KR20170003923A

KR20170003923A - 다중 치환된 피리딘 화합물, 그 제조 방법, 용도 및 약학적 조성물

Info

Publication number: KR20170003923A
Application number: KR1020167030986A
Authority: KR
Inventors: 총친 이; 형 쑤; 징 타오; 송웬 린; 팡빈 한
Original assignee: 피킹 유니버시티 파운더 그룹 컴퍼니, 리미티드; 피케이유 헬쓰케어 인더스트리 그룹 컴퍼니, 리미티드; 피케이유케어 파마스티컬 알앤디 센터
Priority date: 2014-04-08
Filing date: 2014-12-30
Publication date: 2017-01-10
Also published as: CN104974132A; US20170029404A1; CN106866623A; EP3130588B1; WO2015154535A1; EP3130588A1; EP3130588A4; KR101821516B1; JP2017510652A; US9902709B2; CN104974132B; JP6294561B2

Abstract

본 발명은 일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물, 그 제조 방법, 용도 및 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물은 뛰어난 항종양 효과를 가지고, 동시에 다양한 세포 키나제를 저해하고, 상당히 뛰어난 약동학적 특성을 가지며, 경구 및 정맥주사 투여에 매우 적합하다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 종양 및 암을 치료하는데 유용될 수 있다.

Description

다중 치환된 피리딘 화합물, 그 제조 방법, 용도 및 약학적 조성물{Polysubstituted pyridine compound, preparation method, use and pharmaceutical composition}

본 발명은 약화학의 분야에 관한 것으로, 특히 다중 치환된 피리딘 화합물, 그 제조 방법, 용도 및 약학적 조성물에 관한 것이다.

생명과학의 분야에서 항암제(antitumor drug)의 연구 개발은 가장 도전적이고 중요한 것이다. 최근, 분자생물학의 급속한 발전과 암의 출현, 진전 및 메카니즘에 관한 보다 깊은 이해에 따라, 악성 종양 세포의 신호 전달, 세포 주기의 조절, 아포토시스의 유도(induction of apoptosis), 혈관 생성, 및 세포와 세포외 기질(extracellular matrix) 사이의 상호작용 등의 여러 가지의 기본적인 프로세스가 점진적으로 해명되고 있다. 따라서, 특정 목표물에 선택적으로 영향을 미치는, 고효율성, 저독성 및 강력한 특이성을 갖는 신규한 항암제를 찾는 것은 약학 연구 개발의 중요한 분야들 중 하나이다. 따라서, 그것은 새로운 항암제 분야 - 분자 표적치료제(molecular targeted drugs)로 이어지고 있다.

분자 표적치료제는 세포의 암화(cell cancerization)에 수반되는 수용체(receptors) 또는 주요 전달 효소(key enzymes in transduction)에 관련되며 분자 레벨의 종양 성장을 억제하는 한 부류의 약제(drug)를 말한다. 이 분자 표적치료제는 종양 세포의 특징적인 분자들을 표적으로 하고, 정상세포에 대한 독성과 부작용을 저감하면서 항암 역할을 하는 것이다.

양성 조절자(positive regulators)와 음성 조절자(negative regulators) 사이의 균형은 종양의 성장과 전이를 촉진시키는, 종양의 혈관생성을 제어하고, 이에 의하여 혈관생성 억제제의 개발이 종양 연구에 있어서의 핫스팟(hotspots)의 하나가 되고 있다. VEGFR은 중요한 티로신 키나제(tyrosine kinase)의 한 부류이다. 많은 연구들은, VEGFR의 신호 전달 경로의 기능장애(dysfunction)가 종양의 출현, 성장 및 전이에 있어서 중요한 역할을 한다는 것을 보여주었다. VEGFR은 티로신 키나제 수용체에 속하는 VEGFR21(Flt21), VEGFR22(KDR/Flt21) 및 VEGFR23(Flt24)를 주로 포함한다. VEGF는 내피세포의 2개의 막관통 수용체(trans-membrane receptors)에 결합됨으로써 생물학적 기능을 발휘한다.

세포 분화에 있어서의 신호 전달 인자는 많은 단백질 키나제 패밀리(protein kinase families)를 포함한다. 세포 신호 전달 동안에, 단백질 티로신 키나제는 전달 바이패스(by-pass)를 활성화시키는 인산화(phosphorylated)를 위해 인산기를 ATP로부터 많은 주요 단백질의 티로신 잔기(殘基)로 전달하는 것을 촉진시켜, 세포 성장, 증식 및 분화에 영향을 미칠 수 있으므로 매우 중요하다. 많은 종양 세포에 있어서, 티로신 키나제 활성은 비정상으로 상승된다. 50% 이상의 암유전자(oncogenes) 및 그 생성물은 단백질 티로신 키나제 활성을 가지며 그 이상 발현(abnormal expression)은 종양의 출현으로 이어질 수 있다. 게다가, 효소의 이상 발현은 종양 전이, 종양 혈관생성, 및 화학요법에 대한 종양 내성에 관련되기도 한다. 비정상 신호 전달을 차단하거나 변경할 수 있는 선택적인 단백질 키나제에 관한 연구는 약제 개발을 위한 유망한 경로인 것으로 생각된다. 현재, 단백질 키나제의 상이한 ATP-결합 부위(binding sites)에 대항하는 일부 단백질 키나제 저해제(kinase inhibitor)와 소분자 치료제(small-molecule therapeutic agent)가 발견되어 티로신 키나제 저해제와 같이 임상 연구 단계에 들어갔다.

바이엘 제약회사에 의해 개발된 소라페닙(Sorafenib, 상표명: Nexavar)는 2005년 12월에 미국 식품의약품국(FDA)에 의해 진행성 신장암(advanced renal carcinoma)의 치료를 위한 1차 약제로서 승인된 다표적 약제(multi-targeted drug)이며, 전세계의 클리닉 치료에 있어서 표적 치료를 승인한 1차 다표적 약제이다. 중국 특허출원 문헌 CN1341098A는 소라페닙의 화학구조를 개시하고 있으며, 그 소라페닙의 화학구조는 다음과 같다:

본 발명 이전에, 본 발명자가 제출한 또 다른 중국 특허출원 및 특허출원 문헌 CN102532113A(출원번호: 201110435847.9)는 하기 일반식의 화합물을 개시하고 있다.

기존의 항암제는 인간과 그 밖의 포유동물에게 있어서의 종양 질병의 치료 요건을 여전히 충족시키지 못하고 클리닉 치료에 있어서 시판되고 있는 항암제의 치료 효과가 원하는 레벨에 여전히 이르지 못하고 있으므로, 보다 유효한 항암제를 여전히 요망하고 있다.

상기한 문제점을 해결하기 위해, 본 발명은 다중 치환된 피리딘 화합물, 그 제조 방법, 용도 및 약학적 조성물을 제공한다.

특히,

제1 형태에 있어서, 본 발명은 일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:

여기서, X₁은 일반식 a의 치환되거나 비치환된 5원 헤테로 방향족 고리로부터 선택되고;

R₄, R₅ 및 R₆은 각각 탄소 원자, 질소 원자, 산소 원자 또는 황 원자로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고, R₈, R₉ 및 R₁₀은 각각 수소, 할로겐, C₁-C₄ 알킬, C₁-C₄ 알콕실로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;

X₂는 F와 H로 이루어지는 군으로부터 선택되고;

X₃은 할로겐, -CN, C₁-C₄ 알킬, 할로겐화 C₁-C₄ 알킬기, C₁-C₄ 알콕실, 할로겐화 C₁-C₄ 알콕실 및 -NR₁₁R₁₂이며, 상기 R₁₁ 및 R₁₂는 각각 수소 및 C₁-C₄ 알킬로 이루어지는 군로부터 독립적으로 선택된다.

바람직하게는, R₄, R₅ 및 R₆은 각각 탄소 원자 및 질소 원자로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다.

바람직하게는, R₄, R₅ 및 R₆은 동시에 탄소 원자가 아니다.

바람직하게는, R₄, R₅ 및 R₆은 동시에 질소 원자가 아니다.

바람직하게는, R₈, R₉ 및 R₁₀은 각각 수소 및 메틸로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다.

바람직하게는, X₁은

이다.

바람직하게는, X₃은 F, Cl, Br, -CF₃, -CN, C₁-C₂ 알킬, C₁-C₂ 알콕실 및 -NR₁₁R₁₂로 이루어지는 군으로부터 선택되며, 상기 R₁₁ 및 R₁₂는 각각 수소 및 C₁-C₂ 알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택된다.

바람직하게는, X₃은 F, Cl 및 -CN으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

바람직하게는, 일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물은 하기의 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택된다:

,

,

,

,

,

,

, 및

보다 바람직하게는, 일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물은 하기의 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

, 및

바람직하게는, 일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 인산염, 메탄설폰산염, 트리플루오로메탄설폰산염, 벤젠설폰산염, p-톨루엔설폰산염, 1-나프탈렌설폰산염, 2-나프탈렌설폰산염, 아세트산염, 트리플루오로아세트산염, 말산염, 타르타르산염, 시트르산염, 락트산염, 옥살산염, 석신산염, 푸말산염, 말레산염, 벤조산염, 살리실산염, 페닐아세트산염 및 만델산염으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 다중 치환된 피리딘 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 단계를 포함하는 다중 치환된 피리딘 화합물의 제조 방법에 관한 것이다:

1) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 B의 화합물과 일반식 C의 화합물을, 염기로서 포타슘 tert-부톡사이드의 존재 하에 반응시켜, 일반식 D의 화합물을 얻는 단계:

,

여기서, R₁₃은 F, Cl, Br 또는 I이다.

2) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 D의 화합물과 일반식 E의 화합물을, 촉매로서 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 또는 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)디클로라이드의 존재 하에 반응시켜, 일반식 F의 화합물을 얻는 단계:

; 및

3) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 F의 화합물과 일반식 G의 화합물을 반응시켜, 일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물을 얻는 단계.

바람직하게는, 상기 일반식 B의 화합물은 이하의 방법에 의해 제조된다:

일반식 A의 화합물을 할로겐화하여, 일반식 B의 화합물을 얻는다:

여기서, R₁₃은 F, Cl, Br 또는 I이다.

바람직하게는, X₃이 NH₂인 경우, 상기 제조 방법은 이하의 단계를 포함한다:

1) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 H의 화합물과 일반식 C의 화합물을, 촉매로서 포타슘 tert-부톡사이드의 존재 하에 반응시켜, 일반식 W의 화합물을 얻는 단계;

;

여기서, R₁₃은 F, Cl, Br 또는 I이고;

2) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 W의 화합물과 일반식 E의 화합물을, 촉매로서 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 또는 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)디클로라이드의 존재 하에 반응시켜, 일반식 J의 화합물을 얻는 단계:

;

3) 일반식 J의 화합물을, 촉매로서 팔라듐-카본의 존재 하에 수소화하여, 일반식 K의 화합물을 얻는 단계:

; 및

4) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 K의 화합물과 일반식 G의 화합물을 반응시켜, 일반식 L의 화합물을 얻는 단계;

여기서, 본 발명에 있어서는, LDA는 리튬 디이소프로필아미드를 나타내고; THF는 테트라하이드로푸란을 나타내고; -78deg는 -78℃를 나타내고; DMSO는 디메틸설폭사이드를 나타내고; rt는 실온을 나타내고; DCM은 디클로로메탄을 나타내고; conc.는 "농축된"을 나타내며; TEA는 트리에틸아민을 나타낸다.

또한, 본 발명은 VEGFR-2(혈관내피 성장인자 수용체-2), VEGFR-3(혈관내피 성장인자 수용체-3), CRAF(인간 C-RAF 원암유전자 세린/트레오닌 단백질 키나제(human C-Raf proto-oncogene serine/threonine protein kinase)), PDGFR-β(혈소판 유래 성장인자 수용체 β), BRAF(인간 세린/트레오닌 단백질 키나제), BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3(FMS형 티로신 키나제 3) 키나제와 관련된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제를 제조함에 있어서 본 발명에 따른 상기 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 실시형태에 있어서, VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제와 관련된 상기 질환은 종양 또는 암을 포함한다.

바람직하게는, 상기 종양 또는 암은 악성 흑색종(melanoma), 간암(liver cancer), 신장암(renal carcinoma), 급성 백혈병(acute leukemia), 만성 백혈병(chronic luekemia), 비소세포성 폐암(non-small cell lung cancer), 전립선암(prostatic cancer), 갑상선암(thyroid cancer), 피부암(skin cancer), 결장암(colon cancer), 직장암(rectal cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 난소암(ovarian cancer), 유방암(mammary cancer), 골수형성이상증후군(myelodysplastic syndromes), 식도암(esophageal cancer), 또는 중피종(mesothelioma)이다.

또한, 본 발명은 VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제와 관련된 질환의 치료 및/또는 예방의 방법으로서, 필요시에, 본 발명에 따른 상기 다중치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 치료학적인 또는 예방적인 유효량을 대상물에 투여하는 단계를 포함하는 방법을 제공한다.

바람직하게는, 상기 종양 또는 암은 악성 흑색종, 간암, 신장암, 급성 백혈병, 만성 백혈병, 비소세포성 폐암, 전립선암, 갑상선암, 피부암, 결장암, 직장암, 췌장암, 난소암, 유방암, 골수형성이상증후군, 식도암, 또는 중피종이다.

또한, 본 발명은 VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제와 관련된 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 본 발명에 따른 상기 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 및 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다.

본 발명의 실시형태에 있어서, VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제와 관련된 상기 질환은 종양 또는 암이다.

또한, 본 발명은 세포 내에서 VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제의 활성을 저해하는 방법으로서, 본 발명에 따른 상기 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 및 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 상기 세포에 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.

바람직하게는, 상기 방법은 생체외(in vitro)에서 실시된다.

바람직하게는, 상기 방법은 생체내(in vivo)에서 실시된다.

바람직하게는, 상기 세포는 세포주(cell line), 혹은 종양 세포 또는 암 세포 등의 대상물로부터 유래된 세포이다.

바람직하게는, 상기 종양 또는 암은 악성 흑색종, 간암, 신장암, 급성 백혈병, 만성 백혈병, 비소세포성 폐암, 전립선암, 갑상선암, 피부암, 결장암, 직장암, 췌장암, 난소암, 유방암, 골수형성이상증후군, 식도암, 및 중피종으로 이루어지는 군으로부터 선택된다.

또한, 본 발명은 약제를 제조함에 있어서 본 발명에 따른 상기 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 용도에 관한 것으로, 상기 약제는 VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제의 활성을 저해하기 위해 사용된다.

바람직하게는, 상기 약제는 생체외 방법에 사용된다.

바람직하게는, 상기 약제는 생체내 방법에 사용된다.

바람직하게는, 상기 세포는 세포주, 혹은 종양 세포 또는 암 세포 등의 대상 물로부터 유래된 세포이다.

또한, 본 발명은 세포 내에서 VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제의 활성을 저해하는데 사용하기 위한, 본 발명에 따른 상기 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물, 및 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다.

바람직하게는, 생체외 방법에 사용된다.

바람직하게는, 생체내 방법에 사용된다.

바람직하게는, 세포는 세포주, 혹은 종양 세포 또는 암 세포 등의 대상물로부터 유래된 세포이다.

또한, 본 발명은 세포 내에서 VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제의 활성을 저해하기 위한 키트(kit)로서, 본 발명에 따른 상기 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 및 선택적으로 설명서(instructions)를 포함하는 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 및 약학적으로 허용 가능한 보조제(adjuvant)(담체(carrier) 또는 부형제(excipient) 등)를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

바람직하게는, 상기 약학적 조성물은 주사제(injection), 경구 제형(oral formulation), 경피투과제(cutaneous permeable agent), 또는 좌약(suppository)이다.

바람직하게는, 상기 약학적 조성물은 VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제와 관련된 질환의 치료 및/또는 예방을 위해 사용된다.

본 발명에서는 C₁-C₄알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸로부터 선택된다.

본 발명에 있어서, 상기 C₁-C₄알콕실은 C₁-C₄알킬-O-를 나타내며, 여기서, C₁-C₄알킬은 위에서 정의한 것과 동일한 의미를 갖는다.

본 발명에 있어서, 상기 할로겐은 F, Cl, Br, 및 I로부터 선택된다.

본 발명에 있어서, 상기 C₁-C₂알킬은 메틸 또는 에틸을 나타낸다.

본 발명에 있어서, 상기 C₁-C₂알콕실은 메톡실 또는 에톡실을 나타낸다.

본 명세서에서 사용되는 화합물의 명칭이 그 화학식과 일치되지 않는 경우에는, 그 화학식이 우선하여 적용되거나, 당해 분야의 숙련자가 통상의 지식과 조합하여 실용적인 조건에 따라 그것을 결정할 것이다.

본 발명에 따른 일부 화합물은 물 또는 각종의 유기용매로 결정화 또는 재결정화하여도 되고, 이 경우에 각종의 용매화물을 형성하여도 된다. 본 발명은 수화물을 함유하는 화학양론적 용매화물(stoichiometric solvates)을 포함하며, 또한 저압 하에 승화에 의해 제조할 때에 형성되는, 가변량(可變量)의 물을 함유하는 화합물을 포함한다.

본 발명에 의하면, 일반식 I의 화합물이 약학적 목적을 위해 사용되므로, 그 화합물이 순수한 형태로, 예를 들면, 적어도 60%의 순도, 가장 적합하게는 75%의 순도, 보다 바람직하게는 85%의 순도, 가장 바람직하게는 적어도 98%의 순도("%"는 중량%를 나타낸다)로 제공되는 것이 가장 바람직하다는 것을 알 수 있다. 불순 화합물(impure compound)은 약학적 조성물에 사용되는 보다 순수한 형태(purer form)의 제조를 위해 사용될 수도 있다. 불순 생성물(impure product)은 일반식 I의 화합물 또는 그 약학적으로 허용 가능한 유도체의 적어도 1%, 보다 적합하게는 5%, 보다 바람직하게는 10%를 함유한다.

또한, 본 발명은 적어도 1종의 일반식 I의 화합물 및 적어도 1종의 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 일반식 I의 화합물 또는 그 약학적으로 허용 가능한 염은 단독으로, 또는 약학적 조성물의 형태로 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 조합하여 사용될 수 있다. 그 화합물이 약학적 조성물의 형태로 사용될 때에는, 본 발명에 따른 일반식 I의 화합물, 또는 그 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물, 및 1종 이상의 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제의 유효량으로부터 적합한 투여 형태(administration form) 또는 복용 형태(dosage form)를 제조하는 것이 일반적이다. 이 과정은 적합한 수단에 의해 구성성분들을 혼합, 과립화, 압축 또는 용해 단계를 포함한다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 다음의 수단 중 어느 하나에 의해 투여하여도 된다: 경구 투여(oral administration), 분무 흡입(spray inhalation), 직장내 투여(rectal administration), 비강내 투여(intranasal administration), 질내 투여(vaginal administration), 국소 투여(topical administration), 피하사(intravenous), 정맥내(intravenous), 근육내(intramuscular), 복강내(intraperitoneal), 척추강내(intrathecal), 뇌실내(intraventricular), 흉골내(intrasternal), 또는 두개내(intracranial) 주사(injection) 또는 주입(input) 등의 비경구적 투여(parenteral administration), 또는 체외 저장(explant reservoir)에 의한 투여, 이들 중에서 바람직하게는, 경구 투여, 근육내 주사, 복강내 투여 또는 정맥내 투여가 바람직하다.

본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용 가능한 담체는 이온 교환체, 산화알루미늄, 스테아르산알루미늄, 레시틴, 인간 혈청 단백질 등의 혈청 단백질; 인산염 등의 완충 물질, 소르빈산, 소르빈산칼륨, 포화 식물성 지방산의 부분 글리세리드 혼합물, 물, 황산 프로타민 등의 염 또는 전해질, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연염, 콜로이드상 실리카, 3규산마그네슘, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스계 물질, 폴리에틸렌글리콜, 카복시메틸셀룰로오스나트륨, 폴리아크릴산 에스테르, 밀랍(beewax), 라노세린(lanocerin) 등을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 약학적 조성물에 있어서, 담체는 1중량%∼98중량%, 일반적으로 약 80중량%의 양으로 존재한다. 사용 편의상, 국소 마취제, 방부제, 완충제 등을 담체에 직접 용해시켜도 된다.

경구용 정제 및 캡슐 등의 경구 제형은 부형제, 예를 들면 시럽, 아라비아검, 솔비톨, 트라가칸트(tragacanth) 또는 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제; 락토오스, 스크로오스, 옥수수 전분, 인산칼슘, 솔비톨 또는 아미노아세트산 등의 충전제; 스테아린산마그네슘, 탈크, 폴리에틸렌글리콜 또는 실리카 등의 활제; 감자 전분 등의 붕괴제; 또는 라우릴황산나트륨 등의 허용 가능한 윤활촉진제를 함유하여도 된다.

본 발명의 약학적 조성물은 경구용 액상 형태(oral liquid form)이며, 물과 오일의 현탁액, 용액, 에멀젼, 시럽 또는 엘릭서제(elixir)로 제조되거나, 또는 사용 전에 물 또는 그 밖의 적합한 매개물로 보충되는 건조 생성물(dry product)로 제조되어도 된다. 액상 제형(liquid formulation)은 통상의 첨가제, 예를 들면, 솔비톨, 메틸셀룰로오스, 글루코오스 시럽, 겔, 하이드록시에틸셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스, 스테아린산알루미늄 겔 또는 수소첨가 식용 지방 등의 현탁제; 레시틴, 모노올레인산솔비탄 또는 아라비아검 등의 유화제; 또는 아몬드유, 글리세롤 등의 지방, 에틸렌글리콜, 또는 에탄올 등의 비수용성 담체(식용유를 포함하고 있어도 된다); 파라하이드록시벤조산 메틸 또는 프로필, 소르빈산 등의 방부제를 함유하여도 된다.

필요한 경우, 향료 또는 착색제를 첨가해도 된다. 좌약은 코코아 버터 또는 그 밖의 글리세리드 등의 통상의 좌약 기제(坐劑基劑)를 함유해도 된다. 비경구 투여인 경우, 액상 제형(liquid dosage form)은 일반적으로는 화합물과 적어도 1종의 살균 또는 무균 담체로 이루어진다. 담체는 최적으로는 물이다. 선택된 담체와 약제의 농도에 따라, 화합물을 담체에 용해하거나 현탁액으로 조제해도 된다. 주사(injection) 용액을 조제할 때에, 우선 화합물을 물에 용해하고, 여과 및 살균 후에 밀봉병(seal bottle) 또는 앰플(ampoule) 내에 패키징(packaging)한다. 피부에 국소적으로 투여하는 경우, 본 발명에 따른 화합물을 연고, 로션, 또는 크림의 적절한 형태로 조제해도 되며, 여기서 활성성분은 1종 이상의 담체 중에 현탁되거나 용해된다. 연고 조제용의 담체는 광유(mineral oil), 액상 파라핀, 알볼린(albolene), 프로필렌글리콜, 폴리옥시에틸렌, 폴리옥시프로필렌, 가용화 왁스(emulsifying wax) 및 물을 포함하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 로션 및 크림용의 담체는 광유, 솔비탄모노스테아레이트, Tween 60, 헥사데실에스테르 왁스, 헥사데칸 방향족 알코올, 2-옥틸도데칸올, 벤질알코올 및 물을 포함하지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 투여 경로에 의하면, 조성물은 0.1중량% 또는 보다 적합하게는 10-60중량%의 양의 활성성분을 함유해도 된다. 그러나, 조성물이 단위 제형(unit dosage form)인 경우, 각 단위는 바람직하게는, 50∼500mg의 활성성분을 함유한다. 투여의 경로 및 빈도에 의거하여, 성인에게 적합한 치료용량(therapeutic dose)은, 예를 들면, 하루 당 100-3000mg, 예컨대 하루 당 1500mg이다.

일반식 I의 화합물의 최적 투여 용량(administration dose) 및 간격이 질환 또는 장애의 심각도, 화합물의 성질, 투여 형태, 투여 경로 및 투여 부위뿐만 아니라 치료 대상의 특정 포유동물 등의 조건에 따른다는 것을 인식하여야 한다. 최적 투여 용량은 의사에 의해 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 다중 치환된 피리딘 화합물은 종래기술에 비해 다음과 같은 이점과 긍정적인 효과를 갖는다:

본 발명은 처음으로 새로운 부류의 다중 치환된 피리딘 화합물을 제공한 것이다. 기존의 화합물(소나페닙(Sorafenib), 즉 CN1341098A 또는 CN102532113A에 개시된 화합물)과 비교하여, 본 발명에 따른 일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물은 보다 양호한 항종양 효과(anti-tumor effect)를 가지며, 혈관내피 성장인자 수용체-2(VEGFR-2), 혈관내피 성장인자 수용체-3(VEGFR-3), CRAF, 혈소판 유래 성장인자 수용체-β(PDGFR-β), BRAF, V600E BRAF, KIT 및 FLT-3 키나제를 포함하여, 세포 내와 세포 표면에 있는 각종의 키나제를 동시에 억제할 수 있다. 특히, 본 발명에 따른 바람직한 화합물은 이중의 항종양 효과(dual anti-tumor effects)를 갖는다. 한편, 이들 화합물은 VEGFR 및 PDGFR를 억제함으로써 종양의 혈관생성을 차단할 수 있고, 이에 의해 종양 세포의 성장을 억제할 수 있다; 다른 한편으로는, 이들 화합물은 RAF/MEK/ERK 신호 전달 경로를 억제함으로써 종양의 성장을 저해하여, 보다 효과적인 항종양 효과를 얻을 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화합물은 상당히 뛰어난 항종양 효과뿐만 아니라, 상당히 뛰어한 약동학적 특성(pharmacokinetic characteristics)을 갖고, 생체내에서 혈액농도 등의 데이터에 관하여 시판되고 있는 약제인 소라페닙보다 명백히 우수하며, 경구 및 정맥내 투여를 위해 매우 적합하다.

보다 효과적인 항암제(antitumor drug)를 얻기 위해서, 본 발명자들은 다수의 스크리닝 테스트(screening tests)를 실시하였다. 예를 들면, 본 발명자들은 약역학적 실험(pharmacodynamic experiments)에 의해 일반식 II의 피리딘 고리의 치환기 X3, X4 및 X5의 위치에서 스크링하였다.

본 발명자들은 약역학적 실험에 의해 놀랍게도, 피리딘 고리 중의 X₄ 및 X₅ 모두가 수소이고, X₃이 화합물 분자의 전자 구름 효과 및 입체 배치의 변화로 인하여 어떤 치환기로 치환되었을 때에, 피리딘 고리 중의 질소 원자와 약리단기(pharmacophoric group)인 2-(1-메틸-4-피라졸일) 또는 2-(메틸카바모일)과의 상호작용이 향상되어, 화합물 분자와 수용체 간의 결합강도가 보다 높아진다는 것을 알았다. 또한, 본 발명자들은 많은 실험을 통하여 놀랍게도, 피리딘 고리 중에 X₃이 수소이었을 때에, X₃의 위치가 화합물이 쉽게 대사작용될 수 있는 부위(site)이었고; 일반식 I의 X₃이 어떤 치환기에 의해 치환되었을 때에, 그 치환기가 그 부위를 차단하여, 생체내에서 화합물의 신진대사 안정성을 향상시키며 화합물의 높은 혈액 농도를 보장함으로써 본 발명에 따른 화합물의 효능을 더욱 증대시킨다는 것을 알았다. 이들 발견에 근거하여, 본 발명자들은 본 발명의 기술적인 해결책에 더 이르렀다. 본 발명에 따른 화합물은 상당히 뛰어난 항종양 효과를 가지며, 중국특허출원 문헌 CN1341098, CN201110435847.9에 개시된 화합물뿐만 아니라 시판되고 있는 약제인 소라페닙보다 상당히 우수하다.

본 발명자들은 X₃이 전자 끄는 기(electron withdrawing group)이었을 때에, 본 발명에 따른 화합물이 더 양호한 치료 효과를 가졌다는 것을 또한 알았다. 바람직한 전자 끄는 기는 F, Cl 또는 시아노이다.

본 발명의 기술적인 해결책과 본 발명자들에 의해 앞서 출원한 바와 같은 특허출원 CN201110435847.9의 기술적인 해결책 간의 상당한 차이는, 본 발명에 따른 화합물이 피리딘 고리의 3 위치(즉, 본 발명에 따른 일반식 I의 X3)에 치환되는 반면, CN201110435847.9에 개시된 화합물은 피리딘 고리의 3, 5 및 6 위치(즉, 본 명세서(instant specification))에 있어서 일반식 II의 X3, X4 및 X5)에 치환된다는 것이다.

또한, 시판되고 있는 항암제 소라페닙은 피리딘 고리의 3, 5 및 6 위치(즉, 본 발명에 따른 일반식 II의 X3, X4 및 X5)에 치환되어 있어, 본 발명에 따른 화합물은 소라페닙 화합물과는 구조적으로 상이하다.

본 발명자들은 약역학적인 비교 실험들에 의해, 본 발명에 따른 화합물이 ㅍ피리딘 고리의 3, 5 및 6 위치(본 발명에 따른 명세서에 있어서 일반식 II의 X3, X4 및 X5)에 치환되지 않은, CN1341098, CN201110435847.9에 개시된 화합물보다 상당히 양호한 항종양 효과를 가진다는 것을 알았다. 또한, 본 발명에 따른 화합물은 시판되고 있는 항암제 소라페닙보다 상당히 우수하며, 이는 시판되고 있는 항암제 소라페닙과 비교하여, 본 발명에 따른 화합물이 다수의 키나제를 억제할 수 있는 보다 효과적인 항암 화합물이라는 것을 나타낸다.

본 발명에 따른 화합물은 상당히 뛰어난 항종양 효과뿐만 아니라 상당히 뛰어난 약동학적 특성을 갖고, 생체내에서 혈액농도 등의 데이터에 관하여 시판되고 있는 약제인 소라페닙보다 명백히 우수하며, 경구 및 정맥내 투여를 위해 매우 적합하다.

도 1은 키나제 VEGFR2에 대한 실시예 1, 실시예 2, 비교예 3, 비교예 4, 비교예 5, 및 소라페닙 유리염기(free base)의 반최대저해농도(a half maximal inhibitory concentration)를 나타낸 것이다.
도면에 나타난 화합물과 실시예들 간의 대응관계는 다음과 같다:

본 발명에 관하여 더 설명하지만, 이하의 실시형태 및 도면 참조에 의해 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 기본적인 사상에 의거하여, 당해 분야의 숙련자는 다양한 변경 또는 개량을 할 수 있다. 이들 변경 또는 개량은 본 발명의 기본적인 사상에서 벗어나지 않는 한, 본 발명의 범위에 포함된다.

이하의 실시예들에 있어서, 달리 규정되는 것을 제외하고, 모든 시약(reagents)은 예를 들면 제이앤케이 사이언티픽 코퍼레이션 엘티디(J&K SCIENTIFIC Co. Ltd.), 알파 에이사(티안진) 케미컬 코포레이션 엘티디(Alfa Aesar(tianjin) Chemical Co. Ltd.), 또는 베이징 오우헤 테크놀로지 코포레이션 엘티디(Beijing Ouhe Technology Co., Ltd)로부터 상업적으로 입수 가능하다.

이하의 실시예들에 있어서, 수율의 계산식은 다음과 같다:

수율 = 제품 중량 × 원료의 몰 질량/(원료의 중량×제품의 몰 질량)

실시예 1

FD-2013015:

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-플루오로-2-(1-메틸-4-피라졸일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아

제조 방법:

단계 1: 2-클로로-3-플루오로-4-클로로피리딘의 합성

-30℃에서, 질소 가스의 분위기 하에, n-부틸리튬(2.4M 헥산 용액, 13.13mL, 31.5mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(anhydrous tetrahydrofuran)(30mL) 중의 디이소프로필아민 용액(3.18g, 31.5mmol)에 적하하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 -30℃에서 30분간 교반하고, 이어서 -78℃로 냉각하였다. 무수 테트라하이드로푸란(20mL) 중의 2-클로로-3-플루오로피리딘 용액(3.95g, 30mmol)을 적하하고, 이어서 반응 혼합물을 -78℃에서 60분간 교반하였다. 무수 테트라하이드로푸란(50mL) 중의 헥사클로로에탄 용액(7.10g, 30mmol)을 적하하고, 이어서 반응 혼합물을 -78℃에서 60분간 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 암모늄클로라이드 용액(50mL)으로 담금질(quenching)하고, 물(50mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(100mL×3)로 추출하였다. 유기상들(organic phases)을 합쳤다. 합친 유기상들을 식염수(saline solution)(100mL×3)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사(殘渣)를 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트 = 100:1)에 의해 정제하여 황색 고체로서 생성물(3.60g, 수율: 72%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, CDCl₃): 8.14(d, J = 5.1Hz, 1H), 7.34(t, J = 5.1Hz, 1H)

MS(ESI+): m/z 166.2[M+H]⁺

단계 2: 2-클로로-3-플루오로-4-(4-아미노페녹시)피리딘의 합성:

무수 디메틸설폭사이드(210mL) 중의 4-아미노페놀(24.8g, 227mmol)을 질소 가스로 10분간 버블링(bubbling)하고, 이어서 칼륨 tert-부톡사이드(26.80g, 238.8mmol)를 첨가하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분간 교반하고, 이어서 2-클로로-3-플루오로-4-클로로피리딘(37.68g, 227mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 교반하고, 이어서 물(100mL)로 희석하고 에틸아세테이트(500mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 식염수(500mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 5:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(15.0g, 수율: 28%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆): δ5.22(br s, 2H), 6.62(d, J = 9.0Hz, 2H), 6.75(t, J = 5.7Hz, 1H), 6.92(d, J = 9.0Hz, 2H), 8.05(d, J = 5.7Hz, 1H)

MS(ESI+): m/z 239.1[M+H]⁺

단계 3: 4-(3-플루오로-2-(1-메틸-4-피라졸일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

테트라하이드로푸란(THF, 180mL) 중의 2-클로로-3-플루오로-4-(4-아미노페녹시)피리딘(7.2g, 30.2mmol), 1-메틸피라졸-4-일-보론산피나콜에스테르(6.3g, 30.2mmol), 탄산칼륨(12.5g, 90.6mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(1.74g, 1.5mmol)의 혼합물과 물(30mL)을 아르곤 가스로 5분간 버블링하고, 이어서 아르곤 가스의 분위기 하에 85℃에서 24시간 교반하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 물(100mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(100mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 식염수(100mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 1:2, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(5.4g, 수율: 60%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆): δ3.93(s, 3H), 5.18(br s, 2H), 6.54(t, J = 5.7Hz, 1H), 6.63(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.91(d, J = 8.7Hz, 2H), 7.98(d, J = 0.6Hz, 1H), 8.15(d, J = 5.4Hz, 1H), 8.29(d, J = 2.1Hz, 1H)

MS(ESI+): m/z 285.1[M+H]⁺

단계 4: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-플루오로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아의 합성:

디클로메탄(30mL) 중의 4-(3-플루오로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(1.71g, 6.0mmol) 및 4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐이소시아네이트(1.6g, 7.2mmol)의 혼합 용액을 실온에서 12시간 교반하고, 이어서 여과하여 백색 고체를 회수하고, 디클로로메탄으로 세정하고 건조시켜 백색 고체로서 생성물(2.35g, 수율: 75%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆): δ3.93(s, 3H), 6.66(t, J = 6.0Hz, 1H), 7.18(d, J = 9.0Hz, 2H), 7.56(d, J = 9.0Hz, 2H), 7.59-7.63(m, 2H), 7.98(s,1H), 8.10(d, J = 1.8Hz, 1H), 8.20(d, J = 5.4Hz, 1H), 8.30(d, J = 1.8Hz, 1H), 8.98(s, 1H), 9.18(s, 1H)

MS(ESI+): m/z 505.8[M+H]⁺

단계 5: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-플루오로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아 p-톨루엔설포네이트의 합성:

무수 에탄올(20mL) 중의 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-플루오로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아(1.518g, 3mmol) 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(0.684g, 3.6mmol)의 혼합물을 가열 환류시키고, 고체가 완전히 용해될 때까지 무수 에탄올을 더 추가하였다. 얻어진 투명한 용액을 여과하여, 여과액을 하룻밤 방치하고, 이어서 흡인 여과하고, 얻어진 백색 고체를 회수하고 건조시켜 백색 고체로서 생성물(1.328g, 수율: 65%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆)δ9.32(s, 1H), 9.12 (s, 1H), 8.39(d, J = 1.2Hz, 1H), 8.28(d, J = 5.7Hz, 1H), 8.13(d, J = 2.4Hz, 1H), 8.06(s, 1H), 7.72 - 7.56(m, 4H), 7.51(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.23(d, J = 9.0Hz, 2H), 7.13(d, J = 8.1Hz, 2H), 6.77(t, J = 6.2Hz, 1H), 3.95(s, 3H), 2.29(s, 3H).

실시예 2

FD-2013018:

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아

제조 방법:

단계 1: 2,3-디클로로-4-요오도피리딘의 합성

아르곤 가스의 분위기 하에 -78℃에서, n-부틸리튬(2.4M 헥산 용액, 59.12mL, 141.9mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(350mL) 중의 2,3-디클로로피리딘(20g, 135.1mmol) 용액에 적하하여 반응 혼합물을 얻고, 반응 혼합물을 -78℃에서 90분 간 교반하였다. 무수 테트라하이드로푸란(100mL) 중의 요오드(41g, 161.5mmol) 용액을 적하하여, 반응 혼합물을 -78℃에서 60분간 교반하였다. 이어서, 온도를 실온으로 증가시켰다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액(100mL)으로 담금질하고, 물(100mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(200mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 식염수(200mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 100:1)에 의해 정제하여 황색 고체로서 생성물(31.5g, 수율: 85.1%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆): 8.08(d, J = 5.4Hz, 1H), 8.65(d, J = 5.4 Hz, 1H)

MS(ESI+): m/z 273.9[M+H]⁺

단계 2: 2,3-디클로로-4-(4-아미노페녹시)피리딘의 합성:

무수 디메틸설폭사이드(120mL) 중의 4-아미노페놀(13.85g, 127.0mmol) 용액을 질소 가스로 10분간 버블링하고, 이어서 칼륨 tert-부톡사이드(13.60g, 121.2mmol)를 첨가하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분간 교반하고, 이어서 2,3-디클로로-4-요오도피리딘(31.5g, 115.4mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 교반하고, 이어서 물(500mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(300mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 식염수(300mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 4:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(27.5g, 수율: 93.7%)을 수득하였다.

¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆): δ5.24(br s, 2H), 6.64(d, J = 8.8Hz, 2H), 6.67(d, J = 5.6Hz, 1H), 6.90(d, J = 8.8Hz, 2H), 8.39(d, J = 5.6Hz, 1H)

MS(ESI+): m/z 255.0[M+H]⁺

단계 3: 4-(3-클로로-2-(1-메틸-4-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

테트라하이드로푸란(THF, 210mL) 중의 2,3-디클로로-4-(4-아미노페녹시)피리딘(9.1g, 35.7mmol), 1-메틸피라졸-4-일-보론산피나콜에스테르(7.42g, 35.7mmol), 탄산칼륨(14.76g, 106.9mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(2g, 1.72mmol)의 혼합물과 물(35mL)을 아르곤 가스로 5분간 버블링하고, 이어서 아르곤 가스 분위기 하에 85℃에서 24시간 교반하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 물(100mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(100mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 식염수(100mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 1:2, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(4.85g의 수율: 45.2%)을 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆): δ3.93(s, 3H), 5.19(br s, 2H), 6.46(d, J = 5.6Hz, 1H), 6.64(d, J = 8.8Hz, 2H), 6.88(d, J = 8.8Hz, 2H), 8.11(s, 1H), 8.27 (d, J = 5.6Hz, 1H), 8.48 (s, 1H)

MS(ESI+): m/z 301.0[M+H]⁺

단계 4: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아의 합성:

디클로로메탄(50mL) 중의 4-(3-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(4.85g, 16.1mmol) 및 4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐이소시아네이트(4.28g, 19.3mmol)를 실온에서 12시간 교반하고, 이어서 여과하고, 얻어진 백색 고체를 회수하고, 디클로로메탄으로 세정하고, 건조시켜, 백색 고체로서 생성물(7.2 g, 수율: 85.5%)을 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆): δ3.94(s, 3H), 6.56(d, J = 5.2Hz, 1H), 7.19(d, J = 8.8Hz, 2H), 7.59(d, J = 8.8Hz, 2H), 7.61-7.68(m, 2H), 8.12(s, 1H), 8.13(s, 1H), 8.32(d, J = 5.6Hz, 1H), 8.51(s, 1H), 9.01 (s, 1H), 9.21 (s, 1H)

MS(ESI+): m/z 522.1[M+H]⁺

단계 5: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아 p-톨루엔설포네이트의 합성:

무수 에탄올(200mL) 중의 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아(1.570g, 3mmol) 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(0.684g, 3.6mmol)을 가열 환류시키고, 고체가 완전히 용해될 때까지 무수 에탄올을 첨가하였다. 얻어진 투명한 용액을 여과하여, 여과액을 하룻밤 방치하고, 이어서 흡인 여과하고, 얻어진 백색 고체를 회수하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(1.428g, 수율: 69%)을 수득하였다.

1H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.33(s, 1H), 9.14(s, 1H), 8.56(s, 1H), 8.42 - 8.32(dd, J = 6.0, 2.4Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.13(d, J = 2.4Hz, 1H), 7.71 - 7.58(m, 4H), 7.50(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.21(d, J = 8.7 Hz, 3H), 7.13(d, J = 7.8 Hz, 2H), 6.71 - 6.60 (m, 1H), 3.95(s, 3H), 2.29(s, 3H).

실시예 3

FD-2013024:

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)-2-플루오로페닐)우레아

제조 방법:

단계 1: 2,3-디클로로-4-(4-아미노-3-플루오로페녹시)피리딘의 합성:

무수 디메틸설폭사이드(15mL) 중의 4-아미노-3-플루오로페놀(1.69g, 13.28mmol) 용액을 질소 가스로 10분간 버블링하고, 이어서 2,3-디클로로-4-요오도피리딘(3.31g, 12.13mmol)을 첨가하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분간 교반하고, 이어서 2,3-디클로로-4-요오도피리딘(31.5g, 115.4mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 교반하고, 물(50mL)로 희석하여 에틸아세테이트(30mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 식염수(30mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 4:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(1.0g, 수율: 30%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ8.17(d, J = 5.6Hz, 1H), 7.16-7.00(m, 1H), 6.92-6.78(m, 2H), 6.75(d, J = 5.6Hz, 1H), 5.26 (br s, 2H)

MS(ESI+): m/z 272.9[M+H]⁺

단계 2: 4-(3-클로로-2-(1-메틸-4-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)-2-플루오로아닐린의 합성:

테트라하이드로푸란(THF, 5mL) 중의 2,3-디클로로-4-(4-아미노-3-플루오로페녹시)피리딘(0.40g, 1.47mmol), 1-메틸피라졸-4-일-보론산피나콜에스테르(0.35g, 1.68mmol), 탄산칼륨(0.70g, 5.07mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0.10g, 0.086mmol)의 혼합물과 물(1mL)을 아르곤 가스로 5분간 버블링하고, 아르곤 분위기 하에 85℃에서 24시간 교반하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 물(200mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(20mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 식염수(20mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 1:2, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(0.23g, 수율: 49%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ8.48(s, 1H), 8.29(d, J = 5.5Hz, 1H), 8.11(d, J = 0.6Hz, 1H), 7.04(dd, J = 11.9, 2.3Hz, 1H), 6.90-6.75(m, 2H), 6.53(d, J = 5.5Hz, 1H), 5.21(s, 2H), 3.93 (s, 3H)

MS(ESI+): m/z 319.0[M+H]⁺

단계 3: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)-2-플루오로페닐)우레아의 합성:

디클로로메탄(5mL) 중의 4-(3-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)-2-플루오로아닐린(0.23g, 0.72mmol) 및 4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐이소시아네이트(0.16g, 0.72mmol)를 실온에서 12시간 교반하고, 이어서 여과하고, 얻어진 백색 고체를 회수하여, 디클로로메탄으로 세정하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(0.30g, 수율: 77%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.52(s, 1H), 8.75(s, 1H), 8.52(s, 1H), 8.36(d, J = 5.5Hz, 1H), 8.26-8.05(m, 3H), 7.64(s, 2H), 7.36(dd, J = 11.5, 2.6Hz, 1H), 7.07(d, J = 8.1Hz, 1H), 6.69(d, J = 5.5 Hz, 1H), 3.94(s, 3H)

MS(ESI+): m/z 540.0[M+H]⁺

실시예 4

FD-2013025:

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-시아노-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아

제조 방법:

단계 1: 2-클로로-4-요오도니코티노니트릴의 합성:

아르곤 분위기 하에 -30℃에서, n-부틸리튬(2.4M 헥산 용액, 3.0mL, 7.2mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(20mL) 중의 디이소프로필아민(0.728g, 7.2mmol) 용액에 적하하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 -30℃에서 30분간 교반하고, 이어서 -78℃로 냉각하였다. 무수 테트라하이드로푸란(10mL) 중의 2-클로로-니코티노니트릴(1.0g, 7.2mmol) 용액을 적하하고, 이어서 반응 혼합물을 -78℃에서 60분 간 교반하였다. 무수 테트라하이드로푸란(10mL) 중의 요오드(1.8g, 7.2mmol) 용액을 적하하고, 이어서 반응 혼합물을 -78℃에서 30분간 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액(50mL)으로 담금질하고, 물(50mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(100mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 식염수(100mL×3)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트 = 80:1)에 의해 정제하여 황색 고체로서 생성물(0.357g, 수율; 19% )을 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ8.32(d, J = 5.2Hz, 1H), 8.15(d, J = 5.2Hz, 1H)

MS(ESI+): m/z 264.9[M+H]⁺

단계 2: 2-클로로-3-시아노-4-(4-아미노페녹시)피리딘의 합성:

무수 디메틸설폭사이드(3mL) 중의 4-아미노페놀(164mg, 1.48mmol) 용액을 질소 가스로 10분간 버블링하고, 이어서 칼륨 tert-부톡사이드(166mg, 1.48mmol)를 첨가하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분간 교반하고, 2-클로로-4-요오도니코티노니트릴(355mg, 1.34mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 교반하고, 이어서 물(30mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(30mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 물(30mL×2)로 세정하고, 식염수(30mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 4:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(210mg, 수율: 61%)을 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ8.42(d, J = 6.0Hz, 1H), 6.96(d, J = 8.8Hz, 2H), 6.76(d, J = 6.0Hz, 1H), 6.65(d, J = 8.8Hz, 2H), 5.29(s, 2H)

MS(ESI+): m/z 246.0[M+H]⁺

단계 3: 4-(3-시아노-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

테트라하이드로푸란(THF, 6mL) 중의 2-클로로-3-시아노-4-(4-아미노페녹시)피리딘(200mg, 0.816mmol), 1-메틸피라졸-4-일-보론산피나콜에스테르(187mg, 0.878mmol), 탄산칼륨(338mg, 2.45mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(95mg, 0.0816mmol)의 혼합물과 물(1mL)을 아르곤 가스로 5분간 버블링하고, 이어서 아르곤 가스의 분위기 하에 85℃에서 24시간 교반하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 물(20mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(20mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 물(20mL×2)로 세정하고, 식염수(20mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 1:2, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(95mg, 수율: 40%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ8.52(d, J = 6.0Hz, 1H), 8.48(s, 1H), 8.17(s, 1H), 6.95(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.65(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.51(d, J = 6.0 Hz, 1H), 5.25(s, 2H), 3.96 (s, 3H)

MS(ESI+): m/z 292.1[M+H]⁺

단계 4: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-시아노-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아의 합성:

디클로로메탄(50mL) 중의 4-(3-시아노2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(90mg, 0.31mmol) 및 4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐이소시아네이트(68.5mg, 0.31mmol)을 실온에서 12시간 교반하고, 이어서 여과하고, 얻어진 백색 고체를 회수하고, 디클로로메탄으로 세정하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(54mg, 수율: 34%)을 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ9.23(s, 1H), 9.05(s, 1H), 8.56(d, J = 6.0Hz, 1H), 8.51(s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.12 (d, J = 2.0Hz, 1H), 7.67-7.59 (m, 4H), 7.28(d, J = 9.0Hz, 2H), 6.58(d, J = 6.0Hz, 1H), 3.96(s, 3H)

MS(ESI+): m/z 512.9[M+H]⁺

실시예 5

FD-2013027:

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-메틸-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아

제조 방법:

단계 1: 2-클로로-4-플루오로-3-메틸피리딘의 합성:

질소 가스의 분위기 하에 -30℃에서, n-부틸리튬(2.4M 헥산 용액, 4.37mL, 10.49mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(20mL) 중의 디이소프로필아민(1.06g, 11mmol) 용액에 적하하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 -30℃에서 30분간 교반하고, 이어서 -78℃로 냉각하였다. 무수 테트라하이드로푸란(10mL) 중의 2-클로로-4-플루오로피리딘(1.31g, 10mmol) 용액을 적하하고, 이어서 반응 혼합물을 -78℃에서 60분간 교반하였다. 무수 테트라하이드로푸란(5mL) 중의 요오도메탄(1.48g, 10.5mmol) 용액을 첨가하고, 이어서 반응 혼합물을 -78℃에서 30분간 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 용액(5mL)으로 담금질하고, 물(50mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(30mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 포화 식염수(30mL×3)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트= 100:1, v/v)에 의해 정제하여 황색 고체로서 생성물(0.63g, 수율: 43%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ8.31(dd, J = 8.0, 5.8Hz, 1H), 7.38(dd, J = 8.7, 5.6Hz, 1H), 2.27(d, J = 1.8Hz, 3H)

MS(ESI+): m/z 146.0[M+H]⁺

단계 2: 2-클로로-3-메틸-4-(4-아미노페녹시)피리딘의 합성:

무수 디메틸설폭사이드(3mL) 중의 4-아미노페놀(0.21g, 1.91mmol) 용액을 질소 가스로 10분간 버블링하고, 이어서 칼륨 tert-부톡사이드(0.22g, 1.96mmol)를 첨가하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분간 교반하고, 2-클로로-4-플루오로-3-메틸피리딘(269mg, 1.85mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 교반하고, 이어서 물(20mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(20mL×2)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 물(20mL×2)로 세정하고, 식염수(20mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 5:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(0.38g, 수율: 88%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ8.04(d, J = 5.6Hz, 1H), 6.89-6.78(m, 2H), 6.69-6.57(m, 2H), 6.51(d, J = 5.7Hz, 1H), 5.15(s, 2H), 2.31(s, 3H)

MS(ESI+): m/z 235.0[M+H]⁺

단계 3: 4-(3-메틸-2-(1-메틸-4-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

테트라하이드로푸란(THF, 6mL) 중의 2-클로로-3-메틸-4-(4-아미노페녹시)피리딘(380mg, 1.62mmol), 1-메틸-4-피라졸-4-일-보론산피나콜에스테르(337mg, 1.62mmol), 탄산칼륨(400mg, 2.89mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(90mg, 0.08mmol)의 혼합물과 물(1mL)을 아르곤 가스로 5분간 버블링하고, 이어서 아르곤 분위기 하에 85℃에서 24시간 교반하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 물(20mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(20mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 물(20mL×2)로 세정하고, 포화 식염수(20mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 1:2, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(170mg, 수율: 37.5%)을 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ8.18(d, J = 5.6Hz, 1H), 8.17(s, 1H), 7.88(s, 1H), 6.82(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.63(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.35(d, J = 5.6Hz, 1H), 5.10(s, 2H), 3.91(s, 3H), 2.39(s, 3H)

MS(ESI+): m/z 281.1[M+H]⁺

단계 4: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-메틸-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아의 합성:

디클로로메탄(2mL) 중의 4-(3-메틸-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(165mg, 0.58mmol) 및 4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐이소시아네이트 (155mg, 0.7mmol) 용액을 실온에서 12시간 교반하고, 이어서 여과하고, 이어서 얻어진 백색 고체를 회수하고, 디클로로메탄으로 세정하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(145mg, 수율: 49%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.18(s, 1H), 8.94(s, 1H), 8.24(d, J = 5.4Hz, 1H), 8.19(s, 1H), 8.12(d, J = 2.1Hz, 1H), 7.91(s, 1H), 7.69-7.58(m, 2H), 7.55 (d, J = 9.0Hz, 2H), 7.09(d, J = 9.0Hz, 2H), 6.47(d, J = 5.4 Hz, 1H), 3.92(s, 3H), 2.40(s, 3H)

MS(ESI+): m/z 501.9[M+H]⁺

실시예 6

FD-2013031:

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-아미노-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아

제조 방법:

단계 1: 2-클로로-3-니트로-4-(4-아미노페녹시)피리딘의 합성:

무수 디메틸설폭사이드(10mL) 중의 4-아미노페놀(1.09g, 10mmol) 용액을 질소 가스로 10분간 버블링하고, 이어서 칼륨 tert-부톡사이드(1.12g, 10mmol)를 첨가하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분간 교반하고, 2,4-디클로로-3-니트로피리딘(1.93g, 10mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5시간 교반하고, 이어서 물(100mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(50mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 물(50mL×2)로 세정하고, 식염수(50mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트= 3: 1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(408mg, 수율: 15%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ8.40(d, J = 5.7Hz, 1H), 6.33(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.28(d, J = 5.7Hz, 2H), 6.63(d, J = 8.7Hz, 2H), 5.30(br s, 2H)

MS(ESI+): m/z 266.0[M+H]⁺

단계 2: 4-(3-니트로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

테트라하이드로푸란(THF, 18mL) 중의 2-클로로-3-니트로-4-(4-아미노페녹시)피리딘(1.25mg, 1.51mmol), 1-메틸-피라졸-4-일-보론산피나콜에스테르(377mg, 1.81mmol), 탄산칼륨(12.4g, 9.0mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(174mg, 1.151mmol)의 혼합물과 물(3mL)을 아르곤 가스로 5분간 버블링하고, 아르곤 분위기 하에 85℃에서 하룻밤 교반하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 물(50mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(30mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 물(30mL×2)로 세정하고, 포화 식염수(30mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 1:3, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(450 mg, 수율: 96%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ8.49(d, J = 5.7Hz, 1H), 8.10(s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.69-7.46(m, 11H), 6.91 (d, J = 8.7Hz, 2H), 6.68 (d, J = 5.7Hz, 1H), 6.63(d, J = 8.7Hz, 2H), 5.26(br s, 2H), 3.91(s, 3H)

MS(ESI+) m/z 312.0[M+H]⁺

단계 3: 4-(3-아미노-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

무수 메탄올(15mL) 중의 4-(3-니트로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(200mg, 0.64mmol) 및 팔라듐-탄소(20mg)의 혼합물을 실온에서 4atm의 분위기 하에 4시간 교반하였다. 팔라듐-탄소를 셀라이트(Celite)를 통해 여과하고, 이어서 여과액을 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 1:4)에 의해 정제하여 생성물(75mg, 수율: 41%)을 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ8.20(s, 1H), 7.91(s, 1H), 7.73(d, J = 5.2Hz, 1H), 6.83(d, J = 8.8Hz, 2H), 6.62(d, J = 8.8Hz, 2H), 6.29(d, J = 5.2Hz, 1H), 5.08(br s, 2H), 4.72(s, 2H), 3.90 (s, 3H)

MS(ESI+): m/z 282.1[M+H]⁺

단계 4: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-아미노-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아의 합성:

디클로로메탄(3mL) 중의 4-(3-아미노-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(70mg, 0.249mmol) 및 4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐이소시아네이트(55mg, 0.249mmol)를 실온에서 3시간 교반하고, 이어서 여과하고, 얻어진 백색 고체를 회수하여, 디클로로메탄으로 세정하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(79mg, 수율: 63%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.17(s, 1H), 8.92(s, 1H), 8.23(s, 1H), 8.11(s, 1H), 7.93(s, 1H), 7.78(d, J = 5.4Hz, 1H), 7.63(d, J = 2.6Hz, 2H), 7.67-7.59(m, 2H), 7.10(d, J = 9.0Hz, 2H), 6.42(d, J = 5.4Hz, 1H), 4.82(br s, 2H), 3.91(s, 3H)

MS(ESI+): m/z 502.9[M+H]⁺

실시예 7

FD-2013033:

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-메틸아미노-2-(1-메틸-4-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아

제조 방법:

단계 1: 2-클로로-4-요오도-3-(메틸아미노)피리딘의 합성:

아미노메탄과 에탄올(25%, v/v, 30mL) 중의 2-클로로-3-플루오로-4-요오도피리딘(12g, 46.6mmol) 용액을 65℃ 8시간 교반하였다. 휘발성 물질을 감압하에서 제거하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 30:1)에 의해 정제하여 황색유로서 생성물(5.5g, 수율: 44%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ7.77(d, J = 4.9Hz, 1H), 7.51 (d, J = 4.9Hz, 1H), 4.75(br, s, 1H), 2.91(s, 3H)

MS(ESI+): m/z 268.9[M+H]⁺

단계 2: 2-클로로-3-메틸아미노-4-(4-아미노페녹시)피리딘의 합성:

무수 디메틸설폭사이드(3mL) 중의 4-아미노페놀(0.16g, 1.46mmol)을 질소 가스로 10분간 버블링하고, 이어서 칼륨 tert-부톡사이드(0.16g, 1.46mmol)를 첨가하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분간 교반하고, 이어서 2-클로로-4-요오도-3-(메틸아미노)피리딘(170mg, 0.63mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 교반하고, 이어서 80℃에서 5시간 교반하였다. 반응 혼합물을 물(20mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(20mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 물(20mL×2)로 세정하고, 식염수(20mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 5:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(96mg, 수율: 61%)을 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ7.57(d, J = 5.3Hz, 1H), 6.81(d, J = 8.8Hz, 2H), 6.66-6.56(m, 2H), 6.48(d, J = 5.3Hz, 1H), 5.08 (s, 2H), 4.94(q, J = 5.4Hz, 1H), 2.97(d, J = 5.4Hz, 3H)

MS(ESI+): m/z 250.0 [M+H]⁺

단계 3: 4-(3-메틸아미노-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

디메틸폼아미드(DMF, 6mL) 중의 2-클로로-3-메틸아미노-4-(4-아미노페녹시)피리딘(270mg, 1.08mmol), 1-메틸피라졸-4-일-보론산피나콜에스테르(225mg, 1.08mmol), 탄산칼륨(447mg, 3.24mmol) 및 비스(트리페닐포스핀)디클로로팔라듐 (II)(76mg, 0.108mmol)의 혼합물과 물(1mL)을 아르곤 가스로 5분간 버블링하고, 이어서 아르곤 가스의 분위기 하애 85℃에서 24시간 교반하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 물(30mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(30mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 물(30mL×2)로 세정하고, 포화 식염수(30mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 1:3, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(180mg, 수율: 56%)을 수득하였다.

¹H NMR(400MHz, DMSO-d₆) δ8.19(s, 1H), 8.02(s, 1H), 7.94(s, 1H), 7.91(d, J = 5.4Hz, 1H), 6.84(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.62(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.35(d, J = 5.4Hz, 1H), 5.14 (s, 1H), 3.90(s,3H), 2.66(s, 3H)

MS(ESI+): m/z 296.1[M+H]⁺

단계 4: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-메틸아미노-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아의 합성:

디클로로메탄(2mL) 중의 4-(3-메틸아미노-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(170mg, 0.576mmol) 및 4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐이소시아네이트(127.6mg, 0.576mmol) 용액을 실온에서 12시간 교반하고, 이어서 여과하고, 얻어진 백색 고체를 회수하여, 디클로로메탄으로 세정하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(67mg, 수율: 22.5%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.16(s, 1H), 8.91(s, 1H), 8.20(s, 1H), 8.11(s, 1H), 7.95(d, J = 5.1Hz, 2H), 7.94(s, 1H), 7.66-7.60(m, 2H), 7.53(d, J = 9.0Hz, 2H), 7.09(d, J = 9.0Hz, 2H), 6.47(d, J = 5.1Hz, 1H), 4.40(br s, 1H), 3.91(s, 3H), 2.69(d, J = 4.8Hz, 3H)

MS(ESI+): m/z 517.1[M+H]⁺

실시예 8

FD-2013037:

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-메톡시-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아

제조 방법:

단계 1: 2-클로로-3-메톡시-4-요오도피리딘의 합성:

메탄올(10mL) 중의 2-클로로-3-플루오로-4-요오도피리딘(1.05g, 4.08mmol) 및 나트륨메톡사이드(0.22g, 4.08mmol)를 45℃에서 2시간 교반하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 물(50mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(50mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 물(50mL×2)로 세정하고, 식염수(50mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 = 100:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(0.58g, 수율: 53%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ7.92(d, J = 5.1Hz, 1H), 7.86(d, J = 5.1Hz, 1H), 3.83(s, 3H)

MS(ESI+): m/z 269.8[M+H]⁺

단계 2: 2-클로로-3-메톡시-4-(4-아미노페녹시)피리딘의 합성:

밀봉 튜브에서, 무수 디메틸설폭사이드(5mL) 중의 4-아미노페놀(0.172g, 1.58mmol), 2-클로로-3-메톡시-4-요오도피리딘(425mg, 1.58mmol) 및 칼륨 tert-부톡사이드(0.177g, 1.58mmol) 용액을 155℃에서 5시간 교반하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 물(30mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(30mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 물(30mL×2)로 세정하고, 식염수(30mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 4:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(210mg, 수율: 53%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ7.95(d, J = 5.7Hz, 1H), 6.91- 6.86(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.63(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.62(d, J = 5.7Hz, 1H), 5.16(s, 2H), 3.90 (s, 3H)

MS(ESI+): m/z 251.0[M+H]⁺

단계 3: 4-(3-메톡시-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

디메틸폼아미드(DMF, 6mL) 중의 2-클로로-3-메톡시-4-(4-아미노페녹시)피리딘(130mg, 0.52mmol), 1-메틸피라졸-4-일-보론산피나콜에스테르(120mg, 0.58mmol), 탄산칼륨(215mg, 1.56mmol) 및 비스(트리페닐포스핀)디클로로팔라듐(II)(90mg, 0.127mmol)의 혼합물과 물(1mL)을 아르곤 가스로 5분간 버블링하고, 이어서 아르곤 가스의 분위기 하에 100℃에서 5분간 교반하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 물(30mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(30mL×3)로 추출하였다. 유기상들을 합쳤다. 합친 유기상들을 물(30mL×2)로 세정하고, 식염수(30mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 1:3, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(40mg, 수율: 26%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ8.27(s, 1H), 8.07(d, J = 5.4Hz, 1H), 8.00(s, 1H), 6.87(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.62(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.41(d, J = 5.4Hz, 1H), 5.12(s, 2H), 3.91(s, 3H), 3.89(s, 3H)

MS(ESI+): m/z 297.1[M+H]⁺

단계 4: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(3-메톡시-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아의 합성:

디클로로메탄(5mL) 중의 4-(3-메톡시-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(40mg, 0.135mmol) 및 4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐이소시아네이트(30mg, 0.135mmol) 용액을 실온에서 12시간 교반하고, 이어서 여과하고, 이어서 얻어진 백색 고체를 회수하여, 디클로로메탄으로 세정하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(50mg, 수율: 71%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆) δ9.18(s, 1H), 8.95(s, 1H), 8.30(s, 1H), 8.17-8.08(m, 2H), 8.02(s, 1H), 7.69-7.59(m, 2H), 7.55(d, J = 9.0Hz, 2H), 7.15(d, J = 9.0Hz, 2H), 6.55(d, J = 5.4Hz, 1H), 3.91(s, 3H), 3.89(s, 3H)

MS(ESI+): m/z 517.9 [M+H]⁺

비교예 1

비교 화합물: 특허출원 문헌 WO0042012A1에 개시된 바와 같은 방법에 의해 제조된 소라페닙 유리 염기

비교예 2

화합물 번호 FD-1210005

CN201110435847.9에 개시된 실시예 1의 화합물

제조 방법:

단계 1: 2-클로로-4-(4-아미노페녹시)피리딘의 합성:

40mL의 무수 디메틸설폭사이드 중의 4-아미노페놀(4.35g, 39.8mmol) 용액을 질소 가스로 10분간 버블링하고, 이어서 칼륨 tert-부톡사이드(4.7g, 41.8mmol)를 첨가하고 실온에서 30분간 교반하고, 이어서 2-클로로-4-플루오로피리딘(5g, 38.0mmol)을 첨가하여 반응 혼합물을 수득하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 서서히 가열하고 그 온도에서 2시간 반응하고, TLC가 반응이 완료되었다는 것을 보였을 때에 실온으로 냉각하고, 이어서 물로(100mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(100mL×3)로 추출하였다. 에틸아세테이트상들(ethyl acetate phases)을 합치고, 물(100mL×2)로 세정하고, 식염수(100mL)로 다시 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 4:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(7.26g, 수율: 86.8%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, CDCl₃): δ4.07(br s, 2H), 6.72(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.75-6.77(m, 2H), 6.88(d, J = 8.7Hz, 2H), 8.19(d, J = 5.4Hz, 1H).

MS(ESI+) : 221.1[M+H]⁺

단계 2: 4-(2-(1-메틸-4-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

질소 가스의 보호 하에, 2-클로로-4-(4-아미노페녹시)피리딘(5.7g, 25.9mmol) 및 1-메틸피라졸-4-일-보론산피나콜에스테르(6.47g, 31.1mmol)를 테트라하이드로푸란(THF, 70mL)에 용해하였다. 교반 하에, 탄산칼륨(10.7g, 77.5mmol) 및 물(17.1mL)을 첨가하고, 이어서 촉매로서 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(1.5g, 1.29mmol)을 어두운 곳에서 첨가하고, 70℃에서 24시간 교반하고, 실온으로 냉각하여, 농축하고, 이어서 물(50mL)로 희석하여, 에틸아세테이트(50mL×3)로 추출하였다. 에틸아세테이트상들을 합치고, 물(50mL×2)로 세정하고, 식염수(50mL)로 다시 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 1:2, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(5.85g, 수율: 85%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, CDCl₃): δ3.84 (br s, 2H), 3.92(s, 3H), 6.60(dd, J = 2.4, 5.7Hz, 1H), 6.71(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.91(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.94(d, J = 2.1Hz, 1H), 7.86(s, 2H,), 8.34(d, J = 5.7Hz, 1H).

MS(ESI+) : 267.1[M+H]⁺

단계 3: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아의 합성:

4-(2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(6.7g, 25.1mmol)을 에틸아세테이트(80mL)에 용해하고, 질소 가스의 보호 하에, 3-트리플루오로메틸-4-클로로-페닐이소시아네이트(5.6g, 25.1mmol)을 첨가하고, 실온에서 12시간 교반한 후, 다량의 고체를 침전시켰다. 용매의 부피가 40mL일 때까지 반응 혼합물을 농축하고, 흡인 여과하고, 에틸아세테이트로 세정하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(7.5g, 수율: 60.9%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆): δ3.88 (s, 3H), 6.63(d, J = 3.9Hz, 1H), 7.15(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.21(s, 1H), 7.57-7.69(m, 4H), 7.96(s, 1H), 8.12(s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.37(d, J = 5.4Hz, 1H), 8.93(s, 1H), 9.17(s, 1H).

MS(ESI+) : 488.1[M+H]⁺

비교예 3

화합물 번호 FD-2013016.

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(2-(1-메틸-피라졸-4-일)-5-플루오로-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아;

제조 방법:

단계 1: 2-클로로-4-요오도-5-플루오로피리딘의 합성

100mL의 삼구 플라스크(three necked flask) 내에서, 2-클로로-5-플루오로피리딘(2.65g, 20.1mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(30mL)에 용해하고, 질소 가스의 보호 하에, -78℃에서 30분간 교반하였다. n-펜탄(16.27mL, 21.1mmol) 중의 tert-부틸리튬 용액을 서서히 적하하고, 첨가 후에, 반응물을 그 온도에서 90분간 반응시켰다. 이어서, 무수 테트라하이드로푸란(10mL) 중의 요오드(6.13g, 24.2mmol) 용액을 서서히 적하하였다. 첨가 후에, 상기 온도를 실온으로 서서히 증가시켰다. 포화 염화암모늄 용액(100mL)을 첨가하고, 이어서 물(50mL)을 첨가하고, 이어서 상분리(phase separation)를 실시하고, 수상(water phase)을 50mL, 40mL, 200mL의 에틸아세테이트로 따로따로 한번 추출하였다. 유기상들을 합치고, 유기상을 포화 티오황산나트륨 용액(50mL×2)으로 세정하고, 식염수(50mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트= 100:1, v/v)에 의해 정제하여 황색 고체로서 생성물(2g, 수율: 39%)을 수득하였다.

MS(ESI+): 257.9[M+H]⁺

단계 2: 2-클로로-5-플루오로-4-(4-아미노페녹시)피리딘의 합성:

4-아미노페놀(0.55g, 5mmol)을 무수 디메틸설폭사이드(15mL)에 용해하고, 질소 가스로 10분간 퍼지(purge)하고, 이어서 칼륨 t-부톡사이드(0.58g, 5.2mmol)를 첨가하여, 실온에서 30분간 교반하고, 2-클로로-4-요드-5-플루오로피리딘(1.3g, 5mmol)을 첨가하여, 실온에서 5시간 반응시켰다. TLC은 반응이 완료되었음을 보였다. 에틸아세테이트(50mL)를 첨가하여, 충분히 교반하고, 이어서 물(100mL)을 첨가한 후에, 분리를 실시하여, 에틸아세테이트(50mL×3)로 수상(water phase)을 추출하였다. 에틸아세테이트상(ethyl acetate phases)을 합쳐, 물(50mL×2)로 세정하고, 식염수(50mL×2)로 다시 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 4:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(0.2g 수율: 16.8%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆): δ5.24 (br s, 2H), 6.64(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.65(s, 1H), 6.94(d, J = 8.7Hz, 2H), 8.44(d, J = 3.0Hz, 1H).

MS(ESI+) : 239.1[M+H]⁺

단계 3: 4-(5-플루오로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

질소 가스의 보호 하에, 2-클로로-5-플루오로-4-(4-아미노페녹시)피리딘(200mg, 0.84mmol) 및 1-메틸피라졸-4-보론산피나콜에스테르(175mg, 0.84mmol)를 테트라하이드로푸란(THF, 5mL)에 용해하고, 탄산칼륨(347mg, 2.51mmol) 및 물(0.84mL)을 첨가하고, 산소를 제거하고, 아르곤 가스의 보호 하에, 촉매로서 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(48mg, 0.04mmol)을 어두운 곳에서 첨가하고, 85℃에서 24시간 교반하고, 이어서 TLC가 반응이 완료되었음을 보였을 때 실온으로 냉각하였다. 이어서, 에틸아세테이트와 물을 첨가하고(각각에 대하여 20mL), 상분리를 실시하여, 에틸아세테이트(20mL×2)로 수상을 추출하였다. 에틸아세테이트상들을 합치고, 식염수(20mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 4:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(50mg, 수율: 21%)을 수득하였다.

¹H NMR(300 MHz, DMSO-d₆): δ3.82(s, 3H), 5.16(br s, 2H), 6.63(d, J = 8.7Hz, 2H), 6.89(d, J = 6.6Hz, 1H), 6.91(d, J = 8.7Hz, 2H), 7.76(s, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.46(d, J = 3.0Hz, 1H).

MS(ESI+) : 285.0[M+H]⁺

단계 4: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(5-플루오로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아의 합성:

4-(5-플루오로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(50mg, 0.176mmol)을 디클로로메탄(2mL)에 용해하고, 질소 가스의 보호하에, 4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐이소시아네이트(46mg, 0.208mmol)를 첨가하여 실온에서 12시간 교반하였다. 다량의 고체를 침전시켜, 흡인 여과하고, 디클로로메탄으로 세정하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(61mg, 수율: 68.6%)을 수득하였다.

¹HNMR (300MHz, DMSO-d₆): δ3.83 (s, 3H), 7.11(d, J = 6.6Hz, 1H), 7.18(d, J = 9.0Hz, 2H), 7.56(d, J = 9.0Hz, 2H), 7.60-7.67(m, 2H), 7.83(s, 1H), 8.11(d, J = 2.1Hz, 1H), 8.16(s, 1H), 8.52(d, J = 2.7Hz, 1H), 8.95 (s, 1H), 9.17(s, 1H).

MS(ESI+) : 506.1[M+H]⁺

단계 5:1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(5-플루오로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아p-톨루엔설포네이트의 합성:

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(5-플루오로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아(55mg, 0.109mmol) 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(25mg, 0.131mmol)을 무수 에탄올(2mL)에 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 가열 환류하고, 고체가 완전히 용해될 때까지 무수 에탄올을 첨가하였다. 얻어진 투명한 용액을 여과하여, 여과액을 하룻밤 방치하고, 이어서 흡인 여과하고, 얻어진 백색 고체를 회수하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(42mg, 수율: 57%)을 수득하였다.

1H NMR(300MHz, DMSO) δ9.28(s, 1H), 9.08(s, 1H), 8.64(d, J = 3.2Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.12(d, J = 1.7Hz, 1H), 7.90(s, 1H), 7.74 - 7.55(m, 4H), 7.50(dd, J = 5.3, 2.8Hz, 2H), 7.26 - 7.07(m, 5H), 3.84(s, 3H), 2.29(s, 1H).

비교예 4

화합물 번호 FD-2013019.

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(2-(1-메틸-4-피라졸-4-일)-5-클로로-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아;

제조 방법:

단계 1: 2,5-디클로로-4-요오도피리딘의 합성

100mL의 삼구 플라스크 내에서, 2,5-디클로로피리딘(3.0g, 20.3mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(30mL)에 용해하고, 질소 가스의 보호 하에, 온도를 -78℃로 감소시켰다. 30분 후에, n-헥산(8.9mL, 21.3mmol) 중의 2.4M n-부틸리튬 용액을 서서히 적하하였다. 첨가 후에, 그 온도에서 90분간 반응을 실시하고, 이어서 무수 테트라하이드로푸란(10mL) 중의 요오드 용액(6.13g, 24.2mmol)을 반응계에 서서히 적하하고, 이어서 그 온도를 실온으로 증가시켰디. 포화 염화암모늄 용액(100mL)을 첨가하고, 물(50mL)도 첨가하고, 이어서 상분리를 실시하고, 수상을 50mL, 40mL, 200mL의 에틸아세테이트로 각각 한번 추출하였다. 유기상들을 합치고, 포화 티오황산나트륨 용액(50mL×2)과 식염수(50mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하여 황색 고체로서 미정제 생성물(crude product)(4g, 수율: 72%)을 수득하였다. 미정제 생성물을 더 정제하지 않고 다음의 공정에서 직접 사용하였다.

MS(ESI+): 273.9[M+H]⁺

단계 2: 2,5-디클로로-4-(4-아미노페녹시)피리딘의 합성:

4-아미노페놀(1.59g, 14.6mmol)을 무수 디메틸설폭사이드(30mL)에 용해하고, 질소 가스로 10분간 퍼지하고, 칼륨 t-부톡사이드(1.68g, 15mmol)를 첨가하고, 실온에서 30분간 교반하고, 2,5-디클로로-4-요오도피리딘(4g, 14.6mmol)을 첨가하고, 이어서 실온에서 5시간 반응시켜, TLC가 반응이 완료되었음을 보였다. 에틸아세테이트(80mL)를 첨가하고, 충분히 교반하고, 이어서 물(100mL)을 첨가하였다. 상분리 후에, 수상을 에틸아세테이트(100mL×3)로 추출하였다.

에틸아세테이트상들을 합쳐, 물(150mL×2)로 세정하고, 식염수(100mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 4:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(0.34g, 수율: 9.1%)을 수득하였다.

MS(ESI+): 255.0[M+H]⁺

단계 3: 4-(5-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

질소 가스의 보호 하에, 2,5-디클로로-4-(4-아미노페녹시)피리딘(340mg, 1.33mmol) 및 1-메틸피라졸-4-일-보론산피나콜에스테르(278mg, 1.33mmol)을 테트라하이드로푸란(THF, 8mL)에 용해하고, 탄산칼륨(548mg, 3.97mmol) 및 물(1.33mL)을 첨가하고, 이어서 촉매로서 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(76mg, 0.06mmol)을 어두운 곳에서 첨가하고, 이어서 85℃에서 24시간 교반하고, TLC가 반응이 완료되었음을 보였을 때에, 실온으로 냉각하여, 에틸아세테이트와 물을 첨가하였다(각각에 대하여 20mL). 상분리 후에, 수상을 에틸아세테이트(20mL×2)로 추출하였다. 에틸아세테이트상들을 합쳐, 식염수(20mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 4:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(75mg, 수율: 19%)을 수득하였다.

MS(ESI+):301.0[M+H]⁺

단계 4: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(5-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아의 합성:

4-(5-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(75mg, 0.25mmol)을 디클로로메탄(2mL)에 용해하고, 질소 가스의 보호 하에, 4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐이소시아네이트(67mg, 0.3mmol)를 첨가하고, 이어서 실온에서 12시간 교반한 후에, 다량의 고체를 침전시키고, 이어서 흡인 여과하고, 디클로로메탄으로 세정하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(78mg, 수율: 59.7%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆): δ3.82(s, 3H), 6.98(s, 1H), 7.18(d, J = 9.0Hz, 2H), 7.59(d, J = 9.0Hz, 2H), 7.63-7.66(m, 2H), 7.82(s, 1H), 8.12(d, J = 2.1Hz, 1H), 8.22(s, 1H), 8.59(s, 1H), 9.05(s, 1H), 9.25(s, 1H).

MS(ESI+) : 522.1[M+H]⁺

단계 5: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(5-클로로-2-(1-메틸-피라졸-4일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아p-톨루엔설포네이트의 합성:

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(5-클로로-2-(1-메틸-4-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아(70mg, 0.134mmol) 및 p-톨루엔설폰산 일수화물(31mg, 0.161mmol)을 무수 에탄올(2mL)에 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 가열 환류하고, 고체가 완전히 용해될 때까지 무수 에탄올을 더 첨가하였다. 얻어진 투명한 용액을 여과하여, 여과액을 하룻밤 방치하고, 이어서 흡인 여과하고, 얻어진 백색 고체를 회수하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(57mg, 수율: 61%)을 수득하였다.

¹H NMR (300MHz, DMSO) δ9.25(s, 1H), 9.05(s, 1H), 8.59(s, 1H), 8.22(s, 1H), 8.12(d, J = 2.2Hz, 1H), 7.87(s, 1H), 7.72 - 7.54(m, 4H), 7.48(d, J = 8.0Hz, 2H), 7.18(d, J = 9.0Hz, 2H), 7.11(d, J = 7.9Hz, 2H), 6.98(s, 1H), 3.82(s, 3H), 2.29(s, 3H).

비교예 5

화합물 번호 FD-2013017

1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(2-(1-메틸-피라졸-4일)-6-메톡시-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아

제조 방법:

단계 1: 2,6-디클로로-4-(4-아미노페닐)피리딘

4-아미노페놀(2.39g, 21.9mmol)을 무수 디메틸설폭사이드(30mL)에 용해하고, 질소 가스로 10분간 퍼지하고, 칼륨 t-부톡사이드(2.45g, 21.9mmol)를 첨가하고, 이어서 실온에서 30분간 교반하였다. 2,4,6-트리클로로피리딘(4g, 21.9mmol)을 첨가하고, 이어서 45℃에서 5시간 반응시켜, TLC가 반응이 완료되었음을 보였다. 에틸아세테이트(80mL)를 첨가하고, 충분히 교반하고, 이어서 물(100mL)을 첨가한 후에, 상분리를 실시하였다. 수상을 에틸아세테이트(100mL×3)로 추출하였다. 에틸아세테이트상들을 합쳐, 물(150mL×2)로 세정하고, 식염수(100mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하여 담황색 고체로서 미정제 생성물(5.1g, 수율: 91%)을 수득하였다. 미정제 생성물을 더 정제하지 않고 다음의 공정에서 직접 사용하였다.

MS(ESI+): 255.0[M+H]⁺

단계 2: 2-클로로-6-메톡시-4-(4-아미노페녹시)피리딘의 합성

2,6-디클로로-4-(4-아미노페닐)피리딘(7.2g, 28.2mmol)을 무수 메탄올(50mL)에 용해하고, 나트륨메톡사이드(1.52g, 28.2mmol)를 첨가하고, 이어서 24시간 환류한 후에, 증류하여 감압 하에서 건조시켰다. 이어서 물(100mL)을 첨가하였디. 얻어진 용액을 에틸아세테이트(100mL×3)로 추출하고, 식염수(100mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르:에틸아세테이트 8:1)에 의해 정제하여 황색 고체로서 생성물(0.88g, 수율: 12%)을 수득하였다.

MS(ESI+): 251.0[M+H]⁺

단계 3: 4-(6-메톡시-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린의 합성:

질소 가스의 보호 하에, 2-클로로-6-메톡시-4-(4-아미노페녹시)피리딘(440mg, 1.76mmol) 및 1-메틸피라졸-4-일-보론산피나콜에스테르(368mg, 1.76mmol)을 테트라하이드로푸란(THF, 8mL)에 용해시시키고, 탄산칼륨(726mg, 5.25mmol) 및 물(1.76mL)을 첨가하고, 이어서 촉매로서 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(100mg, 0.08mmol)을 어두운 곳에서 첨가하고, 85℃에서 24시간 교반한 후에, TLC가 반응이 완료되었음을 보였을 때에 실온으로 냉각하였다. 이어서, 에틸아세테이트와 물(각각에 대하여 20mL)을 첨가한 후에, 상분리를 실시하였다. 수상을 에틸아세테이트(20mL×2)로 추출하고, 에틸아세테이트상들을 합쳐, 식염수(20mL×2)로 세정하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 여과, 농축하였다. 잔사를 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 석유 에테르:에틸아세테이트 4:1, v/v)에 의해 정제하여 담황색 고체로서 생성물(400mg, 수율: 77%)을 수득하였다.

MS(ESI+): 297.2[M+H]⁺

단계 4: 1-(4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-(4-(6-메톡시-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)페닐)우레아의 합성:

4-(6-메톡시-2-(1-메틸-피라졸-4-일)-피리딘-4-일-옥시)아닐린(400mg, 1. 35mmol)을 디클로로메탄(2mL)에 용해하고, 질소 가스의 보호 하에, 4-클로로-3-트리플루오로메틸페닐이소시아네이트(300mg, 1.35mmol)를 첨가하고, 실온에서 12시간 교반하고, 이어서 고체를 침전시켜, 흡인 여과하고, 디클로로메탄으로 세정하고, 건조시켜 백색 고체로서 생성물(300mg, 수율: 43%)을 수득하였다.

¹H NMR(300MHz, DMSO-d₆): δ3.84(s, 3H), 3.85(s, 3H), 6.25(d, J = 2.4Hz, 1H), 7.00-7.03(m, 1H), 7.12(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.51(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.60-7.68(m, 2H), 7.86(s, 1H), 8.07(s, 1H), 8.13(d, J = 2.4Hz, 1H), 8.94(s, 1H), 9.23(s, 1H).

MS(ESI+) : 518.1[M+H]⁺

실험예 1: VEGFR2 키나제의 저해 활성을 위한 화합물의 결정

1. 재료 및 기기

EnVision 2104 멀티-라벨 마이크로플레이트 검출기(multi-label microplate detector)(PerkinElmer);

OptiPlate-384 White Opaque 384-웰 마이크로웰 플레이트(well microwell plate)(Cat.6007290, PerkinElmer);

HTRF®KinEASE^TM- TK kit(Cat.62 TKOPEC, Cisbio);

VEGFR2(Cat: k2643, Sigma);

5×키나제 완충액(Cat: PV3189, Invitrogen);

ATP 10mM(Cat.PV3227, Invitrogen);

DTT 1M(Cat.D5545, Sigma);

MgCl₂ 1M(Cat.M8266, Sigma);

MnCl₂ 1M(Cat.244589, Sigma);

시험 화합물(Test compounds): 실시예에서 제조된 화합물

대조군 화합물(Control compounds): 비교예에서 제조된 화합물

2. 실험 단계

2.1 VEGFR2 키나제 시약의 조제

표 1 VEGFR2 키나제 반응계에서의 성분 및 그 농도

1×키나제 완충액: 5×키나제 완충액(Invitrogen) 200μL, 1M MgCl 5μL, 1M DTT 1μL, 1M MnCl₂ 1μL, 및 ddH₂O 793μL 함유하는 1×키나제 완충액 1mL

5×TK 기질-비오틴(substrate-biotin) 및 ATP 작동유체(working fluid): TK기질-비오틴 및 ATP의 농도로서, 표 1을 참조하기 바란다. TK 기질-비오틴 및 ATP를 1×키나제 완충액에 의해 반응농도의 5배로 희석하였다;

5×키나제 작동유체: VEGFR2 키나제의 농도로서, 표 1을 참조하기 바란다. 5×키나제 작동유체를 1×키나제 완충액으로 조제하였다;

4×Sa-XL665 작동유체: 반응 시의 Sa-XL665(Cisbio)의 농도로서, 표 1을 참조하기 바란다. 4×Sa-XL665 작동유체를 어세이 완충액(assay buffer)(Cisbio)으로 조제하였다.

4×TK Ab-크립테이트 작동유체: TK Ab-크립테이트(Cisbio)를 작동유체로서 어세이 완충액(Cisbio)으로 100배 희석하였다;

2.2 실험 절차

HTRF KinEASE TK 키트(kit)의 실험 절차

모든 시약을 상술한 바와 같이 조제한 후에, 효소를 제외한 시약을 실온과 균형을 이루게 하고, 이어서 시료 추가를 실시하였다.

일정 농도에서의 기질-비오틴, ATP, VEGFR2 키나제 및 화합물을 실온에서 20분간 1×키나제 완충액에서 반응시켰다. 시험 화합물에 대한 농도는 0∼100μM이었고, 보조용매(co-solvent)로서 2.5% DMSO를 사용하였다. 모든 반응웰(reaction well)에, 4×Sa-XL665 작동유체 5μl 및 4×TK Ab-크립테이트 작동유체 5μl를 첨가하였다. 실온에서 1시간 반응시킨 후에, 형광신호(320nm에서 여기(勵起), 665nm, 615nm에서 발광)를 ENVISION 검출기(PerkinElmer)에 의해 검출하였다. 전체 활성웰(full-active well) 및 백그라운드 신호웰(background signal well)에 의거하여, 각 웰에 대한 저해율(inhibition rate)을 계산하여, 평균값을 복제웰(duplicate well)에 사용하였다. 전문 소프트웨어 Graphpad PRISM 5.0을 이용하여 각 시험 화합물에 대한 반최대저해농도(a half maximal inhibitory concentration)를 피팅(fitting)하였다.

시료 추가의 흐름도(flow chart)는 다음과 같다:

2.3 데이터 분석

발광비(Emission light ratio, ER) = 665nm 발광신호/ 615nm 발광신호

저해율 = (ER_양성-ER_시료)/(ER_양성-ER_음성)*100%

3. 실험 결과

HTRF KinEASE TK 키트를 사용하여 키나제 VEGFR2에 대한 화합물의 IC₅₀ 값을 결정하였다. 100μM 및 4배의 희석구배(gradient dilution)로부터 출발한 화합물의 최종 농도를 측정하여 10개의 농도를 제공하였다. 각 농도에 대하여 복제웰을 사용하였다. DMSO의 최종 농도를 반응계에서 1%로 조절하였다. 실험 결과를 표 2 및 도 1에 나타내었다.

표 2 VEGFR2 키나제의 저해 활성을 위한 본 발명 화합물의 IC₅₀ 결정

4. 실험 결과:

본 발명에 따른 실시예 화합물 모두는 IC₅₀ 값이 1000 미만으로, 본 발명에 따른 화합물이 키나제 VEGFR2의 저해 활성이 뛰어나, 뛰어난 항암제로서 연구될 수 있다는 것을 나타냈습니다.

시판 중인 뛰어난 항암제 소라페닙과 비교하여, 본 발명의 바람직한 화합물은 키나제 VEGFR2의 저해 활성의 면에서, 시판되고 있는 약제 소라페닙(비교 화합물 1)보다 2-3배 높고, 중국 특허출원 CN201110435847.9에 개시된 화합물(비교 화합물 2)보다도 양호하였다. 본 발명의 실시예 1에서 제조한 화합물의 IC₅₀ 값은 각각 소라페닙(유리 염기)과 비교 화합물 2의 0.32배와 0.15배, 즉 그 저해 활성은 각각 소라페닙과 비교 화합물 2의 3.13배와 6.6배이었다. 실시예 2에서 제조한 화합물의 IC₅₀ 값은 각각 소라페닙(유리 염기)과 비교 화합물 2의 0.62배와 0.34배, 즉, 그 저해 활성은 각각 소라페닙과 비교 화합물 2의 1.61배와 3.4배이었다. 실시예 4에서 제조한 화합물의 IC₅₀ 값은 각각 소라페닙(유리 염기)과 비교 화합물 2의 0.75배와 0.36배, 즉 그 저해 활성은 각각 소라페닙과 비교 화합물 2의 1.3배와 2.7배이었다. 실시예 3에서 제조한 화합물의 IC₅₀ 값은 소라페닙(유리 염기)의 2.5배, 즉 그 저해 활성은 소라페닙의 1.5배로, 비교 화합물 2와 필적할 만하였고, 즉 그 저해 활성은 필적할 만하였다.

따라서, 상기의 실험 결과로부터, 본 발명에 따른 화합물은 VEGFR2 키나제 의 저해 활성이 매우 뛰어나다는 것을 알 수 있다.

본 발명의 일반식 II에서의 X3, X4 및 X5의 비교에 의해, 본 발명에 따른 화합물은 비교예 3, 4 및 5보다도 분명히 양호하다.

실험예 2: 종양 세포의 생체외 항증식(in vitro anti-proliferation)의 IC₅₀ 에 대한 본 발명에 따른 화합물의 결정

1. 재료 및 방법

세포주(cell strain):

MDA-MB-231 인간 유방암 세포주(Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences로부터 구입);

A498 인간 신장암 세포주(Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences로부터 구입);

HCT116 인간 결장암 세포주(Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences로부터 구입);

786-Ｏ 인간 투명 신세포암 세포주(Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences로부터 구입);

MiaPaCa-2 인간 췌장암 세포주(American ATCC로부터 구입);

SK-ＯV-3 인간 난소암 세포주(Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences로부터 구입);

HepG2 인간 간암 세포주(Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences로부터 구입);

NCI-H460 인간 대세포 폐암 세포주(Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences로부터 구입);

HL-60 인간 급성 골수성 백혈병 세포주(Shanghai Institute of Cell Biology, Chinese Academy of Sciences로부터 구입);

시약 및 소모 재료:

셀 카운팅 키트-8(Cell Counting Kit-8)(Cat＃ CK04-13, Dojindo);

96-웰 플레이트(96-well plate)(Cat# 3599, Corning Costar);

소태아 혈청(fetal bovine serum) (Cat#10099-141, GIBCO);

표 3에서의 배양배지(Culture media)(Invitrogen);

데스크 탑 ELISA 기기 스펙트라 맥스 M5 마이크로플레이트 리더(Desk-top ELISA instrument Spectra Max M5 Microplate Reader)(Molecular Devices);

시험 화합물: 실시예에서 제조한 화합물

대조군 화합물: 비교예에서 제조한 화합물

2. 실험 단계

2.1 시약 조제

표 3 배양배지(culture medium)의 조제

화합물의 조제: DMSO를 사용하여 화합물을 10mM의 최종 농도로 희석하였다.

2.2 세포 배양

a) 대수 증식기(logarithmic growth phase)의 세포를 회수, 계수하여, 완전배지(complete medium)에 재현탁(re-suspend)하였다.

b) 세포의 농도를 적합한 농도로 조절하여, 그 세포를 웰(well) 당 100μl의 세포 현탁액(cell suspension)으로 96-웰 플레이트(96-well plate)에 파종하였다.

c) 세포를, 배양기 내에서 37℃, 100%의 상대습도, 5% CO₂의 조건 하에 24시간 배양하였다.

2.3 IC₅₀ 어세이(Assay)

a) 대수 증식기의 세포를 회수, 계수하여, 완전배지에 재현탁하였다. 세포의 농도를 적합한 농도(세포 밀도의 최적 실험 결과에 따라 결정)로 조절하여 그 세포를 웰 당 100μl의 세포 현탁액으로 96-웰 플레이트에 파종하였다. 세포를, 배양기 내에서 37℃, 100%의 상대습도, 5% CO₂의 조건 하에 24시간 배양하였다.

b) 배양배지를 이용하여 시험 화합물을 500μM로 희석하고, 이어서 희석 구배(gradient dilution)를 8회 실시하였다. 세포를 25μl/웰에서 추가하였다. 상기 화합물의 최종 농도를 10개의 농도를 포함하여, 100μM 및 0μM의 범위에서 4배 희석하였다.

c) 세포를, 배양기 내에서 37℃, 100%의 상대습도, 5% CO₂의 조건 하에 72시간 배양하였다.

d) 배양배지를 꺼내 폐기하고, 10% CCK-8을 함유하는 완전배지를 추가하고, 이어서 세포를 배양기 내에서 37℃의 조건 하에 2-4시간 배양하였다.

e) 가볍게 흔든 후에, SprctraMax M5 Microplate Reader를 이용하여 450nm 파장에서 흡광도를 결정하고, 기준(reference)으로서 650nm 파장에서의 흡광도를 사용하여 저해율을 계산하였다.

2.4 데이터 처리

약제의 종양 세포 증식 저해율은 다음 식으로 계산된다:

종양 세포 증식 저해율(%) = [(A_c-A_s)/(A_c-A_b]×100%

A: 시료(세포+CCK-8+시험 화합물)의 흡광도;

A_c: 음성 대조군(Cell+CCK-8+DMSO)의 흡광도;

A_b: 양성 대조군(배양배지+CCK-8+DMSO)의 흡광도;

IC₅₀ 곡선을 피팅하고 전문 소프트웨어 GraphPad Prism 5.0을 이용하여 IC₅₀ 값을 계산하였다.

3. 실험 결과

실험에 있어서, 종양 세포주의 생체외 항증식(in vitro anti-proliferation)의 IC₅₀ 값을 위해 본 발명에 따른 화합물을 결정하였다. 그 화합물의 최종 농도는 10개의 농도를 포함하여 100μM과 0μMd의 범위에서 4배 희석되었다.

실험 결과를 표 4에 나타냈다.

표 4 IC₅₀ (μM)

4. 실험 결론:

생체외에서 종양 세포의 항증식에 관한 실험에 있어서, 본 발명에 따른 화합물은 50% 저해농도 IC₅₀이 0∼20이었고, 이는 본 발명에 따른 화합물이 생체외에서 종양 세포의 저해 활성이 매우 뛰어나고 뛰어난 항암제로서 연구될 수 있었다 것을 나타냈다.

시판 중의 매우 뛰어난 항암제인 소라페닙과 비교하여, 본 발명에 따른 화합물은 SK-ＯV-3, HCT-116, 786-Ｏ 및 MDA-MB-231 등의 상이한 종양 세포주의 반최대저해농도(half maximal inhibitory concentration, IC₅₀)의 면에서 시판되고 있는 약제인 소라페닙에 비해 상당히 우수하였고(예를 들면, MDA-MB-231에 있어서, 실시예 1에서 제조한 화합물의 IC₅₀은 소라페닙의 0.28배이었고, 실시예 2에서 제조한 화합물의 IC₅₀은 소라페닙의 0.3배이었다); A498, MiaPaCa-2, HepG2, NCI-H460 및 HL-60 등의 종양 세포주의 반최대저해농도는 시판되고 있는 약제인 소라페닙에 필적할 만하였다.

본 실험은 본 발명에 따른 화합물이 종양 세포의 항증식 활성이 뛰어남을 증명하고 있다.

실험예 3: 생쥐에 있어서 본 발명에 따른 화합물의 약동학에 관한 연구

1. 재료 및 방법

1.1 시험 화합물

본 발명의 실시예, 비교예에서 제조한 화합물

1.2 실험 동물

CD-1 생쥐, 암컷, 체중 28-35g.

1.3 투여 경로

투여 경로: 정맥내 주사(IV); 경구(per os)(PO)

금식 조건: 물을 자유롭게 마실 수 있고, 금식은 없다.

2. 실험 방법

2.1 투여 및 시료 수집

2.1.1 투여

투여 전에 생쥐의 체중을 재고, 그 체중에 기초하여 투여 부피를 계산하였다(IV 그룹: 4mL/kg; PO 그룹: 10mL/kg).

투여 경로 및 용량: 정맥내(IV) 그룹: 1mg/kg; 경구(PO) 그룹: 5mg/kg).

시료: 플라즈마.

동물 그룹 분류(grouping): 각 시험 화합물에 대한 3마리 생쥐/그룹, IV 그룹 및 PO 그룹

2.1.2 시료 채취

투여 후에, 각각의 미리 정해진 시점(pre-determined time point) (5분, 15분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 24시간)에서 IV 그룹에서의 생쥐의 눈 가장자리로부터 30μL 전혈(whole blood)을 채취하고, 각각의 미리 정해진 시점(15분, 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 8시간, 24시간)에서 PO 그룹에서의 생쥐의 눈 가장자리로부터 30μL 전혈을 채취하였다. 전혈을 원심분리(6,000rpm, 5분간)하여 혈장을 얻었다. 더 분석을 위해 모든 혈장 시료를 -80℃의 냉장고에 보관하였다.

2.2 정량 분석 방법

LC/MS/MS의 조건은 이하와 같다:

이온화 모드: ESI, 양이온;

검출 모드: MRM;

정량 이온 FD2012015: 506.12/270.20; 내부 표준(테르페나딘):472.40/436.40;

시료 처리: 아세토니트릴 용액 중의 50ng의 테르페나진 용액을 사용하여 단백질을 침전시켰다;

시료: CD-1 생쥐 혈장(mouse plasma)(EDTA를 사용하여 혈액 응고를 방지);

시료 부피: 20μL;

크로마토그래픽 컬럼(chromatographic column): ACE C4 컬럼(50mm*2.1mm, 5micron)

이동상(moble phase): 기울기 용리(gradient elution), 이동상 A는 물(0.1% 폼산(formic acid)을 함유)이었고, 이동상 B는 아세토니트릴(0.1% 폼산을 함유)이었다;

유량(mL/분): 0.9;

컬럼 온도(℃): 실온;

주입 부피(μL): 5;

시간(분): 2.0.

3. 데이터 처리(data processing)

비구획 모델(non-compartment model)(WinNonlin 소프트웨어에 의해 계산)에 따라 약동학적 파라미터(pharmacokinetic parameters)를 평가하였다.

IV 파라미터: t₁ _/2(hr); C₀(ng/mL); AUC_last(hr*ng/mL); AUC_Inf(hr*ng/mL); AUC Extr(%); Vz(L/kg); Vss(L/kg); CL(mL/min/kg); MRT(hr).

PＯ 파라미터: t₁ _/2(hr); t_max(hr); C_max(ng/mL); AUC_last(hr*ng/mL); AUC_Inf(hr*ng/mL); AUC ExTr(%); MRT(hr); AUC/D(hr*mg/mL); F(%).

4. 실험 결과:

표 5 경구 투여 후 본 발명에 따른 화합물의 약동학적 파라미터

(각 그룹 당 3마리 생쥐로부터의 평균값)

주(註): Cmax: 피크 농도; AUC_last: 곡선 아래의 면적; F: 경구 생체이용률(Oral bioavailability)

5. 실험 결론:

실시예 1 및 2의 화합물은 대사 안정성, 피크 농도, 농도-시간의 곡선 아래의 면적, 및 경구 생체이용률의 면에서 시판되고 있는 소라페닙보다 상당히 우수하였고, 따라서 임상학적 적용에 전망이 매우 밝다. 이는, 일반식 I의 X3 위치에 치환기를 도입한 후에, 그 치환기(비교 화합물 2, 3, 4의 X3 위치에서 수소이다)가 용이하게 대사작용을 할 부위(site)를 차단하여, 그 화합물의 대사 안정성을 향상시키고, 생체내에서 화합물의 높은 혈액 농도를 보장함으로써, 본 발명에 따른 화합물의 효능을 더 높인다는 것을 나타냈다.

실험예 4

1. 세포 배양

37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기 내에, 불활성화된 10% 소태아 혈청, 100U/ml 페니실린 및 100μg/mL 스트렙토마이신 이외에 2mM 글루타민을 함유하는 RPMI-1640 배양배지에서 786-Ｏ 세포를 배양시켰다. 세포 배양 도중에, 초기 농도는 5×10⁵ cells/ml이었고, 세포가 100%의 세포 밀도에 도달할 때까지 그 세포를 3-4일 마다 다른 병들에 분리하였다. 대수 증식기에 있는 종양 세포는 생체내 종양 접종에 사용되었다.

2. 종양 세포의 접종 및 분류

PBS에서 8×10⁶cells/0.1ml 조건 하에 재현탁된 786-Ｏ 종양 세포를 이용하여 암컷 SCID-Beige 무모(無毛) 생쥐들(nude mice)에, 우측 횡흉부(right lateral thorax)에서 피하주사로 접종하였다. 종양이 800mm³의 부피로 성장되었을 때에, 무균 상태하에서, 종양을 제거하였다. 충분히 성장된 종양 조직을 2×2×2mm³의 크기의 종양 덩어리로 절단하였고, 이어서 이것을 사용하여 동물에 피하주사로 접종하였다. 종양이 약 100mm³의 부피로 성장되었을 때에, 생쥐를 분류하여 전체 5그룹, 그룹 당 8마리에 투여하였다.

3. 종양의 측정 및 실험 지표(experimental indexes)

버니어캘리퍼(Vernier caliper)를 이용하여, 종양의 부피를 주 2회 측정하였다. 종양의 장경(長徑)과 단경(短徑)을 측정하였다. 상기 부피를 일반식: 부피 = 0.5×장경×단경²에 의해 계산하였다. 최종 측정 후에, 동물을 도살하고 종양을 제거하여 무게를 쟀다. 각 그룹의 종양 무게에 근거하여, 종양 성장-저해율(tumor growth- inhibiting rate, TGI)을 계산하였다. 종양 성장-저해율(TGI) = (1-T/C)×100%이고, 여기서 T는 약제 투여군의 평균 종양 무게를 나타내고; C는 음성 대조군의 평균 종양 무게를 나타낸다. 데이터는 통계 분석에 의해 TGI≥60%이고 p＜0.05일 때에 효과적이었다.

표 6 786-Ｏ 인간화한 신장 투명세포(humanized renal clear cell)를 이종이식한, 종양을 가지고 있는 생쥐(xenograft tumor-bearing mice)(종양 무게)에 미치는 FD-2013018의 종양-저해 효과

주(註): ^a.평균값±표준오차; ^b.용매 대조군과의 비교; ^c블랭크 용매: 용매 DMA:Solutol HS-15:H₂O = 5:5:90(부피비)(DMA는 디메틸아세트아미드이며, Solutol HS-15는 BASF, CAS:61909-81-7로부터 구입); FD -2013018은 자유 형태로 존재하고; po는 per os를 의미하며, QD는 once a day를 의미한다.

P: 그룹 2(10mg/kg) 대 그룹 3(20mg/kg) = 0.999; 그룹 2 대 그룹 4(40mg/kg) = 0.386; 그룹 3 대 그룹 4 = 0.270.

실험예 5

1. 세포 배양

37℃, 5% CO₂ 조건의 배양기 내에, 불활성화된 10% 소태아 혈청, 100U/ml 페니실린 및 100μg/mL 스트렙토마이신 이외에 2mM 글루타민을 함유하는 McCoy'5 5a 배양배지에서 HCT116 세포를 배양시켰다. 세포 배양 도중에, 초기 농도는 5×10⁵ cells/ml이었고, 세포가 100%의 세포 밀도에 도달할 때까지 그 세포를 3-4일 마다 다른 병들에 분리하였다. 대수 증식기에 있는 종양 세포는 생체내 종양 접종에 사용되었다.

2. 종양 세포의 접종 및 분류

PBS에서 1.0×10⁷cells/0.1ml 조건 하에 재현탁된 HCT116 종양 세포를 이용하여 Balb/c 무모 생쥐들에, 우측 횡흉부에서 피하주사로 접종하였다. 종양이 800mm³의 부피로 성장되었을 때에, 무균 상태하에서, 그 동물을 도살하여, 종양을 제거하였다. 충분히 성장된 종양 조직을 2×2×2mm³의 크기의 종양 덩어리로 절단하였고, 이어서 이것을 사용하여 동물에 우측 횡흉부에서 피하주사로 접종하였다. 종양이 약 110mm³의 부피로 성장되었을 때에, 생쥐를 분류하여 전체 5그룹, 그룹 당 8마리에 투여하였다.

3. 종양의 측정 및 실험 지표

버니어캘리퍼를 이용하여, 종양의 부피를 주 2회 측정하였다. 종양의 장경과 단경을 측정하였다. 상기 부피를 일반식: 부피 = 0.5×장경×단경²에 의해 계산하였다. 최종 측정 후에, 동물을 도살하고 종양을 제거하여 무게를 쟀다. 종양 무게에 근거하여, 종양 성장-저해율(TGI)을 계산하였다. 종양 성장-저해율(TGI) = (1-T/C)×100%이고, 여기서 T는 시험 화합물 군의 평균 종양 무게를 나타내고; C는 용매 대조군의 평균 종양 무게를 나타낸다. 어세이(assay)가 종료되었을 때에, 실험 동물을 안락사시켰다.

표 7 HCT1166을 이종이식한, 종양을 가지고 있는 생쥐(종양 무게)에

미치는 FD-2013018의 종양-저해 효과

주(註): ^a.평균값±표준오차; ^b.대조군과의 비교; FD-2013018은 자유 형태(free form)이었고; 블랭크 용매는 표 6에 정의된 것과 동일하다;

P: 그룹 2(10mg/kg) 대 그룹 3(20mg/kg) = 0.687; 그룹 2 대 그룹 4(40mg/kg) = 0.248;

그룹 3 대 그룹 4 = 0.807.

비교 실험예 1:

수니티닙(Sunitinib)을 특허 WO0160814A1에 개시된 방법에 의하여 제조하였다.

동물 모델 준비:

충분히 성장된 786-Ｏ 고형 종양을 무균 상태하에서 약 1mm³의 평균 부피의 덩어리로 절단하였고, 이것을 사용하여 무모 생쥐에, 우측 앞다리 겨드랑이의 움푹 팬 부분(axillary cavity)에서 접종하였다. 종양이 250∼550mm³으로 성장될 때까지 종양 성장 상태를 정기적으로 관찰하였다.

분류 및 투여:

부피가 너무 크거나 작고 불규칙한 모양의 종양을 가지는 동물들은 폐기하였다. 양호한 상태에서 종양 부피가 250∼550mm³인 종양을 가지는 생쥐들을 전체 48 마리 선택하여 6개 그룹, 즉 용매 대조군 1개, 양성 대조군 3개 및 시험 시료군 2개로 나누었다. 양성 대조군과 시험 시료군 모두에 대하여 하루에 한번 위내에서(intragastrically) 투여하였다; 용매 제어군에 대하여는 하루에 한번 폴리옥시에틸렌 피마자유(caster oil)의 12.5% 에탄올 & 12.5% 물 용액으로 투여하였다; 위내 부피(intragastrical volume)는 10mL/kg이었다.

투여 기간 중에, 종양 직경을 매주 2회 측정하여, 종양 부피를 계산하고, 동물 체중을 기록하였다. 투여하였을 때까지 동물 상태를 관찰하고 이상 상태(abnormal state)를 기록하였다.

동물 도살:

동물을 CO₂로 도살하고, 종양을 제거하여 무게를 측정하고 사진을 찍었다. 동물을 육안 해부학적 처리하고, 장기들을 눈으로 관찰하여 정상 여부를 확인하였다.

관찰 지표:

종양 무게의 저해율(IR) = (W_C-W_T)/W_C

여기서, W_C 및 W_T는 각각 용매 대조군의 평균 종양 무게 및 약제 투여군의 평균 종양 무게를 나타냈다.

BW₀은 분류할 때에 칭량(稱量)한 동물의 체중(즉, d0)을 나타내며, BW_t는 항시 칭량한 동물의 체중을 나타냈다. 체중 감소율이 음의 값인 경우에는, 체중이 증가된다는 것을 의미한다.

통계적 방법:

마이크로소프트 오피스 엑셀 2003 소프트웨어를 이용하여 실험 데이터에 대하여 계산 및 관련 통계 처리를 하였다. 달리 특정되지 않는 한, 데이터를 평균±표준오차(Mwan±Standard Error, 평균±SE)로 나타냈고 t-시험은 2개의 그룹 간의 비교에 사용된다.

표 8 인간 신장암 786-Ｏ을 장기이식(transplantation)한 무모 생쥐의

종양 무게에 미치는 FD-1210005의 효과

주(註): 1. 용매 대조군과 비교하여, ^*P＜0.05, ^**P＜0.01;

2. 실험에 있어서, 소라페닙은 p-톨루엔설포네이트의 형태로 존재하였고, FD-1210005는 자유 형태로 존재하였다.

비교 실험예 2

동물 모델 준비:

무균 상태하에서, 대수 증식기에서 충분히 성장된 인간 HCT-116 세포 현탁액을 사용하여, 무모 생쥐에 인젝터(injector)를 통하여 우측 앞다리 겨드랑이의 움푹 팬 부분에서 피하주사로 접종하였다. 종양이 100∼300mm³의 부피로 성장될 때까지 종양 성장 상태를 정기적으로 관찰하였다.

분류 및 투여:

부피가 100∼300mm³인 종양을 가지는 생쥐 48마리를 선택하여, 6개 그룹, 즉 용매 대조군 1개, 양성 대조군 3개 및 시험 시료군 2개로 나누었다. 양성 대조군과 시험 시료군 모두에 대하여 하루에 한번 위내에서 투여하였다; 용매 제어군에 대하여는 하루에 한번 폴리옥시에틸렌 피마자유의 12.5% 에탄올 & 12.5% 물 용액으로 투여하였다; 위내 부피는 10mL/kg이었다.

투여 기간 중에, 종양 직경을 매주 2회 측정하여, 종양 부피를 계산하고, 동물 체중을 기록하였다. 투여하였을 때까지 동물 상태를 관찰하고 이상 상태를 기록하였다.

동물 도살:

동물을 CO₂로 도살하고, 종양을 제거하여 무게를 측정하고 사진을 찍었다. 사진을 찍은 후에, 각 종양 덩어리를 2개 부분으로 절단하여, 하나는 4% 파라폼알데하이드에 저장하고, 다른 하나는 동결 튜브(freezing tube)에 팩킹(packing)하여 액화질소로 냉동시켰다. 동물을 육안 해부학적 처리하고, 장기들(organs)을 눈으로 관찰하여 정상 여부를 확인하였다.

관찰 지표:

종양 무게의 저해율(IR) = (W_C-W_T)/W_C

통계적 방법:

마이크로소프트 오피스 엑셀 2003 소프트웨어를 이용하여 실험 데이터에 대하여 계산 및 관련 통계 처리를 하였다. 달리 특정되지 않는 한, 데이터를 평균±표준오차(평균±SE)로 나타냈고 t-시험은 2개의 그룹 간의 비교에 사용된다.

표 9 인간 결장암 HCT-116을 장기이식한 무모 생쥐의 종양 무게에

미치는 FD-1210005의 효과

주(註): 1. 용매 대조군과 비교하여, ^*P＜0.05, ^**P＜0.01;

2. "-"는 데이터 없음을 나타냈다.

3. 실험에 있어서, 소라페닙은 p-톨루엔설포네이트의 형태로 존재하였

고, FD-1210005는 자유 형태로 존재하였다.

생체내의 항종양(in vivo antitumor ) 실험의 연구 결과는, 실시예 2에서 제조한 화합물(FD-2013018)이 각각 786-Ｏ 및 HCT116을 이종이식한, 종양을 가지는 생쥐에 대하여 10mg/kg의 용량으로 82% 및 84.1%의 종양-저해 효과에 도달하였고, 40mg/kg의 용량으로 92%의 종양-저해 효과에도 도달한 반면; 비교 화합물 2(FD-2010005)가 각각 786-Ｏ 및 HCT116을 이종이식한, 종양을 가지는 생쥐에 대하여 20mg/kg의 용량으로 80% 및 67%의 종양-저해 효과에 도달하였고, 각각 60mg/kg의 용량으로 80% 및 71%의 종양-저해 효과에 도달하였을 뿐이라는 것을 보여주었다. 그 데이터는, 실시예 2에서 제조한 화합물(FD-2013018)이 생체내의 항종양 활성의 면에서 비교 화합물 2(FD-2010005)보다 우수하였고, 보다 낮은 유효 용량(effective dose)과 보다 강력한 항종양 활성을 가졌음을 보여주었다.

요약해서 말하면, 본 발명에 따른 화합물은 생체외 및 생체내에서 매우 강력한 항종양 활성을 가지며, 특히 약동학적 특성이 뛰어나다. 소라페닙과 비교예 2의화합물과 비교하여, 본 발명에 따른 화합물은 생체외 및 생체내에서 보다 강력한 항종양 활성과 보다 양호한 약동학적 특성을 갖는다.

본 발명의 실시형태에 관하여 상세히 설명하였지만, 당해 분야의 숙련자라면, 본 발명이 개시한 교시에 따라, 변경과 치환을 할 수 있고, 이들 변경과 변화 모두는 본 발명의 보호범위에 속할 것이라는 것을 이해할 것이다. 본 발명의 범위는 청구범위 및 그 등가물 어떠한 것에 의해서도 규정된다.

Claims

일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염:

여기서, X₁은 일반식 a의 치환되거나 비치환된 5원 헤테로 방향족 고리로부터 선택되고;

R₄, R₅ 및 R₆은 각각 탄소 원자, 질소 원자, 산소 원자 또는 황 원자로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고, R₈, R₉ 및 R₁₀은 각각 수소, 할로겐, C₁-C₄ 알킬, C₁-C₄ 알콕실로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되고;
X₂는 F와 H로 이루어지는 군으로부터 선택되고;
X₃은 할로겐, -CN, C₁-C₄ 알킬, 할로겐화 C₁-C₄ 알킬기, C₁-C₄ 알콕실, 할로겐화 C₁-C₄ 알콕실 및 -NR₁₁R₁₂이며, R₁₁ 및 R₁₂는 각각 수소 및 C₁-C₄ 알킬로 이루어지는 군로부터 독립적으로 선택된다.
청구항 1에 있어서,
R₄, R₅ 및 R₆은 각각 탄소 원자 및 질소 원자로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 1 또는 2에 있어서,
R₄, R₅ 및 R₆은 동시에 탄소 원자가 아닌, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 1 또는 2에 있어서,
R₄, R₅ 및 R₆은 동시에 질소 원자가 아닌, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서,
R₈, R₉ 및 R₁₀은 각각 수소 및 메틸로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 1에 있어서,
X₁은
인, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서,
X₃은 F, Cl, Br, -CF₃, -CN, C₁-C₂ 알킬, C₁-C₂ 알콕실 및 -NR₁₁R₁₂로 이루어지는 군으로부터 선택되며, R₁₁ 및 R₁₂는 각각 수소 및 C₁-C₂ 알킬로 이루어지는 군으로부터 독립적으로 선택되는, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 7에 있어서,
X₃은 F, Cl 및 -CN으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 1에 있어서,
일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물은 하기의 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.

,

,

,

,

,

,

및

.
청구항 1에 있어서,
일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물은 하기의 화합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.

, 및

.
청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서,
일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 인산염, 메탄설폰산염, 트리플루오로메탄설폰산염, 벤젠설폰산염, p-톨루엔설폰산염, 1-나프탈렌설폰산염, 2-나프탈렌설폰산염, 아세트산염, 트리플루오로아세트산염, 말산염, 타르타르산염, 시트르산염, 락트산염, 옥살산염, 석신산염, 푸말산염, 말레산염, 벤조산염, 살리실산염, 페닐아세트산염 및 만델산염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 따른 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 및 약학적으로 허용 가능한 보조제(adjuvant)를 포함하는 약학적 조성물.
청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 따른 다중 치환된 피리딘 화합물의 제조 방법으로서, 이하의 단계를 포함하는 다중 치환된 피리딘 화합물의 제조 방법.
1) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 B의 화합물과 일반식 C의 화합물을, 촉매로서 포타슘 tert-부톡사이드의 존재 하에 반응시켜, 일반식 D의 화합물을 얻는 단계:

,
여기서, R₁₃은 F, Cl, Br 또는 I이고;
2) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 D의 화합물과 일반식 E의 화합물을, 촉매로서 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 또는 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)디클로라이드의 존재 하에 반응시켜, 일반식 F의 화합물을 얻는 단계:

; 및
3) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 F의 화합물과 일반식 G의 화합물을 반응시켜, 일반식 I의 다중 치환된 피리딘 화합물을 얻는 단계:

;
여기서 X₁, X₂, X₃은 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 정의된 것과 동일한 의미를 갖는다.
청구항 13에 있어서,
일반식 B의 화합물은 이하의 방법에 의해 제조되는 방법:
일반식 A의 화합물을 할로겐화하여, 일반식 B의 화합물을 얻고:

여기서, R₁₃은 F, Cl, Br 또는 I이다.
청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서,
X₃이 NH₂이고, 상기 제조 방법은 이하의 단계를 포함하는 다중 치환된 피린딘의 제조 방법.
1) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 H의 화합물과 일반식 C의 화합물을, 염기로서 포타슘 tert-부톡사이드의 존재 하에 반응시켜, 일반식 W의 화합물을 얻는 단계;

;
여기서, R₁₃은 F, Cl, Br 또는 I이고;
2) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 W의 화합물과 일반식 E의 화합물을, 촉매로서 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 또는 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II)디클로라이드의 존재 하에 반응시켜, 일반식 J의 화합물을 얻는 단계:

;
3) 일반식 J의 화합물을, 촉매로서 팔라듐-카본의 존재 하에 수소화하여, 일반식 K의 화합물을 얻는 단계

; 및
4) 이하의 도식으로 나타낸 바와 같이, 일반식 K의 화합물과 일반식 G의 화합물을 반응시켜, 일반식 L의 화합물을 얻는 단계:
VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제와 관련된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제를 제조함에 있어서 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 따른 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 용도.
청구항 16에 있어서,
VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제와 관련된 상기 질환은 종양 또는 암을 포함하는, 용도.
청구항 17에 있어서,
상기 종양 또는 암은 악성 흑색종, 간암, 신장암, 급성 백혈병, 만성 백혈병, 비소세포성 폐암, 전립선암, 갑상선암, 피부암, 결장암, 직장암, 췌장암, 난소암, 유방암, 골수형성이상증후군, 식도암, 또는 중피종인, 용도.
VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제와 관련된 질환의 치료 및/또는 예방의 방법으로서, 필요시에, 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 따른 다중치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 치료학적인 또는 예방적인 유효량을 대상물에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
청구항 19에 있어서,
VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제와 관련된 상기 질환은 종양 또는 암을 포함하는, 방법.
청구항 20에 있어서,
상기 종양 또는 암은 악성 흑색종, 간암, 신장암, 급성 백혈병, 만성 백혈병, 비소세포성 폐암, 전립선암, 갑상선암, 피부암, 결장암, 직장암, 췌장암, 난소암, 유방암, 골수형성이상증후군, 식도암, 또는 중피종인, 방법.
VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제와 관련된 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 따른 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 및 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 22에 있어서,
VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제와 관련된 상기 질환은 종양 또는 암인, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 및 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 23에 있어서,
상기 종양 또는 암은 악성 흑색종, 간암, 신장암, 급성 백혈병, 만성 백혈병, 비소세포성 폐암, 전립선암, 갑상선암, 피부암, 결장암, 직장암, 췌장암, 난소암, 유방암, 골수형성이상증후군, 식도암, 또는 중피종인, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 및 약학적으로 허용 가능한 염.
세포 내에서 VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제의 활성을 저해하는 방법으로서, 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 따른 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 및 약학적으로 허용 가능한 염의 유효량을 상기 세포에 투여하는 단계를 포함하는 방법.
청구항 25에 있어서,
상기 방법은 생체외(in vitro)에서 실시되는, 방법.
청구항 25에 있어서,
상기 방법은 생체내(in vivo)에서 실시되는, 방법.
청구항 25 내지 27 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포는 세포주(cell line), 혹은 종양 세포 또는 암 세포 등의 대상물로부터 유래된 세포인, 방법.
청구항 28에 있어서,
상기 종양 또는 암은 악성 흑색종, 간암, 신장암, 급성 백혈병, 만성 백혈병, 비소세포성 폐암, 전립선암, 갑상선암, 피부암, 결장암, 직장암, 췌장암, 난소암, 유방암, 골수형성이상증후군, 식도암, 및 중피종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 방법.
약제를 제조함에 있어서 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 따른 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염의 용도로서, 상기 약제는 세포내에서 VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제의 활성을 저해하기 위해 사용되는 용도.
청구항 30에 있어서,
상기 약제는 생체외 방법으로 사용되는, 용도.
청구항 30에 있어서,
상기 약제는 생체내 방법으로 사용되는, 용도.
청구항 30 내지 32 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포는 세포주, 혹은 종양 세포 또는 암 세포 등의 대상 물로부터 유래된 세포인, 용도.
청구항 33에 있어서,
상기 종양 또는 암은 악성 흑색종, 간암, 신장암, 급성 백혈병, 만성 백혈병, 비소세포성 폐암, 전립선암, 갑상선암, 피부암, 결장암, 직장암, 췌장암, 난소암, 유방암, 골수형성이상증후군, 식도암, 및 중피종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 용도.
세포 내에서 VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제의 활성을 저해하는데 사용하기 위한, 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 따른 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물, 및 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 35에 있어서,
생체외 방법으로 사용하기 위한, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물, 및 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 35에 있어서,
생체내 방법으로 사용하기 위한, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물, 및 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 35 내지 37 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포는 세포주, 혹은 종양 세포 또는 암 세포 등의 대상물로부터 유래된 세포인, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물, 및 약학적으로 허용 가능한 염.
청구항 38에 있어서,
상기 종양 또는 암은 악성 흑색종, 간암, 신장암, 급성 백혈병, 만성 백혈병, 비소세포성 폐암, 전립선암, 갑상선암, 피부암, 결장암, 직장암, 췌장암, 난소암, 유방암, 골수형성이상증후군, 식도암, 및 중피종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는, 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물, 및 약학적으로 허용 가능한 염.
세포 내에서 VEGFR-2, VEGFR-3, CRAF, PDGFR-β, BRAF, V600E BRAF, KIT 및/또는 FLT-3 키나제의 활성을 저해하기 위한 키트(kit)로서, 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 따른 다중 치환된 피리딘 화합물, 혹은 그 수화물, 용매화물 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 및 선택적으로 설명서(instructions)를 포함하는 키트.