KR102558988B1 - 항암제 내성을 완화하고 항암제의 민감성을 강화하기 위한 약학적 조성물 및 그 용도 - Google Patents

항암제 내성을 완화하고 항암제의 민감성을 강화하기 위한 약학적 조성물 및 그 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 새로운 변형된 케모카인 펩타이드를 제공한다. 새로운 변형된 케모카인 펩타이드는 암, 특히 약물-내성 암을 치료하고, 종양 증식을 보다 효과적으로 저해하기 위해 타겟화된 약물과 조합될 수 있다.

Description

항암제 내성을 완화하고 항암제의 민감성을 강화하기 위한 약학적 조성물 및 그 용도 {Pharmaceutical compositions and use thereof for relieving anticancer drug resistance and enhancing sensitivity of anticancer drug}
본 발명은 약학적 조성물에 관한 것이다. 상세하게는, 본 발명은 항암제 내성을 완화하고 항암제의 민감성을 강화하기 위한 약학적 조성물에 관한 것이다.
보다 상세하게는, 본 발명은 항암제 내성을 극복하고, 약물-내성 암 및 약물 내성 암 환자를 치료하고, 종양 증식 및/또는 전이를 저해하기 위한, 케모카인 유사체 펩타이드와 조합되는 타겟화된 약물을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
전세계적인 빠른 인구 증가와 고령화로, 주요 사망 원인으로서 부상하는 암의 중대성이 다수 국가들에서 일부 나타나고 있다. 즉, 암 발병률 및 사망률이 세계적으로 빠르게 증가하고 있다.
항암 요법은 암 치료에 필수적이다. 한편, 암은 대개 항암 요법에 대한 내성을 유발한다. 암 세포가 항암제에 대해 내성을 획득하게 되면, 세포는 대개 치료에 사용되지 않는 다른 항암제에도 내성을 나타낸다. 다시 말해, 약물 내성은 암 치료에 상당한 문제이다.
예를 들어, 티로신 키나제 저해제 (TKI)는 클리닉에서 진행성 EGFR 돌연변이 비-소세포 폐암 환자에 대한 표준 치료제이다 (Sharma SV, 2007). 1세대 EGFR-TKI 게피티닙 (Gefitinib) (상품명 이레사 (iressa)®)은 활성화 EGFR 돌연변이를 가진 NSCLC 환자들에서 현저한 성과 개선을 거두었다. 그러나, 12개월 동안의 반응 기간 중앙값 이후로, 모든 환자들에서 종양 내성이 발생하였으며, 이들 환자들 중 절반 이상은 EGFR T790M 내성 돌연변이의 출현이 원인이었다 (Wheeler DL, 2010).
아울러, ELR-CXC 케모카인은 종양 발생시 동반되는 혈관신생과 관련 있으며, 이의 유도 기전은 이러한 타입의 케모카인, 특히 CXCL8로 언급되는 케모카인이 CXCR1 및 CXCR2와 내피 세포 (EC) 상에서 컨쥬게이션함으로써 야기되는 활성화이다. 현재, 다수의 다양한 타입의 종양들이 ELR-CXC 케모카인을 분비할 수 있는 것으로 입증되어 있다. 예를 들어, 하나 이상의 ELR-CXC 케모카인이 암에서 줄기 세포 특성을 유도함으로써 EGFR 저해제에 대해 내성을 부여하는 것으로 확인되었다 (Liu YN, 2015).
공교롭게도, 종양은 기존 약물에 민감하지 않은 내성 돌연변이를 발현하기에, 치료 효과가 항상 지속되는 것은 아니다. 즉, 임상 실무에서 사용되는 다수의 여러가지 항종양 제제들이 존재하지만, 그 효능은 대부분의 사례들에서 충분하지 않으며, 이러한 요법에 민감한 질환 범주는 제한적이다.
이에, 일차성 및 획득 내성을 가진 종양을 치료 및 예방하는데 효과적인, 활성이 더욱 우수한 신규 제제, 및 이러한 조성물의 개발이 본 발명에서 현재 관심사로 남아있다.
이에, 본 발명에서는 선행 기술 분야에서 당면한 전술한 상황을 다루고자 한다.
본 발명의 과제는 약물 내성을 극복하기 위한 물질/의약제/약학적 조성물, 또는 항암제 내성을 극복하기 위한 물질/의약제/약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 측면은 암 치료 방법, 약물-내성 암의 치료 방법 및 약물-내성 암을 앓고 있는 개체와 같은 개체에서 암을 치료하는데 사용하기 위한 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 측면은, 하나 이상의 케모카인 유사체 펩타이드 및 하나 이상의 의약제를 포함하는 병용 요법을 개체에 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암 치료 방법을 제공한다.
다른 구현예들은, 타겟화된 약물, 약제학적으로 허용가능한 완충제, 희석제, 담체, 보강제 또는 부형제와 조합하여 투여하는 경우, 개체에서 암 치료용 의약제의 제조에 있어 케모카인 유사체 펩타이드의 용도; 및 케모카인 유사체 펩타이드와 조합하여 투여하는 경우, 개체에서 암 치료용 의약제의 제조에 있어 타겟화된 약물, 약제학적으로 허용가능한 완충제, 희석제, 담체, 보강제 또는 부형제의 용도를 제공한다.
본 발명의 상세한 설명은 첨부된 도면을 참조하여 후술한 구현예들로 제공된다.
도 1은 RISE P-8의 전장 아미노산 서열 및 구조를 나타낸 것이다.
도 2a-2d는 부모 세포 및 게피티닙-내성 세포의 CXCL8, CXCR1 및 CXCR2 mRNA 발현을 나타낸 것이다.
도 3a-3b는 부모 세포 및 게피티닙-내성 세포에서 게피티닙 투여에 따른 IL-8 mRNA 발현을 예시한 것이다.
도 4a-4d는 부모 세포 및 게피티닙-내성 세포에서 게피티닙 투여에 따른 CXCR1 및 CXCR2 mRNA 발현을 예시한 것이다.
도 5는 인간 호중구 반응에 대한 CXCL8을 통한 RISE P-8의 길항성을 보여주는 그래프이다.
도 6a-6b는 NSCLC 세포의 3D (현탁) 조건에서 IL-8, CXCR1 및 CXCR2 유전자의 발현을 나타낸 것이다.
도 7a-7b는 NSCLC 세포의 3D (현탁) 조건에서 RISE P-8이 IL-8 단백질의 발현을 현저하게 감소시킴을 나타낸 것이다.
도 8a-8d는 게피티닙-내성 암 세포에서 게피티닙 처리에 따른 CXCR1, CXCR2 및 CXCL8 유전자의 발현 수준을 게피티닙과 RISE P-8의 조합한 경우와 비교하여 나타낸 것이다.
도 9a-9b는 게피티닙-내성 NSCLC 세포의 세포 주기가 RISE P-8에 의해 G0/G1 기에서 정지됨을 나타낸 것이다.
도 10a-10b는 IL-8의 동시 처리시/무처리시 RISE P-8이 게피티닙-내성 NSCLC 세포주의 고정-독립적인 증식률을 저해할 수 있음을 예시한 것이다.
도 11a-11b는 게피티닙-내성 NSCLC 세포에서 RISE P-8이 장기 증식을 저해할 수 있음을 예시한 것이다.
도 12a-12b는 게피티닙-내성 NSCLC 세포에서 RISE P-8이 침습력을 저해할 수 있음을 예시한 것이다.
도 13a-13b는 루이스 폐 암종 세포에서 RISE P-8이 침습력을 억제할 수 있음을 예시한 것이다.
도 14a-14d는 RISE P-8 및 게피티닙의 조합 사용이 종양 증식을 저해하고, 생체내 수명을 연장함을 예시한 것이다.
도 15a-15c는 RISE P-8 및 게피티닙의 조합 사용이 생체내 IL-8, CXCR1 및 CXCR2 mRNA 발현을 약화시킴을 나타낸 것이다.
본 발명을 더욱 상세하게 기술하기에 앞서, 본 발명의 사상 및 범위 내에서 다양한 변화 및 수정이 당해 기술 분야의 당업자들에게 자명할 것이므로, 상세한 설명 및 구체적인 예가 본 발명의 구현예들을 나타내지만 단순 예로서 제공되는 것으로 이해되어야 한다. 당해 기술 분야의 당업자라면, 본원의 내용을 토대로, 본 발명을 전체 범위에서 활용할 수 있다. 달리 정의되지 않은 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어 및 특정 용어는 본 발명이 속하는 당해 기술 분야의 당업자에게 일반적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 가진다.
하기 정의는 정의된 용어를 명확하게 하기 위한 것일 뿐 제한하고자 하는 것은 아니다. 본원에 사용된 특정 용어가 구체적으로 정의되어 있지 않다면, 이들 용어가 규정되지 않는 것으로 간주되어서는 안된다. 오히려, 용어는 당해 기술 분야의 당업자에게 허용되는 의미로 사용된다.
본원에서, 용어 "약학적 조합물 (pharmaceutical combination)" 또는 "조합 (combination)"은, 케모카인 유사체 펩타이드일 수 있거나/타겟화된 약물과 조합된 케모카인 유사체 펩타이드일 수 있는, 치료학적 물질들의 조합 투여 (combined administration)를 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 치료학적 물질은, 동시에 또는 조합 파트너가 상승적인 효과를 발휘할 수 있는 시간 간격으로 분리하여 독립적으로 투여될 수 있는, 케모카인 유사체 펩타이드 또는/타겟화된 약물과 조합되는 케모카인 유사체 펩타이드를 포함한다.
본원에서, 용어 "상승적인" 또는 "상승적인 효과"는 본 발명의 조합으로 달성되거나 및/또는 본 발명의 암 치료 방법을 통해 달성되는 치료학적 효과를 의미하며; 이는 케모카인 유사체 펩타이드 및 타겟화된 약물을 단독으로 또는 분리하여 사용함으로써 발생되는 효과들의 합보다 크다. 유익하게는, 치료학적 물질들 간의 이러한 상승작용은 2종의 치료학적 물질들 중 하나 또는 둘다를 더 적은 양으로 사용가능하게 하거나, 동일한 투여량에서 더 높은 효능을 제공하거나, 및/또는 약물 내성 발생을 방지 또는 지연한다. 상승적인 효과는, 본원에 기술된 약학적 조합물 또는 조성물에 함유된 치료학적 물질의 공동-제형화 (co-formulating)에 의해, 또는 치료학적 물질을 단위 투약 형태를 통해 동시에 투여하거나 또는 동시에 또는 순차적으로 투여되는 분리된 제형들로서 투여함으로써, 달성할 수 있다.
본원에서, 용어 "치료학적 유효량"은, 암을 앓고 있는 특정 환자 (개체)에서 원하는 치료학적 반응을 구축하는데 효과적인, 케모카인 유사체 펩타이드 또는/타겟화된 약물과 조합된 케모카인 유사체 펩타이드의 양을 의미한다. 구체적으로, 용어 "치료학적 유효량"은, 투여시 원하는 치료학적 효과를 달성하게 될 치료학적 물질의 양을 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 원하는 치료학적 효과는 암 전이 등의 암 진행의 일부 또는 완전한 저해, 지연 또는 예방; 암 전이 등의 암의 재발 저해, 지연 또는 예방; 및/또는 개체에서 암의 개시 또는 발병의 예방을 포함한다. 치료학적 물질, 즉, 케모카인 유사체 펩타이드 또는 케모카인 유사체 펩타이드와 타겟화된 약물의 조합의 치료학적 함량과 관련하여, 개체 치료에 사용되는 각각의 치료학적 물질의 양은 적절한 의학적 판단 범위에서 원하지 않은 또는 심각한 부작용을 회피하기에 충분히 낮은 수준인 것으로 역시 고려된다. 조합 사용하는 경우, 치료학적 유효량은 최종 사용자의 나이 및 신체 상태, 암의 중증도, 치료 지속 기간, 임의의 다른 공존 용법의 특성, 치료에 채택된 치료학적 물질의 구체적인 타입, 치료학적 물질을 함유한 약학적 조성물에 이용되는 약제학적으로 허용가능한 특정 담체 및 기타 관련 인자에 따라 달라질 것이다.
본원에서, 용어 "개체"는 동물, 특히 포유류, 보다 구체적으로 인간을 지칭한다. 본원에서, 용어 "포유류"는 인간을 포함한 "포유류" 클래스에 속하는 온혈 척추동물을 지칭한다. 용어 포유류는 고양이, 개, 토끼, 소, 말, 양, 염소, 원숭이, 마우스, 랫, 모래쥐 (gerbil), 기니아피그, 돼지 및 인간과 같은 동물을 포함한다. 본원에서, 용어 "개체"는 용어 환자와 상호 호환적으로 사용될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, "이를 필요로 하는 개체"라는 표현은 암 치료가 필요한 개체를 의미한다. 대안적으로, "이를 필요로 하는 개체"는 암으로 진단된 개체 (환자)를 의미한다.
본원에서, "치료하는" 또는 "치료"는, 질환 또는 의학적인 상태의 개선, 즉, 개체/환자에서 질환 또는 의학적인 상태의 소거 또는 퇴행 유발; 개체/환자에서 질환 또는 의학적인 상태의 억제, 즉, 질환 또는 의학적인 상태의 진행 서행 또는 중단; 또는 개체/환자에서 질환 또는 의학적인 상태의 증상 완화를 포함하는, 포유류 (구체적으로, 인간 또는 반려동물)과 같은 개체/환자에서 질환 또는 의학적인 상태 (예, 암, 종양, 신생물 병태)의 치료 또는 처치를 의미한다.
본원에서, 용어 "약제학적으로 허용가능한"은 조성물에 사용되는 담체, 희석제, 부형제 및/또는 염이 제형의 다른 성분들과 혼용가능하여야 하며 이의 수용자에게 유해하지 않는 것을 의미한다. 또한, "약제학적으로 허용가능한"은, 조성물 또는 투약 형태가 동물 또는 인간과 같은 개체에 사용하기 적합한 적절한 의학적 판단 범위에 속하며, 합리적인 유익성/위해성 비율에 상응하여 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증이 없는 것을 의미한다.
"임상적 유익성"은 암을 치료하는 의사 또는 임상의에 의해 사용되는 표현이다. 이 용어는 요법 시술 중에 개체/환자가 당면하는 인정되거나 또는 인지되는 임의의 유익성을 포괄한다. 본원에서, 이 용어는 종양 크기 감소, 종양 증식의 억제 또는 감소, 진행 시간 지연, 새로운 종양 또는 병변 부재, 새로운 종양 형성 감소, 생존 또는 무진행성 생존 증가 및 전이 부재 중 하나 이상인, 하나 이상의 임상적 유익성을 포함하지만, 이로 한정되는 것은 아니다.
일 측면에서, 본 발명은 항암제 내성을 완화하고 항암제의 민감성을 강화하기 위한, 적어도 케모카인 유사체 펩타이드를 포함하는, 약학적 조성물을 제공한다. 또한, 약학적 조성물은 타겟화된 약물을 더 포함한다.
선택적으로, 본 발명의 예시적인 구현예에서, 본 발명의 케모카인 유사체 펩타이드는, 비-제한적으로, RISE P-8 (서열번호 1)을 포함한다.
본 발명에 따라 채택될 수 있는 RISE P-8 (서열번호 1)을 아래에 나타낸다:
서열번호 1:
GSKELRCQCIRSYSKPFHPKFIKELRVIPASQFCANTEIIVKLSDGRELCLDPKENWVQRVVEKFLKRAENS
아울러, RISE P-8은 CXCL8 (IL-8)의 유사체 단백질로서 명명되었으며, CXCR1 및 CXCR2의 길항제이다. RISE P-8의 전체 아미노산 서열 및 단백질 구조를 도 1에 나타낸다.
일 구현예에서, 본 발명에서, RISE P-8은 IL-8 (CXCL8)에 직접 결합하여, IL-8이 이의 수용체 CXCR1 및 CXCR2에 결합하는 것을 저해한다.
다른 구현예에서, 약학적 조성물은, 타겟화된 약물, 약제학적으로 허용가능한 완충제, 희석제, 담체, 보강제 또는 부형제를 포함하는, 의약제를 더 포함한다.
본 발명의 전술한 타겟화된 약물은 세포 표면 수용체 (또는 항원)에 대한 항체, 신호전달 경로의 소분자 저해제, mTOR 신호전달 경로 저해제, 항-혈관신생제 및 프로테아좀 저해제를 포함한다. 바람직하게는, 타겟화된 약물은 신호전달 경로의 소분자 저해제이다.
세포 표면 수용체 (또는 항원)에 대한 항체는, 비-제한적으로, 항-CD20 단일클론 항체 리툭시맵 (Rituximab) (Mabthera), 항-HER2/neu 항체 트라스투주맵 (Trastuzumab) (헤르셉틴 (herceptin)) 및 항-HER1/EGFR 항체 세툭시맵 (Cetuximab) (Erbitux)을 포함한다.
신호전달 경로의 소분자 저해제는, 비-제한적으로, EGFR-TK 저해제 (예, 게피티닙 (gefitinib), 다사티닙 (dasatinib), 에를로티닙 (erlotinib) (타르세바 (tarceva)), 이마티닙 (imatinib), 닐로티닙 (Nilotinib) (Tasigna), 라파티닙 (lapatinib), 소라페닙 (sorafenib), 서니티닙 (sunitinib), 아파티닙 (afatinib), 오시메르티닙 (osimertinib) (TAGRISSO) 및/또는 이의 유도체들), 　c-kit 티로신 키나제 저해제 및/또는 BCR-ABL 티로신 키나제 저해제 (예, 이마티닙 (imatinib), 닐로티닙 (nilotinib), 다사티닙 (dasatinib), VOTRIENT (파조파닙 (Pazopanib)))를 포함한다.
항-혈관신생제로는, 비-제한적으로, 항-VEGF 항체, 예를 들어 아바스틴 (avastin) (Bevacizumab), 혈관 내피 성장인자 수용체 (VEGFR) 저해제 (예, 소라페닙, 서니티닙 (sunitinib), 반데타닙 (Vandetanib))를 포함한다.
mTOR 신호전달 경로 저해제로는, 비-제한적으로, 템시롤리무스 및 에베롤리무스를 포함한다.
프로테아좀 저해제로는, 비-제한적으로, 보르테조밉 (bortezomib), 카르필조밉 (carfilzomib), 마리조밉 (marizomib), 이사조밉 (ixazomib), 오프로조밉 (oprozomib) 및 델란조밉 (delanzomib)을 포함한다.
케모카인 유사체 펩타이드와 타겟화된 약물 간의 중량비, 부피비 및 농도비는 특별히 제한되지 않는다. 당해 기술 분야의 당업자는 질환에 따라 케모카인 유사체 펩타이드와 타겟화된 약물 간의 적절한 비율을 선택할 수 있으며, 구체적으로, 타겟화된 약물과 조합되는 경우 케모카인 유사체 펩타이드는 상승적인 효과를 발휘한다. 일 구현예에서, 케모카인 유사체 펩타이드의 투여는 주 당 1-3회로 개체 (환자) 체중 kg 당 약 0.01 mg/kg 내지 약 500 mg이다.
아울러, 본 발명은 항암제 내성을 완화하고 항암제의 민감성을 강화하기 위한 약학적 조성물의 용도, 및 암 치료, 암 세포 증식 저해 및/또는 암 세포 전이 저해를 위한 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 개체의 혈관신생-관련 질환 또는 혈관신생-의존적인 질환을 저해할 수 있다. 혈관신생-관련 질환 또는 혈관신생-의존적인 질환으로는, 비-제한적으로, 혈관 침습 (vascular invasion) 및 비정상적인 세포 증식, 예를 들어 종양 또는 암을 포함한다. 본 발명에서, 암은, 비-제한적으로, 흉부암, 복부암, 위장암, 두경부암, 뇌암, 내분비암, 비뇨기 암, 남성 생식기계 신생물, 부인과 암, 혈액암, 피부암 및 육종을 포함한다.
흉부암은 소 세포성 폐암 (SCLC) 및/또는 비-소 세포성 폐암 (NSCLC) 등의 폐암으로부터 선택된다. NSCLC는 폐 선암종, 편평 세포암 및/또는 거대 세포 암종으로부터 선택될 수 있다. SCLC는 소 세포 암종 및 혼성 소 세포/거대 세포 암 또는 복합 소 세포성 폐암 (combined small cell lung cancer)으로부터 선택될 수 있다.
복부암으로는, 비-제한적으로, 간암, 결장직장암, 췌장암, 신장암, 위암 (stomach cancer 또는 gastric cancer), 부신피질 암, 원발성 복막암, 복막 중피종을 포함한다.
위장암으로는, 비-제한적으로, 식도암, 위암, 간암 (간세포암), 담낭암 & 담관암, 췌장암, 결장직장암, 소장암 및 항문암을 포함한다.
두경부암으로는, 비-제한적으로, 후드 및 하인두 암, 비강 및 코곁굴 암, 비인두암, 구강 및 구인두 암 및 침샘 암을 포함한다.
뇌암 타입으로는 원발성 뇌암 또는 이차성 뇌암을 포함한다. 뇌암은, 비-제한적으로, 성상세포종, 교모세포종, 수모세포종, 핍지교종, 신경교종 및 뇌 전이를 포함한다.
내분비암으로는, 비-제한적으로, 부신 종양, 신경내분비 종양, 부갑상선 종양, 뇌하수체 종양 및 갑상선 장애를 포함한다.
비뇨기 암으로는, 비-제한적으로, 방광암 및 요도암을 포함한다.
남성 생식기계 신생물로는, 비-제한적으로, 전립선 암종, 음경 암종, 고환의 정상피종 (testicular seminoma) 및 고환의 배아성 암종 (testicular embryonal carcinoma)을 포함한다.
부인과 암으로는, 비-제한적으로, 자궁경부암, 난소암, 자궁암 (자궁내막 암), 질암 및 외음부암을 포함한다.
혈액암으로는, 비-제한적으로, 백혈병, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 및 다발성 골수종을 포함한다.
피부암으로는, 비-제한적으로, 기저 세포 피부암, 편평 세포 피부암, 흑색종 피부암 및 메르겔 세포 피부암을 포함한다.
육종으로는, 비-제한적으로, 연조직 육종, 골육종 (osteosarcoma 또는 bone sarcoma) 및 횡문근육종을 포함한다.
신생물 및/또는 암은, 비-제한적으로, 유방암 및 신경모세포종을 더 포함한다.
일 구현예에서, 케모카인 유사체 펩타이드 또는 케모카인 유사체 펩타이드와 타겟화된 약물의 조합은, 비-제한적으로, 경구, 혈관내, 진피내, 경피, 근육내, 복막내, 종양내, 비경구, 코, 직장, 설하, 국소, 에어로졸 또는 기관지내 (intratrach) 등의 통상적인 투여 경로에 의해 투여할 수 있다.
일 구현예에서, 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 하나 이상의 타겟화된 약물(들)은 정제, 로젠지 (lozenges), 수성 또는 오일성 현탁제, 과립제, 산제, 카셰제, 유제, 캡슐제, 시럽제, 엘릭실제 (elixir) 등과 같은 경구 투여에 적합한 형태로 투여할 수 있다.
다른 구현예에서, 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 하나 이상의 타겟화된 약물(들)은 근육내, 척추강내, 피하, 복막내, 정맥내 볼루스 주사 또는 정맥내 주입에 의해서와 같이 비경구로 투여할 수 있다. 비경구 투여는 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 타겟화된 약물(들)을 용액 또는 현탁액에 투입함으로써 달성할 수 있다.
일 구현예에서, 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 하나 이상의 타겟화된 약물(들)은 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 하나 이상의 타겟화된 약물(들) 및 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 희석제, 부형제 또는 담체를 포함하는 약학적 조성물의 형태로 투여할 수 있다.
약학적 조성물은 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 하나 이상의 타겟화된 약물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 희석제, 부형제 또는 담체를 포함한다. 환제, 정제, 코팅 정제 및 경질 젤라틴 캡슐제를 제조하는 경우, 사용가능한 약학적 활성 부형제로는, 비-제한적으로, 락토스, 옥수수 전분 또는 이의 유도체, 아라비아 검, 마그네시아 (magnesia) 또는 글루코스 등을 포함한다. 연질 젤라틴 캡슐제 및 좌제의 경우, 사용될 수 있는 담체로는, 비-제한적으로, 지방, 왁스, 천연 또는 경화유 등을 포함한다. 용액제를 제조하는데 적합한 담체는 예를 들어 주사 용액이거나, 또는 유제 또는 시럽제의 경우에는 예를 들어 물, 생리 염화나트륨 용액 또는 알코올, 예를 들어, 에탄올, 프로판올 또는 글리세롤, 당 용액, 예를 들어 글루코스 용액 또는 만니톨 용액, 또는 언급된 다양한 용매들의 혼합물이다. 약학적 조성물에 사용되는 약제학적으로 허용가능한 희석제, 부형제 또는 담체는 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 타겟화된 약물(들)의 투여 경로 및 투약 형태에 따라 선택될 수 있는 통상적으로 공지된 약제학적으로 허용가능한 희석제, 부형제 또는 담체일 수 있다.
일반적으로, 약학적 용도로 의도된 조성물은 약학적 조성물의 제조 분야에서 공지된 임의의 방법에 따라 제조할 수 있다.
본원에 언급된 조성물은 경구 투여에 적합한 형태, 예를 들어 정제, 캡슐제, 로젠지 또는 과립제와 같은 고체 투약 형태; 유제, 용액제, 현탁제와 같은 액체 투약 형태; 비경구 주사 (정맥내, 피하, 근육내, 혈관내 주사 또는 주입 포함)에 적합한 형태, 예를 들어, 무균 용액, 현탁제 또는 유제; 또는 예를 들어 연고, 크림, 겔 또는 로션과 같은 국소 투여에 적합한 형태일 수 있다.
경구 투여하기 위한 조성물은 정제, 로젠지, 수성 또는 오일성 현탁제, 과립제, 산제, 카셰제, 유제, 캡슐제, 시럽제 또는 엘릭실제 형태일 수 있다. 경구 투여하기 적합한 조성물은 표준 비히클을 포함할 수 있다. 이러한 비히클은 바람직하게는 약학적 등급의 것이다.
연고 및 크림제의 경우, 활성 성분 (케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 타겟화된 약물(들))은 수중유 또는 유중수 베이스로 제형화될 수 있다.
근육내, 복막내, 피하 및 정맥내 사용할 경우, 활성 성분 (케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 타겟화된 약물(들))의 무균 용액이 통상적으로 사용되며, 용액의 pH는 적절하게 조정되고, 완충화되어야 한다.
나아가, 약학적 조성물에 함유된 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 타겟화된 약물(들)의 항암 효과는 적절한 제형화를 통해 지연 또는 연장할 수 있다.
투여를 위해 사용되는 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 타겟화된 약물(들)의 유효량은 질환 (암)의 중증도, 증상의 중증도, 개체 (환자)의 나이, 성별, 체중 및 민감성 차이, 투여 방식, 시간, 간격 및 지속 기간, 제형의 특성 및 타입 등에 따라 달라진다. 특정 구현예에서, 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 하나 이상의 타겟화된 약물(들)은, 양쪽 약물들이 여전히 활성을 발휘하는 시간대에 투여할 수 있다. 당해 기술 분야의 당업자라면 투여되는 치료학적 물질의 반감기를 확인함으로써 그러한 시간대를 결정할 수 있을 것이다. 전술한 바와 같이, 본 발명에 따른 약학적 조성물 및/또는 암의 치료 방법 및/또는 암 치료를 위한 용도에서, 케모카인 유사체 펩타이드 및 하나 이상의 타겟화된 약물(들)은 동시적으로 또는 순차적으로 투여될 수 있으며, 순차적으로 투여할 경우 임의 순서일 수 있다. 다른 구현예에서, 케모카인 유사체 펩타이드 및 타겟화된 약물(들)은 한가지 물질의 약동학적 최고 효과가 다른 물질의 약동학적 최고 효과와 동시에 존재하는 방식으로 투여될 수 있다.
그러나, 본 발명의 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 타겟화된 약물(들)은 대안적으로 하나 이상의 부가적인 암 치료제와 조합하여 사용하기 위한 것일 수 있다. 예를 들어, 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 타겟화된 약물(들)은 1종, 2종, 3종, 4종, 5종 또는 그 이상의 부가적인 암 치료제와 조합하여 사용될 수 있다.
본 발명에서, "조합하여"는, 하나 이상의 부가적인 암 치료제가 투여 중인 개체에게 약학적 조성물을 동일한 요법 코스에서 투여하는 것을 포함한다. 즉, 이 용어는, 약학적 조성물과 하나 이상의 부가적인 암 치료제 (예, 볼루스 투여 (bolus doses) 또는 주입)의 공동 투여 (concomitant administration)뿐 아니라 이들 암 치료제들의 시간적인 분리 투여를 포괄한다. 예를 들어, 약학적 조성물은, 임의의 다양한 인자, 예를 들어 증상의 중증도 등에 따라 약학적 조성물의 투여 전, 투여와 동시에 또는 투여 후 투여되는, 하나 이상의 부가적인 암 치료제를 포함하기 위해, 환자의 암 전문의에 의해 결정된 치료 계획/사이클로 투여할 수 있다.
다른 구현예에서, 특정 암을 치료하기 위한 케모카인 유사체 펩타이드 및/또는 타겟화된 약물(들)의 치료학적 유효량은 암의 타입과 특성, 크기, 진행 및 전이 상태에 따라 결정되며, 담당의와 상의하여 결정하여야 한다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 매달 1회, 매달 2회, 매달 3회, 격주로, 주당 1회, 주당 2회, 주당 3회, 주당 4회, 주당 5회, 주당 6회, 2일 간격으로, 매일, 매일 2회 또는 매일 3회로 투여된다.
사용되는 약학적 조성물의 투여량은 구체적인 케모카인 유사체 펩타이드의 활성 및 치료 중인 병태에 따라 달라질 것이며, 지침으로서 투여량은 1회 투여 당 체중 kg 당 0.01 내지 500 mg 범위, 특히 0.02 내지 1 mg 범위에서 선택되는 것으로 언급될 수 있다. 한편, 투약 용법은 대상 환자에게 적절한 수일간 계속될 수 있으며, 매일 용량은 적절한 경우 수회 분리 투여로 분할된다.
케모카인 유사체 펩타이드 투여에 대한 대표적인 비-제한적인 허용량은 주당 1-3회로 약 0.01 mg/kg 내지 약 500 mg/개체 (환자) 체중 kg이다.
게피티닙 투여에 대한 대표적인 비-제한적인 허용량은 1일당 1회로 약 250 mg/개체 (환자) 체중 kg이다.
오시메르티닙 (osimertinib) (TAGRISSO) 투여에 대한 대표적인 비-제한적인 허용량은 1일당 1회로 약 80 mg/개체 (환자) 체중 kg이다.
아파티닙 투여에 대한 대표적인 비-제한적인 허용량은 1일당 1회로 약 40 mg/개체 (환자) 체중 kg이다.
에를로티닙 (타르세바 (tarceva)) 투여에 대한 대표적인 비-제한적인 허용량은 1일당 1회로 약 150 mg/개체 (환자) 체중 kg이다.
Mabthera (리톡시맵) 투여에 대한 대표적인 비-제한적인 허용량은 투여 당 체표면적 당 약 90 mg/m2 내지 약 120 mg/m2이다.
헤르셉틴 (herceptin) (Trastuzumab) 투여에 대한 대표적인 비-제한적인 허용량은 약 2 mg/개체 (환자) 체중 kg/주(week)이다.
VOTRIENT (Pazopanib)을 경구 투여하기 위한 대표적인 비-제한적인 허용량은 1일당 1회로 약 800 mg/개체 (환자) 체중 kg이다.
이마티닙을 투여하기 위한 대표적인 비-제한적인 허용량은 약 400 mg/kg 내지 약 800 mg/개체 (환자) 체중 kg/일(day)이다.
닐로티닙 (Tasigna)을 투여하기 위한 대표적인 비-제한적인 허용량은 약 400 mg/kg 내지 약 800 mg/개체 (환자) 체중 kg/일(day)이다.
일 구현예에서, 본 발명에 제공되는 조합은 특정 분석 시스템에서 시험관내 몇가지 다양한 분석 계획으로 평가하였다. 실험에 대한 상세 내용은 아래에 제공된다. 본원에 제시된 데이터는, 케모카인 유사체 펩타이드, 특히 RISE P-8이 타겟 약물과 조합되었을 때 상승적인 효과를 발휘한다는 것을, 명확하게 보여준다. 또한, 일 구현예에서, 개체에서 임상적인 유익성이 달성된다.
본 발명에 대한 추가적인 특정 구현예들은 비-제한적으로 하기를 포함한다:
실시예 1
세포주
루이스 폐 암종 (Lewis lung carcinoma)(LL/2)은 원발성 루이스 폐 암종의 생착으로부터 기원한 종양을 가진 C57BL 마우스의 폐에서 확립된 세포주이다. 이 폐암 세포주는 10% FBS, 1% 페니실린-스트렙토마이신 및 1% L-글루타민이 첨가된 둘베코의 변형된 이글스 배지에서 가습 세포 배양 인큐베이터 (humidified cell culture incubator)에서 37℃ 및 5% CO2 조건 하에 배양하였다.
인간 NSCLC 세포주, PC9, 게피티닙-내성 PC9 (PC9GR), HCC827 및 게피티닙-내성 HCC827 (HCC827GR)는 10% FBS, 1% 페니실린-스트렙토마이신 및 1% L-글루타민이 첨가된 RPMI 1640 배지에서 가습 세포 배양 인큐베이터에서 37℃ 및 5% CO2 조건 하에 배양하였다. 냉동된 GR 세포주를 1주일 해동한 후, 배양 배지에 최종 농도 3 μM로 게피티닙을 첨가하여 세포를 48시간 두어, 내성을 검증한 다음 신선한 배양 배지로 교체하여 유지하였다.
실시예 2
CXCR1 , CXCR2 및 CXCL8 유전자의 발현 수준 정량
세포로부터 총 RNA를 RNA 추출 시약 (REzolTM C & T, Protech Technology Enterprise Co., Taiwan)을 사용해 단리하고, 분광광도계 (Nanodrop 1000, Thermo Scientific)에 의해 정량하였다. 단일 가닥 cDNA를 PrimeScript RT 시약 키트 (Perfect Real Time) (RR037A, TAKARA Bio, Japan)를 사용해 사용자의 매뉴얼에 따라 합성하였다.
모든 실시간 PCR 반응은 2x qPCR BIO Probe Mix Hi-ROX 시약 (PCR Biosystems, UK) 및 UPL 프로브 시스템 (IL-8, CXCR1, CXCR2)을 사용해 StepOnePlus™ Real-Time PCR 시스템 (Applied Biosystems™)에 의해 수행하였다. 18s를 내부 로딩 대조군으로 이용하였다. 프라이머 서열은 다음을 포함한다: 5'-gagcactccataaggcacaaa-3' (서열번호 2) (CXCL8의 정방향 프라이머) 및 5'-atggttccttccggtggt-3' (서열번호 3) (CXCL8의 역방향 프라이머); 5'-gaccaacatcgcagacacat-3' (서열번호 4) (CXCR1의 정방향 프라이머) 및 5'-tgcttgtctcgttccacttg-3' (서열번호 5) (CXCR1의 역방향 프라이머); 5'-ggctaagcaaaatgtgatatgtacc-3' (서열번호 6) (CXCR2의 정방향 프라이머) 및 5'-caaggttcgtccgtgttgta-3' (서열번호 7) (CXCR2의 역방향 프라이머). 유전자 발현을 하기 식에 따라 계산하였다: 유전자 발현 = 2- ΔΔCt.
실시예 3
게피티닙 -내성 암 세포주 검증
게피티닙-내성 NSCLC 세포주의 확립을 검증하기 위해, 게피티닙 농도구배의 MTT를 부모 세포 및 게피티닙-내성 (GR) 세포를 사용해 수행하였으며, GR 세포주는 부모 세포보다 100-1000배로 훨씬 높은 약물-관용성 (drug-tolerance)을 나타내었다 (표 1). PC9 세포에서 게피티닙의 IC50 값은 0.6009 μM이었으며, 이와 비교해 PC9GR 세포의 경우 92.43 μM이었고 (내성 154배); HCC827 세포에서 게피티닙의 IC50은 0.056 μM인데 반해, HCC827GR 세포는 125.5 μM이었다 (내성 1517배).
표 1. 부모 세포 및 게피티닙-내성 세포주에서 게피티닙의 세포독성

세포주		 IC50 (μM) 내성 배수
부모 세포 내성 세포
PC9 0.6009 92.43 153.8 (배)
HCC827 0.056 125.5 2241.1 (배)
실시예 4
부모 암 세포 대비 게피티닙 -내성 암 세포에서 유도된 게피티닙 -유도성/비-유도성 CXCL8 , CXCR1 및 CXCR2 유전자의 발현 수준
도 2a-2d를 참조하여 살펴보면, 부모 세포 (PC9 (도 2a) 및 HCC827 (도 2b))와 GR 세포 (PC9GR (도 2a) 및 HCC827GR (도 2b)) 간에 유의한 차이가 없거나 또는 거의 동일한 수준의 IL-8 mRNA 발현이 관찰되었다. 그러나, GR 세포 (PC9GR (도 2c) 및 HCC827GR (도 2d))의 CXCR1 mRNA 및 CXCR2 mRNA 발현은, 부모 세포와 비교해, 각각 거의 10-50배까지 현저하게 증가하였다. *P < 0.05; **P < 0.01; ***P<0.001, 스튜던트의 t-검정.
나아가, 본 발명은 또한 게피티닙 자극에 따른 HCC827 및 HCC827GR의 IL-8 mRNA 발현을 확인하였다. 데이터는, IL-8 mRNA 발현이 게피티닙 처리 후 HCC827에서 명확하게 유도되지 않는다는 것을, 보여준다 (도 3a). 이와는 대조적으로, HCC827GR의 IL-8 mRNA 발현은 게피티닙 처리 (5 μM)에 의해 24시간 후 증가하였다 (도 3b).
마찬가지로, HCC827 및 HCC827GR에서 게피티닙 자극에 따른 CXCR1 및 CXCR2 mRNA 발현 데이터는, CXCR1 및 CXCR2 mRNA 발현이 게피티닙 처리 후 HCC827에서 명백하게 유도되지 않음을 보여주었다 (도 4a 및 도 4b). 이와는 대조적으로, HCC827GR에서 CXCR1 및 CXCR2 mRNA 발현은 게피티닙 처리 (5 μM)에 의해 24시간 후 증가하였다 (도 4c 및 도 4d).
실시예 5
RISE P-8은 CXCL8을 통해 인간 호중구 주화성 ( chemotaxis )에 영향을 미친 다
도 5를 참조하여, 호중구 주화성을 변형된 보이덴 챔버 미세주화성 분석 (modified Boyden chamber microchemotaxis assay)을 통해 평가하였다. CXCL8을 단독으로 또는 RISE P-8과 조합하여, 보이덴 챔버 웰의 하단 구획에 배치하고, 상단 구획에는 정제된 호중구를 배치하였다. 이동한 호중구를 세포용해하여, 검출하였다. 호중구 이동 %를 분석하였으며, 주화성 지수 (Chemotaxis Index, CI) 값으로 나타내었다. 즉, CI = (강도RISE P-8 - 강도HBSS) / (강도CXCL8 - 강도HBSS) x 100%. 그 결과, RISE P-8은 CXCL8에 대한 호중구 반응을 효과적으로 길항하고, CXCR1 및 CXCR2에 대해서는 CXCL8과 경쟁하는 것으로, 나타났다.
실시예 6
고정-독립적인 상황에서 생존하는 부모 암 세포 대비 게피티닙 -내성 암 세포에서의 CXCR1, CXCR2 및 CXCL8 유전자의 발현 수준
PC9 (도 6a) 및 PC9GR (도 6b)은, 2D와 비교해, 3D (현탁) 배양시 IL-8 (CXCL8)/ CXCR1/ CXCR2 mRNA 발현 강화를 나타내었다. 즉, CXCL8, CXCR1 및 CXCR2 mRNA 발현은 암 세포의 생존 및 증식에서 부착 상황과 현탁 상황 간에 차별성을 보인다.
실시예 7
RISE P-8은 NSCLC 암 세포의 3D ( 현탁 ) 조건에서 IL-8 단백질의 발현을 현저하게 감소시킬 수 있다
세포를 무혈청 조건에서 16-18시간 동안 둔 후, 배양 배지에 세포 106/mL로 현탁하였다. 세포를 2 x 106/웰로 코팅/비-코팅 6웰 플레이트에 접종하고, 24시간 동안 RISE P-8 (200 ng/ml)를 처리하거나 처리하지 않았다. PC9 (도 7a) 및 PC9GR (도 7b)에서, RISE P-8은 현탁 조건에서만 IL-8 오토크린을 현저하게 약화시킬 수 있는 것으로 확인되었다. 데이터는 평균 ± SD로 나타낸다. *P<0.05; ***P<0.001, 스튜던트의 t-검정. 즉, RISE P-8 처리는 고정-독립적인 상황에서 생존하는 암 세포의 IL-8 분비를 현저하게 감소시킬 수 있다.
실시예 8
게피티닙 대 게피티닙과 RISE P-8의 조합 처리시, 게피티닙 -내성 암 세포에서의 CXCR1, CXCR2 및 CXCL8 유전자의 발현 수준
게피티닙-내성 암 세포에 게피티닙 5 μM을 24시간 처리하면, PC9GR (도 8a) 및 HCC827GR (도 8b)에서 IL-8, CXCR1 및 CXCR2의 발현이 현저하게 증가하였다. 그러나, 게피티닙-내성 암 세포에 게피티닙을 RISE P-8 (200 ng/mL)과 조합 처리한 결과, PC9GR (도 8c) 및 HCC827GR (도 8d)에서 IL-8, CXCR1 및 CXCR2 mRNA 발현이 감소하였다. 데이터는 평균 ± SD로 나타낸다. *P<0.05; **P<0.01; ***P<0.001, 스튜던트의 t-검정. 즉, RISE P-8은 IL-8과 경쟁하고, 그 피드백을 약화시켜, 감소된 IL-8, CXCR1 및 CXCR2의 유전자 발현을 조절할 수 있다.
실시예 9
게피티닙 -내성 암 세포는 RISE P-8 처리에 의해 G0/G1 기에서 정지된다.
암 세포에 5 μM 게피티닙 및/또는 RISE P-8 (200 ng/mL) 또는/및 CXCL8 (100 ng/mL)를 24시간 처리한 다음, 세포를 회수하여 빙랭한 75% 에탄올을 사용해 20℃에서 밤새 고정하였다. 고정 및 세척 후, 암 세포를 프로피듐 아이오다이드 (PI)로 염색하고, 암 세포의 세포 주기를 유세포 측정에 의해 분석하고, FlowJo 7.6.1으로 데이터를 획득하여 분석하였다. 본 발명에서, HCC827GR (도 9a) 및 PC9GR (도 9b)의 세포 주기가 G0/G1 기에서 정지되는 것으로 확인되었다. 아울러, 암 세포의 세포 주기는 게피티닙 단독 처리시와 비교해 게피티닙 및 RISE P-8의 조합 처리시 전체 세포들 중 G0/G1 기 세포의 %가 훨씬 더 현저한 수준으로 정지시킬 수 있었다 (도 9a 및 도 9b). 데이터는 평균 ± SD로 나타낸다. *P<0.05; **P<0.01; ***P<0.001, 스튜던트의 t-검정. 즉, 본 발명에서, 게피티닙과 RISE P-8의 공동 처리가 세포자살을 촉발시키고 세포 증식을 감소시킬 수 있는 것으로, 시사되었다.
실시예 10
게피티닙 -내성 암 세포의 고정-독립적인 증식률은 RISE P-8에 의해 저해될 수 있다
세포 카운팅 키트-8 (CCK-8) (Dojindo, Kumamoto, Japan)를 사용해 세포 증식 분석을 수행하였다. 게피티닙-내성 암 세포에, 게피티닙 (5 μM) 및 RISE P-8 (200 ng/mL)를, 또는 게피티닙을 RISE P-8 및 IL-8 (100 ng/mL)과 함께 24시간 처리하였다. 게피티닙-내성 암 세포의 증식률은 PC9GR (도 10a) 및 HCC827GR (도 10b)에서, 대조군 및 IL-8 그룹 (도 10a 및 도 10b)와 비교해 현저하게 약화되었다. 데이터는 평균 ± SD로 나타낸다. *P<0.05; **P<0.01; ***P<0.001, 스튜던트의 t-검정. 이들 데이터는, 게피티닙과 RISE P-8을 공동 처리한 암 세포에서 CXCL8, CXCR1 및 CXCR2의 하향-조절이 달성됨을, 추가적으로 검증해준다.
실시예 11
RISE P-8은 게피티닙 -내성 암 세포에서 장기간 증식을 저해할 수 있다
한편, 게피티닙-내성 암 세포에 게피티닙 (5 μM)을 RISE P-8 (200 ng/mL)과 함께, 또는 게피티닙을 RISE P-8 및 IL-8 (100 ng/mL)과 함께, 또는 게피티닙을 IL-8과 함께 콜로니 형성 분석을 위해 각각 처리하였다. 또한, 콜로니 형성 분석을 수행하여, 세포 증식을 평가하였다. 그 결과, RISE P-8로 처리된 세포의 콜로니 형성률은 대조군 및 IL-8 그룹과 비교해 장기간 PC9GR (도 11a) 및 HCC827GR (도 11b)에서 현저하게 서행되는 것으로, 드러났다. 데이터는 평균 ± SD로 나타낸다. *P<0.05; **P<0.01; ***P<0.001, 스튜던트의 t-검정.
실시예 12
RISE P-8은 게피티닙 -내성 폐 선암종 세포의 침습력을 저해할 수 있다
세포의 침습력을 8 μm 포어 크기의 트랜스웰 (Corning FluoroBlokTM)을 사용해 평가하였다. 트랜스웰 인서트를 60 ㎕ 마트리겔 (무혈청 배지 중의 300 ㎍/ml, BD Bioscience)로 밤새 37℃ 및 5% CO2 분위기 하에 코팅하였다. 무혈청 배양 배지 0.2 mL 중의 세포 2.5x104주를 마트리겔로 코팅된 상단 챔버에 접종한 다음 약물 IL-8 (100 ng/ml)을 단독으로 또는 RISE P-8 (200 ng/ml)과 함께 처리하였다. 24시간 동안 37℃ 및 5% CO2에서 인큐베이션한 다음, 상단 챔버의 막을 메탄올로 고정하고, 프로피듐 아이오다이드 (PI)로 염색하였다. 막의 아래 구역에서 침습성 세포를 도립 형광 현미경 (Observer.Z1, Zeiss)(배율, x100)을 사용해 표본의 무작위 5곳을 촬영하고, 카운팅하였다.
침습력 분석을 위해, 게피티닙-내성 암 세포에 게피티닙 (5 μM)을 RISE P-8 (200 ng/mL)과 함께, 또는 게피티닙을 RISE P-8 및 IL-8 (100 ng/mL)과 함께, 또는 게피티닙을 IL-8과 함께 각각 처리하였다.
트랜스웰 침습 분석 결과, PC9GR (도 12a) 및 HCC827GR (도 12b)에서 RISE P-8이 대조군과 비교해 침습률을 감소시키는 것으로 나타났다. 한편, PC9GR (도 12a) 및 HCC827GR (도 12b)에서 "IL-8 + RISE P-8 그룹"의 침습률을, PC9GR (도 12a) 및 HCC827GR (도 12b)에서 "IL-8 그룹"과 비교해, 현저하게 방지할 수 있었다. 데이터는 평균 ± SD로 나타낸다. *P<0.05; **P<0.01, 스튜던트의 t-검정.
실시예 13
루이스 폐 암종 세포에서 침습력에 대한 RISE P-8의 억제 효과
도 13a 및 도 13b를 참조하여, 본 발명에서는 CXCL8, MIP-2 또는 RISE P-8로 처리된 LL/2 세포 (루이스 폐 암종)의 침습성을 확인하였다. LL/2 암 세포의 특징은 폐에 매우 쉽게 침입하며, 매우 빨리 증식한다는 것이다. LL/2 세포를 마트리겔-코팅된 폴리카보네이트 필터에 접종하여, 침습 가능성을 분석하였다. 그런 후, 세포를 챔버에서 24시간 인큐베이션하고, PI 염색에 의해 분석한 다음 현미경 검경 하에 세포수를 계수하였다. 트랜스웰 막 상의 대표적인 침습성 세포 영역 (배율 100x)과 침습률을 확인하였다. LL/2 세포에 각각 CXCL8 (100 ng/ml), RISE P-8 (200 ng/ml) 또는 MIP-2 (50 ng/ml)를 처리하였다. 도 13a-13b는 침습률을 정량적으로 보여준다. 데이터는 평균 ± SD로 나타낸다. *P<0.05; **P<0.01, 스튜던트의 t-검정. 동일한 결과는 MIP-2 유도된 세포 침습 데이터에서도 확인되었다 (도 13b). MIP-2는 뮤라인에서의 CXCL8 상동체이다. RISE P-8은 침습성 세포의 수를 현저하게 감소시켰다. 즉, 본 발명에서는, CXCL8이 LL/2 침습력을 자극할 수 있는 반면, RISE P-8은 CXCL8 자극된 세포 침습을 현저하게 억제한다는 것이, 추가적으로 확인되었다.
실시예 14
RISE P-8 및 게피티닙의 조합 사용은 종양 증식을 저해하고, 생체내 수명을 연장한다
수컷 BALB/c 누드 마우스 (5주령)을 National Laboratory Animal Center에서 구입하였다. BALB/c 누드 마우스의 등에 PC9GR을 피사 주사하였다. RISE P-8 (500 ㎍/kg)을 3회 i.p. 주사하고, 게피티닙 (80 mg/kg)을 매주 2회로 입을 통한 위관 영양법에 의해 투여하였다. 종양을 보유한 마우스의 종양 크기를 처리 후 72일까지 기록하였다. 종양의 크기는 "게피티닙 + RISE P-8 그룹"에서 현저하게 저해되었다 (도 14a-14b). 즉, 그 결과, RISE P-8과 게피티닙의 조합은 "게피티닙 그룹"과 비교해 종양 크기를 현저하게 감소시키고, 또한 적어도 다른 그룹과 비교해 14일 이상 종양-보유 마우스의 수명을 효과적으로 연장하였다 (도 14c).
실시예 15
RISE P-8 및 게피티닙의 조합 사용은 생체내 IL-8, CXCR1 및 CXCR2 mRNA 발현을 약화시킨다
72일차에 PC9GR 종양-보유 BALB/c 누드 마우스를 희생시킨 후, 종양 조직의 IL-8, CXCR1 및 CXCR2 유전자의 발현을 "게피티닙" 그룹 및 "게피티닙 + RISE P-8 그룹" (도 15a-15c)에서 조사하였다. 데이터는 평균 ± SEM으로 나타낸다 (n=8). *P<0.05; **P<0.01; ***P<0.001, 스튜던트의 t-검정.
요컨대, 약학적 조성물은 종양 미세환경에서 IL-8, CXCR1, CXCR2의 발현을 상승적인 작용을 통해 약화하고, IL-8의 하향 조절을 통해 종양 증식을 저해하며, 암 세포 이동 및 침습을 IL-8 하향 조절을 통해 차단하고, 전이를 치료하거나 또는 전이 전파를 감소시킨다. 나아가, 전술한 약물-내성 세포는 IL-8을 과다 발현한다.
(임의의 첨부된 청구항, 요약 및 도면을 포함하여) 본 명세서에 기술된 각각의 특징은, 달리 명시되지 않은 한, 대안적인 특징들로 치환하여, 동일한, 등가의 또는 비슷한 목적을 제공할 수 있다. 즉, 달리 명시되지 않은 한, 기술된 각각의 특징은 등가의 또는 유사한 특징들의 포괄적인 시리즈에 대한 단순한 일예이다.
기술된 바와 같이, 이러한 변형은 본 발명의 예시된 구현예들에 대한 전술한 설명에 비추어 본 발명에 행해질 수 있으며, 본 발명의 사상 및 범위내에 포함되어야 한다. 즉, 본 발명은 본원의 구체적인 구현예를 참조하여 기술되었지만, 전술한 내용에서 변형, 다양한 변화 및 치환이 의도된다. 일부 경우에, 본 발명에 대한 구현예들 중 일부 특징은 기술된 본 발명의 범위 및 사상으로부터 이탈되지 않는 범위 내에서 다른 특징들을 대응적으로 사용하지 않고도 채택할 수 있을 것으로 이해될 것이다. 즉, 특정 상황 또는 물질을 본 발명의 기본적인 사상 및 범위에 맞게 적용하기 위해 다수의 변형이 이루어질 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> RISE BIOPHARMACEUTICALS, INC. (BEIJING) <120> Pharmaceutical compositions and use thereof for relieving anticancer drug resistance and enhancing sensitivity of anticancer drug <130> T1946 <150> US 62/927,829 <151> 2019-10-30 <160> 7 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 72 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RISE P-8 <400> 1 Gly Ser Lys Glu Leu Arg Cys Gln Cys Ile Arg Ser Tyr Ser Lys Pro 1 5 10 15 Phe His Pro Lys Phe Ile Lys Glu Leu Arg Val Ile Pro Ala Ser Gln 20 25 30 Phe Cys Ala Asn Thr Glu Ile Ile Val Lys Leu Ser Asp Gly Arg Glu 35 40 45 Leu Cys Leu Asp Pro Lys Glu Asn Trp Val Gln Arg Val Val Glu Lys 50 55 60 Phe Leu Lys Arg Ala Glu Asn Ser 65 70 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for CXCL8 <400> 2 gagcactcca taaggcacaa a 21 <210> 3 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for CXCL8 <400> 3 atggttcctt ccggtggt 18 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for CXCR1 <400> 4 gaccaacatc gcagacacat 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for CXCR1 <400> 5 tgcttgtctc gttccacttg 20 <210> 6 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for CXCR2 <400> 6 ggctaagcaa aatgtgatat gtacc 25 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for CXCR2 <400> 7 caaggttcgt ccgtgttgta 20

Claims (15)

  1. 항암제의 내성을 완화하고 항암제의 민감성을 강화하기 위한 약학적 조성물로서,
    서열번호 1에 기재된 RISE P-8인 케모카인 유사체 펩타이드; 및
    게피티닙 (gefitinib), 약제학적으로 허용가능한 완충제, 희석제, 담체, 보강제 또는 부형제를 포함하는 의약제를 포함하며,
    상기 약학적 조성물은, 비-소세포 폐암으로 진단받고, 여기서 상기 암이 게피티닙에 대해 내성을 보이는, 개체에게 투여되는, 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 약학적 조성물이 이를 필요로 하는 개체에게 치료학적 유효량으로 투여되는, 약학적 조성물.
  3. 제1항에 따른 약학적 조성물을 치료학적 유효량으로 이를 필요로 하는 약물-내성 암 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 항암제 내성을 완화하고 항암제 민감성을 강화하는 방법에 사용하기 위한, 비-소세포 폐암의 치료용 약제로서,
    상기 개체는 비-소세포 폐암으로 진단받고, 상기 암이 게피티닙에 대해 내성을 보이는, 약제.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 종양 미세환경에서 IL-8, CXCR1, CXCR2의 발현을 상승적인 작용을 통해 약화시키고, IL-8의 하향 조절을 통해 종양 증식을 저해하고, 암 세포 이동 및 침습을 IL-8 하향 조절을 통해 차단하고, 전이를 치료하거나 또는 전이 전파를 감소시키고, 항암제에 대한 내성을 극복하며,
    약물-내성 세포는 IL-8을 과다 발현하고, 상기 약물-내성 세포는 암 세포 및 종양 세포로부터 선택되는, 약제.
  5. 제3항에 있어서,
    서열번호 1에 기재된 RISE P-8의 치료학적 유효량이 1회 투여 당 체중 kg 당 0.01 mg 내지 500 mg인, 약제.
  6. 제3항에 있어서,
    상기 약물-내성 암 개체가 포유류로부터 선택되고,
    상기 포유류가 고양이, 개, 토끼, 소, 말, 양, 염소, 원숭이, 마우스, 랫, 모래쥐 (gerbil), 기니아피그, 돼지 및 인간으로부터 선택되는, 약제.
  7. 제1항에 기술된 바와 같은 케모카인 유사체 펩타이드 및 의약제를 포함하는 비-소세포 폐암을 치료하기 위한 약학적 조합물로서,
    상기 암이 게피티닙에 대해 내성을 보이고, 상기 케모카인 유사체 펩타이드 및 의약제가 동시에 또는 순차적으로 투여되는, 약학적 조합물.
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