KR20160117973A

KR20160117973A - 신규한 slco2b1 다형성 마커 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20160117973A
Application number: KR1020150046132A
Authority: KR
Inventors: 이상섭; 장인진; 이이슬; 이금주; 이동주
Original assignee: 인제대학교 산학협력단; 대한민국 (식품의약품안전처장)
Priority date: 2015-04-01
Filing date: 2015-04-01
Publication date: 2016-10-11
Also published as: KR101760246B1

Abstract

본 발명은 SLCO2B1(Solute carrier organic anion transporter family member 2B1) 유전자에 존재하는 신규한 단일염기다형성(single nucleotide polymorphism; SNP) 및 이의 약물반응 예측을 위한 마커 용도에 관한 것으로서, 더욱 자세하게는 SLCO2B1 단일염기다형성을 이용한 약물반응 예측 또는 진단용 조성물, 약물반응 예측 또는 진단용 키트, 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법, 약물 반응과 관련된 유전자의 변이 유전형 검출방법 및 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성에 대한 정보제공방법에 관한 것이다. 본 발명에서 제시하는 신규한 SLCO2B1 단일염기다형성 마커는 약물수송체 기능이상과 관련된 생체 표지인자로서 유용하게 사용될 수 있다. 즉, 본 발명의 신규한 SLCO2B1 단일염기다형성을 생체 표지인자로 사용하여 검체 개인별 약물수송체 활성의 차이 및 약물수송체 결핍으로 인한 이상증후를 예측 또는 진단할 수 있다. 특히, 본 발명의 SLCO2B1 유전자 단일염기다형성은 한국인을 대상으로 발굴한 신규한 변이유전자로서 한국인 맞춤약물치료법 개발에 있어서 핵심기반정보를 제공함으로써 한국인을 위한 유전자 진단법 개발에 이바지할 수 있다.

Description

신규한 SLCO2B1 다형성 마커 및 이의 용도{Novel SLCO2B1 Single Nucleotide Polymorphism Markers and Uses Thereof}

본 발명은 SLCO2B1(Solute carrier organic anion transporter family member 2B1) 유전자에 존재하는 신규한 단일염기다형성(singlenucleotide polymorphism; SNP) 및 이의 약물반응 예측을 위한 마커로의 용도에 관한 것으로서, 더욱 자세하게는 SLCO2B1 단일염기다형성을 이용한 약물반응 예측 또는 진단용 조성물, 약물반응 예측 또는 진단용 키트, 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법, 약물 반응과 관련된 유전자의 변이 유전형 검출방법 및 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성에 대한 정보제공방법에 관한 것이다.

사람의 유전자는 인종에 관계없이 모든 개인에서 99.9%가 동일하며 오직 0.1%만 개체간에 차이가 있으며, 이 0.1%의 유전자 차이가 사람의 특성이나 외모의 상당부분을 결정한다고 알려져 있다. 피부색, 대머리, 털색, 키 등의 외모나 당뇨, 치매, 암 등의 질병 등 여러 가지 특성들이 개인에 따라 유전정보가 다르기 때문에 다양하게 나타나는 현상들이다.

병원에서 처방하는 약물에 대한 반응도 개인에 따라 천차만별로 나타날 수 있으며 유전적 요인에 의해 영향을 받는 것으로 알려져 있다. 치료목적으로 투여한 약물이 바람직한 방향으로 원하는 치료효과를 나타낼 수도 있지만, 예기치 않은 약물부작용을 나타내거나 치료효과가 나타나지 않을 수도 있다. 이와 같은 약물 반응의 다양성을 결정하는 유전자들을 찾아내어 개인에 따라 유전자들이 어떻게 다른지, 약물반응이 얼마나 달라지는가를 연구하는 학문이 약물유전체학이다.

약물유전체학 연구는 가까운 미래에 환자의 유전자 정보만 알더라도 어떤 종류의 약물을, 어느 용량으로, 누구에게, 언제 복용해야 하는지 예측할 수 있는 ‘맞춤약물치료’의 시대를 구현하는 하나의 핵심 기술이 될 것으로 기대되고 있다. 의사가 처방한 약물들이 모든 환자들에게 항상 효과적인 것은 아니며 약물의 효과는 개개인 환자별로 현저한 차이를 보인다. 정상적으로 의사의 진단과 처방을 받아 제대로 약물을 복용한 환자들 중에서도 생명을 위협하는 정도의 심각한 약물이상반응 (주. 약물부작용을 이러한 용어로 표기함)이 종종 발생하며, 그 빈도도 우리가 예상하는 것보다 상당히 높은 것으로 알려져 있다(출처: http://www.kosen21.org/nwebzine/webzine_view.jsp?webzine_seq=76&board_seq=899&data_seq=1186).

단일염기다형성(single nucleotide polymorphism, 이하, "SNP" 라 함)은 인간 유전자 변이의 가장 일반적인 형태로, 유전체(genome) 상에서 A, T, C, G로 구성되는 염기서열의 한 개가 다른 염기서열로 변한 것을 말한다. 이러한 SNP의 2/3는 염기서열 중 C와 T 간의 변이인 것으로 알려져 있고, SNP 변이는 보통 유전체상의 염기서열에서 1000개당 한번 꼴로 나타난다고 알려져 있다. 또한, SNP는 인간의 유전체에서 발생하는 변이의 약 90%를 차지하고 있고, 비슷한 형질이나 같은 가계도를 가지고 있는 사람들은 동일하거나 또는 비슷한 SNP 패턴을 보이기 때문에, 임상에서 개체의 질병에 대한 감수성(susceptibility)을 예측하는 지표로 사용될 수 있고, 약물에 대한 효과 및 부작용을 예측할 수 있는 지표로도 사용될 수 있다. 나아가 SNP는 개체의 유전적 특성에 적합한 진단 및 치료 전략을 구사하는 맞춤의학에 이용될 수 있고, SNP의 패턴과 질병기록을 잘 통합할 수 있다면 여러 가지 질병의 치료를 위한 의료 통계를 구축할 수 있을 것이다.

최근 들어, 유전자의 다형성을 이용한 개개인에서 약물반응을 예측하는 지표로 활용들이 개발되고 있으며, 특히 개인별 맞춤치료에 대한 연구들이 활발히 진행되고 있다.

특히, 한국인의 약물유전체 정보는 다른 종족과 차이가 있어 한국인의 맞춤치료 기술 개발을 위해서는 반드시 변이 지도의 체계적인 구축이 필요한 실정이며, 한국인의 약물유전체 변이는 외국에서 개발한 첨단 유전자 진단법으로도 확인되지 않는 것이 많아서 한국인을 위한 유전자 진단법 개발을 위해서는 변이에 대한 정보 확보가 중요하다.

한편, SLCO2B1은 Solute carrier organic anion transporter family member의 하나로서 다양한 내인성 물질뿐 아니라 많은 약물의 흡수에 관여하는 단백질로 OATP-B, OATP2B1, SLC21A9이라고도 불리우며 간, 폐, 신장, 소장 등 다양한 장기에 발현되어 있다 (Ikumi Tamai et al., 2006). 특히 간세포의 sinusoidal membrane에 주로 발현된 SLCO2B1은 간세포 내로의 흡수에 관여한다. 또한, hydroxymethylglutaryl-CoA (HMG-CoA) 환원효소를 억제하여 LDL-콜레스테롤 농도를 저하시키는 아토르바스타틴(Atorvastatin)도 역시 OATP의 기질 약물이며 인 비트로(in vitro)에서 OATP2B1에 높은 친화성을 가지고 있다. 또한 OATP의 내인성 기질인 에스트론(estrone-3-sulfate)의 수송을 억제한다는 결과가 보고되어 있다 (Br J Pharmacol 2009).

이에 본 발명자들은 질병관리본부 및 유전체 사업단의 차세대 시퀀싱 분석을 통한 SLCO2B1 약물수송단백질의 기능이상과 관련된 한국인 특이적 표지유전인자 신규변이 유전자를 발굴하였으며, 이러한 신규변이 유전형의 발현벡터를 이용하여 실험한 결과 실제로 변이형 SLCO2B1 유전자가 도입된 세포의 경우 야생형 대비 약물수송의 기능이 저하되거나 또는 증대되는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

한국등록특허 제10-0677724호 한국공개특허 제10-2007-0111475호 한국공개특허 제10-2010-0077396호

따라서 본 발명의 목적은 한국인 특이적 표지인자로서 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성을 이용하여 약물반응을 효과적으로 예측(진단)할 수 있는 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은, 상기 조성물을 포함하는 한국인 특이적 약물반응 예측(진단)용 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은, 한국인 특이적 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은, 약물 반응과 관련된 SLCO2B1 유전자의 한국인 특이적 변이 유전형 검출방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 한국인 특이적 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성에 대한 정보제공방법을 제공하는 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서,

본 발명은 SLCO2B1 유전자(reference sequence NM_007256.4)의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기의 단일염기다형성(SNP)을 검출할 수 있는 제제; 또는 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드에서 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 약물반응 예측 또는 진단용 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 1207번째 염기는 G 또는 T이며; 상기 1536번째 염기는 G 또는 T이고; 상기 1594번째 염기는 G 또는 T이며; 또는 상기 2319번째 염기는 T 또는 C일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 약물은 글리벤클라마이드(glibenclamide), 에스트론(estrone-3-sulfate), 벤질페니실린(benzylpenicillin), 펙소페나딘(fexofenadine), 보센탄(Bosentan), 스타틴(statin), 프라바스타틴(pravastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토르바스타틴(atorvastatin) 및 로수바스타틴(rosuvastatin)으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 단일염기다형성(SNP)을 검출할 수 있는 제제는, 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기의 SNP를 포함하는 10~100개의 연속 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 증폭시킬 수 있는 프라이머일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 단일염기다형성(SNP)을 검출할 수 있는 제제는, 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기의 SNP를 포함하는 10~100개의 연속 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드와 혼성할 수 있는 프로브일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 아미노산을 검출할 수 있는 제제는, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드에서 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산과 결합을 형성할 수 있는 항체일 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 약물반응 예측 또는 진단용 키트를 제공한다.

또한, 본 발명은 (a) 검체로부터 시료를 분리하는 단계; 및 (b) 분리된 시료에서 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기를 확인하는 단계 또는 서열번호 2로 이루어지는 폴리펩티드에서 SLCO2B1 단백질의 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 확인하는 단계를 포함하는, 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 1207번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 271번째 아미노산이 아르기닌에서 류신으로 치환된 변이형을 가질 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 1536번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 381번째 아미노산이 발린에서 류신으로 치환된 변이형을 가질 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 1594번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 400번째 아미노산이 아르기닌에서 류신으로 치환된 변이형을 가질 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 2319번째 염기가 티민(T)에서 시토신(C)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 642번째 아미노산이 타이로신에서 히스티딘으로 치환된 변이형을 가질 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 381번째 아미노산이 발린에서 류신으로 치환된 변이형을 갖는 경우 약물 흡수가 저해되는 군으로 판정할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 271번째 아미노산이 아르기닌에서 류신으로 치환된 변이형, 400번째 아미노산이 아르기닌에서 류신으로 치환된 변이형 또는 642번째 아미노산이 타이로신에서 히스티딘으로 치환된 변이형을 갖는 경우 약물 흡수가 증진되는 군으로 판정할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 381번째 아미노산이 발린에서 류신으로 치환된 변이형을 갖는 경우 에스트론(estrone-3-sulfate) 약물에 대한 약물 흡수가 저해됨에 따라, 이러한 치환된 변이형을 갖는 검체의 경우 에스트론(estrone-3-sulfate) 약물을 처방하지 않을 수 있다.

또한, 본 발명은 검체로부터 분리한 핵산 시료에서 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기를 확인하는 단계; 또는 검체로부터 분리한 단백질 시료에서 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드에서 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 확인하는 단계를 포함하는, 약물 반응과 관련된 유전자의 변이 유전형 검출방법을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 SLCO2B1의 변이 유전형은 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환; 1536번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환; 1594번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환; 및 2319번째 염기가 티민(T)에서 시토신(C)으로 치환되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 변이일 수 있다.

또한, 본 발명은 서열번호 1의 SLCO2B1 유전자의 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기를 확인하는 단계를 포함하는, SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성에 대한 정보제공방법을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 방법은 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 SLCO2B1 유전자의 1207번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되었는지 여부; 서열번호 1의 SLCO2B1 유전자의 1536번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되었는지 여부; 서열번호 1의 SLCO2B1 유전자의 1594번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되었는지 여부; 또는 서열번호 1의 SLCO2B1 유전자의 2319번째 염기가 티민(T)에서 시토신(C)으로 치환되었는지 여부를 확인하는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명에서 제시하는 신규한 SLCO2B1 단일염기다형성 마커는 약물수송체 기능이상과 관련된 생체 표지인자로서 유용하게 사용될 수 있다. 즉, 본 발명의 신규한 SLCO2B1 단일염기다형성을 생체 표지인자로 사용하여 검체 개인별 약물수송체 활성의 차이 및 약물수송체 결핍으로 인한 이상증후를 예측 또는 진단할 수 있다. 특히, 본 발명의 SLCO2B1 유전자 단일염기다형성은 한국인을 대상으로 발굴한 신규한 변이유전자로서 한국인 맞춤약물치료법 개발에 있어서 핵심기반정보를 제공함으로써 한국인을 위한 유전자 진단법 개발에 이바지할 수 있다.

도 1은 왼쪽에서부터 SLCO2B1 271L 타입, SLCO2B1 381L 타입, SLCO2B1 400L 타입, SLCO2B1 642H 타입 변이형을 나타낸 것이다.
도 2는 야생형 및 변이형 SLCO2B1 단백질의 약물수송 활성을 분당 방사성 원소의 붕괴수(dpm)로 나타낸 것이다.
도 3은 야생형 및 변이형 SLCO2B1 단백질의 효소역학 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 야생형 및 변이형 SLCO2B1 cDNA에 의해 발현된 단백질의 웨스턴 블럿 결과이다(레인 1 : 음성대조군(pcDNA3.1+), 레인 2 : 야생형 SLCO2B1, 레인 3 : 변이형 SLCO2B1 Arg271Leu, 레인 4 : 변이형 SLCO2B1 Val381Leu, 레인 5 : 변이형 SLCO2B1 Arg400Leu, 레인 6 : 변이형 SLCO2B1 Tyr642His).
도 5는 SLCO2B1의 막전위 단백질 패턴을 도시한 것으로, 단일염기다형성은 붉은 색으로 표시하였다.
도 6은 본 실시예에서 사용한 발현벡터 pcDNA 3.1(+)의 벡터맵을 나타낸 것이다.

본 발명은 서열번호 1의 폴리뉴클레오타이드로 이루어진 SLCO2B1 유전자의 1207번째, 1536번째, 1594번째 또는 2319번째 염기 부위의 단일염기다형성; 및 이들을 생체 표지인자로 이용하여 약물반응을 예측 또는 진단할 수 있는 용도에 관한 것을 특징으로 한다.

보다 구체적으로는, 서열번호 1의 폴리뉴클레오타이드로 이루어진 SLCO2B1 유전자에서 나타나는 단일염기다형성으로는 1207번째 염기가 G 또는 T; 1536번째 염기는 G 또는 T; 1594번째 염기는 G 또는 T; 또는 2319번째 염기는 T 또는 C로 나타날 수 있다.

SLCO2B1은 Solute carrier organic anion transporter family member의 하나로서 다양한 내인성 물질뿐 아니라 많은 약물의 흡수에 관여하는 단백질로서 간, 폐, 신장, 소장 등 다양한 장기에 발현되어 있다.

본 발명자들은 한국인을 대상으로 하는 약물유전다형에 관한 연구 진행을 통해 타종족과 구별되는 한국인 약물반응과 관련된 유전자 변이를 발굴하고자 하였으며, 그 결과 질병관리본부 및 차세대맞춤의료유전체사업에서 분석된 차세대시퀀싱(NGS)에서 확인된 새로운 SLCO2B1 변이 유전자 4종(R271L, V381L, R400L, Y642H)을 토대로 실제 이들 변이 유전자가 약물반응에 어떠한 영향을 미치는지를 실험을 통해 확인하였다. 상기 새로운 SLCO2B1 변이 유전자 4종(R271L, V381L, R400L, Y642H)의 단일염기다형성(SNP) 부위는 각각 1207G>T, 1536G>T, 1594G>T, 2319T>C 이다.

그 결과 본 발명의 SLCO2B1 변이 유전자 R271L, R400L 및 Y642H를 갖는 경우 SLCO2B1 단백질의 운반체(수송) 기능이 증진되는 것을 확인할 수 있었으며, SLCO2B1 변이 유전자 V381L를 갖는 경우 SLCO2B1 단백질의 운반체(수송) 기능이 현저하게 저해되는 것을 확인할 수 있었다.

본 명세서에 기재된 변이에 대하여 설명하면 다음과 같다.

예컨대, “R271L” 변이란 서열번호 2로 이루어진 SLCO2B1 단백질의 아미노산 서열에서 271번째 아미노산이 아르기닌(R)에서 류신(L)으로 치환된 것을 말하며, “1207G>T” 변이란 서열번호 1로 이루어진 SLCO2B1 유전자의 염기서열에서 1207번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환된 것을 말한다.

따라서 본 발명의 SLCO2B1 변이 유전자 R271L, V381L, R400L 또는 Y642H는 각각 서열번호 2로 이루어진 SLCO2B1 단백질의 아미노산 서열에서 271번째 아미노산이 아르기닌(R)에서 류신(L)으로 치환된 변이형; 381번째 아미노산이 발린(V)에서 류신(L)으로 치환된 변이형; 400번째 아미노산이 아르기닌(R)에서 류신(L)으로 치환된 변이형; 642번째 아미노산이 타이로신(Y)에서 히스티딘(H)으로 치환된 변이형을 가리킨다.

또한 상기 SLCO2B1 변이 유전자 R271L, V381L, R400L 또는 Y642H 각각은 단일염기다형성(SNP)으로서 1207G>T, 1536G>T, 1594G>T 또는 2319T>C로 나타낼 수 있다. 이때 1207G>T는 서열번호 1로 이루어진 폴리뉴클레오티드 SLCO2B1 유전자 염기서열에서 1207번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환된 변이형; 1536번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환된 변이형; 1594번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환된 변이형; 2319번째 염기가 티민(T)에서 시토신(C)으로 치환된 변이형을 가리킨다.

이에, 본 발명은 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기의 단일염기다형성(SNP)을 검출할 수 있는 제제; 또는 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드에서 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 약물반응 예측 또는 진단용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 1207번째 염기는 G 또는 T일 수 있으며; 상기 1536번째 염기는 G 또는 T일 수 있으며; 상기 1594번째 염기는 G 또는 T일 수 있으며; 상기 2319번째 염기는 T 또는 C일 수 있다.

본 발명에서 “약물반응 예측 또는 진단용”이란 인간을 포함한 동물에게 약물을 적용하였을 때 나타날 수 있는 개체별 약물의 흡수 정도를 예측하거나 진단하는 용도를 의미한다.

본 발명의 SLCO2B1 단백질은 다양한 종류의 약물흡수(수송)와 관련된 단백질에 해당하며, SLCO2B1 유전자 또는 단백질 기능이상에 따라 약물 흡수 효율이 달라질 수 있다.

상기 SLCO2B1 단백질이 관여하는 약물의 예시로는 글리벤클라마이드(glibenclamide), 에스트론(estrone-3-sulfate), 벤질페니실린(benzylpenicillin), 펙소페나딘(fexofenadine), 보센탄(Bosentan), 스타틴(statin), 프라바스타틴(pravastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토르바스타틴(atorvastatin) 및 로수바스타틴(rosuvastatin) 등과 같은 약물을 예시할 수 있으나, SLCO2B1 단백질이 관여하는 약물이라면 특별히 이의 종류가 한정되는 것은 아니다.

자세하게는 글리벤클라마이드(glibenclamide)는 당뇨병 치료제에 해당하며 SLCO2B1 단백질은 상기 글리벤클라마이드 약물의 흡수에 관여하는 것으로 알려져 있으며; 에스트론(estrone-3-sulfate)은 천연 스테로이드 제제로서 폐경기 여성의 다양한 질환에 적용되는 약물에 해당하며 SLCO2B1 단백질은 상기 에스트론 약물의 흡수에 관여하는 것으로 알려져 있고; 벤질페니실린(benzylpenicillin)은 항생제로서 SLCO2B1 단백질은 상기 항생제의 흡수에 관여하는 것으로 알려져 있으며; 펙소페나딘(fexofenadine)은 항히스타민제에 해당하며 SLCO2B1 단백질은 상기 펙소페나딘 약물 흡수에 관여하는 것으로 알려져 있으며; 보센탄(Bosentan)은 항고혈압제로서 SLCO2B1 단백질은 상기 보센탄 약물의 흡수에 관여하는 것으로 알려져 있고; 스타틴(statin)은 고지혈증 치료제로서 SLCO2B1 단백질은 상기 스타틴 약물의 흡수에 관여하는 것으로 알려져 있으며; 또한 프라바스타틴(pravastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토르바스타틴(atorvastatin) 및 로수바스타틴(rosuvastatin) 등은 콜레스테롤의 합성에 관여하는 효소인 HMG-CoA reductase 를 억제하는 스타틴 계열의 약물로서 SLCO2B1 단백질은 상기 약물에 대해서도 흡수에 관여하는 것으로 알려져 있다.

따라서 SLCO2B1 기능이상이 있는 경우 상기 예시되는 약물들에 대하여도 흡수 효율이 달라질 수 있는바, 본 발명의 새로운 SLCO2B1 변이 유전자 4종(R271L, V381L, R400L, Y642H)을 생체 표지인자로 활용하여, 상기와 같은 약물에 대한 반응의 개인차를 예측함으로써 향후 약물을 선택함에 있어서 약물의 오남용을 방지하는데 크게 공헌할 수 있다.

본 발명의 하기 실시예에서는 SLCO2B1 단백질이 수송하는 대표적인 약물로서 에스트론(estrone-3-sulfate)을 이용하여 변이형 SLCO2B1 4종 각각에 대한 약물수송능을 실험한 결과, SLCO2B1 유전자의 R271L, R400L 및 Y642H 변이형의 경우 정상적인 약물수송 보다 더욱 효과적으로 약물수송이 이루어지고 있는 것을 확인할 수 있었으며, V381L 변이형은 정상적으로 약물수송을 하지 못하는 것을 확인하였다.

상기와 같은 결과는 실제적으로 에스트론 약물 선택의 결정을 위하여 기초자료로 사용될 수 있다.

예를 들어, 폐경기 여성질환의 치료를 위해 에스트론 약물의 처방이 요구되는 환자 개인별 단일염기다형성 유무의 판별을 진행한 후, SLCO2B1 유전자의 R271L, R400L, Y642H, 및 V381L 변이형을 갖는 환자의 경우 약물흡수 효율이 변화함에 따라 처방되는 약물의 표준 용량 대비 조율된 용량으로 동일한 치료효과를 기대할 수 있고, 원하는 약리효과가 달성되기 힘든 경우 에스트론 약물 대신 대체약물을 처방할 수 있으므로 개인별 맞춤의약으로서 약물의 오남용을 방지하는데 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는, 상기 단일염기다형성(SNP)을 검출할 수 있는 제제는, 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기의 SNP를 포함하는 10~100개의 연속 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 증폭시킬 수 있는 프라이머일 수 있으며; 또는 상기 SNP를 포함하는 10~100개의 연속 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드와 혼성할 수 있는 프로브일 수 있다.

본 발명에 따른 상기 폴리뉴클레오티드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오티드는 다형성 서열(polymorphic sequence)이다. 다형성 서열(polymorphic sequenc)이란 뉴클레오티드 서열 중에 단일염기다형을 나타내는 다형성 부위(polymorphic site)를 포함하는 서열을 말한다. 다형성 부위(polymorphic site)란 다형성 서열 중 단일염기다형이 일어나는 부위를 말한다.

본 발명에 따른 상기 폴리뉴클레오티드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오티드는 다형성 서열을 가진다. 본 발명에 있어서 상기 폴리뉴클레오티드는 DNA일 수 있다. 상기 폴리뉴클레오티드는 바람직하게는 10개 이상, 보다 바람직하게는 10 내지 100개, 보다 더 바람직하게는 10 내지 60개의 연속 염기로 구성될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오티드와 특이적으로 혼성화하는 프라이머 또는 프로브는 단일염기다형성(SNP)에 특이적이다.

단일염기다형성(SNP) 특이적이란 각 SNP에 특이적으로 혼성화하는 것, 즉, 다형성 서열 중에 존재하는 다형성 부위의 염기를 특이적으로 구별할 수 있도록 혼성화하는 것을 말한다. 여기에서, 혼성화란 보통 엄격한 조건, 예를 들어 1M 이하의 염 농도 및 25 ℃ 이상의 온도 하에서 보통 수행될 수 있다.

본 발명에 있어서, 프로브는 혼성화 프로브를 의미하는 것으로, 핵산의 상보성 가닥에 서열 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드를 의미한다. 이러한 본 발명의 프로브는 중앙 부위가 다형성 서열의 다형성 부위와 정렬하는 것이 바람직하다. 본 발명의 프로브는 단일염기다형성 부위를 검출하여 약물반응 예측 또는 진단하기 위한 마이크로어레이 등의 키트나 예측 방법 등에 사용될 수 있다.

또한, 본 발명에 있어서, 프라이머는 짧은 자유 3말단 수산화기 (free 3' hydroxyl group)를 가지는 염기 서열로 상보적인 템플레이트 (template)와 염기쌍 (base pair)을 형성할 수 있고 템플레이트 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 서열을 의미한다. 프라이머의 적절한 길이는 사용 목적에 따라 달라질 수 있으나, 일반적으로 15 내지 30개의 염기로 구성된다. 프라이머 서열은 주형과 완전하게 상보적일 필요는 없으나, 주형과 혼성화할 정도로 충분히 상보적이어야 한다. 상기 프라이머는 다형성 부위를 포함하는 DNA 서열에 혼성화하여 다형성 부위를 포함하는 DNA 단편을 증폭시킬 수 있다. 본 발명의 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위를 검출하여 약물반응 예측 또는 진단하기 위한 마이크로어레이 등의 키트나 예측 방법 등에 사용될 수 있다.

본 발명의 프라이머 또는 프로브는 포스포르아미다이트 고체 지지체 방법, 또는 기타 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 이러한 핵산 서열은 또한 당해 분야에 공지된 많은 수단을 이용하여 변형시킬 수 있다. 상기 변형의 비-제한적인 예로는 메틸화, 캡화, 천연 뉴클레오타이드 하나 이상의 동족체로의 치환, 및 뉴클레오타이드 간의 변형, 예를 들면, 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)로의 변형이 있다.

또한, 본 발명에 따른 본 발명의 조성물에 포함되는, 상기 아미노산을 검출할 수 있는 제제는, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드에서 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산과 특이적 항원-항체 결합을 형성할 수 있는 항체일 수 있다.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 약물반응 예측 또는 진단용 키트에 관한 것이다.

본 발명의 키트는 약물반응 예측 또는 진단용 마커인, SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기의 단일염기다형성(SNP)을 확인함으로써 약물반응 예측 또는 진단하는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 약물반응 예측 또는 진단용 키트에는 상기 SNP를 확인하기 위한 폴리뉴클레오티드, 프라이머 또는 프로브뿐만 아니라 분석 방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성 성분 조성물, 용액 또는 장치가 포함될 수 있다.

예를 들어, 본 발명의 키트는 PCR을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있다. PCR 키트는, 상기 SNP 에 대한 특이적인 폴리뉴클레오티드, 프라이머 또는 프로브 외에도 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액 (pH 및 마그네슘 농도는 다양), 데옥시뉴클레오타이드 (dNTPs), Taq-폴리머라아제 및 역전사효소와 같은 효소, DNase, RNAse 억제제, DEPC-수 (DEPC-water) 및 멸균수 등을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 키트는 DNA 칩을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 약물반응 예측 또는 진단용 키트일 수 있다. DNA 칩 키트는, 상기 SNP 에 대한 특이적인 폴리뉴클레오티드, 프라이머 또는 프로브가 부착되어 있는 기판을 포함하고 기판은 정량 대조구 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 핵산을 포함할 수 있다.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 약물반응 예측 또는 진단용 마이크로어레이에 관한 것이다.

상기 마이크로어레이는 본 발명의 폴리뉴클레오티드, 프라이머 또는 프로브를 포함하는 것을 제외하고는 통상적인 마이크로어레이로 이루어질 수 있다.

마이크로어레이 상에서의 핵산의 혼성화 및 혼성화 결과의 검출은 당업계에 잘 알려져 있다. 상기 검출은 예를 들면, 핵산 시료를 형광 물질, 예를 들면, Cy3 및 Cy5와 같은 물질을 포함하는 검출 가능한 신호를 발생시킬 수 있는 표지 물질로 표지한 다음, 마이크로어레이 상에 혼성화하고 상기 표지 물질로부터 발생하는 신호를 검출함으로써 혼성화 결과를 검출할 수 있다.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 (a) 검체로부터 시료를 분리하는 단계; 및 (b) 분리된 시료에서 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기를 확인하는 단계 또는 서열번호 2로 이루어지는 폴리펩티드에서 SLCO2B1 단백질의 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 확인하는 단계를 포함하는, 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법에 관한 것이다.

본 발명에서 “검체”란 검사 대상이 되는 개체를 의미하는 것으로, 인간을 포함하는 동물 전체를 의미하며, 바람직하게는 인간(피험자)일 수 있다.

본 발명의 상기 “시료”란 검체의 혈액, 피부, 피부세포, 점막세포 및 모발과 같은 생물학적 시료를 모두 포함하는 개념이다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 1207번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 271번째 아미노산이 아르기닌에서 류신으로 치환된 변이형을 가질 수 있다. 이러한 변이형을 갖는 경우 약물 흡수가 증진되는 군으로 판정할 수 있다.

본 발명의 다른 구체예에서, 상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 1536번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 381번째 아미노산이 발린에서 류신으로 치환된 변이형을 가질 수 있다. 이러한 변이형을 갖는 경우 약물 흡수가 저해되는 군으로 판정할 수 있다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 1594번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 400번째 아미노산이 아르기닌에서 류신으로 치환된 변이형을 가질 수 있다. 이러한 변이형을 갖는 경우 약물 흡수가 증진되는 군으로 판정할 수 있다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 2319번째 염기가 티민(T)에서 시토신(C)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 642번째 아미노산이 타이로신에서 히스티딘으로 치환된 변이형을 가질 수 있다. 이러한 변이형을 갖는 경우 약물 흡수가 증진되는 군으로 판정할 수 있다.

본 발명의 상기 약물은 SLCO2B1과 관련된 공지의 모든 약물을 의미하며, 자세하게는 글리벤클라마이드(glibenclamide), 에스트론(estrone-3-sulfate), 벤질페니실린(benzylpenicillin), 펙소페나딘(fexofenadine), 보센탄(Bosentan), 스타틴(statin), 프라바스타틴(pravastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토르바스타틴(atorvastatin) 및 로수바스타틴(rosuvastatin) 등을 예시할 수 있으며, 특별히 그 종류를 제한하는 것은 아니다.

본 발명의 하기 실시예에서는 SLCO2B1 단백질이 수송하는 대표적인 약물로서 에스트론(estrone-3-sulfate)을 이용하여 변이형 SLCO2B1 4종 각각에 대한 약물수송능을 실험한 결과, SLCO2B1 유전자의 R271L, R400L 및 Y642H 변이형의 경우 정상적인 약물수송 보다 더욱 효과적인 약물수송이 이루어지고 있는 것을 확인할 수 있었으며, SLCO2B1 유전자의 V381L 변이형은 정상적으로 약물수송을 하지 못하는 것을 확인하였다. 따라서 상기 SLCO2B1 유전자의 R271L, R400L 및 Y642H 변이형을 갖는 검체(피험자)의 경우 에스트론(estrone-3-sulfate) 약물을 표준 양보다 감소된 수준으로 처방하거나, SLCO2B1 유전자의 V381L 변이형을 갖는 검체(피험자)의 경우 에스트론(estrone-3-sulfate) 약물을 처방을 처방하지 않는 방식으로 약물선택 결정을 위한 정보를 제공할 수 있다.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 검체로부터 분리한 핵산 시료에서 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기를 확인하는 단계; 또는 검체로부터 분리한 단백질 시료에서 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드에서 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 확인하는 단계를 포함하는, 약물 반응과 관련된 유전자의 변이 유전형 검출방법에 관한 것이다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 SLCO2B1의 변이 유전형은 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환; 1536번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환; 1594번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환; 및 2319번째 염기가 티민(T)에서 시토신(C)으로 치환되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 변이일 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1>

SLCO2B1 유전자에서 발굴된 4종의 변이유전자

질병관리본부(질병관리본부 국립보건연구원 유전체센터) 및 차세대맞춤의료유전체사업단에서 200명 이상의 한국인 검체를 이용 차세대시퀀싱(NGS) 분석을 통해 새로운 변이유전자를 발굴하였으며, SLCO2B1 유전자에서 발굴된 4종의 변이유전자는 아래에서 나타내었다.

SLCO2B1 유전자에서 신규 발굴된 4종의 변이유전자

단백질	AA change	SNP
SLCO2B1	R271L	1207G>T
SLCO2B1	V381L	1536G>T
SLCO2B1	R400L	1594G>T
SLCO2B1	Y642H	2319T>C

< 실시예 2>

SLCO2B1 신규변이 유전자의 발현벡터 제작

pcDNA 3.1발현벡터(Promega)에 SLCO2B1 변이 유전자 총 4종을 각각 삽입하여 SLCO2B1 신규변이 유전자의 발현벡터 총 4종을 제작을 하였다. SLCO2B1 유전자 증폭을 위해 pcDNA 3.1(+)발현벡터 멀티클로닝 사이트중 하나인 EcoRⅠ사이트를 SLCO2B1 증폭 특이적 프라이머끝에 달아서 제작하였다. 그리고 변이 4종에 대해서는 QuikChangeXL Site-Directed Mutagenesis Kit.(Agilent Technologies)를 이용해서 각 4종의 발현 벡터를 제작하였다.

< 실시예 3>

변이형 SLCO2B1 의 약물수송능 측정

본 실험에서는 상기 <실시예 2>를 통해 제조한 SLCO2B1 신규변이 유전자가 도입된 발현벡터를 HEK293(human embryonic kidney)세포주에 형질주입한 후 변이형 SLCO2B1 유전자가 도입된 상기 세포주에서의 SLCO2B1 단백질의 약물수송능 활성을 방사성 동위원소가 부착된 약물을 이용하여 수행하였다.

자세하게는, 폴리 D-라이신 코팅이 된 24 웰 플레이트에 HEK293 세포주(1.3ｘ10⁵세포/well)를 단 세포층으로 배양한 후, 리포펙타민 2000(Invitrogen)을 이용하여 상기 제조된 야생형 및 변이형 벡터를 HEK293 세포주에 형질 주입하여 37℃에서 24시간 발현시켰다. 형질 주입된 HEK293 세포주를 DPBS(Dulbecco`s Phosphate Buffered Saline)로 2번 세척한 후, DPBS 500μl/well과 함께 37℃ 항온 수조에서 10분간 전 보온시켰다. 이후, DPBS를 제거하고 트리튬([³H])으로 표지된 에스트론(Estrone sulfate, ARC(American Radio labeled Chemicals, Inc)), 약 22nM을 37℃ 항온 수조에서 5분간 반응시켰다. 이때, SLCO2B1의 수송 활성 억제제는 sulfobromophthalein(BSP, Sigma Aldrich) 100μM이 사용되었다. 반응 후, 차가운 DPBS로 3번 세척한 후, 0.1N NaOH 200μl/well로 HEK293 세포주를 1시간 용해시켰다. 용해액은 24 well flexible microplate(PerkinElmer)에 옮기고 supermix(PerkinElmer) 500μl/well과 함께 실온의 진탕기에서 4시간 반응시킨 후, Beta counter로 방사성 동위원소 분석을 수행하였다.

- dpm: 분당 방사성 원소의 붕괴수

- 기질 반응 속도 = pmol/mg protein/min

- 최대 반응 속도(Vmax) : 일정한 시점에 이르러서는 기질농도가 증가하더라도 더 이상 생성물의 형성률이 높아지지 않는 상태

- 미카엘리스 멘텐 상수(Km) : 효소의 기질과의 친화성을 나타내는 파라미터

방사성 동위원소 분석을 수행 결과(단위 dpm)

	pcDNA	WT	R271L	V381L	R400L	Y642H
ES	141	595	611	382	629	711
ES+BSP	113	112	156	137	130	140

그 결과 표 2 및 도 2에서 나타낸 바와 같이, SLCO2B1 유전자의 R271L, R400L 및 Y642H 변이에 의해 방사성 원소의 붕괴수가 다소 증대되는 것을 확인할 수 있었으며, 이에 반해 V381L 변이에 의하여 방사성 원소의 붕괴수가 2배 가량 감소되는 것을 확인하였다. 이는 SLCO2B1 V381L 유전자의 변이에 의해 운반체 약물수송 능력이 억제됨을 나타낸다.

< 실시예 4>

변이형 SLCO2B1 의 약동학 분석

본 실험에서는 기질의 농도에 따른 변이형 SLCO2B1 단백질의 약동학 분석을 위하여, 트리튬([³H])으로 표지된 에스트론(Estrone sulfate)을 5, 10, 30, 50, 100μM 각각 처리하여 상기 <실시예 3>과 동일한 조건의 방사성 동위원소 분석법을 수행하였다.

자세하게는, 야생형 및 변이형 SLCO2B1 형질 주입된 HEK293 세포주를 DPBS(Dulbecco`s Phosphate Buffered Saline)로 2번 세척한 후, DPBS 500μl/well과 함께 37℃ 항온 수조에서 10분간 전 보온시켰다. 이후, DPBS를 제거하고 트리튬([³H])으로 표지된 에스트론(Estrone sulfate)을 5, 10, 30, 50, 100μM 각각 처리 후, 37℃ 항온 수조에서 5분간 반응시켰다. 이하 상기 <실시예 3>과 동일한 방식으로 실험을 진행하였다.

야생형 및 변이형 SLCO2B1 단백질의 효소역학 분석 최대반응속도(Vmax) 및 효소-기질 친화성(Km)로 분석한 결과

변이형	Km(?M)	Vmax(pmol/mg protein/min)
WT(야생형)	23.5	10.3
R271L	58	16.4
V381L	26.0	5.8
R400L	39.3	15.7
Y642H	43.7	18.7

그 결과 표 3 및 도 3에서 나타낸 바와 같이, SLCO2B1 유전자의 R271L, R400L 및 Y642H 변이형의 경우 정상적인 약물수송 보다 더욱 효과적인 약물수송이 이루어지고 있는 것을 알 수 있었으며, SLC2B1 V381L 변이형은 정상적으로 약물수송을 하지 못하는 것을 알 수 있다. 이는 SLCO2B1 유전자의 R271L, R400L 및 Y642H 변이형의 경우 운반체의 기능이 증진됨을 의미하며, 이와 반대로 SLC2B1 V381L 변이형은 운반체의 기능을 제대로 못함으로 인해 효소활성의 저해를 가지고 올 수 있음을 의미한다.

< 실시예 5>

단백질 발현측정 확인

상기 <실시예 2>에서 제작된 발현벡터의 세포내 형질 주입에 의해 변이형 SLCO2B1 단백질이 정상적으로 발현되는지 확인하기 위하여, 웨스턴 블럿을 수행하였다.

자세하게는, 상기 발현벡터로 형질 주입된 세포의 용해물에 대한 단백질을 정량한 각각의 시료 20μg을 4X 샘플 로딩 완충용액(NuPAGE)과 함께 100℃에서 5분간 끓여 식힌 후, 12,000rpm에서 1분간 원심 분리하여 준비하였다. 준비된 시료들을 12% 폴리아크릴아마이드 겔에 로딩하고 120V에서 2시간동안 전개하였다. 이렇게 전기영동된 단백질들을 PVDF 막에 이동시키고 SLCO2B1 다중클론 항체(SantaCruz)와 염소유래의 항-토끼 IgG(goat anti-rabbit IgG)를 사용하여 면역블럿팅하였다. 이후, ECL(Enhanced chemiluminescent) 용액(Millipore)을 사용하여 발광반응을 시키고 ImageJ로 감광하여 단백질의 발현 여부를 확인하였다.

그 결과 도 4에서 나타낸 바와 같이, 변이형 SLCO2B1 단백질의 약물수송 능력의 차이는 단백질양의 차이에 의한 것임을 확인할 수 있었다.

< 실시예 6>

SLCO2B1 막전위 단백질의 패턴 분석

본 실험에서는 수송단백질 SLCO2B1 유전자의 변이 위치를 알아보기 위하여 TOPO2(Transmembrane Protein Display)를 이용하여 SLCO2B1 단백질의 패턴을 분석하였다. NCBI에 따르면 SLCO2B1 단백질의 막전위 부분은 총 12개이며, 번역은 세포질에서 시작한다고 알려져 있다.

그 결과 도 5에서 나타낸 바와 같이, 변이형 SLCO2B1 R271L, R400L 및 Y642H는 세포 밖에 위치하고 있으며, 변이형 SLCO2B1 V381L은 막 내부에 위치함을 확인할 수 있었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

SLCO2B1: Solute carrier organic anion transporter family member 2B1
SNP: single nucleotide polymorphism
ES: Estrone-3-sulfate
BSP: Bromsulphthalein (BSP)

<110> inje university industry-academic cooperation foundation <120> Novel SLCO2B1 Single Nucleotide Polymorphism Markers and Uses Thereof <130> PN1502-036 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 4362 <212> DNA <213> SLCO2B1 polynucleotide sequence <400> 1 aaaaggacag gctgaggctg agcctcaggg aggcggggtg cagcttcctc ttcacagaga 60 ggctggactt gaacaaaccc agccttctat acaaccgtgg agccagggca agggagagac 120 agaaggagca agtgacccag ggagacaaac acttggagat acttggggct gagtttgagc 180 aagactccct aacctgtgtc tggacaagtc tgatgtcctg tgtggcccaa gaagaactga 240 ccccgtgtct ggagctccca ccgttattgc atccctgctg tggctcacct gctgctgtct 300 ccaggagccc ctgagaagat ttgcttcctc tcccctgcta agctccaggt cctgagatta 360 aattaggggc tggagctcac tgcactccag cagtcatggg acccaggata gggccagcgg 420 gtgaggtacc ccaggtacca gacaaggaaa ccaaagccac aatgggcaca gaaaacacac 480 ctggaggcaa agccagccca gaccctcagg acgtgcggcc aagtgtgttc cataacatca 540 agctgttcgt tctgtgccac agcctgctgc agctggcgca gctcatgatc tccggctacc 600 taaagagctc catctccaca gtggagaagc gcttcggcct ctccagccag acgtcggggc 660 tgctggcctc cttcaacgag gtggggaaca cagccttgat tgtgtttgtg agctattttg 720 gcagccgggt gcaccgaccc cgaatgattg gctatggggc tatccttgtg gccctggcgg 780 gcctgctcat gactctcccg cacttcatct cggagccata ccgctacgac aacaccagcc 840 ctgaggatat gccacaggac ttcaaggctt ccctgtgcct gcccacaacc tcggccccag 900 cctcggcccc ctccaatggc aactgctcaa gctacacaga aacccagcat ctgagtgtgg 960 tggggatcat gttcgtggca cagaccctgc tgggcgtggg cggggtgccc attcagccct 1020 ttggcatctc ctacatcgat gactttgccc acaacagcaa ctcgcccctc tacctcggga 1080 tcctgtttgc agtgaccatg atggggccag gcctggcctt tgggctgggc agcctcatgc 1140 tgcgccttta tgtggacatt aaccagatgc cagaaggtgg tatcagcctg accataaagg 1200 acccccgatg ggtgggtgcc tggtggctgg gtttcctcat cgctgccggt gcagtggccc 1260 tggctgccat cccctacttc ttcttcccca aggaaatgcc caaggaaaaa cgtgagcttc 1320 agtttcggcg aaaggtctta gcagtcacag actcacctgc caggaagggc aaggactctc 1380 cctctaagca gagccctggg gagtccacga agaagcagga tggcctagtc cagattgcac 1440 caaacctgac tgtgatccag ttcattaaag tcttccccag ggtgctgctg cagaccctac 1500 gccaccccat cttcctgctg gtggtcctgt cccaggtatg cttgtcatcc atggctgcgg 1560 gcatggccac cttcctgccc aagttcctgg agcgccagtt ttccatcaca gcctcctacg 1620 ccaacctgct catcggctgc ctctccttcc cttcggtcat cgtgggcatc gtggtgggtg 1680 gcgtcctggt caagcggctc cacctgggcc ctgtgggatg cggtgccctt tgcctgctgg 1740 ggatgctgct gtgcctcttc ttcagcctgc cgctcttctt tatcggctgc tccagccacc 1800 agattgcggg catcacacac cagaccagtg cccaccctgg gctggagctg tctccaagct 1860 gcatggaggc ctgctcctgc ccattggacg gctttaaccc tgtctgcgac cccagcactc 1920 gtgtggaata catcacaccc tgccacgcag gctgctcaag ctgggtggtc caggatgctc 1980 tggacaacag ccaggttttc tacaccaact gcagctgcgt ggtggagggc aaccccgtgc 2040 tggcaggatc ctgcgactca acgtgcagcc atctggtggt gcccttcctg ctcctggtca 2100 gcctgggctc ggccctggcc tgtctcaccc acacaccctc cttcatgctc atcctaagag 2160 gagtgaagaa agaagacaag actttggctg tgggcatcca gttcatgttc ctgaggattt 2220 tggcctggat gcccagcccc gtgatccacg gcagcgccat cgacaccacc tgtgtgcact 2280 gggccctgag ctgtgggcgt cgagctgtct gtcgctacta caataatgac ctgctccgaa 2340 accggttcat cggcctccag ttcttcttca aaacaggttc tgtgatctgc ttcgccttag 2400 ttttggctgt cctgaggcag caggacaaag aggcaaggac caaagagagc agatccagcc 2460 ctgccgtaga gcagcaattg ctagtgtcgg ggccagggaa gaagccagag gattcccgag 2520 tgtgagctgt cttggggccc cacctggcca agagtagcag ccacagcagt acctcctctg 2580 agtcctttgc ccaagattgg gtgtcaagag ccctgtgttc cattctggct cctccactaa 2640 attgctgtgt gacttcaggc aagacattga tcctctctca gcctttgctt gctagtctga 2700 accaaagagt tgtttgggca tttgctgtgt tggccatttc tggagcaaga gggtcttctt 2760 cctccttccc ccagccagcc agctgtcctg gggccaggct ttcctgggtg gaaagaagta 2820 tacctttccc tggggcccta ggatagcaaa gtgagccata gtgggccagg ctgccctcca 2880 tgctgggccc cagcccaggt ctgcactcgc ctggatcacc ttctttgagc cttagccatc 2940 tcctgtcagg taggaatgaa cttgccagcc ttcaggctcg ttcagctatg accatctgtg 3000 cggtcagggt acactcagct ctcctcccca actccagcag cctttaagaa gtgtcccttt 3060 ggcgccccct ggaggcagag cactgagctg gaccctgggt agactcccac agggaggacg 3120 gagctggcct caggagtggg acacccagac ttggcagggc cttcaagagg cctgtgtggg 3180 ggccccagga atccttagct gaagcgggga gactcactct ccatctcagg aaattctagc 3240 ccttgccctc agggagccac ggttgagggt gaggcccaac acctgcctta gggccctggg 3300 tgggcaagtc tgggccctgg ggtagggagg gagactcagg cccacacttg ggtattttct 3360 aatttcagac aaacacacac tcagcgcgca ctcactgatt cctacacatt gccaagattt 3420 cacacatgtg accaggggcc accaaagtcc ctgtgacctt tgtgactagg atcctaattt 3480 ctctattttc tcctgggtgc ctgggtctgt gtcacctggg gcagtgtgga taatgtttag 3540 ttctgtgaca ctgttttttg ggggtggcac ctggttctcc gatgcctggg ctggtgtcag 3600 gcccaggact gtagtgctgg gagcagtaaa gctcagctct gtgtaatgag tgatgctatg 3660 gcttgctcgt gtcttatgat ccaatccttt tctacatcag cccttgtttt gttttatggc 3720 tagtcttatc tggcctggtt atttccttgc ggggaggaga gggtttgcta atctgctccc 3780 agcccaacct attaccaccc cacctcgctg ggacctactg ctcgggaggc agcagacagg 3840 gagccaccag cagtggcttc ctggccctgt gctgggggtg gggggaagct gggggcacat 3900 gtggcccttg ccttctgagc agctcccagt gccagggctt tgagactttc ccacatgata 3960 aaagaaaagg gaggtacaga agttccaatt ccctttttat tttgctggtt ggtatctgta 4020 aatgtttaat aaatatctga gcatgtatct atcaacgcca agaatttcaa agtctccttc 4080 aacaatatga ggcttttagg atgtttatat tccttcatcc ctcttgtttc ccaggttttg 4140 cagggaaaaa aagtctggaa ttatagatac agcttattat taaatttgtt cttgcataat 4200 gtctcttcta ttacaaaaat tctttcttca taaactgcat tagaggtttg caacaaccac 4260 atcatttcca ttaacttaga tttaggtttt actggattca ttgctcacca ttattgcttg 4320 tatattacat cttttccaat ctttaaaaaa aaaaaaaaaa aa 4362 <210> 2 <211> 709 <212> PRT <213> SLCO2B1 polynucleotide sequence <400> 2 Met Gly Pro Arg Ile Gly Pro Ala Gly Glu Val Pro Gln Val Pro Asp 1 5 10 15 Lys Glu Thr Lys Ala Thr Met Gly Thr Glu Asn Thr Pro Gly Gly Lys 20 25 30 Ala Ser Pro Asp Pro Gln Asp Val Arg Pro Ser Val Phe His Asn Ile 35 40 45 Lys Leu Phe Val Leu Cys His Ser Leu Leu Gln Leu Ala Gln Leu Met 50 55 60 Ile Ser Gly Tyr Leu Lys Ser Ser Ile Ser Thr Val Glu Lys Arg Phe 65 70 75 80 Gly Leu Ser Ser Gln Thr Ser Gly Leu Leu Ala Ser Phe Asn Glu Val 85 90 95 Gly Asn Thr Ala Leu Ile Val Phe Val Ser Tyr Phe Gly Ser Arg Val 100 105 110 His Arg Pro Arg Met Ile Gly Tyr Gly Ala Ile Leu Val Ala Leu Ala 115 120 125 Gly Leu Leu Met Thr Leu Pro His Phe Ile Ser Glu Pro Tyr Arg Tyr 130 135 140 Asp Asn Thr Ser Pro Glu Asp Met Pro Gln Asp Phe Lys Ala Ser Leu 145 150 155 160 Cys Leu Pro Thr Thr Ser Ala Pro Ala Ser Ala Pro Ser Asn Gly Asn 165 170 175 Cys Ser Ser Tyr Thr Glu Thr Gln His Leu Ser Val Val Gly Ile Met 180 185 190 Phe Val Ala Gln Thr Leu Leu Gly Val Gly Gly Val Pro Ile Gln Pro 195 200 205 Phe Gly Ile Ser Tyr Ile Asp Asp Phe Ala His Asn Ser Asn Ser Pro 210 215 220 Leu Tyr Leu Gly Ile Leu Phe Ala Val Thr Met Met Gly Pro Gly Leu 225 230 235 240 Ala Phe Gly Leu Gly Ser Leu Met Leu Arg Leu Tyr Val Asp Ile Asn 245 250 255 Gln Met Pro Glu Gly Gly Ile Ser Leu Thr Ile Lys Asp Pro Arg Trp 260 265 270 Val Gly Ala Trp Trp Leu Gly Phe Leu Ile Ala Ala Gly Ala Val Ala 275 280 285 Leu Ala Ala Ile Pro Tyr Phe Phe Phe Pro Lys Glu Met Pro Lys Glu 290 295 300 Lys Arg Glu Leu Gln Phe Arg Arg Lys Val Leu Ala Val Thr Asp Ser 305 310 315 320 Pro Ala Arg Lys Gly Lys Asp Ser Pro Ser Lys Gln Ser Pro Gly Glu 325 330 335 Ser Thr Lys Lys Gln Asp Gly Leu Val Gln Ile Ala Pro Asn Leu Thr 340 345 350 Val Ile Gln Phe Ile Lys Val Phe Pro Arg Val Leu Leu Gln Thr Leu 355 360 365 Arg His Pro Ile Phe Leu Leu Val Val Leu Ser Gln Val Cys Leu Ser 370 375 380 Ser Met Ala Ala Gly Met Ala Thr Phe Leu Pro Lys Phe Leu Glu Arg 385 390 395 400 Gln Phe Ser Ile Thr Ala Ser Tyr Ala Asn Leu Leu Ile Gly Cys Leu 405 410 415 Ser Phe Pro Ser Val Ile Val Gly Ile Val Val Gly Gly Val Leu Val 420 425 430 Lys Arg Leu His Leu Gly Pro Val Gly Cys Gly Ala Leu Cys Leu Leu 435 440 445 Gly Met Leu Leu Cys Leu Phe Phe Ser Leu Pro Leu Phe Phe Ile Gly 450 455 460 Cys Ser Ser His Gln Ile Ala Gly Ile Thr His Gln Thr Ser Ala His 465 470 475 480 Pro Gly Leu Glu Leu Ser Pro Ser Cys Met Glu Ala Cys Ser Cys Pro 485 490 495 Leu Asp Gly Phe Asn Pro Val Cys Asp Pro Ser Thr Arg Val Glu Tyr 500 505 510 Ile Thr Pro Cys His Ala Gly Cys Ser Ser Trp Val Val Gln Asp Ala 515 520 525 Leu Asp Asn Ser Gln Val Phe Tyr Thr Asn Cys Ser Cys Val Val Glu 530 535 540 Gly Asn Pro Val Leu Ala Gly Ser Cys Asp Ser Thr Cys Ser His Leu 545 550 555 560 Val Val Pro Phe Leu Leu Leu Val Ser Leu Gly Ser Ala Leu Ala Cys 565 570 575 Leu Thr His Thr Pro Ser Phe Met Leu Ile Leu Arg Gly Val Lys Lys 580 585 590 Glu Asp Lys Thr Leu Ala Val Gly Ile Gln Phe Met Phe Leu Arg Ile 595 600 605 Leu Ala Trp Met Pro Ser Pro Val Ile His Gly Ser Ala Ile Asp Thr 610 615 620 Thr Cys Val His Trp Ala Leu Ser Cys Gly Arg Arg Ala Val Cys Arg 625 630 635 640 Tyr Tyr Asn Asn Asp Leu Leu Arg Asn Arg Phe Ile Gly Leu Gln Phe 645 650 655 Phe Phe Lys Thr Gly Ser Val Ile Cys Phe Ala Leu Val Leu Ala Val 660 665 670 Leu Arg Gln Gln Asp Lys Glu Ala Arg Thr Lys Glu Ser Arg Ser Ser 675 680 685 Pro Ala Val Glu Gln Gln Leu Leu Val Ser Gly Pro Gly Lys Lys Pro 690 695 700 Glu Asp Ser Arg Val 705

Claims

SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기의 단일염기다형성(SNP)을 검출할 수 있는 제제; 또는 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드에서 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 약물반응 예측 또는 진단용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 1207번째 염기는 G 또는 T이며; 상기 1536번째 염기는 G 또는 T이고; 상기 1594번째 염기는 G 또는 T이며; 또는 상기 2319번째 염기는 T 또는 C인 것을 특징으로 하는 약물반응 예측 또는 진단용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 약물은 글리벤클라마이드(glibenclamide), 에스트론(estrone-3-sulfate), 벤질페니실린(benzylpenicillin), 펙소페나딘(fexofenadine), 보센탄(Bosentan), 스타틴(statin), 프라바스타틴(pravastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토르바스타틴(atorvastatin) 및 로수바스타틴(rosuvastatin)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 약물반응 예측 또는 진단용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 단일염기다형성(SNP)을 검출할 수 있는 제제는, 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기의 SNP를 포함하는 10~100개의 연속 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 증폭시킬 수 있는 프라이머인 것을 특징으로 하는 약물반응 예측 또는 진단용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 단일염기다형성(SNP)을 검출할 수 있는 제제는, 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기의 SNP를 포함하는 10~100개의 연속 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드와 혼성할 수 있는 프로브인 것을 특징으로 하는 약물반응 예측 또는 진단용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 아미노산을 검출할 수 있는 제제는, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드에서 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산과 결합을 형성할 수 있는 항체인 것을 특징으로 하는 약물반응 예측 또는 진단용 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는 약물반응 예측 또는 진단용 키트.
(a) 검체로부터 시료를 분리하는 단계; 및
(b) 분리된 시료에서 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기를 확인하는 단계 또는 서열번호 2로 이루어지는 폴리펩티드에서 SLCO2B1 단백질의 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 확인하는 단계를 포함하는, 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법.
제8항에 있어서,
상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 1207번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 271번째 아미노산이 아르기닌에서 류신으로 치환된 변이형을 갖는 것을 특징으로 하는 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법.
제8항에 있어서,
상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 1536번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 381번째 아미노산이 발린에서 류신으로 치환된 변이형을 갖는 것을 특징으로 하는 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법.
제8항에 있어서,
상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 1594번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 400번째 아미노산이 아르기닌에서 류신으로 치환된 변이형을 갖는 것을 특징으로 하는 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법.
제8항에 있어서,
상기 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1의 2319번째 염기가 티민(T)에서 시토신(C)으로 치환되는 경우, 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드의 642번째 아미노산이 타이로신에서 히스티딘으로 치환된 변이형을 갖는 것을 특징으로 하는 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법.
제10항에 있어서,
상기 치환된 변이형을 갖는 경우 약물 흡수가 저해되는 군으로 판정하는 것을 특징으로 하는 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법.
제9항, 제11항 또는 제12항에 있어서,
상기 치환된 변이형을 갖는 경우 약물 흡수가 증진되는 군으로 판정하는 것을 특징으로 하는 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법.
제8항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 약물은 글리벤클라마이드(glibenclamide), 에스트론(estrone-3-sulfate), 벤질페니실린(benzylpenicillin), 펙소페나딘(fexofenadine), 보센탄(Bosentan), 스타틴(statin), 프라바스타틴(pravastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토르바스타틴(atorvastatin) 및 로수바스타틴(rosuvastatin)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법.
제10항에 있어서,
상기 치환된 변이형을 갖는 경우 에스트론(estrone-3-sulfate) 약물에 대한 약물 흡수가 저해됨에 따라, 이러한 치환된 변이형을 갖는 검체의 경우 에스트론(estrone-3-sulfate) 약물을 처방하지 않는 것을 특징으로 하는 약물선택 결정을 위한 정보의 제공방법.
검체로부터 분리한 핵산 시료에서 SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위로서 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기를 확인하는 단계; 또는 검체로부터 분리한 단백질 시료에서 서열번호 2로 이루어진 폴리펩티드에서 271번째, 381번째, 400번째 및 642번째로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산을 확인하는 단계를 포함하는, 약물 반응과 관련된 유전자의 변이 유전형 검출방법.
제17항에 있어서,
상기 SLCO2B1의 변이 유전형은 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 1207번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환; 1536번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환; 1594번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환; 및 2319번째 염기가 티민(T)에서 시토신(C)으로 치환되는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 변이인 것을 특징으로 하는, 약물 반응과 관련된 유전자의 변이 유전형 검출방법.
서열번호 1의 SLCO2B1 유전자의 1207번째, 1536번째, 1594번째 및 2319번째 염기로 이루어진 군으로부터 선택된 염기를 확인하는 단계를 포함하는, SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성에 대한 정보제공방법.
제19항에 있어서,
상기 방법은 서열번호 1로 이루어지는 폴리뉴클레오티드에서 SLCO2B1 유전자의 1207번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되었는지 여부; 서열번호 1의 SLCO2B1 유전자의 1536번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되었는지 여부; 서열번호 1의 SLCO2B1 유전자의 1594번째 염기가 구아닌(G)에서 티민(T)으로 치환되었는지 여부; 또는 서열번호 1의 SLCO2B1 유전자의 2319번째 염기가 티민(T)에서 시토신(C)으로 치환되었는지 여부를 확인하는 단계를 포함하는, SLCO2B1 유전자의 단일염기다형성에 대한 정보제공방법.