TWI665212B

TWI665212B - 趨化素修飾胜肽

Info

Publication number: TWI665212B
Application number: TW104117935A
Authority: TW
Inventors: 程家維; 鄭錫聰; 游輝元
Original assignee: 北京銳瑟生物醫藥科技發展有限公司
Priority date: 2015-06-03
Filing date: 2015-06-03
Publication date: 2019-07-11
Also published as: TW201643183A

Abstract

一種經修飾趨化素胜肽，包含一胺基酸序列，此胺基酸序列帶有：(a)一N’-麩氨酸(E)-白胺酸(L)-精胺酸(R)之特徵序列，此特徵序列位於趨化素胜肽N端；(b)一N’-脯胺酸(P)-丙胺酸(A)-絲胺酸(S)-麩醯胺(Q)-苯基丙胺酸(F)-Cys³之特徵序列，此特徵序列係位於趨化素胜肽N端算起第3個胱胺酸(Cys³)；以及(c)一修飾位置，此修飾位置位於趨化素胜肽上由N端算起第17個胺基酸。此外，本發明之經修飾的趨化素胜肽可用於治療癌症、抑制腫瘤生長。

Description

趨化素修飾胜肽

本發明係關於一種經修飾的趨化素，可作為一種治療劑，尤其，本發明特別有關於一種用於治療癌症與抑制腫瘤生長的經修飾趨化素。

趨化素(Chemokine)是一群可被誘導，可被分泌而且結構類似的小分子(8-14kd)。趨化素可分為CXC、CC、CX3C及C四亞群；若以功能來分類，趨化素可分為恆定性趨化素(Homeostasis chemokines)及發炎性趨化素(Inflammatory chemokines)。

趨化素在其結構上通常具有三個β-褶板(β-sheet)，且在C端具有一個α-螺旋(α-helix)，在N端上會有4個保留的胱胺酸(cysteine)。按照N端所含前兩個胱胺酸序列可分成四個族群：CXC、CC、C、CX3C，而以CC和CXC趨化激素為主。細胞上的趨化素與趨化素接受器結合之後才產生反應，而趨化素接受器具有7個跨細胞膜的G蛋白結合接受器，依其結合標的上之配體(ligand)種類不同而分別被命名為CXCR、CCR、CXR、CX₃CR，若是再依照數目順序排列，如CXCR1、CXCR2、CCR4等。但在標的細胞上不只表現一種趨化素接受器，發炎細胞浸潤的結合標的與趨化素接受器也並非一對一，部份趨化素接受器在不同細胞需一定刺激誘導才會表現。

例如，含有麩胺酸(E)-白胺酸(L)-精胺酸(R)特徵序列(ELR特徵序列)之ELR-CXC趨化素，該ELR-CXC係指在蛋白質N端具有胺基酸序列為ELR-CXC特徵之蛋白，X可為極性且帶有電性或不具電性的胺基酸，或者X並不存在，其可調控致癌基因之生長、IL-8、第二型嗜中性球活化胜肽(NAP-2)，其接受器為CXCR1、CXCR2，主要作用細胞為嗜中性球，可促進嗜中性球之蓄積與活化作用，是以此類ELR-CXC趨化素與廣範圍之急性與慢性發炎病症之發生，素有重大關聯並扮演著一重大的角色，此等之發炎反應包含牛皮癬與風濕性關節炎。

此外ELR-CXC趨化素還更與腫瘤發展時所伴隨的血管新生有關，其誘發機制係為經由此類趨化素，尤指IL-8，與血管內皮細胞(Endothelial cell,EC)上的CXCR1以及CXCR2之結合所產生之活化作用。目前已證實有許多不同類型的腫瘤會產生ELR-CXC趨化素，且會表現此類型趨化素之腫瘤已被認為與腫瘤的不良預後發展有關。

藉由拮抗CXCR1或CXCR2與ELR-CXC趨化素的結合，係為一可行之策略，以便抑制由CXCR1或/及CXCR2受體激活後所引發之異常訊號傳遞，進而治療帶有該兩種受體的細胞活化所造成的相關疾病，因此科學家正致力於尋找及製備抑制CXC趨化素的受質蛋白相似物。

本案發明人鑑於習知技術中的不足，經過悉心試驗與研究，並一本鍥而不捨之精神，終構思出本案發明，能夠克服先前技術的不足，以下為本案之簡要說明。

癌症為已開發國家的重要死因之一。儘管目前對於癌症之診斷及治療方面已有進展，若能早期發現癌症則手術及放射性治療可能治癒癌症，但大部分的藥物不是有很大的副作用，就是效果不佳。因此，醫學界亟需一種方法及組成物來治療或防止癌症。

有鑑於此，本發明係開發一種經修飾趨化素胜肽，以抑制腫瘤生長與治療癌症。

本發明提供一種經修飾趨化素胜肽，其包含一胺基酸序列，此胺基酸具有一N端(N’)，此胺基酸序列帶有：(a)一N’-麩氨酸(E)-白胺酸(L)-精胺酸(R)之特徵序列，此特徵序列位於該趨化素胜肽N端；(b)一N’-脯胺酸(P)-丙胺酸(A)-絲胺酸(S)-麩醯胺(Q)-苯基丙胺酸(F)-Cys³之特徵序列，此特徵序列係位於趨化素胜肽N端算起第3個胱胺酸(Cys³)；其中此趨化素胜肽係包含該(a)、(b)特徵序列並具有一修飾位置，且此修飾位置位於此趨化素胜肽上由N端算起第17個胺基酸。

在一實施例中，其中此趨化素胜肽上第17個胺基酸由苯基丙胺酸(F)置換為白胺酸(L)。

在一實施例中，其中此經修飾趨化素胜肽之未經修飾的前身係來自一來源趨化素胜肽，此來源趨化素胜肽N端的第1個胱胺酸及第2個胱胺酸之間可存在0-2個胺基酸，且當胺基酸為1-2個時，此胺基酸係為具有電性或不具電性之極性胺基酸。

在一實施例中，其中此來源趨化素胜肽係選自由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9及其組合所組成的群組其中之一。

在一實施例中，本發明經修飾趨化素胜肽係選自由SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12及其組合所組成的群組其中之一。

本發明另提供一種醫藥組合物，包含本發明之經修飾趨化素胜肽及一醫藥可接受性賦形劑。

在一實施例中，其中經修飾趨化素胜肽之用途係用於治療癌症或抑制腫瘤生長。

本發明另提供一種治療癌症及抑制腫瘤的醫藥組合物，包括本發明之經修飾趨化素胜肽及一醫藥可接受性賦形劑。

在一實施例中，其中癌症包括前列腺癌、乳癌、子宮癌、血癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、大腸直腸癌、睪丸癌、淋巴癌、橫紋肌肉瘤、神經母細胞瘤、胰臟癌、肺癌、腦部腫瘤、皮膚癌、胃癌、口腔癌、肝癌、喉癌、膽癌、甲狀腺癌、肝癌、腎臟癌以及鼻咽癌等。

第1圖為本發明之來源趨化素胜肽序列(SEQ ID NO：1-SEQ ID NO：9)，亦是對CXCR1或/及CXCR2具有高親和力之ELR-CXC趨化素之胺基酸序列比對圖。

第2圖為本發明之經修飾趨化素胜肽之胺基酸序列比對圖(SEQ ID NO：10-12)。

第3圖顯示具有趨化素CXCL8之細胞遷移數量。

第4圖分別顯示黑色部分為具有化學激素刺激，灰色部分為具有化學激素刺激及CXCL8-IP10，白色部分為具有化學激素刺激及IL8-17LIP10之細胞遷移數量。

第5圖顯示實驗組(IL8-17LIP10)與對照組(食鹽水)的腫瘤體積。

第6圖顯示實驗組(IL8-17LIP10)與對照組(食鹽水)的腫瘤重量

第7圖顯示實驗組(IL8-17LIP10)與對照組(食鹽水)的微血管密度。

第8圖為A組每個禮拜注射4次之CXCL8-IP10 500ug/kg，B組每個禮拜注射2次之CXCL8-IP10 500ug/kg，C組每個禮拜注射2次之CXCL8-IP10250ug/kg，D組每天皮下注射100μl的食鹽水並觀察腫瘤體積大小。

第9圖為犧牲後的小鼠肺臟腫瘤組織，其中，A為每個禮拜注射4次CXCL8-IP10 500ug/kg的老鼠在第24天犧牲後，取出的肺臟；B為注射生理食鹽水的老鼠肺臟，其中箭頭所指的白色腫瘤部位為轉移到肺部所產生病灶。

第10圖顯示腫瘤細胞中表達CXCR1或CXCL8的趨勢。

第11圖顯示本發明拮抗劑對趨化反應的影響。

本發明提供一種新穎的趨化素胜肽。本發明之新穎趨化素胜肽係源自係屬於ELR-CXC趨化素或是對CXCR1或CXCR2具有高親和力之受質，例如，CXCL1(SEQ ID NO：3)、CXCL2(SEQ ID NO：4)、CXCL3(SEQ ID NO：5)、CXCL5(SEQ ID NO：6)、CXCL6(SEQ ID NO：7)、CXCL7(SEQ ID NO：8)、CXCL8(SEQ ID NO：2)、hG31P(SEQ ID NO：1)。本發明係根據此一類型之趨化素進行修飾，主要在其30s-loop處插入一段PASQF特徵序列(第1圖)，此一PASQF原本係存在於趨化素CXCL10中，且該CXCL10為一種非ELR-CXC趨化素。

本發明之經修飾趨化素，包括：(a)一N’-麩氨酸(E)-白胺酸(L)-精胺酸(R)之特徵序列，此特徵序列位於該趨化素胜肽N端；以及(b)一N’-脯胺酸(P)-丙胺酸(A)-絲胺酸(S)-麩醯胺(Q)-苯基丙胺酸(F)-Cys³之特徵序列，此特徵序列係位於趨化素胜肽N端算起第3個胱胺酸(Cys³)。此外，應注意的是，本發明之趨化素胜肽更具有一突變位置(修飾位置)，其係位於由趨化素胜肽N端算起第17個胺基酸。

在一實施例中，本發明趨化素胜肽的第17位胺基酸原本為苯基丙胺酸(F)，並經突變置換後變為其它非苯基丙胺酸的胺基酸。在另一實施例中，本發明趨化素胜肽的第17位胺基酸可為丙胺酸(A)、半胱胺酸(C)、硒半胱胺酸(U)、天冬胺酸(D)、天冬醯胺(N)、谷胺酸(E)、谷氨醯胺(Q)、甘胺酸(G)、組胺酸(H)、白胺酸(L)、異亮胺酸(I)、賴胺酸(K)、吡咯賴胺酸(O)、蛋胺酸(M)、脯胺酸(P)、精胺酸(R)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)、纈胺酸(V)、色胺酸(W)、酪胺酸(Y)，較佳為白胺酸(L)。與未置換之趨化素多胜肽相比較，第17位胺基酸在置換後之趨化素多胜肽具有較高親和性並能夠有效抑制癌細胞生長。

在本發明一特定實施例中，本發明之經修飾的趨化素胜肽包括，但不限於，SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及/或SEQ ID NO：12(可參照第2圖)。

以SEQID NO：10為例，SEQ ID NO：10除具有ELR-CQC之N端序列而符合ELR-CX_nC之胺基酸特徵序列之規則外，SEQ ID NO：10還具有一由N端起算的Pro-Ala-Ser-Gln-Phe(脯胺酸-丙胺酸-絲胺酸-麩醯胺-苯丙胺酸，PASQF)的寡胺基酸序列，此PASQF係為一修飾序列，且被插入於N端起算的第3個胱胺酸(Cysteine,C)之上游(10192)，並且此第3個胱胺酸緊接在PASQF寡胺基酸序列的苯丙胺酸(F)之後。更重要的是，第17位的胺基酸不為苯丙胺酸，而為白胺酸。

由本發明所提供的序列表(第2圖)可知，SEQ ID NO：10至SEQ ID NO：12的ELR-CXC趨化素類似物序列均具有由N端起算第3個胱胺酸之前的PASQF修飾序列。另外，本發明趨化素胜肽的第17位胺基酸經突變為白胺酸。

本發明之經修飾趨化素胜肽、其類似物及/片斷可抑制血管新生相關的疾病。血管新生相關的疾病包括，但不限於，發炎性疾病、慢性風濕性關節炎及牛皮癬、不正常血管侵犯有關的疾病、以及細胞增生性疾病，如與腫瘤或癌症有關的疾病(例如，前列腺癌、乳癌、子宮癌、血癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、大腸直腸癌、睪丸癌、淋巴癌、橫紋肌肉瘤、神經母細胞瘤、胰臟癌、肺癌、腦部腫瘤、皮膚癌、胃癌、口腔癌、肝癌、喉癌、膽癌、甲狀腺癌、肝癌、腎臟癌以及鼻咽癌等)。

本發明之趨化素修飾胜肽及/或包含此趨化素修飾胜肽的藥學組成物可以口服，非腸胃、吸入、直腸、陰道、皮內、經皮或局部給予，一藥劑單位可包括傳統無毒之藥學上可接受的載體、佐劑及載具。

本發明之趨化素修飾胜肽及/或包含此趨化素修飾胜肽的藥學組成物可一次給予，24小時內多次給予或連續給予。當注射的方式為連續給予時，可選用適合的習知方式，包括，但不限於，靜脈注射點滴、靜脈注射幫浦、埋植式注射幫浦或局部給予。治療的時間可依不同的情況做適當的調整，例如，血管新生作用的病程及嚴重性。在以本發明經修飾之趨化素胜肽單獨或合併本發明其他藥劑直到治癒，或持續治療終身。

在另一實施例中，本發明提供一種治療癌症及抑制腫瘤的醫藥組合物。此藥學組成物包括一有效量之本發明趨化素修飾胜肽或其類似物，以及一藥學上可接受之載體。藥學上可接受之載體包括溶劑、分散劑、塗層、抗菌劑/抗真菌劑、等滲壓、吸收延遲劑及其類似物。

【實施例】

1.細胞趨化

利用Boyden chamber assay評估LMVECs之遷移狀況，將LMVECs培養於含有2% FCS的HuMedia-EB2 8小時，之後將12 X104 cells/cm2之細胞推平於孔徑大小5μm且塗佈10μg/ml fibronectin的polycarbonate濾膜(Sigma-Aldrich)。分別將10ng/mL of CXCL8,CXCL6,CXCL1,CXCL5，及CXCL8-IP10或IL8-F17LIP10置入Boyden chamber之底部。LMVECs於Boyden chamber於37℃培養4小時，之後使用Diff-Quick(Harleco)將濾膜固定與染色，而遷移的細胞利用(HPFs)(X200)計算遷移的細胞數量。

第3圖顯示具有趨化素CXCL8之遷移數量最多。

第4圖中黑色部分僅具有化學激素刺激，灰色部分為具有化學激素刺激及CXCL8-IP10，白色部分為具有化學激素刺激及IL8-17LIP10。由第4圖可得知CXCL8-IP10及IL8-17LIP10同樣具有抑制細胞遷移的效用，而IL8-17LIP10抑制細胞遷移的效用相對於CXCL8-IP10較好。

2.裸鼠異種移植分析

將無胸腺雄鼠(4-6週BALB/c)置於無菌操作房中。無菌操作房中具有充份的飲水與飼料，並每天監測小鼠。將GFP-標記PC-3細胞(PC-3-GFP)注射至3隻裸鼠的右腹部，每隻裸鼠注射5 x 10⁶的細胞。培養2-4週後，採取腫瘤以供移植。取出此3隻裸鼠的腫瘤組織進行切片(1mm³的切片)，並於麻醉及消毒的狀態下移植至其它小鼠的前列腺中。移植後第5天，將動物分為2組(每組12隻)，每天皮下注射100μl的食鹽水(對照組)或本發明之序列(IL8-17LIP10(SEQ ID NO：12)，0.5mg/kg)(實驗組)，持續24天。在第12、18、與24天，利用光學解剖顯微鏡與數位相機以515mm的濾光片攝影腫瘤生長影像。腫瘤體積的計算方式如下：腫瘤體積=(長度x寬²)/2。在第24天時，將所有小鼠犧牲，並取得腫瘤GFP螢光影像。微血管密度的計算方式如下：密度=微血管長度/腫瘤體積。腫瘤樣本以4%甲醛固定後，包埋於石蠟中，以供後續的免疫組織化學分析。

第5圖顯示第12、18與24天時，實驗組與對照組的腫瘤體積。由第5圖可知，本發明之序列(IL8-17LIP10)可顯著地抑制腫瘤生長，可抑制腫瘤體積達5倍以上，且隨著時間增加，抑制效果更明顯。

第6圖顯示第24天時，實驗組與對照組的腫瘤重量。由第6圖可知，本發明之序列(IL8-17LIP10)可顯著地抑制腫瘤生長，可抑制腫瘤重量達2倍以上。

3.免疫組織化學分析

將包埋於石蠟中的腫瘤切片脫蠟並以PBS再水化。詳細地說，將切片經PBS潤濕3次，並於10mM檸檬酸鈉(pH 6.0)熱處理15分鐘。之後，以3%的過氧化氫處理10分鐘以去除內源性的過氧化酶活性，再以PBS清洗3次，於室溫下以蛋白質封阻溶液(含5%馬血清的PBS溶液)處理15分鐘後，以PBS清洗3次，再以小鼠抗-VEGF單株抗體(1：50)，兔子抗-NF-κB多株抗體或山羊抗-CD3多株抗體(1：50)於4℃下反應20小時。反應完成後，以PBS清洗3次，並以適當的二級抗體於37℃下反應40分鐘。再以PBS清洗3次後，將切片以生物素標記之山羊抗小鼠或抗兔子之抗山羊IgG多株抗體於暗室反應30分鐘。在呈色反應中，以PBS清洗3次，二氨基聯苯胺溶液染色10分鐘，再以蘇木精染色1分鐘(Kollmar et al,2007)。負對照組以PBS取代初級抗體。將影像轉為灰階(0-225)，以積分光密度(IOD)表示，並利用Image-Pro 6.0 Microsoft軟體測得密度。每組分析5隻小鼠的移植腫瘤。每個腫瘤隨機選擇5個切片影像，以平均出每個腫瘤的灰階值(Csillik et al,2005)。可使用CD31的免疫組織化學分析來鑑定微血管的密度，利用Image-Pro 6.0 Microsoft軟體計數，並以平均值表示。

第7圖顯示對照組與實驗組的微血管密度。由第5圖可知，本發明之序列(IL8-17LIP10)可有效地抑制小鼠體內前列腺癌的微血管新生。

4. C57BL/6小鼠分析

C57BL/6小鼠置於無菌操作房中。無菌操作房中具有充份的飲水與飼料，並每天監測小鼠。將LLW2細胞(Lewis lung carcinma)注射至3隻裸鼠的右腹部，每隻裸鼠注射5 x 10⁶的細胞。培養2-4週後，採取腫瘤以供移植。總共有24隻小鼠接受腫瘤的移植。移植後第5天，將動物分為4組(每組6隻)，A組每個禮拜注射4次之IL8-IP10 500ug/kg，B組每個禮拜注射2次之IL8-IP10 500ug/kg，C組每個禮拜注射2次之IL8-IP10 250ug/kg，D組每天皮下注射100μl的食鹽水。腫瘤體積的計算方式如下：腫瘤體積=(長度x寬²)/2。長度及寬度係利用Image-Pro 6.0 Microsoft測量。在第24天時，將所有小鼠犧牲，並取得腫瘤GFP螢光影像。微血管密度的計算方式如下：密度=微血管長度/腫瘤體積。腫瘤樣本以4%甲醛固定後，包埋於石蠟中，以供後續的免疫組織化學分析。

第8圖顯示A組抑制腫瘤體積的效果最佳。第24天時，將所有小鼠犧牲前，所量測的腫瘤大小，發現A組每個禮拜注射4次之CXCL8-IP10 500ug/kg的老鼠腫瘤體積比D組控制組間的腫瘤小了30%.結果顯示CXCL8-IP10對控制腫瘤發展有顯著的效果。

第9A圖及第9B圖為犧牲後之小鼠腫瘤組織，而由第9A圖可得知腫瘤的遠端轉移已被CXCL8-IP10明顯抑制。第9A圖中的A組每個禮拜注射4次之CXCL8-IP10 500ug/kg的老鼠在第24天犧牲後，取出的肺臟；第9B圖為施打生理食鹽水的老鼠肺臟，其中箭頭所指的白色腫瘤部位為轉移到肺部所產生病灶。經過CXCL8-IP10投藥的老鼠肺部則非常乾淨，並沒有肺部轉移病灶的出現。

5.嗜中性白血球趨化性分析

嗜中性白血球趨化性係藉由改良後之Boyden chamber microchemotaxis assays來評估。白血球係由人類週邊血液經由一般濃度梯度分離而取得，而嗜中性白血球係由濃度低梯分離之底部取得並利用hypotonic lysis清除汙染的紅血球細胞。純化後的嗜中性白血球懸浮於5x106/ml in HBSS (400mg/L氯化鉀(KCl)，60mg/L磷酸氫鉀(KH2PO4)，8000mg/L氯化鈉(NaCl)，350mg/L碳酸氫鈉(NaHCO3)，90mg/L磷酸氫鈉(NaH2PO4‧7H2O)，1000mg/L葡萄糖(glucose)，以及0.5% pH 7.4牛胎盤血清(fetal calf serum；pH 7.4)，之後嗜中性白血球以Calcein AM(Invitrogen,Stockholm,Sweden)培養30分鐘，培養溫度為37℃。The chemoattractants(e.g.CXCL8 20ng/mL),either alone or together with antagonist(IL8-IP10F17L,etc.)趨化因子(例如：CXCL8 20ng/mL)單獨或與其他拮抗劑結合(IL8-IP10F17L,etc.)放置於Boyden chamber的培養區底部而純化後的嗜中性白血球置於培養槽上端，而培養槽的上端與底部係由孔徑5μm的聚碳酸酯濾膜(pore-size polycarbonate filters)所隔開。於37℃及5%二氧化碳(CO2)中培養30分鐘之後移除未移動之細胞及濾膜，並將移動的細胞打破並以VICTOR3(Perkin-Elmer,UK，excitation：485nm；emission：530nm)分析，移動的細胞百分比以趨化指數(Chemotaxis Index(CI)value)表示：CI=(intensity_antagonist-intensity_HBSS)/(intensity_CXCL8-intensity_HBSS)X100%

其中，intensity_antagonist係指同時加入本發明所述的具有拮抗作用的蛋白和CXCL8所產生細胞移動；intensity_CXCL8係指細胞僅經由CXCL8刺激而移動，而intensity_HBSS係指細胞的移動係由重力所造成。

6. RT-PCR分析各腫瘤細胞中CXCR1/2及CXCL8之基因表現量。

本實驗之各癌症細胞株的RNA均藉由TRIzol reagent(Invitrogen,America)及其操作說明萃取而得，其中大部分之RNA的定量係使用NanoDrop® ND-1000 spectrophotometer。於逆轉錄反應過程，樣本係使用cDNA reverse-transcription kit(Prime Script^TM RT reagent kit,Takara,Japan)進行培養，並於基因表現分析前至於冰上。GAPDH為內部控制組。RT-PCR之反應係藉由SYBR(Premix Ex Taq^TM,Takara,Japan)所完成，其CXCL引子為以下所述：5'-gagcactccataaggcacaaa-3'(forward)and 5'-atg gttccttccggtggt-3'(reverse)for CXCL8；5'-gaccaacatcgcagacacat-3'(forward)and 5'-tgcttgtctcgttccacttg-3'(reverse)for CXCR1；5'-ggctaagcaaaatgtgatatgtacc-3'(forward)and 5'-caaggttcgtccgtgttgta-3'(reverse)for CXCR2。

基因表現的計算方法如算式所表現gene expression=2^-△△Ct

第10圖顯示利用RT-PCR偵測到部分腫瘤細胞對於趨化素受體CXCR1具有高度的表達，此外許多的腫瘤細胞會表達高量的CXCR1/2等兩類受體的受質CXCL8，因此可以利用CXCR1/2受體拮抗劑來達到阻止腫瘤細胞生長和轉移的目的。

第11圖顯示更多的拮抗劑設計，在先前揭露的CXCL8-IP10中增加了第12號或/和第13號或/和第十七號胺基酸的變異，可以增強對於其受體CXCR1/2所引發生理反應的拮抗作用，有效達到降低因為腫瘤細胞所表達CXCR1/2受體，或是因為腫瘤細胞高量表達其受體對應受質細胞激素(CXCL1,2,3,5,6,7,8等)所伴隨引發腫瘤增生，抗藥性，轉移和血管新生的抑制作用。

由此可知，由於本發明趨化素胜肽可有效地抑制腫瘤生長、血管新生，以及治療癌症。

所有說明書中所揭示之發明技術特點可以任意方式組合。說明書中揭示之每一技術特點可以提供相同、等同或相似目的之其他方式替換。因此，除非另有特別說明，文中所有揭示之特點均只是等同或相似特點之一般系列之實例。

由上述可知，熟習此技藝者能輕易地了解本發明之必要特徵，在不脫離其精神與範圍之下能就本發明做許多改變與調整以應用於不同用途與條件。

<110>

<120>趨化素修飾胜肽/Modified Chemokine Peptide

<130>

<160> 13

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 72

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 經修飾ELR-CXC趨化素

<400> 1

<210> 2

<211> 72

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 2

<210> 3

<211> 74

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

<210> 4

<211> 74

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 4

<210> 5

<211> 74

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 5

<210> 6

<211> 73

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 6

<210> 7

<211> 74

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 7

<210> 8

<211> 74

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 8

<210> 9

<211> 73

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Artificial ELR-CXC chemokine

<400> 9

<210> 10

<211> 72

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 經修飾ELR-CXC趨化素

<400> 10

<210> 11

<211> 71

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 經修飾ELR-CXC趨化素

<400> 11

<210> 12

<211> 72

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 經修飾ELR-CXC趨化素

<400> 12

Claims

一種經修飾趨化素胜肽，其包含一胺基酸序列，該胺基酸具有一N端(N’)，該胺基酸序列帶有：(a)一N’-麩氨酸(E)-白胺酸(L)-精胺酸(R)之特徵序列，該特徵序列位於該趨化素胜肽N端；(b)一N’-脯胺酸(P)-丙胺酸(A)-絲胺酸(S)-麩醯胺(Q)-苯基丙胺酸(F)-Cys³之特徵序列，該特徵序列係位於趨化素胜肽N端算起第3個胱胺酸(Cys³)；其中該趨化素胜肽係包含該(a)、(b)特徵序列並具有一修飾位置，且該修飾位置位於該趨化素胜肽上由N端算起第17,12,13個胺基酸；其中該趨化素胜肽上第12個胺基酸由蘇氨酸(T)置換為絲氨酸(S)；其中該經修飾趨化素胜肽之未經修飾的前身係來自一來源趨化素胜肽，其中該來源趨化素胜肽係選自由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9及其組合所組成的群組其中之一。
如申請專利範圍第1項所述之經修飾趨化素胜肽，其中該等趨化素胜肽之第17個胺基酸由苯基丙胺酸(F)置換為白胺酸(L)、纈氨酸(V)或異亮氨酸(I)。
如申請專利範圍第1項所述之經修飾趨化素胜肽，其中該等趨化素胜肽之第13個胺基酸由酪氨酸(Y)置換為白胺酸(L)、苯丙氨酸(F)、色氨酸(W)或異亮氨酸(I)。
如申請專利範圍第1項所述之經修飾趨化素胜肽，其中該來源趨化素胜肽N端的第1個胱胺酸及第2個胱胺酸之間可存在1個胺基酸，且當該胺基酸為1個時，該胺基酸係為具有電性或不具電性之極性胺基酸。
如申請專利範圍第1項所述的經修飾趨化素胜肽，其中該經修飾趨化素胜肽係選自由SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、和SEQ ID NO：12及其組合所組成的群組其中之一。
一種醫藥組合物，包含如申請專利範圍第1項之經修飾趨化素胜肽及一醫藥可接受性賦形劑。
如申請專利範圍第6項所述的醫藥組合物，其中該經修飾趨化素胜肽係用於治療癌症或抑制腫瘤生長。
一種治療癌症及抑制腫瘤的醫藥組合物，包括如申請專利範圍第1項之經修飾趨化素胜肽及一醫藥可接受性賦形劑。
如申請專利範圍第8項所述的醫藥組合物，其中該癌症包括，包括前列腺癌、乳癌、子宮癌、血癌、卵巢癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、大腸直腸癌、睪丸癌、淋巴癌、橫紋肌肉瘤、神經母細胞瘤、胰臟癌、肺癌、腦部腫瘤、皮膚癌、胃癌、口腔癌、肝癌、喉癌、膽癌、甲狀腺癌、肝癌、腎臟癌以及鼻咽癌。
申請專利範圍第9項所述的醫藥組合物，其中該癌症其共同特徵為具有CXCR1/2的表達或具有高量CXCL8,CXCL1,CXCL2,CXCL3,CXCL5,CXCL6或CXCL7趨化素或其受體表達的腫瘤細胞。