JPH069427A - 敗血症の予防・治療薬 - Google Patents
敗血症の予防・治療薬Info
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- JPH069427A JPH069427A JP5071866A JP7186693A JPH069427A JP H069427 A JPH069427 A JP H069427A JP 5071866 A JP5071866 A JP 5071866A JP 7186693 A JP7186693 A JP 7186693A JP H069427 A JPH069427 A JP H069427A
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- sepsis
- medicine
- preventive
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- interleukin
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Abstract
(57)【要約】
敗血症の予防・治療
【構成】 インターロイキン１１を有効成分とする敗血
症の予防・治療薬。 【効果】 インターロイキン１１は、効率よく敗血症を
治療もしくは予防する活性を有し、また生体由来の生理
活性物質であるため、優れた敗血症の治療および予防薬
として有用である。
症の予防・治療薬。 【効果】 インターロイキン１１は、効率よく敗血症を
治療もしくは予防する活性を有し、また生体由来の生理
活性物質であるため、優れた敗血症の治療および予防薬
として有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は新規な敗血症の予防・治
療薬に関する。
療薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】敗血症は感染症、悪性腫瘍、肝硬変、腎
不全、糖尿病、異常分娩といったような疾病や、留置カ
テーテル、輸液器具、透析、気管切開といったようなケ
ガや病気に対する治療が原因となって、細菌感染巣から
絶えずまたは断続的に細菌が血液に侵入してくる重傷全
身性感染症である。
不全、糖尿病、異常分娩といったような疾病や、留置カ
テーテル、輸液器具、透析、気管切開といったようなケ
ガや病気に対する治療が原因となって、細菌感染巣から
絶えずまたは断続的に細菌が血液に侵入してくる重傷全
身性感染症である。
【０００３】このような敗血症の原因菌としてはブドウ
球菌、腸連鎖球菌、大腸菌、緑膿菌、クレブシエラ、エ
ンテロバクターなどが主に認められる。これらの細菌感
染により高熱、悪寒、頻脈、強い全身症状を示し、しば
しば、動・静脈血、髄液、骨髄液に感染菌が確認される
ようになる。
球菌、腸連鎖球菌、大腸菌、緑膿菌、クレブシエラ、エ
ンテロバクターなどが主に認められる。これらの細菌感
染により高熱、悪寒、頻脈、強い全身症状を示し、しば
しば、動・静脈血、髄液、骨髄液に感染菌が確認される
ようになる。
【０００４】しかしながら近年では、各種の強力な抗生
物質の開発により典型的な敗血症の症状を示すことは少
なくなってきた。変わって悪性腫瘍、腎不全、悪性リン
パ腫などの患者や高齢者、未熟児といったような抵抗力
の減弱した宿主に、副腎皮質ホルモン、抗腫瘍剤、の投
与や留置カテーテル、輸液器具、透析、気管切開といっ
たような手術、処置を施すことにより誘引される敗血症
が中心となってきた。敗血症は悪寒・発熱・発汗などと
ともに急激な血圧降下・末梢循環不全から始まり、全身
性ショックが誘発され、肺・腎臓・肝臓・心臓・消化管
の障害、さらには中枢神経系等の障害が同時にまたは続
発し、その治療は難しく、しばしば重要臓器障害により
死亡する疾患である。さらに、敗血症が引き金となり播
種性血管内凝固症候群が誘発され、予後は非常に悪くな
る。
物質の開発により典型的な敗血症の症状を示すことは少
なくなってきた。変わって悪性腫瘍、腎不全、悪性リン
パ腫などの患者や高齢者、未熟児といったような抵抗力
の減弱した宿主に、副腎皮質ホルモン、抗腫瘍剤、の投
与や留置カテーテル、輸液器具、透析、気管切開といっ
たような手術、処置を施すことにより誘引される敗血症
が中心となってきた。敗血症は悪寒・発熱・発汗などと
ともに急激な血圧降下・末梢循環不全から始まり、全身
性ショックが誘発され、肺・腎臓・肝臓・心臓・消化管
の障害、さらには中枢神経系等の障害が同時にまたは続
発し、その治療は難しく、しばしば重要臓器障害により
死亡する疾患である。さらに、敗血症が引き金となり播
種性血管内凝固症候群が誘発され、予後は非常に悪くな
る。
【０００５】このような敗血症の原因は、生体に侵入し
てきた感染菌に加え、大腸菌をはじめとするグラム陰性
菌の細胞膜成分をなす内毒素や、黄色ブドウ球菌をはじ
めとするグラム陽性菌の産生する外毒素であることが知
られている。この内毒素のうち、リポポリサッカライド
（LPS ）の生物活性はきわめて多彩で、前述した発熱・
血圧低下をはじめとして体重減少・低血糖・血清鉄減少
反応・白血球減少・血小板減少・インターフェロン産生
作用のほかショックにより死にいたらしめることが報告
されている。（本間ら、内毒素,141-391,1982 ）。
てきた感染菌に加え、大腸菌をはじめとするグラム陰性
菌の細胞膜成分をなす内毒素や、黄色ブドウ球菌をはじ
めとするグラム陽性菌の産生する外毒素であることが知
られている。この内毒素のうち、リポポリサッカライド
（LPS ）の生物活性はきわめて多彩で、前述した発熱・
血圧低下をはじめとして体重減少・低血糖・血清鉄減少
反応・白血球減少・血小板減少・インターフェロン産生
作用のほかショックにより死にいたらしめることが報告
されている。（本間ら、内毒素,141-391,1982 ）。
【０００６】そこでこのような敗血症の予防・治療方法
としては、原因菌を検出し、その抗生物質感受性を測定
してから、起因菌に対して最適な抗生物質を投与すると
ともに、利尿、補液、電解質補正、低タンパク血症の改
善、栄養の補給、γ−グロブリンの投与といったよう
な、宿主の防衛力につとめる必要がある（勝 正孝、En
cyclo-pedia of medical sciences,37,263-265,1984
）。また、不幸にしてショックにおちいった場合は、
外科手術による病巣の除去、循環障害の改善、オプソニ
ン活性化物質の投与、副腎皮質ホルモンの投与、合成プ
ロテアーゼ阻害剤の投与といった処置がなされている。
しかしながら、前述したような悪性腫瘍をはじめとする
患者では、抵抗力がかなり低下しており、多剤耐性菌の
出現も加わり、抗生物質の投与だけではなかなか症状の
改善がみられないことがある。また、基礎疾患の症状と
敗血症の症状がオーバーラップしてくるために、明確な
診断がなされにくくなり、敗血症の予防・治療に困難を
きたす場合もしばしばみられる。さらにショックや播種
性血管内凝固症候群におちいった場合は、その予防・治
療ははなはだ困難であり、現在においても高い死亡率を
きたす疾患である。
としては、原因菌を検出し、その抗生物質感受性を測定
してから、起因菌に対して最適な抗生物質を投与すると
ともに、利尿、補液、電解質補正、低タンパク血症の改
善、栄養の補給、γ−グロブリンの投与といったよう
な、宿主の防衛力につとめる必要がある（勝 正孝、En
cyclo-pedia of medical sciences,37,263-265,1984
）。また、不幸にしてショックにおちいった場合は、
外科手術による病巣の除去、循環障害の改善、オプソニ
ン活性化物質の投与、副腎皮質ホルモンの投与、合成プ
ロテアーゼ阻害剤の投与といった処置がなされている。
しかしながら、前述したような悪性腫瘍をはじめとする
患者では、抵抗力がかなり低下しており、多剤耐性菌の
出現も加わり、抗生物質の投与だけではなかなか症状の
改善がみられないことがある。また、基礎疾患の症状と
敗血症の症状がオーバーラップしてくるために、明確な
診断がなされにくくなり、敗血症の予防・治療に困難を
きたす場合もしばしばみられる。さらにショックや播種
性血管内凝固症候群におちいった場合は、その予防・治
療ははなはだ困難であり、現在においても高い死亡率を
きたす疾患である。
【０００７】以上のような現状に対して、事前に生体に
存在する生体防御機能を高めることができれば、敗血症
や前述した疾患によって引き起こされるショックや播種
性血管内凝固症候群を回避できるものと期待できる。患
者へ投与することにより、患者自身の生体防御機能を高
め、敗血症を防ぐ生理活性物質としてインターロイキン
１（ＩＬ−１）や腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）が知られてい
る。しかしながら、ＩＬ−１を大量に投与した場合では
敗血症性ショック類似の病態を招来し、ＴＮＦ大量投与
の場合ではショックにより死亡率が高いことがあり、医
薬品として生体内投与した場合、安全性に大いに問題が
ある（斎藤ら、外科治療、65,156-164,1991 ）。
存在する生体防御機能を高めることができれば、敗血症
や前述した疾患によって引き起こされるショックや播種
性血管内凝固症候群を回避できるものと期待できる。患
者へ投与することにより、患者自身の生体防御機能を高
め、敗血症を防ぐ生理活性物質としてインターロイキン
１（ＩＬ−１）や腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）が知られてい
る。しかしながら、ＩＬ−１を大量に投与した場合では
敗血症性ショック類似の病態を招来し、ＴＮＦ大量投与
の場合ではショックにより死亡率が高いことがあり、医
薬品として生体内投与した場合、安全性に大いに問題が
ある（斎藤ら、外科治療、65,156-164,1991 ）。
【０００８】本来、生体内に存在し、目的の機能を有し
ている物質を医薬として応用することは、生体のリズム
を乱さない点においてより望ましいと言えるが、生体由
来の生理活性物質で敗血症の予防・治療薬として安全か
つ有用なものはまだ開発されていない。
ている物質を医薬として応用することは、生体のリズム
を乱さない点においてより望ましいと言えるが、生体由
来の生理活性物質で敗血症の予防・治療薬として安全か
つ有用なものはまだ開発されていない。
【０００９】一方、インターロイキン１１（以下、ＩＬ
−１１と略す）は、Ｂリンパ球の成熟分化、プラズマサ
イトーマ増殖を支持し、巨核球コロニー形成と芽球コロ
ニー形成過程でＩＬ−３に対して相乗的に働くことが知
られている（池淵 研二、造血因子、2,68-74,1991）。
−１１と略す）は、Ｂリンパ球の成熟分化、プラズマサ
イトーマ増殖を支持し、巨核球コロニー形成と芽球コロ
ニー形成過程でＩＬ−３に対して相乗的に働くことが知
られている（池淵 研二、造血因子、2,68-74,1991）。
【００１０】このようにＩＬ−１１については色々な生
理活性が報告されているが、まだ敗血症対する明確な効
果は示されていない。
理活性が報告されているが、まだ敗血症対する明確な効
果は示されていない。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明で解決しようと
するのは、本来生体内で作用を有する生理活性物質を医
薬として提供することにある。なかんずく本発明の目的
は、生体内で効率よく敗血症とそれにともなう諸症状を
予防または治療する作用を有する生体内生理活性物質を
提供することにある。
するのは、本来生体内で作用を有する生理活性物質を医
薬として提供することにある。なかんずく本発明の目的
は、生体内で効率よく敗血症とそれにともなう諸症状を
予防または治療する作用を有する生体内生理活性物質を
提供することにある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】前記目的は以下の本発明
により達成される。すなわち本発明は、インターロイキ
ン１１を有効成分とする敗血症とそれにともなう諸症状
の予防・治療薬に関する。本発明は、ＩＬ−１１が効率
良く血中細菌の増加による敗血症とそれにともなう諸症
状の予防・治療薬になることを見出し、ＩＬ−１１が、
従来得られなかった新規な敗血症とそれにともなう諸症
状の予防・治療薬として有用であることを示すものであ
る。
により達成される。すなわち本発明は、インターロイキ
ン１１を有効成分とする敗血症とそれにともなう諸症状
の予防・治療薬に関する。本発明は、ＩＬ−１１が効率
良く血中細菌の増加による敗血症とそれにともなう諸症
状の予防・治療薬になることを見出し、ＩＬ−１１が、
従来得られなかった新規な敗血症とそれにともなう諸症
状の予防・治療薬として有用であることを示すものであ
る。
【００１３】本発明で使用するＩＬ−１１にはとくに制
限はなく、既知の方法で得られるＩＬ−１１が好適に使
用される。例えば遺伝子組換え法により得られた組換え
型ＩＬ−１１、あるいはＩＬ−１１産生細胞を培養して
得られたものでも良い。
限はなく、既知の方法で得られるＩＬ−１１が好適に使
用される。例えば遺伝子組換え法により得られた組換え
型ＩＬ−１１、あるいはＩＬ−１１産生細胞を培養して
得られたものでも良い。
【００１４】組換え型ＩＬ−１１は、既知の方法により
製造することができる。一例として、動物細胞を宿主と
した例を実施例として示したが、これ以外でも広く知ら
れた遺伝子操作法を用いることによって製造することが
できる。たとえば、ハムスター細胞、マウス細胞、サル
細胞などの動物細胞や昆虫細胞あるいは酵母、大腸菌
に、ＩＬ−１１遺伝子をその宿主で機能するプロモータ
ーなどの下流に連結して導入することによっても調製す
ることができる。
製造することができる。一例として、動物細胞を宿主と
した例を実施例として示したが、これ以外でも広く知ら
れた遺伝子操作法を用いることによって製造することが
できる。たとえば、ハムスター細胞、マウス細胞、サル
細胞などの動物細胞や昆虫細胞あるいは酵母、大腸菌
に、ＩＬ−１１遺伝子をその宿主で機能するプロモータ
ーなどの下流に連結して導入することによっても調製す
ることができる。
【００１５】培養ヒト細胞から取得したＩＬ−１１は、
ヒト以外の種由来の不純物の混入を避けることができ、
得られるＩＬ−１１は本来生体内で働くＩＬ−１１に近
いものとなるため好ましい。すなわちヒトに医薬として
投与したときに抗体産生を相対的に排除することができ
るため好ましい。したがって、ヒト培養細胞が産生する
ＩＬ−１１は生体内でのより効率的な有効性を期待する
ことができる。
ヒト以外の種由来の不純物の混入を避けることができ、
得られるＩＬ−１１は本来生体内で働くＩＬ−１１に近
いものとなるため好ましい。すなわちヒトに医薬として
投与したときに抗体産生を相対的に排除することができ
るため好ましい。したがって、ヒト培養細胞が産生する
ＩＬ−１１は生体内でのより効率的な有効性を期待する
ことができる。
【００１６】本発明の培養ヒト細胞が産生するＩＬ−１
１とは、ヒト由来の細胞を培養することによって得られ
るＩＬ−１１を意味し、さらに特定すれば、正常細胞す
なわち、癌化（極端な形質転換）していない、あるいは
癌細胞由来でない付着性ヒト細胞を培養することによっ
て得られるＩＬ−１１が好ましい。癌細胞由来でない正
常ヒト細胞としては、特に線維芽細胞、内皮細胞、スト
ロ−マ細胞などが生体内でのＩＬ−１１の源の一つと考
えられており、その一部は正常細胞に近い形で培養でき
るので特に好適に用いられるが、特にこれらに限定され
るものではない。
１とは、ヒト由来の細胞を培養することによって得られ
るＩＬ−１１を意味し、さらに特定すれば、正常細胞す
なわち、癌化（極端な形質転換）していない、あるいは
癌細胞由来でない付着性ヒト細胞を培養することによっ
て得られるＩＬ−１１が好ましい。癌細胞由来でない正
常ヒト細胞としては、特に線維芽細胞、内皮細胞、スト
ロ−マ細胞などが生体内でのＩＬ−１１の源の一つと考
えられており、その一部は正常細胞に近い形で培養でき
るので特に好適に用いられるが、特にこれらに限定され
るものではない。
【００１７】本発明の組成物は前述した方法で製造され
るヒトＩＬ−１１を主成分として含有する。他の成分と
しては、一般的な医薬添加物が選ばれる。もちろん添加
物が無くとも本発明の目的は達成される。一般的には主
として安定化のために添加物が加えられる。そのような
医薬添加物としては、通常、局法に記載された、医薬添
加物として使えるタンパク質および／または糖類の中か
ら選ばれる。特に好適にはヒト血清アルブミン（ＨＳ
Ａ）、ゼラチン、マンニト−ル、ソルビト−ル、ラクト
−スなどの中から適宜あるいは組み合わせて選ばれる
が、もちろんこれらに限定するものではない。
るヒトＩＬ−１１を主成分として含有する。他の成分と
しては、一般的な医薬添加物が選ばれる。もちろん添加
物が無くとも本発明の目的は達成される。一般的には主
として安定化のために添加物が加えられる。そのような
医薬添加物としては、通常、局法に記載された、医薬添
加物として使えるタンパク質および／または糖類の中か
ら選ばれる。特に好適にはヒト血清アルブミン（ＨＳ
Ａ）、ゼラチン、マンニト−ル、ソルビト−ル、ラクト
−スなどの中から適宜あるいは組み合わせて選ばれる
が、もちろんこれらに限定するものではない。
【００１８】また、本発明の目的は他の敗血症薬、例え
ば抗生物質、IL-1レセプタ−アンタゴニスト、抗TNF 抗
体、抗LPS 抗体、各種サイトカインなどと組み合わせて
使用しても、特にこれらに限定されるものではない。
ば抗生物質、IL-1レセプタ−アンタゴニスト、抗TNF 抗
体、抗LPS 抗体、各種サイトカインなどと組み合わせて
使用しても、特にこれらに限定されるものではない。
【００１９】本発明の目的である敗血症とそれにともな
う諸症状の予防・治療活性を具体的に達成するために
は、こうして得られたＩＬ−１１を主成分とする組成物
を生体に投与する。投与対象は、敗血症とそれにともな
う諸症状の発症が予測される場合、あるいは既に発症し
ている場合であるが特に限定されるものではない。具体
的には外科手術施行前後、各種肝疾患状態、感染症、熱
傷、悪性腫瘍などが対象となる。しかしながら、敗血症
の状態は患者個々の状態により様々な臨床症状を示すこ
とらか、敗血症の関与を疑わせる患者は、全て本発明の
予防・治療薬の対象となり得る。
う諸症状の予防・治療活性を具体的に達成するために
は、こうして得られたＩＬ−１１を主成分とする組成物
を生体に投与する。投与対象は、敗血症とそれにともな
う諸症状の発症が予測される場合、あるいは既に発症し
ている場合であるが特に限定されるものではない。具体
的には外科手術施行前後、各種肝疾患状態、感染症、熱
傷、悪性腫瘍などが対象となる。しかしながら、敗血症
の状態は患者個々の状態により様々な臨床症状を示すこ
とらか、敗血症の関与を疑わせる患者は、全て本発明の
予防・治療薬の対象となり得る。
【００２０】投与方法としては、特に限定するものでは
ないが、一般的な注射、すなわち静脈注射、皮下注射、
筋肉注射、点滴静脈内注入などの内適当な一つが選ばれ
る。経口、経鼻、経肺、経腸のような経粘膜投与法も場
合により、好適に実施される。
ないが、一般的な注射、すなわち静脈注射、皮下注射、
筋肉注射、点滴静脈内注入などの内適当な一つが選ばれ
る。経口、経鼻、経肺、経腸のような経粘膜投与法も場
合により、好適に実施される。
【００２１】有効投与量としては、１日につき体重１Ｋ
ｇ当たり０．０００１から１００００μｇの範囲で選ば
れる。好適には体重１Ｋｇ当たり０．００１−１０００
μｇの範囲で選ばれる。前述の投与量は症状によっても
異なり、これらの値に限定されるものでは勿論ない。
ｇ当たり０．０００１から１００００μｇの範囲で選ば
れる。好適には体重１Ｋｇ当たり０．００１−１０００
μｇの範囲で選ばれる。前述の投与量は症状によっても
異なり、これらの値に限定されるものでは勿論ない。
【００２２】投与回数としては通常１日１ないし２回、
もしくは２ないし数日に１回の範囲で選ばれるがこれに
限定されるものではない。投与方法としては、望ましく
は敗血症の予想される時点で投与するが、その投与時期
は特に限定されるものではない。
もしくは２ないし数日に１回の範囲で選ばれるがこれに
限定されるものではない。投与方法としては、望ましく
は敗血症の予想される時点で投与するが、その投与時期
は特に限定されるものではない。
【００２３】
【実施例】以下に本発明を実施例によって、より詳細
に、より具体的に説明するが、もちろんこれによって本
発明が制限されるものではない。
に、より具体的に説明するが、もちろんこれによって本
発明が制限されるものではない。
【００２４】実施例１ 組換え型ＩＬ−１１の調製：ヒト甲状腺癌由来細胞株Ｎ
ＩＭ−１（通山薫ら、日本血液学会誌、５３（５）、８
０５（１９９０））より調製したｍＲＮＡ １μｇか
ら、ｃＤＮＡ合成キットを（ベーリンガー社）を用い
て、２本鎖ｃＤＮＡを合成した。手法はｃＤＮＡ合成キ
ット指定の方法に従った。
ＩＭ−１（通山薫ら、日本血液学会誌、５３（５）、８
０５（１９９０））より調製したｍＲＮＡ １μｇか
ら、ｃＤＮＡ合成キットを（ベーリンガー社）を用い
て、２本鎖ｃＤＮＡを合成した。手法はｃＤＮＡ合成キ
ット指定の方法に従った。
【００２５】次に、ＩＬ−１１ｃＤＮＡを取得するため
に次のＤＮＡオリゴマー２本を合成した。 ＩＬ−１１Ｎ ＣＣＧＡＡＴＴＣＧＧＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＴＧＴＴ （配列表の配列番号１） ＩＬ−１１Ｃ ＣＣＧＡＡＴＴＣＧＴＣＡＣＡＧＣＣＧＡＧＴＣＴＴ （配列表の配列番号２） ＰＣＲは、ＤＮＡサーマルフイクラーPJ1000（パーキン
エルマー・シータス社）を用いて熱変性９４℃１分間、
アニーリング５０℃２分間、鎖伸長反応７２℃３分間の
条件で４０サイクル行った。サンプルは下記のように調
製したものを５本用い、実験のバラツキ（ＰＣＲでの読
み誤り）の影響を抑えた。
に次のＤＮＡオリゴマー２本を合成した。 ＩＬ−１１Ｎ ＣＣＧＡＡＴＴＣＧＧＡＣＡＴＧＡＡＣＴＧＴＧＴＴ （配列表の配列番号１） ＩＬ−１１Ｃ ＣＣＧＡＡＴＴＣＧＴＣＡＣＡＧＣＣＧＡＧＴＣＴＴ （配列表の配列番号２） ＰＣＲは、ＤＮＡサーマルフイクラーPJ1000（パーキン
エルマー・シータス社）を用いて熱変性９４℃１分間、
アニーリング５０℃２分間、鎖伸長反応７２℃３分間の
条件で４０サイクル行った。サンプルは下記のように調
製したものを５本用い、実験のバラツキ（ＰＣＲでの読
み誤り）の影響を抑えた。
【００２６】 Ｈ2 Ｏ ７８．５μリットル １０×反応バッファー １０ μリットル 10mM dNTP 混液 ２ μリットル プライマーＩＬ−１１Ｎ(50 μM) ２ μリットル プライマーＩＬ−１１Ｃ(50 μM) ２ μリットル ｃＤＮＡ ５ μリットル AmplitagTM（宝酒造） ０．５μリットル （全量 １００ μリットル） （１０×反応バッファー：１００mMトリス・塩酸塩(pH8.3) 、500mM KCl 、15 mM MgCl 2 、0.1%ゼラチン）
【００２７】増幅したＤＮＡはフェノール／クロロホル
ム処理（２回）、クロロホルム処理し、エタノール沈殿
により回収した。ＤＮＡは制限酵素EcoRI で切断し、約
０．６ｋｂのフラグメントを１％低融点アガロース電気
泳動により分離し、精製した。このＤＮＡフラグメント
は、ベクターｐＳＲα（Y. Takebe ら、Mol. Cell. Bio
l., 8, 466-472(1988)）をEcoRI で切断後、ＢＡＰ(Bac
terial Alkaline Phosphatase)処理により脱リン酸化し
たものと、ライゲーションし（ライゲーションキット使
用、宝酒造）大腸菌HB101 コンピテントセル（宝酒造）
にトランスフォーメーションした。
ム処理（２回）、クロロホルム処理し、エタノール沈殿
により回収した。ＤＮＡは制限酵素EcoRI で切断し、約
０．６ｋｂのフラグメントを１％低融点アガロース電気
泳動により分離し、精製した。このＤＮＡフラグメント
は、ベクターｐＳＲα（Y. Takebe ら、Mol. Cell. Bio
l., 8, 466-472(1988)）をEcoRI で切断後、ＢＡＰ(Bac
terial Alkaline Phosphatase)処理により脱リン酸化し
たものと、ライゲーションし（ライゲーションキット使
用、宝酒造）大腸菌HB101 コンピテントセル（宝酒造）
にトランスフォーメーションした。
【００２８】得られたクローン５個のＤＮＡを取得し、
接続部分の配列解析を行って、目的とするＩＬ−１１発
現プラスミドｐＳＲＩＬ−１１を得た。このＤＮＡ：ｐ
ＳＲＩＬ−１１をＤＥＡＥ−デキストラン法でＣＯＳ−
１細胞に導入して、ＦＣＳ血清５％入り培地で２日間培
養した後、無血清培地で細胞を洗い、無血清培地を加え
て２４時間培養した。この培養上清を濃縮、脱塩して
０．２２μｍのフィルターで濾過したものを、薬理実験
に使用した。
接続部分の配列解析を行って、目的とするＩＬ−１１発
現プラスミドｐＳＲＩＬ−１１を得た。このＤＮＡ：ｐ
ＳＲＩＬ−１１をＤＥＡＥ−デキストラン法でＣＯＳ−
１細胞に導入して、ＦＣＳ血清５％入り培地で２日間培
養した後、無血清培地で細胞を洗い、無血清培地を加え
て２４時間培養した。この培養上清を濃縮、脱塩して
０．２２μｍのフィルターで濾過したものを、薬理実験
に使用した。
【００２９】実施例２ 敗血症に対するＩＬ−１１の効果：１群６匹のＣ３Ｈ／
ＨｅＮマウス（雄性、８週令、日本エスエルシー）にＩ
Ｌ−１１（実施例１で得た溶液）をマウス１匹当たり１
００ulの容量で１回皮下投与した。対照群にはＩＬ−１
１の代わりにベクターのみをＣＯＳ細胞にトランスフェ
クションして得た溶液１００ulを投与した。ＩＬ−１１
投与群および対照群とも１時間後に細菌毒素として生理
食塩水で３．５mg／mlに溶解したＬＰＳ（E.coli:055:B
5 ,DIFCO）をマウス１匹当たり１００ul腹腔内に投与し
て、マウスに敗血症により誘発されるショックを起こし
た。測定は２４時間ごとに６日間、マウスの生死判定を
行った。結果を表１に示す。
ＨｅＮマウス（雄性、８週令、日本エスエルシー）にＩ
Ｌ−１１（実施例１で得た溶液）をマウス１匹当たり１
００ulの容量で１回皮下投与した。対照群にはＩＬ−１
１の代わりにベクターのみをＣＯＳ細胞にトランスフェ
クションして得た溶液１００ulを投与した。ＩＬ−１１
投与群および対照群とも１時間後に細菌毒素として生理
食塩水で３．５mg／mlに溶解したＬＰＳ（E.coli:055:B
5 ,DIFCO）をマウス１匹当たり１００ul腹腔内に投与し
て、マウスに敗血症により誘発されるショックを起こし
た。測定は２４時間ごとに６日間、マウスの生死判定を
行った。結果を表１に示す。
【００３０】
【表１】 表１に示すようにＩＬ−１１を投与した群では対照群に
比し、敗血症により誘発されるショックにより死にいた
るマウスの数が減少し、ＩＬ−１１は生体内投与により
敗血症を防ぐ作用が認められた。
比し、敗血症により誘発されるショックにより死にいた
るマウスの数が減少し、ＩＬ−１１は生体内投与により
敗血症を防ぐ作用が認められた。
【００３１】実施例３ 細胞培養によるＩＬ−１１の調製：ヒト線維芽細胞DIP-
2 の培養上清をシリカ担体に吸着させた。つぎに、PBS
(-), 20mM HCl, 25% エチレングリコ−ル/20mM HCl の
順でシリカ担体を洗浄した。50% エチレングリコ−ル/2
0mM HCl で溶出させ、溶出液を強陽イオン交換担体に吸
着させた。20mM HCl, 50mM PB (pH7.0), 20mM PB (pH8.
0)の順で強陽イオン交換担体を洗浄した。0.2M NaCl/50
mM PB (pH8.0) で溶出させ、ＩＬ−１１の調製液とし
た。調製液中のエンドトキシン濃度は0.034EU/mlで、Ｉ
Ｌ−１１濃度はアミノ酸組成分析により定めた。
2 の培養上清をシリカ担体に吸着させた。つぎに、PBS
(-), 20mM HCl, 25% エチレングリコ−ル/20mM HCl の
順でシリカ担体を洗浄した。50% エチレングリコ−ル/2
0mM HCl で溶出させ、溶出液を強陽イオン交換担体に吸
着させた。20mM HCl, 50mM PB (pH7.0), 20mM PB (pH8.
0)の順で強陽イオン交換担体を洗浄した。0.2M NaCl/50
mM PB (pH8.0) で溶出させ、ＩＬ−１１の調製液とし
た。調製液中のエンドトキシン濃度は0.034EU/mlで、Ｉ
Ｌ−１１濃度はアミノ酸組成分析により定めた。
【００３２】実施例４ 敗血症に対するＩＬ−１１の効果：１群６匹のＣ３Ｈ／
ＨｅＮマウス（雄性、８週令、日本エスエルシー）に、
0.1%同種マウス血清含有生理食塩水で100ug/mlになるよ
う調製したＩＬ−１１（実施例３で得た溶液）を、マウ
ス１匹当たり１００ulの容量で１回皮下投与した。対照
群には0.1%同種マウス血清含有生理食塩水のみを１００
ul投与した。ＩＬ−１１投与群および対照群とも１時間
後に細菌毒素として生理食塩水で３．５mg／mlに溶解し
たＬＰＳ（E.coli:055:B5 ,DIFCO）をマウス１匹当たり
１００ul腹腔内に投与して、マウスに敗血症により誘発
されるショックを起こした。測定は２４時間ごとに11日
間、マウスの生死判定を行った。結果を表２に示す。
ＨｅＮマウス（雄性、８週令、日本エスエルシー）に、
0.1%同種マウス血清含有生理食塩水で100ug/mlになるよ
う調製したＩＬ−１１（実施例３で得た溶液）を、マウ
ス１匹当たり１００ulの容量で１回皮下投与した。対照
群には0.1%同種マウス血清含有生理食塩水のみを１００
ul投与した。ＩＬ−１１投与群および対照群とも１時間
後に細菌毒素として生理食塩水で３．５mg／mlに溶解し
たＬＰＳ（E.coli:055:B5 ,DIFCO）をマウス１匹当たり
１００ul腹腔内に投与して、マウスに敗血症により誘発
されるショックを起こした。測定は２４時間ごとに11日
間、マウスの生死判定を行った。結果を表２に示す。
【００３３】
【表２】 表２に示すようにＩＬ−１１を投与した群では対照群に
比し、敗血症により誘発されるショックにより死にいた
るマウスの数が減少し、ＩＬ−１１は生体内投与により
敗血症を防ぐ作用が認められた。
比し、敗血症により誘発されるショックにより死にいた
るマウスの数が減少し、ＩＬ−１１は生体内投与により
敗血症を防ぐ作用が認められた。
【００３４】
【発明の効果】本発明によって、生体内で効率よく敗血
症を治療もしくは予防する活性を有する予防・治療薬を
得ることができる。また、ＩＬ−１１は生体内に存在す
るものであるため、合成医薬に比べより生体と調和する
という優れた敗血症の治療および予防薬が期待できる。
症を治療もしくは予防する活性を有する予防・治療薬を
得ることができる。また、ＩＬ−１１は生体内に存在す
るものであるため、合成医薬に比べより生体と調和する
という優れた敗血症の治療および予防薬が期待できる。
【００３５】
配列番号：１ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列 CCGAATTCGG ACATGAACTG TGTT 24
【００３６】 配列番号：２ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列 CCGAATTCGT CACAGCCGAG TCTT 24
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 岡野 清 神奈川県鎌倉市手広1111番地 東レ株式会 社基礎研究所内
Claims (2)
- 【請求項１】 インターロイキン１１を有効成分とする
敗血症の予防・治療薬。 - 【請求項２】 インターロイキン１１が培養ヒト細胞が
産生するものである請求項１記載の敗血症の予防・治療
薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5071866A JPH069427A (ja) | 1992-03-30 | 1993-03-30 | 敗血症の予防・治療薬 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7431292 | 1992-03-30 | ||
| JP4-74312 | 1992-03-30 | ||
| JP5071866A JPH069427A (ja) | 1992-03-30 | 1993-03-30 | 敗血症の予防・治療薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH069427A true JPH069427A (ja) | 1994-01-18 |
Family
ID=26412984
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5071866A Pending JPH069427A (ja) | 1992-03-30 | 1993-03-30 | 敗血症の予防・治療薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH069427A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006134601A3 (en) * | 2005-06-16 | 2007-05-10 | Hadasit Med Res Service | Methods for the treatment of renal failure |
-
1993
- 1993-03-30 JP JP5071866A patent/JPH069427A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006134601A3 (en) * | 2005-06-16 | 2007-05-10 | Hadasit Med Res Service | Methods for the treatment of renal failure |
| US7897145B2 (en) | 2005-06-16 | 2011-03-01 | Hadasit Medical Research Services And Development Ltd. | Methods for the treatment of renal failure |
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