CN112924698A

CN112924698A - 一种用于诊断神经退行性疾病的生物标志物及其应用

Info

Publication number: CN112924698A
Application number: CN202110243694.1A
Authority: CN
Inventors: 郑红花; 张云武; 许华曦; 周煜航; 王子威; 李霞
Original assignee: Xiamen University
Current assignee: Xiamen University
Priority date: 2021-03-05
Filing date: 2021-03-05
Publication date: 2021-06-08

Abstract

本发明公开了一种用于诊断神经退行性疾病的生物标志物及其应用，为CSF1R胞外氨基片段，即可溶性CSF1R(soluble CSF1R，简称sCSF1R)。检测本发明的sCSF1R能够及时、特异和灵敏的诊断出神经退行性疾病。

Description

一种用于诊断神经退行性疾病的生物标志物及其应用

技术领域

本发明属于神经退行性疾病诊断技术领域，具体涉及一种用于诊断神经退行性疾病的生物标志物及其应用。

背景技术

集落刺激因子1受体(colony stimulating factor 1receptor，CSF1R)是由吞噬性单核细胞表达的III型酪氨酸激酶，属于血小板衍生生长因子(platelet-derivedgrowth factor，PDGF)受体家族，又称巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulatory factor，M-CSF)或分化簇115(cluster ofDifferentiation 115，CD115)，是由CSF1R原癌基因编码的人类细胞表面蛋白，人类的CSF1R基因定位于第5号染色体的5q32。

人CSF1R是由972个氨基酸残基组成的跨膜糖蛋白，分子量为150kD，分为膜外区、跨膜区和胞浆区，分别由512、25和435个氨基酸残基组成。人CSF1R在中枢神经系统主要表达于小胶质细胞，CSF1R通过与配体结合，对小胶质细胞存活、增殖、分化和功能发挥以及对神经细胞稳态维持均具有调节作用。

2012年，美国Mayo Clinic研究团队发现多个CSF1R基因突变家系导致遗传性弥漫性脑白质病伴轴突球样体变(hereditary diffuse leukoencephalopathy withspheroids，HDLS)疾病，该疾病与家族性正色素性白质营养不良(pigmentaryorthochromatic leukodystrophy，POLD)均是相似的、罕见的常染色体显性遗传的神经退行性疾病，以成年起病的痴呆伴运动障碍和癫痫为主要特征。2013年，有研究在HDLS和ALSP两种不同疾病的不同个体中同时检测到存在CSF1R突变，这一结果首次证实了POLD和HDLS两种疾病之间的病理联系，因而POLD和HDLS被视为同一种疾病实体，并将其命名为成年期起病的白质脑病伴轴突球状体样变和色素沉着性胶质细胞(adult onsetleukoencephalopathy with axonal spheroids and pigmented glia，ALSP)。ALSP是由CSF1R突变引起的显性遗传性白质脑病的亚型，通常为中年起病，发病年龄15-78岁，平均35-40岁；病程1-30年，平均6.8年，伴有认知能力下降，精神症状和运动障碍的运动症状。ALSP中的认知症状的特征是额叶功能障碍，如执行功能障碍，注意力缺陷和冷漠。其主要运动障碍症状是步态障碍和运动迟缓，这可能是最初的症状。因此，ALSP应该被认为是认知障碍和运动障碍。

近几年，越来越多的研究表明CSF1R为ALSP的致病基因，迄今全世界发现超过70个CSF1R突变体导致ALSP发生。

目前对于ALSP的诊断多为临床表现、MRI检测以及基因检测。但临床表现多样，且部分呈非典型，故临床极易误诊；MRI设备和检查费较昂贵，在一定程度上限制了它的普及和应用；基因检测技术价格昂贵、耗时长、具有一定的局限性，难以普及。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种用于诊断神经退行性疾病的生物标志物。

本发明的另一目的在于一种神经退行性疾病的诊断试剂盒。

本发明的再一目的在于提供CSF1R胞外氨基片段(可溶性CSF1R，soluble CSF1R，简称sCSF1R)的应用。

本发明的技术方案如下：

一种用于诊断神经退行性疾病的生物标志物，为如SEQ ID NO.01所示的CSF1R胞外氨基片段(CSF1R-ECD)，即sCSF1R。

在本发明的一个优选实施方案中，所述神经退行性疾病包括ALSP、HDLS、POLD、AD(阿尔茨海默病)、FTLD(额颞叶痴呆)、PD(帕金森病)、HD(亨廷顿病)、Stroke(中风)、MS(多发性硬化)、ALS(肌萎缩性侧索硬化)、SCA(不同类型脊髓小脑共济失调)、癫痫、脑缺血和脑损伤。

本发明的另一技术方案如下：

一种神经退行性疾病的诊断试剂盒，包括用于检测外周血和脑脊液中的如SEQ IDNO.01所示的CSF1R胞外氨基片段的含量的试剂。

在本发明的一个优选实施方案中，所述神经退行性疾病包括ALSP、HDLS、POLD、AD、FTLD、PD、HD、中风、MS、ALS、SCA、癫痫、脑缺血和脑损伤。

本发明的再一技术方案如下：

如SEQ ID NO.01所示的CSF1R胞外氨基片段(sCSF1R)作为诊断原发性小胶质细胞病变引起的神经退行性疾病的生物标志物的应用。

在本发明的一个优选实施方案中，所述CSF1R胞外氨基片段(sCSF1R)位于外周血和脑脊液。

在本发明的一个优选实施方案中，所述原发性小胶质细胞病变引起的神经退行性疾病包括ALSP、HDLS和POLD。

本发明的又一技术方案如下：

如SEQ ID NO.01所示的CSF1R胞外氨基片段(sCSF1R)作为辅助诊断继发性小胶质细胞异常引起的神经退行性疾病的生物标志物的应用。

在本发明的一个优选实施方案中，所述CSF1R胞外氨基片段位于外周血和脑脊液。

在本发明的一个优选实施方案中，所述继发性小胶质细胞异常引起的神经退行性疾病包括AD、FTLD、PD、HD、中风、MS、ALS、SCA、癫痫、脑缺血和脑损伤。

本发明的有益效果是：

1、检测本发明的CSF1R胞外氨基片段(sCSF1R)能够及时、特异和灵敏的诊断出神经退行性疾病。

2、本发明的诊断试剂盒通过检测患者外周血和/或脑脊液中的CSF1R胞外氨基片段(sCSF1R)的含量，即可快捷方便灵敏地用于评估以原发性或继发性小胶质细胞病变为特征的神经退行性疾病。

3、本发明的诊断试剂盒若检测出CSF1R胞外氨基片段(sCSF1R)的表达水平低于或高于正常值，则有助于判断该患者患有以原发性或继发性小胶质细胞病变为特征的神经退行性疾病的可能性和风险较大。

附图说明

图1为本发明实施例1中的蛋白质印迹法检测CSF1R存在与TREM2类似的两步切割现象的实验结果图，其中，A为人源CSF1R全长质粒构建图；B为CSF1R全长转染293T细胞后胞内切割情况。

图2为本发明实施例1中的蛋白印迹法检测培养液中CSF1R胞外氨基片段(sCSF1R)的实验结果图，其中，A为人源CSF1R全长和CSF1R胞外氨基片段(NTF)质粒构建图；B为CSF1R全长和胞外氨基片段转染293T细胞后培养液后用Western blot检测胞外片段的代表图；C为Western blot的灰度分析结果，显示各组胞外片段相对含量情况。

图3为本发明实施例1中的Western blot和ELISA法检测CSF1R-1794T突变体胞外氨基片段含量显著降低的实验结果图，其中，A为人源CSF1R全长野生型和1794T突变体质粒构建图，B为CSF1R全长转染293T细胞后胞内胞外氨基片段含量情况，C为胞外氨基片段Western blot结果，D为野生型和突变体全长Western blot结果，E为胞内片段Westernblot结果，F为胞外氨基片段ELISA检测结果。

图4为本发明实施例1中的ELISA法检测15例AD患者外周血CSF1R胞外氨基片段含量显著降低的实验结果图。

具体实施方式

以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。

实施例1

本实施例以试验为基础来阐述与以原发性或继发性小胶质细胞病变为特征的神经退行性疾病的CSF1R野生型及突变体切割情况。

一、实验方法

1.质粒构建

本实施例中使用的载体如下：pEGFP-N1，TREM2-EGFP，HA-CSF1R-EGFP，pCMV3.1-HA，CSF1R-NTF-HA，CSF1R-HA，CSF1R-I794T-HA。

a)质粒获取和构建

TREM2-EGFP全长质粒为美国梅奥医学院卜国军教授实验室提供(详见已发表文章DAP12 Stabilizes the C-terminal Fragment of the Triggering Receptor Expressedon Myeloid Cells-2(TREM2)and Protects against LPS-induced Pro-inflammatoryRespon.J Biol Chem.2015Jun 19；290(25)：15866-15877.)。CSF1R-HA全长质粒购自北京义翘神州生物技术有限公司.。

构建CSF1R-NTF、CSF1R-CTF相关质粒和HA-CSF1R-EGFP质粒所用的引物序列均以NCBI Reference Sequence：NM_001288705.3为模板进行设计。

其中，构建CSF1R-NTF和CSF1R-CTF相关质粒的引物序列如下表所示：

1	CSF1R-19aaReverse	tccctgaccatgccaagctg	SEQ ID NO.02
				2	CSF1R-514aaReverse	gaggaactcatccggggg	SEQ ID NO.03
3	CSF1R-514aaForward	ttcacaccagtggtggtcgc	SEQ ID NO.04
				4	CSF1R-972aaForward	gggggtggaggctcttatc	SEQ ID NO.05

上表中的引物1和3组合用以构建CSF1R-NTF；引物2和4组合用以构建CSF1R-CTF。

pCMV3-CSF1R-HA(Sino Biological)的972位氨基酸插入以下正向引物和反向引物得到HA-CSF1R-EGFP质粒。其中，正向引物为5’-tatccttacgacgtgcctgactacgccatcccagtgatagagcccagtg-3’(SEQ IDNO.06)，反向引物为5’-tccctgaccatgccaagctgtg-3’(SEQIDNO.07)。

b)目的基因片段构建

1)根据TOYOBO公司KOD-Plus-Mutagenesis试剂盒的使用说明设计引物合成CSF1R-N(胞外段)、CSF1R-C(胞内段)。

2)将全长质粒作为模板DNA，调整质粒浓度至50ng/μL，按照说明配制PCR反应体系(在超净台中将反应液加入200μL灭菌PCR管)：

3)PCR反应体系配制：

4)PCR程序反应条件：

5)反应完成后，在50μL产物中加入2μL Dpn I对模板质粒进行消化，混合液用移液枪轻柔吹匀后，用低速离心机离心10sec，放置在37℃恒温水浴中反应1h。

6)反应完成后取5μL产物加入0.8％琼脂糖凝胶中，130V电泳40min后观察PCR产物在指定位置是否有阳性条带。

7)接下来需要环化PCR产物，将连接酶提前在冰上解冻，按照下列反应液体积加入新的PCR管中进行环化：

8)轻柔混匀，低速离心后在PCR仪中16℃反应1h。

c)质粒转化

1)将100μL Trans 5α的感受态细胞在冰浴中解冻。

2)当感受态完全融解后立即放入超净台，并加入上述环化产物10μL，轻柔混匀，冰浴30min，并在此期间轻轻弹击EP管外壁数次，使反应充分。

3)恒温水浴42℃，反应热休克30sec，立即放在冰上反应2min。

4)加入不含抗生素的LB培养基0.9mL，保鲜膜封装后在37℃恒温振荡培养箱里孵育1h。同时从4℃冰箱取出含适当抗生素的LB平板放在37℃烘箱预热。

5)从培养箱中取出菌液，3000rpm离心3min，弃掉900μL上清液后用移液枪重悬菌液，并均匀涂布在含抗生素的平板上(CSF1R及其片段为卡那霉素抗性，TREM2及其片段为氨苄青霉素抗性)。

6)在37℃恒温培养箱培养过夜(16h)，挑取单克隆至无菌管，加入1mL含抗生素的LB培养基，封装后在37℃恒温箱里振荡培养6-8h。

d)突变体确认及使用

1)将上述菌液取300μL送测序公司测序，剩余菌液封口膜密封，4℃保存。

2)确认无误后摇菌大提，所得质粒标记好名称、浓度、日期等，分装保存在-20℃或-80℃。

3)需转染至细胞中的质粒提前冰浴解冻，保存在4℃。

测序验证后提取质粒。

2.细胞培养和处理

用含10％胎牛血清(FBS，Peakserum)和1％双抗(10000units/mL的青霉素和10000μg/mL的链霉素)(Thermo)的Dulbecco′s modified eagle medium(DMEM，Hyclone)，在37℃、潮湿、5％的二氧化碳的空气环境下培养HEK293T细胞。当细胞生长到70％时，按照说明书使用turbofect转染试剂(Thermo)用所用质粒转染细胞。4h后，用10％胎牛血清DMEM或无血清DMEM替代培养基再培养20h，然后收集细胞或培养基进行以下实验：对于条件培养基收集，用无血清的DMEM代替培养基，收集后以5000rcf离心去除细胞碎片，将上清液保存于-40℃用于后续实验。

3.蛋白质印迹法检测CSF1R切割情况

用无免疫沉淀分析裂解液(Boster)和不含EDTA的蛋白酶抑制剂混合物(Roche)收集细胞。通过BCA蛋白质测定试剂盒(Boster)测定总蛋白质的浓度。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测试等质量的蛋白质样品或上清液样品，然后转移到聚偏二氟乙烯膜(PVDF Millipore)上。与一抗(1∶100CSF1R(B-8)或1∶1000/1∶6000Anti-MCSFReceptor或1∶1000/1∶2000GFP或1∶10000HA)和二抗结合的蛋白通过ECL显色。根据ImageJ软件对免疫反应条带进行定量分析。

4.ELISA检测CSF1R-ECD

4.1试验准备

1)细胞生长约70％时转染质粒。

2)转染24h后收取培养基，5000rcf离心去杂质，作为待测样本。

4.2试验过程

试验前提前20min从冰箱中取出试剂盒(Sino Biological酶联免疫分析试剂盒)，平衡至室温，然后按下述步骤进行：

1)按前述试剂准备项准备好各种试剂、标准品和待测样本。

2)计算检测样本所需酶标条，将酶标条从铝箔袋取出，剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口，低温保存。

3)洗板：用1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶标板。洗板对试验结果有重要影响，确保最后一次拍板没有洗液残留。

4)样本孵育：加入标准品和待测样本，100μL/孔，确保15min内完成点样，室温孵育2h。

5)洗板：弃去孔中液体，加入1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶标板。

6)酶标检测抗体孵育：将预先配制至工作浓度的检测抗体加入酶标板中，100μL/孔，混匀，室温孵育1h。

7)洗板：弃去孔中液体，加入1×洗涤缓冲液(300μL/孔)洗板三次，拍干酶标板。

8)显色：将预先配制的底物液加入酶标板中，200μL/孔，混匀，室温避光孵育20min。

9)终止：加入50μL/孔终止液至酶标板中，轻轻震动酶标板至显色均匀。

10)读值：20min内读取450nm的光吸收值。

11)结果：取标准品、空白对照、样本的平均光吸收值，减去空白对照的平均光吸收值，得到标准品、样品的光吸收校准值。将样品的OD值代入方程式2290.8x-53.5R²＝0.9966(方程式为已通过标准品测定吸光度后算出)，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

12)根据样品的实际浓度和临界值进行比较，辅助诊断ALSP。

二、实验结果

1.Western blot检测CSF1R存在与TREM2类似的两步切割现象

用上述pEGFP-N1(Vector)，TREM2-EGFP和HA-CSF1R-EGFP分别转染HEK293T细胞。24h后，收集细胞总蛋白并使用蛋白质印迹法检测蛋白表达。发现CSF1R的前体(CSF1R-precursor，分子量为110kDa)，CSF1R的全长(CSF1R-FL，分子量为170kDa)和CSF1R的切割后跨膜的羧基片段(CSF1R-CTF，分子量为75kDa)，提示HA-CSF1R-EGFP被切割(参见图1)。Vector为阴性对照，TREM2-EGFP为阳性对照。

2.Western blot检测培养液中CSF1R胞外切割片段

用pEGFP-N1(Vector)，CSF1R-NTF-HA(1-514aa)和HA-CSF1R-EGFP分别转染HEK293T细胞，然后用10μM Batimastat(ADAM17抑制剂)有或无的DMEM孵育16h后收取培养液。蛋白质印迹法检测到CSF1R被切割后的氨基片段(CSF1R-ECD，测序得SEQ ID NO.01：

)。表明处理组CSF1R-ECD显著降低，表明CSF1R的氨基端被切割并且由ADAM17介导(参见图2)。Vector为阴性对照，CSF1R-NTF-HA为阳性对照(n＝3，*，P＜0.05)

3.Western blot和ELISA检测CSF1R突变体胞外切割片段含量显著降低

用pCMV3.1-HA(Vector)、CSF1R-HA和CSF1R-I794T-HA分别转染HEK293T细胞，24h后提取细胞总蛋白。蛋白质印迹法几乎检测不到CSF1R-I794T的CSF1R-ECD(n＝3，***，P＜0.001)，且ELISA检测亦发现CSF1R-I794T突变体胞外切割片段含量显著降低(参见图3，图3A为野生型CSF1R-HA和突变CSF1R-I794T-HA质粒构建示意图；图3B为野生型和突变质粒转染到293T细胞后，收集培养液和细胞，蛋白质印迹法检测其中CSF1R各片段的含量；图3C为野生型和突变质粒各组胞外片段(ECD)与全长(FL)的蛋白质印迹灰度分析结果；图3D为各组CSF1R全长(FL)蛋白质印迹灰度分析结果；图3E为各组CSF1R胞内片段(CTF)与全长(FL)的蛋白质印迹灰度分析结果；图3F为ELISA检测各组培养液中胞外片段(ECD)含量。)

4.ELISA检测AD患者外周血中CSF1R胞外切割片段含量显著降低

收集临床AD确诊患者及其年龄匹配的正常对照组的外周血样本各15例，ELISA检测发现AD患者外周血中CSF1R胞外氨基片段CSF1R-ECD含量较正常对照组显著降低(参见图4，n＝15，**，P＜0.01)。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

序列表

<110> 厦门大学

<120> 一种用于诊断神经退行性疾病的生物标志物及其应用

<160> 7

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 517

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Gly Pro Gly Val Leu Leu Leu Leu Leu Val Ala Thr Ala Trp His

1 5 10 15

Gly Gln Gly Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val

20 25 30

Lys Pro Gly Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val

35 40 45

Glu Trp Asp Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly

50 55 60

Ser Ser Ser Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly

65 70 75 80

Thr Tyr Arg Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala

85 90 95

Ile His Leu Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala

100 105 110

Gln Glu Val Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu

115 120 125

Leu Thr Asp Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg

130 135 140

Gly Arg Pro Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His

145 150 155 160

Gly Phe Thr Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln

165 170 175

Cys Ser Ala Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg

180 185 190

Leu Lys Val Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val

195 200 205

Pro Ala Glu Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys

210 215 220

Ser Ala Ser Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn

225 230 235 240

Asn Thr Lys Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg

245 250 255

Tyr Gln Lys Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His

260 265 270

Ala Gly Asn Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser

275 280 285

Thr Ser Met Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser

290 295 300

Ser Glu Gln Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn

305 310 315 320

Leu Lys Val Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp

325 330 335

Thr Tyr Leu Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala

340 345 350

Asn Ala Thr Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu

355 360 365

Pro Arg Leu Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg

370 375 380

Asn Pro Gly Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr

385 390 395 400

Pro Pro Glu Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr

405 410 415

Leu Leu Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu

420 425 430

Gln Cys Ser Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln

435 440 445

Val Trp Asp Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His

450 455 460

Lys Val Thr Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn

465 470 475 480

Gln Thr Tyr Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp

485 490 495

Ala Phe Ile Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu

500 505 510

Phe Leu Phe Thr Pro

515

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

tccctgacca tgccaagctg 20

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gaggaactca tccggggg 18

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ttcacaccag tggtggtcgc 20

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gggggtggag gctcttatc 19

<210> 6

<211> 49

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tatccttacg acgtgcctga ctacgccatc ccagtgatag agcccagtg 49

<210> 7

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

tccctgacca tgccaagctg tg 22

Claims

1.一种用于诊断神经退行性疾病的生物标志物，其特征在于：为如SEQ ID NO.01所示的CSF1R胞外氨基片段。

2.如权利要求1所述的生物标志物，其特征在于：所述神经退行性疾病包括病理表现为小胶质细胞功能异常的ALSP、HDLS、POLD、AD、FTLD、PD、HD、Stroke、MS、ALS、SCA、癫痫、脑缺血和脑损伤。

3.一种神经退行性疾病的诊断试剂盒，其特征在于：包括用于检测外周血和脑脊液中的如SEQ ID NO.01所示的CSF1R胞外氨基片段的含量的试剂。

4.如权利要求3所述的诊断试剂盒，其特征在于：所述神经退行性疾病包括病理表现为小胶质细胞功能异常的ALSP、HDLS、POLD、AD、FTLD、PD、HD、Stroke、MS、ALS、SCA、癫痫、脑缺血和脑损伤。

5.如SEQ ID NO.01所示的CSF1R胞外氨基片段作为诊断原发性小胶质细胞病变引起的神经退行性疾病的生物标志物的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述CSF1R胞外氨基片段位于外周血和脑脊液。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于：所述原发性小胶质细胞病变引起的神经退行性疾病包括ALSP、HDLS和POLD。

8.如SEQ ID NO.01所示的CSF1R胞外氨基片段作为辅助诊断继发性小胶质细胞异常引起的神经退行性疾病的生物标志物的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述CSF1R胞外氨基片段位于外周血和脑脊液。

10.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述继发性小胶质细胞异常引起的神经退行性疾病包括AD、FTLD、PD、HD、中风、MS、ALS、SCA、癫痫、脑缺血和脑损伤。