KR20180011165A - 신생물 치료를 위한 치료적 조합물 및 방법 - Google Patents

Abstract

유효량의 MEDI4736 또는 이의 항원-결합 단편, 트레멜리무맙 또는 이의 항원-결합 단편, 및 MEDI6383을 투여하는 단계를 포함하는 고형 종양의 치료 방법이 본원에서 제공된다.

Description

신생물 치료를 위한 치료적 조합물 및 방법

서열 목록

본 출원은 ASCII 포맷으로 전자 제출된 서열 목록을 포함하며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 2016년 4월 14일에 생성된 상기 ASCII 사본은 BTO-200WOl_SL.txt로 명명되며 크기가 34,448 바이트이다.

암은 계속 주요한 세계적 건강 부담이 되고 있다. 암 치료에서의 진보에도 불구하고, 특히 진행된 질환 또는 기존 치료제에 내성이 있는 암을 갖는 환자에 대한, 더욱 효과적이고 독성이 더 적은 치료법에 대한 의학적 필요성은 충족되지 않고 있다.

종양 제어에서, 면역계, 특히 T 세포-매개 세포독성의 역할은 잘 인식되어 있다. T 세포가 질환의 초기 및 후기 단계에 모두, 암 환자에서 종양 성장 및 생존을 제어한다는 증거가 증가하고 있다. 그러나, 종양 특이적 T-세포 반응을 암 환자에서 증가시키고 유지하는 것은 어렵다.

지금까지 상당한 관심을 받고 있는 T 세포 경로는 세포독성 T 림프구 항원-4(CTLA-4, CD152), 프로그래밍된 사멸 리간드 1(PD-L1, 또한 B7-H1 또는 CD274로 알려져 있음) 및 OX40(CD134; TNFRSF4)을 통해 신호를 전달한다.

CTLA4는 활성화 T 세포 상에서 발현되며, CD28-매개 T 세포 활성화에 뒤따르는 체크에서 T 세포 반응을 유지하기 위한 공동-저해제로서 작용한다. CTLA4는 TCR 관여 후 나이브(naive) 및 메모리 T 세포의 초기 활성화 크기를 조절하고, 항종양 면역성 및 자가면역성 모두에 영향을 미치는 중추적 저해 경로의 일부인 것으로 여겨진다. CTLA4는 T 세포 상에서 전적으로 발현되며, 그 리간드 CD80(B7.1) 및 CD86(B7.2)의 발현은 주로 항원-제시 세포, T 세포, 및 다른 면역 매개 세포로 제한된다. CTLA4 신호전달 경로를 차단하는 길항성 항-CTLA4 항체는 T 세포 활성화를 증강시키는 것으로 보고되었다. 이러한 항체 중 하나인 이필리무맙은 전이성 흑색종의 치료에 대해 2011년 FDA의 승인을 받았다. 또 다른 항-CTLA4 항체인 트레멜리무맙은 진행된 흑색종의 치료에 대해 III상 시험에서 테스트되었으나, 당시 표준 케어(테모졸로마이드 또는 다카르바진)에 비해 환자의 전반적 생존을 유의미하게 증가시키지 못했다.

PD-L1은 또한 T 세포 활성화의 제어에 관여되는 복잡한 수용체 및 리간드 시스템의 일부이다. 정상 조직에서, PD-L1은 T 세포, B 세포, 수지상 세포, 대식구, 중간엽 줄기 세포, 골수-유래 비만 세포뿐만 아니라 다양한 비조혈 세포 상에서 발현된다. 그 정상 기능은 그 두 수용체: programmed death 1(또한 PD-1 또는 CD279로도 알려져 있음) 및 CD80(또한 B7-1 또는 B7.1로도 알려져 있음)과의 상호작용을 통해 T-세포 활성화 및 관용 간 균형을 조절하는 것이다. PD-L1은 또한 종양에 의해 발현되며 여러 부위에서 작용하여 종양이 숙주 면역계에 의한 검출 및 제거를 탈출하는 것을 돕는다. PD-L1은 높은 빈도로 광범위한 암에서 발현된다. 일부 예에서, PD-L1의 발현은 감소된 생존 및 바람직하지 못한 예후와 연관되었다. B7-H1과 그 수용체 간 상호작용을 차단하는 항체는 시험관 내에서 PD-L1-의존적 면역억제 효과를 완화시키고 항종양 T 세포의 세포독성 활성을 증강시킬 수 있다. MEDI4736은 PD-1 및 CD80 수용체 모두에 대한 PD-L1의 결합을 차단할 수 있는 인간 PD-L1에 대해 유도된 인간 단클론 항체이다.

OX40은 주로 활성화 CD4+ 및 CD8+ T 세포, 조절 T 세포(Treg), 및 자연 살해(natural killer; NK) 세포 상에서 발견되는 종양 괴사 인자 수용체(tumor necrosis factor receptor; TNFR)이다. 활성화 CD4+ 및 CD8+ T 세포 상의 OX40을 통한 신호 전달은 향상된 사이토카인 생성, 그랜자임(granzyme) 및 퍼포린(perforin) 방출, 및 및 이펙터(effector) 및 기억 T-세포 풀의 확장을 초래한다. 게다가, Treg 세포 상에서의 OX40의 신호 전달은 Treg의 확장을 저해하며, Treg의 유도를 정지시키고, Treg-억제 기능을 차단한다.

암 및 다른 질환과 싸우기 위한 전략의 개발에서 지난 십 년에 걸쳐 이루어진 상당한 진보에도 불구하고, 진행성, 난치성 및 전이성 질환을 갖는 환자는 제한된 임상 옵션을 갖는다. 화학치료법, 방사선 조사, 및 고용량 화학치료법은 용량이 제한되었다. 특히 진행된 질환 또는 기존 치료제에 내성이 있는 암을 갖는 환자에 있어서, 더 우수한 치료 유효성, 더 긴 임상적 이익, 및 개선된 안전성 프로필을 갖는 신규하고 독성이 더 적은 방법 및 치료제에 대해 상당한 충족되지 않은 필요성이 남아 있다.

일 양태에서, 본 발명은 항-PD-L1 항체 (예를 들어, MEDI4736) 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 (예를 들어, 트레멜리무맙) 또는 이의 항원-결합 단편, 및 OX40 작용제 (agonist) (예를 들어, MEDI6383)를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체 (예를 들어, 인간 대상체)에서 고형 종양을 치료하는 방법을 제공한다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 MEDI4736 또는 이의 항원-결합 단편, 트레멜리무맙 또는 이의 항원-결합 단편, 및 MEDI6383을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체 (예를 들어, 인간 대상체)에서 고형 종양을 치료하는 방법을 제공한다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 유효량의 항-PD-L1 항체 (예를 들어, MEDI4736) 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 (예를 들어, 트레멜리무맙) 또는 이의 항원-결합 단편, 및 OX40 작용제 (예를 들어, MEDI6383) 및 제약상 허용가능한 부형제를 함유하는 제약 조성물을 제공한다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 유효량의 MEDI4736 또는 이의 항원-결합 단편, 트레멜리무맙 또는 이의 항원-결합 단편, 및 MEDI6383 또는 이의 활성 단편 및 제약상 허용가능한 부형제를 함유하는 제약 조성물을 제공한다.

또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 묘사된 임의의 다른 양태에 따른 제약 조성물 및 암 치료 (예를 들어, 본원에 묘사된 임의의 다른 양태에 따른 방법)에 대한 설명서를 포함하는 키트를 제공한다.

본원에 묘사된 임의의 양태의 다양한 구현예에서, OX40 작용제는 OX40 리간드 융합 단백질 (예를 들어, MEDI6383) 또는 항-OX40 항체 중 하나 이상이다.

본원에 묘사된 임의의 양태의 다양한 구현예에서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736이다.

본원에 묘사된 임의의 양태의 다양한 구현예에서, 항-CTLA-4 항체는 트레멜리무맙이다.

본원에 묘사된 임의의 양태의 다양한 구현예에서, 상기 투여는 생존성을 증가시킨다. 다양한 구현예에서, 상기 투여는 MEDI4736 단독, 트레멜리무맙 단독, 또는 MED6383 단독의 투여와 비교하여 생존성을 증가시킨다. 추가의 구현예에서, 상기 투여는 MEDI4736 및 트레멜리무맙, MEDI4736 및 MEDI6383, 및 트레멜리무맙 및 MEDI6383의 투여와 비교하여 생존성을 증가시킨다.

본원에 묘사된 임의의 양태의 다양한 구현예에서, 상기 투여는 종양 부피를 감소시킨다. 다양한 구현예에서, 상기 투여는 MEDI4736 단독, 트레멜리무맙 단독, 또는 MED6383 단독의 투여와 비교하여 종양 부피를 감소시킨다. 추가의 구현예에서, 상기 투여는 MEDI4736 및 트레멜리무맙, MEDI4736 및 MEDI6383, 및 트레멜리무맙 및 MEDI6383의 투여와 비교하여 종양 부피를 감소시킨다.

본원에 묘사된 임의의 양태의 다양한 구현예에서, 항-PD-L1 항체 (예를 들어, MEDI4736) 또는 이의 항원-결합 단편의 투여는 정맥내 주입에 의한 것이다. 본원에 묘사된 임의의 양태의 다양한 구현예에서, 항-CTLA-4 항체 (예를 들어, 트레멜리무맙) 또는 이의 항원-결합 단편의 투여는 정맥내 주입에 의한 것이다. 본원에 묘사된 임의의 양태의 다양한 구현예에서, OX40 작용제 (예를 들어, MEDI6383) 또는 이의 활성 단편의 투여는 정맥내 주입에 의한 것이다. 본원에 묘사된 임의의 양태의 다양한 구현예에서, 제약 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다.

본원에 묘사된 임의의 양태의 다양한 구현예에서, 고형 종양은 난소암, 유방암 (예를 들어, 삼중 음성 유방암), 결장직장암, 전립선암, 자궁경부암, 자궁암, 고환암, 방광암, 두경부암, 흑색종, 췌장암, 신장 세포 암종, 폐암 또는 비소세포 폐암(non-small cell lung cancer; NSCLC) (예를 들어, 편평 또는 비-편평 소세포 폐암) 중 하나 이상이다. 본원에 묘사된 임의의 양태의 다양한 구현예에서, 대상체는 인간 환자이다.

정의

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 이용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다. 하기 참고문헌은 본 발명에서 이용되는 여러 용어의 일반적 정의를 당업자에게 제공한다: 문헌[Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2nd ed. 1994)]; 문헌[The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988)]; 문헌[The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et al. (eds.), Springer Verlag (1991)]; 및 문헌[Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991). 본원에서 이용되는 하기 용어들은, 달리 명시되지 않는 한, 아래에서 이들에게 부여되는 의미를 갖는다.

"항-종양 활성"이란 종양 세포의 증식 또는 생존을 감소시키거나 안정화하는 임의의 생물학적 활성을 의미한다. 하나의 구현예에서, 항-종양 활성은 항-종양 면역 반응이다.

"면역조정제"란 면역 반응(예컨대, 항-종양 면역 반응)을 증강시키는 제제를 의미한다. 본 발명의 예시적인 면역조정제에는 항체, 예컨대 항-CTLA-4 항체, 항-PD-L1 항체, 및 이들의 단편뿐만 아니라 단백질, 예컨대 OX40 리간드 융합 단백질, 또는 이들의 단편이 포함된다. 하나의 구현예에서, 면역조정제는 면역 체크포인트 저해제이다.

"OX40 폴리펩티드"는 NCBI 등록 번호 NP_003318에 대하여 약 85% 이상의 아미노산 동일성을 갖는 폴리펩티드 또는 이의 단편을 의미한다. OX40은 항원-활성화 포유동물 CD4+ 및 CD8+ T 림프구의 표면 상에서 발현되는 수용체의 TNFR-수퍼패밀리의 구성원이다. 예를 들어, 문헌[Paterson et al., MolImmunol 24, 1281-1290 (1987)]; 문헌[Mallett et al., EMBO J 9, 1063-1068 (1990)]; 및 문헌[Calderhead et al., J Immunol 151, 5261-5271 (1993))]을 참조하라. OX40은 CD134, ACT-4, 및 ACT35로도 칭해진다. OX40 수용체 서열은 본 기술 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 젠뱅크(GenBank) 등록 번호 AAB33944 또는 CAE11757로 제공된다.

예시적인 인간 OX40 아미노산 서열이 하기에 제공되어 있다 (서열 번호 18):

"OX40 리간드"는 NCBI 등록 번호 NP_003317에 대하여 85% 이상의 아미노산 동일성을 가지며 OX40 수용체에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드 또는 이의 단편을 의미한다. 예를 들어, 문헌[Baum P.R., et al. EMBO J. 13:3992-4001(1994))]을 참조하라. OX40L이라는 용어는 전체 OX40 리간드, 용해성 OX40 리간드, 및 OX40 리간드의 기능적 활성 부분이 제2 모이어티(moiety), 예를 들어 단백질 도메인에 공유 결합된 것을 포함하는 융합 단백질을 포함한다. 아미노산 서열이 천연 발생 OX4L과는 다르지만 OX40 수용체에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 변이체가 OX40L의 정의 내에 또한 포함된다. OX40의 생물학적 활성이 향상된 변이체가 OX40L의 정의 내에 또한 포함된다. OX40 리간드 서열은 본 기술 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 젠뱅크 등록 번호 NP_003318로 제공된다.

예시적인 인간 OX40 리간드 아미노산 서열이 하기에 제공되어 있다 (서열 번호 19):

"OX40 작용제"는 특이적으로 OX40 수용체와 상호작용하여 OX40 수용체의 생물학적 활성을 증가시키는 OX40 리간드를 의미한다. 바람직하게는, 생물학적 활성은 적어도 약 10%, 20%, 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 심지어 100%만큼 증가된다. 특정 양태에서, 본원에 개시된 OX40 작용제는 OX40 결합 폴리펩티드, 예컨대 항-OX40 항체 (예를 들어, OX40 작용제 항체), OX40 리간드, 또는 이러한 분자의 단편 또는 유도체를 포함한다.

"OX40 항체"는 OX40에 특이적으로 결합하는 항체를 의미한다. OX40 항체는 OX40에 특이적인 단클론 및 다클론 항체와 이들의 항원-결합 단편을 포함한다. 특정 양태에서, 본원에 개시된 항-OX40 항체는 단클론 항체 (또는 이의 항원-결합 단편), 예를 들어, 쥐과, 인간화, 또는 완전 인간 단클론 항체이다. 하나의 특정한 구현예에서, OX40 항체는 OX40 수용체 작용제, 예컨대 문헌[Weinberg et al., J Immunother 29, 575-585 (2006)]에 기술된 마우스 항-인간 OX40 단클론 항체 (9B12)이다. 다른 구현예에서, OX40에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 mAb 9B12와 동일한 OX40 에피토프에 결합한다.

"OX40 리간드 융합 단백질(OX40L FP)"은 특이적으로 OX40 수용체에 결합하여 면역 반응을 증가시키는 단백질을 의미한다. 일 구현예에서, OX40 수용체에의 OX40 리간드 융합 단백질의 결합은 T-세포 인식을 증대시킴으로써 종양 항원 특이적 면역 반응을 향상시킨다. 예시적인 OX40 리간드 융합 단백질이 미국 특허 제7,959,925호 (발명의 명칭: "삼량체형 OX40 면역글로불린 융합 단백질 및 사용 방법(Trimeric OX40 Immunoglobulin Fusion Protein and Methods of Use)")에 개시되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 제7,959,925호의 서열 번호 8 (서열 번호 20)을 참조하라:

. 다른 OX40 리간드 융합 단백질이 예를 들어 미국 특허 제6,312,700호에 개시되어 있다. 일 구현예에서, OX40 리간드 융합 단백질은 종양-특이적 T-세포 면역성을 향상시킨다. 일 구현예에서, OX40 리간드 융합 단백질은 MEDI6383이다.

"PD-L1 폴리펩티드"란 NCBI 접근 번호 NP_001254635와 적어도 약 85% 아미노산 동일성을 가지며 PD-L1 및 CD80 결합 활성을 가지는 폴리펩티드 또는 이들의 단편을 의미한다.

"PD-L1 핵산 분자"란 PD-L1 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 예시적인 PD-L1 핵산 분자 서열은 NCBI 접근 번호 NM_001267706에 제공된다.

"항-PD-L1 항체"란 PD-L1 폴리펩티드에 선택적으로 결합하는 항체를 의미한다. 예시적인 항-PD-L1 항체는, 예를 들어 미국 특허 출원 공개 제20130034559호 / 미국 특허 제8779108호 및 미국 특허 출원 공개 제20140356353호에 기재되며, 이는 본원에 참조로 포함된다. MEDI4736은 예시적인 항-PD-L1 항체이다. 다른 항-PD-L1 항체에는 BMS-936559(브리스톨-마이어스 스퀴브(Bristol-Myers Squibb)) 및 MPDL3280A(로슈(Roche))가 포함된다.

MEDI4736 VL (서열 번호 1)

MEDI4736 VH (서열 번호 2)

MEDI4736 VH CDR1 (서열 번호 3)

MEDI4736 VH CDR2 (서열 번호 4)

MEDI4736 VH CDR3 (서열 번호 5)

MEDI4736 VL CDR1 (서열 번호 6)

MEDI4736 VL CDR2 (서열 번호 7)

MEDI4736 VL CDR3 (서열 번호 8)

"CTLA-4 폴리펩티드"란 젠뱅크(GenBank) 등록 번호 AAL07473.1와 적어도 85% 아미노산 서열 동일성을 가지는 폴리펩티드 또는 T 세포 저해 활성을 가지는 이들의 단편을 의미한다. AAL07473.1의 서열은 아래에 제공된다 (서열 번호 21):

"CTLA-4 핵산 분자"란 CTLA-4 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 예시적인 CTLA-4 폴리뉴클레오티드는 젠뱅크 등록 번호 AAL07473에 제공된다.

"항-CTLA-4 항체"란 CTLA-4 폴리펩티드에 선택적으로 결합하는 항체를 의미한다. 예시적인 항-CTLA-4 항체는, 예를 들어 미국 특허 제6,682,736호; 미국 특허 제7,109,003호; 미국 특허 제7,123,281호; 미국 특허 제7,411,057호; 미국 특허 제7,824,679호; 미국 특허 제8,143,379호; 미국 특허 제7,807,797호; 및 미국 특허 제8,491,895호(트레멜리무맙은 여기서 11.2.1임)에 기재되며, 이는 본원에 참조로 포함된다. 트레멜리무맙은 예시적인 항-CTLA-4 항체이다. 트레멜리무맙 서열은 아래에 제공된다.

트레멜리무맙 미국 특허 제6,682,736호

트레멜리무맙 VL (서열 번호 9)

트레멜리무맙 VH (서열 번호 10)

트레멜리무맙 VH CDR1 (서열 번호 11)

트레멜리무맙 VH CDR2 (서열 번호 12)

트레멜리무맙 VH CDR3 (서열 번호 13)

트레멜리무맙 VL CDR1 (서열 번호 14)

트레멜리무맙 VL CDR2 (서열 번호 15)

트레멜리무맙 VL CDR3 (서열 번호 16)

본 개시에서 이용되는 "항체"라는 용어는 면역글로불린 또는 이들의 단편 또는 유도체를 나타내며, 이것이 시험관내 또는 생체내 생산되는지 여부와 무관하게, 항원-결합 부위를 포함하는 임의의 폴리펩티드를 포괄한다. 용어에는 비제한적으로 다클론, 단클론, 단일특이적, 다중특이적, 비-특이적, 인간화, 단일쇄, 키메라, 합성, 재조합, 하이브리드, 돌연변이화, 및 그래프팅된 항체가 포함된다. 본 개시의 목적을 위해, "온전한 항체"에서와 같이 "온전한" 이라는 용어로 달리 수식되지 않는 한, "항체"라는 용어에는 또한 항체 단편, 예컨대 Fab, F(ab')₂, Fv, scFv, Fd, dAb, 및 항원-결합 기능, 예를 들어 CTLA-4, 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 다른 항체 단편이 포함된다. 전형적으로, 이러한 단편은 항원-결합 도메인을 포함할 것이다.

"항원-결합 도메인", "항원-결합 단편", 및 "결합 단편"이라는 용어는 항체 및 항원 간 특이적 결합에 관여하는 아미노산을 포함하는 항체 분자의 일부를 나타낸다. 항원이 큰 경우에, 항원-결합 도메인은 항원의 일부에만 결합할 수 있다. 항원-결합 도메인과의 특이적 상호작용에 관여하는 항원 분자의 일부는 "에피토프" 또는 "항원 결정기"로 불린다. 항원-결합 도메인은 전형적으로 항체 경쇄 가변 영역(V_L) 및 항체 중쇄 가변 영역(V_H)을 포함하지만, 반드시 둘 다를 포함할 필요는 없다. 예를 들어, 소위 Fd 항체 단편은 V_H 도메인으로만 구성되지만, 여전히 온전한 항체의 일부 항원-결합 기능을 보유한다.

항체의 결합 단편은 재조합 DNA 기법에 의해, 또는 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생산된다. 결합 단편에는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 및 단일쇄 항체가 포함된다. "이중특이적" 또는 "이중작용성" 항체 이외의 항체는 각각의 그 결합 부위가 동일한 것으로 이해된다. 효소 파파인을 이용한 항체의 소화는 "Fab" 단편으로도 알려져 있는 2개의 동일한 항원-결합 단편 및 항원-결합 활성을 갖지 않지만 결정화하는 능력을 가지는 "Fc" 단편을 생성한다. 효소 펩신을 이용한 항체의 소화는 항체 분자의 2개 팔이 결합된 채 유지되고 2개의 항원-결합 부위를 포함하는 F(ab')2 단편을 생성한다. F(ab')2 단편은 항원을 가교하는 능력을 갖는다. 본원에서 이용되는 경우 "Fv"는 항원-인식 및 항원-결합 부위를 모두 보유하는 항체의 최소 단편을 나타낸다. 본원에서 이용되는 "Fab"는 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 CHI 도메인을 포함하는 항체의 단편을 나타낸다.

"mAb"라는 용어는 단클론 항체를 나타낸다. 본 발명의 항체는 비제한적으로 전체 원상태 항체, 이중특이적 항체; 키메라 항체; Fab, Fab', 단일쇄 V 영역 단편(scFv), 융합 폴리펩티드, 및 비통상적 항체를 포함한다.

본 개시에서, "포함한다", "포함하는", "함유하는" 및 "가지는" 등은 U.S. 특허법에서 이들에게 부여되는 의미를 가질 수 있고, "포함된다", "포함되는" 등을 의미할 수 있으며; "로 본질적으로 구성되는" 또는 "본질적으로 구성되는" 등은 U.S. 특허법에서 부여되는 의미를 가지고, 이 용어는 개방형으로, 인용되는 기본적인 또는 신규한 특징이 인용되는 것 이외의 존재에 의해 변화되지 않는 한, 인용되는 것 이외의 존재를 허용하지만 선행 기술의 구현예는 배제한다.

본원에서 이용되는 "결정하는", "평가하는", "검정하는", "측정하는" 및 "검출하는"은 정성적 및 정량적 결정을 모두 나타내며, 이와 같이 "결정하는"이라는 용어는 본원에서 "검정하는", "측정하는" 등과 상호 교환적으로 이용된다. 정량적 결정을 의도하는 경우, 분석물 등의 "양의 결정"이라는 어구가 이용된다. 정성적 및/또는 정량적 결정을 의도하는 경우, 분석물의 "수준의 결정" 또는 분석물의 "검출"이라는 어구가 이용된다.

"기준(reference)"이란 비교의 기준(standard of comparison)을 의미한다.

"대상체"란 비제한적으로 인간 또는 비-인간 포유류, 예컨대 소, 말, 개, 양, 또는 고양이를 포함하는 포유류를 의미한다.

본원에서 제공되는 범위는 범위 내의 모든 값에 대한 약기인 것으로 이해된다. 예를 들어, 1 내지 50의 범위는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 또는 50으로 구성되는 군의 임의의 수, 수의 조합, 또는 하위-범위를 포함하는 것으로 이해된다.

본원에서 이용되는 "치료하다", "치료하는", "치료" 등의 용어는 장애 및/또는 이와 연관된 증상의 감소 또는 완화를 나타낸다. 배제되지는 않지만, 장애 또는 질병의 치료는 장애, 질병 또는 이와 연관된 증상이 완전히 제거되는 것을 필요로 하지는 않음이 이해될 것이다.

구체적으로 언급되지 않거나 맥락 상 명백하지 않은 경우, 본원에서 이용되는 "또는"이라는 용어는 포괄적인 것으로 이해된다. 구체적으로 언급되거나 맥락 상 명백하지 않은 경우, 본원에서 이용되는 단수 용어는 단수 또는 복수인 것으로 이해된다.

구체적으로 언급되지 않거나 맥락 상 명백하지 않은 경우, 본원에서 이용되는 "약"이라는 용어는 당분야의 일반 관용 범위 내인 것으로, 예를 들어 평균의 2 표준 편차 내인 것으로 이해된다. 약은 언급되는 값의 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05%, 또는 0.01% 내인 것으로 이해될 수 있다. 맥락 상 달리 명확하지 않는 한, 본원에서 제공되는 모든 수치 값은 약이라는 용어로 수식된다.

본원에서 변수의 임의의 정의 내인 화학적 군의 목록의 기재에는 임의의 단일 군 또는 기재된 군의 조합으로서의 해당 변수의 정의가 포함된다. 본원에서 변수 또는 양태에 대한 구현예의 인용에는 임의의 단일 구현예 또는 임의의 다른 구현예 또는 이들의 일부와의 조합으로서의 해당 구현예가 포함된다.

본원에서 제공되는 임의의 조성물 또는 방법은 본원에서 제공되는 하나 이상의 임의의 다른 조성물 및 방법과 조합될 수 있다.

도 1a 내지 도 1f는 항-CTLA-4 항체, 항-PD-L1 항체 및 OX40 리간드 융합 단백질의 조합물을 이용한 처리가 종양 부피 감소 및 생존성 증가에서 상기 에이전트들의 단일요법제 및 이중 병용 요법제보다 더 효과적이었음을 나타낸다. 도 1a는 시간이 지남에 따른 연구군의 평균 종양 부피를 도시한 그래프이다. 도 1b는 시간이 지남에 따른 이소타입 대조구 (좌측 패널) 및 미처리 대상체 (우측 패널)의 개개의 종양 부피를 도시한 그래프를 나타낸다. 도 1c는 시간이 지남에 따른 항-CTLA-4 단클론 항체 (CTLA-4 mAb; 좌측 패널); 항-PD-L1 단클론 항체 (PD-L1 mAb; 중앙 패널); 및 OX40 리간드 융합 단백질 (mOX40L FP; 우측 패널)로 처리한 대상체의 개개의 종양 부피를 도시한 그래프를 나타낸다. 도 1d는 시간이 지남에 따른 항-CTLA-4 및 항-PD-L1 단클론 항체 (CTLA-4 mAb + PD-L1 mAb; 상부, 좌측 패널); 항-PD-L1 단클론 항체 및 OX40 (PD-L1 mAb + mOX40L FP; 상부, 우측 패널); 및 항-CTLA-4 단클론 항체 및 OX40 리간드 융합 단백질 (CTLA-4 mAb + mOX40L FP; 하부, 좌측 패널); 및 항-CTLA-4와 항-PD-L1 단클론 항체와 OX40 (CTLA-4 mAb + PD-L1 mAb + mOX40L FP)의 조합물로 처리한 대상체의 개개의 종양 부피를 도시한 그래프를 나타낸다. 도 1e는 시간이 지남에 따른 미처리, 이소타입 대조구, CTLA-4 mAb, PD-L1 mAb, 및 mOX40L FP 연구군에서의 생존율 (%)을 나타내는 그래프이다. 도 1f는 시간이 지남에 따른 CTLA-4 mAb + PD-L1 mAb, 이소타입 대조구, CTLA-4 mAb + mOX40L FP, PD-L1 mAb + mOX40L FP, 및 CTLA-4 mAb + PD-L1 mAb + mOX40L FP FP 연구군에서의 생존율 (%)을 나타내는 그래프이다. 각각의 군의 11마리의 C57BL/6 마우스에 MCA205 세포를 제1일에 피하(SC) 접종하였다. 대조 물품 (이소타입 대조구) 및 테스트 물품 항-CTLA-4 mAb 및 항-PD-L1 mAb를 제11일, 제15일, 제18일 및 제22일에 복강내(IP) 투여하고; 테스트 물품 mOX40L FP를 제11일 및 제15일에 IP 투여하였다. 테스트 물품-처리된 동물과 이소타입 대조구-처리된 동물 사이의 비교를 행하고, 군간 차이를 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 6.0 소프트웨어를 이용하여 섹션 6.6에 설명된 방법에 의해 통계적 유의도에 대하여 분석하였다. 오차 막대는 평균의 표준 오차를 나타낸다. IP = 복강내; SC = 피하; TGI = 종양 성장 저해.

본 발명은 암 치료에 유용한 조성물 및 방법을 특징으로 하며, 이는 항-CTLA-4 항체, 항-PD-L1 항체, 및 OX40 작용제 (예를 들어, OX40 리간드 융합 단백질)의 조합물을 포함한다. 본원에서 하기에 보고된 바와 같이, 이러한 에이전트를 이용한 처리는 마우스 종양 모델에서 종양 부피를 감소시키고 생존성을 증가시켰다.

고형 종양의 치료 방법이 본원에서 제공된다. 제공된 방법은 유효량의 MEDI4736 또는 이의 항원-결합 단편, 트레멜리무맙 또는 이의 항원-결합 단편, 및 OX40 리간드 융합 단백질 또는 이의 활성 단편을 투여하는 단계를 포함한다. 다양한 구현예에서, 고형 종양은 난소암, 유방암 (예를 들어, 삼중 음성 유방암), 결장직장암, 전립선암, 자궁경부암, 자궁암, 고환암, 방광암, 두경부암, 흑색종, 췌장암, 신장 세포 암종, 및 폐암 (예를 들어, 비소세포 폐암(NSCLC))을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 하기 3가지의 주요 하위유형(subtype)의 NSCLC가 있다: 편평 세포 암종, 선암종, 및 대세포 (미분화) 암종. 다른 하위유형은 선편평세포 암종 및 육종양 암종을 포함한다.

항-종양 요법

항-CTLA4 항체, 항-PD-L1 항체, 및 OX40 작용제 (예를 들어, OX40 리간드 융합 단백질, OX40 작용제 항체)를 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료 방법이 본원에서 제공된다. 항-CTLA4 항체, 항-PD-L1 항체, 및 OX40 리간드 융합 단백질의 투여는 마우스 종양 모델에서 종양 부피를 감소시키고 생존성을 증가시켰다. 특정 양태에서, 고형 종양을 겪고 있는 환자에게 항-CTLA4 항체 (예를 들어, 트레멜리무맙), 항-PD-L1 (MEDI4736), 및 OX40 리간드 융합 단백질 (예를 들어, MEDI6383)을 투여한다. 특정 양태에서, 본원에 제공된 방법에 따른 항-CTLA4 항체 (예를 들어, 트레멜리무맙), 항-PD-L1 (MEDI4736), 및 OX40 리간드 융합 단백질 (예를 들어, MEDI6383)의 투여는 비경구 투여 (예를 들어, 정맥내 주입 또는 피하 주사)를 통한 것이다. 특정 양태에서, 항-CTLA4 항체 (예를 들어, 트레멜리무맙), 항-PD-L1 (MEDI4736), 및 OX40 리간드 융합 단백질 (예를 들어, MEDI6383)은 단일 제약 조성물로 투여된다.

항-CTLA4 항체, 항-PD-L1 항체, 및 OX40 작용제를 포함하는 암 요법을 이용한 효과적인 치료는 예를 들어 원발성 종양 부위에서의 또는 하나 이상의 전이에서의 암의 진행 속도의 감소, 종양 또는 전이성 성장의 지연 또는 안정화, 종양 수축, 및/또는 종양 퇴화를 포함한다. 일부 양태에서, 종양 성장의 감소 또는 지연은 통계적으로 유의할 수 있다. 종양 성장의 감소는 기저선에서의 환자의 종양의 성장과 비교함으로써, 예상되는 종양 성장에 대하여 비교함으로써, 큰 환자 집단을 기반으로 하여 예상되는 종양 성장에 대하여 비교함으로써, 또는 대조 집단의 종양 성장에 대하여 비교함으로써 측정될 수 있다. 다른 구현예에서, 본 발명의 방법은 생존성을 증가시킨다.

항-CTLA4 항체, 항-PD-L1 항체, 및 OX40 리간드 융합 단백질을 포함하는 암 요법제의 투여에 대한 임상 반응은 임상의에게 공지된 진단 기술을 이용하여 평가될 수 있으며, 이는 자기 공명 영상(magnetic resonance imaging; MRI) 스캔, x-방사선 영상(x-radiographic imaging), 컴퓨터 단층 촬영(computed tomographic(CT) scan), 유세포 분석법 또는 형광-활성화 세포 분류(fluorescence-activated cell sorter; FACS) 분석, 조직학, 육안 병리학(gross pathology), 및 혈액 화학 검사(blood chemistry) (ELISA, RIA, 및 크로마토그래피에 의해 검출가능한 변화를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아님)를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

T 세포 조정 경로

T 세포가 질환의 초기 및 후기 단계에 모두, 암 환자에서 종양 성장 및 생존을 제어한다는 증거가 증가하고 있다. 그러나, 종양 특이적 T-세포 반응을 암 환자에서 증가시키고 지속시키는 것은 어렵다.

상당한 관심을 받고 있는 T 세포 조정 경로는 세포독성 T 림프구 항원-4(CTLA-4, CD152), programmed death 리간드 1(PD-L1, 또한 B7H-1 또는 CD274로 알려져 있음) 및 OX40 (CD134; TNFRSF4)을 통해 신호를 전달한다.

CTLA-4는 활성화 T 세포 상에서 발현되며, CD28-매개 T 세포 활성화 후 T 세포 반응을 체크 상태로 유지하기 위한 공동-저해제로서 작용한다. CTLA-4는 TGR 관여 후 나이브 및 메모리 T 세포의 초기 활성화 크기를 조절하고, 항종양 면역성 및 자가면역성 모두에 영향을 미치는 중추적 저해 경로의 일부인 것으로 여겨진다. CTLA-4는 T 세포 상에서 발현되며, 그 리간드 CD80(B7.1) 및 CD86(B7.2)의 발현은 주로 항원-제시 세포, T 세포, 및 다른 면역 매개 세포로 제한된다. CTLA-4 신호전달 경로를 차단하는 길항성 항-CTLA-4 항체는 T 세포 활성화를 증강시키는 것으로 보고되었다. 이러한 항체 중 하나인 이필리무맙은 전이성 흑색종의 치료에 대해 2011년 FDA의 승인을 받았다. 또 다른 항-CTLA-4 항체인 트레멜리무맙은 진행된 흑색종의 치료에 대해 III상 시험에서 평가되었으나, 당시 표준 케어(테모졸로마이드 또는 다카르바진)에 비해 환자의 전반적 생존을 유의미하게 증가시키지 않았다.

PD-L1은 또한 T 세포 활성화 제어에 관여되는 복잡한 수용체 및 리간드 시스템의 일부이다. 정상 조직에서, PD-L1은 T 세포, B 세포, 수지상 세포, 대식구, 중간엽 줄기 세포, 골수-유래 비만 세포뿐만 아니라 다양한 비조혈 세포 상에서 발현된다. 그 정상 기능은 그 두 수용체: programmed death 1(또한 PD-1 또는 CD279로도 알려져 있음) 및 CD80(또한 B7-1 또는 B7.1로도 알려져 있음)과의 상호작용을 통해 T-세포 활성화 및 관용 간 균형을 조절하는 것이다. PD-L1은 또한 종양에 의해 발현되며 여러 부위에서 작용하여 종양이 숙주 면역계에 의한 검출 및 제거를 탈출하는 것을 돕는다. PD-L1은 높은 빈도로 광범위한 암에서 발현된다. 일부 예에서, PD-L1의 발현은 감소된 생존 및 바람직하지 못한 예후와 연관되었다. PD-L1 및 그 수용체(예컨대, PD-1) 간 상호작용을 차단하는 항체는 시험관 내에서 PD-L1-의존적 면역억제 효과를 완화시키고 항종양 T 세포의 세포독성 활성을 증강시킬 수 있다.

OX40 (CD134; TNFRSF4)은 주로 활성화 CD4+ 및 CD8+ T 세포, 조절 T 세포(Treg) 및 천연 살해(NK) 세포 상에서 발견되는 종양 괴사 인자 수용체(TNFR)이다 (문헌[Croft et al, 2009]). OX40은 하나의 공지된 내인성 리간드, OX40 리간드(OX40L; CD152; TNFSF4)를 갖는데, 이는 삼량체 형태로 존재하고 OX40을 클러스터링(clustering)할 수 있다 (이는 T 세포 내에서 강한 세포 신호 전달 사건으로 이어짐) (문헌[Croft et al, 2009]). 활성화 CD4+ 및 CD8+ T 세포 상에서의 OX40을 통한 신호 전달은 향상된 사이토카인 생성, 그랜자임 및 퍼포린 방출, 및 이펙터 및 기억 T 세포 풀의 확장을 초래한다 (문헌[Jensen et al, 2010]). 게다가, Treg 세포 상에서의 OX40의 신호 전달은 Treg의 확장을 저해하며, Treg의 유도를 정지시키고, Treg-억제 기능을 차단한다 (문헌[Voo et al, 2013]; 문헌[Vu et al, 2007]).

면역조직화학 연구 및 초기 유세포 분석법적 분석은 OX40이 넓은 범위의 인간 암을 침윤하는 T 세포 상에서 발현됨을 보여주었다 (문헌[Baruah et al, 2011]; 문헌[Curtiet al, 2013]; 문헌[Ladanyi et al, 2004]; 문헌[Petty et al, 2002]; 문헌[Ramstad et al, 2000]; 문헌[Sarff et al, 2008]; 문헌[Vetto et al, 1997]). 종양-침윤 림프구 상에서의 OX40의 발현은 몇몇 인간 암에서 더 긴 생존성과 상관되며, 이는 OX40 신호가 항-종양 면역 반응의 확립에 중요한 역할을 할 수 있음을 시사한다 (문헌[Ladanyi et al, 2004]; 문헌[Petty et al, 2002]).

다양한 비임상 마우스 종양 모델에서, 항체 및 OX40 리간드 융합 단백질을 포함하는 OX40의 작용제는 유망한 결과를 가지고서 성공적으로 사용되어 왔다 (문헌[Kjaergaard et al, 2000]; 문헌[Ndhlovu et al, 2001]; 문헌[Weinberg et al, 2000]). OX40 작용제를 통한 T 세포의 공동 자극(co-stimulating)은 일부의 경우 지속성이 있는 항-종양 활성을 촉진하여 후속적인 종양 챌린지(challenge)에 대하여 장시간 지속되는 보호를 제공하였다 (문헌[Weinberg et al, 2000]). Treg-세포 저해 및 이펙터 T 세포의 공동 자극은 OX40 작용제에 의한 종양 성장 저해에 필요한 것으로 밝혀졌다 (문헌[Piconese et al, 2008]).

항-PD-L1 항체

MEDI4736은 PD-L1에 대해 선택적이고 PD-L1의 PD-1 및 CD80 수용체에 대한 결합을 차단하는 예시적인 항-PD-L1 항체이다. MEDI4736은 시험관 내에서 인간 T-세포 활성화의 PD-L1-매개 억제를 완화시키고 T-세포 의존적 기전을 통해 이종이식편 모델에서 종양 성장을 저해할 수 있다.

본원에서 제공된 방법에서 이용하기 위한 MEDI4736(또는 이들의 단편)에 관한 정보는 미국 특허 제8,779,108호에서 확인될 수 있고, 그 개시는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. MEDI4736의 단편 결정형(Fc) 도메인은 항체-의존적 세포-매개 세포독성(ADCC)의 매개에 관여되는 보체 성분 C1q 및 Fcγ 수용체에 대한 결합을 감소시키는 IgG1 중쇄의 불변 도메인 내에 3중 돌연변이를 함유한다.

본원에서 제공되는 방법에서 이용하기 위한 MEDI4736 및 이의 항원-결합 단편은 중쇄 및 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정한 양태에서, 본원에서 제공되는 방법에서 이용하기 위한 MEDI4736 또는 이의 항원-결합 단편은 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정한 양태에서, 본원에서 제공되는 방법에서 이용하기 위한 MEDI4736 또는 이의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 상기에서 본원에 나타낸 Kabat-정의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 상기에서 본원에 나타낸 Kabat-정의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함한다. 당업자는 당업자에게 공지된 Chothia-정의, Abm-정의, 또는 다른 CDR 정의를 쉽게 확인할 수 있을 것이다. 특정한 양태에서, 본원에서 제공되는 방법에서 이용하기 위한 MEDI4736 또는 이의 항원-결합 단편은, 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제8,779,108호에 개시된 바와 같은 2.14H9OPT 항체의 가변 중쇄 및 가변 경쇄 CDR 서열을 포함한다.

항-CTLA-4 항체

CTLA-4에 특이적으로 결합하고 CTLA-4 활성을 저해하는 항체는 항-종양 면역 반응의 증강에 유용하다. 본원에서 제공된 방법에서 이용하기 위한 트레멜리무맙(또는 이의 항원-결합 단편)에 관한 정보는 미국 특허 제6,682,736호에서 확인될 수 있고(11.2.1로 언급됨), 그 개시는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 트레멜리무맙(CP-675,206, CP-675, CP-675206, 및 티실리무맵으로도 알려져 있음)은 CTLA-4에 대해 고도로 선택적이고 CTLA-4의 CD80(B7.1) 및 CD86(B7.2)에 대한 결합을 차단하는 인간 IgG₂ 단클론 항체이다. 이는 시험관내 면역 활성화를 일으키는 것으로 나타났으며, 트레멜리무맙으로 치료받은 일부 환자는 종양 퇴행을 나타내었다.

본원에서 제공되는 방법에서 이용하기 위한 트레멜리무맙은 중쇄 및 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정한 양태에서, 본원에서 제공되는 방법에서 이용하기 위한 트레멜리무맙 또는 이의 항원-결합 단편은 본원에서 상기에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 본원에서 상기에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 특정한 양태에서, 본원에서 제공되는 방법에서 이용하기 위한 트레멜리무맙 또는 이들의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 상기에서 본원에서 나타낸 Kabat-정의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 상기에서 본원에서 나타낸 Kabat-정의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함한다. 당업자는 당업자에게 공지된 Chothia-정의, Abm-정의, 또는 다른 CDR 정의를 쉽게 확인할 수 있을 것이다. 특정한 양태에서, 본원에서 제공되는 방법에서 이용하기 위한 트레멜리무맙 또는 이의 항원-결합 단편은, 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 제6,682,736호에 개시된 바와 같은 11.2.1 항체의 가변 중쇄 및 가변 경쇄 CDR 서열을 포함한다.

다른 항-CTLA-4 항체는, 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 제20070243184호에 기재된다. 하나의 구현예에서, 항-CTLA-4 항체는 MDX-010; BMS-734016으로도 명명된 이필리무맙(Ipilimumab)이다.

OX40 작용제

OX40 작용제는 항원에 의한 프라이밍 동안 또는 그 직후 CD4⁺ T-세포 상의 OX40 수용체와 상호작용하여 항원에 대한 CD4⁺ T-의 응답을 증가시킨다. 항원 특이적 CD4⁺ T-세포 상의 OX40 수용체와 상호작용하는 OX40 작용제는 항원 단독에 대한 응답과 비교하여 T 세포 증식을 증가시킬 수 있다. 항원에 대한 상승된 응답은 OX40 작용제의 부재 하에서보다 실질적으로 더 긴 시간 기간 동안 유지될 수 있다. 따라서, OX40 작용제를 통한 자극은 항원, 예를 들어 종양 세포의 T-세포 인식을 증대시킴으로써 항원 특이적 면역 반응을 향상시킨다. OX40 작용제는 예를 들어 그 전문이 본원에 참조로 포함된 미국 특허 제6,312,700호, 미국 특허 제7,504,101호, 미국 특허 제7,622,444호, 및 미국 특허 제7,959,925호에 개시되어 있다. 암 치료에서의 그러한 작용제의 사용 방법은 예를 들어 국제 공개 제2013/119202호 및 국제 공개 제2013/130102호에 개시되어 있으며, 상기 국제 공개 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

OX40 작용제는 OX40 결합 분자, 예를 들어, 결합 폴리펩티드, 예를 들어, OX40 리간드 ("OX40L") 또는 이의 OX40-결합 단편, 변이체, 또는 유도체, 예컨대 용해성 세포외 리간드 도메인 및 OX40L 융합 단백질, 및 항-OX40 항체 (예를 들어, 단클론 항체, 예컨대 인간화 단클론 항체), 또는 이들의 항원-결합 단편, 변이체 또는 유도체를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 항-OX40 단클론 항체의 예가 예를 들어 미국 특허 제5,821,332호 및 미국 특허 제6,156,878호에 개시되어 있으며, 이들의 개시 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 특정 구현예에서, 항-OX40 단클론 항체는 9B12, 또는 이의 항원-결합 단편, 변이체, 또는 유도체이며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된 문헌[Weinberg, A.D., et al.J Immunother 29, 575-585 (2006)]에 개시된 바와 같다.

특정 양태에서, 본 발명은 항체 VH 및 항체 VL을 포함하는 인간화 항-OX40 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서, VL은 기준 아미노산 서열

또는

에 대하여 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일 양태에서, 본 발명은 아미노산 서열

를 포함하는 항체 VL 및 아미노산 서열

를 포함하는 VH를 포함하는 인간화 항-OX40 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

특정 양태에서, 본 발명은 아미노산 서열

를 포함하는 항체 중쇄 또는 이의 단편 및 아미노산 서열

을 포함하는 항체 경쇄 또는 이의 단편을 포함하는 인간화 항-OX40 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다.

다른 구현예에서, OX40에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 단편은 mAb 9B12와 동일한 OX40 에피토프에 결합한다.

예시적인 인간화 OX40 항체는 문헌[Morris et al., MolImmunol. May 2007; 44(12): 3112-3121]에 개시되어 있으며, 하기 서열 (서열 번호 27)을 갖는다:

9B12는 인간 OX40 (CD134)의 세포외 도메인에 대하여 유도된 쥐과 IgG1, 항-OX40 mAb이다 (문헌[Weinberg, A.D., et al.J Immunother 29, 575-585 (2006)]). 이것은 OX40의 신호 전달에 대한 작용제 응답을 이끌어내는 그의 능력, 안정성 때문에, 그리고 하이브리도마에 의한 그의 고수준의 생성 때문에 항-OX40 단클론 항체의 패널로부터 선택되었다. 임상 응용에서의 사용을 위하여, 9B12 mAb를 pH 7.0의 인산염 완충 염수로 평형시키고, 그의 농도를 정용여과(diafiltration)에 의해 5.0 mg/ml까지 조정한다.

"OX40 리간드" ("OX40L") (또한 종양 괴사 인자 리간드 수퍼패밀리 구성원 4, gp34, TAX 전사-활성화 당단백질-1, 및 CD252로 다양하게 칭해짐)는 대체로 항원 제시 세포(antigen presenting cells; APC) 상에서 발견되며, 활성화 B 세포, 수지상 세포(dendritic cell; DC), 랑게르한스 세포(Langerhans cell), 형질세포양 DC, 및 대식세포 상에서 유도될 수 있다 (문헌[Croft, M., (2010) Ann Rev Immunol 28:57-78]). 활성화 T 세포, NK 세포, 비만 세포, 내피 세포, 및 평활근 세포를 포함하는 다른 세포가 염증성 사이토카인에 응답하여 OX40L을 발현할 수 있다 (상기 문헌). OX40L은 OX40 수용체에 특이적으로 결합한다. 상기 인간 단백질은 미국 특허 제6,156,878호에 개시되어 있다. 마우스 OX40L은 미국 특허 5,457,035호에 개시되어 있다. OX40L은 세포 표면 상에서 발현되며, 세포내, 막관통 및 세포외 수용체-결합 도메인을 포함한다. OX40L의 기능적 활성 용해성 형태는 예를 들어 미국 특허 제5,457,035호; 미국 특허 제6,312,700호; 미국 특허 제6,156,878호; 미국 특허 제6,242,566호; 미국 특허 제6,528,055호; 미국 특허 제6,528,623호; 미국 특허 제7,098,184호; 및 미국 특허 제7,125,670호에 개시된 바와 같이 세포내 및 막관통 도메인을 결실시킴으로써 생성될 수 있는데, 상기 미국 특허의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본원에 포함된다. OX40L의 기능성 활성 형태는 OX40에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 형태, 즉, OX40 "수용체 결합 도메인"을 보유하는 형태이다. 일례로는 인간 OX40L의 아미노산 51 내지 183이 있다. OX40L 분자 또는 유도체가 OX40에 특이적으로 결합하는 능력을 측정하는 방법이 하기에 논의되어 있다. OX40L 및 그의 유도체 (예컨대 OX40 결합 도메인을 포함하는 유도체)의 제조 및 사용 방법이 미국 특허 제6,156,878호; 미국 특허 제6,242,566호; 미국 특허 제6,528,055호; 미국 특허 제6,528,623호; 미국 특허 제7,098,184호; 및 미국 특허 제7,125,670호에 개시되어 있으며, 상기 미국 특허에는 또한 용해성 형태의 OX40L이 다른 펩티드, 예컨대 인간 면역글로불린("Ig") Fc 영역에 연결된 것을 포함하는 단백질이 또한 개시되어 있는데, 이는 배양된 세포로부터의 OX40 리간드의 정제를 용이하게 하도록, 또는 생체 내에서의 포유동물에의 투여 후 상기 분자의 안정성을 향상시키도록 생성될 수 있다 (미국 특허 제5,457,035호 및 미국 특허 제7,959,925호를 또한 참조하는데, 상기 둘 모두의 미국 특허는 그 전문이 본원에 참조로 포함됨).

본원에서 사용되는 바와 같이, "OX40L"이라는 용어는 전체 OX40 리간드, 용해성 OX40 리간드, 및 OX40 리간드의 기능성 활성 부분을 포함한다. 아미노산 서열이 천연 발생 OX40 리간드와는 다르지만 OX40 수용체에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 OX40 리간드 변이체가 OX40L의 정의 내에 또한 포함된다. 그러한 변이체는 미국 특허 제5,457,035호; 미국 특허 제6,156,878호; 미국 특허 제6,242,566호; 미국 특허 제6,528,055호; 미국 특허 제6,528,623호; 미국 특허 제7,098,184호; 및 미국 특허 제7,125,670호에 개시되어 있다. 관련 구현예에서, 본 발명은 OX40에 특이적으로 결합하는 능력이 상실된, 예를 들어 아미노산 51 내지 183이 상실된 OX40L의 돌연변이체를 제공하며, 여기서, 인간 OX40L의 수용체-결합 도메인의 위치 180의 페닐알라닌은 알라닌으로 대체되었다 (F180A).

OX40 작용제는 OX40L의 하나 이상의 도메인이 하나 이상의 추가의 단백질 도메인에 공유 결합된 융합 단백질을 포함한다. OX40 작용제로 사용될 수 있는 예시적인 OX40L 융합 단백질은 미국 특허 제6,312,700호에 개시되어 있으며, 상기 미국 특허의 개시 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일 구현예에서, OX40 작용제는 다량체형 (예를 들어, 삼량체형 또는 육량체형) OX40L 융합 단백질로 자가 조립되는 OX40L 융합 폴리펩티드를 포함한다. 그러한 융합 단백질은 예를 들어 미국 특허 제7,959,925호에 개시되어 있으며, 상기 미국 특허는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 다량체형 OX40L 융합 단백질은 대상체, 특히 인간 대상체에서, 고도로 안정한 삼량체 및 육량체로 자발적으로 조립되는 그의 능력으로 인하여, 항원 특이적 면역 반응을 향상시키는 데 있어서 증가된 효능을 나타낸다.

또 다른 구현예에서, 다량체 형태로 조립될 수 있는 OX40 작용제는 N-말단에서 C-말단 방향으로 하기를 포함하는 융합 폴리펩티드를 포함하며, 융합 폴리펩티드는 삼량체형 융합 단백질로 자가 조립될 수 있다: 면역글로불린 도메인 (여기서, 면역글로불린 도메인은 Fc 도메인을 포함함), 삼량체화 도메인 (여기서, 삼량체화 도메인은 코일드 코일(coiled coil) 삼량체화 도메인을 포함함), 및 수용체 결합 도메인 (여기서, 수용체 결합 도메인은 OX40 수용체 결합 도메인, 예를 들어, OX40L 또는 OX40-결합 단편, 이의 변이체 또는 유도체임). 일 양태에서, 다량체 형태로 조립될 수 있는 OX40 작용제는 OX40 수용체에 결합하여 적어도 하나의 OX40 매개 활성을 촉진할 수 있다. 특정 양태에서, OX40 작용제는 OX40 리간드의 세포외 도메인을 포함한다.

다량체 형태로 조립될 수 있는 OX40 작용제의 삼량체화 도메인은 개개의 OX40L 융합 폴리펩티드 분자의 삼량체형 단백질로의 자가 조립을 촉진하는 역할을 한다. 이와 같이, 삼량체화 도메인을 갖는 OX40L 융합 폴리펩티드는 삼량체형 OX40L 융합 단백질로 자가 조립된다. 일 양태에서, 삼량체화 도메인은 이소류신 지퍼(zipper) 도메인 또는 다른 코일드 코일 폴리펩티드 구조체이다. 예시적인 코일드 코일 삼량체화 도메인은 하기를 포함한다: TRAF2 (젠뱅크^® 등록 번호 Q12933, 아미노산 299 내지 348; 트롬보스폰딘(Thrombospondin) 1 (등록 번호 PO7996, 아미노산 291 내지 314; 마트릴린(Matrilin)-4 (등록 번호 O95460, 아미노산 594 내지 618; CMP (matrilin-1) (등록 번호 NP―002370, 아미노산 463 내지 496; HSF1 (등록 번호 AAX42211, 아미노산 165 내지 191; 및 쿠빌린(Cubilin) (등록 번호 NP―001072, 아미노산 104 내지 138. 특정한 구체적 양태에서, 삼량체화 도메인은 TRAF2 삼량체화 도메인, 마트릴린-4 삼량체화 도메인, 또는 이들의 조합을 포함한다.

MEDI6383은 특이적으로 TNFR 수퍼패밀리의 구성원인 인간 OX40 수용체에 결합하여 인간 OX40 수용체에 의한 신호 전달을 트리거링하는(trigger) 인간 OX40 리간드 IgG4P 융합 단백질이다. MEDI6383은 하기 3가지의 특유한 도메인으로 구성된다: (1) 동종삼량체(homotrimer)를 형성하여 OX40 수용체에 결합하는 인간 OX40 리간드 세포외 수용체 결합 도메인(receptor binding domain; RBD); (2) OX40 리간드 RBD의 동종삼량체 구조를 안정화하는 TNFR-결부 인자 2로부터 유래된 이소류신 지퍼 삼량체화 도메인; 및 (3) OX40 수용체에 결합될 때 융합 단백질의 Fcγ 수용체 클러스터링(clustering)을 용이하게 하고, 힌지 영역에서 세린의 프롤린으로의 치환(IgG4P)을 포함하여 두 세트의 OX40 리간드 RBD 동종삼량체의 안정성을 촉진하는 인간 IgG4 단편 결정화가능 감마(Fcγ) 도메인.

특정 구현예에서, OX40 작용제는 그의 혈청중 반감기가 증가되도록 변형된다. 예를 들어, OX40 작용제의 혈청중 반감기는 이종 분자, 예컨대 혈청 알부민, 항체 Fc 영역, 또는 PEG에의 콘쥬게이션(conjugation)에 의해 증가될 수 있다. 특정 구현예에서, OX40 작용제는 면역콘쥬게이트 및/또는 융합 단백질을 형성하도록 다른 치료제 또는 독소에 콘쥬게이션될 수 있다. 특정 양태에서, OX40 작용제는 활성제의 안정성을 촉진하고 투여를 용이하게 하도록 제형화될 수 있다.

항체

CTLA-4 및 PD-L1에 선택적으로 결합하고 CTLA-4 및 PD-L1의 결합 또는 활성화를 저해하는 항체가 본 발명의 방법에서 유용하다. OX40에 선택적으로 결합하여 이를 활성화시키는 항체가 본 발명의 방법에서 유용하다.

일반적으로, 항체는, 예를 들어, 전통적 하이브리도마 기법(문헌[Kohler and Milstein (1975) Nature, 256: 495-499]), 재조합 DNA 방법(미국 특허 제4,816,567호), 또는 항체로 수행되는 파지 디스플레이, 라이브러리(문헌[Clackson et al. (1991) Nature, 352: 624-628]; 문헌[Marks et al. (1991) J. Mol. Biol., 222: 581-597])를 이용하여 제조될 수 있다. 다른 항체 생산 기법에 대해서는 또한 문헌[Antibodies: A Laboratory Manual, eds. Harlow et al., Cold Spring Harbor Laboratory, 1988]을 참고한다. 본 발명은 임의의 특정한 원천, 기원 종, 생산 방법에 제한되지 않는다.

면역글로불린으로도 알려져 있는 온전한 항체는 전형적으로 각각 대략 25 kDa의 2개의 경쇄(L) 및 대략 50 kDa의 2개의 중쇄(H)로 이루어진 사량체성 글리코실화 단백질이다. λ쇄 및 κ쇄로 지칭되는 2가지 유형의 경쇄가 항체에서 확인된다. 중쇄 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 면역글로불린은 5가지 주요 클래스: A, D, E, G, 및 M으로 할당될 수 있고, 이들 중 몇몇은 서브클래스(이소형), 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 추가 구분될 수 있다.

상이한 클래스의 면역글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 배치는 당분야에 널리 공지되어 있다. 항체 구조의 리뷰를 위해서는 문헌[Harlow et al., 상기]을 참고하도록 한다. 간략하게, 각각의 경쇄는 N-말단 가변 도메인(VL) 및 불변 도메인(CL)으로 이루어진다. 각각의 중쇄는 N-말단 가변 도메인(VH), 3개 또는 4개의 불변 도메인(CH), 및 힌지 영역으로 이루어진다. VH에 가장 인접한 CH 도메인이 CH1로 명명된다. VH 및 VL 도메인은 프레임워크 영역으로 불리는 4개 영역의 상대적으로 보존된 서열(FR1, FR2, FR3, 및 FR4)로 구성되며, 이는 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 3개 영역의 고가변 서열을 위한 골격을 형성한다. CDR은 항원과의 특이적 상호작용에 관여하는 대부분의 잔기를 함유한다. 3개의 CDR은 CDR1, CDR2, 및 CDR3으로 불린다. 이에 따라, 중쇄 상의 CDR 구성요소는 H1, H2, 및 H3으로 불리는 반면, 경쇄 상의 CDR 구성요소는 L1, L2, 및 L3으로 불린다. CDR3 및 특히 H3은 항원-결합 도메인 내의 가장 큰 분자 다양성의 원천이다. H3은, 예를 들어, 2개 아미노산 잔기만큼 짧을 수도 있고 또는 26개 잔기를 초과할 수도 있다.

Fab 단편(Fragment antigen-binding)은 불변 영역 간 디설파이드 결합에 의해 공유 결합된 VH-CH1 및 VL-CL 도메인으로 구성된다. 숙주 세포에서 공동-발현되는 경우 Fv에서 비-공유 결합된 VH 및 VL 도메인이 해리되는 경향을 극복하기 위해, 소위 단일쇄(sc) Fv 단편(scFv)이 구축될 수 있다. scFv에서, 가요성이고 적절한 길이의 폴리펩티드는 VH의 C-말단을 VL의 N-말단으로, 또는 VL의 C-말단을 VH의 N-말단으로 결합시킨다. 가장 일반적으로, 15-잔기(Gly4Ser)3 펩티드(서열 번호 28)가 링커로서 이용되지만, 다른 링커도 당분야에 공지되어 있다.

항체 다양성은 가변 영역을 코딩하는 여러 생식계열 유전자 및 다양한 체세포 이벤트의 조합 조립의 결과이다. 체세포 이벤트에는 완전 VH 영역을 제조하기 위한 다양성(D)을 갖는 가변 유전자 절편 및 연결(J) 유전자 절편의 재조합 및 완전 VL 영역을 제조하기 위한 가변 및 연결 유전자 절편의 재조합이 포함된다. 재조합 공정은 그 자체가 부정확하여, V(D)J 접합부에서 아미노산 손실 또는 부가를 일으킨다. 이러한 다양성 기전은 항원 노출 전에 발달 중인 B 세포에서 일어난다. 항원 자극 후, B 세포에서 발현된 항체 유전자는 체세포 돌연변이를 거친다.

추산된 수의 생식계열 유전자 절편, 이들 절편의 무작위 재조합, 및 무작위 VH-VL 페어링에 기반하여, 최대 1.6×107의 상이한 항체가 생산될 수 있다(문헌[Fundamental Immunology, 3rd ed., ed. Paul, Raven Press, New York, N.Y., 1993]). 항체 다양성에 기여하는 다른 공정(예컨대 체세포 돌연변이)을 고려하면, 1×10¹⁰개 이상의 상이한 항체가 잠재적으로 생성될 수 있다고 여겨진다(문헌[Immunoglobulin Genes, 2nd ed., eds. Jonio et al., Academic Press, San Diego, Calif., 1995]). 항체 다양성에 관여되는 여러 공정으로 인해, 독립적으로 생성된 항체는 CDR에서 동일하거나 심지어 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 가질 가능성이 매우 적다.

예시적인 항-CTLA-4 및 항-PD-L1 CDR의 서열이 본원에서 제공된다. CDR을 수반하기 위한 구조는 일반적으로 항체 중쇄 또는 경쇄 또는 이의 일부일 것이며, 여기서 CDR은 천연 생성 VH 및 VL의 CDR에 대응하는 위치에 배치된다. 면역글로불린 가변 도메인의 구조 및 위치는, 예를 들어, 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, No. 91-3242, National Institutes of Health Publications, Bethesda, Md., 1991]에 기재된 바와 같이 결정될 수 있다.

본 발명의 항체(예를 들어, 항-CTLA-4, 항-PD-L1, 항-OX40)는 선택적으로 항체 불변 영역 또는 이의 부분을 포함할 수 있다. 예를 들어, VL 도메인은 그 C-말단에서, 인간 Cκ 또는 Cλ쇄를 포함하는 항체 경쇄 불변 도메인에 부착될 수 있다. 유사하게, VH 도메인에 기반하는 특정한 항원-결합 도메인은 임의의 항체 이소형, 예를 들어, IgG, IgA, IgE, 및 IgM 및 비제한적으로 IgG1 및 IgG4를 포함하는 임의의 이소형 서브-클래스에서 유래되는 면역글로불린 중쇄의 전부 또는 일부에 부착될 수 있다.

당업자는 본 발명의 항체가 CTLA-4 및 PD-L1과 다소 상이한 단백질을 검출하고, 측정하고, 저해하기 위해 이용될 수 있음을 인식할 것이다. 표적 단백질이 본원에서 기재되는 적어도 100, 80, 60, 40, 또는 20개의 인접 아미노산의 임의의 서열과 적어도 약 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상 동일한 서열을 포함하는 한, 항체는 결합 특이성을 보유할 것으로 예상된다. 동일성 백분율은 표준 정렬 알고리즘, 예를 들어, 문헌[Altshul et al. (1990) J. Mol. Biol., 215: 403-410]에 기재된 BLAST(Basic Local Alignment Tool), 문헌[Needleman et al. (1970) J. Mol. Biol., 48: 444-453]의 알고리즘, 또는 문헌[Meyers et al. (1988) Comput. Appl. Biosci., 4: 11-17]의 알고리즘에 의해 결정된다.

서열 상동성 분석에 부가하여, 에피토프 맵핑(예를 들어, Epitope Mapping Protocols, ed. Morris, Humana Press, 1996 참고) 및 이차 및 삼차 구조 분석이 수행되어 개시된 항체가 맡게 되는 특정한 3D 구조 및 이들과 항원의 복합체를 확인할 수 있다. 이러한 방법에는 비제한적으로 X-선 결정측정(Engstom (1974) Biochem. Exp. Biol., 11:7-13) 및 본원에서 개시된 항체의 실제 표시 컴퓨터 모델링이 포함된다(Fletterick et al. (1986) Computer Graphics and Molecular Modeling, in Current Communications in Molecular Biology, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.).

유도체

본 발명의 항체(예를 들어, 항-CTLA-4, 항-PD-L1, 항-OX40)에는 이들의 표적에 특이적으로 결합하는 능력을 포함하는 이들 서열의 변이형이 포함될 수 있다. 이러한 변이형은 당분야에 널리 공지된 기법을 이용하여 당업자에 의해 이들 항체의 서열로부터 유도될 수 있다. 예를 들어, 아미노산 치환, 결실, 또는 부가가 FR 및/또는 CDR에서 수행될 수 있다. FR에서의 변화는 보통 항체의 안정성 및 면역원성을 개선하기 위해 설계되지만, CDR에서의 변화는 전형적으로 그 표적에 대한 항체의 친화도를 증가시키기 위해 설계된다. FR의 변이형에는 또한 천연 생성 면역글로불린 동종이형이 포함된다. 이러한 친화도 증가-변화는 CDR을 변형하는 단계 및 그 표적에 대한 항체 친화도를 평가하는 단계가 관여되는 일상적 기법에 의해 실험적으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 보존적 아미노산 치환은 임의의 하나의 개시된 CDR 내에서 수행될 수 있다. 다양한 변형이 문헌[항체 Engineering, 2nd ed., Oxford University Press, ed. Borrebaeck, 1995]에 기재된 방법에 따라 수행될 수 있다. 이들에는 비제한적으로 서열 내 기능적으로 동등한 아미노산 잔기를 코딩하는 상이한 코돈의 치환에 의해 변형되어 "침묵" 변화를 일으키는 뉴클레오티드 서열이 포함된다. 예를 들어, 비극성 아미노산에는 알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판, 및 메티오닌이 포함된다. 극성 중성 아미노산에는 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신, 아스파라긴, 및 글루타민이 포함된다. 양으로 하전된(염기성) 아미노산에는 아르기닌, 라이신, 및 히스티딘이 포함된다. 음으로 하전된(산성) 아미노산에는 아스파르트산 및 글루탐산이 포함된다.

본 발명의 항체의 유도체 및 유사체는 재조합 및 합성 방법(문헌[Maniatis (1990) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.], 및 문헌[Bodansky et al. (1995) The Practice of Peptide Synthesis, 2nd ed., Spring Verlag, Berlin, Germany])을 포함하는, 당분야에 널리 공지된 다양한 기법에 의해 제조될 수 있다.

하나의 구현예에서, 본 발명의 VH 도메인의 아미노산 서열 변이형인 VH 도메인의 제조 방법은 본원에서 개시되는 VH 도메인의 아미노산 서열에서 하나 이상의 아미노산을 부가하거나, 결실하거나, 치환하거나, 삽입하는 단계, 선택적으로 이렇게 제공된 VH 도메인을 하나 이상의 VL 도메인과 조합하는 단계, 및 VH 도메인 또는 VH/VL 조합 또는 조합들을 항원에 대한 특이적 결합에 대해 평가하는 단계를 포함한다. 본원에서 개시된 VL 도메인의 하나 이상의 서열 변이형이 하나 이상의 VH 도메인과 조합되는 유사한 방법이 채용될 수 있다.

유사한 셔플링 또는 조합 기법은 또한 β-락타마제 유전자에 관한 기법을 기재하지만 그 접근이 항체 생성을 위해 이용될 수 있음을 관찰하는 문헌[Stemmer (Nature (1994) 370: 389-391)]에 의해 개시된다.

추가 구현예에서, 하나 이상의 선택된 VH 및/또는 VL 유전자의 무작위 돌연변이화를 이용하여 본원에서 개시된 서열로부터 유도되는 하나 이상의 서열을 수반하는 신규한 VH 또는 VL 영역을 생성할 수 있다. 이러한 기법의 하나인 오차-빈발(error-prone) PCR은 문헌[Gram et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. (1992) 89: 3576-3580)]에 기재된다.

이용될 수 있는 또 다른 방법은 VH 또는 VL 유전자의 CDR에 대한 돌연변이화를 지시하는 것이다. 이러한 기법은 문헌[Barbas et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. (1994) 91: 3809-3813) 및 Schier et al. (J. Mol. Biol. (1996) 263: 551-567)]에 의해 개시된다.

유사하게, 하나 이상의, 또는 모든 3개의 CDR이 VH 또는 VL 도메인의 레퍼토리 내로 그래프팅될 수 있고, 이어서 CTLA-4, 또는 PD-L1에 특이적인 항원-결합 단편에 대해 스크리닝된다.

면역글로불린 가변 도메인의 일부는 실질적으로 본원에서 나타내는 적어도 하나의 CDR, 및 선택적으로 본원에서 나타내는 scFv 단편으로부터의 개입 프레임워크 영역을 포함할 것이다. 이 부분에는 FR1 및 FR4 중 어느 하나 또는 둘 다의 적어도 약 50%가 포함될 수 있고, 이 50%는 FR1의 C-말단 50% 및 FR4의 N-말단 50%이다. 가변 도메인의 상당부의 N-말단 또는 C-말단 끝에서의 추가 잔기는 천연 생성 가변 도메인 영역과 정상적으로 연관되지 않는 것들일 수 있다. 예를 들어, 재조합 DNA 기법에 의한 항체의 구축은 클로닝 또는 다른 조작 단계를 촉진하기 위해 도입된 링커에 의해 코딩되는 N- 또는 C-말단 잔기의 도입을 일으킬 수 있다. 다른 조작 단계에는 면역글로불린 중쇄 불변 영역, 다른 가변 도메인(예를 들어, 디아바디의 생산에서), 또는 아래에서 추가로 상세히 논의되는 단백질성 표지를 포함하는 추가 단백질 서열에 가변 도메인을 연결하기 위한 링커의 도입이 포함된다.

당업자는 본 발명의 항체가 VL 또는 VH 도메인으로부터 하나의 CDR만을 함유하는 항원-결합 단편을 포함할 수 있음을 인식할 것이다. 단일쇄 특이적 결합 도메인 중 어느 하나가, 예를 들어 CTLA-4 및 PD-L1에 결합할 수 있는, 2-도메인 특이적 항원-결합 단편을 형성할 수 있는 상보적 도메인에 대해 스크리닝하기 위해 이용될 수 있다.

본원에서 기재되는 본 발명의 항체(예를 들어, 항-CTLA-4 및/또는 항-PD-L1)는 또 다른 기능적 분자, 예를 들어, 또 다른 펩티드 또는 단백질(알부민, 또 다른 항체 등)에 결합될 수 있다. 예를 들어, 항체는 화학적 가교에 의해 또는 재조합 방법에 의해 결합될 수 있다. 항체는 또한, 미국 특허 제4,640,835호; 미국 특허 제4,496,689호; 미국 특허 제4,301,144호; 미국 특허 제4,670,417호; 미국 특허 제4,791,192호; 또는 미국 특허 제4,179,337호에 나타낸 방식으로, 다양한 비단백질성 중합체 중 하나, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌에 결합될 수 있다. 항체는, 예를 들어, 이들의 순환 반감기를 증가시키기 위해, 중합체에 대한 공유 접합에 의해 화학적으로 개질될 수 있다. 이들을 부착하기 위한 예시적인 중합체 및 방법은 또한 미국 특허 제4,766,106호; 미국 특허 제4,179,337호; 미국 특허 제4,495,285호, 및 미국 특허 제4,609,546호에 나타난다.

개시되는 항체는 또한 원상태 패턴과 상이한 글리코실화 패턴을 갖도록 변형될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 탄수화물 모이어티가 결실될 수 있고/있거나 하나 이상의 글리코실화 부위가 원래 항체에 부가될 수 있다. 본원에서 개시된 항체에 대한 글리코실화 부위의 부가는 당분야에 공지된 글리코실화 부위 공통 서열을 함유하도록 아미노산 서열을 변형하여 달성될 수 있다. 항체 상에서 탄수화물 모이어티의 수를 증가시키는 또 다른 수단은 항체의 아미노산 잔기에 대한 글리코사이드의 화학적 또는 효소적 커플링에 의한다. 이러한 방법은 WO 87/05330 및 문헌[Aplin et al. (1981) CRC Crit. Rev. Biochem., 22: 259-306]에 기재된다. 항체로부터의 임의의 탄수화물 모이어티의 제거는, 예를 들어 문헌[Hakimuddin et al. (1987) Arch. Biochem. Biophys., 259: 52; 및 Edge et al. (1981) Anal. Biochem., 118: 131 및 Thotakura et al. (1987) Meth. Enzymol., 138: 350]에 기재된 바와 같이 화학적으로 또는 효소적으로 달성될 수 있다. 항체는 또한 검출 가능한, 또는 기능적인, 표지로 태그화될 수 있다. 검출 가능한 표지에는 방사선표지, 예컨대 131I 또는 99Tc가 포함되며, 이는 또한 통상적 화학을 이용하여 항체에 부착될 수 있다. 검출 가능한 표지에는 또한 효소 표지, 예컨대 홀스래디쉬 퍼옥시다제 또는 알칼린 포스파타제가 포함된다. 검출 가능한 표지에는 화학적 모이어티, 예컨대 바이오틴이 추가로 포함되며, 이는 특정한 검출 가능한 인지체 모이어티, 예를 들어, 표지된 애비딘에 대한 결합을 통해 검출될 수 있다.

CDR 서열이 본원에서 나타낸 것들과 약간만 상이한 항체는 본 발명의 범위 내에 포함된다. 전형적으로, 아미노산은 유사한 전하, 소수성, 또는 입체화학적 특징을 갖는 관련 아미노산에 의해 치환된다. 이러한 치환은 당업자의 일반 기술 수준 내일 것이다. CDR에서와는 다르게, 항체의 결합 특성에 유해한 영향을 미치지 않고 FR에서 보다 실질적인 변화가 수행될 수 있다. FR에 대한 변화에는 비제한적으로, 항원 접촉을 위해 또는 결합 부위의 안정화를 위해 중요한 비인간-유래 잔기의 인간화 또는 특정 프레임워크 잔기의 조작, 예를 들어, 불변 영역 클래스 또는 서브클래스의 변화, 효과기 기능, 예컨대 Fc 수용체 결합을 변형할 수 있는, 예를 들어 U.S. 특허 5,624,821 및 5,648,260 및 문헌[Lund et al. (1991) J. Immun. 147: 2657-2662 및 Morgan et al. (1995) Immunology 86: 319-324]에 기재되는 특정한 아미노산 잔기의 변화, 또는 불변 영역이 유도되는 종의 변화가 포함된다.

당업자는 상술된 개질이 모든 것을 포괄하는 것이 아니며, 여러 다른 개질이 본 개시의 교시의 견지에서 당업자에게 자명할 것임을 이해할 것이다.

공동-치료법

본원에서 제공되는 바와 같은 항-CTLA-4 항체, 항-PD-L1 항체, 또는 이들의 항원-결합 단편, 및 OX40 작용제 또는 이의 항원-결합 단편과 같은 본 발명의 조합물을 이용한 고형 종양을 갖는 환자의 치료는 상가 효과 또는 상승 효과로 이어질 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "상승적"이라는 용어는 요법제들의 조합물 (예를 들어, 항-CTLA-4 항체, 항-PD-L1 항체, 또는 이들의 항원 결합 단편, 및 OX40 리간드 융합 단백질의 조합물)을 나타낸다.

본 발명의 요법제들의 조합물 (예를 들어, 항-CTLA-4 항체, 항-PD-L1 항체, 또는 이들의 항원 결합 단편, 및 OX40 리간드 융합 단백질의 조합물)의 상승적 효과는 하나 이상의 치료제의 더 낮은 투여량의 이용 및/또는 고형 종양 환자에 대한 상기 치료제의 덜 빈번한 투여를 허용한다. 더 낮은 투여량의 치료제를 이용하고/하거나 상기 치료법을 덜 빈번하게 투여하는 능력은 고형 종양의 치료에서 상기 치료법의 유효성을 감소시키지 않고 대상체에 대한 상기 치료제의 투여와 연관된 독성을 감소시킨다. 또한, 상승적 효과는 고형 종양의 관리, 치료, 또는 완화에서 치료제의 효능 개선을 일으킬 수 있다. 치료제 조합의 상승적 효과는 어느 하나의 단일 치료법의 이용과 연관되는 유해하거나 원치 않는 부작용을 회피하거나 감소시킬 수 있다.

공동-치료법에서, 항-CTLA-4 항체, 항-PD-L1 항체, 또는 이들의 항원 결합 단편, 및 OX40 리간드 융합 단백질의 조합물이 선택적으로 동일 제약 조성물에 포함될 수 있거나 하나 이상의 별도의 제약 조성물에 포함될 수 있다. 특정 양태에서, 본 발명에 따른 제약 조성물은 제약상 허용가능한 비독성 살균 담체, 예컨대 생리식염수, 비독성 완충제, 방부제 등을 포함한다. 본원에 개시된 치료 방법에서 사용하기에 적합한 제형은 예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.) 16th ed. (1980)]에 개시되어 있다.

키트

본 발명은 항-종양 활성을 향상시키기 위한 키트를 제공한다. 일 구현예에서, 키트는 항-CTLA-4 항체, 항-PD-1 항체, 및 OX40 작용제 (예를 들어, OX40 리간드 융합 단백질)를 함유하는 치료 조성물을 제공한다.

일부 구현예에서, 키트는 치료 조성물을 함유하는 멸균 용기를 포함한다; 이러한 용기는 상자, 앰플, 병, 바이알, 튜브, 가방, 파우치, 블리스터-팩, 또는 당분야에 공지된 다른 적합한 용기 형태일 수 있다. 이러한 용기는 플라스틱, 유리, 라미네이트지, 금속 호일, 또는 약제 보유에 적합한 다른 물질로 제조될 수 있다.

요망될 경우, 키트는 본 발명의 치료 조합의 투여 지침을 추가로 포함한다. 특정한 구현예에서, 지침에는 다음 중 적어도 하나가 포함된다: 치료제의 설명; 투여 일정 및 항-종양 활성을 증강시키기 위한 투여; 주의; 경고; 적응증; 반대 적응증; 과투여 정보; 유해 반응; 동물 약리; 임상 연구; 및/또는 참고문헌. 지침은 용기(존재하는 경우) 상에 직접, 또는 용기에 적용되는 표지로서, 또는 용기 내에 또는 이와 함께 공급되는 별도 시트, 팜플렛, 카드, 또는 폴더로서 인쇄될 수 있다.

본 발명의 실시는, 달리 나타내지 않는 한, 분자 생물학(재조합 기법 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상적 기법을 채용하며, 이는 확실히 당업자의 수준 내에 속한다. 이러한 기법은 문헌, 예컨대 문헌["Molecular Cloning: A Laboratory Manual", second edition (Sambrook, 1989)]; 문헌["Oligonucleotide Synthesis" (Gait, 1984); "Animal Cell Culture" (Freshney, 1987)]; 문헌["Methods in Enzymology" "Handbook of Experimental Immunology" (Weir, 1996)]; 문헌["Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells" (Miller and Calos, 1987)]; 문헌["Current Protocols in Molecular Biology" (Ausubel, 1987)]; 문헌["PCR: The Polymerase Chain Reaction", (Mullis, 1994)]; 문헌["Current Protocols in Immunology" (Coligan, 1991)]에서 자세히 설명된다. 이들 기법은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 생산에 적용 가능하며, 이대로 본 발명의 수행 및 실시에서 고려될 수 있다. 특정한 구현에에 특히 유용한 기법은 후술되는 섹션에서 논의될 것이다.

하기 실시예는 본 발명의 검정, 스크리닝, 및 치료 방법을 어떻게 수행하고 이용하는지에 대한 전체 개시와 설명을 당업자에게 제공하기 위해 나타내며, 본 발명자들이 자신의 발명에 대해 간주하는 범위를 제한하려는 것은 아니다.

실시예

실시예 1. OX40 리간드 융합 단백질, 항- CTLA -4 항체 및 항-PD-L1 항체의 조합물은 동계 모델에서 암세포주의 성장을 저해하였다

mOX40L FP (마우스 OX40 리간드 융합 단백질), 항-PD-L1 (10F.9G2), 및 항-CTLA-4 (9D9)의 항종양 활성을 마우스 동계 육종 모델인 MCA205에서 단일요법제로서, 이중 병용 요법제로서, 또는 삼중 병용 요법제서 평가하였다. mOX40L FP를 10F.9G2 및 9D9와 조합하여 투여하는 것은 대조 물품들 또는 상기 에이전트들 중 임의의 것을 단독으로 또는 이중 병용하여 투여하는 것보다 더 큰 항종양 활성으로 이어졌다.

대조 물품을 하기와 같이 획득하였다: 항-CTLA-4 (9D9, 미국 뉴햄프셔주 웨스트 레바논 소재의 바이오엑셀(BioXcell)); 항-PD-L1 (10F.9G2, 미국 뉴햄프셔주 웨스트 레바논 소재의 바이오엑셀); 및 OX40L FP (마우스 OX40L 융합 단백질, 미국 메릴랜드주 게이더스버그 소재의 메드이뮨(MedImmune)). MEDI6383, MEDI4736 및 트레멜리무맙은 각각 마우스 OX40, PD-L1 또는 CTLA-4를 인식하지 않는다. 마우스 OX40에 결합하고, OX40의 신호 전달을 트리거링하는 쥐과 OX40 리간드 IgG1 융합 단백질 (mOX40L FP)을 생성하고, MEDI6383에 대한 대리 마우스 OX40 작용제로서 사용하였다. 10F.9G2는 마우스 PD-L1에 대한 구매가능한 래트 IgG2b 항체이며; 9D9는 마우스 CTLA-4에 대한 구매가능한 마우스 IgG2b 항체이다. 이와 같이, 그 효과 및/또는 활성은 인간에서의 것에 상응할 것으로 예상된다 (예를 들어, 인간 항체, 아미노산 등을 이용할 때). 대조 물품을 하기와 같이 획득하였다: OX40L FP Y182A (Y의 A로의 아미노산 치환을 갖는 마우스 OX40 리간드 융합 단백질, 미국 메릴랜드주 게이더스버그 소재의 메드이뮨); 마우스 IgG2b 이소타입 대조구 (MPC-11, 미국 뉴햄프셔주 웨스트 레바논 소재의 바이오엑셀); 및 래트 IgG2b 이소타입 대조구 (MPC-11, 미국 뉴햄프셔주 웨스트 레바논 소재의 바이오엑셀). Y182A 돌연변이 마우스 OX40L 마우스 IgG1 융합 단백질 대조구는 mOX40L이 마우스 OX40에 결합하는 것을 방지하지만, mOX40L의 전체 구조에는 영향을 주지 않는 수용체-결합 도메인의 위치 182에서의 단일 아미노산 돌연변이 (Y의 A 아미노산으로의 변화)를 갖는 mOX40L FP를 포함한다. OX40L FP Y182A는 천연 마우스 또는 인간 OX40에 결합하지 않으며 따라서 OX40L:OX40 상호작용에 대한 음성 대조구로서의 역할을 한다.

MCA205 동계 종양을 하기와 같이 C57BL/6 마우스에서 확립하였다. MCA205 세포를 프로비던스 캔서 센터(Providence Cancer Center) (미국 오리건주 포틀랜드 소재)로부터 획득하고, 10% 소 태아 혈청 (미국 캘리포니아주 칼스배드 소재의 라이프 테크놀로지즈(Life Technologies))이 보충된 RPMI 1640 배지 (로스웰 파크 메모리알 인스티튜트(Roswell Park Memorial Institute) 1640 배지, 미국 캘리포니아주 칼스배드 소재의 라이프 테크놀로지즈)에서 성장시켰다. MCA205는 화학적으로 유도된 마우스 연조직 육종 종양 세포이다. 7 내지 9주령의 C57BL/6 마우스 (미국 인디애나주 인디애나폴리스 소재의 할란 래보러토리즈, 인크.(Harlan Laboratories, Inc.))의 우측 옆구리 내에 인산염 완충 염수 0.1 mL에 현탁시킨 2.5 x 10⁵개의 MCA205 세포를 피하(SC) 주사함으로써 동종이식편을 확립하였다. C57BL/6 (총 108마리) 암컷 마우스를 이 연구에서 사용하였다. 이식한지 11일 후, 종양이 코호트당 185 mm³ ± 1 mm³의 평균 부피까지 성장한 후 C57BL/6 마우스를 무작위로 할당하였다. 군의 명칭, 동물의 수, 용량 수준, 및 투약 일정이 표 1에 제시되어 있다.

모든 테스트 물품 및 대조 물품을 복강내(IP) 주사에 의해 투여하였다. 동물 치환은 없었다. 마우스의 종합 건강을 불리한 임상 징후에 대하여 매일, 그리고 체중에 대하여 격주로 모니터링하였다. 뒷다리 마비, 호흡 곤란, 20%의 체중 감소, 2000 mm³ 초과의 종양 부피 또는 궤양성 또는 괴사성 종양이 주지될 경우, 동물을 CO₂를 이용한 질식에 의해 즉각적으로 인도적으로 희생시켰다. 모든 실험을 실험 동물의 인도적 처리 및 케어에 대한 AAALAC 및 메드이뮨 IACUC 지침에 따라 행하였다.

종양을 캘리퍼스를 이용하여 매주 3회 또는 2회 측정하고, 종양 부피를 하기 식을 이용하여 계산하였다: 종양 부피 = [길이 (mm) x 폭 (mm)²] /2 (여기서, 길이는 더 큰 쪽으로 정의되며, 폭은 길이에 수직인 더 작은 쪽으로 정의됨). 각각의 군의 항종양 효과를 종양 성장 저해(tumor growth inhibition; TGI)로서 표현하였으며, 이를 하기와 같이 계산하였다: TGI 퍼센트 = (1 - T/C) x 100 (여기서, T = 마지막 용량 후 처리군으로부터의 최종 종양 부피, C = 마지막 용량 후 대조군으로부터의 최종 종양 부피, 종양 성장 응답은, 처리 후 측정가능한 종양이 없을 경우 완전 관해(complete response; CR)로 분류되었다.

일원 분산 분석(one-way ANOVA)을 이용하여 평균 종양 부피 차이를 결정하였다. 유의한 F 검정의 경우, 던넷 다중 비교 검정(Dunnett's multiple comparison test) 또는 시닥 다중 비교 검정(Sidak's multiple comparison test)을 이용하였다 (적절할 경우). 적용가능할 경우 log10 변환을 종양 부피에 적용하여 이분산성을 설명하였다. <0.05의 p 값을 유의한 것으로 간주하였다. 생존성 곡선의 쌍들을 로그 순위 검정을 이용하여 비교하였다. 본페로니 교정(Bonferroni correction)을 다중 비교에 적용하여 패밀리별 오류율(familywise error rate)을 제어하였다. 윈도즈(Windows)용 프리즘(Prism) 6.03을 분석에 이용하였다. <0.05의 P 값 (비조정됨)을 유의한 것으로 간주하엿다.

단일 에이전트로서의 mOX40L FP, 항-CTLA-4 mAb 및 항-PD-L1 mAb를 이용한 마우스의 군의 처리는 마우스의 미처리 및 이소타입 대조군과 비교하여 MCA205 종양 세포의 성장을 감소시켰다 (표 2, 도 1a). 조합된 항-CTLA-4 mAb 및 항-PD-L1 mAb를 이용한 마우스의 처리는 단독의 각각의 에이전트 각각과 비교하여 MCA205 종양 세포의 유사한 수준의 종양 성장으로 이어졌다 (표 2, 도 1a). mOX40L FP를 항-PD-L1 mAb 또는 항-CTLA-4 mAb와 조합한 것을 이용한 마우스의 처리는 항-PD-L1 mAb 및 항-CTLA-4 mAb 단독 또는 대조군과 비교하여 MCA205 종양 세포의 성장을 감소시켰지만, 이는 mOX40L FP 단독과는 비교하지 않았다 (표 2, 도 1a). mOX40L FP를 항-PD-L1 mAb 및 항-CTLA-4 mAb와 조합한 것을 이용한 마우스의 처리는 대조군, 각각의 치료제 단독, 또는 임의의 상기 에이전트들 중 2가지의 조합물과 비교하여 MCA205 종양 세포의 성장을 감소시켰다 (표 2, 도 1a).

개개의 동물들 사이의 응답의 이질성이 동계 모델에서 흔히 관찰된다. 그러나, 병용 요법에서 사용될 때 mOX40L FP, 항-CTLA-4 mAb 및 항-PD-L1 mAb에 대한 응답의 증가는 개개의 동물 종양 성장 그래프로부터 명백하였다 (도 1b 내지 도 1d). 미처리 및 이소타입 대조구 처리 동물을 큰 종양 크기로 인하여 제45일에 안락사시켰다 (도 1b).

항-CTLA-4 mAb를 항-PD-L1 mAb와 조합하여 투여하면 동일 용량 수준의 단일요법제로서의 어느 하나의 상기 항체 단독을 이용한 처리에 비하여 항종양 활성 (TGI 퍼센트 및 CR의 수에 의해 정의되는 바와 같음)이 증가되지 않았다 (표 2, 도 1c). 완전 관해는, 항-CTLA-4 mAb로 처리할 경우 11마리의 마우스 중 0마리 및 항-PD-L1 mAb 단독으로 처리할 경우 11마리 중 1마리와 비교하여, 병용군에서 11마리의 마우스 중 0마리에서 관찰되었다 (표 2).

항-CTLA-4 mAb를 mOX40L FP와 조합하여 투여하면, 동일 용량 수준의 단일요법제로서의 mOX40L FP 단독을 이용한 처리에 비하여 유사한 항종양 활성 (유사한 TGI 퍼센트 및 CR의 수에 의해 정의되는 바와 같음)이 생성되고 (표 2, 도 1d); 동일 용량 수준의 단일요법제로서의 항-CTLA-4 mAb 단독을 이용한 처리에 비하여 더 큰 항종양 활성 (TGI 퍼센트 및 CR의 수에 의해 정의되는 바와 같음)이 생성되었다 (표 2, 도 1d). 완전 관해는, 항-CTLA-4 mAb로 처리할 경우 11마리 중 0마리 및 mOX40L FP 단독으로 처리할 경우 11마리의 마우스 중 2마리와 비교하여, 병용군에서 11마리의 마우스 중 5마리에서 관찰되었다 (표 2).

항-CTLA-4 mAb 및 항-PD-L1 mAb를 함께 mOX40L FP와 조합하여 투여하면, 동일 용량 수준의 단일요법제 또는 이중 요법 조합물로서의 상기 에이전트들 단독을 이용한 처리에 비하여 항종양 활성 (더 높은 TGI 및 더 많은 CR의 수에 의해 정의되는 바와 같음)이 증가되었다 (표 2, 도 1d). 완전 관해는, 항-CTLA-4/PD-L1 mAb 조합물로 처리할 경우 11마리 중 0마리, 항-CTLA-4/mOX40L FP 콤보(combo)로 처리할 경우 11마리의 마우스 중 5마리, 및 항-PD-L1/mOX40L FP 콤보로 처리할 경우 11마리의 마우스 중 3마리와 비교하여 삼중 병용군에서 11마리의 마우스 중 8마리에서 관찰되었다 (표 2).

미처리 마우스 또는 이소타입 대조구 또는 항-CTLA-4 mAb를 투여한 마우스 중 어떠한 것도 연구 마지막까지 생존하지 않았으며, 이때 마우스의 중간 생존 시간은 각각 23일, 23일 및 29일이었다 (도 1e). 항-PD-L1 mAb 또는 mOX40L FP의 투여는 각각의 에이전트의 경우 31일까지 증가된 중간 생존 시간으로 이어졌다. 각각 항-PD-L1 mAb 및 mOX40L FP의 투여 후 제70일에 연구 마지막까지 11마리의 마우스 중 1마리 및 11마리의 마우스 중 2마리가 생존하였다 (도 1e).

항-CTLA-4 mAb를 항-PD-L1 mAb와 투여하면 동일 용량 수준의 단일 요법제로 사용할 때의 어느 하나의 항체 단독을 이용한 처리에 비하여 활성이 증가되지 않았다 (도 1f). 중간 생존 시간은 29일 (항-CTLA-4 mAb) 및 31일 (항-PD-L1 mAb)과 비교하여 31일이었다. 어떠한 동물도 연구 마지막까지 생존하지 않았다.

항-CTLA-4 mAb를 mOX40L FP와 조합하여 투여하면 동일 용량 수준의 단일요법제로 사용할 때의 어느 하나의 항체 단독을 이용한 처리에 비하여 활성이 증가되었다 (도 1f). 중간 생존 시간은 31일 (항-PD-L1 mAb) 및 31일 (mOX40L FP)과 비교하여 45일이었다. 게다가, 항-PD-L1 mAb/mOX40L FP 병용군의 11마리의 마우스 중 3마리가, 11마리의 마우스 중 1마리 (항-PD-L1 mAb) 및 11마리의 마우스 중 2마리 (mOX40L FP)와 비교하여 연구 마지막까지 생존하였다.

항-CTLA-4를 항-PD-L1 mAb 및 mOX40L FP와 조합하여 투여하면, 동일 용량 수준의 어느 하나의 상기 에이전트 단독 또는 상기 에이전트들의 이중 조합물을 이용한 처리에 비하여 활성이 증가되었다 (도 1f). 연구 마지막까지 생존한 동물의 수로 인하여, 삼중 병용군의 중간 생존 시간을 계산하는 것이 가능하지 않았다. 게다가, 삼중 병용군의 11마리의 동물 중 8마리가, 항-CTLA-4/PD-L1 mAb 조합물로 처리할 경우 11마리 중 0마리 (p = 0.0002; 유의함), 항-CTLA-4/mOX40L FP 조합물로 처리할 경우 11마리 중 5마리 (p > 0.05; 유의하지 않음), 및 항-PD-L1/mOX40L FP 조합물로 처리할 경우 11마리 중 3마리 (p = 0.21; 유의하지 않음)와 비교하여 (다중 비교를 위한 본페로니 조정을 이용한 생존 곡선들의 쌍별 비교), 연구 마지막까지 생존하였다 (도 1f).

다른 구현예

상기 설명으로부터, 본원에서 기재된 발명에 다양한 이용 및 조건을 채택하여 변화 및 변형이 수행될 수 있음은 자명할 것이다. 이러한 구현예도 하기 청구범위의 범위 내이다.

본원에서 변수의 임의의 정의 내 요소 목록의 인용에는 임의의 단일 요소 또는 기재된 요소의 조합(또는 하위조합)으로서의 해당 변수의 정의가 포함된다. 본원에서 구현예의 인용에는 임의의 단일 구현예 또는 임의의 다른 구현예 또는 이의 일부와 조합된 구현예가 포함된다.

본 명세서에서 언급된 모든 특허 및 공보는 각각의 독립적 특허 및 공보가 구체적이고 개별적으로 참조로 포함됨을 나타내는 것과 동일한 정도로 본원에 참조로 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> MEDIMMUNE LIMITED <120> THERAPEUTIC COMBINATIONS AND METHODS FOR TREATING NEOPLASIA <130> BTO-200WO1 <140> <141> <150> 62/167,625 <151> 2015-05-28 <160> 28 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 2 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Arg Tyr Trp Met Ser 1 5 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 5 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro Trp Thr 1 5 <210> 9 <211> 139 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 9 Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 1 5 10 15 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys 20 25 30 Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln 35 40 45 Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 50 55 60 Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 65 70 75 80 Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys 85 90 95 Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 100 105 110 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 115 120 125 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 130 135 <210> 10 <211> 167 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 10 Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser 1 5 10 15 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro 20 25 30 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn 35 40 45 Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp 50 55 60 Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu 65 70 75 80 Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Pro Arg Gly Ala Thr Leu 85 90 95 Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 <210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 11 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His 1 5 10 <210> 12 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 12 Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15 <210> 13 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 13 Asp Pro Arg Gly Ala Thr Leu Tyr Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 14 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Ser Tyr Leu Asp 1 5 10 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 15 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 16 Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 17 <211> 402 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 17 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys Asp Gln Asp Lys Ile Glu Ala Leu Ser Ser Lys 225 230 235 240 Val Gln Gln Leu Glu Arg Ser Ile Gly Leu Lys Asp Leu Ala Met Ala 245 250 255 Asp Leu Glu Gln Lys Val Leu Glu Met Glu Ala Ser Thr Gln Val Ser 260 265 270 His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu Tyr 275 280 285 Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu Ile 290 295 300 Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe Tyr 305 310 315 320 Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser Leu 325 330 335 His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val Arg 340 345 350 Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys Val 355 360 365 Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe His Val 370 375 380 Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu Phe Cys 385 390 395 400 Val Leu <210> 18 <211> 277 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Met Cys Val Gly Ala Arg Arg Leu Gly Arg Gly Pro Cys Ala Ala Leu 1 5 10 15 Leu Leu Leu Gly Leu Gly Leu Ser Thr Val Thr Gly Leu His Cys Val 20 25 30 Gly Asp Thr Tyr Pro Ser Asn Asp Arg Cys Cys His Glu Cys Arg Pro 35 40 45 Gly Asn Gly Met Val Ser Arg Cys Ser Arg Ser Gln Asn Thr Val Cys 50 55 60 Arg Pro Cys Gly Pro Gly Phe Tyr Asn Asp Val Val Ser Ser Lys Pro 65 70 75 80 Cys Lys Pro Cys Thr Trp Cys Asn Leu Arg Ser Gly Ser Glu Arg Lys 85 90 95 Gln Leu Cys Thr Ala Thr Gln Asp Thr Val Cys Arg Cys Arg Ala Gly 100 105 110 Thr Gln Pro Leu Asp Ser Tyr Lys Pro Gly Val Asp Cys Ala Pro Cys 115 120 125 Pro Pro Gly His Phe Ser Pro Gly Asp Asn Gln Ala Cys Lys Pro Trp 130 135 140 Thr Asn Cys Thr Leu Ala Gly Lys His Thr Leu Gln Pro Ala Ser Asn 145 150 155 160 Ser Ser Asp Ala Ile Cys Glu Asp Arg Asp Pro Pro Ala Thr Gln Pro 165 170 175 Gln Glu Thr Gln Gly Pro Pro Ala Arg Pro Ile Thr Val Gln Pro Thr 180 185 190 Glu Ala Trp Pro Arg Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr Arg Pro Val Glu 195 200 205 Val Pro Gly Gly Arg Ala Val Ala Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val 210 215 220 Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu 225 230 235 240 Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His Lys Pro Pro Gly Gly 245 250 255 Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln Ala Asp Ala His Ser 260 265 270 Thr Leu Ala Lys Ile 275 <210> 19 <211> 183 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Met Glu Arg Val Gln Pro Leu Glu Glu Asn Val Gly Asn Ala Ala Arg 1 5 10 15 Pro Arg Phe Glu Arg Asn Lys Leu Leu Leu Val Ala Ser Val Ile Gln 20 25 30 Gly Leu Gly Leu Leu Leu Cys Phe Thr Tyr Ile Cys Leu His Phe Ser 35 40 45 Ala Leu Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val 50 55 60 Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln 65 70 75 80 Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn 85 90 95 Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu 100 105 110 Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln 115 120 125 Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr 130 135 140 Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu 145 150 155 160 Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn 165 170 175 Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu 180 <210> 20 <211> 410 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 20 Leu Ala Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 1 5 10 15 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 20 25 30 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 35 40 45 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 50 55 60 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 65 70 75 80 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 85 90 95 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 100 105 110 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 115 120 125 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 130 135 140 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 145 150 155 160 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 165 170 175 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 180 185 190 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 195 200 205 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 210 215 220 Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Leu Leu Gly Gly Gly Ser Ile Lys Gln 225 230 235 240 Ile Glu Asp Lys Ile Glu Glu Ile Leu Ser Lys Ile Tyr His Ile Glu 245 250 255 Asn Glu Ile Ala Arg Ile Lys Lys Leu Ile Gly Glu Arg Gly His Gly 260 265 270 Gly Gly Ser Asn Ser Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Phe Gln Ser 275 280 285 Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu 290 295 300 Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val 305 310 315 320 Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe 325 330 335 Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro 340 345 350 Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala 355 360 365 Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn 370 375 380 Thr Ser Leu Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile 385 390 395 400 His Gln Asn Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu 405 410 <210> 21 <211> 223 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Met Ala Cys Leu Gly Phe Gln Arg His Lys Ala Gln Leu Asn Leu Ala 1 5 10 15 Thr Arg Thr Trp Pro Cys Thr Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Ile Pro 20 25 30 Val Phe Cys Lys Ala Met His Val Ala Gln Pro Ala Val Val Leu Ala 35 40 45 Ser Ser Arg Gly Ile Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Ala Ser Pro Gly 50 55 60 Lys Ala Thr Glu Val Arg Val Thr Val Leu Arg Gln Ala Asp Ser Gln 65 70 75 80 Val Thr Glu Val Cys Ala Ala Thr Tyr Met Met Gly Asn Glu Leu Thr 85 90 95 Phe Leu Asp Asp Ser Ile Cys Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Gln Val 100 105 110 Asn Leu Thr Ile Gln Gly Leu Arg Ala Met Asp Thr Gly Leu Tyr Ile 115 120 125 Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly 130 135 140 Asn Gly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser 145 150 155 160 Asp Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe 165 170 175 Tyr Ser Phe Leu Leu Thr Ala Val Ser Leu Ser Lys Met Leu Lys Lys 180 185 190 Arg Ser Pro Leu Thr Thr Gly Val Tyr Val Lys Met Pro Pro Thr Glu 195 200 205 Pro Glu Cys Glu Lys Gln Phe Gln Pro Tyr Phe Ile Pro Ile Asn 210 215 220 <210> 22 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 22 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Ala Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 23 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 23 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Arg Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Ala Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 24 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 24 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Ser Tyr Asn Gly Ile Thr Tyr His Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Asn Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Ser Leu 65 70 75 80 Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Tyr Lys Tyr Asp Tyr Asp Gly Gly His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 25 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 25 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Ser Gly 20 25 30 Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile 35 40 45 Gly Tyr Ile Ser Tyr Asn Gly Ile Thr Tyr His Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Ile Thr Ile Asn Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Ser Leu 65 70 75 80 Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Tyr Lys Tyr Asp Tyr Asp Gly Gly His Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys 210 215 220 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 26 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 26 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Lys Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Ser Ala Leu Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 27 <211> 412 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 27 Ala Pro Leu Ala Thr Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 145 150 155 160 Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Glu Leu Leu Gly Gly Gly Ser Ile 225 230 235 240 Lys Gln Ile Glu Asp Lys Ile Glu Glu Ile Leu Ser Lys Ile Tyr His 245 250 255 Ile Glu Asn Glu Ile Ala Arg Ile Lys Lys Leu Ile Gly Glu Arg Gly 260 265 270 His Gly Gly Gly Ser Asn Ser Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Phe 275 280 285 Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe 290 295 300 Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn 305 310 315 320 Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly 325 330 335 Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu 340 345 350 Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met 355 360 365 Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr 370 375 380 Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile 385 390 395 400 Leu Ile His Gln Asn Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu 405 410 <210> 28 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 28 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15

Claims (28)

1. 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 OX40 작용제(agonist)를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
2. 제1항에 있어서, OX40 작용제는 OX40 리간드 융합 단백질 또는 항-OX40 항체 중 하나 이상인 방법.
3. 제2항에 있어서, OX40 리간드 융합 단백질은 MEDI6383인 방법.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736인 방법.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CTLA-4 항체는 트레멜리무맙(tremelimumab)인 방법.
6. MEDI4736 또는 이의 항원-결합 단편, 트레멜리무맙 또는 이의 항원-결합 단편, 및 MEDI6383을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 고형 종양을 치료하는 방법.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 생존성을 증가시키는 방법.
8. 제7항에 있어서, 상기 투여는 MEDI4736 단독, 트레멜리무맙 단독, 또는 MED6383 단독의 투여와 비교하여 생존성을 증가시키는 방법.
9. 제7항에 있어서, 상기 투여는 MEDI4736 및 트레멜리무맙, MEDI4736 및 MEDI6383, 및 트레멜리무맙 및 MEDI6383의 투여와 비교하여 생존성을 증가시키는 방법.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 종양 부피를 감소시키는 방법.
11. 제10항에 있어서, 상기 투여는 MEDI4736 단독, 트레멜리무맙 단독, 또는 MED6383 단독의 투여와 비교하여 종양 부피를 감소시키는 방법.
12. 제10항에 있어서, 상기 투여는 MEDI4736 및 트레멜리무맙, MEDI4736 및 MEDI6383, 및 트레멜리무맙 및 MEDI6383의 투여와 비교하여 종양 부피를 감소시키는 방법.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여는 정맥내 주입에 의한 것인 방법.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여는 정맥내 주입에 의한 것인 방법.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, MEDI6383 또는 이의 활성 단편의 투여는 정맥내 주입에 의한 것인 방법.
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 고형 종양은 난소암, 유방암, 결장직장암, 전립선암, 자궁경부암, 자궁암, 고환암, 방광암, 두경부암, 흑색종, 췌장암, 신장 세포 암종 또는 폐암인 방법.
17. 제16항에 있어서, 고형 종양은 삼중 음성 유방암인 방법.
18. 제17항에 있어서, 고형 종양은 비소세포 폐암인 방법.
19. 제18항에 있어서, 고형 종양은 편평 또는 비-편평 비소세포 폐암인 방법.
20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 인간 환자인 방법.
21. 유효량의 항-PD-L1 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 OX40 작용제와 제약상 허용가능한 부형제를 포함하는 제약 조성물.
22. 제21항에 있어서, OX40 작용제는 MEDI6383인 제약 조성물.
23. 제21항 또는 제22항에 있어서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736인 제약 조성물.
24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CTLA-4 항체는 트레멜리무맙인 제약 조성물.
25. 유효량의 MEDI4736 또는 이의 항원-결합 단편, 트레멜리무맙 또는 이의 항원-결합 단편, 및 MEDI6383과 제약상 허용가능한 부형제를 포함하는 제약 조성물.
26. 제21항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 정맥내 투여용으로 제형화된 제약 조성물.
27. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항의 제약 조성물 및 암 치료에 대한 설명서를 포함하는 키트.
28. 제27항에 있어서, 제1항의 방법에서 키트를 사용하는 것에 대한 설명서를 추가로 포함하는 키트.

Images