KR20160094161A - 황금 추출물을 포함하는 다크서클 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 황금 추출물을 포함하는 다크서클 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명의 조성물은 강력한 UGT1A1 발현 효과를 나타내며 부작용 없이 다크서클 개선효과를 얻을 수 있다.

Description

황금 추출물을 포함하는 다크서클 개선용 화장료 조성물{Anti-dark circle composition comprising Scutellaria baicalensis extract}

본 발명은 다크서클 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 눈 밑에 생기는 다크서클로 인해 눈 밑이 검게 보이는 증상을 완화하면서 부작용이 적은 화장료 조성물에 관한 것이다.

UGT1A1(UDP glucuronosyltransferase(글루쿠로노실트랜스퍼라제) 1 family, polypeptide A1)은 간과 피부에서 주로 발현하는 human enzyme으로 glucuronidation pathway에서 스테로이드, 빌리루빈(Bilirubin), 호르몬 등을 수용화 시키는 기능을 갖는다.

다크서클은 안구 주변의 눈가 피부에 어두운 음영이나 색소 침착 등이 생기는 현상으로 주로 눈 아래 피부에 발생하며, 그 원인이 다양하다. 다크서클의 원인은 크게 물리적인 요인과 생물학적 요인으로 분류할 수 있고, 다크서클의 물리적인 요인으로는 안구 아래쪽의 피부의 근막에 비정상적으로 지방의 축적되어 생기는 주머니형 피부 조직에 의한 음영이 대표적이다. 생물학적 요인의 경우 멜라닌의 축적, 혈관의 약화로 유발되는 빌리루빈 등의 침착에 의한 혈색변화 등이 타 피부 대비 상대적인 얇은 두께를 지닌 안구 근처의 피부에 두드러지게 표출되는 것으로 여겨지고 있다.

다크서클의 현상에 따른 병리학적인 영향은 입증된바 없으나, 건강한 이미지를 손상시키고 외모에 부정적인 영향을 미치는 등 많은 사람들이 눈가의 미용적인 문제로 다크서클을 1순위로 꼽고 있다. 이런 다크서클 현상은 미용상 해결해야 할 중요한 문제로 인식되고 있다.

현시점에서 다크서클을 치료하는 방법은 각각의 원인에 대응하여 존재한다. 물리적인 원인인 주머니형 피부 조직의 경우 외과적인 수술에 의한 지방의 흡입이나 분산 또는 조직의 제거 등이 있으나, 수술로 인한 외부활동의 지장과 비용적인 문제로 접근성이 용이하지 않다. 또한 이런 외과적인 수술 방법은 오직 물리적인 원인에 의한 다크서클의 제거에만 사용될 수 있다. 그 외에 미용적인 방법으로 다크서클을 치료하기 위해서 가장 많이 사용되는 방법은 파운데이션이나 컨실러 등의 메이크업 화장료에 의해 차폐하여 가리는 방법이다. 그 외에 멜라닌에 의한 다크서클은 기존의 미백 화장품으로 비슷한 효과를 볼 수 있으나, 헤모글로빈 분해물질의 침착에 대한 대책은 없다.

따라서 본 발명에서는 이러한 상황을 고려하여 다양한 천연물 추출물 소재를 대상으로 스크리닝을 수행하였고, 헤모글로빈의 분해 부산물인 빌리루빈의 분해 기능이 있는 UGT1A1 발현을 증가시키는 소재를 선발하였다.

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 다크서클 개선 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

특히 본 발명은 천연 생약 추출물을 이용한 화장료 조성물로서, 부작용이 적어 안전하면서도 다크서클 개선 효과가 뛰어난 화장료 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 상기 기술적 과제를 해결하기 위하여 황금 추출물을 포함하는 다크서클 예방 및/또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 발명자들은 황금 추출물 사용할 때 눈 밑의 다크서클을 완화할 수 있다는 사실을 실험을 통하여 발견하고, 황금 추출물의 다크서클 개선 또는 예방용이라는 새로운 용도를 제공하게 되었다.

더 나아가 본 발명은 피부에 도포했을 때 피부에 존재하는 빌리루빈을 복합화 시켜 수용화시키는 UGT1A1의 발현을 증가시킴으로써, 눈 아래 피부에 발생하는 다크서클 증상을 완화시키고 나아가 예방할 수 있는 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 사용된 "예방"이라 함은 눈 밑의 혈류량을 흐름을 좋게하고, 피부 내 빌리루빈의 분해를 증가시켜 다크서클이 발생되는 것을 방지하는 것을 의미하며, 경미한 다크서클의 발생까지도 포함하는 넓은 의미로 사용된 용어이다.

본 명세서 사용된 "개선"이라 함은 혈류량을 개선하고, 눈 밑이 진해보이는 정도를 완화하여 본 발명의 조성물을 사용하기 전보다 본 발명의 조성물을 사용하고 난 후 눈 밑이 더욱 밝아지거나 맑아진 상태를 의미하는 넓은 의미로 사용된 용어이다.

황금(Scutellaria baicalensis)은 꿀풀과에 속한 여러해살이풀이다. 황금의 원산지는 동아시아 대륙으로 한국 각처의 산지에 나고, 흔히 밭에서 재배된다. 황금 식물체의 높이는 60cm 가량이며, 전체에 털이 나 있고, 줄기는 밀생하며 네모지고, 가지가 많이 갈라진다. 황금의 잎은 마주나며, 잎자루는 거의 없고, 길이는 4.5cm 및 폭은 8mm이며, 가장자리에 톱니가 없다. 황금의 꽃은 총상꽃차례, 자주색이며, 원줄기 끝과 가지 끝에 붙는다. 황금의 꽃받침은 종 모양이며, 꽃이 핀 후에 닫히고, 화관은 입술 모양이며, 화관의 길이는 2.5cm 정도이다. 황금의 열매는 꽃받침 안에 들어 있고 둥근 모양이다. 황금의 어린 순은 식용으로 사용되며, 뿌리는 이뇨, 소염성 해열, 또는 출혈성 염증 등에 약재로 이용된다.

상기의 황금은 이전에 다크서클 개선 효과가 있다고 알려지지 않았으며, 나아가 상기 천연 식물의 추출물을 다크서클 개선 효과를 위해 응용한 예도 연구된 바가 없었다.

본 발명자들은 황금 추출물을 이용하여 다크서클을 개선하는 UGT1A1 효소 발현 능력을 평가한 결과, 황금 추출물은 강력한 UGT1A1 발현 효과를 나타냄을 확인하였다.

본 발명의 발명자들은 상기와 같이 유익한 생약 추출물을 이용하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 황금 추출물은 본 발명이 속한 분야에서 통상적인 방법으로 추출해낸 추출물을 의미하며, 추출 후 분획, 분리, 여과 등의 방법으로 추가적으로 정제될 수 있다.

예를 들어, 본 발명에 따른 상기 황금 추출물은 이들의 용매 추출물 또는 이의 건조물일 수 있다. 황금 추출 시 추출 용매는 천연물 추출에 사용되는 용매이면 제한 없이 사용할 수 있으며, 예를 들어, 정제수; 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올 등의 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올; 글리세린, 부틸렌글라이콜, 프로필렌글라이콜 등의 다가 알코올; 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 아세톤, 벤젠, 헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매; 또는 이들은 혼합 용매를 이용할 수 있으나, 정제수, 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올과 같은 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 또는 이들의 혼합 용매를 사용하는 것이 바람직하고, 정제수, 에탄올 또는 이들의 혼합용매를 사용하는 것이 더욱 바람직하며, 정제수와 에탄올의 혼합용매를 사용하는 것이 본 발명의 목적상 더욱 바람직하다.

상기 추출 용매의 양은 황금 중량대비 10 내지 100배가 이용될 수 있고, 바람직하게는 20 내지 80배가 이용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 30 내지 50배가 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 추출물을 추출하는 방법은 교반 추출, 냉침 추출, 열수 추출, 침지 추출, 초임계 추출, 아임계 추출, 고온 추출, 고압 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 당업계의 통상적인 추출방법을 사용할 수 있으며, 가온하여 환류 추출 또는 상온에서 추출하는 것이 바람직하다. 추출 시 온도는 10 내지 30℃인 것이 바람직하고, 상기 추출 시간은 1일 내지 20일인 것이 바람직하며, 1 내지 5일인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

더욱 구체적으로, 황금을 음건하여 분쇄한 후, 추출용매를 황금 분쇄물의 1 내지 20배 부피량만큼 가하여 추출하고 나서, 선택적으로 (감압)농축, 건조 또는 정제 과정을 거쳐 제조할 수 있다. 보다 구체적으로, 전술한 방법과 같이 추출용매를 가하여 유효성분물질을 추출하되 (a) 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 50 내지 100℃의 온도 조건에서 1 내지 20시간 가열하여 추출하거나, (b) 5 내지 37℃의 온도 조건에서 1 내지 15일간 침적시켜 유효성분을 추출할 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 또 다른 실시예에 따르면, 황금 추출물은 황금 추출물의 분획물일 수 있다.

본 발명의 황금 분획물은 상기 황금 추출물(바람직하게는 탄소수 1-4의 저급 알코올 추출물)을 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 에틸 아세테이트와 같은 물보다 극성이 낮은 용매로 분획하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 헥산 또는 클로로포름을 이용할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.

특히, 본 발명에 따른 효과를 달성한다는 목적에서 본 발명에 따른 황금 추출물은 탄소수 1-4의 저급 알코올 추출물의 헥산 또는 클로로포름 분획물인 것이 바람직하다.

상기 분획물은 건조시키기 전의 액상 상태의 황금 추출물을 이용하거나 건조된 황금 추출물을 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매 등 적당한 용매에 현탁 또는 용해시킨 후, 헥산, 클로로포름, 부탄올 또는 에틸 아세테이트와 같은 물보다 극성이 낮은 용매를 순차적으로 첨가하여 각각의 층을 분리한 다음 각 층을 감압 농축 및/또는 건조시켜 수득할 수 있다.

이때, 상기 감압 농축은 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.

또한, 본 발명에 따른 “건조”는 감압 건조, 진공 건조, 비등 건조, 분무 건조, 상온 건조 또는 동결 건조일 수 있으나, 동결 건조를 하는 것이 더욱 바람직하다. 다만 본 발명은 이러한 건조 방법에 한정되지 않는다.

본 발명의 황금 추출물은 조성물 전체 중량 대비 0.0001 내지 10 중량% 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.0005 내지 5 중량%, 더욱더 바람직하게는 0.001 내지 1 중량% 포함될 수 있다.

상기 추출물의 함량이 0.0001 중량% 미만일 경우, UGT1A1 발현을 기대하기 어렵고, 10 중량%를 초과하는 경우, 증가하는 함유량만큼 뚜렷한 효과가 기대되지 않는다.

본 발명의 황금 추출물은 통상의 생약 추출물을 함유하는 화장료 조성물 제조 방법에 따라 화장료 조성물로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 추출물 이외에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 보습제, 증점제, 계면활성제, 유상기제, 방부제, 산화방지제, 알코올, 향료, pH 조절제, 천연추출물 등은 물론 상기 추출물에 의한 다크서클 개선 효과를 배가시키기 위한 화학적 성분을 적당한 양으로 배합할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예컨대, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 구체적으로, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 바람직한 제형으로는, 화장료 조성물 내에 추출물들이 고루 분산되고, 본 발명의 효과가 가장 잘 발휘되는 로션, 크림, 에센스 제형이 바람직하다.

본 발명의 황금 추출물을 함유하는 조성물은 다크서클 예방 및 개선에 효과를 가질 수 있다.

특히 본 발명의 황금 추출물을 함유하는 조성물은 다크서클의 증상 중 빌리루빈에 의한 혈색변화 및 색소 침착 현상에 대한 개선 효과가 우수하다.

본 발명의 조성물은 임상에서 눈밑 명도차 개선 효과 또한 우수한 것으로 나타났다.

본 발명의 조성물은 천연 식물 유래 성분을 함유하고 있어 부작용이 적으면서 다크서클 예방 및 개선 효과가 우수하다.

도 1은 UGT1A1의 프로모터 영역(-890~+80)을 포함하는 루시퍼레이즈 발현용 벡터의 개략도이다.
도 2는 UGT1A1의 발현 정도를 알아보기 위해 측정한 루시퍼레이즈 활성을 나타낸 그래프이다.
도 3은 음성 대조군의 mRNA 발현량을 1.0으로 기준하여 황금 추출물 처리 실험군의 mRNA 발현량을 수치화하여 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위하여 하기 실시예 등을 들어 설명한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며 본 발명의 범위가 아래에서 상술하는 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 본 발명의 구체적 이해를 돕기 위해 예시적으로 제공되는 것이다.

황금 추출예

추출예 1

황금을 잘 건조하여 세절한 후, 건조중량 100g을 플라스크에 넣고 추출용매(메탄올) 1000g으로 1일간 추출하였다. 추출물을 0.2㎛의 기공 크기를 가진 필터로 여과하여 황금 추출물을 제조하였다. 추출물을 감압 농축하여 건조추출물을 얻었다.

<실시예 1> UGT1A1 발현 평가

인체 피부세포와 마찬가지로 UGT1A1을 발현하는 세포주인 HepG2를 스테로이드 호르몬이 제거된 우태아 혈청(5% charcoal stripped FBS)을 포함하는 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM; Invitrogen, 미국) 배지에 계대 배양하였다. UGT1A1의 프로모터 활성 정도를 알아보기 위해서 리포터 벡터를 제조하였다. 이를 위해 우선 인간 게놈 DNA로부터 UGT1A1의 프로모터 영역 (-890~+80)을 PCR을 이용하여 증폭하였고, 이 때 사용한 프라이머를 하기 표 2에 나타내었다.

	Sequence
Forward	TTTGGTACCTTTGATAAATTGTGGGGCAA
Reverse	AAAGGTACCCCCCCTCCCTCTGCCTCTTA

도 1을 참고하면, 증폭된 DNA를 KpnI과 NcoI 제한효소를 이용하여 자르고 파이어 플라이 루시퍼레이즈(Firefly luciferase)를 발현하는 pGL3 벡터에 클로닝 하였다.

이 벡터를 HepG2 세포에 트랜스팩션(transfection)을 통해 주입하였다. 상기 제조된 플라즈미드 벡터와 레닐라 루시퍼레이즈(Renilla luciferase)를 항상 발현하는 플라즈미드가 40 : 1 의 비율로 들어있는 DNA 혼합물로 조합하여 프로모터 어세이에 사용하였다. HepG2 세포 2 x 10⁵ 개를 24 웰(well) 플레이트에 분주하고 18시간 배양한 후, 상기 플라즈미드 유전자인 UGT1A1 reporter 1 μg 을 GenJet^TM reagent(SignaGen, 미국)를 이용하여 제조사의 설명서에 따라 일시적 트랜스팩션(transient transfection) 하였다. 이 세포들을 24 시간 배양 후, 인산화완충용액(PBS)로 세척한 다음 우태아 혈청이 없는 DMEM 배지에 황금 추출물을 0.1% 첨가하였다. 음성 대조군(Mock)으로 동량의 용매를 처리하고, 양성 대조군(Positive control)으로는 논문을 통해 UGT1A1의 발현을 높인다는 6,7-dimethylesculrtin을 200μM/ml 로 처리하여 사용하였다. 24시간 배양 후, 인산완충용액으로 세척하고, 세포 용해 완충액을 이용하여 세포를 용해한 후 원심분리기를 이용하여 상등액만 추출하여 루시퍼레이즈 어세이를 실시한 후 퍼킨엘머 빅터3(Perkin Elmer Victor3, 미국)로 발광정도(luminescence)를 측정하고 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타나는 바와 같이, 본 발명에 따른 황금 추출물은 유의한 정도의 UGT1A1의 발현을 증가시켜 높은 파이어플라이 루시퍼레이즈 활성을 나타냄을 알 수 있다. 해당 측정값은 firefly luciferase 수치를 renilla luciferase 수치로 보정해 주었다.

<실시예 2> UGT1A1 유전자 발현 조절 효과

HepG2 세포는 생명공학연구원에서 배양하는 세포를 분주 받아 사용하였고, Dermal basal cell media(DBCM, ATCC, 미국)를 사용하였다. 8 x 10⁵ 개의 세포를 6 웰 플레이트에 분주하여 18시간 배양한 후, 0.1% 농도로 황금 추출물을 24시간 동안 처리하였다. 세포를 회수하여 PBS로 세척한 후, RNeasy mini kit (Qiagen, Germany)를 이용하여 전체 RNA를 추출한 뒤, 정량하여 1 μg의 RNA를 GeneAmp RNA PCR kit (Applied Biosystems, USA)를 이용하여 역전사(reverse transcription)하였다. 역전사 반응은 Mycycler PCR 기기(Biorad, USA)를 이용하여 수행하였다.

합성된 cDNA는 한 반응 당 300ng을 사용하였고, UGT1A1과 GAPDH의 Taqman^® probe (Invitrogen, 미국, HS02511055_S1, HS03929097_g1)를 이용하여 quantitative real time PCR을 수행하였다. Real time PCR은 CFX96 Touch™ Real-Time PCR Detection System 기기 (Biorad, 미국)를 이용하여 수행하였다. Real time PCR을 통해 얻은 실험 결과는 housekeeping 유전자인 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)를 기준으로 △Ct 방법(Livak KJ, Schmittgen TD: Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method, Methods, 25, 402-408(2001)으로 계산하여 나타내었다. 또한, 음성 대조군의 mRNA 발현량을 1.0으로 기준하여 황금 추출물 처리 실험군의 mRNA 발현량을 수치화하여 도 3에 나타내었다.

<제조예> 크림 제조

조성물(중량%)	제조예
황금 추출물	1
스테아린산	15
세탄올	1
수산화칼륨	0.7
글리세린	5
프로필렌 글리콜	3
방부제	적량
향	적량
정제수	to 100

상기 표 3와 같이 황금 추출물을 유효성분으로 포함하는 크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

<효과실험예 1> 피부 명도차 개선 효과

다음과 같은 방법으로 제조예에서 제조한 제품을 이용하여 눈 아래 피부의 명도차 개선 효과를 측정하기 위한 실험을 실시하였다: 효과 실험은 상기 기술된 제조예의 크림을 실시예로, 실시예에서 황금추출물이 들어가지 않은 크림을 비교예로 사용하여 30명의 참여자를 대상으로 진행하였다. 효과 실험의 참여자는 실시예와 비교예의 크림을 매일 오전 중 1회, 취침 전 1회, 하루 총 2회로 4주간 각 참여자의 좌우 눈 아래지역에 주기적으로 도포를 실시하였다. 4주 후에 항온항습실에서 피험자를 10분 동안 충분히 안정시킨 다음, Chromameter CR-400(Minolta, Japan)를 이용하여 눈 밑 색소가 침착된 부위의 L^*, a^*, b^* 값 변화를 측정하였고, 각 수치당 유의한 차이를 보인 인원들의 비율을 확인하였다. L*은 명도 축, a*는 녹색/적색 축, b*는 청색/황색 축을 뜻한다. 다크서클 개선 결과를 표 4에 나타내었다.

	비교예 (좌측 눈 아래)	실시예 (우측 눈 아래)
L*	7명 (23.3%)	22명 (73.3%)
a*	12명 (40.0%)	20명 (66.7%)
b*	11명 (36.7%)	19명 (63.3%)

상기 표 4는 눈 밑 색소가 침착된 부위의 L^*, a^*, b^* 값 변화를 측정한 결과를 나타낸 값이다. 상기 결과에 따르면, 본 발명의 황금 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 해당 추출물이 들어가지 않은 비교예에 비해 눈 밑의 명도차 개선에 효과가 있는 것을 알 수 있으며, 이로써 눈 밑 다크서클 개선에 효과가 있을 것으로 생각된다.

Claims (4)

1. 황금 추출물을 유효 성분으로 포함하는 다크서클 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 황금 추출물은 조성물 전체 중량 대비 0.0001 내지 10 중량% 포함되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 황금 추출물은 UGT1A1(UDP 글루쿠로노실트랜스퍼라제 1A1) 발현을 증가시키는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
4. 황금 추출물을 유효 성분으로 포함하는 UGT1A1 발현용 조성물.
   

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