KR20170136082A

KR20170136082A - 가축의 보조사료 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR20170136082A
Application number: KR1020160066796A
Authority: KR
Inventors: 김철홍; 한송희; 양해진; 박주연; 남효송; 김영호
Original assignee: (주)현농
Priority date: 2016-05-30
Filing date: 2016-05-30
Publication date: 2017-12-11
Also published as: KR101816828B1

Abstract

본 발명은 가축보조사료 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 바실러스 서브틸러스 미생물로 발효시킨 발효미강과 스테비아분말 및 부가제를 함유하여 항균효과가 우수하고 가축의 성장을 촉진시킬 수 있는 가축보조사료 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 가축의 보조사료는 발효미강 100중량부에 대하여 스테비아 분말 10 내지 30중량부와, 커피박 1 내지 10중량부와, 장유박 1 내지 10중량부를 함유한다.

Description

가축의 보조사료 및 이의 제조방법{supplementary feed of livestock and manufacturing method thereof}

본 발명은 가축보조사료 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 바실러스 서브틸러스 미생물로 발효시킨 발효미강과 스테비아분말 및 부가제를 함유하여 항균효과가 우수하고 가축의 성장을 촉진시킬 수 있는 가축보조사료 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

최근 국내외 양돈, 양계 및 축산업계의 문제점은 가축의 질병으로 인한 폐사, 생산성 감소 등이며 이를 해결하기 위한 종래의 기능성 가축용 사료는 대한민국특허공고 제 95-009944호(제목 :겐타마이신과 린코마이신 또는 클린다마이신의 항생제 혼합물을 함유한 동물사료 및 이에 첨가제 또는 음료)와 같이 가축의 질병에 대한 면역력을 증강시키기 위하여 공지의 사료에 항생제, 항균제 등을 배합하거나 생균제 등을 투여하는 방법이 행하여져 왔다.

그러나 이와 같이 사료조성물에 항생제 등을 투여하는 방법은 가축으로 하여금 동물약품이나 유해 항생물질을 남용하고 항생제의 남용은 질병에 대한 면역력을 상실하게 하여 더욱 강력한 항생제를 요구하게 되며 따라서 실질적인 자가 면역력 저하와 만성질환을 유도하게 된다. 더욱이 항생제 등의 과다 사용으로 인하여 유해 항생물질이 가축의 고기나 부산물에 잔류하여 식용으로 적합하지 않은 문제점이 있었다.

이러한 문제점으로 인해 동물의 성장 촉진 및 질병억제, 사료의 효율 개선, 생산물의 품질향상 등을 위해 사료에 첨가하여 사용하는 다양한 기술의 보조사료가 개발되고 있다.

보조사료는 배합사료에 첨가하여 축산물의 소화력, 생리활성, 성장촉진, 면역증강 등 기능성을 개선하기 위하여 사용하는 첨가제를 말한다.

대한민국 등록특허 제 0873778호: 가축사료첨가제

본 발명은 바실러스 서브틸러스 미생물로 발효시킨 발효미강과 스테비아분말 및 부가제를 함유하여 항균효과가 우수하고 가축의 성장을 촉진시킬 수 있는 가축보조사료 및 이의 제조방법을 제공하는 데 그 목적이 있다.

상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명의 가축의 보조사료는 발효미강 100중량부에 대하여 스테비아 분말 10 내지 30중량부와, 커피박 1 내지 10중량부와, 장유박 1 내지 10중량부를 함유한다.

상기 발효미강은 미강에 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis) 배양액을 첨가하여 발효시킨다.

상기 배양액은 포도당, 효모추출물, 펩톤, 인산칼륨, 염화나트륨, 탄산나트륨, 황산마그네슘이 함유된 배지에 바실러스 서브틸러스를 접종하여 30 내지 37℃에서 2 내지 4일 동안 배양시킨다.

상기 발효미강 100중량부에 대하여 녹나무 오일 2 내지 8중량부를 더 함유하는 것을 특징으로 한다.

그리고 상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명의 가축의 보조사료의 제조방법은 포도당, 효모추출물, 펩톤, 인산칼륨, 염화나트륨, 탄산나트륨, 황산마그네슘이 함유된 배지에 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis)를 접종하여 30 내지 37℃에서 1 내지 3일 동안 배양시키는 배양단계와; 상기 배양단계에서 수득한 배양액에 미강을 혼합하여 25 내지 35℃에서 2 내지 6일 동안 발효시켜 발효미강을 얻는 발효단계와; 상기 발효미강 100중량부에 대하여 스테비아 분말 10 내지 30중량부와, 커피박 1 내지 10중량부와, 장유박 1 내지 10중량부를 혼합하는 혼합단계와; 상기 혼합단계에서 수득한 혼합물을 펠릿 형태로 성형하는 성형단계;를 포함한다.

상기 혼합단계에서 상기 발효미강 100중량부에 대하여 녹나무 오일 2 내지 8중량부를 더 혼합한다.

상술한 바와 같이 본 발명은 바실러스 서브틸러스 미생물로 발효시킨 발효미강과 스테비아분말 및 부가제를 함유하여 항균효과가 우수하고 가축의 성장을 촉진시킬 수 있다.

따라서 본 발명의 보조사료는 축산농가의 사료비 절감과 생산성 증대를 꾀할 수 있다.

도 1은 보조사료의 보관온도와 보관일수에 따른 생균수의 시험성적서이고,
도 2는 육용계 사육실험의 시험성적서이다.

이하, 본 발명의 바람직한 실시 예에 따른 가축의 보조사료 및 이의 제조방법에 대하여 구체적으로 설명한다.

본 발명의 일 예에 따른 가축의 보조사료는 발효미강, 스테비아 분말, 커피박, 장유박을 함유한다.

발효미강은 미강에 미생물 배양액을 첨가하여 발효시킨 것이다. 미생물 배양액으로 바실러스속(Bacillus sp) 균주를 배양한 것을 이용할 수 있다. 바실러스속 미생물은 슈도모나스(Pseudomonas)속 다음으로 널리 연구되고 상용화된 세균으로서 생물학적 활성이 있는 다양한 2차 대사산물을 생산하며, 열에 안정하고 열악한 환경에 저항성인 내생포자(endospore)를 형성하는 특징을 가진다. 바람직하게 바실러스속 균주로 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis)를 이용한다.

미강은 현미에서 백미로 정미하는 과정에서 발생하는 도정 부산물로서, 속겨(쌀겨)와 쌀눈을 일컫는다. 쌀의 영양성분을 분석하면 쌀겨부분에 29%, 쌀눈에 66%, 그리고 백미에는 5%의 영양이 분포되어 있어 쌀의 영양분 대부분은 쌀겨와 쌀눈으로 구성된 미강에 있다.

스테비아(Eupatorium rebaudiana Bertoni)는 국화과에 속하는 단일성 다년생 초본이다. 스테비아는 단맛이 설탕의 200배에 이르고 독성이 없는 천연감미식물로 알려져 있다. 스테비아의 독성에 대해 광범위하게 연구되어 왔는데 발암성과 유전독성은 포유류에서 관찰되지 않는 것으로 알려졌으며(Koyama E 등, 2003), 당대체 감미료로 해산물, 피클, 디저트, 과자류 등 여러 식품에 다양하게 사용되고 있다(Lee IS 1997). 또한 저칼로리 무독성 자연식품 스테비아는 현대인들의 당뇨병, 비만, 고지혈증 및 충치 등의 예방에 도움을 주고(Toskulkao C 등, 1997), 알러지 반응이 있는 사람에게도 좋은 치료효과가 있어 여러 가지 의학용으로 활용되고 있다. 또한 스테비아는 열에도 안정적이어서 120℃에서 1시간 가열 후에도 pH나 단맛을 그대로 유지하고 있어(Toskulkao C 등, 1997) 당대체 감미료로 각종 가공식품에 다양하게 이용되고 있다(Kim HI와 Lee BM, 1996).

스테비아 분말은 스테비아의 잎 또는 줄기를 건조시킨 다음 분쇄하여 얻는다.

커피박은 커피원두 가루에 열수를 가해 커피액을 추출한 후 발생된 부산물로서, 커피추출 찌꺼기를 의미한다.

커피박은 구입이 용이할 뿐만 아니라 단백질 10%, 조섬유 23%, 조지방 6% 정도의 영양 성분을 가지고 있는 영양적으로도 활용가치가 충분하다. 또한, 커피박에는 항산화 물질인 방향족 화합물인 폴리페놀(polyphenol)이 다량 함유되어 있어서 항산화제 역할을 할 수 있는 장점을 갖는다. 천연의 항산화제는 사료의 부패방지, 가축의 면역 증강 등의 효과를 가져오므로 생산성 향상에 기여할 수 있다.

장유박은 간장제조 시 얻어지는 부산물로서 단백질 함량이 23~30%, 조섬유 12~14%, 칼슘0.37(mg/100g), 인 0.70(mg/100g), 염분 5~7% 수준의 함유량을 가지고 있어 사료로 공급 시 그 사료 속에 염분을 공급하는 효과를 가진다.

본 발명은 버려지는 폐기물인 커피박과 장유박을 보조사료의 재료로 사용함으로써 폐기물을 재활용할 수 있음과 동시에 보조사료의 제조원가를 절감할 수 있는 장점을 갖는다. 또한, 커피박과 장유박의 기능성을 이용하여 고품질의 보조사료를 제조할 수 있다.

상술한 재료들은 균일하게 혼합하여 가축보조사료를 제조한다. 가령, 발효미강 100중량부에 대하여 스테비아 분말 10 내지 30중량부와, 커피박 1 내지 10중량부와, 장유박 1 내지 10중량부를 혼합하여 가축보조사료를 제조할 수 있다.

본 발명의 보조사료는 분말이나 펠릿 형태로 제공될 수 있다.

본 발명의 사료 첨가제는 통상적인 가축 배합사료에 첨가되어 가축에게 급이된다. 가령, 가축 배합사료 100중량부에 대하여 보조사료 0.1 내지 5중량부가 첨가될 수 있다. 사육대상인 소, 돼지, 닭, 오리 등 가축의 종류에 따라 배합사료의 종류는 적절하게 선택될 수 있다.

양계용 배합사료의 일 예로 옥수수 53.71중량%, 대두박 23.2중량%, 채종박 1.0중량%, 옥배아박 2.0중량%, 주정박 3.0중량%, 소맥피 2.7중량%, 감자전분 0.3중량%, 유지 2.8중량%, 탄산칼슘 9.9중량%, 제2인산칼슘 0.68중량%, 염화나트륨 0.23중량%, 인 분해효소제 0.03중량%, 염화콜린 0.05중량%, 메치오닌 0.2중량%, 미네랄 믹스 0.1중량%, 비타민 믹스 0.1중량%로 조성된다.

본 발명의 보조사료는 소, 돼지, 닭, 오리 등의 가축 배합사료에 일정량 첨가하여 급여함으로써 가축의 소화력, 생리활성촉진, 성장 촉진, 면역력 증강 효과로 인한 축산농가의 생산성을 향상시킬 수 있다.

이하, 본 발명의 가축의 보조사료의 제조방법에 대하여 설명한다.

본 발명의 가축의 보조사료 제조방법은 크게 배지에 바실러스 서브틸러스를 접종하여 배양시키는 배양단계와, 배양액에 미강을 혼합하여 발효시켜 발효미강을 얻는 발효단계와, 발효미강에 스테비아 분말, 커피박, 장유박을 혼합하는 혼합단계와, 혼합단계에서 수득한 혼합물을 펠릿 형태로 성형하는 성형단계를 포함한다. 각 단계별로 살펴본다.

1. 배양단계

미강을 발효시킬 배양액을 만들기 위해 배지에 바실러스 서브틸러스를 접종하여 배양시킨다.

바실러스 서브틸러스 배양액은 바실러스 서브틸러스 종균을 LB(Luria Bertani) 배지에 접종하여 24 내지 48시간 동안 30 내지 35℃에서 종균배양한 다음 본배양 배지에 접종한 후 30 내지 37℃에서 1 내지 3일 동안 배양시켜 얻을 수 있다.

상기 본배양 배지는 멸균된 증류수에 포도당, 효모추출물, 펩톤, 인산칼륨, 염화나트륨, 탄산나트륨, 황산마그네슘을 혼합하여 조성할 수 있다.

가령, 배지 1ℓ당 포도당 6g, 효모추출물 5g, 펩톤 10g, 인산칼륨 2.5g, 염화나트륨 1.5g, 탄산나트륨 0.5g, 황산마그네슘 1g으로 조성될 수 있다.

2. 발효단계

다음으로, 상기 배양단계에서 수득한 배양액에 미강을 혼합하여 발효시켜 발효미강을 얻는다.

발효의 일 예로, 고압멸균처리한 미강 100중량부에 대하여 바실러스 서브틸러스 배양액 5 내지 15중량부를 첨가한 다음 발효기에서 25 내지 35℃에서 2 내지 6일 동안 고체발효시킨다. 발효기간 동안 발효를 촉진시키기 위해 지속적으로 미강을 교반시키면서 발효시킨다.

발효가 완료 후 발효미강의 수분을 감소시키기 위해 건조시켜 최종적으로 수분함량이 4 내지 10중량%인 미강 발효물을 얻는다. 건조시킨 미강 발효물은 덩어리 형태로 뭉쳐있기 때문에 분쇄기를 이용하여 100 내지 300메쉬 입도크기로 분쇄하여 분말 형태로 만든다.

3. 혼합단계

다음으로, 준비된 발효미강에 스테비아 분말, 커피박, 장유박을 혼합한다.

스테비아 분말은 스테비아의 잎 또는 줄기를 건조시킨 다음 분쇄하여 얻을 수 있다.

스테비아의 건조는 자연건조 또는 열풍건조 또는 냉풍건조 방식을 이용할 수 있다. 열풍건조 방법으로 60 내지 80℃의 열풍을 12 내지 24시간 동안 가해 건조시킬 수 있다. 그리고 냉풍건조 방법으로 20 내지 30℃의 냉풍을 1 내지 3일 동안 가해 건조시킬 수 있다. 냉풍건조는 성분의 변화와 휘발성분의 감소를 억제시키는 데 유용하다.

스테비아를 건조시킨 다음 분쇄기를 이용하여 스테비아를 100 내지 300메쉬 입도 크기로 분쇄할 수 있다.

커피박과 장유박은 다른 재료들과 달리 수분이 많다는 특징이 있다. 커피박과 장유박의 함수량은 10 내지 20중량%인 것이 적절하다. 따라서 커피박과 장육박은 적절히 건조시켜 함수량은 10 내지 20중량%로 조절한다.

다음으로, 준비된 재료들을 일정한 비율로 혼합한다. 가령, 발효미강 100중량부에 대하여 스테비아 분말 10 내지 30중량부와, 커피박 1 내지 10중량부와, 장유박 1 내지 10중량부를 혼합하는 혼합하여 혼합물을 얻는다.

혼합은 내부에 교반기가 설치된 교반탱크 내부에서 수행될 수 있다. 이 경우 각 재료가 저장된 저장탱크로부터 일정량이 배출되고, 배출된 재료는 이송컨베이어에 의해 교반탱크 내부로 투입될 수 있다. 교반탱크 내부로 투입된 재료들은 교반기의 회전에 의해 균일하게 혼합된다.

4. 성형단계

다음으로, 혼합단계에서 수득한 혼합물을 펠릿 성형기에 투입하여 펠릿 형태로 성형한다.

펠릿 성형기로 통상적인 가압식 성형기를 이용할 수 있다. 펠릿 성형기를 이용하여 펠릿 형태로 사료를 가공하는 것은 공지의 기술이므로 구체적인 설명은 생략한다.

펠릿 성형기를 통해 약 1 내지 20mm 크기의 펠렛 형태로 성형될 수 있다. 제조된 펠릿 형태의 보조사료는 일정량씩 포대에 담아 포장할 수 있음은 물론이다.

한편, 본 발명의 다른 예로 혼합단계에서 녹나무 오일을 더 혼합할 수 있다. 가령, 발효미강 100중량부에 대하여 스테비아 분말 10 내지 30중량부와, 커피박 1 내지 10중량부와, 장유박 1 내지 10중량부, 녹나무 오일 2 내지 8중량부를 혼합한다.

녹나무(Cinnamomum camphora)는 상록의 교목으로서, 잎은 달걀 모양의 타원형이며 윤이 나고 향기가 있으며, 꽃은 양성화로 5월경에 황백색의 작은 꽃이 잎겨드랑이에서 원추꽃차례를 이루면서 피는 식물이다. 녹나무에 들어 있는 향기 성분은 캄파, 사프롤, 씨네올 등의 정유성분으로서, 녹나무 목질과 잎, 열매에 1% 가량 들어 있다.

녹나무 오일을 녹나무의 잎, 줄기, 가지 중 어느 하나로부터 추출할 수 있다. 추출방법으로 통상적인 수증기 증류법을 이용하여 오일을 추출할 수 있다. 녹나무 오일은 펠릿의 성형성을 향상시키고, 보조사료의 항균성을 높인다.

본 발명의 또 다른 예로 혼합단계에서 곤달비 추출물을 더 혼합할 수 있다. 가령, 발효미강 100중량부에 대하여 스테비아 분말 10 내지 30중량부와, 커피박 1 내지 10중량부와, 장유박 1 내지 10중량부, 녹나무 오일 2 내지 8중량부, 곤달비 추출물 1 내지 5중량부를 혼합한다.

곤달비 추출물은 보조사료의 항산화 활성과 항균활성을 상승시킨다.

곤달비(Ligularia stenocephala)는 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 여러해살이풀로서 한국(전라남도), 일본, 타이완, 중국 등지에 분포하며, 깊은 산의 습지에서 자란다. 한국의 고랭지에서 자생하고 특히 대관령에서 산채로 이용되고 있기 때문에 이 지역의 농가에서 주로 재배하고 있다. 주로 어린잎을 나물로 섭취하며 한방에서는 전초 혹은 뿌리를 보익, 진정 및 부인병 등에 약으로 사용한다고 한다. 곤달비는 곰취와 더불어 쌈, 나물, 장아찌, 김치 등으로 다양하게 식용되고 있으며, 곤달비에서 분리 보고된 물질로는 1β,6α-dihydroxy-5(15)-eudesmene, phthalic acid di-Bu ester, N-phenyl-2-naphthylamine, neophytadiene, vanillin, triterpenoid 유도체, 4-hydroxyacetophenone, chlorogenic acid, caffeic acid 등이 있다(Roh EJ, Kim YS, Kim BG. 2009. Effect of antioxidation and inhibition of melanogenesis from Ligularia stenocephala extract. J Korean Oil Chemists' Soc 26: 87-92).

곤달비 추출물을 얻기 위해서는 다양한 추출방법을 이용할 수 있다. 추출방법 중의 하나로 곤달비에 추출용매를 가하여 추출할 수 있다.

추출용매로 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 다가 알코올 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 적어도 어느 하나를 이용할 수 있다. 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올로 메탄올, 에탄올 등을 이용할 수 있고, 다가 알코올로 부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜, 펜틸렌글리콜 등을 이용할 수 있다. 그리고 혼합물로는 물 및 저급 알코올의 혼합물, 물 및 다가 알코올의 혼합물, 저급 알코올 및 다가 알코올의 혼합물, 또는 물 및 저급알코올 및 다가 알코올의 혼합물을 이용할 수 있다.

추출의 일 예로 곤달비 전초에 대하여 물을 중량비로 4 내지 10배를 가한 후 10 내지 150℃에서 1 내지 48시간 동안 열수추출, 냉침 또는 온침 추출 등을 이용할 수 있다.

이하, 실시 예를 통하여 본 발명에 대해 설명하고자 한다. 다만, 하기의 실시 예는 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위를 하기의 실시 예로 한정하는 것은 아니다.

(실시예)

바실러스 서브틸러스 종균을 LB(Luria Bertani) 배지에 접종하여 48시간 동안 35℃에서 종균배양한 다음 본배양 배지에 접종한 후 30℃에서 48시간 동안 배양하여 바실러스 서브틸러스 배양액을 얻었다.

본배양 배지는 멸균된 증류수에 여러 물질을 혼합하여 조성하였다. 본배양 배지로 하기 표 1과 같이 4종류를 제작하여 바실러스 서브틸러스를 배양하였다.

배지종류	배지조성(g/ℓ)
배지1	Glucose 6g
	Yeast extract 8g
	K₂HPO₄ 2.5g
	NaCl 1.5g
	Na₂CO₃ 0.5g
	MgSO₄ 1g
배지2	sucrose 15g
	Yeast extract 8g
	K₂HPO₄ 2.5g
	NaCl 1.5g
	Na₂CO₃ 0.5g
	MgSO₄ 1g
배지3	Glucose 6g
	Yeast extract 5g
	peptone 10g
	K₂HPO₄ 2.5g
	NaCl 1.5g
	Na₂CO₃ 0.5g
	MgSO₄ 1g
배지4	sucrose 15g
	Yeast extract 5g
	peptone 10g
	K₂HPO₄ 2.5g
	NaCl 1.5g
	Na₂CO₃ 0.5g
	MgSO₄ 1g

멸균처리한 미강 100중량부에 대하여 바실러스 서브틸러스 배양액 10중량부를 혼합한 다음 고체발효기에 투입하여 30℃에서 4일 동안 발효시켰다. 발효 후 건조시켜 수분함량을 6중량%로 감소시킨 다음 분쇄기를 이용하여 200메쉬 입도크기로 분쇄하여 발효미강 분말을 수득하였다.

잎과 줄기가 3:7의 중량비로 혼합된 스테비아에 80℃의 열풍을 24시간 동안 가해 건조시킨 다음 분쇄기를 이용하여 약 200메쉬 입도 크기로 분쇄하여 스테비아 분말을 수득하였다. 커피박과 장유박은 함수량 15중량%로 건조시켜 준비하였다. 녹나무 오일을 상업화된 제품을 구입하여 준비하였다.

준비된 발효미강 100중량부에 대하여 스테비아 분말 20중량부와, 커피박 6중량부와, 장유박 6중량부, 녹나무 오일 4중량부를 혼합한 다음 펠릿 성형기에 투입하여 펠릿 형태의 보조사료를 제조하였다.

<실험예>

1. 보조사료의 생균수 측정

배지 3에서 배양한 바실러스 서브틸러스 배양액으로 제조한 보조사료의 보관온도와 보관일수에 따른 생균수를 측정하기 위해 시험의뢰하였다. 시험결과를 하기 표 2와 도 1에 나타내었다.

보관일수	4℃	40℃	65℃
0일째	0.9±0.2×10⁹cfu/ml	1.1±0.2×10⁹cfu/ml	0.8±0.1×10⁹cfu/ml
7일째	0.8±0.1×10⁹cfu/ml	0.9±0.2×10⁹cfu/ml	1.2±0.2×10⁹cfu/ml
30일째	1.1±0.1×10⁹cfu/ml	1.1±0.2×10⁹cfu/ml	1.1±0.1×10⁹cfu/ml
60일째	1.1±0.2×10⁹cfu/ml	1.2±0.1×10⁹cfu/ml	0.9±0.1×10⁹cfu/ml

표 2를 참조하면, 4℃와 40℃에서 보관할 경우 균수의 변화는 거의 없었으며, 65℃에서 보관했을 경우에도 크게 균수 변화는 일어나지 않았다. 65℃에서 60일간 보관한 경우와 실온에서 1년간 보관한 경우의 보존율이 같다고 판단할 경우 본 발명의 보조사료의 미생물은 실온에서 1년 이상 보존될 것으로 기대된다.

2. 배지별 설팩틴 및 이투린 함량분석

바실러스 서브틸러스는 대사산물로서 항균물질인 설팩틴(surfactin)과 이투린(iturin)을 생산하는 것으로 알려져 있다. 따라서 설팩틴과 이투린의 함량이 높은 보조사료는 항균활성이 높을 것으로 예상할 수 있다. 각 배지에서 바실러스 서브틸러스를 배양한 배양액에 함유된 설팩틴과 이투린의 농도를 분석하여 하기 표 3에 나타내었다.

각 배지별 배양액을 원심분리를 통해서 상등액만을 분리하고, 그 상등액을 염산을 이용하여 pH 2.0으로 맞춘 후 4℃ 저온에서 16시간 동안 놓아두었다. 그리고 이를 다시 원심분리를 통하여 상등액은 버리고 남아있는 침전물에 메탄올을 가해 3회 추출하였다. 추출한 메탄올 추출물을 농축기로 농축시킨 후 고성능액체크로마토그래피(Shimadzu Prominence LC-20AD)를 이용하여 분석하였다.

배지종류	물질 농도(ppm)
배지종류	surfactin	iturin
배지1	2240.87	451.98
배지2	2860.13	1307.01
배지3	2550.27	3415.16
배지4	3347.32	1436.46

상기 표 3을 참조하면, 설팩틴은 배지4에서 배양한 배양액에서 가장 높게 나타났고, 이투린은 배지3에서 배양한 배양액에서 가장 높게 나타났다. 특히, 이투린의 경우 배지3과 다른 배지들과의 농도 차이가 크게 나타났다. 그리고 설팩틴과 이투린을 합한 총 농도는 배지3에서 배양한 배양액에서 가장 높게 나타났다.

이러한 결과를 통해 배지 3을 이용하여 바실러스 서브틸러스를 배양한 배양액으로 보조사료를 제조할 경우 항균활성이 가장 우수할 것으로 예측된다.

3. 항균활성 실험

배지 3에서 바실러스 서브틸러스를 배양한 배양액으로 제조한 보조사료의 항균활성이 우수할 것으로 예상되어 배지 3을 이용하여 바실러스 서브틸러스를 배양한 배양액으로 제조한 보조사료에 대하여 항균활성을 실험하였다. 실험결과를 하기 표 4에 나타내었다.

가축의 장염을 유발하는 대표적인 살모넬라 균주를 대상으로 생장 저해 효과를 검정하였다. 살모넬라 균주를 보조사료에 접종하여 3일이 지난 후에 보조사료 중의 살모넬라 균수를 측정하여 항생제 대체 효과를 입증하고자 하였다.

살모넬라(Salmonella typhimurium) 균주를 Rappaport Vassiliadis(RV) Broth 에 접종하고 42℃ 진탕 배양기에서 24시간 배양하였다. 처리구로서 배양이 완료된 살모넬라 균주 1㎖를 100g의 보조사료에 접종하여 골고루 섞어주고 35℃에서 3일이 지난 시점에서 살모넬라 균주 수를 측정하였다. 대조구로서 미강 100%로 조성된 보조사료 100g에 살모넬라 균주 1㎖를 접종하였고, 무처리구로서 증류수 100g에 살모넬라 균주 1㎖를 접종하였다. 유의성 검정을 위하여 모든 실험은 3반복으로 진행하였다.

실험결과를 하기 표 4에 나타내었다.

S. typhimurium	처리구	대조구	무처리구
1차	1.1×10²cfu/g	3.1×10⁸cfu/g	4.1×10⁸cfu/g
2차	0.9×10²cfu/g	2.1×10⁸cfu/g	2.1×10⁸cfu/g
3차	0.7×10²cfu/g	2.1×10⁸cfu/g	2.1×10⁸cfu/g
평균	0.9×10²cfu/g	2.4×10⁸cfu/g	2.7×10⁸cfu/g

상기 표 4를 참조하면, 처리구는 대조구와 무처리구와 비교하여 유의성 있는 수준에서 살모넬라 균수가 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 본 발명의 보조사료의 항균력이 우수할 것으로 기대된다.

4. 사육실험

배지 3을 이용하여 바실러스 서브틸러스를 배양한 배양액으로 제조한 보조사료를 이용하여 육용계 사육실험을 하였다. 본 실험은 육용계에 급여실증 실험을 통하여 증체율을 개선시키는 효과를 있는지를 검증하기 위하여 실시하였다.

육용계 40수를 실험동물로 공시하여 실험하였다. 사료는 사양표준에 근거하여 급이하였다. 육용계를 총 2개의 그룹으로 나누어 각 그룹에 20수씩 배치하였다. 실험은 부화 후 약 5주간 실시하였고, 각 그룹별로 구간 증체량을 조사하였다.

대조구(무처리구)는 실험기간 동안 일반 육용계 배합사료(퓨리나울트라초이, (주)카길애그리퓨리나, 한국) 급여하였다. 그리고 처리구는 일반 육용계 배합사료를 9일령까지 급여하였고, 10일령부터 일반 육용계 배합사료 99중량%, 보조사료 1.0중량%를 배합하여 급여하였다.

사육실험 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2를 참조하면, 처리구는 22일령까지 급여할 경우 대조구에 비해 유의적으로 성장이 빠른 것으로 나타났다. 따라서 본 발명의 보조사료는 전 기간에 급여하는 것보다 육용계의 성장전반기에 급여할 경우 육용계의 성장률 개선에 효과적인 것으로 나타났다.

이상, 본 발명은 일 실시 예를 참고로 설명되었으나 이는 예시적인 것에 불과하며, 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 이로부터 다양한 변형 및 균등한 실시 예가 가능하다는 점을 이해할 것이다. 따라서 본 발명의 진정한 보호 범위는 첨부된 청구범위에 의해서만 정해져야 할 것이다.

Claims

발효미강 100중량부에 대하여 스테비아 분말 10 내지 30중량부와, 커피박 1 내지 10중량부와, 장유박 1 내지 10중량부를 함유하는 것을 특징으로 하는 가축보조사료.
제 1항에 있어서, 상기 발효미강은 미강에 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis) 배양액을 첨가하여 발효시킨 것을 특징으로 하는 가축보조사료.
제 2항에 있어서, 상기 배양액은 포도당, 효모추출물, 펩톤, 인산칼륨, 염화나트륨, 탄산나트륨, 황산마그네슘이 함유된 배지에 바실러스 서브틸러스를 접종하여 30 내지 37℃에서 2 내지 4일 동안 배양시킨 것을 특징으로 하는 가축보조사료.
제 1항에 있어서, 상기 발효미강 100중량부에 대하여 녹나무 오일 2 내지 8중량부를 더 함유하는 것을 특징으로 하는 가축보조사료.
포도당, 효모추출물, 펩톤, 인산칼륨, 염화나트륨, 탄산나트륨, 황산마그네슘이 함유된 배지에 바실러스 서브틸러스(Bacillus subtilis)를 접종하여 30 내지 37℃에서 1 내지 3일 동안 배양시키는 배양단계와;
상기 배양단계에서 수득한 배양액에 미강을 혼합하여 25 내지 35℃에서 2 내지 6일 동안 발효시켜 발효미강을 얻는 발효단계와;
상기 발효미강 100중량부에 대하여 스테비아 분말 10 내지 30중량부와, 커피박 1 내지 10중량부와, 장유박 1 내지 10중량부를 혼합하는 혼합단계와;
상기 혼합단계에서 수득한 혼합물을 펠릿 형태로 성형하는 성형단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 가축보조사료의 제조방법.
제 5항에 있어서, 상기 혼합단계에서 상기 발효미강 100중량부에 대하여 녹나무 오일 2 내지 8중량부를 더 혼합하는 것을 특징으로 하는 가축보조사료의 제조방법.