KR20170070241A - 항-tim-3 항체 - Google Patents

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Abstract

항-TM3 항체 및 그러한 항체를 포함하는 약학적 조성물, 및 암 또는 감염성 질병 또는 T-세포 기능이상 장애의 치료와 같은 용도 및 이를 사용하는 방법이 개시되어있다. TIM-3 및 다른 표적에 대한 이중 특이적 항체가 또한 TIM-3 및 CD3에 대한 이중 특이적 항체의 바람직한 실시양태로 개시된다.

Description

항-TIM-3 항체{Anti-TIM-3 Antibodies}
본 발명은 T 세포 면역글로불린 뮤신 3(TIM-3)에 결합하는 항체에 관한 것이다.
T-세포 고갈은 많은 만성 감염 및 암 중에 발생하는 T-세포 기능이상 장애의 상태이다. 이는 불량한 T-세포 효과기 기능, 저해 수용체의 지속적 발현 및 기능적 효과기 또는 기억 T-세포의 것과는 다른 전사 상태에 의해 정의된다. 고갈은 감염과 종양을 최적으로 조절하는 것을 막는다(E John Wherry., Nature Immunology 12, 492-499 (2011)).
T-세포 고갈은 T-세포 기능의 단계적이고 점진적인 상실로서 특징지어진다. 고갈은 만성 림프구성 맥락수막염 바이러스 감염 중에 잘 정의되며 일반적으로 종양 전이 중 뿐만 아니라, B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스 및 인간 면역결핍 바이러스 감염을 포함하는 많은 만성 감염 이후에 발생하는 항원-지속 조건하에 발생한다. 고갈은 표현형 및 기능적 결함의 계조(gradation)가 나타날 수 있기 때문에 일률적으로 비활성화된 설정이 아니며, 이들 세포는 프로토타입 효과기, 기억 및 알레르기성 T-세포와도 구별된다. 고갈된 T-세포는 고등급 만성 감염 중에 가장 빈번하게 발생하며, 항원 자극의 수준과 기간은 이 과정의 결정적인 요인이다(Yi et al., Immunology Apr 2010; 129(4):474-481).
순환하는 인간 종양-특이적 CD8+ T 세포는 세포독성이 있을 수 있으며 생체 내 사이토카인을 생성하여 펩타이드, 불완전 프로인트 애쥬번트 (incomplete Freund's adjuvant, IFA), CpG 또는 양자 전달로 예방 접종하는 것과 같은 강력한 면역요법 후에 자가 및 종양-특이적 인간 CD8+ T 세포가 기능적 역량에 도달할 수 있음을 나타낸다. 말초 혈액과 달리, 전이로부터의 T-세포는 비정상적으로 낮은 사이토카인 생성 및 저해 수용체 PD-1, CTLA-4 및 TIM-3의 상향 조절의 기능적 결핍이 있다. 기능적 결핍은 흑색종 조직으로부터 단리된 T-세포가 단기간의 시험관 내 배양 후 IFN-γ 생산을 회복시킬 수 있기 때문에 가역적이다. 그러나, 이 기능 손상이 동물 모델에서 정의된 바와 같이 T-세포 고갈 또는 아네르기(anergy)와 유사할 가능성이 있는 추가 분자 경로를 포함하는지 여부는 여전히 결정되지 않았다 (Baitsch et al., J Clin Invest. 2011; 121 (6) : 2350-2360).
CD279라고도 불리는 프로그램된 세포 사멸 1 (PD-1)은 PDCD1 유전자에 의해 인간에서 코딩되는 I형 막 단백질이다. 이는 2개의 리간드, PD-L1과 PD-L2를 갖는다.
PD-1 경로는 T-세포 고갈의 주요 면역-저해 매개체이다. 이 경로의 차단은 T-세포 활성화, 증대 및 향상된 효과기 기능을 유도할 수 있다. 따라서, PD-1은 T 세포 반응을 음성적으로 조절한다. PD-1은 만성 질환 상태에서 고갈된 T 세포의 표지자로서 동정되었고, PD-1 : PD-1L 상호작용의 차단은 T 세포 기능을 부분적으로 회복시키는 것으로 나타났다 (Sakuishi et al., JEM Vol. 207, September 27, 2010, pp2187-2194).
Nivolumab (BMS-936558)은 2014년 7월에 일본에서 흑색종 치료를 위해 승인된 항-PD-1 항체이다. 다른 항-PD-1 항체는 WO2010/077634, WO 2006/121168에 기재되었다.
T 세포 면역글로불린 뮤신 3 (TIM-3)은 고갈된 CD8+ T 세포 상에서 상향 조절되는 것으로 밝혀진 면역 조절제이다 (Sakuishi et al., JEM Vol. 207, September 27, 2010, pp2187-2194). TIM-3는 원래 IFN-γ를 분비하는 Th1 및 Tc1 세포에서 선택적으로 발현됨으로써 동정되었다. TIM-3와 Tim-3의 리간드인 갈렉틴-9(galectin-9)의 상호작용은 TIM-3+ T 세포 내의 세포 사멸을 유발한다. 항-TIM-3 항체는 Ngiow et al (Cancer Res. 2011 May 15; 71 (10) : 3540-51) 및 US8,552,156에 기재되었다.
TIM-3 및 PD-1은 모두 T 세포 반응의 음성 조절제로서 작용할 수 있고, TIM-3 및 PD-1 경로에 결합된 표적화는 어느 경로만을 단독으로 표적화하는 것보다 종양 성장을 제어하는데 더 효과적이다 (Sakuishi et al., JEM Vol. 207, 2010. 9. 27, pp2187-2194 및 Ngiow 등 Cancer Res. 2011. 5. 15, 71 (10) : 3540-51).
TIM-3은 종양 세포, 예를 들어 급성 골수성 백혈병 세포와 같은 조혈 모세포 의 종양 세포 표면에서도 발현될 수 있다 (Kikushige et al., Cell Stem Cell 2010; 3 : 7 (6) 708-17). 따라서 어떤 경우에는 TIM-3는 특정 항체에 의해 표적화될 수 있는 종양-관련 항원일 수 있다.
발명의 요약
본 발명은 TIM-3에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편에 관한 것이다. 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드 역시 개시되었다. 항체, 항원 결합 단편 및 폴리펩타이드는 단리된 및/또는 정제된 형태로 제공될 수 있으며 연구, 요법 및 진단에 사용하기 적합한 조성물로 제제화될 수 있다.
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드는, 예를 들어 TIM-3을 발현하는 T-세포 또는 종양 세포와 같은 TIM-3을 발현하는 세포에 대해 세포독성이다. 일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드는 그의 세포독성 효과로 인해 암을 치료하는데 유용하다. 적합한 암으로는 급성 골수성 백혈병과 같은 백혈병을 포함한다.
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드는 T-세포 고갈 또는 T-세포 아네르기(arnergy)를 나타내는, 예를 들어 CD8+ T-세포와 같은 T-세포에서 T-세포 기능을 회복시키는데 효과적일 수 있다.
본 발명의 하나의 양태에서 항체 또는 항원 결합 단편이 제공되고, 항체의 아미노산 서열은 아미노산 서열 i) 내지 iii), 또는 아미노산 서열 iv) 내지 vi), 또는 바람직하게는 아미노산 서열 i) 내지 vi):
i) LC-CDR1 : SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
ii) LC-CDR2 : GNNWRPS (서열번호 11)
iii) LC-CDR3 : X1X2WDX3X4X5X6X7GX8 (서열번호 41)
iv) HC-CDR1 : GGSFSGYYWS (서열번호 30) 또는 GYYWS (서열번호 61)
v) HC-CDR2 : EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
vi) HC-CDR3 : GYZ1AGZ2DZ3 (서열번호 42)
또는 상기 서열 i) 내지 vi) 중 하나 이상의 서열에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 대체된 이의 변이체를 포함할 수 있고, 여기서 X1 = E 또는 D이고, X2 = A 또는 S이고, X3 = Y, S 또는 A이고, X4 = Y, A, D 또는 S이고, X5 = V, D, Y, L 또는 A이고, X6 = A 또는 S이고, X7 = A 또는 S이고, X8 = Y, V 또는 S이고, Z1 = V 또는 Y이고, Z2 = S, F, Y 또는 D이고, Z3 = A, D, S 또는 Y이다.
본 발명의 모든 양태와 관련하여, HC-CDR1 : GYYWS (서열번호 61) 인 실시양태에서, 이 서열은 더 큰 서열 GGSFSGYYWS (서열번호 30)에 포함될 수 있다.
일부 실시양태에서, LC-CDR3은 EAWDYYVAAGY (서열번호 12), DSWDSADASGV (서열번호 13), DSWDYDYAAGV (서열번호 14), DSWDSYLAAGV (서열번호 15), ESWDYDYASGV (서열번호 16), DSWDSSDSSGV (서열번호 17), EAWDSAYAAGS (서열번호 18) DSWDAALSAGV (서열번호 19) 또는 ESWDAAAAAGY (서열번호 20) 중의 하나이다.
일부 실시양태에서 HC-CDR3은 GYVAGSDA (서열번호 32), GYVAGFDD (서열번호 33), GYVAGFDS (서열번호 34), GYVAGYDY (서열번호 35), GYVAGSDA (서열번호 36), GYVAGFDS (서열번호 37), GYYAGDDY (서열번호 38), GYVAGYDY (서열번호 39) 또는 GYVAGSDA (서열번호 40) 중의 하나이다.
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: EAWDYYVAAGY (서열번호 12)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: DSWDSADASGV (서열번호 13)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: DSWDYDYAAGV (서열번호 14)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: DSWDSYLAAGV (서열번호 15)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: ESWDYDYASGV (서열번호 16)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: DSWDSSDSSGV (서열번호 17)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: EAWDSAYAAGS (서열번호 18)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: DSWDAALSAGV (서열번호 19)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: ESWDAAAAAGY (서열번호 20)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30), 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS(서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGSDA (서열번호 32)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30), 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS(서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGFDD (서열번호 33)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30), 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS(서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGFDS (서열번호 34)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30), 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS(서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGYDY (서열번호 35)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30), 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS(서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGSDA (서열번호 36)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30), 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS(서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGFDS (서열번호 37)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30), 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS(서열번호 31)
HC-CDR3: GYYAGDDY (서열번호 38)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30), 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS(서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGYDY (서열번호 39)
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30), 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS(서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGSDA (서열번호 40)
상기 항체는 도 1 또는 2에 나타난 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다. 항체는 도 1 또는 3에 나타난 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.
상기 항체는 서열번호 1, 10, 11, 12 또는 2, 10, 11, 13 또는 3, 10, 11, 14 또는 4, 10, 11, 15 또는 5, 10, 11, 16 또는 6, 10, 11, 17 또는 7, 10, 11, 18 또는 8, 10, 11, 19 또는 9, 10, 11, 20 중 하나의 아미노산 서열 또는 도 1에 나타난 아미노산 서열 중 하나를 포함하거나 아미노산 서열이 서열번호 1, 10, 11, 12 또는 2, 10, 11, 13 또는 3, 10, 11, 14 또는 4, 10, 11, 15 또는 5, 10, 11, 16 또는 6, 10, 11, 17 또는 7, 10, 11, 18 또는 8, 10, 11, 19 또는 9, 10, 11, 20 중 하나 또는 도 1에 나타난 VL 사슬 아미노산 서열 중 하나에 적어도 70%, 더 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 가지는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함할 수 있다.
상기 항체는 서열번호 21, 30 또는 61, 31, 32 또는 22, 30 또는 61, 31, 33 또는 23, 30 또는 61, 31, 34 또는 24, 30 또는 61, 31, 35 또는 25, 30 또는 61, 31, 36 또는 27, 30 또는 61, 31, 38 또는 28, 30 또는 61, 31, 39 또는 29, 30 또는 61, 31, 40 중 하나의 아미노산 서열 또는 도 2에 나타난 아미노산 서열 중 하나를 포함하거나 아미노산 서열이 서열번호 21, 30 또는 61, 31, 32 또는 22, 30 또는 61, 31, 33 또는 23, 30 또는 61, 31, 34 또는 24, 30 또는 61, 31, 35 또는 25, 30 또는 61, 31, 36 또는 27, 30 또는 61, 31, 38 또는 28, 30 또는 61, 31, 39 또는 29, 30 또는 61, 31, 40 중 하나 또는 도 2에 나타난 VH 사슬 아미노산 서열에 적어도 70%, 더 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 가지는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역 (VH)을 포함할 수 있다.
상기 항체는 서열번호 1, 10, 11, 12 또는 2, 10, 11, 13 또는 3, 10, 11, 14 또는 4, 10, 11, 15 또는 5, 10, 11, 16 또는 6, 10, 11, 17 또는 7, 10, 11, 18 또는 8, 10, 11, 19 또는 9, 10, 11, 20 중 하나의 아미노산 서열 또는 도 1에 나타난 아미노산 서열 중 하나를 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하고 (또는 아미노산 서열이 서열번호 1, 10, 11, 12 또는 2, 10, 11, 13 또는 3, 10, 11, 14 또는 4, 10, 11, 15 또는 5, 10, 11, 16 또는 6, 10, 11, 17 또는 7, 10, 11, 18 또는 8, 10, 11, 19 또는 9, 10, 11, 20 중 하나 또는 도 1에 나타난 VL 사슬 아미노산 서열 중 하나에 적어도 70%, 더 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 가지는) 서열번호 21, 30 또는 61, 31, 32 또는 22, 30 또는 61, 31, 33 또는 23, 30 또는 61, 31, 34 또는 24, 30 또는 61, 31, 35 또는 25, 30 또는 61, 31, 36 또는 27, 30 또는 61, 31, 38 또는 28, 30 또는 61, 31, 39 또는 29, 30 또는 61, 31, 40 중 하나의 아미노산 서열 또는 도 2에 나타난 아미노산 서열 중 하나를 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있다(또는 아미노산 서열이 서열번호 21, 30 또는 61, 31, 32 또는 22, 30 또는 61, 31, 33 또는 23, 30 또는 61, 31, 34 또는 24, 30 또는 61, 31, 35 또는 25, 30 또는 61, 31, 36 또는 27, 30 또는 61, 31, 38 또는 28, 30 또는 61, 31, 39 또는 29, 30 또는 61, 31, 40 중 하나 또는 도 2에 나타난 VH 사슬 아미노산 서열에 적어도 70%, 더 바람직하게는 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 가지는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역 (VH)을 포함할 수 있다).
상기 항체는 임의적으로 TIM-3에 결합할 수 있다. 상기 항체는 임의적으로 상기에서 기재된 아미노산 서열 조성물을 가질 수 있다. 상기 항체는 lgG일 수 있다. 일 실시양태에서 TIM-3에 결합하는, 본원에 기재된 임의적으로 단리된, 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 시험관 내 복합체가 제공된다.
본 발명의 하나의 양태에서 단리된 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드가 제공되고, 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드는 하기 CDR들을 포함한다:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30), 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
HC-CDR3: GYZ1AGZ2DZ3 (서열번호 42)
여기서, Z1 = V 또는 Y이고, Z2 = S, F, Y 또는 D이고, Z3 = A, D, S 또는 Y이다.
일부 실시양태에서 HC-CDR3은 GYVAGSDA (서열번호 32), GYVAGFDD (서열번호 33), GYVAGFDS (서열번호 34), GYVAGYDY (서열번호 35), GYVAGSDA (서열번호 36), GYVAGFDS (서열번호 37), GYYAGDDY (서열번호 38), GYVAGYDY (서열번호 39), 또는 GYVAGSDA (서열번호 40) 중의 하나이다.
본 발명의 하나의 양태에서 항체 또는 항원 결합 단편이 제공되고, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하고, 여기에서:
상기 중쇄는 HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30) 또는 GYYWS (서열번호 61), HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31), HC-CDR3: GYZ1AGZ2DZ3 (서열번호 42), GYVAGSDA (서열번호 32), GYVAGFDD (서열번호 33), GYVAGFDS (서열번호 34), GYVAGYDY (서열번호 35), GYVAGSDA (서열번호 36), GYVAGFDS (서열번호 37), GYYAGDDY (서열번호 38), GYVAGYDY (서열번호 39), 또는 GYVAGSDA (서열번호 40) 중의 하나에 대해 각각 적어도 85%의 전체 서열 동일성을 갖는 HC-CDR1, HC-CDR2, HC-CDR3을 포함하고, 여기서 Z1 = V 또는 Y이고, Z2 = S, F, Y 또는 D이고, Z3 = A, D, S 또는 Y이고,
상기 경쇄는 LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10), LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11), LC-CDR3: X1X2WDX3X4X5X6X7GX8 (서열번호 41), EAWDYYVAAGY (서열번호 12), DSWDSADASGV (서열번호 13), DSWDYDYAAGV (서열번호 14), DSWDSYLAAGV (서열번호 15), ESWDYDYASGV (서열번호 16), DSWDSSDSSGV (서열번호 17), EAWDSAYAAGS (서열번호 18), DSWDAALSAGV (서열번호 19) 또는 ESWDAAAAAGY (서열번호 20) 중의 하나에 대해 각각 적어도 85%의 전체 서열 동일성을 갖는 LC-CDR1, LC-CDR2, LC-CDR3을 포함하고, 여기서 X1 = E 또는 D이고, X2 = A 또는 S이고, X3 = Y, S 또는 A이고, X4 = Y, A, D 또는 S이고, X5 = V, D, Y, L 또는 A이고, X6 = A 또는 S이고, X7 = A 또는 S이고, X8 = Y, V 또는 S이고, Z1 = V 또는 Y이고, Z2 = S, F, Y 또는 D이고, Z3 = A, D, S 또는 Y이다.
일부 실시양태에서 서열 동일성의 정도는 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 중의 하나일 수 있다.
본 발명의 다른 양태에서 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하는 임의적으로 단리된, 항체 또는 항원 결합 단편이 제공되고, 여기서:
상기 중쇄 서열은 서열번호 21 내지 29 (도 2) 중의 하나의 중쇄 서열에 적어도 85% 서열 동일성을 가지고,
상기 경쇄 서열은 서열번호 1 내지 9 (도 1) 중의 하나의 경쇄 서열에 적어도 85% 서열동일 서열을 가진다.
일부 실시양태에서 서열 동일성의 정도는 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 중의 하나일 수 있다.
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 HCFR1:HC-CDR1:HCFR2:HC-CDR2:HCFR3:HC-CDR3:HCFR4 배열에 따른 CDR들 사이의 가변 영역 중쇄 골격 서열을 추가로 포함한다. 상기 골격 서열은 인간 컨센서스 골격 서열로부터 유래된 것일 수 있다.
본 발명의 하나의 양태에서 본원에 기재된 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드와 임의적으로 결합된, 단리된 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드가 제공되고, 상기 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드는 하기 CDR들을 포함한다:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: X1X2WDX3X4X5X6X7GX8 (서열번호 41)
여기서 X1 = E 또는 D이고, X2 = A 또는 S이고, X3 = Y, S 또는 A이고, X4 = Y, A, D 또는 S이고, X5 = V, D, Y, L 또는 A이고, X6 = A 또는 S이고, X7 = A 또는 S이고, X8 = Y, V 또는 S이다.
일부 실시양태에서, LC-CDR3은 EAWDYYVAAGY (서열번호 12), DSWDSADASGV (서열번호 13), DSWDYDYAAGV (서열번호 14), DSWDSYLAAGV (서열번호 15), ESWDYDYASGV (서열번호 16), DSWDSSDSSGV (서열번호 17), EAWDSAYAAGS (서열번호 18) DSWDAALSAGV (서열번호 19) 또는 ESWDAAAAAGY (서열번호 20) 중의 하나이다.
일부 실시양태에서 항체 또는 항원 결합 단편은 LCFR1:LC-CDR1:LCFR2:LC-CDR2:LCFR3:LC-CDR3:LCFR4 배열에 따른 CDR들 사이의 가변 영역 경쇄 골격 서열을 추가로 포함한다. 상기 골격 서열은 인간 컨센서스 골격 서열로부터 유래된 것일 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 인간 불변 영역을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 의 하나로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 쥐 불변 영역을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, IgG1, IgG2A, IgG2B 및 IgG3의 하나로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 이중 특이적 항체 또는 이중 특이적 항원 결합 단편, TIM-3에 결합할 수 있고, 임의적으로 단리된 항체 또는 항원 결합 단편이 제공된다. 일부 실시양태에서, 이중 특이적 항체 또는 이중 특이적 항원 결합 단편은 본원에 기재된 바와 같이 TIM-3에 결합할 수 있는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 포함하고, 추가적으로 다른 표적 단백질, 예를 들어 TIM-3 이외의 표적 단백질에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 표적 단백질은 세포 표면 수용체이다. 일부 실시양태에서, 상기 표적 단백질은 예를 들어 T 세포인 면역 세포의 세포 표면상에 발현되는 세포 표면 수용체이다. 일부 실시양태에서, 또 다른 표적 단백질에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인은 T 세포 수용체 (TCR) 복합체 또는 이의 성분에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 도메인은 CD3 또는 CD3 폴리펩타이드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 도메인은 하나 이상의 CD3 폴리펩타이드 CD3γ, CD3δ, CD3ζ 또는 CD3ε에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 이중 특이적 항체는 이중 특이적 T-세포 결합 항체이다. 일부 실시양태에서, 상기 표적 단백질은 CD28 패밀리의 구성원일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 CD28 패밀리의 구성원은 PD-1, LAG3, ICOS, CTLA4, BTLA 또는 CD28로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 조성물 예를 들어 약학적 조성물 또는 의약품이 제공된다. 상기 조성물은 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 보조제 또는 희석제를 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에서 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 상기 핵산은 서열번호 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 (도 4) 중 하나의 서열을 가지거나, 유전 코딩의 결과로 퇴화된 서열을 코딩하거나, 뉴클레오타이드 서열이 적어도 70%, 임의적으로 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 중 하나의 동일성을 갖는다.
본 발명의 하나의 양태에서, 본원에 기재된 핵산을 포함하는 벡터가 제공된다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 상기 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 예를 들어, 상기 숙주 세포는 진핵 생물 또는 포유동물, 예를 들어 중국 햄스터 난소 (CHO) 또는 인간일 수 있고, 또는 원핵 세포, 예를 들어, 대장균일 수 있다. 본 발명의 하나의 양태에서 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 제조하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 인코딩하는 벡터의 발현에 적합한 조건하에 본원에 기재된 숙주 세포를 배양하는 단계 및 상기 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 회수하는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드는 치료 또는 의학적 치료에 사용하기 위해 제공된다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드는 암 또는 T 세포 기능이상 장애를 치료하는데 사용하기 위해 제공된다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 암 또는 T 세포 기능이상 장애를 치료하는데 사용하기 위한 의약품 또는 약학 조성물의 제조에서 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드의 용도가 제공된다.
또 다른 양태에서, TIM-3을 발현하는 세포 사멸의 시험관 내 또는 생체 내 방법이 제공되고, 상기 방법은 TIM-3을 발현 (또는 과발현)하는 세포에 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다. 상기 세포는 암 세포, 예를 들어, 백혈구 또는 급성 골수성 백혈구 세포일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 급성 골수성 백혈병 세포는 줄기세포일 수 있고; 예를 들어, 일부 실시양태에서 급성 골수성 백혈병 세포는 CD34+일 수 있다.
본 발명의 다른 양태에서, 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 기능이상 T-세포에 투여하는 단계를 포함하는 T-세포 기능을 향상시키는 방법이 제공된다. 상기 방법은 시험관 내 또는 생체 내에서 수행될 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 암 또는 T-세포 기능이상 장애를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 암 또는 T-세포 기능이상 장애를 앓고 있는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다 .
본 발명의 또 다른 양태에서, 감염성 질병을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 감염성 질병을 앓고 있는 환자에게 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 개체 내 면역 반응을 조절하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 개체의 면역 반응이 조절되도록 하기 위해 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 개체에 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 개체 내 종양 세포의 성장을 억제하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드의 치료 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태에서, TIM-3를 포함하거나 포함하는 것으로 의심되는 시료를 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계 및 항체 또는 항원 결합 단편 및 TIM-3의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다.
본 발명의 또 다른 양태에서, 개체의 질병 또는 병증을 진단하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편과 개체로부터의 시료를 시험관 내 접촉시키는 단계 및 항체 또는 항원 결합 단편과 TIM-3의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함한다.
본 발명의 또 다른 양태에서, TIM-3 신호 조절제로 치료하기 위한 개체를 선택 또는 계층화하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 개체로부터의 시료를 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편과 시험관 내 접촉시키는 단계 및 항체 또는 항원 결합 단편과 TIM-3의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함한다.
본 발명의 양태는 항-TIM-3 항체 또는 항-TIM-3 약제와 같은 TIM3 신호 조절제로 치료하기 위한 환자를 선택하는 방법으로서, 상기 방법은 시험관 내에서 개체로부터의 시료를 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계 및 항체 또는 항원 결합 단편과 TIM-3의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함한다.
본 발명의 하나의 양태에서 시험관 내 TIM-3의 검출을 위한 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편의 용도가 제공된다. 본 발명의 또 다른 양태에서 시험관 내 진단제로서 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편의 용도가 제공된다.
본 발명의 또 다른 양태에서 T 세포의 집단을 증대시키기 위한 방법이 제공되며, 여기서 T 세포는 본 발명에 따른 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드와 시험관 내 또는 생체 외에서 접촉된다.
본 발명의 또 다른 양태에서, T-세포 기능이상 장애를 가지는 개체를 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 개체의 혈액 시료로부터 수득한 T 세포를 본 발명에 따른 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드의 존재하에 배양하여 T 세포 집단을 증대시키는 단계, 증대된 T 세포를 수집하는 단계, 치료를 필요로 하는 개체에 증대된 T 세포를 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 방법에서, 본원에 기재된 조성물로서 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드가 제공될 수 있다
일부 실시양태에서, 상기 항체는 클론 1B9, 1H9, 1H10, 2C7, 2F4, 2G6, 1D9, 1F4, 2C8 중 하나일 수 있다.
항체
본 발명에 따른 항체는 바람직하게는 TIM-3 (항원), 바람직하게는 인간 또는 레서스(rhesus) TIM-3에 임의적으로 1. 0 x 10-6 내지 4. 0 x 10-4 범위의 Kd (s- 1)로 결합한다.
본 발명의 임의의 양태에서, 상기 항체는 바람직하게는 TIM-3 (예: 인간 또는 레서스)에 특이적으로 결합한다.
본 발명에 따른 항체는 단리된 형태로 제공될 수 있다.
본 발명에 따른 항체는 하기 특성 중 적어도 하나를 나타낼수 있다:
a) 인간 TIM-3에 1 x 10-6의 Kd 또는 덜 바람직하게는 1 x 10-5, 1 x 10-4 또는 1 x 10-3 중 하나의 Kd로 결합한다;
b) TIM-3 발현 세포 (항체 의존적 세포-매개 세포독성, ADCC), 예를 들어, TIM-3을 발현하는 급성 골수성 백혈병 세포에 대해 세포독성이 있다.
c) 혼합림프구반응 (Mixed Lymphocyte Reaction, MLR) 분석법에서 T-세포 증식을 증가시킨다 (예: Bromelow et al J. Immunol Methods, 2001 Jan 1; 247 (1-2) : 1-8 참조);
d) MLR 분석법에서 인터페론-감마 생성을 증가시키거나;
e) MLR 분석법에서 인터루킨-2 (IL-2) 분비를 증가시킨다.
"항체"는 본 발명자들은 그 단편 또는 그 유도체, 또는 합성 항체 또는 합성 항체 단편을 포함한다.
단일클론 항체 기술과 관련하여 오늘날의 기술의 관점에서, 항체는 대부분의 항원을 제조할 수 있다. 항원-결합 부분은 항체 (예를 들어, Fab 단편) 또는 합성 항체 단편 (예를 들어, 단일 사슬 Fv 단편 [ScFv])의 부분일 수 있다. 선택된 항원에 적합한 단일클론 항체는, 예를 들어 문헌 (Monoclonal Antibodies: A manual of techniques, H Zola (CRC Press, 1988) 및 Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications, J G R Hurrell (CRC Press, 1982))에 기재된 공지된 기술에 의해 제조할 수 있다. 키메라 항체는 Neuberger et al (1988, 8th International Biotechnology Symposium Part 2, 792-799)에 의해 기술되었다.
단일클론 항체 (mAb)는 본 발명의 방법에 유용하며, 항원에 대해 단일 에피토프를 특이적으로 표적화하는 균질한 항체 집단이다.
다중클론 항체는 본 발명의 방법에 유용하다. 단일특이적 다중클론 항체가 바람직하다. 적합한 다중클론 항체는 당업계에 널리 공지된 방법을 사용하여 제조할 수 있다.
Fab 및 Fab2 단편과 같은 항체의 항원 결합 단편은 또한 유전적으로 조작된 항체 및 항체 단편으로 사용될 수 있다/제공될 수 있다. 항체의 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄(VL) 도메인은 항원 인식에 관여하며, 이는 초기 프로테아제 분해 실험에 의해 사실상 최초로 인식되었다. 추가 확인이 설치류 항체의 "인간화 (humanisation)"에 의해 발견되었다. 설치류 기원의 가변 도메인은 설치류 항체가 설치류 모항체의 항원 특이성을 유지하도록 인간 기원의 불변 도메인에 융합할 수 있다 (Morrison et al (1984) Proc. Natl. Acad. Sd. USA 81, 6851-6855).
그 항원 특이성은 가변 도메인에 의해 부여되고 불변 도메인에 독립적인 것은 하나 이상의 가변 도메인을 모두 포함하는, 항체 단편의 세균 발현을 포함하는 실험으로부터 공지되었다. 이들 분자는 Fab-유사 분자를 포함하고 (Better et al (1988) Science 240, 1041); Fv 분자 (Skerra et al (1988) Science 240, 1038); VH 및 VL 파트너 도메인이 유연한 올리고펩타이드 (Bird et al (1988) Science 242, 423; Huston et al (1988) Proc. Natl. Acad. Sd. USA 85, 5879)를 통해 연결된 단일-사슬 Fv (ScFv) 및 단리된 V 도메인을 포함하는 단일 도메인 항체 (dAb) (Ward et al (1989) Nature 341, 544)를 포함한다. 그들의 특이적 결합 부위를 보유하는 항체 단편의 합성과 관련된 기술에 대한 일반적인 검토는 문헌 (Winter & Milstein (1991) Nature 349, 293- 299)에서 찾아볼 수 있다.
"ScFv 분자"는 본 발명자들은 VH 및 VL 파트너 도메인이 예를 들어, 유연한 올리고펩타이드에 의해 공유결합된 분자를 의미한다.
Fab, Fv, ScFv 및 dAb 항체 단편은 모두 대장균에서 발현되고 분비될 수 있어, 다량의 상기 단편을 용이하게 생산할 수 있다.
전체 항체 및 F(ab')2 단편은 "2가 (bivalent)"이다. "2가"는 본 발명자들은 상기 항체 및 F(ab')2 단편이 2개의 항원 결합 부위를 갖는 것을 의미한다. 반대로, Fab, Fv, ScFv 및 dAb 단편은 1개의 항원 결합 부위만을 갖는 1가이다. TIM-3에 결합하는 합성 항체는 또한 당업계에 공지된 파지 디스플레이 기술을 사용하여 제조될 수 있다.
본 발명의 양태는 예를 들어, 2개의 상이한 항체의 2개의 상이한 단편으로 구성된 이중-특이적 항체를 포함하고, 그러한 이중-특이적 항체는 두 가지 유형의 항원에 결합한다. 항원 중 하나는 TIM-3이며, 상기 이중-특이적 항체는 TIM-3에 결합하는 본원에 기재된 단편을 포함한다. 상기 항체는 임의의 원하는 항원, 예를 들어 세포독성 세포에 결합하기 위해 암 면역요법에 사용된 CD3일 수 있는, 제2의 항원에 대해 친화성을 가지는 상이한 단편을 포함할 수 있고, 이들을 종양 부위에 모아 표적화 할 수 있다. 이중-특이적 항체의 제조 기술은 당업계에 잘 공지되어있다 (2010 Protein Eng Des 23 (4) : 289-297, Bouuerle, PA 등, Mueller, D et al., (2010 Biodrugs 24 (2) : 89-98), Wozniak-Knopp G et al. (2009 Cancer Res 69 (12) : 4941-4944).
따라서, 본 발명은 TIM-3에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편인 이중 특이적 항체 또는 이중 특이적 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 이중 특이적 항체 또는 이중 특이적 항원 결합 단편을 단리할 수 있다.
일부 실시양태에서, 이중 특이적 항체 및 이중 특이적 항원 결합 단편은 본 발명에 따른 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이중 특이적 항체 및 이중 특이적 항원 결합 단편은 TIM-3에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인을 포함하며, 상기 항원 결합 도메인은 TIM-3에 결합할 수 있고, 본 발명에 따른 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 포함하거나 그를 구성한다.
일부 실시양태에서 상기 이중 특이적 항체 및 이중 특이적 항원 결합 단편은 TIM-3에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인을 포함하고, 항원 결합 도메인은 다른 표적 단백질에 결합할 수 있다.
다른 표적 단백질에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인은 TIM-3 이외의 다른 단백질에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 표적 단백질은 세포 표면 수용체이다. 일부 실시양태에서, 상기 표적 단백질은 면역 세포의 세포 표면상에 발현되는 세포 표면 수용체이다. 일부 실시양태에서, 상기 표적 단백질은 T 세포의 세포 표면상에 발현되는 세포 표면 수용체이다.
일부 실시양태에서, 다른 표적 단백질에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인은 T 세포 수용체 (TCR) 복합체 또는 이의 성분에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 도메인은 CD3 또는 CD3 폴리펩타이드에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 항원 결합 도메인은 하나 이상의 CD3 폴리펩타이드 CD3γ, CD3δ, CD3ζ 또는 CD3ε에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서 상기 이중 특이적 항체는 TIM-3 발현 세포에 대해 T 세포 활성 (예를 들어, 세포독성 활성)을 유도할 수 있다. 일부 실시양태에서 이중 특이적 항체는 이중 특이적 T-세포 결합 항체이다. 일부 실시양태에서 상기 이중 특이적 항체 또는 단편은 TIM-3 발현 세포에 대해 T 세포 활성 (예를 들어, 세포독성 활성)을 유도할 수 있다. 즉, 일부 실시양태에서, TIM-3 발현 세포에 대한 T 세포 활성 (예를 들어, 세포독성 활성)은 이중 특이적 항체 또는 단편의 존재하에서 증가한다 (예를 들어, 이중 특이적 항체 또는 단편의 부재의 경우 TIM-3 발현 세포에 대한 활성에 비해). TIM-3 발현 세포에 대한 T 세포 활성은 당업자에게 공지된, 예를 들어 T 세포를 TIM-3 발현 세포와 배양하고 본원에 기재된 세포 용해를 측정하는 방법에 의해 시험관 내에서 결정할 수 있다.
일부 양태에서, 상기 이중 특이적 항체는 본 발명에 따른 TIM-3 결합 항체 또는 항체 단편의 VH 및 VL, 및 CD3 또는 CD3 폴리펩타이드에 결합할 수 있는 항체 또는 항체 단편의 VH 및 VL를 포함하는, 2개의 단일-사슬 가변 단편 (scFV) 형태의 융합 단백질로서 제공된다.
일부 실시양태에서, CD3 또는 CD3 폴리펩타이드에 대한 항원 결합 도메인은 CDR들, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 또는 다른 CD3 또는 예를 들어, 항-CD3 항체 클론 OKT3 (eBioscience), 클론 CD3-12 (AbD Serotec), 클론 UCHT1 (Southern Biotech), 클론 SP7 (Thermo Scientific Pierce Antibodies), 클론 SPV-T3b (Thermo Fisher Scientific), 클론 S4.1 (7D6)(Thermo Fisher Scientific), 클론 MEM-57 (AbD Serotec), 클론 37895 (Miltenyi Biotec), 클론 CA-3 (Abcam), 클론 4D10A6 (Abbiotec), 클론 HIT3a (Abbiotec), 클론 LT3 (Source BioScience), 클론 B-B11 (MyBioSource.com), 클론 17A2 (Novus Biologicals), 클론 BC3 (BioLegend), 클론 HAM25-1352 (MBL International), 클론 CA-3 (Bosterbio), 클론 RBT-CD3 (Lifespan BioSciences), Ham25-1157 (Merck Millipore), 클론 CRIS-7 (Peninsula Laboratories International), 클론 5B2, 클론 2Q1160 (Santa Cruz Biotechnology), 클론 M01, 클론 B1.1 (Abnova Corporation), 클론 EP449E (BioGenex), 클론 6B8D1G5, 클론 6B1C12F3 (Sino Biological), 클론 CL1297 (Atlas Antibodies), 클론 CC23 (Creative Diagnostics), 클론 TR66 (Enzo Life Sciences), 클론 MEM-92 (Cedarlane), 클론 EPR4516 (Origene Technologies), 클론 3A12H2 (Proteintech Group), 클론 33-2A3 (ALPCO), 클론 E272 (Biocare Medical), 클론 SP162, 클론 MRQ-39 (Sigma Aldrich) 또는 클론 F7.2.38 (Dako)의 CD3 폴리펩타이드 결합 단편을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 표적 단백질은 CD28 패밀리의 구성원일 수 있다. 일부 실시양태에서, 표적 단백질은 PD-1 (CD279), LAG3 (CD223), ICOS (CD278), CTLA4 (CD152), BTLA (CD272) 또는 CD28과 같은 CD28 패밀리의 구성원일 수 있다.
일부 특정 실시양태에서, 이중 특이적 항체 또는 이중 특이적 항원 결합 단편은 CD3 또는 CD3 폴리펩타이드에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인을 포함하고, TIM-3에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인은 CDR에서 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 또는 본원에 기재된 클론 2C7의 다른 TIM-3 결합 단편을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 이중 특이적 항체는 하기 특성 중 적어도 하나를 나타낼 수 있다:
a) TIM-3 발현 세포, 예를 들어, TIM-3 발현 급성 골수성 백혈병 세포 (항체 의존적 세포-매개 세포독성, ADCC)의 세포 사멸 (예를 들어, T 세포 매개 세포 살상)을 증가 또는 향상시킨다;
b) TIM-3 발현 줄기세포, 예를 들어, TIM-3 발현하는, CD34+ 급성 골수성 백혈병 세포 (항체 의존적 세포-매개 세포독성, ADCC)의 세포 사멸 (예를 들어, T 세포 매개 세포 사멸)을 증가 또는 향상시킨다;
일부 실시양태에서, PD-1에 대한 항원 결합 도메인은 CDR들, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 또는 예를 들어, 항 PD-1 항체 클론 J116, 클론 MIH4 (eBioscience), 클론 7A11B1 (Rockland Immunochemicals Inc.), 클론 192106 (R&D Systems), 클론 J110, 클론 J105 (MBL International), 클론 12A7D7, 클론 7A11B1 (Abbiotec), 클론 #9X21 (MyBioSource.com), 클론 4H4D1 (Proteintech Group), 클론 D3W4U, 클론 D3O4S (Cell Signaling Technology), 클론 RMP1-30, 클론 RMP1-14 (Merck Millipore), 클론 EH12.2H7 (BioLegend), 클론 10B1227 (United States Biological), 클론 UMAB198 또는 클론 UMAB197 (Origene Technologies)의 다른 PD-1 결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, LAG3에 대한 항원 결합 도메인은 CDR들, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 또는 예를 들어, 항 LAG3 항체 클론 17B4 (Enzo Life Sciences), 클론 333210 (R&D Systems) 또는 클론 14L676 (United States Biological)의 다른 LAG3 결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, ICOS에 대한 항원 결합 도메인은 CDR들, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 또는 예를 들어, 항-ICOS 항체 클론 ISA-3 (eBioscience), 클론 SP98 (Novus Biologicals), 클론 1G1, 클론 3G4 (Abnova Corporation), 클론 669222 (R&D Systems), 클론 TQ09 (Creative Diagnostics) 또는 클론 C398.4A (BioLegend)의 다른 ICOS 결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, CTLA4에 대한 항원 결합 도메인은 CDR들, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 또는 예를 들어, 항-CTLA4 항체 클론 2F1, 클론 1F4 (Abnova Corporation), 클론 9H10 (EMD Millipore), 클론 BNU3 (GeneTex), 클론 1E2, 클론 AS32 (LifeSpan BioSciences), 클론 A3.4H2.H12 (Acris Antibodies), 클론 060 (Sino Biological), 클론 BU5G3 (Creative Diagnostics), 클론 MIH8 (MBL International), 클론 A3.6B10.G1 또는 클론 L3D10 (BioLegend)의 CTLA4 결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, BTLA에 대한 항원 결합 도메인은 CDR들, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 또는 예를 들어, 항-BTLA 항체 클론 1B7, 클론 2G8, 클론 4C5 (Abnova Corporation), 클론 4B8 (antibodies-online), 클론 MIH26 (Thermo Scientific Pierce Antibodies), 클론 UMAB61 (OriGene Technologies), 클론 330104 (R&D Systems), 클론 1B4 (LifeSpan BioSciences), 클론 440205, 클론 5E7 (Creative Diagnostics)의 다른 BTLA 결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, CD28에 대한 항원 결합 도메인은 CDR들, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 또는 예를 들어, 항-CD28 항체 클론 CD28.6 (eBioscience), 클론 CD28.2, 클론 JJ319 (Novus Biologicals), 클론 204.12, 클론 B-23, 클론 10F3 (Thermo Scientific Pierce Antibodies), 클론 37407 (R&D Systems), 클론 204-12 (Abnova Corporation), 클론 15E8 (EMD Millipore), 클론 204-12, 클론 YTH913.12 (AbD Serotec), 클론 B-T3 (Acris Antibodies), 클론 9H6E2 (Sino Biological), 클론 C28/77 (MyBioSource.com), 클론 KOLT-2 (ALPCO), 클론 152-2E10 (Santa Cruz Biotechnology) 또는 클론 XPH-56 (Creative Diagnostics)의 다른 CD28 결합 단편을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 이중 특이적 항체 또는 이중 특이적 항원 결합 단편의 항원 결합 도메인은 항원에 결합할 수 있는 폴리펩타이드의 임의의 도메인일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 적어도 3개의 경쇄 CDR들 (즉, LC-CDR1, LC-CDR2 및 LC-CDR3) 및 3개의 중쇄 CDR들 (즉, HC-CDR1, HC-CDR2 및 HC-CDR3)을 포함하고, 동시에 항체 또는 항원 결합 단편의 항원 결합 영역을 정의한다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 항체 또는 항원 결합 단편의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 항체 또는 항원 결합 단편의 경쇄 폴리펩타이드 및 중쇄 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 이중 특이적 항체 및 이중 특이적 항원 결합 단편은 ( Kontermann MAbs 2012, 4 (2) : 182-197) 에 기재된 형식과 같은 임의의 적합한 형태로 제공될 수 있으며, 이는 전체가 참고문헌으로써 본원에 통합된다. 예를 들어, 이중 특이적 항체 또는 이중 특이적 항원 결합 단편은 이중 특이적 항체 접합체 (예 : IgG2, F(ab')2 또는 CovX-Body), 이중 특이적 IgG 또는 IgG-유사 분자 (예 : IgG, scFv4-Ig , IgG-scFv, scFv-IgG, DVD-Ig, IgG-sVD, sVD-IgG, 2 in 1-IgG, mAb2 또는 Tandemab 공통 LC), 비대칭 이중 특이적 IgG 또는 IgG-유사 분자 (예, kih IgG, kih IgG 공통 LC, 크로스맙 (CrossMab), kih IgG-scFab, mAb-Fv, 전하쌍(charge pair) 또는 SEED-body), 작은 이중 특이적 항체 분자 (Diabody (Db), dsDb, DART, scDb, tandAbs, 직렬 scFv (taFv), 직렬 dAb/VHH, 삼중체 (triple body), 삼중 헤드 (triple head), Fab-scFv 또는 F(ab')2-scFv2), 이중 특이적 Fc 및 CH3 융합 단백질 (예, taFv-Fc, Di-diabody, scDb-CH3, scFv scFv-kih-Fc 또는 scFv-kih-CH3) 또는 이중 특이적 융합 단백질 (예 : scFv2-알부민, scDb-알부민, taFv-톡신, DNL-Fab3, DNL-Fab4 -IgG, DNL-Fab4-IgG-사이토카인2)일 수 있다. 특히 Kontermann MAbs 2012, 4 (2) : 182-19의 도 2 참조.
숙련자는 본 발명에 따른 이중 특이적 항체 및 이중 특이적 항원 결합 단편을 고안 및 제조할 수 있다.
이중 특이적 항체를 생산하는 방법은 항체 또는 항체 단편의 예를 들어, 문헌 (Segal and Bast, 2001. Production of Bispecific Antibodies. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2. 13:2. 13. 1-2. 13. 16)에 기재된 바와 같이 환원 가능한 이황화물 또는 비-환원성 티오에테르 결합을 갖는, 화학적인 교차결합을 포함하고, 이는 전체가 참고문헌으로써 본원에 통합된다. 예를 들어, N-숙신이미딜-3-(-2-피리딜디티오)-프로피오네이트 (SPDP)는 예를 들어, 이황화물-결합 이중 특이적 F(ab)2 헤테로다이머를 생성하기 위해 힌지 영역 SH-기를 통해 Fab 단편을 화학적으로 교차결합하는데 사용할 수 있다.
이중 특이적 항체를 생산하는 다른 방법은 문헌 (D. M. and Bast, B. J. 2001. Production of Bispecific Antibodies. Current Protocols in Immunology. 14:IV:2. 13:2. 13. 1-2. 13. 16)에 기재된 바와 같이, 이중 특이적 항체를 분비할 수는 쿼드로마 세포(quadroma cell)를 생산하기 위해 예를 들어, 항체-생산 하이브리도마 폴리에틸렌 글리콜을 융합하는 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 이중 특이적 항체 및 이중 특이적 항원 결합 단편은 또한 예를 들어, 문헌 (Antibody Engineering: Methods and Protocols, Second Edition (Humana Press, 2012), 40장: Production of Bispecific Antibodies: Diabodies and Tandem scFv (Hornig and Farber-Schwarz)) 또는 문헌 (French, How to make bispecific antibodies, Methods Mol. Med. 2000; 40:333-339)에 기재된 항원 결합 분자에 대해 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 작제물로부터의 발현에 의해 재조합적으로 생산될 수 있다: 이들 모두의 전체가 참고문헌으로써 본원에 통합된다.
예를 들어, 2개의 항원 결합 도메인에 대한 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 (즉, TIM-3에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인에 대한 경쇄 및 중쇄 가변 도메인, 및 다른 표적 단백질에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인에 대한 경쇄 및 중쇄 가변 도메인)을 코딩하고, 항원 결합 도메인 사이의 적합한 링커 또는 이량체 도메인을 코딩하는 서열을 포함하는 DNA 작제물을 분자 복제 기술에 의해 제조할 수 있다. 재조합 이중 특이적 항체는 이후 적당한 숙주 세포 (예를 들어, 포유동물 숙주 세포)에서 상기 작제물의 발현 (예를 들어, 시험관 내)에 의해 생산할 수 있고, 이어서 발현된 재조합 이중 특이적 항체를 임의적으로 정제할 수 있다.
본 발명에 따른 항체, 항원 단편 또는 폴리펩타이드는 또한 수용체가 면역 세포 상에 선택된 특이성을 접목시키는 재조합 기술에 의해 조작되는 키메라 항원 수용체 (CAR; 인공 T-세포 수용체로도 불림)를 작제하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 단일클론 항체의 특이성이 T-세포 상에 접목될 수 있고, 변형된 T-세포는 질병 예를 들어 암의 치료에 사용될 수 있다. CAR의 한 형태는 본 발명에 따른 항체, 항원 단편 또는 폴리펩타이드를 포함하는 scFv와 적합한 수용체 스캐폴드의 막 관통 도메인 및 엔도 도메인의 융합이다. CAR 제조 기술은 문헌 (Pule, M et al., (2003 Cytotherapy 5 (3) : 211-26))에 기재되었다.
항체는 비 변형 모체 항체와 비교하여 항원에 대한 항체의 친화력이 개선된 변형 항체가 생성되는 친화도 성숙(affinity maturation) 과정에 의해 생성될 수 있다. 친화도-성숙 항체는 당업계에 공지된 절차, 예를 들어 문헌 (Marks et al.,Rio/Technology 10:779-783 (1992); Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):331 0-15 9 (1995); and Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992))에 기재되었다.
본 발명에 따른 항체는 바람직하게는 TIM-3에 특이적인 결합을 나타낸다. 표적 분자에 특이적으로 결합하는 항체는 바람직하게는 다른 표적에 결합하는 것보다 더 큰 친화력, 및/또는 더 긴 지속 시간으로 표적에 결합한다. 일 실시양태에서, 비 연관 표적에 대한 항체의 결합 정도는, 예를 들어 ELISA 또는 방사면역측정법 (RIA)에 의해 측정된 항체의 표적에 대한 결합의 약 10% 미만이다. 대안적으로, 결합 특이성은 본 발명의 항-TIM-3 항체가 다른 표적 분자, 예를 들어 TIM-3 패밀리의 다른 구성원에 대한 항체의 Kd 보다 큰, 적어도 0.1 차수의 Kd (즉, 0.1 x 10n, 여기서 n은 크기의 차수를 나타내는 정수)로 TIM-3에 결합하는 결합 친화도의 관점에서 반영될 수 있다. 이는 임의적으로 적어도 0. 2, 0. 3, 0. 4, 0. 5, 0. 6, 0. 7, 0. 8, 0. 9, 1. 0, 1. 5 또는 2. 0 중 하나일 수 있다.
본 발명에 따른 항체는 바람직하게는 ≤1 x 10-6, ≤ 1 x 10-5, ≤1 x 10-4 또는 ≤1 x 10- 3중 하나의 해리상수 (Kd)를 갖는다. 이의 표적에 대한 항체의 결합 친화도는 종종 해리상수 (Kd)의 관점에서 기술된다. 결합 친화도는 당업계에 공지된, 표면플라스몬공명 (SPR) 또는 항체 및 항원 분자의 Fab 버전으로 수행되는 방사성표지 항원 결합 분석법 (RIA)과 같은 방법에 의해 측정될 수 있다.
본 발명에 따른 항체는 그것이 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 "길항제" 항체일 수 있다. TIM-3의 차단은 TIM-3에 의해 매개되는 면역-억제 신호 전달 경로를 억제함으로써 T-세포 기능의 회복을 돕는다.
일부 양태에서, 상기 항체는 1B9 또는 1B9의 변이체이다. 1B9는 하기 CDR 서열을 포함한다.
경쇄:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: EAWDYYVAAGY (서열번호 12)
중쇄:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30) 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGSDA (서열번호 32)
CDR 서열은 Kabat 정의에 의해 결정되었다.
일부 양태에서, 상기 항체는 1H9 또는 1H9의 변이체이다. 1H9는 하기 CDR 서열을 포함한다.
경쇄:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: DSWDSADASGV (서열번호 13)
중쇄:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30) 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGFDD (서열번호 33)
CDR 서열은 Kabat 정의에 의해 결정되었다.
일부 양태에서, 상기 항체는 1H10 또는 1H10의 변이체이다. 1H10은 하기 CDR 서열을 포함한다.
경쇄:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: DSWDYDYAAGV (서열번호 14)
중쇄:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30) 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGFDS (서열번호 34)
CDR 서열은 Kabat 정의에 의해 결정되었다.
일부 양태에서, 상기 항체는 2C7 또는 2C7의 변이체이다. 2C7은 하기 CDR 서열을 포함한다.
경쇄:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: DSWDSYLAAGV (서열번호 15)
중쇄:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30) 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGYDY (서열번호 35)
CDR 서열은 Kabat 정의에 의해 결정되었다.
일부 양태에서, 상기 항체는 2F4 또는 2F4의 변이체이다. 2F4는 하기 CDR 서열을 포함한다.
경쇄:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: ESWDYDYASGV (서열번호 16)
중쇄:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30) 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGSDA (서열번호 36)
CDR 서열은 Kabat 정의에 의해 결정되었다.
일부 양태에서, 상기 항체는 2G6 또는 2G6의 변이체이다. 2G6은 하기 CDR 서열을 포함한다.
경쇄:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: DSWDSSDSSGV (서열번호 17)
중쇄:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30) 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGFDS (서열번호 37)
CDR 서열은 Kabat 정의에 의해 결정되었다.
일부 양태에서, 상기 항체는 1D9 또는 1D9의 변이체이다. 1D9는 하기 CDR 서열을 포함한다.
경쇄:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: EAWDSAYAAGS (서열번호 18)
중쇄:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30) 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
HC-CDR3: GYYAGDDY (서열번호 38)
CDR 서열은 Kabat 정의에 의해 결정되었다.
일부 양태에서, 상기 항체는 1F4 또는 1F4의 변이체이다. 1F4는 하기 CDR 서열을 포함한다.
경쇄:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: DSWDAALSAGV (서열번호 19)
중쇄:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30) 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGYDY (서열번호 39)
CDR 서열은 Kabat 정의에 의해 결정되었다.
일부 양태에서, 상기 항체는 2C8 또는 2C8의 변이체이다. 2C8은 하기 CDR 서열을 포함한다.
경쇄:
LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
LC-CDR3: ESWDAAAAAGY (서열번호 20)
중쇄:
HC-CDR1: GGSFSGYYWS (서열번호 30) 또는
GYYWS (서열번호 61)
HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
HC-CDR3: GYVAGSDA (서열번호 40)
CDR 서열은 Kabat 정의에 의해 결정되었다.
본 발명에 따른 항체는 클론 1B9, 1H9, 1H10, 2C7, 2F4, 2G6, 1D9, 1F4, 2C8 중 하나의 CDR 또는 서열번호 1 및 21, 2 및 22, 3 및 23, 4 및 24, 5 및 25, 6 및 26, 7 및 27, 8 및 28 또는 9 및 29 중 하나를 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 항체에서, 6개 CDR 서열 중 1개 또는 2개 또는 3개 또는 4개가 변할 수 있다. 변이체는 6개 CDR 서열 중 1개 또는 2개에서 1 또는 2개의 아미노산 치환을 가질 수 있다.
항-TIM-3 클론의 VH 및 VL 사슬의 아미노산 서열을 도 1 및 2에 나타내었다. 인코딩 뉴클레오타이드 서열을 도 4에 나타내었다.
경쇄 및 중쇄 CDR은 또한 다수의 상이한 골격 영역과 관련하여 특히 유용할 수 있다. 따라서, LC-CDR1~3 또는 HC-CDR1~3을 갖는 경쇄 및/또는 중쇄는 다른 골격 영역을 가질 수 있다. 적절한 골격 영역은 당해 분야에 잘 공지되어 있으며, 예를 들어, 참고문헌으로 본원에 통합된 (M. Lefranc & G. Le : franc (2001) "The Immunoglobulin FactsBook", Academic Press)에 기재되었다.
본 명세서에서, 항체는 서열 번호 1 및 21, 2 및 22, 3 및 23, 4 및 24, 5 및 25, 6 및 26, 7 및 27, 8 및 28 또는 9 및 29 중 하나 이상의 VH 및/또는 VL 아미노산 서열 또는 도 1 및 2에 나타난 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열에 대해 높은 퍼센트 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및/또는 VL 사슬을 가질 수 있다.
예를 들어, 본 발명에 따른 항체는 TIM-3에 결합하고 서열번호 1 및 21, 2 및 22, 3 및 23, 4 및 24, 5 및 25, 6 및 26, 7 및 27, 8 및 28 또는 9 및 29 중 하나의 VH 사슬 아미노산 서열 또는 도 1 및 2에 나타난 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열에 대한 서열 동일성이 적어도 70%, 더 바람직하게는 적어도 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 를 가지는 아미노산 서열을 포함하는 VH 사슬을 갖는다.
본 발명에 따른 항체는 검출 가능하게 표지되거나, 또는 적어도, 검출될 수 있다. 예를 들어, 상기 항체는 방사성 원자 또는 착색된 분자 또는 임의의 다른 방법으로 용이하게 검출될 수 있는 형광 분자 또는 분자로 표지될 수 있다. 적합한 검출 가능한 분자는 형광 단백질, 루시퍼라제, 효소 기질 및 방사성 표지를 포함한다. 결합 부분은 검출 가능한 표지로 직접 표지될 수 있거나 간접적으로 표지될 수 있다. 예를 들어, 상기 결합 부분은 자체적으로 표지된 다른 항체에 의해 검출될 수 있는 비 표지된 항체일 수 있다. 대안적으로는, 2차 항체는 바이오틴에 결합 될 수 있고, 표지된 스트렙타비딘의 바이오틴에 대한 결합은 1차 항체를 간접적으로 표지하는데 사용된다.
검출 방법
본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편은 TIM-3에 대한 항체 또는 항원 결합 단편의 결합을 포함하는 방법에서 사용될 수 있다. 이러한 방법은 항체 또는 항원 결합 단편과 TIM-3의 결합 복합체의 검출을 포함할 수 있다. 따라서, 일 실시양태에서, TIM-3을 포함하거나 포함한다고 의심되는 시료를 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계 및 항체 또는 항원 결합 단편과 TIM-3의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다.
적절한 방법 형태는 당업계에 잘 공지되어 있으며, 샌드위치 분석법 예를 들어 ELISA와 같은 면역분석법을 포함한다. 상기 방법은 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 TIM-3, 또는 둘 다를 검출 가능한 표지, 예를 들어, 형광, 발광 또는 식별용 방사성 동위원소(radio-label)로 표지하는 단계를 포함할 수 있다.
이러한 종류의 방법은 TIM-3의 검출 및/또는 정량화를 필요로 하는 질병 또는 병증의 진단 방법의 기반을 제공할 수 있다. 이러한 방법은 환자 시료에서 시험관 내 수행되거나 환자 시료의 처리 후에 수행될 수 있다. 일단 시료가 수집된 후에는 환자는 시험관 내 진단 방법을 수행할 필요가 없으므로 사람이나 동물의 몸에서 실행되지 않는 방법일 수 있다.
이러한 방법은 환자 시료 내에 존재하는 TIM-3의 양을 결정하는 것을 포함할 수 있다. 상기 방법은 진단에 이르는 과정의 일부로서 상기 결정된 양을 표준 또는 기준치와 비교하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 다른 진단 시험은 진단 또는 예후의 정확성을 높이거나 여기에 기재된 검사를 사용하여 얻은 결과를 확인하기 위해 본원에 기재된 것과 함께 사용할 수 있다.
환자 시료에 존재하는 TIM-3의 수준은 환자가 항 TIM-3 항체로의 치료에 반응할 가능성이 있음을 나타낼 수 있다. 시료 내 높은 수준의 TIM-3의 존재는 항 TIM-3 항체로 치료하기 위해 환자를 선택하는데 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체는 항-TIM-3 요법으로 치료하기 위해 환자를 선택하는데 사용될 수 있다.
시료 내 TIM-3의 환자의 T-세포 기능이상 장애 또는 암 상태의 진단, 암성 질환에 대한 소인의 진단 또는 암성 질환의 예후 (징후)를 제공하기 위해 사용될 수 있다. 진단 또는 예후는 양성 또는 악성일 수 있는 기존의 (이전에 진단된) 암 상태와 관련될 수 있으며, 의심되는 암 상태와 관련될 수 있거나 환자의 암 상태 (이전에는 진단되지 않았을 수 있음)에 대한 스크리닝과 관련될 수 있다.
일 실시양태에서, CD8+ T 세포 상의 TIM3 발현 수준은 T-세포 고갈 정도 및 질병 상태의 중증도를 나타내기 위해 검출될 수 있다. 어떤 경우에서, T 세포 또는 종양 세포 상의 TIM-3 발현 수준은 항-TIM3 항체 또는 항-TIM3 약제와 같은 TIM3 신호 조절제로 치료하기 위해 환자를 선택하는데 사용될 수 있다.
시료는 임의의 조직 또는 체액으로부터 채취할 수 있다. 시료는 혈액의 양; 피브린 응고 및 혈액 세포의 제거 후 수득된 혈액의 유체 부분을 포함할 수 있는 개인의 혈액으로부터 유래된 혈청의 양; 조직 시료 또는 생검; 또는 상기 개인으로부터 단리된 세포를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 방법은 바람직하게 시험관 내에서 수행된다. 용어 "시험관 내"는 배양된 세포로 실험하는 것을 포함하는 것으로 의도된 반면, 용어 "생체 내"는 온전한 다세포 생물로 실험하는 것을 포함하는 것으로 의도된다.
치료 적용
본 발명에 따른 항체, 항원 결합 단편 및 폴리펩타이드와 이러한 제제를 포함하는 조성물은 의학적 치료에 사용하기 위해 제공될 수 있다. 치료는 치료가 필요한 질병 또는 병증을 갖는 개체에 제공될 수 있다. 질병 또는 병증은 암과 연관된 T-세포 기능이상 장애, 암 또는 감염성 질병을 포함하는 T-세포 기능이상 장애의 하나일 수 있다.
T-세포 기능이상 장애는 정상 T-세포 기능이 손상되어 예를 들어, 미생물, 박테리아 및 바이러스와 같은 외인성 제제에 의한 감염에 의해 생성되거나, 또는 어떤 형태의 암 (예: 종양 관련 항원의 형태)과 같은 일부 질병 상태에서 숙주에 의해 생성될 수 있는 병원체 항원 대한 개체의 면역 반응의 하향 조절을 일으키는 질병 또는 병증일 수 있다.
T-세포 기능이상 장애는 T-세포 고갈 또는 T-세포 아네르기를 포함할 수 있다. T-세포 고갈은 CD8+ T-세포가 증식에 실패하거나 항원 자극에 반응하여 세포독성 및 사이토카인 (예: IFNγ) 분비와 같은 T-세포 효과기를 발휘하지 못하는 상태를 포함한다. 고갈된 T-세포는 또한 TIM-3의 지속적인 상향 조절을 특징으로 하고, TIM-3:갈렉틴 9 상호작용의 차단은 T-세포 고갈을 역전시키고 항원-특이적 T 세포 반응을 회복시킬 수 있다.
T-세포 기능이상 장애는 감염 또는 감염에 대한 효과적인 면역 반응을 나타낼 수 없음으로 인해 나타날 수 있다. 상기 감염은 만성, 지속성, 잠재성 또는 천천히 진행될 수 있으며, 박테리아, 바이러스, 곰팡이 또는 기생충 감염의 결과일 수 있다. 따라서 박테리아, 바이러스 또는 곰팡이 감염 환자에게 치료가 제공될 수 있다. 박테리아 감염의 예로는 헬리코박터 파일로리 (Helicobacter pylori) 감염을 포함한다. 바이러스 감염의 예로는 HIV, B형 간염 또는 C형 간염이 포함된다.
상기 T-세포 기능이상 장애는 종양 면역 탈출과 같은 암에 관련될 수 있다. 많은 인간 종양은 T 세포에 의해 인식되고 면역 반응을 유도할 수 있는 종양 관련 항원을 발현한다. 그러나, 면역 회피는 일반적이며 갈렉틴 9를 포함하는 다양한 가용성 인자에 의해 매개되는 것으로 알려져 있다. 따라서, TIM-3과 갈렉틴 9의 상호작용을 차단하면 종양 세포에 대한 이러한 음성 면역조절 신호를 억제하고 종양-특이적 CD8+ T 세포 면역성을 향상시킬 수 있다
암은 T-세포 고갈과 같은 T-세포 기능이상 장애의 징후가 없는 경우에도 치료할 수 있다. 본 발명에 따른 항체는, 예를 들어 고갈된 T- 또는 급성 골수성 백혈병 세포와 같은 암세포인 T-세포와 같은 TIM-3 발현 세포에 대해 세포독성일 수 있다. 따라서, 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드는 항체 의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC) 또는 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 포함하는 방법, 또는 CAR 세포, 또는 CD3를 표적으로 하는 이중 특이적 항체와 같은 표적 세포 사멸을 위한 면역 효과기를 유도하는 임의의 방법에서 유용할 수 있다.
본 발명에 따른 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드의 용도는 개체가 TIM-3 신호전달을 억제하고 제한된 손상, 회피 또는 종양 면역 탈출 유도로 효과적인 면역 반응을 할 수 있게 한다. 이러한 치료에서, 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드는 종양 면역 탈출의 발병 예방을 포함하는 암에 대한 치료를 제공할 수 있다.
상기 치료는 T-세포 기능이상 장애의 예방, 예를 들어, 감염 또는 암의 진행 또는 발병의 예방을 목표로 할 수 있다. 따라서, 항체, 항원 결합 단편 및 폴리펩타이드는 약학 조성물 또는 의약품을 제제화하는데 사용될 수 있고, 개체는 질병 상태의 발달에 대해 예방적으로 치료될 수 있다. 이것은 질병 상태의 증상이 나타나기 전에 발생할 수 있으며, 및/또는 감염이나 암 발병 위험이 더 큰 것으로 생각되는 개체에게 주어질 수 있다.
치료는 백신, 예를 들어 동시에, 개별적 또는 순차적인 요법, 또는 백신과 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 단일 조성물로 동시 투여할 수 있는 T-세포 백신과의 병행 치료를 포함할 수 있다. 이런 맥락에서, 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드는 백신에 대한 보조제로서 제공될 수 있다. 고갈된 T 세포의 제한된 증식 잠재력은 T-세포 면역요법의 실패의 주요 원인으로 여겨지고 있으며, T 세포 고갈을 막거나 역전시킬 수 있는 약제는 T-세포 면역요법의 효능을 향상시키는 잠재적 전략이다 (Barber et al., Nature Vol 439, No.9 p682-687 Feb 2006).
항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드의 투여는 바람직하게는 "치료학적 유효량"으로, 이것은 개인에게 이익을 나타내기에 충분한 것이다. 실제 투여량, 투여 속도 및 시간 경과는 치료할 질병의 성질 및 정도에 따른다. 복용량 결정 등의 치료 처방은 일반 개업의 및 다른 의사의 책임하에 있으며 일반적으로 치료할 질환, 개별 환자의 상태, 전달 부위, 투여 방법 및 기타 요인을 고려한다. 상기 언급 한 기술 및 프로토콜의 예는 문헌 (Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th Edition, 2000, pub. Lippincott, Williams & Wilkins.)에서 찾을 수 있다.
약학적으로 유용한 조성물 및 의약품의 제제화
본 발명에 따른 항체, 항원 결합 단편 및 폴리펩타이드는 임상적 용도를 위한 약제학적 조성물로서 제제화될 수 있으며 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 부형제 또는 보조제를 포함할 수 있다.
본 발명에 따라, 약학적으로 유용한 조성물의 생산 방법이 또한 제공되며, 이러한 생산 방법은 본원에 기재된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 단리하는 단계; 및/또는 본원에 기재된 단리된 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 약학적으로 허용가능한 담체, 보조제, 부형제 또는 희석제와 혼합하는 단계를 포함한다.
예를 들어, 본 발명의 추가의 양태는 T-세포 기능이상 장애를 치료하는데 사용하기 위한 약제 또는 약학 조성물을 제제화 또는 제조하는 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 약학적으로 허용가능한 담체, 보조제, 부형제 또는 희석제와 함께 투여하는 단계를 포함한다.
감염
감염은 감염 또는 세균성, 바이러스성, 곰팡이성 또는 기생충 감염과 같은 감염성 질병일 수 있다. 일부 실시양태에서, 이는 만성/지속성 예를 들어, 그러한 감염은 T 세포 기능이상 장애 또는 T 세포 고갈과 관련된 감염을 치료하는 것이 특히 바람직할 수 있다.
T 세포 고갈은 암에서 뿐만 아니라 많은 만성 감염 (바이러스성, 세균성 및 기생충성)에서 발생하는 T 세포 기능이상 장애의 상태로 확립되었다 (Wherry Nature Immunology Vol. 12, No. 6, p492-499, June 2011).
TIM-3 발현은 만성 감염 환자에서 중요한 병원성 역할을 하는 것으로 보고되었다 (Golden-Mason L, et al., J Virol. 2009; 83 (18) : 9122-9130).
치료될 수 있는 박테리아성 감염의 예로는 바실러스 (Bacillus spp. ), 보르데텔라 퍼츄시스 (Bordetella pertussis), 클로스트리디움 (Clostridium spp. ), 코리네박테리움 (Corynebacterium spp. ), 비브리오 콜레라 (Vibrio chloerae), 스타필로코코스 (Staphylococcus spp. ), 스트렙토코코스 (Streptococcus spp. ), 에세리키아 (Escherichia), 클렙시엘라 (Klebsiella), 프로테우스 (Proteus), 에르시니아 (Yersinia), 에르위나 (Erwina), 살모넬라 (Salmonella), 리스테리아 (Listeria sp), 헬리코박터 파일로리 (Helicobacter pylori), 마이코박테리아 (mycobacteria) (예. 마이코박테리움 튜버큐로시스 (Mycobacterium tuberculosis)) 및 슈도모나스 아에루기노사 (Pseudomonas aeruginosa)와 같은 균주를 포함한다. 예를 들어, 세균 감염은 패혈증 또는 결핵일 수 있다.
Yao et al (PD-1 on dendritic cells impedes innate immunity against bacterial infection. Blood 113(23):5811-5818 Jun 4 2009)은 리스테리아 모노사이토진 (Listeria monocytogenes)에 의한 감염에 대한 자연 면역 반응 동안 DC 기능의 음성 조절에서 PD-1을 확입하였다. Brahmamdam et al (Delayed administration of anti-PD-1 antibody reverses immune dysfunction and improves survival during sepsis. Journal of Leukocyte Biology vo. 88, no. 2 233-240, August 2010)은 패혈증 발병 24시간 후 투여된 항 -PD-1 항체가 패혈증에 의해 유발된 림프구 및 DC의 고갈, Bcl-xL의 증가, 세포 사멸 및 생존 개선을 방지한다고 보고 했다. Tim3:갈렉틴-9 상호 작용은 T 세포 고갈을 매개하고 마이코박테리움 튜버큘로시스 (Mycobacterium tuberculosis)에 의한 감염에 대한 자연 및 적응 면역 반응을 매개하는 것으로 보고되었다 (Jayaraman et al., The Journal of Immunology 2012, 188, 70.6).
치료될 수 있는 바이러스성 감염의 예로는, 인플루엔자 바이러스, 홍역 바이러스, B형 간염 바이러스 (HBV), C형 간염 바이러스 (HCV), 인체 면역 결핍 바이러스 (HIV), 림프성 맥락수막염 바이러스 (LCMV), 단순 포진 바이러스 및 인체 유두종 바이러스를 포함한다.
HCV, HBV 및 HIV로 인한 것과 같은 만성 바이러스성 감염은 일반적으로 면역 제거를 피할 수 있는 메커니즘을 포함한다. PD-1 및 TIM-3의 발현은 C형 간염 바이러스 (HCV)에 대한 결핍 T 세포 반응과 관련이 있다고 밝혀졌다 (McMahan et al., The Journal of Clinical Investigation Vol.120, No.12 p4546-4557, December 2010). HCV에서, McMahan et al (상기 참조)은 HCV-특이적 CTL에 대한 이중 TIM-3 및 PD-1 발현의 수준이 바이러스 지속성의 발병 이전에 예후 정보를 제공한다는 것을 발견했다. Barber et al (Nature Vol 439, No.9 p682-687 Feb 2006)은 PD-1이 만성 바이러스 감염 중에 증가한다고 보고하였다. LCMV에 감염된 마우스에서 그들은 PD-1/PD-L1 억제 경로의 차단이 CD8 T 세포에 대해 유익한 영향을 미치고, 증식을 일으키고, 사이토카인을 분비하고, 감염된 세포를 죽이고, 바이러스 부하를 감소시키는 능력을 회복했다고 보고했다. PD-1은 또한 HIV 감염에서 상향 조절되었다 (Said et al., Nature Medicine Vol. 16, No. 4 p452-460 April 2010). PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단하는 것은 만성 바이러스 감염의 동물 모델에서 바이러스 제거 및 T 세포 기능 개선에 기여하였다 (상기 Said 등 참조).
치료될 수 있는 곰팡이상 감염의 예로는 알터나리아 종 (Alternaria sp ), 아스퍼질러스 종 ( Aspergillus sp ), 칸디다 종 ( Candida sp ) 및 히스토플라스마 종 ( Histoplasma sp .)에 의한 감염을 포함한다. 곰팡이 감염은 곰팡이 패혈증 또는 히스 토 플라스마 증일 수 있다.
Chang et al (Blockade of the negative co-stimulatory molecules PD-1 and CTLA-4 improves survival in primary and secondary fungal sepsis. Critical Care 2013, 17:R85)은 항-PDD 항체가 일차 및 이차 곰팡이 패혈증에서 생존율을 높이는 데 매우 효과적이라고 보고했다. Lazar-Molnar et al (The PD-1/PD-L costimulatory pathway critically affects host resistance to the pathogenic fungus Histoplasma capsulatum PNAS vol.105, no.7, p2658-2663, 19 Feb 2008)은 는 항 PD-1 항체가 히스토플라스마 캡슐라툼 (Histoplasma capsulatum)에 감염된 생쥐의 생존율을 유의하게 증가시킨다고 보고했다. 따라서 곰팡이 감염을 매개하는데 T 세포 고갈의 중요성이 잘 확립되었다. 치료될 수 있는 기생충 감염의 예로는 열대열 식물 (Plasmodium) 종(예. Plasmodium falciparum , Plasmodium yoeli, Plasmodium ovale, Plasmodium vivax 또는 Plasmodium chabaudi chabaudi)에 의한 감염을 포함한다. 기생충 감염은 말라리아, 리슈만편모충증 (leishmaniasis) 및 톡소플라스마증 (toxoplasmosis)과 같은 질병일 수 있다.
열대열말라리아원충 (Plasmodium falciparum)에 의한 인간의 감염은 PD-1 및 T 세포 고갈 마우스의 발현을 증가시키는 것으로 밝혀졌다 (Butler et al., Nature Immunology Vol. 13, No. 12, p 188-195 February 2012). 생체 내 항-PD-L1 및 항-LAG-3 단일클론 항체를 사용한 PD-L1 및 LAG-3의 차단은 CD4+ T 세포 기능의 회복, 여포 헬퍼 T-세포 수의 증폭, 배아-중심 B 세포 및 형질아세포, 강화된 보호 항체 및 쥐의 혈액 단계 말라리아를 신속히 제거하였다. 이는 또한 만성 감염의 발병을 차단하는 것으로 나타났다 (상기 Butler 등 참조).
암
암은 원하지 않는 세포 증식 (또는 원하지 않는 세포 증식에 의한 모든 질병), 신생물 또는 종양 또는 원하지 않는 세포 증식, 신생물 또는 종양의 증가된 위험 또는 경향일 수 있다. 암은 양성이거나 악성일 수 있으며 1차 또는 2차 (전이성)일 수 있다. 신생물 또는 종양은 세포의 비정상적인 성장 또는 증식일 수 있으며 모든 조직에 위치할 수 있다. 조직의 예로는 부신, 부신 수질, 항문, 맹장 (appendix), 방광, 혈액, 뼈, 골수, 뇌, 유방, 막창자 (cecum), 중추 신경계 (뇌를 포함 또는 제외) 소뇌, 자궁 경부, 결장, 십이지장, 자궁 내막, 상피 세포(신장 상피), 담낭, 식도, 신경교종, 심장, 회장 (ileum), 공장 (jejunum), 신장, 눈물샘, 후두, 간, 폐, 림프, 림프절, 림프구, 상악골, 종격막, 장간막, 자궁 근충, 비 인두, 오트 메, 구강, 난소, 췌장, 이하선,회장, 장, 신장, 눈물샘, 후두, 간, 폐, 림프절, 림프절, 림프구, 상악골, 종격근, 장간막, 자궁근종, 코인두, 장막 (omentume), 구강, 난소 췌장, 이하선 (parotid gland), 말초 신경계, 복막, 흉막, 전립선, 타액선, S 형 결장, 피부, 소장, 연조직, 비장, 위, 고환, 흉선, 갑상선, 혀, 편도선, 자궁, 외음부, 백혈구를 포함한다.
치료할 종양은 신경계 또는 비 신경계 종양일 수 있다. 신경계 종양은 중추 신경계 또는 말초 신경계에서 비롯될 수 있다. 신경교종, 수모세포종, 뇌수막종, 신경섬유종, 상의세포종, 신경초종, 신경섬유육종, 성상세포종 및 희소돌기아세포종을 포함한다. 비 신경계 암/종양은 예를 들어, 흑색종, 중피종, 림프종, 골수종, 백혈병, 비호지킨 림프종 (NHL), 호지킨 림프종, 만성 골수성 백혈병 (CML), 급성 골수성 백혈병 (AML), 골수 이형성 증후군 (MDS), 피부 T 세포 림프종 (CTCL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 간암, 상피세포암, 전립선 암종, 유방암, 폐암, 결장암, 난소암, 췌장암, 흉선 암종, 비소 세포 폐암, NSCLC, 혈액암 및 육종 (sarcoma)을 포함하는 다른 비 신경 조직에서 비롯될 수 있다.
입양 T 세포 전달 요법
입양 T 세포 전달 요법은 개체로부터 제거된 백혈구내 과정을 지칭하며, 보통은 백혈구를, 전형적으로는 백혈구가 분리된 혈액 시료를 추출함으로써, 시험관 내 또는 생체 외에서 증식시켜, 동일한 개체 또는 상이한 개체로 되돌린다. 상기 치료는 전형적으로 개체에 필요한 T 세포 집단의 활성 형태의 양/농도를 증가시키는 것을 목표로 한다. 이러한 치료는 T 세포 고갈을 겪는 개체에게 유익할 수 있다.
T 세포 고갈의 메커니즘을 차단하거나 역전시킬 수 있는 항체는 T 세포 활동을 강화하고 T 세포 증식을 촉진시키는 수단을 제공한다.
따라서, 본 발명의 또 다른 양태에서, 본 발명에 따른 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드와 T 세포가 시험관 내 또는 생체 외에서 접촉하는, T 세포 집단을 증대시키는 방법이 제공된다.
상기 방법은 임의적으로 하기 단계 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 개체로부터 혈액 시료를 채취하는 단계; 혈액 시료로부터 T 세포를 분리하는 단계; 시험관 내 또는 생체 외 세포 배양 (항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드와 접촉시킬 수 있는 곳)에서 T 세포를 배양하고, T 세포의 증대된 집단을 수집하는 단계; T 세포를 보조제, 희석제 또는 담체와 혼합하는 단계; 상기 증대된 T 세포를 개체에 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
따라서, 본 발명의 일부 양태에서, T-세포 기능이상 장애를 갖는 개체의 치료가 제공되며, 이 방법은 치료가 필요한 개체로부터 혈액 시료를 수득하는 단계, 상기 혈액 시료로부터 수득된 T 세포를 본 발명에 따른 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드의 존재하에 T 세포 집단을 증대시키는 단계, 증대된 T 세포를 수집하는 단계 및 치료를 필요로하는 개체에게 증대된 T 세포를 투여하는 단계를 포함한다.
상기 T 세포는 치료를 필요로 하는 개체로부터 수득될 수 있고, 단리 및/또는 정제될 수 있다. 그들은 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포 집단일 수 있다. 상기 T 세포는 T 세포 고갈을 겪는 집단을 대표할 수 있고 임의적으로 TIM-3의 발현이 상향 조절될 수 있다.
배양하는 중에, T 세포는 원하는 수의 세포로 T 세포를 증대시키는데 적합한 조건 및 시간 동안 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드와 접촉시킬 수 있다. 적절한 시간 후에 T 세포를 수확하고, 임의적으로 농축시키고, 적절한 담체, 보조제 또는 희석제와 혼합하여 개체로 되돌릴 수 있다. 개체는 1회 이상의 치료를 받을 수 있다.
T 세포 증대의 방법은 당해 기술 분야에 잘 공지되었으며, 예를 들어, 문헌 (Kalamasz et al., J Immunother 2004 Sep-Oct; 27(5):405-18; Montes et al., Clin Exp Immunol 2005 Nov;142(2):292-302; Wlfl and Greenburg Nature Protocols 9 p950-966 27 March 2014; Trickett and Kwan Journal of Immunological Methods Vol. 275, Issues 1-2, 1 April 2003, p251-255; Butler et al PLoSONE 7(1) 12 Jan 2012.)에 기재되어 있다.
동시 또는 순차적 투여
조성물은 치료될 상태에 따라 동시에 또는 순차적으로 단독으로 또는 다른 치료제와 병용 투여될 수 있다.
본 명세서에서, 본 발명의 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드 및 항- 감염제 또는 화학요법제 (치료제)는 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드로의 치료는 화학요법을 수반할 수 있다.
동시 투여는 예를 들어 두 작용제 (복합 제제)를 함유하는 약학 조성물로서 또는 서로의 직후 및 경우에 따라 동일한 투여 경로, 예를 들어 같은 동맥, 정맥 또는 다른 혈관을 통해 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드 및 치료제를 함께 투여하는 것을 말한다.
순차 투여는 다른 약제의 개별 투여에 의해 주어진 시간 간격 후에 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드 또는 치료제 중 하나의 투여하는 것을 의미한다. 일부 실시양태에서, 2개의 제제가 동일한 경로에 의해 관리될 필요는 없다. 시간 간격은 임의의 시간 간격일 수 있다.
항- 감염제
감염 치료에 있어서, 본 발명의 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드는 전술한 바와 같이 항-감염제와 함께 투여될 수 있다. 항-감염제는 감염에 관여하는 미생물 또는 바이러스에 대한 작용을 갖는 것으로 알려진 제제일 수 있다.
적합한 항-감염제로는 항생제 (페니실린, 세팔로스포린, 리파마이신, 리피아미마이신, 퀴놀론, 술폰아미드, 매크로라이드, 링코사미드, 테트라사이클린, 사이클릭 리포펩타이드, 글리시클린, 옥사졸리디논 및 리피아미마이신), 항 바이러스제 (역전사효소 억제제, 인테그라제 억제제, 전사 인자 억제제, 안티센스 및 siRNA 제제 및 프로테아제 억제제), 항 곰팡이제 (폴리엔, 이미다졸, 트리아졸, 티아졸, 알릴아민 및 에키노칸틴 등) 및 항 기생충제 (선충증제, 항 적혈구제, 항 혈변제 및 항원충약제).
화학요법
화학요법은 약제 또는 이온화 방사선 (예: X-레이 또는 γ-선을 이용한 방사선요법)으로 암을 치료하는 것을 말한다. 바람직한 실시양태에서, 화학요법은 약제 치료를 의미한다. 약제은 화학 물질, 예를 들어, 소분자 약제, 항생제, DNA 인터 카레이터, 단백질 억제제 (예: 키나아제 억제제), 또는 생물학적 제제, 항체, 항체 단편, 핵산 또는 펩타이드 앱타머, 핵산 (예: DNA, RNA), 펩타이드, 폴리펩타이드 또는 단백질을 포함할 수 있다. 약제는 약제학적 조성물 또는 의약품으로서 제제화될 수 있다. 제제는 하나 이상의 약학적으로 허용 가능한 희석제, 부형제 또는 담체와 함께 하나 이상의 약제 (예를 들어, 하나 이상의 활성 약제)을 포함할 수 있다.
치료는 하나 이상의 약제 투여를 포함할 수 있다. 약제은 치료될 상태에 따라 동시에 또는 순차적으로 단독으로 또는 다른 치료제와 병용 투여될 수 있다. 예를 들어, 화학요법은 두 가지 약제의 투여를 포함하는 병용 요법일 수 있으며, 하나 이상의 요법이 암을 치료할 수 있다.
화학요법은 하나 이상의 투여 경로에 의해 경구 내, 피하 내, 피부 내 또는 종양 내 투여될 수 있다.
화학요법은 치료법에 따라 투여될 수 있다. 치료 계획은 의사 또는 의료 종사자에 의해 준비될 수 있는 화학요법 투여의 예정된 시간표, 계획, 책략 또는 스케줄일 수 있으며, 치료를 필요로하는 환자에게 적합하도록 맞춰질 수 있다.
치료는 다음 중 하나 이상을 나타낼 수 있다 : 환자에게 투여할 화학요법의 유형; 각 약제 또는 방사선의 용량; 투여 사이의 시간차; 각 치료의 기간; 임의의 치료 중지의 수 및 성질 등. 병용 요법의 경우, 각 약제을 투여하는 방법을 나타내는 단일 치료 체제가 제공될 수 있다.
화학요법 약제 및 생물학적 제제는 다음에서 선택할 수 있다 :
· 시스플라틴 (cisplatin), 카보플라틴 (carboplatin), 메클로레타민 (mechlorethamine), 시클로포스파미드 (cyclophosphamide), 클로람부실 (chlorambucil), 이포스파마이드 (ifosfamide)와 같은 알킬화제;
· 아자티오퓨린 (azathiopurine ) 또는 메르캅토퓨린 (mercaptopurine)과 같은 퓨린 또는 피리미딘 항 대사 물질;
· 빈카 알칼로이드 (예: 빈크리스틴 (vincristine), 빈블라스틴 (vinblastine), 비놀레빈 (vinorelbine), 빈데신 (vindesine), 포도필로톡신 (podophyllotoxin), 에토포사이드 (etoposide), 테니포사이드 (teniposide), 파클리탁셀 (TaxolTM), 도세탁셀 (docetaxel)과 같은 탁산 (taxane)과 같은 알칼로이드 및 테르페노이드;
· I 형 토포이소머라제 (type I topoisomerase) 저해제 캄포테신 (camptothecins), 이리노테칸 (irinotecan) 및 토포테칸 (topotecan)과 같은 토포이소머라제 억제제 또는 II 형 토포이소머라제 억제제 암사크린 (amsacrine), 에토포사이드, 에토포사이드 포스페이트, 테니포사이드;
· 닥티노마이신 (dactinomycin), 독소루비신 (doxorubicin) (Adriamycin ™), 에피루비신 (epirubicin), 블레오마이신 (bleomycin), 라파마이신 (rapamycin)과 같은 항종양 항생제 (예: 안스라실린 (anthracyline) 항생제);
· 항-PC-L1, 항-CTLA-4, 항-LAG-3, 항-4-1BB, 항-GITR, 항-CD27, 항-BLTA, 항-OX40, 항-VEGF, 항-TNF-α, 항-IL-2, 항-GpIIb/IIIa, 항-CD-52, 항-CD20, 항-RSV, 항-HER2/neu(erbB2), 항-TNF 수용체, 항-EFFR 항체, 단일클론 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, 아바스티누맙 (abastinumab), 베바시주맙 (avastin®), 압식시맙 (abciximab), 다클리주맙 (daclizumab), 젬투주맙 (gemtuzumab), 알렘투주맙 (alemtuzumab), 리툭시맙 (rituximab) (Mabthera®), 팔리비주맙 (palivizumab), 트라츄주맙 (trastuzumab))과 같은 항체 기반 약제.
· 엘로티닙 (erlotinib), 세툭시맙 (cetuximab), 제피티닙 (gefitinib)과 같은 EGFR 억제제
· 베바시주맙 (Avastin®)과 같은 항 혈관 신생제
· Sipuleucel-T (Provenge®)와 같은 항암 백신
일 실시양태에서, 화학요법제는 항-PD-1 항체 또는 항-PD-L1, 항-CTLA-4, 항-LAG-3, 항-4-1BB, 항-GITR, 항-CD27, 항-BLTA, 항-OX40, 항-VEGF, 항-TNF-α, 항-IL-2, 항-GpIIb/IIIa, 항-CD-52, 항-CD20, 항-RSV, 항-HER2/neu(erbB2), 항-TNF 수용체, 항-EFFR 항체이다. 일부 실시양태에서, 화학요법제는 면역관문억제제 또는 부자극 분자이다.
추가적 화학요법제는 하기로부터 선택될 수 있다: 13-시스-레티노산, 2-클로로디옥시아데노신 (2-Chlorodeoxyadenosine), 5-아자시티딘 (5-Azacitidine), 5-플루오로우라실 (5-Fluorouracil), 6-메르캅토퓨린 (6-Mercaptopurine), 6-티오구아닌 (6-Thioguanine), 아브락산 (Abraxane), Accutane®, 악티노마이신-D (Actinomycin-D), Adriamycin®, Adrucil®, Afinitor®, Agrylin®, Ala-Cort®, 알데스류킨 (Aldesleukin), 알렘투주맙 (Alemtuzumab), ALIMTA, 알리트레티노인 (Alitretinoin), Alkaban-AQ®, Alkeran®, 모든-트랜스레티노산 (All-transretinoic Acid), 알파 인터페론 (Alpha Interferon), 알트레타민 (Altretamine), 아메토프테린 (Amethopterin), 아미포스틴 (Amifostine), 아미노글루테티미드 (Aminoglutethimide), 아나그렐리드 (Anagrelide), Anandron®, 아나스트로졸 (Anastrozole), 아라비노실시토신 (Arabinosylcytosine), Aranesp®, Aredia®, Arimidex®, Aromasin®, Arranon®, 3산화 비소 (Arsenic Trioxide), 아스파라기나제 (Asparaginase), ATRA Avastin®, 아자시티딘 (Azacitidine), BCG, BCNU, 벤다뮤스틴 (Bendamustine), 베바시주맙 (Bevacizumab), 벡사로텐 (Bexarotene), BEXXAR®, 비칼루타마이드 (Bicalutamide), BiCNU, Blenoxane®, 플레오마이신 (Bleomycin), 보르테조밉 (Bortezomib), 부설판 (Busulfan), Busulfex®, 칼슘 류코보린 (Calcium Leucovorin), Campath®, Camptosar®, 캠프토테신-11 (Camptothecin-11), 카페티타빈 (Capecitabine), Carac™, 카보플라틴 (Carboplatin), 카무스틴 (Carmustine), Casodex®, CC-5013, CCI-779, CCNU, CDDP, CeeNU, Cerubidine®, 세툭시맙 (Cetuximab), 클로람부실 (Chlorambucil), 시스플라틴 (Cisplatin), 시트로보룸 인자 (Citrovorum Factor), 클라드리빈 (Cladribine), 코르티손 (Cortisone), Cosmegen®, CPT-11, 사이클로포스파미드 (Cyclophosphamide), Cytadren®, 시타라빈 (Cytarabine), Cytosar-U®, Cytoxan®, 다코젠 (Dacogen), 닥티노마이신 (Dactinomycin), 다르베포데틴 알파 (Darbepoetin Alfa), 다사티닙 (Dasatinib), 다우노마이신 (Daunomycin), 다우노루비신 (Daunorubicin), 다우노루비신 하이드로클로라이드 (Daunorubicin Hydrochloride), 다우노루비신 리포조멀 (Daunorubicin Liposomal), DaunoXome®, 데카드론 (Decadron), 데시타빈 (Decitabine), Delta-Cortef®, Deltasone®, 데니류킨 (Denileukin), 디프티톡스 (Diftitox), DepoCyt™, 덱사메타손 (Dexamethasone), 덱사메타손 아세테이트 (Dexamethasone Acetate), 덱사메타손 소듐 포스페이트 (Dexamethasone Sodium Phosphate), 덱사손 (Dexasone), 덱스라존 (Dexrazoxane), DHAD, DIC, 디오덱스 (Diodex), 도데타셀 (Docetaxel), Doxil®, 독소루비신 (Doxorubicin), 독소루비신 리포조멀 (Doxorubicin Liposomal), Droxia™, DTIC, DTIC-Dome®, Duralone®, Eligard™, Ellence™, Eloxatin™, Elspar®, Emcyt®, 에피루비신 (Epirubicin), 에포데틴 알파 (Epoetin Alfa), 얼비툭스 (Erbitux), 얼로티닙 (Erlotinib), 에르위니아 L-아스파라기나제 (Erwinia L-asparaginase), 에스트라뮤스틴 (Estramustine), Ethyol Etopophos®, 에포토사이드 (Etoposide), 에포토사이드 포스페이트 (Etoposide Phosphate), Eulexin®, 에베롤리무스 (Everolimus), Evista®, 엑스메스탄 (Exemestane), Faslodex®, Femara®, 필그라스팀 (Filgrastim), 플록스우리딘 (Floxuridine), Fludara®, ㅍ플루다라빈 (Fludarabine), Fluoroplex®, 플루오로우라실 (Fluorouracil), 플루옥시메스테론 (Fluoxymesterone), 플루타미드 (Flutamide), 폴린 산 (Folinic Acid), FUDR®, 풀베스트란트 (Fulvestrant), 제피티닙 (Gefitinib), 젬시타빈 (Gemcitabine), 젬투주맙 오조가미신 (Gemtuzumab ozogamicin), Gleevec™, Gliadel® Wafer, 고세셀린 (Goserelin), 그라눌로사이트-콜로니 자극인자 (Granulocyte - Colony Stimulating Factor), 그라눌로사이트 매크로파지 콜로니 자극인자 (Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor), Herceptin ®, 헥사트롤 (Hexadrol), Hexalen®, 헥사메틸멜라닌 (Hexamethylmelamine), HMM, Hycamtin®, Hydrea®, Hydrocort Acetate®, 하이드로코르티손 (Hydrocortisone), 하이드로코르티손 소듐 포스페이트 (Hydrocortisone Sodium Phosphate), 하이드로코르티손 소듐 석시네이트 (Hydrocortisone Sodium Succinate), 하이드로코르톤 포스페이트 (Hydrocortone Phosphate), 하이드록시우레아 (Hydroxyurea), 이브리투모맙 (Ibritumomab), 이브리투모맙 튜세탄 (Ibritumomab Tiuxetan), Idamycin®, 이다루비신 (Idarubicin), Ifex®, IFN-alpha, 이포스파미드 (Ifosfamide), IL-11, IL-2, 이마티닙 메실레이트 (Imatinib mesylate), 이미다졸 카르복사미드 (Imidazole Carboxamide), 인터페론 알파, 인터페론 알파-2b (PEG 결합), 인터루킨-2, 인터루킨-11, Intron A® (인터페론 알파-2b), Iressa®, 이리노테칸 (Irinotecan), 이소트레티오닌 (Isotretinoin), 익사베필론 (Ixabepilone), Ixempra™, 키드롤라제 (Kidrolase), Lanacort®, 라파티닙 (Lapatinib), L-아스파라기나제, LCR, 레날리도마이드 (Lenalidomide), 레트로졸 (Letrozole), 류코보린 (Leucovorin), 류케란 (Leukeran), Leukine™, 류프롤리드 (Leuprolide), 류포크리스틴 (Leurocristine), Leustatin™, Liposomal Ara-C, Liquid Pred®, 로뮤스틴 (Lomustine), L-PAM, L-사르콜리신 (L-Sarcolysin), Lupron®, Lupron Depot®, Matulane®, 막시덱스 (Maxidex), 메클로레타민 (Mechlorethamine), 메클로레타민 하이드로클로라이드 (Mechlorethamine Hydrochloride), Medralone®, Medrol®, Megace®, 메게스트롤 (Megestrol), 메게스트롤 아세테이트 (Megestrol Acetate), 멜팔란 (Melphalan), 메르캅토퓨린 (Mercaptopurine), 메스나 (Mesna), Mesnex™, 메토스렉세이트 (Methotrexate), 메토트렉세이트 소듐 (Methotrexate Sodium), 메틸프레드니솔론 (Methylprednisolone), Meticorten®, 미토마이신 (Mitomycin), 미토마이신-C, 미톡산트론 (Mitoxantrone), M-Prednisol®, MTC, MTX, Mustargen®, 머스틴 (Mustine), Mutamycin®, Myleran®, Mylocel™, Mylotarg®, Navelbine®, 넬라라빈 (Nelarabine), Neosar®, Neulasta™, Neumega®, Neupogen®, Nexavar®, Nilandron®, Nilutamide, Nipent®, 니트로젠 머스타드 (Nitrogen Mustard), Novaldex®, Novantrone®, 옥트레오타이드 (Octreotide), 옥트레오타이드 아세테이트 (Octreotide acetate), Oncospar®, Oncovin®, Ontak®, Onxal™, 오프레벨킨 (Oprevelkin), Orapred®, Orasone®, 옥살리플라틴 (Oxaliplatin), 파클리탁셀 (Paclitaxel), 파클리탁셀 단백질-결합 (Paclitaxel Protein-bound), 파미드로네이트 (Pamidronate), 파니투뮤맙 (Panitumumab), Panretin®, Paraplatin®, Pediapred®, PEG 인터페론, 페가스파가제 (Pegaspargase), 페그필그라스팀 (Pegfilgrastim), PEG-INTRON™, PEG-L-아스파라기나제, PEMETREXED, 펜토스타틴 (Pentostatin), 페닐알라닌 머스타드 (Phenylalanine Mustard), Platinol®, Platinol-AQ®, 프레드니솔론 (Prednisolone), 프레드니손 (Prednisone), Prelone®, 프로카바진 (Procarbazine), PROCRIT®, Proleukin®, Prolifeprospan 20 with Carmustine Implant Purinethol®, 랄록시펜 (Raloxifene), Revlimid®, Rheumatrex®, Rituxan®, 리툭시맙 (Rituximab), Roferon-A® (인터페론 알파-2a), Rubex®, 루비도마이신 하이드로클로라이드 (Rubidomycin hydrochloride), Sandostatin® Sandostatin LAR®, 사그라모스팀 (Sargramostim), Solu-Cortef®, Solu-Medrol®, 소라페닙 (Sorafenib), SPRYCEL™, STI-571, 스트렙토조신 (Streptozocin), SU11248, 서니티닙 (Sunitinib), Sutent®, 타목시펜 (Tamoxifen), Tarceva®, Targretin®, Taxol®, Taxotere®, Temodar®, 테모졸로마이드 (Temozolomide), 템시롤리머스 (Temsirolimus), 테니포사이드 (Teniposide), TESPA, 탈리도마이드 (Thalidomide), Thalomid®, TheraCys®, 티오구아닌 (Thioguanine), Thioguanine Tabloid®, 티노포스포아미드 (Thiophosphoamide), Thioplex®, 티오테파 (Thiotepa), TICE®, Toposar®, 토포테칸 (Topotecan), 토레미펜 (Toremifene), Torisel®, 토시투모맙 (Tositumomab), 트라스투주맙 (Trastuzumab), Treanda®, 트레티노인 (Tretinoin), Trexall™, Trisenox®, TSPA, TYKERB®, VCR, Vectibix™, Velban®, Velcade®, VePesid®, Vesanoid®, Viadur™, Vidaza®, 빈플라스틴 (Vinblastine), 빈플라스틴 설페이트 (Vinblastine Sulfate), Vincasar Pfs®, 빈크리스틴 (Vincristine), 비노렐빈 ( Vinorelbine), 비노렐빈 타트레이트 (Vinorelbine tartrate), VLB, VM-26, 보리노스타트 (Vorinostat), VP-16, Vumon®, Xeloda®, Zanosar®, Zevalin™, Zinecard®, Zoladex®, 졸레드론 산 (Zoledronic acid), 졸린자 (Zolinza), Zometa®.
투여 경로
본 발명의 양태에 따른 항체, 항원 결합 단편, 폴리펩타이드 및 기타 치료제, 의약품 및 약제학적 조성물은 비경구, 정맥 내, 동맥 내, 근육 내, 근육 내, 피하, 피부 내 종양 및 경구 투여를 위해 제제회될 수 있다. 항체, 항원 결합 단편, 폴리펩타이드 및 다른 치료제는 유체 또는 고체 형태로 제제화될 수 있다. 유체 제제는 인간 또는 동물 신체의 선택된 영역으로의 주사에 의한 투여를 위해 제제화 될 수 있다.
용법
항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드의 다중 투여량이 제공될 수 있다. 하나 이상의 또는 각각의 투여량은 다른 치료제의 동시 또는 순차 투여를 수반할 수 있다.
다중 투여량은 미리 정해진 시간 간격에 따라 분리될 수 있고, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 31일 또는 1, 2, 3, 4 또는 6개월 중 하나를 선택할 수 있다. 예를 들어, 7, 14, 21 또는 28일(±3일, 2일 또는 1일) 에 한 번씩 투여할 수 있다.
키트
본 발명의 일부 양태에서, 부품 키트가 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 키트는 소정량의 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 갖는 적어도 하나의 용기를 가질 수 있다. 키트는 의약품 또는 약제학적 조성물의 형태로 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 제공할 수 있으며, 특정 질병 또는 병증을 치료하기 위해 환자에게 투여하기 위한 지시와 함께 제공될 수 있다. 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드는 종양 또는 혈액으로의 주사 또는 주입에 적합하도록 제제화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 키트는 소정량의 다른 치료제 (예 : 항 감염제 또는 화학요법제)를 갖는 적어도 하나의 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 양태에서, 키트는 또한 두 가지 의약품 또는 약제학적 조성물이 특정 질병 또는 병증에 대한 병행 치료를 제공하도록 동시에 또는 개별적으로 투여될 수 있도록 제 2 의약품 또는 약제학적 조성물을 포함할 수 있다. 치료제는 또한 종양 또는 혈액으로의 주사 또는 주입에 적합하도록 제제화될 수 있다.
개체
치료될 개체는 동물 또는 인간일 수 있다. 개체는 바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간이다. 개체는 비인간 포유동물일 수 있지만, 보다 바람직하게는 인간이다. 개체는 수컷 또는 암컷일 수 있다. 개체는 환자일 수 있다. 개체는 치료를 필요로하는 질병 또는 병증으로 진단되었거나 그러한 질병이나 병증을 가진 것으로 의심될 수 있다.
단백질 발현
세포에서 본 발명에 따른 폴리펩타이드를 생산하기에 적합한 분자 생물학 기술은 문헌 (Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1989)에 기재된 바와 같이, 당업계에 공지된 것이다.
폴리펩타이드는 뉴클레오타이드 서열로부터 발현될 수 있다. 뉴클레오타이드 서열은 세포에 존재하는 벡터에 포함되거나, 세포의 게놈에 통합될 수 있다.
본원에서 사용되는 "벡터"는 외인성 유전 물질을 세포 내로 전달하기 위한 비히클로서 사용되는 올리고뉴클레오타이드 분자 (DNA 또는 RNA)이다. 벡터는 세포 내 유전 물질의 발현을 위한 발현 벡터일 수 있다. 이러한 벡터는 발현될 유전자 서열을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터 서열을 포함할 수 있다. 벡터는 종결 코돈 및 발현 인핸서를 포함할 수도 있다. 당업계에 공지된 임의의 적합한 벡터, 프로모터, 인핸서 및 종결 코돈을 사용하여 본 발명에 따른 벡터로부터 폴리펩타이드를 발현시킬 수 있다. 적합한 벡터는 플라스미드, 바이너리 벡터, 바이러스 벡터 및 인공 염색체 (예를 들어, 효모 인공 염색체)를 포함한다.
본 명세서에서, "작동가능하게 연결된"이란 용어는 선택된 뉴클레오타이드 서열 및 조절 뉴클레오타이드 서열 (예, 프로모터 및/또는 인핸서)이 조절 서열의 영향 또는 조절 하(이에 의해 발현 카세트를 형성)에서 뉴클레오타이드 서열의 발현을 위치시키는 방식으로 공유결합되는 상황을 포함할 수 있다. 따라서, 조절 서열이 뉴클레오타이드 서열의 전사에 영향일 미칠 수 있다면, 조절 서열은 선택된 뉴클레오타이드 서열에 작동가능하게 연결된다. 경우에 따라, 생성된 전사물은 원하는 단백질 또는 폴리펩타이드로 번역될 수 있다.
폴리펩타이드의 발현에 적합한 임의의 세포는 본 발명에 따른 펩타이드를 생산하는데 사용될 수 있다. 세포는 원핵 생물 또는 진핵 생물일 수 있다. 적합한 원핵 세포는 대장균을 포함한다. 진핵 세포의 예로는 효모 세포, 식물 세포, 곤충 세포 또는 포유류 세포를 포함한다. 일부 원핵 세포는 진핵 세포와 동일한 번역 후 변형을 허용하지 않기 때문에 어떤 경우에는 세포가 원핵 세포가 아니다. 또한, 매우 높은 발현 수준은 진핵 생물에서 가능하며 단백질은 적절한 태그를 사용함으로써 진핵 생물에서 정제하기가 더 쉬울 수 있다. 특정 플라스미드가 또한 매개체 내로 단백질의 분비를 향상시키는데 이용될 수 있다.
관심 폴리펩타이드를 생산하는 방법은 폴리펩타이드를 발현하도록 변형된 세포의 배양 또는 발효를 포함할 수 있다. 배양 또는 발효는 적절한 영양 공급원, 공기/산소 및/또는 성장 인자가 제공된 생물 반응기에서 수행될 수 있다. 세포로부터 배양 배지/발효액을 분리하고, 단백질 함량을 추출하고, 분비된 폴리펩타이드를 분리하기 위해 개별 단백질을 분리함으로써 분비된 단백질을 수집할 수 있다. 배양, 발효 및 분리 기술은 당업자에게 공지된 것이다.
생물 반응기는 세포가 배양될 수 있는 하나 이상의 용기를 포함한다. 생물 반응기에서의 배양은 반응기로의 연속적인 유동 및 반응기로부터 배양된 세포의 연속적인 유동으로 연속적으로 일어날 수 있다. 대안적으로, 배양은 배치로 발생할 수 있다. 생물 반응기는 배양되는 세포에 최적의 조건이 제공되도록 pH, 산소, 유입 및 유출 및 용기 내 교반과 같은 환경 조건을 모니터링하고 제어한다.
관심 폴리펩타이드를 발현하는 세포의 배양 후, 상기 폴리펩타이드는 바람직하게는 단리된다. 당업계에 공지된 세포 배양으로부터 폴리펩타이드/단백질을 단리하기 위한 임의의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 관심있는 폴리펩타이드/단백질을 배양물로부터 단리하기 위해, 관심있는 폴리펩타이드/단백질을 함유하는 배지로부터 배양된 세포를 먼저 분리할 필요가 있을 수 있다. 해당 폴리펩타이드/단백질이 세포로부터 분비되면, 세포는 원심 분리에 의해 단리된 폴리펩타이드/단백질을 함유하는 배양 배지로부터 분리할 수 있다. 해당 폴리펩타이드/단백질이 세포 내에서 수집되면 원심 분리 전에, 예를 들어 초음파 처리, 급속 동결-해동 또는 삼투 성 용해를 사용하여 세포를 파쇄할 필요가 있다. 원심 분리는 배양된 세포, 또는 배양된 세포의 세포 잔해를 포함하는 펠렛, 및 배양 배지 및 관심 폴리펩타이드/단백질을 함유하는 상등액을 생성할 수 있다.
이어서 다른 단백질 및 비 단백질 성분을 포함할 수 있는 상등액 또는 배양 배지로부터 목적하는 폴리펩타이드/단백질을 분리하는 것이 바람직할 수 있다. 상등액 또는 배양 배지로부터 폴리펩타이드/단백질 성분을 분리하는 일반적인 접근법은 침전에 의한 것이다. 다른 용해도의 폴리펩타이드/단백질은 암모늄 설페이트와 같은 침전제의 상이한 농도에서 침전된다. 예를 들어, 침전제의 농도가 낮으면 수용성 단백질이 추출된다. 따라서, 침전제의 농도를 증가시킴으로써, 상이한 용해도의 단백질을 구별할 수 있다. 이어서, 분리된 단백질로부터 황산 암모늄을 제거하기 위해 투석을 사용할 수 있다.
상이한 폴리펩타이드/단백질을 구별하기 위한 다른 방법, 예를 들어 이온 교환 크로마토그래피 및 크기 배제 크로마토그래피가 당업계에 공지되어있다. 이들은 침전의 대안으로 사용되거나 침전에 이후 수행될 수 있다.
일단 관심 폴리펩타이드/단백질이 배양물로부터 단리되면, 단백질을 농축하는 것이 필요할 수 있다. 한외여과 또는 동결 건조와 같은 목적 단백질을 농축시키는 다수의 방법이 당업계에 공지되어있다.
서열 동일성
아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열 동일성의 퍼센트를 결정하기 위한 정렬은, 예를 들어 ClustalW 1. 82, T-coffee 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공개적으로 입수 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 당업자에게 공지된 다양한 방법으로 성취될 수 있다. 이러한 소프트웨어를 사용할 때 기본 매개 변수 (예 : 갭 페널티 및 익스텐션 페널티를 위해 바람직하게 사용된다. ClustalW 1.82의 기본 매개 변수는 다음과 같다. Protein Gap Open Penalty = 10.0, Protein Gap Extension Penalty = 0.2, Protein matrix = Gonnet, Protein / DNA ENDGAP = -1, Protein / DNA GAPDIST = 4.
본 발명은 그러한 조합이 명확하게 허용 불가능하거나 명시적으로 회피되는 경우를 제외하고 기재된 양태 및 바람직한 특징의 조합을 포함한다.
본원에서 사용된 섹션 제목은 단지 조직적인 목적을 위한 것이며 기재된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
본 발명의 양태 및 실시양태는 첨부된 도면들을 참조하여 예로서 설명될 수 있다. 추가 양태 및 실시양태는 당업자에게 자명할 것이다. 본 명세서에 언급된 모든 문헌은, 참고문헌으로서 본원에 통합된다.
문맥상 다른 의미를 요구하지 않는 한, 후술하는 청구범위를 포함하여, 본 명세서 전반에 걸쳐, "포함한다" 및 "포함하는"과 같은 변형은 기재된 정수 또는 단계 또는 그룹의 정수 또는 단계를 제외하는 것이 아니라, 다른 정수 또는 단계 또는 정수 또는 단계의 그룹을 포함하는 것을 의미하는 것으로 이해되야 할 것이다.
명세서 및 첨부된 청구의 범위에서 사용된 바와 같이, 단수 형태는 문맥상 다르게 지시하지 않는 한 복수 대상을 포함한다는 것을 알아야한다. 범위는 본 명세서에서 "약" 하나의 특정값 및/또는 으로부터 "약" 다른 특정값까지 표현될 수 있다. 이러한 범위가 표현될 때, 다른 실시양태는 하나의 특정값 및/또는 다른 특정값을 포함한다. 유사하게, 값이 근사값으로 표현될 때, 선행하는 "약"의 사용에 의해, 특정값이 또 다른 실시양태를 형성한다는 것이 이해될 것이다.
도 1은 항-TIM-3 항체 1B9, 1H9, 1H10, 2C7, 2F4, 2G6, 1D9, 1F4, 2C8 (인간 IgG4)에 대한 경쇄 가변 도메인 서열이다. CDR은 밑줄을 그어, 따로 나타내었다.
도 2는 항-TIM-3 항체 클론 1B9, 1H9, 1H10, 2C7, 2F4, 2G6, 1D9, 1F4, 2C8 (인간 IgG4)에 대한 중쇄 가변 도메인 서열이다. CDR은 밑줄을 그어, 따로 나타내었다.
도 3은 항-TIM-3 항체 클론 1B9, 1H9, 1H10, 2C7, 2F4, 2G6, 1D9, 1F4, 2C8에 대한 경쇄 및 중쇄 CDR 서열을 나타내는 표이다.
도 4는 항-TIM-3 항체 클론 1B9, 1H9, 1H10, 2C7, 2F4, 2G6, 1D9, 1F4, 2C8 (인간 IgG4)에 대한 경쇄 및 중쇄 가변 서열의 뉴클레오타이드 및 코딩된 아미노산 서열이다.
도 5는 클론 1B9, 1H9, 1H10, 2C7, 2F4, 2G6, 1D9, 1F4, 2C8의 비율을 나타내는 표이다.
도 6은 정제된 T 세포 및 급성 골수성 백혈병 (AML) 세포 상의 항-TIM-3 클론 2C7-항 CD3 항체의 영향을 나타내는 차트이다. AML 세포는 정제된 T 세포와 1:1비율로 혼합하고, 상기 항체를 다양한 농도로 첨가하였다. 24시간 배양한 후, 세포 용해를 측정하였다.
도 7은 AML 생검 (즉, AML 줄기세포) 중의 CD34+ 세포 상의 항-TIM-3 클론 2C7-항 CD3 항체의 CD34 특이적 사멸 효과를 나타내는 차트이다. 선택 이후, CD34+ 세포 (>99% CD34+ 정제 시료)를 정제된 T 세포와 1:1비율로 혼합하고, 상기 항체를 다양한 농도로 첨가하였다. 24시간 배양한 후, 세포 용해를 측정하였다.
도 8은 탠덤 단일 사슬 이중 특이적 항체 형태의 모식도이다.
실시예
항-인간 TIM-3 항체의 단리
3-라운드 바이오-패닝 (bio-panning) 공정에서 시험관 내 선택을 통해 인간 항체 파지 디스플레이 라이브러리로부터 항-TIM-3 항체를 분리하였다.
기본적으로, 스트렙타비딘-자성 비드를 비오틴화된 인간 TIM-3로 코팅하고 자기 정렬을 이용하여 항-TIM-3 특이적 파지를 제거하는데 사용하였다. 잠재적인 항-비오틴 항체를 없애기 위한 몇 단계가 선택 공정에 추가되었다.
HB2151 세포 내에서 소규모로 유도한 후, Fab 항체를 ELISA로 스크리닝하였다. 요약하면, ELISA 플레이트를 인간 Tim-3으로 코팅하고, 카제인 용액으로 차단시켰다. PBS Tween-20 중에서 광범위하게 세척한 후, 유도 플레이트로부터의 상등액을 PBS 내 7% 우유가 존재하는 ELISA 플레이트로 옮겼다. 90분 후, 실온에서 교반 및 광범위한 세척하에 HRP에 결합한 염소 항-인간 Fab 항체를 첨가하였다. 1시간 후, 플레이트를 세척하고 TMB 기질을 첨가하였다. 반응을 1 M HCl로 중단시키고, 광학 밀도를 670nm에서의 기준으로 450nm에서 측정하였다. > 0.1 흡광도을 나타내는 항체를 양성으로 선택하였다. 첫 번째 클론 형성능(clonality) 스크리닝은 DNA 지문채취법 의해 수행되었고; 이후 클론 형성능은 시퀀싱으로 확인하였다.
친화도 성숙(Affinity maturation)
시험관 내 TIM-3을 중화시키는데 있어서 우수한 프로파일을 나타내는 하나의 클론이 추가로 조작되었다. 그 서열을 생식 세포-유사 골격으로 되돌린 후, 이 항체는 CDR 엔지니어링을 통해 친화도 성숙을 거쳤다. 특정 친화도-성숙 항-TIM-3 항체의 선택은 파지 디스플레이에 의해 실시하였고, ELISA으로 스크리닝하였다.
ELISA-양성 클론 중 몇몇 리드를 선택하기 위해, TIM-3 결합/해리 프로파일을 표면 플라스몬 공명 (Surface Plasmon Resonance, SPR)으로 분석하였다. 요약하면, Fc에 결합된 인간 TIM-3를 센서 칩 상에 고정시킨 다음, 항체를 칩 상에 흐르게 함으로서 적용시켰다. 결합 및 해리 속도는 ProteOn XPR36 생체 분석기 (Biorad)를 사용하여 기록하였다. 9개의 클론 (1B9, 1H9, 1H10, 2C7, 2F4, 2G6, 1D9, 1F4, 2C8)이 TIM-3에 대한 신속/강한 연관성과 단백질로부터의 느린 해리를 토대로 선택되었다(도 5).
환자 유래 급성 골수 백혈병 세포의 이중특이적 항-TIM-3, 항-CD3 항체에 의한 특이적 사멸
항-TIM-3 클론 2C7을 사용하여 한쪽 면 (CD3에 특이적)의 T 세포 및 다른 면의 표적 TIM-3과 결합할 수 있는 이중 특이적 항체를 제조하였다. 이중 특이적 항체는 융합 단백질로서 2개의 단일 사슬 가변 단편 (scFv)을 포함한다. scFv 중 하나는 클론 2C7 (즉, 서열번호 4 및 24)에 대한 VH 및 VL 서열을 포함하고, 다른 scFv는 항-CD3 항체 클론에 대한 VH 및 VL 서열을 포함한다.
탠덤 단일 사슬 이중 특이적 항체의 모식은 도 8에 나타냈다.
항-CD3 (항-TIM-3 클론 2C7-항 CD3 이중 특이적 항체)을 갖는 탠덤 단일-사슬 이중 특이적 형태의, 항-TIM-3 클론 2C7을 AML 환자의 생검에서 얻은 급성 골수성 백혈구 (AML) 세포를 사멸시키는 능력을 평가하기 위해 시험하였다.
요약하면, 정제된 T 세포를 화학요법 치료 3 라인에 불응성인 환자로부터 수득한 AML 세포와 1 : 1의 비율로 혼합하였다. 이중 특이적 항체를 다양한 농도로 첨가하고, 상기 혼합물을 24시간 동안 배양하였다. 배양 후, AML 세포의 세포 용해를 측정하였다.
그 결과를 도 6에 나타내었다. 항-TIM-3 클론 2C7-항 CD3 이중 특이적 항체는 생체 외에서 화학요법-내성 환자로부터 AML 세포를 사멸시키는데 있어서 강력다는 것이 입증되었다.
그런 다음, 클론 2C7-항 CD3 이중 특이적 항체를 AML 줄기세포, 즉 높은 수준의 CD34를 발현하는 AML 생검 내 세포 상에서 시험하였다. 선별 후, CD34+ 세포 (> 99% CD34+ 순도의 시료)를 정제된 T 세포와 1 : 1 비율로 혼합하고, 상기 항체를 다양한 농도로 첨가하였다. 24시간 배양 후, 세포 용해를 측정하였다.
그 결과를 도 7에 나타내었다. 항-TIM-3 클론 2C7-항 CD3 이중 특이적 항체는 중간 내지 고농도에서, 생체 외 AML 줄기세포를 사멸시키는 능력을 나타내었다.
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Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Tyr Val Ala Gly Ser Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 26 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 2G6 <400> 26 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Tyr Val Ala Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 27 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1D9 <400> 27 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Tyr Tyr Ala Gly Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 28 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1F4 <400> 28 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Tyr Val Ala Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 29 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 2C8 <400> 29 Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Tyr Val Ala Gly Ser Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 30 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR1 <400> 30 Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr Tyr Trp Ser 1 5 10 <210> 31 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR2 <400> 31 Glu Ile Asn His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 32 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR3 <400> 32 Gly Tyr Val Ala Gly Ser Asp Ala 1 5 <210> 33 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR3 <400> 33 Gly Tyr Val Ala Gly Phe Asp Asp 1 5 <210> 34 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR3 <400> 34 Gly Tyr Val Ala Gly Phe Asp Ser 1 5 <210> 35 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR3 <400> 35 Gly Tyr Val Ala Gly Tyr Asp Tyr 1 5 <210> 36 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR3 <400> 36 Gly Tyr Val Ala Gly Ser Asp Ala 1 5 <210> 37 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR3 <400> 37 Gly Tyr Val Ala Gly Phe Asp Ser 1 5 <210> 38 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR3 <400> 38 Gly Tyr Tyr Ala Gly Asp Asp Tyr 1 5 <210> 39 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR3 <400> 39 Gly Tyr Val Ala Gly Tyr Asp Tyr 1 5 <210> 40 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR3 <400> 40 Gly Tyr Val Ala Gly Ser Asp Ala 1 5 <210> 41 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: LC-CDR3 <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> Xaa = Glu or Asp <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> Xaa = Ala or Ser <220> <221> VARIANT <222> (5)..(5) <223> Xaa = Tyr, Ser or Ala <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> Xaa = Tyr, Ala, Asp or Ser <220> <221> VARIANT <222> (7)..(7) <223> Xaa = Val, Asp, Tyr, Leu or Ala <220> <221> VARIANT <222> (8)..(8) <223> Xaa = Ala or Ser <220> <221> VARIANT <222> (9)..(9) <223> Xaa = Ala or Ser <220> <221> VARIANT <222> (11)..(11) <223> Xaa = Tyr, Val or Ser <400> 41 Xaa Xaa Trp Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa 1 5 10 <210> 42 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR3 <220> <221> VARIANT <222> (3)..(3) <223> Xaa = Val or Tyr <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> Xaa = Ser, Phe, Tyr or Asp <220> <221> VARIANT <222> (8)..(8) <223> Xaa = Ala, Asp, Ser or Tyr <400> 42 Gly Tyr Xaa Ala Gly Xaa Asp Xaa 1 5 <210> 43 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of light chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1B9 <400> 43 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa agtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat ggcaataatt ggcgaccctc agggattcct 180 gaccgcttct ctggctccaa gtctggcacc tcagccaccc tgggcatcac cggacttcag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgaa gcttgggatt attatgttgc tgctgggtat 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330 <210> 44 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of light chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1H9 <400> 44 cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa agtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat ggcaataatt ggcgaccctc agggattcct 180 gaccgcttct ctggctccaa gtctggcacc tcagccaccc tgggcatcac cggacttcag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgat tcttgggatt ctgctgatgc ttctggggtt 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330 <210> 45 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of light chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1H10 <400> 45 cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa agtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat ggcaataatt ggcgaccctc agggattcct 180 gaccgcttct ctggctccaa gtctggcacc tcagccaccc tgggcatcac cggacttcag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgat tcttgggatt atgattatgc tgctggggtt 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330 <210> 46 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of light chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 2C7 <400> 46 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa agtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat ggcaataatt ggcgaccctc agggattcct 180 gaccgcttct ctggctccaa gtctggcacc tcagccaccc tgggcatcac cggacttcag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgat tcttgggatt cttatcttgc tgctggggtt 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330 <210> 47 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of light chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 2F4 <400> 47 cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa agtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat ggcaataatt ggcgaccctc agggattcct 180 gaccgcttct ctggctccaa gtctggcacc tcagccaccc tgggcatcac cggacttcag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgaa tcttgggatt atgattatgc ttctggggtt 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330 <210> 48 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of light chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 2G6 <400> 48 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa agtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat ggcaataatt ggcgaccctc agggattcct 180 gaccgcttct ctggctccaa gtctggcacc tcagccaccc tgggcatcac cggacttcag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgat tcttgggatt cttctgattc ttctggggtt 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330 <210> 49 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of light chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1D9 <400> 49 cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa agtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat ggcaataatt ggcgaccctc agggattcct 180 gaccgcttct ctggctccaa gtctggcacc tcagccaccc tgggcatcac cggacttcag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgaa gcttgggatt ctgcttatgc tgctgggtct 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330 <210> 50 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of light chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1F4 <400> 50 cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa agtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat ggcaataatt ggcgaccctc agggattcct 180 gaccgcttct ctggctccaa gtctggcacc tcagccaccc tgggcatcac cggacttcag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgat tcttgggatg ctgctctttc tgctggggtt 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330 <210> 51 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of light chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 2C8 <400> 51 cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa agtcaccatc 60 tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcagctc 120 ccaggaacag cccccaaact cctcatttat ggcaataatt ggcgaccctc agggattcct 180 gaccgcttct ctggctccaa gtctggcacc tcagccaccc tgggcatcac cggacttcag 240 actggggacg aggccgatta ttactgcgaa tcttgggatg ctgctgctgc tgctgggtat 300 ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 330 <210> 52 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1B9 <400> 52 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccttg 240 aaactgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggctatgtt 300 gctggctctg atgcttgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcaagc 348 <210> 53 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1H9 <400> 53 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccttg 240 aaactgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggctatgtt 300 gctggctttg atgattgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcaagc 348 <210> 54 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1H10 <400> 54 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccttg 240 aaactgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggctatgtt 300 gctggctttg attcttgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcaagc 348 <210> 55 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 2C7 <400> 55 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccttg 240 aaactgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggctatgtt 300 gctggctatg attattgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcaagc 348 <210> 56 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 2F4 <400> 56 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccttg 240 aaactgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggctatgtt 300 gctggctctg atgcttgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcaagc 348 <210> 57 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 2G6 <400> 57 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccttg 240 aaactgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggctatgtt 300 gctggctttg attcttgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcaagc 348 <210> 58 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1D9 <400> 58 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccttg 240 aaactgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggctattat 300 gctggcgatg attattgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcaagc 348 <210> 59 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 1F4 <400> 59 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccttg 240 aaactgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggctatgtt 300 gctggctatg attattgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcaagc 348 <210> 60 <211> 348 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: Nucleotide sequence of heavy chain variable domain sequence for anti-TIM-3 antibody clone 2C8 <400> 60 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccttg 240 aaactgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aggctatgtt 300 gctggctctg atgcttgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcaagc 348 <210> 61 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Synthetic sequence: HC-CDR1 <400> 61 Gly Tyr Tyr Trp Ser 1 5

Claims (57)

  1. TIM-3에 결합할 수 있는, 임의로 단리된, 항체 또는 항원 결합 단편으로서,아미노산 서열 i) 내지 vi):
    i) LC-CDR1 : SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
    ii) LC-CDR2 : GNNWRPS (서열번호 11)
    iii) LC-CDR3 : X1X2WDX3X4X5X6X7GX8 (서열번호 41)
    iv) HC-CDR1 : GYYWS (서열번호 61) 또는 GGSFSGYYWS (서열번호 30)
    v) HC-CDR2 : EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
    vi) HC-CDR3 : GYZ1AGZ2DZ3 (서열번호 42)
    또는 상기 서열 i) 내지 vi) 중 하나 이상의 서열에서 1개 또는 2개 또는 3개의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 이의 변이체를 갖고, 여기서 X1 = E 또는 D이고, X2 = A 또는 S이고, X3 = Y, S 또는 A이고, X4 = Y, A, D 또는 S이고, X5 = V, D, Y, L 또는 A이고, X6 = A 또는 S이고, X7 = A 또는 S이고, X8 = Y, V 또는 S이고, Z1 = V 또는 Y이고, Z2 = S, F, Y 또는 D이고, Z3 = A, D, S 또는 Y인, 항체 또는 항원 결합 단편.
  2. 제1항에 있어서, LC-CDR3이 EAWDYYVAAGY (서열번호 12), DSWDSADASGV (서열번호 13), DSWDYDYAAGV (서열번호 14), DSWDSYLAAGV (서열번호 15), ESWDYDYASGV (서열번호 16), DSWDSSDSSGV (서열번호 17), EAWDSAYAAGS (서열번호 18) DSWDAALSAGV (서열번호 19) 또는 ESWDAAAAAGY (서열번호 20) 중의 하나인 것인, 항체 또는 항원 결합 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, HC-CDR3이 GYVAGSDA (서열번호 32), GYVAGFDD (서열번호 33), GYVAGFDS (서열번호 34), GYVAGYDY (서열번호 35), GYVAGSDA (서열번호 36), GYVAGFDS (서열번호 37), GYYAGDDY (서열번호 38), GYVAGYDY (서열번호 39), 또는 GYVAGSDA (서열번호 40) 중의 하나인 것인, 항체 또는 항원 결합 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
    LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
    LC-CDR3: EAWDYYVAAGY (서열번호 12)
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
    LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
    LC-CDR3: DSWDSADASGV (서열번호 13)
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
    LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
    LC-CDR3: DSWDYDYAAGV (서열번호 14)
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
    LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
    LC-CDR3: DSWDSYLAAGV (서열번호 15)
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
    LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
    LC-CDR3: ESWDYDYASGV (서열번호 16)
  9. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
    LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
    LC-CDR3: DSWDSSDSSGV (서열번호 17)
  10. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
    LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
    LC-CDR3: EAWDSAYAAGS (서열번호 18)
  11. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
    LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
    LC-CDR3: DSWDAALSAGV (서열번호 19)
  12. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 경쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    LC-CDR1: SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
    LC-CDR2: GNNWRPS (서열번호 11)
    LC-CDR3: ESWDAAAAAGY (서열번호 20)
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    HC-CDR1: GYYWS (서열번호 61), 또는
    GGSFSGYYWS (서열번호 30)
    HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
    HC-CDR3: GYVAGSDA (서열번호 32)
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    HC-CDR1: GYYWS (서열번호 61), 또는
    GGSFSGYYWS (서열번호 30)
    HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
    HC-CDR3: GYVAGFDD (서열번호 33)
  15. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    HC-CDR1: GYYWS (서열번호 61), 또는
    GGSFSGYYWS (서열번호 30)
    HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
    HC-CDR3: GYVAGFDS (서열번호 34)
  16. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    HC-CDR1: GYYWS (서열번호 61), 또는
    GGSFSGYYWS (서열번호 30)
    HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
    HC-CDR3: GYVAGYDY (서열번호 35)
  17. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    HC-CDR1: GYYWS (서열번호 61), 또는
    GGSFSGYYWS (서열번호 30)
    HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
    HC-CDR3: GYVAGSDA (서열번호 36)
  18. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    HC-CDR1: GYYWS (서열번호 61), 또는
    GGSFSGYYWS (서열번호 30)
    HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
    HC-CDR3: GYVAGFDS (서열번호 37)
  19. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    HC-CDR1: GYYWS (서열번호 61), 또는
    GGSFSGYYWS (서열번호 30)
    HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
    HC-CDR3: GYYAGDDY (서열번호 38)
  20. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    HC-CDR1: GYYWS (서열번호 61), 또는
    GGSFSGYYWS (서열번호 30)
    HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
    HC-CDR3: GYVAGYDY (서열번호 39)
  21. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 CDR들을 포함하는 적어도 하나의 중쇄 가변 영역을 갖는, 항체 또는 항원 결합 단편:
    HC-CDR1: GYYWS (서열번호 61), 또는
    GGSFSGYYWS (서열번호 30)
    HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
    HC-CDR3: GYVAGSDA (서열번호 40)
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 세포독성인 것인, 항체 또는 항원 결합 단편.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 T-세포 고갈 또는 T-세포 아네르기를 나타내는 T-세포에서 T-세포 기능을 회복시키는데 유효한 것인, 항체 또는 항원 결합 단편.
  24. TIM-3에 결합된 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는, 임의의 단리된, 시험관 내 복합체.
  25. 하기 CDR들을 포함하는 단리된 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드:
    LC-CDR1 : SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10)
    LC-CDR2 : GNNWRPS (서열번호 11)
    LC-CDR3 : X1X2WDX3X4X5X6X7GX8 (서열번호 41)
    여기서, X1 = E 또는 D이고, X2 = A 또는 S이고, X3 = Y, S 또는 A이고, X4 = Y, A, D 또는 S이고, X5 = V, D, Y, L 또는 A이고, X6 = A 또는 S이고, X7 = A 또는 S이고, X8 = Y, V 또는 S이다.
  26. 제25항에 있어서, LC-CDR3이 EAWDYYVAAGY (서열번호 12), DSWDSADASGV (서열번호 13), DSWDYDYAAGV (서열번호 14), DSWDSYLAAGV (서열번호 15), ESWDYDYASGV (서열번호 16), DSWDSSDSSGV (서열번호 17), EAWDSAYAAGS (서열번호 18) DSWDAALSAGV (서열번호 19) 또는 ESWDAAAAAGY (서열번호 20) 중의 하나인 것인, 단리된 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드.
  27. 하기 CDR들을 포함하는 단리된 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드:
    HC-CDR1: GYYWS (서열번호 61), 또는
    GGSFSGYYWS (서열번호 30)
    HC-CDR2: EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31)
    HC-CDR3: GYZ1AGZ2DZ3 (서열번호 42)
    여기서, Z1 = V 또는 Y이고, Z2 = S, F, Y 또는 D이고, Z3 = A, D, S 또는 Y이다.
  28. 제27항에 있어서, HC-CDR3이 GYVAGSDA (서열번호 32), GYVAGFDD (서열번호 33), GYVAGFDS (서열번호 34), GYVAGYDY (서열번호 35), GYVAGSDA (서열번호 36), GYVAGFDS (서열번호 37), GYYAGDDY (서열번호 38), GYVAGYDY (서열번호 39), 또는 GYVAGSDA (서열번호 40) 중의 하나인 것인, 단리된 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드.
  29. 제27항 또는 제28항에 따른 중쇄 가변 영역 폴리펩타이드와 조합된 제25항 또는 제26항의 단리된 경쇄 가변 영역 폴리펩타이드.
  30. TIM-3에 결합할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편으로서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함하고,
    중쇄는 GYYWS (서열번호 61) 또는 GGSFSGYYWS (서열번호 30) EINHSGSTNYNPSLKS (서열번호 31), GYZ1AGZ2DZ3 (서열번호 42)에 대해 각각 적어도 85%의 전체 서열 동일성을 갖는 HC-CDR1, HC-CDR2, HC-CDR3을 포함하고, 여기서 Z1 = V 또는 Y이고, Z2 = S, F, Y 또는 D이고, Z3 = A, D, S 또는 Y이고,
    경쇄는 SGSSSNIGNNYVS (서열번호 10), GNNWRPS (서열번호 11), X1X2WDX3X4X5X6X7GX8 (서열번호 41)에 대해 각각 적어도 85%의 전체 서열 동일성을 갖는 LC-CDR1, LC-CDR2, LC-CDR3을 포함하고, 여기서 X1 = E 또는 D이고, X2 = A 또는 S이고, X3 = Y, S 또는 A이고, X4 = Y, A, D 또는 S이고, X5 = V, D, Y, L 또는 A이고, X6 = A 또는 S이고, X7 = A 또는 S이고, X8 = Y, V 또는 S인, 항체 또는 항원 결합 단편.
  31. TIM-3에 결합할 수 있는, 임의로 단리된, 항체 또는 항원 결합 단편으로서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 갖고,
    중쇄 서열은 서열번호 21 내지 29 중의 하나의 중쇄 서열과 적어도 85%의 서열 동일성을 갖고 (도 2), 및
    경쇄 서열은 서열번호 1 내지 9 중의 하나의 경쇄 서열과 적어도 85%의 서열 동일성을 갖는 (도 1), 항체 또는 항원 결합 단편.
  32. TIM-3에 결합할 수 있는, 임의로 단리된, 항체 또는 항원 결합 단편으로서, (i) 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 따른 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드, 및 (ii) TIM-3 이외의 표적 단백질에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인을 포함하는 이중 특이적 항체 또는 이중 특이적 항원 결합 단편인, 항체 또는 항원 결합 단편.
  33. 제32항에 있어서, TIM-3 이외의 표적 단백질에 결합할 수 있는 항원 결합 도메인이 CD3 또는 CD3 폴리펩타이드에 결합할 수 있는 것인, 항체 또는 항원 결합 단편.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드 및 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물.
  35. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 인코딩하는 단리된 핵산.
  36. 제35항의 핵산을 포함하는 벡터.
  37. 제36항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  38. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 제조하는 방법으로서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 인코딩하는 벡터의 발현에 적합한 조건하에, 제37항의 숙주 세포를 배양하는 단계 및 상기 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 회수하는 단계를 포함하는 방법.
  39. 치료 또는 의학적 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드.
  40. 암 또는 T-세포 기능이상 장애의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드.
  41. 암의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드.
  42. 감염성 질병의 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드.
  43. 암 또는 T-세포 기능이상 장애의 치료에 사용하기 위한 의약품의 제조에 있어서 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드의 용도.
  44. 암의 치료에 사용하기 위한 의약품의 제조에 있어서 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드의 용도.
  45. 감염성 질병의 치료에 사용하기 위한 의약품의 제조에 있어서 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드의 용도.
  46. TIM-3을 발현하는 세포에 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는, TIM-3을 발현하는 세포를 사멸시키는 시험관 내 또는 생체 내 방법.
  47. 기능이상의 T-세포에 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는, T-세포 기능을 향상시키는 시험관 내 또는 생체 내 방법.
  48. 암 또는 T-세포 기능이상 장애를 앓고 있는 환자에게 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는, 암 또는 T-세포 기능이상 장애를 치료하는 방법.
  49. 암을 앓고 있는 환자에게 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는, 암을 치료하는 방법.
  50. 감염성 질병을 앓고 있는 환자에게 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드를 투여하는 단계를 포함하는, 감염성 질병을 치료하는 방법.
  51. TIM-3을 포함하거나 포함한다고 의심되는 시료를 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계 및 항체 또는 항원 결합 단편과 TIM-3의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  52. 개체의 질병 또는 병증을 진단하는 방법으로서, 개체로부터의 시료를 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편과 시험관 내 접촉시키는 단계 및 항체 또는 항원 결합 단편과 TIM-3의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  53. TIM-3 신호 조절제로 치료하기 위한 개체를 선택 또는 계층화하는 방법으로서, 개체로부터의 시료를 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편과 시험관 내 접촉시키는 단계 및 항체 또는 항원 결합 단편과 TIM-3의 복합체 형성을 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  54. 시험관 내 TIM-3의 검출을 위한 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편의 용도.
  55. 시험관 내 진단제로서 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편의 용도.
  56. T-세포가 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드와 시험관 내 또는 생체 외에서 접촉되는, T 세포 집단을 증대시키는 방법.
  57. T-세포 기능이상 장애를 갖는 개체를 치료하는 방법으로서, 개체의 혈액 시료로부터 수득한 T 세포를 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 따른 항체, 항원 결합 단편 또는 폴리펩타이드의 존재하에 배양하여 T 세포 집단을 증대시키는 단계, 증대된 T 세포를 수집하는 단계, 치료를 필요로 하는 개체에게 증대된 T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
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