KR20160120924A - 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 혈전 질환 예방 또는 치료용 조성물, 항혈전용 조성물, 또는 혈행 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환 예방 또는 치료용 조성물, 항혈전용 조성물, 또는 혈행 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 땃두릅나무 추출물은 혈소판 응집을 억제시켜 혈액 응고 시간과 출혈 시간을 지연시키는 우수한 효과를 가지고 있는바, 혈행 개선 및 혈전 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 활용될 수 있다.

Description

땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 치료용 조성물{Compositions for prevention or treatment of thrombosis comprising an extract of Opalopanax elatus}

본 발명은 혈전 질환의 예방 또는 치료용 조성물, 항혈전용 조성물, 또는 혈행 개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 치료용 조성물, 항혈전용 조성물, 또는 혈행 개선용 조성물에 관한 것이다.

혈액순환(the circulation of blood)이란 혈액이 심장을 중심으로 혈관을 따라 신체를 순환하는 것으로, 각 기관 및 조직에 산소와 영양을 공급하고 탄산가스와 대사산물을 방출하며, 여러 내분비선에서의 호르몬 운반을 통한 특정기관의 기능 조절, 그밖에 병원균 조절작용과 체온 조절, 삼투압 조절, 수분 조절 등의 기능을 수행하는 과정이다.

혈액순환 장애란 우리 온몸의 구석구석에 뻗어 있는 혈관이 탄력을 잃고 내벽에 콜레스테롤 등이 침착되어 혈관 내강이 좁아져 혈액 순환이 원활이 이루어지지 못하는 것을 말한다. 혈액순환 장애는 손발 차고 저림, 뒷목 당김, 어깨 결림, 기억력 감퇴, 무기력, 집중력 약화, 현기증 및 만성 피로 증상을 유발하여 정상적인 생활을 영위하는데 어려움이 많게 된다. 또한 혈액순환 장애로 인해 고혈압, 동맥경화증, 심근 경색증, 뇌졸중 등이 발생할 수 있으므로 예방 및 관리가 필요하다.

상기 혈액순환 장애의 주요 발병원인 중 하나로 혈전(thrombus)이 알려져 있다. 혈전이란 과다한 혈소판 응집에 의해 매개되는 병리현상으로 인식되고 있다. 혈관에 상처가 생기면 혈관은 수축하게 되며, 상처부로 드러나게 된 콜라겐 섬유(collagen gibrers)에 혈소판이 점착(adhension)되어 활성화(activation)되고, 혈소판에서 분비되는 세로토닌 (serotonin), 아데노신 디포스페이트(adenosine dephosphate, ADP) 및 트롬복산 A2(Thromboxane A2) 등이 혈소판의 응집(aggregation)을 유도한다. 상기 ADP는 더 많은 혈소판들이 달라붙게 하며, 트롬복산 A2(thromboxane A2)는 혈소판들이 응집되도록 작용하여 혈관이 수축하게 된다. 이와 같이 일차적으로 지혈이 진행된 후, 내인성 경로(intrinsic pathway), 외인성 경로(extrinsic pathway) 및 공통 경로(common pathway)로 혈액 응고계가 활성화되어 급속히 혈전이 생성된다. 과도하게 생성된 혈전은 혈관 벽에 붙어 굳어져서 혈류의 흐름을 방해하고 혈액의 점도를 낮추어 혈액순환을 원활하지 못하게 하여 혈액 순환 장애의 원인이 되는 혈전증(thrombosis)이 발생하게 된다.

현재 혈전 질환의 예방과 치료에는 항혈소판제, 항응고제, 형성된 혈전을 치료하기 위한 혈전용해제 등이 사용되고 있으나. 대표적인 항혈소판제제인 아스피린은 효과는 뛰어나지만 위장관 출혈과 소화성 궤양 등의 부작용을 일으키는 것으로 알려져 있다. 또한, 그 외의 항응고제나 혈전용해제 치료제로 쓰이는 약물들은 대부분 경구투여가 불가능하며, 혈전에 대한 선택성이 적어 장기간 복용 시 용혈현상, 면역반응, 발열, 알러지 등의 다양한 부작용을 나타내고 있다. 이러한 부작용과 미비한 효과에도 불구하고, 시판되고 있는 치료제의 가격이 매우 고가로서 환자들이 쉽게 사용하기 어려운 문제점이 또한 나타나고 있다. 따라서, 혈소판의 활성화 및 응고의 억제, 혈전의 용해 활성 등의 혈전생성 저해에 대한 높은 선택성을 가지는 동시에 부작용을 최소화시키는 치료제의 개발이 요구되고 있다.

한편, 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai)는 두릅나무과의 낙엽 활엽 관목으로, 경상남도, 경상북도, 강원도, 평안남도, 평안북도, 함경남도, 함경북도 등지에 분포하며 주로 강원도(설악산, 오대산, 대암산) 1000m 이상의 고지대에 소군락으로 자생하는 것으로 알려져 있다.

땃두릅나무의 한약재명은 자인삼(혹은 천삼)이라 하여 인삼과 비슷한 작용을 하는 것으로 알져져 있다. 땃두릅나무는 한방에서 주로 기를 돕고, 심혈관 질환 및 당뇨병 등을 치료하고 중추신경을 흥분시키는 작용을 하여 신경 쇠약, 저혈압 및 정신분열증 등에 효과적인 것으로 알려져 있으나, 혈행 개선에 관한 연구는 없는 상태이다.

본 발명자들은 혈행 개선 또는 혈전 질환 치료에 효과적인 물질을 연구하던 중, 땃두릅나무 추출물이 혈소판 응집을 억제시키고 혈액 응고 시간과 출혈 시간을 연장시켜 혈액 순환을 개선하고 혈전 질환을 예방 또는 치료하는 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

대한민국 공개특허 제2011-0055872호 대한민국 공개특허 제2013-0058519호

본 발명의 목적은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항혈전용 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈행 개선용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항혈전용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈행 개선용 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 땃두릅나무 추출물은 혈소판 응집을 억제시켜 혈액 응고 시간과 출혈 시간을 지연시키는 우수한 효과를 가지고 있는바, 혈행 개선 및 혈전 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 활용될 수 있다.

도 1은 땃두릅나무 추출물의 농도에 따른 혈소판 응집 저해 효과(ex vivo aggregation)를 확인한 결과를 나타낸 도이다(도 1의 OE는 땃두릅나무 추출물을 처리한 희석한 혈소판 풍부 혈장(RPR)을 나타내고, Control은 땃두릅나무 추출물을 처리하지 않은 희석한 혈소판 풍부 혈장(RPR)을 나타낸다).
도 2는 땃두릅나무 추출물의 농도에 따른 락테이트 디하이드로제나제(lactate Dehydrogenase, LDH)의 활성도를 확인한 결과를 나타낸 도이다(도 2의 OE는 땃두릅나무 추출물을 처리한 희석한 혈소판 풍부 혈장(RPR)을 나타낸다).
도 3은 땃두릅나무 추출물의 농도에 따른 생체 내에서의 혈소판 응집 저해 효과를 확인한 결과를 나타낸 도이다(도 3의 OE는 땃두릅나무 추출물을 처리한 혈소판이 제거된 혈장을 나타내고, GB는 은행잎 추출물을 처리한 혈소판이 제거된 혈장을, Normal은 어떠한 추출물도 처리하지 않은 혈소판이 제거된 혈장을 나타낸다).

본 발명은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항혈전용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈행 개선용 조성물을 제공한다.

상기 조성물은 약학적 조성물 또는 식품 조성물을 포함한다.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.

본 발명에서 용어,“추출물”은 생약을 적절한 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다.

본 발명의 땃두릅나무 추출물에는 땃두릅나무에 추출용매를 가하여 얻은 추출물뿐만 아니라 추출용매로 추출하여 제조한 조추출물에 분획용매를 가하여 얻은 분획물이 포함되나, 이에 한정되지 않는다.

일례로, 본 발명의 유효성분인 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai) 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 분리정제 방법에 의해 제조된다:

1) 땃두릅나무를 추출용매로 추출하는 단계;

2) 단계 1)의 땃두릅나무 추출물을 여과하는 단계;

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하는 단계.

상기 제조방법에 있어서, 단계 1)에서 사용되는 땃두릅나무는 세척하여 그대로 사용하거나 건조하여 사용할 수 있다. 건조방법으로는 양건, 음건, 열풍건조 및 자연 건조하는 방법을 모두 사용할 수 있다. 또한, 추출 효율을 증대시키기 위해 땃두릅나무를 분쇄기로 분쇄하여 사용할 수 있다. 상기 땃두릅나무는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있고, 잎, 줄기, 가지 또는 뿌리가 모두 이용 가능하며, 구체적으로 뿌리, 줄기 및 가지가 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제조방법에 있어서, 단계 1)에서는 땃두릅나무에 적당한 양의 추출 용매를 첨가하여 완전히 침지되도록 한다. 상기 추출 용매로는 당업계에서 일반적으로 사용하는 무기 또는 유기 용매를 제한없이 사용할 수 있으며, 예를 들어, 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매가 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출 용매의 양은 땃두릅나무에 대하여 2 내지 20배, 바람직하게는 추출효율을 증가시키기 위하여 3배 내지 5배로 첨가할 수 있다. 추출 방법은 실온에서 함침하거나, 가온할 수 있으며, 바람직하게는 20 내지 70℃에서 1시간 내지 10일, 초음파 추출 또는 환류 냉각 추출할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 추출횟수는 1회 내지 5회, 바람직하게는 1회 내지 3회이나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제조방법에 있어서, 단계 2)의 여과는 가제(Gaze)를 이용하여 여과하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

상기 제조방법에 있어서, 단계 3)의 감압 농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결 건조하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

또한, 상기 제조방법은 4) 단계 3)의 농축물을 추가적으로 유기용매로 분획하는 단계를 더 포함할 수 있다.

상기 제조방법에 있어서, 단계 4)의 유기용매는 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 클로로포름, 에틸아세테이트, 디클로메탄, 부탄올 또는 이들의 혼합용매일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 실시예에서는, 하기와 같은 과정을 통해 땃두릅나무 추출물을 수득하였다. 먼저, 땃두릅나무를 물로 세척하여 이물질을 제거한 후, 그늘에서 건조하고 분쇄한다. 분쇄된 땃두릅나무 분말에 70 부피% 에탄올을 추출용매로 하여, 환류 냉각법을 통해 땃두릅나무를 추출한다. 상기 추출액을 여과한 후, 감압 농축 및 건조를 통해 최종 땃두릅나무 추출물을 수득한다.

본 발명에서 용어,“혈행”은 혈액이 혈관을 통해서 신체의 각 부분으로 이동하는 것을 의미한다.

본 발명에서 용어,“혈전”은 생체의 혈관 내에서 혈액이 굳어진 상태를 의미하는바, 혈전은 혈관내피의 손상, 혈류의 침체, 혈액성분의 변화 등에 의해서 발생하고, 이러한 혈전에 의하여 일어나는 병태를 혈전증(thrombosis)이라고 한다. 또한, 상기 혈전은 상처가 복구될 때 생체내의 복잡한 생성기작에 의하여 활성화된 트롬빈(thrombin)이 혈액 중에 존재하는 피브리노겐(fibrinogen)을 피브린(fibrin)으로 변화시켜 불용성의 중합체를 형성하면서 생성되는데, 피브린 단량체는 수소결합에 의하여 결집되어 부드러운 혈병(soft clot)을 형성하고 이 혈병은 여러 요인에 의하여 딱딱한 혈병(hard clot)으로 전환되어 혈전을 생성하게 된다.

본 발명에서 용어,“혈전 질환”은 혈관 안쪽에 덩어리가 생기거나 혈전이 생겨서 혈액의 흐름이 막힌 것을 의미한다. 상기 혈전 질환은 심근경색, 협심증, 혈전성 정맥염, 동맥색전증, 관상동맥혈전증, 뇌동맥혈전증, 말초혈관혈전증, 심부정맥혈전증, 간문맥혈전증, 동맥혈전증, 정맥혈전증, 만성정맥허혈, 허혈성 뇌경색, 동맥경화, 고혈압, 폐고혈압, 뇌경색, 뇌졸중, 만성동맥폐색증, 폐경색, 뇌색전증, 신장색전증, 혈전색전증, 폐동맥 색전증, 지주막하 출혈 후의 병적 증상, 경피적 관상동맥성형술(PTCA) 또는 스텐트(stent) 삽입 시의 혈전 생성, 스텐트 설치 후의 재협착, 카테터 혈전성 폐색 또는 재폐색, 급성 관상동맥증후군, TIA(일과성 뇌허혈 발작 또는 급성 뇌혈관 증후군) 및 심부전증 등을 포함하며, 바람직하게는 동맥혈전증, 정맥혈전증, 간문맥 혈전증, 폐동맥 색전증, 만성정맥허혈, 하지정맥류, 심부정맥혈전증, 협심증, 뇌경색 및 뇌출혈이나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 땃두릅나무 추출물은 혈소판 응집을 저해하고 혈액 응고 시간 및 출혈 시간을 지연시키는 우수한 효과를 가지고 있다. 따라서 땃두릅나무 추출물은 혈전 질환의 예방 또는 치료, 항혈전용 및 혈행 개선용 의약품 및 건강기능식품으로 유용하게 사용될 수 있다.

이에 본 발명은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 땃두릅나무 추출물과 함께 혈전 질환 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 상기 유효성분 외에도 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 추가성분, 즉, 약학적으로 허용되거나 영양학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다.

보다 상세하게는 상기 조성물은 상기 유효성분 외에 추가로 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다.

상기 담체, 부형제 및 희석제로는 통상의 것을 모두 사용 가능하고, 예를 들어 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 칼슘카보네이트, 덱스트린, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1 이상 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 성분들은 유효성분 즉, 땃두릅나무 추출물에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균된 수용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 나아가, 연고제, 로션제, 스프레이제, 패취제, 크림제, 산제, 현탁제, 겔제 또는 젤의 형태의 피부 외용제의 형태로 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 예를 들어 본 발명의 조성물은 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 구강, 심장내, 골수내, 경막내, 경피, 장관, 피하, 설하 또는 국부 투여할 수 있으며, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 약학적 조성물의 치료상 유효 투여량은 대상체의 종, 체중, 연령 및 개별 상태, 치료되는 장애 또는 질환, 또는 이들의 중증도에 따라 달라진다. 본 발명의 조성물의 일일 투여량은 땃두릅나무 추출물의 양을 기준으로 0.0001 내지 1000 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.001 내지 100㎎/㎏이며, 하루 1 내지 6회 투여될 수 있으나, 상기 투여량은 어떠한 의미로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

본 발명의 식품 조성물은 식품학적으로 허용된 담체와 혼합하여 식품 조성물로서 제공될 수 있다. 상기 땃두릅나무 추출물은 전체 식품 조성물에 대해 0.01 내지 99.99% 중량비로 포함되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 유효성분을 식품 또는 음료 첨가물로 사용할 경우, 상기 합성 또는 추출물로부터 분리된 것을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 상기 유효성분의 혼합양은 그의 사용목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적절하게 조절하여 결정될 수 있다.

건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우, 본 발명의 식품 조성물은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에, 장기간 복용이 가능하다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿류, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있다. 음료수로 제형화할 경우에 상기 식품 조성물 이외에 첨가되는 액체 성분은 한정되지 않으나, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드(예를 들면, 포도당, 과당 등), 디사카라이드(예를 들면, 말토오스, 수크로오스 등) 및 폴리사카라이드(예를 들면, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당), 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당 알코올이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마린, 스테비아 추출물) 및 합성 향미제(예를 들면, 사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한 본 발명의 식품 조성물은 과일 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 단독으로 또는 조합으로 사용될 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 조성물 전체 중량당 0.001 내지 50 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항혈전용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈행 개선용 조성물을 제공한다.

상기 항혈전용 조성물 또는 혈행 개선용 조성물은 상술한 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 약학적 제제 또는 식품 제제를 포함하기 때문에, 상술한 본 발명의 조성물과 중복된 내용은 중복된 내용의 기재에 의한 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.

이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제제예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 실험예 및 제제예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 실험예 및 제제예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1 : 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai)의 추출물 제조

땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai)를 물로 씻어 이물질 및 염분을 제거한 후 건조하여 분쇄하였다. 추출용기에 상기 분쇄된 땃두릅나무 분말 50g과 70 부피%의 에탄올 수용액을 총 1 L가 되도록 첨가하였다. 그 후 80 ℃ 에서 2시간 동안 환류 냉각법을 2회 반복하여 땃두릅나무를 추출하였다. 상기 추출액을 여과한 후, 40℃의 수욕상에서 감압 농축 및 건조를 통해 최종 땃두릅나무 추출물을 수득하였다.

실험예 1 : 땃두릅나무 추출물의 혈소판 응집 저해 효과 비교 측정

상기 실시예 1에서 수득한 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai) 추출물의 혈전 질환에 미치는 효과를 확인하기 위하여, 아래와 같은 실험을 수행하였다.

실험예 1-1 : 실험동물 및 혈소판 풍부 혈장(PRP) 준비

실험용 쥐(rat)를 에테르(ether)로 마취시키고, 항응고제인 3.2% 소듐 시트레이트(sodium citrate)를 상기 실험용 쥐의 혈액과 1:9 (v/v) 비율이 되도록 함유한 피티(PT)관으로 실험용 쥐의 복대동맥으로부터 채혈하였다. 상기 채혈한 혈액을 200×g에서 10분간 원심 분리하고 상등액을 분리하여 혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)을 얻은 후, 계속하여 800×g에서 15분간 원심분리를 하여 혈소판이 거의 없는 혈청(platelet poor plasma, PPP)을 수득하였다. 이후 상기PRP를 혈소판 세포 계수기(Horiba LC-660, Japan)를 이용하여 혈소판 수를 계측하고 상기 PPP를 이용하여 상기PRP를 혈소판이 4 ×10⁶ 개/mL가 되도록 희석하였다. 혈소판은 저온에서 응집되므로 모든 실험은 상온에서 실시하였다.

실험예 1-2 : 혈소판 응집 정도 측정

쥐의 혈소판 응집 저해능은 전혈응집분석기(Aggregometer)(Chrono-log, Haver town, PA, USA)를 사용하여 탁도 측정법으로 측정하였다. 보다 구체적으로, 상기 실험예 1-1에서 수득한 희석한 PRP를 37℃에서 5분간 배양시킨 후, 상기 실시예 1에서 수득한 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai) 추출물을 각각 0.25, 0.5, 1 mg/mL의 농도별로 첨가하였다. 대조군으로는 혈행 개선에 효과적이라고 알려진 은행잎(Ginkgo biloba) 추출물을 땃두릅나무 추출물과 동일한 농도로 첨가하였다. 3분 후, 혈소판 응집 유도 물질(agonist)인 콜라겐(Collagen) 5㎕를 첨가하여 응집을 유도하였으며, 시료를 처리하지 않은 PRP를 정상군으로 하여 혈소판 응집 저해 정도를 하기의 수학식 1로 구하였다. 그 결과를 하기 표 1 및 도 1에 나타내었다.

[수학식 1]

저해정도 = [(A - B) / A] × 100

A : 은행잎 추출물을 처리한 시료의 aggregation %

B : 땃두릅나무 추출물을 처리한 시료의 aggregation %

시료	처리농도 (mg/ml)	응집억제율 (%)
은행잎 추출물 (Ginkgo biloba)	1	30.29 ± 4.51
땃두릅나무 추출물 (Oplopanax elatus Nakai)	0.25	7.75 ± 5.48
	0.5	18.60 ± 1.10
	1	32.56 ± 1.10

표 1과 도 1에 나타낸 바와 같이, 땃두릅나무 추출물의 농도 의존적으로 유의하게 혈소판 응집 저해 정도가 증가함을 확인하였다.

실험예 2 : 락테이트 디하이드로제나제(Lactate Dehydrogenase, LDH) 유출 실험

상기 실시예 1에서 수득한 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai) 추출물이 혈소판으로부터의 락테이트 디하이드로제나제(Lactate Dehydrogenase, LDH) 유출에 미치는 영향을 측정하기 위하여, 흡광도 측정 방법을 이용하였다. 보다 구체적으로, 상기 실험예 1-1과 같은 방법으로 수득한 희석한 혈소판 풍부 혈장(PRP)에 땃두릅나무 추출물을 각각 0.25, 0.5, 1 mg/mL의 농도로 가한 후, 37 ℃에서 5분간 보존한 뒤 10,000×g 에서 2분간 원심 분리하였다. 0.17mM 의 베타-엔에이디에이치(β-NADH; β-nicotinamide adenine dinucleotide phosphate)를 트리스-이디티에이(tris-EDTA ; tris-ethylenediaminetetraacetic acid)에 녹여 만든 1.0 mL의 용액에 상기 원심 분리한 상등액 25 μL를 첨가하고, 37 ℃에서 미리 보존한 14 mM 피루브산 용액 100 μL를 가하였다. 여기에 피루브산 용액을 첨가한 후, 즉시 339 nm의 파장에서 1분간 흡광도 변화를 측정하였다. 0.3 % 트리톤 엑스-100(triton X-100)으로 세포의 용해를 유발하여 측정된 값을 LDH의 100% 활성도로 하여 LDH의 총 활성도를 계산하였으며, 그 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 땃두릅나무 추출물의 LDH의 총 활성도가 증가하였는바, 땃두릅나무 추출물이 혈전 생성을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 3 : 혈액응고 경로 확인

상기 실시예 1에서 수득한 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai) 추출물이 관여하는 혈액 응고 경로를 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

실험예 3-1. 외인성 경로에 미치는 영향 분석

혈소판을 완전히 제거한 사람의 혈장을 미리 37℃에서 가열시키고 상기 실시예 1에서 수득한 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai) 추출물 및 대조군인 은행잎(Ginkgo biloba) 추출물 시료를 상기 혈장에 처리한 후, 5분간 보관하였다. 그 후, 상기 시료가 처리된 혈장에 37℃로 가온해 둔 피티 시약(PT reagent)(TECO, Germany)을 빠르게 분주한 후 타이머를 눌러서 응고가 일어날 때까지의 시간을 코어귤로미터(coagulometer)(Coatron M4, Germany)를 이용하여 프로트롬빈 타임(Prothrombin time, PT)을 측정하였으며, 상기 프로트롬빈 타임(PT)을 평균±표준편차로 나타내었다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

시료	농도 (mg/mL)	PT (sec)
정상군	-	18.53 ± 0.06
은행잎 추출물 (Ginkgo biloba)	1	18.30 ± 0.34
땃두릅나무 추출물 (Oplopanax elatus Nakai)	0.25	18.55 ± 0.07
	0.5	18.57 ± 0.21
	1	18.90 ± 0.30

표 2에 나타낸 바와 같이, 모든 실험군에서 프로트롬빈 타임(PT)의 변화는 거의 없음을 확인하였다. 따라서, 은행잎과 땃두릅나무 추출물 모두 외인성 응고인자에는 거의 영향을 미치지 않음을 확인하였다.

실험예 3-2. 내인성 경로에 미치는 영향 분석

혈소판을 완전히 제거한 사람의 혈장을 미리 37℃ 에서 가열시키고 상기 실시예 1에서 수득한 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai) 추출물 및 대조군인 은행잎(Ginkgo biloba) 추출물 시료를 상기 혈장에 처리한 후, 5분간 보관하였다. 상기 시료가 처리된 혈장에 37℃로 가온해 둔 에이피티티 시약(aPTT reagent)(TECO, Germany)을 분주한 후 다시 5분간 배양하였다. 그 후 칼슘클로라이드 용액(CaCl₂)을 빠르게 분주하고 타이머를 눌러서 응고가 일어날 때까지의 시간을 코어큘로미터(Coatron M4, Germany)를 이용하여 활성트롬보플라스틴 시간(activated partial thromboplastin time, aPTT)을 측정하였으며, 상기 활성트롬보플라스틴 시간(aPTT)를 평균±표준편차로 나타내었다. 그 결과를 표 3에 나타내었다.

시료	농도 (mg/mL)	aPTT (sec)
정상군	-	45.1 ± 0.49
은행잎 추출물 (Ginkgo biloba)	1	47.5 ± 0.78
땃두릅나무 추출물 (Oplopanax elatus Nakai)	0.25	45.1 ± 0.40
	0.5	46.9 ± 2.00
	1	55.9 ± 1.62

표 3에 나타낸 바와 같이, 땃두릅나무 추출물을 농도 1 mg/mL으로 처리했을 때 정상군과 비교하여 내인성 응고 기전에 의한 혈액응고 시간이 유의적으로 증가하는 것을 확인하였다.

따라서, 이를 통해 땃두릅나무 추출물이 내인성 인자가 관여하는 aPTT 시간을 증가시켜 혈액 응고를 억제하는 것을 확인하였다.

실험예 4 : 실험동물에서 혈소판 응집 억제능 평가

상기 실시예 1에서 수득한 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai) 추출물의 혈소판 응집 억제능을 평가하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.

실험예 4-1. 실험동물에서 땃두릅나무 추출물의 혈행 개선 효과 확인

샘타코(Samtaco, O-san si, Korea)로부터 공급받은 7주령(무게 300-320 g)의 수컷 쥐(rat)를 22±2℃의 온도와 40~60%의 습도를 유지하는 사육실에서, 오전 6시와 오후 6시를 기준으로 밤낮의 주기가 12시간이 되도록 사육하였다. 표준 사료와 물은 자유롭게 접근할 수 있도록 하여 1주일간 환경에 적응시킨 후 실험을 진행하였다. 대조군인 은행잎(Ginkgo biloba) 추출물과 실시예 1에서 수득한 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai) 추출물을 물에 녹여 1주일간 동일한 시간에 경구로 1일 1회 투여하였다. 실험 마지막 날, 쥐(rat)를 에테르(ether)로 마취시키고, 항응고제인 3.2% 소듐 시트레이트(sodium citrate)를 상기 쥐의 혈액과 1:9 (v/v) 비율이 되도록 함유한 피티(PT)관으로 쥐의 복대동맥으로부터 채혈하였다. 얻어진 혈액을 200×g에서 10분간 원심 분리하고 상등액을 분리하여 혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma, PRP)을 수득하였고 남은 부분을 다시 800×g에서, 15분간 원심 분리하여 혈소판이 거의 없는 혈청(platelet poor plasma, PPP)를 얻었다. 이후 상기 혈소판 풍부 혈장(PRP)을 혈소판 세포 계수기(Horiba LC-660, Japan)를 이용하여 혈소판 수를 계측하고 상기 PPP를 이용하여 상기 PRP를 혈소판이 4×10⁶개/mL이 되도록 희석하였다. 혈소판은 저온에서 응집되므로 모든 실험은 상온에서 실시하였다. 쥐의 혈소판 응집 저해율은 전혈응집분석기(Chrono-log, Haver town, PA, USA)를 사용하여 탁도 측정법으로 측정하였다. 상기 쥐에서 분리한 PRP를 37℃에서 2분간 보존한 후 혈소판 응집 유도 물질인 콜라겐(collagen) 5 ㎕를 처리하여 혈소판 응집을 유도하였으며 시료를 경구 투여하지 않은 쥐의 PRP를 정상군으로 하여 혈소판 응집 저해 정도를 실험예 1-2의 수학식 1로 구하였다. 그 결과를 하기 표 4 및 도 3에 나타내었다.

시료	농도 (mg/kg)	응집억제율 (%)
은행잎 추출물 (Ginkgo biloba)	40	17.98 ± 9.89
땃두릅나무 추출물 (Oplopanax elatus Nakai)	0.8	1.28 ± 3.52
	4	4.56 ± 4.04
	20	16.55 ± 4.82

표 4 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 실험동물에 은행잎 추출물과 땃두릅나무 추출물을 1주일간 투여하였을 때 땃두릅나무 추출물이 은행잎 추출물에 비해 투여 농도가 1/2배 낮음에도 불구하고, 콜라겐(collagen)에 의해 유도되는 혈소판 응집에 대한 땃두릅나무 추출물의 혈소판 응집 억제율이 은행잎 추출물과 비슷한 수치를 나타내었다. 이를 통해 땃두릅나무 추출물이 동물 모델에서 혈액 응고를 억제하는 효과가 우수함을 확인하였다.

실험예 4-2. 실험동물의 꼬리 출혈에 미치는 영향 비교 분석

상기 실시예 1에서 수득한 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai) 추출물의 혈소판과 혈액 응고 인자들에 의한 지혈 마개를 형성하는 능력을 확인하기 위하여, 실험 동물의 꼬리 출혈 시간을 하기와 같은 실험을 통해 측정하였다.

대조군인 은행잎(Ginkgo biloba) 추출물과 실시예 1에서 수득한 땃두릅나무 추출물을 물에 녹여 1주일간 동일한 시간에 경구로 1일 1회 투여하였다. 럼푼(20 mg/kg)과 케타민(75 mg/kg)의 혼합액의 복강 주사를 이용해 상기 추출물을 일주일간 투약한 실험용 쥐를 마취시켰다. 그 후 체온이 내려가지 않게 하여 쥐를 편평한 곳에 두고 꼬리가 수직으로 늘어지게 한 후, 꼬리를 끝에서 3 mm를 잘라 37℃가 유지되는 생리식염수에 담근 후, 피를 흘리는 시간을 측정하였다. 30초 이상 혈액이 나오지 않으면 지혈이 된 것으로 보고 최대 30분까지 출혈 시간을 관찰하였으며, 그 결과를 표 5 에 나타내었다.

시료	농도 (mg/kg)	출혈 시간 (sec)
정상군	-	875 ± 70
은행잎 추출물 (Ginkgo biloba)	40	915 ± 130
땃두릅나무 추출물 (Oplopanax elatus Nakai)	0.8	8.80 ± 63
	4	1068 ± 71
	20	1550 ± 292

표 5에 나타낸 바와 같이, 실험동물에 땃두릅나무 추출물을 1주일간 투여하였을 때 농도에 따라 유의적으로 출혈 시간이 증가하였으며, 20 mg/kg 농도로 투여 시 땃두릅나무 추출물 투여군이 대조군인 은행잎 추출물을 2배의 농도로 투여한 군에 비해 약 1.5배 이상 더 출혈 시간 연장에 효과적임을 확인하였다.

이상의 실험 결과를 통하여, 땃두릅나무(Oplopanax elatus Nakai) 추출물이 부작용 없이 콜라겐(collagen)에 의한 혈소판 응집을 억제시키고, 생체 내에서도 혈액 응고 시간과 출혈 시간을 연장시켜 공지된 항혈전용 물질에 비해 혈액 순간을 개선시키는 효능이 현저히 우수함을 확인하였으며, 이를 통해 땃두릅나무 추출물을 혈전 질환 예방 또는 치료용 조성물, 항혈전용 조성물 및 혈행개선용 조성물로 이용할 수 있음을 확인하였다.

이하 본 발명의 약학적 조성물 및 식품 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 약학적 조성물의 제조

1-1. 산제의 제조

땃두릅나무 추출물 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

1-2. 정제의 제조

땃두릅나무 추출물 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

1-3. 캡슐제의 제조

땃두릅나무 추출물 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

1-4. 주사제의 제조

땃두릅나무 추출물 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄2H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

1-5. 액제의 제조

땃두릅나무 추출물 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100 ml로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 2. 식품 조성물의 제조

2-1. 건강식품의 제조

땃두릅나무 추출물 20 mg

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 μg

비타민 E 1.0 mg

비타민 B1 0.13 mg

비타민 B2 0.15 mg

비타민 B6 0.5 mg

비타민 B12 0.2 μg

비타민 C 10 mg

비오틴 10 μg

니코틴산아미드 1.7 mg

엽산 50 μg

판토텐산 칼슘 0.5 mg

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 mg

산화아연 0.82 mg

탄산마그네슘 25.3 mg

제1인산칼륨 15 mg

제2인산칼슘 55 mg

구연산칼륨 90 mg

탄산칼슘 100 mg

염화마그네슘 24.8 mg

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

2-2. 건강음료의 제조

땃두릅나무 추출물 100 mg

비타민 C 15 g

비타민 E(분말) 100 g

젖산철 19.75 g

산화아연 3.5 g

니코틴산아미드 3.5 g

비타민 A 0.2 g

비타민 B1 0.25 g

비타민 B2 0.3 g

물 정량

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (10)

1. 땃두릅나무(Oplopanax elatus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 땃두릅나무는 줄기, 뿌리 및 그 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 기관인 것을 특징으로 하는, 혈전 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 땃두릅나무 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 그 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 것을 특징으로 하는, 혈전 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
4. 제1항에 있어서, 상기 땃두릅나무 추출물은 에탄올 수용액 추출물인 것을 특징으로 하는, 혈전 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
5. 제1항에 있어서, 상기 땃두릅나무 추출물은 혈소판 응집 저해 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 혈전 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
6. 제1항에 있어서, 상기 땃두릅나무 추출물은 생체 내 혈전생성 억제 및 예방 활성을 갖는 것을 특징으로 하는, 혈전 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈전 질환은 동맥 혈전증, 정맥 혈전증, 간문맥 혈전증, 폐동맥 색전증, 만성정맥허혈, 하지정맥류, 심부정맥혈전증, 협심증, 뇌경색, 및 뇌출혈로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 질환인 것을 특징으로 하는, 혈전 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물.
   
8. 땃두릅나무(Oplopanax elatus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈전 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
   
9. 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 항혈전용 조성물.
   
10. 땃두릅나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 혈행 개선용 조성물.
    

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