KR20180012279A - 신경 질환의 치료를 위한 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 CSF-1R 활성의 억제제 및 신경 질환의 새로운 치료 방법에 관한 것이다.

Description

신경 질환의 치료를 위한 방법

본 발명은 일반적으로 신경 질환을 치료하는 방법 및 보다 구체적으로 신경 질환의 치료를 위한 항-CSF-1R 항체에 관한 것이다.

신경염증 반응과 관련된 다양한 신경 질환이 있으며, 예를 들어 일반적으로 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 자폐증, 크로이츠펠트-야콥병, 수막염, 다발성 경화증, 파킨슨병, 뇌졸중, 외상성 뇌 손상 또는 간질, 간질발생(epileptogenesis) 및 발작 장애 및 경련이 가장 두드러진다.

세계 보건 기구(WHO) 및 간질에 대한 국제 연맹(ILAE)은 간질을 뉴런 뇌 세포에서의 과도하고 혼란스런 방전(discharge)에 의해 유발되는 발작 현상으로 구성되는 만성적이고, 재발성이며, 반복적인 신경 장애로 정의한다. 그 발병률은 2개의 피크를 갖는데, 어린 시절과 청소년기에 하나는 갖고, 60세 이상에서 두 번째로 더 뚜렷한 하나를 갖는다. 국제 간질 협회(IBE)에 따르면, 전 세계적으로 약 5천만 명의 사람들이 간질로 고통받으며, 이들 중 20-30%는 한 달에 한 번이 넘는 발작을 겪는다(Forsgren et al., Eur J Neurol 2005;12:245-53).

전 세계적으로 1년당 새로운 간질 사례의 수는 10만 명당 24 내지 53건의 범위이다. 유럽에서는, 여러 나라에서 수년 동안 실시된 유병률 연구로부터, 90만 명의 어린이와 청소년, 190만 명의 20세 내지 64세의 성인, 및 60만 명의 65세 이상의 노인이 간질에 걸린 것으로 계산되었다(Forsgren et al., Eur J Neurol 2005;12:245-53).

간질은 발작을 특징으로 하는 다양한 만성 신경 장애의 집합을 포함하는 것으로 간주된다. 이러한 발작은 재발성이며 비유발성일 수 있거나, 향후 발작 가능성을 증가시키는 뇌 변화와 조합된 단일 발작을 구성할 수 있다. 간질 발작은 전형적으로 뇌에서의 비정상적이거나, 과도하거나 또는 과동조(hypersynchronous) 뉴런 활성으로부터 비롯된다.

간질은 세계 인구에서 약 1%의 유병률을 갖는 가장 흔한 신경 질환 중 하나이다. 간질에 대한 국제 연맹에 의해 제공된 가장 최근의 정의에 따르면, "간질 발작은 뇌에서의 비정상적인 과도하거나 동시적인 뉴런 활성으로 인한 징후 및/또는 증상의 일시적인 발생이다", "간질은 간질 발작을 생성하는 지속적인 경향, 및 이 병태의 신경생물학적, 인지적, 심리적, 및 사회적 결과를 특징으로 하는 뇌의 장애이다."(Fisher et al., 2014).

간질 원인에 대한 지식은 전체 게놈 시퀀싱 기술의 출현과 인간 게놈의 이해의 증대 이후로 빠르게 진화하고 있다. 또한, 분자 생물학과 유전학에서의 새로운 개념과 기술은 간질 병리생리학에 대한 우리의 이해를 근본적으로 바꾸었다. 신경영상 기술은 현재 발작 생성과 간질 진행에 관여하는 뇌 회로와 구조의 전례가 없는 이해를 가능하게 하고 있다. 마지막으로, 뇌파검사(EEG) 또는 시험관내 전기생리학과 같은 신경생리학 기술은 간질에서 신경망의 역할에 관한 추가의 정보를 제공한다.

상이한 유형의 발작 및 간질 병인, 예컨대, 전신 발작, 국소 발작 및 원인 불명의 발작이 존재한다. 국소 발작은 하나의 반구(대뇌 피질의 특정 영역을 포함)로 제한된 네트워크 내의 일부 지점에서 비롯되는 것으로 개념화되는 반면, 전신 발작은 양측으로 분포된 네트워크(전체 대뇌 피질 포함) 내의 일부 지점에서 비롯되어 양방향으로 분포된 네트워크에 빠르게 관여하는 것으로 개념화된다(Berg and Scheffer, 2011). 문헌[Berg et al., 2010]에 의해 공개된 간질에 대한 국제 연맹(ILAE)에 의한 발작의 현재의 분류는 a) 특히 강직간대(tonic-clonic)(임의의 조합으로), 소발작(absence)(전형적, 비전형적, 특별한 특징을 갖는 소발작, 간대성근경련 소발작, 눈꺼풀 간대성근경련), 간대성근경련(간대성근경련, 간대성근경련 무긴장성, 간대성근경련 강직성, 간대성, 강직성, 무긴장성)을 의미하는 전신 발작, b) 의식 또는 인식의 손상이 있거나 없는 국소 발작 및 c) 원인 불명의 발작(간질 경련).

의식 또는 인식의 손상이 없는 국소 발작은 i) 관찰가능한 운동 또는 자율 구성요소를 갖는 것이다. 이것은 대략 "단순 부분 발작"의 개념에 해당하는데, "국소 운동" 및 "자율"은 발작 징후에 따라 이 개념을 적절하게 전달할 수 있는 용어이다. 또는 ii) 주관적인 감각 또는 심령 현상만을 포함하는 것에 해당한다. 이것은 "전조(aura)"의 개념에 해당한다.

의식 또는 인식의 손상을 갖는 국소 발작은 대략 양측의 경련성 발작(강직, 간대, 또는 간직 및 간대 구성요소 포함)으로 진화하는 복합 부분 발작"의 개념에 해당한다. 이 표현은 용어 "2차 전신 발작"을 대체한다.

또한, 주요 병인적 인자가 요즘에 더 잘 정의되었다: 1) 유전적 원인: 발작이 장애의 핵심 증상인 알려지거나 추정된 유전적 결함(들)의 직접적인 결과; 2) 구조적/대사적 원인: 실질적으로 증가된 간질 발생 위험성과 관련된 것으로 입증된 구별되는 구조적 또는 대사적 병태 또는 질환; 3) 근본 원인의 특성이 결정될 수 없을 때, 알려지지 않은 원인(Berg and Scheffer, 2011).

또한, 간질을 야기하는 과정, 즉, 간질발생에 관한 신규 개념이 현재 도입되고 있으며, 이는 이 분야에서 추가 연구 노력을 유도한다. 간질발생은 자발적 발작을 생성할 수 있는 조직의 발달 및 확장을 지칭하며, 이는 (1) 간질 병태의 발달 및/또는 (2) 병태가 확립된 후 진행을 야기한다(Pitkanen et al., (2013)). 질환 또는 증후군 변형은 2개의 구성요소를 갖는다: 항간질발생 및 동시이환 변형.

항간질발생은 예방, 발작 변형, 및 치유를 포함하는, 간질발생의 효과에 대항하는 과정이다. 예방과 관련하여, 완전한 예방은 간질의 발달을 중단시킨다. 부분적 예방은 간질의 발달을 지연시키거나 그의 중증도를 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 발작은 발생하지만 이들은 빈도가 적거나, 더 짧거나, 또는 더 가벼운 발작 유형(발작 변형)일 수 있다. 항간질발생은 또한 간질이 이미 확립된 후 간질의 진행을 예방하거나 감소시킬 수 있다.

동시이환 변형은 불안, 우울증, 신체 운동 장애, 또는 인지 저하와 같은, 간질 관련 동시이환의 증상 발달 또는 진행을 경감시키거나 역전시키는 치료를 의미한다.

치유적 치료는 간질의 완전하고 영구적인 역전으로서 정의되어, 치료 철회 후에 발작이 일어나지 않는다(Pitkanen et al., 2013).

간질 발병 전 또는 후에 질환 변형제가 제공될 수 있는 경우, 간질에서 질환 변형을 목표로 하는 신규 치료 접근법이 제안되고 있다. 이러한 치료는 간질 발병 전에 제공되면, 간질의 발달을 예방하거나 지연시킬 수 있다. 이러한 치료가 간질의 진단 후에 제공되면, 그것은 발작 중증도를 완화시키거나, 간질의 진행을 예방하거나 감소시키거나, 또는 발작을 약물 내성에서 약물 민감성으로 변경할 수 있다.

상기 기재된 치료 개념은 간질에서의 현재의 치료 표준과 근본적으로 상이하며, 신경 흥분성 기전을 표적화하여 항발작 효과만을 제공하는 항간질 약물(AED)을 포함한다. 이러한 약물은 간질의 근본적인 원인 또는 병리생리학을 다루지 않으며, 20개가 넘는 AED의 인상적인 의료품이 시장에서 이용가능함에도 불구하고, 간질 환자 중 30-40%는 제어되지 않은 발작 및 상기 질환과 관련된 동시이환으로 고통받고 있다.

이것은 신경 질환 변형 특성을 갖는 보다 효과적인 약물을 제공하기 위한 중요한 충족되지 않은 의학적 필요를 창출한다.

염증은 인간 간질 및 간질발생의 병리생리학에서 지표적 역할을 하는 것으로 이해된다. 특히, 미세아교 세포 활성화는 TLE 및 간질발생의 실험 모델인 인간 측두엽 간질(TLE)에서 관찰되는 주요 전염증 경로의 유도와 관련된다. 이것은 주로 TLE를 갖는 환자 및 설치류 모델 모두로부터 얻은 뇌 조직에 대해 수행된 다양한 연구에 의해 제안되었으며, 이는 몇 가지 케모카인 및 전염증성 사이토카인을 포함하는, 면역/염증 경로와 관련된 유전자의 강한 상향조절을 나타낸다. 만성적으로 활성화된 미세아교 세포는 전염증성 사이토카인(예컨대, TNFa, IL1b)을 방출하고, 이는 이후에 신경 흥분성을 증가시키고 발작을 촉발하는 역할을 하는 것으로 가정된다. 이것은 실험 모델에서 발작 활성을 악화시킬 수 있는 IL1b에 대해 가장 잘 설명되어 있는 한편, IL1b 생산의 유전자 넉다운 또는 억제는 항경련 효과를 가지며 실험 모델에서 질환의 경과를 변형시킬 수 있다.

그러나, 미세아교 활성을 제어하는 현재 이용가능한 확인된 약물 표적은 오히려 드물며, 기존 치료 접근법은 주로 새로운 화학적 독립체(NCE)에 초점을 맞춘다. 예를 들어 소분자 화합물(PLX3397)이 집락 자극 인자 1 수용체(CSF-1R)를 억제하는데 사용된 공개된 연구인 문헌[Elmore et al., 2014]은 이 수용체가 미세아교 기능 및 생존력의 핵심 조절자라는 것을 학인시켜 주는 데이터를 제공하였다.

집락-자극 인자 1(CSF-1) 및 구조적으로 유사하나 서열이 무관한 분자인 인터루킨-34(IL-34)는 CSF1R의 2개의 내인성 리간드이며, 이는 대식세포 및 미세아교에 의해 배타적으로 발현된다. 대식세포 집락 자극 인자(M-CSF)로도 공지된 집락 자극 인자 1(CSF-1)은 다양한 세포에 의해 생산되는 사이토카인이다. CSF-1은 2개의 "단량체" 폴리펩타이드로 구성되며, 이는 생물학적 활성 이량체 CSF-1 단백질을 형성한다. CSF-1은 선택적 RNA 스플라이싱, 단백질 전구체의 단백질 분해 가공 및 당화 및 프로테오글리칸의 부가를 포함하는 번역후 변형으로 인해 적어도 3개의 성숙한 형태로 존재한다(Cerretti DP et al. 1988, Mol Immunol, 25(8),761; Pixley FJ and Stanley ER, 2004, Trends in Cell Biology, 14(11) 628-38; Douglass, TG et al, 2008, Int Immunopharmacol, 8, 1354-76 참고). CSF-1 단백질의 다양한 형태는 2개의 분비된 분자를 포함하며, 하나는 당화되고, 다른 하나는 더 긴 아미노 말단 서열 및 프로테오글리칸 변형으로 구성된다. 또 다른 변이체는 당화되지만 프로테오글리칸 모이어티가 없는 막관통(TM) 분자이다. 이 막 형태는 단백질분해 절단을 통해 방출되어 활성 가용성 분자를 방출할 수 있다. 모든 형태는 아미노 말단에 32개 아미노산 신호 서열, 카르복실 말단 근처에 약 23개 아미노산의 추정상의 막관통 영역 및 짧은 세포질 COOH-말단 꼬리를 갖는 전구체 폴리펩타이드로서 생산된다. 전구체 펩타이드는 이후 아미노 말단 및 카르복실 말단 단백질분해 절단에 의해 가공되어 잔기 1-149가 동일하고 수용체 결합 도메인을 구성하는 CSF-1의 성숙한 형태를 생산한다. 생체내에서, CSF-1 단량체는 당화되고, 디설파이드-연결을 통해 이량체화된다. CSF-1은 혈액 세포의 생산을 촉진하는 생물학적 작용제(agonist)의 그룹에 속한다. 구체적으로, 그것은 단핵 식세포 계통의 골수 선조 세포를 위한 성장, 분화 및 생존 인자로서 작용한다. 또한, CSF-1은 반응 세포 상의 특이적 수용체를 통해 대식세포의 생존, 증식 및 기능을 자극한다. 다른 실험은 대식세포 집락-자극 인자(M-CSF)가 난치성 TLE 환자로부터의 생검 후 배양된 성인 인간 미세아교의 표현형을 변경한다는 것을 보여주었다(Smith et al., 2013). 다른 최근 데이터는 CSF-1R 유전자의 돌연변이가 발작 및 간질과 관련된 유전성 미만성 백질뇌병증을 유발한다는 것을 보여준다(Rademakers et al., 2011; Guerreiro et al., 2013).

CSF-1 수용체(CSF-1R)는 c-fms 유전자 산물 또는 CD115로도 지칭된다. CSF-1R은 유형 III 수용체 티로신 키나제 패밀리에 속하는 165kDa 유형 1 TM 당단백질이다. 또한, CSF-1 수용체는 미세아교를 포함하는 단핵 식세포의 증식, 분화, 및 생존의 조절을 담당한다. CSF-1R이 결여된 마우스는 말초 조직에서 감소된 수의 대식세포를 나타낸다. 중요하게도, CSF-1R-결핍 마우스는 또한 뇌에서 미세아교가 결여되고, 이는 치사 표현형과 관련된다. 사실상, 배양된 뉴런에서 낮은 수준의 CSF-1R이 관찰됨에도 불구하고, 미세아교는 정상 조건하에 CSF-1R을 발현하는 뇌에서의 유일한 세포이다. 리간드 CSF-1의 CSF-1R에의 결합은 상기 티로신 키나제 도메인의 작용을 통해, 하나 이상의 티로신 잔기 상에 수용체의 인산화를 야기한다. 이 인산화는 검출될 수 있는데, 인산화 후 수용체에만 결합하는 항체가 이용가능하기 때문이다(예를 들어 Cell Signaling Technology로부터의 Phospho-M-CSF-수용체(Tyr546) 항체 #3083).

CSF-1R에 대한 항체는 본 기술분야에 공지되어 있다. 문헌[Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793]은 CSF-1 활성을 억제하는 CSF-1R에 대한 항체를 기술한다(Sherr, C.J. et al., Blood 73 (1989) 1786-1793). WO제09/026303호는 인간 CSF-1R에 결합하는 항-CSF-1R 항체 및 항-쥣과 CSF-1R 항체를 사용한 생체내 마우스 종양 모델을 개시한다. WO제11/123381호는 CSF-1R을 내재화하며 ADCC 활성을 갖는 항-CSF-1R 항체를 개시한다. WO제11/123381호는 항-쥣과 CSF-1R 항체를 사용한 생체내 마우스 종양 모델을 개시한다. WO제11/140249호는 암의 치료에 유용한 것으로 언급되는, CSF-1R에 대한 CSF-1의 결합을 차단하는 항-CSF-1R 항체를 개시한다. WO제09/112245호는 CSF-1R에 대한 CSF-1 결합을 억제하고 암, 염증성 장 질환 및 류마티스성 관절염의 치료에 유용한 것으로 언급되는 항-CSF-1R IgG1 항체를 개시한다. WO제11/131407호는 CSF-1R에 대한 CSF-1 결합을 억제하고 골 손실 및 암의 치료에 유용한 것으로 언급되는 항-CSF-1R 항체를 개시한다. WO제11/107553호는 CSF-1R에 대한 CSF-1 결합을 억제하고 골 손실 및 암의 치료에 유용한 것으로 언급되는 항-CSF-1R 항체를 개시한다. WO제11/070024호는 인간 CSF-1R 단편 delD4에 결합하는 항-CSF-1R 항체를 개시한다. WO제15/028455호는 CSF-1R에 대한 CSF-1 결합을 억제하고 섬유증 및 암의 치료에 유용한 것으로 언급되는 항-CSF-1R 항체를 개시한다.

그러나, 예를 들어 항체와 같은 큰 생물학적 분자의 혈액-뇌 장벽(BBB) 투과성과 관련된 심각한 제한 및 우려가 여전히 존재한다. 지금까지, 큰 분자 또는 항체에 의해 뇌 염증을 조절하는 것은 성공적이지 못한 것으로 입증되었다. 오히려, IgG1 항체에 융합된 임상적으로 사용된 재조합 TNF 수용체인 에타네르셉트가 혈액-뇌 장벽(BBB)을 통과하지 못하여 설치류에서 전신 투여 후 뇌에서 TNF-α-유도 염증에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다(Zhou et al., 2011). 병원에서 전형적인 투여 경로인 전신 주사된 항체의 중추적으로 매개된 치료 효과에 대해 상당한 의구심이 여전히 존재한다. 이것은 특히 항-CSF1R 항체에 대해 문제가 되는데, CSF1R이 또한 뇌 모세관의 내피 세포에서 발현되고, 그의 천연 리간드 IL-34에 의한 이 수용체의 활성화가 BBB 완전성을 회복시키고 그의 투과성을 제한하는 것으로 나타났다(Jin et al., 2014).

결과적으로, 신경 질환의 개선되고, 안정하고, 효능있는 치료적 치료 및/또는 예방을 위한 현재 여전히 높은 충족되지 않은 의학적 필요가 있다. 따라서, 본 발명의 목적은 신경 질환, 보다 구체적으로 간질의 새로운 치료 방법을 제공하는 것이다.

일 양태에서, 본 발명은 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 CSF-1R 활성의 억제제를 제공한다.

일 양태에서, 본 발명의 억제제는 핵산이다. 추가 양태에서, 본 발명의 억제제는 항체 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 유도체이다.

일 양태에서, 본 발명은 측두엽 간질(TLE)의 동물 모델에서 항-CSF-1R 항체의 전신 주사가, 미세아교 유전자의 발현의 변화에 의해 입증된, 미세아교 기능을 조절할 수 있다는 것을 나타내는 결과를 제공한다. 결과적으로, 상기 제공된 결과는 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한 CSF-1R 활성의 억제제로서 강력한 생존가능한 치료적 생물학적 독립체(NBE)를 제공한다.

따라서, 본 발명은 충족되지 않은 필요를 다루며 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 CSF-1R 활성의 억제제를 제공한다. 본 발명은 추가로 간질, 간질발생, 발작 및 경련의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 CSF-1R 활성의 억제제를 제공한다.

본 발명의 일 양태에서, 신경 질환의 치료 및 또는 예방용 약제의 제조를 위한 CSF-1R 활성의 억제제의 용도가 제공된다.

본 발명은 추가로 CSF-1R 활성의 억제제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 더욱이, 본 발명은 CSF-1R 활성의 억제제의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 신경 질환으로 고통받거나 신경 질환이 발생할 위험이 있는 인간 대상의 치료 및/또는 예방을 위한 방법을 제공한다.

도 1은 특정 아미노산 및 폴리뉴클레오타이드 서열(서열번호 1 내지 서열번호 14)을 나타낸다.
도 2는 세포 표면 상에서의 발현에 적합한 폴리뉴클레오타이드에 의해 코딩된 인간 CSF-1R 세포외 도메인의 서열(서열번호 15)을 나타낸다
도 3은 M-NFS-60 세포 상의 수용체-결합된 CSF-1이 이 방법에 의해 검출가능하였음을 확인시켜주는 유세포분석 데이터를 나타낸다.
도 4는 조직 배양 웰의 표면에 고정되거나 용액에서 자유로운 Ab535가 사용된 농도에서 CSF-1의 부존재하에 M-NFS-60 세포의 증식을 지지하지 않는다는 것을 보여준다.
도 5는 항-CSF-1R 항체로 처리(피하) 후 마우스에서 CSF-1R 전사 표적 관여를 나타낸다. CSF-1R의 4개의 전사 표적 유전자, 예컨대, Aif1(패널 A,B), Ctse(패널 C,D), Emr1(패널 E,F) 및 Irf8(패널 G,H)의 발현을 항-CSF-1R 항체 또는 음성 대조군으로서 대조군 IgG의 피하 주사 후 간질 마우스(좌측 패널) 및 순수한 동물(우측 패널)의 해마에서 qPCR에 측정하였다.
도 6은 항-CSF-1R 항체로 처리(피하) 후 마우스 뇌 절편(해마의 치아 이랑)에서 수행된 면역조직화학 실험의 결과를 나타낸다. 활성화된 미세아교의 마커인 Iba1 단백질은 적색으로 표지된 반면, 세포 핵은 DAPI(패널 A-C)에 의해 파란색으로 염색되었다. mm² 당 Iba1-발현 미세아교 세포의 밀도가 패널 D에서 정량화되었다.
도 7은 필로카르핀 마우스 모델에서 간질 발작의 빈도에 대한 항-CSF1R 항체의 보호 효과를 나타낸다.

본 발명의 일 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위해 제공되는 CSF-1R 활성의 억제제는 핵산이다. 추가 양태에서, 본 발명의 억제제는 항체 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 유도체이다.

본 발명에서, 용어 "신경 질환"은 하기 질환을 지칭한다: 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 안젤만 증후군, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 자폐 스펙트럼, 양극성 장애, 뇌 손상, 뇌 부상, 뇌 종양, 중추 통증 증후군, 뇌 위축, 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증(CIDP), 만성 통증, 복합 부위 통증 증후군, 크로이츠펠트-야콥병, 치매, 다운 증후군, 드라베 증후군, 뇌염, 본태성 진전, 프리드라이히 운동실조, 취약 X 증후군, 취약 X 관련 진전/운동실조 증후군(FXTAS), 두부 손상, 두통, 대상포진, 헌팅턴병, 저산소증, 면역 매개 뇌척수염, 영아 연축, 두개내 고압, 라포라병, 란다우-클레프너 증후군, 레녹스-가스토 증후군, 백질이영양증, 백질 소설성 백질뇌병증(leukoencephalopathy with vanishing white matter), 루이소체 치매, 뇌회결손(lissencephaly), 라임병-신경성 후유증, 거뇌증, 수막염, 소두증, 편두통, 미니-뇌졸중(일과성 허혈 발작), 운동 뉴런 질환-근위축성 측삭 경화증 참조, 다발경색성 치매, 다발성 경화증, 유아의 근간대성 뇌병증, 간대성근경련, AIDS의 신경학적 징후, 루프스의 신경성 후유증, 신경세포 세로이드 지방갈색소증, 신경병증, 니만-피크병, 오타하라 증후군, 파킨슨병, 부수종양성 질환(paraneoplastic disease), 원발성 축삭경화증, 프리온 질환, 진행성 다초점 백질뇌병증, 진행 핵상 마비, 라스무센 뇌염, 하지불안증후군, 레트 증후군, 강직-인간 증후군, 뇌졸중, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 진전, 결절성 경화증, 운베리히트-룬드보그병, 구회 간질(uncinate epilepsy), 웨스트 증후군, 윌슨병.

신경 질환의 바람직한 예는 안젤만 증후군, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 자폐 스펙트럼, 뇌 손상, 뇌 종양, 크로이츠펠트-야콥병, 다운 증후군, 드라베 증후군, 뇌염, 취약 X 증후군, 취약 X 관련 진전/운동실조 증후군(FXTAS), 두부 손상, 대상포진, 저산소증, 면역 매개 뇌척수염, 영아 연축, 라포라병, 란다우-클레프너 증후군, 레녹스-가스토 증후군, 백질이영양증, 백질 소실성 백질뇌병증, 뇌회결손, 라임병-신경성 후유증, 수막염, 다발성 경화증, 유아의 근간대성 뇌병증, 간대성근경련, 루프스의 신경성 후유증, 오타하라 증후군, 프리온 질환, 라스무센 뇌염, 레트 증후군, 외상성 뇌 손상, 결절성 경화증, 운베리히트-룬드보그병, 구회 간질 또는 웨스트 증후군을 포함한다.

본 발명에서, 신경 질환의 치료는 바람직하게는 간질, 간질발생, 발작 장애 및 경련에 관한 것이다.

발병 연령에 의해 배열된 간질 증후군의 예는 신생아 시기(양성 가족성 신생아 간질(BFNE), 초기 근간대성 뇌병증(EME), 오타하라 증후군), 유아기(전이성 국소 발작을 갖는 유아기의 간질, 웨스트 증후군, 유아기에서의 간대성근경련 간질(MEI), 양성 유아 간질, 양성 가족성 유아 간질, 드라베 증후군, 비진행성 장애에서 근간대성 뇌병증), 소아기(유아기에 시작될 수 있는 열성 발작 플러스(FS+), 파나이오토풀러스(panayiotopoulos) 증후군, 간대성근경련 무긴장성(이전에 불안정한(astatic)) 발작을 갖는 간질, 중심측두 극파(BECTS)를 갖는 양성 간질, 상염색체-우성 야간 전두엽 간질(ADNFLE), 후기 발병 소아 후두엽 간질(Gastaut type), 간대성근경련 소발작을 갖는 간질, 레녹스-가스토 증후군, 수면 중 지속적 극서파를 갖는 간질 뇌병증(CSWS), 란다우-클레프너 증후군(LKS), 소아 부존재 간질(CAE)), 청소년/성인(유아 소간질(JAE), 유아 간대성근경련 간질(JME), 전신성 강직-간대 발작만을 갖는 간질, 진행성 간대성근경련 간질(PME), 청각 장애를 갖는 상염색체 우성 뇌전증(ADEAF), 다른 가족성 측두엽 간질), 덜 특이적인 연령 관련성(가변 초점을 갖는 가족성 국소 간질(소아 내지 성인), 반사 간질), 독특한 무리(해마 경화증을 갖거나 없는 안쪽 측두염 간질(HS를 갖거나 없는 MTLE), 라무센 증후군, 시상하부 과오종을 갖는 겔라스틱 발작, 반경련-반신마비-간질, 이러한 진단 범주 중 어느 것에도 맞지 않는 간질은 먼저 공지된 구조적 또는 대사적 병태(추정상의 원인)의 존재 또는 부존재에 기초하여 먼저 구별될 수 있으며, 이후 발작 발병의 일차 모드에 기초하여 구별될 수 있다(전신 대 국소)), 구조적-대사적 원인에 의해 기인하고 이에 의해 조직화된 간질(피질 발달의 기형(반구거뇌증(hemimegalencephaly), 헤테로토피아(heterotopias) 등), 신경피부 증후군(결절성 경화증 복합체, 스터르지-웨버 등), 종양, 감염, 외상, 혈관종, 출산전후의 모욕, 뇌졸중), 원인 불명의 간질 및 전형적으로 간질 형태 자체로 진단되지 않는 간질 발작을 갖는 병태(양성 신생아 발작(BNS), 열성 발작(FS))이다.

보다 바람직한 구현예에서, 본 발명은 간질의 치료 및/또는 예방에서 사용하기 위한 억제제를 제공하며, 간질의 유형은 전신 발작, 국소 발작 및 원인 불명의 발작을 포함하는 군으로부터 선택된다. 가장 바람직한 구현예에서, 본 발명은 측두엽 간질(TLE)의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제를 제공한다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 'CSF-1R 활성'은 CSF-1R에 대해 본 기술분야에서 이해되는 활성, 특히 인간 CSF-1R 및 이의 아형, 예를 들어 1, 2, 3 또는 모든 아형의 활성의 스펙트럼을 지칭한다. 예를 들어, 수용체에 대한 리간드의 결합은 특정 티로신 잔기에서 CSF-1R의 인산화를 유도하고(Bourette RP and Rohrschneider LR, 2000, Growth Factors 17: 155-166), 뒤이어 일어나는 일련의 신호 전달 사건은 세포 전달, 생존, 분화 및 증식을 매개할 수 있다(Suzu S et al, 1997, J Immunol, 159, 1860-7; Yeung Y-G and Stanley ER, 2003, Mol Cell Proteomics, 2, 1143-55; Yu W et al 2008, J Leukoc Biol84(3), 852-63). 선택된 티로신 잔기 대신에 페닐알라닌 잔기를 포함하는 돌연변이체 CSF-1R 수용체 분자의 형질감염된 세포에서의 발현은 특정 티로신 잔기와 생존, 증식 및 형태학과 같은 세포의 결과와의 관련성을 밝혀내었다(Yu et al J Leukoc Biol 2008 Sep 84(3): 852-863). 분자 특이적 항체와 함께 항-포스포티로신 항체를 사용한 단백질체학 접근법 및 면역블롯팅 기술은 수용체의 리간드 자극 후 이들 세포 기능을 매개하는데 관여하는 많은 세포내 분자를 확인하였다(Yeung Y-G et al, 1998, J Biol Chem. 13, 273(46): 17128-37; Husson H et al, 1997, Oncogene15, 14(19): 2331-8).

본 발명에 따른 CSF-1R 활성의 억제제는 CSF-1R의 활성, 특히 신경 질환에서의 CSF-1R의 활성을 방해하거나, 예를 들어 감소시키거나/억제하거나, 차단하거나 또는 경쟁하는 제제이다. 알츠하이머병, 파킨슨병, 간질, 간질발생, 발작 및 경련에서 CSF-1R의 활성을 방해하는 제제가 특히 바람직하다. 본 발명에 따른 억제제는 CSF-1R 활성을 부분적으로 또는 완전히 억제할 수 있다. 본 발명에서 사용되는 억제제는 비제한적으로, IL-34, CSF-1 또는 CSF-1 수용체(CSF-1R)와 상호작용할 수 있는(예컨대, 결합하거나 인식할 수 있는) 억제제 또는 IL-34, CSF-1 또는 CSF-1R을 코딩하는 핵산 분자, 또는 IL-34, CSF-1 또는 CSF-1R의 발현을 억제할 수 있거나 또는 CSF-1R 및 CSF-1 및/또는 IL-34 간의 상호작용을 억제할 수 있는 억제제를 포함한다. 이러한 억제제는, 비제한적으로, 항체, 핵산(예컨대, DNA, RNA, 안티센스 RNA 및 siRNA), 탄수화물, 지질, 단백질, 폴리펩타이드, 펩타이드, 펩타이드모방체 및 다른 약물일 수 있다.

적합한 억제제의 예는, 비제한적으로, CSF-1에 결합하고 천연 CSF-1 수용체에의 결합을 방해하는 CSF-1 수용체의 합성 기능적 단편, CSF-1 수용체에 결합하고 천연 CSF-1 수용체에의 결합을 방해하는 CSF-1의 합성 기능적 단편, CSF-1 수용체에 결합하고 천연 CSF-1 수용체에의 결합을 방해하는 IL-34의 합성 기능적 단편, CSF-1 또는 IL-34 또는 CSF-1 수용체에 결합하고 CSF-1 수용체-리간드 상호작용을 방해하는 항체, CSF-1, IL-34 또는 CSF-1 수용체를 코딩하는 mRNA에 특이적으로 혼성화하는 안티센스 핵산 분자 또는 IL-34, CSF-1 또는 CSF-1R의 활성을 억제하는 다른 약물을 포함한다.

CSF-1 수용체 활성의 억제제는 이러한 억제제를 확인하고 생산하는 방법과 마찬가지로 본 기술분야에서 공지되어 있다. 중화 항-CSF-1 항체는, 예를 들어 문헌[Weir et al., 1996, J Bone Miner. Res.l 1, 1474-1481 and Haran-Ghera et al, 1997, Blood, 89, 2537-2545]에 의해 기술되었고, 이 문헌은 또한 항-CSF-lR 항체를 기술한다. CSF-1의 안티센스 길항제가 또한 기술되었다(EP제1223980호).

적합한 억제제일 수 있는 제제는 광범위한 후보 제제로부터 선택될 수 있다. 후보 제제의 예는 비제한적으로, 핵산(예컨대, DNA 및 RNA), 탄수화물, 지질, 단백질, 폴리펩타이드, 펩타이드, 펩타이드모방체 및 다른 약물을 포함한다. 제제는 본 기술분야에서 공지된 조합 라이브러리 방법에서의 많은 접근법 중 어느 것을 사용하여 수득될 수 있으며, 이는 생물학적 라이브러리; 공간적으로 어드레스가능한 병렬 고상 또는 용액상 라이브러리; 디콘볼루션(deconvolution)을 필요로 하는 합성 라이브러리 방법; "원-비드 원-화합물(one-bead one-compound)" 라이브러리 방법; 및 친화성 크로마토그래피 선택을 이용한 합성 라이브러리 방법을 포함한다. 생물학적 라이브러리 접근법은 펩타이드 라이브러리에 적합한 반면, 다른 4개의 접근법은 펩타이드, 비펩타이드 올리고머 또는 화합물의 라이브러리에 적용가능하다(Lam, 1997, Anticancer Drug Des. 12:145; U.S. 제5,738,996호; 및 U.S. 제5,807,683호).

분자 라이브러리의 합성을 위한 본 설명에 기초한 적합한 방법의 예는, 예를 들어 문헌[DeWitt et al, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6909; Erb et al, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:11422; Zuckermann et al, 1994, J. Med. Chem. 37:2678; Cho et al, 1993, Science 261:1303; Carrell et al, 1994, Angew. Chem. hit. Ed. Engl. 33:2059; Carell et al, 1994, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:2061; and Gallop et al, 1994, J. Med. Chem. 37:1233]에서 발견될 수 있다.

화합물의 라이브러리는, 예를 들어, 용액에서(예컨대, Houghten, 1992, Bio/Techniques 13:412-421), 또는 비드(Lam, 1991, Nature 354:82-84), 칩(Fodor, 1993, Nature 364:555-556), 박테리아(US 제5,223,409호), 포자(US 제5,571,698호; 제5,403,484호; 및 제5,223,409호), 플라스미드(Cull et al, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:1865- 1869) 또는 파아지(Scott and Smith, 1990, Science 249:386-390; Devlin, 1990, Science 249:404-406; Cwirla et al, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:6378-6382; and Felici, 1991, J. Mol. Biol. 222:301-310) 상에서 제공될 수 있다.

일 예에서, 본 발명에서 사용하기 위한 억제제는 핵산일 수 있다. 특히 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 핵산 분자는 상보적인 핵산에의 결합에 의해 이들의 각각의 폴리펩타이드의 발현을 변경하기 위해, 안티센스 분자로서 사용될 수 있다. CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 핵산은, 예를 들어 게놈 DNA 또는 cDNA로부터 표준 클로닝 기술을 사용하여 수득될 수 있거나 널리 공지되고 상업적으로 이용가능한 기술을 사용하여 합성될 수 있다. CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 핵산은 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 핵산의 뉴클레오타이드 서열 내로의 하나 이상의 뉴클레오타이드 치환, 부가 또는 결실을 함유할 수 있다. 예를 들어, 부위 지향적 돌연변이생성 및 PCR 매개 돌연변이생성을 포함하는 본 기술분야의 숙련가에게 공지된 표준 기술이 돌연변이를 도입하는데 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 안티센스 핵산은 각각의 폴리펩타이드를 코딩하는 RNA(바람직하게는 mRNA)의 일부에 대한 일부 서열 상보성으로 인해 혼성화할 수 있는 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 핵산을 포함한다. 안티센스 핵산은 이러한 폴리펩타이드를 코딩하는 mRNA의 코딩 및/또는 비코딩 영역에 상보적일 수 있다. 가장 바람직하게는, 안티센스 핵산은 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드의 발현의 억제를 야기한다. 본 발명은 또한 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드를 코딩하는 유전자 또는 cDNA에 대해 안티센스인 적어도 8개의 뉴클레오타이드(예를 들어 15 내지 22개의 뉴클레오타이드, 예컨대 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 또는 22개의 뉴클레오타이드)를 포함하는, 단리된 DNA인, CSF-1R 활성의 억제제의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 신경 질환으로부터 고통받거나 신경 질환이 발생할 위험에 있는 인간 대상의 치료 및/또는 예방에의 용도를 위한 CSF-1R 활성의 억제제를 제공한다.

일 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제는 CSF-1 또는 IL-34와 상호작용하는(즉, 결합하거나 인식하는) 항체이다. 또 다른 구현예에서, 항체는 CSF-1 또는 IL-34와 선택적으로 상호작용한다. 선택적으로 상호작용한다는 것(예컨대, 인식하거나 결합하는 것)은 항체가 다른 폴리펩타이드보다 CSF-1 또는 IL-34 폴리펩타이드에 대해 더 큰 친화성을 갖는다는 것을 의미한다. 적합한 항체의 예는, 예를 들어 CSF-1 또는 IL-34가 그의 수용체에 결합하는 것을 방지함으로써, 그것이 생물학적 활성인 것을 방지하기 위한 방식으로 CSF-1 또는 IL-34에 결합함으로써 CSF-1 또는 IL-34의 활성을 억제하는 항체이다.

본 발명의 일 구현예는 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제를 제공하며, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 CSF-1R에 결합한다. 가장 바람직하게는, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제는 CSF-1R과 상호작용하고(즉, 결합하거나 인식하고), CSF-1R의 활성을 억제하는 항체이다. 일 구현예에서, 항체는 CSF-1R과 선택적으로 상호작용한다. 선택적으로 상호작용하는 것(예컨대, 인식하거나 결합하는 것)은 항체가 다른 폴리펩타이드보다 CSF-1R 폴리펩타이드에 대해 더 큰 친화성을 갖는다는 것을 의미한다. 적합한 항체의 예는 그것이 생물학적 활성인 것을 방지하기 위한 방식으로 CSF-1R에 결합함으로써 CSF-1R의 활성을 억제하는 항체이다.

일 구현예에서, 항체는 CSF-1R의 아형, 예를 들어 인간 CSF-1R 및 이의 아형을 인식한다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 CSF-1R 활성의 억제제는 CSF-1이 수용체 CSF-1R에 결합하는 것을 차단한다.

본원에 사용된 바와 같이 "차단하는"은 수용체를 폐색하는 것과 같이 물리적으로 차단하는 것을 의미하지만, 항체 또는 단편이, 예를 들어 형태 변화를 야기하는 에피토프에 결합하는 경우도 포함할 것이며, 이는 천연 리간드가 수용체에 더 이상 결합하지 않는다는 것을 의미한다(본원에서 알로스테릭 차단 또는 알로스테릭 억제로 지칭됨).

일 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 CSF-1R의 모든 이소타입, 예를 들어 ECD 도메인에 변이를 갖는 것, 예컨대 V23G, A245S, H247P, V279M 및 상기 변이체의 2, 3 또는 4개의 조합을 갖는 것에 결합한다. CSF-1 및 IL-34 모두는 CSF-1R에 대한 리간드이며, 본 발명에서의 용도를 위한 항체는 바람직하게는 기능적 세포 스크린에서 CSF-1 및 IL-34 모두의 활성을 억제한다. 본 발명에 따른 용도를 위한 항체는 또한 바람직하게는 CSF-1R 활성화 및/또는 CSF-1R 내재화를 야기하지 않는다.

CSF-1R을 차단하는 항체의 능력을 결정하는데 적합한 분석은 본원 실시예에 기재되어 있으며, 실시예 2를 참조한다.

BIAcore는 결합 동역학을 측정하기 위해 사용되는 분석의 예이며, 단핵구 또는 THP-1 세포를 사용하는 ELISA 분석 또는 세포 기반 분석이 또한 유용할 수 있다. CSF-1 및 IL-34 모두는 CSF-1R에 대한 리간드이며 항-CSF-1R 항체는 CSF-1 또는 IL-34가 CSF-1R에 결합하는 것을 차단하지만 바람직하게는 CSF-1 및 IL-34 모두가 CSF-1R에 결합하는 것을 차단할 수 있다. 항-CSF-1R 항체는 또한 바람직하게는 CSF-1R 활성화 또는 CSF-1R 내재화를 야기하지 않는다. CSF-1R 활성화 또는 CSF-1R 내재화를 일으키는 항체의 능력을 결정하는데 적합한 분석은 실시예에 기재되어 있으며, CSF-1 의존적 증식을 측정하는 분석을 기술하는 실시예 2를 참고한다.

CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드 또는 상기 폴리펩타이드를 발현하는 세포는 상기 폴리펩타이드를 특이적으로 인식하는 항체를 생산하는데 사용될 수 있다.

CSF-1, IL-34 및 CSF-1R 폴리펩타이드는 '성숙한' 폴리펩타이드 또는 이의 생물학적 활성 단편 또는 유도체일 수 있다. 바람직하게는 CSF-1 폴리펩타이드는 생물학적 활성에 중요한 것으로 여겨지는 아미노산 1-149를 함유한다.

본원에 사용된 바와 같이 CSF-1R은 CSF-1R로 명명된 단백질(서열번호 11에 나타낸 바와 같음), 이의 아형 및 이의 생물학적 활성 단편을 지칭한다. 서열번호 11은 인간 CSF1-R의 전체 972개 아미노산 서열을 나타내며, 여기서 잔기 1-19는 예측된 신호 펩타이드이다. 바람직하게는 CSF-1R 폴리펩타이드는 CSF-1R 서열의 예측된 세포외 영역을 나타내는, 인간의 아미노산 20-517을 함유한다. CSF-1R의 대안적인 형태는 공지되어 있다. 일 구현예에서, CSF-1R은 인간 단백질 또는 이의 아형이다. 일반적으로, 본 발명에서 사용되는 항체는 CSF-1R의 세포외 도메인을 지향할 것이다. 도 2에 나타낸 바와 같은 인간 CSF-1R(서열번호 15)은 P07333 하에 UniProt 데이터베이스에 등록되어 있다.

CSF-1 및 CSF-1R 폴리펩타이드는 발현 시스템을 포함하는 유전적으로 조작된 숙주 세포로부터 본 기술분야에서 널리 공지된 과정에 의해 제조될 수 있거나 또는 이들은 천연 생물학적 공급원으로부터 회수될 수 있다. 일 구현예에서, 도 2에 나타낸 서열(서열번호 15)은 적합한 세포주로 형질감염될 수 있고, 상기 폴리펩타이드는 세포 표면 상에 발현될 수 있다. 아미노산 단편은 상기 발현을 촉진하기 위해 GPI-앵커에 융합될 수 있다. 이후, 세포는 숙주를 면역화하는데 사용될 수 있다.

본원에서, 용어 "폴리펩타이드"는 펩타이드, 폴리펩타이드 및 단백질을 포함한다. 이들은 달리 명시하지 않는 한 상호교환적으로 사용된다. CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드는 일부 경우, 예를 들어 친화성 태그에 융합된 융합 단백질과 같은 더 큰 단백질의 일부일 수 있다.

이러한 폴리펩타이드에 대해 생성된 항체는 상기 폴리펩타이드 또는 이를 발현하는 세포를 널리 공지되고 일상적인 프로토콜을 사용하여, 동물, 바람직하게는 비인간 동물에게 투여함으로써 수득될 수 있으며, 예를 들어 문헌[Handbook of Experimental Immunology, D. M. Weir (ed.), Vol 4, Blackwell Scientific Publishers, Oxford, England, 198]을 참고한다. 많은 온혈 동물, 예컨대 토끼, 마우스, 랫트, 양, 소 또는 돼지가 면역화될 수 있다. 그러나, 마우스, 토끼, 돼지 및 랫트가 일반적으로 바람직하다.

일 구현예에서, 본 발명에 의해 제공되는 억제제는 항체 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 유도체이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명에 의해 제공되는 억제제는 단클론 또는 다클론 항체이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명에 의해 제공되는 억제제는 키메라, 인간화 또는 인간 항체인 항체 또는 이의 단편 또는 유도체이다.

단클론 항체는 하이브리도마 기술(Kohler and Milstein, 1975, Nature, 256:495-497), 트리오마 기술, 인간 B-세포 하이브리도마 기술(Kozbor et al, 1983, Immunology Today, 4:72) 및 EBV-하이브리도마 기술(Cole et al, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, p77-96, Alan R Liss, Inc., 1985)과 같은 본 기술분야에서 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 발명에서의 용도를 위한 항체는 또한 문헌[Babcook, J. et al, 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93(15):7843-7848, WO제92/02551호 및 WO제2004/051268호 및 WO제2004/106377호]에 의해 기재된 방법에 의해 특이적 항체의 생산을 위해 선택된 단일 림프구로부터 생성된 면역글로불린 가변 영역 cDNA를 클로닝하고 발현시킴으로써 단일 림프구 항체 방법을 사용하여 생성될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같이 특이적은 그것이 특이적인 항원만을 인식하는 항체를 지칭하거나, 그것이 비특이적인 항원에 결합하는 것과 비교하여 그것이 특이적인 항원에 대한 유의하게 더 높은 결합 친화성, 예를 들어 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10배 더 높은 결합 친화성을 갖는 항체를 지칭하는 것으로 의도된다.

키메라 항체는 경쇄 및 중쇄 유전자가 상이한 종에 속하는 면역글로불린 유전자 분절로 구성되도록 유전적으로 조작된 면역글로불린 유전자에 의해 코딩된 항체이다. 이러한 키메라 항체는 항원성이 낮을 가능성이 있다. 2가 항체는 본 기술분야에서 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다(Milstein et al, 1983, Nature 305:537-539; WO 제93/08829호, Traunecker et al, 1991, EMBO J. 10:3655-3659). 다가 항체는 다중 특이성을 포함할 수 있거나 단일특이적일 수 있다(예를 들어 WO 제92/22853호 참고).

본원에 사용된 바와 같이, 용어 '인간화 항체 분자'는 중쇄 및/또는 경쇄가 수용자 항체(예컨대, 인간 항체)의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역 프레임워크 내로 이식된 공여자 항체(예컨대, 쥣과 단클론 항체)로부터의 하나 이상의 CDR(원하는 경우, 하나 이상의 변형된 CDR 포함)을 함유하는 항체 분자를 지칭한다(예컨대, US 제5,585,089호; WO제91/09967호 참고). 검토를 위해, 문헌[Vaughan et al, Nature Biotechnology, 16, 535-539, 1998]을 참고한다.

일 구현예에서, 전체 CDR이 전달되기보다는, 상기 본원에 기재된 CDR 중 어느 하나로부터의 하나 이상의 특이성 결정 잔기만이 인간 항체 프레임워크로 전달된다(예를 들어, Kashmiri et al., 2005, Methods, 36, 25-34). 일 구현예에서 상기 본원에 기재된 CDR 중 하나 이상으로부터의 특이성 결정 잔기만이 인간 항체 프레임워크로 전달된다. 또 다른 구현예에서, 상기 본원에 기재된 CDR 각각으로부터의 특이성 결정 잔기만이 인간 항체 프레임워크로 전달된다.

본 발명의 인간화 항체에서, 프레임워크 영역은 수용자 항체와 정확하게 동일한 서열을 가질 필요가 없다. 예를 들어, 비정상적인 잔기는 상기 수용자 사슬 클래스 또는 유형에 대해 더 빈번하게 발생하는 잔기로 변경될 수 있다. 대안적으로, 수용자 프레임워크 영역 내의 선택된 잔기는 이들이 공여자 항체 내의 동일한 위치에서 발견되는 잔기에 상응하도록 변경될 수 있다(Reichmann et al., 1998, Nature, 332, 323-324 참고). 이러한 변경은 공여자 항체의 친화성을 회복하는데 필요한 최소로 유지되어야 한다. 변경될 필요가 있을 수 있는 수용자 프레임워크 영역에서 잔기를 선택하기 위한 프로토콜은 WO제91/09967호에 제시되어 있다.

CDR 또는 특이성 결정 잔기가 이식될 때, 마우스, 영장류 및 인간 프레임워크 영역을 포함하는 임의의 적절한 수용자 가변 영역 프레임워크 서열이 CDR이 유래된 공여자 항체의 클래스/유형을 고려하여 사용될 수 있다.

적합하게는, 인간화 항체는 인간 수용자 프레임워크 영역뿐만 아니라 하나 이상의 CDR을 포함하는 가변 도메인을 갖는다. 따라서, 일 구현예에서, 가변 도메인이 인간 수용자 프레임워크 영역 및 비-인간 공여자 CDR을 포함하는 인간 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R에 결합하는 인간화 항체가 제공된다.

본 발명에서 사용될 수 있는 인간 프레임워크의 예는 KOL, NEWM, REI, EU, TUR, TEI, LAY 및 POM(Kabat et al., 상기)이다. 예를 들어, KOL 및 NEWM은 중쇄를 위해 사용될 수 있고, REI는 경쇄를 위해 사용될 수 있으며 및 EU, LAY 및 POM은 중쇄 및 경쇄 모두를 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, 인간 생식계열(germline) 서열이 사용될 수 있고; 이들은 http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/에서 이용가능하다.

본 발명의 인간화 항체에서, 수용자 중쇄 및 경쇄는 반드시 동일한 항체로부터 유래될 필요가 없으며, 원하는 경우 상이한 사슬로부터 유래된 프레임워크 영역을 갖는 복합 사슬을 포함할 수 있다.

본 발명에서 사용하기 위한 항체는 또한 본 기술분야에서 공지된 다양한 파아지 디스플레이 방법을 사용하여 생성될 수 있고, 이는 문헌[Brinkman et al. (in J. Immunol. Methods, 1995, 182: 41-50), Ames et al. (J. Immunol. Methods, 1995, 184:177- 186), Kettleborough et al (Eur. J. Immunol. 1994, 24:952-958), Persic et al. (Gene, 1997 187 9-18), Burton et al (Advances in Immunology, 1994, 57:191-280) 및 WO 제90/02809호; WO 제91/10737호; WO 제92/01047호; WO 제92/18619호; WO 제93/11236호; WO 제95/15982호; WO 제95/20401호; 및 US 제5,698,426호; 제5,223,409호; 제5,403,484호; 제5,580,717호; 제5,427,908호; 제5,750,753호; 제5,821,047호; 제5,571,698호; 제5,427,908호; 제5,516,637호; 제5,780,225호; 제5,658,727호; 제5,733,743호 및 제5,969,108호]에 의해 개시된 것을 포함한다. US 제4,946,778호에 기재된 것과 같은 단일 사슬 항체의 생산을 위한 기술은 또한 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드에 대한 단일 사슬 항체를 생산하도록 개조될 수 있다. 또한, 형질전환 마우스, 또는 다른 포유동물을 포함하는 다른 유기체가 인간화 항체를 발현하는데 사용될 수 있다.

본 발명의 구현예는 이중특이적 또는 다중특이적인 항체 또는 이의 단편 또는 유도체인 CSF-1R 활성의 억제제를 제공한다. 본 발명의 추가 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 항체는, 전장 중쇄 및 경쇄를 갖는 완전 항체 분자, 또는 Fab, 변형된 Fab, Fab', 변형된 Fab', F(ab')₂, Fv, 단일 도메인 항체(예컨대, VH 또는 VL 또는 VHH), scFv, 2가, 3가 또는 4가 항체, Bis-scFv, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 및 상기 중 임의 것의 에피토프-결합 단편을 포함하는 군으로부터 선택되는 이의 단편을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다(예를 들어, Holliger and Hudson, 2005, Nature Biotech. 23(9):1126-1136; Adair and Lawson, 2005, Drug Design Reviews - Online 2(3), 209-217 참고).

이러한 항체 단편을 생성하고 제조하는 방법은 본 기술분야에 널리 공지되어 있다(예를 들어 Verma et al., 1998, Journal of Immunological Methods, 216, 165-181 참고). 본 발명에서 사용하기 위한 다른 항체 단편은 국제 특허 출원 WO제2005/003169호, WO제2005/003170호 및 WO제2005/003171호에 기재된 Fab 및 Fab' 단편을 포함한다. 다가 항체는 다중 특이성, 예컨대 이중특이성을 포함할 수 있거나 또는 단일특이성일 수 있다(예를 들어 WO 제92/22853호, WO제05/113605호, WO제2009/040562호 및 WO제2010/035012호).

일 구현예에서, 상기 항체는, 면역글로불린 모이어티, 예를 들어 Fab 또는 Fab' 단편을 포함하는 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 결합 항체 융합 단백질, 및 예를 들어 모두 본원에 참고로 포함된 WO제2009/040562호, WO제2010/035012호, WO제2011/030107호, WO제2011/061492호 및 WO제2011/086091호에 기재된 바와 같이, 이에 직접 또는 간접적으로 결합된 하나 또는 2개의 단일 도메인 항체(dAb)로서 제공된다.

일 구현예에서, 융합 단백질은, 예를 들어, 선택적으로 디설파이드 결합에 의해 연결된 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 쌍으로서, 2개의 도메인 항체를 포함한다.

일 구현예에서, 융합 단백질의 Fab 또는 Fab' 요소는 단일 도메인 항체 또는 항체에 대해 동일한 또는 유사한 특이성을 갖는다. 일 구현예에서, Fab 또는 Fab'는 단일 도메인 항체 또는 항체에 대해 상이한 특이성을 가지며, 즉 융합 단백질은 다가이다. 일 구현예에서, 본 발명에 따른 다가 융합 단백질은 알부민 결합 부위를 가지며, 예를 들어 내부의 VH/VL 쌍은 알부민 결합 부위를 제공한다.

항체 단편 및 이들을 생산하는 방법은 본 기술분야에서 널리 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌[Verma et al, 1998, Journal of Immunological Methods, 216, 165-181]을 참고한다. 본 발명에서 사용하기 위한 항체 단편의 특정 예는 천연 또는 변형된 힌지 영역을 갖는 Fab' 단편이다. 많은 변형된 힌지 영역은 이미, 예를 들어, US 제5,677,425호, WO제99/15549호, 및 WO제98/25971호에 기재되었고, 이들은 본원에 참고로 포함되어 있다. 본 발명에서 사용하기 위한 특정 항체 단편의 추가 예는 국제 특허 출원 제PCT/GB2004/002810호, 제PCT/GB2004/002870호 및 제PCT/GB2004/002871호(모두 2004년 7월 1일에 출원됨)에 기재된 것을 포함한다. 특히, 국제 특허 출원 제PCT/GB2004/002810호에 기재된 변형된 항체 Fab 단편이 바람직하다.

일 구현예에서, 항체 중쇄는 CH1 도메인을 포함하고, 항체 경쇄는 카파 또는 람다 중 하나인 CL 도메인을 포함한다.

일 구현예에서, 항체 중쇄는 CH1 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하고, 항체 경쇄는 카파 또는 람다 중 하나인 CL 도메인을 포함한다.

본 발명의 항체 분자의 불변 영역 도메인은, 만약 존재하는 경우, 항체 분자의 제안된 기능, 및 특히 필요할 수 있는 이펙터 기능을 고려하여 선택될 수 있다. 예를 들어, 불변 영역 도메인은 인간 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM 도메인일 수 있다. 특히, 항체 분자가 치료용으로 의도되고 항체 이펙터 기능이 필요한 경우 특히 IgG1 및 IgG3 이소타입의 인간 IgG 불변 영역 도메인이 사용될 수 있다. 대안적으로, 항체 분자가 치료용으로 의도되고 항체 이펙터 기능이 필요하지 않을 때 IgG2 및 IgG4 이소타입이 사용될 수 있다.

특정 구현예에서, 본 발명의 항체는 IgG2 또는 IgG4 항체이다. 이들 불변 영역 도메인의 서열 변이체가 또한 사용될 수 있음이 이해될 것이다. 예를 들어, 문헌[Angal et al., 1993, Molecular Immunology, 1993, 30:105-108]에 기재된 바와 같이 위치 241의 세린이 프롤린으로 변경된 IgG4 분자가 사용될 수 있다. 단일 아미노산 치환은 키메라 마우스/인간(IgG4) 항체의 이종성을 폐지한다. 문헌[Mol. Immunol. 30:105-108)]은 IgG4 항체의 절반 분자 형성을 최소화하기 위해 부위 지향적 돌연변이생성 접근법을 기술한다. 이 보고에서, 코어 힌지 내의 단일 아미노산 치환인 S241P는 실질적으로 적은 반절 분자 형성을 야기하였다. 따라서, 항체가 IgG4 항체인 구현예에서, 항체는 돌연변이 S241P를 포함할 수 있다. 상이한 IgG 이소타입에 의한 차별적인 ADCC 유도는 FcγR에 대한 이들 잔기의 친화성에 의존한다. 인간에서, IgG1 및 IgG3은 이펙터 기능을 유도하는 것으로 알려진 반면, IgG2 및 IgG4는 이펙터 기능을 약하게 유도한다. 바람직한 구현예에서, 본 발명에서의 용도를 위한 항체는 ADCC를 포함하는, 이펙터 기능을 약하게 유도하는 IgG2 또는 IgG4 항체이다. 본 발명에서 신경 질환을 치료하는 용도를 위한 항체는 제한된 이펙터 기능을 갖는 것이 특히 바람직한데, 이펙터 기능을 갖는 항체의 사용은 CSF-1R을 발현하는 세포의 향상된 고갈을 야기하여 환자에서 부작용을 일으킬 가능성이 있기 때문이다.

또한, 항체는 다양한 번역후 변형을 겪을 수 있음이 본 기술분야의 숙련가에 의해 이해될 것이다. 이러한 변형의 유형 및 정도는 종종 항체를 발현하는데 사용되는 숙주 세포주뿐만 아니라 배양 조건에 의존한다. 이러한 변형은 당화, 메티오닌 산화, 디케토피페라진 형성, 아스파테이트 이성질체화 및 아스파라긴 탈아미드화에서의 변이를 포함할 수 있다. 빈번한 변형은 카르복시펩티다제의 작용으로 인한 카르복시 말단의 염기성 잔기(예컨대, 라이신 또는 아르기닌)의 손실이다(문헌[Harris, RJ. Journal of Chromatography 705:129-134, 1995]에 기재된 바와 같음). 따라서, 항체 중쇄의 C-말단의 라이신은 존재하지 않을 수 있다.

또 다른 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서 사용될 수 있는 CSF-1R 활성의 억제제는 혈액-뇌 장벽(BBB)을 통과하여 뇌에서 신경 질환으로 고통받는 환자의 치료 및/또는 예방에 충분한 치료적 유효량을 달성하는 항체 또는 이의 단편 또는 유도체이다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 "치료적 유효량"은 표적화된 질환 또는 병태를 치료하거나, 개량하거나 또는 예방하는데 필요한 치료제의 양, 또는 검출가능한 치료적, 약리학적 또는 예방적 효과를 나타내는데 필요한 치료제의 양을 지칭한다. 임의의 항체의 경우, 치료적 유효량은 초기에 세포 배양 분석에서 또는 동물 모델에서, 일반적으로 설치류, 토끼, 개, 돼지 또는 영장류에서 추정될 수 있다. 동물 모델은 또한 적절한 농도 범위 및 투여 경로를 결정하는데 사용될 수 있다. 이후, 이러한 정보는 인간에서 투여를 위한 유용한 용량 및 경로를 결정하는데 사용될 수 있다.

인간 대상을 위한 정확한 치료적 유효량은 질환 상태의 중증도, 대상의 일반적인 건강, 대상의 연령, 체중 및 성별, 식이, 투여의 시간 및 빈도, 약물 조합(들), 반응 민감도 및 요법에 대한 내성/반응에 좌우될 것이다. 이 양은 통상적인 실험에 의해 결정될 수 있으며 임상의의 판단에 속한다. 일반적으로, 치료적 유효량은 0.01 mg/kg 내지 500 mg/kg, 예를 들어 0.1 mg/kg 내지 200 mg/kg, 예컨대 100 mg/Kg일 것이다.

또 다른 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체 또는 이의 단편 또는 유도체이며, 중쇄의 가변 도메인은 CDR-H1에 대해 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-H2에 대해 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-H3에 대해 서열번호 6에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함한다.

본 발명은 또한 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제를 제공하며, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 경쇄의 가변 도메인은 CDR-L1에 대해 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-L2에 대해 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-L3에 대해 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함한다.

또 다른 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 억제제이며, 중쇄의 가변 도메인은 CDR-H1에 대해 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-H2에 대해 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-H3에 대해 서열번호 6에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함하고 경쇄의 가변 도메인은 CDR-L1에 대해 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-L2에 대해 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-L3에 대해 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함한다.

또 다른 구현예에서 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제는 중쇄가 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 억제제이다.

본 발명은 또한 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제를 제공하며, 경쇄는 서열번호 7에 제시된 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제를 제공한다.

본 발명의 일 양태에서, 항-CSF-1R 항체 또는 이의 결합 단편 또는 유도체가 제공되며, 중쇄의 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함하고 CDR-H1의 서열은 서열번호 4에 제시된 서열과 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일성 또는 유사성을 가지며, CDR-H2의 서열은 서열번호 5에 제시된 서열과 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일성 또는 유사성을 가지고, CDR-H-3의 서열은 서열번호 6에 제시된 서열과 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일성 또는 유사성을 갖는다. 바람직하게는, 항-CSF-1R 항체 또는 이의 결합 단편은 부가적으로 경쇄를 포함하고, 경쇄의 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함하며, CDR-L1의 서열은 서열번호 1에 제시된 서열과 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일성 또는 유사성을 가지고, CDR-L2의 서열은 서열번호 2에 제시된 서열과 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일성 또는 유사성을 가지며, CDR-L3의 서열은 서열번호 3에 제시된 서열과 적어도 60% 동일성 또는 유사성을 갖는다. 일 구현예에서, 본원에 개시된 가변 영역 서열과 적어도 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 동일성 또는 유사성을 갖는 가변 영역이 제공된다.

본원에 사용된 바와 같이, "동일성"은 정렬된 서열의 임의의 특정 위치에서, 아미노산 잔기가 서열 간에 동일함을 나타낸다. 본원에 사용된 바와 같이, "유사성"은 정렬된 서열의 임의의 특정 위치에서, 아미노산 잔기가 서열 간에 유사한 유형임을 나타낸다. 예를 들어, 류신은 이소류신 또는 발린으로 치환될 수 있다. 종종 서로 치환될 수 있는 다른 아미노산은 비제한적으로:

- 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판(방향족 측쇄를 갖는 아미노산);

- 라이신, 아르기닌 및 히스티딘(염기성 측쇄를 갖는 아미노산);

- 아스파테이트 및 글루타메이트(산성 측쇄를 갖는 아미노산);

- 아스파라긴 및 글루타민(아미드 측쇄를 갖는 아미노산); 및

- 시스테인 및 메티오닌(황-함유 측쇄를 갖는 아미노산)을 포함한다.

동일성 및 유사성의 정도는 쉽게 계산될 수 있다(Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing. Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987, Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991, the BLAST™ software available from NCBI (Altschul, S.F. et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410; Gish, W. & States, D.J. 1993, Nature Genet. 3:266-272. Madden, T.L. et al., 1996, Meth. Enzymol. 266:131-141; Altschul, S.F. et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; Zhang, J. & Madden, T.L. 1997, Genome Res. 7:649-656).

본 발명의 일 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제는 항체 또는 이의 단편 또는 유도체가 BIAcore 방법에 따라 결정된 10 pM 이하의 인간 CSF-1R에 대한 결합 친화성[K_D]을 갖는 억제제이다.

본 발명의 일 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제는 항체 또는 이의 단편 또는 유도체가 BIAcore 방법에 따라 결정된 100 pM 이하의 친화성[K_D]에 의해 항-CSF-1R 항체의 결합을 교차 차단하는 억제제이다.

본 발명의 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 적합하게는 높은 결합 친화성을 갖는다. 친화성은 표면 플라즈몬 공명, 예를 들어 단리된 천연 또는 재조합 CSF-1R 또는 적합한 융합 단백질/폴리펩타이드를 사용한 BIAcore와 같은 기술을 포함하는, 본 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어 친화성은 재조합 인간 CSF-1R 세포외 도메인을 사용하여 측정될 수 있다. 사용하기 위한 재조합 인간 CSF-1R 세포외 도메인은 단량체일 수 있다. 적합하게는 본 발명의 용도를 위한 항체 분자는 약 1nM 이하의 단리된 인간 CSF-1R에 대한 결합 친화성을 갖는다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체 분자는 약 500 pM 이하의 결합 친화성을 갖는다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체 분자는 약 250 pM 이하의 결합 친화성을 갖는다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체 분자는 약 200 pM 이하의 결합 친화성을 갖는다. 일 구현예에서, 본 발명은 약 100 pM 이하의 결합 친화성을 갖는 항-CSF-1R 항체를 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 약 100 pM 이하, 바람직하게는 약 10 pM 이하, 더욱 바람직하게는 약 5 pM 이하의 결합 친화성을 갖는 인간화 항-CSF-1R 항체를 제공한다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 약 100 pM 이하, 바람직하게는 약 10 pM 이하, 더욱 바람직하게는 약 5 pM 이하의 결합 친화성을 갖는 인간화 항-CSF-1R 항체를 제공한다.

상기 친화성의 수치가 낮을수록 항원에 대한 항체 또는 단편의 친화성은 높아진다.

본 발명의 일 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제는 항체 또는 이의 단편 또는 유도체가 그것이 차단하는 항체와 동일한 에피토프에 결합함으로서 결합을 교차 차단하는 억제제이다. 적합한 교차 차단 분석의 예는 WO제15/028455호에 기재되어 있다.

본 발명은 또한 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제를 제공하며, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 서열번호 15의 인간 c-fms의 세포외 도메인에 결합하기 위해 항-CSF-1R 항체의 항체 또는 이의 단편 또는 유도체와 경쟁한다.

동일한 에피토프와 경쟁하는 항원 결합 단백질(예컨대, 중화 항원 결합 단백질 또는 중화 항체)의 맥락에서 사용될 때 용어 "경쟁하다"는, 시험 중인 항원 결합 단백질(예컨대, 항체 또는 이의 면역학적 기능적 이의 단편 또는 유도체)이 참조 항원 결합 단백질(예컨대, 리간드, 또는 참조 항체)가 공통 항원(예컨대, c-fms 또는 이의 단편)에 특이적으로 결합하는 것을 방지하거나 억제하는 분석에 의해 항원 결합 단백질 간의 경쟁이 결정되는 것을 의미한다. 경쟁 결합 분석의 많은 유형, 예를 들어: 고상 직접 또는 간접 방사성면역분석(RIA), 고상 직접 또는 간접 효소 면역분석(EIA), 샌드위치 경쟁 분석(예컨대, Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology _2:242-253 참고); 고상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(예컨대, Kirkland et al., 1986, J lmmunol . 137:3614-3619 참고); 고상 직접 표지 분석, 고상 직접 표지 샌드위치 분석(예컨대, Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press 참고); I-125 표지를 사용한 고상 직접 표지 RIA(예컨대, Morel et al., 1988, Molec . lmmunol . 25:7-15 참고); 고상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(예컨대, Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552 참고); 및 직접 표지 RIA(Moldenhauer et al., 1990, Scand . J lmmunol . 32:77-82)가 사용될 수 있다. 전형적으로, 이러한 분석은 고체 표면에 결합된 정제된 항원 또는 이들 중 하나를 갖는 세포, 표지되지 않은 시험 항원 결합 단백질 및 표지된 참조 항원 결합 단백질의 사용을 포함한다. 경쟁 억제는 시험 항원 결합 단백질의 존재하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정된다. 일반적으로 시험 항원 결합 단백질은 과량으로 존재한다. 경쟁 분석에 의해 확인된 항원 결합 단백질(경쟁 항원 결합 단백질)은 참조 항원 결합 단백질과 동일한 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질 및 입체 장애가 일어나도록 참조 항원 결합 단백질에 결합된 에피토프와 충분히 근접한 인접한 에피토프에 결합하는 항원 결합 단백질을 포함한다. 일반적으로, 경쟁 항원 결합 단백질이 과량으로 존재할 때, 그것은 공통 항원에 대한 참조 항원 결합 단백질의 특이적 결합을 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 75% 억제할 것이다. 일부 경우, 결합은 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 97% 이상 억제된다.

본 발명의 일 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제는 CSF-1R 항체의 억제제로서 인간 CSF-1R의 에피토프에 결합하는 억제제이다.

본 발명의 일 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제는 인간 CSF-1R의 에피토프에 결합하는 항체이다.

인간 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드의 이러한 특이적 영역 또는 에피토프는 본 발명에 의해 제공된 항체 중 어느 것과 조합된 본 기술분야에서 공지된 임의의 적합한 에피토프 맵핑 방법에 의해 확인될 수 있다. 그러한 방법의 예는 항체에 의해 인식되는 에피토프의 서열을 함유하는 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 가장 작은 단편을 이용하여 CSF-1R로부터 유래된 다양한 길이의 펩타이드의 본 발명의 항체에의 결합에 대해 스크리닝하는 것을 포함한다. CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 펩타이드는 합성적으로 또는 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드의 단백질 소화에 의해 생산될 수 있다. 항체에 결합하는 펩타이드는, 예를 들어, 질량 분광 분석에 의해 확인될 수 있다. 또 다른 예에서, NMR 분광학 또는 X선 결정학이 본 발명의 항체에 의해 결합된 에피토프를 확인하는데 사용될 수 있다. 일단 확인되면, 본 발명의 항체에 결합하는 에피토프 단편은, 만약 필요한 경우, 동일한 에피토프에 결합하는 추가의 항체를 얻기 위한 면역원으로서 사용될 수 있다.

항체 또는 단편과 같은 생물학적 분자는 산성 및/또는 염기성 작용기를 함유하여, 분자에 순 양전하 또는 음전하를 부여한다. 전체 "관찰된" 전하의 양은 독립체의 절대 아미노산 서열, 3D 구조 내의 하전된 그룹의 국부적인 환경 및 분자의 환경 조건에 좌우될 것이다. 등전점(pI)은 특정 분자 또는 이의 용매가 접근가능한 표면이 순전하를 띠지 않는 pH이다. 일 예에서, CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 항체 및 단편은 적절한 등전점을 갖도록 조작될 수 있다. 이것은 보다 강한 특성, 특히 적합한 용해도 및/또는 안정성 프로파일 및/또는 개선된 정제 특성을 갖는 항체 및/또는 단편을 야기할 수 있다.

따라서, 일 양태에서, 본 발명은 원래 확인된 항체와 상이한 등전점을 갖도록 조작된 인간화 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 항체를 제공한다. 항체는, 예를 들어 아미노산 잔기를 대체함으로써, 예컨대 산성 아미노산 잔기를 하나 이상의 염기성 아미노산 잔기로 대체함으로써 조작될 수 있다. 대안적으로, 염기성 아미노산 잔기가 도입되거나 산성 아미노산 잔기가 제거될 수 있다. 대안적으로, 분자가 허용되지 않을 정도로 높은 pI 값을 갖는 경우, 필요에 따라, pI를 낮추기 위해 산성 잔기가 도입될 수 있다. pI를 조작할 때 항체 또는 단편의 바람직한 활성을 유지하기 위해 주의를 기울여야 하는 것이 중요하다. 따라서 일 구현예에서, 조작된 항체 또는 단편은 "변형되지 않은" 항체 또는 단편과 동일하거나 실질적으로 동일한 활성을 갖는다.

프로그램, 예컨대 ** ExPASY http://www.expasy.ch/tools/pi_tool.html , 및 http://www.iut-arles.up.univ-mrs.fr/w3bb/d_abim/compo-p.html이 항체 또는 단편의 등전점을 예측하는데 사용될 수 있다.

본 발명에 의해 제공된 항체의 친화성은 본 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 변경될 수 있음이 이해될 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R에 대해 개선된 친화성을 갖는, 본 발명의 항체 분자의 변이체에 관한 것이다. 이러한 변이체는 CDR를 돌연변이시키는 것(Yang et al., J. Mol. Biol., 254, 392-403, 1995), 사슬 셔플링(Marks et al., Bio/Technology, 10, 779-783, 1992), 대장균의 돌연변이 균주의 사용(Low et al., J. Mol. Biol., 250, 359-368, 1996), DNA 셔플링(Patten et al., Curr. Opin. Biotechnol., 8, 724-733, 1997), 파아지 디스플레이(Thompson et al., J. Mol. Biol., 256, 77-88, 1996) 및 성적 PCR(Crameri et al., Nature, 391, 288-291, 1998)을 포함하는 많은 친화성 성숙 프로토콜에 의해 수득될 수 있다. 문헌[Vaughan et al. (상기)]은 이러한 친화성 성숙의 방법을 논의한다.

원하는 경우, 본 발명에서 사용하기 위한 항체는 하나 이상의 이펙터 분자(들)에 접합될 수 있다. 본 발명의 구현예는 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 항체를 제공하며, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 하나 이상의 이펙터 분자(들)에 접합된다.

이펙터 분자가 단일 이펙터 분자 또는 본 발명의 항체에 부착될 수 있는 단일 모이어티를 형성하도록 연결된 2개 이상의 상기 분자를 포함할 수 있음이 이해될 것이다. 이펙터 분자에 연결된 항체 단편을 수득하고자 하는 경우, 이것은 항체 단편이 직접 또는 커플링제를 통해 이펙터 분자에 연결되는 표준 화학적 또는 재조합 DNA 절차에 의해 제조될 수 있다. 이러한 이펙터 분자를 항체에 접합하기 위한 기술은 본 기술분야에 널리 공지되어 있다(Hellstrom et al., Controlled Drug Delivery, 2nd Ed., Robinson et al., eds., 1987, pp. 623-53; Thorpe et al., 1982 , Immunol. Rev., 62:119-58 and Dubowchik et al., 1999, Pharmacology and Therapeutics, 83, 67-123 참고). 특정 화학적 절차는, 예를 들어, WO 제93/06231호, WO 제92/22583호, WO 제89/00195호, WO 제89/01476호 및 WO 제03/031581호에 기재된 것을 포함한다. 대안적으로, 이펙터 분자가 단백질 또는 폴리펩타이드인 경우, 연결은, 예를 들어 WO 제86/01533호 및 EP제0392745호에 기재된 바와 같은 재조합 DNA 절차를 사용하여 달성될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이 용어 이펙터 분자는, 예를 들어, 항신생물제, 약물, 독소, 생물학적 활성 단백질, 예를 들어 효소, 다른 항체 또는 항체 단편, 합성 또는 천연 발생 중합체, 핵산 및 이의 단편, 예컨대, DNA, RNA 및 이의 단편, 방사선핵종, 특히 방사선요오드화물, 방사성동위원소, 킬레이트화 금속, 나노입자 및 리포터 그룹, 예컨대 NMR 또는 ESR 분광학에 의해 검출될 수 있는 형광 화합물 또는 화합물을 포함한다.

이펙터 분자의 예는 세포에 해로운(예컨대, 사멸시키는) 임의의 제제를 포함하는 세포독소 또는 세포독성제를 포함할 수 있다. 예는 콤브레스타틴, 돌라스타틴, 에포틸론, 스타우로스포린, 메이탄시노이드, 스폰지스타틴, 리족신, 할리콘드린, 로리딘, 헤미아스테린, 탁솔, 사이토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티딘 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포사이드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜키신, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 및 푸로마이신 및 이의 유사체 또는 또는 상동체를 포함한다.

이펙터 분자는 또한, 비제한적으로, 항대사산물제(예컨대, 메토트렉세이트, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진), 알킬화제(예컨대, 메클로르에타민, 티오에파 클로람부실, 멜팔란, 카르무스틴(BSNU) 및 로무스틴(CCNU), 사이클로포스파미드, 부설판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 및 시스-디클로로디아민 백금 (II)(DDP) 시스플라틴), 안트라사이클린(예컨대, 다우노루비신(이전에 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예컨대, 닥티노마이신(이전에 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 안트라마이신(AMC), 칼리케아마이신 또는 두오카르마이신), 및 항유사분열제(예컨대, 빈크리스틴 및 빈블라스틴)를 포함한다

다른 이펙터 분자는 킬레이트화된 방사선핵종, 예컨대 ¹¹¹In 및 ⁹⁰Y, Lu¹⁷⁷, 비스무스²¹³, 칼리포늄²⁵², 이리듐¹⁹² 및 텅스텐¹⁸⁸/레늄¹⁸⁸; 또는 약물, 예컨대, 비제한적으로, 알킬포스포콜린, 토포이소머라제 I 억제제, 탁소이드 및 수라민을 포함할 수 있다.

다른 이펙터 분자는 단백질, 펩타이드 및 효소를 포함한다. 관심있는 효소는, 비제한적으로, 단백질분해 효소, 가수분해효소, 리아제, 이소머라제, 트랜스퍼라제를 포함한다. 관심있는 단백질, 폴리펩타이드 및 펩타이드는, 비제한적으로, 면역글로불린, 독소, 예컨대 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소, 또는 디프테리아 독소, 단백질, 예컨대 인슐린, 종양 괴사 인자, α-인터페론, β-인터페론, 신경 성장 인자, 혈소판 유래 성장 인자 또는 조직 플라스미노겐 활성자, 혈전제 또는 항혈관형성제, 예컨대, 안지오스타틴 또는 엔도스타틴, 또는 생물학적 반응 변형제, 예컨대 림포카인, 인터루킨-1(IL-1), 인터루킨-2(IL-2), 과립구 대식세포 집락 자극 인자(GM-CSF), 과립구 집락 자극 인자(G-CSF), 신경 성장 인자(NGF) 또는 다른 성장 인자 및 면역글로불린을 포함한다.

다른 이펙터 분자는, 예를 들어 진단에 유용한 검출가능한 물질을 포함할 수 있다. 검출가능한 물질의 예는 다양한 효소, 보결 그룹, 형광 물질, 발광 물질, 생물발광 물질, 방사능 핵종, 양전자 방출 금속(양전자 방사 단층촬영에 사용하기 위함), 및 비방사능 상자성 금속 이온을 포함한다. 일반적으로 진단용으로 사용하기 위해 항체에 접합될 수 있는 금속의 경우 미국 특허 제4,741,900호를 참고한다. 적합한 효소는 호스 래디쉬 퍼옥시다제, 알칼리 포스파타제, 베타-갈락토시다제, 또는 아세틸콜린에스터라제를 포함하고; 적합한 보결 그룹은 스트렙타비딘, 아비딘 및 바이오틴을 포함하며; 적합한 형광 물질은 움벨리페론, 플루오레세인, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레세인, 단실 클로라이드 및 피코에리트린을 포함하고; 적합한 발광 물질은 루미놀을 포함하며; 적합한 생물발광 물질은 루시퍼라제, 루시페린, 및 애쿼린을 포함하고; 적합한 방사능 핵종은 ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹¹¹In 및 ⁹⁹Tc를 포함한다.

또 다른 예에서, 이펙터 분자는 생체내에서 항체의 반감기를 증가시키고/시키거나 항체의 면역원성을 감소시키고/시키거나 상피 장벽을 통과하여 면역계로 항체의 전달을 향상시킬 수 있다. 이러한 유형의 적합한 이펙터 분자의 예는 중합체, 알부민, 알부민 결합 단백질 또는 알부민 결합 화합물, 예컨대 WO제05/117984호에 기재된 것을 포함한다.

일 구현예에서, CSF-1R과 독립적인 이펙터 분자에 의해 제공되는 반감기가 유리하다.

이펙터 분자가 중합체인 경우, 그것은, 일반적으로, 합성 또는 천연 발생 중합체, 예를 들어 선택적으로 치환된 직쇄 또는 분지쇄 폴리알킬렌, 폴리알케닐렌 또는 폴리옥시알킬렌 중합체 또는 분지되거나 분지되지 않은 다당류, 예컨대, 동종 다당류 또는 이종 다당류이다.

상기 언급된 합성 중합체에 존재할 수 있는 특정한 선택적인 치환기는 하나 이상의 하이드록시, 메틸 또는 메톡시 그룹을 포함한다.

합성 중합체의 특정 예는 선택적으로 치환된 직쇄 또는 분지쇄 폴리(에틸렌글리콜), 폴리(프로필렌글리콜) 폴리(비닐알콜) 또는 이의 유도체, 특히 선택적으로 치환된 폴리(에틸렌글리콜), 예컨대 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 또는 이의 유도체를 포함한다.

특정한 천연 발생 중합체는 락토스, 아밀로스, 덱스트란, 글리코겐 또는 이의 유도체를 포함한다.

일 구현예에서, 중합체는 알부민 또는 이의 단편, 예컨대 인간 혈청 알부민 또는 이의 단편이다.

본 발명에서 사용된 바와 같은 "유도체"는 반응성 유도체, 예를 들어 티올 선택적 반응성 그룹, 예컨대 말레이미드 등을 포함하는 것으로 의도된다. 반응성 그룹은 직접 또는 링커 분절을 통해 중합체에 연결될 수 있다. 이러한 그룹의 잔기는 일부 경우 항체 단편 및 중합체 사이의 연결 그룹으로서 생성물의 일부를 형성할 것임이 이해될 것이다.

중합체의 크기는 원하는 대로 달라질 수 있으나, 일반적으로 500Da 내지 50000Da, 예를 들어 5000 내지 40000Da, 예컨대 20000 내지 40000Da의 평균 분자량 범위일 것이다. 중합체 크기는 특히 제품의 의도된 용도, 예를 들어 뇌, 종양과 같은 특정 조직에 국한되거나 순환 반감기를 연장시키는 능력에 기초하여 선택될 수 있다(검토를 위해, Chapman, 2002, Advanced Drug Delivery Reviews, 54, 531-545 참고). 따라서, 예를 들어, 제품이, 예를 들어 뇌 또는 종양의 치료에서의 용도를 위해 순환을 떠나 조직을 통과하도록 의도되는 경우, 작은 분자량 중합체, 예를 들어 약 5000Da의 분자량을 갖는 중합체를 사용하는 것이 유리할 수 있다. 제품이 순환 중에 남아있는 적용의 경우, 더 큰 분자량 중합체, 예를 들어 20000Da 내지 40000Da 범위의 분자량을 갖는 중합체를 사용하는 것이 유리할 수 있다.

적합한 중합체는 폴리알킬렌 중합체, 예컨대 폴리(에틸렌글리콜) 또는, 특히, 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 또는 이의 유도체, 및 특히 약 15000Da 내지 약 40000Da 범위의 분자량을 갖는 것을 포함한다.

일 예에서, 본 발명에서의 용도를 위한 항체는 폴리(에틸렌글리콜)(PEG) 모이어티에 부착된다. 하나의 특정 예에서, 항체는 항체 단편이고 PEG 분자는 항체 단편에 위치한 임의의 이용가능한 아미노산 측쇄 또는 말단 아미노산 작용기, 예를 들어 임의의 유리 아미노, 이미노, 티올, 하이드록실 또는 카르복실 그룹을 통해 부착될 수 있다. 이러한 아미노산은 항체 단편에 자연적으로 존재할 수 있거나 재조합 DNA 방법을 사용하여 단편 내로 조작될 수 있다(예를 들어 US 제5,219,996호; US 제5,667,425호; WO제98/25971호, WO제2008/038024호 참고). 일 예에서, 본 발명의 항체 분자는 변형된 Fab 단편이며, 변형은 이펙터 분자의 부착을 허용하기 위해 하나 이상의 아미노산을 그의 중쇄의 C-말단에 부가하는 것이다. 적합하게는, 부가적인 아미노산은 이펙터 분자가 부착될 수 있는 하나 이상의 시스테인 잔기를 함유하는 변형된 힌지 영역을 형성한다. 다수의 부위는 둘 이상의 PEG 분자를 부착하는데 사용될 수 있다.

적합하게는 PEG 분자는 항체 단편에 위치한 적어도 하나의 시스테인 잔기의 티올 그룹을 통해 공유 결합된다. 변형된 항체 단편에 부착된 각각의 중합체 분자는 단편에 위치한 시스테인 잔기의 황 원자에 공유 결합될 수 있다. 공유 결합은 일반적으로 디설파이드 결합 또는, 특히, 황-탄소 결합일 것이다. 티올 그룹이 부착 지점으로서 사용되는 경우, 적절하게 활성화된 이펙터 분자, 예를 들어 티올 선택적 유도체, 예컨대 말레이미드 및 시스테인 유도체가 사용될 수 있다. 활성화된 중합체는 상기 기재된 바와 같이 중합체 변형된 항체 단편의 제조에서 출발 물질로서 사용될 수 있다. 활성화된 중합체는 티올 반응성 그룹, 예컨대 α-할로카르복실산 또는 에스테르, 예컨대, 아이오도아세타미드, 이미드, 예컨대, 말레이미드, 비닐 설폰 또는 디설파이드를 함유하는 임의의 중합체일 수 있다. 이러한 출발 물질은 상업적으로 수득될 수 있거나(예를 들어 Nektar, 이전에 Shearwater Polymers Inc., Huntsville, AL, USA로부터) 또는 종래의 화학적 절차를 사용하여 상업적으로 이용가능한 출발 물질로부터 제조될 수 있다. 특정 PEG 분자는 20K 메톡시-PEG-아민(Nektar, 이전에 Shearwater; Rapp Polymere; 및 SunBio로부터 수득가능함) 및 M-PEG-SPA(Nektar, 이전에 Shearwater로부터 수득가능함)를 포함한다.

일 구현예에서, 항체는 예컨대, EP 제0948544호 또는 EP제1090037호에 개시된 방법에 따라, 페길화된, 즉, 이에 공유 결합된 PEG(폴리(에틸렌글리콜))를 갖는 변형된 Fab 단편, Fab' 단편 또는 diFab이다[또한 "Poly(ethyleneglycol) Chemistry, Biotechnical and Biomedical Applications", 1992, J. Milton Harris (ed), Plenum Press, New York, "Poly(ethyleneglycol) Chemistry and Biological Applications", 1997, J. Milton Harris and S. Zalipsky (eds), American Chemical Society, Washington DC and "Bioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciences", 1998, M. Aslam and A. Dent, Grove Publishers, New York; Chapman, A. 2002, Advanced Drug Delivery Reviews 2002, 54:531-545 참고]. 일 예에서, PEG는 힌지 영역 내의 시스테인에 부착된다. 일 예에서, PEG 변형된 Fab 단편은 변형된 힌지 영역 내의 단일 티올 그룹에 공유 결합된 말레이미드 그룹을 갖는다. 라이신 잔기는 말레이미드 그룹에 공유 결합될 수 있고, 라이신 잔기 상의 아민 그룹 각각에 약 20,000Da의 분자량을 갖는 메톡시폴리(에틸렌글리콜) 중합체가 부착될 수 있다. 따라서, Fab 단편에 부착된 PEG의 총 분자량은 약 40,000Da일 수 있다.

특정 PEG 분자는 PEG2MAL40K(Nektar, 이전에 Shearwater로부터 수득가능함)로도 알려진 N,N'-비스(메톡시폴리(에틸렌 글리콜) MW 20,000) 변형된 라이신의 2-[3-(N-말레이미도)프로피온아미도]에틸 아미드를 포함한다.

PEG 링커의 대안적인 공급원은 GL2-400MA3(하기 구조 내의 m은 5임) 및 GL2-400MA(m은 2임)를 공급하는 NOF를 포함하며, n은 약 450이다:

.

즉, 각각의 PEG는 약 20,000Da이다.

따라서 일 구현예에서, PEG는 SUNBRIGHT GL2-400MA3으로서 공지된 2,3-비스(메틸폴리옥시에틸렌-옥시)-1-{[3-(6-말레이미도-1-옥소헥실)아미노]프로필옥시} 헥산(2 팔 분지된 PEG, -CH₂）₃NHCO(CH₂)₅-MAL, Mw 40,000이다.

하기 유형의 추가의 대안적인 PEG 이펙터 분자:

일 구현예에서, 사슬 내의 아미노산 226에 또는 약 아미노산 226, 예를 들어 중쇄의 아미노산 226(순차적 넘버링에 의해)에 있는 시스테인 아미노산 잔기를 통해 부착된, 페길화된(예를 들어, 본원에 기재된 PEG를 갖는), 전장 항체와 같은 항체가 제공된다.

일 구현예에서, 본 개시내용은 하나 이상의 PEG 중합체, 예를 들어 1개 또는 2개의 중합체, 예컨대 40kDa 중합체 또는 중합체들을 포함하는 Fab'PEG 분자를 제공한다. 본 개시내용에 따른 Fab-PEG 분자는 이들이 Fc 단편과 독립적인 반감기를 갖는다는 점에서 특히 유리할 수 있다. 일 구현예에서, 중합체, 예컨대 PEG 분자, 전분 분자 또는 알부민 분자에 접합된 scFv가 제공된다. 일 구현예에서, 항체 또는 단편은, 예를 들어 반감기를 증가시키기 위해 전분 분자에 접합된다. 전분을 단백질에 접합시키는 방법은 본원에 참고로 포함된 US 제8,017,739호에 기재된 바와 같다.

CSF-1R 활성의 억제제를 확인하기 위해, 많은 상이한 접근법이 당업자에 의해 수행될 수 있다. 일 예에서, 억제제는 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R과 상호작용하는 제제를 먼저 확인한 다음, 상기 제제를 시험하여 CSF-1R 활성을 억제하는 제제를 확인함으로써 확인된다. 이러한 하나의 예에서, 제제는 항체이다.

CSF-1, IL-34 또는 CSF1-R과 상호작용하는 제제 또는 억제제는 임의의 적합한 방법을 사용하여, 예를 들어 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드를 후보 제제와 접촉시키고 폴리펩타이드와 상호작용하는 후보 제제의 능력을 결정하는 무세포 또는 세포 기반 분석 시스템을 사용하여 확인될 수 있다. 바람직하게는, CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드와 상호작용하는 후보 제제의 능력을 참조 범위 또는 대조군과 비교한다. 원하는 경우, 이 분석은 복수의 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드 샘플을 사용하여 복수(예컨대, 라이브러리)의 후보 제제를 스크리닝하는데 사용될 수 있다. 무세포 분석의 일 예에서, 천연 또는 재조합 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드를 포함하는 제1 및 제2 샘플을 후보 제제 또는 대조군 제제와 접촉시키고, 후보 제제 및 대조군 제제 사이의 상호작용의 차이를 비교함으로써 상기 폴리펩타이드와 상호작용하는 후보 제제의 능력을 결정한다. 바람직하게는, 폴리펩타이드는, 예를 들어, 폴리펩타이드를 이를 특이적으로 인식하고 이에 결합하는 고정화 항체와 접촉시킴으로써, 또는 폴리펩타이드의 정제된 제제를 단백질에 결합하도록 설계된 표면과 접촉시킴으로써 먼저 고정화된다. 폴리펩타이드는 부분적으로 또는 완전히 정제될 수 있거나(예컨대, 다른 폴리펩타이드가 부분적으로 또는 완전히 없는) 또는 세포 용해물의 부분일 수 있다. 또한, 폴리펩타이드는 CSF-1, IL-34 또는 CSF1-R 폴리펩타이드 또는 이의 생물학적 활성 부분 및 글루타티온-S-트랜스퍼라제 또는 IgGl의 Fc 영역과 같은 도메인을 포함하는 융합 단백질일 수 있다. 대안적으로, 폴리펩타이드는 당업자에게 널리 공지된 기술을 사용하여 바이오티닐화될 수 있다(예컨대, 바이오티닐화 키트, Pierce Chemicals; Rockford, IL). 폴리펩타이드와 상호작용하는 후보 제제의 능력은, 예를 들어, ELISA, BIAcore™, 유세포분석 또는 형광 마이크로부피 분석 기술(FMAT)과 같은 당업자에게 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다. 세포 기반 분석이 사용되는 또 다른 예에서, CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R을 발현하는 세포의 집단을 후보 제제와 접촉시키고 상기 폴리펩타이드와 상호작용하는 후보 제제의 능력을 결정한다. 바람직하게는, CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R과 상호작용하는 후보 제제의 능력을 참조 범위 또는 대조군과 비교한다. 예를 들어, 세포는 진핵 기원(예컨대, 효모 또는 포유동물)일 수 있고 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드를 내인성으로 발현할 수 있거나 폴리펩타이드를 발현하도록 유전적으로 조작될 수 있다. 일부 경우, CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드 또는 후보 제제는, 예를 들어 폴리펩타이드와 후보 제제 사이의 상호작용을 검출할 수 있게 하는 방사능 표지(예컨대 P, S 또는 I) 또는 형광 표지(예컨대, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리트린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, o-프탈데하이드 또는 플루오레스카민)로 표지된다. ELISA, 유세포분석 및 FMAT와 같은 대안적인 방법이 또한 사용될 수 있다. CSF-1R 활성을 억제하는 제제는 임의의 적합한 방법에 의해, 예를 들어: (i) 후보 제제의 존재하의 CSF-1R의 활성을 후보 제제의 부존재 또는 대조군 제제의 존재하의 상기 폴리펩타이드의 활성과 비교하고; (ii) 후보 제제가 CSF-1R의 활성을 억제하는지 결정함으로써 확인될 수 있다. 이러한 분석은 임상 모니터링에서 또는 약물 개발에서 후보 제제를 스크리닝하는데 사용될 수 있다. 상기 기재된 바와 같이, 결합하는 제제를 CSF-1R 활성을 억제하는 능력에 대해 스크리닝하기 전에, CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R과 상호작용하는 제제를 확인하기 위해, 상기 제제는 적절한 경우 미리 스크리닝될 수 있다(예컨대, 항체). 일 예에서, 세포 기반 분석 시스템은 CSF-1R의 활성을 억제할 수 있는 제제를 확인하는데 사용될 수 있다. 하나의 특정 예에서, CSF-1 활성 또는 CSF-1R 활성의 억제제를 확인하는데 사용되는 분석은 문헌[Metcalf, 1970, J. Cell.Physiol.76-89]의 표준 시험관내 집락 자극 분석이며, 여기서 CSF-1은 대식세포 집락의 형성을 자극시킬 수 있다. 잠재적인 억제제를 분석에 첨가하고 대식세포의 증식을 ³H 티미딘 혼입 또는 포르마잔 염료 전환과 같은 임의의 적합한 방법에 의해 측정한다. 따라서, 억제는 대조군 대비 증식의 감소로서 측정된다.

또 다른 예에서, CSF-1R의 억제제는 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드의 발현을 하향조절할 수 있으며, 예를 들어 안티센스 억제제이다. 이러한 억제제는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 확인될 수 있다. 일 예에서, 이러한 억제제는 세포 기반 분석 시스템에서 확인된다. 따라서, CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드 또는 핵산을 발현하는 세포의 집단을 후보 제제와 접촉시키고 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드 또는 핵산의 발현을 변경하는 후보 제제의 능력을 참조 범위 또는 대조군과 비교하여 결정한다. 일 예에서, CSF-1, IL-34 또는 CSF1-R 폴리펩타이드를 발현하는 세포의 집단을 후보 제제 또는 대조군 제제와 접촉시키고, CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드 또는 핵산의 발현을 변경하는 후보 제제의 능력을 세포의 처리된 집단 및 대조군 집단 사이의 CSF-1, IL-34 또는 CSF1-R 폴리펩타이드 또는 핵산의 발현 수준의 차이를 비교하여 결정한다. 원하는 경우, 이 분석은 복수의(예컨대, 라이브러리) 후보 제제를 스크리닝하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 세포는 진핵 기원(예컨대, 효모 또는 포유동물)일 수 있고 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드를 내인성으로 발현할 수 있거나 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드를 발현하도록 유전적으로 조작될 수 있다. 상기 폴리펩타이드 또는 핵산의 발현을 변경하는 후보 제제의 능력은 당업자에게 공지된 방법에 의해, 예를 들어 및 비제한적으로, 유세포분석, 방사선표지, 섬광 분석, 면역침전, 웨스턴 블롯 분석, 노던 블롯 분석 또는 RT-PCR에 의해 결정될 수 있다.

CSF-1R의 활성을 억제하는 제제는, 예를 들어 하나 이상의 동물 모델에서 치료적 유효량을 결정하기 위해 확인되거나 추가로 시험될 수 있다. 적합한 동물의 예는, 비제한적으로, 마우스, 랫트, 토끼, 원숭이, 기니어 피그, 개 및 토끼를 포함한다. 일 예에서, 제제가 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R의 발현을 억제하는 경우, 포유동물의 제1 및 제2 그룹에 후보 제제 또는 대조군 제제를 투여하고, CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드 또는 핵산의 발현을 억제하는 후보 제제의 능력을 포유동물의 제1 및 제2 그룹 간의 발현 수준의 차이를 비교하여 결정한다. 원하는 경우, 포유동물의 제1 및 제2 그룹에서의 IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드 또는 핵산의 발현 수준을 포유동물의 대조군 그룹에서의 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드 또는 핵산의 수준과 비교할 수 있다. 후보 제제 또는 대조군 제제는 당업계에 공지된 수단에 의해 투여될 수 있다(예컨대, 경구, 직장 또는 비경구, 예컨대 복강내 또는 정맥내 또는 전신). 폴리펩타이드 또는 핵산의 발현 변화는 상기 서술된 방법에 의해 평가될 수 있다.

알츠하이머병 또는 파킨슨병의 설치류 모델의 예는, 예를 들어, 문헌[Wirths et al., 2010]에 의해 입증되었다. 알츠하이머병의 APP/PS1KI 형질전환 마우스 모델에서 미세아교 활성화 및 Iba1의 발현 증가가 입증되었다. 유사하게도, 문헌[Depboylu et al., 2012]은 파킨슨병의 MPTP 유도 모델에서 Iba1 발현과 관련된 강한 미세아교 활성화를 나타내었다. 중요하게도, 강력한 미세아교 활성화 표현형 및 증가된 Iba1 신호가 α-시누클레인의 파킨슨병 유도 α-시누클레인의 과발현의 설치류 및 비인간 영장류 모델 모두에서 관찰되었다(Barkholt et al., 2012, Luk et al., 2012).

또 다른 예에서, CSF-1R 활성의 억제는 질환 증상의 개량 또는 개선, 및/또는 질환의 지연된 발병 또는 늦춰진 진행을 모니터링함으로써 결정될 수 있다. 예를 들어, 비제한적으로, 예를 들어 특히, 간질, 알츠하이머병 또는 파킨슨병과 같은 신경 질환의 경우, 이는 뇌 또는 조직 배양에서 미세아교 활성화 또는 미세아교 세포의 마커의 감소로서 나타날 수 있다. 신경 질환 환자에서의 CSF-1R 활성의 억제는 또한 다른 원인의 부존재시 질환 활성의 급격한 악화로서 정의된, 감소된 악화와 같은 임상적 사건을 모니터링함으로써 결정될 수 있다. 따라서 일 구현예에서, CSF-1R의 억제제를 이용하는 것은 하기 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 안젤만 증후군, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 자폐 스펙트럼, 양극성 장애, 뇌 손상, 뇌 종양, 중추 통증 증후군, 뇌 위축, 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증(CIDP), 만성 통증, 복합 부위 통증 증후군, 크로이츠펠트-야콥병, 치매, 다운 증후군, 드라베 증후군, 뇌염, 본태성 진전, 프리드라이히 운동실조, 취약 X 증후군, 취약 X 관련 진전/운동실조 증후군(FXTAS), 두부 손상, 두통, 대상포진, 헌팅턴병, 저산소증, 면역 매개 뇌척수염, 영아 연축, 두개내 고압, 라포라병, 란다우-클레프너 증후군, 레녹스-가스토 증후군, 백질이영양증, 백질 소실성 백질뇌병증, 루이소체 치매, 뇌회결손, 라임병-신경성 후유증, 거뇌증, 수막염, 소두증, 편두통, 미니-뇌졸중(일과성 허혈 발작), 운동 뉴런 질환-근위축성 측삭 경화증 참조, 다발경색성 치매, 다발성 경화증, 유아의 근간대성 뇌병증, 간대성근경련, AIDS의 신경학적 징후, 루프스의 신경성 후유증, 신경세포 세로이드 지방갈색소증, 신경병증, 니만-피크병, 오타하라 증후군, 파킨슨병, 부수종양성 질환, 원발성 축삭경화증, 프리온 질환, 진행성 다초점 백질뇌병증, 진행 핵상 마비, 라스무센 뇌염, 하지불안증후군, 레트 증후군, 강직-인간 증후군, 뇌졸중, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 진전, 결절성 경화증, 운베리히트-룬드보그병, 구회 간질, 웨스트 증후군, 윌슨병 중 하나 이상의 감소를 제공할 수 있다.

본 발명의 바람직한 예에서, 억제제는 간질, 간질발생, 발작 및 경련의 치료 및/또는 예방에서 사용될 수 있다. 본 발명의 추가의 바람직한 예에서, 억제제는 전신 발작, 국소 발작 및 원인 불명의 발작을 포함하는 군으로부터 선택되는, 특별한 유형의 간질의 치료 및/또는 예방에서 사용될 수 있다. 본 발명의 보다 바람직한 구현예에서, 억제제는 측두엽 간질(TLE)의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있다.

신경 질환에 익숙한 의사에게 공지된 기술이 후보 제제가 질환과 관련된 하나 이상의 증상을 변경하였는지 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 신경 질환의 많은 상이한 모델이 본 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 미세아교 활성화와 관련된 신경염증의 모델은, 미세아교 활성화를 유도하여 신경 질환에서 관찰된 미세아교 표현형을 모방하는 것으로 보고된, 지질다당류(LPS) 박테리아 내독소의 전신 주사에 기초한다. 이 모델은 설치류 종에서 사용될 수 있지만, 최근 연구는 LPS 모델이 또한 미세아교 활성화의 강한 활성화와 연관되는 경우, 비인간 영장류에서 사용될 수 있음을 입증하였다(Hannestad et al., 2012).

신경 질환 또는 미세아교 활성화 상태를 위한 영상화 기술은 활성화된 미세아교에서 강한 유도를 나타내는, 전이체 단백질(TSPO)에 결합하는 방사능 흔적을 사용하는 양전자 방사 단층촬영(PET)일 수 있다(Hannestad et al., 2012). TSPO는 미세아교 활성화의 번역 마커로서 간주되는데, 그의 유도가 간질, 알츠하이머 파킨슨병과 같은 몇 가지 신경 질환의 과정에서 보고되었기 때문이다(Amhaoul et al., 2014; Hommet et al., 2014; Edison et al., 2013).

본 발명의 일 구현예는 신경 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 억제제를 제공하며, 이는 핵산이다.

추가 구현예에서, 본 발명은 CSF-1R 활성을 억제하는 항체의 중쇄(들) 및/또는 경쇄(들)를 코딩하는 단리된 DNA 서열인 억제제를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 중쇄(들) 및/또는 경쇄(들)를 코딩하는 단리된 DNA 서열은 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 중쇄의 가변 도메인은 CDR-H1에 대해 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-H2에 대해 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-H3에 대해 서열번호 6에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함하고, 경쇄의 가변 도메인은 CDR-L1에 대해 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-L2에 대해 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-L3에 대해 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함한다.

또 다른 예에서, 억제제가 핵산인 경우, 이것은 유전자 요법을 통해 투여될 수 있다(예를 들어 Hoshida, T. et al, 2002, Pancreas, 25:111-121; Ikuno, Y. 2002, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2002 43:2406-2411; Bollard, C, 2002, Blood 99:3179- 3187; Lee E., 2001, Mol. Med. 7:773-782 참고). 유전자 요법은 발현되거나 발현가능한 핵산을 대상에게 투여하는 것을 지칭하며, 일 예에서 이것은 CSF-1, IL-34 또는 CSF-IR 핵산 또는 이의 부분이다. 본 기술분야에서 이용가능한 유전자 요법을 위한 임의의 방법은 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 환자에게 치료적 핵산을 전달하는 것은 직접적 생체내 유전자 요법(즉, 환자가 핵산 또는 핵산-함유 벡터에 직접 노출됨) 또는 간접적 생체외 유전자 요법(즉, 세포가 시험관내에서 핵산으로 먼저 형질전환된 다음 환자 내로 이식됨)일 수 있다.

예를 들어, 생체내 유전자 요법을 위해, CSF-1, IL-34 또는 CSF-IR 핵산을 함유하는 발현 벡터는 그것이 세포내가 되는 방식으로, 즉, 예를 들어, 문헌[US 제4,980,286호 또는 Robbins et al, 1998, Pharmacol. Ther. 80:35-47]에 기재된 바와 같이, 결함이 있거나 약화된 레트로바이러스 또는 다른 바이러스 벡터를 사용한 감염에 의해 투여될 수 있다. 당업계에 공지된 다양한 레트로바이러스 벡터는, 예컨대 바이러스 게놈의 패키징 및 이후의 숙주 세포 DNA로의 통합에 필요하지 않은 레트로바이러스 서열을 결실시키도록 변형된, 문헌[Miller et al. (1993, Meth. Enzymol. 217:581-599)]에 기재된 것과 같은 레트로바이러스 벡터이다. 또한 비분열 세포를 감염시키는 능력으로 인해 유리한 아데노바이러스 벡터가 사용될 수 있고, 이러한 고성능 바이러스 벡터는 문헌[Kochanek (1999, 인간 유전자 요법, 10:2451-2459)]에 기재되어 있다. 사용될 수 있는 키메라 바이러스 벡터는 문헌[Reynolds et al. (1999, Molecular Medicine Today, 1:25 -31)]에 기재된 것이다. 하이브리드 벡터가 또한 사용될 수 있으며, 이는 문헌[Jacoby et al. (1997, Gene Therapy, 4:1282-1283)]에 의해 기재되어 있다. 네이키드 DNA의 직접적인 주사 또는 미세입자 충격의 사용(예컨대, 유전자 건(R); Biolistic, Dupont) 또는 이를 지질로 코팅하는 것이 또한 유전자 요법에서 사용될 수 있다. 세포 표면 수용체/형질감염 화합물 또는 리포좀, 미세입자 또는 마이크로캡슐에서의 캡슐화 또는 핵에 들어가는 것으로 공지된 펩타이드에 연결된 핵산을 투여하는 것 또는 수용체 매개 세포내이입에 취약한 리간드에 연결하여 그것을 투여하는 것(Wu and Wu, 1987, J. Biol. Chem., 262:4429-4432 참고)이 관심있는 수용체를 특이적으로 발현하는 세포 유형을 표적화하는데 사용될 수 있다. 생체외 유전자 요법에서, 유전자는 조직 배양을 사용하여 시험관내에서 세포 내로 전달되고, 세포는 피하 주사, 세포를 피부 이식편에 적용하는 것 및 조혈 줄기 또는 선조 세포와 같은 재조합 혈액 세포의 정맥내 주사와 같은 다양한 방법에 의해 환자에게 전달된다. CSF-1, IL-34 또는 CSF-IR 핵산이 유전자 요법의 목적을 위해 도입될 수 있는 세포는, 예를 들어, 상피 세포, 내피 세포, 각화세포, 섬유아세포, 근육 세포, 간세포 및 혈액 세포를 포함한다. 사용될 수 있는 혈액 세포는, 예를 들어, T-림프구, B-림프구, 단핵구, 대식세포, 호중구, 호산구, 거대핵세포, 과립구, 조혈 세포 또는 선조 세포, 미세아교세포 등을 포함한다.

본 발명의 양태는 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 CSF-1R 활성의 억제제의 용도이다. 본 발명의 CSF-1R 활성의 억제제의 이 용도 및 하기의 보다 특정한 용도는 비제한적으로 상기 기재된 억제제 및 설명에 의해 제공된 모든 정의가 관련된 억제제를 포함한다.

본 발명의 일 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 억제제의 용도는 핵산을 포함한다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 억제제의 용도는 항체 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 유도체에 관한 것이다. 따라서, 본 발명의 항체 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 유도체의 용도는 단클론 또는 다클론 항체를 포함한다. 또한, 본 발명에서 항체 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 유도체의 용도는 키메라, 인간화 또는 인간 항체에 관한 것이다. 본 발명의 일 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도는 이중특이적 또는 다중특이적 항체를 포함한다. 따라서, 본 발명의 항체 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 유도체의 용도는 전장 중쇄 및 경쇄를 갖는 완전 항체 분자, 또는 Fab, 변형된 Fab, Fab', 변형된 Fab', F(ab')₂, Fv, 단일 도메인 항체 (VH 또는 VL 또는 VHH), scFv, 2가, 3가 또는 4가 항체, Bis-scFv, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 및 상기 중 임의 것의 에피토프-결합 단편을 포함하는 군으로부터 선택되는 이의 단편을 포함하는 군으로부터 선택되는 항체에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 구현예는 하나 이상의 이펙터 분자(들)에 접합된 억제제를 포함하는 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 억제제의 용도를 제공한다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, CSF-1R에 결합하는 항체인 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체의 용도가 제공된다.

또한, 항체인 CSF-1R 활성의 억제제의 용도가 본 발명에 의해 제공되며, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 혈액-뇌 장벽(BBB)을 통과하여 뇌에서 신경 질환으로 고통받는 환자의 치료 및/또는 예방에 충분한 치료적 유효량에 도달한다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도는 중쇄 및 경쇄를 갖는 항체를 포함하며, 중쇄의 가변 도메인은 CDR-H1에 대해 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-H2에 대해 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-H3에 대해 서열번호 6에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함한다.

또한, 본 발명은 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도를 제공하며, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 경쇄의 가변 도메인은 CDR-L1에 대해 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-L2에 대해 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-L3에 대해 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도는 중쇄 및 경쇄를 갖는 항체를 포함하며, 중쇄의 가변 도메인은 CDR-H1에 대해 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-H2에 대해 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-H3에 대해 서열번호 6에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함하고, 경쇄의 가변 도메인은 CDR-L1에 대해 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-L2에 대해 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-L3에 대해 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도는 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 중쇄를 갖는 항체를 포함한다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도는 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체를 포함한다.

본 발명은 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 신경 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도를 추가로 제공한다.

본 발명은 또한 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도를 제공하며, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 10 pM 이하의 인간 CSF-1R에 대한 결합 친화성[K_D]을 갖는다.

본 발명은 또한 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도를 제공하며, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 100 pM 이하의 친화성[K_D]에 의해 청구항 13항에 따른 항체의 결합을 교차 차단한다.

본 발명의 또 다른 구현예는 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도이며, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 그것이 결합하는 항체와 동일한 에피토프에 결함함으로써 결합을 교차 차단한다.

본 발명의 또 다른 구현예는 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도이며, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 도 2의 인간 CSF-1R(c-fms)의 세포외 도메인(서열번호 15)에의 결합에 대해 항체 또는 이의 단편 또는 유도체와 경쟁한다.

본 발명의 구현예는 인간 CSF-1R의 에피토프에 결합하는, 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도를 제공한다.

본 발명의 또 다른 구현예는 본 발명에 적합한 항체의 중쇄(들) 및/또는 경쇄(들)를 코딩하는 단리된 DNA 서열인 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 항체 또는 이의 단편 또는 유도체의 용도를 제공한다.

본원에 기재된 바와 같이, CSF-1R 활성의 억제제는 신경 질환의 치료 및/또는 예방에 사용될 수 있다. 이러한 용도를 위해, 제제는 일반적으로 약학 조성물의 형태로 투여될 것이다. 또한, 약학적으로 허용가능한 희석제, 부형제 및/또는 담체와 조합된 CSF-1R 활성의 억제제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 본 발명의 약학 조성물은 또한 다른 활성 성분을 부가적으로 포함할 수 있다.

용어 '치료'는 치료적 및/또는 예방적 요법을 포함한다. 특정 억제제 또는 억제제의 조합을 사용하여 신경 질환 또는 병태을 치료하고/하거나 예방하는 방법이 본원에서 언급될 때, 이러한 언급은 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 상기 억제제 또는 억제제의 조합의 용도를 포함하는 것으로 의도되는 것으로 이해되어야 한다.

조성물은 통상 멸균, 약학 조성물의 일부로서 공급될 것이고, 이는 약학적으로 허용가능한 담체를 일반적으로 포함할 것이다. 이러한 조성물은 임의의 적합한 형태일 수 있다(그것을 환자에게 투여하는 원하는 방법에 따라). 본 발명에서 사용되는 억제제는 바람직하게는 대상에게 경구로 또는 직장내로 투여되지만, 또한 다양한 다른 경로, 예컨대 경피, 피하, 비강내, 정맥내 및 근육내로 투여될 수 있다. 어떤 주어진 사례에서 투여를 위한 가장 적합한 경로는 특정 억제제, 대상, 및 질환의 특성 및 중증도 및 대상의 신체 상태에 따라 달라질 것이다.

본 발명에서의 용도를 위한 억제제는, 예를 들어 항신경 요법일 수 있는, 하나 이상의 다른 치료적 활성 화합물과 조합되어, 예컨대, 동시에, 순차적으로 또는 개별적으로 투여될 수 있다.

약학 조성물은 용량당 본 발명의 활성제의 미리 결정된 양을 함유하는 단위 용량 형태로 편리하게 제공될 수 있다. 이러한 단위는 치료되는 병태, 투여 경로 및 대상의 연령, 체중 및 병태에 따라, 예를 들어 비제한적으로, 1000 mg/kg 내지 0.01 mg/kg, 예를 들어 750 mg/kg 내지 0.1 mg/kg, 예컨대 100 mg/kg 내지 1 mg/kg을 함유할 수 있다.

본 발명에서의 용도를 위한 약학적으로 허용가능한 담체는, 예컨대, 투여 경로에 따라 다양한 형태를 취할 수 있다.

경구 투여용 조성물은 액체 또는 고체일 수 있다. 경구 액체 제제는, 예를 들어, 수성 또는 유성 현탁액, 용액, 유화액, 시럽 또는 엘릭서의 형태일 수 있거나, 또는 사용하기 전에 물 또는 다른 적합한 비히클로 재구성하기 위한 건조 제품으로서 제공될 수 있다. 경구 액체 제제는 당업계에 공지된 현탁제를 함유할 수 있다. 분말, 캡슐 및 정제와 같은 경구 고체 제제의 경우, 담체, 예컨대 전분, 당, 미세결정 셀룰로오스, 과립화제, 윤활제, 결합제, 붕해제 등이 포함될 수 있다. 이들의 투여 용이성 때문에, 정제 및 캡슐이 가장 유리한 경우 투여 단위 형태에 해당하며, 이 경우 고체 약학적 담체가 일반적으로 사용된다.

상기 제시된 통상적인 투여 형태 외에도, 본 발명의 활성제는 또한 제어 방출 수단 및/또는 전달 장치에 의해 투여될 수 있다. 정제 및 캡슐은 종래의 담체 또는 부형제, 예컨대 결합제, 예를 들어, 시럽, 아카시아, 젤라틴, 소르비톨, 트라가칸트, 또는 폴리비닐피롤리돈; 충전제, 예를 들어 락토스, 당, 옥수수 전분, 인산칼슘, 소르비톨 또는 글리신; 정제 윤활제, 예를 들어 스테아린산 마그네슘, 탈크, 폴리에틸렌 글리콜 또는 실리카; 붕해제, 예를 들어 감자 전분; 또는 허용가능한 습윤제, 예컨대 나트륨 라우릴 설페이트를 포함할 수 있다. 정제는 일반적인 약학적 관행에서 널리 공지된 방법에 따라 표준 수성 또는 비수성 기술에 의해 코팅될 수 있다.

경구 투여에 적합한 본 발명의 약학 조성물은 캡슐, 카세제 또는 정제와 같은 별개의 단위로 제공될 수 있으며, 각각은 분말 또는 과립으로서, 또는 수성 액체, 비수성 액체, 수중유 유화액 또는 유중수 액체 유화액 중의 용액 또는 현탁액으로서, 미리 결정된 양의 활성제를 함유한다. 이러한 조성물은 약학 방법 중 어느 것에 의해 제조될 수 있지만, 모든 방법은 하나 이상의 필수 성분을 구성하는 담체와 활성제를 결합시키는 단계를 포함한다. 일반적으로, 조성물은 활성제를 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 둘 모두와 균일하고 밀접하게 혼합한 다음, 필요한 경우, 생성물을 원하는 형태로 성형함으로써 제조된다. 예를 들어, 정제는, 선택적으로 하나 이상의 보조 성분과 함께, 압축 및 성형에 의해 제조될 수 있다.

비경구 투여에 적합한 약학 조성물은 하이드록시프로필셀룰로오스와 같은 계면활성제와 적합하게 혼합된 물 중의 본 발명의 활성제의 용액 또는 현탁액으로서 제조될 수 있다. 분산액은 또한 오일 중의 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 이의 혼합물로 제조될 수 있다. 보관 및 사용의 일반적인 조건하에, 이러한 제제는 미생물의 성장을 방지하는 보존제를 함유한다. 주사가능한 용도에 적합한 약학적 형태는 항산화제, 완충액, 정균제 및 조성물을 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질을 함유할 수 있는 수성 또는 비수성 멸균 주사 용액, 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다. 즉석 주사 용액, 분산액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립 및 정제로부터 제조될 수 있다. 약학 조성물은 당업계에 공지된 의료 장치를 이용하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 바람직한 구현예에서, 본 발명의 약학 조성물은 US 제5,399,163호; 제5,383,851호; 제5,312,335호; 제5,064,413호; 제4,941,880호; 제4,790,824호; 또는 제4,596,556호에 개시된 장치와 같은 무바늘 피하 주사 장치를 이용하여 투여될 수 있다. 본 발명의 방법에 유용한 널리 공지된 이식물 및 모듈의 예는 제어된 속도로 약물을 분주하기 위한 마이크로주입 펌프를 개시하는 US 제4,487,603호; 피부를 통해 약제를 투여하기 위한 치료 장치를 개시하는 US 제4,486,194호; 정확한 주입 속도로 약물을 전달하기 위한 약물 주입 펌프를 개시하는 US 제4,447,233호; 연속 약물 전달을 위한 가변 유동 이식가능한 주입 장치를 개시하는 US 제4,447,224호; 다중 챔버 구획을 갖는 삼투성 약물 전달 시스템을 개시하는 US 제4,439,196호; 및 삼투성 약물 전달 시스템을 개시하는 US 제4,475,196호를 포함한다. 많은 다른 상기 이식물, 전달 시스템, 및 모듈이 당업자에게 공지되어 있다.

국소 투여에 적합한 약학 조성물은 연고, 크림, 현탁액, 로션, 분말, 용액, 페이스트, 겔, 함침 드레싱, 스프레이, 에어로졸 또는 오일, 경피 장치, 살분 분말 등으로서 제형화될 수 있다. 이러한 조성물은 활성제를 함유하는 종래의 방법을 통해 제조될 수 있다. 따라서, 이들은 또한 양립가능한 종래의 담체 및 첨가제, 예컨대 보존제, 약물 침투를 돕는 용매, 크림 또는 연고에서의 피부연화제 및 로션용 에탄올 또는 올레일 알코올을 포함할 수 있다. 이러한 담체는 조성물의 약 1% 내지 약 98%로 존재할 수 있다. 보다 일반적으로, 이들은 조성물의 최대 약 80%를 형성할 것이다. 단지 예시로서, 크림 또는 연고는 원하는 점성을 갖는 크림 또는 연고를 생산하는데 충분한 양으로 화합물의 약 5-10 중량%를 함유하는, 충분한 양의 친수성 물질 및 물을 혼합함으로써 제조된다. 경피 투여에 적합한 약학 조성물은 연장된 기간 동안 수용자의 표피와 긴밀한 접촉을 유지하도록 의도된 별개의 패치로서 제공될 수 있다. 예를 들어, 활성제는 이온영동법(iontophoresis)에 의해 패치로부터 전달될 수 있다. 외부 조직, 예를 들어 입 및 피부에의 적용을 위해, 조성물은 바람직하게는 국소 연고 또는 크림으로서 적용된다. 연고로 제형화될 때, 활성제는 파라핀계 또는 수혼화성 연고 기제와 함께 사용될 수 있다. 대안적으로, 활성제는 수중유 크림 기제 또는 유중수 기제를 갖는 크림으로 제형화될 수 있다. 입에서의 국소 투여에 적합한 약학 조성물은 로젠지, 파스틸(pastille) 및 구강 세정제를 포함한다. 눈에 국소 투여하는데 적합한 약학 조성물은 점안제를 포함하며, 활성제는 적합한 담체, 특히 수성 용매에 용해되거나 현탁된다. 이들은 또한 상기와 같은 국소 연고 또는 크림을 포함한다. 담체가 고체인 직장 투여에 적합한 약학 조성물은 가장 바람직하게는 단위 용량 좌제로서 제공된다. 적합한 담체는 코코아 버터 또는 다른 글리세라이드 또는 당업계에서 통상적으로 사용되는 물질을 포함하며, 좌제는 연화되거나 용융된 캐피어(capier)와의 조합과 혼합된 후, 냉각 및 성형 몰드에 의해 편리하게 형성될 수 있다. 이들은 또한 관장으로서 투여될 수 있다.

CSF-1R 활성의 억제제의 투여되는 투여량은 특정 억제제, 신경 질환의 유형, 대상, 및 질환의 특성 및 중증도 및 대상의 신체 상태, 및 투여의 선택된 경로에 따라 달라질 것이며; 적절한 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 인간 및 동물에서 신경 질환의 치료 및/또는 예방을 위해, 항체를 포함하는 약학 조성물은 항체 기반의 임상 제품과 같은 임상 제품을 위한 본 기술분야에 공지된 주사 및 다른 투여 경로와 같은, 투여의 임의의 적합한 경로를 사용하여 치료 또는 예방적 유효량(예컨대, 신경 질환의 억제 및/또는 신경 질환 증상의 경감을 야기하는 투여량)으로 환자(예컨대, 인간 대상)에게 투여될 수 있다. 조성물은 투여의 방법에 따라, 본 발명의 억제제의 적어도 0.05 중량%, 예를 들어 0.5 내지 50 중량%, 예컨대 1 내지 10 중량%, 또는 이상을 함유할 수 있다. 본 발명의 억제제의 개별 투여량의 최적의 양 및 간격은 치료되는 병태의 특성 및 정도, 투여의 형태, 경로 및 부위, 치료되는 특정 대상의 연령 및 병태에 의해 결정된다는 것과, 의사가 사용될 적절한 투여량을 최종적으로 결정할 것임이 당업자에 의해 인식될 것이다. 이 투여량은 적절한 만큼 자주 반복될 수 있다. 부작용이 나타나면, 투여량의 양 및/또는 빈도는, 정상적인 임상 관행에 따라, 변경되거나 감소될 수 있다.

일 양태에서, 본 발명의 약학 조성물은 CSF-1, IL-34 또는 CSF-1R 핵산을 포함하며, 상기 핵산은 적합한 숙주에서 CSF1, IL-34 또는 CSF-1R 폴리펩타이드 또는 이의 키메라 단백질을 발현하는 발현 벡터의 일부이다. 특히, 이러한 핵산은 폴리펩타이드 코딩 영역에 작동가능하게 연결된 프로모터를 가지며, 상기 프로모터는 유도성 또는 항시성(및, 선택적으로, 조직 특이적)이다.

본 발명의 일 양태는 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 약학 조성물을 제공한다.

본 발명은 신경 질환으로 고통받거나 신경 질환이 발생할 위험이 있는 인간 대상의 치료 및/또는 예방을 위한 방법을 추가로 제공하며, 이는 CSF-1R 활성의 억제제의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 것을 포함한다. 본 발명의 일 구현예에서, 신경 질환으로 고통받거나 신경 질환이 발생할 위험이 있는 인간 대상의 치료 및/또는 예방을 위한 방법은 본 발명에 따른 억제제, 또는 본 발명에 따른 약학 조성물의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 것에 관한 것이다.

본 발명은 신경 질환으로 고통받거나 신경 질환이 발생할 위험이 있는 인간 대상의 치료 및/또는 예방을 위한 방법을 추가로 제공하며, CSF-1R 활성의 억제제는 하나 이상의 다른 치료적 활성 화합물과 조합하여 투여된다. 본 발명의 또 다른 양태는 다른 치료적 활성 화합물이 또 다른 항간질 치료제인 방법을 제공한다.

본 발명은 CSF-1R 활성의 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 억제제, 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제의 제조를 위한 CSF-1R 활성의 억제제의 용도, 신경 질환의 치료 및/또는 예방에서의 용도를 위한 CSF-1R 활성의 억제제를 포함하는 약학 조성물 또는 신경 질환으로 고통받거나 신경 질환이 발생할 위험이 있는 인간 대상의 치료 및/또는 예방을 위한 방법을 제공하며, 신경 질환은 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 안젤만 증후군, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 자폐 스펙트럼, 양극성 장애, 뇌 손상, 뇌 종양, 중추 통증 증후군, 뇌 위축, 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증(CIDP)), 만성 통증, 복합 부위 통증 증후군, 크로이츠펠트-야콥병, 치매, 다운 증후군, 드라베 증후군, 뇌염, 본태성 진전, 프리드라이히 운동실조, 취약 X 증후군, 취약 X 관련 진전/운동실조 증후군(FXTAS), 두부 손상, 두통, 대상포진, 헌팅턴병, 저산소증, 면역 매개 뇌척수염, 영아 연축, 두개내 고압, 라포라병, 란다우-클레프너 증후군, 레녹스-가스토 증후군, 백질이영양증, 백질 소실성 백질뇌병증, 루이소체 치매, 뇌회결손, 라임병-신경성 후유증, 거뇌증, 수막염, 소두증, 편두통, 미니-뇌졸중(일과성 허혈 발작), 운동 뉴런 질환-근위축성 측삭 경화증 참조, 다발경색성 치매, 다발성 경화증, 유아의 근간대성 뇌병증, 간대성근경련, AIDS의 신경학적 징후, 루프스의 신경성 후유증, 신경세포 세로이드 지방갈색소증, 신경병증, 니만-피크병, 오타하라 증후군, 파킨슨병, 부수종양성 질환, 원발성 축삭경화증, 프리온 질환, 진행성 다초점 백질뇌병증, 진행 핵상 마비, 라스무센 뇌염, 하지불안증후군, 레트 증후군, 강직-인간 증후군, 뇌졸중, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 진전, 결절성 경화증, 운베리히트-룬드보그병, 구회 간질, 웨스트 증후군, 윌슨병으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 구현예에서, 신경 질환은 바람직하게는 안젤만 증후군, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 자폐 스펙트럼, 뇌 손상, 뇌 종양, 크로이츠펠트-야콥병, 다운 증후군, 드라베 증후군, 뇌염, 취약 X 증후군, 취약 X 관련 진전/운동실조 증후군(FXTAS), 두부 손상, 대상포진, 저산소증, 면역 매개 뇌척수염, 영아 연축, 라포라병, 란다우-클레프너 증후군, 레녹스-가스토 증후군, 백질이영양증, 백질 소실성 백질뇌병증, 뇌회결손, 라임병-신경성 후유증, 수막염, 다발성 경화증, 유아의 근간대성 뇌병증, 간대성근경련, 루프스의 신경성 후유증, 오타하라 증후군, 프리온 질환, 라스무센 뇌염, 레트 증후군, 외상성 뇌 손상, 결절성 경화증, 운베리히트-룬드보그병, 구회 간질 또는 웨스트 증후군으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 신경 질환은 간질, 간질발생, 발작 및 경련을 포함하는 군으로부터 선택된다. 본 발명의 추가 구현예에서, 간질의 유형은 전신 발작, 국소 발작 및 원인 불명의 발작을 포함하는 군으로부터 선택된다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 신경 질환은 측두엽 간질(TLE)이다.

가장 바람직한 구현예로서, WO제15/028455호에 개시된 바와 같은 항-CSF-1R 항체가 참조로 본원에 포함된다.

본 발명은 하기 실시예를 참조하여 설명될 것이며, 이는 단지 예시적인 것이고 어떤 식으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다.

실시예 1 항 -마우스 CSF -1R 항체의 단리

2마리의 토끼를 마우스 CSF-1R(Uniprot Entry p09581)의 잔기 1-512를 일시적으로 발현하는 세포로 5회 면역화하였다. 2 μg/ml 마우스 CSF-1R-토끼 Fc가 코팅된 Nunc Maxisorp 플레이트를 사용한 ELISA에서 항체 반응을 모니터링하였다. 1:100,000 희석에 대한 혈청 역가가 두 토끼에서 관찰되었다. M-NFS-60 세포((Metcalf et al., 1970)에 대한 혈청의 결합을 또한 FACS에 의해 결정하였다. 중앙 FL1을 항체 희석에 대해 플롯팅하였다. 1:10,000의 희석에 대한 결합이 관찰되었다.

CSF-1-의존적 M-NFS-60 세포주(Metcalf et al., 1970)를 사용하여, 두 토끼로부터의 혈청이 1:100의 희석까지 CSF-1-의존적 세포 생존을 차단할 수 있는 것으로 나타났다(데이터 미제시).

100개의 96-웰 플레이트에 웰당 1000-5000 토끼 PBMC를 시딩하고, EL4-B5 마우스 흉선종 세포 및 토끼 T 세포 조건화된 배지(TSN)의 존재하에 37℃에서 1주간 성장시켰다. 이어서, 항체 함유 상층액을 M-NFS-60 세포 및 항-토끼 Fc-특이적 Cy5 접합체를 사용하여 FMAT 분석에서 스크리닝하였다. 678개의 CSF-1R-결합제가 확인되었다. 이들로부터, 약 3%가 세포 분석에서 CSF-1-의존적 M-NFS-60 증식을 차단하였다. 결합제를 또한 2 μg/ml CSF-1R-토끼 Fc가 코팅된 플레이트를 사용한 ELISA에 의해 스크리닝하였고, 항-토끼 F(ab')2-HRP 접합체와의 결합을 밝혀내었다. 결합제를 또한 ELISA 기반 고상 차단 분석에서 스크리닝하였다. 이 분석을 위해, Nunc Maxisorp 384-웰 플레이트를 0.5 μg/ml CSF-1R-토끼 Fc로 코팅한 다음, PBS/0.1% Tween-20/1% PEG20000에서 차단시켰다. 플레이트를 세척한 다음, 배양 상층액을 플레이트에 첨가하고 실온에서 >1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, CSF-1을 10 ng/ml의 최종 농도로 상층액에 첨가하고 실온에서 1시간 더 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척한 다음, 0.5 μg/ml 바이오티닐화된 염소 항-마우스 CSF-1 항체(R&D systems)와 함께 인큐베이션하였다. 수용체에 대한 CSF-1 결합을 스트렙타비딘-HRP을 사용하여 밝혀내었다. 진행을 위해 8개의 웰을 선택하였다. 모두 세포 및 단백질에 대한 결합을 입증하였고 M-NFS-60 분석 및 ELISA에서 차단되었다.

형광 기반 방법을 사용하여 양성 웰로부터 항원-특이적 B 세포를 확인하였다. 양성 웰로부터의 면역글로불린 분비 B 세포를 바이오티닐화된 마우스 CSF-1R-토끼 Fc 및 염소 F(ab')2 항-토끼 F(ab')2 단편-특이적 FITC 접합체(Jackson ImmunoResearch)가 코팅된 스트렙타비딘 비드와 혼합하였다. 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션 후, 항원 특이적 B 세포로부터 분비된 항체를 상기 B 세포 부근의 비드 상에 포획하였다. FITC 접합체의 존재는 항체 코팅된 비드의 표지 및 항원 특이적 B 세포 주위의 형광 초점의 형성을 야기하였다. 형광 현미경을 사용하여 확인된 이들 개별적인 B 세포를 마이크로조작기로 골라 내 PCR 튜브에 넣었다. 항체 가변 영역 유전자를 역전사(RT)-PCR에 의해 단일 세포로부터 회수하였다. 이후, 토끼 V-영역을 CHO 일시적 발현 시스템에서 인간 IgG4 키메라 항체 또는 Fab로서 발현시켰다. 8개의 웰 중 4개가 재조합 항-CSF-1R 항체를 생산하였다. 이후, 재조합 항체를 이용한 중화 활성을 M-NFS-60 분석에서 확인하였다. Fab 분자를 사용하여 BIAcore를 또한 수행하여 CSF-1R 토끼 Fc에 대한 친화성을 결정하였다(표 1). 중화 활성 및 친화성에 기초하여, Ab535를 항마우스 CSF-1R 시약으로서 선택하였다. 이후, 이러한 항체를 설치류화하고, 전장 쥣과 IgG1로서 포유동물 시스템에서 발현시키고 정제하였다.

BIAcore 방법

정제된 재조합 CSF-1R/Fc 융합 단백질에 대한 결합 동역학을 측정함으로써 항체를 BIAcore 분석에서 CSF-1R에 결합하는 능력에 대해 시험하였다.

분석 포맷은 고정된 항-인간 IgG,F(ab')₂에 의한 항-CSF-1R 항체의 포획, 이후 포획된 표면 상에 hCSF-1R/Fc의 적정이었다. BIA(Biamolecular Interaction Analysis)를 BIAcore 3000(GE Healthcare Bio-Sciences AB)을 사용하여 수행하였다. 모든 실험을 25℃에서 수행하였다. Affinipure F(ab')₂ 단편 염소 항-인간 IgG, F(ab')₂ 단편 특이적(Jackson ImmunoResearch)을 ~6000 반응 단위(RU)의 수준까지 아민 커플링 화학을 통해 CM5 센서 칩(GE Healthcare Bio-Sciences AB)에 고정화시켰다. HBS-EP 완충액(10 mM HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% 계면활성제 P20, GE Healthcare Bio-Sciences AB)을 10 μl/분의 유속으로 진행 완충액으로서 사용하였다. 항-CSF-1R 항체를 주사하여 고정화된 항-인간 IgG,F(ab)₂ 상에 약 100 RU의 포획 수준을 제공하였다.

재조합 인간 CSF-1R/Fc를 3분 동안 30 μl/분의 유속으로 상기 포획된 항-CSF-1R 항체 상에 2.5 nM 내지 78 pM의 배가 희석에 의해 적정한 다음(R&D Systems), 8분 해리 단계를 수행하였다. 이러한 센서그램을 사용하여 결합 속도를 생성하였다. 40 mM HCl의 2개의 연속적인 10 μl 주사 후 10 mM NaOH의 5 μl 주사에 의해 10 μl/분의 유속으로 표면을 재생하였다. 이중 참조된 배경 차감된 결합 곡선을 표준 절차에 따라 BIAevaluation 소프트웨어(version 4.1)를 사용하여 분석하였다. 동역학 파라미터를 피팅 알고리즘으로부터 결정하였다. Ab553에 대한 결과가 표 1에 나타나 있다.

항체 REF:	결합 속도 ka (M -1 s -1 )	해리 속도 kd (s -1 )	친화성 불변 K D
Ab 535	8.05 + 0.01 e 6	1.21 + 0.15 e -5	1.50 pM

실시예 2 Ab535의 시험관내 분석

Ab535는 시험관내에서 CSF -1 수용체-양성 세포주에 대한 쥣과 CSF -1의 결합을 차단한다

CSF-1이 CSF-1R에 결합하는 것을 방지하는 수용체 결합된 Ab535의 능력을 조사하였다. 쥣과 CSF-1R-양성 세포주인 M-NFS-60을 분석에 사용하였고, 상기 분석에서 세포를 CSF-1에 노출하기 전에 Ab535 또는 대조군 항체와 함께 미리 인큐베이션하였다. 이후, 수용체 결합된 CSF-1을 형광 표지된 항체 및 유세포분석을 사용하여 검출하였다. 세포 형광 강도의 Ab535 의존적 감소는 CSF-1이 CSF-1R에 결합하는 것을 방지하는 수용체 결합된 Ab535의 능력을 나타내는 것으로 해석하였다.

M-NFS-60 세포(LGC Promochem, Teddington, UK)를 10% 우태아혈청(PAA), Hepes(Invitrogen, 10 mM 최종 농도), 피루브산 나트륨(Invitrogen, 1 mM 최종 농도), 글루코스(Sigma-Aldrich, 4.5 g/l 최종 농도), 중탄산나트륨(Sigma-Aldrich, 1.5% 최종 농도), 베타-머캅토에탄올(Sigma-Aldrich, 0.05 mM 최종 농도), 재조합 쥣과 CSF-1(Preprotech, 3.3 ng/ml 최종 농도)가 보충된 기본 RPMI 배지(Invitrogen) 중의 현탁액에 유지시켰다.

M-NFS-60 세포를 1x10E6 세포/ml의 농도로 유동 완충액(0.2% BSA(Sigma-Aldrich), 0.09% 나트륨 아자이드(Sigma-Aldrich)가 보충된 PBS (Invitrogen))에서 제조하였다. Ab535 또는 쥣과 IgG1 이소타입 대조군 항체의 연속 희석을 유동 완충액에서 제조하고 이를 100μl 세포 분취액에 첨가하여 200 μl 부피 중의 20, 5, 1.25, 0.32, 0.08 μg/ml의 최종 농도를 달성하고, 이를 얼음 상에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이후, 세포를 유동 완충액에서 2회 세척하고, 얼음 상에서 30분 동안 0.5 μg/ml 재조합 쥣과 CSF-1과 함께 인큐베이션하고, 유동 완충액에서 2회 세척하였다. 수용체 결합된 CSF-1을 검출하기 위해, 세포를 얼음 상에서 30분 동안 바이오티닐화된 항-쥣과 CSF-1 항체(R&D Systems, 5μg/ml)와 함께 인큐베이션하고, 유동 완충액에서 2회 세척하고, 최종 세척 단계 및 500 μl 유동 완충액에서 세포의 재현탁 전에 15분 동안 얼음 상에서 Alexafluor 488-접합된 스트렙타비딘(Invitrogen, 1:200 희석)과 함께 인큐베이션하여 결합된 항체를 표지하였다. 세포를 FACSCaliber 유동 세포계측기(Becton Dickinson)를 사용하여 유세포분석에 의해 형광에 대해 평가하고, 데이터를 WinMDI 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.

유세포분석 데이터의 분석은 M-NFS-60 세포 상의 수용체 결합된 CSF-1이 이 방법에 의해 검출가능하였음을 확인시켜 주었다(도 3a). CSF-1을 첨가하기 전에 사용된 임의의 농도에서 Ab535와 세포와의 인큐베이션은 CSF-1이 CSF-1R에 결합하는 것을 방지하였다(도 3b). 사용된 임의의 농도에서 이소타입 대조군 항체와 세포와의 인큐베이션은 CSF-1 결합 및 검출에 효과가 없었다(도 3c).

CSF -1R에 대한 Ab535의 결합은 시험관내에서 CSF -1 의존적 세포주의 증식 및 생존에서 CSF -1을 대체하지 않는다

CSF-1 의존적 세포의 생존 및 증식을 지지하는데 있어서 CSF-1을 대체하는 Ab535의 능력을 세포 증식 분석에서 M-NFS-60 세포를 사용하여 조사하였고, 상기 분석은 세포를 용액 중의 자유로운 Ab535 및 플라스틱 상에 고정화된 Ab535에 노출시키는 것을 포함하였다.

CSF-1 의존적 세포를 지지하는 고정화된 Ab535의 능력을 평가하기 위해, 96-웰 둥근 바닥 조직 배양 플레이트의 웰을 24시간 동안 Ab535 또는 무관한 이소타입 대조군 항체로 코팅한 다음, PBS 중의 10 μg/ml 또는 1 μg/ml의 항체를 함유하는 용액을 웰당 50 μl씩 첨가하고 4℃에서 인큐베이션하여 세포 증식 분석을 개시하였다. 웰을 흡인하고 각 웰을 100 μl PBS로 2회 세척하여 결합하지 않은 항체를 제거하였다.

상기 기재된 바와 같이 유지된 증식성 M-NFS-60 세포를, CSF-1이 없는 50 μl의 성장 배지에 웰당 10,000 세포의 밀도로 96-웰 둥근 바닥 조직 배양 플레이트에 시딩하였다. 재조합 쥣과 CSF-1, Ab535이 보충되거나 보충물이 없는 추가의 50 μl 성장 배지를 적절한 웰에 첨가하였다. 플레이트를 72시간 동안 인큐베이션하고 세포수를 제조사의 지침(Promega)에 따라 CellTiter Glo 키트를 사용하여 결정하여, 시험된 각 조건에 대해, ATP의 수준 및 이에 따른 세포수에 비례하는 측정가능한 발광 판독값을 생성하였다. 모든 조건은 삼반복으로 수행하였다.

데이터의 분석은, CSF-1이 없는 성장 배지에서 유지된 것과 비교하여 CSF-1이 보충된 웰에서 유의하게 더 높은 세포수에 의해 반영된 바와 같이, M-NFS-60이 증식을 위해 CSF-1에 의존한다는 것을 확인시켜 주었다. 또한, 조직 배양 웰의 표면에 고정화되거나 용액 중에서 자유로운 Ab535는 사용된 농도에서 CSF-1의 부존재하에 M-NFS-60 세포의 증식을 지지하지 않았다(도 4).

실시예 3: 측두엽 간질의 필로카르핀 마우스 모델

측두엽 간질 및 간질발생의 필로카르핀 모델을 문헌[Mazzuferi et al., 2012]에 기재된 바와 같이 수행하였다. 실험 1일 및 3일에 100 mg/kg(피하) 항-CSF-1R(Ab535) 또는 비히클을 투여한 필로카르핀에 의한 측두엽 간질의 유도 후 19주에 순수한 또는 간질 마우스(n=8-10). 8일에, 동물을 희생시키고, 이들의 뇌를 두개골에서 제거하였다.

필로카르핀 유도된 측두엽 간질은 두 개의 뇌 반구의 대칭적 변화와 관련이 있다(Mazzuferi et al., 2012). 해마를 우측 반구로부터 빠르게 절개하고, -80℃에서 냉동시켜, qRT-PCR을 위해 RNA를 추출하였다. 조직학적 연구(면역조직화학)를 수행하기 위해 좌측 반구를 4% PFA에 침지하여 고정시켰다.

항체에 의한 수용체 차단의 분자 결과를 나타내기 위해, CSF-1R의 하류 전사 표적 유전자를 생물학적 경로 및 유전자 조절의 수동적으로 구성된 데이터베이스인 톰슨-로이터 메타베이스(Thomson-Reuters Metabase; (http://lsresearch.thomsonreuters.com/pages/solutions/10/metabase)를 사용하여 확인하였다. 표적 CSF-1R 유전자 중에서, Aif1, Irf8, Ctse1 및 Emr1 유전자를 선택하였는데, 이들이 해마에서 발현되는 것으로 알려져 있기 때문이다. 이들의 발현을 qRT-PCR에 의해 측정하고 비교하였다.

CSF-1R의 상기 언급된 표적 유전자 중 하나인 Aif1은 미세아교 활성화의 널리 확립된 마커인 Iba1 단백질을 코딩한다. Iba1의 발현은 인간 간질 및 간질의 마우스 모델, 예컨대 필로카르핀 모델(Vezzani et al., 2013)에서 발견되는 미세아교 세포에서 지속적으로 증가한다. 따라서, 항-CSF-1R 항체로 처리된 필로카르핀 간질 마우스의 해마에서 그의 발현의 면역조직화학적 평가를 수행하였다. Iba1(미세아교세포 마커) 및 DAPI(핵 마커)를 인식하는 특이적 항체를 사용하였고, 40x 렌즈(NanoZoomer)로 영상을 획득한 후 해마의 치아 이랑에서 Iba1-양성 세포의 수를 정량하였다(세포/mm²).

결과

CSF-1R의 4개의 전사 표적 유전자, 예컨대, Aif1(도 5 패널 A,B), Ctse(도 5 패널 C,D), Emr1(도 5 패널 E,F) 및 Irf8(도 5 패널 G,H)의 발현을 항-CSF-1R 항체 또는 음성 대조군으로서 대조군 IgG의 피하 주사 후 간질 마우스(좌측 패널) 및 순수한 동물(우측 패널)의 해마에서의 qPCR에 의해 측정하였다.

필로카르핀 마우스에서, 항-CSF-1R 항체 처리(피하)는 대조군과 비교하여 4개의 모든 선택된 표적 유전자(Aif1, Ctse, Emr1 및 Irf8)의 발현을 유의하게 감소시켰다(도 5 - 패널 A,C, E 및 G). 이는 CSF-1R이 항-CSF-1R 항체로 처리된 간질 마우스의 해마에서 효과적으로 억제된다는 것을 입증한다.

순수한 동물에서 Aif1, Ctse 및 Irf8 유전자의 발현은 항-CSF-1R 항체에 의해 영향을 받지 않는다(도 5, - 패널 B, D 및 H). 이것은 항-CSF-1R이 뇌에서 효과를 가지기 위해 질환 상태(간질)가 필요하다는 것을 시사한다. 그러나, Emr1 발현은 순수한 마우스에서도 영향을 받는데(도 1 - 패널 F), 이는 CSF-1R의 일부 표적 유전자가 질환 배경에 의존할 수 있는 반면, 다른 것은 그렇지 않다는 것을 시사한다.

간질 마우스에서, 항-CSF-1R은 상기 4개의 유전자의 발현 수준을 순수한 동물에서 관찰되는 발현 수준으로 적어도 일부 회복시키며(패널 A, C, E, 및 G), 이는 간질을 갖는 마우스의 뇌에서 표적 관여를 나타낸다. 순수한 동물에서, 이 효과는 Irf8 표적 유전자에서만 관찰될 수 있지만(패널 F), 3개의 다른 표적 유전자에서는 관찰되지 않았고(패널 B, D 및 H), 이는 필로카르핀 유도된 간질 동물과 비교하여 순수한 동물에서 항-CSF-1R 노출의 상이한 표적 관여를 나타낸다.

실시예 4: 마우스 뇌 절편에서 수행된 면역조직화학 실험

유전자 발현 데이터에 기초한 실시예 3에 기재된 관찰을 뇌 조직학에 의해 확인하였다. 도 6은 활성화된 미세아교 세포의 마커인 Iba1 마커(적색)에 대한 항-CSF-1R 항체 처리(피하) 후 마우스 뇌 절편(해마의 치아 이랑)에서 수행된 면역조직화학 결과를 나타내며; 세포 핵은 DAPI에 의해 청색으로 염색되었다. mm² 당 Iba1-발현 미세아교세포의 밀도가 패널 D에 정량되었다.

Iba1 단백질은 CSF-1R의 직접적인 하류 표적 유전자인 실시예 3에 언급된 Aif1 유전자에 의해 코딩된다. 명확히 나타낸 바와 같이(도 6 - 패널 B 및 패널 D에서의 정량), 순수한 마우스와 비교하여, 간질 필로카르핀 마우스에서 미세아교 활성화 및 Iba1 양성 세포에 대한 염색이 강하게 증가한다(도 6 - 패널 A 및 패널 D에서의 정량). 항-CSF-1R 항체의 주사(피하)는 간질 동물에서 Iba1-양성 세포의 강한 감소를 야기하였고(도 6 패널 C), 이는 미세아교 활성의 감소와 일치한다. 따라서, 항-CSF-1R 항체 처리는 대조군 수준으로 Iba1 염색의 정상화를 유도하였다(도 6 - 패널 C 및 패널 D에서의 정량).

실시예 5: 파킨슨병의 MPTP 마우스 모델

파킨슨병의 특징인 도파민성 세포의 선택적인 급성 변성은, 예컨대, 마우스에서, 1-메틸-4-페닐-1,2,3,6-테트라하이드로피리딘(MPTP)과 같은 독소에 의해 유도될 수 있다. MPTP의 주사 후, 도파민성 세포는 며칠 동안 변성되고 미세아교의 활성화를 수반한다(Depboylu et al., 2012).

순수한 마우스(n=8-10)의 2개의 그룹에게 실험 1일 및 4일에 100 mg/kg(피하) 항-CSF-1R(Ab535) 또는 비히클을 투여하였다. 8일에, 마우스의 두 그룹에 MPTP(12.5 mg/kg; 피하)를 주사한다. MPTP의 전신 주사는 두 개의 뇌 반구에서 대칭 변화를 빠르게 유도하므로 마우스를 독소 주사 후 10-12시간에 희생시켰다. 선조체(striatum)를 우측 반구로부터 빠르게 절개하고, -80℃에서 냉동시켜 qRT-PCR을 위해 RNA 추출을 수행하였다. 조직학적 연구(면역조직화학)를 수행하기 위해 좌측 반구를 4% PFA에 침지하여 고정시켰다.

항-CSF-1R 항체에 의한 수용체의 분자 결과를 나타내기 위해, 하류 전사 표적 유전자 Aif1, Irf8, Ctse1 및 Emr1의 발현을 측정하고 qRT-PCR에 의해 비교하였다. 활성화된 미세아교 세포 및 세포 핵(DAPI)의 마커인 Iba1을 선택적 항체에 대해 염색하였다. mm²당 Iba1-발현 미세아교 세포의 밀도를 선조체에서 정량하였다.

실시예 6: 파킨슨병에서 알파- 시누클레인 전형성 섬유소( PFF ) 마우스 모델 내로의 화합물의 시험

정제된 재조합 마우스 야생형 알파-시누클레인 PFF를 고속으로 원심분리하고 상측액을 수집한다. PFF를 마이크로원심분리 튜브에서 모아 5일간 교반하였다(1,000 RPM). 분취액을 드라이 아이스에서 냉동시키고 -80℃에서 보관한다. PFF를 실온에서 해동시키고 초음파처리한다. 사용하기 전 현탁액의 농도는 PBS 중의 2.5 μg/μl의 단백질이다. 이어서, 10주령의 수컷 및/또는 암컷 마우스 C57Bl/6J를 케타민/메데토미딘으로 마취시키고 PFF를 다음의 좌표로 우측 선조체 내로 주사한다: AP +0.2 mm, ML -2.0 mm, DV -3.0 mm(0.1 μL/분으로 2 μL의 총 부피). 항-CSF-1R 항체(Ab 535; 100 mg/kg; 피하)를 PFF 주사 후 다음날부터 1개월간 매주 1회 투여한다. 이 시간 후, 동물을 로타로드(rotarod), 빔 시험(beam test), 와이어-매달기 시험(wire-hanging test) 및 보행(gait) 분석과 같은 다양한 행동 시험에서 평가한다. 행동 시험 후, 동물을 희생시키고 뇌를 제거한다. 조직학적 연구(면역조직화학)를 수행하기 위해 우측 반구를 4% PFA에 침지하여 고정시킨다.

항-CSF-1R 항체에 의한 수용체 차단의 분자 결과를 나타내기 위해, Iba1 미세아교 단백질의 발현을 정량적 면역조직화학(실시예 4와 같음)에 의해 측정한다. 마지막으로, pS129 알파-시누클레인의 뇌 분포, 총 알파-시누클레인의 측정, 선조체 및 흑색질(substantia nigra) 내의 도파민성 뉴런의 계수를 또한 수행한다.

실시예 7: 필로카르핀 마우스 모델에서 발작 빈도에 미치는 항- CSF1R 항체의 예방 효과

필로카르핀 간질 마우스의 그룹(방법에 기재된 바와 같이 제조됨)을 연속적으로 모니터링하여 효능 연구에 들어가기 전에 자발적 재발성 발작을 나타내는지 확인하였다. 3D 가속도계(accelerometer) 및 비디오 카메라로 운동 활동을 동시에 기록하는 독점 시스템(UCB Pharma)으로 발작 모니터링을 수행하였다. 이 시스템은 가속도계 신호의 분석에 의해 행동 발작을 자동으로 검출한다. 이후, 상기 검출 알고리즘에 의해 확인된 모든 행동 발작을 해당 비디오 클립을 면밀히 검토하는 중에 숙련된 기술자에 의해 채점하였다. 자발적 재발성 발작의 존재를 확인한 후, 동일한 시스템으로 마우스(n=64)를 14일간 연속적으로 모니터링하여 기준 발작 빈도를 확립한 후, 처리를 시작하였다. 이어서, 마우스(그룹당 n=32)에게 추가 14일간 연속 발작을 모니터링하는 중에 매주 2회(총 4회 주사), 대조군 IgG 또는 항-Csf1R 항체(100 mg/kg)를 처리하였다. 그리고 나서, 발작 빈도의 % 변화를 이 식에 따라 계산하였다:

발작 빈도의 % 변화 = (처리 중의 발작 빈도 / 기준선 중의 발작 빈도) x 100

대조군 IgG 항체의 주사는 기준선에 비해 발작 빈도의 증가를 야기하였으나, 상기 증가는 항-Csf1R 항체로 처리한 후에는 관찰되지 않았다. 결과적으로, 대조군과 활성 항체 그룹을 비교할 때 처리 단계 중에 발작 빈도에서 통계학적으로 유의한 차이가 있었다(도 7).

SEQUENCE LISTING <110> UCB Biopharma SPRL <120> METHOD FOR TREATMENT OF NEUROLOGIC DISEASE <130> PF0024-EP-EPA <160> 15 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CA019_969 Ab sequences CDR-L1 <220> <221> CDR-L1 <222> (1)..(11) <400> 1 Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asp Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CA019_969 Ab sequences CDRL2 <220> <221> CDR-L2 <222> (1)..(7) <400> 2 Tyr Ala Ser Ser Leu Gln Asp 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CA019_969 Ab sequences CDR-L3 <220> <221> CDR-L3 <222> (1)..(9) <400> 3 Leu Gln Asp Ser Glu Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 4 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CA019_969 Ab sequences CDR-H1 <220> <221> CDR-H1 <222> (1)..(12) <400> 4 Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr Gly Met Gly Val Gly 1 5 10 <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CA019_969 Ab sequences CDR-H2 <220> <221> CDR-H2 <222> 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Lys Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg 245 250 255 Tyr Gln Lys Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His 260 265 270 Ala Gly Asn Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser 275 280 285 Thr Ser Met Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser 290 295 300 Ser Glu Gln Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn 305 310 315 320 Leu Lys Val Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp 325 330 335 Thr Tyr Leu Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala 340 345 350 Asn Ala Thr Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu 355 360 365 Pro Arg Leu Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg 370 375 380 Asn Pro Gly Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr 385 390 395 400 Pro Pro Glu Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr 405 410 415 Leu Leu Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu 420 425 430 Gln Cys Ser Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln 435 440 445 Val Trp Asp Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His 450 455 460 Lys Val Thr Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn 465 470 475 480 Gln Thr Tyr Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp 485 490 495 Ala Phe Ile Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu 500 505 510 Phe Leu Phe Thr Pro Val Val Val Ala Cys Met Ser Ile Met Ala Leu 515 520 525 Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Tyr Lys Tyr Lys Gln Lys Pro 530 535 540 Lys Tyr Gln Val Arg Trp Lys Ile Ile Glu Ser Tyr Glu Gly Asn Ser 545 550 555 560 Tyr Thr Phe Ile Asp Pro Thr Gln Leu Pro Tyr Asn Glu Lys Trp Glu 565 570 575 Phe Pro Arg Asn Asn Leu Gln Phe Gly Lys Thr Leu Gly Ala Gly Ala 580 585 590 Phe Gly Lys Val Val Glu Ala Thr Ala Phe Gly Leu Gly Lys Glu Asp 595 600 605 Ala Val Leu Lys Val Ala Val Lys Met Leu Lys Ser Thr Ala His Ala 610 615 620 Asp Glu Lys Glu Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Met Ser His Leu 625 630 635 640 Gly Gln His Glu Asn Ile Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr His Gly 645 650 655 Gly Pro Val Leu Val Ile Thr Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu 660 665 670 Asn Phe Leu Arg Arg Lys Ala Glu Ala Met Leu Gly Pro Ser Leu Ser 675 680 685 Pro Gly Gln Asp Pro Glu Gly Gly Val Asp Tyr Lys Asn Ile His Leu 690 695 700 Glu Lys Lys Tyr Val Arg Arg Asp Ser Gly Phe Ser Ser Gln Gly Val 705 710 715 720 Asp Thr Tyr Val Glu Met Arg Pro Val Ser Thr Ser Ser Asn Asp Ser 725 730 735 Phe Ser Glu Gln Asp Leu Asp Lys Glu Asp Gly Arg Pro Leu Glu Leu 740 745 750 Arg Asp Leu Leu His Phe Ser Ser Gln Val Ala Gln Gly Met Ala Phe 755 760 765 Leu Ala Ser Lys Asn Cys Ile His Arg Asp Val Ala Ala Arg Asn Val 770 775 780 Leu Leu Thr Asn Gly His Val Ala Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala 785 790 795 800 Arg Asp Ile Met Asn Asp Ser Asn Tyr Ile Val Lys Gly Asn Ala Arg 805 810 815 Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Ile Phe Asp Cys Val Tyr 820 825 830 Thr Val Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile 835 840 845 Phe Ser Leu Gly Leu Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Leu Val Asn Ser Lys 850 855 860 Phe Tyr Lys Leu Val Lys Asp Gly Tyr Gln Met Ala Gln Pro Ala Phe 865 870 875 880 Ala Pro Lys Asn Ile Tyr Ser Ile Met Gln Ala Cys Trp Ala Leu Glu 885 890 895 Pro Thr His Arg Pro Thr Phe Gln Gln Ile Cys Ser Phe Leu Gln Glu 900 905 910 Gln Ala Gln Glu Asp Arg Arg Glu Arg Asp Tyr Thr Asn Leu Pro Ser 915 920 925 Ser Ser Arg Ser Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Ser Glu Leu Glu Glu 930 935 940 Glu Ser Ser Ser Glu His Leu Thr Cys Cys Glu Gln Gly Asp Ile Ala 945 950 955 960 Gln Pro Leu Leu Gln Pro Asn Asn Tyr Gln Phe Cys 965 970 <210> 12 <211> 277 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence for CSF-1R <400> 12 Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val Lys Pro Gly 1 5 10 15 Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val Glu Trp Asp 20 25 30 Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Ser 35 40 45 Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly Thr Tyr Arg 50 55 60 Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala Ile His Leu 65 70 75 80 Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala Gln Glu Val 85 90 95 Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu Leu Thr Asp 100 105 110 Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg Gly Arg Pro 115 120 125 Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr 130 135 140 Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala 145 150 155 160 Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg Leu Lys Val 165 170 175 Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val Pro Ala Glu 180 185 190 Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys Ser Ala Ser 195 200 205 Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn Asn Thr Lys 210 215 220 Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg Tyr Gln Lys 225 230 235 240 Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His Ala Gly Asn 245 250 255 Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser Thr Ser Met 260 265 270 Phe Phe Arg Val Val 275 <210> 13 <211> 49 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence for CSF-1R <400> 13 Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr Ile 1 5 10 15 His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala Leu 20 25 30 Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg Leu Lys Val Gln 35 40 45 Lys <210> 14 <211> 493 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence for CSF-1R (SNP V32G, A245S, H247P, V279M, position underlined) <400> 14 Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val Lys Pro Gly 1 5 10 15 Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val Glu Trp Asp 20 25 30 Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Ser 35 40 45 Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly Thr Tyr Arg 50 55 60 Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala Ile His Leu 65 70 75 80 Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala Gln Glu Val 85 90 95 Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu Leu Thr Asp 100 105 110 Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg Gly Arg Pro 115 120 125 Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr 130 135 140 Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala 145 150 155 160 Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg Leu Lys Val 165 170 175 Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val Pro Ala Glu 180 185 190 Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys Ser Ala Ser 195 200 205 Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn Asn Thr Lys 210 215 220 Leu Ala Ile His Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg Tyr Gln Lys 225 230 235 240 Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His Ala Gly Asn 245 250 255 Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser Thr Ser Met 260 265 270 Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser Ser Glu Gln 275 280 285 Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn Leu Lys Val 290 295 300 Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp Thr Tyr Leu 305 310 315 320 Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala Asn Ala Thr 325 330 335 Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu Pro Arg Leu 340 345 350 Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg Asn Pro Gly 355 360 365 Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Pro Pro Glu 370 375 380 Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr Leu Leu Cys 385 390 395 400 Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu Gln Cys Ser 405 410 415 Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln Val Trp Asp 420 425 430 Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His Lys Val Thr 435 440 445 Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn Gln Thr Tyr 450 455 460 Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp Ala Phe Ile 465 470 475 480 Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu 485 490 <210> 15 <211> 512 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> sequence of human CSF-1R extracellular domain <400> 15 Met Gly Pro Gly Val Leu Leu Leu Leu Leu Val Ala Thr Ala Trp His 1 5 10 15 Gly Gln Gly Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val 20 25 30 Lys Pro Gly Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val 35 40 45 Glu Trp Asp Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly 50 55 60 Ser Ser Ser Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala 85 90 95 Ile His Leu Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala 100 105 110 Gln Glu Val Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu 115 120 125 Leu Thr Asp Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg 130 135 140 Gly Arg Pro Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His 145 150 155 160 Gly Phe Thr Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln 165 170 175 Cys Ser Ala Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg 180 185 190 Leu Lys Val Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val 195 200 205 Pro Ala Glu Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys 210 215 220 Ser Ala Ser Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn 225 230 235 240 Asn Thr Lys Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg 245 250 255 Tyr Gln Lys Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His 260 265 270 Ala Gly Asn Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser 275 280 285 Thr Ser Met Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser 290 295 300 Ser Glu Gln Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn 305 310 315 320 Leu Lys Val Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp 325 330 335 Thr Tyr Leu Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala 340 345 350 Asn Ala Thr Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu 355 360 365 Pro Arg Leu Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg 370 375 380 Asn Pro Gly Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr 385 390 395 400 Pro Pro Glu Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr 405 410 415 Leu Leu Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu 420 425 430 Gln Cys Ser Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln 435 440 445 Val Trp Asp Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His 450 455 460 Lys Val Thr Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn 465 470 475 480 Gln Thr Tyr Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp 485 490 495 Ala Phe Ile Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu 500 505 510

Claims (55)

1. 신경 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 CSF-1R 활성의 억제제.
2. 제1항에 있어서, 핵산인 억제제.
3. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 유도체인 억제제.
4. 제3항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 단클론성 또는 다클론성인 억제제.
5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 키메라이거나, 인간화된 것이거나, 또는 인간의 것인 억제제.
6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 이중특이적 또는 다중특이적인 억제제.
7. 제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는, 전장 중쇄 및 경쇄를 갖는 완전 항체 분자, 또는 이의 단편으로서, Fab, 변형된 Fab, Fab', 변형된 Fab', F(ab')₂, Fv, 단일 도메인 항체(VH 또는 VL 또는 VHH), scFv, 2가, 3가 또는 4가 항체, Bis-scFv, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 또는 상기 중 임의 것의 에피토프-결합 단편을 포함하는 군으로부터 선택되는 단편을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 억제제.
8. 제3항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 하나 이상의 이펙터 분자(들)에 접합되는 것인 억제제.
9. 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 CSF-1R에 결합하는 것인 억제제.
10. 제3항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 혈액-뇌 장벽(BBB)을 통과하여 뇌에서 신경 질환으로 고통받는 환자의 치료 및/또는 예방에 충분한 치료적 유효량에 도달하는 것인 억제제.
11. 제3항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄의 가변 도메인은 CDR-H1에 대해 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-H2에 대해 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-H3에 대해 서열번호 6에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함하는 것인 억제제.
12. 제3항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 경쇄의 가변 도메인은 CDR-L1에 대해 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-L2에 대해 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-L3에 대해 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함하는 것인 억제제.
13. 제3항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 중쇄의 가변 도메인은 CDR-H1에 대해 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-H2에 대해 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-H3에 대해 서열번호 6에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함하고, 경쇄의 가변 도메인은 CDR-L1에 대해 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-L2에 대해 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-L3에 대해 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함하는 것인 억제제.
14. 제3항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄는 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 것인 억제제.
15. 제3항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄는 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 것인 억제제.
16. 제3항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 억제제.
17. 제3항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 10 pM 이하의 인간 CSF-1R에 대한 결합 친화성[K_D]을 갖는 것인 억제제.
18. 제3항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 100 pM 이하의 친화성[K_D]으로 제13항에 따른 항체의 결합을 교차 차단하는 것인 억제제.
19. 제3항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 이것이 차단하는 항체와 동일한 에피토프에 결합함으로써 결합을 교차 차단하는 것인 억제제.
20. 제3항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 서열번호 15의 인간 c-fms의 세포외 도메인에 결합하기 위해 제13항의 항체 또는 이의 단편 또는 유도체와 경쟁하는 것인 억제제.
21. 제3항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 제13항의 억제제로서 인간 CSF-1R의 에피토프에 결합하는 억제제.
22. 제2항에 있어서, 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 따른 항체의 중쇄(들) 및/또는 경쇄(들)를 코딩하는 단리된 DNA 서열인 억제제.
23. 신경 질환의 치료 및/또는 예방용 약제를 제조하기 위한 CSF-1R 활성의 억제제의 용도.
24. 제23항에 있어서, 억제제는 핵산인 용도.
25. 제23항에 있어서, 억제제는 항체 또는 이의 기능적 활성 단편 또는 유도체인 용도.
26. 제25항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 단클론성 또는 다클론성인 용도.
27. 제25항 또는 제26항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 키메라이거나, 인간화된 것이거나, 또는 인간의 것인 용도.
28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 이중특이적 또는 다중특이적인 것인 용도.
29. 제25항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는, 전장 중쇄 및 경쇄를 갖는 완전 항체 분자, 또는 이의 단편으로서, Fab, 변형된 Fab, Fab', 변형된 Fab', F(ab')₂, Fv, 단일 도메인 항체(VH 또는 VL 또는 VHH), scFv, 2가, 3가 또는 4가 항체, Bis-scFv, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 또는 상기 중 임의 것의 에피토프-결합 단편을 포함하는 군으로부터 선택되는 단편을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 용도.
30. 제25항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 하나 이상의 이펙터 분자(들)에 접합되는 것인 용도.
31. 제25항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 CSF-1R에 결합하는 것인 용도.
32. 제25항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 혈액-뇌 장벽(BBB)을 통과하여 뇌에서 신경 질환으로 고통받는 환자의 치료 및/또는 예방에 충분한 치료적 유효량에 도달하는 것인 용도.
33. 제25항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 중쇄의 가변 도메인은 CDR-H1에 대해 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-H2에 대해 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-H3에 대해 서열번호 6에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함하는 것인 용도.
34. 제25항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 경쇄의 가변 도메인은 CDR-L1에 대해 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-L2에 대해 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-L3에 대해 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함하는 것인 용도.
35. 제25항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 중쇄의 가변 도메인은 CDR-H1에 대해 서열번호 4에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-H2에 대해 서열번호 5에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-H3에 대해 서열번호 6에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함하고, 경쇄의 가변 도메인은 CDR-L1에 대해 서열번호 1에 제시된 서열을 갖는 CDR, CDR-L2에 대해 서열번호 2에 제시된 서열을 갖는 CDR 및 CDR-L3에 대해 서열번호 3에 제시된 서열을 갖는 CDR 중 적어도 하나를 포함하는 것인 용도.
36. 제25항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄는 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 것인 용도.
37. 제25항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄는 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 것인 용도.
38. 제35항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 서열번호 9에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 7에 제시된 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 용도.
39. 제25항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 10 pM 이하의 인간 CSF-1R에 대한 결합 친화성[K_D]을 갖는 것인 용도.
40. 제25항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 100 pM 이하의 친화성[K_D]으로 제13항에 따른 항체의 결합을 교차 차단하는 것인 용도.
41. 제25항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 이것이 차단하는 항체와 동일한 에피토프에 결합함으로써 결합을 교차 차단하는 것인 용도.
42. 제25항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 단편 또는 유도체는 서열번호 15의 인간 c-fms의 세포외 도메인에 결합하기 위해 제35항의 항체 또는 이의 단편 또는 유도체와 경쟁하는 것인 용도.
43. 제25항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 제35항의 억제제로서 인간 CSF-1R의 에피토프에 결합하는 용도.
44. 제24항에 있어서, 제35항 내지 제43항 중 어느 한 항에 따른 항체의 중쇄(들) 및/또는 경쇄(들)를 코딩하는 단리된 DNA 서열인 용도.
45. 약학적으로 허용가능한 부형제, 희석제 또는 담체 중 하나 이상과 조합된 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 억제제를 포함하는 약학 조성물.
46. 제45항에 있어서, 다른 활성 성분을 추가로 포함하는 약학 조성물.
47. 신경 질환으로 고통받거나 신경 질환의 위험에 있는 인간 대상의 치료 및/또는 예방을 위한 방법으로서, CSF-1R 활성의 억제제의 치료적 유효량을 상기 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
48. 제47항에 있어서, 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 억제제, 또는 제45항 또는 제46항에 따른 약학 조성물의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
49. 제47항 또는 제48항에 있어서, CSF-1R 활성의 억제제는 하나 이상의 다른 치료적 활성 화합물과 조합하여 투여되는 것인 방법.
50. 제49항에 있어서, 다른 치료적 활성 화합물은 또 다른 항간질 치료제인 방법.
51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 신경 질환은 알츠하이머병, 근위축성 측삭 경화증(ALS), 안젤만 증후군, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 자폐 스펙트럼, 양극성 장애, 뇌 손상, 뇌 부상, 뇌 종양, 중추 통증 증후군, 뇌 위축, 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증(CIDP), 만성 통증, 복합 부위 통증 증후군, 크로이츠펠트-야콥병, 치매, 다운 증후군, 드라베 증후군, 뇌염, 본태성 진전, 프리드라이히 운동실조, 취약 X 증후군, 취약 X 관련 진전/운동실조 증후군(FXTAS), 두부 손상, 두통, 대상포진, 헌팅턴병, 저산소증, 면역 매개 뇌척수염, 영아 연축, 두개내 고압, 라포라병, 란다우-클레프너 증후군, 레녹스-가스토 증후군, 백질이영양증, 백질 소실성 백질뇌병증(leukoencephalopathy with vanishing white matter), 루이소체 치매, 뇌회결손(lissencephaly), 라임병-신경성 후유증, 거뇌증, 수막염, 소두증, 편두통, 미니-뇌졸중(일과성 허혈 발작), 운동 뉴런 질환-근위축성 측삭 경화증, 다발경색성 치매, 다발성 경화증, 유아의 근간대성 뇌병증, 간대성근경련, AIDS의 신경학적 징후, 루프스의 신경성 후유증, 신경세포 세로이드 지방갈색소증, 신경병증, 니만-피크병, 오타하라 증후군, 파킨슨병, 부수종양성 질환(paraneoplastic disease), 원발성 축삭경화증, 프리온 질환, 진행성 다초점 백질뇌병증, 진행 핵상 마비, 라스무센 뇌염, 하지불안증후군, 레트 증후군, 강직-인간 증후군, 뇌졸중, 일과성 허혈 발작, 외상성 뇌 손상, 진전, 결절성 경화증, 운베리히트-룬드보그병, 구회 간질(uncinate epilepsy), 웨스트 증후군, 윌슨병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 억제제, 용도, 약학 조성물 및 방법.
52. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 신경 질환은 안젤만 증후군, 주의력 결핍 과잉행동 장애, 자폐 스펙트럼, 뇌 손상, 뇌 종양, 크로이츠펠트-야콥병, 다운 증후군, 드라베 증후군, 뇌염, 취약 X 증후군, 취약 X 관련 진전/운동실조 증후군(FXTAS), 두부 손상, 대상포진, 저산소증, 면역 매개 뇌척수염, 영아 연축, 라포라병, 란다우-클레프너 증후군, 레녹스-가스토 증후군, 백질이영양증, 백질 소실성 백질뇌병증, 뇌회결손, 라임병-신경성 후유증, 수막염, 다발성 경화증, 유아의 근간대성 뇌병증, 간대성근경련, 루프스의 신경성 후유증, 오타하라 증후군, 프리온 질환, 라스무센 뇌염, 레트 증후군, 외상성 뇌 손상, 결절성 경화증, 운베리히트-룬드보그병, 구회 간질 또는 웨스트 증후군을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 억제제, 용도, 약학 조성물 및 방법.
53. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 신경 질환은 간질, 간질발생(epileptogenesis), 발작 및 경련을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 억제제, 용도, 약학 조성물 및 방법.
54. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 간질의 유형은 전신 발작, 국소 발작 및 원인 불명의 발작을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 억제제, 용도, 약학 조성물 및 방법.
55. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 신경 질환은 측두엽 간질(TLE)인 억제제, 용도, 약학 조성물 및 방법.

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