KR20180042217A - 치료 방법 - Google Patents
치료 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20180042217A KR20180042217A KR1020187001041A KR20187001041A KR20180042217A KR 20180042217 A KR20180042217 A KR 20180042217A KR 1020187001041 A KR1020187001041 A KR 1020187001041A KR 20187001041 A KR20187001041 A KR 20187001041A KR 20180042217 A KR20180042217 A KR 20180042217A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- exosomes
- amphoteric
- mammalian
- human
- exosome
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims abstract description 26
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims abstract description 24
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims abstract description 22
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims abstract description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 claims description 215
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 61
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 36
- 210000003425 amniotic epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 33
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 27
- 206010006475 bronchopulmonary dysplasia Diseases 0.000 claims description 24
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims description 24
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims description 23
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 23
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 22
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 claims description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 13
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 10
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 claims description 9
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 9
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 claims description 9
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 8
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 claims description 8
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 8
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims description 8
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 7
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims description 7
- 230000006872 improvement Effects 0.000 claims description 7
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 claims description 7
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 6
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 claims description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 5
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 5
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 claims description 5
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 claims description 5
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 claims description 5
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 claims description 4
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims description 4
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims description 4
- 208000003435 Optic Neuritis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010037394 Pulmonary haemorrhage Diseases 0.000 claims description 4
- 208000002552 acute disseminated encephalomyelitis Diseases 0.000 claims description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 claims description 4
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 4
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 4
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 claims description 4
- 208000009174 transverse myelitis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 claims description 3
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims description 3
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims description 3
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 claims description 3
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 claims description 3
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 claims description 3
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000036546 leukodystrophy Diseases 0.000 claims description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 claims description 3
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 claims description 3
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 2
- 208000032376 Lung infection Diseases 0.000 claims 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 claims 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 claims 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 claims 1
- 102000006757 Wnt Receptors Human genes 0.000 claims 1
- 108010047118 Wnt Receptors Proteins 0.000 claims 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 claims 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims 1
- 208000012947 ischemia reperfusion injury Diseases 0.000 claims 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 15
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 13
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 11
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 8
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 6
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 6
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 5
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 5
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 4
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 4
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 4
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 4
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 4
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 230000009325 pulmonary function Effects 0.000 description 4
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 230000007730 Akt signaling Effects 0.000 description 3
- 102100023705 C-C motif chemokine 14 Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 101000836492 Dictyostelium discoideum ALG-2 interacting protein X Proteins 0.000 description 3
- 102100030209 Elongin-B Human genes 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000978381 Homo sapiens C-C motif chemokine 14 Proteins 0.000 description 3
- 101001134621 Homo sapiens Programmed cell death 6-interacting protein Proteins 0.000 description 3
- 208000004852 Lung Injury Diseases 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 3
- 102100033344 Programmed cell death 6-interacting protein Human genes 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 206010069363 Traumatic lung injury Diseases 0.000 description 3
- 230000004156 Wnt signaling pathway Effects 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001901 basal epithelial cell of bronchioalveolar duct junction Anatomy 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 3
- 231100001039 immunological change Toxicity 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 231100000515 lung injury Toxicity 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 3
- 230000007433 nerve pathway Effects 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 208000002815 pulmonary hypertension Diseases 0.000 description 3
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 102100039998 Apolipoprotein C-II Human genes 0.000 description 2
- BHELIUBJHYAEDK-OAIUPTLZSA-N Aspoxicillin Chemical compound C1([C@H](C(=O)N[C@@H]2C(N3[C@H](C(C)(C)S[C@@H]32)C(O)=O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC(=O)NC)=CC=C(O)C=C1 BHELIUBJHYAEDK-OAIUPTLZSA-N 0.000 description 2
- 102100034691 Astrocytic phosphoprotein PEA-15 Human genes 0.000 description 2
- 102100026437 Branched-chain-amino-acid aminotransferase, cytosolic Human genes 0.000 description 2
- 102100031629 COP9 signalosome complex subunit 1 Human genes 0.000 description 2
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 description 2
- 102100028952 Drebrin Human genes 0.000 description 2
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 2
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102100039466 Eukaryotic translation initiation factor 5B Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 101000734668 Homo sapiens Astrocytic phosphoprotein PEA-15 Proteins 0.000 description 2
- 101000838600 Homo sapiens Drebrin Proteins 0.000 description 2
- 101001011846 Homo sapiens Elongin-B Proteins 0.000 description 2
- 101001139062 Homo sapiens Kinesin heavy chain isoform 5A Proteins 0.000 description 2
- 101001006789 Homo sapiens Kinesin heavy chain isoform 5C Proteins 0.000 description 2
- 101001124062 Homo sapiens NSFL1 cofactor p47 Proteins 0.000 description 2
- 101000743829 Homo sapiens Ras-related protein Rab-12 Proteins 0.000 description 2
- 101000633680 Homo sapiens Tetratricopeptide repeat protein 37 Proteins 0.000 description 2
- 101000796121 Homo sapiens Thioredoxin-like protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000613251 Homo sapiens Tumor susceptibility gene 101 protein Proteins 0.000 description 2
- 101000717424 Homo sapiens UV excision repair protein RAD23 homolog B Proteins 0.000 description 2
- 102100020685 Kinesin heavy chain isoform 5A Human genes 0.000 description 2
- 102100027928 Kinesin heavy chain isoform 5C Human genes 0.000 description 2
- 102100024192 Mitogen-activated protein kinase 3 Human genes 0.000 description 2
- 235000009421 Myristica fragrans Nutrition 0.000 description 2
- 102100028383 NSFL1 cofactor p47 Human genes 0.000 description 2
- 102100032077 Neuronal calcium sensor 1 Human genes 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 102100037392 Phosphoglycerate kinase 2 Human genes 0.000 description 2
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 102100027062 Septin-14 Human genes 0.000 description 2
- 102100029210 Tetratricopeptide repeat protein 37 Human genes 0.000 description 2
- 102100031373 Thioredoxin-like protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100022567 Tubulin polymerization-promoting protein family member 3 Human genes 0.000 description 2
- 102100040879 Tumor susceptibility gene 101 protein Human genes 0.000 description 2
- 102100020779 UV excision repair protein RAD23 homolog B Human genes 0.000 description 2
- 102100037814 Vigilin Human genes 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002669 amniocentesis Methods 0.000 description 2
- 210000001691 amnion Anatomy 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000007847 digital PCR Methods 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 2
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 2
- 230000007184 endocrine pathway Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 2
- 239000001115 mace Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 2
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000003307 slaughter Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 2
- 108010008054 testis specific phosphoglycerate kinase Proteins 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- 101150063992 APOC2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100034213 ATPase family protein 2 homolog Human genes 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 102100025677 Alkaline phosphatase, germ cell type Human genes 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 108010024284 Apolipoprotein C-II Proteins 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004152 Bone morphogenetic protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000654 Bone morphogenetic protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101710142286 Branched-chain-amino-acid transaminase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010070033 COP9 Signalosome Complex Proteins 0.000 description 1
- 102100021824 COP9 signalosome complex subunit 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100028879 COP9 signalosome complex subunit 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100024153 Cadherin-15 Human genes 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000003692 Caveolin 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000032 Caveolin 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100038909 Caveolin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100038503 Cellular retinoic acid-binding protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 description 1
- 229940123150 Chelating agent Drugs 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 102100023708 Coiled-coil domain-containing protein 80 Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 102000052581 Cullin Human genes 0.000 description 1
- 108700020475 Cullin Proteins 0.000 description 1
- 102100024382 Cullin-associated NEDD8-dissociated protein 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010072220 Cyclophilin A Proteins 0.000 description 1
- 102100037073 Cytoplasmic dynein 1 light intermediate chain 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100040074 DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB11-b2 Human genes 0.000 description 1
- 101150014361 Delta gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 101150084967 EPCAM gene Proteins 0.000 description 1
- 108010003751 Elongin Proteins 0.000 description 1
- 102100029174 Ethanolamine-phosphate cytidylyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 101710092084 Eukaryotic translation initiation factor 5B Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102100029378 Follistatin-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102100039280 Glycogenin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025989 Glyoxalase domain-containing protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100028967 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Human genes 0.000 description 1
- 108010024164 HLA-G Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000780587 Homo sapiens ATPase family protein 2 homolog Proteins 0.000 description 1
- 101000574440 Homo sapiens Alkaline phosphatase, germ cell type Proteins 0.000 description 1
- 101000766268 Homo sapiens Branched-chain-amino-acid aminotransferase, cytosolic Proteins 0.000 description 1
- 101000940485 Homo sapiens COP9 signalosome complex subunit 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000896048 Homo sapiens COP9 signalosome complex subunit 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000916502 Homo sapiens COP9 signalosome complex subunit 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000762242 Homo sapiens Cadherin-15 Proteins 0.000 description 1
- 101000714553 Homo sapiens Cadherin-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000740981 Homo sapiens Caveolin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001099865 Homo sapiens Cellular retinoic acid-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000978383 Homo sapiens Coiled-coil domain-containing protein 80 Proteins 0.000 description 1
- 101000910263 Homo sapiens Cullin-associated NEDD8-dissociated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000954691 Homo sapiens Cytoplasmic dynein 1 light intermediate chain 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001104175 Homo sapiens DNA-directed RNA polymerase II subunit RPB11-b2 Proteins 0.000 description 1
- 101001011859 Homo sapiens Elongin-A Proteins 0.000 description 1
- 101000881731 Homo sapiens Elongin-C Proteins 0.000 description 1
- 101000988434 Homo sapiens Ethanolamine-phosphate cytidylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101001036496 Homo sapiens Eukaryotic translation initiation factor 5B Proteins 0.000 description 1
- 101001062535 Homo sapiens Follistatin-related protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000888201 Homo sapiens Glycogenin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000857136 Homo sapiens Glyoxalase domain-containing protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 1
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000998146 Homo sapiens Interleukin-17A Proteins 0.000 description 1
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000688216 Homo sapiens Intestinal-type alkaline phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101001052490 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 3 Proteins 0.000 description 1
- 101100031018 Homo sapiens NPEPPSL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000637977 Homo sapiens Neuronal calcium sensor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001120413 Homo sapiens Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A-like 4C Proteins 0.000 description 1
- 101001120412 Homo sapiens Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A-like 4D Proteins 0.000 description 1
- 101001120407 Homo sapiens Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A-like 4E Proteins 0.000 description 1
- 101000626165 Homo sapiens Putative tenascin-XA Proteins 0.000 description 1
- 101000714026 Homo sapiens RUN and FYVE domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000836005 Homo sapiens S-phase kinase-associated protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001094146 Homo sapiens SUMO-activating enzyme subunit 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000836552 Homo sapiens Septin-14 Proteins 0.000 description 1
- 101001059454 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MARK2 Proteins 0.000 description 1
- 101000798726 Homo sapiens Transmembrane 9 superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000679406 Homo sapiens Tubulin polymerization-promoting protein family member 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000662020 Homo sapiens Ubiquitin-like modifier-activating enzyme 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000644131 Homo sapiens Uroplakin-3b-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000805481 Homo sapiens Vigilin Proteins 0.000 description 1
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 1
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 1
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 1
- 102100033461 Interleukin-17A Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102100024319 Intestinal-type alkaline phosphatase Human genes 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- 101001083117 Microbacterium liquefaciens Hydantoin permease Proteins 0.000 description 1
- 108700027649 Mitogen-Activated Protein Kinase 3 Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 102100034404 Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710151542 Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000610549 Oryza sativa subsp. japonica Thioredoxin-like 3-3 Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102100034539 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A Human genes 0.000 description 1
- 102100026132 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A-like 4C Human genes 0.000 description 1
- 102100026131 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A-like 4D Human genes 0.000 description 1
- 102100026128 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A-like 4E Human genes 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004861 Phosphoric Diester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090001050 Phosphoric Diester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102100033803 Puromycin-sensitive aminopeptidase-like protein Human genes 0.000 description 1
- 102100024653 Putative tenascin-XA Human genes 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 102100036446 RUN and FYVE domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000020140 Rab12 Human genes 0.000 description 1
- 102100039106 Ras-related protein Rab-12 Human genes 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- PPTYJKAXVCCBDU-UHFFFAOYSA-N Rohypnol Chemical compound N=1CC(=O)N(C)C2=CC=C([N+]([O-])=O)C=C2C=1C1=CC=CC=C1F PPTYJKAXVCCBDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010055623 S-Phase Kinase-Associated Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000005155 SKP1 Human genes 0.000 description 1
- 108091006302 SLC2A14 Proteins 0.000 description 1
- 102100035250 SUMO-activating enzyme subunit 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710005685 Septin-14 Proteins 0.000 description 1
- 102100028904 Serine/threonine-protein kinase MARK2 Human genes 0.000 description 1
- 102100039672 Solute carrier family 2, facilitated glucose transporter member 14 Human genes 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102100032466 Transmembrane 9 superfamily member 4 Human genes 0.000 description 1
- 101710183381 Tubulin polymerization-promoting protein family member 3 Proteins 0.000 description 1
- 108010078814 Tumor Suppressor Protein p53 Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102100037939 Ubiquitin-like modifier-activating enzyme 6 Human genes 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 102100020898 Uroplakin-3b-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100031083 Uteroglobin Human genes 0.000 description 1
- 108090000203 Uteroglobin Proteins 0.000 description 1
- 206010047295 Ventricular hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 241001416177 Vicugna pacos Species 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- 101000779569 Zymomonas mobilis subsp. mobilis (strain ATCC 31821 / ZM4 / CP4) Alkaline phosphatase PhoD Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003510 anti-fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000008436 biogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000009084 cardiovascular function Effects 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000023402 cell communication Effects 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000006041 cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000029036 donor selection Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 108010062994 frequenin calcium sensor proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000011223 gene expression profiling Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 102000011054 glycogenin Human genes 0.000 description 1
- 108010062764 glycogenin Proteins 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 108010092427 high density lipoprotein binding protein Proteins 0.000 description 1
- 230000002962 histologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 102000027041 kinase binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 description 1
- 238000013123 lung function test Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005399 mechanical ventilation Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- NZWOPGCLSHLLPA-UHFFFAOYSA-N methacholine Chemical compound C[N+](C)(C)CC(C)OC(C)=O NZWOPGCLSHLLPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002329 methacholine Drugs 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005015 neuronal process Effects 0.000 description 1
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000414 obstructive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 1
- 238000000575 proteomic method Methods 0.000 description 1
- 210000001147 pulmonary artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000009613 pulmonary function test Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008263 repair mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004202 respiratory function Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 102000036071 retinoic acid binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091010987 retinoic acid binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090000064 retinoic acid receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000013424 sirius red staining Methods 0.000 description 1
- 230000036560 skin regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000021595 spermatogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 210000000603 stem cell niche Anatomy 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 201000009032 substance abuse Diseases 0.000 description 1
- 231100000736 substance abuse Toxicity 0.000 description 1
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000006459 vascular development Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Psychology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
Abstract
본 발명은 일반적으로 조직 및 신경 치료, 재생 및/또는 회복을 용이하게 하기 위해 강화된 세포-기반 치료법에 의한 포유동물 대상의 치료 방법에 관한 것이다. 포유동물 대상의 치료에 유용한 의약 및 의약의 제조 방법도 본 발명에 포함된다.
Description
본 발명은 일반적으로 조직 및 신경 치료, 재생 및/또는 회복을 용이하게 하도록 강화된 세포-기반 치료 접근법에 의한 포유동물 대상의 치료 방법에 관한 것이다. 포유동물 대상의 치료에 유용한 의약 및 의약의 생산 방법도 본 발명에 포함된다.
본 명세서에서 저자에 의해 언급된 출판물의 서지 세부사항은 상세한 설명의 끝에 알파벳순으로 수집된다.
본 명세서에서 임의의 선행 기술에 대한 언급은 이 선행 기술이 어느 나라에서의 공통적인 지식의 일부를 형성한다는 인정 또는 어떤 형태의 제안이 아니며 인정 또는 어떤 형태의 제안으로 간주되어서는 안 된다.
현대 의학은 화학 치료제 및 항생제와 같은 생물학적 제제의 동정에 의해 크게 발전했다. 그러나, 많은 의약은 다요인 기능을 가지고 있으며, 일부는 목표 외의 생리적 효과에 영향을 미친다. 세포-기반 치료법은 현대 의학의 다음 기둥으로 제안되었다(Fishback et al. (2013) Sci Transl Med 5:179 ps7).
세포-기반 치료법에서 속도 제한 인자 중 하나는 모순된 제품에 대한 잠재 성이다. 이것은 줄기 세포와 관련된 실험에서 강조된다. 예를 들어, 문헌에서 잘 특성화되고 임상 시험 수준을 달성한 반면, 간엽 줄기 세포(MSC)는 일반적으로 사용을 위해 연속 계대배양을 필요로 한다. 이것은 종종 세포가 사용될 수 있는 시기와 방법에 부정적인 영향을 미칠 수 있다.
이 문제점을 극복하기 위한 하나의 접근법은 기탁된 간엽 전구 세포를 사용하는 것이었다. 이것은 적어도 수확과 치료 사이의 지연을 피한다. 그러나 이것은 기증자들 사이에서 세포의 효능의 가변성을 가져오고 연속 계대배양의 부정적인 영향에 대한 문제를 다루지 않는다.
이 문제를 해결하기 위한 임시 조치는 "마스터(master)" 세포 은행을 갖는 것이다. 다시 말하면, 이것은 노화와 후성/핵형의 변화가 일어나기 전에 세포가 겪을 수 있는 한정된 수의 계대배양이 있다는 피할 수 없는 문제를 극복하지 못한다(Schellenberg et al. (2011) Aging (Albany NY) 3: 873-888). 또한 반복 투여 후에 면역 거부 반응의 위험이 있다.
경우에 따라, 산과 감시 및 신생아 치료의 현저한 개선으로, 조산아의 수가 증가하여 "미숙아 질병"의 유행에 증가를 초래한다. 하나의 구체적인 쇠약 질환은 매우 조산아의 난치병성 만성 폐 질환인 기관지 폐 이형성증(BPD)이다. 이것은 폐포의 발육불량 및 정지와 폐 모세관 구조의 붕괴를 특징으로 한다. BPD는 새로 태어난 어린이의 이환율과 사망률의 주요 사례이다. BPD의 생존자는 성인 초기에 폐쇄성 호흡기 질환(Doyle et al, (2006) Paediatrics 118: 108-113) 및 만성 나쁜 건강과 인지 저하(Lodha et al. (2014) PLoSONE: e90843)의 심각한 위험에 처해있다. 간엽 줄기 세포는 BPD를 위한 세포-기반 치료법으로 제안되었지만 위에 요약 된 이유 때문에 감정적인 스트레스를 유발하는 것과 별개로, 다른 치료법을 지연시킬 수 있는 기능적 효과가 크게 다른 세포 배치가 있을 수 있다.
폐 모세관 구조에 대한 손상의 문제는 조산아에게 국한되지 않는다. 동물 경주 산업 및 특히 경마 산업은 운동 유발 폐 출혈(EIPH)의 문제에 직면해 있다. 일부 관할 지역에서, 경주가 끝난 후 두 번 이상 코피를 흘리는 말은 생존을 위해 추가 경주가 금지된다. 이것은 엄청난 경제적 손실을 초래할 수 있다. EIPH를 예방하거나 치료하는 화학 치료 접근법은 경기력 향상과 관련하여 윤리적인 우려를 야기 할 수 있으며, 어떠한 경우에도 이런 접근법이 터진 모세혈관을 재생성하지는 못한다.
인간 양막 상피 세포(hAECs)의 유익한 효과가 문서화되어 있다(예를 들어, Hodges et al. (2012) Am J Obstet Gynerol 206: 448e8-448e15; Murphy et al. (2012) Cell Transplant I: 1477-1492; Vosdoganes et al. (2013) Cytotherapy 15:1021-1029; Yawno et al. (2013) Dev Neurosci 35:272-282). 그러나 작용 메커니즘을 규명할 필요가 있다.
따라서, 세포-기반 치료법의 문제점을 해결할 필요가 있고 대안적인 전략이 요구된다는 것이 명백하다.
본 발명에 따르면, 세포 통신을 위한 소포성 비히클은 포유동물 양막 상피 세포(AEC)로부터 방출되는 것으로 확인된다. 본 발명에서 "양수 엑소좀"으로 지칭되는 소포는 후기 엔도솜에서 유래하고 세포 표면으로부터 방출된 나노미터 크기의 세포외 소포(50-100nm)이다.
포유동물 양막 상피 세포-기반 치료법의 개선된 형태가 본 발명에 교시된다. 이 개선은 상피 세포에 의해 방출되고 내인성 수리 기전을 활성화시킴으로써 회복 효과를 나타내는 나노 크기 양막 엑소좀의 사용을 포함한다. 양수 엑소좀은 면역 세포에 직접 작용하여 T 세포 증식을 감소시키고, 대식세포 식균 작용을 증가시키고, 줄기 세포를 활성화시키고, 활성화된 섬유 아세포에서 콜라겐 생성을 억제하는 것으로 본 발명에 제시된다. 양수 엑소좀은 단백질(예를 들어, 사이토카인) 및 유전 분자(예를 들어, miRNA, mRNA 및 비 암호화 RNA)의 형태로 엑소좀 카고(cargo)의 프로파일을 방출한다는 것이 본 발명에서 제안된다.
엑소좀의 생체생성은 후기 엔도솜의 제한 막의 내향 발육에 의한 혈관내 소포의 형성을 포함한다. 후기 엔도솜은 원형질막과 융합되어 엑소좀을 방출한다. 일단 분비되면, 엑소좀은 부모 세포에 근접한 표적 세포에 의해 흡수되거나 순환을 통해 말초 부위로 이동될 수 있다. 기계적으로, 엑소좀은 부모 세포 물질을 포함하는 복잡한 벡터로서 작용한다. 이들은 단백질과 유전 물질을 포함할 수 있으며, 그 물질은 표적 세포로 옮겨진다.
따라서, 본 발명은 세포-기반 치료법에 대한 향상된 접근법의 개발에 기초한다. 본 발명은 포유동물 양막 상피 세포로부터 방출되고 면역조절, 친-재생 및 회복 효과를 갖는 양수 엑소좀의 사용을 교시한다. 양수 엑소좀은 T 세포 증식을 감소시키고, 대식세포 식균 작용을 증가시키며, miRNA, mRNA 및 비 암호화 RNA와 같은 유익한 단백체 및 유전 분자의 방출을 통해 내인성 줄기 세포를 활성화시키도록 면역 세포에 영향을 미친다. 양수 엑소좀은 상처 치유를 포함하여 조직 치료, 재생 및 회복을 용이하게 하고, 세포 유지를 촉진하며, 신경 퇴행 및 손상의 효과를 개선하고 수선 및 신경 재생을 촉진하는 것을 포함하는 신경 보호를 유도하기 위해 본 발명에서 제안된다. 양수 엑소좀은 또한 활성화된 섬유 아세포에서 콜라겐 생성을 억제한다. 엑소좀은 질환 또는 허혈성 재관류 손상 또는 장기 손상과 같은 전신 혈관구조에서 질환 또는 부작용을 이후 신장, 간, 췌장, 심장 및 폐 손상뿐만 아니라 이들 기관에서의 섬유성 상태(예를 들어, 간 또는 폐 섬유증)의 치료의 개선을 포함하는 수선 및 재생을 촉진하기 위해 추가로 제안된다. 엑소좀은 또한 수초 형성 촉진에 유용하며, 따라서 다발성 경화증과 같은 탈수초성 질환 또는 장애의 치료에 유용할 것으로 제안된다.
양수 엑소좀은 인간뿐만 아니라 비인간 포유동물에도 유익한 효과를 갖는다. 따라서, 본 발명은 인간 및 수의학 분야에도 적용된다. 인간 피험자로부터의 AEC는 본 발명에서 "hAECs"로 불린다.
수의학 응용의 한 예는 운동 유발 폐 출혈(EIPH)에 대한 말, 경주견 및 낙타를 포함하는 경주용 동물의 치료이다.
양수 엑소좀은 생물 반응기에서 포유동물 양막 상피 세포를 배양하고 조절된 배양 배지로부터 양수 엑소좀을 분리함으로써 다량으로 생산될 수 있다. 상피 세포는 불멸화 세포주로 유지될 수 있다. 양수 엑소좀은 필요에 따라 분리되거나 동결 건조된 상태로 보관될 수 있다.
본 발명의 혁신적인 특징은 양수 엑소좀을 사용하기 위해 포유동물의 양막 상피 세포의 양립 가능한 기증자를 확인할 필요가 없다는 것이다. 엑소좀은 불리한 면역 반응을 일으키지 않는다. 오히려, 기증자는 임신 단계 및/또는 신생아 또는 만삭 출산 아기의 건강과 같은 다른 특성에 기초하여 선택된다. 그러나, 한 실시태양에서, 양수 엑소좀은 임신 말기의 환자로부터의 hAEC로부터 유도된다. 양막 상피 세포는 양막 상피 세포와 상이한 생리 조건에 따라 조직 또는 신경 조직 치료, 재생 및/또는 회복을 촉진시키는 양수 엑소좀을 생성한다. 그러나 세포-기반 치료법의 단점은 없다. 따라서, 본 발명의 한 양태는 원하는 상태를 치료하는데 유용한 양수 엑소 좀을 생성하는 양막 상피 세포를 동정하기 위한 기증자 선택이다. 이것은 양막 상피 세포의 저장소의 생성을 유도할 수 있다. 특정 세포 배치는 치료할 질병이나 상태에 따라 선택될 수 있다.
양수 엑소좀을 포함하는 약학적 조성물, 양수 엑소좀을 포함하는 치료 키트 및/또는 적절한 기증자 또는 양막 상피 세포주 및 생물 반응기 키트를 스크리닝하기 위한 시약을 포함하는 치료 키트는 또한 본 발명의 교시에 의해 포함된다.
개선된 또는 변형된 형태의 세포-기반 치료법이 본 발명에 교시된다. 따라서, 양막 상피 세포의 사용에 의해 인간 피험자를 포함하는 포유동물을 치료하기 위한 개선된 세포-기반 치료 프로토콜이 본 발명에서 가능하며, 개선은 양수 엑소솜을 불멸화 양막 상피 세포주로부터 단리시키고 조직 또는 신경 조직 치료, 재생 및/또는 회복이 필요한 대상에게 전신 또는 국소 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 내용 중에 포함되어 있다.
일부 도면은 컬러 표현 또는 엔티티를 포함한다. 칼라 사진은 요청시 특허권자 또는 적절한 특허청으로부터 제공된다. 특허청으로부터 취득한 경우 수수료가 부과될 수 있다.
도 1은 전형적 컵 형태의 형태 및 약 100nm 직경을 나타내는 양수 엑소좀의 (A) 전자 현미경; (B) 엑소좀 생체생성, Alix 및 TSG101 마커의 발현의 사진 표현이다. Alix와 TSG101은 엑소좀 바이오 마커이다.
도 2는 (A) 양수 엑소좀이 hAEC 조절 배지와 유사하게 T-세포 증식을 억제한다; (B) 양수 엑소좀은 대식세포 식균 작용 n = 3을 증가시킨다는 것을 보여주는 그래프 표현이다.
도 3은 조직:공극 비가 기관지 폐 이형성증(BPD) 생쥐 모델에서 양수 엑소좀에 의해 개선된 것을 나타내는 그래프 표현이다.
도 4는 E16에서의 양막 내 LPS 주사, 출생 후 4일째의 엑소좀/세포의 주입 및 도살 지점(X 표시)을 나타내는 실시예 3에서 사용된 실험 시간의 도식적 표현이다.
도 5는 (A) 텀(term) 엑소좀이 프리텀(preterm) 엑소좀보다 더 면역 억제성이다; (B) 텀 엑소좀은 pHRodo 레이블링 n = 그룹당 3 명의 기증자에 의해 표시된 바와 같이 대식세포 식균 작용을 더 잘 증가시킬 수 있다는 것을 나타내는 그래프 표현이다.
도 6은 블레오 마이신 유발 폐 섬유증의 생쥐 모델(A); (B) 6-8개월 된 암컷 C57BI6 생쥐에서 양수 엑소좀이 확립된 폐 염증 및 섬유화를 역전시키는 것을 보여주는 그래프 표현이다. 텀 hAEC의 10 μg 또는 50 μg 엑소좀, 블레오 마이신 면역성 검사 후 7일째에 비강 내 투여.
도 7은 양성 엑소좀이 시험관 내에서 일차 인간 폐 섬유 아세포의 활성화를 역전시키는 것을 보여주는 그래프이다. 5mg/mL의 변형된 성장 인자 β 존재하에 배양되었을 때 엑소좀은 24시간 이내에 α-평활근 액틴의 단백질 수준을 감소시켰다.
도 8은 양수 엑소좀이 사이토카인-사이토카인 수용체 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA를 함유하는 것을 보여주는 도식적 표현이다. 노란색 상자는 하나 이상의 miRNA에 의한 표적을 나타낸다.
도 9는 양수 엑소좀이 Wnt 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA를 함유하는 것을 보여주는 도식적 표현이다. 노란색 상자는 하나 이상의 miRNA에 의한 표적을 나타낸다.
도 10은 양수 엑소좀이 PI3K-Akt 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA를 함유하는 것을 보여주는 도식적 표현이다. 노란색 상자는 하나 이상의 miRNA에 의한 표적을 나타낸다.
도 11은 양수 엑소좀이 miRNA 표적 TGFβ 신호 전달 경로를 함유하는 것을 보여주는 도식적 표현이다. 노란색 상자는 하나 이상의 miRNA에 의한 표적을 나타낸다.
도 12의 A는 건강한 대조군 hAEC, 텀 엑소좀 및 프리텀 엑소좀 사이의 조직 공극 비(%)를 포함하는 양수 엑소좀의 폐 재생 효과를 나타내는 그래프 표현이며, B, C 및 D는 사진 표현이다. "텀" 엑소좀은 임신 말기에 hAEC로부터 분리된 엑소좀이다. "프리텀" 엑소좀은 임신 기간 이전에 분리된다.
도 13의 A 내지 C는 양수 엑소좀이 hAEC와 마찬가지로 폐에서 재생을 유발하는 것을 보여주는 사진 표현이다. 어두운 염색은 엘라스틴 양성 선단(tips)의 증거이다.
도 14는 섬유아세포 엑소좀이 아닌 양수 엑소좀이 폐에서 내인성 줄기 세포 반응을 유발한다는 것을 나타내는 그래프 표현이다. 이 반응은 hAEC에 의해 유도 된 반응보다 훨씬 더 크다.
도 15의 A 및 B는 조직학적 간 절편 CCL4+ 염수 대 CCL4 + 엑소좀의 시리우스 레드 염색(A) 및 α-평활근 액틴(α-SMA) 면역조직화학 분석을 사용하여 증명된 바와 같이 양수 엑소좀이 간에서 항 섬유성이었다는 것을 보여준다.
도 16은 텀 대 프리텀 hAEC로부터의 엑소좀 사이의 단백체 수준에서의 차이를 나타내는 그래프 표현이다.
도 17은 hAEC 및 총 중간 간엽 줄기 세포(MSC) 간의 세포 성분 비교의 그래프 표현이다.
hAEC 총 exo
총 MSC exo(Anderson et al. (2016) Stem cells http://doi.ory/10.1002/stem.2298).
도 18은 hAEC 및 총 MSC(Anderson et al. (2016) supra) 사이의 생물학적 공정 비교를 나타내는 그래프 표현이다.
hAEC 총 exo
총 MSC exo(Anderson et al. (2016)supra)
도 1은 전형적 컵 형태의 형태 및 약 100nm 직경을 나타내는 양수 엑소좀의 (A) 전자 현미경; (B) 엑소좀 생체생성, Alix 및 TSG101 마커의 발현의 사진 표현이다. Alix와 TSG101은 엑소좀 바이오 마커이다.
도 2는 (A) 양수 엑소좀이 hAEC 조절 배지와 유사하게 T-세포 증식을 억제한다; (B) 양수 엑소좀은 대식세포 식균 작용 n = 3을 증가시킨다는 것을 보여주는 그래프 표현이다.
도 3은 조직:공극 비가 기관지 폐 이형성증(BPD) 생쥐 모델에서 양수 엑소좀에 의해 개선된 것을 나타내는 그래프 표현이다.
도 4는 E16에서의 양막 내 LPS 주사, 출생 후 4일째의 엑소좀/세포의 주입 및 도살 지점(X 표시)을 나타내는 실시예 3에서 사용된 실험 시간의 도식적 표현이다.
도 5는 (A) 텀(term) 엑소좀이 프리텀(preterm) 엑소좀보다 더 면역 억제성이다; (B) 텀 엑소좀은 pHRodo 레이블링 n = 그룹당 3 명의 기증자에 의해 표시된 바와 같이 대식세포 식균 작용을 더 잘 증가시킬 수 있다는 것을 나타내는 그래프 표현이다.
도 6은 블레오 마이신 유발 폐 섬유증의 생쥐 모델(A); (B) 6-8개월 된 암컷 C57BI6 생쥐에서 양수 엑소좀이 확립된 폐 염증 및 섬유화를 역전시키는 것을 보여주는 그래프 표현이다. 텀 hAEC의 10 μg 또는 50 μg 엑소좀, 블레오 마이신 면역성 검사 후 7일째에 비강 내 투여.
도 7은 양성 엑소좀이 시험관 내에서 일차 인간 폐 섬유 아세포의 활성화를 역전시키는 것을 보여주는 그래프이다. 5mg/mL의 변형된 성장 인자 β 존재하에 배양되었을 때 엑소좀은 24시간 이내에 α-평활근 액틴의 단백질 수준을 감소시켰다.
도 8은 양수 엑소좀이 사이토카인-사이토카인 수용체 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA를 함유하는 것을 보여주는 도식적 표현이다. 노란색 상자는 하나 이상의 miRNA에 의한 표적을 나타낸다.
도 9는 양수 엑소좀이 Wnt 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA를 함유하는 것을 보여주는 도식적 표현이다. 노란색 상자는 하나 이상의 miRNA에 의한 표적을 나타낸다.
도 10은 양수 엑소좀이 PI3K-Akt 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA를 함유하는 것을 보여주는 도식적 표현이다. 노란색 상자는 하나 이상의 miRNA에 의한 표적을 나타낸다.
도 11은 양수 엑소좀이 miRNA 표적 TGFβ 신호 전달 경로를 함유하는 것을 보여주는 도식적 표현이다. 노란색 상자는 하나 이상의 miRNA에 의한 표적을 나타낸다.
도 12의 A는 건강한 대조군 hAEC, 텀 엑소좀 및 프리텀 엑소좀 사이의 조직 공극 비(%)를 포함하는 양수 엑소좀의 폐 재생 효과를 나타내는 그래프 표현이며, B, C 및 D는 사진 표현이다. "텀" 엑소좀은 임신 말기에 hAEC로부터 분리된 엑소좀이다. "프리텀" 엑소좀은 임신 기간 이전에 분리된다.
도 13의 A 내지 C는 양수 엑소좀이 hAEC와 마찬가지로 폐에서 재생을 유발하는 것을 보여주는 사진 표현이다. 어두운 염색은 엘라스틴 양성 선단(tips)의 증거이다.
도 14는 섬유아세포 엑소좀이 아닌 양수 엑소좀이 폐에서 내인성 줄기 세포 반응을 유발한다는 것을 나타내는 그래프 표현이다. 이 반응은 hAEC에 의해 유도 된 반응보다 훨씬 더 크다.
도 15의 A 및 B는 조직학적 간 절편 CCL4+ 염수 대 CCL4 + 엑소좀의 시리우스 레드 염색(A) 및 α-평활근 액틴(α-SMA) 면역조직화학 분석을 사용하여 증명된 바와 같이 양수 엑소좀이 간에서 항 섬유성이었다는 것을 보여준다.
도 16은 텀 대 프리텀 hAEC로부터의 엑소좀 사이의 단백체 수준에서의 차이를 나타내는 그래프 표현이다.
도 17은 hAEC 및 총 중간 간엽 줄기 세포(MSC) 간의 세포 성분 비교의 그래프 표현이다.
도 18은 hAEC 및 총 MSC(Anderson et al. (2016) supra) 사이의 생물학적 공정 비교를 나타내는 그래프 표현이다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 문맥이 달리 요구되지 않는 한, "포함한다(comprise)" 또는 "포함한다(comprises)" 또는 "포함하는(comprising)"과 같은 변형은 명시된 요소 또는 정수 또는 방법 단계 또는 요소 그룹 또는 정수 또는 방법 단계의 그룹의 포함을 의미하나 임의의 요소 그룹 또는 정수 또는 방법 단계 또는 요소 그룹 또는 정수 또는 방법 단계의 그룹의 배제가 아니라는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥이 달리 지시하지 않는 한 복수 양태를 포함한다. 따라서, 예를 들어, "질환 또는 상태"에 대한 언급은 하나 이상의 질환 또는 상태뿐만 아니라 둘 이상의 질환 또는 상태를 포함한다; "하나의 엑소좀"이란 하나의 엑소좀뿐만 아니라 2개 이상의 엑소 좀을 포함한다; "발명"에 대한 언급은 발명에 의해 교시된 단일 및 다중 양태를 포함한다; 기타 등등. 본 명세서에서 교시되고 가능한 양태는 "발명"이라는 용어에 포함된다. "질환" 또는 "상태"는 또한 "장애"를 포함한다. 이러한 모든 양태는 본 발명의 범위 내에서 가능하다. 본 발명에서 고려되는 임의의 변형체 및 유도체는 본 발명의 "형태"에 포함된다.
본 발명은 일반적으로 세포, 조직, 신경 경로 및 내분비 경로의 치료, 재생 및 회복의 범위 내에 해당하는 다양한 질환 및 상태에 대한 포유동물 대상의 치료를 촉진시키기 위한 향상된 세포-기반 치료법을 교시한다. 본 발명은 포유동물 양막 상피 세포(AECs)를 배양하는데 사용된 조절된 배지로부터 분리된 양수 엑소좀이 유익한 면역조절 생리학적 및 생화학적 특성을 갖는다는 것을 교시한다. 본질적으로, 포유동물 양수 엑소좀은 T 세포 증식을 감소시키고, 대식세포 식균 작용을 증가시키며, miRNA, mRNA 및 비 암호화 RNA와 같은 유익한 단백체 및 유전 분자의 방출을 통해 내인성 줄기 세포를 활성화시키도록 면역 세포에 영향을 미친다. 양수 엑소좀은 또한 활성화된 섬유 아세포에서 콜라겐 생성을 억제한다. 중요하게는, 양수 엑소좀은 면역원성이 아니므로, 동종이형 양수 엑소좀이 사용될 수 있다.
양수 엑소좀은 또한 확립된 폐 염증 및 폐 섬유화를 역전시키고 원발성 폐 섬유 아세포의 역방향 활성화를 역전시킨다. 이것은 간, 췌장, 심장 및 신장과 같은 다른 기관의 섬유화에도 적용된다. 또한 사이토카인- 사이토카인 수용체 신호 전달 경로, Wnt 신호 전달 경로, PI3K-Akt 신호 전달 경로 및 TGFβ 신호 전달 경로뿐만 아니라 다양한 생리학적 및 신경학적 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA, mRNA 및 비 암호화 RNA를 포함한다.
본 명세서는 포유 동물 양수 엑소좀이 세포, 기관을 포함하는 조직, 신경 경로, 전신 혈관계의 치료, 재생 및 회복을 유도할 뿐만 아니라 상처 치유를 촉진한다는 것을 교시한다. 양수 엑소좀은 뇌 및 척수의 치료, 재생 및 회복을 용이하게 하고, 신경퇴행 상태의 회복을 촉진하고, 외상, 질환 또는 물질 남용에 따른 장기 손상의 회복을 유도하고, 뇌졸중 또는 외상성 뇌 손상과 같은 뇌에 대한 다른 외상 이후 수리를 용이하게 한다는 것이 본 발명에 제안된다. 엑소좀은 다발성 경화증, 시신경염, 데빅 증후군, 횡단성 척수염, 급성 파종성 뇌척수염과 부신백질이영양증 및 부신척수신경병증과 같은 탈수초 질환, 상태 또는 장애의 치료에 재수초화를 용이하게 하도록 제안되었다. 한 실시태양에서 양수 엑소좀은 폐 손상의 수리를 용이하게 한다. 이것은 아기의 기관지 폐 이형성증(BPD) 치료에 중요하다. 양수 엑소좀은 또한 말, 경주용 개(예를 들어, 그레이하운드) 및 낙타와 같은 경주용 동물에서 운동 유발 폐 출혈(EIPH)의 치료에서 수의학 용도가 있다.
따라서, 본 발명은 동일한 종의 기증자 포유동물로부터의 동종이형 포유동물 양막 상피 세포로부터 유래된 포유동물 양수 엑소좀의 전신 투여 또는 국소 투여를 포함하는 포유동물 대상의 치료 방법이다.
"포유동물 대상"은 치료가 필요한 임의의 포유동물을 포함한다. 한 실시태양에서, 포유동물 대상은 인간이다. 용어 "AEC"는 "양막 상피 세포"를 의미한다. 인간에게서 왔을 때, AEC는 "hAECs"로 지정된다.
따라서, 본 명세서는 인간 기증자로부터의 동종이형 양막 상피 세포로부터 유래된 인간 양수 엑소좀의 전신 투여 또는 국소 투여를 포함하는, 인간 대상을 치료하는 방법에 대한 교육을 위한 것이다.
다른 실시태양에서, 포유동물 대상은 비 제한적으로 말, 암소, 양, 염소, 돼지, 알파카, 라마, 개, 고양이 또는 낙타와 같은 비인간 포유동물이나 이에 제한되지 않는다.
한 실시태양에서, 포유동물 대상은 치료가 필요하다. "치료"라는 용어는 세포, 조직 및 신경 및 내분비 경로를 포함하는 생리학적 경로의 치료, 재생 또는 재생 및/또는 회복의 촉진을 포함한다. 본 발명의 예는 허혈성 재관류 손상 또는 뇌졸중 이후 혈관을 포함하는 모세 혈관, 동맥 및 정맥과 같은 순환 혈관을 포함하는 기관, 내부 및 표면 상처, 궤양 및 흉터, 신경 퇴행성 질환 및 외상성 뇌 손상 및 척수 손상을 포함한 뇌 및 척수 손상의 치료, 재생 및/또는 회복을 포함하나 이에 제한되는 것은 아니다. 엑소좀은 또한 섬유성 질환, 폐, 간, 심장, 신장 및 췌장의 상태 또는 장애와 같은 기관 섬유증의 치료를 위해 제안된다. 엑소좀은 또한 다발성 경화증, 시신경염, 데빅 증후군, 횡단성 척수염, 급성 파종성 뇌척수염과 부신백질이영양증 및 부신척수신경병증과 같은 탈수초 질환, 상태 또는 장애의 치료에서의 사용이 고려된다. 양수 엑소좀은 피부 재생 또는 흉터 또는 상처 치유를 촉진하는 화장품제뿐만 아니라 질환 또는 상태를 치료하기 위한 임상적 응용에 유용하다.
임의의 하나의 이론 또는 작용 방식에 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니지만, 포유동물 양수 엑소좀은 양막 상피 세포로부터의 전달을 위한 소포성 비히클을 나타내고, 치료, 재생 및 회복을 용이하게 하는 유익한 분자의 칵테일을 제공하는 단백체 및 유전 분자를 방출한다고 본 발명에서 제안된다. 단백체 및 유전 분자의 프로파일은 양막 상피 세포를 얻는 기증자의 임신 단계에 따라 다를 것이라고 제안되었다. 따라서, 본 명세서는 상이한 임신 단계에서 상이한 기증자로부터 불멸화된 포유동물 양막 상피 세포의 은행을 생성하는 것을 교시한다. 그런 다음 상피 세포는 치료 대상의 질환이나 상태 및 양수 엑소좀이 생산하는 단백체와 유전 분자의 프로파일을 기반으로 은행으로부터 선택된다. 본 명세서는 치료될 질환 또는 상태에 따라, 특정 단백체 및/또는 유전자 프로파일을 갖는 양수 엑소좀이 바람직 할 수 있음을 교시한다.
따라서, 본 발명에 교시된 또 다른 양태는 포유동물 대상을 치료하는 방법이며, 다음 단계를 포함한다:
i. 선택적으로 기증자를 확인하는 단계;
ii. 배양 중인 상피 세포에 의해 생산된 양수 엑소좀의 단백체 및/또는 유전자 프로파일에 기반하여 기증자로부터 불멸된 양막 상피 세포를 선택하는 단계;
iii. 선택된 불멸화 양막 상피 세포로부터 조절된 배지를 생성하는 단계;
iv. 조절된 배지로부터 양수 엑소좀을 분리하는 단계; 및
v. 포유동물 대상에게 양수 엑소좀을 전신적 또는 국소적으로 투여하는 단계.
한 실시태양에서, 포유동물 대상은 인간 대상이다. 따라서, 본 발명에 교시된 또 다른 양태는 인간 대상을 치료하는 방법이며, 다음 단계를 포함한다:
i. 선택적으로 기증자를 확인하는 단계;
ii. 배양 중인 상피 세포에 의해 생산된 양수 엑소좀의 단백체 및/또는 유전자 프로파일에 기반하여 기증자로부터 불멸된 양막 상피 세포를 선택하는 단계;
iii. 선택된 불멸화 양막 상피 세포로부터 조절된 배지를 생성하는 단계;
iv. 조절된 배지로부터 양수 엑소좀을 분리하는 단계; 및
v. 인간 대상에게 양수 엑소좀을 전신적 또는 국소적으로 투여하는 단계.
다른 실시태양에서, 포유동물 양수 엑소좀을 분리하고 이의 프로테옴 및 유전 프로파일을 미리 결정하고 선택된 포유동물 양수 엑소좀의 은행은 프로파일에 기반하여 생성된다. 그런 다음 특정 양수 엑소좀이 치료에 사용하기 위해 선택된다.
따라서, 본 명세서는 포유동물 대상을 치료하는 방법을 가르치며, 다음 단계를 포함한다:
i. 선택적으로 기증자를 확인하는 단계;
ii. 엑소좀에 의해 방출된 약제의 단백체 및/또는 유전자 프로파일에 기반하여 기증자로부터 양수 엑소좀을 선택하는 단계; 및
iii. 양수 엑소좀을 포유동물 대상에게 전신 또는 국소 투여하는 단계.
한 실시태양에서, 포유동물 대상은 인간이다.
따라서, 본원에서 인간 피험자를 치료하는 방법이 교시되며, 다음 단계를 포함한다:
i. 선택적으로 기증자를 확인하는 단계;
ii. 엑소좀에 의해 방출된 약제의 단백체 및/또는 유전자 프로파일에 기반하여 기증자로부터 양수 엑소좀을 선택하는 단계; 및
iii. 양수 엑소좀을 인간 대상에게 전신 또는 국소 투여하는 단계.
양수 엑소좀은 치료에 사용될 때 의약, 약제, 치료제, 세포 치료 유도제, 활성 성분 등으로 지칭될 수 있다. "치료법"은 임상 치료와 미용 치료를 모두 포함한다.
포유동물 대상에서 세포 또는 신경 치료, 재생 및/또는 회복을 유도하는 방법이 본 발명에서 추가로 교시되며, 이 방법은 세포 또는 신경 회복을 유도하기에 충분한 시간 동안과 조건하에서 동종이형 양수 엑소좀의 포유동물 대상에게 전신 또는 국소 투여를 포함한다.
한 실시태양에서, 인간 대상에서 세포 또는 신경 치료, 재생 및/또는 회복을 유도하는 본 발명에서 가능한 방법은 세포 또는 신경 회복을 유도하기에 충분한 시간 동안과 조건하에서 동종이형 양수 엑소좀의 인간 대상에게 전신 또는 국소 투여를 포함한다.
추가의 실시태양에서, 포유동물 대상에서 세포 또는 신경 치료, 재생 및/또는 회복을 위한 의약의 제조에서 포유동물 양수 엑소좀의 사용이 본 발명에서 고려된다.
한 실시태양에서, 포유동물은 인간이다.
따라서, 본 명세서는 인간 대상에서 세포 또는 신경 치료를 위한 의약의 제조에서 인간 양수 엑소좀의 사용을 추가로 교시한다. 본 명세서는 다발성 경화증과 같으나 이에 제한되지 않는 탈수초성 질환, 상태 또는 장애의 치료를 위한 의약의 제조에 있어서 인간 양수 엑소좀의 용도를 추가로 교시한다.
본 발명에서 양막 상피 세포로부터 유래된 양수 엑소좀의 분리된 샘플이 교시된다. 이것은 인간 양막 상피 세포로부터의 인간 양수 엑소좀의 분리된 샘플을 포함한다. 개선된 세포-기반 치료 프로토콜에서 이런 양수 엑소좀을 사용하는 것이 제안된다. 따라서, 본 발명은 포유동물 대상을 치료하는데 사용하기 위해 선택된 동종이형 포유동물 양수 엑소좀을 포함하는 약학적 조성물에까지 확장되며, 약학적 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 추가로 포함한다.
한 실시태양에서, 포유동물 대상은 인간 대상이다.
따라서, 본 발명은 인간 대상을 치료하는데 사용하기 위한 인간 동종이형 양수 엑소좀 포함하는 약학적 조성물을 교시하며, 약학적 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 추가로 포함한다.
또한, 조성물은 인간 대상을 치료하기 위한 용도의 인간 동종이형 양수 엑소좀을 포함하는 화장 조성물일 수 있으며, 하나 이상의 미용상 허용되는 담체, 부형제 및/또는 희석제를 추가로 포함한다.
약학적으로 허용 가능한 담체는, 예를 들어, 양수 엑소좀을 안정화시키도록 작용하는 생리학적으로 허용되는 화합물을 함유할 수 있다. 생리적으로 허용 가능한 화합물은, 예를 들어, 글루코오스, 수크로오스 또는 덱스트란과 같은 탄수화물, 아스코르브산 또는 글루타티온과 같은 산화 방지제, 킬레이트제, 저 분자량 단백질 또는 물 또는 식염수 또는 기타 안정화제를 포함하는 부형제 및/또는 버퍼를 포함할 수 있다. 세제는 또한 리포솜성 담체를 포함하는 양수 엑소좀의 흡수를 안정화 시키거나 증가시키거나 감소시키는데 사용될 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체 및 제제는 당업자에게 공지되어 있으며, 과학 및 특허 문헌에 상세하게 기술되며, 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences (1990), 18th Edition, Mack Publishing Company, Easton,("Remington's") 참조.
다른 생리학적으로 허용 가능한 화합물은 양수 엑소좀 제제에서 미생물의 성장 또는 작용을 예방하는데 유용한 방부제를 포함한다. 다양한 방부제가 주지되어 있으며, 예를 들어, 아스코르브산을 포함한다. 당업자는 생리학적으로 허용 가능한 화합물을 포함하는 약학적으로 허용 가능한 담체의 선택이, 예를 들어, 본 발명의 양수 엑소좀의 투여 경로 및 엑소좀에 의해 생성된 단백질 및 핵산의 특정 생리학적 또는 생화학적 성질에 의존한다는 것을 이해할 것이다.
약학적 조성물의 형태의 양수 엑소좀의 투여는 당업자에게 공지된 임의의 편리한 수단에 의해 그리고 질환 또는 상태 또는 손상 부위에 따라 수행될 수 있다. 투여 경로는 호흡기, 기관내, 비인두, 정맥내, 복강내, 흉강내, 피하, 두개강내, 피내, 근육내, 안내, 경막내, 뇌내, 비강내, 직장내, 국소, 패치, 붕대 및 임플란트를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 한 실시태양에서 양수 엑소좀은, 예를 들어, 심각한 화상 상처를 가진 대상에 분무될 수 있다.
주사용으로 적합한 약학적 제형은 멸균 수용액 또는 분산액을 포함한다.
분산액 형태의 멸균 주사 용액은 일반적으로 다양한 멸균된 활성 성분을 양수 엑소좀을 함유하는 멸균 비히클에 혼입시킴으로써 제조된다.
비경구 투여를 위해, 양수 엑소좀은 약학적 담체와 함께 제제화되고 현탁액으로서 투여될 수 있다. 적합한 담체의 예는 물, 식염수, 덱스트로스 용액, 프룩토오스 용액, 에탄올 또는 동물성, 식물성 또는 합성 유래의 오일이다. 담체는 또한 다른 성분, 예를 들어, 방부제, 완충제 등을 함유할 수 있다. 양수 엑소좀이 경막내 투여될 때, 뇌척수액에서 제제화될 수 있다.
점막 또는 경피 투여를 위해, 침투될 장벽에 적합한 침투제가 약제를 전달하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 침투제는, 예를 들어, 경점막 투여를 위한 담즙산 및 푸시딘 유도체로 당업계에 일반적으로 공지되어 있다. 또한 세제를 사용하여 침투를 촉진할 수 있다. 경점막 투여는 비강 분무를 통할 수 있거나 좌약을 사용할 수 있다, 예를 들어 Sayani and Chien (1996) Crit Rev Ther Drug Carrier Syst 13:85-184.
본 발명의 양수 엑소좀은 또한 일정 기간에 걸쳐 내부적으로 엑소좀을 전달할 수 있는 지속적인 전달 또는 지속 방출 메카니즘으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 양수 엑소좀의 지속 전달이 가능한 생분해성 미소구 또는 캡슐 또는 다른 생분해성 폴리머 형태가 본 발명의 제제에 포함될 수있다(예를 들어, Putney and Burke (1998) Nat Biotech 16:153-157).
본 발명의 약학적 조성물을 제조함에 있어서, 다양한 제제화 기술이 사용되어 생체분포를 변경시킬 수 있다. 생체분포를 변경시키는 다수의 방법이 당업자에게 공지되어있다. 이런 방법의 예는 단백질, 지질(예를 들어, 리포솜), 탄수화물 또는 합성 폴리머와 같은 물질로 구성된 소포에서의 엑소좀의 보호를 포함한다. 약물 동태학에 대한 일반적인 설명은 예를 들어 Remington's를 참조한다.
본 발명의 약학적 조성물은 투여 방법에 따라 다양한 단위 투여량 제형으로 투여될 수 있다. 이런 투여량은 본질적으로는 권고적이며 특정 치료 상황에 따라 조정된다. 이것을 달성하기에 적합한 양수 엑소좀의 양은 "유효량"으로 정의된다. 이 사용을 위한 투여량 계획 및 유효량, 즉 "투여량 요법"은 질환 또는 상태의 단계, 질환 또는 상태의 중증도, 환자의 건강 상태, 환자의 신체 상태, 나이, 약학적 제제 및 농도 또는 양수 엑소좀의 선택을 포함하는 다양한 인자에 따라 결정될 것이다. 환자에 대한 투여량 요법을 계산할 때, 투여 방식 또한 고려된다. 투여량 요법은 또한 약학적 조성물의 제거율 등을 고려해야 한다. 예를 들어, Remington's; Egleton and Davis (1997), Peptides 18:1431-1439; Langer (1990), Science 249:1527-1533 참조. 한 실시태양에서, 0.05μg 내지 100μg의 양수 엑소좀이 투여된다. 여기에는 0.1μg 내지 50μg 및 0.1μg 내지 20μg의 양 및 이 사이의 임의의 양을 포함된다.
이들 방법에 따르면, 양수 엑소좀 또는 이를 함유하는 약학적 조성물은 하나 이상의 다른 약제와 함께 공동 투여될 수 있다. 본 발명에서 "공동 투여된"이란 동일 또는 상이한 경로를 통한 동일한 제형 또는 2개의 상이한 제형의 투여 또는 동일한 또는 상이한 경로에 의한 순차적 투여를 의미한다. 본 발명에서 "순차적인" 투여란 양수 엑소좀과 다른 약제의 투여 사이의 초, 분, 수 또는 일의 시차를 의미한다. 공동 투여는 임의의 순서로 발생할 수 있다. 공동 투여될 수 있는 약제의 예는 사이토카인을 포함한다. 일반적으로, 다른 약제의 선택은 치료할 질병 또는 상태를 전제로한다.
대안적으로, 표적화 치료법이 항체 또는 세포 특이적 리간드와 같은 표적화 시스템의 사용에 의해 양수 엑소좀을 신체의 세포 또는 위치의 형태로 전달하기 위해 표적 치료법이 사용될 수 있다. 표적화는 다양한 이유로, 예를 들어, 치료가 필요한 부위에서 국소 치료를 촉진시키는데 바람직할 수 있다.
본 발명에 양수 엑소좀의 생산이 또한 교시된다. 편리하게는, 이는 배치 배양 반응기 또는 연속 흐름 배양 반응기의 형태일 수 있는 생물 반응기에서 달성된다. 일반적으로, 양막 상피 세포는 불멸화되고 생물 반응기에서 성장 배지를 뿌리기 위해 사용된다. 그런 다음, 생성된 조절 배지를 수집하고 양수 엑소좀을 분리하고 즉시 사용을 위해 제제화하거나 추후 사용을 위해 동결건조에 의해 저장한다.
키트도 본 발명에서 고려된다. 키트는 치료용 또는 진단용일 수 있다. 치료 키트는 선택된 배치의 동결 건조된 양수 엑소좀 및 하나 이상의 다른 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제 및/또는 다른 활성제를 포함할 수있다. 진단 키트는 배치의 양수 엑소좀의 단백체 또는 유전자 프로파일을 결정하기 위한 시약을 포함할 수 있다.
실시예
본 발명에서 교시된 양태는 이하의 비 제한적인 실시예에 의해 추가로 기술된다.
실시예 1
양수 엑소좀의 생산
양수 엑소좀을 분리하기 위한 프로토콜이 개발되었다(도 1). 이것은 양수 엑소좀에 대한 첫 번째 설명이며 생물학적 활성의 확인이다. hAEC의 일차 분리물을 무 혈청 배지(Ultraculture media, Lonza)에서 96시간 동안 배양한 다음 세포를 제거하고 110,000g에서 연속 초원심 분리를 통해 엑소좀 분리를 위해 처리된 조절 배지에서 배양한다. 임신 나이와 관계없이 백만 hAEC 당 대략 정제된 엑소좀 1.5 - 2μg를 지속적으로 정제한다. 이것은 세포사멸체에 의한 오염 없이 생물 반응기-스타일 배양에서 확대될 수 있다.
유사한 효과를 발휘하는 양수 엑소좀의 능력을 시험하였다. 양수 엑소좀은 hAEC 조건 배지와 비슷한 정도로 T 세포의 증식을 억제하며 뚜렷한 투여량 효과(0.1μg 대 1μg)를 보인다. hAEC 조절 배지(ExD CM)로부터 엑소좀의 고갈은 이러한 효과를 사라지게 하고(도 2a), 이는 양수 엑소좀이 T 세포 억제의 중요한 매개자임을 나타낸다. 양수 엑소좀은 대식세포의 식균 활성을 직접 증가시킬 수 있었다(도 2b). 이러한 결과는 hAEC 조절 배지의 면역조절 효과가 주로 엑소좀에 기인한다는 것을 나타낸다.
실시예 2
양수 엑소좀의 활성
양수 엑소좀이 생체 내에서 기능적인지를 결정하였다. 1μg의 양수 엑소좀을 출생 후 4일째 BPD 생쥐에 정맥내 주사하고 생후 14일에 조직:공극 비의 평가를 수행하였다. 양수 엑소좀은 폐포 단순화를 역전시키는데 효과적이었다(도 3). 양수성 엑소좀은 BPD 생쥐의 염증을 해결하면서 폐포의 단순화를 줄이고 내인성 줄기 세포를 모집함으로써 폐 구조에 대한 해로운 변화를 방지하거나 역전시키는 주요 역할을 한다.
요약하면, 데이터는 양수 엑소좀이 이의 부모 세포와 유사한 방식으로 숙주 면역학적 사건 및 폐 치료를 조절한다는 것을 나타낸다. 양수 엑소좀은 hAEC의 재생 능력을 생체 내에서 반복할 수 있다고 제안되었다. 양수 엑소좀 카고의 성격을 밝힘으로써, 이들은 격심한 면역조절 및 친-회복 효과를 발휘하는데 사용될 수 있다.
BPD의 생쥐 모델은 양수 엑소좀의 신생아 투여가 폐 구조를 회복시키고, 폐 줄기 세포 미세 환경(niche)을 활성화시키며, BPD 생쥐의 염증을 hAEC 처리 동물 수준과 유사하게 조절할 수 있는 지를 결정하는데 사용된다. 이것이 장기적인 생리학적 결과(예를 들어, 폐 고혈압 및 폐 기능)의 개선을 가져올 것으로 또한 결정된다. 양수 엑소좀의 단백체 및 mRNA/miRNA 함량을 분석하여 hAEC 매개 치료와 관련된 특정 경로를 확인한다.
실시예 3
BPD 생쥐에서 양수 엑소좀의 회복 효과
데이터는 양수 엑소좀이 시험관 내 및 생체 내에서 면역조절 및 친재생 효과를 발휘한다는 것을 나타낸다. 양수 엑소좀이 치료 동안 세포 누화에 미치는 영향을 이해하고 양수 엑소좀만으로도 BPD 동물 모델에서 hAEC의 회복 효과를 반복하는 데 충분한 지 여부를 결정하기 위해서, 양수 엑소좀의 두 투여량(1μg 및 10μg)의 효과를 hAEC의 최적화된 투여량과 비교한다. 섬유 아세포와 섬유 아세포 엑소좀을 대조군으로 사용한다.
인간 BPD에 대한 두 가지 중요한 요인 - 주산기 염증 및 출생 후 과산소증을 결합하여 폐 치료에 대한 텀 및 프리텀 양수 엑소좀의 효과를 평가하기 위해 BPD의 생쥐 모델을 사용한다. 설치류를 사용하는 BPD와 같은 복잡한 질병을 모델링하는 데는 한계가 있지만, 이 모델은 자세한 분자 분석에 적합하다. 설치류 연구는 투여량 효과의 평가를 위한 상대적으로 저렴한 비용을 허용하고, 청년기 및 성체 결과를 조사하는 장기간의 연구를 허용한다. 간단히 말해서, 5μL 식염수 속 0.2μg의 리포폴리사카라이드(LPS)를 미세 절삭 유리 바늘(내경: 70-80μm)과 마이크로 인젝터(IM-300, Narashige)를 사용하여 E16에서 생쥐 태아의 각 양막 주머니에 주사한다. 태어나면, 신생아 생쥐 및 어미를 산소 농도가 높은 챔버(65% 산소) 또는 실내 공기에 배치한다. 어미는 산소 독성을 막기 위해 매 48시간마다 교대한다. 산전 염증과 출생후 과산소증의 조합은 인간 BPD와 유사한 폐 손상을 일으킨다(Vosdoganes et al. (2013) Cytotherapy 15:1021-1029; Nold et al. Proc. Natl Acad. Sci USA 110:14384-14389). 치료제는 출생 후 4일째에 투여된다. E16에서의 양막 내 LPS 주사, 출생 후 4일째의 엑소좀/세포의 주입 및 도살 지점(X 표시)을 묘사하는 실험 타임 라인이 도 4에 도시된다.
엑소좀 또는 세포는 양막 내 주사 및 넓은 유리 주사 바늘(100-120㎛ 내경)에 대해 기술된 동일한 장비를 사용하여 표면 관자 정맥을 통해 정맥 내 투여된다. 최종 주사량은 10μL이며 4일령 생쥐가 잘 견딜 수 있다. 면역학적 변화와 폐 줄기 세포 모집 및 폐 치료의 평가를 위해 출생 후 7일과 14일에 생쥐 새끼를 도살한다. 두 그룹의 동물을 이유 후 실내 공기로 옮기고 4주령 및 10주령에 테스트하여 청소년기 및 초기 성체기의 폐 고혈압, 심혈관 및 호흡 기능과 같은 장기 결과에 대한 신생아 치료의 효과를 평가한다.
hAEC는 텀(37-40주) 인간 임신 기간으로부터 분리한다. 일차 분리물을 실험에 사용한다. 6명의 기증자의 hAECs를 모든 동물 실험을 위한 일정한 모집단을 제공하기 위해 동등하게 모집하였다. hAEC를 투여받은 동물은 출생 후 4일에 100,000 hAEC의 단일 주사를 맞는다. 양수 엑소좀의 경우, 모집된 hAEC의 일부를 96시간 동안 배양 배지(25 mL Ultraculture media, Lonza 당 1,000만)에 넣는다. 그런 다음 엑소좀을 조절 배지에서 분리한다. 엑소좀 마커(TSG101 및 Alix)에 대한 웨스턴 블롯을 수행하고 크기 및 전자 현미경에 의한 식별에 의해 분리된 펠렛의 엑소좀 특성. 엑소좀을 생리 식염수에 재현탁하고 출생 후의 4일째에 1μg 또는 10μg의 투여량으로 투여한다.
인간 폐 섬유 아세포는 폐 치료를 지원하지 않으며, 대조군 세포 유형으로서 적합하다(Moodley et al. (2010) Am J Respir Crit Care Med i:643-651). 상기와 동일한 배양 프로토콜을 사용하여 얻은 인간 폐 섬유아세포 또는 섬유아세포 엑소좀을 투여한다. 섬유아세포는 hAEC와 동일한 투여량으로 투여디고 섬유아세포 엑소좀은 더 높은 투여량(10μg)으로 투여된다. 실험 그룹은 표 1에 기술된다.
| 건강한 생쥐 | 그룹 | BPD 생쥐 | 그룹 | ||
| 생리식염수 | - | 1 | 생리식염수 | - | 7 |
| hAECs | 100,000 세포 | 2 | hAECs | 100,000 세포 | 8 |
| 양수 엑소좀 |
1㎍ | 3 | 양수 엑소좀 |
1㎍ | 9 |
| 10㎍ | 4 | 10㎍ | 10 | ||
| 섬유아세포 | 100,000 세포 | 5 | 섬유아세포 | 100,000 세포 | 11 |
| 섬유아세포 엑소좀 |
10㎍ | 6 | 섬유아세포 엑소좀 |
10㎍ | 12 |
면역학적 변화
이전에 기술된 바와 같이 폐를 수집하여 유동 세포 계측법을 위해 처리한다(Nold et al. (2013) supra; Tan et al. (2015) Stem Cell Res. Ther. 6:8). CD45 + 분획을 분류하고 표면 마커 및 세포 내 사이토카인 염색의 조합을 사용하여 T 세포(CD3, CD4, CD25, IFNγ, IL-4, IL17A, FoxP3), 대식세포(CD11b, F4/80, CD86, MHCII), 호중구(CD11c, Ly6G), B 세포(B220) 및 NK 세포(NK1.1)의 숫자, 표현형 및 활성화 상태의 변화를 평가한다. 기관지 폐포 세척액을 수집하여 이전에 기술한 바와 같이(Nold et al. (2013) supra) 단백체 프로파일러(R & D Systems)를 사용하여 사이토카인의 변화를 측정한다.
폐 줄기/선조 세포 모집
BASC 집단에 대한 변화는 CD45-/CD31-/Sca-1+/EpCam+에 기반한 유동 분류에 의해 결정된다(Lee et al. (2014) Cell 156: 440-455). 이것은 위의 면역 세포 연구로부터의 세포의 CD45+ 분획을 사용한다. AT2는 CD31-/Sca-1-/자가형광의 유동 분류를 기반으로 분류된다. 전사 프로파일의 차이점은 단일 세포 디지털 PCR (Fluidigm, qdPCR 37K)을 사용하여 결정된다. 유동 분류된 단일 세포는 세포 용해, RNA 분리, 사전 증폭 및 cDNA 전환이 일어나는 96-웰 미세유체 플레이트(C1 Single Cell Autoprep System, Fluidigm)에서 캡쳐된다. 그런 다음 샘플을 디지털 PCR 용 미세유체 카드에 적재한다. 데이터는 SINGuLAR v2.0 분석 도구 세트를 사용하여 분석한다. BASC와 AT2의 미세 환경 활성화 경로가 잘못 기술되었기 때문에, 최근에 기술 된 BMP1/NFATc1/트롬보스폰딘-1 액시스를 포함하는 줄기 세포 다능성, 활성화, 모집 및 분화를 다루는 맞춤형 48:48 deltaGene 분석(Lee et al. (2014) supra).
폐포 단순화
조직:공극 비를 측정하는 정량적 이미지 분석은 모든 실험 그룹에 걸쳐 폐포 단순화의 정도를 결정하기 위해 수행된다.
숙주 줄기 세포 틈새의 활성화
폐 줄기 세포 미세 환경의 활성화 상태를 결정하기 위해 말단 기관지에서 BASCs에 대해 면역조직화학 염색(SPC+CC10+)을 수행한다(Lee et al. (2014) supra).
목적은 폐 구조의 변화 및 내인성 폐 줄기 세포의 모집이 폐 기능의 장기간 개선 및 이차 합병증의 감소로 연장되는 지를 아는 것이다.
생리학 연구
폐 기능 검사 및 심장 초음파 검사는 회복된 청년기(4주령) 및 젊은 성체 (10주령) 생쥐에서 수행된다.
심장 초음파
생쥐를 3% 아이소플루란으로 마취시키고 1-2%에서 계속하여 350 내지 450 bpm의 심장 박동수를 달성하였다. Vevo 2100 초음파(Monash Bioimaging)와 40MHz 선형 변환기는 앞쪽으로 각을 이룬 좌측 복장뼈주위 긴 축 단면도를 따라 폐동맥 가속 시간의 PW 도플러 측정을 수행하는데 사용된다. 오른쪽 심실 벽 두께는 우측 복장뼈주위 긴 축 단면도를 따라 M 모드를 적용하여 측정된다. 동일한 그룹의 생쥐가 침습성 폐 기능 검사에 사용된다. 생쥐는 인라인 초음파 분무기, 인공 호흡기 및 부착 압력 변환기(FlexiVent, SCIREQ, Montreal, Canada)에 연결된 18G 캐뉼라로 기관절개하였다. 기도 저항과 순응은 쥐를 증가하는 농도의 메타콜린(1-30mg/mL, 사이클 당 3분)에 노출시킴으로써 평가한다. 강제 호기량, 폐활량 및 흡기량을 얻는다. 무제한 전신 체중 측정법과는 달리, 이것은 동물 훈련을 필요로 하지 않으며 측정 조작을 실행하기 위해 기계 환기를 잠깐 멈추게 할 수 있으며 이 기간 동안 사전 정의된 압력 또는 체적 파형이 측정된다. 이것은 과다한 데드 스페이스 및 측정 부정확성과 같은 체적변동기록기에서 직면한 전통적인 문제를 극복한다.
양수 엑소좀은 BPD 생쥐에서 대식세포 분극을 유발하고, Treg 팽창을 유도하며, 호중구 및 수지상 세포의 활성화를 감소시키는 능력에 유익한 효과를 가질 것으로 제안된다. 면역학적 변화는 1μg의 대조군 hAECS에 비해 10μg 투여양의 양수 엑소좀으로 더욱 격심할 것으로 제안되었다. 이와 같이, 폐포 단순화의 역전은 높은 투여량의 양수 엑소좀을 투여받은 동물에서 더 크다. 이것은 장기적인 생리학적 결과의 개선으로 옮겨져서 우심실 벽 비후의 증가, 폐 고혈압의 개선 및 정상적인 폐 기능의 회복에 용량 의존적 감소가 나타날 것이다. hAECs 또는 양수 엑소좀이 건강한 생쥐에 투여될 때 어떠한 변화도 기대되지 않는다. 섬유아세포 또는 섬유아세포 엑소좀은 면역 세포, 폐 치료 또는 장기적인 생리학적 결과에 영향을 미치지 않는다고 제안된다.
실시예 4
양수 엑소좀의 독특한 매개자
hAEC 기증자의 임신 연령은 그들의 회복 능력에 중요한 영향을 미칠 수 있다(Lim et al. (2013) Placenta 34: 486-492). 텀 및 프리텀 hAEC로부터 수집된 엑소좀 카고 사이의 비교가 이루어진다. 준비 과정에서, 텀 및 프리텀 기증자로부터의 양수 엑소좀을 투여하고 텀 기증자로부터의 양수 엑소좀을 투여받은 동물에서만 폐포 단순화가 역전되어 면역 조절 및 재생을 위한 경로를 활성화시키는 능력은 프리텀 양수 엑소좀에서 현저하게 약화됨을 나타낸다. 초기 존재/부존재 단백체 분석이 엑소좀 카고에 대해 수행될 때, 텀 및 프리텀 기증자에서 각각 242 및 21개 독특한 단백질이 확인된다. 유전자 존재 분석을 이용하여, 텀 양수 엑소좀은 상처 치유, 세포사멸, 혈관 발달, 급성 염증 및 상피 세포 발달과 관련된 세포 신호 전달의 매개자를 함유하였는 것이 결정되었다.
단백체 분석을 위해, 양수 엑소좀(텀 및 프리텀, 그룹당 n = 10)의 용액 내 트립신 분해를 수행한 후, 절대 정량을 위한 액체 크로마토그래피 및 질량 분광법 을 수행하였다(WEHI Proteomics Laboratory, Melbourne, Australia). 데이터는 nanoACQUITY UPLC 시스템(Waters)에 연결된 Nano-ESI 소스(Proxeon)에 장착된 Q-Exactive 하이브리드 사중극자-오비트랩 질량 분석기를 사용하여 얻는다. 피크 목록은 단일 MASCOT 파일로 실행된 각 LC-MS/MS에 대해 통합되고 인간 Ref-Seq 단백질 데이터베이스(1% 거짓 발견율)에 대해 검색된다. 파이프라인 파일럿(Pipeline Pilot)(Accelrys) 및 스폿파이어(Spotfire)(TIBCO)는 정량적인 단백체 데이터를 분석하는데 사용된다. 윌콕슨 부호 순위 검정(Wilcoxon signed-rank test)은 풍요의 차이를 평가하는데 사용된다. 유니프롯(UniProt) 데이터베이스는 기능, 세포내 지방화를 기반으로 단백질을 분류하고 상처 치유, 세포 생존 및 면역 조절과 관련된 유전자를 지정하기 위해 발급된다.
핵산 분석을 위해, 디지털 유전자 발현 프로파일링은 cDNA 말단의 대규모 분석(MACE, GenXpro GmbH)을 사용하여 수행된다. 이것은 일반적으로 마이크로어레이에서 손실되는 수용체 및 전사 인자와 같은 RNASeq(백만 전차세당 1-20 사본)보다 ~20배 더 깊은 전사체의 포획 및 정량화 속도를 허용한다. MACE는 엑소좀에서 작은 RNA와 miRNA를 서열화하는데 최적화되어 있으며 cDNA 분자를 태깅함으로써 qPCR 어레이와 RNASeq의 이점을 결합한다. 이는 mRNA-miRNA 상호 작용에 영향을 미치고 따라서 전사체의 안정성 및 생물학적 관련성을 결정하는 대안적인 폴리아데닐화를 확인한다. 쌍을 이룬 비교를 위한 유전자 존재 강화 및 유전자 세트 강화 분석이 수행된다.
텀 및 프리텀 양수 엑소좀 사이에 고유한 분자 표지가 있을 것이며, 이것은 이들의 친 회복 및 재생 효과와 관련이 있다.
실시예 5
친 재생 효과
양수 엑소좀의 친 재생 효과는 기관지 폐 이형성 신생 생쥐 모델에서 입증되었다. 폐포 감소는 텀 또는 프리텀 양수 조직으로부터의 엑소좀 투여 후에 관찰되었다(도 12a 내지 도 12d). 용어 "BPD"는 기관지 폐 이형성 생쥐 모델 동물을 의미한다.
실시예 6
엑소좀의 작용 메커니즘
텀-유래된 인간 엑소좀을 폐 재생을 유도하는 능력을 위해 측면 인간 양막 상피 세포(hAEC)를 따라 시험하였다. 그 결과는 도 13a 내지 도 13c에 도시된다. 텀 엑소좀은 도 13에서 어두운 염색된(엘라스틴 양성) 선단으로 보이는 바와 같이 2차 격벽정을 회복시켰다.
또한, 도 14는 양수 엑소좀이 폐에서 내인성 줄기 세포 반응을 유발한다는 것을 보여준다. 실제로, 양수 엑소좀은 hAEC보다 2배 이상 효과적이었다.
양수 엑소좀이 외인성 폐 줄기 세포의 성장을 직접적으로 촉진할 수 있다는 것도 관찰되었다. 이것은 대조군과 비교하여 엑소좀에 노출된 폐포, 기관지 및 혼합 폐 조직에서 발생하였다.
실시예 7
엑소좀은 간에서 항 섬유성 작용을 한다.
8주령의 성체 생쥐에서 12주간 사염화탄소를 매주 3회 복강 내 주사하여 간 섬유증을 유도하였다. 8주째에, 엑소좀(1μg)을 주 2회 주사하였다. 결과는 도 15a 및 b에 도시된다. 섬유아세포는 시리우스 레드 분석 및 α-평활근 액틴(SMA) 발현 분석을 사용하여 결정하였다. α-SMA는 섬유아세포 수축력에 중요한 역할을 한다. α-SMA 발현은 표준 분석법을 사용하여 결정되었으며 시리우스 레드 또는 α-SMA 양성 영역은 필드 당 측정되었다. 염증성 대식세포 단백질인 CCL14를 사용하였다. CCL14 + 엑소 좀은 CCL14 + 식염수 대조군과 비교하여 필드 당 섬유화 세포가 현저히 적었다(도 15a 및 b).
실시예 8
단백체 카고
도 16은 텀 엑소좀과 프리텀 hAEC 사이의 단백체 카고가 거의 동일함을 나타낸다. 텀 대 프리텀 hAEC의 단백체 카고 사이에 더 많은 차이가 있었다. 시험한 단백질은 표 2와 3에 나열된다. hAEC과 전체 MSC 사이의 유용한 세포 성분 비교는 17에 도시된다. 도 18은 또한 hAECs와 전체 MSC 사이의 생물학적 과정을 비교한다.
|
검색 ID/
등록번호 |
유전자 표시 | Entrez Gene ID | 유전자 설명 |
| PGK2 | PGK2 | 5232 | 포스포글리세레이트 키나아제 2 |
| CAND2 | CAND2 | 23066 | 컬린 결합 및 네딜데이션 해리 2(추정) |
| CCDC80 | CCDC80 | 151887 | 80을 함유하는 코일드 코일 도메인 |
| RAB12 | RAB12 | 201475 | RAB12, 멤버 RAS 종양 유전자 패밀리 |
| RAD23B | RAD23B | 5887 | RAD23 동족체 B (S. cerevisiae) |
| DBN1 | DBN1 | 1627 | 드레브린 1 |
| STRAP | STRAP | 11171 | 세린/트레오닌 키나아제 수용체 관련 단백질 |
| UBA6 | UBA6 | 55236 | 유비퀴틴-유사 조절자 활성화 효소 6 |
| PEA15 | PEA15 | 8682 | 성상 세포에서 풍부한 인산 단백질 15 |
| GLOD4 | GLOD4 | 51031 | 4를 함유하는 글리옥살라제 도메인 |
| COPE | COPE | 11316 | 코트머 단백질 복합체, 서브 유닛 엡실론 |
| BCAT1 | BCAT1 | 586 | 분지형 사슬 아미노산 트랜스아미나제 1, 세포질 |
| FSTL1 | FSTL1 | 11167 | 폴리스타틴-유사 1 |
| DYNC1LI2 | DYNC1LI2 | 1783 | 다이네인, 세포질 1, 가벼운 중쇄 2 |
| GPS1 | GPS1 | 2873 | G 단백질 경로 억제기 1 |
| SPATA5 | SPATA5 | 166378 | 정자 형성 관련 5 |
| COPS5 | COPS5 | 10987 | COP9 신호 서브 유닛 5 |
| GYG1 | GYG1 | 2992 | 글리코게닌 1 |
| TCEB2 | TCEB2 | 6923 | 전사 신장 인자 B (SIII), 폴리 펩타이드 2 (18kDa, elongin B) |
| APOC2 | APOC2 | 344 | 아포지단백질 C-II |
| MAPK3 | MAPK3 | 5595 | 미토겐 활성 단백질 키나아제 3 |
| RUFY1 | RUFY1 | 80230 | 1을 포함하는 RUN 및 FYVE 도메인 |
| HDLBP | HDLBP | 3069 | 고밀도 지단백질 결합 단백질 |
| TTC37 | TTC37 | 9652 | 테트라트리코펩타이드 반복 도메인 37 |
| UBA2 | UBA2 | 10054 | 유니퀴틴-유사 조절자 활성화 효소 2 |
| NCS1 | NCS1 | 23413 | 신경 세포 칼슘 센서 1 |
| CAV2 | CAV2 | 858 | 카베올린 2 |
| TM9SF4 | TM9SF4 | 9777 | 경막 9 수퍼 패밀리 단백질 멤버 4 |
| EIF5B | EIF5B | 9669 | 진핵세포 번역 개시 인자 5B |
| TXNL1 | TXNL1 | 9352 | 티오레독신-유사 1 |
|
검색 ID/
등록번호 |
유전자 표시 | Entrez Gene ID | 유전자 설명 |
| TNXA | |||
| TES | TES | 26136 | 고환에서 추출한 전사체(3 개의 LIM 도메인) |
| NPEPPSL1 | |||
| UPK3BL | |||
| POLR2J3 | |||
| DKFZp586I031 | |||
| SEPT14 | SEPT14 | 346288 | 셉틴 14 |
| DKFZp313C1541 | |||
| SLC2A14 | SLC2A14 | 144195 | 용질 담체 2 (촉진 당 수송체), 멤버 14 |
| PPIAL4C | |||
| PPIAL4E | |||
| PPIAL4D | PPIAL4D | 645142 | 펩티딜프로프릴 이성화 효소 A (사이클로필린 A)-유사 4D |
| CRABP1 | CRABP1 | 1381 | 세포 레티노산 결합 단백질 1 |
| Sep-02 | |||
| TPPP3 | TPPP3 | 51673 | 튜불린 중합-촉진 단백질 패밀리 멤버 3 |
| Sep-08 | |||
| ARPC4-TTLL3 | |||
| KIF5C | KIF5C | 3800 | 키네신 패밀리 멤버 5C |
| KIF5A | KIF5A | 3798 | 키네신 패밀리 멤버 5A |
| NSFL1C | NSFL1C | 55968 | NSFL1 (p97) 보조인자 (p47) |
| PERP | PERP | 64065 | PERP, TP53 세포자멸사 효과기 |
| SKP1 | SKP1 | 6500 | S-단계 키나아제-결합 단백질 1 |
| ALPPL2 | ALPPL2 | 251 | 알칼리성 인산 가수분해효소, 태반-유사 2 |
| ALPI | ALPI | 248 | 알칼라성 인산 가수분해효소, 장 |
| PCYT2 | PCYT2 | 5833 | 인산염 시디딜일 전이효소 2, 에탄올 아민 |
| CDH3 | CDH3 | 1001 | 카드헤린 3, 유형 1, P-카드헤린(태반) |
실시예 9
엑소좀은 수초화를 촉진한다
양수 엑소좀을 다발성 경화증의 동물 모델에서 시험한다. 엑소좀은 재수초화를 촉진하고 다발성 경화증뿐만 아니라 시신경염, 데빅병, 횡단성 척수염, 급성 파종성 뇌척수염과 부신백질이영양증 및 부신척수신경병증과 같은 다른 상태의 치료에 유용할 것으로 기대된다.
실시예 10
엑소좀 활성
인간 양막 상피 세포의 조절된 배지로부터 분리된 엑소좀은 면역 조절 및 친 재생 효과를 갖는다. 양수 엑소좀은 (다른 요소들과 함께) 높은 수준의 HLA-G를 포함한다.
양수 엑소좀의 면역억제 효과는 기증자의 임신 연령에 상응한다. 이는 (Lim et al. (2013) supra)에 이미 발행한 임신 연령과 관련된 기증자 효능에 상응한다.
양수 엑소좀은 기관지 폐 이형성 모델의 신생아 생쥐 모델에서 폐 손상을 역전시킨다. 정맥 주사된 엑소좀은 생리식염수와 비교하여 조직:공극 비를 현저히 향상시키고 우리의 생체 외 시험과 일치하며, 텀 양수 엑소좀은 BPD 관련 폐 손상을 완화시키는 능력에서 프리텀 엑소좀보다 우월했다. 이것은 폐의 내인성 줄기 세포 미세 환경, 즉 기관지폐포 관 접합브의 활성화와 관련이 있다. 그 결과는 도 5에 도시된다. 양수 엑소좀은 폐 섬유증 및 다른 기관의 섬유증 치료에 유용할 것으로 제안되었다.
양수 엑소좀은 블레오마이신 유도된 폐 섬유증의 생쥐 모델에서 확립된 폐 염증 및 섬유화를 역전시킨다. 블레오마이신 감염 7일 후 양수 엑소좀의 비강 내 투여는 폐에서 활성화된 근섬유 아세포(α-평활근 액틴 양성)의 비율을 유의하게 감소시켰다. 이것은 폐의 콜라겐 침착의 감소와 일치하였다. 그 결과는 도 6에 도시된다.
양수 엑소좀은 생체 외에서 일차 인간 폐 섬유 아세포의 활성화를 직접 역전시킨다. 양수 엑소좀은 5ng/mL의 형질 전환 성장 인자 β 존재 하에서 배양되었을 때 24시간 이내에 α-평활근 액틴의 단백질 수준을 감소시켰다. 그 결과는 도 7에 도시된다.
양수 엑소좀은 도 8에 도시된 바와 같이 사이토카인-사이토카인 수용체 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA를 포함하며, 여기서 노란색 박스는 하나 이상의 miRNA에 의한 표적을 나타낸다.
양수 엑소좀은 도 9에 도시된 바와 같이 Wnt 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA를 포함하며, 여기서 노란색 박스는 하나 이상의 miRNA에 의한 표적을 나타낸다.
양수 엑소좀은 도 10에 도시된 바와 같이 PI3K-Akt 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA를 포함하며, 여기서 노란색 박스는 하나 이상의 miRNA에 의해 표적을 나타낸다.
양수 엑소좀은 도 11에 도시된 바와 같이 TGFβ 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA를 포함하며, 여기서 노란색 박스는 하나 이상의 miRNA에 의해 표적을 나타낸다.
양수 엑소좀은 hAEC와 같은 AEC보다 효과적이지는 않지만 효과적이며 생리 및 신경 과정의 다양한 범위에서 세포 및 분자 치료 메카니즘을 유도할 수 있는 능력이 있음이 분명하다.
본 기술 분야의 당업자는 본 명세서에 기재된 발명이 구체적으로 설명된 것 이외의 변형 및 수정이 가능하다는 것을 이해할 것이다. 본 발명은 이러한 모든 변형 및 수정을 고려한 것으로 이해된다. 본 발명은 또한 본 명세서에서 언급되거나 지시된 단계, 특징, 조성물 및 화합물 모두를 개별적으로 또는 전체적으로, 및 임의의 둘 이상의 단계 또는 특징 또는 조성물 또는 화합물의 모든 조합을 가능하게한다.
참고 문헌:
Anderson et al. (2016) Stem Cells. http://doi.org/10.1002/stem.2298
Doyle et al. (2006) Paediatrics 118: 108-113
Egleton and Davis (1997) Peptides 18:1431-1439
Fishback et al. (2013) Sci Transl Med 5:179 ps7)
Hodges et al. (2012) Am J Obstet Gynerol 206: 448e8-448e15
Langer (1990) Science 249:1527-1533
Lee et al. (2014) Cell 156:440-455
Lim et al. (2013) Placenta 34: 486-492
Lodha et al. (2014) PLoS ONE: e90843
Putney and Burke (1998) Nat Biotech 16:153-157
Remington's Pharmaceutical Sciences (1990), 18th Edition, Mack Publishing Company, Easton, PA.
Moodley et al. (2010) Am J Respir Crit Care Med i:643-651
Murphy et al. (2012) Cell Transplant 21:1477-1492
Nold et al Proc. Natl Acad. Sci USA 110:14384-14389
Schellenberg et al. (2011) Aging (Albany NY) 3:873-888
Sayani and Chien (1996) Crit Rev Ther Drug Carrier Syst 13:85-184
Tan et al. (2015) Stem Cell Res Ther 6:8
Vosdoganes et al. (2013) Cytotherapy 15:1021-1029
Yawno et al. (2013) Dev Neurosci 35:272-282
Claims (22)
- 동일한 종의 기증자 포유동물로부터의 동종이형 포유동물 양막 상피 세포로부터 유래된 포유동물 양수 엑소좀의 전신 투여 또는 국소 투여를 포함하는 포유동물 대상의 치료 방법.
- 제 1 항에 있어서,
치료될 포유동물 대상은 인간인 방법. - 제 2 항에 있어서,
치료될 포유동물 대상은 비인간 포유동물인 방법. - 제 3 항에 있어서,
치료될 비인간 포유동물은 말, 개 및 낙타로 이루어진 그룹으로부터 선택된 경주용 동물인 방법. - 제 2 항에 있어서,
인간 대상은 중추 신경계, 말초 신경계, 전신 혈관구조의 세포 또는 신경 치료, 재생 또는 회복 또는 상처 치료를 유도하도록 치료되는 방법. - 제 5 항에 있어서,
인간 대상은 폐, 심장, 간, 신장 또는 췌장의 세포 또는 조직, 허혈-재관류 손상, 상처, 뇌 또는 척수 손상에 이은 세포를 치료, 재생 또는 회복하거나 활성화된 섬유아세포에서 콜라겐 생성을 억제하도록 치료되는 방법. - 제 6 항에 있어서,
인간 대상은 폐, 간, 심장, 신장 또는 췌장의 섬유증 질환, 상태 또는 장애에 대해 치료되는 방법. - 제 5 항에 있어서,
인간 대상은 신경 퇴행성 질환 또는 상태에 대해 치료되는 방법. - 제 8 항에 있어서,
신경 퇴행성 질환 또는 상태는 탈수초성 질환인 방법. - 제 9 항에 있어서,
탈수초성 질환은 다발성 경화증, 시신경염, 데빅 증후군, 횡단성 척수염, 급성 파종성 뇌척수염, 부신백질이영양증 또는 부신척수신경병증인 방법. - 제 8 항에 있어서,
신경 퇴행성 질환 또는 상태는 운동 신경 질환, 뇌졸중, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 알츠하이머 병, 파킨슨 병, 헌팅톤 병 및 다발성 경화증으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법. - 제 8 항에 있어서,
인간 대상은 기관지 폐 이형성증, 낭포성 섬유증, 폐 섬유증, 간 섬유증, 만성 폐 감염, 천식, 알레르기성 비염 및 만성 폐색성 폐 질환(COPD)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 질환 또는 상태에 대해 치료되는 방법. - 제 1 항에 있어서,
양수 엑소좀이 폐 감염 및 섬유화를 역전시키고 원발성 폐 섬유아세포를 역전시키는 방법. - 제 1 항에 있어서,
양수 엑소좀은 사이토카인-사이토카인 수용체, Wnt, PI3K-Akt 및 TGFβ 신호 전달 경로를 표적으로 하는 miRNA를 함유하는 방법. - 제 4 항에 있어서,
경주용 동물은 운동 유발 폐 출혈에 대해 치료되는 방법. - 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
양수 엑소좀은 불멸화된 포유동물 양막 상피 세포주의 은행으로부터 유래되는 방법. - 제 1 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
양수 엑소좀은 불멸화된 포유동물 양수 엑소좀으로부터 유래된 동결 건조 양수 엑소좀의 은행으로부터 선택되는 방법. - 포유동물 양수 엑소좀 및 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 약학 조성물.
- 제 18 항에 있어서,
포유동물 양수 엑소좀은 인간 양수 엑소좀인 약학적 조성물. - 포유동물 대상에서 세포 또는 신경 치료, 재생 및/또는 회복을 위한 의약의 제조에서 포유동물 양수 엑소좀의 용도.
- 제 20 항에 있어서,
포유동물 양수 엑소좀은 인간 양수 엑소좀인 용도. - 양막 상피 세포를 사용하여 인간 대상을 포함하는 포유동물 대상을 치료하기위한 개선된 세포-기반 치료 프로토콜로서, 개선은 불멸화된 양막 상피 세포주로부터 양수 엑소좀을 분리시키고, 조직 또는 신경 치료, 재생 및/또는 회복을 필요로 하는 대상에게 전신적 또는 국소적으로 투여하는 것을 포함하는 개선된 세포-기반 치료 프로토콜.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AU2015902214 | 2015-06-12 | ||
| AU2015902214A AU2015902214A0 (en) | 2015-06-12 | A method of treatment | |
| AU2016901349A AU2016901349A0 (en) | 2016-04-12 | A method of treatment | |
| AU2016901349 | 2016-04-12 | ||
| PCT/AU2016/050468 WO2016197196A1 (en) | 2015-06-12 | 2016-06-10 | A method of treatment |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20180042217A true KR20180042217A (ko) | 2018-04-25 |
Family
ID=57502820
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020187001041A KR20180042217A (ko) | 2015-06-12 | 2016-06-10 | 치료 방법 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11123376B2 (ko) |
| EP (2) | EP3307286B1 (ko) |
| JP (3) | JP6967228B2 (ko) |
| KR (1) | KR20180042217A (ko) |
| CN (2) | CN108025027B (ko) |
| AU (1) | AU2016275566B2 (ko) |
| CA (1) | CA2989172C (ko) |
| ES (1) | ES2941757T3 (ko) |
| HK (1) | HK1252568A1 (ko) |
| PH (1) | PH12017502283A1 (ko) |
| WO (1) | WO2016197196A1 (ko) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020027467A1 (ko) * | 2018-07-30 | 2020-02-06 | 주식회사 엑소코바이오 | 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 유효성분으로 포함하는 항염조성물 |
| US11337419B2 (en) | 2018-07-28 | 2022-05-24 | Exocobio Inc. | Method for lyophilizing exosome |
| US11529306B2 (en) | 2018-07-30 | 2022-12-20 | Exocobio Inc. | Lyophilized formulation of stem cell-derived exosomes and anti-inflammatory composition including the same as active ingredient |
| US11730695B2 (en) | 2018-05-31 | 2023-08-22 | Exocobio Inc. | Composition for alleviating facial redness, comprising stem cell-derived exosomes as active ingredient |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190028281A (ko) | 2017-09-08 | 2019-03-18 | 주식회사 엑소코바이오 | 지방줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 조성물의 신장 기능 개선 용도 |
| GB201718681D0 (en) * | 2017-11-13 | 2017-12-27 | Evox Therapeutics Ltd | Protein engineered extracellular vesicles |
| WO2019124522A1 (ja) * | 2017-12-21 | 2019-06-27 | 合同会社みらか中央研究所 | 細胞外小胞の安定化方法 |
| WO2020032186A1 (ja) * | 2018-08-08 | 2020-02-13 | 学校法人東京女子医科大学 | 口腔上皮細胞が産生する細胞外小胞を含む局所適用組成物 |
| WO2020176801A1 (en) * | 2019-02-28 | 2020-09-03 | Fagg William Samuel Iv | Amniotic fluid-derived extracellular vesicles and uses thereof for wound healing |
| WO2020209304A1 (ja) * | 2019-04-09 | 2020-10-15 | 孝広 落谷 | 線維化、炎症、及び／又は老化疾患に対する治療薬 |
| EP4006144A4 (en) * | 2019-07-31 | 2023-04-05 | Shanghai Santeja H & M Tech. Development Inc | THERAPEUTIC MEDICINE FOR FIBROSIS, INFLAMMATION AND/OR AGE-RELATED DISEASES |
| KR102340058B1 (ko) * | 2020-05-12 | 2021-12-16 | 경북대학교 산학협력단 | 양막상피세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 안구질환 예방 또는 치료용 조성물 |
| WO2021237100A1 (en) * | 2020-05-21 | 2021-11-25 | Codiak Biosciences, Inc. | Methods of targeting extracellular vesicles to lung |
| JP6967308B1 (ja) * | 2020-06-30 | 2021-11-17 | 国立大学法人高知大学 | 胎児付属物由来組織細胞培養上清を含む脳神経障害治療剤 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2788780B1 (fr) * | 1999-01-27 | 2001-03-30 | Ap Cells Inc | Procede de preparation de vesicules membranaires |
| EP2164505B1 (en) * | 2007-05-28 | 2014-09-17 | Monash University | Treatment of chronic lung disease |
| WO2010105144A2 (en) * | 2009-03-12 | 2010-09-16 | University Of South Florida | Method of disease-induced and receptor-mediated stem cell neuroprotection |
| EP2683389B1 (en) * | 2011-03-11 | 2017-05-03 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions relating to mesenchymal stem cell exosomes |
| ES2967272T3 (es) * | 2011-11-30 | 2024-04-29 | Bullerdiek Joern | Expresión de miARNs en tejido placentario |
| US20140010801A1 (en) | 2012-06-08 | 2014-01-09 | University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Compositions and Methods for Restoring or Rejuvenating Stem/Progenitor Cell Function |
| JP6343671B2 (ja) * | 2013-12-12 | 2018-06-13 | サムスン ライフ パブリック ウェルフェア ファウンデーション | トロンビンを利用した幹細胞由来のエキソソームの生成促進方法 |
| CN104382827A (zh) | 2014-11-28 | 2015-03-04 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 人羊膜间充质干细胞外泌体的用途 |
| CN104666344B (zh) | 2015-02-28 | 2019-09-20 | 广州医科大学附属第一医院 | 间充质干细胞外泌体在制备治疗肺纤维化的药物制剂中的应用 |
| CN105477016A (zh) * | 2015-11-13 | 2016-04-13 | 中国人民解放军第二军医大学 | 人间充质干细胞来源的外泌体在抗组织纤维化及瘢痕形成中的应用 |
| KR101843634B1 (ko) * | 2016-04-15 | 2018-03-30 | 사회복지법인 삼성생명공익재단 | 트롬빈 처리 줄기세포에서 유래된 엑소좀을 포함하는 만성폐질환 치료용 조성물 |
-
2016
- 2016-06-10 AU AU2016275566A patent/AU2016275566B2/en active Active
- 2016-06-10 KR KR1020187001041A patent/KR20180042217A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-06-10 EP EP16806439.2A patent/EP3307286B1/en active Active
- 2016-06-10 ES ES16806439T patent/ES2941757T3/es active Active
- 2016-06-10 US US15/735,817 patent/US11123376B2/en active Active
- 2016-06-10 CN CN201680047646.2A patent/CN108025027B/zh active Active
- 2016-06-10 CN CN202210347434.3A patent/CN114984054A/zh active Pending
- 2016-06-10 WO PCT/AU2016/050468 patent/WO2016197196A1/en active Application Filing
- 2016-06-10 CA CA2989172A patent/CA2989172C/en active Active
- 2016-06-10 JP JP2018516607A patent/JP6967228B2/ja active Active
- 2016-06-10 EP EP23150971.2A patent/EP4218780A1/en active Pending
-
2017
- 2017-12-12 PH PH12017502283A patent/PH12017502283A1/en unknown
-
2018
- 2018-09-17 HK HK18111881.9A patent/HK1252568A1/zh unknown
-
2021
- 2021-06-15 JP JP2021099640A patent/JP7372619B2/ja active Active
-
2023
- 2023-08-18 JP JP2023133456A patent/JP2023175700A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11730695B2 (en) | 2018-05-31 | 2023-08-22 | Exocobio Inc. | Composition for alleviating facial redness, comprising stem cell-derived exosomes as active ingredient |
| US11337419B2 (en) | 2018-07-28 | 2022-05-24 | Exocobio Inc. | Method for lyophilizing exosome |
| WO2020027467A1 (ko) * | 2018-07-30 | 2020-02-06 | 주식회사 엑소코바이오 | 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 유효성분으로 포함하는 항염조성물 |
| US11529306B2 (en) | 2018-07-30 | 2022-12-20 | Exocobio Inc. | Lyophilized formulation of stem cell-derived exosomes and anti-inflammatory composition including the same as active ingredient |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2989172A1 (en) | 2016-12-15 |
| AU2016275566B2 (en) | 2022-02-24 |
| EP3307286B1 (en) | 2023-01-11 |
| JP2021152041A (ja) | 2021-09-30 |
| JP2023175700A (ja) | 2023-12-12 |
| CN108025027B (zh) | 2022-05-24 |
| JP6967228B2 (ja) | 2021-11-17 |
| ES2941757T3 (es) | 2023-05-25 |
| US11123376B2 (en) | 2021-09-21 |
| JP2018518534A (ja) | 2018-07-12 |
| CN108025027A (zh) | 2018-05-11 |
| EP3307286A4 (en) | 2018-12-26 |
| EP3307286A1 (en) | 2018-04-18 |
| CN114984054A (zh) | 2022-09-02 |
| CA2989172C (en) | 2024-04-23 |
| PH12017502283A1 (en) | 2018-06-11 |
| EP4218780A1 (en) | 2023-08-02 |
| AU2016275566A1 (en) | 2017-12-21 |
| WO2016197196A1 (en) | 2016-12-15 |
| JP7372619B2 (ja) | 2023-11-01 |
| HK1252568A1 (zh) | 2019-05-31 |
| US20190336539A1 (en) | 2019-11-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7372619B2 (ja) | 治療方法 | |
| Hu et al. | Extracellular vesicle activities regulating macrophage-and tissue-mediated injury and repair responses | |
| KR20190084207A (ko) | 지방 조직 유래의 중간엽 기질 세포 조정 배지 및 이것의 제조 및 사용 방법 | |
| US20190060367A1 (en) | 3-d collagen scaffold-generated exosomes and uses thereof | |
| KR20200029475A (ko) | 인간 구강 점막 줄기세포 분비체 | |
| JP6894652B1 (ja) | 組織修復剤、組織修復剤の使用方法およびスクリーニング方法 | |
| JP2009256374A (ja) | 疾患および損傷の処置のための一酸化窒素ドナー | |
| Pena-Altamira et al. | Release of soluble and vesicular purine nucleoside phosphorylase from rat astrocytes and microglia induced by pro-inflammatory stimulation with extracellular ATP via P2X7 receptors | |
| KR20160134738A (ko) | 국소적 전달을 위한 압타머 | |
| CN112423768A (zh) | 通过肺球体细胞分泌因子的吸入来进行治疗性肺修复 | |
| US11129875B2 (en) | Osteoarthritis treatment with chemokine-loaded alginate microparticles | |
| EP3964219A1 (en) | Pharmaceutical composition for treating sepsis or systemic inflammatory response syndrome, comprising isolated mitochondria as active ingredient | |
| US20220008481A1 (en) | Method of treatment | |
| EP3733205A1 (en) | Lipocalin-type prostaglandin d2 synthase production accelerating agent | |
| Fareez et al. | Molecular and Epigenetic Basis of Extracellular Vesicles Cell Repair Phenotypes in Targeted Organ-specific Regeneration | |
| JP2021531279A (ja) | 自然リンパ系細胞による小膠細胞活性化の抑制 | |
| WO2024029597A1 (ja) | ＩＦＮ－γへ選択的に結合するＤＮＡオリゴヌクレオチドを含有するドライアイ治療薬 | |
| Safakhil et al. | Inflammasome Regulation at the Level of Cellular and Molecular Function affect by Recombinant Tissue Plasminogen Activator and Exosomes Treatment in Ischemic Stroke Animal Model | |
| CA3207905A1 (en) | Method for obtaining tumor-hypoxia educated regenerative macrophages and use thereof in regenerative medicine | |
| CN116098921A (zh) | 一种具有哺乳动物大脑系统抗衰作用的生物制品及其制备方法和应用 | |
| CN118256448A (en) | Stem cell-derived extracellular vesicles rich in miRNA-125a-5p and application thereof in preparation of drugs for treating cerebral ischemia reperfusion injury | |
| Benito Muñoz | The role of purinergic receptor A1 in neurogenesis modulation from subventricular zone |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E902 | Notification of reason for refusal |