바닥 플라스크 중 DCM 중 (10 mL) 중 화합물 44 (154 mg, 213.51 μmol)의 용액에 m-CPBA (80 mg, 324.51 μmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 5일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (15 mL)으로 희석하고 포화 NaHCO3 (6 mL) 및 Na2S2O3 (6 mL)으로 15분 동안 교반하였다. 유기 층을 분리하고, 포화 염수 (2 x 3 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 화합물 46을 백색 고체로서 150 mg 수득하였다 (정량적).
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 60/40 부분입체이성질체 혼합물; 0.75 (d, J = 6.8 Hz, 1.8 H); 0.79 (d, J = 6.8 Hz, 3 H); 0.85 (d, J = 6.8 Hz, 1.2 H); 0.95 내지 0.99 (m, 4.2 H); 1.02 내지 1.09 (m, 4.8 H); 1.15 (s, 1.8 H); 1.18 (s, 1.2 H); 1.20 (m, 0.6 H); 1.38 (m, 0.4 H); 1.59 내지 1.62 (m, 2 H); 1.80 (m, 0.6 H); 1.89 (m, 0.4 H); 2.25 (m, 0.6 H); 2.40 내지 2.71 (부분적으로 가려진 m, 2.4 H); 2.96 내지 3.08 (m, 2 H); 3.54 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.82 (d, J = 1.9 Hz, 0.4 H); 3.92 (d, J = 1.9 Hz, 0.6 H); 4.14 내지 4.29 (m, 2 H); 4.40 내지 4.50 (m, 2 H); 5.11 (m, 1 H); 5.85 (dd, J = 2.0 및 15.5 Hz, 0.6 H); 5.95 (dd, J = 2.0 및 15.5 Hz, 0.4 H); 6.38 (m, 1 H); 7.04 (분할된 d, J = 8.8 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.2 및 8.8 Hz, 0.6 H); 7.19 (dd, J = 2.2 및 8.8 Hz, 0.4 H); 7.28 (d, J = 2.2 Hz, 0.6 H); 7.30 (d, J = 2.2 Hz, 0.4 H); 7.30 내지 7.40 (m, 4 H); 7.89 (d, J = 8.1 Hz, 0.6 H); 7.92 (d, J = 8.1 Hz, 0.4 H); 8.29 (d, J = 10.0 Hz, 0.6 H); 8.32 (d, J = 8.1 Hz, 0.6 H); 8.35 (d, J = 10.0 Hz, 0.4 H); 8.40 (d, J = 8.1 Hz, 0.4 H). LCMS (A1): ES m/z = 735 [M-H]-; m/z = 737 [M+H]+; tR = 1.52분.
실시예 8
(3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-(3-(4-(아미노메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6,7-트리메틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
0℃에서, 둥근 바닥 플라스크 중, DCM (3 mL) 및 MeOH (3 mL) 중 화합물 46 (60 mg, 81.38 μmol)의 용액에 H2O 1 mL 중 TCEP (38.9 mg, 134.3 μmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 35시간 동안 교반한 다음, DCM (15 mL) 및 포화 NaHCO3으로 희석하였다. 10분 동안 교반한 후, 유기 층을 분리하고, 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 5 g에 의해 정제하여 실시예 8을 백색 고체로서 23 mg (40%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 60/40 부분입체이성질체 혼합물; 0.77 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 0.81 (분할된 d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.88 (d, J = 7.0 Hz, 1.4 H); 0.95 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 0.98 (s, 1.8 H); 1.00 (s, 1.2 H); 1.02 내지 1.09 (m, 4.8 H); 1.17 (s, 1.8 H); 1.19 (s, 1.2 H); 1.22 (m, 0.6 H); 1.40 (m, 0.4 H); 1.51 내지 1.64 (m, 2 H); 1.78 (m, 0.6 H); 1.89 (m, 0.4 H); 2.28 (m, 0.6 H); 2.40 내지 2.71 (부분적으로 가려진 m, 2.4 H); 2.96 (dd, J = 2.2 및 7.5 Hz, 0.6 H); 2.99 (dd, J = 2.2 및 7.5 Hz, 0.4 H); 3.03 (m, 1 H); 3.55 (m, 1 H); 3.70 (s, 1.2 H); 3.72 (s, 1.8 H); 3.78 (d, J = 2.2 Hz, 0.4 H); 3.81 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.2 Hz, 0.6 H); 4.12 내지 4.30 (m, 2 H); 5.12 (m, 1 H); 5.84 (dd, J = 1.8 및 15.6 Hz, 0.6 H); 5.96 (dd, J = 1.8 및 15.6 Hz, 0.4 H); 6.39 (m, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.16 내지 7.38 (m, 6 H); 7.90 (d, J = 8.1 Hz, 0.6 H); 7.93 (d, J = 8.1 Hz, 0.4 H); 8.28 (d, J = 10.0 Hz, 0.6 H); 8.32 (d, J = 8.1 Hz, 0.6 H); 8.37 (d, J = 10.0 Hz, 0.4 H); 8.41 (d, J = 8.1 Hz, 0.4 H). LCMS (A1): ES m/z = 709 [M-H]-; m/z = 711 [M+H]+; tR = 0.86분.
화합물 47: (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-1-(((S)-1-((4-(3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6,7-트리메틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
아르곤 하에, 둥근 바닥 플라스크에 실시예 8 (110 mg, 154.65 μmol) 및 DMF (2 mL)에 이어서 FmocValAla (90 mg, 219 μmol), HOBt (30 mg, 222μmol), DCM (10 mL) 및 EDC (35 μl, 197.52 μmol)를 도입하였다. 용액을 실온에서 3h30 동안 교반한 다음, H2O (10 mL)로 켄칭하고, DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 포화 NaHCO3, 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 톨루엔의 존재 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 15 g에 의해 정제하여 화합물 47을 백색 고체로서 49 mg (46%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 60/40 부분입체이성질체 혼합물; 0.76 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 0.80 (m, 3 H); 0.82 내지 0.89 (m, 6.4 H); 0.95 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 0.98 (s, 1.8 H); 1.00 (s, 1.2 H); 1.02 내지 1.09 (m, 4.8 H); 1.17 (s, 1.8 H); 1.19 (s, 1.2 H); 1.20 내지 1.32 (m, 3.6 H); 1.40 (m, 0.4 H); 1.51 내지 1.63 (m, 2 H); 1.78 (m, 0.6 H); 1.85 (m, 0.4 H); 2.00 (m, 1 H); 2.27 (m, 0.6 H); 2.40 내지 2.72 (부분적으로 가려진 m, 2.4 H); 2.96 (m, 1 H); 3.04 (m, 1 H); 3.55 (m, 1 H); 3.77 (d, J = 2.2 Hz, 0.4 H); 3.81 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.2 Hz, 0.6 H); 3.90 (m, 1 H); 4.15 내지 4.38 (m, 6 H); 5.12 (m, 1 H); 5.85 (dd, J = 1.8 및 15.6 Hz, 0.6 H); 5.95 (dd, J = 1.8 및 15.6 Hz, 0.4 H); 6.39 (m, 1 H); 7.05 (분할된 d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15 내지 7.48 (m, 19 H); 7.73 (t, J = 8.1 Hz, 2 H); 7.90 (d, J = 8.1 Hz, 2.6 H); 7.92 (d, J = 8.1 Hz, 0.4 H); 8.05 (d, J = 8.1 Hz, 1 H); 8.25 내지 8.45 (m, 3 H). LCMS (A1): ES m/z = 552 [M+2H]2+; m/z = 1103 [M+H]+; m/z = 1147 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.55-1.57분.
화합물 48: (2S)-2-아미노-N-((2S)-1-((4-((2R,3R)-3-((1S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6,7-트리메틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)-3-메틸부탄아미드
둥근 바닥 플라스크에서, 피페리딘 (60 μL, 600.6 μmol)을 DCM (5 mL) 중 화합물 47 (50 mg, 45.30 μmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시키고 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 5 g 상에서 정제하여 알파 및 베타 에폭시드 70 mg을 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 60/40 부분입체이성질체 혼합물; 0.75 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 0.80 (m, 3 H); 0.82 내지 0.92 (m, 6.4 H); 0.96 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 0.98 (s, 1.8 H); 1.00 (s, 1.2 H); 1.02 내지 1.09 (m, 4.8 H); 1.15 (s, 1.8 H); 1.19 (s, 1.2 H); 1.20 내지 1.42 (m, 4 H); 1.50 내지 1.70 (가려진 m, 2 H); 1.78 (m, 0.6 H); 1.85 (m, 0.4 H); 2.00 (m, 1 H); 2.25 (m, 0.6 H); 2.40 내지 2.72 (부분적으로 가려진 m, 2.4 H); 2.92 내지 3.08 (m, 3 H); 3.54 (m, 1 H); 3.79 (d, J = 2.1 Hz, 0.4 H); 3.81 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.1 Hz, 0.6 H); 4.13 내지 4.41 (m, 6 H); 5.12 (m, 1 H); 5.85 (d, J = 15.4 Hz, 0.6 H); 5.93 (d, J = 15.4 Hz, 0.4 H); 6.38 (m, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15 내지 7.32 (m, 6 H); 7.90 (d, J = 8.3 Hz, 0.6 H); 7.93 (d, J = 8.3 Hz, 0.4 H); 8.10 내지 8.55 (m, 7 H). LCMS (A1): ES m/z = 441 [M+2H]2+; m/z = 879 [M-H]-; m/z = 881 [M+H]+; m/z = 925 [M-H+HCO2H]-; tR = 0.92분.
알파 및 베타 에폭시드를 70:30 헵탄/EtOH의 등용매 용리를 사용한 10 μm 키랄팩 AD (실리카 겔 지지체 상에 코팅된 아밀로스 트리스-3,5-디메틸페닐카르바메이트, 키랄 테크놀로지스 유럽) 1.1 kg으로 패킹된 76 x 350 mm 칼럼 상에서 수행된 키랄 액체 크로마토그래피에 의해 분리하였다. 농축시킨 후, 화합물 48 28 mg을 백색 고체로서 수득하고 (70%), 알파 에폭시드 19 mg을 백색 고체로서 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.75 (d, J = 7.0 Hz, 6 H); 0.80 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.88 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.98 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 6 H); 1.17 (s, 3 H); 1.23 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.35 (m, 1 H); 1.50 내지 1.68 (m, 2 H); 1.78 (m, 1 H); 1.91 (m, 1 H); 2.26 (m, 1 H); 2.58 내지 2.70 (m, 2 H); 2.96 (dd, J = 1.9 및 7.7 Hz, 1 H); 2.99 (d, J = 4.8 Hz, 1 H); 3.02 (dd, J = 3.3 및 14.8 Hz, 1 H); 3.53 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 1.9 Hz, 1 H); 4.10 내지 4.23 (m, 3 H); 4.28 (d, J = 6.1 Hz, 2 H); 4.35 (m, 1 H); 5.11 (m, 1 H); 5.83 (dd, J = 1.9 및 15.2 Hz, 1 H); 6.37 (ddd, J = 4.0, 11.2 및 15.2 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.8 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.4 및 8.8 Hz, 1 H); 7.26 (s, 4 H); 7.29 (d, J = 2.4 Hz, 1 H); 7.90 (d, J = 8.2 Hz, 1 H); 8.08 (넓은 d, J = 7.7 Hz, 1 H); 8.29 (d, J = 10.1 Hz, 1 H); 8.33 (d, J = 8.2 Hz, 1 H); 8.46 (t, J = 6.7 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 441 [M+2H]2+; m/z = 879 [M-H]-; m/z = 881 [M+H]+; m/z = 925 [M-H+HCO2H]-; tR = 0.92분.
화합물 49: 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6,7-트리메틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-5-옥소펜탄산
아르곤 하에, 둥근 바닥 플라스크 중 DCM (4 mL) 중 글루타르산 무수물 (3.78 mg, 32.44 μmol)의 용액을 DCM (9 mL) 중 화합물 48 (26 mg, 29.5 μmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시키고 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH/H2O) 2.5 g 상에서 정제하여 화합물 49를 백색 고체로서 18 mg (61%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.78 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.80 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 6 H); 1.15 (s, 3 H); 1.23 (넓은 d, J = 7.0 Hz, 4 H); 1.49 내지 1.61 (m, 2 H); 1.70 (m, 2 H); 1.78 (m, 1 H); 1.97 (m, 1 H); 2.20 (m, 4 H); 2.25 (m, 1 H); 2.62 (m, 2 H); 2.95 (m, 1 H); 3.02 (m, 1 H); 3.53 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.88 (s, 1 H); 4.10 내지 4.22 (m, 3 H); 4.24 내지 4.31 (m, 3 H); 5.11 (m, 1 H); 5.83 (d, J = 15.7 Hz, 1 H); 6.36 (m, 1 H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.19 (넓은 d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.23 (m, 4 H); 7.29 (넓은 s, 1 H); 7.87 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 7.90 (d, J = 8.1 Hz, 1 H); 8.06 (d 큰, J = 7.3 Hz, 1 H); 8.29 (d, J = 10.1 Hz, 1 H); 8.37 (m, 2 H); 12.0 (넓은 m, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 993 [M-H]-; m/z = 995 [M+H]+; tR = 1.21분.
실시예 9
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6,7-트리메틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-5-옥소펜타노에이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, DCM (5 mL) 중 화합물 49 (15 mg, 15.07 μmol)의 용액에 DSC (5.63 mg, 21.09 μmol) 및 DIEA (3.56 μL, 21.09 μmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 2.5 g 상에서 정제하여 실시예 9를 백색 고체로서 7.7 mg (47%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.78 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.80 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.99 (s, 3 H); 1.04 (d, J = 7.2 Hz, 6 H); 1.18 (s, 3 H); 1.26 (m, 4 H); 1.57 (m, 2 H); 1.79 (m, 1 H); 1.83 (m, 2 H); 1.99 (m, 1 H); 2.22 내지 2.33 (m, 3 H); 2.60 a 2.71 (m, 4 H); 2.82 (s, 4 H); 2.97 (dd, J = 2.1 및 7.7 Hz, 1 H); 3.04 (dd, J = 3.4 및 14.7 Hz, 1 H); 3.55 (m, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 4.19 (m, 3 H); 4.26 내지 4.34 (m, 3 H); 5.12 (m, 1 H); 5.86 (dd, J = 2.0 및 15.7 Hz, 1 H); 6.38 (ddd, J = 3.8, 11.2 및 15.7 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.19 (dd, J = 2.2 및 8.7 Hz, 1 H); 7.26 (m, 4 H); 7.29 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.91 (m, 2 H); 8.09 (m, 1 H); 8.29 (d, J = 9.9 Hz, 1 H); 8.35 (m, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 1092 [M+H]+; m/z = 1136 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.26분.
실시예 10
mAb-Ex9
사전에 기재된 일반적 방법을 사용하여 실시예 10을 제조하였다. hu2H11_R35-74 60 mg을 DMA (5 당량) 중 실시예 9의 10.78 mM 용액 198 μL과 2시간 동안 반응시켰다. 이 때, 실시예 9 (3 당량)의 용액 120 μL를 첨가하고, 매질을 2시간 동안 교반하였다. DPBS pH 6.5 + 20% NMP 중 슈퍼덱스 200 pg 상에서 정제한 후, 아미콘 울트라-15 상에서 농축시키고, 완충제 B pH 6.5 + 5% NMP 중 PD-10 상에서 완충제 교환하고, 스테리플립 상에서 여과하여, 실시예 10을 DAR 4.7 (HRMS)과 함께 2.23 mg/mL의 농도로 무색 맑은 용액으로서 46 mg 수득하였으며, 단량체 순도 99.2%이고 전반적 수율 78%이다.
SEC-HRMS: 도 3에서 무손상 ADC에 대한 스펙트럼; m/z = 150345 (D1); m/z = 151319 (D2); m/z = 152297 (D3); m/z = 153274 (D4); m/z = 154251 (D5); m/z = 155222 (D6); m/z = 156202 (D7); m/z = 157183 (D8).
실시예 11 내지 14의 합성: 3-(S)-네오펜틸-7-Me-아자-C52 입체이성질체 1의 벤질계 아민, 글루타릴-Val-Ala-3-(S)-네오펜틸-7-Me-아자-C52 벤질계 아민 입체이성질체 1의 NHS 에스테르 및 상응하는 ADC
화합물 50: (6R,13S)-(1E,3R,4S,6E)-8-(tert-부톡시)-1-(4-(히드록시메틸)페닐)-3-메틸-8-옥소옥타-1,6-디엔-4-일 6-(3-클로로-4-메톡시벤질)-2,2,9,10,10-펜타메틸-13-네오펜틸-4,7,11-트리옥소-3-옥사-5,8,12-트리아자테트라데칸-14-오에이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, DMF (20 mL) 중 단편 BC2 (742 mg, 1.68 mmol)의 용액에 HATU (716 mg, 1.83 mmol) 및 HOAt (251 mg, 1.83 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, DMF (10 mL) 및 DIEA (981 μL, 5.56 mmol) 중 단편 AD1 (730 mg, 1.59 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 매질을 얼음 (200 g)으로 희석하고, AcOEt (4 x 200 mL)로 추출하였다. 유기 층을 H2O (80 mL), 포화 염수 (2 x 80 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 2회의 연속적 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였으며, 제1은 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 300 g 상이며, 제2는 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 70 g 상이고, 화합물 50을 무색 발포체로서 428 mg (30%) 수득하였다.
화합물 51: (2E,5S,6R,7E)-5-(((2S)-2-(3-((R)-2-아미노-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)-프로판아미도)-2,2-디메틸부탄아미도)-4,4-디메틸펜타노일)옥시)-8-(4-(히드록시메틸)페닐)-6-메틸옥타-2,7-디엔산
둥근 바닥 플라스크에, 화합물 50 (428 mg, 483.87 μmol) 및 DCM (27 mL)을 도입하였다. 용액을 0℃에서 냉각시킨 다음, TFA (8 mL, 106.62 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고 감압 하에 톨루엔 (3 x 100 mL)과 함께 공-증발시켰다. 조 오일을 1:1 AcOEt/H2O (75 mL)로 희석하고, 2M NaOH (250 μL)로 pH 6-7까지 중화시켰다. 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 층을 분리하였다. 수성 층을 AcOEt (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 포화 염수 (2 x 15 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 화합물 51을 무색 발포체로서 374 mg 수득하였다 (정량적).
화합물 52: (3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((R,E)-4-(4-(히드록시메틸)-페닐)부트-3-엔-2-일)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, CH3CN (60 mL) 중 화합물 51 (352 mg, 483.31 μmol)의 용액에 HATU (208 mg, 531.64 mmol), HOAt (73.09 mg, 531.64 μmol) 및 DIEA (244.52 μL, 1.45 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 그 후, 반응 매질을 0.5 N 시트르산을 사용하여 pH 4까지 중화시키고, 진공 하에 부분적으로 농축시키고, AcOEt (150 mL)로 추출하였다. 유기 층을 포화 NaHCO3 (10 mL), 포화 염수 (3 x 10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 15 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 52를 무색 발포체로서 188 mg (54%) 수득하였다.
화합물 53: (3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-16-((R,E)-4-(4-(((트리이소프로필실릴)옥시)메틸)페닐)부트-3-엔-2-일)-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
0℃에서, 아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, DCM (7 mL) 중 화합물 52 (188 mg, 264.68 μmol)의 용액에 1H-이미다졸 (83.72 mg, 1.2 mmol) 및 1M 클로로트리이소프로필실란 (134.15 μl)을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, 포화 NH4Cl로 켄칭하고, 15분 동안 교반하였다. 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (3 x 25 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 1M NaHSO4 (10 mL), 포화 NaHCO3 (10 mL), 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 10 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 53을 무색 발포체로서 137 mg (59%) 수득하였다.
실시예 11
(3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(히드록시메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
실시예 11을 두 단계로 제조하였다.
단계 1
0℃에서 아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, DCM (5.5 mL) 중 화합물 53 (137 mg, 158.08 μmol)의 용액에 DCM (2 mL) 중 m-CPBA (50.66 mg, 205.51 μmol)의 용액을 첨가하고, 반응 매질을 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 2시간 교반 후 m-CPBA 39 mg을 2회 첨가하였다. 교반 16시간 후, 혼합물을 포화 NaHCO3 (30 mL) 및 Na2S2O3 (30 mL)으로 켄칭하고, 15분 동안 교반하고, DCM (40 mL)으로 희석하였다. 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM (2 x 20 mL)으로 추출하였다. 유기 층을 포화 염수 (2 x 8 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 알파 및 베타 에폭시드를 무색 고체로서 160 mg 수득하였다 (정량적).
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 60/40 부분입체이성질체 혼합물; 0.80 내지 0.91 (m, 12 H); 0.97 내지 1.09 (m, 24 H); 1.12 내지 1.21 (m, 6 H); 1.32 (d, J = 14.7 Hz, 0.6 H); 1.40 (d, J = 14.7 Hz, 0.4 H); 1.70 내지 1.87 (m, 1 H); 1.90 (dd, J = 10.1 및 14.7 Hz, 0.4 H); 1.97 (dd, J = 10.1 및 14.7 Hz, 0.6 H); 2.28 (m, 0.6 H); 2.40 (m, 0.4 H); 2.55 내지 2.79 (m, 2 H); 2.90 내지 3.00 (m, 2 H); 3.44 (m, 1 H); 3.79 (d, J = 2.1 Hz, 0.4 H); 3.80 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.1 Hz, 0.6 H); 4.03 내지 4.22 (m, 2 H); 4.78 (s, 0.8 H); 4.80 (s, 1.2 H); 5.03 (m, 1 H); 5.90 (dd, J = 1.5 및 15.5 Hz, 0.6 H); 5.99 (dd, J = 1.5 및 15.5 Hz, 0.4 H); 6.40 내지 6.55 (m, 1 H); 7.02 내지 7.07 (m, 1 H); 7.13 내지 7.38 (m, 6 H); 7.85 내지 7.93 (m, 2 H); 8.40 (d, J = 7.3 Hz, 0.6 H); 8.51 (d, J = 7.3 Hz, 0.4 H). LCMS (A1): ES m/z = 880 [M-H]-; m/z = 882 [M+H]+; m/z = 926 [M-H+HCO2H]-; tR = 2.05-2.06분.
단계 2
0℃에서 아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, THF (7.5 mL) 중 알파 및 베타 에폭시드 (177 mg, 200.53 μmol)의 용액에 1M TBAF (221 μL, 221 μmol)를 적가하였다. 실온에서 2시간 동안 교반한 후, TBAF 50 μL를 첨가하고, 3.5시간 동안 교반하였다. 반응 매질을 H2O (9 mL)로 희석하고, 10분 동안 교반하고, DCM (3 x 25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 염수 (3 x 8 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 알파 및 베타 에폭시드를 무색 고체로서 210 mg 수득하였다 (정량적).
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 60/40 부분입체이성질체 혼합물; 0.82 내지 1.25 (m, 21 H); 1.32 (d, J = 14.5 Hz, 0.6 H); 1.42 (d, J = 14.5 Hz, 0.4 H); 1.80 (m, 1 H); 1.91 (dd, J = 10.0 및 14.5 Hz, 0.4 H); 1.98 (dd, J = 10.0 및 14.5 Hz, 0.6 H); 2.22 내지 2.48 (m, 1 H); 2.55 내지 2.78 (m, 2 H); 2.89 내지 3.03 (m, 2 H); 3.44 (m, 1 H); 3.79 (d, J = 2.2 Hz, 0.4 H); 3.80 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.2 Hz, 0.6 H); 4.04 내지 4.22 (m, 2 H); 4.48 (d, J = 5.8 Hz, 0.8 H); 4.50 (d, J = 5.8 Hz, 1.2 H); 5.03 (m, 1 H); 5.16 (t, J = 5.8 Hz, 0.4 H); 5.19 (t, J = 5.8 Hz, 0.6 H); 5.89 (dd, J = 1.9 및 15.6 Hz, 0.6 H); 5.99 (dd, J = 1.9 및 15.6 Hz, 0.4 H); 6.40 내지 6.52 (m, 1 H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 0.6 H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 0.4 H); 7.16 내지 7.37 (m, 6 H); 7.83 내지 7.94 (m, 2 H); 8.39 (d, J = 7.4 Hz, 0.6 H); 8.50 (d, J = 7.4 Hz, 0.4 H). LCMS (A1): ES m/z = 724 [M-H]-; m/z = 726 [M+H]+; tR = 1.29분.
알파 및 베타 에폭시드를 75:25 헵탄/EtOH의 등용매 용리를 사용한 10 μm 키랄팩 AD (실리카 겔 지지체 상에 코팅된 아밀로스 트리스-3,5-디메틸페닐카르바메이트, 키랄 테크놀로지스 유럽) 1.1 kg으로 패킹된 76 x 350 mm 칼럼 상에서 수행된 키랄 액체 크로마토그래피에 의해 분리하였다. 농축시킨 후, 실시예 11 66 mg을 백색 고체로서 수득하고 (45%), 알파 에폭시드 45 mg을 백색 고체로서 수득하였다 (31%).
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.82 내지 0.89 (m, 12 H); 0.99 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 6.9 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H); 1.34 (d, J = 14.6 Hz, 1 H); 1.80 (m, 1 H); 1.98 (dd, J = 10.1 및 14.6 Hz, 1 H); 2.26 (m, 1 H); 2.61 (m, 1 H); 2.69 (dd, J = 11.1 및 14.6 Hz, 1 H); 2.91 (dd, J = 2.1 및 7.8 Hz, 1 H); 2.94 (dd, J = 3.7 및 14.6 Hz, 1 H); 3.42 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.91 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 4.03 내지 4.14 (m, 2 H); 4.50 (d, J = 5.8 Hz, 2 H); 5.03 (m, 1 H); 5.19 (t, J = 5.8 Hz, 1 H); 5.89 (dd, J = 2.1 및 15.5 Hz, 1 H); 6.43 (ddd, J = 4.7, 10.9 및 15.5 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.3 및 8.7 Hz, 1 H); 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.30 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 1 H); 7.92 (d, J = 7.1 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 9.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 724 [M-H]-; m/z = 726 [M+H]+; tR = 1.29분.
화합물 54: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(아지도메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, THF (5 mL) 중 실시예 11 (66 mg, 90.87 μmol)의 용액에 0℃에서, DPPA (100.23 μl, 454.36 μmol) 및 DBU (69.27 μl, 454.36 μmol)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 5시간 동안 교반한 다음, H2O로 희석하고, AcOEt (2 x 15 mL)로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 포화 염수 (2 x 5 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/iPrOH) 15 g에 의해 정제하여 화합물 54를 무색 고체로서 64 mg 수득하였다 (94%).
실시예 12
(3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(아미노메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
둥근 바닥 플라스크 중, DCM (3 mL), MeOH (3 mL) 및 H2O (400 μL) 중 화합물 54 (64 mg, 85.18 μmol)의 용액에 TCEP (26.86 mg, 93.70 μmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (15 mL) 및 포화 NaHCO3으로 희석하고, 10분 동안 교반하고, DCM (3 x 15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고 아미노-프로필 개질된 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 4.5 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 실시예 12를 백색 고체로서 42 mg 수득하였다 (68%).
화합물 55: (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2R,3R)-3-((1S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, 실시예 12 (42 mg, 57.91 μmol) 및 DMF (1 mL)에 이어서 FmocValAla (34.44 mg, 86.86 μmol), HOBt (13.20 mg, 93.81 μmol), DCM (10 mL) 및 EDC (10.36 μl, 57.91 μmol)를 도입하였다. 반응 매질을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, H2O (15 mL)로 희석하고, 10분 동안 실온에서 교반하고, DCM (3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 화합물 55를 백색 고체로서 83 mg 수득하였다 (정량적).
화합물 56: (2S)-2-아미노-N-((2S)-1-((4-((2R,3R)-3-((1S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)-3-메틸부탄아미드
둥근 바닥 플라스크에서, 피페리딘 (57.8 μL, 579.10 μmol)을 DCM (10 mL) 중 화합물 55 (64.73 mg, 57.91 μmol)의 용액에 첨가하였다. 5시간 동안 교반한 후, 피페리딘 57.8 μL를 첨가하고, 매질을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 매질을 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 DCM/MeOH/H2O) 15 g에 의해 정제하여 화합물 56을 무색 고체로서 30 mg (58%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.86 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.82 내지 0.90 (m, 15 H); 1.00 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H); 1.24 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.34 (d, J = 14.6 Hz, 1 H); 1.66 (넓은 m, 2 H); 1.80 (m, 1 H); 1.91 (m, 1 H); 1.98 (dd, J = 10.2 및 14.6 Hz, 1 H); 2.27 (m, 1 H); 2.60 (m, 1 H); 2.69 (dd, J = 11.1 및 14.6 Hz, 1 H); 2.91 (dd, J = 2.0 및 7.7 Hz, 1 H); 2.94 (dd, J = 3.7 및 14.6 Hz, 1 H); 2.99 (d, J = 4.9 Hz, 1 H); 3.43 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.91 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.03 내지 4.12 (m, 2 H); 4.29 (d, J = 6.2 Hz, 2 H); 4.34 (m, 1 H); 5.03 (m, 1 H); 5.89 (dd, J = 1.8 및 15.6 Hz, 1 H); 6.43 (ddd, J = 4.8, 10.9 및 15.6 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.2 및 8.6 Hz, 1 H); 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.32 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 1 H); 7.92 (d, J = 7.2 Hz, 1 H); 8.07 (넓은 d, J = 7.9 Hz, 1 H); 8.40 (d, J = 7.3 Hz, 1 H); 8.45 (t, J = 6.2 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 448 [M+2H]2+; m/z = 893 [M-H]-; m/z = 895 [M+H]+; m/z = 939 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.29분.
화합물 57: 5-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2R,3R)-3-((1S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-5-옥소펜탄산
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중 DCM (2 mL) 중 글루타르산 무수물 (4.29 mg, 36.85 μmol)의 용액을 DCM (6 mL) 중 화합물 56 (30 mg, 33.5 μmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 매질을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 진공 하에 부분적으로 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH/H2O) 2.5 g 상에서 정제하여 화합물 57을 무색 래커로서 34 mg 수득하였다 (정량적).
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.80 내지 0.89 (m, 18 H); 0.99 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H); 1.24 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.34 (d, J = 14.6 Hz, 1 H); 1.70 (m, 2 H); 1.80 (m, 1 H); 1.97 (m, 2 H); 2.19 (m, 4 H); 2.26 (m, 1 H); 2.60 (m, 1 H); 2.70 (dd, J = 11.2 및 14.6 Hz, 1 H); 2.90 (dd, J = 2.2 및 7.8 Hz, 1 H); 2.95 (dd, J = 3.7 및 14.6 Hz, 1 H); 3.43 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.91 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.03 내지 4.18 (m, 3 H); 4.22 내지 4.33 (m, 3 H); 5.03 (m, 1 H); 5.90 (d, J = 15.5 Hz, 1 H); 6.43 (ddd, J = 4.9, 11.0 및 15.5 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.19 내지 7.28 (m, 5 H); 7.32 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.85 (넓은 d, J = 8.9 Hz, 2 H); 7.91 (d, J = 7.2 Hz, 1 H); 8.06 (넓은 d, J = 7.5 Hz, 1 H); 8.36 (넓은 t, J = 6.6 Hz, 1 H); 8.42 (d, J = 7.8 Hz, 1 H); 12.10 (넓은 m, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 1007 [M-H]-; m/z = 1009 [M+H]+; tR = 1.21분.
실시예 13
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(((2S)-1-(((2S)-1-((4-((2R,3R)-3-((1S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-5-옥소펜타노에이트
아르곤 하에 둥근 바닥 플라스크 중, DCM (8 mL) 중 화합물 57 (33 mg, 32.69 μmol)의 용액에 DSC (11.72 mg, 45.76 μmol) 및 DIEA (7.7 μL, 45.76 μmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시키고 실리카 겔 (구배 용리 DCM/iPrOH) 2.5 g 상에서 2회의 연속적 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 실시예 13을 무색 고체로서 17.9 mg (49%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.80 내지 0.90 (m, 18 H); 1.00 (s, 3 H); 1.04 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H); 1.24 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.34 (d, J = 14.6 Hz, 1 H); 1.80 (m, 1 H); 1.83 (m, 2 H); 1.98 (m, 2 H); 2.26 (m, 1 H); 2.29 (m, 2 H); 2.60 (m, 1 H); 2.68 (t, J = 7.5 Hz, 2 H); 2.70 (dd, J = 11.2 및 14.6 Hz, 1 H); 2.80 (s, 4 H); 2.91 (dd, J = 2.2 및 7.6 Hz, 1 H); 2.95 (dd, J = 3.7 및 14.6 Hz, 1 H); 3.43 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.06 내지 4.15 (m, 2 H); 4.18 (dd, J = 6.9 및 8.7 Hz, 1 H); 4.21 내지 4.33 (m, 3 H); 5.03 (m, 1 H); 5.89 (d, J = 15.5 Hz, 1 H); 6.43 (ddd, J=4.9, 10.9 및 15.5 Hz, 1 H); 7.02 (d, J=8.7 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.3 및 8.7 Hz, 1 H); 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.25 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.31 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 7.84 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.89 (m, 2 H); 8.04 (d, J = 7.5 Hz, 1 H); 8.33 (t, J = 6.5 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 7.6 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 796; m/z = 1104 [M-H]-; m/z = 1106 [M+H]+; m/z = 1150 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.26분.
실시예 14
mAb-Ex13
사전에 기재된 일반적 방법을 사용하여 실시예 14를 제조하였다. hu2H11_R35-74 60 mg을 DMA (5 당량) 중 실시예 13의 10.05 mM 용액 200 μL과 2시간 동안 반응시켰다. 이 때, 실시예 13 (4.5 당량)의 용액 180 μL를 첨가하고, 매질을 2시간 동안 교반하였다. 완충제 B pH 6.5 + 10% NMP 중 슈퍼덱스 200 pg 상에서 정제한 후, 아미콘 울트라-15 상에서 농축시키고, 완충제 B pH 6.5 + 5% NMP 중 PD-10 상에서 완충제 교환하고, 스테리플립 상에서 여과하여, 실시예 14를 DAR 3.5 (HRMS)와 함께 2 mg/mL의 농도로 무색 맑은 용액으로서 46 mg 수득하였으며, 단량체 순도 99.7%이고 전반적 수율 77%이다.
SEC-HRMS: 도 4에서 무손상 ADC에 대한 스펙트럼; m/z = 149336 (네이키드 mAb); m/z = 150328 (D1); m/z = 151319 (D2); m/z = 152311 (D3); m/z = 153302 (D4); m/z = 154295 (D5); m/z = 155290 (D6); m/z = 156282 (D7).
실시예 15
(3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((S)-1-(3-(4-(히드록시-메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-3,6,6-트리메틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
실시예 15를 반응식 2에 도시된 일반적 경로 B 및 실시예 4 및 11에 대해 기재된 것에 따라 제조하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 65/35 부분입체이성질체 혼합물; 0.93 내지 1.26 (m, 12 H); 1.75 (m, 0.65 H); 1.83 (m, 0.35 H); 2.22 (m, 0.65 H); 2.41 (m, 0.35 H); 2.55 내지 2.70 (m, 2 H); 2.81 (d, J = 13.7 Hz, 0.65 H); 2.88 (d, J = 13.7 Hz, 0.35 H); 2.93 (dd, J = 2.1 및 8.2 Hz, 0.65 H); 3.00 (m, 1.35 H); 3.22 내지 3.35 (부분적으로 가려진 m, 1 H); 3.77 (d, J = 2.1 Hz, 0.35 H); 3.81 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.1 Hz, 0.65 H); 4.25 내지 4.39 (m, 1.65 H); 4.34 (m, 0.35 H); 4.48 (d, J = 6.0 Hz, 0.7 H); 4.50 (d, J = 6.0 Hz, 1.3 H); 5.08 (m, 1 H); 5.17 (t, J = 6.0 Hz, 0.35 H); 5.20 (t, J = 6.0 Hz, 0.65 H); 5.78 (dd, J = 1.9 및 15.5 Hz, 0.65 H); 5.89 (dd, J = 1.9 및 15.5 Hz, 0.35 H); 6.40 (m, 1 H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.2 및 8.7 Hz, 0.65 H); 7.19 (dd, J = 2.2 및 8.7 Hz, 0.35 H); 7.20 내지 7.34 (m, 5 H); 7.58 (넓은 d, J = 10.2 Hz, 0.65 H); 7.64 (넓은 d, J = 10.2 Hz, 0.35 H); 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 0.65 H); 8.07 (d, J = 8.4 Hz, 0.35 H); 8.35 (d, J = 8.3 Hz, 0.65 H); 8.44 (d, J = 8.3 Hz, 0.35 H). LCMS (A1): ES m/z = 654 [M-H]-; m/z = 656 [M+H]+; tR = 1.06분.
실시예 16
(3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((S)-1-(3-(4-(히드록시-메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-6,6-디메틸-3-이소프로필-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
실시예 16을 반응식 2에 도시된 일반적 경로 B 및 실시예 4 및 11에 대해 기재된 것에 따라 제조하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 60/40 부분입체이성질체 혼합물; 0.72 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 0.87 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 0.98 (s, 1.8 H); 0.99 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 1.01 (s, 1.2 H); 1.05 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 1.09 (s, 1.8 H); 1.11 (s, 1.2 H); 1.82 (m, 1 H); 1.91 (m, 0.6 H); 2.01 (m, 0.4 H); 2.30 (m, 1 H); 2.52 내지 2.72 (m, 2 H); 2.88 내지 3.04 (m, 3 H); 3.25 내지 3.35 (가려진 m, 1 H); 3.79 (d, J = 2.2 Hz, 0.4 H); 3.80 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.2 Hz, 0.6 H); 4.09 내지 4.21 (m, 2 H); 4.48 (d, J = 5.8 Hz, 0.8 H); 4.50 (d, J = 5.8 Hz, 1.2 H); 5.14 내지 5.29 (m, 2 H); 5.79 (dd, J = 1.7 및 15.4 Hz, 0.6 H); 5.90 (dd, J = 1.7 및 15.4 Hz, 0.4 H); 6.40 내지 6.52 (m, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.10 (dd, J = 2.0 및 10.2 Hz, 1 H); 7.17 (m, 1 H); 7.21 내지 7.35 (m, 5 H); 7.70 (d, J = 9.3 Hz, 0.6 H); 7.80 (d, J = 9.3 Hz, 0.4 H); 8.39 (d, J = 8.0 Hz, 0.6 H); 8.44 (d, J = 8.0 Hz, 0.4 H). LCMS (A1): ES m/z = 682 [M-H]-; m/z = 684 [M+H]+; tR = 1.16분.
실시예 17
(3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((S)-1-(3-(4-(히드록시-메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-3-tert-부틸-6,6-디메틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
실시예 17을 반응식 2에 도시된 일반적 경로 B 및 실시예 4 및 11에 대해 기재된 것에 따라 제조하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 50/50 부분입체이성질체 혼합물; 0.90 (s, 4.5 H); 0.91 (s, 4.5 H); 1.00 (d, J = 7.0 Hz, 1.5 H); 1.03 (s, 1.5 H); 1.05 (s, 1.5 H); 1.06 (d, J = 7.0 Hz, 1.5 H); 1.10 (s, 1.5 H); 1.12 (s, 1.5 H); 1.85 (m, 1H); 2.32 (m, 1H); 2.55 내지 2.72 (m, 2 H); 2.90 내지 3.03 (m, 3 H); 3.25 내지 3.35 (가려진 m, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.15 (m, 1 H); 4.36 (d, J = 10.0 Hz, 0.5 H); 4.43 (d, J = 10.0 Hz, 0.5 H); 4.49 (d, J = 5.9 Hz, 1 H); 4.51 (d, J = 5.9 Hz, 1 H); 5.15 (t, J = 5.9 Hz, 0.5 H); 5.18 (t, J = 5.9 Hz, 0.5 H); 5.29 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 2.0 및 15.4 Hz, 0.5 H); 5.90 (d, J = 15.4 Hz, 0.5 H); 6.39 (m, 1 H); 6.91 (dd, J = 2.5 및 10.4 Hz, 0.5 H); 6.98 (dd, J = 2.5 및 10.4 Hz, 0.5 H); 7.05 (분할된 d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15 (분할된 dd, J = 2.4 및 8.7 Hz, 1 H); 7.20 내지 7.39 (m, 6 H); 8.32 (d, J = 7.9 Hz, 0.5 H); 8.40 (d, J = 7.9 Hz, 0.5 H). LCMS (A4): ES m/z = 696 [M-H]-; m/z = 698 [M+H]+; tR = 4.13-4.16분.
실시예 18
(3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(아미노메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6,7-트리메틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
실시예 18을 반응식 1에 도시된 일반적 경로 A 및 실시예 8에 대해 기재된 것에 따라 제조하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.78 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.87 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.00 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H); 1.30 (m, 1 H); 1.50 내지 1.90 (m, 5 H); 2.28 (m, 1 H); 2.55 내지 2.76 (m, 2 H); 2.90 내지 3.00 (m, 2 H); 3.48 (m, 1 H); 3.70 (s, 2 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (s, 1 H); 4.02 내지 4.15 (m, 2 H); 5.06 (m, 1 H); 5.88 (d, J = 15.5 Hz, 1 H); 6.47 (m, 1 H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.20 (m, 3 H); 7.31 (m, 3 H); 7.80 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.89 (d, J = 7.3 Hz, 1 H); 8.41 (d, J = 8.2 Hz, 1 H).
실시예 19
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-3-이소부틸-6,6,7-트리메틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-5-옥소펜타노에이트
실시예 19를 반응식 3에 도시된 것 및 실시예 2, 6, 9 및 13에 대해 기재된 바와 같이 제조하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.79 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.81 내지 0.89 (m, 18 H); 1.01 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.20 (s, 3 H); 1.24 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.31 (m, 1 H); 1.60 내지 1.74 (m, 2 H); 1.78 내지 1.86 (m, 3 H); 1.96 (m, 1 H); 2.21 내지 2.31 (m, 3 H); 2.55 내지 2.72 (m, 4 H); 2.80 (s, 4 H); 2.96 (m, 2 H); 3.47 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.03 내지 4.14 (m, 2 H); 4.17 (dd, J = 6.8 및 8.6 Hz, 1 H); 4.21 내지 4.33 (m, 3 H); 5.06 (m, 1 H); 5.89 (d, J = 15.5 Hz, 1 H); 6.47 (ddd, J = 5.2, 10.5 및 15.5 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.3 및 8.7 Hz, 1 H); 7.23 (m, 4 H); 7.32 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 7.80 (d, J = 8.3 Hz, 1 H); 7.89 (m, 2 H); 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 1 H); 8.32 (t, J = 6.3 Hz, 1 H); 8.42 (d, J = 7.6 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 1092 [M+H]+; m/z = 1136 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.23분.
실시예 20
mAb-Ex19
실시예 20을 실시예 3, 7, 10 및 14와 유사한 방식으로 제조하였다. 실시예 20 45 mg을 DAR 4.4 (HRMS)와 함께 2.55 mg/mL의 농도로 무색 맑은 용액으로서 수득하였으며, 단량체 순도 99.1%이고 전반적 수율 78%이다.
SEC-HRMS: 도 5에서 무손상 ADC에 대한 스펙트럼; m/z = 150368 (D1); m/z = 151350 (D2); m/z = 152327 (D3); m/z = 153304 (D4); m/z = 154281 (D5); m/z = 155255 (D6); m/z = 156237(D7); m/z = 157217 (D8).
실시예 21
(3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-(3-(4-(아미노메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-7-시클로프로필-3-이소부틸-6,6-디메틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로-헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
실시예 21을 반응식 1에 도시된 일반적 경로 A 및 실시예 1 및 8에 대해 기재된 것에 따라 제조하였다.
실시예 22
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 5-(((S)-1-(((S)-1-((4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-7-시클로프로필-3-이소부틸-6,6-디메틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)아미노)-5-옥소펜타노에이트
실시예 22을 반응식 3에 도시된 것 및 실시예 2, 6, 9 및 13에 기재된 바와 같이 제조하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.34 (m, 1 H); 0.66 (m, 1 H); 0.74 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.76 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.78 (s, 3 H); 0.80 (m, 1 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.04 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.08 (s, 3 H); 1.11 (m, 1 H); 1.20 (m, 1 H); 1.23 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.43 내지 1.54 (m, 2 H); 1.78 (m, 1 H); 1.82 (m, 2 H); 1.98 (m, 1 H); 2.22 (m, 1 H); 2.28 (m, 2 H); 2.65 (m, 3 H); 2.79 (m, 1 H); 2.81 (s, 4 H); 2.97 (dd, J = 2.2 및 7.9 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.02 (m, 1 H); 4.17 (dd, J = 6.7 및 8.7 Hz, 1 H); 4.27 (d, J = 6.3 Hz, 2 H); 4.30 (m, 1 H); 4.37 (m, 1 H); 5.10 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.8 및 15.5 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 4.0, 11.6 및 15.5 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.11 (dd, J = 2.3 및 8.7 Hz, 1 H); 7.20 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 7.22 (m, 4 H); 7.46 (s, 1 H); 7.77 (d, J = 9.0 Hz, 1 H); 7.89 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 8.05 (d, J = 7.5 Hz, 1 H); 8.29 (d, J = 7.6 Hz, 1 H); 8.32 (t, J = 6.3 Hz, 1 H).
실시예 23
mAb-Ex22
실시예 23을 실시예 3, 7, 10 및 14와 유사한 방식으로 제조하였다. 실시예 23 45 mg을 DAR 3.6 (HRMS)과 함께 2.14 mg/mL의 농도로 무색 맑은 용액으로서 수득하였으며, 단량체 순도 100%이고 전반적 수율 75%이다.
SEC-HRMS: 도 6에서 무손상 ADC에 대한 스펙트럼; m/z = 150341 (D1); m/z = 151329 (D2); m/z = 152317 (D3); m/z = 153308 (D4); m/z = 154296 (D5); m/z = 155287 (D6); m/z = 156279 (D7); m/z = 157267 (D8).
실시예 24
(3S,7S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(아지도메틸)페닐)옥시란-2-일)-에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
실시예 24를 반응식 3에 도시된 일반적 경로 C 및 실시예 32에 대해 기재된 것에 따라 제조하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.83 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.8 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.03 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1.19 (s, 3H); 1.33 (d, J = 14.5 Hz, 1H); 1.84 (m, 1H); 1.97 (dd, J = 9.8 및 14.5 Hz, 1H); 2.27 (dd, J = 11.1 및 14.5 Hz, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.1 및 14.2 Hz, 1H); 2.92 (dd, J = 2.1 및 7.7 Hz, 1H); 2.96 (dd, J = 3.6 및 14.2 Hz, 1H); 3.43 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.96 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 4.08 (ddd, J = 3.6, 7.1 및 11.1 Hz, 1H); 4.12 (m, 1H); 4.46 (s, 2H); 5.05 (ddd, J = 1.3, 3.9 및 11.3 Hz, 1H); 5.90 (dd, J = 1.3 및 15.3 Hz, 1H); 6.45 (ddd, J = 4.7, 10.7 및 15.3 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.4 및 8.7 Hz, 1H); 7.32 (m, 3H); 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7.92 (d, J = 7.1 Hz, 1H); 8.40 (d, J = 7.4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 749 [M-H]-; m/z = 751 [M+H]+; m/z = 795 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.52분.
실시예 25
(3S,7S, 10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(아미노메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
실시예 25를 실시예 1, 5, 8 및 11에 기재된 바와 같이 제조하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.86 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.98 (s, 3H); 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.18 (s, 3H); 1.34 (d, J = 14.5 Hz, 1H); 1.80 (m, 1H); 1.98 (dd, J = 9.8 및 14.5 Hz, 1H); 2.27 (dd, J = 11.1 및 14.5 Hz, 1H); 2.40 (넓은 m, 2H); 2.62 (m, 1H); 2.68 (dd, J = 11.1 및 14.2 Hz, 1H); 2.90 (dd, J = 2.1 및 7.7 Hz, 1H); 2.96 (dd, J = 3.6 및 14.2 Hz, 1H); 3.43 (m, 1H); 3.76 (s, 2H); 3.80 (s, 3H); 3.91 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 4.02 내지 4.15 (m, 2H); 5.04 (ddd, J = 1.3, 3.9 및 11.3 Hz, 1H); 5.88 (dd, J = 1.3 및 15.4 Hz, 1H); 6.45 (ddd, J = 4.7, 10.7 및 15.3 Hz, 1H); 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.2 및 8.5 Hz, 1H); 7.23 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 7.32 (d, J = 2.2 Hz, 2H); 7.36 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 7.86 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 7.93 (d, J = 6.9 Hz, 1H); 8.40 (d, J = 7.1 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 723 [M-H]-; m/z = 725 [M+H]+; m/z = 769 [M-H+HCO2H]-; tR = 0.87분.
실시예 26 내지 28의 합성: 3-(S)-네오펜틸-7-(S)-Me-아자-C52 벤질계 알콜, 글루타릴-Val-Ala-EDA-3-(S)-네오펜틸-7-(S)-Me-아자-C52 벤질계 알콜의 NHS 에스테르 및 상응하는 ADC
화합물 58: (2R,3S)-1-((4-메톡시벤질)옥시)-2-메틸헥스-5-엔-3-일 (S)-2-((S)-3-((R)-2-아크릴아미도-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)프로판아미도)-2,2-디메틸부탄아미도)-4,4-디메틸펜타노에이트
DMF (12 mL) 중 화합물 BC4 (365 mg, 919.7 μmol)의 용액에 HATU (402 mg, 1.06 mmol) 및 HOAt (144 mg, 1.06 mmol)를 첨가하고, 반응 매질을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, DMF (5 mL) 및 DIEA (562 μL, 3.22 mmol) 중 화합물 AD3 (365 mg, 965.7 μmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, H2O (50 mL)로 희석하고, EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 H2O (15 mL), 포화 염수 (3 x 15 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH 및 헵탄/EtOAc) 30 g 상에서 2회의 연속적 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 58을 무색 발포체로서 564 mg (81%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.83 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.85 (s, 9H); 0.87 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.03 (s, 3H); 1.55 (dd, J = 2.4 및 14.5 Hz, 1H); 1.78 (dd, J = 9.5 및 14.5 Hz, 1H); 1.96 (m, 1H); 2.20 (m, 1H); 2.30 (m, 1H); 2.72 (dd, J = 9.6 및 13.9 Hz, 1H); 2.87 (dd, J = 5.3 및 13.9 Hz, 1H); 3.20 (dd, J = 6.5 및 9.5 Hz, 1H); 3.37 (dd, J = 5.4 및 9.5 Hz, 1H); 3.76 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.19 (m, 1H); 4.28 (m, 1H); 4.34 (s, 2H); 4.55 (m, 1H); 4.82 (m, 1H); 5.00 (d, J = 10.2 Hz, 1H); 5.07 (d, J = 17.4 Hz, 1H); 5.55 (dd, J = 2.3 및 10.2 Hz, 1H); 5.71 (m, 1H); 6.01 (dd, J = 2.3 및 17.1 Hz, 1H); 6.28 (dd, J = 10.2 및 17.1 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.17 (dd, J = 2.3 및 8.6 Hz, 1H); 7.22 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.32 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.65 (d, J = 9.5 Hz, 1H); 7.70 (d, J = 7.9 Hz, 1H); 8.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 754 [M-H]-; m/z = 756 [M+H]+; m/z = 800 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.62분.
화합물 59: (3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((R)-1-((4-메톡시-벤질)옥시)프로판-2-일)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
아르곤 하에 DCM (56 mL) 중 화합물 58 (560 mg, 740.4 μmol)의 용액에 그럽스 I 촉매 (31.0 mg, 37.02 μmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 1h 30 동안 교반한 후, 촉매 31.0 mg을 첨가하였다. 실온에서 1h 30 동안 교반을 수행한 후, 촉매 31.0 mg을 첨가하였다. 실온에서 1h 30 동안 교반을 수행한 후, 촉매 31.0 mg을 첨가하고, 반응 매질을 실온에서 1h 30 동안 교반하였다. 이것을 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 25 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 59 (61%) 330 mg을 수득하였으며, 220 mg을 추가로 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 15 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 59를 트리시클로헥실포스핀 옥시드와의 혼합물로서 204 mg 수득하였다 (37%).
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.85 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.91 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.04 (s, 3H); 1.20 (s, 3H); 1.29 (d, J = 14.5 Hz, 1H); 1.95 (dd, J = 9.8 및 14.5 Hz, 1H); 1.99 (m, 1H); 2.26 (m, 1H); 2.43 (m, 1H); 2.72 (dd, J = 10.1 및 14.3 Hz, 1H); 2.97 (dd, J = 3.6 및 14.3 Hz, 1H); 3.27 (dd, J = 6.1 및 9.3 Hz, 1H); 3.40 (dd, J = 5.8 및 9.3 Hz, 1H); 3.46 (m, 1H); 3.72 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.10 (m, 1H); 4.13 (m, 1H); 4.38 (s, 2H); 4.97 (m, 1H); 5.93 (d, J = 15.4 Hz, 1H); 6.43 (ddd, J = 4.8, 10.7 및 15.4 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.17 (d, J = 8.6 Hz, 3H); 7.36 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.88 (m, 2H); 8.48 (d, J = 7.5 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 726 [M-H]-; m/z = 728 [M+H]+; m/z = 772 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.54분.
화합물 60: (3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((R)-1-히드록시프로판-2-일)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
화합물 59 (532 mg, 730.4 μmol)를 DCM (36 mL) 중 TFA (3.93 mL)의 용액으로 실온에서 30분 동안 처리하였다. 반응 매질을 자기 교반 하에 9% 수성 NaHCO3 (130 mL)에 부었다. 교반을 30분 동안 수행한 다음, 수성 상을 DCM (2 x 70 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 H2O (3 x 20 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 30 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 60을 백색 발포체로서 299 mg (67%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.88 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.89 (s, 9H); 0.90 (d, J = 7.0 Hz, 3H) 1.03 (s, 3H); 1.20 (s, 3H); 1.36 (dd, J = 1.8 및 14.5 Hz, 1H); 1.80 (m, 1H); 1.96 (dd, J = 9. 6 및 14.5 Hz, 1H); 2.25 (m, 1H); 2.43 (m, 1H); 2.72 (dd, J = 11.1 및 14.3 Hz, 1H); 2.97 (dd, J = 3.8 및 14.3 Hz, 1H); 3.25 (m, 1H); 3.45 (m, 2H); 3.80 (s, 3H); 4.10 (m, 1H); 4.16 (m, 1H); 4.57 (t, J = 5.3 Hz, 1H); 4.98 (m, 1H); 5.93 (dd, J = 1.3 및 15.3 Hz, 1H); 6.45 (ddd, J = 4.9, 10.7 및 15.3 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.22 (dd, J = 2.3 및 8.6 Hz, 1H); 7.36 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.89 (m, 2H); 8.48 (d, J = 7.3 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 606 [M-H]-; m/z = 608 [M+H]+; tR = 1.2분.
화합물 61: (S)-2-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)프로판알
얼음/아세톤 조로 냉각된 DCM (6 mL) 중 화합물 60 (297 mg, 488.4 μmol)의 용액에 0℃에서 H2O (1.18 mL), TEMPO (1.57 mg, 9.8 μmol) 중 KBr (58.11 mg, 488.4 μmol)의 용액을 첨가하고, 1.56M 차아염소산나트륨 pH 9.5 (467.6 μL, 732.52 μmol)의 수용액을 적가하였다. 교반을 0℃에서 15분 동안 수행한 다음, 0℃에서 포화 Na2S2O3 (3.56 mL)를 첨가하고, 빙조를 제거하고, 반응 매질을 10분 동안 교반하였다. 이어서, 이것을 DCM (3 x 25 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 H2O (2 x 10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 15 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 61을 백색 래커로서 139 mg (47%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.85 (s, 9H); 0.90 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.03 (s, 3H); 1.04 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.20 (s, 3H); 1.26 (d, J = 15.3 Hz, 1H); 1.95 (m, 1H); 2.44 (m, 1H); 2.57 (m, 1H); 2.72 (dd, J = 11.2 및 14.4 Hz, 1H); 2.80 (m, 1H); 2.98 (dd, J = 3.1 및 14.4 Hz, 1H); 3.80 (s, 3H); 4.10 (m, 3H); 5.22 (m, 1H); 5.98 (d, J = 15.3 Hz, 1H); 6.47 (ddd, J = 4.9, 10.8 및 15.3 Hz, 1H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.22 (dd, J = 2.3 및 8.7 Hz, 1H); 7.37 (s, 1H); 7.90 (m, 1H); 7.92 (d, J = 8.2 Hz, 1H); 8.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H); 9.68 (s, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 604 [M-H]-; m/z = 606 [M+H]+; m/z = 650 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.28분.
화합물 62: (4-(((트리이소프로필실릴)옥시)메틸)페닐)메탄올
THF (100 mL) 중 1,4-벤젠디메탄올 (2 g, 14.33 mmol)의 용액에 이미다졸 (1.13 g, 16.48 mmol)을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 15분 동안 교반한 다음 트리이소프로필실릴 클로라이드 (3.14 mL, 14.33 mmol)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반을 수행하였다. Et2O (50 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 유기 상을 포화 염수 (100 mL)로 2회 세척하고, MgSO4 상에서 여과하고, 진공 하에 농축시키고, DCM 중에 용해시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (등용매 용리 8:2 헵탄/EtOAc) 200 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 62를 무색 오일로서 1.9 g (45%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 1.04 (d, J = 6,7 Hz, 18H); 1.15 (m, 3H); 4.48 (d, J = 5.7 Hz, 2H); 4.78 (s, 2H); 5.13 (t, J = 5.7 Hz, 1H); 7.29 (s, 4H).
화합물 63: ((4-(브로모메틸)벤질)옥시)트리이소프로필실란
0℃에서 냉각시킨 DCM (65 mL) 중 N-브로모숙신이미드 (1.29 g, 7.16 mmol)의 현탁액에 디메틸 술피드 (953 μL, 12.9 mmol)를 적가하였다. 교반을 0℃에서 10분 동안 수행한 다음, 반응 매질을 -20℃에서 냉각시키고, -20℃에서 10분 동안 교반하였다. DCM (30 mL) 중 화합물 62 (1.9 g, 6.45 mmol)의 용액을 -20℃에서 냉각시킨 다음, 적가하였다. 교반을 -20℃에서 15분에 이어서 0℃에서 15분 및 실온에서 밤새 수행하였다. 반응 매질을 포화 염수 (100 mL)로 2회 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 2회의 연속적 플래쉬 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (구배 용리 헵탄/EtOAc) 40 g 상에서 정제하였다. 목적 화합물을 함유하는 분획을 합하고, 진공 하에 농축시키고, 헵탄 (8 mL) 중에 용해시켰다. 현탁액을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시키고, Et2O (5 mL) 중에 용해시키고, -20℃에서 냉각시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 63을 연황색 오일로서 1.18 g (51%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 1.04 (d, J = 6,8 Hz, 18H); 1.15 (m, 3H); 4.70 (s, 2H); 4.81 (s, 2H); 7.29 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 2H). LCMS (A5): ES m/z = 104; m/z = 356 [M]+; tR = 1.99분.
화합물 64: (1R,4S,5R,6S)-4,7,7-트리메틸-6-(4-(((트리이소프로필실릴)옥시)메틸)벤질)-6-티아비시클로[3.2.1]옥탄-6-윰 트리플루오로메탄술포네이트
(1R,4R,5R)-4,7,7-트리메틸-6-티아비시클로[3.2.1]옥탄 (CAS 번호 [5718-75-2], 562.3 mg, 3.3 mmol)에 DCM (3.4 mL) 중 화합물 63 (1.18 g, 3.3 mmol)의 용액을 첨가하였다. 이어서, H2O (3 mL) 중 리튬 트리플루오로메탄술포네이트 (2.63 g, 16.51 mmol)의 용액을 적가하고, 반응 매질을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, H2O (15 mL) 및 DCM (15 mL)을 반응 매질에 첨가하고, 교반을 실온에서 10분 동안 수행하였다. 수성 상을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염수 (3 x 8 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 연황색 오일을 iPr2O (5 mL) 중에서 연화처리하고, 그에 따라 수득된 고체를 여과하고, iPr2O (2 x 5 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 화합물 64를 백색 고체로서 1.125 g (57%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 1.04 (m, 21H); 1.15 (m, 3H); 1.45 (m, 1H); 1.60 (m, 2H); 1.68 (s, 3H); 1.71 (m, 1H); 1.74 (s, 3H); 1,98 (m, 1H); 2.40 (d, J = 14.6 Hz, 1H); 2.45 (m, 1H); 2.58 (넓은 d, J = 14.6 Hz, 1H); 3.85 (m, 1H); 4.56 (d, J = 12.6 Hz, 1H); 4.83 (s, 2H); 4.90 (d, J = 12.6 Hz, 1H); 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H).
화합물 65: (3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(((트리이소프로필실릴)옥시)메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
-70℃에서 냉각시킨 DCM (4 mL) 중 화합물 61 (138 mg, 227.7 μmol) 및 64 (149.5 mg, 250.4 μmol)의 용액에 BEMP (CAS 번호 [98015-45-3], 90.2 μL, 296.0 μmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -70℃에서 2시간 동안 교반하고, 포화 염수 (7 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 조를 제거하고, 교반을 실온까지 격렬히 수행하였다. 수성 상을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 10 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 65를 무색 오일로서 163 mg (30%) 및 화합물 61을 60 mg (43%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.84 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.05 (d, J = 7.3 Hz, 18H); 1.15 (m, 3H); 1.19 (s, 3H); 1.32 (d, J = 14.8 Hz, 1H); 1.82 (m, 1H); 1.97 (dd, J = 9.9 및 14.8 Hz, 1H); 2.28 (dt, J = 11.1 및 14.9 Hz, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.2 및 14.3 Hz, 1H); 2.91 (dd, J = 2.2 및 7.6 Hz, 1H); 2.95 (dd, J = 3.8 및 14.3 Hz, 1H); 3.43 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.91 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.08 (ddd, J = 3.8, 7.4 및 11.2 Hz, 1H); 4.12 (m, 1H); 4.81 (s, 2H); 5.04 (ddd, J = 1.5, 4.5 및 11.1 Hz, 1H); 5.89 (dd, J = 1.5 및 15.2 Hz, 1H); 6.44 (ddd, J = 4.5, 10.6 및 15.2 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7.91 (d, J = 7.1 Hz, 1H); 8.39 (d, J = 7.4 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 120; m/z = 882 [M+H]+; tR = 7.65분.
실시예 26
(3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(히드록시메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
0℃에서 냉각시킨 THF 중 화합물 65의 용액에 TBAF를 첨가하였다. 반응 매질을 0℃에서 1h 30 동안 교반한 다음, H2O (5 mL)를 첨가하고, 교반을 20분 동안 수행하였다. 반응 매질을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염수 (3 x 5 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 EtOAc/MeOH/H2O) 15 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 실시예 26을 백색 래커로서 69 mg (91%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.85 (s, 9H); 0.89 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.19 (s, 3H); 1.35 (d, J = 14.8 Hz, 1H); 1.80 (m, 1H); 1.99 (dd, J = 9.9 및 14.8 Hz, 1H); 2.27 (dt, J = 11.1 및 14.9 Hz, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.2 및 14.3 Hz, 1H); 2.90 (dd, J = 2.2 및 7.6 Hz, 1H); 2.95 (dd, J = 3.8 및 14.3 Hz, 1H); 3.43 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.91 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.06 내지 4.15 (m, 2H); 4.50 (d, J = 5.9 Hz, 2H); 5.03 (dd, J = 1.5, 3.7 및 11.5 Hz, 1H); 5.20 (t, J = 5.9 Hz, 1H); 5.89 (dd, J = 1.5 및 15.3 Hz, 1H); 6.43 (ddd, J = 4.6, 10.7 및 15.3 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.2 및 8.6 Hz, 1H); 7.23 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 7.32 (m, 3H); 7.87 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 7.92 (d, J = 7.0 Hz, 1H); 8.40 (d, J = 7.4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 724 [M-H]-; m/z = 726 [M+H]+; m/z = 770 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.29분.
화합물 66: 4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트
DCM (5 mL) 중 실시예 26 (68 mg, 93.6 μmol)의 용액에 비스 (4-니트로페닐)카르보네이트 (118.7 mg, 374.5 μmol) 및 DIEA (49 μL, 281.0 μmol)를 적가하였다. 반응 매질을 실온에서 6일 동안 교반한 다음, 포화 염수를 첨가하고, 이것을 DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 5 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 66을 백색 래커로서 79 mg (94%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.85 (s, 9H); 0.89 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.05 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.19 (s, 3H); 1.34 (d, J = 14.6 Hz, 1H); 1.83 (m, 1H); 1.97 (dd, J = 9.9 및 14.6 Hz, 1H); 2.28 (dt, J = 11.1 및 14.9 Hz, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.2 및 14.3 Hz, 1H); 2.93 (m, 2H); 3.42 (m, 1H); 3.79 (s, 3H); 3.99 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.09 (m, 2H); 5.05 (dd, J = 1.3, 4.0 및 11.1 Hz, 1H); 5.31 (s, 2H); 5.89 (dd, J = 1.3 및 15.3 Hz, 1H); 6.47 (ddd, J = 4.8, 10.8 및 15.3 Hz, 1H); 7.01 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.21 (dd, J = 2.2 및 8.6 Hz, 1H); 7.31 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.36 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.50 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.59 (d, J = 9.3 Hz, 2H); 7.87 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 7.92 (d, J = 7.0 Hz, 1H); 8.32 (d, J = 9.3 Hz, 2H); 8.39 (d, J = 7.4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 889 [M-H]-; m/z = 891 [M+H]+; m/z = 935 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.55분.
화합물 67: (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-1-(((S)-1-((2-NBoc-아미노에틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 히드로클로라이드
DCM (100 mL) 중 Fmoc-Val-Ala-OH (3.5 g, 8.53 mmol)의 현탁액에 TEA (3.6 mL, 25.58 mL)를 첨가하고, 이는 출발 물질, N-Boc-EDA (1.62 mL, 10.23 mmol) 및 DCM 50% 중 프로필포스폰산 무수물 (6.51 g, 10.23 mmol)의 용액의 완전한 용해로 이어진다. 반응 매질을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 1N NaOH (50 mL)를 첨가하고, 현탁액을 여과하고, H2O 및 DCM으로 세척하였다. 여과물의 유기 상을 H2O로 세척하였다. 케이크 및 유기 상을 합하고, 진공 하에 부분적으로 농축시키고, 여과하고, DCM으로 세척하고, 건조시켜 화합물 67을 백색 분말로서 3.952 g 수득하였다 (84%).
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.86 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.19 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.37 (s, 9H); 1.99 (m, 1H); 2.92 내지 3.14 (m, 4H); 3.88 (dd, J = 6.9 및 9.1 Hz, 1H); 4.19 내지 4.35 (m, 4H); 6.71 (m, 1H); 7.32 (m, 2H); 7.38 (m, 1H); 7.42 (m, 2H); 7.73 (m, 2H); 7.84 (t, J = 6.8 Hz, 1H); 7.89 (d, J = 7.8 Hz, 2H); 7.92 (d, J = 7.8 Hz, 1H).
화합물 68: (9H-플루오렌-9-일)메틸 ((S)-1-(((S)-1-((2-아미노에틸)아미노)-1-옥소프로판-2-일)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 히드로클로라이드
디옥산 (3 mL) 중 화합물 67 (100 mg, 159.5 μmol)의 현탁액에 디옥산 중 HCl 4N (905 μL, 3.62 mmol)을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 20시간 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 iPr2O (3 mL) 중에 재현탁시키고, 초음파 조 중에 침지시키고, 여과하였다. 이와 같이 하여 수득한 케이크를 iPr2O (2 x 3 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 화합물 68을 백색 고체로서 78 mg (88%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.85 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.87 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.23 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.99 (m, 1H); 2,83 (m, 2H); 3.29 (m, 2H); 3.89 (dd, J = 6.9 및 8.9 Hz, 1H); 4.19 내지 4.38 (m, 4H); 7.33 (m, 2H); 7.42 (m, 3H); 7.75 (m, 2H); 7.88 (넓은 s, 3H); 7.90 (d, J = 7.6 Hz, 2H); 8.08 (d, J = 7.3 Hz, 1H); 8.14 (d, J = 5.9 Hz, 1H).
화합물 69: 4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16yl)에틸)옥시란2-일)벤질 (2-((S)-2-((S)-2-아미노-3-메틸부탄아미도)프로판아미도)에틸)카르바메이트
DCM 중 화합물 66 (78 mg, 87.5 μmol) 및 68 (51.4 mg, 105.0 μmol)의 현탁액에 DIEA (44.0 μL, 262.5 μmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 밤새 교반한 다음 화합물 68 (24 mg, 49 μoml) 및 DIEA (15 μL)를 첨가하고, 교반을 실온에서 1일 동안 수행하였다. 피페리딘 (87.0 μL, 875.0 μmol)을 첨가하고, 교반을 실온에서 밤새 수행하였다. 반응 매질을 진공 하에 농축시키고, 2회의 연속적 플래쉬 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (구배 용리 EtOAc/MeOH/H2O) 5 g 상에서 정제하여 화합물 69를 백색 래커로서 57 mg (66%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.75 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.85 (s, 9H); 0.86 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.87 (d, J = 6.7 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.18 (m, 6H); 1.33 (d, J = 14.5 Hz, 1H); 1.75 (넓은 s, 2H); 1.81 (m, 1H); 1.92 (m, 1H); 1.98 (dd, J = 10.0 및 14.5 Hz, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.3 및 14.7 Hz, 1H); 2.90 (dd, J = 2.0 및 7.5 Hz, 1H); 2.96 (m, 1H); 2.98 (d, J = 4.7 Hz, 1H); 3.05 (m, 2H); 3.12 (m, 2H); 3.43 (m, 1H); 3.81 (s, 3H); 3.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H); 4.09 (m, 2H); 4.26 (m, 1H); 5.01 (s, 2H); 5.04 (m, 1H); 5.89 (dd, J = 1.5 및 15.2 Hz, 1H); 6.45 (ddd, J = 4.5, 10.4 및 15.2 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.4 및 8.8 Hz, 1H); 7.26 (t, J = 6.0 Hz, 1H); 7.29 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.32 (d, J = 2.5 Hz, 1H); 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7.93 (d, J = 7.1 Hz, 1H); 8.00 (t, J = 6.0 Hz, 1H); 8.03 (d, J = 8.1 Hz, 1H); 8.41 (d, J = 7.2 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 492 [M+2H]2+; m/z = 980 [M-H]-; m/z = 982 [M+H]+; m/z = 1026 [M-H+HCO2H]-; tR = 0.91분.
화합물 70: (9S,12S)-1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시-벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)페닐)-12-이소프로필-9-메틸-3,8,11,14-테트라옥소-2-옥사-4,7,10,13-테트라아자옥타데칸-18-산
DCM (8 mL) 중 화합물 69 (56.0 mg, 56.8 μL)의 용액에 DCM (4 mL) 중 글루타르산 무수물 (7.27 mg, 62.5 μmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH/H2O) 5 g 상에서 정제하여 화합물 70을 백색 래커로서 35.5 mg (56%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.81 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.83 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.85 (s, 9H); 0.87 (d, J = 6.5 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.19 (m, 6H); 1.32 (d, J = 14.3 Hz, 1H); 1.70 (m, 2H); 1.81 (m, 1H); 1.92 (m, 1H); 1.98 (m, 2H); 2.15 (m, 2H); 2.19 (t, J = 7.5 Hz, 2H); 2.27 (m, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.1 및 14.1 Hz, 1H); 2.91 (d, J = 7.6 Hz, 1H); 2.95 (m, 1H); 3.04 (m, 2H); 3.10 (m, 2H); 3.41 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.93 (s, 1H); 4.03 내지 4.16 (m, 3H); 4.19 (m, 1H); 5.01 (s, 2H); 5.04 (m, 1H); 5.89 (d, J = 15.6 Hz, 1H); 6.43 (ddd, J = 5.3, 11.0 및 15.6 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.3 및 8.7 Hz, 1H); 7.28 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.30 (m, 1H); 7,32 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.88 (m, 2H); 7.93 (d, J = 7.4 Hz, 1H); 7.98 (넓은 s, 1H); 8.06 (넓은 s, 1H); 8.42 (d, J = 7.4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 549 [M+2H]2+; m/z = 1094 [M-H]-; m/z = 1096 [M+H]+; tR = 1.21분.
실시예 27
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 (9S,12S)-1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로-헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)페닐)-12-이소프로필-9-메틸-3,8,11,14-테트라옥소-2-옥사-4,7,10,13-테트라아자옥타데칸-18-오에이트
Ar 하에 DCM (5 mL) 중 화합물 70 (14.6 mg, 13.3 μmol)의 용액에 DSC (4.3 mg, 16.0 μmol) 및 DIEA (2.8 μL, 16.0 μmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 DSC (1.5 mg, 5.6 μmol) 및 DIEA (1 μL, 5.7 μmol)를 첨가하고, 교반을 실온에서 1시간 동안 수행하였다. 반응 매질을 진공 하에 농축시키고, 디올-개질된 실리카 겔 (구배 용리 DCM/iPrOH) 16.4 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 실시예 27을 백색 래커로서 11.4 mg (72%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.81 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.83 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.85 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.5 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.19 (m, 6H); 1.34 (d, J = 14.4 Hz, 1H); 1.83 (m, 3H); 1.98 (m, 2H); 2.26 (m, 1H); 2.29 (m, 2H); 2.60 (m, 1H); 2.68 (t, J = 7.6 Hz, 2H); 2.70 (dd, J = 11.2 및 14.3 Hz, 1H); 2.80 (s, 4H); 2.91 (dd, J = 2.3 및 7.6 Hz, 1H); 2.95 (dd, J = 3.7 및 14.3 Hz, 1H); 2.99 내지 3.20 (m, 4H); 3.43 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.93 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.05 내지 4.25 (m, 4H); 5.01 (m, 2H); 5.03 (m, 1H); 5.89 (dd, J = 1.6 및 15.4 Hz, 1H); 6.44 (ddd, J = 4.6, 10.9 및 15.4 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.5 Hz, 1H); 7.20 (m, 2H); 7.28 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.31 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.37 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.86 (m, 3H); 7.91 (d, J = 7.1 Hz, 1H); 7.95 (d, J = 7.6 Hz, 1H); 8.39 (d, J = 7.3 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 311; m/z = 1191 [M-H]-; m/z = 1193 [M+H]+; m/z = 1237 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.26분.
실시예 28
mAb-Ex27
실시예 28을 실시예 3, 7, 10 및 14와 유사한 방식으로 제조하였다. 실시예 28 1.56 mg을 DAR 4 (HRMS)와 함께 0.78 mg/mL의 농도로 무색 맑은 용액으로서 수득하였으며, 단량체 순도 100%이고 전반적 수율 13%이다.
SEC-HRMS: m/z = 149405 (네이키드 mAb); m/z = 150486 (D1); m/z = 151568 (D2); m/z = 152645 (D3); m/z = 153725 (D4); m/z = 154802 (D5); m/z = 155882 (D6); m/z = 156961 (D7); m/z = 158039 (D8).
실시예 29의 합성: 말레이미도-mc-vc-PABA-3-(S)-네오펜틸-7-(S)-Me-아자-C52 벤질계 아민
화합물 71: 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-니트로페닐) 카르보네이트
화합물 72를 문헌 [Verma V.A., et al., Bioorg Med Chem Lett 2015, 25, 864-868]에 기재된 바와 같이 제조하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.83 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.87 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.18 (m, 2H); 1.31 내지 1.75 (m, 8H); 1.96 (m, 1H); 2.10 (m, 1H); 2.18 (m, 1H); 2.96 (m, 1H); 3.01 (m, 1H); 3.37 (t, J = 7.2 Hz, 2H); 4.19 (dd, J = 7.0 및 8.6 Hz, 1H); 4.38 (m, 1H); 5.24 (s, 2H); 5.42 (s, 2H); 5.98 (t, J = 6.0 Hz, 1H); 7.00 (s, 2H); 7.40 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.57 (d, J = 9.2 Hz, 2H); 7.66 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.81 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 8.12 (d, J = 7.9 Hz, 1H); 8.31 (d, J = 9.2 Hz, 2H); 10.08 (s, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 738 [M+H]+; m/z = 782 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.1분.
실시예 29
4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸-부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)카르바메이트
화합물 71 (16.0 mg, 21.7 μmol)에 DCM (2.5 mL) 및 DIEA (3.4 μL, 19.7 μmol) 중 실시예 25 (14.3 mg, 19.7 μmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 밤새 교반한 다음 DMF (1 mL)를 첨가하고, 교반을 실온에서 1일 동안 수행하였다. H2O (8 mL)를 반응 매질에 첨가하고, 교반을 15분 동안 수행한 다음, 수성 상을 DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 톨루엔으로 2회 공-증발시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 5 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 실시예 29를 백색 고체로서 15.8 mg (60%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.81 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.86 (s, 9H); 0.89 (d, J = 6.8 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.18 (s, 3H); 1.19 (m, 2H); 1.31 내지 1.75 (m, 9H); 1.80 (m, 1H); 1,96 (m, 2H) 2.10 (m, 1H); 2.18 (m, 1H); 2,27 (m, 1H); 2.61 (m, 1H); 2,69 (dd, J = 10.8 및 14.3 Hz, 1H); 2,90 (dd, J = 2.1 및 7.6 Hz, 1H); 2.96 (m, 2H); 3.01 (m, 1H); 3.37 (t, J = 7.2 Hz, 2H); 3.42 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.90 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 4.08 (m, 1H); 4.11 (m, 1H); 4.20 (m, 3H); 4.39 (m, 1H); 4.97 (s, 2H); 5.04 (m, 1H); 5.40 (s, 2H); 5.89 (dd, J = 1.7 및 15.5 Hz, 1H); 5.97 (t, J = 6.2 Hz, 1H); 6.45 (ddd, J = 4.8, 10.7 및 15.5 Hz, 1H); 6.99 (s, 2H); 7.01 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.2 및 8.7 Hz, 1H); 7.21 내지 7.30 (m, 6H); 7.31 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.59 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.78 (m, 2H); 7.85 (d, J = 8.5 Hz, 1H); 7.90 (d, J = 6.9 Hz, 1H); 8.07 (d, J = 7.8 Hz, 1H); 8.39 (d, J = 7.3 Hz, 1H); 9.97 (s, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 662 [M+2H]2+; m/z = 1322 [M-H]-; m/z = 1324 [M+H]+; m/z = 1368 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.3분.
실시예 30 & 31의 합성: 비-절단가능한 트리아졸-3-(S)-네오펜틸-7-(S)-Me-아자-C52의 NHS 에스테르 및 상응하는 ADC
화합물 72: tert-부틸 3-(프로프-2-인-1-일옥시)프로파노에이트
THF (23 mL) 중 프로파르길 알콜 (1.362 mL, 23.4 mmol)의 용액에 소듐 (20.08 mg, 0.874 mmol)을 첨가하고, 반응 매질을 소듐이 완전히 가용화될 때까지 60℃에서 가열한 다음, 실온으로 냉각시킨 후, tert-부틸 아크릴레이트 (2.286 mL, 15.6 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 밤새 교반한 다음, H2O (25 mL)를 첨가하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 화합물 72를 무색 오일로서 2 g (70%) 수득하였다.
화합물 73: 3-(프로프-2-인-1-일옥시)프로판산
DCM (50 mL) 중 화합물 72 (2.0 g, 10.86 mmol)의 용액에 TFA (8.065 mL, 108.6 mmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 밤새 교반하고, 진공 하에 농축시키고, 톨루엔으로 공증발시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 80 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 73을 오일로서 1.1 g (80%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 2.46 (t, J = 6.4 Hz, 2H); 3.43 (t, J = 2.4 Hz, 1H); 3.63 (t, J = 6.4 Hz, 2H); 4.11 (d,J = 2.4 Hz, 2H); 12.20 (넓음, 1H).
화합물 74: 3-((1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)프로판산
THF (0.5 mL) 중 실시예 24 (50 mg, 66.6 μmol)의 용액에 화합물 73 (17.05 mg, 113.1 μmol), 0.1M 수성 황산구리 (II) (266 μL, 26.6 μmol) 및 0.2M 수성 아스코르브산나트륨 (266 μL, 53.2 μmol)을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 1일 동안 교반한 다음, H2O (1 mL)를 첨가하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 1 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 세파덱스 LH20 (용리 DCM) 상에서 여과에 의해 정제하여 오일 40 mg을 수득하였으며, 이를 추가로 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 5 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 74 (35%) 20 mg을 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.82 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.7 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.18 (s, 3H); 1.31 (d, J = 14.6 Hz, 1H); 1.80 (m, 1H); 1.97 (dd, J = 10.0 및 14.6 Hz, 1H); 2.25 (m, 1H); 2.42 (t, J = 6.6 Hz, 2H); 2.60 (m, 1H); 2,70 (dd, J = 10.9 및 14.4 Hz, 1H); 2.90 (dd, J = 2.2 및 7.6 Hz, 1H); 2.95 (dd, J = 3.6 및 14.4 Hz, 1H); 3.44 (m, 1H); 3.62 (t, J = 6.6 2H); 3.80 (s, 3H); 3.94 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.08 (m, 2H); 4.49 (s, 2H); 5.03 (m, 1H); 5.59 (s, 2H); 5.89 (dd, J = 1.7 및 15.3 Hz, 1H); 6.43 (ddd, J = 4.8, 10.8 및 15.3 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.4 및 8.7 Hz, 1H); 7.29 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7.90 (d, J = 7.0 Hz, 1H); 8.13 (s, 1H); 8.46 (m, 1H); 12.20 (넓음, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 440 [M+2H]2+; m/z = 877 [M-H]-; m/z = 879 [M+H]+; tR = 1.24분.
실시예 30
2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-((1-(4-((2R,3R)-3-((S)-1-((3S,7S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6,6,7-트리메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-1-옥사-4,8,11-트리아자-시클로헥사데스-13-엔-16-일)에틸)옥시란-2-일)벤질)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메톡시)프로파노에이트
DCM (5 mL) 중 화합물 74 (20 mg, 22.7 μmol)의 용액에 DIEA (5.0 μL, 28.5 μmol) 및 DSC (6.34 mg, 23.8 μmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음 DSC (3 mg, 11.3 μmol) 및 DIEA (5 μL, 28.5 μmol)를 첨가하고, 교반을 실온에서 2시간 동안 수행하였다. 이어서, 반응 매질을 진공 하에 농축시키고, 2회의 연속적 플래쉬 크로마토그래피에 의해 디올-개질된 실리카 겔 (구배 용리 DCM/iPrOH) 1.5 g 상에서 정제하여 실시예 30 (50%) 11.5 mg을 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.83 (s, 9H); 0.87 (d, J = 6.6 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.04 (d, J = 6.6 Hz, 3H); 1.19 (s, 3H); 1.32 (d, J = 14.5 Hz, 1H); 1.81 (m, 1H); 1.96 (dd, J = 10.2 및 14.5 Hz, 1H); 2.25 (m, 1H); 2.60 (m, 1H); 2.70 (dd, J = 11.2 및 14.5 Hz, 1H); 2.80 (s, 4H); 2.90 (dd, J = 2.0 및 7.4 Hz, 1H); 2.94 (t, J = 6.1 Hz, 2H); 2.97 (dd, J = 3.6 및 14.1 Hz, 1H); 3.42 (m, 1H); 3.74 (t, J = 6.1 Hz, 2H); 3.80 (s, 3H); 3.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H); 4.09 (m, 2H); 4.55 (s, 2H); 5.03 (m, 1H); 5.59 (s, 2H); 5.89 (dd, J = 1.6 및 15.2 Hz, 1H); 6.44 (ddd, J = 4.7, 10.6 및 15.2 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.4 및 8.6 Hz, 1H); 7.29 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 7.32 (m, 3H); 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7.90 (d, J = 6.9 Hz, 1H); 8.14 (s, 1H); 8.39 (d, J = 7.5 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 120; m/z = 974 [M-H]-; m/z = 976 [M+H]+; m/z = 1020 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.29분.
실시예 31
mAb-Ex.30
실시예 31을 실시예 3, 7, 10 및 14와 유사한 방식으로 제조하였다. 실시예 31 5.4 mg을 DAR 4 (HRMS)와 함께 1.8 mg/mL의 농도로 무색 맑은 용액으로서 수득하였으며, 단량체 순도 98.1%이고 전반적 수율 45%이다.
SEC-HRMS: m/z = 149399 (네이키드 mAb); m/z = 150245 (D1); m/z = 151101 (D2); m/z = 151965 (D3); m/z = 152831 (D4); m/z = 153679 (D5); m/z = 154546 (D6); m/z = 155408 (D7); m/z = 156273 (D8); m/z = 157284(D9).
실시예 32의 합성: 3-(S)-네오펜틸-6-Me-6-CH2OH-아자-C52 벤질계 아민
화합물 75: (2R,3S)-1-((4-메톡시벤질)옥시)-2-메틸헥스-5-엔-3-일 (2S)-2-((4-((R)-2-아크릴아미도-3-(3-클로로-4-메톡시페닐)프로판아미도)-3-(히드록시메틸)-3-메틸-2-옥소부틸)아미노)-4,4-디메틸펜타노에이트
DMF (12 mL) 중 화합물 BC6 (385.6 mg, 773.5 μmol)의 용액에 HATU (348.7 mg, 889.5 μmol) 및 HOAt (122.3 mg, 889.5 μmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 30분 동안 교반한 다음 DMF (5 mL) 및 DIEA (475.2 μL, 2.71 mmol) 중 화합물 AD3 (292 mg, 773.5 μmol)의 용액을 첨가하고, 교반을 실온에서 4시간 동안 수행하였다. H2O (50 mL)를 첨가하고, 수성 상을 EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 H2O (15 mL), 포화 염수 (3 x 15 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 30 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 75를 황색 오일로서 383 mg (65%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 55/45 부분입체이성질체 혼합물; 0.85 내지 0.88 (m, 12H); 0.91 (s, 1.65H); 0.92 (s, 1.35H); 1.56 (m, 1H); 1.60 (m, 1H); 1.98 (m, 1H); 2.21 (m, 1H); 2.30 (m, 1H); 2.71 (m, 1H); 2.92 (m, 1H); 3.19 내지 3.45 (m, 6H); 3.73 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.29 (m, 1H); 4.33 (m, 2H); 4.58 (m, 1H); 4.82 (m, 1H); 4.95 내지 5.09 (m, 3H); 5.55 (dd, J = 2.2 및 10.2 Hz, 1H); 5.71 (m, 1H); 6.01 (dd, J = 2.2 및 17.2 Hz, 1H); 6.23 (dd, J = 10.2 및 17.2 Hz, 1H); 6.89 (m, 2H); 7.01 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.17 (dd, J = 2.2 및 8.6 Hz, 1H); 7.21 (m, 2H); 7.34 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 0.45H); 7.84 (d, J = 8.0 Hz, 0.55H); 7.98 (t, J = 6.5 Hz, 0.45H); 8.00 (t, J = 6.5 Hz, 0.55H); 8.39 (d, J = 8.6 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 756 [M-H]-; m/z = 758 [M+H]+; m/z = 802 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.54-1.56분.
화합물 76: (3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6-(히드록시메틸)-16-((R)-1-((4-메톡시벤질)옥시)프로판-2-일)-6-메틸-3-네오펜틸-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
Ar 하에 DCM (38 mL) 중 화합물 75 (380 mg, 501.1 μmol)의 용액에 그럽스 I 촉매 (20.97 mg, 25.05 μmol)를 첨가하였다. 반응 매질을 Ar 하에 실온에서 4시간 동안 교반한 다음, 그럽스 I 촉매 (20.97 mg, 25.05 μmol)를 첨가하였다. 교반을 실온에서 3시간 동안 수행한 다음, 그럽스 I 촉매 (20.97 mg, 25.05 μmol)를 첨가하고, 교반을 실온에서 실행하였다. 반응 24시간 후, 그럽스 I 촉매 (20.97 mg, 25.05 μmol)를 첨가하고, 교반을 4시간 동안 수행하였다. 반응 매질을 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (등용매 용리 헵탄/EtOAc) 20 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 76 입체이성질체 1 (56%) 170 mg 및 화합물 76 입체이성질체 2 (37%) 138 mg을 수득하였다.
화합물 76 입체이성질체 1
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.83 (s, 9H); 0.91 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.02 (s, 3H); 1.30 (dd, J = 2.4 및 14.6 Hz, 1H); 1.53 (dd, J = 9.9 및 14.6 Hz, 1H); 1.99 (m, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.45 (m, 1H); 2.67 (m, 1H); 2.91 (dd, J = 3.0 및 13.7 Hz, 1H); 2.97 (dd, J = 4.0 및 14.5 Hz, 1H); 3.17 내지 3.49 (m, 5H); 3.72 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.18 (m, 1H); 4.37 (m, 2H); 4.50 (td, J = 2.4 및 9.6 Hz, 1H); 5.00 (m, 3H); 5.82 (dd, J = 1.9 및 15.4 Hz, 1H); 6.39 (ddd, J = 4.2, 11.6 및 15.4 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.04 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.12 (m, 1H); 7.15 (dd, J = 2.3 및 8.6 Hz, 1H); 7.21 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.28 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 8.09 (d, J = 9.6 Hz, 1H); 8.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 728 [M-H]-; m/z = 730 [M+H]+; m/z = 774; tR = 5.15분.
화합물 76 입체이성질체 2
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.83 (s, 9H); 0.88 (s, 3H); 0.91 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.28 (dd, J = 2.4 및 14.6 Hz, 1H); 1.67 (dd, J = 9.9 및 14.6 Hz, 1H); 1.99 (m, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.45 (m, 1H); 2.67 (m, 1H); 3.02 (dd, J = 3.3 및 14.2 Hz, 1H); 3.08 (dd, J = 1.9 및 13.5 Hz, 1H); 3.25 내지 3.42 (m, 4H); 3.55 (dd, J = 5.1 및 11.0 Hz, 1H); 3.73 (s, 3H); 3.81 (s, 3H); 4.17 (m, 1H); 4.37 (m, 2H); 4.44 (td, J = 2.1 및 9.3 Hz, 1H); 4.80 (t, J = 5.1 Hz, 1H); 5.00 (m, 2H); 5.86 (dd, J = 1.6 및 15.1 Hz, 1H); 6.38 (ddd, J = 4.0, 11.4 및 15.3 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.19 (dd, J = 2.2 및 8.7 Hz, 1H); 7.22 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 7.30 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.42 (d, J = 10.4 Hz, 1H); 7.92 (d, J = 8.9 Hz, 1H); 8.45 (d, J = 8.0 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 728 [M-H]-; m/z = 730 [M+H]+; m/z = 774; tR = 4.79분.
화합물 77: (3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((R)-1-((4-메톡시-벤질)옥시)프로판-2-일)-6-메틸-3-네오펜틸-6-(((트리에틸실릴)옥시)메틸)-1-옥사-4,8,11-트리아자-시클로헥사데스-13-엔-2,5,9,12-테트라온
빙조로 냉각된 DCM (3 mL) 중 화합물 76 입체이성질체 1 (170 mg, 232.8 μmol)의 용액에 4℃에서 클로로트리에틸실란 (159.3 μL, 931.1 μmol) 및 TEA (131.1 μL, 931.1 μmol)를 적가하였다. 반응 매질을 4℃에서 30분 동안 교반한 다음, 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 반응 매질을 DCM (50 mL) 및 염수 (10 mL)로 희석하고, 교반을 10분 동안 수행하였다. 유기 상을 포화 염수 (2 x 10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 화합물 76 (138 mg, 189.0 μmol)의 다른 부분입체이성질체를 유사하게 보호하고, 두 배치 모두를 합하고, 실리카 겔 (등용매 용리 헵탄/EtOAc) 20 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 77 입체이성질체 1 139 mg을 무색 발포체 (39%)로서, 그리고 화합물 77 입체이성질체 2 107 mg을 무색 발포체 (30%)로서 수득하였다.
화합물 77 입체이성질체 1
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.62 (q, J = 8.1 Hz, 6H); 0.83 (s, 9H); 0.91 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 0.96 (t, J = 8.1 Hz, 9H); 1.04 (s, 3H); 1.66 (dd, J = 3.4 및 14.4 Hz, 1H); 1.43 (dd, J = 9.3 및 14.4 Hz, 1H); 1.99 (m, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.47 (m, 1H); 2.68 (m, 1H); 2.92 (dd, J = 3.0 및 13.5 Hz, 1H); 2.99 (dd, J = 4.0 및 14.8 Hz, 1H); 3.21 내지 3.40 (m, 3H); 3.48 (m, 1H); 3.63 (d, J = 10.3 Hz, 1H); 3.73 (s, 3H); 3.81 (s, 3H); 4.17 (m, 1H); 4.36 (m, 2H); 4.51 (td, J = 2.9 및 9.4 Hz, 1H); 5.02 (m, 1H); 5.82 (dd, J = 1.8 및 15.4 Hz, 1H); 6.39 (ddd, J = 4.3, 11.6 및 15.4 Hz, 1H); 6.89 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.02 (m, 1H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.15 (dd, J = 2.3 및 8.7 Hz, 1H); 7.21 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.29 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.96 (d, J = 9.4 Hz, 1H); 8.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 842 [M-H]-; m/z = 844 [M+H]+; m/z = 888 [M-H+HCO2H]-; tR = 7.08분.
화합물 77 입체이성질체 2
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.52 (q, J = 8.1 Hz, 6H) 0.84 (s, 9H); 0.88 내지 0.93 (m, 15H); 1.29 (dd, J = 2.6 및 14.5 Hz, 1H); 1.68 (dd, J = 10.1 및 14.5 Hz, 1H); 1.99 (m, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.47 (m, 1H); 2.68 (m, 1H); 3.01 (dd, J = 3.4 및 14.5 Hz, 1H); 3.15 (d, J = 12.8 Hz, 1H); 3.33 (m, 1H); 3.48 (d, J = 10.4 Hz, 1H); 3.73 (s, 3H); 3.81 (s, 3H); 3.83 (d, J = 10.4 Hz, 1H); 4.17 (m, 1H); 4.36 (m, 2H); 4.45 (td, J = 2.4 및 9.2 Hz, 1H); 5.01 (m, 1H); 5.84 (dd, J = 1.8 및 15.3 Hz, 1H); 6.39 (ddd, J = 3.9, 11.4 및 15.3 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.19 (dd, J = 2.2 및 8.6 Hz, 1H); 7.22 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 7.30 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.47 (d, J = 10.4 Hz, 1H); 8.01 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 8.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 842 [M-H]-; m/z = 844 [M+H]+; m/z = 888 [M-H+HCO2H]-; tR = 6.88분.
화합물 78: 3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-16-((R)-1-히드록시프로판-2-일)-6-메틸-3-네오펜틸-6-(((트리에틸실릴)옥시)메틸)-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
얼음/아세톤 조로 냉각된 DCM (10 mL) 및 H2O (2.5 mL) 중 화합물 77 (245 mg, 290.1 μmol)의 두 부분입체이성질체 모두의 용액에 DDQ (339.4 mg, 1.45 mmol) 및 2,6-디-tert-부틸피리딘 (171.7 mg, 870.3 μmol)을 첨가하였다. 반응 매질을 0℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 수성 NaHCO3 (10 mL) 및 DCM (10 mL)으로 희석하고, 교반을 10분 동안 수행하였다. 수성 상을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염수 (3 x 5 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 20 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 78을 백색 발포체로서 155 mg (74%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.49 내지 0.65 (m, 6H); 0.80 내지 1.07 (m, 24H); 1.35 내지 1.71 (m, 2H); 1.83 (m, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.47 (m, 1H; 2.68 (m, 1H); 2.90 내지 3.50 (m, 5.96H); 3.65 (d, J = 10.6 Hz, 0.52H); 3.80 (s, 3H); 3.82 (d, J = 10.6 Hz, 0.52H); 4.18 (m, 1H); 4.29 내지 4.70 (m, 2H); 5.02 (m, 1H); 5.80 내지 5.89 (m, 1H); 6.05 (m, 0.11H); 6.39 (m, 0.89H); 6.98 내지 7.31 (m, 3.48H); 7.47 (d, J = 10.6 Hz, 0.52H); 7.87 (d, J = 9.4 Hz, 0.11H); 7.96 (d, J = 9,4 Hz, 0.52H); 8.00 (d, J = 9.4 Hz, 0.37H); 8.31 (d, J = 8.0 Hz, 0.63H); 8.42 (d, J = 8.4 Hz, 0.37H). LCMS (A4): ES m/z = 722 [M-H]-; m/z = 724 [M+H]+; m/z = 768 [M-H+HCO2H]-; tR = 5.68-5.78분.
화합물 79: 2S)-2-((3S,10R,16S,E)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6-메틸-3-네오펜틸-2,5,9,12-테트라옥소-6-(((트리에틸실릴)옥시)메틸)-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-16-일)프로판알
얼음/ 아세톤 조로 냉각된 DCM (1.5 mL) 중 화합물 78 (154 mg, 212.6 μmol)의 용액에 0℃에서 H2O (612 μL) 중 KBr (25.6 mg, 212.6 μmol)의 용액, DCM (137 μL, 4.25 μmol) 중 5 mg/mL의 TEMPO의 용액 및 1.56M 차아염소산나트륨 pH 9.5 수용액 (204 μL, 318.9 μmol)을 적가하였다. 교반을 0℃에서 15분 동안 수행한 다음, 0℃에서 포화 Na2S2O3 (1.9 mL)을 첨가하고, 빙조를 제거하고, 반응 매질을 10분 동안 교반하였다. 이어서, 이것을 DCM (3 x 20 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 H2O (2 x 10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 15 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 61 (23%) 36 mg을 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 72/28 부분입체이성질체 혼합물: 0.49 내지 0.65 (m, 6H); 0.80 내지 1.08 (m, 24H); 1.32 내지 1.69 (m, 2H); 2.40 (m, 1H); 2.68 (m, 2H); 2.79 (m, 1H); 2.89 내지 3.70 (m, 5H); 3.80 (s, 3H); 4.10 내지 4.53 (m, 2H); 5.02 (m, 0.28H); 5.28 (m, 0.72H); 5.78 내지 5.91 (m, 1H); 6.07 (m, 0.28H); 6.40 (m, 0.72H); 7.00 내지 7.51 (m, 4H); 7.90 (d, J = 9.4 Hz, 0.28H); 7.98 (d, J = 9.4 Hz, 0.72H); 8.34 (m, 1H); 9.59 (d, J = 2.5 Hz, 0.28H); 9.63 (d, J = 1.8 Hz, 0.72H). LCMS (A5): m/z = 722 [M+H]+; tR = 1.71분.
화합물 80: 1-(아지도메틸)-4-(브로모메틸)벤젠
DMF (20 mL) 중 p-크실렌 디브로마이드 (2.0 g, 7.2 mmol)의 용액에 20분 내에 DMF (20 mL) 중 아지드화나트륨 (584.9 mg, 8.64 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 20시간 동안 교반한 다음, 얼음 (100 g)에 붓고, EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 염수 (3 x 15 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 톨루엔으로 공증발시키고, 실리카 겔 (용리 Et2O) 70 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 80을 무색 오일로서 773 mg (47%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 4.45 (s, 2H); 4.71 (s, 2H); 7.35 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 2H).
화합물 81: (1R,4S,5R,6S)-6-(4-(아지도메틸)벤질)-4,7,7-트리메틸-6-티아비시클로[3.2.1] 옥탄-6-윰 트리플루오로메탄술포네이트
(1R,4R,5R)-4,7,7-트리메틸-6-티아비시클로[3.2.1]옥탄 (CAS 번호 [5718-75-2], 580.1 mg, 3.41 mmol)에 DCM (2.2 mL) 중 화합물 80 (770 mg, 3.41 mmol)의 용액을 첨가하였다. H2O (2 mL) 중 리튬 트리플루오로메탄술포네이트 (2.71 g, 17.03 mmol)의 용액을 적가하고, 반응 매질을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 이어서, H2O (15 mL) 및 DCM (15 mL)을 반응 매질에 첨가하고, 교반을 실온에서 10분 동안 수행하였다. 수성 상을 DCM (3 x 15 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염수 (3 x 8 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 연황색 오일을 iPr2O (5 mL) 중에서 연화처리하고, 이와 같이 하여 수득된 고체를 여과하고, iPr2O (2 x 5 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 화합물 81을 백색 고체로서 1.266 g (79%) 수득하였다.
RMN 1H (400 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 1.08 (d, J = 7.2 Hz, 3H); 1.45 (m, 1H); 1.55 내지 1.80 (m, 3H); 1.69 (s, 3H); 1.75 (s, 3H); 1.99 (m, 1H); 2.40 (d, J = 13.8 Hz, 1H); 2.45 (m, 1H); 2.59 (dm, J = 13.8 Hz, 1H); 3.88 (t, J = 4.6 Hz, 1H); 4.52 (s, 2H); 4.60 (d, J = 12.8 Hz, 1H); 4.90 (d, J = 12.8 Hz, 1H); 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.61 (d, J = 8.5 Hz, 2H).
화합물 82: (3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(아지도메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6-메틸-3-네오펜틸-6-(((트리에틸실릴)옥시)메틸)-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
-70℃에서 냉각시킨 DCM (1.5 mL) 중 화합물 79 (35 mg, 48.5 μmol) 및 81 (24.8 mg, 53.3 μmol)의 용액에 BEMP (CAS 번호 [98015-45-3], 18.6 μL, 63.0 μmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 -70℃에서 2h 30 동안 교반하고, 포화 염수 (1.5 mL)를 반응 혼합물에 첨가하고, 조를 제거하고, 교반을 격렬히 실온까지 수행하였다. 수성 상을 DCM (3 x 10 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH) 5 g 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하여 화합물 82를 무색 래커로서 10.2 mg (24%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.61 (q, J = 8.1 Hz, 6H); 0.80 (s, 9H); 0.98 (t, J = 8.1 Hz, 9H); 1.02 (s, 3H); 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.34 (dd, J = 2.5 및 14.4 Hz, 1H); 1.44 (dd, J = 10.0 및 14.4 Hz, 1H); 1.85 (m, 1H); 2.27 (m, 1H); 2.62 (m, 2H); 2.88 (dd, J = 2.6 및 13.5 Hz, 1H); 2.97 (dd, J = 3.7 및 14.2 Hz, 1H); 3.00 (dd, J = 2.3 및 7.3 Hz, 1H); 3,35 (m, 1H); 3.48 (dd, J = 9.5 및 14.2 Hz, 1H); 3.61 (d, J = 10.3 Hz, 1H); 3.81 (s, 3H); 3.92 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 4.15 (m, 1H); 4.46 (s, 2H); 4.48 (td, J = 2.5 및 9.7 Hz, 1H); 5.10 (m, 1H); 5.78 (dd, J = 2.2 및 15.3 Hz, 1H); 6.40 (ddd, J = 4.3, 11.6 및 15.3 Hz, 1H); 7.04 (m, 2H); 7.14 (dd, J = 2.3 및 8.6 Hz, 1H); 7.28 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.96 (d, J = 9.7 Hz, 1H); 8.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 120; m/z = 865 [M-H]-; m/z = 867 [M+H]+; m/z = 911 [M-H+HCO2H]-; tR = 1.87분.
실시예 32
(3S,10R,16S,E)-16-((S)-1-((2R,3R)-3-(4-(아미노메틸)페닐)옥시란-2-일)에틸)-10-(3-클로로-4-메톡시벤질)-6-메틸-3-네오펜틸-6-(((트리에틸실릴)옥시)메틸)-1-옥사-4,8,11-트리아자시클로헥사데크-13-엔-2,5,9,12-테트라온
DCM (1.3 mL) 및 MeOH (0.7 mL) 중 화합물 82 (9.4 mg, 10.84 μmol)의 용액에 H2O (0.7 mL) 중 TCEP (3.45 mg, 11.9 μmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 매질을 실온에서 밤새 교반한 다음 수성 NaHCO3 (2.5 mL)을 첨가하고, 교반을 10분 동안 수행하였다. 수성 상을 DCM (3 x 10 mL)으로 추출하고, 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (구배 용리 DCM/MeOH/H2O) 5 g 상에서 정제하여 실시예 32를 백색 래커로서 4.55 mg (57%) 수득하였다.
RMN 1H (500 MHz, ppm 단위 δ, DMSO-d6): 0.82 (s, 9H); 1.01 (s, 3H); 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.33 (dd, J = 2.3 및 14.5 Hz, 1H); 1.56 (dd, J = 10.1 및 14.5 Hz, 1H); 1.82 (m, 1H); 2.27 (m, 1H); 2.64 (m, 2H); 2.88 (dd, J = 2.6 및 13.5 Hz, 1H); 2.92 (dd, J = 2.2 및 7.3 Hz, 1H); 2.96 (dd, J = 4.0 및 11.2 Hz, 1H); 3,19 (dd, J = 4.3 및 10.9 Hz, 1H); 3.41 (m, 2H); 3.74 (s, 2H); 3.81 (s, 3H); 3.88 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.18 (m, 1H); 4.47 (td, J = 2.1 및 9.4 Hz, 1H); 4.91 (dd, J = 4.2 및 6.2 Hz, 1H); 5.08 (m, 1H); 5.76 (dd, J = 2.3 및 15.5 Hz, 1H); 6.40 (ddd, J = 3.7, 11.5 및 15.5 Hz, 1H); 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 7.11 (m, 1H); 7.14 (dd, J = 2.4 및 8.8 Hz, 1H); 7.22 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 7.25 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 7.35 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 8.08 (d, J = 9.4 Hz, 1H); 8.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 725 [M-H]-; m/z = 727 [M+H]+; tR = 0.79분.
약리학적 결과
본 발명의 화합물에 대해 그의 항종양 효과를 결정하기 위한 약리학적 시험을 행하였다. 화학식 (III)의 ADC를 또한 혈장 안정성 면에서 평가하였다.
예시적 목적을 위해, WO2011/001052로부터 유래한 2종의 접합체인 하기 도시된 ADC1 및 ADC2를 또한 시험하였다.
화학식 (I)의 크립토피신 화합물에 의한 HCT116 및 MDA-MB-231 세포주의 증식 억제 평가
지수 성장기의 HCT116 및 MDA-MB-231 세포를 트립신처리하고, 그의 각각의 배양 배지 (MDA-MB-231 세포에 대해서는 DMEM/F12 깁코(Gibco) #21331, 10% FCS 깁코 #10500-056, 2 nM 글루타민 깁코 #25030; HCT116 세포에 대해서는 DMEM 깁코 #11960, 10% FCS 깁코 #10500-056, 2 mM 글루타민 깁코 #25030) 중에 재현탁시켰다. 세포 현탁액을, 시토스타(Cytostar) 96-웰 배양 플레이트 (지이 헬스케어 유럽(GE Healthcare Europe), #RPNQ0163)에서 혈청을 함유하는 완전(whole) 배양 배지 중에 5000개 세포/웰의 밀도로 시딩하였다. 4시간 동안 인큐베이션한 후, 크립토피신 화합물의 연속 희석물을 10-7 M로부터 10-12 M로 감소하는 농도로 (각각의 농도에 대해 삼중으로) 웰에 첨가하였다. 세포를 크립토피신 화합물의 존재 하에 5% CO2를 함유하는 분위기 중에서 37℃에서 3일 동안 배양하였다. 제4일에, 10 μl의 14C-티미딘 용액 (0.1 μCi/웰, 퍼킨 엘머(Perkin Elmer) #NEC56825000)을 각각의 웰에 첨가하였다. 14C-티미딘 혼입을 실험을 시작하고 나서 96시간 후에 마이크로베타 방사능 카운터 (퍼킨 엘머)로 측정하였다. 데이터를, 크립토피신 화합물로 처리된 세포로 수득된 감소된 카운트와, 대조군 웰의 세포 (배양 배지 단독으로 처리됨)로 수득된 카운트 사이의 비를 결정함으로써 생존 백분율의 형태로 표현하였다.
억제 활성은 활성을 50% 억제하는 농도에 의해 주어진다.
1 화학식 (I)의 크립토피신 화합물을 명칭 "구조 코멘트"의 칼럼에 명시된 바와 같이 순수 β 에폭시드 또는 α 및 β 에폭시드의 혼합물로서 시험하였음. β 에폭시드가 α 에폭시드보다 통상적으로 50 내지 100배 더 강력함은 문헌에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Al-Awar R.S., et al., J Med Chem 2003, 46, 2985-3007] 참조).
화학식 (I)의 크립토피신 화합물은 HCT116 및 MDA-MB-231 세포주의 증식을 50 pM 내지 2.815 nM 범위의 IC50으로 억제하는 것으로 밝혀졌다.
화학식 (III)의 ADC에 의한 MDA-MB-231 세포주의 증식 억제 평가
지수 성장기의 MDA-MB-231 세포를 트립신처리하고, 그의 배양 배지 (DMEM/F12 깁코 #21331, 10% FCS 깁코 #10500-056, 2 nM 글루타민 깁코 #25030) 중에 재현탁시켰다. 세포 현탁액을, 시토스타 96-웰 배양 플레이트 (지이 헬스케어 유럽, #RPNQ0163)에서 혈청을 함유하는 완전 배양 배지 중에 5000개 세포/웰의 밀도로 시딩하였다. 4시간 동안 인큐베이션한 후, ADC의 연속 희석물을 10-7 M로부터 10-12 M로 감소하는 농도로 (각각의 농도에 대해 삼중으로) 웰에 첨가하였다. 세포를 ADC의 존재 하에 5% CO2를 함유하는 분위기 중에서 37℃에서 3일 동안 배양하였다. 제4일에, 10 μl의 14C-티미딘 용액 (0.1 μCi/웰, 퍼킨 엘머 #NEC56825000)을 각각의 웰에 첨가하였다. 14C-티미딘 혼입을 실험을 시작하고 나서 96시간 후에 마이크로베타 방사능 카운터 (퍼킨 엘머)로 측정하였다. 데이터를, ADC로 처리된 세포로 수득된 감소된 카운트와, 대조군 웰의 세포 (배양 배지 단독으로 처리됨)로 수득된 카운트 사이의 비를 결정함으로써 생존 백분율의 형태로 표현하였다. 특정 실험에서는, 네이키드 항체를 실험 시작 시에 1 μM의 농도로 웰에 첨가하고, 증식의 억제를 상기 기재된 바와 같이 측정하였다.
화학식 (III)의 크립토피신 ADC, 뿐만 아니라 ADC1 및 ADC2는 MDA-MB-231 세포주의 증식을 20 pM 내지 130 pM 범위의 IC50 및 185 내지 500의 ADC 단독 vs ADC + 네이키드 항체의 선택성 비로 억제하는 것으로 밝혀졌다.
SCID 마우스에서의 단일 i.v. 투여 후 화학식 (III)의 ADC의 MTD의 결정
MTD를, 개별 마우스에 대해 연속 3일 동안 15% 체중 감소 또는 1일 동안 20% 체중 감소 또는 사망을 유도하지 않는 최대 용량으로서 결정하였다. 이를 3마리의 암컷 SCID 마우스에서의 단일 정맥내 (i.v.) 볼루스 주사 후 및 치료후 28일의 기간 동안 평가하였다.
화학식 (III)의 크립토피신 ADC는 SCID 마우스에서 20 mg/kg 내지 ≥ 50 mg/kg 범위의 MTD를 나타내었다.
단일 i.v. 투여 후 SCID 마우스에서의 MDA-MB-231에 대한 화학식 (III)의 ADC의 생체내 항종양 활성의 평가
생체내 항종양 활성을, 암컷 SCID 마우스에서의 s.c. 이식된 측정가능한 유방 MDA-MB-231 이종이식편에 대해 3종의 용량-수준에서 평가하였다. 대조군은 미치료 상태로 두었다. 접합체를 단일 i.v. 볼루스 주사에 의해 투여하였으며, 치료일은 각각의 그래프 상에 화살표 (▼)에 의해 제시되었다.
접합체의 항종양 활성의 평가를 위해, 동물을 매주 2회 칭량하고, 종양을 캘리퍼에 의한 매주 2회 측정하였다. 동물 체중은 종양 중량을 포함하였다. 종양 부피를 식: 종괴 (mm3) = [길이 (mm) × 폭 (mm)2]/2를 사용하여 계산하였다. 1차 효능 종점은 ΔT/ΔC, 중앙 퇴행 퍼센트, 부분 및 완전 퇴행 (PR 및 CR)이었다. 각각의 치료군 (T) 및 대조군 (C)에 대한 종양 부피의 변화를, 명시된 관찰일에서의 종양 부피로부터 제1 치료일 (개시일)에서의 종양 부피를 뺌으로써 각각의 종양에 대해 계산하였다. 중앙 ΔT를 치료군에 대해 계산하고, 중앙 ΔC를 대조군에 대해 계산하였다. 이어서, ΔT/ΔC를 계산하고, 백분율로서 표현하였다: ΔT/ΔC = (델타 T/델타 C)×100.
종양 퇴행 백분율은 제1 치료의 제1일 (t0)에서의 종양 부피와 비교한 명시된 관찰일 (t)에서의 치료군의 종양 부피의 감소 %로서 정의되었다. 특정한 시점에 및 각각의 동물에 대해, 퇴행 %를 계산하였다. 이어서, 군에 대해 중앙 퇴행 %를 계산하였다. % 퇴행 (t에서) = ((부피t0 - 부피t)/부피t0)×100. 퇴행은 치료 시작 시 종양 부피의 50%로 감소된 경우에 부분 퇴행 (PR)으로서 정의되고, 종양 부피가 측정될 수 없는 (0 mm3) 경우에 완전 퇴행 (CR)으로서 정의되었다. 무종양 생존자 (TFS)는 연구 종료 시 (최종 치료후 >100일)에 종양이 검출불가능한 동물로서 정의되었다.
단일 i.v. 투여 후 SCID 마우스에서의 MDA-MB-231에 대한 Ex.3의 생체내 항종양 활성의 평가
단일 i.v. 투여 후 SCID 마우스에서의 MDA-MB-231에 대한 Ex.7의 생체내 항종양 활성의 평가
단일 i.v. 투여 후 SCID 마우스에서의 MDA-MB-231에 대한 Ex.10의 생체내 항종양 활성의 평가
단일 i.v. 투여 후 SCID 마우스에서의 MDA-MB-231에 대한 Ex.14의 생체내 항종양 활성의 평가
단일 i.v. 투여 후 SCID 마우스에서의 MDA-MB-231에 대한 Ex.20의 생체내 항종양 활성의 평가
단일 i.v. 투여 후 SCID 마우스에서의 MDA-MB-231에 대한 Ex.23의 생체내 항종양 활성의 평가
이들 결과는 본 발명의 모든 시험된 실시예, 뿐만 아니라 ADC2가 0.625 mg/kg 내지 5 mg/kg 범위의 용량에서 항종양 활성을 나타내었음을 제시하였다.
SCID 마우스에서의 단일 i.v. 투여 (5 mg/kg) 후 Ex.3 및 Ex.7의 PK 파라미터의 결정
ADC 및 전체 항체의 생체내 약동학을, 단일 i.v. 볼루스 주사에 의한 접합체의 투여 후 암컷 SCID 마우스에서 평가하였다. 암컷 SCID 마우스 (5-6주령, 평균 체중 20-25 g)를 층상 후드의 무균 조건 하에 멸균실에 수용하고, 자유롭게 급식하였다. ADC를 1회 용량 수준 (10 mL/kg)의 i.v. 볼루스로서 투여하였다 (비-연속 설계, n=3 / 샘플링 시간). 각각의 동물에 대해 및 각각의 선택된 시점 (즉, 0.083, 0.25, 24, 72, 96, 168, 240, 336시간)에, 600 μL의 혈액을 심장 천자를 통해 수집한 다음, 혈액 샘플을 원심분리하였다 (4℃에서 15분 및 3500 tr/분). 혈장 샘플 중 ADC 및 전체 항체의 정량화를, 면역검정을 사용하여 수행하였다. 마우스에서의 접합체 및 전체 항체의 혈장 농도 대 시간 프로파일 및 PK 파라미터를 비-구획화 분석 (포에닉스(Phoenix), 윈논린(WinNonLin) 버전 6.3)을 사용하여 특징화하였으며, 도 15 및 16에 도시되어 있다. 농도-시간 곡선하 면적, AUC (μg.일/mL)를 사다리꼴 규칙에 의해 추정하였다. t=0에서의 농도 C0 (μg/mL), 클리어런스 CL (L/(일.kg) 및 최종 제거 반감기 t1/2 (일)을 곡선으로부터 유도 및 계산하였다.
a: 단지 AUCext >> 30% (즉 42%)로서의 참고 데이터; b: 단지 AUCext >> 30% (즉 50%)로서의 참고 데이터.
SCID 마우스에서 5 mg/kg으로 단일 i.v. 투여한 후 화학식 (III)의 크립토피신 ADC의 혈장 안정성의 HRMS에 의한 평가
PK 연구로부터의 혈장 샘플을 또한 LC-HRMS에 의해 분석하였다. 크로마토그래피 분석을 워터스 액퀴티 I 클래스 및 워터스 대량 정제용 마이크로 탈염 20 μm (2.1 x 5 mm) 칼럼 상에서 80℃에서 하기 기재된 바와 같은 (A) 물 + 0.1% 포름산/(B) CH3CN + 0.1% 포름산의 구배 용리를 사용하여 수행하였다.
질량 분광측정법을 워터스 QTOF 시냅트(Synapt) G2-S 기계 상에서 전기분무 이온화를 사용하여 양성 모드 (ES+)로 수행하였다. 질량 스펙트럼은 워터스 바이오파마링스(Biopharmalynx) 소프트웨어로 디컨볼루션하였다. HRMS 스펙트럼을 모든 시험된 실시예에 대해 수득하였으며, 도 20 내지 25에 도시되어 있다.
이들 결과는 본 발명의 모든 시험된 실시예가 참조 ADC인 ADC1 및 ADC2에서 관찰된 대사를 나타내지 않았음을 제시하였다.
따라서, 본 발명의 화합물은 항암 활성을 가지며, 본 발명의 접합체는 마우스 혈장 중에서 개선된 안정성을 나타냄이 명백하다.
따라서, 본 발명의 또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 항암제로서의, 화학식 (I)의 크립토피신 화합물 또는 화학식 (III)의 접합체의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 화학식 (III)의 접합체를 포함하는 의약을 또한 제공한다.
이들 의약은 특히 암의 치료에서, 치료용으로 사용된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 활성 성분으로서 본 발명에 따른 화학식 (III)의 접합체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 이들 제약 조성물은 유효 용량의 본 발명에 따른 화학식 (III)의 적어도 1종의 접합체 및 또한 적어도 1종의 제약상 허용되는 부형제를 포함한다.
상기 부형제는 원하는 제약 형태 및 투여 방법에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상의 부형제로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 유효 용량의 본 발명에 따른 화학식 (III)의 접합체를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 제시된 병리상태를 치료하는 방법을 또한 제공한다.
Claims (39)
- 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
여기서
R1은 (C1-C6)알킬 기를 나타내고;
R2 및 R3은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기를 나타내거나;
또는 대안적으로 R2 및 R3은 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 또는 (C3-C6)헤테로시클로알킬 기를 형성하고;
R4 및 R5는 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기 또는 (C1-C6)알킬-NH(R12) 기 또는 (C1-C6)알킬-OH 기 또는 (C1-C6)알킬-SH 기 또는 (C1-C6)알킬-CO2H 기를 나타내거나;
또는 대안적으로 R4 및 R5는 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 또는 (C3-C6)헤테로시클로알킬 기를 형성하고;
R6은 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기를 나타내고;
R7 및 R8은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기 또는 (C1-C6)알킬-CO2H 기 또는 (C1-C6)알킬-N(C1-C6)알킬2 기를 나타내거나;
또는 대안적으로 R7 및 R8은 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 (C3-C6)시클로알킬 기 또는 (C3-C6)헤테로시클로알킬 기를 형성하고;
R9는, 수소 원자, -OH, (C1-C4)알콕시, 할로겐 원자, -NH2, -NH(C1-C6)알킬 또는 -N(C1-C6)알킬2 또는 -NH(C1-C6)시클로알킬 또는 (C3-C6)헤테로시클로알킬로부터 서로 독립적으로 선택된, 페닐 핵의 1개 이상의 치환기를 나타내고;
R10은, 수소 원자 및 (C1-C4)알킬로부터 선택된, 페닐 핵의 적어도 1개의 치환기를 나타내고;
W는
(C1-C6)알킬-NH(R11),
(C1-C6)알킬-OH,
(C1-C6)알킬-SH,
CO2H 또는 C(=O)NH2;
(C1-C6)알킬-CO2H 또는 (C1-C6)알킬-C(=O)NH2; 또는
(C1-C6)알킬-N3
을 나타내고;
R11 및 R12는 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기를 나타낸다.
- 제1항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, R1이 메틸 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R2 및 R3이 수소 원자를 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3 중 1개가 메틸 기를 나타내고, 다른 1개가 수소 원자를 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R2 및 R3이 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 시클로프로필 기를 형성하는 것을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R4 및 R5가 메틸 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R6이 수소 원자를 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R7 및 R8이 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R9가 메톡시 기 및 염소 원자로부터 선택된 2개의 치환기를 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R10이 수소 원자를 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
R1이 (C1-C6)알킬을 나타내고;
각각의 R2 및 R3이 수소 원자를 나타내고;
R6이 수소 원자를 나타내고;
R9가 메톡시 기 및 염소 원자로부터 선택된 2개의 치환기를 나타내고;
R10이 수소 원자를 나타내는 것
을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물. - 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
R1이 (C1-C6)알킬을 나타내고;
R2 및 R3 중 1개가 (C1-C6)알킬을 나타내고, 다른 1개가 수소 원자를 나타내고;
R6이 수소 원자를 나타내고;
R9가 메톡시 기 및 염소 원자로부터 선택된 2개의 치환기를 나타내고;
R10이 수소 원자를 나타내는 것
을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물. - 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, W가 (C1-C6)알킬-NHR11, (C1-C6)알킬-OH, (C1-C6)알킬-SH 및 (C1-C6)알킬-CO2H로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제14항에 있어서, W가 CH2-NH2 또는 CH2-OH 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제1항에 있어서, 하기 목록으로부터 선택된 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드.
여기서
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같고,
Y는 (C1-C6)알킬-NR11, (C1-C6)알킬-O, (C1-C6)알킬-S, C(=O)O, C(=O)NH, (C1-C6)알킬-C(=O)O, (C1-C6)알킬-C(=O)NH 또는 (C1-C6)알킬-트리아졸 기로부터 선택되고;
R11은 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기를 나타내고;
L은 링커를 나타내고;
RCG1은 링커의 말단에 존재하는 반응성 화학적 기를 나타낸다.
- 제17항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드.
- 제17항 또는 제18항에 있어서, Y가 (C1-C6)알킬-NR11을 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드.
- 제19항에 있어서, Y가 CH2-NH를 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드.
- 제17항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, L이 화학식 (IV)의 것이며,
여기서
L1은
Y = (C1-C6)알킬-N(R11)인 경우에는, 단일 결합 또는 NR16(헤테로)아릴-CR15R14-O-C(=O) 기;
Y = (C1-C6)알킬-O 또는 (C1-C6)알킬-S인 경우에는, NR18-(C2-C6)알킬-NR17-C(=O) 기 또는 NR16(헤테로)아릴-CR15R14-O-C(=O)-NR18-(C2-C6)알킬-NR17-C(=O) 기;
Y = C(=O)O, C(=O)NH, (C1-C6)알킬-C(=O)O 또는 (C1-C6)알킬-C(=O)NH인 경우에는, NR16(헤테로)아릴-CR15R14- 기
를 나타내고;
R11, R14, R15, R16, R17 및 R18은 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기를 나타내고;
(AA)w는 펩티드 결합을 통해 함께 연결된 w개 아미노산 AA의 서열을 나타내고;
w는 1 내지 12 범위의 정수를 나타내고;
L2는 단일 결합 또는 (C1-C6)알킬 기 또는 (C1-C6)알킬-(OCH2CH2)i 기 또는 (C1-C6)알킬-(OCH2CH2)i-O(C1-C6)알킬 기 또는 (CH2CH2O)i(C1-C6)알킬 기 또는 CH(SO3H)-(C1-C6)알킬 기 또는 (C1-C6)알킬-CH(SO3H) 기 또는 (C1-C6)알킬-시클로헥실 기 또는 NR19-(C1-C6)알킬 기 또는 NR20-(CH2CH2O)i(C1-C6)알킬 기 또는 NR21-아릴 기 또는 NR21-헤테로아릴 기 또는 (C1-C6)알킬-NR22C(=O)-(C1-C6)알킬 기 또는 (C1-C6)알킬-NR22C(=O)-(C1-C6)알킬-(OCH2CH2)i 기를 나타내고;
R19, R20, R21 및 R22는 서로 독립적으로 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기를 나타내고;
i는 1 내지 50의 정수를 나타내고;
AA는, 알라닌 (Ala), β-알라닌, γ-아미노부티르산, 2-아미노-2-시클로헥실아세트산, 2-아미노-2-페닐아세트산, 아르기닌 (Arg), 아스파라긴 (Asn), 아스파르트산 (Asp), 시트룰린 (Cit), 시스테인 (Cys), α,α-디메틸-γ-아미노부티르산, β,β-디메틸-γ-아미노부티르산, 글루타민 (Gln), 글루탐산 (Glu), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 류신 (Leu), 리신 (Lys), ε-아세틸-리신 (AcLys), 메티오닌 (Met), 오르니틴 (Orn), 페닐알라닌 (Phe), 프롤린 (Pro), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr), 발린 (Val)으로부터 선택된 배위 D 또는 L의 천연 또는 비천연 아미노산을 나타내는 것임
을 특징으로 하는 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드. - 제21항에 있어서, 서열 (AA)w가 하기 화학식을 가지며,
여기서 R23은 AA의 측쇄를 나타내는 것임
을 특징으로 하는 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드. - 제21항 또는 제22항에 있어서, 서열 AA가 알라닌 (Ala), 시트룰린 (Cit), 글루타민 (Gln), 글리신 (Gly), ε-아세틸-리신 (AcLys), 발린 (Val)을 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드.
- 제17항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, RCG1이,
-Za가 단일 결합, O 또는 NH를 나타내고,
Ra가 H를 나타내거나, 또는 (C1-C6)알킬, (C3-C7)시클로알킬, (C5-C10)아릴, (C5-C10)헤테로아릴 또는 (C3-C7)헤테로시클로알킬 기 또는 숙신이미딜 기를 나타내는 것인
-C(=O)-ZaRa 기;
- 하기 반응성 기 중 1종: 말레이미도기; R13이 수소 원자 또는 (C1-C6)알킬 기를 나타내는 것인 할로아세트아미도
기; -Cl; -N3; -OH; -SH; -NH2; -C≡CH,
기 또는 O-(C1-C6)알킬 히드록실아민 기
로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드. - 제17항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, L2가 (C1-C6)알킬 기 또는 (C1-C6)알킬-(OCH2CH2)i 기 또는 CH(SO3H)-(C1-C6)알킬 기를 나타내는 것을 특징으로 하는 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드.
- 제17항에 있어서, 하기 목록으로부터 선택된 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드.
- 화학식 (III)의 접합체.
여기서
R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 및 R10은 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같고;
Y 및 L은 제17항 내지 제23항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같고;
G는 링커의 말단에 존재하는 반응성 기인 RCG1과, Ab 상에 존재하는 직교 반응성 기인 RCG2 사이의 반응 생성물을 나타내고;
Ab는 항체를 나타낸다.
- 제27항에 있어서, 하기 구조를 갖는 화학식 (III)의 접합체.
- 제27항 또는 제28항에 있어서, RCG2가,
항체의 표면에 존재하는 리신 잔기의 측쇄에 의해 함유된 리신의 ε-아미노 기;
항체 중쇄 및 경쇄의 N-말단 아미노산의 α-아미노 기;
힌지 영역의 사카라이드 기;
쇄내 디술피드 결합을 환원시킴으로써 생성된 시스테인의 티올, 또는 조작된 시스테인의 티올;
항체의 표면에 존재하는 일부 글루타민 잔기의 측쇄에 의해 함유된 아미드 기;
포르밀글리신 생성 효소를 사용하여 도입된 알데히드 기
로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화학식 (III)의 접합체. - 제27항 또는 제28항에 있어서,
RCG1이 N-히드록시숙신이미딜 에스테르를 나타내는 경우에, RCG2는 -NH2 기를 나타내고;
RCG1이 말레이미도 또는 할로아세트아미도 관능기 또는 -Cl 기를 나타내는 경우에, RCG2는 -SH 기를 나타내고;
RCG1이 -N3 기를 나타내는 경우에, RCG2는 -C≡CH 기 또는 활성화된 C≡C를 나타내고;
RCG1이 -OH 또는 -NH2 기를 나타내는 경우에, RCG2는 카르복실산 또는 아미드 관능기를 나타내고;
RCG1이 -SH 기를 나타내는 경우에, RCG2는 말레이미도 또는 할로아세트아미도 관능기를 나타내고;
RCG1이 -C≡CH 관능기 또는 활성화된 C≡C를 나타내는 경우에, RCG2는 -N3 기를 나타내고;
RCG1이 O-알킬 히드록실아민 관능기 또는 픽테트-스펭글러(Pictet-Spengler) 반응 기재를 나타내는 경우에, RCG2는 알데히드 또는 케톤 관능기를 나타내는 것
을 특징으로 하는 화학식 (III)의 접합체. - 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, G가 하기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화학식 (III)의 접합체.
- 하기 단계를 포함하는, 화학식 (I)의 크립토피신 화합물을 제조하는 방법이며,
여기서
- 단계 (i)은 커플링 시약의 존재 하의, 단편 AD3과 대안적 BC 사이의 펩티드 커플링이고;
- 단계 (ii)는 촉매의 존재 하의, 폐환 복분해에 의한 마크로고리화이고;
- 단계 (iii)은 산성 조건에서의 p-메톡시벤질 에테르의 탈보호이고;
- 단계 (iv)는 산화제를 사용하는, 알콜의 산화이고;
- 단계 (v)는 염기의 존재 하에 적절하게 치환된 이소티오시네올-유래 키랄 술포늄을 사용하는, 비대칭 코리-차이코프스키(Corey-Chaykovsky) 반응에 의한 에폭시드의 도입이고;
- 단계 (vi)은 아지도 기의 환원인,
화학식 (I)의 크립토피신 화합물을 제조하는 방법. - (i) - 임의로 변형제에 의해 변형된, 항체의 임의로 완충된 수용액과,
- 제17항 내지 제26항 중 어느 한 항에 정의된 바와 같은 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드의 용액을
접촉시키고 반응하도록 하여, 공유 결합의 형성에 의해 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드를 항체에 부착시키는 단계이며,
여기서 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드의 화학적 기 RCG1는 항체 상에 존재하는 화학적 기 RCG2에 대해, 특히 항체 상에 존재하는 아미노 기에 대해 반응성이고, 상기 화학적 기 RCG2는 적절한 경우에 변형제에 의해 도입된 것인 단계;
(ii) 및 이어서 임의로, 화학식 (II)의 크립토피신 페이로드 및/또는 미반응 항체 및/또는 형성되었을 수 있는 임의의 응집체로부터, 단계 (i)에서 형성된 접합체를 분리하는 단계
를 포함하는, 화학식 (III)의 접합체를 제조하는 방법. - 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (III)의 접합체를 포함하는 것을 특징으로 하는 의약.
- 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (III)의 접합체, 및 또한 적어도 1종의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 것을 특징으로 하는 제약 조성물.
- 항암제로서의, 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (I)의 크립토피신 화합물의 용도.
- 항암제로서의, 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (III)의 접합체의 용도.
- 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료에 사용하기 위한 화학식 (I)의 크립토피신 화합물.
- 제27항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료에 사용하기 위한 화학식 (III)의 접합체.
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