CN104211765B - 与trb3蛋白特异性结合的多肽，其筛选方法、鉴定和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了与TRB3蛋白特异性结合的多肽，其筛选方法、鉴定和用途，具体涉及涉及与人伪激酶tribbles3（TRB3）特异性结合的三条多肽序列，具有下列氨基酸序列：B1：Ser‑Leu‑Ser‑Gln‑Met‑Leu‑Ser‑Met，A2：Gly‑Gly‑Trp‑Leu‑Thr‑Arg‑Leu‑Leu‑Gln‑Thr‑Lys，B3：Ile‑Gly‑Ala‑Ala‑Leu‑Asp‑Thr‑Ile，该多肽是通过表面等离子共振（Biacore）的方法筛选出来，具有与TRB3特异性结合，并能阻断TRB3和P62蛋白结合的能力；同时该肽段的衍生物Pep2‑B1，Pep2‑A2，Pep2‑B3可以抑制肿瘤细胞的生长和转移。因此本发明及其衍生物可以作为TRB3新的抑制剂，并可应用于开发抑制肿瘤生长和转移的疫苗或药物。

Description

与TRB3蛋白特异性结合的多肽，其筛选方法、鉴定和用途

技术领域

本发明涉及一种能与人伪激酶tribbles3（TRB3）结合并且阻断其与P62蛋白结合的多肽，属于医药技术领域。

背景技术

癌症在全球是导致死亡的“头号杀手”。转移是癌症致死的主要原因，90%以上的癌症患者最终死于肿瘤转移。因此，抗肿瘤转移在肿瘤治疗中显得尤为重要。肿瘤的侵袭和转移是一个极其复杂的多基因调控过程，涉及一系列侵袭转移相关基因的表达和功能异常。对这些基因的作用机制及下游信号转导途径的阐明，将为转移性癌症的分子诊断和个体化治疗奠定基础。

TRB3（Tribbles Homologue3）是Tribbles同源蛋白家族成员之一，最早在果蝇中被鉴定到，并发现该蛋白能抑制有丝分裂，调节发育过程中细胞的增殖、迁移及形态形成。在哺乳动物中，有三种Tribbles同源蛋白：TRB1，TRB2和TRB3，它们都是假激酶蛋白家族成员。这三种蛋白都含有Ser/Thr蛋白激酶样结构域（Kinase like domain,KD），但却缺乏ATP的结合位点和催化残基，因此没有激酶活性。尽管如此，Tribbles蛋白却具有接头蛋白样的功能，参与多种蛋白复合体的组装。在哺乳动物Tribbles家族成员中，TRB3的研究最为深入，其相互作用蛋白包括转录因子、泛素连接酶、细胞膜上II型BMP受体以及MAPK、PI3K信号通路成员。通过与这些蛋白相互作用，TRB3参与了糖脂代谢、脂肪细胞分化、凋亡、应激和胶原表达等的调控。近来，多种证据表明，三种Tribbles家族同源蛋白在肿瘤的发生发展过程中都具有重要的调节作用。TRB1和TRB2参与了髓样白血病的发生；TRB3在多种肿瘤细胞系和人肿瘤组织中呈现高表达。我们的前期研究结果表明，TRB3在肿瘤的发展过程中发挥重要的促进作用。体外和体内实验均显示，利用TRB3序列特异性shRNA干扰肿瘤细胞内TRB3表达能显著降低肿瘤细胞的侵袭能力以及在动物体内的转移能力，大大提高荷瘤动物的生存率。这些结果提示TRB3是一种促肿瘤转移基因，可能是治疗肿瘤的一个潜在靶点。

近年来，自噬在肿瘤发生、发展中的作用是肿瘤领域的研究热点之一。自噬能清除细胞内冗余、错误折叠蛋白以及损伤细胞器防止氧自由基堆积，维持基因组稳定性，抑制肿瘤发生及转移。自噬被还认为是另一种形式的程序性细胞死亡。我们发现肿瘤细胞内TRB3的过度表达能降低自噬关键性抑制因子mTOR蛋白水平，并抑制多个自噬相关蛋白，例如II型LC3、Becline-1、PI3K3C表达增多，进而造成自噬相关货车蛋白P62产生堆积，证明肿瘤细胞内TRB3表达能诱导自噬受到抑制。我们进一步发现肿瘤细胞内的TRB3主要与P62蛋白发生相互作用，进而阻断其他泛素化蛋白与P62蛋白的结合，造成自噬通路被抑制，诱导肿瘤细胞的发生和转移。因此，研究和开发TRB3蛋白的抑制剂，或者阻断其与P62蛋白结合的物质，具有很好的抑制肿瘤发生和发展的成药前景。

发明内容

本发明要解决的技术问题是靶向治疗与TRB3相关的的多肽，该多肽氨基酸序列如序列SN1、SN2、SN3所示：

SN1：Ser-Leu-Ser-Gln-Met-Leu-Ser-Met，

SN2：Gly-Gly-Trp-Leu-Thr-Arg-Leu-Leu-Gln-Thr-Lys，

SN3：Ile-Gly-Ala-Ala-Leu-Asp-Thr-Ile。

本发明的氨基酸序列而在其他位置出现氨基酸替换，缺失或添加，且能与TRB3特异性结合的寡肽序列。

本发明的多肽及其衍生物用于靶向治疗与TRB3相关的疾病。

本发明的多肽及其衍生物用于制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用。所述的肿瘤选自肝癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、白血病。

本发明通过如下技术方案实现:由于TRB3蛋白表达水平在多种肿瘤疾病中明显升高，其过度表达可以与自噬相关蛋白P62结合，抑制肿瘤细胞的自噬活性，促进肿瘤细胞的发生和转移。本发明的肽段可以与TRB3特异性结合，并且阻断其与P62蛋白的相互作用，使得肿瘤细胞的自噬水平恢复正常，因此其适应症在于治疗肝癌，肺癌，结肠癌，乳腺癌和白血病等癌症疾病。

术语及简称

ELISA酶联免疫吸附试验

BSA牛血清白蛋白

Transwell一种实验技术，研究肿瘤细胞生长、侵袭和转移的能力。

Matrigel基底膜基质，在室温条件下，Matrigel聚合形成具有生物学活性的三维基质，模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，研究肿瘤细胞形态、生化功能、迁移、侵染和基因表达等。

附图说明

图1：表面等离子共振方法验证不同浓度的多肽B1,A2和B3与蛋白TRB3的动力学结合曲线。其中左图为B1和TRB3的结合曲线，中间图A2和TRB3的结合曲线，右图为B3和TRB3的结合曲线。

图2：酶联免疫吸附法（ELISA）验证多肽B1,A2或B3与蛋白TRB3的结合直方图。其中阳性对照为P62蛋白,阴性对照为牛血清白蛋白BSA

图3：竞争酶联免疫吸附法（ELISA）验证多肽B1,A2或B3竞争TRB3和P62蛋白结合的直方图。其中对照为TRB3与P62的结合直方图，B1、A2、B3分别代表加入多肽B1,A2或B3后TRB3与P62的结合直方图。

图4：免疫共沉淀的方法验证在细胞水平多肽B1、A2、B3的衍生物Pep2-B1、Pep2-A2、Pep2-B3对蛋白TRB3和P62相互作用的影响。

图5：细胞划痕实验验证在细胞水平多肽B1、A2、B3的衍生物Pep2-B1、Pep2-A2、Pep2-B3对肝癌细胞划痕后的运动能力的影响。图5从左到右依次为对照组，Pep2-B1、Pep2-A2、Pep2-B3多肽加药组。

图6:Transwell实验验证多肽B1、A2、B3的衍生物Pep2-B1、Pep2-A2、Pep2-B3对肝癌细胞侵袭能力的影响。图6从左到右依次为对照组，Pep2-B1,Pep2-A2,Pep2-B3多肽加药组。

图7:Matrigel胶三维培养实验验证多肽B1、A2、B3的衍生物Pep2-B1、Pep2-A2、Pep2-B3对肝癌细胞侵袭能力的影响。图7从左到右依次为对照组，Pep2-B1,Pep2-A2,Pep2-B3多肽加药组。

图8：细胞生长实验验证多肽B1、A2、B3的衍生物Pep2-B1、Pep2-A2、Pep2-B3对肝癌细胞HepG2，白血病细胞K562，结肠癌细胞HCT-8，肺癌细胞A549和乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的影响。

图9：裸鼠皮下种瘤实验和实验性肺转移实验验证多肽B1的衍生物Pep2-B1在体内对肝癌细胞生长和转移能力的影响。其中左图为皮下种瘤实验的结果，右图为实验性肺转移实验的结果。

图10：裸鼠皮下种瘤实验和实验性肺转移实验验证多肽B1的衍生物Pep2-B1在体内对肺癌细胞生长和转移能力的影响。其中左图为皮下种瘤实验的结果，右图为实验性肺转移实验的结果。

图11：裸鼠皮下种瘤实验和实验性肺转移实验验证多肽B1的衍生物Pep2-B1在体内对结肠癌细胞生长和转移能力的影响。其中左图为皮下种瘤实验的结果，右图为实验性肺转移实验的结果。

图12：裸鼠皮下种瘤实验和实验性肺转移实验验证多肽B1的衍生物Pep2-B1在体内对乳腺癌细胞生长和转移能力的影响。其中左图为皮下种瘤实验的结果，右图为实验性肺转移实验的结果。

图13：裸鼠皮下种瘤实验和实验性肺转移实验验证多肽B1的衍生物Pep2-B1在小鼠体内对白血病细胞全身浸润的影响。

具体实施方式

以下通过多肽筛选，鉴定及应用优选实施例并结合附图具体说明本发明的各个方面和特征。本领域的技术人员应该理解，这些实施例只是用于说明目的，而不限制本发明的范围。本发明的保护范围只受权利要求书的限制。在不背离权利要求书范围的条件下。本领域的技术人员可以对本发明的各个方面进行各种修改和改进，这些修改和改进也属于本发明的保护范围。

另外，需要注意的是，除非特别指明，下面实施例中所用的各种材料和试剂都是本领域中常用的材料和试剂，可以通过常规的商业途径获得；所用方法均为本领域技术人员公知的常规方法或按照厂商所建议的条件。

实施例1用表面等离子共振的方法筛选与TRB3蛋白结合的肽段。

首先将P62蛋白分段截短成不同的多肽片段，用多肽固相合成仪进行肽段合成，此过程由北京赛百盛基因有限公司进行。

实施例整个筛选过程在表面等离子共振仪Biacore T200中进行。

筛选方法如下：

1.将纯化的蛋白TRB3(购自RD公司)通过氨基偶联到CM5芯片上（购自GE公司），10μL/min的流速洗去未结合的蛋白，并且平衡芯片表面2小时。

2.将不同浓度的250μL多肽片段（200,50,12.5,6.25nM）自动进样，整个过程在25℃进行。所使用的缓冲液为HBS-EP缓冲液(0.01MHEPES,0.15M NaCl,3mM EDTA,0.005%表面活性剂)。

3.用Biacore T200自带分析软件模拟不同浓度多肽与TRB3的结合曲线，得出图1中的三条与TRB3蛋白结合能力较强的肽段B1，A2,B3。

B1：Ser-Leu-Ser-Gln-Met-Leu-Ser-Met，

A2：Gly-Gly-Trp-Leu-Thr-Arg-Leu-Leu-Gln-Thr-Lys，

B3：Ile-Gly-Ala-Ala-Leu-Asp-Thr-Ile，

图1中的横坐标为反应时间，单位为秒。纵坐标为反应芯片表面与多肽的反应强度，单位为RU。结果表明从P62蛋白结构域中截取的肽段中，B1，A2和B3肽段与TRB3蛋白有较高的亲和力。

实施例2ELISA方法验证肽段B1，A2和B3与蛋白TRB3的结合。

具体操作步骤如下：

1.将人TRB3蛋白及牛血清白蛋白（BSA）用PBS稀释至10μg/ml，每孔添加100μl，4℃包被96孔ELISA板过夜。

2.用含有0.1%Tween-20PBS洗三次。用200μl封闭液（10%牛血清PBS）包板，37℃包被2h。

3.倒掉包被液，对应加入1μg/ml多肽B1，A2和B3溶液200μl，同时设置阳性对照孔，加入200μl 1μg/ml P62蛋白溶液，37℃孵育1h。

4.用含有0.1%Tween-20PBS洗五次。每孔加入100μl用封闭液1：4000稀释后的抗M13单克隆抗体，室温孵育1h。

5.用含有0.1%Tween-20PBS洗六次。配制底物显色液（100mmol/L乙酸钠，PH6.0，每50ml缓冲液加入10μl30%过氧化氢，100μg/mlTMB），每孔加入100μl，室温孵育5min。每孔加入50μl0.1M稀硫酸，终止反应。

6.结果以样品孔的OD₄₅₀值绘制柱状图，见图2。

结果表明B1，A2和B3肽段与TRB3蛋白有较高的亲和力。

实施例3竞争ELISA的方法验证肽段B1，A2和B3可以竞争TRB3与P62蛋白的结合。

具体操作步骤如下：

1.将人TRB3蛋白及牛血清白蛋白（BSA）用PBS稀释至10μl/ml，每孔添加100μl，4℃包被96孔ELISA板过夜。

2.用含有0.1%Tween-20PBS洗三次。用200μl封闭液（10%牛血清PBS）包板，37℃包被2h。

3.倒掉包被液，对应加入1μg/ml P62蛋白溶液200μl，37℃孵育1h。

4.用含有0.1%Tween-20PBS洗五次。每孔加入100μl用封闭液稀释的辣根过氧化氢酶标记的多肽B1，A2和B3，室温孵育1h。

5.用含有0.1%Tween-20PBS洗六次。配制底物显色液（100mmol/L乙酸钠，PH6.0，每50ml缓冲液加入10μl30%过氧化氢，100μg/mlTMB），每孔加入100μl，室温孵育5min。每孔加入50μl0.1M稀硫酸，终止反应。

6.结果以样品孔的OD₄₅₀值绘制柱状图，见图3。

结果表明B1，A2和B3肽段可以竞争P62蛋白与TRB3蛋白的结合。

实施例4免疫共沉淀的方法验证肽段Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3可以在细胞水平竞争蛋白p62与蛋白TRB3的结合。

将肽段B1，A2和B3连接上细胞穿膜肽Pep2（序列为HLYVSPW），组成新的衍生物Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3，此肽段由赛百盛基因技术有限公司进行合成，纯度>98%。

免疫共沉淀试剂如下：

裂解液A液：0.6057g Tris碱，1.7532g NaCl，0.1017g MgCl₂·6H₂O，0.0742gEDTA，10mL甘油，10mL10%NP40，加去离子水至150mL，用HCl调pH值至7.6，定容至191mL，充分混匀，0.45μm滤膜过滤，4°C储存。

裂解液B液：200μL2Mβ-磷酸甘油，4mL2.5M NaF，2mL100mM NaVO₃，2mL100mM PMSF，200μL1M DTT，1mg/mL的Leu、Pep、Apr各200μL，总体积共9mL。母液于-20°C储存。使用前，将B液中各成分的母液解冻，分别按上述组成比例加入A液中并混匀。

Protein A/G Plus-Agarose购自美国Santa cruz公司。

具体操作步骤如下：

1.将肝癌HepG2细胞铺90mm大皿，待细胞贴壁后加入1mg/ml的多肽Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3，孵育12小时后收集细胞。

2.以免疫共沉淀裂解液裂解细胞，收获细胞总蛋白约4-10mg，将各组蛋白调整至相同浓度。每组蛋白各取200μg，留作细胞裂解液Input作为对照。

3.剩余蛋白加入2μg P62抗体或者与P62抗体种属相同的Normal IgG，同时加入10μL Protein A/G Plus-Agarose充分重悬，4°C缓慢旋转摇动过夜。4°C、3000rpm离心5min，小心吸除上清，宁可留下少量上清也不能吸到Agarose。加入0.5mL免疫共沉淀洗液，混匀，冰浴静置1min，4°C、3000rpm离心30sec，小心吸除上清。重复洗涤5次，最后一次离心前静置5min。小心吸除上清，加入20-30μL2×SDS凝胶加样缓冲液，混匀，95°C变性3min，迅速转移至冰浴冷却。12000rpm室温离心2min，上清即为沉淀的蛋白样品，取部分或全部进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。

结果如图4所示，细胞穿膜肽将肽段B1、A2、B3带入细胞后可以明显抑制TRB3蛋白与P62蛋白的结合。

实施例5细胞划痕实验验证肽段Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3可以抑制肿瘤细胞划痕后的愈合。

具体操作步骤如下：

1.先用记号笔在6孔板背后，用直尺比着划横线，横穿过孔。

2.在孔中加入约5×10⁵个HepG2肝癌细胞，待过夜后细胞贴壁

3.第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不要倾斜。

4.用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入新的培养基，同时加入1μg/ml的多肽Pep2-B1，Pep2-A2，Pep2-B2。

5.放入37℃5%CO2培养箱培养，24小时后取样拍照，实验结果见图5。

结果显示肽段Pep2-B1，Pep2-A2，Pep2-B3可以抑制肿瘤细胞划痕后的愈合能力。

实施例6Transwell实验验证肽段Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3可以抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移。

具体操作步骤如下：

1.准备transwell小室：将Matrigel放在冰上而后放入冰箱中隔夜使其解冻，将聚碳酸酯膜用指甲油粘在transwell细胞培养小室上，风干，在膜内加入Matrigel10μl（1mg/ml），置于超净台中风干，形成一个基质屏障膜。

2.准备细胞悬液：取对数生长期的HepG2细胞，无血清DMEM制成5×10⁵/ml单细胞悬液。

3.在24孔板中加入含10%小牛血清的细胞培养液DMEM，每孔600μl，将细胞悬液加入transwell小室中，每小室90μl，给药组加入多肽Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3，将小室浸于24孔板的完全培养液中，37℃，5%CO2孵箱内孵育12小时，取出小室，滤膜用多聚甲醛固定20min，用双蒸水洗三遍，结晶紫染液染色1h，双蒸水洗三遍，棉签轻轻擦去上层细胞，双蒸水洗三遍，倒置显微镜下观察细胞。

典型图如图六所示，结果表明多肽Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3可以明显抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移能力。

实施例7Matrigel三维培养实验验证多肽Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3可以抑制肿瘤细胞的侵袭能力。

具体操作步骤如下：

1.收集对数生长期的HepG2细胞，然后调整细胞浓度，制成1000细胞/ml的细胞悬液。

2.从-20℃冰箱取出Matrigel，融化后取200μl迅速加入24孔板中的孔，使其快速铺满孔的底部。

3.带齐凝固后加入1ml细胞悬液，同时加入1μg/ml多肽Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3。

4.然后移培养板于CO2培养箱中37℃进行培养。

5.培养7-lO天后，对细胞集落进行结晶紫染色，用显微镜拍照。

细胞克隆集落典型图如图7所示，结果显示多肽Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3可以明显抑制肿瘤细胞的侵袭能力。

实施例8细胞计数实验验证肽段Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3可以抑制肿瘤细胞的生长。

具体操作步骤如下：

1.收集对数生长期的肝癌细胞HepG2，肺癌细胞A549，结肠癌细胞HCT-8，乳腺癌细胞MDA-MB231和白血病细胞K562，调整细胞浓度，制成15万/ml的细胞悬液。

2.将1ml细胞悬液加入12孔板进行培养，12小时后换成新的培养基，并且加入1μg/ml的多肽Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3。

3.每隔一天进行传代一次，并且计数，培养一周后绘制出生长曲线。

实验结果如图8所示，结果表明多肽Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3可以明显抑制多种肿瘤细胞的生长。

实施例9裸鼠皮下种瘤实验和实验性肺转移实验验证肽段Pep2-B1，Pep2-A2和Pep2-B3对肝癌细胞生长和转移的抑制。

1.裸鼠皮下肿瘤生长模型

实验耗材及试剂：灭菌EP管1.5ml，15ml离心管，枪头，滤网（100目），脱脂棉球，镊子数把，酒精棉球，无菌1mL注射器，500ml烧杯（灭菌，用前照紫外），PBS(过滤)，胰酶，血清。

实验动物及分组：4-6周龄雄性裸鼠20只（购自北京维通利华实验动物有限公司），随机分为两组：HepG2组10只，Pep2-B1给药组10只。细胞制备：将贴壁培养的荧光素酶标记的HepG2细胞用胰酶消化，到达胰酶消化时间后（此时细胞状态应为单细胞且刚好贴壁不掉），吸掉胰酶。用含有1%血清的PBS按2ml/皿终止，将细胞吹下，移至15ml离心管中，1200转离心5min。弃上清，PBS重悬，过100目滤网一次；细胞计数，调整细胞终浓度至2.5x10⁷/ml。

瘤细胞接种：200μl细胞悬液接种于裸鼠左上腹部近腋下皮下。

肿瘤生长观察：皮下注射肿瘤细胞后一周用多肽进行治疗（5mg/kg体重，每周两次），活体成像仪每周一次观测肿瘤生长状态。

2.裸鼠尾静脉注射肺转移模型

实验耗材及试剂：灭菌EP管，枪头，滤网（200目），针头（4号），脱脂棉球，镊子数把，酒精棉球，无菌250μL注射器，PBS(过滤)，胰酶，血清。

实验动物及分组：4-6周龄雄性裸鼠20只（购自北京维通利华实验动物有限公司），随机分为两组，HepG2组10只，Pep2-B1给药组10只。

细胞制备同皮下种瘤模型。

瘤细胞注射：100μl细胞悬液尾静脉注射入裸鼠体内。

肿瘤细胞肺转移观察：尾静脉注射肿瘤细胞后一周用多肽进行治疗（5mg/kg体重，每周两次），活体成像仪每周一次观测肿瘤转移状态。

实验六周后，肝癌细胞的生长和转移状况见图9，其中图9左为肝癌细胞在小鼠体内瘤体大小的典型图，模型为不给药组，Pep2-B1为多肽给药组。图9右为肝癌细胞肺部转移的典型图，模型为不给药组，Pep2-B1为多肽给药组。结果显示Pep-B1能明显抑制肝癌细胞在小鼠体内的生长和肺转移。

实施例10裸鼠皮下种瘤实验和实验性肺转移实验验证肽段Pep2-B1可以抑制肺癌细胞的生长和转移。

材料和方法同实施例9，所不同之处在于所用肿瘤细胞为肺癌细胞A549。实验六周后，肺癌细胞的生长和转移状况见图10，其中图10左为肺癌细胞在小鼠体内瘤体大小的典型图，模型为不给药组，Pep2-B1为多肽给药组。图10右为肝癌细胞肺部转移的典型图，模型为不给药组，Pep2-B1为多肽给药组。结果显示Pep-B1能明显抑制肺癌细胞在小鼠体内的生长和肺转移。

实施例11裸鼠皮下种瘤实验和实验性肺转移实验验证肽段Pep2-B1可以抑制结肠癌细胞的生长和转移。

材料和方法同实施例9，所不同之处在于所用肿瘤细胞为结肠癌细胞HCT-8。实验六周后，结肠癌细胞的生长和转移状况见图11，其中图10左为结肠癌细胞在小鼠体内瘤体大小的典型图，模型为不给药组，Pep2-B1为多肽给药组。图11右为结肠癌细胞肺部转移的典型图，模型为不给药组，Pep2-B1为多肽给药组。结果显示Pep-B1能明显抑制结肠癌细胞在小鼠体内的生长和肺转移。

实施例12裸鼠皮下种瘤实验和实验性肺转移实验验证肽段Pep2-B1可以抑制乳腺癌细胞的生长和转移。

材料和方法同实施例9，所不同之处在于所用肿瘤细胞为乳腺癌细胞MDA-MB-231。实验六周后，乳腺癌细胞的生长和转移状况见图12，其中图12左为乳腺癌细胞在小鼠体内瘤体大小的典型图，模型为不给药组，Pep2-B1为多肽给药组。图12右为乳腺癌细胞肺部转移的典型图，模型为不给药组，Pep2-B1为多肽给药组。结果显示Pep-B1能明显抑制乳腺癌细胞在小鼠体内的生长和肺转移。

实施例13裸鼠皮下种瘤实验和实验性肺转移实验验证肽段Pep2-B1可以抑制白血病细胞的浸润。

材料和方法同实施例9，所不同之处在于所用实验动物为NOD-SCID小鼠（购自北京维通利华实验动物有限公司），所用肿瘤细胞为白血病细胞K562。实验六周后，白血病细胞对小鼠全身浸润状况见图13，其中图13左为不给药的模型组，Pep2-B1为多肽给药组。结果显示Pep-B1能明显抑制白血病细胞对小鼠的全身浸润。

Claims (4)

1.如序列SN1、SN2、SN3所示的多肽，其特征在于，氨基酸序列如下：

SN1：Ser-Leu-Ser-Gln-Met-Leu-Ser-Met，

SN2：Gly-Gly-Trp-Leu-Thr-Arg-Leu-Leu-Gln-Thr-Lys，

SN3：Ile-Gly-Ala-Ala-Leu-Asp-Thr-Ile。

2.根据权利要求1所述的多肽，所述多肽与TRB3特异性结合，其特征在于，用于靶向治疗与TRB3相关的疾病。

3.根据权利要求1所述的多肽在制备预防和/或治疗癌症药物中的应用。

4.根据权利要求3的应用，所述的癌症选自肝癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、白血病。

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