KR20170141239A - 변형된 케모카인 펩타이드 - Google Patents

변형된 케모카인 펩타이드 Download PDF

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Abstract

본 발명은 (a) N-말단에 ELR 서열을 가지며, (b) N-말단으로부터 3번째 시스테인 잔기 앞에 PASQF 서열이 위치하며, (c) N-말단으로부터 17번째 아미노산 잔기가 변형된, 아미노산 서열을 포함하는 변형된 케모카인 펩타이드를 제공한다. 본 발명의 케모카인 펩타이드는 암을 치료하고, 종양 증식을 저해하는데 사용될 수 있다.

Description

변형된 케모카인 펩타이드
본 발명은 치료 길항제일 수 있는 변형된 케모카인 펩타이드에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 암을 치료하고 종양의 증식을 저해하기 위한 변형된 케모카인에 관한 것이다.
케모카인은 유도가능한 분비성의 구조적으로 연관된 소형 분자 (약 8-14 kD)들로 구성된 일군이다. 케모카인은 CXC, CC, CX3C 및 C와 같이 4개의 하위군으로 분류된다. 케모카인은 또한 주류 기능성 하위군 2종으로도 분류된다: "항상성 케모카인 (homeostatic chemokine)" 및 "염증성 케모카인".
케모카인은 통상적으로 구조에 β-시트 3개를 가지고 있으며, C 말단에 α-나선 구조와 N-말단에 4개의 보존된 시스테인을 가지고 있다. 케모카인은 N-말단의 처음 시스테인 (Cys) 2개를 포함하는 서열을 기준으로 4종 (CXC, CC, CX3C 및 XC)의 하위군으로 분류되어 왔다. 4가지 타입들 중, CXC와 CC는 2종의 주 하위군인 반면, XC와 CX3C는 소수 하위군이다. 케모카인이 세포 상에서 케모카인 수용체와 접합된 이후에 반응이 발생한다. 케모카인 수용체로는 7종의 막관통 G 단백질 결합 수용체들이 있으며, 이들 각각 결합 타겟의 리간드 타입에 따라 CXCR, CCR, CXR 및 CX3CR로 지칭된다. 케모카인 수용체들은 CXCR1, CXCR2, CXCR4 등과 같이 번호가 추가로 지정된다. 그러나, 케모카인 수용체 단 하나만 타겟 세포 상에 제시되는 것도, 침윤된 염증 세포의 결합 타겟이 하나의 케모카인 수용체에만 특이적으로 결합하는 것도 아니기 때문에, 특정 자극 및 유도 상황에서는 여러 가지 세포들에서 수종의 케모카인 수용체들이 발현되어야 한다.
예를 들어, 글루타메이트 (E)-루신 (L)-아르기닌 (R) 특수 서열 (ELR 특수 서열)을 가진 ELR-CXC 케모카인은 N-말단에 특징적인 ELR-CXC 아미노산 서열을 가진 단백질을 지칭하며, X는 하전성 또는 비-하전성 극성을 가진 아미노산이거나 또는 X는 생략된다. ELR-CXC 케모카인은 발암 물질, IL-8 및 호중구-활성화 단백질-2 (NAP-2)의 발현을 조절할 수 있다. 이들 수용체는 CXCR1과 CXCR2이며, 주로 호중구를 타겟팅한다. ELR-CXC 케모카인은 호중구의 축적과 활성화를 촉진할 수 있다. 즉, 이러한 유형의 ELR-CXC 케모카인은 넓은 범위의 급성 및 만성 염증 질환을 야기하는데 중요한 역할을 담당한다. 이러한 염증으로는 건선 및 류마티스 관절염 등이 있다.
아울러, ELR-CXC 케모카인은 종양 발생 (tumor development)시 동반되는 혈관신생과 연관되어 있으며, 유도 기전은 이 타입의 케모카인, 특히 IL-8이 내피 세포 (EC) 상의 CXCR1 및 CXCR2와 접합함으로써 형성되는 활성화이다. 현재, 수많은 여러가지 타입의 종양들이 ELR-CXC 케모카인을 분비할 수 있으며, 이들 케모카인을 과발현하는 종양이 예후 불량과 연관되어 있다는 것이 입증되어 있다.
CXCR1 또는 CXCR2와 ELR-CXC 케모카인과의 접합을 길항 (anti-conjugation)하는 것은, CXCR1 또는/및 CXCR2 수용체의 활성화에 의해 유도되는 비정상적인 신호 전달을 저해함으로써, 이들 2가지 타입의 수용체에 의한 세포 활성화로 기인한 관련 질환들을 치료하는, 실현가능한 전략이다. 이에, 과학자들은 CXC 케모카인을 저해하기 위한 수용체 단백질의 유사체를 발굴 및 제조하는데 노력을 기울이고 있다.
이에, 본 출원은 선행 기술에서 직면한 전술한 상황을 해결하고자 한다.
암은 선진국에서 질환으로 인한 사망의 가장 주된 요인이다. 암을 초기 단계에 진단받으면, 성공적인 치료 가능성은 더 높다. 암 진단 및 치료에 상당한 진전이 이루어져 왔지만, 약물이 심각한 부작용을 야기하거나 또는 효과가 없는 문제가 있다. 따라서, 암을 치료하거나 또는 암을 예방하기 위한 새로운 방법 또는 새로운 조성물이 요구되고 있다.
전술한 문제를 해결하기 위해, 본 발명은 일 구현예에서 종양 증식을 저해하고 암을 치료하기 위한 변형된 케모카인을 제공한다.
본 발명은 펩타이드 서열을 포함하는 변형된 케모카인 펩타이드를 제공한다. 이 펩타이드 서열의 N-말단은 특수 서열 2종을 포함한다. 특수 서열 하나는 변형된 케모카인 펩타이드의 N-말단에 위치한 "(a) 글루타메이트 (E)-루신 (L)-아르기닌 (R) 서열"이다. 또 다른 특수 서열은 케모카인 펩타이드의 N-말단으로부터 3번째 시스테인 (C)의 상류에 이웃한 "(b) 프롤린 (P)-알라닌 (A)-세린 (S)-글루타민 (Q)-페닐알라닌 (F)-Cys3 서열"이다. 변형된 케모카인 펩타이드는 (a) 특수 서열, (b) 특수 서열 및 변형된 부위를 포함한다. 상기 언급된 변형된 부위는 변형된 케모카인 펩타이드의 N-말단으로부터 17, 12 또는 13번째 위치에 위치한다.
일 구현예에서, 17번째 위치에서 페닐알라닌 (F) 잔기가 루신 (L)으로 치환된다.
일 구현예에서, 변형된 케모카인 펩타이드의 비-변형된 전구체는 소스 케모카인으로부터 기원한다. 소스 케모카인은 N-말단에 처음 시스테인 2개 사이에 아미노산 잔기 0-2개가 위치되며, 아미노산 잔기의 수가 1-2개일 경우 아미노산 잔기는 하전된 극성 또는 비-하전된 극성을 가진다.
일 구현예에서, 소스 케모카인 펩타이드는 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 변형된 케모카인 펩타이드는 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12로부터 선택된다.
또한, 본 발명은 본 발명의 변형된 케모카인 펩타이드 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
일 구현예에서, 변형된 케모카인 펩타이드는 암을 치료하거나 또는 종양 증식을 저해하기 위해 사용된다.
본 발명은 치료학적인 유효량의 본 발명에 따른 변형된 케모카인 펩타이드 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 암을 치료하거나 또는 종양 증식을 저해하기 위한 약학적 조성물을 제공한다.
일 구현예에서, 암은 전립선암, 유방암, 자궁암, 백혈병, 난소암, 자궁내막암, 자궁경부암, 결장직장암, 고환암, 림프종, 횡문근육종, 신경모세포종, 췌장암, 폐암, 뇌암, 피부암, 위암, 구강암, 간암, 후두암, 담낭암, 갑상선암, 간암, 신장암 또는 비인두암을 포함한다.
도 1은 소스 케모카인 펩타이드 서열들 (서열번호 1-9), 즉 CXCR1 및/또는 CXCR2에 고 친화성을 가진 ELR-CXC 아미노산 서열들의 아미노산 서열을 비교 정렬한 것이다.
도 2는 본 발명에 따른 변형된 케모카인 펩타이드의 아미노산 서열들 (서열번호 10-12)을 비교 정렬한 것이다.
도 3은 상당량의 세포가 CXCL8 존재시 이동함을 예시한 것이다.
도 4는 이동한 세포의 수를 표시한 것이다. 검정색 막대는 CXCL8에 의해 촉발된 주화성을 표시한 것이다. 회색 막대는 ELR-CXC 케모카인과 CXCL8-IP10의 처리를 표시한 것이다. 백색 막대는 ELR-CXC 케모카인과 17LIP10의 처리를 표시한 것이다.
도 5는 처리군 (IL8-17LIP10)과 위약군 (식염수)의 종양 부피를 나타낸 것이다.
도 6은 처리군 (IL8-17LIP10)과 위약군 (식염수)의 종양 무게를 나타낸 것이다.
도 7은 처리군 (IL8-17LIP10)과 위약군 (식염수)의 미세혈관 밀도를 나타낸 것이다.
도 8은 CXCL8-IP10 또는 식염수를 주사한 이후의 종양 부피를 나타낸 것이다. 그룹 A에는 매주 4회로 CXCL8-IP10 500 ㎍/kg을 주사하였다. 그룹 B에는 매주 2회로 CXCL8-IP10 500 ㎍/kg을 주사하였다. 그룹 C에는 매주 2회로 CXCL8-IP10 250 ㎍/kg을 주사하였다. 그룹 D에는 매일 식염수 100 ㎕를 피하 주사하였다.
도 9는 마우스 폐에서 수득된 종양 조직의 외양 사진을 나타낸 것이다. 마우스에 매주 4번 CXCL8-IP10 500 ㎍/kg (도 9A) 또는 식염수 (도 9B)를 i.p.로 투여한 후 24일째에 마우스를 안락사시키며, 폐 조직을 수득하였다. 화살표로 표시된 흰색 누드는 폐에 전이된 암 병소이다.
도 10은 암 세포에서 CXCR1 및 CXCL8의 발현 수준을 예시한 것이다.
도 11은 주화성에 의해 본 발명의 길항 작용의 효과를 예시한 것이다.
본 발명은 새로운 케모카인을 제공한다. 본 발명의 새로운 케모카인은 ELR-CXC 케모카인으로부터 유래되거나 또는 CXCR1 또는 CXCR2에 고 친화성인 물질, 예를 들어, CXCL1 (서열번호 3), CXCL2 (서열번호 4), CXCL3 (서열번호 5), CXCL5 (서열번호 6), CXCL6 (서열번호 7), CXCL7 (서열번호 8), CXCL8 (서열번호 2) 및 hG31P (서열번호 1)로부터 유래된다. 본 발명에서, 변형은 본 발명에서 상기한 유형의 케모카인에 대해 수행되며, 주로 오리지널 30s-루프 영역을 치환하는 PASQF 특수 서열에 의존한다 (도 1). 이 PASQF는 본래 ELR-CXC 케모카인에 속하지 않는 (non-ELR-CXC 케모카인) CXCL10 케모카인에 존재한다.
일 구현예에서, 본 발명의 변형된 케모카인은 (a) 변형된 케모카인 펩타이드의 N-말단에 위치한 특수 서열 "-N'-글루타메이트 (E)-루신 (L)-아르기닌 (R)"과, (b) 케모카인 펩타이드의 N-말단으로부터 3번째 시스테인 (c)의 상류에 이웃한 특수 서열 "-N'-프롤린 (P)-알라닌 (A)-세린 (S)-글루타민 (Q)-페닐알라닌 (F)-Cys3"을 포함한다. 본 발명의 변형된 케모카인은 변형된 케모카인 펩타이드의 N-말단으로부터 17번째 위치에 돌연변이 (변형)를 더 포함한다는 점에 유념하여야 한다.
일 구현예에서, 17번 위치의 오리지널 아미노산 잔기는 페닐알라닌 (F)이고, 17번째 아미노산 잔기가 단일 아미노산 돌연변이에 의해 페닐알라닌 (F) 이외의 아미노산으로 치환된다. 다른 구현예에서, 17번 위치의 아미노산 잔기는 알라닌 (A), 시스테인 (C), 셀레노시스테인 (U), 아스파르트산 (D), 아스파라긴 (N), 글루탐산 (E), 글루타민 (Q), 글리신 (G), 히스티딘 (H), 루신 (L), 이소루신 (I), 라이신 (K), 피로라이신 (O), 메티오닌 (M), 프롤린 (P), 아르기닌 (R), 세린 (S), 트레오닌 (T), 발린 (V), 트립토판 (W), 티로신 (Y), 바람직하게는 루신 (L)으로 치환될 수 있다. 아미노산 치환되지 않은 소스 케모카인 펩타이드와 비교해, 변형된 케모카인은, 17번째 위치의 아미노산 잔기가 치환된 후, 보다 우수한 친화성을 가지며, 종양 증식을 효과적으로 저해할 수 있다.
선택적으로, 본 발명의 예시적인 구현예에서, 본 발명의 변형된 케모카인은 서열번호 10, 서열번호 11 및/또는 서열번호 12 (도 2)를 포함하지만, 이들로 한정되는 것은 아니다.
예를 들어, 서열번호 10은 아미노산 특수 서열 ELR-CXnX 규칙을 충족하기 위해 N-말단의 ELR-CQC 서열 뿐만 아니라 올리고펩타이드 서열 Pro-Ala-Ser-Gln-Phe (PASQF)을 포함한다. PASQF는 N-말단으로부터 3번째 시스테인 (10192)의 상류가 치환된 변형된 서열이며, 3번째 시스테인이 PASQF 올리고펩타이드 서열의 페닐알라닌에 인접하게 이웃한다. 보다 중요하게는, 17번째 위치의 아미노산 잔기 (제1 변형 위치)는 페닐알라닌이 아닌 루신이다.
도 2에 도시된 서열에서, ELR-CXC 케모카인 유사체인 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12는, 케모카인 펩타이드의 N-말단으로부터 3번째 시스테인 (C)의 상류에 위치한, PASQF 변형된 서열을 가진다. 또한, 본 발명에 따른 케모카인은 17번 위치의 아미노산 잔기가 루신으로 돌연변이된다.
본 발명의 변형된 케모카인, 이의 유사체 및 단편은 혈관신생과 관련된 질환을 치료할 수 있다. 혈관신생 관련 질환으로는, 염증성 장애, 만성 관절 류마티스 및 건선, 혈관의 부적절한 또는 부적절한 시기의 침입과 관련된 장애, 예를 들어 당뇨병성 망막증, 신혈관 녹내장, 재협착증, 및 세포 증식 장애/질환, 예를 들어, 신생물 (neoplasm) 및 암 관련 장애 (예, 전립선암, 유방암, 자궁암, 백혈병, 난소암, 자궁내막암, 자궁경부암, 결장직장암, 고환암, 림프종, 횡문근육종, 신경모세포종, 췌장암, 폐암, 뇌암, 피부암, 위암, 구강암, 간암, 후두암, 담낭암, 갑상선암, 간암, 신장암 또는 비인두암) 등이 있으나, 이들로 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 변형된 케모카인은 필요에 따라 통상적인 무독성의 약제학적으로 허용가능한 담체, 보강제 및 비히클을 함유한 투약 단위 제형 (dosage unit formulation) 형태로서 경구, 볼, 비경구, 흡입 스프레이, 직장, 진피내, 경피 또는 국소적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 변형된 케모카인은 단회 투여, 24시간의 기간에 걸친 다회 투여로 또는 연속 주입에 의해 투여될 수 있다. 연속 주입에 의해 투여되는 경우, 본 발명의 화합물은 비제한적인 예로 정맥내 중력 점적 (intravenous gravity drip), 정맥내 주입 펌프, 이식가능한 주입 펌프 또는 임의의 국소 경로 등의 당해 기술 분야에 잘 알려진 방법에 의해 공급될 수 있다. 치료 기간은 다수 인자들, 예를 들어, 혈관신생 병태의 중증도 및 지속 기간에 따라 달라질 것이다. 본 발명에 따른 케모카인의 단독 또는 다른 제제와의 조합한 개체 치료는 혈관신생이 없어질 때까지 지속될 수 있거나, 또는 치료는 개체의 일생 동안 지속될 것이다.
다른 구현예에서, 본 발명은 암을 치료하고 종양을 저해하기 위한 약학적 조성물을 제공한다. 약학적 조성물은 유효량의 본 발명에 따른 변형된 케모카인 또는 이의 유사체 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 담체로는 용매, 분산제, 코팅제, 항세균제/항진균제, 등장제 (isotonicity agent), 제어 방출제 (controlled release agent) 및/또는 이들의 유사체 등이 있을 수 있다.
실시예
1. 세포 주화성
보이덴 챔버 분석 (boyden chamber assay)을 이용해 LMVEC의 이동을 시험하였다. LMVEC는 2% FCS가 첨가된 HuMedia-EB2 상에서 8시간 동안 배양하였다. 세포를, 10 ㎍/ml 피브로넥틴이 코딩된 폴리카보네이트 막 (Sigma-Aldrich) 상에 1.2 x 105 세포/cm2 밀도로 접종하였다. CXCL8, CXCL6, CXCL1, CXCL5 및 CXCL8-IP10 또는 IL8-F17LIP10을 10 ng/ml로 보이덴 챔버 바닥에 각각 첨가하였다. 보이덴 챔버에서 LMVEC를 4시간 동안 37℃에서 배양한 다음, 고정하고 Diff-Quick (Harleco)으로 염색하였다. 이동한 세포의 수를 HPFs (X200)로 카운팅하였다.
그 결과, 케모카인 CXCL8이 존재할 때 많은 수의 세포가 이동한 것으로 나타났다 (도 3).
도 4에서, 검정색 막대는 케모카인과 CXCL8-IP10을 함께 처리한 경우를 표시한 것이고, 백색 막대는 케모카인과 IL8-17LIP10을 동시 처리한 경우를 표시한 것이다. 도 4에 따르면, CXCL8-IP10 및 IL8-17LIP10 둘다 세포 이동을 저해하는 효과를 나타냈으며, IL8-17LIP10이 CXCL8-IP10에 비해 세포 이동 저해 효과가 더 우수하였다.
2. 이종 종양을 가진 BALB /c 누드 수컷 마우스에서 변형된 케모카인 펩타이 드 투여에 의한 항종양 효과
BALB/c 누드 수컷 마우스 (Bltw:NU-Foxn1 nu , 4-6주령)를 입수하여, 층류식 기류 캐비넷 안에서 특수 병원균 무균 조건 하에 수용하였다. 동물은 수돗물과 표준 펠릿 사료에 자유롭게 접근할 수 있게 하였고, 건강 상태를 매일 체크하였다. 누드 마우스 이종이식 분석을 위해, 단층 배양한 GFP-양성 PC3 세포 (PC-3-GFP)를 수확하여, 누드 마우스 3마리의 우측 옆구리에 5 x 106 세포/마우스로 피하 접종하였다. 2-4주 후, 종양을 이식을 위해 회수하였다. 실험 종료 시점에, 이들 3마리의 마우스에서 종양 이종이식물을 적출하여, 단편으로 자르고 (1 mm3 단편), 국소 마취 하에 무균 수술 조건에서 이식용 누드 마우스의 전립선 조직으로 이식하였다. 동물 총 24마리에 이식을 실시하였다. 5일 후 (0일), 동물은 24일간 본 발명의 서열 처리군 (서열번호 13 (IL8-17LIP10), 0.5 mg/kg) (실험군) 또는 정상 식염수 100 ㎕ 피하 주사군 (대조군)으로 2개의 그룹 (동물 12마리/그룹)으로 나누었다. 증식하는 종양의 GFP 형광 사진을 디지탈 카메라를 사용해 515 nm 방출 필터가 장착된 실체 현미경의 광학 구성 (optical configuration)으로 12일, 18일 및 24일에 포착하였다. 종양 부피는 식: 부피 = (길이 x 너비2)/2로 계산하였다. 24일째에, 마우스들을 모두 안락사시키고, 종양의 GFP 형광 사진을 포착하였다. 혈관의 미세혈관 밀도를 식: 밀도 = 미세혈관 길이/종양 면적으로 계산하였다. 각 마우스에서 취한 종양 샘플을, 추후 면역조직화학적 분석을 위해, 표준 절차를 이용해 4% 파라포름알데하이드에서 고정하고, 파라핀으로 포매하였다.
12일, 18일 및 14일째의 처리 (실험)군과 위약 (대조)군의 종양 부피 결과를 도시한다 (도 5). 도 5에 따르면, 본 발명의 서열 (IL8-17LIP10)은 종양 증식을 효과적으로 저해한다. 처리군의 종양 부피는 위약군과 비교해 5배 이상으로 감소하였다. 이러한 처리군에서의 위약군 대비 종양 부피의 명백한 저해는 시간 경과에 따라 지속되었고, 점점 강해졌다.
24일째, 처리 (실험)군 및 위약 (대조)군의 종양 무게 결과를 도시한다 (도 6). 도 6에 따르면, 본 발명의 서열 (IL8-17LIP10)은 종양 증식을 효과적으로 저해하여, 종양 무게가 2배 이상 감소하였다.
3. 이종이식 종양 조직에 대한 면역조직화학적 분석
파라핀-포매된 전립선암 이종이식체의 단편을 탈랍(dewaxed)하고, PBS로 재수화하였다. 상세하게는, 단편들을 PBS로 3번 헹군 다음 10 mM 소듐 사이트레이트 (pH 6.0) 중에서 15분간 열-처리하였다. 여기에 3% 과산화수소를 10분간 처리하여 내인성 퍼옥시다제의 활성을 차단하였다. 단편들을 다시 PBS로 3번 헹구고, 단백질 차단 용액 (5% 정상 말 혈청/PBS, pH 7.5)과 함께 실온에서 15분간 인큐베이션한 다음 PBS로 3번 헹구고, 마우스 단일클론 anti-VEGF 항체 (1 : 50), 토끼 다클론 anti-NF-κB 항체 또는 염소 다클론 anti-CD31 항체 (1 : 50)와 함께 4℃에서 20시간 동안 인큐베이션하였다. 반응 후, 단편들을 PBS로 3번 헹구고, 적절한 이차 항체 희석액과 함께 37℃에서 40분간 인큐베이션하였다. PBS로 다시 3번 헹군 후, 단편을 바이오틴화된 염소 항-마우스 또는 항-토끼 항-염소 폴리-면역글로불린과 함께 암 조건 하에 30분간 인큐베이션하였다. 발색을 위해, 단편들을 PBS로 3번 헹구고, 다이아미노벤지디민 용액 중에 10분간 인큐베이션한 후 1분간 헤마톡실린으로 대조염색을 수행하였다 (Kollmar et al, 2007). 음성 대조군 단편은 일차 항체 대신 PBS와 함께 인큐베이션하였다. 사진 촬영한 부분을 회색 스케일 (스케일 0-255)로 변환하여 염색된 단편의 강도를 측정하고, Image-Pro 6.0 Microsoft로 계산하여 IOD (integrated optical density)로 표시하였다. 각 그룹에 대해 마우스 종양 이종이식물 5개를 분석하였다. 여러 단편에서 랜덤 선택한 종양 당 사진 촬영한 단편 5개를 사용해 각 종양 이종이식물의 평균 회색 값을 구하였다 (Csillik et al., 2005). CD31의 면역조직화학적 분석을 적용해 미세혈관 밀도를 측정하고, 미세혈관 밀도 측정 결과를 Image-Pro 6.0 Microsoft로 계산하여 평균 미세혈관 면적 %로 표시하였다.
처리 (실험)군과 위약 (대조)군의 미세혈관 밀도 결과를 도시한다 (도 7). 도 7에 따르면, 본 발명의 서열 (IL8-17LIP10)은 전립선암 이종이식 누드 마우스에서 혈관신생을 효과적으로 저해한다.
4. 이종이식 종양을 가진 C57BL /6 누드 마우스에서 변형된 케모카인 펩타이 드의 투여에 의한 항종양 효과
C57BL/6 누드 마우스를 층류식 기류 캐비넷 안에서 특수 병원균 무균 조건 하에 수용하였다. 동물은 수돗물과 표준 펠릿 사료에 자유롭게 접근할 수 있게 하였고, 건강 상태를 매일 체크하였다. LLW2 세포 (루이스 폐암) 5 x 106개를 마우스 3마리에 우측 사분면에 5 x 106 세포/마우스로 주사하였다. 2-4주 후, 종양을 이식을 위해 회수하였다. 본 실험에서는 마우스 24마리에 이식하였다. 이식 5일 후, 마우스 24마리를 4개의 그룹 (마우스 6마리/그룹)으로 나누었다. 그룹 A: 매주 4회 투여, CXCL8-IP10 500 ㎍/kg. 그룹 B: 매주 2회 투여, CXCL8-IP10 500 ㎍/kg. 그룹 C: 매주 2회 투여, CXCL8-IP10 250 ㎍/kg. 그룹 D: 식염수 100 ㎕을 매일 피하 투여함. 종양 부피는 식: 부피 = (길이 x 너비2)/2로 계산하였다. 24일째에, 마우스를 모두 안락사시키고, 종양의 GFP 형광 사진을 포착하였다. 혈관의 미세혈관 밀도를 식: 밀도 = 미세혈관 길이/종양 면적으로 계산하였다. 각 마우스에서 취한 종양 샘플을, 추후 면역조직화학적 분석을 위해, 표준 절차를 이용해 4% 파라포름알데하이드에서 고정하고, 파라핀으로 포매하였다.
도 8에 따르면, 그룹 A가 종양 증식을 저해하는데 가장 우수한 개선 효과를 나타내었다. 24일째에, 마우스 모두 안락사시켜 종양의 부피를 계산하였다. 그룹 D와 비교해, 매주 4회 CXCL8-IP10 (500 ㎍/kg)을 투여한 그룹 A에서 종양 부피가 30%까지 감소하였다. 이 결과는 CXCL8-IP10이 종양 증식을 유의하게 저해한다는 것을 의미한다.
도 9에 따르면, CXCL8-IP10에 의해 종양의 전이가 현저하게 억제되었다. 매주 4회로 CXCL8-IP10을 500 ㎍/kg 투여하거나 (도 9A) 또는 식염수 (도 9B)를 투여한 후, 24일째에 마우스를 안락사시켜 폐를 수득하였다. 화살표로 표시된 백색 부위는 폐에 퍼진 암 병소를 표시한다. CXCL8-IP10의 투여 후, 마우스 폐에서 전이성 병소는 발견되지 않았다.
5. 호중구 주화성 분석
개선된 보이덴 챔버 마이크로케모탁시스 분석 (improved Boyden chamber microchemotaxis assay)을 통해 호중구 주화성을 평가하였다. 백혈구를 일반적인 원심 구배에 의해 말초혈로부터 수집하였다. 저 농도 구배 영역의 하단에서 호중구를 취하였으며, 저장성 세포용혈 (hypotonic lysis)을 통해 적혈구 오염을 제거하였다. 정제된 호중구 (5 x 106/ml)를 HBSS 용액 (400 mg/L KCl, 60 mg/L KH2PO4, 8000 mg/L, NaCl, 350 mg/L NaHCO3, 90 mg/LNaH2PO4·7H2O, 1000 mg/L 글루코스)에 현탁한 다음 Calcein AM (Invitrogen, Stockholm, Sweden) 배지에서 30분간 37℃에서 배양하였다. 케모카인 (예, CXCL8 20 ng/ml)을 단독으로 또는 다른 길항제 (예, IL8-IP10F17L)와 조합하여 챔버 하단에 넣고, 정제된 호중구는 상단 챔버에 넣었다. 5 ㎛ 포어-크기의 폴리카보네이트 필터를 사용해, 상단 챔버와 하단 챔버를 분리하였다. 세포를 5% CO2 습윤 대기 하에 30분간 37℃에서 배양한 후, 비-이동 세포와 필터는 제거하고, 이동한 세포를 세포용혈 처리하여 VICTOR3 (Perkin-Elmer, UK, 여기: 485nm; 방출: 530nm)로 분석하였다. 세포 이동 %를 주화성 지수 (CI)로 표시하였다. CI = (길항제 강도 (intensity antagonist) - HBSS 강도)/(CXCL8 강도 - HBSS 강도) x 100%, 여기서 "길항제 강도"는 길항제에 의해 유발되는 세포 이동을 의미하고, "CXCL8 강도"는 CXCL8에 의해 유발되는 세포 이동을 의미하며, "HBSS 강도"는 중력에 의해 유발되는 세포 이동을 의미한다.
6. 종양 세포에서 CXCR1 /2 및 CXCL8 유전자의 발현 수준
암 세포주 (표 1)의 RNA를 TRIzol 시약 (Invitrogen, America)을 표준 방법에 따라 사용해 각각 추출하고, NanoDrop®ND-1000 분광광도계로 정량하였다. cDNA 역-전사 키트 (Prime Script™ RT 시약 키트, Takara, Japan)를 사용해 샘플 RNA의 역 전사를 수행하였으며, 샘플들은 유전자 발현 분석하기 전까지 얼음 위에 두었다. 내부 대조군은 GAPDH이었다. RT-PCR 반응은 SYBR (Premix Ex Taq™, Takara, Japan)에 의해 수행하였으며, 이때 CXCL의 프라이머로, CXCL8에 대한 프라이머 5'-gagcactccataaggcacaaa-3' (정방향) 및 5'-atggttccttccggtggt-3' (역방향); CXCR1에 대한 프라이머 5'-gaccaacatcgcagacacat-3' (정방향) 및 5'-tgcttgtctcgttccacttg-3' (역방향); CXCR2에 대한 프라이머 5'-ggctaagcaaaatgtgatatgtacc-3' (정방향) 및 5'-caaggttcgtccgtgttgta-3' (역방향)이 사용되었다.
유전자 발현은 하기 식으로 계산하였다: 유전자 발현 = 2- ΔΔCt
표 1. 종양 세포주
HCC827 폐 선암종
HCC827GR HCC827 게피티닙 (gefitinib)-내성
H1975 폐 선암종
H2170 폐 편평 세포암
H157 구강 편평 세포암
CT26 결장암 세포
CL1-0 폐 선암종
CL1-5 폐 선암종
PC9 폐 선암종
H3255 비-소 세포성 폐암
A549 폐 선암종
H520 폐 편평 세포암
H460 비-소 세포성 폐암
도 10은 RT-PCR에 의해 확인된 바와 같이 부분적으로 종양 세포에서 CXCR1이 고 수준으로 발현됨을 보여준다. 다수의 종양 세포들이 CXCR1 및 CXCR2 수용체의 기질인 CXCL8을 고도로 발현하였다. 즉, CXCR1/2 길항제를 이용해 종양 증식과 전이를 저해할 수 있다.
도 11은 추가적인 길항제 형태를 예시한다. CXCL8-IP10 펩타이드에서 제1 변형 위치, 및/또는 제2 변형 위치, 및/또는 제3 변형 위치의 아미노산 잔기(들)를 CXCR1/2에 의해 유도되는 길항제 특성을 개선하도록 변형시켰다. 이들 길항제는 종양 세포에서 CXCR1/2 수용체의 발현을 효과적으로 억제하거나 또는 종양 증식, 약물 내성, 전이 및 고 수준의 사이토카인 발현 (CXCL1, 2, 3, 5, 6, 7 및 8, 등)과 관련된 혈관신생을 저해하였다.
전술한 바와 같이, 본 발명의 변형된 케모카인은 효과적으로 종양 증식과 혈관신생을 저해할 수 있으며, 암을 치료할 수 있다.
(첨부된 모든 청구항, 요약 및 도면을 비롯하여) 본원에 기술된 각각의 특징은, 명백하게 달리 명시되지 않은 한, 동일한, 등가의 또는 유사 목적을 제공하는 대체 특징들로 치환될 수 있다. 즉, 달리 명시되지 않은 한, 본원에 기술된 각각의 특징은 등가의 또는 유사한 특징들로 된 전체 시리즈의 일 예일 뿐이다.
기술한 바와 같이, 본 발명의 예시된 구현예들에 대한 전술한 설명에 비추어 본 발명에 대해 이러한 변형들이 수행될 수 있으며, 이는 본 발명의 사상 및 범위내에 포함된다. 즉, 본 발명이 구체적인 구현예를 들어 본원에 기술되지만, 변형의 자유성, 다양한 변화 및 치환이 전술한 설명에 포함되는 것으로 의도된다. 일부 경우에, 본 발명에 대한 구현예들 중 일부 특징들은 기술된 본 발명의 사상 및 범위로부터 이탈되지 않는 한에서 다른 특징들을 상응하게 사용하지 않고도 채택가능한 것으로 이해될 것이다. 따라서, 본 발명의 본질적인 범위 및 사상에 맞추어 특정 상황 또는 물질에 다수의 변형을 가할 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> RISE TECHNOLOGY CO LTD <120> Modified Chemokine Peptide <130> THPA-150423-T904-PCT-KR <150> WO2016192067A1 <151> 2015-06-03 <160> 12 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 72 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The modified Chemokine Peptide, hG31P, synthesized from the laboratory <400> 1 Gly Ser Lys Glu Leu Arg Cys Gln Cys Ile Arg Thr Tyr Ser Lys Pro 1 5 10 15 Phe His Pro Lys Phe Ile Lys Glu Leu Arg Val Ile Glu Ser Pro Pro 20 25 30 His Cys Ala Asn Thr Glu Ile Ile Val Lys Leu Ser Asp Gly Arg Glu 35 40 45 Leu Cys Leu Asp Pro Lys Glu Asn Trp Val Gln Arg Val Val Glu Lys 50 55 60 Phe Leu Lys Arg Ala Glu Asn Ser 65 70 <210> 2 <211> 72 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ser Ala Lys Glu Leu Arg Cys Gln Cys Ile Lys Thr Tyr Ser Lys Pro 1 5 10 15 Phe His Pro Lys Phe Ile Lys Glu Leu Arg Val Ile Glu Ser Gly Pro 20 25 30 His Cys Ala Asn Thr Glu Ile Ile Val Lys Leu Ser Asp Gly Arg Glu 35 40 45 Leu Cys Leu Asp Pro Lys Glu Asn Trp Val Gln Arg Val Val Glu Lys 50 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Val Asn Val Arg Ser Pro 20 25 30 Gly Pro His Cys Ala Gln Thr Glu Val Ile Ala Thr Leu Lys Asn Gly 35 40 45 Lys Lys Ala Cys Leu Asn Pro Ala Ser Pro Met Val Gln Lys Ile Ile 50 55 60 Glu Lys Ile Leu Asn Lys Gly Ser Thr Asn 65 70 <210> 6 <211> 73 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Ala Val Leu Arg Glu Leu Arg Cys Val Cys Leu Gln Thr Thr Gln Gly 1 5 10 15 Val His Pro Lys Met Ile Ser Asn Leu Gln Val Phe Ala Ile Gly Pro 20 25 30 Gln Cys Ser Lys Val Glu Val Val Ala Ser Leu Lys Asn Gly Lys Glu 35 40 45 Ile Cys Leu Asp Pro Glu Ala Pro Phe Leu Lys Lys Val Ile Gln Lys 50 55 60 Ile Leu Asp Gly Gly Asn Lys Glu Asn 65 70 <210> 7 <211> 74 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Ser Ala Val Leu Thr Glu Leu Arg Cys Thr Cys Leu Arg Val Thr Leu 1 5 10 15 Arg Val Asn Pro Lys Thr Ile Gly Lys Leu Gln Val Phe Pro Ala Gly 20 25 30 Pro Gln Cys Ser Lys Val Glu Val Val Ala Ser Leu Lys Asn Gly Lys 35 40 45 Gln Val Cys Leu Asp Pro Glu Ala Pro Phe Leu Lys Lys Val Ile Gln 50 55 60 Lys Ile Leu Asp Ser Gly Asn Lys Lys Asn 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Ser Lys Pro 1 5 10 15 Leu His Pro Lys Phe Ile Lys Glu Leu Arg Val Ile Pro Ala Ser Gln 20 25 30 Phe Cys Ala Asn Thr Glu Ile Ile Val Lys Leu Ser Asp Gly Arg Glu 35 40 45 Leu Cys Leu Asp Pro Lys Glu Asn Trp Val Gln Arg Val Val Glu Lys 50 55 60 Phe Leu Lys Arg Ala Glu Asn Ser 65 70

Claims (12)

  1. 펩타이드 서열을 포함하는 변형된 케모카인 펩타이드 (modified chemokine peptide)로서,
    상기 펩타이드 서열의 N-말단이,
    (a) 상기 변형된 케모카인 펩타이드의 N-말단에 위치하는, 특수 서열 A로 규정되는, "글루타메이트 (E)-루신 (L)-아르기닌 (R)" 서열;
    (b) 케모카인 펩타이드의 N-말단으로부터 3번째 시스테인 (C)의 상류에 이웃한, 특수 서열 B로 규정되는, "프롤린 (P)-알라닌 (A)-세린 (S)-글루타민 (Q)-페닐알라닌 (F)-Cys3" 서열을 포함하며,
    상기 변형된 케모카인 펩타이드가 특수 서열 A, 특수 서열 B 및 변형된 부위 (modified position)로 구성되며, 상기 변형된 부위가 상기 변형된 케모카인 펩타이드의 N-말단으로부터 17, 12 또는 13번째 위치에 위치하는, 변형된 케모카인 펩타이드.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 변형된 케모카인 펩타이드는 N-말단으로부터 17번째 위치가 페닐알라닌 (F)에서 루신 (L), 발린 (V) 또는 이소루신 (I)으로 치환된, 변형된 케모카인 펩타이드.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 변형된 케모카인 펩타이드는 N-말단으로부터 12번째 위치가 트레오닌 (T)에서 세린 (S)으로 치환된, 변형된 케모카인 펩타이드.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 변형된 케모카인 펩타이드는 N-말단으로부터 13번째 위치가 티로신 (Y)에서 루신 (L), 페닐알라닌 (F), 트립토판 (W) 또는 이소루신 (I)으로 치환된, 변형된 케모카인 펩타이드.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 변형된 케모카인 펩타이드의 비-변형된 전구체가 소스 케모카인 펩타이드 (source chemokine peptide)로부터 기원하며,
    상기 소스 케모카인 펩타이드는 N-말단으로부터 첫번째 시스테인과 2번째 시스테인 사이에 0-2개의 아미노산 잔기(들)를 포함하며, 상기 아미노산 잔기(들)는 아미노산 잔기의 수가 1-2개일 경우 하전된 극성 또는 비-하전된 극성을 띠는, 변형된 케모카인 펩타이드.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 소스 케모카인 펩타이드가 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 변형된 케모카인 펩타이드.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 변형된 케모카인 펩타이드가 서열번호 10, 서열번호 11 및 서열번호 12로부터 선택되는, 변형된 케모카인 펩타이드.
  8. 제1항에 따른 변형된 케모카인 펩타이드 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 변형된 케모카인 펩타이드가 암을 치료하거나 또는 종양 증식을 저해하기 위해 사용되는, 약학적 조성물.
  10. 치료학적인 유효량의, 제1항에 따른 변형된 케모카인 펩타이드; 및
    약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는,
    암을 치료하고 종양 증식을 저해하기 위한 약학적 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 암이 전립선암, 유방암, 자궁암, 백혈병, 난소암, 자궁내막암, 자궁경부암, 결장직장암, 고환암, 림프종, 횡문근육종, 신경모세포종, 췌장암, 폐암, 뇌암, 피부암, 위암, 구강암, 간암, 후두암, 담낭암, 갑상선암, 간암, 신장암 또는 비인두암을 포함하는, 약학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 암은 CXCR1/2를 발현하는 세포 또는 CXCL8, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL5, CXCL6 및 CXCL7으로 이루어진 다량의 케모카인을 가진 세포를 특징으로 하며,
    상기 암이 케모카인 수용체를 발현하는 암 세포를 특징으로 하는, 약학적 조성물.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210091054A (ko) * 2020-01-10 2021-07-21 라이즈 바이오파마슈티컬즈, 인코포레이티드 (베이징) 항암 화학요법으로 인한 내성을 완화하고 항암 화학요법의 효과를 증진시키기 위한 약학적 조성물 및 그 용도

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107034272B (zh) * 2016-12-14 2020-09-29 河北医科大学第四医院（河北省肿瘤医院） Cxcl2在制备诊断或治疗肺腺癌工具中的应用
AU2020260381A1 (en) * 2019-10-30 2021-05-20 Rise Biopharmaceuticals Inc. Pharmaceutical compositions and use thereof for relieving anticancer drug resistance and enhancing sensitivity of anticancer drug

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100029562A1 (en) * 2008-05-21 2010-02-04 Gordon John R hG31P Expression System
US20130109614A1 (en) * 2011-10-26 2013-05-02 Jya-Wei Cheng Antagonists for diseases induced by cells with high-affinity elr-cxc chemokine receptor proteins

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE169638T1 (de) * 1991-12-04 1998-08-15 Biomedical Res Centre Ltd Analoge des menschlichen interleukin-8.
US5595756A (en) * 1993-12-22 1997-01-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents
CN101200502A (zh) * 2006-07-26 2008-06-18 趋化因子治疗剂公司 设计用于治疗人类疾病的干扰素诱导型蛋白-10(ip-10或cxcl10)趋化因子类似物
CA2773664A1 (en) * 2009-09-11 2011-03-17 Protaffin Biotechnologie Ag Composition for treatment of cxcl8-mediated lung inflammation

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100029562A1 (en) * 2008-05-21 2010-02-04 Gordon John R hG31P Expression System
US20130109614A1 (en) * 2011-10-26 2013-05-02 Jya-Wei Cheng Antagonists for diseases induced by cells with high-affinity elr-cxc chemokine receptor proteins

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Protein Expression and Purification, Academic Press, Vol.61(1):65-72(2008. 9. 1.) *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20210091054A (ko) * 2020-01-10 2021-07-21 라이즈 바이오파마슈티컬즈, 인코포레이티드 (베이징) 항암 화학요법으로 인한 내성을 완화하고 항암 화학요법의 효과를 증진시키기 위한 약학적 조성물 및 그 용도

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