KR20160098257A - 세포독성 펩티드 및 그의 접합체 - Google Patents

세포독성 펩티드 및 그의 접합체 Download PDF

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얀 그뤼네발트
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테츠오 우노
용친 완
싱 왕
윤호 진
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노파르티스 아게
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Abstract

본원에는, 본원에 기재된 바와 같은 화학식 I의 신규 세포독성 펩티드 및 면역접합체 (즉 항체 약물 접합체)를 제조하는데 있어서 이러한 펩티드의 용도가 개시되어 있다:
<화학식 I>
Figure pct00651

또한, 본원에는 항원 결합 모이어티, 예컨대 항체에 연결된 이러한 신규 세포독성 펩티드를 포함하는 면역접합체 (즉 항체 약물 접합체)가 기재되어 있으며; 여기서 이러한 면역접합체는 세포 증식성 장애를 치료하는데 유용하다. 본 발명은 추가로 이들 면역접합체를 포함하는 제약 조성물, 상기 면역접합체와 치료 공동-작용제를 포함하는 조성물, 및 세포 증식 장애를 치료하기 위해 이들 면역접합체 및 조성물을 사용하는 방법을 제공한다.

Description

세포독성 펩티드 및 그의 접합체 {CYTOTOXIC PEPTIDES AND CONJUGATES THEREOF}
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2013년 12월 17일에 출원된 미국 가출원 번호 61/917293을 우선권 주장하며, 이 가출원은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
발명의 분야
본 발명은 항-유사분열 세포독성 펩티드이며, 세포 증식성 장애를 치료하는데 유용한 화합물을 제공한다. 본 발명은 또한, 항원-결합 모이어티에 연결된 이러한 세포독성 펩티드를 포함하는 접합체, 및 이들 접합체를 함유하는 제약 조성물을 포함한다. 또한, 암을 포함한, 세포 증식 장애를 치료하기 위해 이들 화합물 및 접합체를 사용하는 방법을 포함한다.
특정 세포에 세포독성제 및/또는 세포 증식 억제제의 표적 전달을 위한 항체-약물 접합체 (ADC)의 사용은 중요한 연구의 중심이 되어 왔다. [Antibody-Drug Conjugate, Methods in Molecular Biology, Vol. 1045, Editor L. Ducry, Humana Press (2013)]. ADC는 세포 증식 억제 또는 세포독성 활성을 위해 선택된 약물에 연결된, 치료적 개입의 표적이 되는 세포에 결합하는 그의 능력으로 선택된 항체를 포함한다. 그로 인해 표적 세포에의 항체의 결합은 그 치료 효과가 필요한 부위에 약물을 전달한다.
암 세포와 같은 표적 세포를 인식하고 표적 세포에 선택적으로 결합하는 많은 항체는 ADC에서 사용하기 위해 개시되어 있으며, 항체에 세포 독소와 같은 페이로드(payload) (약물)의 화합물을 부착하기 위한 많은 방법이 또한 기재되어 있다. 비록, ADC에 대한 광범위한 연구에도 불구하고, 단지 소수의 부류의 세포 증식 억제제가 ADC 페이로드로서 광범위하게 사용되어 왔다. 비록 미국에서 인간에서 사용하기 위해 승인된 최초의 ADC가 2000년에 출시 (나중에 시장에서 철수)되었다 할지라도, 10년 후 단지 소수의 화학적 부류의 약물 화합물 (메이탄시노이드, 아우리스타틴, 칼리케아마이신 및 듀오카르마이신)이 ADC를 위한 페이로드로서 임상 시험에 이르렀다. [Antibody-Drug Conjugates: the Next Generation of Moving Parts, A. Lash, Start-Up, Dec. 2011, 1-6]. 따라서, 특히 암을 치료하기 위한 치료제로서 ADC의 널리 인정된 가치를 고려해 볼 때, ADC에서 페이로드로서 사용하기 위해 개선된 특성을 갖는 세포독성 펩티드의 필요성이 남아 있다.
발명의 개요
본원에 제공된 발명은 세포독성 펩티드 및 이러한 세포독성 펩티드를 항체-약물 접합체 (ADC)의 약물 성분으로서 사용하는 방법을 포함한다. 본 발명은 신규 세포독성 펩티드 및 이러한 신규 세포독성 펩티드의 ADC를 위한 페이로드로서의 용도를 포함한다. 본 발명은 추가로 이러한 신규 세포독성 펩티드를 ADC에 혼입하는데 유용한 방법 및 중간체, 및 세포 증식 장애를 치료하기 위해 신규 화합물 및 접합체를 사용하는 방법을 포함한다. 이러한 세포독성 펩티드는 튜블린의 중합을 차단하고 그로 인해 핵 이동 및 핵 및 세포 분열을 차단함으로써 세포 분할을 억제하는 항-유사분열제이다.
본 발명의 한 측면에서 화학식 I의 구조를 갖는, 세포독성 펩티드, 또는 그의 입체이성질체, 및 그의 제약상 허용되는 염이 있다:
<화학식 I>
Figure pct00001
상기 식에서,
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00002
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NR12(CH2)mR16, -LR9, -NHS(O)2R11, -NHS(O)2(CH2)mN3, -NHS(=O)2LR9,
Figure pct00003
이고;
R5는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, -((CH2)mO)nR12, 또는 -CN, -C(=O)NH2 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R7은 LR9이고;
R8은 H 또는 LR9이고;
각각의 L은 독립적으로 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
R9는
Figure pct00004
, -NR12C(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00005
, SH, -SSR15, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR12S(=O)2(CH=CH2), -NR12C(=O)CH2R10, -NR12C(=O)CH2Br, -NR12C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2,
Figure pct00006
, -CO2H, -NH2, -NCO, -NCS,
Figure pct00007
이고;
R10은
Figure pct00008
이고;
각각의 R11은 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴, 페닐로 치환된 이미다졸릴, 페닐로 치환된 옥사디아졸릴, 피라졸릴, 피리미디닐,
Figure pct00009
, -CH2S(=O)2NH2, -CH2S(=O)2NHLR9, -LR9 또는 -X4LR9이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R15는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
R16은 -LR9로 치환되거나 비치환되는, N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
각각의 R19는 H 또는 C1-C6알킬이고;
X3은
Figure pct00010
이고; X4는
Figure pct00011
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
이러한 상기 언급된 측면의 한 실시양태에서,
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00012
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NR12(CH2)mR16, -LR9, -NHS(O)2R11, -NHS(O)2(CH2)mN3, -NHS(=O)2LR9,
Figure pct00013
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R7은 LR9이고;
R8은 H 또는 LR9이고;
각각의 L은 독립적으로 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
R9는
Figure pct00014
, -NR12C(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00015
, SH, -SSR15, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR12S(=O)2(CH=CH2), -NR12C(=O)CH2R10, -NR12C(=O)CH2Br, -NR12C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2,
Figure pct00016
, -CO2H, -NH2, -NCO, -NCS,
Figure pct00017
이고;
R10은
Figure pct00018
이고;
각각의 R11은 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴,
Figure pct00019
,
-LR9 또는 -X4LR9이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R15는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
R16은 -LR9로 치환되거나 비치환되는, N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
X3은
Figure pct00020
이고; X4는
Figure pct00021
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
화학식 I의 구조를 갖는 세포독성 펩티드의 이러한 측면의 특정 실시양태에서,
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나, R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00022
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11,
Figure pct00023
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R8은 H이고;
각각의 R11은 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴,
Figure pct00024
이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R15는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 비치환 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
화학식 I의 구조를 갖는 세포독성 펩티드의 이러한 측면의 특정 실시양태에서, 화학식 Ia의 구조를 갖는 세포독성 펩티드가 있다:
<화학식 Ia>
Figure pct00025
화학식 I 또는 화학식 Ia의 구조를 갖는 세포독성 펩티드의 측면의 다른 실시양태에서, 화학식 Ib의 구조를 갖는 세포독성 펩티드가 있다:
<화학식 Ib>
Figure pct00026
화학식 I의 구조를 갖는 세포독성 펩티드의 측면의 특정 실시양태에서, 화학식 Ic의 구조를 갖는 세포독성 펩티드가 있다:
<화학식 Ic>
Figure pct00027
화학식 I 또는 화학식 Ic의 구조를 갖는 세포독성 펩티드의 측면의 다른 실시양태에서, 화학식 Id의 구조를 갖는 세포독성 펩티드가 있다:
<화학식 Id>
Figure pct00028
화학식 I의 구조를 갖는 세포독성 펩티드의 측면의 특정 실시양태에서, 화학식 Ie의 구조를 갖는 세포독성 펩티드가 있다:
<화학식 Ie>
Figure pct00029
화학식 I 또는 화학식 Ie의 구조를 갖는 세포독성 펩티드의 측면의 다른 실시양태에서, 화학식 If의 구조를 갖는 세포독성 펩티드가 있다:
<화학식 If>
Figure pct00030
본 발명은, 항원 결합 모이어티, 예컨대 항체 또는 항체 단편에 연결된 세포독성 펩티드를 함유하는, 본원에서 ADC로도 칭해지는 면역접합체를 제공한다. 세포독성 펩티드를 포함하는 이들 접합체는, 특히 세포독성 펩티드가, 암 세포를 인식하고 따라서 공격에 표적이 되는 세포에 세포독성 펩티드의 전달을 촉진하는 항체에 연결되는 경우, 세포 증식 장애를 치료하는데 유용하다. 면역접합체는 본원에 더 상세히 설명된 바와 같이 특정 암을 치료하는데 특히 유용하다. 본원에 제공된 데이터는 이들 면역접합체가 세포 증식의 효과적인 억제제임을 입증하며; 이론에 얽매이지 않고, 그들의 활성은 세포에서 튜불린의 중합의 억제로 인한 것으로 여겨진다.
한 측면에서 본 발명의 면역접합체는 화학식 II의 면역접합체를 포함한다:
<화학식 II>
Figure pct00031
상기 식에서,
Ab는 항원 결합 모이어티를 나타내고;
L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
R101은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00032
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
R101은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00033
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00034
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, 또는 -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11 또는
Figure pct00035
이고;
R5는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, -((CH2)mO)nR12, 또는 -CN, -C(=O)NH2 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R11은 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴, 페닐로 치환된 이미다졸릴, 페닐로 치환된 옥사디아졸릴, 피라졸릴, 피리미디닐,
Figure pct00036
또는 -CH2S(=O)2NH2이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
R19는 H 또는 C1-C6알킬이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
한 측면에서 본 발명의 면역접합체는 화학식 II의 면역접합체를 포함한다:
<화학식 II>
Figure pct00037
상기 식에서,
Ab는 항원 결합 모이어티를 나타내고;
L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
R101은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00038
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
R101은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00039
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00040
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, 또는 -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11 또는
Figure pct00041
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R11은 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴,
Figure pct00042
이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
본 발명의 면역접합체의 또 다른 측면에서 화학식 III의 구조를 갖는 면역접합체가 있다:
<화학식 III>
Figure pct00043
상기 식에서,
Ab는 항원 결합 모이어티를 나타내고;
L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00044
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R11은 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
R17은 결합, -NH-, -NHS(=O)2-,
Figure pct00045
이고;
R18은 결합,
Figure pct00046
또는 -CH2S(=O)2NH-이고;
R19는 H 또는 C1-C6알킬이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
본 발명의 면역접합체의 또 다른 측면에서 화학식 III의 구조를 갖는 면역접합체가 있다:
<화학식 III>
Figure pct00047
상기 식에서,
Ab는 항원 결합 모이어티를 나타내고;
L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00048
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R11은 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
R17은 결합, -NH-, -NHS(=O)2-,
Figure pct00049
이고;
R18은 결합,
Figure pct00050
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
본 발명은 전달되는 페이로드 (약물)로서 화학식 I의 세포독성 펩티드를 사용하여 이러한 ADC를 제조하는 방법을 제공한다. 이러한 세포독성 펩티드에서 세포독성 펩티드 N-말단 또는 C-말단을 변형시켜 반응성 관능기, 및 임의로 하나 이상의 링커 성분을 갖도록 하고, 세포독성 펩티드가 항체 또는 항원 결합 단편에 직접 또는 간접적으로 연결되는 것을 촉진시킨다 (예를 들어 화학식 I의 세포독성 펩티드의 상기 기재된 제2 및 제3 측면). 게다가, 본 발명은 세포 증식 장애를 치료하기 위해 이들 ADC를 사용하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체를, 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합하여, 임의로 2종 이상의 제약상 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합하여 포함하는 제약 조성물, 및 세포 증식 장애를 치료하기 위해 이들 조성물을 사용하는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 과도하거나 바람직하지 않은 세포 증식을 특징으로 하는 병태의 치료를 필요로 하는 대상체에게 유효량의 화학식 II 또는 화학식 III의 면역접합체를 투여하는 것을 특징으로 하는, 상기 병태를 치료하는 방법을 제공한다. 치료 대상은 포유동물일 수 있고, 바람직하게는 인간이다. 본원에 기재된 면역접합체 및 방법에 의해 치료가능한 병태는 다양한 형태의 암, 예컨대 위, 골수, 결장, 비인두, 식도, 및 전립선 종양, 신경교종, 신경모세포종, 유방암, 폐암, 난소암, 결장직장암, 갑상선암, 백혈병 (예를 들어, 골수성 백혈병, 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), T-계통 급성 림프모구성 백혈병 또는 T-ALL 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 골수이형성 증후군 (MDS), 털 세포 백혈병), 림프종 (호지킨 림프종 (HL), 비호지킨 림프종 (NHL)), 다발성 골수종, 방광, 신장, 위 (예를 들어, 위장관 기질 종양 (GIST)), 간, 흑색종 및 췌장 암, 및 육종을 포함한다. 이들 방법 및 조성물로 치료될 수 있는 다른 세포 증식 장애는 당뇨 망막병증, 간 및 폐 섬유증, 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 및 홍반 루푸스를 포함한다.
본 발명은 화학식 I 내지 III 및 본원에 기재된 바와 같은 그의 하위 화학식, 및 그의 모든 입체이성질체 (부분입체이성질체 및 거울상이성질체 포함), 호변이성질체, 및 동위원소 농축 형태 (중수소 치환 포함)뿐만 아니라 이들 화합물의 제약상 허용되는 염의 조성물을 포함한다. 본 발명은 또한 화학식 I (또는 그의 하위-화학식)의 다형체 및 그의 염, 특히 제약상 허용되는 염을 포함한다.
도 1. MDA-MB-231 클론 40을 이용한, 항-Her2 Cys (A) 및 A1/ybbR 태그(tag) (B) 돌연변이체 ADC, MDA-MB-231 클론 16을 이용한 항-Her2 Cys (C) 및 A1/ybbR 태그 (D) 돌연변이체 ADC, HCC1954를 이용한 항-Her2 Cys (E) 및 A1/ybbR 태그 (F) 돌연변이체 ADC, 및 JimT-1 세포를 이용한 항-Her2 Cys (G) 및 A1/ybbR 태그 (H) 돌연변이체 ADC의 시험관내 세포 증식 검정.
도 2. 항체 20507-HC-E152C-10 (A), 항체 20507-HC-S375C-47 (B), 항체 20507-HC-ins388-A1-20 (C), 및 항체 20507-HC-ins388-A1-49-22 (D) ADC의 시험관내 세포 증식 검정.
도 3. 실험에 사용된 적이 없는 마우스에서 항-Her2-LC-S159C-10 (A), 항-Her2-LC-S159C-47 (B), 항-Her2-LC-S159C-77 (C), 항-Her2-LC-S159C-80 (D), 항-Her2-LC-S159C-79 (E), 항-Her2-LC-S159C-78 (F), 항-Her2-LC-S159C-14 (G), 항-Her2-HC-E152C-S375C-10 (H), 및 항-Her2-10 (I)의 약물동태학적 연구.
도 4. 1 mg/kg의 용량에서 실험에 사용된 적이 없는 마우스에서 항체 20507-HC-E152C-10 (A), 항체 20507-LC-K107C-47 (B), 항체 20507-HC-ins388-A1-20 (C), 항체 20507-HC-E152C-S375C-10 (D), 항체 20507-10 (E), 항-Her2-HC-ins388-ybbR-20 (G), 항체 20507-HC-ins388-A1-49-22 (H), 항-Her2-HC-ins388-A1-49-22 (I), 및 항-Her2-HC-ins388-ybbR-(i-11)-75 (J) ADC의 약물동태학적 연구. 항체 20507-HC-ins388-A1-20 (F)의 약물동태학적 연구를 10 mg/kg의 용량에서 종양-보유 마우스에서 수행하였다.
도 5. ADC의 시험관내 안정성 연구. 37℃에서 상이한 pH를 갖는 완충제에서 인큐베이션된 항-Her2-LC-S159C-10의 페이로드 보유의 경시 변화 (A), 37℃에서 상이한 pH를 갖는 완충제에서 인큐베이션된 항-Her2-LC-S159C-10의 숙신이미드 고리 가수분해의 경시 변화 (B), 37℃에서 상이한 pH를 갖는 완충제에서 인큐베이션된 항-Her2-LC-S159C-47의 페이로드 보유의 경시 변화 (C), 37℃에서 상이한 pH를 갖는 완충제에서 인큐베이션된 항-Her2-LC-S159C-47의 숙신이미드 고리 가수분해의 경시 변화 (D), 24시간 동안 37℃에서 pH 8.5 완충제에서 인큐베이션된 항-Her2-LC-S159C-10, 항-Her2-LC-S159C-77, 항-Her2-LC-S159C-80, 항-Her2-LC-S159C-79, 항-Her2-LC-S159C-78 및 항-Her2-LC-S159C-14의 페이로드 보유율(retention rate) (E), 24시간 동안 37℃에서 pH 8.5 완충제에서 인큐베이션된 항-Her2-LC-S159C-10, 항-Her2-LC-S159C-77, 항-Her2-LC-S159C-80, 항-Her2-LC-S159C-79, 항-Her2-LC-S159C-78 및 항-Her2-LC-S159C-14의 숙신이미드 고리 가수분해의 정도 (F).
도 6. H526 종양 모델에서 항체 20507 ADC의 생체내 효능 연구. (A) 항체 20507-HC-E152C-10 및 항체 20507-HC-E152C-MMAF ADC. (B) 항체 20507-HC-E152C-10, 항체 20507-HC-ins388-A1-20 및 항체 20507-LC-S159C-MMAF ADC. (C) 항체 20507-HC-E152C-S375C-10 및 항체 20507-10. (D) 항체 20507-HC-E152C-10, 항체 20507-HC-ins388-A1-49-22, 및 항-Her2-HC-ins388-A1-49-22 ADC.
상세한 설명
달리 명시적으로 제공되지 않는 한 다음의 정의가 적용된다.
용어 "아미노산"은 정규(canonical), 합성, 및 비천연 아미노산, 뿐만 아니라 정규 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 정규 아미노산은 유전자 코드에 의해 코딩되는 단백질 생성 아미노산이며, 알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 발린, 뿐만 아니라 셀레노시스테인, 피롤리신 및 피롤린-카르복시-리신을 포함한다. 아미노산 유사체는 정규 아미노산과 동일한 기본 화학 구조, 즉, 수소, 카르복실 기, 아미노 기 및 R 기에 결합된 α-탄소를 갖는 화합물, 예를 들어 호모세린, 노르류신, 메티오닌 술폭시드, 메티오닌 메틸 술포늄을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R 기 (예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩티드 골격을 갖지만, 정규 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 보유한다.
용어 "항원 결합 모이어티"는 본원에 사용된 바와 같이, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 모이어티를 지칭하고, 항체 및 항체 단편을 포함하나 그에 제한되지는 않는다.
용어 "항체"는 본원에 사용된 바와 같이, 상응하는 항원을, 비-공유결합으로, 가역적으로, 그리고 특이적인 방식으로 결합할 수 있는 면역글로불린 패밀리의 폴리펩티드를 지칭한다. 예를 들어, 천연 발생 IgG 항체는 디술피드 결합에 의해 상호-연결된 적어도 2개의 중(H) 쇄 및 2개의 경(L) 쇄를 포함하는 사량체이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 (본원에서 VH로 약칭됨) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2 및 CH3인 3개의 도메인으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 (본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 CL인 1개의 도메인으로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역 (FR)으로 칭해지는 더욱 보존된 영역이 산재되어 있는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 칭해지는 초가변성 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 아미노-말단에서 카르복시-말단으로 하기의 순서로 배열된 3개의 CDR 및 4개의 FR로 구성된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포 (예를 들어, 이펙터 세포) 및 고전적인 보체 시스템의 제1 성분 (Clq)을 포함한, 숙주 조직 또는 인자에의 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
용어 "항체"는 모노클로날 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 낙타류 항체, 키메라 항체, 및 항-개별특이형(idiotypic) (항-Id) 항체 (예를 들어, 본 발명의 항체에 대한 항-Id 항체 포함)를 포함하나, 그에 제한되지는 않는다. 항체는 임의의 이소형/부류 (예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 또는 하위부류 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)일 수 있다.
경쇄 및 중쇄 둘 다가 구조적 및 기능성 상동성의 영역으로 분할된다. 용어 "불변" 및 "가변"은 기능적으로 사용된다. 이와 관련하여, 경쇄 (VL) 및 중쇄 (VH) 부분 둘 다의 가변 도메인이 항원 인식 및 특이성을 결정하는 것으로 이해될 것이다. 반대로, 경쇄 (CL) 및 중쇄 (CH1, CH2 또는 CH3)의 불변 도메인은 중요한 생물학적 특성, 예를 들어 분비, 태반경유 이동, Fc 수용체 결합, 보체 결합 등을 부여한다. 관례적으로, 불변 영역 도메인의 넘버링은 항체의 항원 결합 부위 또는 아미노-말단에서 더욱 멀어짐에 따라 증가한다. N-말단은 가변 영역이고, C-말단에서는 불변 영역이며; CH3 및 CL 도메인은 실제로 각각 중쇄 및 경쇄의 카르복시-말단 도메인을 포함한다.
용어 "항원 결합 단편"은, 본원에서 사용된 바와 같이, (예를 들어, 결합, 입체 장애, 안정화/탈안정화, 공간 분포에 의해) 항원의 에피토프와 특이적으로 상호작용하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 부분을 지칭한다. 결합 단편의 예는 단일-쇄 Fv (scFv), 디술피드-연결 Fv (sdFv), Fab 단편, F(ab') 단편, VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편; 힌지(hinge) 영역에서 디술피드 브릿지로 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab)2 단편; VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편 (문헌 [Ward et al., Nature 341:544-546, 1989]); 및 단리된 상보성 결정 영역 (CDR), 또는 항체의 기타 에피토프-결합 단편을 포함하나, 그에 제한되지는 않는다.
더욱이, 비록 Fv 단편의 2개의 도메인인 VL 및 VH가 별도의 유전자에 의해 코딩되긴 하지만, 이들은, 재조합 방법을 사용하여, 이들을 VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성하는 단일 단백질 쇄 (단일쇄 Fv ("scFv")로 공지됨; 예를 들어, 문헌 [Bird et al., Science 242:423-426, 1988]; 및 [Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883, 1988] 참조)로 만들어지게 할 수 있는 합성 링커에 의해 연결될 수 있다. 이러한 단일쇄 항체 또한 용어 "항원 결합 단편" 내에 포함되도록 의도된다. 이들 항원 결합 단편은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술을 사용하여 수득되고, 무손상 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 단편이 스크리닝된다.
항원 결합 단편은 또한 단일 도메인 항체, 맥시바디(maxibody), 미니바디(minibody), 나노바디(nanobody), 인트라바디(intrabody), 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 테트라바디(tetrabody), v-NAR 및 bis-scFv 내로 혼입될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Hollinger and Hudson, Nature Biotechnology 23:1126-1136, 2005] 참조). 항원 결합 단편이 III형 피브로넥틴 (Fn3)과 같은 폴리펩티드를 기초로 하는 스캐폴드 내로 그라프팅될 수 있다 (피브로넥틴 폴리펩티드 모노바디(monobody)가 기술되어 있는 미국 특허 번호 6,703,199 참조).
항원 결합 단편이 한 쌍의 직렬 Fv 절편 (VH-CH1-VH-CH1)을 포함하는 단일쇄 분자 내로 혼입될 수 있고, 이는 상보적인 경쇄 폴리펩티드와 함께 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성한다 (문헌 [Zapata et al., Protein Eng. 8:1057-1062, 1995]; 및 미국 특허 번호 5,641,870 참조).
용어 "모노클로날 항체" 또는 "모노클로날 항체 조성물"은 본원에 사용된 바와 같이, 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖거나 동일한 유전자 공급원으로부터 유래되는 폴리펩티드 (항체 및 항원 결합 단편 포함)를 지칭한다. 이러한 용어는 또한 단일한 분자 조성의 항체 분자들의 제제를 포함한다. 모노클로날 항체 조성물은 특정 에피토프에 대한 단일한 결합 특이성 및 친화도를 나타낸다.
용어 "인간 항체"는, 본원에 사용된 바와 같이, 프레임워크 및 CDR 둘 다가 인간 기원의 서열로부터 유래되는 가변 영역을 갖는 항체를 포함한다. 더욱이, 항체가 불변 영역을 함유하면, 불변 영역 또한 이러한 인간 서열, 예를 들어 인간 생식계열 서열, 또는 인간 생식계열 서열의 돌연변이형, 또는 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래된 컨센서스(consensus) 프레임워크 서열을 함유하는 항체 (예를 들어, 문헌 [Knappik et al., J. Mol. Biol. 296:57-86, 2000]에 기술된 바와 같음)로부터 유래된다.
본 발명의 인간 항체는 인간 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다 (예를 들어, 시험관내에서의 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내에서의 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이, 또는 안정성 또는 제작을 촉진하기 위한 치환).
용어 "인간화" 항체는, 본원에 사용된 바와 같이, 비-인간 항체의 반응성을 보유하면서 인간에서 덜 면역원성인 항체를 지칭한다. 이는, 예를 들어, 비-인간 CDR 영역을 보유하고 항체의 나머지 부분을 그의 인간 대응물로 대체함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]; [Morrison and Oi, Adv. Immunol., 44:65-92 (1988)]; [Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536 (1988)]; [Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991)]; [Padlan, Molec. Immun., 31(3):169-217 (1994)] 참조.
용어 "특이적으로 결합하다" 또는 "선택적으로 결합하다"는, 항원 (예를 들어, 단백질 또는 글리칸)과 항체, 항체 단편, 또는 항체-유래 결합제와의 상호작용을 기술하는 맥락에서 사용되는 경우, 예를 들어, 생물학적 샘플, 예를 들어, 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직 샘플에서, 단백질과 다른 생물 제제의 이종 개체군에서 항원의 존재의 결정적 인자인 결합 반응을 지칭한다. 따라서, 특정 지정된 면역검정 조건 하에, 특정의 결합 특이성을 갖는 항체 또는 결합제는 백그라운드에 적어도 2배로 특정의 항원에 결합하고 샘플에 존재하는 다른 항원에 상당한 양으로 실질적으로 결합하지 않는다. 한 실시양태에서, 지정된 면역검정 조건 하에, 특정의 결합 특이성을 갖는 항체 또는 결합제는 백그라운드에 적어도 십(10)배로 특정의 항원에 결합하고 샘플에 존재하는 다른 항원에 상당한 양으로 실질적으로 결합하지 않는다. 이러한 조건 하에 항체 또는 결합제에 대한 특이적 결합은 항체 또는 작용제가 특정의 단백질에 대한 그의 특이성에 대해 선택되는 것을 필요로 할 수 있다. 필요에 따라 또는 적절한 경우, 이러한 선택은 다른 종 (예를 들어, 마우스 또는 래트) 또는 다른 아형으로부터의 분자와 교차-반응하는 항체를 감산함으로써 달성될 수 있다. 대안으로, 일부 실시양태에서, 특정 목적 분자와 교차-반응하는 항체 또는 항체 단편이 선택된다.
다양한 면역검정 형식을 사용하여 특정 단백질과 특이적으로 면역반응하는 항체를 선택할 수 있다. 예를 들어, 고체-상 ELISA 면역검정이 관례대로 사용되어 단백질과 특이적으로 면역반응성인 항체를 선택한다 (예를 들어, 특이적 면역반응성을 결정하는데 사용될 수 있는 면역검정 형식 및 조건의 기재의 경우, 문헌 [Harlow & Lane, Using Antibodies, A Laboratory Manual (1998)] 참조). 전형적으로 특이적 또는 선택적 결합 반응은 백그라운드에 비해 적어도 2배, 보다 전형적으로 백그라운드에 비해 적어도 10 내지 100배의 신호를 초래할 것이다.
용어 "친화도"는 본원에 사용된 바와 같이, 단일 항원 부위에서의 항체와 항원 사이의 상호작용의 강도를 지칭한다. 각각의 항원 부위 내에서, 항체 "아암"의 가변 영역은 다수의 부위에서 약한 비-공유결합력을 통해 항원과 상호작용하며; 상호작용이 더 많을수록, 친화도가 더 강하다.
용어 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 지칭한다. 그러나, 하나의 항원에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 항원에 대한 교차-반응성을 가질 수 있다. 게다가, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다.
용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기들의 중합체를 지칭하도록 본원에서 상호교환가능하게 사용된다. 이 용어는 정규 아미노산 중합체뿐만 아니라 비-정규 아미노산 중합체에도 적용된다. 달리 명시되지 않는 한, 특정의 폴리펩티드 서열은 또한 그의 변형된 변이체를 함축적으로 포함한다.
용어 "면역접합체" 또는 "항체-약물-접합체"는 본원에 사용된 바와 같이, 항원 결합 모이어티, 예컨대 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 화학식 I의 세포독성 펩티드의 연결을 지칭한다. 이 연결은 공유 결합, 또는 비-공유 상호작용일 수 있고, 킬레이트화를 포함할 수 있다. 관련 기술분야에 공지된, 다양한 링커가 면역접합체를 형성시키기 위해 사용될 수 있다.
용어 "세포독소", 또는 "세포독성제"는 본원에 사용된 바와 같이, 세포의 성장 및 증식에 해롭고, 세포 또는 악성종양을 감소, 억제, 또는 파괴하는 작용을 할 수 있는 임의의 작용제를 지칭한다.
용어 "항암제"는 본원에 사용된 바와 같이, 세포독성제, 화학요법제, 방사선요법 및 방사선요법제, 표적화된 항암제, 및 면역요법제를 포함하나 그에 제한되지는 않는, 암과 같은 세포 증식성 장애를 치료하는데 사용될 수 있는 임의의 작용제를 지칭한다.
용어 "약물 모이어티" 또는 "페이로드"는 본원에 사용된 바와 같이, 면역접합체를 형성하기 위해 항체 또는 항원 결합 단편에 접합되거나 접합될 수 있으며, 항체 또는 항원 결합 단편에 부착되는데 유용한 임의의 모이어티를 포함할 수 있는 화학 모이어티를 지칭한다. 예를 들어, "약물 모이어티" 또는 "페이로드"는 본원에 기재된 세포독성 펩티드를 포함하나, 그에 제한되지는 않는다. 본 발명의 면역접합체는 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 세포독성 펩티드를 페이로드로서 포함하나, 또한 하나 이상의 다른 페이로드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 약물 모이어티 또는 페이로드를 포함한 다른 페이로드는, 항암제, 항염증제, 항진균제, 항박테리아제, 항기생충제, 항바이러스제, 또는 마취제일 수 있다. 특정 실시양태에서 약물 모이어티는 Eg5 억제제, HSP90 억제제, IAP 억제제, mTor 억제제, 미세소관 안정화제, 미세소관 탈안정화제, 아우리스타틴, 돌라스타틴, 메이탄시노이드, MetAP (메티오닌 아미노펩티다제), 단백질 CRM1의 핵 유출의 억제제, DPPIV 억제제, 미토콘드리아에서의 포스포릴 전달 반응의 억제제, 단백질 합성 억제제, 키나제 억제제, CDK2 억제제, CDK9 억제제, 프로테아솜 억제제, 키네신 억제제, HDAC 억제제, DNA 손상제, DNA 알킬화제, DNA 삽입제, DNA 마이너 그루브 결합제 및 DHFR 억제제로부터 선택된다. 적합한 예는 칼리케아마이신, 예컨대 감마-칼리케아마이신; 및 메이탄시노이드, 예컨대 DM1, DM3 및 DM4를 포함한다. 이들 각각을 본 발명의 항체 및 방법과 상용성인 링커에 부착시키는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Singh et al., (2009) Therapeutic Antibodies: Methods and Protocols, vol. 525, 445-457] 참조.
"종양"은 신생물성 세포 성장 및 증식 (악성이든 양성이든), 및 모든 전암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다.
용어 "항-종양 활성"은 종양 세포 증식 속도, 생존율, 또는 전이 활성에서의 감소를 의미한다. 항-종양 활성을 나타내는 가능한 방식은 요법 동안 발생하는 비정상 세포의 성장 속도의 하락 또는 종양 크기 안정성 또는 감소를 나타내는 것이다. 이종이식 모델, 동종이식 모델, MMTV 모델, 및 항-종양 활성을 연구하는 관련 기술분야에 공지되어 있는 기타 공지 모델을 포함하나 그에 제한되지는 않는 승인된 시험관내 또는 생체내 종양 모델을 사용하여 이러한 활성을 평가할 수 있다.
용어 "악성종양"은 비-양성 종양 또는 암을 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "암"은 탈조절되거나 비제어된 세포 성장을 특징으로 하는 악성종양을 포함한다. 예시적인 암은 암종, 육종, 백혈병 및 림프종을 포함한다.
용어 "암"은 원발성 악성 종양 (예를 들어, 종양 세포가 원래의 종양 부위 이외의 대상체의 신체 내의 부위로 이동하지 않은 종양) 및 2차 악성 종양 (예를 들어, 종양 세포가 원래 종양의 부위와 상이한 2차 부위로 이동하는 것인 전이로부터 발생된 종양)을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "제약상 허용되는 담체"는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 바와 같은 임의의 그리고 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제 (예를 들어 항박테리아제, 항진균제), 등장화제, 흡수 지연제, 염, 보존제, 약물 안정화제, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료 등, 및 그의 조합을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329] 참조). 임의의 통상적인 담체가 활성 성분과 상용적이지 않은 경우를 제외하고는, 치료 또는 제약 조성물에서의 그의 사용이 고려된다.
본 발명의 화합물에 대한 용어 "치료 유효량"은 대상체의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제, 또는 증상의 개선, 병태의 완화, 질환 진행의 둔화 또는 지연, 또는 질환의 예방 등을 도출할 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. 한 비제한적 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은, 대상체에게 투여시, 병태, 또는 장애 또는 질환을 적어도 부분적으로 완화, 억제, 예방 및/또는 개선하는데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "대상체"는 동물을 지칭한다. 전형적으로 동물은 포유동물이다. 대상체는 또한 예를 들어 영장류 (예를 들어, 인간, 남성 또는 여성), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스, 어류, 조류 등을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 영장류이다. 구체적 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "억제하다", "억제" 또는 "억제하는"은 주어진 병태, 증상, 또는 장애, 또는 질환의 감소 또는 저해, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기저 활성에서의 상당한 하락을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 임의의 질환 또는 장애에 대한 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는, 한 실시양태에서, 질환 또는 장애의 개선 (즉, 질환 또는 그의 임상적 증상 중 하나 이상의 발생의 둔화 또는 저지 또는 감소)을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 환자에 의해 식별가능하지 않을 수 있는 것들을 포함한 하나 이상의 물리적 파라미터의 완화 또는 개선을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 신체적으로 (예를 들어, 식별가능한 증상의 안정화), 생리학적으로 (예를 들어, 물리적 파라미터의 안정화), 또는 신체적으로 및 생리학적으로 질환 또는 장애의 조정을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애의 진행을 방지 또는 지연시키는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 대상체는 이러한 대상체가 이러한 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질의 면에서 이점을 얻는다면 상기 치료를 "필요로 하는"이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 부정관사, 정관사 및 본 발명의 맥락에서 (특히 청구항의 문맥에서) 유사한 용어는 본원에서 달리 명시되지 않거나 문맥에 의해 분명히 모순되지 않는 한 단수 및 복수 둘 다를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 변형된 면역접합체는, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8, 또는 12 또는 16의 "세포독성 펩티드-대-항체"의 비에 따라 기재되며; 이 비는 화학식 II 및 화학식 III에서 "y"에 상응한다. 이 비가 특정의 접합체 분자에 대한 정수 값을 갖지만, 면역접합체의 샘플 내에 어느 정도의 불균질성으로 인해, 많은 분자를 함유하는 샘플을 기재하기 위해 평균값이 전형적으로 사용되는 것으로 이해된다. 면역접합체의 샘플에 관한 평균 로딩은 본원에서 "약물 대 항체 비" 또는 DAR로서 지칭된다. 일부 실시양태에서, DAR은 약 1 내지 약 16, 및 전형적으로 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8이다. 일부 실시양태에서, 중량 기준으로 샘플의 적어도 50%는 평균 DAR 플러스 또는 마이너스 2를 갖는 화합물이며, 바람직하게는 샘플의 적어도 50%는 평균 DAR 플러스 또는 마이너스 1.5를 함유하는 생성물이다. 바람직한 실시양태는 DAR이 약 2 내지 약 8, 예를 들어, 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 또는 약 8인 면역접합체를 포함한다. 이들 실시양태에서, "약 q"의 DAR은 DAR에 대한 측정값이 q의 ±20% 내에, 또는 바람직하게는 q의 ±10% 내에 있음을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "광학 이성질체" 또는 "입체이성질체"는 본 발명의 주어진 화합물에 대해 존재할 수 있는 다양한 입체 이성질체 배위 중 임의의 것을 지칭하며, 기하 이성질체를 포함한다. 치환기가 탄소 원자의 키랄 중심에서 부착될 수 있는 것으로 이해된다. 용어 "키랄"은 그의 거울상 파트너에 비-중첩가능성의 특성을 갖는 분자를 지칭하며, 한편 용어 "비키랄"은 그의 거울상 파트너에 중첩가능한 분자를 지칭한다. 따라서, 본 발명은 화합물의 거울상이성질체, 부분입체이성질체 또는 라세미체를 포함한다. "거울상이성질체"는 서로 비-중첩가능한 거울상인 한 쌍의 입체이성질체이다. 한 쌍의 거울상이성질체의 1:1 혼합물이 "라세미" 혼합물이다. 이 용어는 적절한 경우에 라세미 혼합물을 지정하는데 사용된다. "부분입체이성질체"는 2개 이상의 비대칭 원자를 갖지만, 서로 거울상이 아닌 입체이성질체이다. 절대 입체화학은 칸-인골드-프렐로그(Cahn-Ingold-Prelog) R-S 시스템에 따라 특정된다. 화합물이 순수한 거울상이성질체인 경우, 각각의 키랄 탄소에서의 입체화학은 R 또는 S에 의해 특정될 수 있다. 절대 배위가 알려지지 않은 분할된 화합물은 이들이 나트륨 D 선의 파장에서 평면 편광을 회전시키는 방향에 따라 (+) 또는 (-) (우선성 또는 좌선성)로 지정될 수 있다. 본원에 기재된 특정 화합물은 1개 이상의 비대칭 중심 또는 축을 함유하고, 따라서 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 및 절대 입체화학의 관점에서 (R)- 또는 (S)-로 정의될 수 있는 다른 입체이성질체 형태를 생성할 수 있다.
출발 물질 및 절차의 선택에 따라, 화합물은 가능한 이성질체 중 하나의 형태 또는 그의 혼합물로서, 예를 들어, 비대칭 탄소 원자의 수에 따라, 순수한 광학 이성질체, 또는 이성질체의 혼합물, 예컨대 라세미체 및 입체 이성질체의 혼합물로서 존재할 수 있다. 본 발명은, 달리 언급되지 않는 한, 예를 들어, 구체적 이성질체가 확인되는 경우, 라세미 혼합물, 부분입체이성질체 혼합물 및 임의로 순수한 형태를 포함한 모든 이러한 가능한 이성질체를 포함함을 의미한다. 광학 활성 (R)- 및 (S)- 이성질체는 키랄 신톤 또는 키랄 시약을 사용하여 제조하거나, 통상적인 기술을 사용하여 분해할 수 있다. 화합물이 이중 결합을 함유하는 경우, 치환기는 E 또는 Z 배위일 수 있다. 화합물이 이치환 시클로알킬을 함유하는 경우, 시클로알킬 치환기는 시스- 또는 트랜스-배위를 가질 수 있다. 모든 호변이성질체 형태가 또한 포함되는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "염" 또는 "염들"은 본 발명의 화합물의 산 부가 또는 염기 부가 염을 지칭한다. "염"은 특히 "제약상 허용되는 염"을 포함한다. 용어 "제약상 허용되는 염"은 본 발명의 화합물의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하고, 전형적으로는 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌, 염을 지칭한다. 많은 경우에, 본 발명의 화합물은 아미노 및/또는 카르복실 기 또는 이와 유사한 기의 존재로 인해 산 및/또는 염기 염을 형성할 수 있다.
제약상 허용되는 산 부가 염은 무기 산 및 유기 산을 이용하여 형성될 수 있으며, 예를 들어, 아세테이트, 아스파테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카보네이트/카보네이트, 비술페이트/술페이트, 캄포르술포네이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 클로로테오필리네이트, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 히푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우릴 술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 인산염/인산수소/인산이수소, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술포살리실레이트, 타르트레이트, 토실레이트 및 트리플루오로아세테이트 염이다.
염이 유래될 수 있는 무기산은, 예를 들어, 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다.
염이 유래될 수 있는 유기산은, 예를 들어, 아세트산, 프로피온산, 글리콜 산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산, 술포살리실산 등을 포함한다. 제약상 허용되는 염기 부가 염은 무기 및 유기 염기를 이용하여 형성될 수 있다.
염이 유래될 수 있는 무기 염기는, 예를 들어, 암모늄 염 및 주기율표 I 내지 XII열로부터의 금속을 포함한다. 특정 실시양태에서, 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 은, 아연, 및 구리로부터 유래되며; 특히 적합한 염은 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘 염을 포함한다.
염이 유래될 수 있는 유기 염기는, 예를 들어, 1급, 2급, 및 3급 아민, 천연 발생 치환 아민을 포함한 치환 아민, 시클릭 아민, 염기성 이온 교환 수지 등을 포함한다. 특정 유기 아민은 이소프로필아민, 벤자틴, 콜리네이트, 디에탄올아민, 디에틸아민, 리신, 메글루민, 피페라진 및 트로메타민을 포함한다.
본 발명의 제약상 허용되는 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티로부터 합성할 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산 형태를 화학량론적 양의 적절한 염기 (예컨대 Na, Ca, Mg, 또는 K 수산화물, 탄산염, 중탄산염 등)와 반응시킴으로써, 또는 이들 화합물의 유리 염기 형태를 화학량론적 양의 적절한 산과 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 이러한 반응은 전형적으로 물 또는 유기 용매에서, 또는 이 둘의 혼합물에서 수행한다. 일반적으로, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴과 같은 비-수성 매질의 사용이, 실행 가능한 경우, 바람직하다. 추가의 적합한 염의 목록은, 예를 들어, 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985)]; 및 ["Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]에서 찾을 수 있다.
본원에서 제공된 모든 화학식은 또한 화합물의 비표지된 형태뿐만 아니라 동위원소 표지된 형태를 나타내는 것으로 의도된다. 동위원소로 표지된 화합물은 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체되는 것을 제외하고 본원에서 제공된 화학식에 의해 묘사된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 플루오린 및 염소, 예컨대 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F 31P, 32P, 35S, 36Cl, 125I 각각의 동위원소를 포함한다. 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 다양한 동위원소 표지된 화합물, 예를 들어 방사성 동위원소, 예컨대 3H 및 14C가 존재하는 것들, 또는 비-방사성 동위원소, 예컨대 2H 및 13C가 존재하는 것들을 포함한다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 대사 연구 (14C로), 반응 동역학 연구 (예를 들어 2H 또는 3H로), 검출 또는 영상화 기술, 예컨대 양전자 방출 단층 촬영 (PET) 또는 단일 광자 방출 컴퓨터 단층 촬영 (SPECT) (약물 또는 기질 조직 분포 검정 포함)에서, 또는 환자의 방사성 치료에서 유용하다. 특히, 18F 또는 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. 화학식 I의 동위원소-표지된 화합물은 일반적으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 또는 이전에 사용된 비-표지된 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 수반하는 실시예 및 제조예에 기재된 것들과 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다.
추가로, 더 무거운 동위원소, 특히 중수소 (즉, 2H 또는 D)로의 치환은 더 큰 대사 안정성으로부터 생긴 특정 치료학적 이점, 예를 들어 생체내 반감기의 증가 또는 필요 투여량의 감소 또는 치료 지수의 개선을 제공할 수 있다. 이와 같은 더 무거운 동위원소, 특히 중수소의 농도는 동위원소 농축 계수에 의해 정의될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "동위원소 농축 계수"는 특정된 동위원소의 동위원소 존재비와 천연 존재비 사이의 비율을 의미한다. 본 발명의 화합물 내의 치환기가 표시된 중수소인 경우, 이러한 화합물은 각각의 지정된 중수소 원자에 대해 적어도 3500 (각각의 지정된 중수소 원자에서 52.5% 중수소 혼입), 적어도 4000 (60% 중수소 혼입), 적어도 4500 (67.5% 중수소 혼입), 적어도 5000 (75% 중수소 혼입), 적어도 5500 (82.5% 중수소 혼입), 적어도 6000 (90% 중수소 혼입), 적어도 6333.3 (95% 중수소 혼입), 적어도 6466.7 (97% 중수소 혼입), 적어도 6600 (99% 중수소 혼입), 또는 적어도 6633.3 (99.5% 중수소 혼입)의 동위원소 농축 계수를 갖는다.
본 발명에 따른 제약상 허용되는 용매화물은 결정화의 용매가 동위원소 치환될 수 있는 것들, 예를 들어 D2O, d6-아세톤, d6-DMSO, 뿐만 아니라 비-농축 용매를 이용한 용매화물을 포함한다.
본 발명의 화합물, 즉 수소 결합을 위한 공여체 및/또는 수용체로서 작용할 수 있는 기를 함유하는 화학식 I의 화합물은 적합한 공결정 형성제로 공결정을 형성할 수 있다. 이들 공결정은 공지된 공결정 형성 절차에 의해 화학식 I의 화합물로부터 제조될 수 있다. 이러한 절차는 화학식 I의 화합물을 분쇄, 가열, 공동-승화, 공동-용해, 또는 결정화 조건 하에 공결정 형성제와 용액 중 접촉시키고 그로 인해 형성된 공결정을 단리하는 것을 포함한다. 적합한 공결정 형성제는 WO 2004/078163에 기재된 것들을 포함한다. 따라서, 본 발명은 추가로 화학식 I의 화합물을 포함하는 공결정을 제공한다.
본 발명의 화합물(들)의 임의의 비대칭 원자 (예를 들어, 탄소 등)는 라세미체 또는 거울상이성질체 농축, 예를 들어 (R)-, (S)- 또는 (R,S)- 배위에 존재할 수 있다. 특정 실시양태에서, 각각의 비대칭 원자는 적어도 50% 거울상이성질체 과잉률, 적어도 60% 거울상이성질체 과잉률, 적어도 70% 거울상이성질체 과잉률, 적어도 80% 거울상이성질체 과잉률, 적어도 90% 거울상이성질체 과잉률, 적어도 95% 거울상이성질체 과잉률, 또는 적어도 99% 거울상이성질체 과잉률의 (R)- 또는 (S)-배위를 갖고; 즉, 광학 활성 화합물의 경우, 한 거울상이성질체의 실질적인 배제에 대해 다른 하나의 거울상이성질체를 사용하는 것이 종종 바람직하다. 불포화 이중 결합을 갖는 원자에서 치환기는, 가능한 경우, 시스- (Z)- 또는 트랜스- (E)- 형태에 존재할 수 있다.
따라서, 본원에 사용된 바와 같이 본 발명의 화합물은 가능한 이성질체, 회전 이성질체, 회전 장애 이성질체, 호변 이성질체 또는 그의 혼합물 중 하나의 형태로, 실질적으로 순수한 기하 (시스 또는 트랜스) 이성질체, 부분입체이성질체, 광학 이성질체 (대장체), 라세미체 또는 그의 혼합물로서 일 수 있다. "실질적으로 순수한" 또는 "다른 이성질체가 실질적으로 없는"은 본원에 사용된 바와 같이, 생성물은 중량 기준으로, 바람직한 이성질체의 양에 대하여 5% 미만, 및 바람직하게는 2% 미만의 다른 이성질체를 함유함을 의미한다.
이성질체의 임의의 생성된 혼합물은 구성성분의 물리화학적 차이를 기준으로, 순수한 또는 실질적으로 순수한 기하 또는 광학 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체로, 예를 들어, 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 분리될 수 있다.
최종 생성물 또는 중간체의 임의의 생성된 라세미체는 공지된 방법에 의해,예를 들어, 광학 활성 산 또는 염기로부터 수득된, 그의 부분입체이성질체의 분리에 의해, 그리고 광학 활성 산성 또는 염기성 화합물을 유리시킴으로써 광학 대장체로 분할될 수 있다. 특히, 따라서 염기성 모이어티를, 본 발명의 화합물을, 예를 들어, 광학 활성 산, 예를 들어, 타르타르산, 디벤조일 타르타르산, 디아세틸 타르타르산, 디-O, O'-p-톨루오일 타르타르산, 만델산, 말산 또는 캄포르-10-술폰산으로 형성된 염의 분별 결정화에 의해, 그의 광학 대장체로 분할하는데 사용할 수 있다. 라세미 생성물을 또한 키랄 크로마토그래피, 예를 들어 키랄 흡착제를 사용하는 고압 액체 크로마토 그래피 (HPLC)에 의해 분할할 수 있다.
더욱이, 그의 염을 포함한 본 발명의 화합물은 또한, 그의 수화물의 형태로 수득될 수 있거나, 그의 결정화에 사용되는 다른 용매를 포함할 수 있다. 본 발명의 화합물은 본질적으로 또는 계획적으로 제약상 허용되는 용매 (물 포함)를 형성할 수 있으며; 따라서, 본 발명은 용매화 및 비용매화 형태 둘 다를 포괄하는 것으로 의도된다. 용어 "용매화물"은 하나 이상의 용매 분자와 본 발명의 화합물 (그의 제약상 허용되는 염 포함)의 분자 복합체를 지칭한다. 이러한 용매 분자는 수용자에게 무해한 것으로 공지된, 제약 분야에 통상적으로 사용되는 것들, 예를 들어, 물, 에탄올 등이다. 용어 "수화물"은 용매 분자가 물인 복합체를 지칭한다.
본 발명의 화학식 I의 화합물은, 그의 염, 수화물 및 용매화물을 포함하여, 본질적으로 또는 계획적으로 다형체를 형성할 수 있다.
용어 "티올-말레이미드"는 본원에 사용된 바와 같이 하기 화학식
Figure pct00051
을 갖는, 말레이미드와 티올의 반응에 의해 형성된 기를 지칭하며, 상기 식에서 Y 및 Z는 티올-말레이미드 연결에 의해 연결되는 기이며 링커 성분, 항체 또는 페이로드를 포함할 수 있다.
"절단성"은 본원에 사용된 바와 같이 공유 연결에 의해 2개의 모이어티를 연결하지만, 분해되어 생리학적으로 적절한 조건 하에 모이어티 사이의 공유 연결을 절단하는 링커 또는 링커 성분을 지칭하며, 전형적으로 절단성 링커는 세포 외부의 경우보다 세포내 환경에서 생체내에서 더 급속히 절단되어, 페이로드의 방출이 표적 세포 내부에서 우선적으로 일어나게 한다. 절단은 효소적 또는 비효소적일 수 있으나, 일반적으로 항체를 분해하지 않고도 항체로부터 페이로드를 방출할 수 있다. 절단은 페이로드에 부착된 링커 또는 링커 성분의 일부 부분을 남겨 둘 수 있거나, 링커의 임의의 잔존 부분 또는 성분 없이 페이로드를 방출할 수 있다.
"Pcl"은 본원에 사용된 바와 같이 피롤린 카르복시 리신, 예를 들어,
Figure pct00052
를 지칭하고, 여기서 R20은 H이고, 이는 펩티드에 혼입되는 경우 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00053
R20이 메틸인 상응하는 화합물은 피롤리신이다.
"비-절단성"은 본원에 사용된 바와 같이 생리학적 조건 하에 분해에 특별히 민감하지 않은 링커나 링커 성분을 지칭하고, 예를 들어, 이는 적어도 면역접합체의 항체 또는 항원 결합 단편 부분만큼 안정적이다. 이러한 링커는 때때로 "안정적인"으로서 지칭되는데, 이는 이들이 분해에 충분히 내성이어서 페이로드가 항원 결합 모이어티 Ab에 Ab 자체가 적어도 부분적으로 분해될 때까지 연결을 유지하도록 함(즉, Ab의 분해가 생체내에서 절단보다 선행한다)을 의미한다. 안정적인 또는 비-절단성 링커를 갖는 ADC의 항체 부분의 분해는 생체내 전달되는 페이로드 또는 약물 모이어티에 부착된, 항체로부터의 하나 이상의 아미노산, 및 링커의 일부 또는 전부를 남길 수 있다.
용어 "C1-C3알킬", "C2-C3알킬", "C1-C4알킬", "C1-C5알킬", "C1-C6알킬" 및 "C2-C6알킬"은, 본원에 사용된 바와 같이, 1-3개의 탄소 원자, 2-3개의 탄소 원자, 1-4개의 탄소 원자, 1-5개의 탄소 원자, 1-6개의 탄소 원자 또는 2-6개의 탄소 원자를 각각 함유하는 완전 포화 분지형 또는 직쇄 탄화수소를 지칭한다. "C1-C3알킬" 기의 비제한적 예는 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필을 포함한다. "C2-C3알킬" 기의 비제한적 예는 에틸, n-프로필 및 이소프로필을 포함한다. "C1-C4알킬" 기의 비제한적 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸을 포함한다. "C1-C5알킬" 기의 비제한적 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸 및 이소펜틸을 포함한다. "C1-C6알킬" 기의 비제한적 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸 및 헥실을 포함한다. "C2-C6알킬" 기의 비제한적 예는 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸 및 헥실을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "알킬렌"은 다른 관능기(feature)에 부착되는 2개의 개방 원자가, 및 1 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 2가 알킬기를 지칭한다. 달리 규정되지 않는 한, 알킬렌은 1 내지 10개의 탄소 원자, 1 내지 6개의 탄소 원자, 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 모이어티를 지칭한다. 알킬렌의 대표적 예는 메틸렌, 에틸렌, n-프로필렌, 이소-프로필렌, n-부틸렌, sec-부틸렌, 이소-부틸렌, tert-부틸렌, n-펜틸렌, 이소펜틸렌, 네오펜틸렌, n-헥실렌, 3-메틸헥실렌, 2,2-디메틸펜틸렌, 2,3-디메틸펜틸렌, n-헵틸렌, n-옥틸렌, n-노닐렌, n-데실렌 등을 포함하나, 그에 제한되지는 않는다.
용어 "C1-C3알콕시", "C2-C3알콕시", "C1-C4알콕시", "C1-C5알콕시", "C1-C6알콕시" 및 "C2-C6알콕시"는, 본원에 사용된 바와 같이, 기 -O-C1-C3알킬, -O-C2-C3알킬, -O-C1-C4알킬, -O-C1-C5알킬, -O-C1-C6알킬 및 -O-C2-C6알킬 각각을 지칭하고, 여기서 기 "C1-C3알킬", "C2-C3알킬", "C1-C4알킬", "C1-C5알킬", "C1-C6알킬" 및 "C2-C6알킬"은 본원에 정의된 바와 같다. "C1-C3알콕시" 기의 비제한적 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시 및 이소프로폭시를 포함한다. "C2-C3알콕시" 기의 비제한적 예는 에톡시, n-프로폭시 및 이소프로폭시를 포함한다. "C1-C4알콕시" 기의 비제한적 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소부톡시, sec-부톡시 및 tert-부톡시를 포함한다. "C1-C5알콕시" 기의 비제한적 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소부톡시, sec-부톡시, tert-부톡시, n-펜틸옥시 및 이소펜틸옥시를 포함한다. "C1-C6알콕시" 기의 비제한적 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소부톡시, sec-부톡시, tert-부톡시, n-펜틸옥시, 이소펜틸옥시 및 헥실옥시를 포함한다. "C2-C6알콕시" 기의 비제한적 예는 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, 이소부톡시, sec-부톡시, tert-부톡시, n-펜틸옥시, 이소펜틸옥시 및 헥실옥시를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "할로겐" (또는 할로)은 플루오린, 브로민, 염소 또는 아이오딘, 특히 플루오린 또는 염소를 지칭한다. 할로겐-치환 기 및 모이어티, 예컨대 할로겐에 의해 알킬 (할로알킬)은 모노-, 폴리- 또는 퍼-할로겐화될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "헤테로원자"는, 달리 규정되지 않는 한, 질소 (N), 산소 (O) 또는 황 (S) 원자, 특히 질소 또는 산소를 지칭한다.
용어 "4-8 원 헤테로시클로알킬"은, 본원에 사용된 바와 같이, 포화 4-8 원 모노시클릭 탄화수소 고리 구조를 지칭하고, 여기서 탄화수소 고리 구조의 고리 탄소의 1 내지 2개가 1 내지 2개의 NR 기에 의해 대체되고, 여기서 R은 수소, 결합, 본원에 정의된 바와 같은 R5 기 또는 본원에 정의된 바와 같은 R7 기이다. 4-8 원 헤테로시클로알킬 기의 비제한적 예는, 본원에 사용된 바와 같이, 아제타디닐, 아제타딘-1-일, 아제타딘-2-일, 아제타딘-3-일, 피롤리디닐, 피롤리딘-1-일, 피롤리딘-2-일, 피롤리딘-3-일, 피롤리딘-4-일, 피롤리딘-5-일, 피페리디닐, 피페리딘-1-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 피페리딘-5-일, 피페리딘-6-일, 피페라지닐, 피페라진-1-일, 피페라진-2-일, 피페라진-3-일, 피페라진-4-일, 피페라진-5-일, 피페라진-6-일, 아제파닐, 아제판-1-일, 아제판-2-일, 아제판-3-일, 아제판-4-일, 아제판-5-일, 아제판-6-일, 및 아제판-7-일을 포함한다.
용어 "6 원 헤테로시클로알킬"은, 본원에 사용된 바와 같이, 포화 6 원 모노시클릭 탄화수소 고리 구조를 지칭하고, 여기서 탄화수소 고리 구조의 고리 탄소의 1 내지 2개가 1 내지 2개의 NR 기에 의해 대체되고, 여기서 R은 수소, 결합, 본원에 정의된 바와 같은 R5 기 또는 본원에 정의된 바와 같은 R7 기이다. 6 원 헤테로시클로알킬 기의 비제한적 예는, 본원에 사용된 바와 같이, 피페리디닐, 피페리딘-1-일, 피페리딘-2-일, 피페리딘-3-일, 피페리딘-4-일, 피페리딘-5-일, 피페리딘-6-일, 피페라지닐, 피페라진-1-일, 피페라진-2-일, 피페라진-3-일, 피페라진-4-일, 피페라진-5-일 및 피페라진-6-일을 포함한다.
용어 "5-8 원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬"은, 본원에 사용된 바와 같이, 포화 5-8 원 융합 비시클릭 탄화수소 고리 구조를 지칭하고, 여기서 탄화수소 고리 구조의 고리 탄소의 1 내지 2개가 1 내지 2개의 NR 기에 의해 대체되고, 여기서 R은 수소, 결합, 본원에 정의된 바와 같은 R5 기 또는 본원에 정의된 바와 같은 R7 기이다. 5-8 원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 기의 비제한적 예는, 본원에 사용된 바와 같이, 3-아자비시클로[3.1.0]헥사닐 및 3-아자비시클로[4.1.0]헵타닐을 포함한다.
본원에 사용된 면역접합체 명명 규칙은 항체-화합물 번호이고, 여기서 화합물 번호는 특정 항체에의 접합에 사용된 화학식 I의 화합물을 지칭한다.
링커
ADC 페이로드로서 사용하기 위해 본원에 제공된 세포독성 펩티드는 링커, L에, 또는 직접 항원 결합 모이어티에 부착될 수 있다. 이러한 ADC에서 사용하기 위해 적합한 링커는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 본 발명의 접합체에서 사용될 수 있다. 링커, L은, 항원 결합 모이어티 상에서 임의의 적합한 이용가능한 위치에서 항원 결합 모이어티에 부착될 수 있고: 전형적으로, L은 이용가능한 아미노 질소 원자 (즉, 아미드라기보다는, 1급 또는 2급 아민) 또는 히드록실 산소 원자에, 또는 이용가능한 술프히드릴에, 예컨대 시스테인 상에서 부착된다. 본원에 제공된 세포독성 펩티드에의 링커, L의 부착은 세포독성 펩티드의 N-말단에서 또는 세포독성 펩티드의 C-말단에서 일 수 있다. ADC에서 사용하기 위한 다종다양한 링커는 공지되어 있고 (예를 들어, 문헌 [Lash, Antibody-Drug Conjugates: the Next Generation of Moving Parts, Start-Up, Dec. 2011, 1-6] 참조), 본 발명의 범주 내에서 접합체에서 사용될 수 있다.
화학식 I, 화학식 II 및 화학식 III에서 링커, L은, 하나 이상의 링커 성분 L1, L2, L3, L4, L5, L6 등을 포함하는 연결 모이어티이다. 특정 실시양태에서 링커 성분은 함께 측면에 있는 기를 연결하는 결합을 나타낼 수 있다. 특정 실시양태에서, L은 -*L1L2L3L4L5L6-이고, 여기서 *는 본 발명의 세포독성 펩티드로의 부착 부위를 나타낸다. 특정 실시양태에서 링커 성분은 함께 측면에 있는 기를 연결하는 결합을 나타낼 수 있다. 특정 실시양태에서, L은 -*L1L2L3L4L5-이고, 여기서 *는 본 발명의 세포독성 펩티드로의 부착 부위를 나타낸다. 특정 실시양태에서 링커 성분은 함께 측면에 있는 기를 연결하는 결합을 나타낼 수 있다. 특정 실시양태에서, L은 -*L1L2L3L4-이고, 여기서 *는 본 발명의 세포독성 펩티드로의 부착 부위를 나타낸다. 특정 실시양태에서 링커 성분은 함께 측면에 있는 기를 연결하는 결합을 나타낼 수 있다. 특정 실시양태에서, L은 -*L1L2L3-이고, 여기서 *는 본 발명의 세포독성 펩티드로의 부착 부위를 나타낸다. 바람직한 실시양태에서 L은 -*L1L2-이고, 여기서 *는 본 발명의 세포독성 펩티드로의 부착 부위를 나타낸다. 특정 실시양태에서 L은 -L1-이다. 일부 바람직한 링커 및 링커 성분은 본원에 묘사되어 있다.
화학식 I, 화학식 II 및 화학식 III에서 링커, L은 2가일 수 있고, 이는 이것이 항원 결합 모이어티로 링커당 단지 하나의 페이로드를 연결하는데 사용될 수 있거나, 이는 3가일 수 있고 항원 결합 모이어티로 링커당 2개의 페이로드를 연결할 수 있거나, 이는 다가일 수 있음을 의미한다. 3가, 4가, 및 다가 링커를 사용하여 항원 결합 모이어티 (예를 들어 항체) 상에 페이로드 (약물)의 로딩을 증가시킬 수 있고, 그로 인해 다중 링커를 부착하기 위해 항체 상에 추가적 부위를 필요로 하지 않으면서 약물 대 항체 비 (DAR)를 증가시킨다. 이러한 링커의 예는 문헌 [Bioconjugate Chem., 1999 Mar-Apr;10(2):279-88]; US6638499; [Clin Cancer Res October 15, 2004 10; 7063]; 및 WO2012/113847A1에 제공되어 있다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체에서 사용하기 위한, 링커, L은 절단가능하거나 절단가능하지 않을 수 있다. 절단성 링커, 예컨대 히드라존, 디술피드, 디펩티드 Val-Cit를 함유하는 것들, 및 글루쿠로니다제-절단성 p-아미노벤질옥시카르보닐 모이어티를 함유하는 것들은, 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Ducry, et al., Bioconjugate Chem ., vol. 21, 5-13 (2010)] 참조. 절단성 링커를 포함하는 면역접합체의 경우, 면역접합체가 세포에 결합하거나 세포에 진입할 때까지 링커는 생체내에서 실질적으로 안정적이고, 이 시점에서 세포내 효소 또는 세포내 화학 조건 (pH, 감소 용량) 중 하나가 링커를 절단하여 세포독성 펩티드를 유리시킨다.
대안으로, 비-절단성 링커를 화학식 I의 화합물 및 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체에서 사용할 수 있다. 비-절단성 링커은 세포에서 분해되도록 설계되는 구조적 성분이 결여되어 있고, 따라서 그의 구조는 실질적으로 변화할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Ducry, et al., Bioconjugate Chem ., vol. 21, 5-13 (2010)] 참조. 이들 면역접합체는 표적 세포에 진입하고 링커 분해라기보다는 단백질 분해(proteolytic degradation)를 겪을 것으로 여겨지고; 따라서, 적어도 일부 또는 모두의 링커 및 심지어 일부 항체 또는 항체 단편이 페이로드에 부착된 상태로 남을 수 있다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체에서 링커, L은 전형적으로 통상 2개 이상의 링커 성분을 함유하고, 이는 편의상 접합체의 어셈블리에서 선택될 수 있거나, 이들은 선택되어 접합체의 특성에 영향을 줄 수 있다. 링커, L을 형성하기 위한 적합한 링커 성분은 링커, L을 구축하는 방법과 같이, 관련 기술분야에 공지되어 있다. 링커 성분은 아미노산에 기를 부착하는데 통상 사용되는 기, 스페이서, 예컨대 알킬렌 기 및 에틸렌 옥시드 올리고머, 아미노산 및 약 4개의 아미노산 길이의 짧은 펩티드; 결합; 및 카르보닐, 카르바메이트, 카르보네이트, 우레아, 에스테르 및 아미드 연결 등을 포함할 수 있다. 링커 성분은 티올-말레이미드 기, 티오에스테르, 아미드, 및 에스테르; 표적 세포 내에서, 상에서 또는 주위에서 발견되는 조건 하에 생체내에서 용이하게 절단되는 기, 예컨대 디술피드, 히드라존, 디펩티드, 예컨대 Val-Cit, 치환 벤질옥시카르보닐 기 등; 항원 결합 모이어티에 대해 적합한 위치에서 페이로드를 배향하는 스페이서, 예컨대 페닐, 헤테로아릴, 시클로알킬 또는 헤테로시클릴 고리, 및 알킬렌 쇄; 및/또는 예를 들어, 용해도를 향상시키거나 분자간 응집을 감소시킬 수 있는, 약물동태학적 특성-향상 기, 예컨대 1개 이상의 극성 기 (카르복시, 술포네이트, 히드록실, 아민, 아미노산, 사카라이드)로 치환된 알킬렌, 및 메틸렌 기(들) 대신에 1개 이상의 -NH- 또는 -O-를 함유하는 알킬렌 쇄, 예컨대 글리콜 에테르 (-CH2CH2O-)p (여기서 p는 1-10이다)를 포함할 수 있다.
게다가, 링커 성분은 두 반응성 기 사이의 반응에 의해 쉽게 형성되는 화학 모이어티를 포함할 수 있다. 이러한 화학 모이어티의 비제한적 예는 표 1에 제공된다.
<표 1>
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
Figure pct00057
상기 식에서, 표 1에서 R32는 H, C1-4 알킬, 페닐, 피리미딘 또는 피리딘이고; 표 1에서 R35는 H, C1- 6알킬, 페닐, 또는 1 내지 3개의 -OH 기로 치환된 C1- 4알킬이고; 표 1에서 각각의 R36은 독립적으로 H, C1- 6알킬, 플루오로, -C(=O)OH로 치환된 벤질옥시, -C(=O)OH로 치환된 벤질, -C(=O)OH로 치환된 C1- 4알콕시 및 -C(=O)OH로 치환된 C1- 4알킬로부터 선택되고; 표 1에서 R37은 독립적으로 H, 페닐 및 피리딘으로부터 선택되고, 표 1에서 각각의 R5는 독립적으로 H 또는 C1- 6알킬로부터 선택되고; 표 1에서 R12는 H, -CH3 또는 페닐이고; 표 1에서 R50은 H 또는 니트로이다.
일부 실시양태에서, 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체의 링커, L의 링커 성분은 접합에 통상 사용되는 아미노산 측쇄 중 하나, 예를 들어, 시스테인의 티올, 또는 리신의 유리 -NH2, 또는 항체 내로 조작된 Pcl 또는 Pyl 기와 반응성 관능기의 반응시 형성되는 기이다. 예를 들어, 문헌 [Ou, et al., PNAS 108(26), 10437-42 (2011)] 참조. 항원 결합 모이어티의 시스테인 잔기와의 반응에 의해 형성되는 링커 성분은
Figure pct00058
를 포함하나, 그에 제한되지는 않는다. 항원 결합 모이어티의 리신 잔기의 -NH2와의 반응에 의해 형성되는 링커 성분은
Figure pct00059
를 포함하나, 그에 제한되지는 않고, 여기서 각각의 p는 1-10이고, 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬 (바람직하게는 메틸)이다. Pcl 또는 Pyl 기와의 반응에 의해 형성되는 링커 성분은
Figure pct00060
를 포함하나, 그에 제한되지는 않고, 여기서 R20은 H 또는 Me이고, R30은 H, Me 또는 페닐이며, 연결을 위해서는, 상기 나타낸 아실 기가 조작된 항체 내의 Pcl 또는 Pyl의 리신 부분에 부착한다. Ab 디술피드 브릿지,
Figure pct00061
와, 히드록실아민을 함유하는 화학식 I의 화합물의 반응시 형성되는 링커 성분은
Figure pct00062
이다. Ab 디술피드 브릿지,
Figure pct00063
와, 히드록실아민을 함유하는 화학식 I의 화합물의 반응시 형성되는 링커 성분은
Figure pct00064
이다.
일부 실시양태에서, 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체의 링커, L의 링커 성분은, 예를 들어, 알킬렌 기 -(CH2)n- (여기서 n은 전형적으로 1-10 또는 1-6임), 에틸렌 글리콜 단위 (-CH2CH2O-)n (여기서 n은 1-20, 전형적으로 1-10 또는 1-6임), -O-, -S-, 카르보닐 (-C(=O)-), 아미드 -C(=O)-NH- 또는 -NH-C(=O)-, 에스테르 -C(=O)-O- 또는 -O-C(=O)-, 2개의 이용가능한 부착점을 갖는 고리계, 예컨대 페닐 (1,2- 1,3- 및 1,4-이치환 페닐 포함), C5-6 헤테로아릴, 1,1-이치환 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 또는 시클로헥실을 포함한 C3-8 시클로알킬, 및 1,4-이치환 시클로헥실, 및 C4-8 헤테로시클릴 고리로부터 선택된 2가 고리, 및 이하에 묘사된 구체적 예; 아미노산 -NH-CHR*-C=O- 또는 -C(=O)-CHR*-NH-, 또는 화학식 [N]-CHR*-C(=O)- [여기서 R*은 공지된 아미노산의 측쇄 (빈번히 정규 아미노산 중 하나, 예를 들어, trp, ala, asp, lys, gly 등, 그러나 또한 예를 들어 노르발린, 노르류신, 호모세린, 호모시스테인, 페닐글리신, 시트룰린, 및 통상 알파-아미노산으로 칭해지는 다른 것을 포함)이다]을 갖는 인접 구조의 N에 (예를 들어, 말레이미드 질소에) 부착하는 아미노산으로부터 유래된 기, 공지된 아미노산의 폴리펩티드 (예를 들어, 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드 등), 티올-말레이미드 연결 (말레이미드에의 -SH의 첨가로부터), -S-CR2- 및 다른 티올 에테르, 예컨대 -S-CR2-C(=O)- 또는 -C(=O)-CR2-S- (여기서 R은 독립적으로 각각의 경우에 H 또는 C1-4 알킬이다), -CH2-C(=O)-, 및 디술피드 (-S-S-) 뿐만 아니라 이들 중 임의의 것과 이하에 기재된 다른 링커 성분, 예를 들어, 결합, 비-효소적 절단성 링커, 비-절단성 링커, 효소적 절단성 링커, 광-안정성 링커, 광-절단성 링커 또는 자기-희생적 스페이서의 조합을 포함하는 링커를 포함한다.
특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체의 링커, L은 -*L1L2L3L4L5L6-이고, 여기서 *는 본 발명의 세포독성 펩티드로의 부착 부위를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체의 링커, L은 -*L1L2L3L4L5-이고, 여기서 *는 본 발명의 세포독성 펩티드로의 부착 부위를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체의 링커, L은 -*L1L2L3L4-이고, 여기서 *는 본 발명의 세포독성 펩티드로의 부착 부위를 나타낸다. 특정 실시양태에서, 화학식 I의 화합물 및 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체의 링커, L은 -*L1L2L3-이고, 여기서 *는 본 발명의 세포독성 펩티드로의 부착 부위를 나타낸다. 바람직한 실시양태에서 화학식 I의 화합물 및 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체의 링커, L은 -*L1L2-이고, 여기서 *는 본 발명의 세포독성 펩티드로의 부착 부위를 나타낸다. 특정 실시양태에서 화학식 I의 화합물의 링커, L은 -L1-이다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체의 링커 성분 L1은 -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mX3((CH2)mO)n-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00065
, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-,
Figure pct00066
, -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mNR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NR12(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12-, -NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(C(R12)2)m-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNR12-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NR12-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NR12-, -NR12C(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -NR12C(=S)-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NR12-,
Figure pct00067
Figure pct00068
Figure pct00069
로부터 선택되고,
여기서,
R20은 H 또는 Me이고, R30은 H, -CH3 또는 페닐이고;
R21은
Figure pct00070
이고;
각각의 R25는 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬로부터 선택되고;
Raa는 글리신, 알라닌, 트립토판, 티로신, 페닐알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 시스테인, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 페닐글리신 및 t-부틸글리신으로부터 선택된 아미노산의 측쇄이고;
R32는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 페닐, 피리미딘 및 피리딘으로부터 선택되고;
R33은 독립적으로
Figure pct00071
로부터 선택되고;
R34는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00072
로부터 선택된 자기 희생적 스페이서이고;
X2는
Figure pct00073
로부터 선택된 디펩티드이고;
X3은
Figure pct00074
이고, X4는
Figure pct00075
이고,
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
화학식 I의 화합물 및 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체의 링커 성분 L2, L3, L4, L5, 및 L6은 각각 독립적으로 결합, -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mX3((CH2)mO)n-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00076
, (CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-,
Figure pct00077
, -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mNR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NR12(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12-, -NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(C(R12)2)m-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNR12-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NR12-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NR12-, -NR12C(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -NR12C(=S)-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NR12-,
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
로부터 선택되고,
여기서,
R20은 H 또는 Me이고, R30은 H, -CH3 또는 페닐이고;
R21은
Figure pct00081
이고;
각각의 R25는 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬로부터 선택되고;
Raa는 글리신, 알라닌, 트립토판, 티로신, 페닐알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 시스테인, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 페닐글리신 및 t-부틸글리신으로부터 선택된 아미노산의 측쇄이고;
R32는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 페닐, 피리미딘 및 피리딘으로부터 선택되고;
R33은 독립적으로
Figure pct00082
로부터 선택되고;
R34는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00083
로부터 선택된 자기 희생적 스페이서이고;
X2는
Figure pct00084
로부터 선택된 디펩티드이고;
X3은
Figure pct00085
이고, X4는
Figure pct00086
이고,
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
세포독성 펩티드
본 발명의 세포독성 펩티드, 또는 그의 입체이성질체, 및 그의 제약상 허용되는 염은 화학식 I의 구조를 갖는 화합물이다.
<화학식 I>
Figure pct00087
상기 식에서,
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00088
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NR12(CH2)mR16, -LR9, -NHS(O)2R11, -NHS(O)2(CH2)mN3, -NHS(=O)2LR9,
Figure pct00089
이고;
R5는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, -((CH2)mO)nR12, 또는 -CN, -C(=O)NH2 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R7은 LR9이고;
R8은 H 또는 LR9이고;
각각의 L은 독립적으로 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
R9는
Figure pct00090
, -NR12C(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00091
, SH, -SSR15, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR12S(=O)2(CH=CH2), -NR12C(=O)CH2R10, -NR12C(=O)CH2Br, -NR12C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2,
Figure pct00092
, -CO2H, -NH2, -NCO, -NCS,
Figure pct00093
이고;
R10은
Figure pct00094
이고;
각각의 R11은 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴, 페닐로 치환된 이미다졸릴, 페닐로 치환된 옥사디아졸릴, 피라졸릴, 피리미디닐,
Figure pct00095
, -CH2S(=O)2NH2, -CH2S(=O)2NHLR9, -LR9 또는 -X4LR9이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R15는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
R16은 -LR9로 치환되거나 비치환되는, N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
각각의 R19는 H 또는 C1-C6알킬이고;
X3은
Figure pct00096
이고; X4는
Figure pct00097
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
본 발명의 한 측면에 화학식 I의 구조를 갖는 세포독성 펩티드, 또는 그의 입체이성질체, 및 그의 제약상 허용되는 염이 있다.
<화학식 I>
Figure pct00098
상기 식에서,
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00099
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NR12(CH2)mR16, -LR9, -NHS(O)2R11, -NHS(O)2(CH2)mN3, -NHS(=O)2LR9,
Figure pct00100
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R7은 LR9이고;
R8은 H 또는 LR9이고;
각각의 L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 독립적으로 선택된 링커이고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
R9는
Figure pct00101
, -NR12C(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00102
, SH, -SSR15, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR12S(=O)2(CH=CH2), -NR12C(=O)CH2R10, -NR12C(=O)CH2Br, -NR12C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2,
Figure pct00103
, -CO2H, -NH2, -NCO, -NCS,
Figure pct00104
이고;
R10은
Figure pct00105
이고;
각각의 R11은 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴,
Figure pct00106
,
-LR9 또는 -X4LR9이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R15는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
R16은 -LR9로 치환되거나 비치환되는, N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
X3은
Figure pct00107
이고; X4는
Figure pct00108
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
합성 방법
본 발명의 화합물을 합성하는데 이용된 모든 출발 물질, 빌딩 블록, 시약, 산, 염기, 탈수제, 용매 및 촉매는 시판되거나 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 유기 합성 방법에 의해 제조될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Houben-Weyl 4th Ed. 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volume 21] 참조). 추가로, 본 발명의 화합물은 다음의 실시예에 비추어 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 유기 합성 방법에 의해 제조될 수 있다.
화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 화합물에 대한 합성 접근법의 예시적 예는 하기 일반 반응식에서 제공된다. 하기 반응식에서 R1, R2, R3, R4, R5, R6, 및 L은 본원에 정의된 바와 같다. 비록 일반 반응식은 다양한 합성 단계에 사용된 구체적 시약을 나타내긴 하지만, 다른 공지된 시약을 사용하여 이러한 합성 단계를 완수할 수 있는 것으로 이해된다.
화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 화합물 (여기서 R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환된다)에 대한 합성 접근법은 이하에 반응식 1 내지 3에서 나타냈다.
<반응식 1>
Figure pct00109
반응식 1에서, R3은 아미드 결합 형성을 통해 짧은 펩티드에 커플링되고 후속 아미드 결합 형성을 통한 R1의 커플링과 함께 탈보호 단계가 이어진다. 반응식 1에서, 예로서,
Figure pct00110
은
Figure pct00111
일 수 있고, 이는 커플링 후에 후속적으로 탈보호된다. 반응식 1에서, 예로서,
Figure pct00112
은 또한
Figure pct00113
일 수 있다.
<반응식 2>
Figure pct00114
반응식 2는 화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 화합물 (여기서 R3은
Figure pct00115
이고, R4는 -OH 또는 -OCH3이다)에 대한 한 예시적인 합성 접근법을 예시한다. 반응식 2에서, R3은 아미드 결합 형성을 통해 짧은 펩티드에 커플링된 후에 탈보호 단계와 아미드 결합 형성을 통한 R1의 후속 커플링에 적용된다. 반응식 2에서, 예로서,
Figure pct00116
은
Figure pct00117
일 수 있고, 이는 커플링 후에 후속적으로 탈보호된다. 반응식 1에서, 예로서,
Figure pct00118
은 또한
Figure pct00119
일 수 있다.
<반응식 3>
Figure pct00120
반응식 3은 화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 화합물 (여기서 R3은
Figure pct00121
이다)에 대한 한 예시적인 합성 접근법을 예시한다. 반응식 3에서, R3은 아미드 결합 형성을 통해 짧은 펩티드에 커플링된 후에 탈보호 단계와 아미드 결합 형성을 통한 R1의 후속 커플링에 적용된다. 반응식 3에서, 예로서,
Figure pct00122
은
Figure pct00123
일 수 있고, 이는 커플링 후에 후속적으로 탈보호된다. 반응식 1에서, 예로서,
Figure pct00124
은 또한
Figure pct00125
일 수 있다.
화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 N-말단 연결된 화합물 (여기서 R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환된다)에 대한 합성 접근법을 이하에 반응식 4 내지 6에 나타냈다.
<반응식 4>
Figure pct00126
반응식 4에서, R3은 아미드 결합 형성을 통해 짧은 펩티드에 커플링된 후에 탈보호 단계와 아미드 결합 형성을 통한 R1의 후속 커플링에 적용된다. 반응식 3에서, 예로서,
Figure pct00127
은
Figure pct00128
일 수 있다.
<반응식 5>
Figure pct00129
반응식 5에서, 처음에 R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 또는 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이며, 여기서 각각은 비치환되거나 또는 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환된 것이고(반응식 1 내지 3 참조), 그 다음에 R7이 후속적으로 부착되어 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬을 수득하거나, 또는 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이며, 여기서 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환된 것이다. 예시적 예를 이하에 반응식에 나타냈다:
Figure pct00130
대안으로, 화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 화합물 (여기서 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환된 것이고(반응식 1 내지 3 참조), 그 다음에 R7이 후속적으로 부착되어 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬을 수득하거나, 또는 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환된 것이다)은 반응식 6에서 알 수 있는 바와 같은 두 단계 공정에 의해 수득된다.
<반응식 6>
Figure pct00131
상기 식에서, RG1 및 RG2는 반응성 기, 예컨대 표 1에 제공된 것들이고, L'는 하나 이상의 링커 성분이다.
예시적 예를 이하에 반응식에 나타냈다:
화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 C-말단 연결된 화합물 (여기서 R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환된다)에 대한 한 합성 접근법을 이하에 반응식 7에 나타냈다.
<반응식 7>
Figure pct00133
화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 C-말단 연결된 화합물 (여기서 R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환된다)에 대한 대안적 합성 접근법을 이하에 반응식 8에 나타냈다.
<반응식 8>
Figure pct00134
화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 C-말단 연결된 화합물 (여기서 R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환된다)에 대한 대안적 합성 접근법을 이하에 반응식 9에 나타냈다.
<반응식 9>
Figure pct00135
화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 C-말단 연결된 화합물 (여기서 R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환된다)에 대한 대안적 합성 접근법을 이하에 반응식 10에 나타냈다.
<반응식 10>
Figure pct00136
화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 C-말단 연결된 화합물 (여기서 R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환된다)에 대한 대안적 합성 접근법을 이하에 반응식 11에 나타냈다.
<반응식 11>
Figure pct00137
화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 C-말단 연결된 화합물 (여기서 R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환된다)에 대한 대안적 합성 접근법을 이하에 반응식 12에 나타냈다.
<반응식 12>
Figure pct00138
반응식 7 내지 12에서, 예로서,
Figure pct00139
은
Figure pct00140
또는
Figure pct00141
일 수 있고, 이는 커플링 후에 후속적으로 탈보호된다. 반응식 1에서, 예로서,
Figure pct00142
은 또한
Figure pct00143
일 수 있다. 대안으로, 반응식 7 내지 12에서는,
Figure pct00144
와의 후속 반응에 의해, R5는 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 비치환 C-결합 6원 헤테로시클로알킬의 탈보호 후에 부착될 수 있거나, 또는 비치환 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이다.
본 발명은 추가로 본 공정들의 임의의 변형을 포함하며, 여기서 그의 임의의 단계에서 수득가능한 중간 생성물이 출발 물질로서 사용되고 나머지 단계가 수행되거나, 여기서 출발 물질은 반응 조건 하에 계내 생성되거나, 여기서 반응 성분은 그의 염 또는 광학적으로 순수한 물질의 형태로 사용된다.
하기 실시예는 본 발명을 예시하고자 하는 것이고 본 발명에 대한 제한으로서 해석되어서는 안된다. 온도는 섭씨 온도로서 주어진다. 달리 언급되지 않는 경우, 모든 증발은 감압, 전형적으로 약 15 mm Hg 내지 100 mm Hg (= 20-133 mbar) 하에 수행한다. 사용된 약어는 관련 기술분야에서 통상적인 것들이다. 모든 반응은 임의의 추가 증류 없이 상업적 등급의 용매를 사용하여 질소 하에 수행하였다. 추가 정제 없이 상업적 등급으로서의 시약을 사용하였다. 박층 크로마토그래피는 TLC 실리카겔 플레이트를 사용하여 수행하였다. 칼럼 크로마토그래피는 플래시(flash) 등급 미리 충전된 레디셉(Redisep)® 칼럼을 사용하는, ISCO 콤비플래시 컴패니언(Combiflash Companion) 시스템을 사용하여 수행하였다.
정제용 HPLC는 다음 조건을 사용하여 워터스 자정작용(Waters Autopurification) 시스템 상에서 수행하였다: 칼럼 선파이어(Column Sunfire) C18 30 x 100 mm, 5 μm, 물 중 CH3CN + 0.05% TFA-CH3CN으로 30 ml/min에서 구배 용리.
분석 방법
달리 명시되지 않는 한, 하기 HPLC 및 HPLC/MS 방법을 중간체의 제조 및 실시예에서 사용하였다.
LC/MS 분석은 애질런트(Agilent) 1200sl/6140 시스템 상에서 수행하였다.
칼럼: 워터스 액쿼티(Waters Acquity) HSS T3 C18, 50x2.0, 1.8 ㎛
이동상: A) H2O + 0.05% TFA; B: 아세토니트릴 + 0.035% TFA
펌프 방법:
Figure pct00145
검출: 190 nm - 400 nm에서 UV 다이오드 어레이
MS 스캔: 200 -1350 amu
ELSD: 60℃
MS 파라미터:
Figure pct00146
중간체에 대한 합성 절차
(S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민 (i- 1)의 합성
Figure pct00147
단계 1: (S)-2-((t-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판산 (200 mg, 0.754 mmol)을 0℃에서 디클로로메탄 (5.5 ml)에, 이어서 카르보닐디이미다졸 (128 mg, 0.792 mmol)에 첨가하였다. 30분 동안 0℃에서 교반한 후, 벤조히드라지드 (103 mg, 0.754 mmol)를 첨가하였다. 0℃에서 추가의 45분 후에, 사브로민화탄소 (497 mg, 1.5 mmol) 및 트리페닐포스핀 (198 mg, 0.754 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 및 이어서 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 물을 혼합물에 첨가하고 DCM (5 ml X3)으로 추출하였다. 유기 층을 합하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 실리카겔 칼럼 (헥산 중 20-40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 t-부틸 [(1S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸]카르바메이트를 수득하였다. MS m/z 366 (M+H). 체류 시간 1.351분. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.03 - 7.85 (m, 2H), 7.62 - 7.38 (m, 3H), 7.33 - 7.16 (m, 3H), 7.18 - 7.04 (m, 2H), 5.35 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.15 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 3.28 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 1.54 (s, 9H).
단계 2: DCM (5 ml) 중 단계 1에서 수득된 화합물 (548 mg, 1.5 mmol)에 TFA (1.5 ml)를 첨가하였다. 생성된 용액을 18시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하여 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민 (i-1) TFA 염을 수득하였다. 이를 추가 정제 없이 사용하였다. MS m/z 266 (M+H). 체류 시간 0.858분.
2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에탄아민 (i- 2)의 합성.
벤질마그네슘 클로라이드 (1.2 ml, 2.4 mmol) (THF 중 2 M)를 0℃에서 톨루엔 (10 ml) 중 2-시아노피리미딘 (210 mg, 2.00 mmol)에 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 이 온도에서 교반하였다. 그 다음에 2-부탄올 (10 ml), 이어서 수소화붕소나트륨 (106 mg, 2.80 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에, MeOH (3 ml) 및 물로 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc (2 X 30 ml)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 생성물을 정제용 HPLC (0.05% TFA를 갖는 물 중 10-30% 아세토니트릴)에 의해 정제하여 2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에탄아민 (i- 2)을 수득하였다. MS m/z 200.2 (M+H). 체류 시간 0.637분. 1H NMR (400 MHz, 아세토니트릴-d3) δ 8.75 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 7.27 (m, 3H), 7.14 - 7.05 (m, 2H), 4.84 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 3.45 (dd, J = 14.1, 6.3 Hz, 1H), 3.33 (dd, J = 14.1, 7.1 Hz, 1H).
(S)-2-페닐-1-(1H-피라졸-3-일)에탄아민 (i- 3)의 합성
Figure pct00148
단계 1: 히드라진 일수화물 (0.034 ml, 0.69 mmol)을 MeOH (5 ml) 중 (S,E)-t-부틸 (5-(디에틸아미노)-3-옥소-1-페닐펜트-4-엔-2-일)카르바메이트 (60 mg, 0.17 mmol)에 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 70℃에서 및 이어서 3일 동안 50℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 물에 용해시키고, DCM (5 ml X 2)으로 추출하였다. DCM 층을 합하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 실리카겔 제조용 TLC (DCM 중 4% MeOH)에 의해 정제하여 (S)-t-부틸 (2-페닐-1-(1H-피라졸-3-일)에틸)카르바메이트를 수득하였다. MS m/z 288.2 (M+H). 체류 시간 1.310분. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.53 - 7.35 (m, 1H), 7.28 - 6.90 (m, 5H), 6.01 (s, 1H), 5.47 - 5.25 (m, 0.3 H), 5.15 - 4.84 (m, 0.7H), 3.40 (s, 1H), 3.09 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 1.34 (d, J = 31.2 Hz, 9H).
단계 2: DCM (2 ml) 중 단계 1에서 사용된 화합물 (38 mg, 0.13 mmol)의 용액을 2시간 동안 실온에서 TFA (0.5 ml)로 처리한 다음에 농축하여 (S)-2-페닐-1-(1H-피라졸-3-일)에탄아민 TFA 염 (i- 3)을 수득하였다. 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. MS m/z 188.2 (M+H). 체류 시간 0.616분.
(S)-t-부틸 (3-(2-아미노-3-히드록시프로필)페닐)카르바메이트 (i- 4)의 합성
Figure pct00149
단계 1: THF (1 M, 10 ml) 중 BH3를 0℃에서 교반하면서 THF (10 ml) 중 (S)-2-((t-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-니트로페닐)프로판산 (562 mg, 1.81 mmol)에 첨가하였다. 그 다음에 반응물을 1시간 동안 50℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 냉각하고, 물로 켄칭하고, EtOAc로 희석하고 10% 수성 K2CO3로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 물질을 실리카겔 칼럼 (30-70% EtOAc-헥산)에 의해 정제하여 (S)-t-부틸 (1-히드록시-3-(3-니트로페닐)프로판-2-일)카르바메이트를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 319.1 (M+Na). 체류 시간 1.183분. 1H NMR (600 MHz, 클로로포름-d) δ 8.13 - 8.04 (m, 2H), 7.57 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.9, 7.6 Hz, 1H), 4.76 (s, 1H), 3.87 (dq, J = 8.0, 4.6, 4.1 Hz, 1H), 3.69 (dd, J = 10.9, 3.9 Hz, 1H), 3.58 (dd, J = 10.8, 4.7 Hz, 1H), 2.97 (td, J = 13.1, 12.5, 7.3 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H).
단계 2: 아세토니트릴 (5 ml) 중 (S)-t-부틸 (1-히드록시-3-(3-니트로페닐)프로판-2-일)카르바메이트 (0.31 g, 1.0 mmol)에 10% 염산 (5 ml)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 48시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하여 (S)-2-아미노-3-(3-니트로페닐)프로판-1-올을 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 197.2 (M+H). 체류 시간 0.775분.
단계 3: (S)-2-아미노-3-(3-니트로페닐)프로판-1-올 HCl 염 (0.243 g, 1.046 mmol)을 MeOH (10 ml)에 용해시키고 탄소상 10% 팔라듐 (50 mg, 0.047 mmol)을 첨가하였다. 2L 수소 벌룬을 부착하였다. 반응물을 H2로 3회 플러싱한 다음에 1시간 동안 실온에서 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타냈다. 반응물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고 농축하여 (S)-2-아미노-3-(3-아미노페닐)프로판-1-올을 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 167.2 (M+H). 체류 시간 0.373분.
단계 4: (S)-2-아미노-3-(3-아미노페닐)프로판-1-올 HCl 염 (0.212 g, 1.046 mmol) 및 Boc2O (228 mg, 1.05 mmol) 및 디옥산-물-AcOH (10:9:1, 20 ml)를 합하고 3일 동안 실온에서 교반하였다. LCMS는 반응이 75% 완료되었음을 나타냈다. 추가의 Boc2O (150 mg)를 첨가하고 반응물을 6시간 동안 추가로 교반하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 농축하고 정제용 HPLC (0.05% TFA를 갖는 물 중 10-40% 아세토니트릴)로 정제하여 (S)-t-부틸 (3-(2-아미노-3-히드록시프로필)페닐)카르바메이트 (i-4)를 오일로서 수득하였다. MS m/z 267.2 (M+H). 체류 시간 1.011분.
(S)-t-부틸 (4-(2-아미노-3-히드록시프로필)페닐)카르바메이트 (i- 5)의 합성
Figure pct00150
단계 1: THF (10 ml) 중 (S)-2-((t-부톡시카르보닐)아미노)-3-(4-니트로페닐)프로판산 (0.80 g, 2.58 mmol)에 0℃에서 보란 디메틸 술피드 착물 (1.00 ml, 10.5 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 10분 동안 및 이어서 5시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음에 반응물을 0℃에서 물로 켄칭하였다. 켄칭된 혼합물을 DCM과 1 M 수성 Na2CO3에 분배하였다. DCM 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 (S)-t-부틸 (1-히드록시-3-(4-니트로페닐)프로판-2-일)카르바메이트를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 319.1(M+Na). 체류 시간 1.031분. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.10 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 4.73 (s, 1H), 3.83 (s, 1H), 3.70 - 3.56 (m, 1H), 3.50 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 2.91 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 1.32 (s, 9H).
단계 2: 아세토니트릴 (5 ml) 및 10% 염산 (5 ml) 중 (S)-t-부틸 (1-히드록시-3-(4-니트로페닐)프로판-2-일)카르바메이트 (300 mg, 1.01 mmol)를 4시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하였다. 잔류물을 포화 수성 Na2CO3로 처리하고, DCM-iPrOH (10:1, 10 mlX3)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 건조시키고 농축하여 (S)-2-아미노-3-(4-니트로페닐)프로판-1-올을 수득하였다. MS m/z 197.2 (M+H). 체류 시간 0.512분. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.32 - 7.92 (m, 2H), 7.41 - 7.21 (m, 2H), 4.18 - 4.00 (m, 1H), 3.66 - 3.49 (m, 2H), 3.49-3.36 (m, 1H), 3.25-3.00 (m, 1H), 3.01 - 2.74 (m, 2H), 2.70-2.65 (m, 1H).
단계 3: (S)-2-아미노-3-(4-니트로페닐)프로판-1-올 (200 mg, 1.019 mmol)을 MeOH (10 ml)에 용해시키고 10% Pd/C (50 mg)를 첨가하였다. 2 L 수소 벌룬을 부착하였다. 반응물을 H2로 3회 플러싱한 다음에 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과한 다음에 농축하여 (S)-2-아미노-3-(4-아미노페닐)프로판-1-올을 수득하였다. MS m/z 167.2 (M+H). 체류 시간 0.240분.
단계 4: (S)-2-아미노-3-(4-아미노페닐)프로판-1-올 (168 mg, 1.012 mmol)을 디옥산 (10 ml)-물 (9 ml)-AcOH (1 ml)에 용해시키고 t-부틸 디카르보네이트 (0.28 g, 1.28 mmol)를 합하고 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 농축하고 C18 칼럼을 사용하여 ISCO로 정제하고, 0.05% TFA를 갖는 물 중 10-40% 아세토니트릴로 용리시켜 (S)-t-부틸 (4-(2-아미노-3-히드록시프로필)페닐)카르바메이트 TFA (i- 5)를 수득하였다. MS m/z 267.2 (M+H). 체류 시간 0.764분. 1H NMR (400 MHz, 아세토니트릴-d3) δ 7.59 (s, 1H), 7.36 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.14 (s, 3H), 3.69 (dd, J = 11.7, 3.2 Hz, 1H), 3.57 - 3.36 (m, 2H), 2.86 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 1.47 (s, 9H).
(S)-t-부틸 (3-(2-아미노-3-메톡시프로필)페닐)카르바메이트 (i- 6)의 합성
Figure pct00151
단계 1: 보란 디메틸 술피드 착물 (3.00 ml, 31.6 mmol)을 0℃에서 THF (10 ml) 중 (S)-2-((t-부톡시카르보닐)아미노)-3-(3-니트로페닐)프로판산 (1.5 g, 4.83 mmol)에 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 10분 동안 및 이어서 6시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음에 반응물을 0℃에서 물로 켄칭하였다. 켄칭된 반응 혼합물을 DCM과 1 M 수성 Na2CO3에 분배하였다. DCM 층을 분리하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 (S)-t-부틸 (1-히드록시-3-(3-니트로페닐)프로판-2-일)카르바메이트를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 319.1(M+Na). 체류 시간 1.031분. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.14 - 7.97 (m, 2H), 7.57 (dt, J = 7.7, 1.4 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 8.8, 7.6 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 14.5 Hz, 1H), 3.87 (s, 1H), 3.69 (dd, J = 10.9, 3.8 Hz, 1H), 3.58 (dd, J = 10.9, 4.7 Hz, 1H), 2.95 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H).
단계 2: 0℃에서 THF/DMF 4:1 (10 ml) 중 (S)-t-부틸 (1-히드록시-3-(3-니트로페닐)프로판-2-일)카르바메이트 (0.200 g, 0.675 mmol)에 NaH (광유 중 60%, 0.048 g, 1.2 mmol)를 서서히, 이어서 메틸 아이오다이드 (0.19 g, 1.3 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 어떤 기포 (H2)도 관찰되지 않을 때까지 물을 서서히 첨가함으로써 주의 깊게 반응물을 켄칭하였다. 조 생성물을 EtOAc (10 ml X3)로 추출하였다. 합해진 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 C18 칼럼을 사용하여 ISCO에 의해 정제하고 0.05% TFA를 갖는 물 중 30-67% ACN으로 용리시켜 (S)-t-부틸 (1-메톡시-3-(3-니트로페닐)프로판-2-일)카르바메이트를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 333.1(M+Na). 체류 시간 1.205분. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) d 8.10 (dd, J = 4.5, 2.5 Hz, 2H), 7.59 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 8.8, 7.6 Hz, 1H), 4.96 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.07 - 3.88 (m, 1H), 3.43 - 3.28 (m, 5H), 2.98 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.40 (s, 9H).
단계 3: 아세토니트릴 (3 ml) 및 10% 염산 (3 ml) 중 (S)-t-부틸 (1-메톡시-3-(3-니트로페닐)프로판-2-일)카르바메이트 (124 mg, 0.400 mmol)를 4시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하였다. 포화 수성 Na2CO3를 잔류물에 첨가하고 생성된 혼합물을 DCM-iPrOH (10:1, 10 ml X3)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 건조시키고 농축하여 (S)-1-메톡시-3-(3-니트로페닐)프로판-2-아민을 수득하였다. MS m/z 211.2 (M+H). 체류 시간 0.622분.
단계 4: (S)-1-메톡시-3-(3-니트로페닐)프로판-2-아민을 MeOH (10 ml)에 용해시키고 10% Pd/C (50 mg)를 첨가하였다. 2 L 수소 벌룬을 부착하였다. 반응물을 H2로 3회 플러싱한 다음에 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과한 다음에 농축하여 (S)-3-(2-아미노-3-메톡시프로필)아닐린을 수득하였다. MS m/z 181.2 (M+H). 체류 시간 0.282분.
단계 5: 디옥산 (3 ml)-물 (3 ml)-AcOH (0.6 ml) 중 (S)-3-(2-아미노-3-메톡시프로필)아닐린 (62.6 mg, 0.347 mmol) 및 t-부틸 디카르보네이트 (0.093 ml, 0.4 mmol)를 합하고 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 농축하고 C18 칼럼을 사용하여 ISCO로 정제하고, 0.05% TFA를 갖는 물 중 10-40% 아세토니트릴로 용리시켜 (S)-t-부틸 (3-(2-아미노-3-메톡시프로필)페닐)카르바메이트 TFA 염 (i- 6)을 수득하였다. MS m/z 281.2 (M+H). 체류 시간 0.856분. 1H NMR (400 MHz, 아세토니트릴-d3) d 7.61 (s, 1H), 7.40 - 7.12 (m, 3H), 6.89 (dt, J = 7.4, 1.5 Hz, 1H), 6.78 (s, 3H), 3.59 (m, 1H), 3.50 (dd, J = 10.6, 3.4 Hz, 1H), 3.38 (dd, J = 10.6, 6.9 Hz, 1H), 3.33 (s, 3H), 2.90 (d, J=7.5 Hz, 3H), 1.48 (s, 9H).
(3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵탄산 (i-7)의 합성
Figure pct00152
단계 1: Dil-OtBu HCl 염 (388 mg, 0.982 mmol), (1R,3S,4S)-2-(t-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (287 mg, 1.19 mmol), HATU (411 mg, 1.08 mmol) 및 DIEA (0.42 ml, 2.38 mmol) 및 DMF (5 ml)를 합하고 30분 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (10 ml)로 희석하고 RP-C18 ISCO에 의해 정제하여 (3R,4S,5S)-t-부틸 4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노에이트를 수득하였다. MS (m+1) = 582.5, HPLC 피크 RT = 1.542분
단계 2: 1,4-디옥산 (10 ml) 중 4 M HCl 중 단계 1에서 수득된 생성물 (540 mg, 0.93 mmol)을 밤새 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 에서 농축하여 (3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵탄산을 수득하였다. MS (m+1) = 426.2, HPLC 피크 RT = 0.736분
단계 3: 단계 2에서 수득된 생성물 (430 mg, 0.93 mmol), 37% 포름알데히드 용액 (0.38 ml, 4.7 mmol), 아세트산 (0.27 ml, 4.65 mmol), NaBH3CN (585 mg, 9.31 mmol) 및 MeOH (10 ml)를 합하고 30분 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하였다. 잔류물을 RP-C18 ISCO에 의해 정제하여 450 mg의 (3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵탄산을 TFA 염으로서 수득하였다. TFA 염을 10 ml의 12N HCl 용액으로 처리하고 2회 농축하여 (3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵탄산 HCl 염 (i- 7)을 수득하였다. MS (m+1) = 440.2, HPLC 피크 RT = 0.754분
Boc - Dap - OMe : ((S)- tert -부틸 2-(( 1R,2R )-1,3- 디메톡시 -2- 메틸 -3- 옥소프로 필)피롤리딘-1-카르복실레이트) (i-8) 의 합성
Figure pct00153
Boc-Dap-OH (스몰 몰리큘즈 인크.((Small Molecules Inc.), 3.11 g, 10.8 mmol), K2CO3 (2.99 g, 21.6 mmol), 아이오도메탄 (2.95 g) 및 아세톤 (55 mL)을 합하였다. 반응물을 2시간 동안 20℃에서 교반하였다. 추가의 메틸아이오다이드 (2.28 g)를 반응물에 첨가하고 반응물을 3시간 동안 40℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 200 mL EtOAc와 100 mL H2O에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 50 mL 포화 수성 NaCl로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여, Boc-Dap-OMe (i- 8)를 황색 오일로서 수득하였다. MS (ESI+) m/z 계산치 324.2, 실측치 324.2 (M+23). 체류 시간 1.245분.
Dap - OMe : (( 2R,3R )- 메틸 3- 메톡시 -2- 메틸 -3-((S)- 피롤리딘 -2-일) 프로파노에 이트) (i-9) 의 합성
Figure pct00154
Boc-Dap-OMe (3.107 g, 10.3 mmol)를 디에틸 에테르 (2 M, 10 mL) 중 HCl과 합하고 농축하였다. 이 조작을 반복하였다. 7회째 처리 후에 반응이 완료되었다. Dap-OMe (i- 9)의 HCl 염을 농축된 후에 백색 고체로서 수득하였다. MS (ESI+) m/z 계산치 202.1, 실측치 202.2 (M+1). 체류 시간 0.486분. 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.065-4.041 (m, 1H), 3.732 (br.s, 1H), 3.706 (s, 3H), 3.615 (s, 3H), 3.368 (br.s, 1H), 3.314 (br.s, 1H), 2.795 (q, 1H, J=6.8Hz), 2.085-1.900 (m, 4H), 1.287 (d, 3H, J=7.2Hz).
(R)-2,4-디히드록시-3,3-디메틸-N-(3-옥소-3-((2-옥소프로필)아미노)프로필)부탄아미드 (i-10)의 합성
Figure pct00155
단계 1: 판토텐산 (50 mg, 0.23 mmol)을 DMF (5 mL)에 용해시키고 디페닐포스포릴 아지드 (98 μL, 0.46 mmol) 및 2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)에탄아민 (40 mg, 0.34 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고 트리에틸아민 (79 μL, 0.57 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 0℃에서 교반한 다음에, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. EtOAc (50 mL)를 첨가하고 0.1N HCl 용액 (20 mL), 0.1N NaOH 용액 (20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 여액을 진공 중에서 농축하고 잔류물을 HPLC에 의해 정제하고 동결 건조시켜 (R)-2,4-디히드록시-3,3-디메틸-N-(3-(((2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)메틸)아미노)-3-옥소프로필)부탄아미드를 수득하였다. MS (m+1) = 319.2, HPLC 피크 RT = 0.466분
단계 2: (R)-2,4-디히드록시-3,3-디메틸-N-(3-(((2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)메틸)아미노)-3-옥소프로필)부탄아미드 (46 mg, 0.14 mmol)를 THF (5 mL) 및 3N HCl 용액 (3 mL)에 용해시키고 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 0℃로 냉각한 후에, 반응 혼합물을 1N NaOH 용액으로 중화시키고 진공 중에서 절반의 부피로 농축하였다. 반응 혼합물을 ISCO RP-C18에 의해 정제하고 동결 건조시켜 (R)-2,4-디히드록시-3,3-디메틸-N-(3-옥소-3-((2-옥소프로필)아미노)프로필)부탄아미드 (i- 10)를 수득하였다. MS (m+1) = 275.2, HPLC 피크 RT = 0.337분, 1H-NMR (MeOD, 400 MHz) δ 3.99 (s, 2H), 3.84 (s, 1H), 3.42~4.47 (m, 2H), 3.42 (d, 1H, J = 11.2 Hz), 3.34 (d, 1H, J = 11.2 Hz), 2.45 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.10 (s, 3H), 0.87 (s, 6H).
(R)-N-(3-((2-아지도에틸)아미노)-3-옥소프로필)-2,4-디히드록시-3,3-디메틸부탄아미드 (i- 11)의 합성
Figure pct00156
판토텐산 (50 mg, 0.23 mmol)을 DMF (5 mL)에 용해시키고 디페닐포스포릴 아지드 (98 μL, 0.46 mmol) 및 2-아지도에탄아민 (30 mg, 0.34 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고 트리에틸아민 (79 μL, 0.57 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 0℃에서 교반한 다음에, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. EtOAc (50 mL)를 첨가하고 0.1N HCl 용액 (20 mL), 0.1N NaOH 용액 (20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 여액을 진공 중에서 농축하고 잔류물을 HPLC에 의해 정제하고 동결 건조시켜 (R)-N-(3-((2-아지도에틸)아미노)-3-옥소프로필)-2,4-디히드록시-3,3-디메틸부탄아미드 (i- 11)를 수득하였다. MS (m+1) = 288.2, HPLC 피크 RT = 0.504분, 1H-NMR (MeOD, 400 MHz) δ 3.84 (s, 1H), 3.41~4.47 (m, 3H), 3.31~3.35 (m, 5H), 2.40 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 0.87 (s, 6H).
(R)-2,4-디히드록시-3,3-디메틸-N-(3-옥소-3-((3-옥소부틸)아미노)프로필) 부탄아미드 (i-12)의 합성
Figure pct00157
단계 1: 판토텐산 헤미칼슘 염 (100 mg, 0.390 mmol)을 CH3CN (10 mL)에 용해시키고 황산 수지를 사용하여 판토텐산으로 교환하였다. 판토텐산 (10 mg, 0.046 mmol)을 DMF (2 mL)에 용해시키고 디페닐포스포릴 아지드 (20 μL, 0.091 mmol) 및 2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)에탄아민 (7 mg, 0.005 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하고 트리에틸아민 (16 μL, 0.114 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 0℃에서 교반한 다음에, 24시간 동안 실온에서 교반하였다. EtOAc (50 mL)를 첨가하고 0.1N HCl 용액 (20 mL), 0.1N NaOH 용액 (20 mL), 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고 여과하였다. 여액을 진공 중에서 농축하고 잔류물을 HPLC에 의해 정제하고 동결 건조시켜 (R)-2,4-디히드록시-3,3-디메틸-N-(3-((2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)에틸)아미노)-3-옥소프로필)부탄아미드를 수득하였다. MS (m+1) = 333.2, HPLC 피크 RT = 0.512분
단계 2: (R)-2,4-디히드록시-3,3-디메틸-N-(3-((2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)에틸)아미노)-3-옥소프로필)부탄아미드 (6 mg, 0.018 mmol)를 THF (2 mL) 및 3N HCl 용액 (1 mL)에 용해시키고 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 0℃로 냉각한 후에, 반응 혼합물을 1N NaOH 용액으로 중화시키고 진공 중에서 절반의 부피로 농축하였다. 반응 혼합물을 ISCO RP-C18에 의해 정제하고 동결 건조시켜 (R)-2,4-디히드록시-3,3-디메틸-N-(3-옥소-3-((3-옥소부틸)아미노)프로필) 부탄아미드 (i- 12)를 수득하였다. MS (m+1) = 289.2, HPLC 피크 RT = 0.362분, 1H-NMR (MeOD, 400 MHz) δ 3.83 (s, 1H), 3.37~4.45 (m, 3H), 3.34 (d, 2H, J = 7.2 Hz), 3.32 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 2.65 (t, 2H, J = 6.4Hz), 2.34 (t, 2H, J = 6.8 Hz), 2.10 (s, 3H), 0.87 (s, 6H).
2,4-디히드록시-3,3-디메틸-N-(3-옥소부틸)부탄아미드 (i- 13)의 합성
Figure pct00158
단계 1: 수소화알루미늄리튬 (583 mg, 15 mmol)을 THF (100 mL)에 용해시키고 0℃로 냉각하였다. THF (50 mL) 중 (±)-판토락톤 (1g, 8 mmol)의 용액을 0℃에서 첨가하고 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물에 무수 황산나트륨을 서서히, 이어서 EtOAc (50 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 짧은 셀라이트 패드 상에서 여과하고 여액을 농축하였다. 잔류물을 ISCO (CH2Cl2 중 5% 내지 20%의 MeOH)에 의해 정제하여 3,3-디메틸부탄-1,2,4-트리올을 수득하였다. 1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 3.71~3.74 (m, 1H), 3.65 (dd, 1H, J = 4.8 및 7.6 Hz), 3.57 (dd, 1H, J = 2.4 및 4.8 Hz), 3.54 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 3.48 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).
단계 2: 3,3-디메틸부탄-1,2,4-트리올 (570 mg, 4 mmol) 및 1-(디메톡시메틸)-4-메톡시벤젠 (1.16 g, 6 mmol)을 CH2Cl2 (50 mL)에 용해시키고 (7,7-디메틸-2-옥소비시클로[2.2.1]헵탄-1-일) 메탄술폰산 (99 mg, 0.4 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고 트리에틸아민 (0.29 mL, 2 mmol)을 첨가하였다. 농축 후에, 잔류물을 ISCO (n-헥산 중 0% 내지 30%의 EtOAc)에 의해 정제하여 2-(4-메톡시페닐)-5,5-디메틸-1,3-디옥산-4-일)메탄올을 수득하였다. 1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.44 (d, 2H, J = 6.0 Hz), 6.91 (d, 2H, J = 6.0 Hz), 5.47 (s, 1H), 3.90 (s, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.59~3.70 (m, 5H), 1.14 (s, 3H), 0.84 (s, 3H).
단계 3: DMSO (0.27 mL, 4 mmol)를 무수 CH2Cl2 (20 mL)에 용해시키고 옥살릴 클로라이드 (0.25 mL, 3 mmol)를 -78℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 15분 동안 교반하고 무수 CH2Cl2 (1 mL) 중 2-(4-메톡시페닐)-5,5-디메틸-1,3-디옥산-4-일)메탄올 (485 mg, 2 mmol)의 용액을 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 -78℃에서 교반하고 트리에틸아민 (1.34 mL, 10 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)과 CH2Cl2 (100 mL)에 분배하고, 유기 층을 포화 NaHCO3 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 잔류물을 ISCO (n-헥산 중 20% 내지 50%의 EtOAc)에 의해 정제하여 2-(4-메톡시페닐)-5,5-디메틸-1,3-디옥산-4-카르발데히드를 수득하였다. MS (m+1) = 251.2, HPLC 피크 RT = 1.105분.
단계 4: 2-(4-메톡시페닐)-5,5-디메틸-1,3-디옥산-4-카르발데히드 (289 mg, 1 mmol)를 아세톤/CH2Cl2 (3:1, 20 mL)에 용해시키고 물 (5 mL) 중 NaH2PO4.H2O (1593 mg, 12 mmol) 및 NaCl2O (528 mg, 6 mmol)의 새로이 제조된 용액을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고 농축하였다. 잔류물을 ISCO (C18)에 의해 정제하여 2-(4-메톡시페닐)-5,5-디메틸-1,3-디옥산-4-카르복실산을 수득하였다. MS (m+1) = 267.2, HPLC 피크 RT = 0.957분.
단계 5: 2-(4-메톡시페닐)-5,5-디메틸-1,3-디옥산-4-카르복실산 (40 mg, 0.2 mmol)을 DMF (3 mL)에 용해시키고 HATU (39 mg, 0.2 mmol) 및 DIEA (0.05 mL, 0.3 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고 2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)에탄아민 (40 mg, 0.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고 정제용 HPLC에 의해 정제하여 2-(4-메톡시페닐)-5,5-디메틸-N-(2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)에틸)-1,3-디옥산-4-카르복스아미드를 수득하였다. MS (m+1) = 380.2, HPLC 피크 RT = 1.102 분, 1H-NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.44 (d, 2H, J = 5.6 Hz), 7.33 (bs, 1H), 6.90 (d, 2H, J = 5.2 Hz), 5.46 (s, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.82~3.88 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.75 (m, 1H), 3.68 (dd, 2H, J = 7.6 및 16.0 Hz),3.38 (m, 2H), 1.86 (m, 4H), 1.31 (s, 3H), 1.11(s, 3H), 1.09 (s, 3H).
단계 5: 2-(4-메톡시페닐)-5,5-디메틸-N-(2-(2-메틸-1,3-디옥솔란-2-일)에틸)-1,3-디옥산-4-카르복스아미드 (10 mg, 0.03 mmol)를 MeOH (1 mL) 중 3M HCl에 용해시키고 물 (0.1 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 진공 중에서 농축하고 ISCO (C18)에 의해 정제하여 2,4-디히드록시-3,3-디메틸-N-(3-옥소부틸)부탄아미드 (i-13)를 수득하였다. MS (m+1) = 218.2, HPLC 피크 RT = 0.400분, 1H-NMR (MeOD-d4, 400 MHz) δ 3.84 (s, 1H), 3.31~3.44 (m, 4H), 2.70 (t, 2H, J = 4.0 Hz),2.12 (s, 3H), 0.88 (s, 3H).
비결합 펩티드에 대한 합성 절차
실시예 1: (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트 (1)
Figure pct00159
단계 1: 0℃에서 N,N-디메틸포름아미드 (DMF, 20.0 mL) 중 BocVal-Dil-Dap-OH (1.00 g, 1.75 mmol)의 용액에 N,N-디이소프로필 에틸아민 (DIEA, 0.677 g, 5.25 mmol) 및 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트 (HATU) (0.731 g, 1.93 mmol)를 첨가하였다. 그 다음에, 생성된 용액을 5분 동안 교반하고 0℃에서 DMF (5.0 mL) 중 DIEA (0.226 g, 1.75 mmol) 및 L-페닐알라닌 메틸 에스테르 HCl 염 (0.377 g, 1.75 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 추가의 30분 동안 교반한 다음에 농축하였다. 잔류물을 ISCO 시스템, C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 20-90% 아세토니트릴-물로 용리시켜 BocVal-Dil-Dap-PheOMe를 수득하였다: MS m/z 733.4 (M+1); 체류 시간 1.47분.
단계 2: 메탄올 (20 mL) 중 단계 1에서 수득된 BocVal-Dil-Dap-PheOMe (0.683 g, 0.932 mmol)의 용액에 HCl (1,4-디옥산 중 4N, 16 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 7시간 동안 실온에서 교반하고 농축하였다. 잔류물을 디옥산에 용해시키고 동결 건조시켜 Val-Dil-Dap-PheOMe HCl 염을 수득하였다: MS m/z 633.4 (M+1); 체류 시간 0.96분.
단계 3: (1R,3S,4S)-N-Boc-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (12.6 mg, 0.052 mmol)을 15 ml 환저 플라스크에서 DMF (1 mL)에 용해시켰다. DIEA (12.3 mg, 0.095 mmol) 및 HATU (19 mg, 0.050 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고 DMF (1.0 mL) 중 Val-Dil-Dap-PheOMe HCl 염 (30 mg, 0.090 mmol) 을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응이 완료되었음을 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 20-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% 트리플루오로아세트산 (TFA) 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다: MS m/z 856.6 (M+1); 체류 시간 1.67분.
단계 4: 단계 3에서 수득된 생성물을 디클로로메탄 (DCM) (2.0 mL)에 용해시키고 TFA (0.5 mL)로 처리하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. LCMS 분석은 반응이 완료되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 회전식 증발기에 의해 농축하여 화합물 1을 TFA 염으로서 수득하였다: MS m/z 756.6 (M+1); 체류 시간 1.22분.
실시예 2: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (2)
Figure pct00160
25 mL 환저 플라스크에 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트 TFA 염 (1) (38.4 mg, 0.044 mmol), LiOH일수화물 (50.0 mg, 1.19 mmol) 및 용매 혼합물 MeOH-H2O (2:1, 4.0 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 60시간 동안 실온에서 교반하였다. LC-MS 분석은 반응이 완료되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하고 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 아세토니트릴-H2O (10-70%) (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고 농축하여 화합물 2를 TFA 염으로서 수득하였다, MS m/z 742.5 (M+1). 체류 시간 1.15분.
실시예 3: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (3)
Figure pct00161
단계 1: 15 ml 환저 플라스크에서 DMF (1.0 mL) 중 Boc-Val-Dil-Dap-OH (20.0 mg, 0.035 mmol)의 용액에 DIEA (9.0 mg, 0.070 mmol), 이어서 N,N,N',N'-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU) (13.3 mg, 0.035 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반한 후에 DMF (1.0 mL) 중 (1S,2R)-2-아미노-1-페닐프로판-1-올 (6.4 mg, 0.042 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응이 완료되었음을 나타냈다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 tert-부틸 ((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다, MS m/z 705.4 (M+1). 체류 시간 1.39분.
단계 2: DCM (2.0 mL) 중 tert-부틸 ((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (24.7 mg, 0.035 mmol)의 용액에 TFA (1.0 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고 농축하여 (S)-2-아미노-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드 (MS m/z 605.4 (M+1)) (체류 시간 0.96분)와 그의 TFA 에스테르 (MS m/z 701.4 (M+1)) (체류 시간 1.17분)의 혼합물을 수득하였다. 혼합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 3: DMF (1.0 mL) 중 (1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (8.4 mg, 0.035 mmol)의 용액에 DIEA (0.024 ml, 0.14 mmol) 및 HBTU (13.3 mg, 0.035 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반하고 DMF (0.5 mL) 중 단계 2에서 수득된 생성물 혼합물의 용액 (25.2 mg, 0.035 mmol) (TFA 에스테르 함유)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 유지한 다음에 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 30-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (MS m/z 828.5 (M+1)) (체류 시간 1.42분)와 그의 TFA 에스테르 (MS m/z 924.4 (M+1)) (체류 시간 1.61분)의 혼합물을 수득하였다.
단계 4: DCM (1.5 mL) 중 단계 3에서 수득된 혼합물의 용액에 TFA (1.0 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하여 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (MS m/z 728.4 (M+1)) (체류 시간 0.99분)와 (1S,2R)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-1-페닐프로필 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (MS m/z 824.5 (M+1)) (체류 시간 1.31분)의 혼합물을 수득하였다. 이 혼합물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 5: MeOH-H2O (1:1, 3.0 mL) 중 단계 4에서 수득된 혼합물의 용액에 LiOH (10.0 mg, 0.418 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반한 다음에 대략 1 mL의 총 부피로 농축하였다. 조 혼합물을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-35% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 화합물 3을 수득하였다, MS m/z 728.4 (M+1). 체류 시간 0.99분.
실시예 4: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-N-1-(메틸술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (4)
Figure pct00162
단계 1: (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판산 (132.5 mg, 0.50 mmol)을 DMF (4 mL)에 용해시켰다. DIEA (0.523 mL, 3.0 mmol) 및 HATU (475 mg, 1.25 mmol)를 첨가하였다. 15분 후에, 메탄술폰아미드 (143 mg)를 첨가하고 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. LC/MS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 생성물을 Prep-HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 백색 고체를 수득하였다. MS m/z 243.1 (M+1). 체류 시간 1.023분. 생성물을 DCM (2 mL)에 용해시켰다. TFA (2 mL)를 첨가하고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC/MS 분석 반응이 완료되었음을 나타냈다. 탈보호된 생성물을 Prep-HPLC에 의해 정제하고, 10-40% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 백색 고체를 수득하였다. MS m/z 243.1 (M+1). 체류 시간 0.403분. NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.41-7.30 (m, 5H), 4.10-4.06 (m, 1H), 3.32-3.25 (m, 1H), 3.19 (s, 3H), 3.12-3.07 (m, 1H).
단계 2: Boc-Val-Dil-Dap (65.5 mg, 0.115 mmol)을 DMF (2 mL)에 용해시켰다. DIEA (59.2 mg, 80 uL) 및 HATU (27.7 mg, 0.099 mmol)를 첨가하였다. 10분 후에, (S)-2-아미노-N-(메틸술포닐)-3-페닐프로판아미드 (18.5 mg, 0.076 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC/MS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 생성물을 Prep-HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 백색 고체를 수득하였다. MS m/z 796.4 (M+1). 체류 시간 1.388분. 생성물을 MeOH (3M, 3 mL) 중 HCl에 용해시켰다. 용매를 서서히 제거하였다. LC/MS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. MS m/z 696.3 (M+1). 체류 시간 1.046분.
단계 3: (1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (14.23 mg, 0.059 mmol)을 DMF (2 mL)에 용해시켰다. DIEA (22.9 mg, 0.177 mmol) 및 HATU (20.19 mg, 0.053 mmol)를 첨가하였다. 10분 후에, 이전 단계로부터의 생성물 (21.6 mg, 0.029 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LC/MS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 생성물을 Prep-HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 백색 고체를 수득하였다. MS m/z 919.5 (M+1). 체류 시간 1.370분. 생성물을 MeOH (3M, 3 mL) 중 HCl에 용해시켰다. 용매를 서서히 제거하였다. LC/MS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. MS m/z 819.5 (M+1). 체류 시간 1.096분.
실시예 5: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-N-1-(메틸술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (5)
Figure pct00163
화합물 4 (5 mg, 0.00584 mmol)를 MeOH (2.0 mL)에 용해시켰다. 파라포름알데히드 (5.97 mg, 0.199 mmol) 및 아세트산 (6.0 uL)을 첨가하였다. 시아노수소화붕소나트륨 (12.5 mg, 0.199 mmol)을 첨가하고 반응 혼합물을 50℃로 가열하고 1시간 동안 교반하였다. LC/MS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 생성물을 Prep-HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 백색 고체를 수득하였다. MS m/z 833.5 (M+1). 체류 시간 0.983분.
실시예 6: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-테트라졸-5-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (6)
Figure pct00164
단계 1: N-Boc-아미노 니트릴 (0.5 g, 2.03 mmol), 소듐 아지드 (0.264 g, 4.06 mmol) 및 브로민화아연 (0.229 g, 1.02 mmol)을 2-프로판올-물 용매 혼합물 (1:1, 60 ml)의 혼합물에 용해시키고 반응 혼합물을 16시간 동안 환류 하에 교반하였다. 반응의 완료 후에, 5 ml의 10% 시트르산 및 30 ml 에틸 아세테이트를 첨가하고 어떤 고체도 잔류하지 않을 때까지 교반을 계속하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합해진 유기 층을 물로 세척하고 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 제거하고 잔류물을 실리카겔 칼럼에 의해 정제하고, DCM 중 10% 메탄올로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하고, 에틸 아세테이트에 재용해시키고, 염수로 세척하고, 건조시키고 농축하여 (S)-tert-부틸 (2-페닐-1-(2H-테트라졸-5-일)에틸)카르바메이트를 수득하였다. MS m/z 290.2 (M+1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.40 - 7.24 (m, 3H), 7.22 - 7.12 (m, 2H), 5.22 - 5.02 (m, 2H), 3.49 - 3.24 (m, 2H), 1.40 (s, 9H).
단계 2: 15 ml 환저 플라스크에 (S)-tert-부틸 (2-페닐-1-(2H-테트라졸-5-일)에틸)카르바메이트 (30 mg, 0.104 mmol), TFA (2 ml) 및 DCM (4 ml)을 첨가하여투명한 용액을 수득하고 이를 1시간 동안 실온에서 교반하였다. LCMS는 Boc 기가 절단되었음을 나타냈다. 용액을 농축하여 조 (S)-2-페닐-1-(2H-테트라졸-5-일)에탄아민을 TFA 염 (M+1 190.2)으로서 수득하고, 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 3: 15 ml 환저 플라스크에 DMF (2 ml) 중 Boc-Val-Dil-Dap-OH (59.3 mg, 0.104 mmol) 및 DIEA (0.072 ml, 0.415 mmol)를 첨가하여 투명한 용액을 수득하였다. HATU (43.4 mg, 0.114 mmol)를 첨가한 다음에 반응 혼합물을 5분 동안 교반한 다음에 단계 2에서 수득된 (S)-2-페닐-1-(2H-테트라졸-5-일)에탄아민 TFA 염 (0.104 mmol)을 첨가하였다. 용액을 72시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 10-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 tert-부틸 ((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-테트라졸-5-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. MS m/z 743.5 (M+1). 체류 시간 1.325분.
단계 4: 15 ml 환저 플라스크에 tert-부틸 ((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-테트라졸-5-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (46 mg, 0.056 mmol), TFA (2 ml) 및 DCM (4 ml)을 첨가하여 투명한 용액을 수득하고 이를 1시간 동안 실온에서 교반하였다. LCMS는 Boc 기가 절단되었음을 나타냈다. 용액을 농축하여 조 (S)-2-아미노-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-테트라졸-5-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드 TFA 염을 수득하였다. MS m/z 643.5 (M+1). 체류 시간 0.947분이고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 5: DMF (1 ml) 중 (1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (7.6 mg, 0.032 mmol)의 용액에 DIEA (0.014 ml, 0.079 mmol) 및 HATU (12 mg, 0.032 mmol)를 첨가한 다음에, 이를 (S)-2-아미노-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-테트라졸-5-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드 TFA 염 (20 mg, 0.026 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반한 다음에 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 30-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-테트라졸-5-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 866.6 (M+1). 체류 시간 1.407분.
단계 6: DCM (2 ml) 중 (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-테트라졸-5-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 TFA 염 (10.2 mg, 0.012 mmol)의 용액에 TFA (1 ml)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하여 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-테트라졸-5-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 ( 6)를 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 766.6 (M+1). 체류 시간 0.985분.
실시예 7: ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스폰산. (7)
Figure pct00165
단계 1: ((R)-1-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-2-페닐에틸)포스핀산 (100 mg, 0.313 mmol) (문헌 [J. Chem. Soc. Perkin Trans. I 1984, 2845]에 기재된 절차를 따름으로써 합성됨)을 피리딘 (5 ml)에 용해시키고 n-BuOH (35 mg, 0.46 mmol), 이어서 피발로일 클로라이드 (70 mg, 0.58 mmol)를 첨가하였다. LCMS는 반응이 불완전하였음을 나타냈고, 따라서 n-BuOH 및 피발로일 클로라이드의 3개의 다른 부분을 모든 포스핀산이 소모될 때까지 첨가하였다. 그 다음에 2 ml 피리딘-H2O (10% 물) 중 아이오딘 (160 mg, 0.630 mmol)의 용액을 첨가하고 반응 혼합물을 20분 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타냈다. 피리딘을 진공에 의해 제거하였다. 티오술페이트 수용액을 첨가하고 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 그 다음에 EtOAc 층을 건조시키고, 농축하고 ISCO (5.5 g C18 칼럼)로 정제하고, 물 중 10%-60% 아세토니트릴 (0.5% TFA 포함)로 용리시켜 벤질 ((1R)-1-(부톡시(히드록시)포스포릴)-2-페닐에틸)카르바메이트를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 392.1 (M+1). 체류 시간 1.179분. 1H NMR (400 MHz, CD3CN) d 7.42 - 7.18 (m, 8H), 7.18 - 7.00 (m, 2H), 6.10 (s, 1H), 5.07 - 4.59 (m, 2H), 4.20-4.35 (m, 1H), 4.13 - 3.93 (m, 2H), 3.15-3.30 (m, 1H), 2.85-2.75 (s, 1H), 1.71 - 1.47 (m, 2H), 1.47 - 1.23 (m, 2H), 0.89 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
단계 2: MeOH (5 ml) 중 벤질 ((1R)-1-(부톡시(히드록시)포스포릴)-2-페닐에틸)카르바메이트 (84.7 mg, 0.216 mmol)의 용액에 10% Pd/C (26 mg)를 첨가하였다. 수소 벌룬을 부착하고 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 촉매를 셀라이트를 통해 여과에 의해 제거하고, 여액을 증발 건조시켜 부틸 수소 ((R)-1-아미노-2-페닐에틸)포스포네이트를 수득하였다. MS m/z 258.1 (M+1). 체류 시간 0.789분이고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 3: 15 mL 환저 플라스크에 DMF (2 ml) 중 Boc-Val-Dip-Dap-OH (80 mg, 0.140 mmol) 및 DIEA (62.9 mg, 0.487 mmol)를 첨가하여 투명한 용액을 수득하였다. HATU (53 mg, 0.139 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 5분 동안 교반한 다음에 부틸 수소 ((R)-1-아미노-2-페닐에틸)포스포네이트 (41.9 mg, 0.163 mmol)를 첨가하였다. 용액을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 40-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 tert-부틸 ((2S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((2S)-2-((1R,2R)-3-(((1R)-1-(부톡시(히드록시)포스포릴)-2-페닐에틸)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. MS m/z 811.4 (M+1). 체류 시간 1.376분.
단계 4: DCM (3 ml) 중 tert-부틸 ((2S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((2S)-2-((1R,2R)-3-(((1R)-1-(부톡시(히드록시)포스포릴)-2-페닐에틸)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트 (106 mg, 0.131 mmol)의 용액에 TFA (1 ml)를 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하였다. 약 2/3가 포스폰산 (1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스폰산으로 전환되었다. MS m/z 655.3 (M+1). 체류 시간 0.957분. 나머지 1/3은 부틸 수소 (1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스포네이트이었다. MS m/z 711.4 (M+1). 체류 시간 1.038분. 혼합물을 분리 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 5: DMF (1 ml) 중 (1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (3.8 mg, 0.016 mmol)의 용액에 DIEA (6.1 mg, 0.047 mmol) 및 이어서 HATU (5.9 mg, 0.016 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 실온에서 교반한 다음에 주로 포스폰산을 함유하는 단계 4로부터의 아민의 혼합물 (12 mg, 0.016 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 C18 칼럼, 4.5 g을 사용하여 ISCO에 의해 정제하고, 0.05% TFA를 갖는 물 중 10-70% 아세토니트릴로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스폰산 (MS m/z 878.5 (M+1), 체류 시간 1.307분), 및 (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((2S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((2S)-2-((1R,2R)-3-(((1R)-1-(부톡시(히드록시)포스포릴)-2-페닐에틸)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (MS m/z 934.5 (M+1), 체류 시간 1.447분)을 수득하였다.
단계 6: DCM (2 ml) 중 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스폰산 (11.0 mg, 0.012 mmol)의 용액에 TFA (1 ml)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하여 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스폰산 ( 7)을 수득하였다. MS m/z 778.4 (M+1). 체류 시간 0.973분.
실시예 8: ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 (8)
Figure pct00166
단계 1: 15 mL 환저 플라스크에 DMF (2 ml) 중 Boc-Val-Dip-Dap-OH (50 mg, 0.087 mmol) 및 DIEA (33.9 mg, 0.262 mmol)를 첨가하여 투명한 용액을 수득하였다. HATU (33.3 mg, 0.087 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 5분 동안 교반한 다음에 ((R)-1-아미노-2-페닐에틸)포스핀산 (41 mg, 0.154 mmol) (문헌 [J. Chem. Soc. Perkin Trans. I 1984, 2845]에 기재된 절차를 따름으로써 합성됨)에 첨가하였다. 용액을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. LCMS는 목적 생성물의 형성을 나타냈다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 30-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산을 수득하였다. MS m/z 739.4 (M+1). 체류 시간 1.248분.
단계 2: DCM (2 ml) 중 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 (69.1 mg, 0.094 mmol)의 용액에 TFA (1 ml)를 첨가하고 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하여 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 (MS m/z 639.3 (M+1); 체류 시간 0.851분)을 수득하고 이를 다음 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 3: DMF (1 ml) 중 (1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (11.3 mg, 0.047 mmol)의 용액에 DIEA (0.033 ml, 0.188 mmol), 이어서 HATU (17.9 mg, 0.047 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반한 다음에 DMF (1 ml) 중 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 (35.4 mg, 0.047 mmol)의 용액에 첨가하였다. LCMS는 반응이 10분 내에 완료되었음을 나타냈다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 30-55% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산을 수득하였다. MS m/z 862.5 (M+1). 체류 시간 1.372분.
단계 4: DCM (2 ml) 중 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 (60 mg, 0.070 mmol)의 용액에 TFA (1 ml)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하여 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 (8)을 수득하였다. MS m/z 762.5 (M+1). 체류 시간 1.220분.
실시예 9: ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 (9)
Figure pct00167
MeOH (2 ml) 중 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 (8) (20 mg, 0.023 mmol)의 용액에 파라포름알데히드 (10 mg, 0.33 mmol) 및 아세트산 (0.019 ml, 0.333 mmol), 이어서 시아노수소화붕소나트륨 (20 mg, 0.32 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 50℃에서 및 이어서 2일 동안 실온에서 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하여 불용성 잔류물을 제거하고 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 10-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 (9)을 수득하였다. MS m/z 776.4 (M+1). 체류 시간 0.944분.
실시예 10: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-히드록시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (50)
Figure pct00168
단계 1: DIEA (0.013 ml, 0.075 mmol) 및 HATU (18.5 mg, 0.049 mmol)를 DMF (1 ml) 중 (1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (9.8 mg, 0.040 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반한 다음에 DMF 중 Val-Dil-Dap-OH (17.7 mg, 0.038 mmol)에 첨가하였다. 반응물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음에 조 물질을 정제용 HPLC (30-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(t-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산을 수득하였다. MS m/z 695.4 (M+H). 체류 시간 1.376분.
단계 2: DMF (1 ml) 중 단계 1에서 수득된 생성물 (5.9 mg, 0.008 mmol)에 DIEA (1.1 mg, 0.008 mmol) 및 HATU (3.8 mg, 0.010 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 5분 동안 교반한 후에, DMF 중 (S)-2-(S)-2-아미노-3-페닐프로판-1-올 (1.9 mg, 0.013 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (20-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (1R,3S,4S)-t-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-히드록시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다. MS m/z 828.5 (M+H). 체류 시간 1.388분.
단계 3: DCM (3 ml) 중 단계 2에서 수득된 생성물 (4 mg, 0.005 mmol)을 1시간 동안 실온에서 TFA (1 ml)로 처리한 다음에 농축하여 화합물 ( 50)을 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 728.5 (M+H). 체류 시간 1.008분.
실시예 11: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-히드록시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (51)
Figure pct00169
(1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-히드록시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (50) (6.1 mg, 0.008 mmol), MeOH (2 ml), 아세트산 (0.005 ml, 0.09 mmol), 파라포름알데히드 (3 mg, 0.1 mmol), 및 시아노수소화붕소나트륨 (5 mg, 0.08 mmol)을 실온에서 합한 다음에 1시간 동안 50℃에서 교반하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 여과하고, 정제용 HPLC ( 20-40% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 51)을 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 742.5 (M+H). 체류 시간 1.008분.
실시예 12: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-(3-아미노페닐)-3-히드록시프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (52)
Figure pct00170
단계 1: DIEA (0.105 ml, 0.60 mmol) 및 HATU (45.5 mg, 0.12 mmol)를 DMF (2 ml) 중 (3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵탄산 (i-7) (57 mg, 0.12 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 실온에서 교반한 다음에 DMF (1 ml) 중 DapOMe (i-9) (28.5 mg, 0.12 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 정제용 HPLC (10-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (2R,3R)-메틸 3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노에이트를 수득하였다. MS m/z 623.5 (M+H). 체류 시간 1.225분.
단계 2: LiOH (30 mg, 1.25 mmol)를 MeOH-H2O (1:1, 4 ml) 중 단계 1에서 수득된 생성물 (43.2 mg, 0.059 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하고, 농축하고 HCl (1N, 1 ml)로 산성화하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (10-38% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산을 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 609.5 (M+H). 체류 시간 0.962분.
단계 3: DMF (1 ml) 중 단계 2에서 수득된 생성물 (45.7 mg, 0.063 mmol)에 DIEA (0.055 ml, 0.32 mmol) 및 HATU (24.0 mg, 0.063 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 실온에서 교반한 다음에 DMF (1 ml) 중 (S)-t-부틸 (3-(2-아미노-3-히드록시프로필)페닐)카르바메이트 TFA 염 (i-4) (24.1 mg, 0.063 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 t-부틸 (3-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-히드록시프로필)페닐)카르바메이트를 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 857.5 (M+H). 체류 시간 1.145분.
단계 4: 아세토니트릴-물 (1:1, 4 ml)과 5% HCl 중 단계 3에서 수득된 생성물 (61.4 mg, 0.063 mmol)의 용액을 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 농축하고 정제용 HPLC (10-30% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 52)를 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 757.5 (M+H). 체류 시간 0.744분.
실시예 13: (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트 (53)
Figure pct00171
MeOH (5 ml) 중 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트 TFA 염 (1) (55.4 mg, 0.064 mmol)에 아세트산 (0.009 ml, 0.2 mmol), 파라포름알데히드 (24 mg, 0.79 mmol) 및 이어서 시아노수소화붕소나트륨 (25 mg, 0.40 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 40℃에서 교반하고, 여과하고, 농축하고 정제용 HPLC (0.05% TFA를 갖는 10-45% 아세토니트릴-물)에 의해 정제하여 화합물 ( 53)을 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 770.3 (M+H). 체류 시간 1.100분.
실시예 14: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (9d)
Figure pct00172
화합물 (53) TFA 염 (50.8 mg, 0.057 mmol)을 MeOH-H2O (1:1, 5 ml)에 용해시키고 LiOH (20 mg, 0.835 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 40℃에서 교반하였다. MeOH를 증발에 의해 제거하였다. 물을 잔류물에 첨가하고, AcOH (0.040 ml)로 산성화하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (27-33% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 (54)를 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 756.5 (M+H). 체류 시간 0.985분.
실시예 15: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (55)
Figure pct00173
DIEA (10.2 mg, 0.014 mL) 및 HATU (7.7 mg, 0.020 mmol)를 DMF (1 ml) 중 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 TFA 염 (단계 2, 실시예 12) (12.3 mg, 0.017 mmol)에 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 교반한 다음에, DMF (0.5 ml) 중 (S)-2-아미노-3-페닐프로판-1-술폰아미드 (4.3 mg, 0.020 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 추가의 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 55)를 수득하였다. MS m/z 805.5 (M+1). 체류 시간 0.965분.
실시예 16: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (56)
Figure pct00174
단계 1: DMF (2 ml) 중 Boc-Dap-OH (21.6 mg, 0.075 mmol)에 DIEA (48.5 mg, 0.066 ml) 및 HATU (26.2 mg, 0.069 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 교반한 다음에, (S)-2-아미노-3-페닐프로판-1-술폰아미드(13.4 mg, 0.063 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반한 다음에 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (S)-t-부틸 2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-카르복실레이트를 수득하였다. MS m/z 484.2 (M+1). 체류 시간 1.130분.
단계 2: (S)-t-부틸 2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-카르복실레이트 (28.5 mg, 0.059 mmol)를 메탄올성 HCl (3 M, 3 ml)에 용해시켰다. 용매를 서서히 밤새 N2 스트림에 이어서 감압 하에 제거하여 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)-3-((S)-피롤리딘-2-일)프로판아미드를 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 384.2 (M+1). 체류 시간 0.630분.
단계 3: DMF (1 ml) 중 Cbz-Val-Dil-OH (28.7 mg, 0.066 mmol)에 DIEA (0.048 ml) 및 HATU (22.9 mg, 0.060 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 교반한 다음에, DMF (1 ml) 중 (2R,3R)-3-메톡시-2-메틸-N-((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)-3-((S)-피롤리딘-2-일)프로판아미드 (23 mg, 0.055 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고, 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 벤질 ((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바메이트를 수득하였다. MS m/z 802.4 (M+1). 체류 시간 1.298분.
단계 4: 단계 3에서 수득된 생성물 (24.6 mg, 0.031 mmol), 10% Pd-C (32.7 mg) 및 EtOAc (3 ml)를 합하고 실온에서 8시간 동안 수소 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 농축하여 (S)-2-아미노-N-((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)-N,3-디메틸부탄아미드를 수득하였다. MS m/z 668.4 (M+1). 체류 시간 0.888분.
단계 5: (1R,3S,4S)-2-(t-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (7.0 mg, 0.029 mmol), DMF (1 ml), DIEA (0.021 ml) 및 HATU (10.1 mg, 0.027 mmol)를 합하고 15분 동안 실온에서 교반한 다음에, DMF (1 ml) 중 단계 4에서 수득된 생성물 (16.2 mg, 0.024 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고 정제용 HPLC (30-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (1R,3S,4S)-t-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다. MS m/z 891.5(M+1). 체류 시간 1.319분.
단계 6: 단계 5에서 수득된 생성물 (13.2 mg, 0.015 mmol)을 메탄올성 HCl (3 M, 3 ml)에 용해시켰다. 용매를 서서히 밤새 N2 스트림에 이어서 감압 하에 제거하여 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 ( 56)를 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 791.5(M+1). 체류 시간 0.923분.
실시예 17: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (57)
Figure pct00175
DIEA (33 mg, 0.26 mmol) 및 HATU (19 mg, 0.051 mmol)를 DMF (2 ml) 중 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(t-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 (40 mg, 0.043 mmol)에 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 실온에서 교반한 다음에 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에탄아민 (22.4 mg, 0.085 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (1R,3S,4S)-t-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다. MS m/z 940.5 (M+1). 체류 시간 1.333분. 이 생성물 (13.9 mg, 0.015 mmol)을 메탄올성 HCl (3 M, 3 ml)에 용해시켰다. 용매를 서서히 밤새 N2 스트림에 이어서 감압 하에 제거하여 화합물 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 ( 57)를 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 840.5 (M+1). 체류 시간 0.936분.
실시예 18: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (58)
Figure pct00176
화합물 ( 58)을 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에탄아민 대신에 (S)-1-메톡시-3-페닐프로판-2-아민 HCl 염을 사용하여 화합물 ( 57)에 대해 기재된 절차에 의해 제조하였다. MS m/z 742.5(M+1). 체류 시간 0.997분.
실시예 19: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-피라졸-3-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (59)
Figure pct00177
화합물 ( 59)을 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에탄아민 대신에 (S)-2-페닐-1-(1H-피라졸-3-일)에탄아민 HCl 염을 사용하여 화합물 ( 57)에 대해 기재된 절차에 의해 제조하였다. MS m/z 764.5(M+1). 체류 시간 0.959분.
실시예 20: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (60), 및 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((R)-2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (61)
Figure pct00178
화합물 (60) 및 ( 61)을 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에탄아민 대신에 2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에탄아민을 사용하여 화합물 ( 57)에 대해 기재된 절차에 의해 제조하였다. Boc 보호된 (60) 및 ( 61)을 정제용 HPLC (30-65% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)) 상에서 분리하였다. Boc 보호된 (60) 및 ( 61)로부터 Boc 기를 제거하여 ((1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (60) 및 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((R)-2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (61)를 HCl 염으로서 각각 수득하였다. MS m/z 776.5(M+1). 체류 시간 1.001분 (60) 및 1.016분 (61).
실시예 21: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (62)
Figure pct00179
화합물 ( 62)을 단계 1에서와 같이 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에탄아민 대신에 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민을 사용하여 화합물 ( 57)에 대해 기재된 절차로 제조하였다. Boc 기의 제거 후에, 화합물 (62)을 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 842.5(M+1). 체류 시간 1.112분.
실시예 22: (1R,3S,4S)-2-(시아노메틸)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-히드록시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (63)
Figure pct00180
단계 1: DIEA (104 mg, 0.80 mmol) 및 HATU (122 mg, 0.32 mmol)를 DMF (3 ml) 중 (1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (78 mg, 0.32 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 실온에서 교반한 다음에 DMF (2 ml) 중 Val-Dil-Dap-OMe (130 mg, 0.27 mmol)에 첨가하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고 농축하였다. 포화 중탄산나트륨 용액 (5 ml)을 잔류물에 첨가하고 생성물을 DCM (10 ml X 3)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 건조시키고 농축하여 (1R,3S,4S)-t-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-1,3-디메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다. 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. MS m/z 710.5 (M+H). 체류 시간 1.440분.
단계 2: DCM (10 ml) 중 단계 1에서 수득된 생성물 (190 mg, 0.27 mmol)을 3시간 동안 실온에서 TFA (2 ml)로 처리한 다음에, 농축하여 (2R,3R)-메틸 3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노에이트를 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 610.5 (M+H). 체류 시간 1.003분. 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 3: MeOH (10 ml) 중 단계 2에서 수득된 생성물 (193 mg, 0.27 mmol)에 아세트산 (0.015 ml, 0.27 mmol), 파라포름알데히드 (40 mg, 1.3 mmol) 및 시아노수소화붕소나트륨 (84 mg, 1.4 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 16시간 동안 50℃에서 교반하였다. LCMS는 대략 90%가 시아노메틸화 화합물로 전환되고 약 10%가 메틸화 화합물로 전환되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 여과하고 정제용 HPLC (20-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하였다. 시아노 부가물을 함유하는 분획을 수집하고 농축하여 (2R,3R)-메틸 3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(시아노메틸)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노에이트를 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 648.5 (M+H). 체류 시간 1.261분.
단계 4: MeOH-H2O (1:1 5 ml) 중 단계 3에서 수득된 생성물 (0.12 g, 0.16 mmol)에 LiOH (50 mg, 2.09 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 실온에서 교반한 다음에 0.2 ml 10% HCl로 산성화하였다. 시아노 기를 부분적으로 가수분해시켜 시아노메틸의 것 이외에도 카르바모일메틸화 생성물을 형성시켰다. 반응물을 농축하고 두 생성물을 정제용 HPLC (20-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 단리하여 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(시아노메틸)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 (MS m/z 634.4 (M+H), 체류 시간 1.138분), 및 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(2-아미노-2-옥소에틸)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 (TFA 염으로서)을 수득하였다. MS m/z 652.4 (M+H). 체류 시간 0.888분).
단계 5: DMF 중 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(시아노메틸)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 TFA 염 (6 mg, 0.008 mmol)에 DIEA (3.1 mg, 0.024 mmol) 및 HATU (3.7 mg, 0.0096 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 5분 동안 실온에서 교반한 다음에 (S)-2-아미노-3-페닐프로판-1-올 (2.4 mg, 0.016 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (10-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 63)을 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 767.5 (M+H). 체류 시간 1.189분.
실시예 23: (1R,3S,4S)-2-(2-아미노-2-옥소에틸)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-히드록시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (64)
Figure pct00181
DMF 중 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(2-아미노-2-옥소에틸)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 TFA 염 (단계 4, 실시예 22) (6.1 mg, 0.008 mmol)에 DIEA (3.1 mg, 0.024 mmol) 및 HATU (3.7 mg, 0.0096 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 5분 동안 실온에서 교반한 다음에 (S)-2-아미노-3-페닐프로판-1-올 (2.4 mg, 0.016 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (10-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 64)를 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 785.5 (M+H). 체류 시간 0.951분.
실시예 24: (1R,3S,4S)-2-아세틸-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-히드록시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (65)
Figure pct00182
단계 1: DCM (2 ml) 중 (2R,3R)-메틸 3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노에이트 (단계 2, 실시예 63) (13 mg, 0.021 mmol) TFA 염에 DIEA (0.014 ml, 0.082 mmol) 및 아세트산 무수물 (0.0039 ml, 0.041 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 수성 Na2CO3 (2 M)를 첨가하고 반응 혼합물을 DCM (5 ml X 3)으로 추출하였다. 유기 층을 합하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과한 다음에 농축하여 (2R,3R)-메틸 3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아세틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로파노에이트를 수득하였다. 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. MS m/z 651.5 (M+H). 체류 시간 1.188분.
단계 2: MeOH:H2O (1:1 2 ml) 중 단계 1에서 수득된 생성물에 LiOH (10 mg, 0.42 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고 0.040 ml HOAc를 첨가하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (10-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아세틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산을 수득하였다. MS m/z 637.4 (M+H). 체류 시간 1.158분.
단계 3: DMF (1 ml) 중 단계 2에서 수득된 생성물 (5 mg, 0.008 mmol)의 용액에 DIEA (2.7 mg, 0.021 mmol) 및 HATU (3.9 mg, 0.010 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 5분 동안 실온에서 교반한 다음에 (S)-2-아미노-3-페닐프로판-1-올 (1.6 mg, 0.010 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 조 물질을 정제용 HPLC (10-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 (65)를 수득하였다. MS m/z 770.5 (M+H). 체류 시간 1.121분.
실시예 25: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(4-페닐-1H-이미다졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (66)
Figure pct00183
DIEA (0.0097 ml) 및 HATU (3.2 mg, 0.0083 mmol)를 DMF (0.5 ml) 중 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 TFA 염 (단계 2, 실시예 12) (4.0 mg, 0.0055 mmol)에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 15분 동안 교반하고, DMF (0.5 ml) 중 (S)-2-페닐-1-(4-페닐-1H-이미다졸-2-일)에탄아민 (2.9 mg, 0.011 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음에 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 ( 66)을 수득하였다. MS m/z 854.5 (M+1). 체류 시간 0.980분.
실시예 26: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (67)
Figure pct00184
화합물 ( 67)을 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에탄아민 대신에 (S)-1-메톡시-3-페닐프로판-2-아민 HCl 염을 사용하여 화합물 ( 66)에 대해 기재된 방법에 의해 수득하였다. MS m/z 756.5 (M+1). 체류 시간 1.046분.
실시예 27: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-피라졸-3-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (68)
Figure pct00185
화합물 ( 68)을 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에탄아민 대신에 (S)-2-페닐-1-(1H-피라졸-3-일)에탄아민 HCl 염을 사용하여 화합물 ( 66)에 대해 기재된 방법에 의해 수득하였다. MS m/z 778.5 (M+1). 체류 시간 0.998분.
실시예 28: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (69) 및 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((R)-2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (70)
Figure pct00186
화합물 (69) 및 ( 70)을 두 부분입체이성질체의 정제용 HPLC 분리 (30-55% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)) 후에 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에탄아민 대신에 2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에탄아민을 사용하여 화합물 ( 66)에 대해 기재된 방법에 의해 수득하였다. MS m/z 790.5 (M+1). ( 69) 및 (70) 각각에 대해 체류 시간 1.016분 및 1.043분.
실시예 29: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (71)
Figure pct00187
화합물 ( 71)을 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에탄아민 대신에 (S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에탄아민을 사용하여 화합물 ( 66)에 대해 기재된 방법에 의해 수득하였다. MS m/z 856.5 (M+1). 체류 시간 1.120분.
실시예 30: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-(3-아미노페닐)-3-메톡시프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (72)
Figure pct00188
DIEA (0.012 ml, 0.069 mmol) 및 HATU (7.89 mg, 0.021 mmol)를 DMF (2 ml) 중 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 (단계 2, 실시예 12) (10 mg, 0.014 mmol)에 첨가하였다. 반응물을 5분 동안 실온에서 교반한 다음에 (S)-t-부틸 (3-(2-아미노-3-메톡시프로필)페닐)카르바메이트 TFA 염 (10.9 mg, 0.028 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 조 물질을 정제용 HPLC (20-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 t-부틸 (3-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-메톡시프로필)페닐)카르바메이트를 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 871.5 (M+H). 체류 시간 1.157분. 아세토니트릴 (2 ml) 중 이 생성물 (13.6 mg, 0.014 mmol)에 10% 염산 (2 ml)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하여 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-(3-아미노페닐)-3-메톡시프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (72)를 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 771.5 (M+H). 체류 시간 0.883분.
실시예 31: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-(4-아미노페닐)-3-히드록시프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (73)
Figure pct00189
화합물 ( 73)을 (S)-t-부틸 (3-(2-아미노-3-메톡시프로필)페닐)카르바메이트 TFA 염 대신에 (S)-t-부틸 (4-(2-아미노-3-히드록시프로필)페닐)카르바메이트 TFA 염을 사용하여 화합물 ( 72)에 대해 기재된 방법에 의해 제조하였다. MS m/z 757.5 (M+H). 체류 시간 0.787분.
실시예 32: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (74)
Figure pct00190
DIEA (0.006 ml, 0.035 mmol) 및 HATU (4.0 mg, 0.010 mmol)를 DMF (1 ml) 중 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 (5 mg, 0.007 mmol)에 첨가하였다. 반응물을 5분 동안 실온에서 교반한 다음에 (1S,2R)-(+)-노르에페드린 (3 mg, 0.02 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 정제용 HPLC (20-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하였다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 10% 염산을 첨가하였다. 농축하여 화합물 ( 74)를 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 742.5 (M+H). 체류 시간 1.005분.
예를 들어 화학식 I의 N-말단 연결된 화합물의 합성 절차
실시예 33: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (10)
Figure pct00191
15 ml 환저 플라스크에서 DMF (1.0 mL) 중 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산산 (EMCA) (1.2 mg, 0.0058 mmol)의 용액에 DIEA (3.0 mg, 0.023 mmol), 이어서 HATU (2.7 mg, 0.0070 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반한 후에 DMF (1.0 mL) 중 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 TFA 염 (2) (5.0 mg, 0.0058 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응이 완료되었음을 나타냈다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-80% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 화합물 10을 수득하였다, MS m/z 935.6 (M+1). 체류 시간 1.17분.
실시예 34: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥실)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (11)
Figure pct00192
단계 1: 100 mL 환저 플라스크에 포화 NaHCO3 수용액 (12.0 mL) 중 6-아미노-1-헥산올 (1.00 g, 6.44 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 냉각하고, N-메톡시카르보닐말레이미드 (0.750 g, 6.44 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1.5시간 동안 0℃에서 교반하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 2 M HCl을 사용하여 0℃에서 pH 1로 산성화하였다. 산성화된 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (AcOEt)로 추출하였다. 유기 층을 농축하였다. 잔류물을 DCM에 용해시키고, 실리카겔 칼럼 상에 로딩하고, MeOH/DCM (0-4%)으로 용리시켜 1-(6-히드록시헥실)-1H-피롤-2,5-디온을 백색 고체로서 수득하였다, MS m/z 198.2 (M+1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.68 (s, 2H), 3.63 (t, d = 6.4 Hz, 2H), 3.52 (t, d = 7.2 Hz, 2H), 1.63-1.52 (m, 4H), 1.43-1.28 (m, 4H).
단계 2: DCM (10.0 mL) 중 1-(6-히드록시헥실)-1H-피롤-2,5-디온 (237 mg, 1.20 mmol)에 데스-마틴 시약 (618 mg, 1.44 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 1시간 후에, 반응 혼합물을 DCM (10 mL)으로 희석하고 여과하였다. 여액을 농축하고 ISCO (실리카겔, EtOAc/헥산 0-20%)에 의해 정제하여 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산알을 무색 오일로서 수득하였다, MS m/z 196.2 (M+1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.76 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 6.69 (s, 2H), 3.52 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 2.43 (td, J = 7.2 Hz, 1.6 Hz, 2H), 1.70-1.56 (m, 4H), 1.36-1.28 (m, 2H).
단계 3: 화합물 2 (5.0 mg, 0.0067 mmol) 및 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산알 (6.6 mg, 0.034 mmol)을 MeOH (1.0 mL)에 용해시켰다. 시아노수소화붕소나트륨 (4.2 mg, 0.067 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥실)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 11을 수득하였다, MS m/z 921.6(M+1). 체류 시간 1.07분.
실시예 35: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질)옥시)카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (12)
Figure pct00193
실온에서 15 mL 환저 플라스크에 MC-Val-Cit-PABC-PNP (5.2 mg, 0.0070 mmol), (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 TFA 염 (2) (5.0 mg, 0.0058 mmol) 및 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸 (HOAT) (0.6 mg, 0.005 mmol), 이어서 피리딘-DMF (1:4, 1.25 mL)를 첨가하였다. 생성된 용액에 DIEA (2.3 mg, 0.018 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 72시간 동안 교반하고 이 때까지 화합물 2가 소모되었다. 반응 혼합물을 농축하고 잔류물을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-80% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 화합물 12를 수득하였다, MS m/z 1340.7 (M+1). 체류 시간 1.15분.
실시예 36: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (13)
Figure pct00194
단계 1: DMF (2 mL) 중 3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로판산 (6.6 mg, 0.033 mmol)에 DIEA (0.011 mL, 0.065 mmol) 및 HATU (10.3 mg, 0.027 mmol)를 첨가하였다. 15분 후에, 화합물 1 (8.2 mg, 0.010 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트를 수득하였다, (MS m/z 941.3 (M+1). 체류 시간 1.30분.
단계 2: 단계 1로부터의 에스테르 생성물을 아세토니트릴 (0.3 mL) 및 H2O (0.2 mL)에 용해시켰다. 수성 NaOH (1.0N, 0.15 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 화합물 13 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산을 수득하였다, MS m/z 927.5 (M+1). 체류 시간 1.21분.
실시예 37: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(3-(2-(2-(4-((2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에톡시)에톡시)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (14)
Figure pct00195
DMF (1.2 mL) 및 H2O (0.3 mL) 중 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(3-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (13) (5.4 mg, 0.058 mmol), 1-(프로프-2-인-1-일)-1H-피롤-2,5-디온 (1.6 mg, 0.012 mmol) 및 CuSO4 (0.7 mg, 0.005 mmol)의 용액을 L-아스코르브산 나트륨 염 (2.6 mg, 0.015 mmol)으로 처리하고 2시간 동안 실온에서 교반하였다. LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(3-(2-(2-(4-((2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에톡시)에톡시)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 14를 수득하였다, MS m/z 1062.5 (M+1). 체류 시간 1.15분.
실시예 38: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-(((2-(2-(2-(비닐술포닐)에톡시)에톡시)에틸)술포닐)에틸)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (15)
Figure pct00196
단계 1: t-BuOK (119 mg, 1.10 mmol)를 THF (100 mL) 중 디비닐 술폰 (1.60 g, 13.5 mmol) 및 에틸렌 글리콜 (330 mg, 5.32 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 조 물질을 산출하고 이를 실리카겔 칼럼 크로마토그래피 (EtOAc-헥산 2:1 내지 3:1)에 의해 정제하여 ((2-(2-(2-비닐술포닐에톡시)에톡시)에틸)술포닐)에텐을 무색 시럽으로서 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d 6.75 (dd, J = 9.9 Hz, 16.6 Hz, 2H), 6.39 (d, J = 16.6 Hz, 2H), 6.09 (d, J = 9.9 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 5.7 Hz, 4H), 3.61 (s, 4H), 3.24 (t, J = 5.7 Hz, 4H).
단계 2: DCM-i-PrOH (2:1) 중 ((2-(2-(2-비닐술포닐에톡시)에톡시)에틸)술포닐)에텐 (13.3 mg, 0.045 mmol)의 용액에 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 TFA 염 (2) (10.0 mg, 0.012 mmol) 및 DIEA (0.0020 mL, 0.012 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 80℃로 가열하고 이 시점에서 LCMS 분석은 반응이 70-80% 완료되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하고, 잔류물을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 10-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 화합물 15를 TFA 염으로서 수득하였다, MS m/z 1040.4 (M+1). 체류 시간 1.03분.
실시예 39: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-(3-(메틸(2-(비닐술포닐)에틸)아미노)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (16)
Figure pct00197
단계 1: DMF (1.0 mL) 중 3-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)프로판산 (5.4 mg, 0.027 mmol)의 용액에 DIEA (0.0070 mL, 0.040 mmol) 및 HATU (9.1 mg, 0.024 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반하고 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 TFA 염 (2) (11.4 mg, 0.013 mmol)을 첨가하였다. LCMS 분석에 의해 판단된 바와 같이 반응은 1시간 내에 완료되었다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 10-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(3-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산을 수득하였다, MS m/z 927.5 (M+1). 체류 시간 1.28분.
단계 2: DCM (2.0 mL) 중 단계 1에서 수득된 생성물 (6.4 mg, 0.0069 mmol)의 용액에 TFA (1.0 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고 농축하여 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-(3-(메틸아미노)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 TFA 염을 수득하였다. MS m/z 827.4 (M+1). 체류 시간 0.99분. 이 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 3: i-PrOH (2.0 mL) 중 단계 2에서 수득된 생성물 TFA 염 (6.5 mg, 0.0069 mmol)의 용액에 디비닐 술폰 (20.0 mg, 0.169 mmol) 및 DIEA (0.010 mL, 0.057 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 80℃에서 교반하였고, 이때 LCMS 분석에 의해 판단된 바와 같이 반응이 완료되었고 반응 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 10-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 화합물 16을 수득하였다, MS m/z 945.4 (M+1). 체류 시간 0.99분.
실시예 40: (1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (17)
Figure pct00198
이 화합물을 EMCA (5.5 mg, 0.026 mmol), DIEA (10.0 mg, 0.078 mmol), HBTU (9.8 mg, 0.026 mmol) 및 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((1S,2R)-1-히드록시-1-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 TFA 염 (3) (21.8 mg, 0.026 mmol)으로부터 화합물 (4) (실시예 4에서)에 대해 기재된 바와 동일한 방법을 사용하여 합성하였다. 화합물 17을 역상 HPLC에 의한 정제 후에 수득하였다, MS m/z 921.5 (M+1). 체류 시간 1.25분.
실시예 41: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-메르캅토헥실)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (18)
Figure pct00199
단계 1: MeOH (2.0 ml) 중 S-(6-옥소헥실) 에탄티오에이트 (4.28 mg, 0.025 mmol) 및 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 TFA 염 (2) (7.0 mg, 0.0082 mmol)의 용액에 아세트산 (0.0050 mL, 0.083 mmol) 및 시아노수소화붕소나트륨 (2.57 mg, 0.041 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 50℃에서 가열하고 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고 농축하여, (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(아세틸티오)헥실)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산을 수득하였다, MS m/z 900.5 (M+1), 체류 시간 1.17분.
단계 2: 단계 1에서 수득된 생성물을 MeOH-H2O (2:1, 3.0 mL)에 용해시켰다. 용액에 수산화리튬 (5.0 mg, 0.21 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0.5시간 동안 실온에서 교반한 다음에 대략 1.5 mL로 농축하였다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 화합물 18을 수득하였다, MS m/z 858.5 (M+1). 체류 시간 1.16분.
실시예 42: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(3-아미노-4-포르밀페녹시)헥실)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (19)
Figure pct00200
단계 1: DMF (2.0 mL) 중 2-니트로-4-((6-옥소헥실)옥시)벤즈알데히드 (20.1 mg, 0.076 mmol) 및 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트 (1) (16.5 mg, 0.019 mmol)의 용액에 아세트산 (0.0076 mL, 0.13 mmol) 및 시아노수소화붕소나트륨 (11.9 mg, 0.190 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 50℃에서 가열하고 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 알데히드 (MS m/z 1005.5 (M+1), 체류 시간 1.27분) 및 목적 알콜 (MS m/z 1007.5 (M+1), 체류 시간 1.21분) 중간체를 함유하는 분획를 합하고 농축하고 다음 단계에서 사용하였다.
단계 2: 알데히드 및 알콜을 함유하는 단계 1로부터 수득된 혼합물을 DCM (2.0 mL)에 용해시키고 데스-마틴 페리오디난 (4.0 mg, 0.0095 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 Na2S2O3 수용액으로 세척하고 DCM으로 추출하였다. DCM 층을 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하였다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(4-포르밀-3-니트로페녹시)헥실)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트 TFA 염을 수득하였다, MS m/z 1005.5 (M+1). 체류 시간 1.27분. 생성물은 또한 일부 가수분해된 산을 함유하였다, MS m/z 991.5 (M+1). 체류 시간 1.22분.
단계 3: 물 중 70% EtOH 중 단계 2에서 수득된 생성물 (16.9 mg, 0.015 mmol)의 용액에 철 분말 (0.8 mg, 0.02 mmol) 및 HCl (0.1N, 0.15 mL, 0.015 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 격렬하게 교반하였다. 갈색 침전물이 형성되었다. 혼합물을 셀라이트 플러그를 통해 여과하고 여액을 농축하였다. 조 물질을 ISCO, C18 칼럼에 의해 정제하고, 30-100% 아세토니트릴-H2O로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(3-아미노-4-포르밀페녹시)헥실)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트를 수득하였다, MS m/z 975.5 (M+1). 체류 시간 1.23분.
단계 4: MeOH-H2O (1.5:1, 2.5 mL) 중 단계 3에서 수득된 생성물 (4.6 mg, 0.0047 mmol)의 용액에 수산화리튬 (10.0 mg, 0.435 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 약 50% 부피로 농축하고 1N HCl을 이용하여 pH 5로 산성화하였다. 조 물질을 ISCO, C18 칼럼에 의해 정제하고, 30-75% 아세토니트릴-H2O로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고, 0.3 mg의 LiOH로 중화시키고, 동결 건조시켜 화합물 19를 수득하였다, MS m/z 961.5 (M+1). 체류 시간 1.15분.
실시예 43: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (20)의 조효소 A 부가물
Figure pct00201
pH 7.5에서 5 mM EDTA를 함유하는 100 mM 인산염 완충제 중 조효소 A (CoA) 삼리튬 염 (7.6 mg, 0.0096 mmol)의 용액에 DMSO (0.048 mL) 중 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (17) (9.0 mg, 0.0096 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 방치하였고, 이때 LCMS 분석에 의해 판단된 바와 같이 반응이 완료되었다. 샘플을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 CoA 부가물 20을 수득하였다, MS m/z 852 (M/2+1)). 체류 시간 0.98분.
실시예 44: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2-브로모아세트아미도)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (21)
Figure pct00202
단계 1: DMF (2.0 mL) 중 6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥산산 (12 mg, 0.051 mmol)의 용액에 DIEA (18 mg, 0.14 mmol) 및 HATU (18 mg, 0.047 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 실온에서 교반한 후에 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (2) (40 mg, 0.047 mmol)을 첨가하였다. 반응은 30분 내에 완료되었다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산을 수득하였다, MS m/z 955.5 (M+1). 체류 시간 1.32분.
단계 2: DCM (2.0 mL) 중 단계 1에서 사용된 화합물 (15.6 mg, 0.016 mmol)의 용액에 TFA (1.0 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반하고 농축하여 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-아미노헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 TFA 염을 수득하였다, MS m/z 855.5 (M+1). 체류 시간 1.01분.
단계 3: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-아미노헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 TFA 염 (20 mg, 0.021 mmol)을 DCM에 용해시키고 DIEA (12 mg, 0.093 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각하였다. 그 다음에 반응 혼합물에 DCM (0.2 mL) 중 2-브로모아세틸 브로마이드 (9.0 mg, 0.045 mmol)의 용액을 교반하면서 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 0℃에서 교반하고 LCMS 분석은 아민 출발 물질이 소모되었음을 나타냈다. 포화 수성 NaHCO3를 첨가하여 반응물을 켄칭하였다. 반응 혼합물을 DCM (5 mL X 3)으로 추출하였다. 유기 층을 합하고 농축하였다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 30-45% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 분획을 모으고 농축하여 화합물 21을 수득하였다, MS m/z 975.3 (M+1). 체류 시간 1.19분.
실시예 45: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(아미노옥시)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (22)
Figure pct00203
단계 1: DMF (1.0 mL) 중 리튬 6-(((1-에톡시에틸리덴)아미노)옥시)헥사노에이트 (6.3 mg, 0.028 mmol)의 용액에 HATU (8.9 mg, 0.023 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 20분 동안 실온에서 교반한 후에 전체 반응 혼합물을 DMF (1.0 mL) 중 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트 TFA 염 (1) (20 mg, 0.021 mmol) 및 DIEA (6.0 mg, 0.047 mmol)의 용액에 첨가하였다. 2시간 동안 실온에서 교반한 후에, 반응 혼합물을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 40-80% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하였다. LCMS 분석은 알콕실아민 모이어티 상에서의 보호 기를 제거하여 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(아미노옥시)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트의 TFA 염을 제공하였음을 밝혀냈다, MS m/z 885.5 (M+1). 체류 시간 1.10분.
단계 2: MeOH-H2O (1:1, 2.0 mL) 중 단계 1에서 사용된 화합물 (24.3 mg, 0.023 mmol)의 용액에 수산화리튬 (20 mg, 0.84 mmol)을 첨가하였다. 반응을 LCMS에 의해 모니터링하였다. 완료시 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-40% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 화합물 22 TFA 염을 수득하였다, MS m/z 871.5 (M+1). 체류 시간 1.03분.
실시예 46: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-((S)-아지리딘-2-카르복스아미도)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (23)
Figure pct00204
단계 1: 7 mL 바이알에서, 6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥산산 (16 mg, 0.069 mmol)을 무수 DMF(2 mL)에 용해시켰다. DIEA (0.036 mL, 0.21 mmol) 및 HATU (24 mg, 0.062 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 교반한 후에 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트 (1, HCl 염, 30 mg, 0.034 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 추가의 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% ACN-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트를 수득하였다. MS m/z 969.6 (M+1). 체류 시간 1.42분. 이렇게 수득된 생성물 (21 mg, 0.022 mmol)을 MeOH (3M, 2 mL) 중 HCl에 용해시켰다. 용매를 감압 하에 서서히 제거하였다. 잔류물의 LCMS 분석은 Boc 기의 완전한 제거를 나타냈다. 잔류물을 아세토니트릴 및 물에 용해시키고 동결 건조시켜 (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-아미노헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트를 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 869.5 (M+1). 체류 시간 1.01분.
단계 2: 이전 단계로부터의 생성물 (10 mg, 0.012 mmol)을 THF (0.8 mL), MeOH (0.1 mL) 및 H2O (0.1 mL)에 용해시켰다. 수산화리튬 일수화물 (4.83 mg, 0.115 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응의 완료를 나타냈다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 0.1N 염산을 사용하여 중화시키고, 아세토니트릴 및 H2O에서 용해시키고, 동결 건조시켜 일부 LiCl을 함유하는 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-아미노헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산을 수득하였다. MS m/z 855.6 (M+1). 체류 시간 0.98분.
단계 3: 7 mL 바이알에서 (S)-1-트리틸아지리딘-2-카르복실산 (7.6 mg, 0.023 mmol)을 무수 DMF (2 mL)에 용해시켰다. DIEA (0.010 mL, 0.021 mmol) 및 HATU (7.9 mg, 0.021 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-아미노헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (10 mg, 0.012 mmol) 전에 10분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 추가의 2시간 동안 실온에서 교반하였다. LCMS는 반응의 완료를 나타냈다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 C18aq 칼럼 (5.5 g)을 사용하여 역상 ISCO에 의해 정제하고, 10-100% 아세토니트릴-H2O로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-(6-((S)-1-트리틸아지리딘-2-카르복스아미도)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산을 수득하였다. MS m/z 1166.5 (M+1). 체류 시간 1.49분.
단계 4: 단계 3으로부터의 생성물 (4.0 mg, 0.0034 mmol)을 MeOH/CHCl3 (1:1, 1 mL)에 용해시키고 0℃로 냉각하였다. TFA (0.0040 mL, 0.051 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 1시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 대략 60% 완료되었음을 나타냈다. TFA (0.0040 mL, 0.051 mmol)를 다시 첨가하였다. 실온에서 또 다른 1시간 후에 LCMS는 반응이 완료되었음을 나타냈다. 용매를 감압 하에 증발시켰다. 잔류물을 MeOH에 용해시키고 C18aq 칼럼 (5.5 g)을 사용하여, 역상 ISCO에 의해 정제하고, 10-100% 아세토니트릴-H2O로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-((S)-아지리딘-2-카르복스아미도)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (23)을 수득하였다. MS m/z 924.6 (M+1). 체류 시간 1.012분.
실시예 47: S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(4-(4-((2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)부타노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (24)
Figure pct00205
단계 1: DMF (100 mL) 중 에틸 4-브로모부타노에이트 (3.4 g, 0.0174 mol)의 용액에 소듐 아지드 (1.7 g, 0.0262 mol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃로 가열하고 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고 에테르로 3회 추출하였다. 유기 상을 물로 3회 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 조 생성물을 수득하고 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 2: 에틸 4-아지도부타노에이트 (157 mg, 1.0 mmol)를 THF (4 mL), MeOH (0.5 mL) 및 물 (0.5 mL)에 용해시켰다. 그 다음에 LiOH.H2O (168 mg, 4.0 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응의 완료를 나타냈다. 반응을 중단하고, 1N HCl을 사용함으로써 pH를 2-3로 조정하고 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축하여 조 생성물을 수득하고 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 3.36 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.39 (t, J=7.2 Hz, 2H), 1.89-1.82 (m, 2H).
단계 3: DMF (3.0 mL) 및 H2O (0.75 mL) 중 4-아지도부탄산 (19 mg, 0.147 mmol), 1-(프로프-2-인-1-일)-1H-피롤-2,5-디온 (39.8 mg, 0.294 mmol) 및 CuSO4 (17.62 mg, 0.11 mmol)의 용액을 L-아스코르브산 나트륨 염 (72.9 mg, 0.368 mmol)으로 처리하고 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 Prep-HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 백색 고체를 수득하였다. MS m/z 265.1 (M+1). 체류 시간 0.642분. 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.94 (s, 1H), 6.86 (s, 2H), 4.77 (s, 2H), 4.43 (t, J=7.0 Hz, 2H), 2.31 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.17-2.13 (m, 2H).
단계 4: 4-(4-((2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)부탄산 (4.5 mg, 0.017 mmol)을 DMF (1 mL)에 용해시켰다. DIEA (9.9 uL, 0.057 mmol) 및 HATU (5.61 mg, 0.015 mmol)를 첨가하고 혼합물을 10분 동안 교반한 후에 2 (9.72 mg, 0.011 mmol)를 첨가하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LC/MS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 생성물을 Prep-HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물 24를 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 백색 고체를 수득하였다. MS m/z 988.5.1 (M+1). 체류 시간 1.074분.
실시예 48: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-N-1-(메틸술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (25)
Figure pct00206
EMCA (4.1 mg, 0.019 mmol)를 DMF (2 mL)에 용해시켰다. DIEA (8.31 mg, 0.064 mmol) 및 HATU (5.87 mg, 0.015 mmol)를 첨가하고 10분 후에 화합물 4 (11 mg, 0.013 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LC/MS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 생성물을 Prep-HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 30-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 목적 생성물 25를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 1012.5 (M+1). 체류 시간 1.222분.
실시예 49: (1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-테트라졸-5-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (26)
Figure pct00207
DMF (1 ml) 중 EMCA (2.5 mg, 0.012 mmol)의 용액에 DIEA (6.2 ul, 0.035 mmol) 및 이어서 HATU (4.5 mg, 0.012 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반한 다음에 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-테트라졸-5-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 TFA 염 (6.7 mg, 0.0076 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 유지시키고 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 화합물 26을 수득하였다. MS m/z 959.5 (M+1). 체류 시간 1.220분.
실시예 50: ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스폰산 (27)
Figure pct00208
DMF (1 ml) 중 EMCA (3.3 mg, 0.016 mmol)의 용액에 DIEA (2.7 ul, 0.016 mmol) 및 이어서 HATU (5.93 mg, 0.016 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 실온에서 교반한 다음에 DMF 중 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스폰산 7 (10 mg, 0.011 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 30-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스폰산 27로 농축하였다. MS m/z 971.5 (M+1). 체류 시간 1.181분.
실시예 51: ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 (28)
Figure pct00209
DMF (1 ml) 중 EMCA (2.4 mg, 0.011 mmol)의 용액에 DIEA (6.6 ul, 0.038 mmol) 및 HATU (4.0 mg, 10.42 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반한 다음에 DMF (1 ml) 중 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 8 (8.3 mg, 0.0095 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물은 10분 내에 완료되었고 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 30-55% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 28을 수득하였다. MS m/z 955.5 (M+1). 체류 시간 1.151분.
실시예 52: 부틸 수소 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스포네이트 (29)
Figure pct00210
피리딘 (1 ml) 중 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 8 (4.2 mg, 0.0044 mmol)의 용액에 n-BuOH (3.3 mg, 0.044 mmol) 및 이어서 피발로일 클로라이드 (5.3 mg, 0.044 mmol)를 첨가하였다. 아인산 모두가 에스테르로 전환될 때까지 반응을 LCMS에 의해 모니터링하였다. 그 다음에 습윤 피리딘-물 (10:1 1 ml) 중 새로이 제조된 아이오딘 (11 mg, 0.044 mmol) 용액을 첨가하였다. 완료될 때까지 반응을 LCMS에 의해 모니터링하였다. 피리딘을 진공에 의해 제거하고 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 30-55% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 부틸 수소 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스포네이트 29를 수득하였다. MS m/z 1027.5 (M+1). 체류 시간 1.300분. 에스테르는 산성 조건에서 가수분해하기 쉽다.
실시예 53: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-((((1R,8S,9s)-비시클로[6.1.0]논-4-인-9-일메톡시)카르보닐)아미노)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (75)
Figure pct00211
DMF-THF (1:1, 2 ml) 중 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-아미노헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (단계 2, 실시예 44) (5 mg, 0.005 mmol)에 (1R,8S,9s)-비시클로[6.1.0]논-4-인-9-일메틸 (2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 카르보네이트 (1.5 mg, 0.005 mmol) 및 DIEA (0.0025 ml, 0.014 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 실온에서 교반한 다음에 정제용 HPLC (40-65% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 75)를 수득하였다. MS m/z 1031.6 (M+H). 체류 시간 1.337분.
실시예 54: 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-히드록시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (76)
Figure pct00212
DMF (1 ml) 중 MC-Val-Cit-PAB-PNP (1.9 mg, 0.0026 mmol), 화합물 (50) TFA 염 (1.8 mg, 0.002 mmol)의 용액에 피리딘 (0.25 ml), HOAT (0.29 mg, 0.002 mmol) 및 DIEA (0.0054 ml, 0.031 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 40℃에서 및 이어서 18시간 동안 30℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축하고 정제용 HPLC (20-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 76)을 수득하였다. MS m/z 664.0 (M/2+H). 체류 시간 1.165분.
실시예 55: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(3-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (77)
Figure pct00213
DMF (1 ml) 중 3-(2-(말레이미도)에톡시)프로판산 (2.2 mg, 0.010 mmol)의 용액에 HATU (3.7 mg, 0.0098 mmol) 및 DIEA (3.6 mg, 0.028 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 5분 동안 교반한 다음에, DMF (0.5 ml) 중 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (8 mg, 0.0093 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반한 다음에 농축하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (10-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 77)을 수득하였다. MS m/z 937.5 (M+H). 체류 시간 1.138분.
실시예 56: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(3-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)에톡시)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (78)
Figure pct00214
화합물 (78)을 3-(2-(말레이미도)에톡시)프로판산 대신에 3-(2-(2-(말레이미도)에톡시)에톡시)프로판산 (2.6 mg, 0.010 mmol)을 사용하여 화합물 (77)에 대해 기재된 방법에 의해 제조하였다. MS m/z 981.5 (M+H). 체류 시간 1.140분.
실시예 57: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(3-(2-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)에톡시)에톡시)프로파노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (79)
Figure pct00215
화합물 ( 79)를 3-(2-(말레이미도)에톡시)프로판산 대신에 3-(2-(2-(2-(말레이미도)에톡시)에톡시)에톡시)프로판산 (3.1 mg, 0.010 mmol)을 사용하여 화합물 (77)에 대해 기재된 방법에 의해 제조하였다. MS m/z 1025.5 (M+H). 체류 시간 1.143분.
실시예 58: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(1-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (80)
Figure pct00216
화합물 ( 80)을 3-(2-(말레이미도)에톡시)프로판산 대신에 1-(말레이미도)-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오산 (3.6 mg, 0.010 mmol)을 사용하여 화합물 (77)에 대해 기재된 방법에 의해 제조하였다. MS m/z 1069.5 (M+H). 체류 시간 1.144분.
실시예 59: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-(4-(1-(2-(2-(2-(2-(4-(5-(메틸술포닐)-1,3,4-옥사디아졸-2-일)페녹시)에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)부타노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (81)
Figure pct00217
단계 1: (S)-메틸 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로파노에이트 (1) (63 mg, 0.080 mmol)를 ACN (0.75 ml) 및 물 (0.5 ml)에 용해시켰다. NaOH (1 M, 0.35 ml)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 1N HCl를 이용하여 대략 pH 5로 중화시킨 후에, 반응 혼합물을 물로 희석하고 동결 건조시켜 조 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산을 수득하였다. MS m/z 742.4(M+1). 체류 시간 1.010분. 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 2: DMF (2 ml) 중 헥스-5-이노산 (5.4 mg, 0.049 mmol)의 용액에 DIEA (26.1 mg, 0.35 mmol) 및 HATU (16.9 mg, 0.044 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음에 단계 1에서 수득된 생성물 (30 mg, 0.040 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(헥스-5-이노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산을 수득하였다. MS m/z 836.5 (M+1). 체류 시간 1.224분.
단계 3: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(헥스-5-이노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (7 mg, 0.0084 mmol) 및 2-(4-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에톡시)페닐)-5-(메틸술포닐)-1,3,4-옥사디아졸 (3.7 mg, 0.0084 mmol)을 t-BuOH (1 ml) 및 물 (1 ml)에 현탁시켰다. 0.3 ml H2O 중 소듐 L-아스코르베이트 (1.7 mg, 0.0084 mmol) 및 0.3 ml H2O 중 CuSO4 (0.3 mg, 0.0017 mmol)를 주사기를 사용하여 순차적으로 첨가하고 반응물을 3시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 제조용 (10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 81)을 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 639.4 (M/2+1). 체류 시간 1.196분.
실시예 60: 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (82)
Figure pct00218
(1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 ((56), 8.7 mg, 0.011 mmol), MC-Val-Cit-PABC-PNP (9.7 mg, 0.013 mmol), HOAT (1.7 mg, 0.011 mmol) 및 DIEA (0.013 ml, 0.077 mmol)를 피리딘 (0.5 ml) 및 DMF (2 ml)에서 합하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC (10-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 82)를 백색 고체로서 수득하였다. MS m/z 695.5 (M/2+1). 체류 시간 1.139분.
실시예 61: 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(4-페닐-1H-이미다졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (83)
Figure pct00219
화합물 ( 83)을 화합물 (56) 대신에, (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(5-페닐-1H-이미다졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 ( 57)를 사용하여 화합물 ( 82)에 대해 기재된 방법에 의해 제조하였다. MS m/z 720.0 (M/2+1). 체류 시간 1.169분.
실시예 62: 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (84)
Figure pct00220
화합물 ( 84)를 화합물 (56) 대신에 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-3-(((S)-1-메톡시-3-페닐프로판-2-일)아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (58)를 사용하여 화합물 ( 82)에 대해 기재된 방법에 의해 제조하였다. MS m/z 671.0 (M/2+1). 체류 시간 1.236분.
실시예 63: 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-피라졸-3-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (85)
Figure pct00221
화합물 ( 85)를 화합물 (56) 대신에 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(1H-피라졸-3-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 ( 59)를 사용하여 화합물 ( 82)에 대해 기재된 방법에 의해 제조하였다. MS m/z 682.1(M/2+1). 체류 시간 1.172분.
실시예 64: 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (86)
Figure pct00222
화합물 ( 86)을 화합물 (56) 대신에 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (62)를 사용하여 화합물 ( 83)에 대해 기재된 방법에 의해 제조하였다. MS m/z 721.1(M/2+1). 체류 시간 1.280분.
실시예 65: 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (87)
Figure pct00223
화합물 ( 87)을 화합물 (56) 대신에 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (60)를 사용하여 화합물 (82)에 대해 기재된 방법에 의해 제조하였다. 체류 시간 1.204분.
실시예 66: 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (1R,3S,4S)-3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((R)-2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (88)
Figure pct00224
화합물 ( 88)을 화합물 (56) 대신에 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((R)-2-페닐-1-(피리미딘-2-일)에틸)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 ( 61)를 사용하여 화합물 ( 82)에 대해 기재된 방법에 의해 제조하였다. MS m/z 688.0 (M/2+1). 체류 시간 1.221분.
실시예 67: (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(5-((2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-5-옥소펜탄아미도)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (89)
Figure pct00225
DMF (1 ml) 중 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-아미노헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 ((단계 2, 실시예 44) 20 mg, 0.021 mmol) 및 DIEA (0.018 ml, 0.10 mmol)의 용액을 DMF (1 ml) 중 비스(2,5-디옥소피롤리딘-1-일) 글루타레이트 (10.1 mg, 0.031 mmol) 및 DIEA (0.018 ml)에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(5-((2,5-디옥소피롤리딘-1-일)옥시)-5-옥소펜탄아미도)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (89)을 수득하였다. MS m/z 1066.5 (M+1). 체류 시간 1.103분.
예를 들어 화학식 I의 C-말단 연결된 화합물의 합성 절차
실시예 68: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (30)
Figure pct00226
단계 1: 15 mL 환저 플라스크에 DMF (2.0 mL) 중 (1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (12 mg, 0.050 mmol) 및 DIEA (0.032 mL, 0.18 mmol), 이어서 HATU (19 mg, 0.050 mmol)를 첨가하였다. 생성된 용액을 5분 동안 교반하였다. 그 다음에, N-(4-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판아미도)벤질)-6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미드 TFA 염 (48.5 mg, 0.047 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 10-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다, MS m/z 1139.6 (M+1). 체류 시간 1.39분.
단계 2: 15 mL 환저 플라스크에 단계 1에서 수득된 생성물 (42.6 mg, 0.037 mmol), TFA (2.0 mL) 및 DCM (4.0 mL)을 첨가하여, 투명한 용액을 생성시켰다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였고 이때 LCMS 분석은 Boc가 완전히 제거되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 농축하여 화합물 30을 TFA 염으로서 수득하였다, MS m/z 1039.6 (M+1). 체류 시간 1.06분.
실시예 69: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (31)
Figure pct00227
15 mL 환저 플라스크에 MeOH (2.0 mL) 중 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 TFA 염 (30) (20 mg, 0.017 mmol), 파라포름알데히드 (5.9 mg, 0.21 mmol), 및 아세트산 (0.0029 mL, 0.050 mmol)을 첨가하였다. 생성된 현탁액에 NaCNBH3 (6.6 mg, 0.11 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 추가의 포름알데히드 및 NaCNBH3를 첨가하고 반응 혼합물을 1시간 동안 50℃로 가열하여 반응을 완료하였다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 10-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 화합물 31을 TFA 염으로서 수득하였다, MS m/z 1053.7 (M+1)). 체류 시간 1.07분.
실시예 70: (1R,3S,4S)-2-아세틸-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (32)
Figure pct00228
15 mL 환저 플라스크에 아세트산 (0.79 mg, 0.013 mmol), DIEA (1.7 mg, 0.013 mmol) 및 DMF (1.0 mL), 이어서 HBTU (2.2 mg, 0.0058 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 5분 동안 교반한 후에 (2S,3S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-3-메틸피롤리딘-2-카르복스아미드 TFA 염 (30) (5.5 mg, 0.0048 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 화합물 32를 수득하였다, MS m/z 1081.3 (M+1). 체류 시간 1.22분.
실시예 71: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-(6-히드록시헥실)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (33)
Figure pct00229
MeOH (1.0 mL) 중 화합물 30 (3.0 mg, 0.0029 mmol)에 6-히드록시헥산알 (6.7 mg, 0.058 mmol), 이어서 NaBH3CN (9.1 mg, 0.14 mmol)을 첨가하였다. 30분 후에, 추가의 NaBH3CN (9.1 mg, 0.14 mmol)을 첨가하였다. 또 다른 30분 후에, LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 반응 혼합물을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-(6-히드록시헥실)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 33을 수득하였다, MS m/z 1139.6 (M+1). 체류 시간 1.10분.
실시예 72: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-(6-히드록시헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (34)
Figure pct00230
DMF (1 mL) 중 6-히드록시헥산산 (3.8 mg, 0.029 mmol)에 DIEA (7.5 mg, 0.058 mmol) 및 HBTU (9.1 mg, 0.024 mmol)를 첨가하였다. 10분 후에, 화합물 30 (10 mg, 0.0096 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였고, 이때 LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 반응 혼합물을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 화합물 34를 수득하였다, MS m/z 1153.5 (M+1). 체류 시간 1.20분.
실시예 73: (2S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-3-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복스아미드 (35)
Figure pct00231
이 화합물을 3-(tert-부톡시카르보닐)-3-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복실산 (12.5 mg, 0.055 mmol), DIEA (28.5 mg, 0.22 mmol), HATU (21 mg, 0.055 mmol) 및 N-(4-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판아미도)벤질)-6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미드 TFA 염 (11 mg, 0.011 mmol)을 사용하여 화합물 30에 대해 기재된 바와 동일한 방법을 사용하여 합성하였다. 정제 후에, Boc-보호된 중간체를 수득하였다, MS m/z 1125.5 (M+1). 체류 시간 1.34분. 이렇게 수득된 생성물 (10 mg, 0.0089 mmol)을 DCM (4.0 mL) 중 TFA (2.0 mL)로 처리하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 실온에서 교반하고 LCMS 분석은 Boc가 완전히 제거되었음을 나타냈다. 용액을 농축하여 화합물 35를 TFA 염으로서 수득하였다, MS m/z 1025.5 (M+1). 체류 시간 1.06분.
실시예 74: (2S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-3-메틸-3-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복스아미드 (36)
Figure pct00232
MeOH (2.0 mL) 중 (2S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-3-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복스아미드 TFA 염 (35) (7.9 mg, 0.0062 mmol) 및 파라포름알데히드 (2.7 mg, 0.089 mmol)에 NaCNBH3 (11 mg, 0.018 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 50℃에서 교반하였다. 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 20-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 농축하여 화합물 36을 TFA 염으로서 수득하였다, MS m/z 1039.5 (M+1). 체류 시간 1.07분.
실시예 75: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사옥타트리아콘탄-38-오일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (37)
Figure pct00233
DMF (1.5 mL) 중 2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35-도데카옥사옥타트리아콘탄-38-오산 (17.0 mg, 0.029 mmol)에 DIEA (7.5 mg, 0.058 mmol) 및 HATU (9.2 mg, 0.024 mmol)를 첨가하였다. 10분 후에, 화합물 30 (10.0 mg, 0.0096 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 화합물 37을 수득하였다, MS m/z 805.6 ((M+2)/2). 체류 시간 1.25분.
실시예 76: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-오일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (38)
Figure pct00234
화합물 38을 화합물 30 (10 mg, 0.0096 mmol) 및 2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사헥사코산-26-오산 (11.91 mg, 0.029 mmol)을 사용하여 화합물 37에 대해 기재된 바와 동일한 방법에 의해 합성하였다, MS m/z 717.5 ((M+2)/2). 체류 시간 1.25분.
실시예 77: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-(1-히드록시-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (39)
Figure pct00235
화합물 39를 DMF (1.5 mL) 중 30 (10 mg, 0.0096 mmol), 1-히드록시-3,6,9,12-테트라옥사펜타데칸-15-오산 (7.7 mg, 0.029 mmol), DIEA (7.46 mg, 0.058 mmol) 및 HBTU (9.12 mg, 0.024 mmol)를 사용하여 화합물 37에 대해 기재된 바와 동일한 방법에 의해 합성하였다, MS m/z 1287.6 (M+1)). 체류 시간 1.18분.
실시예 78: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((4-((2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)메틸)시클로헥산카르복스아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (40)
Figure pct00236
단계 1: (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판산 (964 mg, 3.63 mmol)을 DMF (10 mL)에 용해시켰다. DIEA (1.27 g, 9.84 mmol) 및 HATU (1.13 g, 3.03 mmol)를 첨가하였다. 10분 후에, 벤질 4-아미노벤질카르바메이트 (388 mg, 1.51 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였고 이때 LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. EtOAc (60 mL)를 반응에 첨가하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하였다. 합해진 유기 상을 H2O (5 x 10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 농축하여 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 DCM (5.0 mL)에 용해시키고 TFA (5.0 mL)로 처리하였다. 실온에서 1시간 후에, LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 DCM 중 2 M 암모니아와 0-8% MeOH를 사용하여 ISCO에 의해 정제하여 (S)-벤질 4-(2-아미노-3-페닐프로판아미도)벤질카르바메이트를 백색 고체로서 수득하였다, MS m/z 404.2(M+1)). 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.44-7.23 (m, 14H), 5.10 (s, 2H), 4.26 (s, 2H), 4.12 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 3.28-3.22 (m, 1H), 3.15-3.10 (m, 1H).
단계 2: (S)-벤질 4-(2-아미노-3-페닐프로판아미도)벤질카르바메이트 (201.7 mg, 0.50 mmol) 및 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 (429 mg, 0.75 mmol)을 DMF (6 mL)에 용해시켰다. 그 다음에 DIEA (323 mg, 2.50 mmol) 및 HATU (342 mg, 0.90 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 역상 HPLC에 의해 정제하여 벤질 4-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판아미도)벤질카르바메이트를 수득하였다, MS m/z 957.5 (M+1), 체류 시간 1.54분. Boc 보호된 생성물 (393 mg, 0.41 mmol)을 메탄올성 HCl (3 M, 15 mL)에 용해시켰다. 용매를 서서히 감압 하에 증발시켰다. LCMS 분석은 탈보호 반응의 완료를 나타냈다. 아세토니트릴 및 물을 첨가하고 생성된 용액을 동결 건조시켜 벤질 4-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판아미도)벤질카르바메이트를 HCl 염으로서 수득하였다, MS m/z 857.5 (M+1). 체류 시간 1.16분.
단계 3: (1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (190 mg, 0.788 mmol)을 DMF (5.0 mL)에 용해시켰다. DIEA (254 mg, 1.97 mmol) 및 HATU (270 mg, 1.71 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반하고, 벤질 4-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판아미도)벤질카르바메이트 (336 mg, 0.394 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였고 이때 LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 반응 혼합물을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((((벤질옥시)카르보닐)아미노)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다, MS m/z 1080.5 (M+1), 체류 시간 1.56분.
Boc 보호된 생성물 (88 mg, 0.081 mmol)을 메탄올성 HCl (3 M, 6.0 mL)에 용해시켰다. 용매를 서서히 감압 하에 증발시켰다. LCMS 분석은 탈보호 반응의 완료를 나타냈다. 아세토니트릴 및 물을 첨가하고 생성된 용액을 동결 건조시켜 벤질 4-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판아미도)벤질카르바메이트를 HCl 염으로서 수득하였다, MS m/z 980.5 (M+1).
단계 4: 벤질 4-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판아미도)벤질카르바메이트 (65.8 mg, 0.067 mmol)를 MeOH (4 mL)에 용해시켰다. 파라포름알데히드 (22.8 mg, 0.76 mmol) 및 아세트산 (0.023 mL, 0.40 mmol), 이어서 시아노수소화붕소나트륨 (47.7 mg, 0.76 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반하면서 50℃로 가열하였다. LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 벤질 4-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판아미도)벤질카르바메이트를 수득하였다, MS m/z 994.5 (M+1). 체류 시간 1.21분.
단계 5: 벤질 4-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판아미도)벤질카르바메이트 (48 mg, 0.048 mmol)를 MeOH (5.0 mL)에 용해시키고, N2 하에 플러싱하였다. Pd/C (20.5 mg, 10% Pd)를 첨가하였다. 반응 용기를 비우고 H2로 다시 채웠다. 이 조작을 5회 반복하여 반응 분위기를 H2로 대체하였다. 반응 혼합물을 H2 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 반응 혼합물을 여과하고, 농축하여 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-(아미노메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드를 수득하였다, MS m/z 860.5 (M+1). 체류 시간 0.86분. 이렇게 수득된 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 6: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-(아미노메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (12 mg, 0.014 mmol) 및 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 4-((2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)메틸)시클로헥산카르복실레이트 (5.6 mg, 0.017 mmol)를 DMF (1 mL)에 용해시키고, DIEA (10.8 mg, 0.084 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 화합물 40을 수득하였다, MS m/z 1079.5 (M+1). 체류 시간 1.12분.
실시예 79: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((3-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)에톡시)프로판아미도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (41)
Figure pct00237
DMF (1.5 ml) 중 3-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)에톡시)프로판산 (7.2 mg, 0.028 mmol)에 DIEA (10.8 mg, 0.084 mmol) 및 HATU (8.0 mg, 0.021 mmol)를 첨가하였다. 10분 후에, (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-(아미노메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (12 mg, 0.014 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 화합물 41을 수득하였다, MS m/z 1099.5 (M+1). 체류 시간 1.07분.
실시예 80: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (42)
Figure pct00238
포화 수성 NaHCO3 (3.0 mL)에 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-(아미노메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (20.0 mg, 0.023 mmol)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 0℃로 냉각하고, 메틸 2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-카르복실레이트 (14.4 mg, 0.093 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1.5시간 동안 0℃에서 교반하였다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 화합물 42를 수득하였다, MS m/z 940.5 (M+1). 체류 시간 1.13분.
실시예 81: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((3-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥실)우레이도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (43)
Figure pct00239
단계 1: (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((((벤질옥시)카르보닐)아미노)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (211 mg, 0.195 mmol)를 MeOH (10 mL)에 용해시켰다. Pd/C (41.6 mg, 10% Pd)를 첨가하였다. 반응 용기를 비우고 H2로 다시 채웠다. 이 조작을 5회 반복하여 반응 분위기를 H2로 대체하였다. 반응 혼합물을 H2 하에 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 반응 혼합물을 여과하고 농축하여 (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-(아미노메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (MS m/z 946.6 (M+1))를 수득하고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 2: (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-(아미노메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (30 mg, 0.032 mmol)를 DMF (3 ml) 및 THF (3 ml)에 용해시켰다. 그 다음에 DIEA (20.5 mg, 0.16 mmol) 및 4-니트로페닐 카르보노클로리데이트 (12.8 mg, 0.063 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LC/MS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)아미노)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다, MS m/z 1111.5 (M+1). 체류 시간 1.54분.
단계 3: DMF (1.0 mL) 및 THF (1.0 mL)에 용해된 (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-(((S)-1-((4-((((4-니트로페녹시)카르보닐)아미노)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트 (13.7 mg, 0.012 mmol)에 1-(6-아미노헥실)-1H-피롤-2,5-디온 (14.5 mg, 0.074 mmol) 및 DIEA (31.9 mg, 0.25 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (1R,3S,4S)-tert-부틸 3-(((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((3-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥실)우레이도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)카르바모일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-2-카르복실레이트를 수득하였다, MS m/z 1168.6 (M+1). 이렇게 수득된 Boc 보호된 생성물을 메탄올성 HCl (3 M, 2.0 mL)에 용해시켰다. 용매를 감압 하에 서서히 제거하였다. LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 잔류물을 아세토니트릴 및 물에 용해시키고 동결 건조시켜 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((3-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥실)우레이도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드를 HCl 염으로서 수득하였다, MS m/z 1068.6 (M+1). 체류 시간 1.09분
단계 4: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((3-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥실)우레이도)메틸)페닐)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (8.4 mg, 0.0079 mmol)를 MeOH (1.5 mL)에 용해시켰다. 파라포름알데히드 (2.7 mg, 0.089 mmol) 및 아세트산 (0.0027 mL, 0.046 mmol), 이어서 시아노수소화붕소나트륨 (5.6 mg, 0.089 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 교반하면서 1시간 동안 50℃로 가열하였다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 화합물 43을 수득하였다, MS m/z 1082.6 (M+1). 체류 시간 1.11분.
실시예 82: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-((4-((6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)메틸)페닐)(메틸)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (44)
Figure pct00240
단계 1: 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산산 (349 mg, 1.65 mmol)을 DMF (10 mL)에 용해시켰다. 그 다음에 DIEA (820 mg, 6.35 mmol) 및 HATU (579 mg, 1.52 mmol)를 첨가하고 반응 혼합물을 10분 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음에 tert-부틸 (4-(아미노메틸)페닐)(메틸)카르바메이트 (300 mg, 1.27 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. EtOAc (30 mL)를 반응에 첨가하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하였다. 합해진 유기 상을 H2O (5 x 10 mL)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축하고 ISCO (EtOAc/헥산 0-80%)에 의해 정제하였다. 목적 생성물 (MS m/z 374.2 (M+1-tBu), 체류 시간 1.156분)을 황색 오일로서 수득하였다. 생성물을 DCM (3 mL)에 용해시키고 TFA (1 mL)로 처리하였다. 실온에서 1시간 후에, 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 아세토니트릴 및 H2O에 용해시키고 동결 건조시켜 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N-(4-(메틸아미노)벤질)헥산아미드를 황색 고체로서 수득하였다 (MS m/z 330.2 (M+1), 체류 시간 0.61분).
단계 2: DMF (5 mL)에 용해된 (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판산 (219 mg, 0.827 mmol)에 DIEA (356 mg, 2.76 mmol) 및 HATU (288 mg, 0.758 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 10분 동안 교반한 후에, 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N-(4-(메틸아미노)벤질)헥산아미드 (227 mg, 0.689 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. EtOAc (20 mL) 를 반응에 첨가하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 합해진 유기 상을 H2O (5 x 10 mL)로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축하고 ISCO (EtOAc/헥산, 0-75%)에 의해 정제하여, 목적 생성물을 수득하였다. MS m/z 577.3 (M+1). 체류 시간 1.19분. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.00 (s, 1H), 8.24 (t, J = 6.0 Hz, 1h), 7.52 (d, j = 8.4 Hz, 2H), 7.32-7.09 (m, 7H), 7.01 (s, 2H), 4.31 (m, 1H), 4.19 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.38 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.17 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 3.00 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 2.10 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.54-1.44 (m, 4H), 1.31 (s, 9H), 1.22-1.15 (m, 4H). 생성물을 MeOH (5 mL) 중 3M HCl에 용해시켰다. 용매를 감압 하에 서서히 제거하였다. 잔류물을 아세토니트릴 및 H2O에 용해시키고 동결 건조시켜 (S)-N-(4-(2-아미노-N-메틸-3-페닐프로판아미도)벤질)-6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미드를 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 477.2 (M+1). 체류 시간 0.83분.
단계 3: DMF (4 mL)에 용해된 Boc-Val-Dil-Dap-OH (347 mg, 0.607 mmol)에 DIEA (261 mg, 2.02 mmol) 및 HATU (282 mg, 0.49 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 15분 동안 교반한 후에 (S)-N-(4-(2-아미노-N-메틸-3-페닐프로판아미도)벤질)-6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미드 (193 mg, 0.404 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 역상 HPLC에 의해 정제하여 목적 생성물, N-(4-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-N-메틸-3-페닐프로판아미도)벤질)-6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미드를 수득하였다. MS m/z 1030.5 (M+1). 체류 시간 1.430분. 생성물을 3M 메탄올성 HCl (3 mL)에 용해시켰다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 아세토니트릴 및 H2O에 용해시키고 동결 건조시켜 목적 생성물 N-(4-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-아미노-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-N-메틸-3-페닐프로판아미도)벤질)-6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미드를 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 930.5 (M+1). 체류 시간 1.07분.
단계 4-5: 화합물 30 및 화합물 31의 제조에 대해 기재된 바와 동일한 절차에 따라, 화합물 44를 수득하였다. MS m/z 1067.6 (M+1). 체류 시간 1.10분.
실시예 83: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-N-1-(3-아지도프로필술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (45)
Figure pct00241
단계 1: 물 (25 mL) 중 소듐 아지드 (3.50 g, 53.8 mmol)의 교반 용액에 아세톤 (25 mL) 중 1,3-프로판 술폰 (6.10 g, 50.0 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 24시간 동안 실온에서 교반하고 농축 건조시켰다. 생성된 고체를 디에틸 에테르 (100 mL)에 현탁시키고 1시간 동안 환류 하에 교반하였다. 현탁액을 실온으로 냉각하고 고체를 여과에 의해 수집하고, 아세톤 및 디에틸 에테르로 세척하고, 진공 하에 건조시켜, 3-아지도-1-프로판술폰산을 수득하였다. MS m/z 188.1(M+1). 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 3.47 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.07-2.00 (m, 2H).
단계 2: 3-아지도-1-프로판술폰산 (2.07 g, 13.0 mmol)을 톨루엔에 현탁시켰다. PCl5 (2.61 g, 13.0 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 3시간 동안 환류 하에 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각하고, 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 여과 케이크를 DCM으로 세척하였다. 합해진 여액을 농축하여 3-아지도프로판-1-술포닐 클로라이드를 진황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.
단계 3: 0℃에서 냉각된 NH4OH (5 mL)에 3-아지도프로판-1-술포닐 클로라이드 (1.75 g, 9.53 mmol)를 첨가하였다. 10분 후에, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고 3시간 동안 동일한 온도에서 교반하였다. 오일상 혼합물은 투명하게 되었다. 반응 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축하였다. 잔존 용매를 18시간 동안 고 진공 하에 추가로 제거하여 3-아지도프로판-1-술폰아미드를 수거하였다. MS m/z 187.1 (M+1). 1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.83 (s, 2H), 3.51 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.23 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.17-2.10 (m, 2H).
단계 4: (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판산 (100 mg, 0.38 mmol)을 DMF (4 mL)에 용해시킨 후에, DIEA (0.395 mL, 2.26 mmol) 및 HATU (358 mg, 0.940 mmol)를 첨가하였다. 15분 후에, 3-아지도프로판-1-술폰아미드 (186 mg, 1.13 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였고 이때 LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (S)-tert-부틸 (1-(3-아지도프로필술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)카르바메이트를 수득하였다. MS m/z 312.1 (M+1-Boc). 체류 시간 1.15분. 이렇게 수득된 생성물 (72.4 mg. 0.176 mmol)을 3M 메탄올성 HCl (5 mL)에 용해시켰다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 아세토니트릴 및 H2O에 용해시키고 동결 건조시켜 (S)-2-아미노-N-((3-아지도프로필)술포닐)-3-페닐프로판아미드를 분홍색을 띤 황색을 띤 고체로서 수득하였다. MS m/z 312.1 (M+1). 1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.42-7.31 (m, 5H), 4.16-4.13 (m, 1H), 3.51-3.47 (m, 4H), 3.32-3.26 (m, 1H), 3.13-3.08 (m, 1H), 2.00-1.94 (m, 2H).
단계 5: DMF (4 mL)에 용해된 Boc-Val-Dil-Dap-OH (195 mg, 0.34 mmol)에 DIEA (132 mg, 1.02 mmol) 및 HATU (108 mg, 0.28 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반한 후에 (S)-2-아미노-N-((3-아지도프로필)술포닐)-3-페닐프로판아미드 (59.2 mg, 0.17 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 추가의 2시간 동안 교반하였다. 조 물질을 역상 HPLC에 의해 정제하여 목적 생성물 (95 mg, 65% 수율, MS m/z 865.4 (M+1), 체류 시간 1.43분)을 수득하였다. 생성물을 MeOH (3 mL) 중 3M HCl에 용해시켰다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 그 다음에 아세토니트릴 및 H2O를 잔류물에 첨가하고 용액을 동결 건조시켜 목적 생성물, (S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-N-1-(3-아지도프로필술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-2-아미노-3-메틸-1-옥소부탄을 수득하였다. MS m/z 765.4 (M+1). 체류 시간 1.04분.
단계 6: DMF (2.0 mL) 중 (1R,3S,4S)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복실산 (16.5 mg, 0.068 mmol)에 DIEA (17.6 mg, 0.137 mmol) 및 HATU (21.6 mg, 0.057 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 실온에서 교반한 후에 (S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-N-1-(3-아지도프로필술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-2-아미노-3-메틸-1-옥소부탄 (20 mg, TFA 염, 0.023 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였고 이때 LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% ACN-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-N-1-(3-아지도프로필술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-(tert-부톡시카르보닐)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드를 수득하였다. MS m/z 988.5 (M+1). 체류 시간 1.51분. 이렇게 수득된 생성물 (9.4 mg. 0.0095 mmol)을 메탄올성 HCl (3M, 2.0 mL)에 용해시켰다. 용매를 감압 하에 서서히 제거하였다. 잔류물을 아세토니트릴 및 H2O에 용해시키고 동결 건조시켜 화합물 45를 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 888.5 (M+1). 체류 시간 1.10분.
실시예 84: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-N-1-(3-아지도프로필술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (46)
Figure pct00242
(1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-N-1-(3-아지도프로필술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (45) (8.8 mg, 0.0099 mmol)를 MeOH (2.0 mL)에 용해시켰다. 파라포름알데히드 (10.1 mg, 0.337 mmol) 및 아세트산 (0.0102 mL), 이어서 시아노수소화붕소나트륨 (21.2 mg, 0.337 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하면서 50℃에서 가열하였다. 추가의 파라포름알데히드 (10.1 mg, 0.337 mmol), 아세트산 (0.0102 mL) 및 시아노수소화붕소나트륨 (21.2 mg, 0.337 mmol)을 첨가하였다. 50℃에서 1시간 후에, LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% ACN-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 화합물 46을 수득하였다. MS m/z 902.5 (M+1). 체류 시간 1.12분.
실시예 85: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-N-1-(3-(4-((2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)프로필술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (47)
Figure pct00243
DMF (2.0 mL) 및 H2O (0.5 mL) 중 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-N-1-(3-아지도프로필술폰아미도)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (46) (5.2 mg, 0.0058 mmol), 1-(프로프-2-인-1-일)-1H-피롤-2,5-디온 (1.56 mg, 0.012 mmol) 및 CuSO4 (0.7 mg, 0.004 mmol)의 용액을 L-아스코르브산 나트륨 염 (2.5 mg, 0.014 mmol)으로 처리하고 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 추가의 CuSO4 (0.7 mg, 0.004 mmol) 및 L-아스코르브산 나트륨 염 (2.5 mg, 0.014 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 추가의 2시간 후에, LCMS 분석은 반응의 완료를 나타냈다. 조 물질을 C18 칼럼을 사용하여 역상 HPLC에 의해 정제하고, 10-90% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 모으고 동결 건조시켜 화합물 47을 수득하였다. MS m/z 1037.4 (M+1). 체류 시간 1.00분.
실시예 86: 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥실 수소 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스포네이트 (48)
Figure pct00244
피리딘 (2 ml) 중 ((R)-1-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-2-페닐에틸)포스핀산 9 (10.2 mg, 0.011 mmol)에 1-(6-히드록시헥실)-1H-피롤-2,5-디온 (13.5 mg, 0.068 mmol) 및 이어서 피발로일 클로라이드 (40 mg, 0.332 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0.5시간 동안 실온에서 교반하고 포스핀산의 90%가 사라질 때까지 반응을 LCMS에 의해 모니터링하였다. 그 다음에 피리딘 중 5% H2O 중 새로이 제조된 I2 용액을 첨가하였다. 일단 산화 단계가 완료된 후, 피리딘을 고 진공에 의해 제거하였다. 조 물질을 아세토니트릴에 용해시키고 조 물질을 역상 HPLC, C18 칼럼에 의해 정제하고, 10-60% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유)로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 농축하여 화합물 48을 수득하였다. MS m/z 971.5 (M+1). 체류 시간 1.038분.
실시예 87: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-(3-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)페닐)-3-히드록시프로판-2-일)아미노)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소프로필)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (90)
Figure pct00245
DMF (0.5 ml) 중 EMCA (1.3 mg, 0.006 mmol)를 10분 동안 실온에서 DIEA (0.006 ml, 0.03 mmol) 및 HATU (2.3 mg, 0.006 mmol)로 처리한 다음에, DMF (0.5 ml) 중 화합물 (52) TFA 염 (6 mg, 0.006 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 16시간 동안 실온에서 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (10-45% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 (90)을 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 950.6 (M+H). 체류 시간 0.934분.
실시예 88: 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-5-우레이도펜탄아미도)벤질 (3-((S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-히드록시프로필)페닐)카르바메이트 (91)
Figure pct00246
피리딘 (0.25 ml)을 DMF (1 ml) 중 (52) TFA 염 (6 mg, 0.006 mmol), MC-Val-Cit-PAB-PNP (13 mg, 0.018 mmol), 이어서 HOAT (0.8 mg, 0.006 mmol) 및 DIEA (13 mg, 0.098 mmol)에 첨가하였다. 반응물을 48시간 동안 40℃에서 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (25-40% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 91)을 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 678.6 (M/2+H). 체류 시간 0.959분.
실시예 89: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-(N-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-술파모일프로판)-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (92)
Figure pct00247
EMCA (12.1 mg, 0.057 mmol)를 DMF (1 ml)에 용해시켰다. DIEA (0.0024 ml) 및 HATU (19.7 mg, 0.052 mmol)를 첨가하였다. 그 다음에 DMF (2 ml) 중 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-술파모일프로판-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 ((55), 26.4 mg, 0.029 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 그 다음에, 추가의 EMCA (12.1 mg, 0.057 mmol), DIEA (0.0024 ml) 및 HATU (19.7 mg, 0.052 mmol)를 첨가하였다. 2시간 후에, EMCA (12.1 mg, 0.057 mmol), DIEA (0.0024 ml) 및 HATU (19.7 mg, 0.052 mmol)를 다시 첨가하였다. 그 다음에, 반응물을 2시간 동안 50℃에서 가열하였다. 반응물을 냉각하고, 추가의 EMCA (12.1 mg, 0.057 mmol), DIEA (0.0024 ml) 및 HATU (19.7 mg, 0.052 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 ( 55)의 대략 20%가 생성물로 전환되었음을 나타냈다. 반응 혼합물을 정제용 HPLC (30-50% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-3-메톡시-1-((S)-2-((1R,2R)-1-메톡시-2-메틸-3-옥소-3-(((S)-1-페닐-3-(N-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥사노일)-술파모일프로판)-2-일)아미노)프로필)피롤리딘-1-일)-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (92)를 수득하였다. MS m/z 998.5 (M+1). 체류 시간 1.041분.
실시예 90: (1R,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((3R,4R,7S)-7-벤질-20-(4-((2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)-4-메틸-5,8-디옥소-2,12,15,18-테트라옥사-6,9-디아자이코산-3-일)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (93)
Figure pct00248
단계 1: DMF (4 ml) 중 (S)-2-((t-부톡시카르보닐)아미노)-3-페닐프로판산 (175 mg, 0.66 mmol)을 15분 동안 DIEA (0.48 ml, 2.75 mmol) 및 HATU (230 mg, 0.605 mmol)로 처리한 후에, 2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에탄아민 (120 mg, 0.55 mmol)으로 처리하였다. 반응물을 밤새 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (S)-t-부틸 (1-아지도-13-옥소-15-페닐-3,6,9-트리옥사-12-아자펜타데칸-14-일)카르바메이트를 수득하였다. MS m/z 466.3 (M+1). 체류 시간 1.170분.
단계 2: (S)-t-부틸 (1-아지도-13-옥소-15-페닐-3,6,9-트리옥사-12-아자펜타데칸-14-일)카르바메이트 (117 mg, 0.251 mmol)를 메탄올성 HCl (3M, 5 ml)에 용해시켰다. 용매를 증발에 의해 서서히 제거하여, Boc 기를 완전히 제거하였다. 잔존 용매를 밤새 감압 하에 추가로 제거하여 (S)-2-아미노-N-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-3-페닐프로판아미드를 HCl 염으로서 수득하였다. MS m/z 366.1 (M+1). 체류 시간 0.858분.
단계 3: DMF (1 ml) 중 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 (단계 2, 실시예 12, 8 mg, 0.01 mmol)을 15분 동안 DIEA (0.011 ml, 0.066 mmol) 및 HATU (4.63 mg, 0.012 mmol)로 처리한 후에, DMF (1 ml) 중 (S)-2-아미노-N-(2-(2-(2-(2-아지도에톡시)에톡시)에톡시)에틸)-3-페닐프로판아미드 (5.3 mg, 0.013 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 조 물질을 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (1R,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((3R,4R,7S)-20-아지도-7-벤질-4-메틸-5,8-디옥소-2,12,15,18-테트라옥사-6,9-디아자이코산-3-일)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드를 수득하였다. MS m/z 956.5 (M+1). 체류 시간 1.051분.
단계 4: t-BuOH (1 ml) 및 물 (1 ml) 중 단계 3에서 수득된 생성물 (6.2 mg, 0.0058 mmol) 및 1-(프로프-2-인-1-일)-1H-피롤-2,5-디온 (1.6 mg, 0.012 mmol)에 0.2 ml H2O 중 소듐 L-아스코르베이트 (1.1 mg, 0.0058 mmol)를 첨가하고 0.1 ml 물 중 CuSO4 (0.2 mg, 0.001 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반한 다음에, 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 93)을 수득하였다. MS m/z 1091.6(M+1). 체류 시간 0.980분.
실시예 91: (1R,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((3R,4R,7S)-7-벤질-17-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4-메틸-5,8-디옥소-2,12,15-트리옥사-6,9-디아자헵타데칸-3-일)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (94)
Figure pct00249
단계 1: t-부틸 (2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)카르바메이트 (250 mg, 1.0 mmol) 및 메틸 2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-카르복실레이트 (156 mg, 1.0 mmol)를 포화 수성 NaHCO3 (10 ml)에서 합하고 0℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 염산 (2 M)을 이용하여 pH 2로 산성화하고 EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 농축하였다. 조 물질을 0-4% MeOH/DCM을 사용하여 ISCO에 의해 정제하여 t-부틸 (2-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)에톡시)에틸)카르바메이트를 무색 오일로서 수득하였다. MS m/z 229.2(M+1-Boc). 체류 시간 0.963분. 1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 6.71 (s, 2H), 5.04 (bs, 1H), 3.74 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.64 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.61-3.59 (m, 2H), 3.56-3.54 (m, 2H), 3.50 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.31-3.26(m, 2H), 1.44 (s, 9H).
단계 2: DCM (2 ml) 중 t-부틸 (2-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)에톡시)에틸)카르바메이트 (184 mg, 0.56 mmol)를 30분 동안 0℃에서 및 이어서 2시간 동안 실온에서 TFA (0.4 ml)로 처리하였다. 반응 혼합물을 농축하여 1-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)-1H-피롤-2,5-를 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 229.2(M+1). 체류 시간 0.353분.
단계 3: DMF (1 ml) 중 Boc-L-Phe-OH (30 mg, 0.113 mmol)를 15분 동안 DIEA (88 mg) 및 HATU (43 mg, 0.113 mmol)로 활성화시키고, DMF (1 ml) 중 1-(2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)-1H-피롤-2,5-디온 TFA 염 (46.4 mg)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반한 다음에 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 (S)-t-부틸 (1-((2-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)에톡시)에틸)아미노)-1-옥소-3-페닐프로판-2-일)카르바메이트를 수득하였다. MS m/z 476.2(M+1). 체류 시간 1.091분. DCM (2 ml) 중 이 생성물 (31 mg, 0.065 mmol)을 30분 동안 0℃에서 및 이어서 2시간 동안 실온에서 TFA (0.2 ml)로 처리하엿다. 반응 혼합물을 농축하여 (S)-2-아미노-N-(2-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)에톡시)에틸)-3-페닐프로판아미드를 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 376.2(M+1). 체류 시간 0.649분.
단계 4: DMF (1 ml) 중 (2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-N,3-디메틸-2-((1R,3S,4S)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판산 TFA 염 (단계 2, 실시예 12) (7.2 mg, 0.010 mmol)에 DIEA (7.7 mg) 및 HATU (4.18 mg, 0.011 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 교반하고, DMF (1 ml) 중 (S)-2-아미노-N-(2-(2-(2-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)에톡시)에톡시)에틸)-3-페닐프로판아미드 TFA 염 (6.3 mg, 0.013 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하고 정제용 HPLC (20-70% 아세토니트릴-H2O (0.05% TFA 함유))에 의해 정제하여 화합물 ( 93)을 TFA 염으로서 수득하였다. MS m/z 966.5(M+1). 체류 시간 1.016분.
실시예 92: (1R,3S,4S)-N-((S)-1-(((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((3R,4R,7S)-7-벤질-14-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-4-메틸-5,8-디옥소-2,12-디옥사-6,9-디아자테트라데칸-3-일)피롤리딘-1-일)-3-메톡시-5-메틸-1-옥소헵탄-4-일)(메틸)아미노)-3-메틸-1-옥소부탄-2-일)-2-메틸-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미드 (95)
Figure pct00250
화합물 ( 95)를 t-부틸 (2-(2-(2-아미노에톡시)에톡시)에틸)카르바메이트 대신에 t-부틸 (2-(2-아미노에톡시)에틸)카르바메이트를 사용하여 화합물 ( 94)에 대해 기재된 방법에 의해 제조하였다. MS m/z 922.5 (M+1). 체류 시간 1.044분.
조효소 A 유사체에 대한 합성 절차
실시예 93: 조효소 A의 3-부텐-2-온 부가물 (49)
Figure pct00251
조효소 A 삼리튬 염 (259 mg, 시그마(Sigma), 검정 >93%)을 2.0 mL의 인산염 완충제와 EDTA (100 mM 인산염, 5 mM EDTA, pH 7.5)에 용해시켰다. 반응 혼합물에 3-부텐-2-온 (29.0 μL, 알드리치(Aldrich), 99%)을 첨가하고, 반응 혼합물을 75분 동안 20℃에서 방치하였다. 전체 반응 혼합물을 ISCO C18Aq 골드(Gold) 15.5 g 칼럼 상에 로딩하였고 이는 100% H2O로 미리 평형화되었다. 목적 생성물을 100% H2O에서 용리시켰다. 순수한 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고 동결 건조시켜, 화합물 49를 결정질 고체로서 수득하였다. MS (ESI+) m/z 838.2 (M+1). H-NMR (400MHz, D2O) δ 8.525 (s, 1H), 8.235 (s, 1H), 6.140 (d, 1H, J=7.2Hz), 4.746 (m, 1H), 4.546 (bs, 1H), 4.195 (bs, 1H), 3.979 (s, 1H), 3.786 (dd, 1H, J= 4.8, 9.6Hz), 3.510 (dd, 1H, J=4.8, 9.6Hz), 3.429 (t, 2H, J= 6.6Hz), 3.294S (t, 2H, J=6.6Hz), 2.812 (t, 2H, J=6.8Hz), 2.676 (t, 2H, J=6.8Hz), 2.604 (t, 2H, J=6.8Hz), 2.420 (t, 2H, J=6.6Hz), 2.168 (s, 3H), 0.842 (s, 3H), 0.711 (s, 3H) (주: D2O와 겹치는 일부 피크는 보고되지 않음).
실시예 94: 케톤-조효소 A 유사체 ( CoA -(i-10))
Figure pct00252
화합물 (i- 10)을, 5 mM의 화합물 (i-10)을 20 MgCl2를 함유하는 50 mM HEPES 완충제 (pH 8.0) 중에서 37℃에서 약 14시간 동안 10 μM 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) CoAA, 25 μM 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) CoAD, 및 20 μM 에스케리키아 콜라이 CoAE의 존재하에 25 mM의 ATP와 반응시킴으로써 케톤-관능화 CoA 유사체 CoA -(i- 10)로 전환시켰다. 가용성 효소를 10 kDa 컷오프(cutoff)로 아미콘 울트라(Amicon Ultra) 원심분리 필터를 통해 한외여과에 의해 분리하였다. 화합물 (i-10)의 CoA 유사체 CoA -(i- 10)로의 효소적 전환은 항-Her2-HC-ins388-ybbR-(i-10)-22 ADC의 형성에 의해 확인되었다 (표 9 및 표 10 참조).
실시예 95: 아지드-조효소 A 유사체 ( CoA -(i-11))
Figure pct00253
화합물 (i- 11)을, 5 mM의 화합물 (i-11)을 20 MgCl2를 함유하는 50 mM HEPES 완충제 (pH 8.0) 중에서 37℃에서 약 14시간 동안 10 μM 스타필로코커스 아우레우스 CoAA, 25 μM 에스케리키아 콜라이 CoAD, 및 20 μM 에스케리키아 콜라이 CoAE의 존재하에 25 mM의 ATP와 반응시킴으로써 아지드-관능화 CoA 유사체 CoA -(i- 11)로 전환시켰다. 가용성 효소를 10 kDa 컷오프로 아미콘 울트라 원심분리 필터를 통해 한외여과에 의해 분리하였다. 화합물 (i- 11)의 CoA 유사체 CoA -(i- 11)로의 효소적 전환은 적은 분획의 한외여과액의 5배 몰 과량의 화합물 ( 75)와의 반응 후에 LC-MS 분석에 의해 확인되었다. 구리-프리(copper-free) 클릭 화학(click chemistry) 반응을 50% (v/v) DMSO/H2O에서 23℃에서 3시간 동안 수행하고, 반응 혼합물을 0.9 mL/분의 유량으로 0.05% TFA를 함유하는 물 중 10 내지 100% 아세토니트릴로부터 1.35분-구배 용리를 사용하여 역상 액쿼티 UPLC HSS T3 칼럼 (100 Å, 2.1 mm x 50 mm, 워터스) 상에서 분리하였다. 질량 스펙트럼 분석은 목적 부가물의 존재를 밝혀냈고 그로 인해 모든 3개의 CoA 생합성 효소에 의해 화합물 (i-11)의 CoA 유사체 CoA -(i- 11)로의 전환을 확인해 주었다. MS m/z 904.6 ((M+2)/2). 체류 시간 0.94분.
실시예 96: 케톤-조효소 A 유사체 ( CoA -(i-12))
Figure pct00254
화합물 (i- 12)를, 5 mM의 화합물 (i- 12)를 20 MgCl2를 함유하는 50 mM HEPES 완충제 (pH 8.0) 중에서 37℃에서 약 16시간 동안 10 μM 스타필로코커스 아우레우스 CoAA, 25 μM 에스케리키아 콜라이 CoAD, 및 20 μM 에스케리키아 콜라이 CoAE의 존재하에 25 mM의 ATP와 반응시킴으로써 케톤-관능화 CoA 유사체 CoA -(i- 12)로 전환시켰다. 2분 동안 20817 x g으로 반응 혼합물의 원심분리 후에, 가용성 효소를 10 kDa 컷오프로 아미콘 울트라 원심분리 필터를 통해 한외여과에 의해 분리하였다 (15분; 14000 x g). 화합물 (i-12)의 CoA 유사체 CoA -(i- 12)로의 효소적 전환은 항-Her2-HC-ins388-ybbR-(i-12)-22 ADC의 형성에 의해 확인되었다 (표 10 참조).
실시예 97: 케톤-조효소 A 유사체 ( CoA -(i-13))
Figure pct00255
화합물 (i- 13)을, 10 mM의 화합물 (i- 13)을 20 mM MgCl2를 함유하는 50 mM HEPES 완충제 (pH 8.0) 중에서 37℃에서 약 48시간 동안 10 μM 스타필로코커스 아우레우스 CoAA, 25 μM 에스케리키아 콜라이 CoAD, 및 20 μM 에스케리키아 콜라이 CoAE의 존재하에 25 mM의 ATP와 반응시킴으로써 케톤-관능화 CoA 유사체 CoA -(i-13)로 전환시켰다. 2분 동안 20817 x g으로 반응 혼합물의 원심분리 후에, 가용성 효소를 10 kDa 컷오프로 아미콘 울트라 원심분리 필터를 통해 한외여과에 의해 분리하였다 (15분; 14000 x g).
비교용 펩티드에 대한 합성 절차
(S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)-N-메틸헥산아미도)-3-메틸부탄아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (MC- MMAF)의 합성
Figure pct00256
MMAF-OMe (135 mg, 콘코르티스 바이오시스템즈(Concortis Biosystems))를 CH3CN (10 ml)에 용해시켰다. 생성된 투명한 용액에 5 mL 물, 이어서 0.375 mL의 1N 수성 수산화나트륨 (인증됨, 피셔 사이언티픽(Fisher Scientific))을 첨가하였다. 반응 혼합물을 18시간 동안 21℃에서 자기 교반하였고, 이때 LCMS 분석은 완전한 반응을 나타냈다. 반응 혼합물을 냉동 및 동결 건조시켜, MMAF 나트륨 염을 수득하였다. LCMS 체류 시간 0.911분. MS (ESI+) m/z 732.5 (M+1). 이전 반응에서 이렇게 수득된 MMAF 나트륨 염을 10 mL DMSO에 용해시켰다. 별도의 반응 용기에서, 6-(2,5-디옥소-2,5-디히드로-1H-피롤-1-일)헥산산 (95 mg)을 25분 동안 21℃에서 3.0 mL DMSO 중 HATU (165 mg) 및 DIEA (0.126 mL)로 처리하였다. 활성화 에스테르의 전체 반응 혼합물을 MMAF 나트륨 염의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 3시간 동안 동일한 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 40 mL의 EtOAc와 20 mL의 5% 수성 시트르산에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 20 mL의 EtOAc로 추출하였다. 합해진 유기 층을 로 세척하고 10 mL 포화 수성 NaCl로 세척하고, 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 ISCO C18골드 15.5 g 칼럼을 사용하여 ISCO 콤비플래시 기기 상에서 정제하였다. 목적 물질을 H2O 중 50% CH3CN으로 용리시켰다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 합하고 동결 건조시켜, 화합물을 백색 고체로서 수득하였다. LCMS 체류 시간 1.392분. MS (ESI+) m/z 925.6 (M+1).
실시예 98: 페이로드의 시험관내 세포 사멸 검정
시험관내 화학식 I의 세포독성 펩티드의 세포 사멸 효능의 평가를 위해, 세포 증식 검정을 8개의 세포주, 즉 MDA-MB231 클론 16, 클론 40, JimT1, HCC1954, H526, KU812, CMK11-5 세포 및 Jurkat 세포를 이용하여 동시에 수행하였다. 게다가, 시험관내, 세포 증식 검정을 3개의 다른 세포주, 즉 A375, SKBR3 및 NCI-N87을 사용하여 수행하였다. 모든 세포주는 실시예 106에서 보다 상세히 기재하였고 또한 본 발명의 면역접합체의 시험관내 효능을 평가하기 위해 사용하였다. 세포 증식 검정은 세포를 다양한 농도의 ADC와 함께 인큐베이션한 지 5일 후에 셀-타이터-글로(Cell-Titer-Glo)™ (프로메가(Promega))를 이용하여 수행하였다 (Riss et al., (2004) Assay Drug Dev Technol. 2:51-62). 일부 연구에서는, 세포 기반 검정은 고속 대량 처리이고 자동 시스템 상에서 수행한다 (Melnick et al., (2006) Proc Natl Acad Sci U S A. 103:3153-3158). 화학식 I의 세포독성 펩티드의 특정 예에 대해 수득된 시험관내 세포 사멸 효능을 표 2a 및 표 2b에 제공하였다.
<표 2a>
화학식 I의 특정 세포독성 펩티드의 시험관내 세포 사멸 (IC 50 (nM))
Figure pct00257
<표 2b>
화학식 I의 특정 세포독성 펩티드의 시험관내 세포 사멸 (IC 50 (nM))
Figure pct00258
n.d., 측정되지 않음
항원-결합 모이어티
화학식 II 또는 III에서 항원-결합 모이어티는 표적 세포 유형 상에서 발견되는 세포-표면 마커에 선택적으로 결합하는 임의의 모이어티일 수 있다. 일부 측면에서, Ab는 암 세포의 표면, 예를 들어, 종양-관련 항원 상에서 주로 또는 우선적으로 발견되는 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편 (예를 들어 항체의 항원 결합 단편)이다. 일부 측면에서, Ab는 세포 표면 수용체 단백질 또는 다른 세포 표면 분자, 세포 생존 조절 인자, 세포 증식 조절 인자, 조직 발달 또는 분화 (예를 들어, 조직 발달 또는 분화에 기능적으로 기여하는 것으로 공지되거나 의심되는)와 관련된 분자, 림포카인, 시토카인, 세포 주기 조절에 관여되는 분자, 혈관형성에 관여되는 분자 또는 혈관신생 (예를 들어 혈관신생에 기능적으로 기여하는 것으로 공지되거나 의심되는)과 관련된 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, 항원 결합 단편)이다. 종양-관련 항원은 클러스터 분화 인자 (즉, CD 단백질)일 수 있다. 본 발명의 일부 측면에서, 본 발명의 항원 결합 모이어티는 한 항원에 특이적으로 결합한다. 본 발명의 일부 측면에서, 본 발명의 항원 결합 모이어티는 본원에 기재된 2개 이상의 항원에 특이적으로 결합하며, 예를 들어, 본 발명의 항원 결합 모이어티는 그의 이중특이적 또는 다중특이적 항체 또는 항원 결합 단편이다.
예시적인 항체 또는 항원 결합 단편은 항-에스트로겐 수용체 항체, 항-프로게스테론 수용체 항체, 항-p53 항체, 항-HER-2 항체, 항-EGFR 항체, 항-카텝신 D 항체, 항-Bcl-2 항체, 항-E-카데린 항체, 항-CA125 항체, 항-CA15-3 항체, 항-CA19-9 항체, 항-c-erbB-2 항체, 항-P-당단백질 항체, 항-CEA 항체, 항-망막모세포종 단백질 항체, 항-ras 종양단백질(oncoprotein) 항체, 항-루이스(Lewis) X 항체, 항-Ki-67 항체, 항-PCNA 항체, 항-CD3 항체, 항-CD4 항체, 항-CD5 항체, 항-CD7 항체, 항-CD8 항체, 항-CD9/p24 항체, 항-CD1-항체, 항-CD11c 항체, 항-CD13 항체, 항-CD14 항체, 항-CD15 항체, 항-CD19 항체, 항-CD20 항체, 항-CD22 항체, 항-CD23 항체, 항-CD30 항체, 항-CD31 항체, 항-CD33 항체, 항-CD34 항체, 항-CD35 항체, 항-CD38 항체, 항-CD39 항체, 항-CD41 항체, 항-LCA/CD45 항체, 항-CD45RO 항체, 항-CD45RA 항체, 항-CD71 항체, 항-CD95/Fas 항체, 항-CD99 항체, 항-CD100 항체, 항-S-100 항체, 항-CD106 항체, 항-유비퀴틴 항체, 항-c-myc 항체, 항-시토케라틴 항체, 항-람다 경쇄 항체, 항-멜라노솜 항체, 항-전립선 특이적 항원 항체, 항-tau 항원 항체, 항-피브린 항체, 항-케라틴 항체, 및 항-Tn-항원 항체를 포함하나 그에 제한되지는 않는다.
한 실시양태에서, 화학식 II 또는 III의 항체-약물 접합체 (ADC)의 항원 결합 모이어티는 ErbB 유전자에 의해 코팅되는 수용체에 특이적으로 결합한다. 항원 결합 모이어티는 EGFR, HER2, HER3 및 HER4로부터 선택된 ErbB 수용체에 특이적으로 결합할 수 있다. 항원 결합 모이어티는 HER2 수용체의 세포외 도메인 (ECD)에 특이적으로 결합하고 HER2 수용체를 과발현하는 종양 세포의 성장을 억제하는 항체일 수 있다. 항체는 모노클로날 항체, 예를 들어 뮤린 모노클로날 항체, 키메라 항체, 또는 인간화 항체일 수 있다. 인간화 항체는 huMAb4D5-1, huMAb4D5-2, huMAb4D5-3, huMAb4D5-4, huMAb4D5-5, huMAb4D5-6, huMAb4D5-7 또는 huMAb4D5-8 (트라스투주맙)일 수 있다. 항체는 항체 단편, 예를 들어 Fab 단편일 수 있다.
화학식 II 또는 III에서의 항원-결합 모이어티는 종양-관련 항원 및 세포 표면 수용체에 대한 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, 항원 결합 단편)을 포함하나, 그에 제한되지는 않는다. 이러한 종양-관련 항원은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 관련 기술분야에 널리 공지되어 있는 방법 및 정보를 사용하여 항체를 발생시키는데 사용하기 위해 제조될 수 있다. 암 진단 및 치료를 위한 효과적인 세포 표적을 발견하려는 시도로, 연구자들은 하나 이상의 정상 비-암성 세포(들) 상에서와 비교하여 암 세포의 하나 이상의 특정의 유형(들)의 암 세포의 표면 상에서 특이적으로 발현되는 막관통 또는 달리 종양-관련 폴리펩티드를 동정하고자 하였다. 자주, 이러한 종양-관련 폴리펩티드는 비-암성 세포의 표면 상에서와 비교하여 암 세포의 표면 상에서 더 풍부하게 발현된다. 이러한 종양-관련 세포 표면 항원 폴리펩티드의 동정은 항체-기반 요법을 통해 파괴를 위한 암 세포를 특이적으로 표적으로 하는 능력을 초래하였다.
본 발명의 면역접합체에 유용한 항체 및 항체 단편 (예를 들어, 항원 결합 단편)은, 변형 또는 조작된 항체, 예컨대 시스테인 잔기 (Junutula JR, Raab H, Clark S, Bhakta S, Leipold DD, Weir S, Chen Y, Simpson M, Tsai SP, Dennis MS, Lu Y et al.: Nat Biotechnol 2008, 26:925-932), 또는 Pcl, 피롤리신, 펩티드 태그 (예컨대 S6, A1 및 ybbR 태그)를 포함한 다른 반응성 아미노산, 및 비-천연 아미노산이, 고유 서열의 하나 이상의 아미노산 대신에, 도입되도록 변형되어 화학식 I 또는 그의 하위 화학식의 세포독성 펩티드에의 접합을 위한 항체 또는 항원 결합 단편 상의 반응성 부위를 제공하는 항체를 포함한다. 예를 들어, 항체 또는 항체 단편은 변형되어, 약물에의 접합을 위한 부위로서 Pcl 또는 피롤리신 (W. Ou et al. (2011) PNAS 108 (26), 10437-10442) 또는 비천연 아미노산 (문헌 [J.Y. Axup, K.M. Bajjuri, M. Ritland, B.M. Hutchins, C.H. Kim, S.A. Kazane, R. Halder, J.S. Forsyth, A.F. Santidrian, K. Stafin, Y. Lu et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 109 (2012), pp. 16101-16106]; 검토용으로, 문헌 [C.C. Liu and P.G. Schultz (2010) Annu Rev Biochem 79, 413-444]; [C.H. Kim, J.Y. Axup, P.G. Schultz (2013) Curr Opin Chem Biol. 17, 412-419] 참조)를 혼입할 수 있다. 유사하게, 효소 접합 방법을 위한 펩티드 태그를 항체에 도입할 수 있다 (Strop P. et al. Chem Biol. 2013, 20(2):161-7; Rabuka D., Curr Opin Chem Biol. 2010 Dec;14(6):790-6; Rabuka D,et al., Nat Protoc. 2012, 7(6):1052-67). 한 다른 예는 조효소 A 유사체의 접합을 위한 4'-포스포판테테이닐 트랜스퍼라제 (PPTase)의 사용이다 (WO2013184514). 페이로드 또는 링커-페이로드 조합물과 이러한 변형 또는 조작된 항체를 접합시키는 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다.
본 발명에서 유용한 항원-결합 모이어티 (예를 들어, 항체 및 항원 결합 단편)는 또한 다른 변형을 가질 수 있거나, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 태그, 알부민, 및 기타 융합 폴리펩티드를 포함하나 그에 제한되지는 않는 다른 모이어티에 접합될 수 있다.
본원에서의 실시예에서 사용된 항체는 표 3에 기재된 중쇄 및 경쇄 서열을 갖는다. 이들 항체를 조작하여 본 발명의 세포독성 펩티드와 부위-특이적 접합을 위한 시스테인 잔기 또는 PPTase 효소 태그를 함유하도록 하였다. 본원에서의 실시예는 이들 조작된 항체가 화학식 II 또는 III의 면역접합체에서 사용하기에 적합한 항체임을 나타낸다. 게다가, 비-조작된 항체를 또한 전통적인 방법을 통해 화학식 II 또는 III의 면역접합체의 제조를 위해 사용할 수 있다 (Carter PJ, Senter PD, Antibody-drug conjugates for cancer therapy, Cancer J. 2008, 14(3):154-69; J.E. Stefano, M. Busch, L. Hou, A. Park, and D.A. Gianolio, p. 145-171, and M.-P. Brun and L. Gauzy-Lazo, p. 173-187 in Antibody-Drug Conjugate, Methods in Molecular Biology, Vol. 1045, Editor L. Ducry, Humana Press (2013).
<표 3>
예시적 항체의 아미노산 서열
Figure pct00259
Figure pct00260
Figure pct00261
서열 1 및 서열 2는 야생형 항-Her2 항체 중쇄 (HC) 및 경쇄 (LC) 각각의 전장 아미노산 서열이다. CDR 영역은 밑줄이 그어져 있다. 서열 3은 항-Her2 LC-S159C 및 항체 20507-LC-S159C 돌연변이체 항체의 LC 불변 영역의 아미노산 서열이다. 서열 4, 서열 5 및 서열 6은 중쇄 HC-E152C 및 HC-S375C, 및 HC-E152C-S375C 돌연변이체 항체 각각에 대한 불변 영역의 아미노산 서열이다. 서열 7은 항체 20507의 경쇄 LC-K107C 돌연변이체이다. 서열 8은 항-Her2 HC-ins388-ybbR에 대한 돌연변이체 중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열이고 여기서 ybbR 태그가 HC 잔기 Glu388 뒤에 삽입되어 있다. 서열 9는 항-Her2 및 항체 20507 HC-ins388-A1 항체 둘 다에 대한 돌연변이체 중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열이고 여기서 A1 태그가 HC 잔기 Glu388 뒤에 삽입되어 있다. 돌연변이체 Cys 잔기 및 ybbR 및 A1의 삽입된 서열 태그는 볼드체로 나타냈고 상응하는 돌연변이체 쇄의 서열에서 밑줄이 그어져 있다. 서열 10 및 서열 11은 야생형 항체 20507 중쇄 및 경쇄 각각의 불변 영역의 아미노산 서열이다.
항체의 생산
본 발명의 항체 및 항체 단편 (예를 들어, 항원 결합 단편)은, 항체 사량체의 재조합 발현, 화학 합성, 및 효소 소화를 포함하나 그에 제한되지는 않는, 관련 기술분야에 공지된 임의의 수단에 의해 생산될 수 있으며, 한편 전장 모노클로날 항체는, 예를 들어, 하이브리도마 또는 재조합 생산에 의해 수득될 수 있다. 재조합 발현은 관련 기술분야에 공지된 임의의 적절한 숙주 세포, 예를 들어, 포유동물 숙주 세포, 박테리아 숙주 세포, 효모 숙주 세포, 곤충 숙주 세포 등일 수 있다.
본 발명은 추가로 본원에 기재된 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어, 본원에 기재된 바와 같은 상보성 결정 영역을 포함하는 중쇄 또는 경쇄 가변 영역 또는 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
폴리뉴클레오티드 서열은 항체 또는 그의 결합 단편을 코딩하는 기존 서열 (예를 들어, 이하에 실시예에서 기재된 바와 같은 서열)의 PCR 돌연변이유발에 의해 또는 데노보(de novo) 고체-상 DNA 합성에 의해 생산될 수 있다. 핵산의 직접적인 화학 합성은 관련 기술분야에서 공지된 방법, 예컨대 문헌 [Narang et al., Meth. Enzymol. 68:90, 1979]의 포스포트리에스테르 방법; 문헌 [Brown et al., Meth. Enzymol . 68:109, 1979]의 포스포디에스테르 방법; 문헌 [Beaucage et al., Tetra. Lett., 22:1859, 1981]의 디에틸포스포르아미다이트 방법; 및 미국 특허 번호 4,458,066의 고체 지지체 방법에 의해 완수될 수 있다. PCR에 의해 폴리뉴클레오티드 서열에 돌연변이를 도입하는 것은, 예를 들어, 문헌 [PCR Technology: Principles and Applications for DNA Amplification, H.A. Erlich (Ed.), Freeman Press, NY, NY, 1992]; [PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al. (Ed.), Academic Press, San Diego, CA, 1990]; [Mattila et al., Nucleic Acids Res. 19:967, 1991]; 및 [Eckert et al., PCR Methods and Applications 1:17, 1991]에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다.
또한 상기 기재된 항체 또는 항체 단편을 생산하기 위한 발현 벡터 및 숙주 세포가 본 발명에서 제공된다. 다양한 발현 벡터를 사용하여 본 발명의 항체 쇄 또는 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 발현시킬 수 있다. 바이러스-기반 및 비-바이러스성 발현 벡터를 사용하여 포유동물 숙주 세포에서 항체를 생산할 수 있다. 비바이러스성 벡터 및 시스템은 플라스미드, 에피솜성 벡터 (전형적으로 단백질 또는 RNA를 발현시키기 위한 발현 카세트를 포함), 및 인간 인공 염색체를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Harrington et al., Nat Genet 15:345, 1997] 참조). 예를 들어, 포유동물 (예를 들어, 인간) 세포에서의 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 발현에 유용한 비바이러스성 벡터는 pThioHis A, B & C, pcDNA3.1/His, pEBVHis A, B & C (인비트로겐(Invitrogen), 캘리포니아주 샌디에이고), MPSV 벡터, 및 기타 단백질을 발현시키기 위한 관련 기술분야에 공지된 다수의 기타 벡터를 포함한다. 유용한 바이러스성 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노관련 바이러스, 헤르페스 바이러스에 기초하는 벡터, SV40, 유두종 바이러스, HBP 엡스타인 바르(Epstein Barr) 바이러스에 기초하는 벡터, 백시니아 바이러스 벡터 및 셈리키삼림열 바이러스(Semliki Forest virus) (SFV)를 포함한다. 문헌 [Smith, Annu . Rev. Microbiol. 49:807, 1995]; 및 [Rosenfeld et al., Cell 68:143, 1992] 참조.
발현 벡터의 선택은 벡터가 발현되는 의도된 숙주 세포에 따라 달라진다. 전형적으로, 발현 벡터는 프로모터, 및 본 발명의 항체 쇄 또는 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동적으로 연결되어 있는 다른 조절 서열 (예를 들어, 인핸서)을 함유한다. 일부 실시양태에서, 유도성 프로모터를 사용하여 유도성 조건 하를 제외하고 삽입된 서열의 발현을 방지한다. 유도성 프로모터는, 예를 들어, 아라비노스, lacZ, 메탈로티오네인 프로모터 또는 열 쇼크 프로모터를 포함한다. 형질전환된 유기체의 배양을 발현 생성물이 숙주 세포에 의해 더 양호하게 인용되는 서열을 코팅하기 위한 개체군의 바이어스 없이 비유도성 조건하에 확장할 수 있다. 프로모터 이외에도, 다른 조절 요소가 또한 본 발명의 항체 쇄 또는 단편의 효율적인 발현을 위해 필요하거나 요구될 수 있다. 이들 요소는 전형적으로 ATG 개시 코돈 및 인접하는 리보솜 결합 부위 또는 다른 서열을 포함한다. 게다가, 발현의 효율성은 사용 중인 세포 시스템에 적절한 인핸서의 개재에 의해 향상될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Scharf et al., Results Probl . Cell Differ. 20:125, 1994]; 및 [Bittner et al., Meth . Enzymol ., 153:516, 1987] 참조). 예를 들어, SV40 인핸서 또는 CMV 인핸서를 사용하여 포유동물 숙주 세포에서의 발현을 증가시킬 수 있다.
발현 벡터는 또한 분비 신호 서열 위치를 제공하여 삽입된 항체 서열에 의해 코팅되는 폴리펩티드를 갖는 융합 단백질을 형성할 수 있다. 더 자주, 삽입된 항체 서열은 백터에서의 개재 전에 신호 서열에 연결된다. 항체 경쇄 및 중쇄 가변 도메인을 코딩하는 서열을 수령하는데 사용되는 벡터는 때때로 또한 그의 불변 영역 또는 부분을 코딩한다. 이러한 벡터는 불변 영역을 갖는 융합 단백질로서 가변 영역의 발현을 가능하게 하고, 그로 인해 무손상 항체 또는 그의 단편의 생산을 야기한다. 전형적으로, 이러한 불변 영역은 인간이다.
본 발명의 항체 쇄를 보유하고 발현시키기 위한 숙주 세포는 원핵성 또는 진핵성일 수 있다. 에스케리키아 콜라이는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 클로닝하고 발현시키는데 유용한 한 원핵성 숙주이다. 사용하기에 적합한 다른 미생물 숙주는 바실루스, 예컨대 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis ), 및 다른 장내 세균, 예컨대 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia), 다양한 슈도모나스(Pseudomonas) 종을 포함한다. 이들 원핵성 숙주에서, 숙주는 또한, 전형적으로 발현 제어 서열을 함유하는 발현 벡터를 숙주 세포 (예를 들어, 복제 기점)와 상용성이 되도록 할 수 있다. 게다가, 임의의 수의 다양한 널리 공지된 프로모터, 예컨대 락토스 프로모터 시스템, 트립토판 (trp) 프로모터 시스템, 베타-락타마제 프로모터 시스템, 또는 파지 람다로부터의 프로모터 시스템이 존재할 수 있다. 프로모터는 전형적으로, 임의로 작동자 서열과 함께 발현을 제어하고, 전사 및 번역을 개시하고 완료하기 위해, 리보솜 결합 부위 서열 등을 갖는다. 다른 미생물, 예컨대 효모를 또한 사용하여 본 발명의 항체 또는 항체 단편을 발현시킬 수 있다. 바큘로바이러스 벡터와 조합된 곤충 세포를 또한 사용할 수 있다.
한 측면에서, 포유동물 숙주 세포를 사용하여 본 발명의 항체 및 항체 단편을 발현시키고 생산한다. 예를 들어, 이들은 내인성 면역글로불린 유전자를 발현하는 하이브리도마 세포주 또는 외인성 발현 벡터를 보유하는 포유동물 세포주일 수 있다. 이들은 임의의 정상적인 필멸의 또는 정상적인 또는 비정상적인 불멸의 동물 또는 인간 세포를 포함한다. 예를 들어, CHO 세포주, 다양한 Cos 세포주, HeLa 세포, 골수종 세포주, 형질전환된 B 세포 및 하이브리도마를 포함한, 무손상 면역글로불린을 분비할 수 있는 다수의 적합한 숙주 세포주가 개발되었다. 폴리펩티드를 발현하는 포유동물 조직의 세포 배양의 사용은, 예를 들어, 문헌 [ Winnacker, From Genes to Clones, VCH Publishers, N.Y., N.Y., 1987]에서 일반적으로 논의되어 있다. 포유동물 숙주 세포를 위한 발현 벡터는 발현 제어 서열, 예컨대 복제 기점, 프로모터, 및 인핸서 (예를 들어, 문헌 [Queen et al., Immunol . Rev. 89:49-68, 1986] 참조), 및 필수적인 프로세싱 정보 부위, 예컨대 리보솜 결합 부위, RNA 스플라이스 부위, 폴리아데닐화 부위, 및 전사 종료자 서열을 포함할 수 있다. 이들 발현 벡터는 대개 포유동물 유전자로부터 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터를 함유한다. 적합한 프로모터는 구성적, 세포 유형-특이적, 단계-특이적, 및/또는 조정성 또는 조절성일 수 있다. 유용한 프로모터는 메탈로티오네인 프로모터, 구성적 아데노바이러스 주요 후기(major late) 프로모터, 덱사메타손-유도성 MMTV 프로모터, SV40 프로모터, MRP polIII 프로모터, 구성적 MPSV 프로모터, 테트라시클린-유도성 CMV 프로모터 (예컨대 인간 전초기(immediate-early) CMV 프로모터), 구성적 CMV 프로모터, 및 관련 기술분야에 공지된 프로모터-인핸서 조합을 포함하나, 그에 제한되지는 않는다.
관심 폴리뉴클레오티드 서열을 함유하는 발현 벡터를 도입하는 방법은 세포상 숙주의 유형에 따라 달라진다. 예를 들어, 염화칼슘 형질감염은 통상 원핵 세포에 이용되며, 한편 인산칼슘 처리 또는 전기 천공법은 다른 세포상 숙주에 사용될 수 있다 (일반적으로 상기 문헌 [Sambrook et al.,] 참조). 다른 방법은, 예를 들어, 전기 천공법, 인산칼슘 처리, 리포솜-매개 형질전환, 주입 및 미량주입, 탄도 방법, 비로솜, 면역리포솜, 다가 양이온:핵산 접합체, 네이키드(naked) DNA, 인공 비리온, 헤르페스 바이러스 구조적 단백질 VP22에의 융합 (Elliot and O'Hare, Cell 88:223, 1997), DNA의 작용제-향상된 흡수, 및 생체외 형질도입을 포함한다. 재조합 단백질의 장기의, 고-수율 생산을 위해, 안정적인 발현이 자주 요구될 것이다. 예를 들어, 항체 쇄 또는 결합 단편을 안정적으로 발현하는 세포주는 선택성 마커 유전자 및 내인성 발현 효소 또는 복제의 바이러스 기점을 함유하는 본 발명의 발현 벡터를 사용하여 제조할 수 있다. 벡터의 도입 후에, 세포를 선택적 배지로 바꾸기 전에 농축 배지에서 1-2일 동안 성장시킬 수 있다. 선택성 마커의 목적은 선택에 저항성을 부여하는 것이고, 그의 존재는 선택적 배지에서 도입된 서열을 성공적으로 발현시키는 세포를 성장시킨다. 저항성, 안정적으로 형질감연된 세포는 세포 유형에 적절한 조직 배양 기술을 사용하여 증식될 수 있다.
실시예 99: 접합 연구를 위한 항-Her2 및 항체 20507 Cys 및 A1/ybbR 태그 돌연변이체 항체의 클로닝
항-Her2 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 코딩하는 DNA 올리고뉴클레오티드 (Carter P, Presta L, Gorman CM, Ridgway JB, Henner D, Wong WL, Rowland AM, Kotts C, Carver ME, Shepard HM. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 4285-4289. Humanization of an anti-p185her2 antibody for human Cancer therapy)를 화학적으로 합성하고 인간 IgG1 및 인간 카파 경쇄의 불변 영역을 함유하는, 2개의 포유동물 발현 벡터, pOG-HC 및 pOG-LC로 클로닝하고, 이는 2개의 야생형 구축물, pOG-항-Her2 항체 HC 및 pOG-항-Her2 항체 LC 각각을 초래한다. 이들 벡터에서, 포유동물 세포에서의 항체 중쇄 및 경쇄의 발현은 CMV 프로모터에 의해 구동된다. 벡터는 중쇄 및 경쇄의 N-말단에서 합성 24 아미노산 신호 서열, MKTFILLLWVLLLWVIFLLPGATA (서열 12)을 코딩하여, 포유동물 세포로부터의 그의 분리를 유도한다. 신호 서열은 293 프리스타일(Freestyle)™ 세포에서 수백의 포유동물 단백질에서 단백질 분비를 지향하는데 효율적인 것으로 입증되었다 (Gonzalez R, Jennings LL, Knuth M, Orth AP, Klock HE, Ou W, Feuerhelm J, Hull MV, Koesema E, Wang Y, Zhang J, Wu C, Cho CY, Su AI, Batalov S, Chen H, Johnson K, Laffitte B, Nguyen DG, Snyder EY, Schultz PG, Harris JL, Lesley SA. (2010) Proc Natl Acad Sci U S A. 107:3552-7). 올리고뉴클레오티드 지향된 돌연변이유발을 사용하여 항-Her2 항체의 LC-S159C 돌연변이체를 제조하였다. 인간 카파 경쇄의 불변 영역에서 LC-S159C 돌연변이 부위에 상응하는 센스 및 항-센스 프라이머 (표 4)를 화학적으로 합성하였다. PCR 반응은 주형으로서 pOG-항-Her2 항체 HC 및 pOG-항-Her2 항체 LC를 이용하여 PfuUltra II 퓨전(Fusion) HS DNA 폴리머라제 (스트라타진(Stratagene))을 사용하여 수행하였다. PCR 생성물을 아가로스 겔 상에서 확인하였고, DPN I로 처리한 후에 DH5a 세포에서 형질전환시켰다 (Klock et al., (2009) Methods Mol Biol . 498:91-103).
LC-S159C 돌연변이체 구축물의 서열은 DNA 염기 서열 결정법에 의해 확인하였다. 야생형 항-Her2 항체 중쇄의 전장 아미노산 서열은 서열 1로서 나타냈고 경쇄의 것은 서열 2로서 나타냈다. LC-S159C 돌연변이체 항체의 아미노산 서열은 표 3에 나타냈고 C159는 볼드체이고 밑줄이 그어져 있다. 인간 IgG1 중쇄 및 인간 카파 경쇄에서의 아미노산 잔기는 Eu 번호 방식에 따라 번호를 매겼다 (Edelman et al, (1969) Proc Natl Acad Sci USA, 63:78-85). 항-Her2- LC-S159C 항체를 추가로, 상응하는 항생제를 포함하는 배지에서 안정적으로 형질감염된 세포 클론의 선택을 위해 항생제 선택 마커를 함유하는 벡터로 클로닝하였다.
유사하게, 항-Her2 항체의 이중 Cys 돌연변이체, HC-E152C-S375C, 및 제2 항체, 항체 20507의 4개의 Cys 돌연변이체 (HC-E152C, HC-S375C, LC-K107C, LC-S159C, HC-E152C-S375C)를 표 4에 기재된 DNA 프라이머 및 상기 절차를 사용하여 클로닝하였다. 항체 20507은 인간 IgG1 중쇄 및 인간 카파 경쇄를 함유한다. 항체 20507의 중쇄 및 경쇄의 불변 부분은 항-Her2 항체에서의 것들과 아미노산 서열에서 동일하다. 항-Her2 항체 및 항체 20507의 Cys 돌연변이체의 불변 영역의 아미노산 서열은 표 3에 나타냈고 돌연변이된 Cys는 볼드체이고 밑줄이 그어져 있다.
ybbR 및 A1 펩티드 서열의 항-Her2 항체 중쇄의 불변 영역으로의 삽입을 표준 분자 생물학 방법에 의해 완수하였다. 벡터 pOG-항-Her2 항체 HC는 PCR 주형으로서 역할을 하여 상응하는 HC-ins388-ybbR 및 HC-ins388-A1 삽입 돌연변이체를 수득하였다. 표 4는 이들 구축물의 클로닝에 사용된 센스 및 안티-센스 프라이머를 기재한다. 항체 20507-HC-ins388-A1 삽입 돌연변이체를 코딩하는 돌연변이체는 항체 20507 중쇄의 가변 영역을 증폭함으로써 제조하였다. 그 다음에 증폭된 DNA 단편을 항-Her2-HC-ins388-A1 삽입 돌연변이체를 코딩하는 기존 벡터 내로 옮겼다. 펩티드-태그부착된 중쇄를 코딩하는 모든 생성된 발현 벡터를 DNA 염기 서열 결정법에 의해 확인하였다. HC-ins388-ybbR 및 HC-ins388-A1 삽입을 함유하는 항-Her2 항체를 추가로, 항체 선택 마커를 이용하여 벡터로 클로닝하고, 그로 인해 각각의 펩티드-태그부착된 구축물을 안정적으로 발현하는 클론을 후속 단리하였다. 항-Her2 항체 및 항체 20507의 A1/ybbR 삽입 돌연변이체의 불변 영역의 아미노산 서열을 표 3에 나타냈다. 삽입된 펩티드 태그를 볼드체로 나타냈고 밑줄을 그어져 있다.
항-Her2 및 항체 20507 Cys 및 A1 태그 돌연변이체 항체를 실시예 100에 기재된 바와 같이 제조하고, 실시예 101, 102, 103, 104 및 105에 기재된 바와 같은 화학식 I의 예시적인 세포독성 펩티드와 접합시켰다.
<표 4>
돌연변이체 항체를 클로닝하는데 사용된 돌연변이 프라이머의 DNA 서열.
Figure pct00262
실시예 100: 항-Her2 및 항체 20507 Cys 및 A1/ybbR 태그 돌연변이체 항체의 제조
항-Her2 및 항체 20507 Cys, A1 태그 및 ybbR 태그 돌연변이체를 이전에 기재된 바와 같은 일과성 형질감염 방법을 사용하여 중쇄 및 경쇄 플라스미드를 공동-형질감염시킴으로써 293 프리스타일™ 세포에서 발현시켰다 (Meissner, et al., Biotechnol Bioeng. 75:197-203 (2001)). 공동-형질감염에서 사용된 DNA 플라스미드를 제조업체의 프로토콜에 따라 퀴아젠(Qiagen) 플라스미드 제조 키트를 사용하여 제조하였다. 293 프리스타일™ 세포를 5% CO2 하에 37℃에서 프리스타일™ 발현 배지 (인비트로겐) 중 현탁액에서 배양하였다. 형질감염 전날에, 세포를 새로운 배지로 0.7 x 106개의 세포/ml로 분할하였다. 형질감염 당일에, 세포 밀도는 전형적으로 1.5 x 106개의 세포/ml에 이르렀다. 세포를 PEI 방법을 사용하여 1:1의 비로 중쇄 및 경쇄 플라스미드의 혼합물로 형질감염시켰다 (상기 문헌 [Meissner et al., 2001]). 형질감염된 세포를 5일 동안 추가로 배양하였다. 배양물로부터의 배지를 20분 동안 2000x g에서 배양물을 원심분리함으로써 수확하고 0.2 마이크로미터 필터를 통해 여과하였다. 발현된 항체를 프로테인 A-세파로스(Protein A- Sepharose)™ (GE 헬쓰케어 라이프 사이언시즈(GE Healthcare Life Sciences))를 사용하여 여과된 배지로부터 정제하였다. 항체 IgG를 pH 3.0 용리 완충제를 사용하여 프로테인 A-세파로스™ 칼럼으로부터 용리시켰다. 용리된 IgG 용액을 1 M 트리스(Tris)-HCl (pH 8.0)로 즉시 중화시킨 후에 PBS로 완충제 교환하였다.
항-Her2-LC-S159C, 항-Her2-HC-ins388-ybbR, 및 항-Her2-HC-ins388-A1 항체를 위한 발현 구축물을 또한 CHO 세포로 형질감염시켰다. 표준 프로토콜에 따라서, 그 다음에 이들 항체를 안정적으로 발현하는 세포를 항생제를 사용하여 선택하였다. 선택된 CHO 세포 클론에서 발현된 모든 항-Her2 항체 구축물을 상기에 기재된 바와 같이 프로테인 A-세파로스 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
별도의 연구에서, 항-Her2-LC-S159C 항체를 CHO 세포에서 안정적으로 발현시킨 후에 항생제 선택에 의해 선택하였다. 수립된 CHO 세포 클론에서 발현된 항-Her2-LC-S159C 항체를 상기에 기재된 바와 같은 프로테인 A-세파로스 칼럼 절차에 의해 정제하였다.
면역접합체
페이로드 (약물)로서 이러한 세포독성 펩티드를 포함하는 본 발명의 면역접합체는 화학식 II의 접합체를 포함한다:
<화학식 II>
Figure pct00263
상기 식에서,
Ab는 항원 결합 모이어티를 나타내고;
L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택된 링커이고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
R101은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00264
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
R101은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00265
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00266
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, 또는 -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11 또는
Figure pct00267
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R11은 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴,
Figure pct00268
이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
페이로드 (약물)로서 이러한 세포독성 펩티드를 포함하는 본 발명의 다른 면역접합체는 화학식 III의 접합체를 포함한다:
<화학식 III>
Figure pct00269
상기 식에서,
Ab는 항원 결합 모이어티를 나타내고;
L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00270
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R11은 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
R17은 결합, -NH-, -NHS(=O)2-,
Figure pct00271
이고;
R18은 결합,
Figure pct00272
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
본 발명의 화학식 II 및 III의 다른 면역접합체는 이하에 열거된 실시양태에서 제공된다.
본 발명은 항원-결합 모이어티, 예컨대 항체 또는 항체 단편에 연결된 하나 이상의 항-유사분열 세포독성 펩티드를 포함하는 면역접합체를 제공한다. 바람직한 본 발명의 면역접합체는 본원에 기재된 바와 같은 화학식 II 또는 III의 것들이다. 이러한 면역접합체를 제조하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 바람직한 면역접합체는 표 5에 개시된 것들, 및 항-Her2 항체 대신에 또 다른 항원 결합 모이어티를 갖는 그의 변이체, 특히 항-Her2 항체가 하기 목록으로부터 선택된 항체에 의해 대체되는 이러한 접합체를 포함하나, 그에 제한되지는 않는다: 항-에스트로겐 수용체 항체, 항-프로게스테론 수용체 항체, 항-p53 항체, 항-EGFR 항체, 항-카텝신 D 항체, 항-Bcl-2 항체, 항-E-카데린 항체, 항-CA125 항체, 항-CA15-3 항체, 항-CA19-9 항체, 항-c-erbB-2 항체, 항-P-당단백질 항체, 항-CEA 항체, 항-망막모세포종 단백질 항체, 항-ras 종양단백질 항체, 항-루이스 X 항체, 항-Ki-67 항체, 항-PCNA 항체, 항-CD3 항체, 항-CD4 항체, 항-CD5 항체, 항-CD7 항체, 항-CD8 항체, 항-CD9/p24 항체, 항-CD1-항체, 항-CD11c 항체, 항-CD13 항체, 항-CD14 항체, 항-CD15 항체, 항-CD19 항체, 항-CD20 항체, 항-CD22 항체, 항-CD23 항체, 항-CD30 항체, 항-CD31 항체, 항-CD33 항체, 항-CD34 항체, 항-CD35 항체, 항-CD38 항체, 항-CD39 항체, 항-CD41 항체, 항-LCA/CD45 항체, 항-CD45RO 항체, 항-CD45RA 항체, 항-CD71 항체, 항-CD95/Fas 항체, 항-CD99 항체, 항-CD100 항체, 항-S-100 항체, 항-CD106 항체, 항-유비퀴틴 항체, 항-c-myc 항체, 항-시토케라틴 항체, 항-람다 경쇄 항체, 항-멜라노솜 항체, 항-전립선 특이적 항원 항체, 항-tau 항원 항체, 항-피브린 항체, 항-케라틴 항체, 및 항-Tn-항원 항체.
일부 실시양태에서, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체는 항원-결합 활성을 갖는 항체 또는 항체 단편 Ab를 포함하고, 여기서 링커 L은 Ab의 시스테인 황 원자에서 Ab에 부착된다. 시스테인 황 기와의 반응에 사용되는 전형적인 반응성 기 및 형성되는 생성된 기를 표 1에 제공하였다. 항원 결합 모이어티의 시스테인 잔기와의 반응에 의해 형성되는 링커 성분의 비제한적 예는
Figure pct00273
를 포함하나, 그에 제한되지는 않는다.
다른 실시양태에서, 화학식 II 또는 화학식 III의 면역접합체는 Ab, 항원-결합 활성을 갖는 항체 또는 항체 단편을 포함하고, 여기서 링커는 Ab에서 브릿징된 디술피드를 통해 Ab에 부착된다. 이러한 실시양태에서
Figure pct00274
모이어티 h는 히드록실아민을 함유하는 화학식 I의 화합물과
Figure pct00275
의 반응시 형성된다.
일부 실시양태에서, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체는 항원-결합 활성을 갖는 항체 또는 항체 단편 Ab를 포함하고, 여기서 링커 L은 리신의 유리 -NH2에서 Ab에 부착된다. 항원 결합 모이어티의 리신 잔기의 -NH2와의 반응에 의해 형성되는 링커 성분 (여기서 각각의 p는 1-10이고, 각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬 (바람직하게는 메틸)이다)은
Figure pct00276
를 포함하나, 그에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체는 항원-결합 활성을 갖는 항체 또는 항체 단편 Ab를 포함하고, 여기서 링커 L은 항체로 조작되는 Pcl 또는 Pyl에서 Ab에 부착된다. 예를 들어, 문헌 [Ou, et al., PNAS 108(26), 10437-42 (2011)] 참조. Pcl 또는 Pyl 기와의 반응에 의해 형성되는 링커 성분은
Figure pct00277
를 포함하나, 그에 제한되지는 않고, 여기서 R20은 H 또는 Me이고, R30은 H, Me 또는 페닐이고, 연결을 위해서는 상기 나타낸 아실 기가 조작된 항체 내의 Pcl 또는 Pyl의 리신 부분에 부착한다.
일부 실시양태에서, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체는 항원-결합 활성을 갖는 항체 또는 항체 단편 Ab를 포함하고, 여기서 링커 L은 항체로 조작되는 S6, ybbR 또는 A1 펩티드에서 세린 잔기에서 Ab에 부착된다. 이러한 세린 잔기와의 반응에 의해 형성되는 링커 성분은
Figure pct00278
를 포함하나, 그에 제한되지는 않는다.
예로서, 화학식 II의 면역접합체의 형성을 위한 한 일반적인 반응식을 이하에 반응식 13에 나타냈다:
<반응식 13>
Figure pct00279
여기서 RG1은 표 1로부터의 반응성 기 1이고 RG2는 표 1로부터의 반응성 기 1이고 각각의 기의 반응 생성물 (표 1에 나타낸 바와 같음)은 링커 L의 링커 성분이다. R101, R2, R3, L 및 Ab는 본원에 정의된 바와 같다.
화학식 II의 면역접합체의 형성을 위한 또 다른 일반적인 반응식을 이하에 반응식 14에 나타냈다:
<반응식 14>
Figure pct00280
여기서 RG1은 표 1로부터의 반응성 기 1이고 RG2는 표 1로부터의 반응성 기 1이고 각각의 기의 반응 생성물 (표 1에 나타낸 바와 같음)은 링커 L의 링커 성분이다. R101, R2, R3, L 및 Ab는 본원에 정의된 바와 같다.
예로서, 화학식 III의 면역접합체의 형성을 위한 한 일반적인 반응식을 이하에 반응식 15에 나타냈다:
<반응식 15>
Figure pct00281
여기서 RG1은 표 1로부터의 반응성 기 1이고 RG2는 표 1로부터의 반응성 기 1이고 각각의 기의 반응 생성물 (표 1에 나타낸 바와 같음)은 링커 L의 링커 성분이다. R1, R2, R3, L 및 Ab는 본원에 정의된 바와 같다.
화학식 II의 면역접합체의 형성을 위한 또 다른 일반적인 반응식을 이하에 반응식 16에 나타냈다:
<반응식 16>
Figure pct00282
여기서 RG1은 표 1로부터의 반응성 기 1이고 RG2는 표 1로부터의 반응성 기 1이고 각각의 기의 반응 생성물 (표 1에 나타낸 바와 같음)은 링커 L의 링커 성분이다. R1, R2, R3, L 및 Ab는 본원에 정의된 바와 같다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 제약 조성물은 정맥내 투여, 비경구 투여 등과 같은 투여의 특정 경로를 위해 제제화될 수 있다.
본 발명의 면역접합체는 전형적으로 등장 수용액 및/또는 수성 완충제 중 용액 또는 현탁액으로서 제제화된다. 이들은 전형적으로 주사에 의해 또는 주입에 의해, 비경구적으로 투여된다. 그의 제제화 및 투여 방법은 이러한 항체 치료제와 같은 기타 생물계 약제의 제제화 및 투여 방법과 유사하고, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
특정 주사용 조성물은 수성 등장 용액 또는 현탁액이고, 좌제는 유리하게는 지방 에멀션 또는 현탁액으로부터 제조된다. 상기 조성물은 멸균될 수 있고/거나 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용액 프로모터, 삼투압을 조절하기 위한 염 및/또는 완충제를 함유할 수 있다. 게다가, 이들은 또한 다른 치료상 유익한 물질을 함유할 수 있다. 상기 조성물은 각각 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제조되고, 활성 성분 약 0.1-75%를 함유하거나, 약 1-50%를 함유한다.
화학식 I의 특정 세포독성 펩티드에 대해 수득된 표 2에 제공된 시험관내 세포 사멸 효능은 이러한 화학식 I의 화합물이 유익한 약리학적 활성을 나타내고, 이들 화합물은 ADC의 페이로드로서 사용될 수 있음을 나타낸다. 본원에서 입증된 바와 같이, 화학식 I의 화합물을 포함하는 면역접합체는, 상이한 인간 암을 나타내는 이종이식 종양의 강력한 성장 억제에 의해 입증된 바와 같이, 시험관내 표적 세포 및 생체내 종양에 대해 실질적인 활성을 나타낸다. 따라서 항체와 같은 항원 결합 모이어티에 연결된, 화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 페이로드를 포함하는, 본 발명의 화학식 II 또는 III의 면역접합체는 또한 암, 예컨대 위, 골수, 결장, 비인두, 식도, 및 전립선 종양, 신경교종, 신경모세포종, 유방암, 폐암, 난소암, 결장직장암, 갑상선암, 백혈병 (예를 들어, 골수성 백혈병, 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), T-계통 급성 림프모구성 백혈병 또는 T-ALL 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 골수이형성 증후군 (MDS), 털 세포 백혈병), 림프종 (호지킨 림프종 (HL), 비호지킨 림프종 (NHL)), 다발성 골수종, 방광, 신장, 위 (예를 들어, 위장관 기질 종양 (GIST)), 간, 흑색종 및 췌장 암, 및 육종을 치료하는데 유용하다.
본 발명의 실시양태는 화학식 I, 및 그의 하위 화학식의 화합물의 항원 결합 모이어티에의 접합 및 그로 인해 본원에 기재된 바와 같이, 화학식 II 또는 화학식 III의 면역접합체를 형성하는 것을 제공한다.
화학식 I, 또는 그의 하위 화학식의 화합물을 포함하는 본 발명의 면역접합체는 항-유사분열 독소에 의해 억제되는 관련 기술분야에 공지된 암, 및 본 발명의 화합물 및 접합체에 의해 억제되기 쉬운 본원에 나타낸 그러한 종양 유형을 치료하는데 특히 유용하다. 치료를 위한 적합한 적응증은 위, 골수, 결장, 비인두, 식도, 및 전립선 종양, 신경교종, 신경모세포종, 유방암, 폐암, 난소암, 결장직장암, 갑상선암, 백혈병 (예를 들어, 골수성 백혈병, 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), T-계통 급성 림프모구성 백혈병 또는 T-ALL 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 골수이형성 증후군 (MDS), 털 세포 백혈병), 림프종 (호지킨 림프종 (HL), 비호지킨 림프종 (NHL)), 다발성 골수종, 방광, 신장, 위 (예를 들어, 위장관 기질 종양 (GIST)), 간, 흑색종 및 췌장 암, 및 육종을 포함하나, 그에 제한되지는 않는다. 화학식 I, 또는 그의 하위 화학식의 화합물을 포함하는 본 발명의 면역접합체는 치료에서 특히 유용하다. 추가 실시양태에서, 치료는 항-유사분열 독소에 의해 치료될 수 있는 질환을 위한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 위, 골수, 결장, 비인두, 식도, 및 전립선 종양, 신경교종, 신경모세포종, 유방암, 폐암, 난소암, 결장직장암, 갑상선암, 백혈병 (예를 들어, 골수성 백혈병, 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), T-계통 급성 림프모구성 백혈병 또는 T-ALL 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 골수이형성 증후군 (MDS), 털 세포 백혈병), 림프종 (호지킨 림프종 (HL), 비호지킨 림프종 (NHL)), 다발성 골수종, 방광, 신장, 위 (예를 들어, 위장관 기질 종양 (GIST)), 간, 흑색종 및 췌장 암, 및 육종을 포함하나 그에 제한되지 않는 암을 치료하는데 유용하다.
방법은 전형적으로 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 면역접합체 또는 이러한 면역접합체를 포함하는 제약 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 면역접합체는 본원에 기재된 것들과 같은 임의의 적합한 방법에 의해 투여될 수 있고, 투여는 치료 의사에 의해 선택된 간격으로 반복될 수 있다.
따라서, 추가 실시양태로서, 본 발명은 의약의 제조를 위한, 화학식 II 또는 III의 면역접합체, 또는 본원에 기재된 이러한 화합물의 실시양태 중 어느 하나의 용도를 제공한다. 추가 실시양태에서, 의약은 항-유사분열 독소에 의해 치료될 수 질환의 치료용이다. 또 다른 실시양태에서, 질환은 위, 골수, 결장, 비인두, 식도, 및 전립선 종양, 신경교종, 신경모세포종, 유방암, 폐암, 난소암, 결장직장암, 갑상선암, 백혈병 (예를 들어, 골수성 백혈병, 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML), 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), T-계통 급성 림프모구성 백혈병 또는 T-ALL 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 골수이형성 증후군 (MDS), 털 세포 백혈병), 림프종 (호지킨 림프종 (HL), 비호지킨 림프종 (NHL)), 다발성 골수종, 방광, 신장, 위 (예를 들어, 위장관 기질 종양 (GIST)), 간, 흑색종 및 췌장 암, 및 육종으로부터 선택된다.
본 발명의 제약 조성물 또는 조합물은 약 50-100 kg의 대상체를 위한 약 1-1000 mg의 활성 성분(들), 또는 약 1-500 mg 또는 약 1-250 mg 또는 약 1-150 mg 또는 약 0.5-100 mg, 또는 약 1-50 mg의 활성 성분의 단위 투여일 수 있다. 화합물의 치료 유효 투여량, 제약 조성물, 또는 그의 조합은 대상체의 종, 체중, 연령 및 개별 상태, 치료되는 장애 또는 질환 또는 그의 심각성에 따라 달라진다. 통상의 기술을 가진 의사, 임상의 또는 수의사는 장애 또는 질환의 진행을 예방, 치료 또는 억제하는데 필요한 활성 성분 각각의 유효량을 쉽게 결정할 수 있다.
상기 인용된 투여 특성이 유리하게는 포유 동물, 예를 들어, 마우스, 래트, 개, 원숭이 또는 그의 단리된 기관, 조직 및 제제를 사용하여 시험관내 및 생체내 시험에서 입증가능하다. 본 발명의 화합물은 용액, 예를 들어, 수용액의 형태로 시험관내, 그리고 예를 들어, 현탁액으로서 또는 수용액으로, 생체내 장내, 비경구, 유리하게는 정맥내로 적용될 수 있다. 시험관내 투여량은 약 10-3 몰 내지 10-12 몰 농도의 범위에 이를 수 있다. 생체내 치료 유효량은 투여 경로에 따라 약 0.1-500 mg/kg, 또는 약 1-100 mg/kg의 범위에 이를 수 있다.
본 발명의 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체는 하나 이상의 치료 공동-작용제(들)와 동시에, 또는 전에 또는 후에 투여될 수 있다. 본 발명의 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체는 동일하거나 상이한 투여 경로에 의해, 개별적으로, 또는 공동-작용제(들)와 동일한 제약 조성물로서 함께 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 치료에서 화학식 I, 또는 그의 하위 화학식의 화합물, 및 하나 이상의 다른 치료 공동-작용제를 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 포함하는 생성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 치료는 암과 같은 질환 또는 병태를 항-유사분열 독소로 치료하는 것이다. 조합 제제로서 제공되는 생성물은 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체, 및 다른 치료 공동-작용제(들)를 동일한 제약 조성물에서 함께, 또는 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체, 및 다른 치료 공동-작용제(들)를 별도의 형태로, 예를 들어 키트의 형태로 포함하는 조성물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체, 및 또 다른 치료 공동-작용제(들)를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 임의로, 제약 조성물은 상기에서 기재된 바와 같이, 제약상 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물 및 접합체와 함께 사용하기에 적합한 공동-작용제는 다른 항암제, 항알레르기제, 항오심제 (또는 항구토제), 진통제, 항염증제, 세포보호제, 및 그의 조합을 포함한다.
본원에 개시된 화합물 및 접합체와 조합하여 사용하는 것에 대해 고려되는 구체적 공동-작용제는 아나스트로졸 (아리미덱스(Arimidex)®), 비칼루트아미드 (카소덱스(Casodex)®), 블레오마이신 술페이트 (블레녹산(Blenoxane)®), 부술판 (밀레란(Myleran)®), 부술판 주사액 (부술펙스(Busulfex)®), 카페시타빈 (크셀로다(Xeloda)®), N4-펜톡시카르보닐-5-데옥시-5-플루오로시티딘, 카르보플라틴 (파라플라틴(Paraplatin)®), 카르무수틴 (BiCNU®), 클로르암부실 (류케란(Leukeran)®), 시스플라틴 (플라티놀(Platinol)®), 클라드리빈 (류스타틴(Leustatin)®), 시클로포스파미드 (시톡산(Cytoxan)® 또는 네오사르(Neosar)®), 시타라빈, 시토신 아라비노시드 (시토사르(Cytosar)-U®), 시타라빈 리포솜 주사액 (데포시트(DepoCyt)®), 다카르바진 (DTIC-도메(Dome)®), 닥시노마이신 (악티노마이신(Actinomycin) D, 코스메간(Cosmegan)), 다우노루비신 히드로클로라이드 (세루비딘(Cerubidine)®), 다우노루비신 시트레이트 리포솜 주사액 (다우녹솜(DaunoXome)®), 덱사메타손, 독세탁셀 (탁소테레(Taxotere)®), 독소루비신 히드로클로라이드 (아드리아마이신(Adriamycin)®, 루벡스(Rubex)®), 에토폽시드 (베페시드(Vepesid)®), 플루다라빈 포스페이트 (플루다라(Fludara)®), 5-플루오로우라실 (아드루실(Adrucil)®, 에푸덱스(Efudex)®), 풀루타미드 (유렉신(Eulexin)®), 테자시티빈, 겜시타빈 (디플루오로데옥시시티딘), 히드록시우레아 (히드레아(Hydrea)®), 이다루비신 (이다마이신(Idamycin)®), 이포스파미드 (이펙스(IFEX)®), 이리노테칸 (캄토사르(Camptosar)®), L-아스라파기나제 (ELSPAR®), 류코보린 칼슘, 멜팔란 (알케란(Alkeran)®), 6-메르캅토푸린 (푸리네톨(Purinethol)®), 메토트렉세이트 (폴렉스(Folex)®), 미톡산트론 (노반트론(Novantrone)®), 미토타르그, 파클리탁셀 (탁솔(Taxol)®), 피닉스 (이트륨(Yttrium)90/MX-DTPA), 펜토스타틴, 폴리페프로산 20과 카르무스틴 임플란트 (글리아델(Gliadel)®), 타목시펜 시트레이트 (놀바덱스(Nolvadex)®), 테니포시드 (부몬(Vumon)®), 6-티오구아닌, 티오테파, 티라파자민 (Tirazone®), 주사용 토포테칸 히드로클로라이드 (히캄프틴(Hycamptin)®), 빈블라스틴 (벨반(Velban)®), 빈크리스틴 (온코빈(Oncovin)®), 및 비노렐빈 (나벨빈(Navelbine)®)을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 조성물 중 하나 이상이 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식을 함유하는, 둘 이상의 개별 제약 조성물을 포함하는 키트를 제공한다. 한 실시양태에서, 키트는 상기 조성물을 개별적으로 보유하는 수단, 예컨대 용기, 분할된 병, 또는 분할된 호일 패킷을 포함한다.
본 발명의 조합 치료에서, 본 발명의 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체, 및 다른 치료 공동-작용제는 동일하거나 상이한 제조업자에 의해 제조 및/또는 제제화될 수 있다. 게다가, 본 발명의 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체와 다른 치료제는 함께, (i) 의사에게 조합 생성물의 사전 제공 (예를 들어 본 발명의 화합물과 다른 치료제를 포함하는 키트의 경우); (ⅱ) 투여 직전에 의사 자신 (또는 의사의 지도하에)에 의해; (ⅲ) 예를 들어 본 발명의 화합물 및 다른 치료제의 순차적 투여 동안에 환자 자체에서 조합 요법으로 적용할 수 있다.
본 발명은 또한 세포독성 펩티드로 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체를 제공한다. 본 발명은 또한 세포독성 펩티드로 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체를 제공하며, 여기서 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체는 또 다른 치료제와 함께 투여하기 위해 제조된다. 본 발명은 또한 세포독성 펩티드로 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 또 다른 치료 공동-작용제를 제공하며, 여기서 다른 치료 공동-작용제는 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체와 함께 투여하기 위해 제조된다. 본 발명은 또한 항-유사분열 독소로 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체를 제공하며, 여기서 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체는 또 다른 치료 공동-작용제와 함께 투여된다. 본 발명은 또한 항-유사분열 독소로 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 또 다른 치료 공동-작용제를 제공하며, 여기서 다른 치료 공동-작용제는 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체와 함께 투여된다.
본 발명은 또한 세포독성 펩티드로 질환 또는 병태를 치료하기 위한, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체의 용도를 제공하며, 여기서 환자는 이전에 (예를 들어 24시간 내에) 또 다른 치료제로 치료되었다. 본 발명은 또한 항-유사분열 독소로 질환 또는 병태를 치료하기 위한 또 다른 치료제의 용도를 제공하며, 여기서 환자는 이전에 (예를 들어 24시간 내에) 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체로 치료되었다.
본 발명은 또한 항-유사분열 독소로 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체를 제공한다. 본 발명은 또한 항-유사분열 독소로 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체를 제공하며, 여기서 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체는 또 다른 치료제와 함께 투여하기 위해 제조된다. 본 발명은 또한 항-유사분열 독소로 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 또 다른 치료 공동-작용제를 제공하며, 여기서 다른 치료 공동-작용제는 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체와 함께 투여하기 위해 제조된다. 본 발명은 또한 항-유사분열 독소로 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체를 제공하며, 여기서 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체는 또 다른 치료 공동-작용제와 함께 투여된다. 본 발명은 또한 항-유사분열 독소로 질환 또는 병태를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 또 다른 치료 공동-작용제를 제공하며, 여기서 다른 치료 공동-작용제는 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체와 함께 투여된다.
본 발명은 또한 항-유사분열 독소로 질환 또는 병태를 치료하기 위한, 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체의 용도를 제공하며, 여기서 환자는 이전에 (예를 들어 24시간 내에) 또 다른 치료제로 치료되었다. 본 발명은 또한 항-유사분열 독소로 질환 또는 병태를 치료하기 위한 또 다른 치료제의 용도를 제공하며, 여기서 환자는 이전에 (예를 들어 24시간 내에) 화학식 II 또는 화학식 III, 또는 그의 하위 화학식의 면역접합체로 치료되었다.
링커- 페이로드 (L-P)와 항원 결합 모이어티의 접합
실시예 101: 항-Her2 및 항체 20507 Cys 돌연변이체 항체와 화학식 I의 세포독성 펩티드의 접합에 의해 형성된 항체 약물 접합체 (ADC)
링커-페이로드를 항원 결합 모이어티에 접합시키는 다수의 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Antibody-Drug Conjugate, Methods in Molecular Biology, Vol. 1045, Editor L. Ducry, Humana Press (2013))]에서 검토됨). 본 실시예에서, 링커를 포함하는 본 발명의 화학식 I의 화합물을 문헌 [JR, Raab H, Clark S, Bhakta S, Leipold DD, Weir S, Chen Y, Simpson M, Tsai SP, Dennis MS, Lu Y, Meng YG, Ng C, Yang J, Lee CC, Duenas E, Gorrell J, Katta V, Kim A, McDorman K, Flagella K, Venook R, Ross S, Spencer SD, Lee Wong W, Lowman HB, Vandlen R, Sliwkowski MX, Scheller RH, Polakis P, Mallet W. (2008) Nature Biotechnology 26:925-932]에 기재된 방법을 사용하여 항체로 조작된 시스테인 잔기에 접합시켰다. 본 발명의 화학식 I의 세포독성 펩티드의 접합은 본원에서 작은 세트의 Cys 항체 돌연변이체를 사용하여 예시되지만 세포독성 펩티드는 모든 가능한 Cys 항체 돌연변이체는 아닐지라도 대부분에 접합될 수 있는 것으로 예상된다. 더 나아가, 세포독성 펩티드는 모든 항체는 아닐지라도 다수의 Cys 돌연변이체에 접합될 수 있는 것으로 예상된다.
포유동물 세포에서 발현된 항체에서 조작된 Cys가 그의 생합성 동안에 부가물 (디술피드), 예컨대 글루타티온 (GSH) 및/또는 시스테인에 의해 변형되기 때문에 (Chen et al. 2009), 초기에 발현된 바와 같은 생성물 중 변형된 Cys는 티올 반응성 시약, 예컨대 말레이미도 또는 브로모- 또는 아이오도-아세트아미드 기에 비반응성이다. 발현 후에 조작된 시스테인을 접합시키기 위해, 글루타티온 또는 시스테인 부가물을 이들 디술피드를 환원시킴으로써 제거될 필요가 있고, 이는 일반적으로 발현된 단백질에서 디술피드의 모두를 환원시키는 것을 수반한다. 이는 항체를 환원제, 예컨대 디티오트레이톨 (DTT)에 맨 먼저 노출시킨 후에 기능적 항체 구조를 복원 및/또는 안정화시키는 항체의 모든 고유 디술피드 결합의 재-산화를 허용하는 절차로 완수될 수 있다. 따라서, 모든 고유 디술피드 결합 및 조작된 시스테인 잔기의 시스테인 또는 GSH 부가물 사이에 결합된 디술피드를 환원시키기 위해, 새로이 제조된 DTT를 정제된 항-Her2 또는 항체 20507 Cys 돌연변이체 구축물에, 20 mM의 최종 농도까지 첨가하였다. 1시간 동안 37℃에서 DTT와 함께 인큐베이션한 후에, 혼합물을 매일 완충제 교환과 함께 3일 동안 PBS에 대하여 4℃에서 투석하여 DTT를 제거하고 고유 디술피드 결합을 재-산화시켰다. 대안적 방법은 탈염 칼럼, 예컨대 세파덱스(Sephadex) G-25를 통해 환원 시약을 제거하는 것이다. 일단 단백질이 완전히 환원되면, 1 mM 산화 아스코르베이트 (데히드로-아스코르브산)를 탈염 샘플에 첨가하고 재-산화 인큐베이션을 20시간 동안 수행한다. 두 방법 모두 유사한 결과를 초래한다. 그러나, CuSO4를 사용하여 문헌에 이전에 기재된 재-산화 프로토콜을 따르도록 하는 시도는 단백질 침전을 초래하였다 (Junutula JR, Raab H, Clark S, Bhakta S, Leipold DD, Weir S, Chen Y, Simpson M, Tsai SP, Dennis MS, Lu Y, Meng YG, Ng C, Yang J, Lee CC, Duenas E, Gorrell J, Katta V, Kim A, McDorman K, Flagella K, Venook R, Ross S, Spencer SD, Lee Wong W, Lowman HB, Vandlen R, Sliwkowski MX, Scheller RH, Polakis P, Mallet W. (2008) Nature Biotechnology 26:925). 본원에서의 모든 실시예는 상기에 기재된 투석 프로토콜을 사용한다. 재산화는 쇄내 디술피드를 복원하며, 한편 투석은 항체의 조작된 시스테인(들)에 초기에 연결된 시스테인 및 글루타티온을 제거한다.
재-산화 후에, 항체를 화학식 I의 세포독성 펩티드에 접합시키고, 여기서 화학식 I의 세포독성 펩티드는 링커 및 반응성 모이어티를 포함한다. 예로서, 연결된 말레이미드 모이어티를 갖는 화학식 I의 세포독성 펩티드 (항체에 대해 10몰 당량)를 PBS 완충제 (pH 7.2) 중 재-산화 항-Her2 또는 항체 20507 Cys 돌연변이체 항체에 첨가하였다. 인큐베이션을 1시간 동안 수행하였다. 접합 과정을, 비-접합 항체로부터 접합 항체를 분리할 수 있는, 역상 HPLC에 의해 모니터링하였다. 접합 반응 혼합물을 80℃로 가열된 PRLP-S 칼럼 (4000 Å, 50 mm x 2.1 mm, 애질런트) 상에서 분석하고 칼럼의 용리를 1.5 ml/분의 유량에서 0.1% TFA 함유를 함유하는 물 중의 30-60% 아세토니트릴의 선형 구배에 의해 수행하였다. 칼럼으로부터의 단백질의 용리를 280 nm, 254 nm 및 215 nm에서 모니터링하였다.
항-Her2 또는 항체 20507 Cys 돌연변이체 항체에 연결된 말레이미드를 갖는 다양한 세포독성 펩티드의 접합 효율성은 사용된 세포독성 펩티드의 용해도에 따라 달라졌으나 대부분의 반응은 90% 초과의 접합체를 초래하였다 (표 5 및 6). 응집 상태를 평가하기 위해, 생성된 접합체를 PBS 중 0.1 ml/분의 유량에서 크기 배제 크로마토그래피 칼럼 (GE, 슈퍼덱스(Superdex)200, 3.2/30)을 수행하였다. 모든 접합체는 주로 단량체성이었다. 접합체의 대부분은 3% 미만의 이량체성 및 올리고머성 물질을 함유하고 (표 5 및 6), 이는 항-Her2 또는 항체 20507 Cys 돌연변이체 항체에 연결된 말레이미드를 갖는 이러한 세포독성 펩티드의 접합은 응집을 유발하지 않았음을 나타낸다. 유사하게, A1 또는 ybbR 태그 (실시예 104 및 105)를 통한 효소 접합은 또한 90% 초과의 접합 효율성 (표 7 및 9)을 진행시키고 3% 미만의 검출가능한 응집체를 갖는 단량체성인 접합체 (표 7 및 9)를 초래한다.
접합체는 또한, 일반적으로 약물 대 항체 비 (DAR)로서 지칭되는 항체 결합 모이어티에의 세포독성 펩티드의 평균 로딩의 관점을 특징으로 하였다. 환원 및 탈글리코실화 샘플의 경우 DAR 값은 LC-MS 데이터로부터 외삽하였디. LC/MS는 ADC 중 항체에 부착된 페이로드 (약물)의 분자의 평균 수의 정량화를 가능하게 한다. HPLC는 항체를 경쇄 및 중쇄로 분리하고, 쇄당 링커-페이로드 기의 수에 따라 중쇄 (HC) 및 경쇄 (LC)로 분리한다. 질량 스펙트럼 데이터는 혼합물 중 성분 종류, 예를 들어, LC, LC+1, LC+2, HC, HC+1, HC+2 등의 식별을 가능하게 한다. LC 및 HC 쇄 상에 평균 로딩으로부터, 평균 DAR을 ADC에 관해 계산하였다. 주어진 접합체 샘플에 관한 DAR은 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 함유하는 사량체 항체에 부착된 약물 (페이로드) 분자의 평균 수를 나타낸다. 표 5 및 6은 항-Her2 또는 항체 20507 항체 및 연결된 말레이미드를 갖는 특정 세포독성 펩티드로 수득된 접합체에 관해 수득된 DAR 값을 제공한다.
비교군(comparator)으로, 항체 20507-LC-S159C 돌연변이체 항체를 동일한 프로토콜에 따라 말레이미도카프로일 모노-메틸 아우리스타틴 F와 접합시켰다 (MC-MMAF; Doronina SO, Mendelsohn BA, Bovee TD, Cerveny CG, Alley SC, Meyer DL, Oflazoglu E, Toki BE, Sanderson RJ, Zabinski RF, Wahl AF, Senter PD. Bioconjug. Chem. 2006 Jan-Feb;17(1):114-24.). 비교군 항체 20507-LC-S159C-MMAF ADC의 특성을 표 6에 기재하였다.
실시예 102: 비-조작된 항체의 고유 디술피드 결합의 부분 환원을 통한 항체 약물 접합체의 제조
본 발명의 세포독성 약물을 또한 항체의 부분 환원을 포함하는 절차를 사용하여 비-조작된 항체의 고유 시스테인 잔기에 접합시킬 수 있다 (Doronina, S. O., Toki, B. E., Torgov, M. Y., Mendelsohn, B. A., Cerveny, C. G., Chace, D. F., DeBlanc, R. L., Gearing,R. P., Bovee, T. D., Siegall, C. B., Francisco, J. A., Wahl, A. F., Meyer, D. L., and Senter, P. D. (2003) Development of potent monoclonal antibody auristatin conjugates for cancer therapy. Nat. Biotechnol. 21, 778-784). 본 실시예에서, 5 내지 10 mg/ml의 농도에서 항-Her2 및 항체 20507 항체의 쇄간 및 쇄내 디술피드 결합을, 고체 메르캅토에틸아민을 50 mM의 최종 농도까지 첨가하고 혼합물을 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션함으로써 맨 먼저 2 mM EDTA를 함유하는 PBS에서 부분 환원시켰다. 탈염 및 1% w/v PS-20 세정제의 첨가 후에, 부분 환원된 항체 (1-2 mg/ml)를 10 mg 항체 당 0.5 내지 1 mg 페이로드 화합물 10과 4℃에서 밤새 반응시켰다. 생성된 ADC, 항-Her2-10 및 항체 20507-10을 프로테인 A 크로마토그래피에 의해 정제하였다. PBS로 기초 세척 후에, 접합체를 50 mM 시트레이트, pH 2.7, 140 mM NaCl로 용리시키고, 중화시키고 멸균 여과하였다. 생성된 2개의 ADC, 항-Her2-10 및 항체 20507-10의 평균 DAR을 소수성 상호작용 크로마토그래피 및 MS에 의해 각각 4.1 및 4.6로 측정하였다. 상기 2개의 ADC의 선택된 생화학적 특성을 표 5 및 6에 나타냈다. 항-Her2 항체 및 항체 20507 이외에도, 본 발명의 세포독성 펩티드는 상기 방법 (실시예 102)을 사용하여 모든 항체는 아닐지라도 다수의 고유 시스테인 잔기에 접합될 수 있는 것으로 예상된다.
<표 5>
다양한 항-Her2 Cys 돌연변이체 ADC의 특성
Figure pct00283
a 명칭은 화학적 접합 단계에서 사용된 화합물에 상응하는 마지막 숫자 및 돌연변이 항체의 기재로 이루어진다.
b 접합 효율성은 역상 HPLC에 의해 측정되었고 ADC로 전환된 항체의 백분율을 기재한다.
c 역상 HPLC에 따른 약물-대-항체 비.
d 응집은 분석용 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정하였고 이량체 및 올리고머 종류를 포함한다.
<표 6>
다양한 항체 20507 Cys 돌연변이체 ADC의 특성
Figure pct00284
a 명칭은 화학적 접합 단계에서 사용된 화합물에 상응하는 마지막 숫자 및 돌연변이 항체의 기재로 이루어진다.
b 접합 효율성은 역상 HPLC에 의해 측정되었고 ADC로 전환된 항체의 백분율을 기재한다.
c 역상 HPLC에 따른 약물-대-항체 비.
d 응집은 분석용 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정하였고 이량체 및 올리고머 종류를 포함한다.
실시예 103: 비-조작된 항체의 고유 디술피드 결합을 재연결하기 위해 1,3-디클로로프로판-2-온을 사용하는 항체 약물 접합체의 제조
실시예 102에서의 절차를 사용하는 비-조작된 항체의 고유 시스테인 잔기에의 접합은 자연적으로 항체를 안정화시키는 일부 고유 디술피드 결합이 파괴되어 약물 접합 후에 그 상태로 남는다는 단점을 갖는다. 이 단점을 극복하는 대안적인 방법에서, 항체의 쇄간 및 쇄내 디술피드 결합은 맨 먼저 환원된 다음에 1,3-디클로로프로판-2-온과의 반응을 통해 화학적으로 재연결된다. 이 공정에서, 항체 중 4개의 고유 쇄간 디술피드 결합은 3개의 탄소 "케톤 브릿지"에 의해 대체된다 (반응식 17). 그 다음에 케톤 기를 제2 단계에서 세포독성 약물과 특이적으로 접합시킬 수 있다. 생성된 ADC는 항체의 4개의 고유 쇄간 디술피드 결합의 위치에서 특이적으로 부착된 4개 이하의 약물을 갖는다. 부분 환원 고유 디술피드에의 전통적인 접합 (실시예 102)과 대조적으로, 실시예에서 제조된 ADC가 더 안정적이다. 일례로, 비-조작된, 재조합 항-Her2를 표준 방법에 의해 그리고 상기 기재된 바와 같이 제조하였다. 정제 후에, 변형된 항-Her2를 반응식 17에 따라 두 단계로 세포독성 약물에 접합시켰다.
<반응식 17>
Figure pct00285
단계 1: 1,3-디클로로프로판-2-온을 사용하는 재-브릿징 및 고유 디술피드 브릿지의 환원: TCEP·HCl (47.2 ㎍, 0.165 μmol)을 4℃에서 트리스 완충제 (pH 7.4, 0.25 M, 177 μL) 중의 항-Her2 IgG (2036 ㎍, 0.014 μmol) 및 1,3-디클로로프로판-2-온 (220 ㎍, 1.648 μmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 4시간 동안 4℃에서 유지하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 용리 완충제로서 PBS (pH 7.4)를 이용하여 제바(Zeba) 스핀 칼럼 7K MWCO를 사용하여 탈염하였다. 생성된 용액을 10K 아미콘(Amicon) 필터에 의해 농축하여 변형된 항-Her2를 수득하였다. ESI (용리액 A : 물 + 0.1% 포름산, 용리액 B : 아세토니트릴 + 0.04% 포름산. 구배 : 2분 내에 3 내지 80% B - 유량 1.0 ml/분. 칼럼 : 프로스위프트 모노리쓰(Proswift Monolith) 4.6*50 mm 40℃); 145399 Da (PNGase F (뉴 잉글랜드 바이오랩(New England biolab)에 의한 탈글리코실화 후에).
단계 2: 세포독성 약물의 접합: 3,5-디아미노벤조산 (355 ㎍, 2.334 μmol, DMSO 중 1.42 μL) 및 (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((1R,3S,4S)-2-(6-(아미노옥시)헥사노일)-2-아자비시클로[2.2.1]헵탄-3-카르복스아미도)-N,3-디메틸부탄아미도)-3-메톡시-5-메틸헵타노일)피롤리딘-2-일)-3-메톡시-2-메틸프로판아미도)-3-페닐프로판산 (22) (77 ㎍, 0.078 μmol, DMSO 중 0.77 μL)의 용액을 23℃에서 변형된 항-Her2 (577.5 ㎍, 0.0039 μmol, PBS 중 35 μL, pH 7.4)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 21시간 동안 23℃에서 유지하였다. 그 다음에 반응 혼합물을 용리 완충제로서 PBS (pH 7.4)를 이용하여 제바 스핀 칼럼 7K MWCO를 사용하여 2회 탈염하여 화합물 ( 22)로 접합된 변형된 항-Her2를 수득하였다. ESI-MS (용리액 A : 물 + 0.1% 포름산, 용리액 B : 아세토니트릴 + 0.04% 포름산. 구배 : 2분 내에 3 내지 80% B - 유량 1.0 ml/분. 칼럼 : 프로스위프트 모노리쓰 4.6*50 mm 40℃); 147955 Da (DAR 3), 148807 Da (DAR 4) (PNGase F (뉴 잉글랜드 바이오랩)를 이용한 처리에 의한 탈글리코실화 후에). 전체 DAR을 DAR 3.7로서 계산하였다.
비록 항-Her2 항체에 관해 여기서 단지 나타내긴 하였지만, 본 실시예에서 접합 접근법은 모든 다른 항체는 아닐지라도 다수에 적용가능한 것으로 예상된다.
실시예 104: 항-Her2 및 항체 20507 A1/ybbR 태그 돌연변이체 항체와 화학식 I의 세포독성 펩티드의 접합
변역 후의 4'-포스포판테테이닐화는 구조적으로 다양한 작은 분자로 재조합 단백질의 부위-특이적 표지화를 위한 다목적 방법이다 (Yin J, Straight PD, McLoughlin SM, Zhou Z, Lin AJ, Golan DE, Kelleher NL, Kolter R, Walsh CT (2005) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102:15815-15820) (Zhou Z, Cironi P, Lin AJ, Xu Y, Hrvatin S, Golan DE, Silver PA, Walsh CT, Yin J (2007) ACS Chem. Biol. 2:337-346). 뒤섞인 4'-포스포판테테이닐 트랜스퍼라제 (PPTases)의 촉매 작용을 기반으로 하는 이러한 효소 접근법은, 고도로 균질한 ADC의 제조를 위해 채택되었다 (WO2013184514). 효소 표지화는 IgG1 항체의 불변 영역의 다양한 부위에 11 또는 12-mer S6, ybbR, 및 A1 펩티드 서열을 혼입함으로써 완수한다. 비록 하기 실시예가 단지 한 부위를 위한 PPTase-매개 ADC 형성을 기재하긴 하지만, 접근법은 항체 스캐폴드 내에 다수의 삽입 부위에 적용가능한 것으로 예상되고 다수의 항체에 적용가능한 것으로 예상된다.
부르카르트(Burkart) 및 동료에 의한 이전 작업은 기질로서 다양한 CoA-리포터 유사체를 수용하는 다목적 효소로서의 PPTases를 밝혀냈다 (La Clair JJ, Foley TL, Schegg TR, Regan CM, Burkart MD (2004) Chem. Biol. 11:195-201). 따라서, PPTase 촉매 작용에 적합한 기질로 약물 페이로드를 전환시키기 위해, 화학식 I의 세포 독성 펩티드를 함유하는 말레이미드를 마이클(Michael) 부가를 통해 CoA의 말단 티올 기에 접합시켰다 (실시예 43 참조). 세포독성 펩티드를 효소 인식 요소에 공유결합적으로 연결시킴으로써, 생성된 세포독성 CoA-펩티드 유사체 (화합물 20)를 각각의 항체의 포매된 펩티드 서열에 효소적으로 접합시켰다. 예로서, 2.5 μM의 항-Her2-HC-ins388-ybbR 항체 또는 항체 20507-HC-ins388-A1을 바실루스 서브틸리스로부터의 1 μM의 Sfp PPTase의 존재하에 30 μM의 세포독성 CoA-펩티드 유사체 (화합물 20) (항체에 대해 12몰 당량)와 접합시켰다. 효소 접합 반응을 20 mM NaCl 및 12.5 mM MgCl2로 보충된 75 mM 트리스-HCl 완충제 (pH 8.0) 중에서 대략 16시간 동안 실온에서 수행하였다. 항체 20507-HC-ins388-A1의 세포독성 페이로드로의 거의 완전한 표지화를 보장하기 위해, 인큐베이션 시간을 또 다른 3일 연장하고 (화합물 20)의 CoA-펩티드 유사체 및 Sfp PPTase의 농도를 각각 35 μM (항체에 대해 14몰 당량) 및 2 μM로 증가시켰다. 접합 후에, Sfp PPTase 및 과잉의 시약을 프로테인 A 친화도 크로마토그래피 (프로테인 A-세파로스™, GE 헬쓰케어 라이프 사이언시즈)에 의해 제거하였다. 칼럼의 용리는 0.1 M의 아세트산나트륨 완충제 (pH 3.0)로 수행한 후에 1 M 트리스-HCl 완충제 (pH 8.0)로 즉시 중화시켰다. 마지막으로, 펩티드-태그부착된 ADC를 PD-10 탈염 칼럼 (GE 헬쓰케어)을 사용하여 PBS로 완충제 교환하였다.
페이로드 접합의 정도는 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중의 25 - 50% 아세토니트릴의 6분 선형 구배를 이용하여 PLRP-S 칼럼 (4000 Å, 5 μM, 50 x 4.6 mm, 애질런트 테크놀로지즈(Agilent Technologies)) 상에서 분석용 HPLC에 의해 측정하였다. 접합 및 비-접합 항체의 역상 분리를 280 nm의 파장에서 모니터링하였다. 이를 위해, HPLC 피크 적분은 항-Her2-HC-ins388-ybbR 및 20507-HC-ins388-A1 항체의 CoA-펩티드 유사체 (화합물 20)로의 거의 완전한 표지화를 나타냈다. 효소적으로 표지된 ADC의 정체성을 상응하는 환원 및 탈글리코실화된 샘플의 데콘볼루션된 ESI-MS 스펙트럼을 수득함으로써 추가로 확인하였다. 표 8에 나타낸 바와 같이, 관측 질량은 항-Her2-HC-ins388-ybbR 및 20507-HC-ins388-A1 항체의 약물-표지된 중쇄의 계산치 분자량과 일치하였다. 마지막으로, 효소적으로 표지된 ADC를 쇼덱스 프로테인 (Shodex Protein) KW-803 칼럼 상에서 분석용 크기-배제 크로마토그래피 (AnSEC)에 의해 분석하였다. 항체 접합체 둘 다 단량체성 ADC의 겉보기 분자량에 상응하는 체류 시간으로 용리시켰다 (표 7 참조). 어떤 다른 종류도 검출되지 않았으며, 이는 친수성 CoA-펩티드 유사체의 접합이 항체 응집을 촉진시키지 않았음을 나타냈다.
<표 7>
항-Her2 및 항체 20507 A1/ybbR 태그 ADC의 특성
Figure pct00286
a HC-ins388은 중쇄에서 잔기 Glu388 뒤에 A1 또는 ybbR 펩티드 태그의 삽입을 지칭한다. 마지막 숫자는 화학적 접합 단계에서 사용된 화합물에 상응한다.
b 접합 효율성은 역상 HPLC에 의해 측정되었고 ADC로 전환된 항체의 백분율을 기재한다.
c 역상 HPLC에 따른 약물-대-항체 비.
d 응집은 분석용 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정하였고 이량체 및 올리고머 종류를 포함한다.
<표 8>
항-Her2 및 항체 20507 A1/ybbR 태그 ADC의 특성
Figure pct00287
a HC-ins388은 중쇄에서 잔기 Glu388 뒤에 A1 또는 ybbR 펩티드 태그의 삽입을 지칭한다. 마지막 숫자는 화학적 접합 단계에서 사용된 화합물에 상응한다.
b 애질런트 6520 Q-TOF 기기 (애질런트 테크놀로지즈) 상에서 검출된 바와 같은 달톤 단위의 질량.
c 접합 중쇄에 대해 예측된 바와 같은 달톤 단위의 질량
d 커플링되지 않은 중쇄에 대해 예측된 바와 같은 달톤 단위의 질량
실시예 105: A1/ybbR-태그부착된 항-Her2 및 항체 20507 돌연변이체 항체와 화학식 I의 세포독성 펩티드의 두 단계 접합
두 단계 방법은 번역 후의 4'-포스포판테테이닐화에 의해 부위-특이적 ADC를 제조하는 대안적 전략이다 (WO2013184514). 이 접근법의 제1 단계는 생물직교성(bioorthogonal) 기, 예컨대 아지도, 알켄, 알킨, 케톤, 또는 알데히드 모이어티를 함유하는 CoA 유사체로 펩티드-태그부착된 항체의 PPTase-촉매화 표지화를 기반으로 한다. 생물직교적으로 표지된 항체의 친화도 정제 후에, 두 단계 방법의 제2 단계는 생물직교성 기와 반응성인 모이어티를 포함하는 세포독성 페이로드의 접합을 포함한다. 예로서, 다음 부분은 중쇄의 불변 영역 내에 특이적 부위에서 A1 또는 ybbR 태그 삽입을 함유하는 항체 20507 및 항-Her2 돌연변이체 항체에 대한 두 단계 방법을 기재한다. 게다가, 다음 부분은 중쇄의 불변 영역 내에 특이적 부위에서 A1 또는 ybbR 태그 삽입을 함유하는 항체 20507 및 항-Her2 돌연변이체 항체에 대한 두 단계 방법을 기재한다. 그러나, 이 전략은 다종다양한 항체의 불변 영역 내에서 다수의 삽입 부위에 광범위하게 적용가능한 것으로 예상된다. 게다가, 비록 두 단계 방법을 옥심 결찰 및 구리-프리 클릭 화학에 대해 예시되었지만,이 전략은 다른 생물직교성 화학, 예컨대 슈타우딩거(Staudinger) 결찰, 이소니트릴계 클릭 화학, 및 테트라진 결찰로 확장될 수 있음을 상상할 수 있다.
옥심 결찰 및 구리-프리 클릭 화학은 부위-특이적 단백질 접합체의 제조를 위한 효율적인, 생물직교성 방법으로서 몇몇 연구 단체에 의해 사용되었다 (Axup JY, Bajjuri KM, Ritland M, Hutchins BM, Kim CH, Kazane SA, Halder R, Forsyth JS, Santidrian AF, Stafin K, Lu Y, Tran H, Seller AJ, Biroc SL, Szydlik A, Pinkstaff JK, Tian F, Sinha SC, Felding-Habermann B, Smider VV, Schultz PG (2012) Proc Natl Acad Sci U S A. 109:16101-16106) (Rabuka D, Rush JS, deHart GW, Wu P, Bertozzi CR (2012) Nat Protoc. 7:1052-1067) (Plass T, Milles S, Koehler C, Schultz C, Lemke EA (2011) Angew Chem Int Ed Engl. 50:3878-3881) (Kaya E, Vrabel M, Deiml C, Prill S, Fluxa VS, Carell T (2012) Angew Chem Int Ed Engl. 51:4466-4469). 변역 후의 4'-포스포판테테이닐화를 옥심 결찰과 조합하기 위해, 케톤 기를 CoA에 후자를 메틸 비닐 케톤으로 반응시킴으로써 공유결합적으로 부착시켰다 (실시예 93 참조). 그 다음에, PPTase 촉매작용을 사용하여 생물직교성 케톤 기를 부위-특이적으로 항-Her2 항체의 포매된 A1 태그 상에 효소적으로 접합시켰다. 구체적으로, 2.5 μM의 항-Her2-HC-ins388-A1 항체를 바실루스 서브틸리스로부터의 1 μM의 Sfp PPTase의 존재하에 30 μM의 생성된 케톤-CoA 유사체 (화합물 49) (항체에 대해 12몰 당량)와 접합시켰다. 두 단계 방법의 제1 단계는 12.5 mM MgCl2 및 20 mM NaCl로 보충된 75 mM 트리스-HCl 완충제 (pH 8.0) 중에서 실온에서 대략 16시간 동안 수행하였다. 항-Her2-HC-ins388-A1 항체의 케톤-CoA 유사체 (화합물 49; 실시예 93 참조)로의 거의 완전한 표지화는 환원 및 탈글리코실화된 샘플의 데콘볼루션된 ESI-MS 스펙트럼을 수득함으로써 확인하였다. 유사한 반응은 또한 항체 20507-HC-ins388-A1의 근사 정량적 케톤 관능화를 초래하였다. 표 10에 나타낸 바와 같이, 관측 질량은 상응하는 케톤-관능화 중쇄의 계산치 분자량과 일치하였다. 프로테인 A 친화도 크로마토그래피 (프로테인 A-세파로스™, GE 헬쓰케어 라이프 사이언시즈)에 의해 Sfp PPTase 및 과잉의 케톤-CoA 유사체를 제거한 후에, 케톤-활성화 항체, 항-Her2-HC-ins388-A1-49 및 항체 20507-HC-ins388-A1-49를 0.1 M의 아세트산나트륨 완충제 (pH 3)로 용리시킨 후에 1 M 트리스-HCl 완충제 (pH 8)로 즉시 중화시켰다. 중화된 항체 용액을 물로 완충제 교환하고 0.22 μm 기공 크기를 갖는 필터를 통과시켰다.
이러한 두 단계 표지화 접근법의 또 다른 측면에서, 변형 CoA 유사체를 CoA 생합성 효소 CoAA, CoAD, 및 CoAE를 사용하여 화학효소적으로 제조하였다 (Worthington AS, Burkart MD (2006) Org Biomol Chem. 4:44-46) (Kosa NM, Haushalter RW, Smith AR, Burkart MD (2012) Nat Methods 9:981-984). 이 접근법을 채택하여, 케톤-관능화 CoA 유사체를 상응하는 판토테네이트 전구체 분자 (i-10), (i-12) 및 (i-13) (실시예 94, 96 및 97)로부터 제조하였다. 마찬가지로, 아지드-관능화 CoA 유사체를 각각의 판토테네이트 유도체 (i-11) (실시예 95 참조)로부터 화학효소적으로 합성하였다. 이 접근법에서, 실시예 94 내지 97로부터의 한외여과액을 추가 정제 없이 사용하고, CoA 유사체 CoA -(i-10), CoA -(i-11), CoA -(i-12) 및 CoA -(i- 13)을 항-Her2-HC-ins388-ybbR (2.5 μM)에의 접착에, 대략 30 μM의 최종 농도로 사용하였다. 항체 표지화를 12.5 mM MgCl2 및 20 mM NaCl로 보충된 75 mM 트리스-HCl 완충제 (pH 8.0) 중에서 23℃에서 16 내지 72시간 동안 1.5 μM 비. 서브틸리스 Sfp PPTase의 존재하에 수행하였다. 유사하게, CoA-(i-13)를 2 μM Sfp 효소의 존재하에 대략 25 μM의 최종 농도에서 접합시켰다.
생물직교적으로 표지된 항체의 친화도 크로마토그래피 (맵실렉트 수레(MabSelect SuRe)™, GE 헬쓰케어 라이프 사이언시즈)를 케토-CoA 유사체 49에 대한 상기에 기재된 바와 정확히 동일한 방식으로 수행하였다. 정제 후에, 중화된 항체 용액을 PBS로 완충제 교환하였다. ybbR-태그부착된 항체에의 케톤 및 아지드 모이어티의 공유결합적 부착을 PNGase F 및 TCEP (표 10)로 샘플 처리 후에 질량 분광 분석에 의해 확인하였다.
케톤 기의 부위-특이적 부착은 두 단계 방법의 제2 단계로서 케톤-활성화 항-Her2-HC-ins388-A1-49, 항체 20507-HC-ins388-A1-49, 항-Her2-HC-ins388-ybbR-(i-10), 및 항-Her2-HC-ins388-ybbR-(i-12)에의 세포독성 페이로드의 후속 옥심 결찰을 가능하게 하였다. 25 내지 67 μM의 케톤-관능화 항체를 2.5 내지 5% (v/v) DMSO를 함유하는 50 또는 100 mM 아세트산나트륨 완충제 (pH 4 - 5) 중의 아미노옥시-펩티드 유사체 (화합물 22)의 7.5 내지 40배 몰 과량 (0.5 - 1 mM)과 반응시켰다. 23 또는 37℃에서 인큐베이션의 16 내지 36시간 후에, 과잉의 아미노옥시 시약을 하이로드(HiLoad) 26/600 슈퍼덱스 200 prep 등급 칼럼 (GE 헬쓰케어) 상에서 제조용 크기-배제 크로마토그래피에 의해 제거하였다. 약물-대-항체 비 (DAR)를 0.1% 트리플루오로아세트산을 함유하는 물 중의 30 내지 60% 아세토니트릴의 5분 선형 구배를 이용하여 PLRP-S 칼럼 (4000 Å, 5 μM, 50 x 4.6 mm, 애질런트 테크놀로지즈) 상에서 분석용 HPLC에 의해 측정하였다. HPLC 흔적을 280 nm의 파장에서 이어서 접합 및 비-접합 항체의 피크 적분으로 모니터링하였다. 표 9에 나타낸 바와 같이, 두 단계 방법은 아미노옥시-펩티드 유사체 (화합물 22)를 이용한 케톤-활성화 항-Her2-HC-ins388-A1-49 및 항체 20507-HC-ins388-A1-49의 근사 정량적 표지화를 제공하였다. 그에 반해서, 케톤-활성화 항-Her2-HC-ins388-ybbR-(i-10) 항체에의 화합물 22의 부위-특이적 접합은 덜 효율적이었고, 1.3의 DAR을 갖는 ADC를 초래하였다. 옥심 결찰을 통한 ADC 형성은 면역접합체의 환원 및 탈글리코실화 후에 ESI-MS에 의해 추가로 확인되었다 (표 10). 마지막으로, 슈퍼덱스 200 10/300 GL (GE 헬쓰케어) 및 프로테인 KW-803 5 μm 300 x 8 mm (쇼덱스) 칼럼 상에서의 분석용 크기-배제 크로마토그래피 (AnSEC)는 단지 소량의 응집된 ADC를 밝혔냈으며, 이는 응집이 두 단계 접합 과정 동안에 거의 유도되지 않는다는 점을 시사한다.
조작된 항체에의 아지드 모이어티 부위-특이적 부착은 구리-프리 클릭 화학을 통한 후속 페이로드 접합을 가능하게 한다. 본 실시예에서, 생물직교성 반응은 약물-링커에 공유결합적으로 부착되는, 비시클로[6.1.0]노닌 (BCN) 기의 고리의 변형에 의해 촉진된다. 변형-촉진된 알킨-아지드 고리화 첨가를 BCN-관능화 페이로드 화합물 75의 존재하에 아지드-활성화 항-Her2-HC-ins388-ybbR-(i-11) 항체를 이용하여 촉진시켰다. 두 단계 방법의 이러한 제2 단계를 1 M NaCl 및 6% (v/v) DMSO로 보충된 100 mM 인산나트륨 완충제 (pH 7.5) 중에서 127 μM의 항-Her2-HC-ins388-ybbR-(i-11) 항체 및 1270 μM의 BCN-연결된 펩티드 유사체 (화합물 75)와 함께 수행하였다. 23℃에서 인큐베이션의 대략 16시간 후에, 과잉의 BCN 시약을 맵실렉트 수레™ (GE 헬쓰케어 라이프 사이언시즈)를 사용하여 표준 프로테인 A 친화도 크로마토그래피에 의해 제거하였다. 용리를 IgG 용리 완충제 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific))로 수행한 후, 1 M 트리스-HCl 완충제 (pH 8)로 중화시키고 PBS로 완충제 교환하였다. 표 10에 나타낸 바와 같이, 구리-프리 클릭 화학을 통한 페이로드 접합은 ADC 샘플의 환원 및 탈글리코실화 후에 ESI-MS에 의해 확인되었다. 동일한 방법을 사용하여 면역접합체의 평균 DAR을 계산하였다. 이 과정에서, 10 ㎍의 ADC를 10 μL의 50% 슬러리의 IgG 세파로스 6 패스트 플로우(Fast Flow) (GE 헬쓰케어)로 보충하였다. 수지 결합을 23℃에서 1시간 동안 온화한 교반 하에 수행하였다. 수지를 PBS로 세척한 후에, 5 ㎍의 PNGase F의 첨가 및 3시간 동안 37℃에서 후속 인큐베이션에 의해 친화도-결합 ADC를 탈글리코실화하였다. 친화도 수지를 PBS로 세척함으로써 PNGase F 효소를 제거하였다. 그 다음에, 탈글리코실화된 샘플을 1% 포름산으로 용리시킨 후에 10 M 아세트산암모늄 (pH 5)으로 즉시 중화시켰다. 항체 구축물을 중쇄 및 경쇄로 효과적으로 환원시키기 위해, 20 μL의 용리액을 10 M 아세트산암모늄 (pH 5) 중 5 μL의 0.66 M TCEP 및 6 M 구아니딘 히드로클로라이드를 함유하는 10 μL의 100 mM 포름산나트륨 완충제 (pH 4.0)로 보충하였다. 23℃에서 30분 이상 동안 인큐베이션 후에, 환원 및 탈글리코실화된 샘플을 6550 i펀넬(Funnel) Q-TOF LC/MS 시스템 (애질런트 테크놀로지즈) 상에 주입하였다. 매스헌터(MassHunter) 정성적 분석 소프트웨어 (애질런트 테크놀로지즈)를 스펙트럼 기록 및 스펙트럼 데콘볼루션의 처리에 사용하였다. 평균 DAR을 분배에 걸친 상대 피크 높이의 DAR 상태 가중 평균으로서 계산하였다. 표 9에 나타낸 바와 같이, 항-Her2-HC-ins388-ybbR-(i-11)-75 ADC는 2.0의 평균 DAR을 갖고, 이는 두 접합 단계가 거의 정량적이었음을 시사한다. 마지막으로, ADC를 바이오(bio) SEC-3 칼럼 (애질런트 테크놀로지즈) 상에서 분석용 크기-배제 크로마토그래피 (AnSEC)에 의해 검사하고 95% 단량체성인 것으로 밝혀졌고 이는 접합 과정에서 응집이 거의 유발되지 않음을 시사한다.
<표 9>
두 단계 접합 과정을 통해 표지된 A1- 및 ybbR-태그부착된 항체/ADC의 특성
Figure pct00288
a HC-ins388은 중쇄에서 잔기 Glu388 뒤에 A1 또는 ybbR 펩티드 태그의 삽입을 지칭한다. 마지막 숫자는 접합 단계에서 사용된 화합물에 상응한다. 예를 들어, 항-Her2-HC-ins388-A1-49-22 및 항체 20507-HC-ins388-A1-49-22를 맨 먼저 화합물 49로 효소적으로 접합시킨 후에 화합물 22로 화학 접합시켰다.
b 접합 효율성은 역상 HPLC에 의해 측정되었고 ADC로 전환된 항체의 백분율을 기재한다.
c 접합 효율성은 질량 분석에 의해 측정되었고 ADC로 전환된 항체의 백분율을 기재한다.
d 역상 HPLC에 따른 약물-대-항체 비.
e 질량 분석에 따른 약물-대-항체 비.
f 응집은 분석용 크기 배제 크로마토그래피에 의해 측정하였고 이량체 및 올리고머 종류를 포함한다.
<표 10>
두 단계 접합 과정을 통해 표지된 A1- 및 ybbR-태그부착된 항체/ADC의 특성
Figure pct00289
a HC-ins388은 중쇄에서 잔기 Glu388 뒤에 A1 또는 ybbR 펩티드 태그의 삽입을 지칭한다. 마지막 숫자는 접합 단계에서 사용된 화합물에 상응한다. 예를 들어, 항-Her2-HC-ins388-A1-49-22 및 항체 20507-HC-ins388-A1-49-22를 맨 먼저 화합물 49로 효소적으로 접합시킨 후에 화합물 22로 화학 접합시켰다.
b 애질런트 6520 Q-TOF 기기 (애질런트 테크놀로지즈) 상에서 검출된 바와 같은 달톤 단위의 질량.
c 접합 중쇄에 대해 예측된 바와 같은 달톤 단위의 질량
d 커플링되지 않은 중쇄에 대해 예측된 바와 같은 달톤 단위의 질량
e 미지의 정체성의 미미한 피크.
f 비변형 중쇄는 비-포스포판테테이닐화 및 케톤/아지드-관능화 종류 둘 다를 지칭한다.
표 5 및 표 6에 개시된 화학식 II 및 화학식 III의 면역접합체를 접합된 항-Her2 및 항체 20507 Cys 항체 및 연결된 말레이미드를 갖는 화학식 I의 특정 세포독성 펩티드에 의해 수득하였지만, 본 발명의 다른 링커-페이로드 조합물을 또한 사용하였다. 표 7 내지 10에 개시된 면역접합체가 이러한 예이다. 비-조작된 항체에의 접합은 또 다른 예이다. 이는 실시예 102 및 103에 기재된 바와 같이 부분 환원 디술피드 결합에의 접합에 의해 달성될 수 있다. 비-조작된 항체는 또한, 예를 들어, 화합물 89, 또는 관련 기술분야에 공지된 다양한 다른 방법을 사용한 접합된 리신일 수 있다.
실시예 106: 항-Her2 및 항체 20507 Cys 및 A1/ybbR 태그 ADC의 시험관내 세포 사멸 효능을 측정하는 세포 증식 검정
표적 항원을 자연적으로 발현하는 세포 또는 표적 항원을 발현하도록 조작된 세포주를 빈번히 사용하여 ADC의 활성 및 효능을 검정한다. 항-Her2 항체 ADC 시험관내의 세포 사멸 효능을 평가하기 위해, 2개의 조작된 세포주, MDA-MB231 클론 16 및 클론 40, 및 4개의 내인성 세포주, JimT1, HCC1954, NCI-N87 및 SKBR3 세포를 사용하였다 (Clinchy B, Gazdar A, Rabinovsky R, Yefenof E, Gordon B, Vitetta ES. Breast Cancer Res Treat. (2000) 61:217-228). MDA-MB231 클론 16 세포는 높은 카피수 (~5x105개의 카피/세포)의 재조합 인간 Her2를 안정적으로 발현하며, 한편 클론 40은 낮은 카피 수 (~5x103개의 카피/세포)의 인간 Her2를 발현한다. 높은 수준의 Her2는 HCC1954 (~5x105개의 카피/세포), SKBR-3 (5.4x105개의 카피/세포) 및 NCI-N87 (2.7x105개의 카피/세포) 세포주에서 내인성으로 발현되며, 한편 JimT-1 세포는 인간 Her2를 중간 수준 (~8x104개의 카피/세포)으로 발현한다. 음성 대조군으로서, Her2 음성 A375 세포주를 사용하였다. 항원 의존적 세포독성 효과는 항원이 결여된 세포가 아니라 세포 표면에서 충분한 항원을 발현하는 세포를 단지 사멸하여야 한다. 세포를 다양한 농도의 ADC와 함께 인큐베이션한 지 5일 후에 셀-타이터-글로™ (프로메가)로 세포 증식 검정을 수행하였다 (Riss et al., (2004) Assay Drug Dev Technol. 2:51-62). 일부 연구에서, 세포 기반 검정은 고속 대량 처리이고 자동 시스템 상에서 수행하였다 (Melnick et al., (2006) Proc Natl Acad Sci U S A. 103:3153-3158).
하나 (항-Her2-LC-S159C-44)를 제외한 모든 항-Her2 ADC가 높은 수준의 Her2 발현을 갖는 세포 주, 즉 MDA-MB231 클론 16, HCC1954, NCI-N87, SKBR3을 특이적으로 사멸시켰으나, 낮은 수준의 Her2를 발현하는 MDA-MB231 클론 40 세포에 대하여, 및 또한 Her2 음성 A375 세포에 대하여는 세포독성 효능을 나타내지 않았다 (도 1; 표 11, 표 13). 높은 수준의 Her2를 발현하는 4개의 세포주에서 항-Her2 ADC의 IC50은 20 pM 내지 700 pM의 범위에 이른다 (표 11, 표 13). 중간 수준의 Her2를 발현하는 JimT-1 세포에서, 항-Her2-ADC에 의한 세포 사멸 활성은 널리 다양했다. 일부 ADC는 높은 수준의 Her2를 발현하는 세포에서 활성이었고 JimT-1 세포에서는 아니었다. 많은 ADC는 높은 수준의 Her2를 발현하는 세포주 만큼 효과적으로 JimT-1 세포를 사멸시켰다 (표 11, 표 13). 결과는 항-Her2 ADC가 Her2+ 세포를 Her2-의존적 방식으로 사멸시켰고 ADC는 다중 세포 유형에 대하여 활성임을 시사한다. 유사하게, 야생형 항체 (실시예 102)의 부분 환원 방법에 의해 및 A1 또는 ybbR 태그를 통한 효소적 방법에 의해 (실시예 104 및 105) 및 케톤 브릿지 방법론에 의해 (실시예 103) 제조된 항-Her2 ADC가 또한 Her2+ 세포를 Her2-의존적 방식으로 사멸시켰고 (표 11), 이는 본 발명에 개시된 세포독성 펩티드는 상이한 접합 방법 및 화학을 통해 항체에 접합되는 경우 그의 효능을 보유함을 입증한다.
화학식 I의 세포독성 펩티드가 또한 다른 항체에 접합되는 경우 활성인지의 여부를 확인하기 위해, 화학식 I의 몇몇 세포독성 펩티드를 항체 20507에 접합시켰고, 그의 표적 항원은 H526, KU812 및 CMK11-5 세포에서 발현되나 Jurkat 세포에서는 아니다. 도 2 및 표 12에 나타낸 바와 같이, Her2+ 세포에서 세포 사멸 활성을 나타내는 페이로드 링커 조합물은 또한 항체 20507에 접합시 활성이어서, 표적 항원을 발현하는 세포를 사멸한다. 결과는 본원에 기재된 화학식 I의 세포독성 펩티드가 광범위한 세포 유형에 대하여 세포독성을 나타냄을 나타낸다.
<표 11>
시험관내 세포 사멸 검정에서 ADC 효능: MDA-MB231 클론 40, MDA-MB231 클론 16, HCC1954 및 JimT-1 세포 증식 검정에서 항-Her2 ADC의 IC50.
Figure pct00290
a 명칭은 화학적 접합 단계에서 사용된 화합물에 상응하는 마지막 숫자 및 돌연변이 항체의 기재로 이루어진다. HC-ins388은 중쇄에서 잔기 Glu388 뒤에 A1 또는 ybbR 펩티드 태그의 삽입을 지칭한다.
b 검정에서 사용된 최고 농도는 6.67E-02 μM이었다. 따라서 6.67E-02 μM의 IC50 값은 검정에서 ADC의 불활성을 지칭한다.
c 값은 검정에서 사용된 최고 농도에 상당하며, 따라서 ADC의 불활성을 나타낸다.
<표 12>
시험관내 세포 사멸 검정에서 ADC 효능: Jurkat, H526, KU812 및 CMK11-5 세포 증식 검정에서 항체 20507 ADC의 IC50.
Figure pct00291
a 명칭은 화학적 접합 단계에서 사용된 화합물에 상응하는 마지막 숫자 및 돌연변이 항체의 기재로 이루어진다. HC-ins388은 중쇄에서 잔기 Glu388 뒤에 A1 펩티드 태그의 삽입을 지칭한다.
b 검정에서 사용된 최고 농도는 6.67E-02 μM이었다. 따라서 6.67E-02 μM의 IC50 값은 검정에서 ADC의 불활성을 지칭한다.
<표 13>
시험관내 세포 사멸 검정에서 ADC 효능: A375, HCC1954, JimT-1 NCI-N87 및 SKBR3 세포 증식 검정에서 항-Her2 ADC의 IC50.
Figure pct00292
a 명칭은 화학적 접합 단계에서 사용된 화합물에 상응하는 마지막 숫자 및 돌연변이 항체의 기재로 이루어진다.
b 검정에서 사용된 최고 농도는 6.67E-02 μM이었다. 따라서 6.67E-02 μM의 IC50 값은 검정에서 ADC의 불활성을 지칭한다.
c N.D.: 측정되지 않음
실시예 107: 항-Her2 및 항체 20507 ADC의 약물동태학적 연구
긴 혈청 반감기는 ADC의 높은 생체내 효능에 중요한 것으로 입증되었다 (Hamblett, et al., "Effects of drug loading on the antitumor activity of a monoclonal antibody drug conjugate," Clin Cancer Res., 10:7063-7070 (2004); Alley et al., Bioconjug Chem . 19:759-765 (2008)). 항체에의 소수성 약물 페이로드를 부착하는 것이 항체의 특성에 영향을 미칠 수 있을 것이고, 이는 생체내에서 ADC의 급속한 소거 (Hamblett et al., 2004)를 야기하고 생체내 효능은 불량할 수 있다. 생체내 ADC의 소거에 대한 본 발명의 다양한 세포독성 펩티드의 접합의 효과를 평가하기 위해, 종양이 없는 마우스에서 약물동태학적 연구를 수행하였다. 뮤린 혈장에서 본 발명의 면역접합체의 세포독성 펩티드 (즉 약물 부분)를 검출하기 위해, 본 발명의 다양한 세포독성 펩티드를 또한 인식하는 항-MMAF 항체를 발생시켰다. 면역접합체의 검출을 위한 ELISA를, 혈장으로부터 인간 IgG 분자를 포획하기 위해 항-hIgG 항체, 및 두 가지 별도의 검정에서 신호 검출을 위해 제2 항-인간 IgG 항체 및 항-MMAF 항체를 사용하여 기로스(Gyros)™ 플랫폼 상에서 발전시켰다. 항-MMAF 항체는 본 발명의 세포독성 펩티드를 인식하고 따라서 세포독성 펩티드가 부착된 ADC ("무손상" ADC)를 검출하는데 사용될 수 있다. 따라서, 두 ELISA는 인간 항체 및 "무손상" ADC 각각의 혈청 농도를 측정한다.
PK 연구의 예는 도 3 및 도 4에 나타냈다. 1 mg/kg의 단일회 용량으로 하기 ADC를 그룹당 3마리의 마우스에게 투여하였다: 항-Her2-LC-S159C-10 (도 3A), 항-Her2-LC-S159C-47 (도 3B), 항-Her2-LC-S159C-77 (도 3C), 항-Her2-LC-S159C-80 (도 3D), 항-Her2-LC-S159C-79 (도 3E), 항-Her2-LC-S159C-78 (도 3F), 항-Her2-LC-S159C-14 (도 3G), 항-Her2-HC-E152C-S375C-10 (도 3H), 항-Her2-10 (도 3I), 항체 20507-HC-E152C-10 (도 4A), 항체 20507-LC-K107C-47 (도 4B), 항체 20507-HC-ins388-A1-20 (도 4C), 항체 20507-HC-E152C-S375C-10 (도 4D), 항체 20507-10 (도 4E), 항-Her2-HC-ins388-ybbR-20 (도 4G), 항체 20507-HC-ins388-A1-49-22 (도 4H), 항-Her2-HC-ins388-A1-49-22 (도 4I), 및 항-Her2-HC-ins388-ybbR-(i-11)-75 (도 4J) ADC. 항체 20507-HC-ins388-A1-20 (도 4F)을 10 mg/kg의 단일회 용량으로 투여하였다. 혈장 샘플을 3주 과정에 걸쳐 수집하고 항체 20507 및 항-Her2 ADC를 포함한 IgG 분자를 포획하기 위해 항-hIgG 항체, 뿐만 아니라 각각의 네이키드 항체를 사용하여 ELISA에 의해 검정하였다. 그 다음에 항-MMAF 및 항-hIgG 항체를 두 가지 별도의 검정으로 검출을 위해 사용하였다. 항-MMAF 항체 검정은 항체 접합체의 농도만을 측정하고 항-hIgG는 항체 접합체 및 페이로드가 결여된 항체 둘 다를 정량화한다. 마우스에게 주사된 바와 같은 동일한 물질을 사용하여 개별적으로 각각의 ADC에 대해 표준 곡선을 발생시켰다. 따라서 마우스에게 주사 후에 항체 20507 또는 항-Her2 ADC의 약물 로딩에 대한 어떤 변화도 일어나지 않는다면 항-MMAF 및 항-hIgG를 이용한 검정은 동일한 농도 판독을 산출하여야 한다. 페이로드의 일부를 상실한 ADC의 경우, 항-MMAF 항체를 이용한 검정은 항-hIgG 검정보다 더 낮은 농도를 측정할 것이다. 따라서 두 농도 판독의 비교는 마우스에서 생체내 인큐베이션 동안에 항체 20507 및 항-Her2 ADC로부터 약물-방출 측정을 가능하게 한다.
도 3 및 도 4에 나타낸 바와 같이, 항-hIgG 및 항-MMAF 검정 둘 다에 의해 수득된 혈장 농도는 항-Her2 및 항체 20507 항체 둘 다에서 조작된 Cys(들)에 접합하는 말레이미드 페이로드를 갖는 대부분의 ADC와 잘 매칭되며 (도 3A-I, 도 4D), 이는 이들 ADC에 대한 시험 기간 동안에 이들 ADC에서 최소한의 약물 상실이 있음을 시사한다. 야생형 항체, 항-Her2-10 (도 3I) 및 항체 20507-10 (도 4E)의 부분 환원에 의해 제조된 2개의 ADC는, 항-hIgG 및 항-MMAF 검정에 의해 측정된 농도 (전자는 후자보다 더 높음) 사이의 강한 격차를 나타냈고, 이는 상기 2개의 ADC의 경우 시험 기간 동안에 상당한 약물 상실이 있음을 시사한다. 효소-매개 방법에 의해 제조된 ADC, 항체 20507-HC-ins388-A1-20, 항-Her2-HC-ins388-ybbR-20, 항체 20507-HC-ins388-A1-49-22, 및 항-Her2-HC-ins388-A1-49-22 ADC는 항-IgG 및 항-MMAF 검정에 의해 측정된 농도 간에 양호한 일치를 나타냈다 (도 4F, G, H 및 I). 그에 반해서, 항-Her2-HC-ins388-ybbR-(i-11)-75 ADC (도 4J)는 항-hIgG와 항-MMAF 검정 간의 큰 격차를 나타냈고, 이는 ADC가 PK 연구 과정 동안에 상당한 약물 탈접합을 겪음을 시사한다.
도 4에 나타낸 바와 같이, 항-hIgG 검정 및 항-MMAF 검정 둘 다에 의해 수득된 혈장 농도는 항체 20507-HC-E153C-10 ADC, 항체 20507-LC-K107C-47 ADC 및 항체 20507-HC-ins388-A1-20 ADC와 잘 일치하고, 이는 시험 기간 동안에 이들 ADC에서 최소한의 약물 상실이 있음을 시시한다.
마우스 순환에서 3주 후에 ADC를 위한 약물 페이로드의 보유를 보다 상세히 측정하기 위해, ADC는 말단 채혈을 통해 수집된 마우스 혈청으로부터 친화도-정제되고 ADC에 부착된 약물 페이로드는 MS 분석에 의해 분석하였다. 전형적인 과정에서, 200 μl의 혈장을 10 mM EDTA를 함유하는 동일한 양의 PBS로 희석하였다. 희석액에, 10 μl의 친화도 수지 (IgG 실렉트(Select) 세파로스 6 패스트 플로우; GE 헬쓰케어 17-0969-01; 50% 슬러리)를 첨가하였다. 희석된 혈장 샘플과 함께 수지의 인큐베이션을 온화한 교반을 적용하여 수지 침강을 피함으로써 실온에서 1시간 동안 수행하였다. 그 다음에 수지를 여과해 내고 200 μl의 PBS로 2회 세척하였다. 항체를 탈글리코실화하기 위해, 10 μl의 PBS로 희석된 10 μl의 PNGase F (1 mg/mL, 1/2x TBS pH 7.4, 2.5 mM EDTA, 50% 글리세롤)를 수지에 첨가하고 수지 및 혼합물을 37℃에서 2-3시간 동안 인큐베이션하였다. 친화도 수지를 200 μl PBS로 2회 세척함으로써 PNGase F를 제거하고, 20 μl의 1% 포름산을 첨가하고 수지를 여과해 냄으로써 샘플을 친화도 수지로부터 2회 용리시켰다. 합해진 용리액을 20 μl의 6 M 구아니딘 히드로클로라이드 및 5 μl의 환원 완충제 (0.66 M TCEP, 3.3 M 아세트산암모늄, pH 5)로 희석하였다. 항체를 효과적으로 환원시키기 위해, 분석 전에 샘플을 실온에서 30분 이상 동안 인큐베이션하였다. 애질런트 테크놀로지즈 6550-i펀넬 QTOF MS / 애질런트 1260 HPLC 시스템으로 LCMS를 수행하였다. 표준 역상 크로마토그래피를 80℃에서 0.5 ml/분의 유량으로 PLRS 칼럼 (8 μm, 2.1 x 50 mm, 1000Å, 애질런트)을 이용하여 샘플 탈염에 사용하였다. 6분 내에 0.1% 포름산을 함유하는 20%- 내지 60%-아세토니트릴의 선형 구배를 사용하여 용리를 수행하였다. 애질런트 정성적 분석을 스펙트럼 기록 및 스펙트럼 데콘볼루션의 처리에 사용하였다. 분석용으로 스펙트럼 기록을 모든 관련된 종류의 용리를 커버하는 시간 간격에 걸쳐 합산하였다. 합산된 스펙트럼을 충전 산태에서 데콘볼루션시켰고 데콘볼루션된 스펙트럼의 영상을 기록하였다. 할당가능한 종류에 대해 피크 강도의 값을 추출하였다. DAR 상태 및 단편 종류의 할당은 약물 분자를 갖는 접합체의 예상 질량 이동 및 분석된 항체의 서열로부터 계산된 질량의 값을 기반으로 이루어졌다. 평균 DAR을 분포에 걸쳐서 모든 DAR 상태의 상대 피크 높이를 사용하여 계산하였다. 평균 항체 DAR을 2개의 평균 경쇄 및 2개의 평균 중쇄로부터의 DAR의 합계로서 계산하였다.
MS에 의해 측정된 바와 같이, 마우스 순환에서의 3주 후 정제된 ADC의 평균DAR을, 원래 ADC 제제 중의 DAR과 비교하였다. "페이로드 보유"는 2개의 DAR (원래 ADC 제제의 DAR로 나눈 마우스 혈장으로부터 단리된 ADC의 DAR)의 비로부터 계산되었고, 마우스 순환에서 3주 후 ADC 상에 보유된 페이로드의 백분율을 나타낸다. MS에 의해 측정된 바와 같은 다양한 ADC의 페이로드 보유는 대개 항-MMAF 항체를 사용하는 상기 언급된 ELISA 검정에 의해 수득된 결과와 일치한다 (도 3 및 4).
표 14에 나타낸 바와 같이, 페이로드 보유는 화합물, 접합 부위 및 접합 방법에 따라 5% 내지 96%로 넓은 범위에 이르렀다. PPTase 효소적 방법에 의해 제조된 ADC의 경우, 화합물 20 및 22에 대한 페이로드 보유 (MS에 의해)는 50% 초과이며, 한편 화합물 75의 경우 페이로드 보유는 단지 5%이다 (표 14). 후자의 경우에, 말단 채혈된 혈청으로부터 정제된 ADC의 질량 분광 평가는 약물-링커의 카르바메이트 모이어티의 거의 정량적 절단을 밝혀냈으며, 한편 항체와 세포독성 페이로드의 클릭 화학 연결은 순환에서 안정적인 상태로 잔류하였다.
말레이미드 기를 특징으로 하는 Cys 반응성 세포독성 펩티드로 제조된 ADC의 경우, 페이로드 보유는 화합물 구조 및 접합 부위에 따라 18% 내지 96% 범위에 이르렀다 (표 14). 혈장 샘플로부터 단리된 ADC에 관한 MS 결과는 ADC로부터 페이로드의 탈접합이 말레이미드 페이로드와 접합된 Cys 잔기의 티올 기 사이에서 일어났음을 확인해 준다. 링커 구조의 어떤 파괴도 관찰되지 않았다. 따라서 회수된 비접합 항체의 관측 질량이 비변형 항체의 것이므로, 말레이미드 연결된 페이로드에 대한 페이로드 보유는 가역 마이클 부가를 통해 반대로 탈접합에 관련될 수 있다.
말레이미드와 유리 티올 기 간의 티오에테르를 형성하는 반응은 공지되어 있다 (Bioconjugate Chem. 2011, 22, 1946-1953). 가역 반응은 생체내 및 시험관내에서 ADC로부터 말레이미드 약물 페이로드의 탈접합에 원인이 되는 것으로 여겨진다. 후속적으로, 탈접합된 페이로드의 말레이미드는 아미노산, 펩티드 또는 단백질의 형태로 유리 티올로부터 반응할 수 있다. (Bioconjugate Chem. 2008, 19, 759-765; Nat. Biotechnol. 2012, 30, 184-189).
본 발명의 특정 세포독성 펩티드의 경우, 마우스 혈액 순환에서 ADC로부터 의 페이로드 탈접합은 무시해도 될 정도인 것으로 밝혀졌다 (표 14). 마우스 순환에서 3주 후에, 90%의 페이로드는 항체의 조작된 Cys에 접합하는 화합물 47, 14, 77, 80, 79, 및 78로 제조된 ADC를 위해 보유되는 것으로 밝혀졌다. 혈장 샘플로부터 단리된 이들 ADC의 MS 분석은 ADC의 질량이 각각의 접합된 약물 페이로드에 대해 18 달톤 증가되었음을 밝혀냈으며, 이는 가수분해 반응이 일어났음을 시사한다. 말레이미드 기와 시스테인의 반응으로부터 생성된 숙신이미드 고리는 자발적인 가수분해를 겪는 것으로 밝혀졌다 (Gregory, J. Am. Chem. Soc. 1955, 77, 3922; Knight, P. Biochem . J. 1979, 179, 191-197; Khan M.N. J Pharm Sci. 1984, 73:1767-1771). 사실상, 기는, 접합체를 염기성 pH에 노출시킴으로써 의도적으로 가수분해될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Biochem. J. 1979 179, 191-197]; Biochemistry 1976, 15, 2863-8]; [Chem Commun. 2011; 47: 5452-5454]). 숙신이미드 기의 가수분해 고리 개방은 상기 언급된 말레이미드 가역 반응에 적용되지 않을 안정적인 티오에테르 결합을 생성할 것이다 (Bioconjugate Chem. 2011, 22, 1946-1953; Nat. Biotechnol. 2012, 30, 184-189; Nat. Biotechnol. 2014, 32, 1059). 화합물 47, 14, 77, 80, 79, 및 78에 의해 예시되는 본 발명의 특정 화합물은 항체에서 Cys 잔기에 접합시 더 큰 숙신이미드 고리 가수분해를 갖고 그로 인해 보다 안정적인 항체 약물 접합체를 생성한다.
<표 14>
IP-MS에 의해 측정된 바와 같이 실험에 사용된 적이 없는 마우스에서 3주 후에 선택된 ADC의 페이로드 보유
Figure pct00293
실시예 108: ADC의 시험관내 안정성
본 발명의 세포독성 펩티드로 제조된 ADC의 안정성에 대한 숙신이미드 고리 가수분해의 효과를 시험관내에서 추가로 연구하였다. 항체에 접합된 말레이미드 페이로드의 숙신이미드 고리의 가수분해 및 페이로드 탈접합으로부터 생긴 질량 변화를 LC-MS에 의해 모니터링하였다. 숙신이미드 고리의 가수분해는 특정 조건, 예컨대 높은 pH, 고온, 또는 높은 염에 의해 모의되는 것으로 보고되었다 (J. Am. Chem. Soc. 1955, 77, 3922; Biochemistry, 1976, 1 5, 2836; Biochem . J. 1979, 179, 191-197; J Pharm Sci. 1984, 73:1767-1771, Bioorg. Med. Chem. Lett. 17 (2007) 6286-6289). ADC의 시험관내 안정성을 pH의 함수로서 탐침하기 위해, 항-Her2-LC-S159C-10 및 항-Her2-LC-S159C-47을 pH 7.0 내지 pH 9.0의 범위에 이르는 완충제에서 37℃에서 인큐베이션하고 ADC를 MS에 의해 다양한 시점에서 분석하여 페이로드 탈접합 및 숙신이미드 가수분해의 정도를 측정하였다. 탈접합된 ADC, 가수분해된 숙신이미드 고리를 갖는 부착된 페이로드를 갖는 ADC 및 무손상 숙신이미드 고리를 갖는 부착된 페이로드를 갖는 ADC의 상대 개체군을 상응하는 ADC 종류의 상대 MS 강도로부터 계산하였다. 도 5A에 나타낸 바와 같이, 인큐베이션 완충제의 pH의 증가는 항-Her2-LC-S159C-10의 탈접합을 향상시킨다. pH 7.0 완충제에서, 항-Her2-LC-S159C-10은 10시간 후에 대략 10% 페이로드 상실로 안정적이었다. 그러나, 10시간 동안 pH 8.0 및 pH 9.0 완충제에서의 인큐베이션은 페이로드 탈접합의 정도를 각각 대략 30% 및 60%로 증가시켰다 (도 5A). 그에 반해서, 25시간 동안 37℃에서 pH 7.0 내지 9.0을 갖는 완충제 중의 항-Her2-LC-S159C-47의 인큐베이션은 15% 초과의 탈접합을 초래하지 않았다 (도 5C).
동시에, 상기 2개의 ADC의 숙신이미드 고리 가수분해의 정도를 또한 다양한 시점에서 측정하였다 (도 5B 및 도 5D). ADC 둘 다의 경우, 인큐베이션 완충제의 pH의 증가는 숙신이미드 고리의 가수분해를 모의하였다. 항-Her2-LC-S159C-47의 경우 숙신이미드 고리 가수분해는 항-Her2-LC-S159C-10의 경우보다 상당히 보다 급속하게 일어났다. 25시간 동안 pH 7.5 완충제에서 항-Her2-LC-S159C-10의 인큐베이션은 항체에 여전히 부착된 30%의 페이로드 및 20%의 페이로드의 탈접합을 야기하였다 (도 5A 및 도 5B). 동일한 인큐베이션 조건 하에, 항-Her2-LC-S159C-47은 단지 대략 10%의 페이로드를 상실하였며, 한편 대략 90%의 부착된 페이로드가 가수분해되었다 (도 5C 및 도 5D). 도 5E, 및 F에 나타낸 바와 같이, 시험관내 페이로드 접합 및 숙신이미드 고리 가수분해를 37℃에서 24시간 동안 pH 8.5 완충제에서 인큐베이션된 항-Her2-LC-S159C-10, 항-Her2-LC-S159C-77, 항-Her2-LC-S159C-80, 항-Her2-LC-S159C-79, 항-Her2-LC-S159C-78 및 항-Her2-LC-S159C-14 ADC에 대해 분석하였다. 페이로드의 탈접합은 항-Her2-LC-S159C-77, 항-Her2-LC-S159C-80, 항-Her2-LC-S159C-79, 항-Her2-LC-S159C-78 및 항-Her2-LC-S159C-14 ADC에 대해 검출가능하지 않았지만 (도 5E), 고도의 숙신이미드 고리 가수분해가 모든 ADC에 대해 관찰되었다 (도 5F). 따라서, 화합물 47, 14, 77, 80, 79, 및 78에 의해 예시된 본 발명의 특정 화합물은 가역 말레이미드 반응을 통해 탈접합에 대해 더 낮은 감수성 및 숙신이미드 고리 가수분해를 통한 추가의 안정화로 개선된 ADC 안정성을 나타낸다.
실시예 109: 항체 20507 ADC를 이용한 생체내 효능 연구
생체내 이종이식 종양 모델은 인간에서 관찰되는 생물학적 할성을 모의하고 면역-결핍 누드 마우스 내로의 적절하고 잘 특성화된 인간 원발성 종양 또는 종양 세포주의 그라프팅으로 이루어진다. 항암 시약을 이용한 종양 이종이식 마우스의 치료에 대한 연구는 시험 시약의 생체내 효능과 관련된 유익한 정보를 제공하였다 (Sausville and Burger, (2006) Cancer Res. 66:3351-3354). H526 세포는 그의 표면 상에 항체 20507의 항원을 발현하고 항체 20507 ADC에 의해 선택적으로 사멸되기 때문에 (도 2, 표 12), 세포주를 사용하여 항체 20507 ADC의 생체내 활성을 평가하기 위한 이종이식 모델을 발생시켰다. 모든 동물 연구는 문헌 [Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH publication; National Academy Press, 8th edition, 2001)]에 따라 수행하였다. H526 세포를 nu/nu 마우스에 피하로 이식하였다 (Morton and Houghton, Nat Protoc. 2007;2:247-250). 종양 크기가 ~200 mm3에 이른 후, 3개의 항체 20507 ADC를 3 mg/kg 또는 10 mg/kg의 단일회 용량으로정맥내 주사에 의해 마우스에게 투여하였다. 종양 성장은 ADC 주사 후 주기적으로 측정하였다. 각각의 처리 군은 7마리의 마우스를 포함하였다. 이러한 생체내 효능 연구의 예를 도 6A에 도시하였다. 마우스를 3 mg/kg의 항체 20507-HC-E152C-10 ADC로 처리하는 것은 종양 성장 억제를 유발하였으며 한편 10 mg/kg의 항체 20507-HC-E152C-10 ADC로의 처리는 종양 퇴축을 야기하였다 (도 6A). 항체 20507-HC-E152C-10 ADC의 효능은 양성 대조군 ADC, 참조 화합물 MC-MMAF로 접합된 항체 20507-HC-E152C-MMAF의 것과 동일하였다. ADC 처리와 관련된 어떤 체중 감소도 관찰되지 않았으며 이는 낮은 전신 독성을 시사한다. 결과는 10 mg/kg의 단일회 용량 치료로, 항체 20507-HC-E152C-10 ADC는 상당한 체중 감소 없이 H526 종양의 퇴축을 효과적으로 유발했음을 확인해 주었다. 제2 연구에서, 항체 20507-HC-E152C-10 및 항체 20507-HC-ins388-A1-20 ADC를 3 mg/kg and 10 mg/kg의 용량으로 H526 종양-보유 마우스에게 투여하였다 (도 6B). ADC 둘 다 3 mg/kg에서 유사한 종양 억제 활성 및 10 mg/kg에서 종양 퇴축 활성을 나타냈다. 항체 20507-HC-E152C-10 ADC가 20507-HC-ins388-A1-20 ADC보다 약간 더 효과적이었다.
또 다른 실시예에서, 본 발명자들은 두 항체 20507 ADC 항체 20507-HC-E152C-S375C-10 및 항체 20507-10의 생체내 효능을, H526 이종이식 모델에서 비교하였다 (도 6C). 2개의 ADC를 2개의 상이한 방법을 사용하여 상이한 Cys에 접합하는 동일한 페이로드, 화합물 10으로 제조하였다. 항체 20507-HC-E152C-S375C-10은 조작된 Cys 잔기, HC-E152C 및 HC-S375C에 접합된 화합물 10을 갖는, 실시예 101에 기재된 바와 같은 Cys 돌연변이체 항체로 제조하였다. 항체 20507-10은 고유 Cys 잔기에 접합된 화합물 10을 갖는 실시예 102에 기재된 바와 같은 야생형 항체 20507의 부분 환원 방법을 사용하여 제조하였다. 항체 20507-10은 항체 20507-HC-E152C-S375C-10 (DAR 3.9)보다 약간 더 높은 DAR (DAR 4.6)을 갖는다 (표 6). 약물동태학적 연구는 상기 2개의 ADC가 마우스에서 3주의 순환 동안에 매우 상이한 정도로 동일한 페이로드를 보유하였고 (도 4D, 도 4E, 표 14): 항체 20507-HC-E152C-S375C-10은 항체 20507-10 (20%) 보다 훨씬 더 양호한 페이로드 보유율 (56%)을 보임을 나타냈다.
H526 이종이식 모델에서, 동일한 투여량의 항체 20507-HC-E152C-S375C-10이 항체 20507-10보다 종양을 억제하는데 보다 효과적이다 (도 6C). 항원이 H526 세포에서 발현되지 않는 항-Her2-HC-E152C-S375C-10은, 어떤 종양 억제 활성도 나타내지 않았다.
제3 연구에서, 항체 20507-HC-E152C-10 및 항체 20507-HC-ins388-A1-49-22 ADC를 H526 종양-보유 마우스에게 7 mg/kg의 단일회 용량으로 정맥내 주사하였다 (도 6D). 항체 20507-HC-ins388-A1-49-22 ADC는 종양 억제를 보였지만, 항체 20507-HC-E152C-10 ADC는 동일한 용량 수준에서 종양 퇴축을 나타냈으며, 이는 후자의 ADC의 더 높은 효능을 나타내는 것이다. 어떤 상이한 종양 억제 활성도 이소형 대조군 ADC, 항-Her2-HC-ins388-A1-49-22의 경우에는 관찰되지 않았으며, 이는 항체 20507 ADC에 의한 항원 특이적 세포 사멸을 시사한다. 함께, 모든 세가지 연구는 다양한 방법에 의해 항체에 부착된 본 발명의 세포독성 펩티드는 마우스 이종이식 모델에서 항원-발현 암의 퇴축을 유발할 수 있음을 확인해 준다.
실시예 110: Sfp 4'-포스포판테테이닐 트랜스퍼라제 (PPTase)의 제조
PIPE 방법 (문헌 [Klock et al., Proteins 71:982-994 (2008)] 참조)을 사용하여 바실루스 서브틸리스 Sfp PPTase를 pET22b 발현 벡터 내로 클로닝하였다. C-말단 His6 태그의 절단을 허용하기 위해, TEV (담배 식각 바이러스) 프로테아제 인식 부위를 Sfp 코딩 서열의 하류에 삽입하였다. 클로닝에 사용된 모든 프라이머 및 Sfp 단백질 서열을 표 15에 기재하였다.
<표 15>
Sfp 단백질 서열 및 클로닝에 사용된 프라이머
Figure pct00294
단백질 발현 및 정제를 문헌 [Yin et al. (문헌 [Nat. Protoc. 1:280-285 (2006)] 참조)]에 따라 이를 약간 변형시켜서 수행하였다. 간결히 말하자면, 1 L의 TB 배지를 pET22b/sfp 발현 플라스미드를 보유하는 에스케리키아 콜라이 BL21 (DE3) 세포의 포화된 밤새 배양물로부터 접종하였다. 배양물을 37℃에서 250 rpm에서 진탕시키고, 0.7의 광학 밀도 (600 nm)에 도달한 후에 1 mM의 IPTG를 첨가하여 유도시켰다. 온도를 30℃로 저하시키고 배양물을 대략 16시간 동안 250 rpm에서 진탕시킨 후에 박테리아 세포를 원심분리 (3400 rpm에서 20분)에 의해 수확하였다. 사용 전에, 세포 펠릿을 -20℃에서 보관하였다. 단백질 정제를 시작하기 위해, 동결된 펠릿을 대략 15분 동안 얼음 상에서 해동시키고, 20 mM 트리스/HCl (pH 8), 0.5 M NaCl, 5 mM 이미다졸, 및 2 U/mL DNase I을 함유하는 완충제 (습식 중량 1 g의 세포당 3 mL의 완충제)에 재현탁시켰다. 간헐적 1초의 지연으로 1초 초음파처리 펄스를 사용하여 2분의 총 시간 동안 초음파 처리에 의해 세포 용해를 유도하였다. 불용성 세포 잔해물을 제거하기 위해, 생성된 용해물을 4℃에서 25분 동안 40,000×g에서 원심분리하였다. 그 다음에, 4 mL의 50% Ni-NTA 아가로스 슬러리 (퀴아젠)를 정화된 용해물에 첨가함으로써 His6-태그부착된 Sfp 효소를 포획하였다. 4℃에서 1시간 동안 진탕시킨 후에, 수지-용해물 혼합물을 1회용 칼럼에 부었다. 침강된 수지를 50 칼럼 부피의 50 mM 트리스/HCl (pH 8), 300 mM NaCl, 및 20 mM 이미다졸로 세척하였다. 6 칼럼 부피의 50 mM 트리스/HCl (pH 8), 300 mM NaCl, 및 250 mM 이미다졸로 용리를 수행하였다. Sfp 효소를 50 mM 트리스/HCl (pH 8) 및 50 mM NaCl을 함유하는 TEV 절단 완충제로 교환하였다. 1시간 동안 23℃에서 및 이어서 대략 16시간 동안 4℃에서 7% (w/w) TEV 프로테아제를 이용한 소화에 의해 His6 태그 제거를 수행하였다. 그 다음에 TEV-소화된 Sfp 효소를 PBS로 미리 평형화된 새로운 Ni-NTA 칼럼 상에 재로딩하였다. 칼럼 유입으로부터 및 5 칼럼 부피의 50 mM 트리스/HCl (pH 8), 300 mM NaCl, 및 20 mM 이미다졸을 포함하는 세척 단계로부터 절단된 효소를 수집하였다. 그 다음에, 정제된 Sfp 효소를, 3.5 kDa 컷-오프를 갖는 슬라이드-에이-라이저 투석 카세트(Slide-A-Lyzer Dialysis Cassettes) (피어스(Pierce))를 사용하여 10 mM 트리스/HCl (pH 7.4), 1 mM EDTA, 10% 글리세롤에 대하여 투석하였다. 투석물을 0.22 ㎛ 필터에 통과시킨 후에, 28620 M-1cm-1의 몰 흡광 계수를 사용하여 280 nm에서의 자외선 분광법 (ND-1000 UV-Vis 분광광도계, 나노드롭 테크놀로지스(NanoDrop Technologies) (델라웨어주 윌밍턴))에 의해 Sfp 효소의 수율을 정량하였다. 배양물 리터당 19 ㎎의 TEV-절단된 Sfp 효소가 수득되었다. 그 다음에, 10 kDa 컷-오프를 갖는 아미콘 울트라 원심분리 필터 유닛(Amicon Ultra Centrifugal Filter Unit) (밀리포어(Millipore))을 사용하여 Sfp PPTase를 151 μM로 농축하였다. SDS-PAGE에 의해 효소의 순도를 평가하고, LC-MS에 의해 His6 태그 제거를 확인하였다. 분석용 크기-배제 크로마토그래피에 따라서, TEV-절단된 Sfp PPTase는 90% 단량체성이다. 농축 효소를 분취하고, 액체 질소에서 급속 냉동시키고, -80℃에서 보관하였다.
본 발명의 다른 측면 및 실시예는 열거된 실시양태의 하기 목록에서 제공된다. 각각의 실시양태에서 특정된 특징은 다른 특정된 특징과 조합되어 본 발명의 추가 실시양태를 제공할 수 있다는 점을 인식할 것이다.
실시양태 1. 화학식 I의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 입체이성질체.
<화학식 I>
Figure pct00295
상기 식에서,
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나, R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00296
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11,
Figure pct00297
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R8은 H이고;
각각의 R11은 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴,
Figure pct00298
이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R15는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 비치환 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
실시양태 2. 실시양태 1에 있어서,
R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 C-결합 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되는 것인 화합물.
실시양태 3. 화학식 I의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 입체이성질체, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
<화학식 I>
Figure pct00299
상기 식에서,
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00300
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NR12(CH2)mR16, -LR9, -NHS(O)2R11, -NHS(O)2(CH2)mN3, -NHS(=O)2LR9,
Figure pct00301
이고;
R5는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, -((CH2)mO)nR12, 또는 -CN, -C(=O)NH2 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R7은 LR9이고;
R8은 H 또는 LR9이고;
각각의 L은 독립적으로 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
R9는
Figure pct00302
, -NR12C(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00303
, SH, -SSR15, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR12S(=O)2(CH=CH2), -NR12C(=O)CH2R10, -NR12C(=O)CH2Br, -NR12C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2,
Figure pct00304
, -CO2H, -NH2, -NCO, -NCS,
Figure pct00305
이고;
R10은
Figure pct00306
이고;
각각의 R11은 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴, 페닐로 치환된 이미다졸릴, 페닐로 치환된 옥사디아졸릴, 피라졸릴, 피리미디닐,
Figure pct00307
-CH2S(=O)2NH2, -CH2S(=O)2NHLR9, -LR9 또는 -X4LR9이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R15는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
R16은 -LR9로 치환되거나 비치환되는, N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
X3은
Figure pct00308
이고;
X4는
Figure pct00309
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
실시양태 4. 화학식 I의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 입체이성질체, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
<화학식 I>
Figure pct00310
상기 식에서,
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00311
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NR12(CH2)mR16, -LR9, -NHS(O)2R11, -NHS(O)2(CH2)mN3, -NHS(=O)2LR9,
Figure pct00312
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R7은 LR9이고;
R8은 H 또는 LR9이고;
각각의 L은 독립적으로 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
R9는
Figure pct00313
, -NR12C(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00314
, SH, -SSR15, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR12S(=O)2(CH=CH2), -NR12C(=O)CH2R10, -NR12C(=O)CH2Br, -NR12C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2,
Figure pct00315
, -CO2H, -NH2, -NCO, -NCS,
Figure pct00316
이고;
R10은
Figure pct00317
이고;
각각의 R11은 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴,
Figure pct00318
-LR9 또는 -X4LR9이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R15는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
R16은 -LR9로 치환되거나 비치환되는, N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
X3은
Figure pct00319
이고;
X4는
Figure pct00320
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
실시양태 5. 실시양태 1 내지 4 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 Ia의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 Ia>
Figure pct00321
실시양태 6. 실시양태 1 내지 5 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 Ib의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 Ib>
Figure pct00322
실시양태 7. 실시양태 1 내지 4 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 Ic의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 Ic>
Figure pct00323
실시양태 8. 실시양태 1 내지 4 및 7 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 Id의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 Id>
Figure pct00324
실시양태 9. 실시양태 1 내지 4 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 Ie의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 Ie>
Figure pct00325
실시양태 10. 실시양태 1 내지 4 및 9 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 If의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 If>
Figure pct00326
실시양태 11. 실시양태 1 내지 4 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 Ig의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 Ig>
Figure pct00327
실시양태 12. 실시양태 1 내지 4 또는 11 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 Ih의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 Ih>
Figure pct00328
실시양태 13. 실시양태 1 내지 4 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 Ii 또는 화학식 Ij의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 Ii>
Figure pct00329
<화학식 Ij>
Figure pct00330
실시양태 14. 실시양태 1 내지 4 또는 13 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 Ik 또는 화학식 Im의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 Ik>
Figure pct00331
<화학식 Im>
Figure pct00332
실시양태 15. 실시양태 1 내지 4 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 In 또는 화학식 Io의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 In>
Figure pct00333
<화학식 Io>
Figure pct00334
실시양태 16. 실시양태 1 내지 4 또는 15 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 Ip 또는 Iq의 구조를 갖는 화합물:
<화학식 Ip>
Figure pct00335
<화학식 Iq>
Figure pct00336
실시양태 17. 실시양태 11 내지 16 중 어느 한 실시양태에 있어서, R19가 H인 것인 화합물.
실시양태 18. 실시양태 3 내지 17 중 어느 한 실시양태에 있어서, 각각의 L이 독립적으로 -L1L2L3L4L5L6- 및 -L6L5L4L3L2L1-로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6이 본원에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
실시양태 19. 실시양태 3 내지 18 중 어느 한 실시양태에 있어서, 각각의 L이 독립적으로 -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3- 및 -L3L2L1-로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6이 본원에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
실시양태 20. 실시양태 3 내지 19 중 어느 한 실시양태에 있어서, 각각의 L이 독립적으로 -L1L2- 및 -L2L1-로부터 선택되고, 여기서 -L1 및 L2가 본원에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
실시양태 21. 실시양태 3 내지 19 중 어느 한 실시양태에 있어서, L이 -L1-이고, 여기서 -L1이 본원에 정의된 바와 같은 것인 화합물.
실시양태 22. 실시양태 3 내지 21 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나, R1이 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되는 것인 화합물.
실시양태 23. 실시양태 3 내지 21 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 C-결합 6원 헤테로시클로알킬은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되는 것인 화합물.
실시양태 24. 실시양태 3 내지 6 및 18 내지 21 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나, R1이 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되고,
R4가 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NHS(O)2(CH2)mN3, -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11,
Figure pct00337
인 것인 화합물.
실시양태 25. 실시양태 3 내지 6, 18 내지 21 및 24 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 C-결합 6원 헤테로시클로알킬은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되고,
R4가 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NHS(O)2(CH2)mN3, -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11,
Figure pct00338
인 것인 화합물.
실시양태 26. 실시양태 3 내지 25 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R2가 -C1-C6알킬이고;
R5가 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6이 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R7이 L1R9이고;
R8이 H이고;
R9가
Figure pct00339
, -NR12C(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00340
, SH, -SSR15, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR12S(=O)2(CH=CH2), -NR12C(=O)CH2Br, -NR12C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2,
Figure pct00341
, -CO2H, -NH2, -NCO, -NCS,
Figure pct00342
이고;
R10이
Figure pct00343
이고;
각각의 R11이 독립적으로 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R12가 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13이 테트라졸릴,
Figure pct00344
이고;
각각의 R14가 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R15가 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
R16이 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 비치환 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬인 것인 화합물.
실시양태 27. 실시양태 1 내지 21 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나, R1이 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되는 것인 화합물.
실시양태 28. 실시양태 1 내지 21 및 27 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 C-결합 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되는 것인 화합물.
실시양태 29. 실시양태 3 내지 27 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나, R1이 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R3이
Figure pct00345
이고,
R4가 -L1R9, -NHS(=O)2L1R9,
Figure pct00346
인 것인 화합물.
실시양태 30. 실시양태 3 내지 20 및 29 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 C-결합 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고,
R3이
Figure pct00347
이고,
R4가 -L1R9, -NHS(=O)2L1R9,
Figure pct00348
인 것인 화합물.
실시양태 31. 실시양태 3 내지 21 및 27 내지 30 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R2가 -C1-C6알킬이고;
R5가 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6이 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2 및 -NR12C(=O)R11이고;
R8이 L1R9이고;
R9가
Figure pct00349
, -NR12C(=O)CH=CH2, -N3,
Figure pct00350
, SH, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR12S(=O)2(CH=CH2), -NR12C(=O)CH2R10, -NR12C(=O)CH2Br, -NR12C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2,
Figure pct00351
, -CO2H, -NH2, -NCO, -NCS,
Figure pct00352
이고 ;
R10이
Figure pct00353
이고;
각각의 R11이 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R12가 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13이
Figure pct00354
, -LR9 또는 -X4LR9이고;
각각의 R14가 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R16이 -LR9로 치환되는, N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
X3은
Figure pct00355
이고;
X4는
Figure pct00356
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
실시양태 32. 실시양태 1 내지 6 및 18 내지 28 중 어느 한 실시양태에 있어서, R4가 -OH, -OCH3, -NHS(O)2R11 또는
Figure pct00357
인 것인 화합물.
실시양태 33. 실시양태 3 내지 6 및 18 내지 28 중 어느 한 실시양태에 있어서, R4가 -OH, -OCH3, -NHS(O)2R11, -NHS(O)2(CH2)mN3 또는
Figure pct00358
인 것인 화합물.
실시양태 34. 실시양태 3 내지 6, 18 내지 23 및 27 내지 31 중 어느 한 실시양태에 있어서, R4가 -L1R9, -NHS(=O)2L1R9,
Figure pct00359
인 것인 화합물.
실시양태 35. 실시양태 1 내지 4, 9, 10 및 18 내지 30 중 어느 한 실시양태에 있어서, R13이
Figure pct00360
인 것인 화합물.
실시양태 36. 실시양태 1 내지 4, 9, 10 및 18 내지 30 및 35 중 어느 한 실시양태에 있어서, R13이
Figure pct00361
, -LR9 또는 -X4LR9인 것인 화합물.
실시양태 37. 실시양태 1 내지 21 및 26 내지 36 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00362
인 것인 화합물.
실시양태 38. 실시양태 1 내지 21 및 26 내지 37 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00363
인 것인 화합물.
실시양태 39. 실시양태 1 내지 3 내지 21, 26, 27, 29 및 31 내지 36 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00364
인 것인 화합물.
실시양태 40. 실시양태 1 내지 3 내지 21, 26, 27, 29, 31 내지 36 및 39 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00365
인 것인 화합물.
실시양태 41. 실시양태 3 내지 26, 및 32 내지 36 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00366
인 것인 화합물.
실시양태 42. 실시양태 3 내지 26, 32 내지 36 및 41 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00367
인 것인 화합물.
실시양태 43. 실시양태 3 내지 22, 24 및 31 내지 36 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00368
인 것인 화합물.
실시양태 44. 실시양태 3 내지 22, 24 및 31 내지 36 및 43 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00369
인 것인 화합물.
실시양태 44. 실시양태 3 내지 22, 24, 31 내지 36 및 43 중 어느 한 실시양태에 있어서, R9가
Figure pct00370
, -S(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, N3,
Figure pct00371
인 것인 화합물.
실시양태 45. 실시양태 3 내지 44 중 어느 한 실시양태에 있어서, R9가
Figure pct00372
, -S(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, N3,
Figure pct00373
인 것인 화합물.
실시양태 46. 화학식 II의 면역접합체:
<화학식 II>
Figure pct00374
상기 식에서,
Ab는 항원 결합 모이어티를 나타내고;
L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
R101은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00375
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
R101은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00376
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00377
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, 또는 -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11 또는
Figure pct00378
이고;
R5는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, -((CH2)mO)nR12, 또는 -CN, -C(=O)NH2 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R11은 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴, 페닐로 치환된 이미다졸릴, 페닐로 치환된 옥사디아졸릴, 피라졸릴, 피리미디닐,
Figure pct00379
또는 -CH2S(=O)2NH2이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
R19는 H 또는 C1-C6알킬이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
실시양태 47. 화학식 II의 면역접합체:
<화학식 II>
Figure pct00380
상기 식에서,
Ab는 항원 결합 모이어티를 나타내고;
L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
R101은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00381
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
R101은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00382
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00383
이고;
R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, 또는 -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11 또는
Figure pct00384
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R11은 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R13은 테트라졸릴,
Figure pct00385
이고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
실시양태 48. 실시양태 46 및 47에 있어서, L이 -L1L2L3L4L5L6- 또는 -L6L5L4L3L2L1-이고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같은 것인 면역접합체.
실시양태 49. 실시양태 46 및 47에 있어서, L이 -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3- 및 -L3L2L1-로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같은 것인 면역접합체.
실시양태 50. 실시양태 47 및 49 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 II의 면역접합체가 화학식 IIa의 면역접합체인 것인 면역접합체:
<화학식 IIa>
Figure pct00386
실시양태 51. 실시양태 46 및 47 중 어느 한 실시양태에 있어서, L이 -L1L2- 또는 -L2L1-이고, 여기서 -L1 및 L2은 본원에 정의된 바와 같은 것인 면역접합체.
실시양태 52. 실시양태 46, 47 및 51 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 II의 면역접합체가 화학식 IIb의 면역접합체인 것인 면역접합체:
<화학식 IIb>
Figure pct00387
실시양태 53. 실시양태 46, 47, 51 및 52 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 II, 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 면역접합체가 화학식 IIc의 구조를 갖는 면역접합체인 것인 면역접합체.
<화학식 IIc>
Figure pct00388
실시양태 54. 실시양태 46 내지 53 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R101이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00389
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되고, 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
R101이 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00390
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되고, 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되는 것인 면역접합체.
실시양태 55. 실시양태 46 내지 54 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R101이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00391
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되고, 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되는 것인 면역접합체.
실시양태 56. 실시양태 46 내지 55 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R101이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
Figure pct00392
기에 C-결합되고 L1에 N-결합되고 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되는 것인 면역접합체.
실시양태 57. 실시양태 46 내지 56 중 어느 한 실시양태에 있어서, R101이
Figure pct00393
인 것인 면역접합체.
실시양태 58. 실시양태 46 내지 57 중 어느 한 실시양태에 있어서, R101이
Figure pct00394
인 것인 면역접합체.
실시양태 59. 실시양태 46 내지 58 중 어느 한 실시양태에 있어서, R3이
Figure pct00395
이고, R19가 H인 것인 면역접합체.
실시양태 60. 실시양태 46 내지 59 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R4가 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NHS(O)2R11, 또는 -NR12(CH2)mR16이고;
R13이 테트라졸릴,
Figure pct00396
인 것인 면역접합체.
실시양태 61. 실시양태 46 내지 60 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R4가 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, 또는 -NR12(CH2)mR16인 것인 면역접합체.
실시양태 62. 실시양태 46 내지 61 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R13이 테트라졸릴,
Figure pct00397
인 것인 면역접합체.
실시양태 63. 실시양태 46 내지 62 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R4가 -OH 또는 C1-C6알콕시인 것인 면역접합체.
실시양태 64. 화학식 III의 면역접합체:
<화학식 III>
Figure pct00398
상기 식에서,
Ab는 항원 결합 모이어티를 나타내고;
L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00399
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R11은 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
R17은 결합, -NH-, -NHS(=O)2-,
Figure pct00400
이고;
R18은 결합,
Figure pct00401
또는 -CH2S(=O)2NH-이고;
R19는 H 또는 C1-C6알킬이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
실시양태 65. 화학식 III의 구조를 갖는 면역접합체:
<화학식 III>
Figure pct00402
상기 식에서,
Ab는 항원 결합 모이어티를 나타내고;
L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같고;
y는 1 내지 16의 정수이고;
R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
R2는 -C1-C6알킬이고;
R3은
Figure pct00403
이고;
R5는 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
R11은 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
R17은 결합, -NH-, -NHS(=O)2-,
Figure pct00404
이고;
R18은 결합,
Figure pct00405
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
실시양태 66. 실시양태 64 및 65 중 어느 한 실시양태에 있어서, L이 L1L2L3L4L5L6- 또는 -L6L5L4L3L2L1-이고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같은 것인 면역접합체.
실시양태 67. 실시양태 64 내지 65 중 어느 한 실시양태에 있어서, L이 -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3- 및 -L3L2L1-로부터 선택되고, 여기서 -L1, L2, L3, L4, L5, 및 L6은 본원에 정의된 바와 같은 것인 면역접합체.
실시양태 68. 실시양태 64, 65 및 66 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 III의 면역접합체가 화학식 IIIa의 면역접합체인 것인 면역접합체:
<화학식 IIIa>
Figure pct00406
실시양태 69. 실시양태 64 및 65 중 어느 한 실시양태에 있어서, L이 -L1L2- 또는 -L2L1-이고, -L1 및 L2는 본원에 정의된 바와 같은 것인 면역접합체.
실시양태 70. 실시양태 64, 65 및 69 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 III의 면역접합체가 화학식 IIIb의 면역접합체인 것인 면역접합체:
<화학식 IIIb>
Figure pct00407
실시양태 71. 실시양태 64, 65 및 69 및 70 중 어느 한 실시양태에 있어서, 화학식 III, 화학식 IIIa 또는 화학식 IIIb의 면역접합체가 화학식 IIIc의 면역접합체인 것인 면역접합체:
<화학식 IIIc>
Figure pct00408
실시양태 72. 실시양태 64 내지 71 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되는 것인 면역접합체.
실시양태 73. 실시양태 64 내지 72 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되는 것인 면역접합체.
실시양태 74. 실시양태 64 내지 73 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00409
인 것인 면역접합체,
실시양태 75. 실시양태 64 내지 74 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00410
인 것인 면역접합체.
실시양태 76. 실시양태 64 내지 71중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00411
인 것인 면역접합체.
실시양태 77. 실시양태 64 내지 71 중 어느 한 실시양태에 있어서, R1이
Figure pct00412
인 것인 면역접합체.
실시양태 78. R5가 -CH3 또는 -C(=O)CH3인 것인 실시양태 1 내지 45 중 어느 한 실시양태에 따른 화합물, 또는 실시양태 46 내지 77 중 어느 한 실시양태의 면역접합체.
실시양태 79. R12가 H, -CH3 또는 -CH2CH3인 것인 실시양태 1 내지 45 및 78 중 어느 한 실시양태에 따른 화합물, 또는 실시양태 46 내지 78 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 80. R2가 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 sec-부틸인 것인 실시양태 1 내지 45, 78 및 79 중 어느 한 실시양태에 따른 화합물, 또는 실시양태 46 내지 79 중 어느 한 실시양태의 면역접합체.
실시양태 81.
L1이 -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mX3((CH2)mO)n-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00413
, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-,
Figure pct00414
, -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)m-, -(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)m-, -(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mNR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NR12(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12-, -NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12(CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -NR12(CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(C(R12)2)m-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNR12-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NR12-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NR12-, -NR12C(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -NR12C(=S)-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NR12-,
Figure pct00415
Figure pct00416
Figure pct00417
로부터 선택되고;
L2, L3, L4, L5, 및 L6은 각각 독립적으로 결합, -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mX3((CH2)mO)n-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00418
, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-,
Figure pct00419
, -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)m-, -(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)m-, -(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mNR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NR12(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12-, -NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12(CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -NR12(CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(C(R12)2)m-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNR12-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NR12-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NR12-, -NR12C(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -NR12C(=S)-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NR12-,
Figure pct00420
Figure pct00421
Figure pct00422
로부터 선택되고;
여기서,
R20은 H 또는 Me이고, R30은 H, -CH3 또는 페닐이고;
R21은
Figure pct00423
이고;
각각의 R25는 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬로부터 선택되고;
Raa는 글리신, 알라닌, 트립토판, 티로신, 페닐알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 시스테인, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 페닐글리신 및 t-부틸글리신으로부터 선택된 아미노산의 측쇄이고;
R32는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 페닐, 피리미딘 및 피리딘으로부터 선택되고;
R33은 독립적으로
Figure pct00424
로부터 선택되고;
R34는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00425
로부터 선택된 자기 희생적 스페이서이고;
X2는
Figure pct00426
로부터 선택된 디펩티드이고;
X3은
Figure pct00427
이고; X4는
Figure pct00428
인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 82.
L1이 -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00429
, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-,
Figure pct00430
, -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mNR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NR12(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12-, -NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(C(R12)2)m-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNR12-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NR12-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NR12-, -NR12C(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -NR12C(=S)-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NR12-,
Figure pct00431
Figure pct00432
Figure pct00433
로부터 선택되고;
L2, L3, L4, L5, 및 L6은 각각 독립적으로 결합, -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00434
, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-,
Figure pct00435
, -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mNR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NR12(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12-, -NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(C(R12)2)m-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNR12-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NR12-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NR12-, -NR12C(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -NR12C(=S)-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NR12-,
Figure pct00436
Figure pct00437
Figure pct00438
로부터 선택되고;
여기서,
R20은 H 또는 Me이고, R30은 H, -CH3 또는 페닐이고;
R21은
Figure pct00439
이고;
각각의 R25는 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬로부터 선택되고;
Raa는 글리신, 알라닌, 트립토판, 티로신, 페닐알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 시스테인, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 페닐글리신 및 t-부틸글리신으로부터 선택된 아미노산의 측쇄이고;
R32는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 페닐, 피리미딘 및 피리딘으로부터 선택되고;
R33은 독립적으로
Figure pct00440
로부터 선택되고;
R34는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00441
로부터 선택된 자기 희생적 스페이서이고;
X2는
Figure pct00442
로부터 선택된 디펩티드이고;
X3은
Figure pct00443
이고; X4는
Figure pct00444
인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 또는 실시양태 46 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 83.
L1이 -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNH((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNH((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00445
, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNH(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-,
Figure pct00446
, -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NHC(=O)(CH2)m-, -NHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m -, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH-, -(CH2)mC(=O)NH-, -(CH2)mNH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NH(CH2)m-, -NHC(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NH -, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNH-, -NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -NHC(R12)2(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(R12)2NH-, -NH(CH2)mX3(CH2)m-, -NHC(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -(CH2)mX3(CH2)mNH-, -NH((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNH-, -(CH2)mNH-, -NH((CH2)mO)n(CH2)m-, -NH((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nNH-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNH-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNHC(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NH(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNH-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -NHC(=S)-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)-, -C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -NHS(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NH-,
Figure pct00447
Figure pct00448
Figure pct00449
로부터 선택되고;
L2, L3, L4, L5, 및 L6이 각각 독립적으로 결합, -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNH((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNH((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00450
, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNH(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-,
Figure pct00451
, -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NHC(=O)(CH2)m-, -NHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m -, -, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH-, -(CH2)mC(=O)NH-, -(CH2)mNH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NH(CH2)m-, -NHC(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NH -, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNH-, -NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -NHC(R12)2(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(R12)2NH-, -NH(CH2)mX3(CH2)m-, -NHC(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -(CH2)mX3(CH2)mNH-, -NH((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNH-, -(CH2)mNH-, -NH((CH2)mO)n(CH2)m-, -NH((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nNH-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNH-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNHC(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NH(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNH-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -NHC(=S)-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)-, -C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -NHS(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NH-,
Figure pct00452
Figure pct00453
Figure pct00454
로부터 선택되고;
여기서,
R20은 H 또는 Me이고, R30은 H, -CH3 또는 페닐이고;
R21은
Figure pct00455
이고;
각각의 R25는 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬로부터 선택되고;
Raa는 글리신, 알라닌, 트립토판, 티로신, 페닐알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 시스테인, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 페닐글리신 및 t-부틸글리신으로부터 선택된 아미노산의 측쇄이고;
R32는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 페닐, 피리미딘 및 피리딘으로부터 선택되고;
R33은 독립적으로
Figure pct00456
로부터 선택되고;
R34는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00457
로부터 선택된 자기 희생적 스페이서이고;
X2는
Figure pct00458
로부터 선택된 디펩티드이고;
X3은
Figure pct00459
이고; X4는
Figure pct00460
인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 84.
L2, L3, L4, L5, 및 L6이 결합이고,
L1이 -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00461
, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-,
Figure pct00462
, -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mNR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NR12(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12-, -NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(C(R12)2)m-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNR12-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NR12-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NR12-, -NR12C(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)-, -C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, 및 -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NR12-로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00463
로부터 선택된 자기 희생적 스페이서이고;
X2는
Figure pct00464
로부터 선택된 디펩티드이고;
X3은
Figure pct00465
이고; X4는
Figure pct00466
인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 85.
L2, L3, L4, L5, 및 L6이 결합이고,
L1이 -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNH((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNH((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00467
, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNH(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-,
Figure pct00468
, -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NHC(=O)(CH2)m-, -NHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m -, -, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH-, -(CH2)mC(=O)NH-, -(CH2)mNH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NH(CH2)m-, -NHC(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NH -, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNH-, -NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -NHC(R12)2(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(R12)2NH-, -NH(CH2)mX3(CH2)m-, -NHC(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -NHC(R12)2(CH2)mOC(=O)NH((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNHC(=O)O(CH2)mC(R12)2NH-, -(CH2)mX3(CH2)mNH-, -NH((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNH-, -(CH2)mNH-, -NH((CH2)mO)n(CH2)m-, -NH((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nNH-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNH-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNHC(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NH(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNH-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NH-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S- and -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)-, -C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m- -NHS(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, 및 -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NH-로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00469
로부터 선택된 자기 희생적 스페이서이고;
X2는
Figure pct00470
로부터 선택된 디펩티드이고;
X3은
Figure pct00471
이고; X4는
Figure pct00472
인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 86.
L2, L3, L4, L5, 및 L6이 결합이고,
L1이 -(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-,
Figure pct00473
, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -NHC(R12)2(CH2)m-, -NH(CH2)mX3(CH2)m-, -NHCH2(CH2)mOC(=O)NH((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNH(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-,
Figure pct00474
, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)-, -C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -NHS(=O)2(CH2)mX3(CH2)m- 및 -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NH-로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00475
로부터 선택된 자기 희생적 스페이서이고;
X2는
Figure pct00476
로부터 선택된 디펩티드이고;
X3은
Figure pct00477
이고; X4는
Figure pct00478
인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 45 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 87.
L2, L3, L4, L5, 및 L6이 결합이고,
L1이 -(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -NHC(R12)2(CH2)m-, -NH(CH2)mX3(CH2)m-, -NHCH2(CH2)mOC(=O)NH((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m- and -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)-, -C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -NHS(=O)2(CH2)mX3(CH2)m- 및 -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NH-로부터 선택되고;
X1은
Figure pct00479
로부터 선택된 자기 희생적 스페이서이고;
X2는
Figure pct00480
로부터 선택된 디펩티드이고;
X3은
Figure pct00481
이고; X4는
Figure pct00482
인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 88.
L1이 -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m*-, -*C(=O)(CH2)mX3((CH2)mO)n-, -(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)mX2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m*-, -(CH2)mNH(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)*-, -((CH2)mO)n(CH2)m*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)*-, -(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mS(=O)2*-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2*-, -(CH2)mOC(=O)NH(CH2)mC(=O)*-, 및 -(CH2)mOC(=O)NH(CH2)mS(=O)2*-이고, 여기서 면역접합체 실시양태에서 *는 R101에의 부착점을 나타내며 한편 화합물 실시양태에서 *는 R1에의 부착점을 나타내고;
L2가 결합,
Figure pct00483
,
-S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-, -SCH2CH2C(=O)NH-, -NHC(=O)CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2NH- 또는 -NHS(=O)2CH2CH2S-이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 63 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 89.
L1이 -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m*-, -(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)mX2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m*-, -(CH2)mNH(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)*-, -((CH2)mO)n(CH2)m*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)*-, -(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mS(=O)2*- 및 -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2*-이고, 여기서 면역접합체 실시양태에서 *는 R101에의 부착점을 나타내며 한편 화합물 실시양태에서 *는 R1에의 부착점을 나타내고;
L2가 결합,
Figure pct00484
,
-S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-, -SCH2CH2C(=O)NH-, -NHC(=O)CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2NH- 또는 -NHS(=O)2CH2CH2S-이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 63 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 90.
L1이 -(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m*- 및 -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)*-로부터 선택되고, 여기서 면역접합체 실시양태에서 *는 R101에의 부착점을 나타내며 한편 화합물 실시양태에서 *는 R1에의 부착점을 나타내고;
L2가
Figure pct00485
,
-S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-, -SCH2CH2C(=O)NH-, -NHC(=O)CH CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2NH- 또는 -NHS(=O)2CH2CH2S-이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 63 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 91.
L1이 -(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m*- 및 -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)*-로부터 선택되고, 여기서 면역접합체 실시양태에서 *는 R101에의 부착점을 나타내며 한편 화합물 실시양태에서 *는 R1에의 부착점을 나타내고;
L2가
Figure pct00486
,
-S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-, -NH(=O)CH2CH2S-, -SCH2CH2C(=O)NH-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S- 또는 -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2- 이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 63 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 92.
L1이 -(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m*- 및 -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)*-로부터 선택되고, 여기서 면역접합체 실시양태에서 *는 R101에의 부착점을 나타내며 한편 화합물 실시양태에서 *는 R1에의 부착점을 나타내고;
L2가
Figure pct00487
이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 63 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 93.
L1이 -(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m*- 및 -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)*로부터 선택되고, 여기서 면역접합체 실시양태에서 *는 R101에의 부착점을 나타내며 한편 화합물 실시양태에서 *는 R1에의 부착점을 나타내고;
L2가
Figure pct00488
이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 63 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 94.
L1이 -(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m*- 및 -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)*-로부터 선택되고, 여기서 면역접합체 실시양태에서 *는 R101에의 부착점을 나타내며 한편 화합물 실시양태에서 *는 R1에의 부착점을 나타내고;
L2가
Figure pct00489
이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 46 내지 63 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 95.
L1이 *C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00490
, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m)-, -*C(=O)NH(CH2)m)-, -*C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -*((CH2)mO)n(CH2)m-, -*(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -*C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -*C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-, -*(CH2)m(O(CH2)m)n-, -*C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, - *C(=O)NH(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*NH2S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m- 및 -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-로부터 선택되고, 여기서 *는 R3에의 부착점을 나타내고;
L2가 결합,
Figure pct00491
,
Figure pct00492
, -S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-,
Figure pct00493
, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S- 또는 -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 21, 27 내지 31, 34, 36 내지 40, 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 64 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 96.
L1이 -*C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00494
, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m)-, -*C(=O)NH(CH2)m)-, -*C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -*(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -*C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -*C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-, -*(CH2)m(O(CH2)m)n-, -*C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, - *C(=O)NH(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*NH2S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m- 및 -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-로부터 선택되고, 여기서 *는 R3에의 부착점을 나타내고;
L2가 결합,
Figure pct00495
,
Figure pct00496
, -S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-,
Figure pct00497
,
-S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S- 또는 -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 21, 27 내지 31, 34, 36 내지 40, 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 64 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 97.
L1이 -*C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X4 X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00498
, -*NH2S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m)- 및 -*C(=O)NH(CH2)m)-로부터 선택되고, 여기서 *는 R3에의 부착점을 나타내고;
L2가
Figure pct00499
, -S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-,
Figure pct00500
,
Figure pct00501
, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S- 또는 -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 21, 27 내지 31, 34, 36 내지 40, 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 64 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 98.
L1이 -*C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X4 X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00502
, -*NH2S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m)- 및 -*C(=O)NH(CH2)m)-로부터 선택되고, 여기서 *는 R3에의 부착점을 나타내고;
L2가
Figure pct00503
, -S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-,
Figure pct00504
,
Figure pct00505
, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S- 또는 -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 21, 27 내지 31, 34, 36 내지 40, 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 64 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 99.
L1이 -*C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X4 X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00506
, -*NH2S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m)- 및 -*C(=O)NH(CH2)m)-로부터 선택되고, 여기서 *는 R3에의 부착점을 나타내고;
L2가
Figure pct00507
이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 21, 27 내지 31, 34, 36 내지 40, 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 64 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 100.
L1이 -*C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X4 X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00508
, -*NH2S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m)- 및 -*C(=O)NH(CH2)m)-로부터 선택되고, 여기서 *는 R3에의 부착점을 나타내고;
L2가
Figure pct00509
, -S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-,
Figure pct00510
,
Figure pct00511
, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S- 또는 -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2- 이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 21, 27 내지 31, 34, 36 내지 40, 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 64 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 101.
L1이 *C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X4 X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00512
, -*NH2S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m)- 및 -*C(=O)NH(CH2)m)-로부터 선택되고, 여기서 *는 R3에의 부착점을 나타내고;
L2가
Figure pct00513
이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 21, 27 내지 31, 34, 36 내지 40, 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 64 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 102.
L1이 -*C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m-, -*(CH2)mNHC(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X4 X1X2C(=O)(CH2)m-, -*X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -*S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-,
Figure pct00514
, -*NH2S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -*C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m)- 및 -*C(=O)NH(CH2)m)-로부터 선택되고, 여기서 *는 R3에의 부착점을 나타내고;
L2가
Figure pct00515
이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
L3, L4, L5 및 L6이 결합인 것인 실시양태 3 내지 21, 27 내지 31, 34, 36 내지 40, 45 및 78 내지 80 중 어느 한 실시양태의 화합물, 및 실시양태 64 내지 80 중 어느 한 실시양태에 따른 면역접합체.
실시양태 103. 실시양태 1 내지 45, 및 78 내지 102 중 어느 한 실시양태에 있어서,
Figure pct00516
Figure pct00517
Figure pct00518
Figure pct00519
Figure pct00520
Figure pct00521
Figure pct00522
Figure pct00523
Figure pct00524
Figure pct00525
Figure pct00526
Figure pct00527
로부터 선택되는 화합물.
실시양태 104. 실시양태 46 내지 102 중 어느 한 실시양태의 면역접합체, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
실시양태 105. 치료 유효량의 실시양태 46 내지 102 중 어느 한 실시양태의 면역접합체, 및 하나 이상의 치료 활성 공동-작용제를 포함하는 조합물.
실시양태 106. 세포 증식 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 실시양태 46 내지 102 중 어느 한 실시양태의 면역접합체를 투여하는 것을 포함하는, 세포 증식 장애를 치료하는 방법.
실시양태 107. 실시양태 46 내지 102 중 어느 한 실시양태에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 면역접합체.
실시양태 108. 실시양태 107에 있어서, 의약이 암의 치료에서 사용하기 위한 것인 면역접합체.
실시양태 109. 실시양태 46 내지 102 중 어느 한 실시양태에 있어서, 암을 치료하는데 사용하기 위한 면역접합체.
실시양태 110. 실시양태 46 내지 102 중 어느 한 실시양태에 있어서,
Figure pct00528
Figure pct00529
Figure pct00530
Figure pct00531
로부터 선택된 화학식을 갖는 면역접합체.
실시양태 111. 실시양태 110에서, X는
Figure pct00532
이고, 여기서 R101, R2 및 R3은 실시양태 46, 47, 54 내지 59, 및 80에 정의된 바와 같다.
실시양태 112. 실시양태 111에서, X는
Figure pct00533
이고, 여기서 R1, R2 및 R3은 실시양태 65, 66, 73 내지 78 및 81에 정의된 바와 같다.
실시양태 113. 실시양태 112에서, X는 실시양태 1 또는 2에서의 종류 중 어느 한 종류이다.
실시양태 114. 실시양태 46 내지 113 중 어느 한 실시양태에 있어서, 달리 기재되지 않는 한, Ab는 임의의 항원 결합 모이어티일 수 있고, 바람직하게는 세포 표면 마커, 예컨대 표적 세포, 예컨대 암 세포의 특징인 본원에 기재된 것들을 인식하는 항원 또는 항원 단편이다.
실시양태 115. 실시양태 46 내지 113 중 어느 한 실시양태에 있어서, 달리 기재되지 않는 한, Ab는 임의의 항원 결합 모이어티, 전형적으로 제약 개재에 표적이 되는 세포, 예컨대 암 세포의 항원 특징을 인식하는 것일 수 있다. 많은 적합한 항원은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고; 특별한 관심의 구체적인 것들이 기재되어 있다. 전형적으로, Ab는 단리 또는 구축될 수 있고, 천연 또는 변형 (조작)될 수 있는 항체, 또는 항체에 유사한 항원 결합 활성을 보유하는 항체 단편이다.
실시양태 116에서. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3 및 4로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 m은 독립적으로 1, 2 및 3으로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 m은 독립적으로 1 및 2로부터 선택된다.
실시양태 117. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 및 9로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3 및 4로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 n은 독립적으로 1, 2 및 3으로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 n은 독립적으로 1 및 2로부터 선택된다.
실시양태 118. 실시양태 46 내지 114 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 y는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 y는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 y는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 y는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 및 9로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 y는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 y는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6 및 7로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 y는 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5 및 6으로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 y는 독립적으로 1, 2, 3, 4 및 5로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 y는 독립적으로 1, 2, 3 및 4로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 y는 독립적으로 1, 2 및 3으로부터 선택된다. 상기 실시양태 중 어느 한 실시양태에서, 각각의 y는 독립적으로 1 및 2로부터 선택된다.
실시양태 119. 실시양태 3에 있어서, R3이
Figure pct00534
이고, R19가 H인 것인 화합물.
실시양태 120. 실시양태 3 내지 6, 18 내지 26, 32, 33, 45 및 81 내지 87 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R1이
Figure pct00535
이고; R2가 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 sec-부틸이고; R3이
Figure pct00536
이고;
R4가 -OH이고; R9가
Figure pct00537
이고,
L이 L1이고, 여기서 L1이 -(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, 및 -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-로부터 선택되고,
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택되는 것인 화합물.
실시양태 121. 실시양태 3 내지 6, 18 내지 26, 32, 33, 45 및 81 내지 87 중 어느 한 실시양태에 있어서,
R1이
Figure pct00538
이고; R2가 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 sec-부틸이고;
L이 L1이고, 여기서 L1이 -(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)- 및 -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-로부터 선택되고;
R3이
Figure pct00539
이고; R4가 -OH이고; R9가
Figure pct00540
이고; X3이
Figure pct00541
이고;
각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
SEQUENCE LISTING <110> IRM LLC Uno, Tetsuo <120> CYTOTOXIC PEPTIDES AND CONJUGATES THEREOF <130> PAT056407-WO-PCT <160> 31 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 450 <212> PRT <213> anti-Her2 heavy chain wild type <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu 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14 ctctcctgac agttgccgct ctgcagggcg ttgtccacct 40 <210> 15 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer sesquence <400> 15 tacttcccct gtcccgtgac cgtgtcctgg aacagcgga 39 <210> 16 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer sequence <400> 16 ggtcacggga caggggaagt agtccttcac caggcagc 38 <210> 17 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer sequence <400> 17 ttctacccct gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaacg 40 <210> 18 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer sequence <400> 18 ggcgatgtcg caggggtaga agcccttcac cagacaggtc a 41 <210> 19 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer sequence <400> 19 gtggagatct gtcgaacggt ggccgctccc agcgtgttca 40 <210> 20 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer sequence <400> 20 accgttcgac agatctccac cttggtaccc tgtccgaac 39 <210> 21 <211> 52 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer sequence <400> 21 ctggagttca tcgccagcaa gctggccaac aactacaaga ccacacctcc ag 52 <210> 22 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer sequence <400> 22 cttgctggcg atgaactcca ggctgtcctc gggctggccg ttgctc 46 <210> 23 <211> 52 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer sequence <400> 23 ctggacatgc tggagtggag cctgatgaac aactacaaga ccacacctcc ag 52 <210> 24 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer sequence <400> 24 ccactccagc atgtccaggc tgtcgccctc gggctggccg ttgctc 46 <210> 25 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B. subtilis Sfp pET22b primer <400> 25 gaaggagata tacatatgaa aatttatggg atttacatgg atcgc 45 <210> 26 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> B. subtilis Sfp pET22b primer <400> 26 gtggtggtgg tggtggtgca gcaattcttc ataggagacc atcg 44 <210> 27 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pET22b primer <400> 27 caccaccacc accaccactg ag 22 <210> 28 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> pET22b primer <400> 28 catatgtata tctccttctt aaagttaaac aaaattattt c 41 <210> 29 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TEV into B. subtilis Sfp pET22b primer <400> 29 gagaacctgt acttccaagg ccaccaccac caccaccact gag 43 <210> 30 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TEV into B. subtilis Sfp pET22b primer <400> 30 gccttggaag tacaggttct ccagcaattc ttcataggag accatcg 47 <210> 31 <211> 237 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bacillus subtilis Sfp PPTase with C-terminal TEV cleavage site and His6 tag <400> 31 Met Lys Ile Tyr Gly Ile Tyr Met Asp Arg Pro Leu Ser Gln Glu Glu 1 5 10 15 Asn Glu Arg Phe Met Ser Phe Ile Ser Pro Glu Lys Arg Glu Lys Cys 20 25 30 Arg Arg Phe Tyr His Lys Glu Asp Ala His Arg Thr Leu Leu Gly Asp 35 40 45 Val Leu Val Arg Ser Val Ile Ser Arg Gln Tyr Gln Leu Asp Lys Ser 50 55 60 Asp Ile Arg Phe Ser Thr Gln Glu Tyr Gly Lys Pro Cys Ile Pro Asp 65 70 75 80 Leu Pro Asp Ala His Phe Asn Ile Ser His Ser Gly Arg Trp Val Ile 85 90 95 Cys Ala Phe Asp Ser Gln Pro Ile Gly Ile Asp Ile Glu Lys Thr Lys 100 105 110 Pro Ile Ser Leu Glu Ile Ala Lys Arg Phe Phe Ser Lys Thr Glu Tyr 115 120 125 Ser Asp Leu Leu Ala Lys Asp Lys Asp Glu Gln Thr Asp Tyr Phe Tyr 130 135 140 His Leu Trp Ser Met Lys Glu Ser Phe Ile Lys Gln Glu Gly Lys Gly 145 150 155 160 Leu Ser Leu Pro Leu Asp Ser Phe Ser Val Arg Leu His Gln Asp Gly 165 170 175 Gln Val Ser Ile Glu Leu Pro Asp Ser His Ser Pro Cys Tyr Ile Lys 180 185 190 Thr Tyr Glu Val Asp Pro Gly Tyr Lys Met Ala Val Cys Ala Ala His 195 200 205 Pro Asp Phe Pro Glu Asp Ile Thr Met Val Ser Tyr Glu Glu Leu Leu 210 215 220 Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His His His His His His 225 230 235

Claims (56)

  1. 화학식 I의 구조를 갖는 화합물 또는 그의 입체이성질체, 또는 그의 제약상 허용되는 염.
    <화학식 I>
    Figure pct00542

    상기 식에서,
    R1은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나 R1은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
    R2는 -C1-C6알킬이고;
    R3은
    Figure pct00543
    이고;
    R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NR12(CH2)mR16, -LR9, -NHS(O)2R11, -NHS(O)2(CH2)mN3, -NHS(=O)2LR9,
    Figure pct00544
    이고;
    R5는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, -((CH2)mO)nR12, 또는 -CN, -C(=O)NH2 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
    R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
    R7은 LR9이고;
    R8은 H 또는 LR9이고;
    각각의 L은 독립적으로 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고, 여기서
    L1은 -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mX3((CH2)mO)n-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
    Figure pct00545
    , -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-,
    Figure pct00546
    , -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)m-, -(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)m-, -(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mNR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NR12(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12-, -NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12(CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -NR12(CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(C(R12)2)m-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)m X3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNR12-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NR12-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NR12-, -NR12C(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -NR12C(=S)-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NR12-,
    Figure pct00547

    Figure pct00548

    Figure pct00549

    로부터 선택되고,
    R20은 H 또는 Me이고, R30은 H, -CH3 또는 페닐이고;
    R21은
    Figure pct00550
    이고;
    각각의 R25는 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬로부터 선택되고;
    Raa는 글리신, 알라닌, 트립토판, 티로신, 페닐알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 시스테인, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 페닐글리신 및 t-부틸글리신으로부터 선택된 아미노산의 측쇄이고;
    R32는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 페닐, 피리미딘 및 피리딘으로부터 선택되고;
    R33은 독립적으로
    Figure pct00551
    로부터 선택되고;
    R34는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 선택되고;
    X1은
    Figure pct00552
    로부터 선택된 자기 희생적 스페이서이고;
    X2는
    Figure pct00553
    로부터 선택된 디펩티드이고;
    X3은
    Figure pct00554
    이고,
    X4는
    Figure pct00555
    이고;
    L2, L3, L4, L5, 및 L6은 각각 독립적으로 결합 및 L1로부터 선택되고;
    R9는
    Figure pct00556
    , -NR12C(=O)CH=CH2, -N3,
    Figure pct00557
    , SH, -SSR15, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR12S(=O)2(CH=CH2), -NR12C(=O)CH2R10, -NR12C(=O)CH2Br, -NR12C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2,
    Figure pct00558
    , -CO2H, -NH2, -NCO, -NCS,
    Figure pct00559

    Figure pct00560
    이고;
    R10은
    Figure pct00561
    이고;
    각각의 R11은 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    R13은 테트라졸릴, 페닐로 치환된 이미다졸릴, 페닐로 치환된 옥사디아졸릴, 피라졸릴, 피리미디닐,
    Figure pct00562
    -CH2S(=O)2NH2, -CH2S(=O)2NHLR9, -LR9 또는 -X4LR9이고;
    각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    R15는 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
    R16은 -LR9로 치환되거나 비치환되는, N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
    각각의 R19는 H 또는 C1-C6알킬이고;
    X3은
    Figure pct00563
    이고;
    X4는
    Figure pct00564
    이고;
    각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
    각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서, R3이
    Figure pct00565
    이고, R19가 H인 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 화학식 Ia의 구조를 갖는 화합물:
    <화학식 Ia>
    Figure pct00566
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 Ib의 구조를 갖는 화합물:
    <화학식 Ib>
    Figure pct00567
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 L이 독립적으로 L1L2- 및 -L2L1-로부터 선택되거나, 또는 L이 -L1-인 화합물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 C-결합 6원 헤테로시클로알킬은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되는 것인 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 C-결합 6원 헤테로시클로알킬은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 0 내지 3개의 치환기 및 R7로 치환되고,
    R4가 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NHS(O)2(CH2)mN3, -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11,
    Figure pct00568

    인 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    R2가 -C1-C6알킬이고;
    R5가 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
    R6이 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
    R7이 L1R9이고;
    R8이 H이고;
    R9가
    Figure pct00569
    , -NR12C(=O)CH=CH2, -N3,
    Figure pct00570
    , SH, -SSR15, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR12S(=O)2(CH=CH2), -NR12C(=O)CH2Br, -NR12C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2,
    Figure pct00571
    , -CO2H, -NH2, -NCO, -NCS,
    Figure pct00572
    이고;
    R10이
    Figure pct00573
    이고;
    각각의 R11이 독립적으로 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    각각의 R12가 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    R13이 테트라졸릴,
    Figure pct00574
    이고;
    각각의 R14가 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    R15가 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
    R16이 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 비치환 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬인 화합물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R1이
    Figure pct00575
    인 화합물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R1이
    Figure pct00576
    인 화합물.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R1이
    Figure pct00577
    인 화합물.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R1이
    Figure pct00578
    인 화합물.
  13. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나, R1이 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되는 것인 화합물.
  14. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 C-결합 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되는 것인 화합물.
  15. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 C-결합 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고,
    R3이
    Figure pct00579
    이고,
    R4가 -L1R9, -NHS(=O)2L1R9,
    Figure pct00580
    인 화합물.
  16. 제1항 내지 제5항 및 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    R2가 -C1-C6알킬이고;
    R5가 C1-C6알킬, 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, 또는 -((CH2)mO)nR12이고;
    R6이 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2 및 -NR12C(=O)R11이고;
    R8이 L1R9이고;
    R9가
    Figure pct00581
    , -NR12C(=O)CH=CH2, -N3,
    Figure pct00582
    , SH, -S(=O)2(CH=CH2), -(CH2)2S(=O)2(CH=CH2), -NR12S(=O)2(CH=CH2), -NR12C(=O)CH2R10, -NR12C(=O)CH2Br, -NR12C(=O)CH2I, -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, -C(O)NHNH2,
    Figure pct00583
    , -CO2H, -NH2, -NCO, -NCS,
    Figure pct00584
    이고 ;
    R10이
    Figure pct00585
    이고;
    각각의 R11이 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    각각의 R12가 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    R13이
    Figure pct00586
    , -LR9 또는 -X4LR9이고;
    각각의 R14가 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    R16이 -LR9로 치환되는, N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
    X3이
    Figure pct00587
    이고;
    X4가
    Figure pct00588
    이고;
    각각의 m이 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고;
    각각의 n이 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택되는 것인 화합물.
  17. 제1항 내지 제5항, 제15항 및 제16항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 -L1R9, -NHS(=O)2L1R9,
    Figure pct00589
    인 화합물.
  18. 제1항 내지 제5항 및 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, R13이
    Figure pct00590
    , -LR9 또는 -X4LR9인 화합물.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, R9가
    Figure pct00591
    ,
    Figure pct00592
    , -S(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, N3,
    Figure pct00593
    인 화합물.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, R9가
    Figure pct00594
    , -S(=O)2(CH=CH2), -NHC(=O)CH2Br, -NHC(=O)CH2I, -ONH2, N3,
    Figure pct00595
    인 화합물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, L이 -L1-이고 -L1-이
    -(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-,
    Figure pct00596
    , -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mNH(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)-, -C(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)-, -C(=O)NH(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)-, -C(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNHC(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -NR12S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NR12-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m- 및 -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m-로부터 선택되는 것인 화합물.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, L이 -L1-이고 -L1-이
    -(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-,
    Figure pct00597
    , -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mNH(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNH(CH2)m-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mNHC(=O)NH(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2- 및 -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-로부터 선택되는 것인 화합물.
  23. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이거나, R1이 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 C-결합 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬이고, 여기서 각각은 비치환되거나, 각각은 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
    R2가 -C1-C6알킬이고;
    R3이
    Figure pct00598
    이고;
    R4가 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11,
    Figure pct00599
    이고;
    R5가 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, -((CH2)mO)nR12, 또는 -CN, -C(=O)NH2 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
    R6이 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
    R8이 H이고;
    각각의 R11이 독립적으로 C1-C6알킬, 및 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    각각의 R12가 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    R13이 테트라졸릴, 페닐로 치환된 이미다졸릴, 페닐로 치환된 옥사디아졸릴, 피라졸릴, 피리미디닐,
    Figure pct00600
    또는 -CH2S(=O)2NH2이고;
    각각의 R14가 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    R15가 2-피리딜 또는 4-피리딜이고;
    R16이 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 비치환 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
    R19가 H 또는 C1-C6알킬이고;
    각각의 m이 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
    각각의 n이 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택되는 것인 화합물.
  24. 제23항에 있어서,
    R1이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 C-결합 6원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 C-결합 6원 헤테로시클로알킬은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되는 것인 화합물.
  25. 제1항 내지 제14항, 제23항 및 제24항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 -OH, -OCH3, -NHS(O)2R11, -NHS(O)2(CH2)mN3 또는
    Figure pct00601
    인 화합물.
  26. 제1항, 제5항 내지 제16항 및 제19항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    R13이
    Figure pct00602
    인 화합물.
  27. 제1항 내지 제5항 및 제13항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, R1이
    Figure pct00603
    인 화합물.
  28. 제1항 내지 제5항 및 제13항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, R1이
    Figure pct00604
    인 화합물.
  29. 제1항 내지 제5항, 제13항, 제23항 및 제25항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, R1이
    Figure pct00605
    인 화합물.
  30. 제1항 내지 제5항, 제13항, 제23항 및 제25항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, R1이
    Figure pct00606
    5인 화합물.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, R5가 -CH3 또는 -C(=O)CH3인 화합물.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, R12가 H, -CH3 또는 -CH2CH3인 화합물.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 sec-부틸인 화합물.
  34. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이
    Figure pct00607
    이고;
    R2가 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 sec-부틸이고; R3이
    Figure pct00608
    이고;
    R4가 -OH이고; R9가
    Figure pct00609
    이고,
    L이 L1이고, 여기서 L1이 -(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, 및 -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-로부터 선택되고,
    각각의 m이 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고
    각각의 n이 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택되는 것인 화합물.
  35. 제1항에 있어서,
    Figure pct00610

    Figure pct00611


    _
    Figure pct00612

    Figure pct00613

    Figure pct00614

    Figure pct00615

    Figure pct00616

    Figure pct00617

    Figure pct00618

    Figure pct00619

    Figure pct00620

    Figure pct00621

    로부터 선택되는 화합물.
  36. 화학식 II의 면역접합체:
    <화학식 II>
    Figure pct00622

    상기 식에서,
    Ab는 항원 결합 모이어티를 나타내고;
    L은 -L1L2L3L4L5L6-, -L6L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4L5-, -L5L4L3L2L1-, -L1L2L3L4-, -L4L3L2L1-, -L1L2L3-, -L3L2L1-, -L1L2-, -L2L1- 및 -L1로부터 선택되고,
    여기서,
    L1은 -(CH2)m-, -C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)X1X2(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)X1X2C(=O)(CH2)mNR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2((CH2)mO)n(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NH(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)X1C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-,
    Figure pct00623
    , -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)-, -(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)mNHC(=O)-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)X1-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-,
    Figure pct00624
    , -((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)n-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)m-, -(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)m-, -(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -C(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mS(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12-, -(CH2)mNR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-, -NR12(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)m-, -(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12-, -NR12(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12C(R12)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12(CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -NR12(CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -NR12(CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -NR12C(R12)2(CH2)mOC(=O)NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12C(=O)O(CH2)mC(R12)2NR12-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)mNR12-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)m-, -NR12((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(CH2)m(O(CH2)m)nNR12-, -(C(R12)2)m-, -(CH2CH2O)n-, -(OCH2CH2)n-, -(CH2)mO(CH2)m-, -S(=O)2(CH2)m-, -(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mNR12C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mS(=O)2-, -S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2-, -(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)-, -C(=O)X1X2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mNR12C(=O)-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)mC(=O)-, -C(=O)(CH2)mNR12C(=O(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NR12(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)n(CH2)mNR12C(=O)(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)NR12(CH2)m-, -X4X1X2C(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1X4-, -X1C(=O)(CH2)mNHC(=O)(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)X1-, -C(=O)CHRaaNR12-, -CHRaaC(=O)-, -C(=O)NR12-, -C(=O)O-, -S-, -SCH2(C=O)NR12-, -NR12C(=O)CH2S-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -(CH2)2S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2CH2CH2-, -NR12C(=S)-, -(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(=O)-, -C(=O)((CH2)mO)nX3(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)((CH2)mO)n(CH2)m-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mNR12C(=O)NR12(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mNR12C(=O)-, -C(=O)NR12(CH2)mX3(CH2)m-, -NR12S(=O)2(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2NR12-,
    Figure pct00625

    Figure pct00626

    Figure pct00627

    Figure pct00628
    로부터 선택되고;
    R20은 H 또는 Me이고, R30은 H, -CH3 또는 페닐이고;
    R21은
    Figure pct00629
    이고;
    각각의 R25는 독립적으로 H 또는 C1-4 알킬로부터 선택되고;
    Raa는 글리신, 알라닌, 트립토판, 티로신, 페닐알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 아스파르트산, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 시스테인, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 페닐글리신 및 t-부틸글리신로부터 선택된 아미노산의 측쇄이고;
    R32는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 페닐, 피리미딘 및 피리딘으로부터 선택되고;
    R33은 독립적으로
    Figure pct00630
    로부터 선택되고;
    R34는 독립적으로 H, C1-4 알킬, 및 C1-6 할로알킬로부터 선택되고;
    X1은
    Figure pct00631
    로부터 선택된 자기 희생적 스페이서이고;
    X2는
    Figure pct00632
    로부터 선택된 디펩티드이고;
    X3은
    Figure pct00633
    이고;
    X4는
    Figure pct00634
    이고;
    L2, L3, L4, L5, 및 L6은 각각 독립적으로 결합 및 L1로부터 선택되고;
    y는 1 내지 16의 정수이고;
    R101은 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
    Figure pct00635
    기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
    R101은 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
    Figure pct00636
    기에 C-결합되고 L1에 N-결합되거나 L1에 C-결합되고, 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되고;
    R2는 -C1-C6알킬이고;
    R3은
    Figure pct00637
    이고;
    R4는 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, 또는 -NR12(CH2)mR16, -NHS(O)2R11 또는
    Figure pct00638
    이고;
    R5는 C1-C6알킬, -C(=O)R11, -(CH2)mOH, -C(=O)(CH2)mOH, -C(=O)((CH2)mO)nR12, -((CH2)mO)nR12, 또는 -CN, -C(=O)NH2 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
    R6은 할로, 옥소, OH, C1-C6알킬, -N(R14)2, -R16 및 -NR12C(=O)R11이고;
    R11은 C1-C6알킬, 또는 1 내지 5개의 히드록실로 임의로 치환되는 C1-C6알킬이고;
    각각의 R12는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    R13은 테트라졸릴, 페닐로 치환된 이미다졸릴, 페닐로 치환된 옥사디아졸릴, 피라졸릴, 피리미디닐,
    Figure pct00639
    또는 -CH2S(=O)2NH2이고;
    각각의 R14는 독립적으로 H 및 C1-C6알킬로부터 선택되고;
    R16은 N 및 O로부터 독립적으로 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 N-결합 4-8원 헤테로시클로알킬이고;
    R19는 H 또는 C1-C6알킬이고;
    각각의 m은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로부터 선택되고,
    각각의 n은 독립적으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 및 18로부터 선택된다.
  37. 제36항에 있어서, 화학식 II의 면역접합체가 화학식 IIb의 면역접합체인 면역접합체:
    <화학식 IIb>
    Figure pct00640
  38. 제36항 또는 제37항에 있어서, 화학식 II, 화학식 IIa 또는 화학식 IIb의 면역접합체가 화학식 IIc의 구조를 갖는 면역접합체인 면역접합체.
    <화학식 IIc>
    Figure pct00641
  39. 제36항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
    R101이 1-2개의 N 헤테로원자 및 C1-C2알킬렌 브릿지를 함유하는 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
    Figure pct00642
    기에 C-결합되고 L1에 N-결합되고, 6원 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되거나;
    R101이 1-2개의 N 헤테로원자를 함유하는 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼이고, 여기서 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은
    Figure pct00643
    기에 C-결합되고 L1에 N-결합되고, 5-8원 융합 비시클릭 헤테로시클로알킬 2가 라디칼은 비치환되거나 R5 및 R6으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 치환되는 것인 면역접합체.
  40. 제36항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, R101이
    Figure pct00644
    인 면역접합체.
  41. 제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, R101이
    Figure pct00645
    인 면역접합체.
  42. 제36항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, R3이
    Figure pct00646
    이고, R19가 H인 면역접합체.
  43. 제36항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 -OH, C1-C6알콕시, -N(R14)2, -R16, -NR12(CH2)mN(R14)2, 또는 -NR12(CH2)mR16인 면역접합체.
  44. 제36항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, R13이 테트라졸릴,
    Figure pct00647
    인 면역접합체.
  45. 제36항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, R4가 -OH 또는 C1-C6알콕시인 면역접합체.
  46. 제36항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, R5가 -CH3 또는 -C(=O)CH3인 면역접합체.
  47. 제36항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, R12가 H, -CH3 또는 -CH2CH3인 면역접합체.
  48. 제36항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 메틸, 에틸, 이소프로필 또는 sec-부틸인 면역접합체.
  49. 제36항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1이 -(CH2)mNHC(=O)(CH2)mX3(CH2)m*-, -(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)mX2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m*-, -(CH2)mNH(CH2)mC(=O)*-, -((CH2)mO)n(CH2)m*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(=O)*-, -(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mNHC(=O)(CH2)m*-, -(CH2)mC(=O)NH(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)NH(CH2)m*-, -(CH2)mS(=O)2*-, -(CH2)mX3(CH2)mS(=O)2*-, -(CH2)mOC(=O)NH(CH2)mC(=O)*-, 및 -(CH2)mOC(=O)NH(CH2)mS(=O)2*-이고, 여기서 *는 R101에의 부착점을 나타내고;
    L2가 결합,
    Figure pct00648
    , -S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-, -SCH2CH2C(=O)NH-, -NHC(=O)CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2NH- 또는 -NHS(=O)2CH2CH2S-이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
    L3, L4, L5 및 L6이 결합인 면역접합체.
  50. 제36항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1이 -(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m*- 및 -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)*-로부터 선택되고, 여기서 *는 R101에의 부착점을 나타내고;
    L2가
    Figure pct00649
    , -S-, -SCH2(C=O)NH-, -NHC(=O)CH2S-, -SCH2CH2C(=O)NH-, -NHC(=O)CHCH2S-, -SCH2CH2S(=O)2-, -S(=O)2CH2CH2S-, -SCH2CH2S(=O)2NH- 또는 -NHS(=O)2CH2CH2S-이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
    L3, L4, L5 및 L6이 결합인 면역접합체.
  51. 제36항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서,
    L1이 -(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)*-, -(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m-, -(CH2)mX3(CH2)mC(=O)X2X1C(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(=O)*-, -(CH2)m(O(CH2)m)nS(=O)2(CH2)m*- 및 -(CH2)mNR12(CH2)mC(=O)*-로부터 선택되고, 여기서 *는 R101에의 부착점을 나타내고;
    L2가
    Figure pct00650
    이고, 여기서 *는 L1에의 부착점을 나타내고;
    L3, L4, L5 및 L6이 결합인 면역접합체.
  52. 제36항 내지 제51항 중 어느 한 항의 면역접합체, 및 하나 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  53. 치료 유효량의 제36항 내지 제51항 중 어느 한 항의 면역접합체, 및 하나 이상의 치료 활성 공동-작용제를 포함하는 조합물.
  54. 세포 증식 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 유효량의 제36항 내지 제51항 중 어느 한 항의 면역접합체를 투여하는 것을 포함하는, 세포 증식 장애를 치료하는 방법.
  55. 제36항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 면역접합체.
  56. 제36항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 암을 치료하는데 사용하기 위한 면역접합체.
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