KR20160085342A - 개질된 kz144 엔도리신 서열 - Google Patents

개질된 kz144 엔도리신 서열 Download PDF

Info

Publication number
KR20160085342A
KR20160085342A KR1020167015821A KR20167015821A KR20160085342A KR 20160085342 A KR20160085342 A KR 20160085342A KR 1020167015821 A KR1020167015821 A KR 1020167015821A KR 20167015821 A KR20167015821 A KR 20167015821A KR 20160085342 A KR20160085342 A KR 20160085342A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
lys
leu
gly
ala
thr
Prior art date
Application number
KR1020167015821A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102302044B1 (ko
Inventor
슈테판 밀러
라인하드 슈테어너
하이케 슈튜어
Original Assignee
뤼산도 아게
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 뤼산도 아게 filed Critical 뤼산도 아게
Publication of KR20160085342A publication Critical patent/KR20160085342A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102302044B1 publication Critical patent/KR102302044B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2462—Lysozyme (3.2.1.17)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/503—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01017—Lysozyme (3.2.1.17)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

본 발명은 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드와 관련된다. 상기 폴리펩티드는 바람직하게는 그람-음성 박테리아, 특히 슈도모나스 및/또는 캄필로박터 박테리아의 펩티도글리칸을 분해한다. 또한, 본 발명은 상기 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 벡터, 및 대응하는 숙주 세포와 관련된다. 끝으로 본 발명은 본 발명에 따른 상기 폴리펩티드, 핵산, 벡터 및/또는 숙주 세포를 포함하는 조성물과 관련된다.

Description

개질된 KZ144 엔도리신 서열{MODIFIED KZ144 ENDOLYSIN SEQUENCE}
본 발명은 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드와 관련된다. 상기 폴리펩티드는 바람직하게는 그람-음성 박테리아, 특히 슈도모나스 및/또는 캄필로박터 박테리아의 펩티도글리칸을 분해한다. 또한, 본 발명은 상기 폴리펩티드를 인코딩 하는 핵산, 상기 핵산을 포함하는 벡터, 및 대응되는 숙주 세포와 관련된다. 끝으로, 본 발명은 본 발명에 따른 상기 폴리펩티드, 핵산, 벡터 및/또는 숙주 세포를 포함하는 조성물과 관련된다.
거대한, 용해성 Myoviridae 박테리오파지 φΚΖ (280 334 bp)는 많은 일반적으로 사용되는 항생제에 내성이 있는 중요한 기회감염 병원균이고 따라서 병원 환경에서의 상당한 우려를 유발하는, Pseudomonas aeruginosa를 감염시킨다. 2007년에, Briers et al. (Molecular Microbiology (2007) 65(5), 1334-1344) 은 상기 박테리오파지의 지놈을 시퀀싱하였고, 고도의 용해성 펩티도글리칸 가수분해효소인 엔도리신 KZ144을 규명하였다. WO 2010/149792에서, 효소적 요소로서 상기 엔도리신 서열을 포함하는 융합 단백질이 그람-음성 박테리아의 세포벽을 분해하는데 사용하기 위해서 제안되었다.
상기 엔도리신 및 융합 단백질은 전반적으로 효과적인 반면, 몇몇 기술적 적용에 있어서는 엔도리신 폴리펩티드가, 특히 안정성 및 프로세싱에 대하여, 차선적인 특징(suboptimal characteristics)를 나타내는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 이 점에 있어서 바람직하게는 향상된 특징을 나타내는 추가의 엔도리신 효소에 대한 필요가 당해 분야에 존재한다. 따라서, 본 발명의 문제는 상기의 폴리펩티드를 제공하는데에 있다.
상기 문제점은 첨부된 청구항에서 설정되는 청구 범위(subject-matter)에 의해 해결된다.
첫 번째 측면에서, 본 발명은 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성(sequence identity)을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드와 관련되고, 상기에서 SEQ ID NO: 1 은 하기에 의해 특징화되고:
X1은 부재(absent) 또는 임의의 아미노산, 특히 M일 수 있음,
X14는 임의의 아미노산, 바람직하게는 S, R 또는 N, 더욱 바람직하게는 S 또는 R일 수 있음
X23은 임의의 아미노산, 바람직하게는 S, R 또는 N, 더욱 바람직하게는 S일 수 있음
X50은 임의의 아미노산, 바람직하게는 S, R 또는 N, 더욱 바람직하게는 S 또는 N일 수 있음
X82는 임의의 아미노산, 바람직하게는 T 또는 I일 수 있음
X122는 임의의 아미노산, 바람직하게는 I 또는 M일 수 있음
X149는 임의의 아미노산, 바람직하게는 M 또는 P일 수 있음
X154는 임의의 아미노산, 바람직하게는 L 또는 T일 수 있음
X160은 임의의 아미노산, 바람직하게는 A 또는 T일 수 있음
X167은 임의의 아미노산, 바람직하게는 I 또는 L일 수 있음
X179는 임의의 아미노산, 바람직하게는 N 또는 F일 수 있음
X180은 임의의 아미노산, 바람직하게는 M 또는 E일 수 있음
X186은 임의의 아미노산, 바람직하게는 V 또는 Y일 수 있음
X206은 임의의 아미노산, 바람직하게는 A, N 또는 V일 수 있음
X212는 임의의 아미노산, 바람직하게는 T 또는 N일 수 있음
X224는 임의의 아미노산, 바람직하게는 P 또는 Q일 수 있음
X230은 임의의 아미노산, 바람직하게는 N 또는 Y일 수 있음
X232는 임의의 아미노산, 바람직하게는 S 또는 T일 수 있음;
및 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열도, SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열도, SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열도 포함하지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "폴리펩티드"는, 특히, 특이적 서열 내 펩티드 결합에 의해 연결된 아미노산 잔기의 중합체를 의미한다. 폴리펩티드의 아미노산 잔기는 예를 들어 카보하이드레이트 및 포스페이트와 같은 다양한 기의 공유 부착에 의해 개질될 수 있다. 다른 성분들은 헴(heme) 또는 지질과 같은 폴리펩티드 사슬과 더 느슨하게 연합될 수 있으며, 이는 본원에서 "폴리펩티드"라는 용어에 의해 또한 포함되는 접합된 폴리펩티드를 생성할 수 있다. 본원에서 사용되는 상기 용어는 또한 단백질을 포함하도록 의도된다. 따라서, 용어 "폴리펩티드"는 또한 예를 들어 두 개 이상의 아미노산 사슬의 복합체(complex)를 포함한다. 용어 "폴리펩티드"에는 당업계에서 일반적으로 사용되는 선택적 개질, 예를 들어 비오틴화, 아세틸화, 페길레이션, 아미노-, SH- 또는 카르복실-기의 화학적 변화 (예컨대, 보호기) 등을 나타내는 폴리펩티드의 구현예가 포함되지 않는다. 하기의 설명으로부터 명백해지는 바와 같이, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 또한 융합 단백질, 즉 자연에서는 조합이 발생하지 않는, 적어도 두 개의 아미노산의 연결,일 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "폴리펩티드"는 아미노산 중합체의 특정의 길이로 한정되지 않지만, 일반적으로 폴리펩티드는 약 50개 이상의 아미노산, 약 100개 이상의 아미노산, 또는 심지어 약 150개 이상의 아미노산의 길이를 나타낼 것이다. 필수적이지는 않지만 일반적으로, 본 발명의 전형적인 폴리펩티드는 길이가 약 750개의 아미노산을 초과하지는 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "% 서열 상동성"은, 다음과 같이 이해되어야 한다: 비교되는 두 서열이 서열 간 최대 연관성(maximum correlation)을 부여받기 위해 정렬된다. 이는 정렬(alignment)의 정도를 향상시키기 위해 하나 또는 양쪽 서열에 "갭"의 삽입을 포함할 수 있다. % 상동성은 이후, 특히 동일 또는 유사 길이에 적합한, 비교되는 각 서열의 전체 길이에 따라 (소위 글로벌 정렬(global alignment)), 또는 동일하지 않은 길이의 서열에 더욱 적합한, 짧고, 정의된 길이에 따라(소위 로컬 정렬(local alignment)) 결정된다. 상기 단락에서, 예를 들어 쿼리 아미노산 서열에 적어도 95%의 "서열 상동성"을 갖는 아미노산 서열은, 대상 아미노산 서열이 쿼리 아미노산 서열의 각 100개의 아미노산 당 5개까지 아미노산 변경(alterations)을 포함할 수 있는 것을 제외하고, 대상 아미노산 서열의 서열이 쿼리 서열에 동일한 것을 의미하도록 의도된다. 다시 말해, 쿼리 아미노산 서열에 적어도 95% 상동성의 서열을 갖는 아미노산 서열을 얻기 위해, 대상 서열 내 아미노산 잔기의 5% (100개 중 5개)까지 다른 아미노산으로 삽입 또는 치환되거나 또는 결실될 수 있다. 2 이상의 서열의 상동성 및 유사성(homology)을 비교하는 방법은 당해 기술분야에 잘 알려져 있다. 두 서열이 상동인 비율(percentage)는 예를 들어 수학적 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다. 바람직하게는, 비제한적으로, 사용될 수 있는 수학적 알고리즘의 예로 [Karlin et al. (1993), PNAS USA, 90:5873-5877]의 알고리즘이 있다. 상기 알고리즘은 프로그램, 예컨대, BLAST 또는 NBLAST 프로그램 (또한, Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215, 403-410 또는 Altschul et al. (1 997), Nucleic Acids Res, 25:3389-3402 참조, 월드 와이드 웹 사이트 ncbi.nlm.nih.gov의 NCBI 홈페이지를 통해 접속가능 한) 및 FASTA (Pearson (1 990), Methods Enzymol. 83, 63-98; Pearson and Lipman (1988), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A 85, 2444-2448.)의 BLAST 패밀리 내로 통합된다. 특정한 규모의 다른 서열과 상동인 서열은 이들 프로그램을 통해서 확인될 수 있다. 나아가, [Wisconsin 서열 분석 패키지, version 9.1] (Devereux et al, 1984, Nucleic Acids Res., 387-395) 에서 사용 가능 한 프로그램, 예를 들어 BESTFIT 및 GAP 프로그램,은 두 개의 폴리펩티드 서열간 % 상동성을 결정하는데 사용될 수 있다. BESTFIT은 (Smith and Waterman (1981 ), J. Mol. Biol. 147, 195-197.)의 "로컬 유사성" 알고리즘을 사용하고, 두 서열 사이의 유사성(similarity)의 최적의 단일 영역을 찾는다. 참조 서열에 대해 특정 정도의 서열 상동성을 공유하는 아미노산 서열이 본원에서 인용되는 경우, 서열 내 상기 차이는 바람직하게는 보존적 아미노산 치환에 기인한다. 바람직하게는, 상기 서열은 예컨대 비록 더 낮은 속도일지라도, 참조 서열의 활성을 유지한다. 또한, "적어도" 특정 비율의 서열 상동성을 공유하는 서열이 본원에서 인용되는 경우, 이후 100%의 서열 상동성은 바람직하게는 포함되지 않는다.
본원에서 사용되는 "보존적 아미노산 치환"은 충분하게 유사한 물리화학적 특성을 가지는 아미노산 그룹 내에서 발생할 수 있어 그룹의 구성원들 사이의 치환은 분자의 생물학적 활성이 보존된다 (예컨대, Grantham, R. (1974), Science 185, 862-864 참조). 특히, 보존적 아미노산 치환은 바람직하게는 동일한 분류의 아미노산 (예컨대, 염기성 아미노산, 산성 아미노산, 극성 아미노산, 지방성 측쇄를 가지는 아미노산, 양성 또는 음성으로 전된 측쇄를 가지는 아미노산, 측쇄 내 방향족을 가지는 아미노산, 수소 브릿지 내로 들어갈 수 있는 측쇄, 예컨대 하이드록시 기능을 가지는 측쇄를 가지는 아미노산 등)에서 비롯된 치환이다. 본원 내의 보존적 치환은 예를 들어, 염기성 아미노산 잔기(Lys, Arg, His)로 또 다른 염기성 아미노산 잔기(Lys, Arg, His)를 치환, 지방성 아미노산 잔기(Gly, Ala, Val, Leu, lie)로 또 다른 지방성 아미노산 잔기를 치환, 방향성 아미노산 잔기(Phe, Tyr, Trp)로 또 다른 방향성 아미노산 잔기를 치환, 트레오닌을 세린으로 또는 류신을 이소류신으로 치환하는 것이다. 추가의 보존적 아미노산 교환(exchange)은 당업자에게 공지되어 있다.
본원에서 사용되는 용어 "결실"은 바람직하게는 서열 내에서 또는 N- 또는 C-말단에서, 개별 참조 서열과 비교하여 유도 서열(derivative 서열) 내 1, 2, 3, 4, 5개의 (혹은 심지어 5개 초과의) 연속적인 아미노산 잔기의 부재를 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "삽입"은 바람직하게는 개별 참조 서열과 비교하여 유도 서열 내 1, 2, 3, 4, 5개의 (혹은 심지어 5개 초과의) 연속적인 아미노산 잔기가 추가적으로 서열 사이에 존재하는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "부가"는 바람직하게는 개별 참조 서열과 비교하여 유도 서열의 N- 및/또는 C-말단에 1, 2, 3, 4, 5개의 (혹은 심지어 5개 초과의) 연속적인 아미노산 잔기의 부가적인 존재를 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "치환"은 참조 서열 내 대응되는 위치에서 존재 또는 부재 하는 아미노산 잔기와 상이한, 유도 서열의 특정 위치에의 아미노산 잔기의 존재를 의미한다. 전술된 바와 같이, 바람직하게는 상기 치환은 보존적 치환이다.
본원에서 사용되는 용어 "세포벽"은 그람-음성 박테리아의 외부 세포 인클로저(enclosure)를 형성하고 따라서 세포의 온전성(integrity)을 보장하는 모든 구성성분을 의미한다. 특히, 본원에서 사용되는 용어 "세포벽"은 펩티도글리칸, 지질다당류를 가지는 그람-음성 박테리아의 외막, 박테리아 세포막, 뿐만 아니라 펩티도글리칸 상에 장착된 부가적 층, 예컨대 캡슐, 외부 단백질 층 또는 점액층을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "아미노산 서열 스트레치(stretch)"는 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 서열 내 아미노산 서열의 특정의 스트레치를 의미한다. 상기 서열은 양이온성 펩티드, 다가양이온성 펩티드, 양친매성 펩티드, 소수성 펩티드, 스시 펩티드 및/또는 항균성 펩티드의 서열을 의미한다. 상기 서열은 His5-태그, His6-태그, His7-태그, His8-태그, His9-태그, HislO-태그, Hisll-태그, Hisl2-태그, Hisl6-태그 및 His20-태그와 같은 His-태그, Strep-태그, Avi-태그, Myc-태그, Gst-태그, JS-태그, 시스테인-태그, FLAG-태그 또는 당업계에 공지된 다른 태그, 티오레독신 또는 말토스 결합 단백질 (MBP)과 같은 통상적인 태그를 의미하지는 않는다. 바람직하게는 본원에서 사용되는 아미노산 서열 스트레치는 약 6 내지 약 39개의 아미노산 잔기의 길이이다.
본원에서 사용되는 "양이온성 펩티드"는 바람직하게는 양으로 하전 된 아미노산 잔기를 가지는 펩티드를 의미한다. 바람직하게는, 양이온성 펩티드는 9.0 이상의 pKa-값을 가진다. 통상적으로, 양이온성 펩티드의 적어도 4개의 아미노산 잔기가 양으로 하전 될 수 있으며, 예를 들어, 리신 또는 아르기닌일 수 있다. "양으로 하전 된"은 대략의 생리학적 조건에서 순(net) 양전하를 갖는 아미노산 잔기의 측쇄를 의미한다. 본원에서 사용되는 용어 "양이온성 펩티드"는 또한 다가양이온성 펩티드를 의미하고, 예를 들어, 20% 미만의, 바람직하게는 10% 미만의 양성으로 하전 된 아미노산 잔기를 포함하는 양이온성 펩티드를 또한 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "다가양이온성 펩티드"는 바람직하게는 대부분 양으로 하전 된 아미노산 잔기, 특히 리신 및/또는 아르기닌 잔기로 구성된 펩티드를 의미한다. 적어도 아미노산 잔기의 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 약 100%가 양으로 하전 된 아미노산 잔기, 특히 리신 및/또는 아르기닌 잔기인 경우, 펩티드는 주로 양으로 하전 된 아미노산 잔기로 구성된다. 양으로 하전 된 아미노산 잔기가 아닌 아미노산 잔기는 중성으로 하전 된 아미노산 잔기 및/또는 음으로 하전 된 아미노산 잔기 및/또는 소수성 아미노산 잔기일 수 있다. 바람직하게는, 양으로 하전 된 아미노산 잔기가 아닌 아미노산 잔기는 중성으로 하전 된 아미노산 잔기, 특히 세린 및/또는 글리신이다.
본원에서 사용되는 용어, "항균성 펩티드"(AMP)는 바람직하게는 예를 들어, 박테리아, 바이러스, 진균, 효모, 미코플라즈마 및 원생동물에 대해 살균 및/또는 세균발육저지 활성을 갖는 자연적으로 발생한 임의의 펩티드를 의미한다. 따라서, 본원에서 사용되는 용어 "항균성 펩티드"는 특히 항-박테리아, 항-진균, 항-사상균, 항-기생충, 항-원생동물, 항-바이러스, 항-감염성, 항-전염 및/또는 살균, 살조류, 살아메바, 살미생물, 살박테리아, 살진균, 살기생충, 치사원생동물(protozoacidal), 살원생동물 특성이 있는 임의의 펩티드를 의미한다. 항균성 펩티드는 바람직하게는 항-박테리아 펩티드이다. 항균성 펩티드는 RNase A 슈퍼 패밀리(super family)의 일원(member), 디펜신, 카텔리시딘, 그래뉼리신, 히스타틴, 소리아신(psoriasin), 더미시딘 또는 헵시딘일 수 있다. 항균성 펩티드는 곤충, 어류, 식물, 거미류, 척추동물 또는 포유류에서 자연적으로 발생할 수 있다. 바람직하게는 항균성 펩티드는 곤충, 어류, 식물, 거미류, 척추동물 또는 포유류에서 자연적으로 발생할 수 있다. 바람직하게는 항균성 펩티드는 래디쉬, 누에 나방, 독거미, 개구리, 바람직하게는 Xenopus laevis, Rana 개구리, 더욱 바람직하게는 Rana catesbeiana, 두꺼비, 바람직하게는 Asian toad Bufo bufo gargarizans, 파리, 바람직하게는 초파리, 더욱 바람직하게는 Drosophila melanogaster, 이집트 숲모기, 꿀벌, 호박벌, 바람직하게는 Bombus pascuorum, 쉬파리, 바람직하게는 Sarcophaga peregrine, 전갈, 투구게, 메기, 바람직하게는 Parasilurus asotus, 소, 돼지(pig), 양, 돼지(porcine), 보바인, 원숭이 및 인간 내에서 자연적으로 발생할 수 있다. 본원에서 사용되는 "항균성 펩티드" (AMP)는 특히 양이온성 펩티드, 다가양이온성 펩티드, 양친매성 펩티드, 스시 펩티드, 디펜신, 및 소수성 펩티드가 아닌 펩티드이지만 그럼에도 불구하고 항균성 활성을 보이는 펩티드일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "스시 펩티드"는 짧은 공통 반복부를 갖는 상보적 조절 단백질(CCP)을 의미한다. 스시 펩티드의 스시 모듈은 다수의 다양한 단백질 내 단백질-단백질 상호작용 도메인으로서 기능 한다. 스시 도메인을 함유하는 펩티드는 항균성 활성을 갖는 것으로 확인되었다. 바람직하게는, 스시 펩티드는 자연적으로 발생한 펩티드이다.
본원에서 사용되는 용어 "양친매성 펩티드"는 친수성 및 소수성 작용기를 모두 갖는 합성 펩티드를 의미한다. 바람직하게는, 본원에서 사용되는 용어 "양친매성 펩티드"는 친수성 및 소수성 기의 정의된 배열을 가지는 펩티드를 의미하고, 양친매성 펩티드는 예를 들어 나선(helix)의 한 면을 따라 대부분 비극성 측쇄를 갖고 이의 표면의 나머지를 따라 극성 잔기를 갖는 알파 나선형(alpha helical)일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "소수성 기"는 바람직하게는 물 또는 수성 상에서의 용해도 보다 더 높은 유상에서의 용해도를 가지는, 실질적으로 수 불용성이지만 유상에는 가용성인 아미노산 측쇄와 같은 화학적 기를 의미한다. 물에서, 소수성 측쇄를 갖는 아미노산 잔기는 서로 상호작용하여 비수성 환경을 발생시킨다. 소수성 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 예에는 발린, 이소류신, 류신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트립토판, 시스테인, 알라닌, 티로신, 및 프롤린 잔기가 있다.
본원에서 사용되는 용어 "소수성 펩티드"는 바람직하게는 소수성기를 가지는 아미노산 잔기로 주로 구성되는 소수성 펩티드를 의미한다. 상기 펩티드는 바람직하게는 소수성 아미노산 잔기로 주로 구성되는데, 즉, 적어도 약 20, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 적어도 약 100% 의 아미노산 잔기가 소수성 아미노산 잔기이다. 소수성이 아닌 아미노산 잔기는 바람직하게는 중성이고 바람직하게는 친수성이 아니다.
본원에서 사용되는 용어 "태그"는 a) 전체 아미노산 서열 또는 폴리펩티드의 발현을 향상시키거나, b) 전체 아미노산 서열 또는 폴리펩티드의 정제를 용이하게 하거나, c) 전체 아미노산 서열 또는 폴리펩티드의 고정을 용이하게 하거나, 및/또는 전체 아미노산 서열 또는 폴리펩티드의 검출을 용이하게 하기 위하여 당업계에서 일반적으로 또 다른 아미노산 서열과 융합되거나 혹은 포함되는 아미노산 서열을 의미한다. 태그의 예로서, His5-태그, His6-태그, His7-태그, His8-태그, His9-태그, HislO-태그, Hisll-태그, Hisl2-태그, Hisl6-태그 및 His20-태그와 같은 His 태그, Strep-태그, Avi-태그, Myc-태그, GST-태그, JS-태그, 시스테인-태그, FLAG-태그, HA-태그, 티오레독신 또는 말토스 결합 단백질s (MBP), CAT, GFP, YFP,등이 있다. 당업자에게 상이한 기술 적용에 적합한 수많은 태그가 공지되어 있다. 태그는 예를 들어 상이한 ELISA 에세이 포맷 내 항체 결합 혹은 다른 기술적 적용에 적합한 태그 된 폴리펩티드를 만들 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "포함하는"은 의미 "구성되는" (즉, 부가적인 다른 물질의 존재를 배재 하는)의 의미로 한정되어 해석되지 않는다. 오히려 "포함하는"은 임의로 추가적인 물질이 존재할 수 있다는 것을 암시한다. 용어 "포함하는"은 "~만으로 구성된" (즉, 다른 부가적인 물질의 존재를 배재 하는) 및 "~만으로 구성되지 않고 포함하는" (즉 부가적인 다른 물질의 존재를 필요로 하는)의 범위 내에 속하는 가시적인 구현예를 포함하고, 다만 전자가 더 선호된다.
본 발명에 따른 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 보이는 아미노산 서열 내에서, 다음 중 적어도 하나 (예컨대, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 또는 심지어 17개 모두)를 보일 수 있다: X14는 C가 아님; X23은 C가 아님; X50은 C가 아님; X82는 I; X122는 M; X149는 P; X154는 T, X160은 T; X167는 L; X179는 F; X180는 E; X186는 Y; X206는 N 또는 V, X212는 N; X224는 Q; X230은 Y 및/또는 X232는 T임. 각 아미노산 잔기의 위치를 나타내는 숫자는 SEQ ID NO: 1에 대응되는 서열 내 상대적인 위치를 나타내는 것이고, SEQ ID NO: 1보다 더 길지도 모르는 본 발명에 따른 폴리펩티드의 전체 아미노산 서열에 대한 것은 아니다.
발명의 폴리펩티드는 상기 적어도 90%의 서열 상동성을 가진다. 발명의 폴리펩티드는 따라서 예를 들어 더 높은 레벨의 서열 상동성을 보일 수 있고, 예컨대, SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 98,5%, 적어도 약 99% (e.g. 3개 미만의 아미노산 편차) , 적어도 약 99,3% (e.g. 2개 미만의 아미노산 편차), 적어도 약 99,5%, 적어도 약 99,6% 또는 심지어 100%의 서열 상동성을 보일 수 있다.
SEQ ID NO: 1의 서열 (또는 이의 더 특이적인 서열, 하기 참조)과 주어진 레벨의 서열 상동성을 공유하는 서열을 포함하는 발명의 폴리펩티드는 예컨대 하나 이상의 아미노산 잔기의 첨가, 치환, 삽입 또는 결실 및 이들의 가능한 모든 조합에 의해 참조 서열과 구별될 수 있다. 명확성만을 위해, 상기 조합은 서열의 별개의 위치를 의미한다는 것이 강조된다. 동일한 상대적 위치에서의 하나 이상 아미노산의 "결실" 및 이어지는 "부가", 또는 "부가" 및 이어지는 "결실"은, "부가" 및 "결실" (혹은 그 반대) 의 조합이 아닌 용어 "치환"에 해당한다. 바람직하게는, SEQ ID NO: 1 (또는 이의 더 특이적인 서열, 하기 참조)의 서열과의 서열 내 편차(deviation)는 보존적인 특성, 예컨대 보존적 치환에 의할 것이다. 심지어 더욱 바람직하게는, 서열 내 편차는, 효소 활성에서 중요하지-않는 것으로 확인된 SEQ ID NO: 1 (또는 이의 더 특이적인 서열, 하기 참조) 내 위치, 즉, X1, X14, X23, X50, X82, X122, X149; X160, X167, X179, X180, X186; X206; X212; X224; X230 및/또는 X232로 제한된다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열 내 위치 115에서 글루탐산 잔기를 나타낸다. 공보 [Briers et al. (Molecular Microbiology (2007) 65(5), 1334-1344)]에서 제시되는 바와 같이, 돌연변이 E115A는 효소의 약 70%의 활성의 상실을 유발한다. 따라서, 상기 돌연변이를 포함하는 본 발명의 폴리펩티드가 폴리펩티드의 기능을 상실하지 않고 여전히 다양한 기술적인 목적을 제공할 수 있지만, 상기 돌연변이가 본 발명의 폴리펩티드 내 SEQ ID NO: 1에 대응되는 서열 스트레치 내 존재하지 않는 경우가 명백히 선호된다.
본 발명에 따른 특정의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 서열을 포함한다.
본 발명의 발명자들은 SEQ ID NO: 5의 아미노산 서열 (KZ144 엔도리신 서열) 내 3개의 시스테인 잔기가 효소 활성에 필수적이지 않다는 것을 확인하였다. 따라서, 몇몇 구현예에서, 발명의 폴리펩티드의 SEQ ID NO: 1 (본 발명의 공통 서열) 에 상응하는 서열 (혹은 상기 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 공유하는 서열) 내에서, X14는 C가 아니거나, X23은 C가 아니거나, 또는 X50은 C가 아니다. 이들의 조합도 가능한데, 예컨대 X14 및 X23이 C가 아니거나, X14 및 X50이 C가 아니거나, 또는 X23 및 X50이 C가 아니다. 유사하게, X14도, X23도, X50도, C가 아닌 것 역시 가능하다. 원칙상, 상기 아미노산 잔기는 결실되거나 또는 임의의 다른 아미노산에 의해 치환될 수 있다. 상기 다른 아미노산의 예에는 S, R 및 N이 있다. 따라서, X14는 예컨대 S, N, 또는 R; 더욱 바람직하게는 S 또는 R; 가장 바람직하게는 R일 수 있고; X23는 예컨대 S, N, 또는 R, 더욱 바람직하게는 S일 수 있고; 및 X50은 예컨대 N, 또는 R, 더욱 바람직하게는 S 또는 N; 가장 바람직하게는 N일 수 있다. X14, X23 및 X50는 물론 상이한 아미노산 치환을 나타낼 수 있는데, 예컨대, X14는 R이고 반면에 X23 및 X50은 S일 수 있고; 또는 X14 및 X23은 S이고 반면에 X50은 N일 수 있고; X14는 R인 반면, X23은 S 및 X50은 N일 수 있다. 기타 등등. 예측될 수 있는 다른 임의의 조합도 역시 본 발명에 의해 고려된다. 보존적 아미노산 치환이 바람직하다. 시스테인 잔기의 세린 잔기로의 치환이 특히 바람직하다. 따라서, 본 발명의 특히 바람직한 예에서 X14는 S, X23은 S 또는 X50은 S이다. 물론, X14 및 X23은 S, 또는 X14 및 X50은 S, 또는 X23 및 X50은 S도 또한 가능하다. X14, X23 및 X50는 모두 S일 수 있다. 하나 이상의 또는 모든 상기 시스테인 잔기의 부재는 예컨대 바람직하지 않은 이황화 브릿지 형성에 의한, 본 발명에 따른 폴리펩티드 응집의 위험이 감소 된다는 장점을 가지고 있어, 따라서, 본 발명의 바람직한 구현예에 해당된다.
상기 언급된 시스테인 잔기의 불필요함(dispensability)과 함께, 본 발명의 발명자들은 또한, SEQ ID NO: 5의 서열 내 다양한 다른 잔기도 필수적이지 않다는 점 및 나아가 이들이 다른 잔기에 의해 치환될 수 있고, 이에 의해 예컨대 본 발명의 폴리펩티드의 온도 안정성을 증가시킬 수 있음을 밝혀내었다. 상기 치환의 예로서, X82I, X122M, X149P; X154T, X160T, X167L, X179F, X180E, X186Y, X206V, X206N, X212N, X230Y 및 X232T이 있다. 상기 치환은 단독으로 또는 임의의 조합으로서 존재할 수 있다. 일반적인 조합으로는, X122M 및 X160T의 조합이 있다. 다른 조합의 비제한적인 예로서, X82I, X206V 더하기 X232T; X82I, X122M, X160T, X206V, 더하기 X232T; X82I, X122M, X160T, X206N, 더하기 X232T; X82I, X122M, X206V, 더하기 X232T; X82I, X122M, X149P, X160T, X206V, 더하기 X232T; X82I, X122M, X160T, X180E, X206V, 더하기 X232T; X82I, X122M, X160T, X186Y, X206V, 더하기 X232T; X82I, X122M, X160T, X206V, X230Y, 더하기 X232T; X82I, X122M, X149P, X206V, 더하기 X232T; X82I, X122M, X149P, X160T, X206V, 더하기 X232T; X82I, X122M, X149P, X206V, 더하기 X232T; X82I, X122M, X149P, X167L, X206V, 더하기 X232T; X82I, X122M, X149P, X179F, X206V, 더하기 X232T; X82I, X122M, X149P, X206V, X212N 더하기 X232T; X82I, X122M, X149P, X206V, X224Q 더하기 X232T; X82I, X122M, X149P, X154T, X206V, 더하기 X232T 등이 있다. 물론, 본 두 번째 유형의 아미노산 개질은 예측가능한 임의의 유형의 조합으로 전술된 시스테인 대체(replacement)와 조합될 수 있다. 상기의 조합에 대한 비 제한적인 예로, X14S, X50S, X122M 및 X160T; X14S, X50S, X82I, X122M, X160T, X206V, 및 X232T; X14S, X50S, X82I, X122M, X160T, X206N, 및 X232T; X14S, X50S, X82I, X122M, X206V, 및 X232T; X14S, X50S, X82I, X122M, X149P, X160T, X206V, 및 X232T; X14S, X50S, X82I, X122M, X160T, X180E, X206V, 및 X232T; X14S, X50S, X82I, X122M, X160T, X186Y, X206V, 및 X232T; X14S, X50S, X82I, X122M, X160T, X206V, X230Y, 및 X232T; X14R, X50S, X82I, X122M, X160T, X206V, 및 X232T; X14S, X50N, X82I, X122M, X160T, X206V, 및 X232T; X14R, X50S, X82I, X122M, X149P, X206V, 및 X232T; X14R, X50S, X82I, X122M, X149P, X160T, X206V, 및 X232T; X14R, X50N, X82I, X122M, X149P, X206V, 및 X232T; X14R, X50N, X82I, X122M, X149P, X167L, X206V, 및 X232T; X14R, X50N, X82I, X122M, X149P, X179F, X206V, 및 X232T; X14R, X50N, X82I, X122M, X149P, X206V, X212N, 및 X232T; X14R, X50N, X82I, X122M, X149P, X206V, X24Q 및 X232T; X14R, X50N, X82I, X122M, X149P, X154T, X206V, 및 X232T; 등이 있다.
SEQ ID NO: 1 (본 발명의 공통 서열)에서, 첫 번째 아미노산 잔기는 부재 또는 임의의 아미노산, 특히 M으로 나타난다. 본 발명자들의 및 이전의 연구결과 (WO 2010/149792)에 따르면 KZ144의 N-말단 메티오닌은 불필요한 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명의 몇몇 구현예에서, 발명의 폴리펩티드 내 SEQ ID NO: 1에 대응되는 서열에서 위치 X1은 M이 아니다. 본 발명의 폴리펩티드가 예를 들어 SEQ ID NO: 1에 대응되는 서열 내에 추가의 서열 요소(sequence element)를 나타내는 경우, 이는 예컨대 숙주 세포 내 효과적인 발현을 목적하는데 유용할 수 있고, SEQ ID NO: 1의 위치 1의 메티오닌이 대응되는 핵산 서열 내 시작 코돈을 피하기 위해 제거되거나 또는 다른 아미노산으로 대체되는 경우, 이는 잠재적으로 N-말단에 위치된 추가의 서열 요소가 결여된 폴리펩티드의 평행적인 발현을 잠재적으로 유도할 수 있다.반면에, 본 발명의 폴리펩티드 내에 추가의 N-말단의 서열 요소가 없는 경우, X1은 물론 바람직하게는 메티오닌(예컨대, 발현 목적)이다. 하지만, 효소 활성을 위해서 X1은 결코 필요하지 않다.
본 발명자에 의해 특히 시험 된, SEQ ID NO: 1의 정의(definition)의 영향하에 존재하는 서열에는, 예컨대 SEQ ID NOs: 6-27 (및 N-말단 메티오닌이 없는 대응된 서열, SEQ ID NOs: 28-49)이 있다.
포괄적 서열인 SEQ ID NO: 1에 대해서 이제까지 규정된 모든 것이 유사한 방법으로 더욱 특이적인 서열에 대해서도 적용되는 것으로 이해된다. 따라서, 그리고 명확하게 하기 위해, 바람직한 구현예에서, 전술된 바와 같이 포괄적인 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 나타내는 서열을 포함하는 본 발명에 따른 폴리펩티드는, 틀림없이 본원에서 기술되는 또는 심지어 특히 기술되는 SEQ ID NO: 1의 더 특이적인 서열과도 적어도 90%의 서열 상동성을 유사한 방법으로 나타낼 수 있다. 따라서, 본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 폴리펩티드는 SEQ ID NOs: 6-49 중 어느 것에서 선택되는 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 나타내는 서열을 예컨대 포함할 수 있고, 이때 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열도, SEQ ID NO:3의 아미노산 서열도 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열도 포함하지 않는다.
본 발명에 따른 폴리펩티드는 효소적 아미노산 서열, 예컨대 SEQ ID NO: 1의 서열 (혹은 상기 정의 내에 포함되는 다른 서열)과 적어도 90%의 서열 상동성을 나타내는 서열,의 옆에 추가의 아미노산 스트레치, 예컨대 WO 2010/149792 내에서 유사한 양상으로서 이미 기술된 것과 같은 아미노산 스트레치,를 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 폴리펩티드는 예컨대 양친매성 펩티드, 양이온성 펩티드, 다가양이온성 펩티드, 소수성 펩티드, 또는 스시 펩티드 및 디펜신과 같은 자연적으로 발생하는 항균성 펩티드로 구성된 군에서 선택되는 적어도 하나의 아미노산 서열 스트레치를 추가로 포함할 수 있다. 상기 부가적인 아미노산 서열 스트레치는 본 발명의 폴리펩티드의 항박테리아 성질을 향상시킬 수 있다. 몇몇 구현예에서, 본 발명의 폴리펩티드는 양친매성 펩티드, 양이온성 펩티드, 다가양이온성 펩티드, 소수성 펩티드, 또는 스시 펩티드 및 디펜신과 같은 자연적으로 발생하는 항균성 펩티드의 군에서 선택되는 적어도 두 개의 상이한 아미노산 서열 스트레치를 포함할 수 있다.
상기 하나 이상의 부가적인 아미노산 서열 스트레치는 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 나타내는 서열의 N-말단 또는 C-말단에 존재할 수 있다. 이들은 예컨대 본 발명의 폴리펩티드의 N- 또는 C-말단에 위치될 수 있다. 상기 부가적인 아미노산 서열 스트레치의 비 제한적인 바람직한 예로는 서열 KRK 및 SEQ ID NOs: 50-120일 수 있고, 이는 이하 좀 더 상세하게 규정된다. 본 발명에 따른 폴리펩티드는 상기 그룹에서 선택되는 적어도 하나의 부가적인 아미노산 서열 스트레치를 포함할 수 있다. 특히 가능한 부가적인 아미노산 서열 스트레치의 일반적인 및 특이적인 특성과 관련하여, 추가적 안내를 위해, 예컨대 WO 2010/023207, WO 2010/149792, WO 2010/149795 및 WO 2012/085259이 참조된다.
양이온성 및 다가양이온성 아미노산 서열 스트레치에 대해 예시가 다음의 표 1에서 나열된다.
[표 1]
Figure pct00001
본 발명을 수행하는데 사용될 수 있는 항균성 아미노산 서열의 예가 하기 표 2에 나열된다.
[표 2]
Figure pct00002
적어도 하나의 부가적인 아미노산 서열 스트레치는 [Ding JL, Li P, Ho B Cell Mol Life Sci. 2008 Apr;65(7-8):1202-19. The Sushi peptides: structural characterization and mode of action against gram-negative bacteria]에 기술된 스시 펩티드일 수 있다. SEQ ID NO: 115에 따른 스시 1 펩티드가 특히 바람직하다. 다른 바람직한 스시 펩티드로는 스시 펩티드 S1 및 S3 및 이들의 복수체(multiple)가 있다; FASEB J. 2000 Sep;14(12): 1801-13.
바람직한 소수성 펩티드로는 SEQ ID NO: 116에 따른 아미노산 서열을 가지는 Walmaghl 및 아미노산 서열 Phe-Phe-Val-Ala-Pro (SEQ ID NO: 117)을 가지는 소수성 펩티드가 있다.
바람직한 양친매성 펩티드에는 SEQ ID NO: 118에 따른 T4 리소자임의 α4-낫 및 SEQ ID NO: 119에 따른 아미노산 서열을 가지는 WLBU2-변이체 및 SEQ ID NO: 120에 따른 Walmagh 2가 있다.
전술된 바와 같이, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 KRK 및 SEQ ID NOs: 50-120로 구성되는 군에서 선택되는 적어도 하나의 부가적인 아미노산 서열 스트레치를 포함할 수 있다. 예컨대 대응되는 예로서, SEQ ID NOs: 121-127로 구성된 군에서 선택되는 서열 (및 N-말단 메티오닌이 없는 대응되는 서열, SEQ ID NOs: 128-134)에서 선택되는 서열을 포함하는 폴리펩티드가 있다.
본 발명에 따른 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, 상기에서 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열도, SEQ ID NO:3의 아미노산 서열도 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열도 포함하지 않는다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드는 SEQ ID NOs: 121 - 134 중 어느 것에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 91,5%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 또한 포함할 수 있고, 상기에서 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열도, SEQ ID NO:3의 아미노산 서열도 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열도 포함하지 않는다.
따라서, 상기 발명의 폴리펩티드는 예컨대 SEQ ID NOs: 121 - 134 중 어느 하나에서 선택되는 아미노산 서열과 91,5%보다 더 높은 정도의 서열 상동성을 나타내는 서열, 예컨대 SEQ ID NOs: 121 - 134 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 98,5%, 적어도 약 98,75%, 적어도 약 99% (e.g. 3개 미만의 아미노산 편차) , 적어도 약 99,5% (e.g. 2개 미만의 아미노산 편차), 적어도 약 99,6% 또는 심지어 100%의 서열 상동성을 나타낼 수 있는 서열을 포함할 수 있다.
또한, 전술된 하나 이상의 부가적인 아미노산 서열 스트레치가 본 발명의 폴리펩티드 내에 존재하거나 또는 그렇지 않은 경우와는 무관하게, 폴리펩티드는 추가로 하나 이상의 태그 서열을 포함할 수 있다. 상기 태그 서열은 SEQ ID NO: 1의 서열의 적어도 약 90%의 서열 상동성을 보이는 서열의 N-말단 또는 C-말단에 존재할 수 있다. 이들은 예컨대 발명의 폴리펩티드의 N- 또는 C-말단에 위치될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 하나 이상의 태그 서열은 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 보이는 아미노산 서열의 C-말단에 위치될 수 있다.
하나 이상의 태그 서열은 예컨대 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 보이는 아미노산 서열과 직접적으로 또는 1 내지 10개의 아미노산 잔기, 바람직하게는 1 내지 5개의 아미노산 잔기, 심지어 더욱 바람직하게는 1 내지 2개의 아미노산의 짧은 링커를 통해서 연결될 수 있다. 링커 서열은 바람직하게는 하나 이상의 글리신 잔기를 포함하는 플렉서블(flexible) 서열이다. 태그의 많은 예가 당해 분야에 공지되어 있고, 이중 일부에 대해서 전술되었다. 본 발명의 문맥에서, His-태그, 바람직하게는 SEQ ID NO: 135에 따른 His 태그가 특히 바람직하다.
본 발명에 따른 폴리펩티드의 길이는 원칙적으로는 제한되지 않지만, 바람직하게는 길이는 매우 길다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 폴리펩티드는 약 320개의 아미노산을 초과하지 않는, 바람직하게는 약 310개의 아미노산을 초과하지 않는 전체 길이를 가진다.
본 발명에 따른 폴리펩티드의 특정 예가 SEQ ID NOs: 136-142 (및 N-말단 메티오닌이 없는 대응되는 서열, SEQ ID NOs: 143-149)으로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, 상기에서 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열도, SEQ ID NO:3의 아미노산 서열도 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열도 포함하지 않는다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드는 SEQ ID NOs: 136 - 149 중 어느 하나에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 91,5%의 서열 상동성을 나타내는 서열을 또한 포함할 수 있고, 상기에서 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열도, SEQ ID NO:3의 아미노산 서열도 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열도 포함하지 않는다.
따라서, 상기 발명의 폴리펩티드는 예컨대 SEQ ID NOs: 136 - 149 중 어느 하나에서 선택되는 아미노산 서열과 91,5% 보다 더 높은 정도의 서열 상동성을 보이는, 예컨대 SEQ ID NOs: 136 - 149 중 어느 하나에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 98,5%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99,25% (e.g. 3개 미만의 아미노산 편차), 적어도 약 99,5% (e.g. 2개 미만의 아미노산 편차), 적어도 약 99,6% 또는 심지어 100%의 서열 상동성을 나타내는 서열을 포함할 수 있다. SEQ ID NOs: 136 - 149와의 편차는 구성성분 SMAP29 펩티드, 개질된 KZ144 엔도리신 및 His-태그를 연결하는 두개의 서열 내에서 특히 발생할 수 있다.
본 발명에 따른 폴리펩티드는 바람직하게는 그람-음성 박테리아, 특히 슈도모나스 및/또는 캄필로박터 박테리아의 펩티도 글리칸을 분해하는 능력에 의해 특징되어 진다. 특히, 본 발명에 따른 폴리펩티드는, 바람직하게는 pseudomonas aeruginosa , 특히 Pseudomonas aeruginosa PAOl, Campylobacter jejuni 및/또는 Campylobacter coli의 펩티도글리칸을 분해할 수 있다.
그람 음성 박테리아에 대한 펩티도글리칸 분해 활성은 당해 분야에 공지된 에세이에 의해, 예컨대 뮤라분해성(muralytic) 에세이에 의해 측정될 수 있는데, 이 경우 그람 음성 박테리아가 (예컨대 클로로포름에 의해) 투과화 또는 제거되어 추정되는 효소의 펩티도글리칸 층으로의 접근을 허용하게 된다. 효소가 활성인 경우, 펩티도글리칸 층의 분해는 탁도(turbidity)의 저하를 야기하고, 이는 측광적으로 측정될 수 있다(예컨대 Briers et ah, J. Biochem. Biophys Methods 70: 531-533, (2007)참조).
추가의 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산에 관한 것이다. 유전적 코드에 대한 축퇴성(degeneracy)을 알고 있는 당업자라면 상기 핵산을 만들어내는 방법을 알 수 있을 것이다.
추가의 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 핵산을 포함하는, 발현 벡터 또는 클로닝 벡터와 같은 벡터에 관한 것이다.
추가의 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 폴리펩티드, 본 발명에 따른 핵산, 및/또는 본 발명에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다.
추가의 측면에서, 본 발명은 본 발명에 따른 폴리펩티드, 본 발명에 따른 핵산, 본 발명에 따른 벡터, 및/또는 본 발명에 따른 숙주세포를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 바람직하게는, 상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 희석제, 첨가제 또는 담체를 포함하는 약학적 조성물이다.
전술된 바와 같이, 본 발명에 따른 폴리펩티드 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, 상기에서 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열도, SEQ ID NO:3의 아미노산 서열도 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열도 포함하지 않는다. 하지만, 추가의 측면에서, 및 전술된 본 발명의 폴리펩티드와 약간은 상이하게, 본 발명은 추가로 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성(sequence identity)을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드로서 상기 폴리펩티드가 SEQ ID NO: 2 아미노산 서열도, SEQ ID NO: 152 아미노산 서열도, SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열도 포함하지 않는 폴리펩티드와 관련된다. 임의로, 본 추가적 관점의 상기 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열 또한 포함하지 않는다. 발명의 폴리펩티드 및 각각의 핵산, 벡터, 숙주 세포 및 조성물에 관한 전술된, 실시예 내, 또는 청구항 내의 모든 구현예 및 조합은 본 추가의 관점에서도 역시 특별하게 고려된다.
이하, 첨부된 도면에 대해 간단한 설명을 기술한다. 도면은 본 발명을 더 상세하게 설명하기 위함이다. 하지만, 이들은 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.
도 1은 하기를 나타낸다:
SEQ ID NO: 1,
SEQ ID NO: 2 N-말단 메티오닌이 없는 KZ144 엔도리신,
SEQ ID NO: 3 N-말단 메티오닌이 없는, 및 메티오닌을 대신해서 셀레노메티오닌 잔기를 가지는 KZ144 엔도리신,
SEQ ID NO: 4 E115A 돌연변이를 가지고 N-말단 메티오닌이 없는 KZ144 엔도리신, 및
SEQ ID NO: 5 KZ144 엔도리신.
도 2는 하기를 설명한다:
SEQ ID NO: 136 SMAP-29 (실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 76), N-말단 메티오닌이 없고 C14S 및 C50S를 가지는 개질된 KZ144 (반-점선/반-실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 28) 및 His-태그 (점선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 135)의 융합 단백질.
SEQ ID NO: 137 SMAP-29 (실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 76), N-말단 메티오닌이 없고 및 T82I, A206V 및 S232T를 가지는 개질된 KZ144 (반-점선/반-실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 29) 및 His-태그 (점선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 135)의 융합 단백질.
SEQ ID NO: 138 SMAP-29 (실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 76), N-말단 메티오닌이 없고 및 T82I, A206V, S232T, I122M을 가지는 개질된 KZ144; 및 A160T (반-점선/반-실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 30) 및 His-태그 (점선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 135)의 융합 단백질.
SEQ ID NO: 139 SMAP-29 (실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 76), N-말단 메티오닌이 없는 및 C14S, C50S, I122M; 및 A160T를 가지는 개질된 KZ144 (반-점선/반-실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 31) 및 His-태그 (점선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 135)의 융합 단백질.
SEQ ID NO: 140 SMAP-29 (실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 76), N-말단 메티오닌이 없는 및 C14S, C23S 및 C50S를 가지는 개질된 KZ144 (반-점선/반-실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 32) 및 His-태그 (점선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 135)의 융합 단백질.
SEQ ID NO: 141 SMAP-29 (실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 76), N-말단 메티오닌이 없는 및 T82I, A206V, S232T, I122M; A160T, C14S 및 C50S를 가지는 개질된 KZ144 (반-점선/반-실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 33) 및 His-태그 (점선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 135)의 융합 단백질.
SEQ ID NO: 142 SMAP-29 (실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 76), N-말단 메티오닌이 없는 및 T82I, A206N, S232T, I122M; A160T C14S 및 C50S를 가지는 개질된 KZ144 (반-점선/반-실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 49) 및 His-태그 (점선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 135)의 융합 단백질.
SEQ ID NO: 151 SMAP-29 (실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 76), N-말단 메티오닌이 없는 KZ144 (반-점선/반-실선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 2) 및 His-태그 (점선으로 밑줄됨; SEQ ID NO: 135)의 융합 단백질.
실시예
이하에서, 본 발명의 다양한 구현예 및 측면을 설명하는 구체적인 실시예가 제시된다. 하지만, 본 발명은 본원에서 기술되는 구체적 구현예에 의해 그 범위가 제한되지는 않는다. 실제로, 본원에서 기술된 것에 부가되는 본 발명의 다양한 변형은 전술된 기재, 첨부된 도면 및 하기 실시예로부터 당업자에게 명백해질 것이다. 이러한 모든 변형은 첨부된 청구항의 범위 내에 속한다.
실시예 1: KZ144 엔도리신을 안정화하는 돌연변이의 확인
엔도리신 KZ144 (SEQ ID NO: 5) 내 유리한 개질 위치의 확인을 위하여, 본 발명자들은 제1 단계에서 표적 단백질의 표적화된 불안정화를 사용하였다. 이를 위해, N-말단이 절단된 KZ144가 생성되었는데 (SEQ ID NO: 150), 여기에서 서열 돌연변이가 랜덤 돌연변이 유발 (에러-유발 PCR)을 통해 삽입되었고, 이어서 융합 및 클로람페니콜 에세이(CAT 에세이)에 의해 선별되었다.
유망 후보군의 단백질 용융 온도가 원편광 이색법 (circular dichroism: CD)에 의해 측정되었다. 단백질에 대한 타원률의 변화가 Jasco J-815 CD 분광계를 사용하여 온도에 대한 함수로서 220nm에서 기록되었고 및 JASCO 분석 소프트웨어를 사용하여 단순 S자형(sigmoid) 풀림 모델로 피팅되었다. 단백질 용융 온도 (Tmelt)가 풀림 전이(unfolding transition)의 중간점에서 결정되었다. 스펙트럼(spectra)이 5.0-5.8μΜ의 단백질 농도에서 l℃/min의 가열 속도 및 3s의 인큐베이션 시간, 410μl의 볼륨 내 1mm 빛 통과 Hellma 석영 큐베트 내에서 기록되었다. 측정이 50mM NaPh 버퍼, 300mM NaCl 내 7.4, 7.0, 6.2 및 5.7의 pH에서 수행되었다.
확인된 가장 유망한 후보군 중 몇몇을 하기의 표에 나타내었다:
[표 3]
Figure pct00003
* 표시된 위치는 KZ144 서열, SEQ ID NO: 5 서열 내 위치를 의미하는 것으로서 SEQ ID NO: 150 내 위치를 의미하는 것이 아님.
따라서 확인된 안정화 돌연변이가 이어서 안정성을 향상시키기 위해서 전체 길이 서열과 같은 다른 서열 내로 도입되었다.
이후의 단계에서, 세린이 시스테인 잔기 C14, C23 및/또는 C50의 치환을 위해서 몇몇 구조체 내에서 사용되었다 (위치는 SEQ ID NO: 5에 대한 위치를 나타냄; 보존적 치환). 시험 된 상기 위치에서의 다른 치환으로는 N 및 R이 있다.
실험의 추가의 라운드에서, 돌연변이의 다양한 조합이 전체 길이 엔도리신 KZ144 (SEQ ID NO: 5)에서 시험되었다:
[표 4]
Figure pct00004
Figure pct00005
*TM vs. SEQ ID NO: 5
실시예 2: 본 발명에 따른 몇몇 폴리펩티드의 용융 온도 및 선택된 박테리아 스트레인에 대한 MIC
SEQ ID NO 151 (w/o 돌연변이) 및 SEQ ID NOs: 136 -142 에 따른 폴리펩티드의 구성을 위해, Pseudomonas aeruginosa 파지 KZ가 사용되었다. 펩티드 융합 파트너로 SMAP-29가 선택되었다. SMAP-29는 양 백혈구에서 발견되고 29개의 아미노산 (RGLRRLGRKIAHG VKKYGPT VLRIIRIAG ; 분자량: 3.3 kDa, SEQ ID NO: 76)으로 구성된다. 이는 중심 힌지에 의해 연결되는 2개의 LPS-결합 위치로 되어있다.
클로닝
개별 펩티드 및 엔도리신을 인코딩하는 핵산 분자가 핵산 분자의 5' 단부(end)의 Ndel (5 '-CAT ATG-3') 제한 위치 및 핵산 분자의 3' 단부(end)의 Xhol (5'-CTC GAG-3') 제한 위치에 의해 구성(construct)되었다. 펩티드 및 엔도리신은 BamHI (5'-GGA TCC-3')를 통해서 연결되었다.
융합 단백질이 예컨대 [Sambrook et al. 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual]에 기술된 표준 클로닝 기술을 사용하여 적어도 두 개의 핵산 서열을 연결함에 의해서 구성되었다. 따라서, 펩티드 스트레치를 인코딩하는 핵산 분자가 개별 제한 효소 Ndel 및 BamHI로 처리됨으로써 절단되었다. 이어서, 펩티드 스트레치를 인코딩하는 절단된 핵산이, 역시 사전에 개별 제한 효소인 Ndel 및 BamHI로 처리되어 절단된 pET21 b 발현 벡터 (Novagen, Darmstadt, Germany) 내로 결찰되었다. 이후, 엔도리신을 인코딩하는 핵산 분자가 BamHI 및 Xhol로 처리되어 절단되었고, 이에 의해 엔도리신은 역시 사전에 개별 제한 효소인 BamHI 및 Xhol로 처리되어 절단된 pET21b 발현 벡터 (Novagen, Darmstadt, Germany) 내로 결찰(ligated)될 수 있게 되었다.
펩티드-엔도리신 융합체의 서열이 DNA 시퀀싱을 통해 조절되었고 및 올바른 클론이 단백질 발현을 위해 E. coli BL21(DE3)pLysS (Novagen, Darmstadt, Germany) 내로 형질전환되었다.
정제(Purification)
융합 단백질의 재조합 발현이 E. coli BL21(DE3)pLysS 세포 (Novagen, Darmstadt, Germany) 내에서 수행되었다. 세포가 OD600nm = 0.5-0.8의 흡광도에 도달할 때까지 성장되었다. 이후 융합 단백질의 발현이 0.5 mM IPTG (이소프로필티오갈락토사이드)를 사용하여 유도되었고, 발현이 37℃, 4 h동안 수행되었다.
세포가 20 min 동안 6000g에서 원심분리되어 수득 되었고, ice 상에서 초음파 분해를 통해 파괴되었다. E. coli 조 추출물의 가용성 및 불용성 분획이 원심분리 (Sorvall, SS34, 30 min, 15 000 rpm)에 의해 분리되었다. 모든 단백질은 pET21b 벡터에 의해 인코딩된 C-말단 His6 태그를 사용한 Ni2 + 친화성 크로마토그래피 (Akta FPLC, GE Healthcare)에 의해 정제되었다. 샘플은 매 크로마토그래피 단계 전에 마이크로필터링(0.2 μm) 되었다.
Ni2 + 친화성 크로마토그래피가 4개의 일련의 단계로 수행되며, 상기의 단계는 모두 실온에서 수행된다:
1. 유속 3-5 ml/min에서 10 컬럼 볼륨의 세척 버퍼(20mM 이미다졸, 1M NaCl 및 20mM HEPES pH 7.4)까지에 의한 Histrap FF 5 ml 컬럼(GE Healthcare)의 평형 단계.
2. 유속 3-5 ml/min에서 Histrap FF 5 ml 컬럼상에 원하는 표적 단백질과 함께 전체 용해물(lysate)의 로딩 단계.
3. 비결합 단백질을 제거하기 위해, 세척 버퍼의 10 컬럼 볼륨까지 사용하는 컬럼의 세척단계.
4. 유속 3-5 ml/min에서 100%까지의 15 칼럼 볼륨의 증가하는 선형 구배의 용리 버퍼 (500mM 이미다졸, 500mM NaCl 및 20mM HEPES pH 7.4)를 통해 컬럼에서 결합된 표적 단백질을 용리하는 단계.
소수성 상호작용 크로마토그래피 (Hydrophobic Interaction Chromatography: HIC)가 5개의 일련의 단계 내에서 수행되었고, 모두 상온에서 수행되었다:
1. 유속 l-2ml/min으로 5 컬럼 볼륨까지의 세척 버퍼 (850mM 암모늄 설페이트, 500mM NaCl 및 20mM HEPES pH 7.4)를 사용하는 HiScreen Phenyl HP 5 ml 컬럼 (GE Healthcare)의 평형단계
2. Ni2 + 친화성 단계의 세척 버퍼의 예정된 양을 첨가함으로써 단백질 농도를 0.5mg/ml로 일차 세팅하고, 이어서 예정된 양의 암모늄 설페이트 스톡 용액(3.8M)을 첨가하여 대략 850mM의 최종의 농도로 암모늄 설페이트의 농도를 조절함에 의해 샘플(Ni2 + 친화성 단계의 단백질 풀 1ml 컬럼 볼륨 당 5mg)을 제조하는 단계
3. 제조된 샘플을 HiScreen Phenyl HP 5 ml 컬럼에 l-2ml/min의 유속으로 로딩하는 단계.
4. 비결합 단백질을 제거하기 위해, 5 컬럼 볼륨의 세척 버퍼로 컬럼을 세척하는 단계.
5. 유속 1-2 ml/min으로, 40% 용리 버퍼 (500mM NaCl 및 20mM HEPES pH 7.4)의 단계에 의해 표적 단백질을 컬럼에서 용리하는 단계. 표적 단백질은 본 단계에서 넓은 피크내에서 용리된다.
막 투석에 의한 버퍼의 변화:
HIC 단계의 용리 풀이 저장 버퍼(500 mM NaCl 및 20mM HEPES; pH7.4) 내로 4℃에서 투석(막: MWCO: 6000-8000D를 가지는 재생 셀룰로오스) 된다. 투석 인자는 160 - 250이다.
특징화 ( Characterisation )
상승 된 온도에서의 SEQ ID NOs: 136 -142에 따른 폴리펩티드의 안정성을 특징화하는 용융온도가 전술된 원편광 이색 측정법(CD)을 통해서 측정되었다.
P. aeroginasa, C. jejuni 및 C. coli 에 대한 SEQ ID NOs: 136 -142에 따른 폴리펩티드의 활성이 개별 스트레인 상의 최소 억제 농도(minimal inhibitory concentration: MIC)fmf 측정함에 의해서 특징화되었다.
최소 억제 농도(Minimal Inhibitory Concentration: MIC )의 결정
항생제에 대한 "최소 억제 농도(MIC)"의 결정과 유사하게, MIC가 마이크로희석 테스트에 의해 결정되었다. 캄필로박터 종에 대한 시험이 완전히 미호기성 조건 및 42℃에서 수행되었다.
실험의 설정은 다음과 같다:
하룻밤 배양액(culture) 각각이 1: 10으로 희석되었다. Ps . aeruginosa가 37 ℃에서 OD600=0.6 (대략 109 세포/ml)까지 인큐베이션되었다. Campylobacter sp .는 미호기성으로 OD600=0.08 (대략 2,5x10 세포/ml)까지 인큐베이션 되었다. 박테리아 배양액이 Mueller- Hinton-브로쓰 (양이온-조절된 Mueller-Hinton-브로쓰 아님) 내 ml당 2xl05 내지 8xl05의 콜로니-형성 단위의 농도로 희석되고 원하는 양의 튜브내로 분리되었다.
관심의 폴리펩티드가 상이한 농도(Mueller-Hinton-브로쓰 내 μg/ml의 최종 농도로서 결정됨)로 첨가되었다. Ps . aeruginosa의 경우 EDTA가 2 mM의 최종 농도로 첨가되었다. Campylobacter sp의 경우 EDTA가 사용되지 않았다.
혼합물이 하룻밤 동안 Ps . Aeruginosa에 대해 37℃에서 및 캄필로박터 종에 대해서 42℃에서 인큐베이션되었다. 박테리아 성장이 탁도 (음성 컨트롤과 비교)에 의해 시각적으로 결정되었다. MIC는 박테리아 성장이 관찰되지 않은 튜브 내의 농도로서 정의되었다. 양성 (관심의 폴리펩티드 및/또는 EDTA가 없는) 및 음성 컨트롤(무 박테리아 Mueller-Hinton-브로쓰)이 실험에 포함되었다.
결과가 하기의 표에 요약된다:
[표 5]
Figure pct00006
표에서, 용융온도는 CD에 의해 측정됨, 버퍼: 50mM NaPh, pH 7.45 300mM NaCl. 언급된 위치는 표 내 언급된 SEQ ID NO:의 위치가 아닌, Z144 서열, SEQ ID NO: 5의 서열 내 위치를 의미하는 것임.
도입된 돌연변이는 따라서 SEQ ID NOs: 136 -142의 폴리펩티드 대(vs) SEQ ID NO: 151의 폴리펩티드의 용융 온도를 증가시킬 뿐만 아니라, 폴리펩티드, 심지어 SEQ ID NO: 141의 7배 돌연변이의 활성에 대해서 영향을 미치지 않았다.
실시예 3: SEQ ID NO: 139 및 SEQ ID NO: 141에 따른 폴리펩티드의 온도 안정성
증가 된 용융 온도가 개별 돌연변이된 폴리펩티드의 온도 안정성에 실제로 영향을 미치는 것을 설명하기 위해서, 본 발명자들은 실험적으로 SEQ ID NO: 139 및 SEQ ID NO: 141의 돌연변이 된 폴리펩티드를 자연의 비-돌연변이된 참조 폴리펩티드 (SEQ ID NO: 151)의 용융 온도를 명백하게 초과하는 온도에 노출시켰다.
이를 위해서 두 폴리펩티드 모두가 51℃ 및 52℃ 온도에서 장기간의 직접 가열에 노출되었다. 이어서, 활성 테스트가 순응조건(adapted condition)에서 모델 시스템으로의 Pseudomonas aeruginosa 스트레인에 대하여 수행되었다.
결과가 하기 표에 요약된다:
[표 6]
Figure pct00007
단백질 버퍼: 50mM NaPh, pH 7.45 300mM NaCl
표에서, 전술된 바와 같이, 언급된 위치는 표 내에 언급된 SEQ ID NO:의 전체-길이 서열 내 위치가 아닌 KZ144 서열, SEQ ID NO: 5에 대응되는 서열 부분 내 위치를 의미함.
SEQUENCE LISTING <110> Lysando AG <120> MODIFIED KZ144 ENDOLYSIN SEQUENCE <130> IP20162970DE <150> PCT/EP2013/073869 <151> 2013-11-14 <160> 152 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Consensus Sequence <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid or absent; in particular it can be methionine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular serine, arginine or aspargine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..(23) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular serine, arginine or aspargine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (50)..(50) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular serine, arginine or aspargine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (82)..(82) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular threonine or isoleucine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (122)..(122) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular isoleucine or methionine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (149)..(149) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular methionine or proline <220> <221> MISC_FEATURE <222> (154)..(154) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular leucine or threonine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (160)..(160) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular alanine or threonine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (167)..(167) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular isoleucine or leucine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (179)..(179) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular asparagine or phenylalanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (180)..(180) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular methionine or glutamic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (186)..(186) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular valine or tyrosine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (206)..(206) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular alanine, asparagine or valine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (212)..(212) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular threonine or asparagine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (224)..(224) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular proline or glutamine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (230)..(230) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular asparagine or tyrosine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (232)..(232) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid, in particular serine or threonine <400> 1 Xaa Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Xaa Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Xaa Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Xaa Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Xaa Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Xaa Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Xaa Lys Tyr Gly Val Xaa Thr Asp Pro Thr Gly Xaa 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Xaa Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Xaa Xaa Asn Ile Leu Arg Pro Xaa Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Xaa Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Xaa Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Xaa 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Xaa Pro Xaa Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 2 <211> 259 <212> PRT <213> unknown <220> <223> KZ144 endolysin without N-terminal methionine <400> 2 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 3 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> KZ144 without N-terminal methionine, with selenomethionine instead of methionine residues <220> <221> misc_feature <222> (79)..(79) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (93)..(93) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (142)..(142) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (148)..(148) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (170)..(170) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (179)..(179) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (250)..(250) <223> Xaa is selenomethionine <400> 3 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Xaa Pro 65 70 75 80 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Xaa Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Xaa Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Xaa Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Xaa Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Xaa Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Xaa Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 4 <211> 259 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Mutated KZ144 with E115A and without n-terminal methionine <220> <221> misc <222> (114)..(114) <223> mutation corresponding to position E115A in KZ144 endolysin <400> 4 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Ala Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 5 <211> 260 <212> PRT <213> unknown <220> <223> phiKZgp144 <400> 5 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 6 <211> 260 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S and C50S <400> 6 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 7 <211> 260 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V and S232 <400> 7 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 8 <211> 260 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M and A160T <400> 8 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 9 <211> 260 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C50S, I122M and A160T <400> 9 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 10 <211> 260 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C23S and C50S <400> 10 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Ser Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 11 <211> 260 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S <400> 11 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 12 <211> 260 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206N, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S <400> 12 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Asn Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 13 <211> 260 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with N230Y, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S <400> 13 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Tyr Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 14 <211> 260 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with M180E, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S <400> 14 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Glu Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 15 <211> 260 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with M149P, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S <400> 15 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 16 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with V186Y, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S <400> 16 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Tyr Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 17 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14R and C50S <400> 17 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 18 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, C14S and C50S <400> 18 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 19 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50N <400> 19 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 20 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14R, C50S, T82I, I122M, M149P, A206V and S232T <400> 20 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 21 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14R, C50S, T82I, I122M, M149P, A160T, A206V and S232T <400> 21 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 22 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, A206V, S232T, C14R and C50N <400> 22 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 23 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, I167L, A206V, S232T, C14R and C50N <400> 23 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Leu Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 24 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, N179F, A206V, S232T, C14R and C50N <400> 24 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Leu Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Phe Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 25 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, A206V, T212N, S232T, C14R and C50N <400> 25 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Asn Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 26 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, A206V, P224Q, S232T, C14R and C50N <400> 26 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Gln 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 27 <211> 260 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, L154T, A206V, S232T, C14R and C50N <400> 27 Met Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu 1 5 10 15 Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 Ile Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp 35 40 45 Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 55 60 Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met 65 70 75 80 Pro Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala 85 90 95 Val Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala 100 105 110 Ser Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser 115 120 125 Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile 130 135 140 Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Thr Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155 160 Leu Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile 165 170 175 Lys Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185 190 Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg 195 200 205 Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro 210 215 220 Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser 225 230 235 240 Pro Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala 245 250 255 Ala His Arg Lys 260 <210> 28 <211> 259 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S and C50S, without N-terminal methionine <400> 28 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 29 <211> 259 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V and S232, without N-terminal methionine <400> 29 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 30 <211> 259 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M and A160T, without N-terminal methionine <400> 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 31 <211> 259 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C50S, I122M and A160T, without N-terminal methionine <400> 31 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 32 <211> 259 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C23S and C50S, without N-terminal methionine <400> 32 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Ser Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 33 <211> 259 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S, without N-terminal methionine <400> 33 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 34 <211> 259 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206N, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S, without N-terminal methionine <400> 34 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Asn Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 35 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with N230Y, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S, without N-terminal methionine <400> 35 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Tyr Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 36 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with M180E, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S, without N-terminal methionine <400> 36 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Glu Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 37 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with M149P, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S, without N-terminal methionine <400> 37 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 38 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with V186Y, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S, without N-terminal methionine <400> 38 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Tyr Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 39 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14R and C50S, without N-terminal methionine <400> 39 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 40 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, C14S and C50S, without N-terminal methionine <400> 40 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 41 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50N, without N-terminal methionine <400> 41 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 42 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14R, C50S, T82I, I122M, M149P, A206V and S232T; without N-terminal methionine <400> 42 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 43 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14R, C50S, T82I, I122M, M149P, A160T, A206V and S232T; without N-terminal methionine <400> 43 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 44 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, A206V, S232T, C14R and C50N, without N-terminal methionine <400> 44 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 45 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, I167L, A206V, S232T, C14R and C50N, without N-terminal methionine <400> 45 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Leu Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 46 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, N179F, A206V, S232T, C14R and C50N, without N-terminal methionine <400> 46 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Leu Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Phe Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 47 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, A206V, T212N, S232T, C14R and C50N, without N-terminal methionine <400> 47 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Asn Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 48 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, A206V, P224Q, S232T, C14R and C50N, without N-terminal methionine <400> 48 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Gln Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 49 <211> 259 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, I122M, M149P, L154T, A206V, S232T, C14R and C50N, without N-terminal methionine <400> 49 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Asn Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 65 70 75 80 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Thr Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250 255 His Arg Lys <210> 50 <211> 6 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 50 Lys Arg Lys Lys Arg Lys 1 5 <210> 51 <211> 5 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synethtic sequence <220> <221> misc_feature <222> (3)..(3) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 51 Lys Arg Xaa Lys Arg 1 5 <210> 52 <211> 5 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 52 Lys Arg Ser Lys Arg 1 5 <210> 53 <211> 5 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 53 Lys Arg Gly Ser Gly 1 5 <210> 54 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 54 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 1 5 <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 55 Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 <210> 56 <211> 8 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 56 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 <210> 57 <211> 10 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 57 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys 1 5 10 <210> 58 <211> 12 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 58 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 1 5 10 <210> 59 <211> 14 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 59 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg 1 5 10 <210> 60 <211> 16 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 60 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 10 15 <210> 61 <211> 18 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 61 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys 1 5 10 15 Arg Lys <210> 62 <211> 19 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 62 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys 1 5 10 15 Arg Lys Lys <210> 63 <211> 19 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 63 Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10 15 Arg Arg Arg <210> 64 <211> 19 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 64 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 10 15 Lys Lys Lys <210> 65 <211> 20 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 65 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg 1 5 10 15 Lys Lys Arg Lys 20 <210> 66 <211> 21 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 66 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg 1 5 10 15 Lys Lys Arg Lys Lys 20 <210> 67 <211> 21 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 67 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys 1 5 10 15 Arg Lys Lys Arg Lys 20 <210> 68 <211> 22 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 68 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Gly Ser Gly Lys Arg Lys 1 5 10 15 Lys Arg Lys Lys Arg Lys 20 <210> 69 <211> 24 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 69 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Gly Ser Gly Ser Gly Lys 1 5 10 15 Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 20 <210> 70 <211> 25 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 70 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys 1 5 10 15 Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys 20 25 <210> 71 <211> 31 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 71 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg 1 5 10 15 Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 20 25 30 <210> 72 <211> 38 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 72 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Gly Ser Gly Ser Gly Lys 1 5 10 15 Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Gly Ser Gly Ser Gly Lys Arg Lys 20 25 30 Lys Arg Lys Lys Arg Lys 35 <210> 73 <211> 39 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 73 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys 1 5 10 15 Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg 20 25 30 Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 35 <210> 74 <211> 42 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 74 Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg 1 5 10 15 Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg 20 25 30 Ser Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 35 40 <210> 75 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75 Leu Leu Gly Asp Phe Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu 1 5 10 15 Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val 20 25 30 Pro Arg Thr Glu Ser 35 <210> 76 <211> 29 <212> PRT <213> unknown <220> <223> SMAP-29 sheep <400> 76 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly 20 25 <210> 77 <211> 13 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Indolicidine bovine <400> 77 Ile Leu Pro Trp Lys Trp Pro Trp Trp Pro Trp Arg Arg 1 5 10 <210> 78 <211> 18 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Protegrin Porcine <400> 78 Arg Gly Gly Arg Leu Cys Tyr Cys Arg Arg Arg Phe Cys Val Cys Val 1 5 10 15 Gly Arg <210> 79 <211> 31 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Cecropin P1 Mammal (pig) <400> 79 Ser Trp Leu Ser Lys Thr Ala Lys Lys Leu Glu Asn Ser Ala Lys Lys 1 5 10 15 Arg Ile Ser Glu Gly Ile Ala Ile Ala Ile Gln Gly Gly Pro Arg 20 25 30 <210> 80 <211> 23 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Magainin frog <400> 80 Gly Ile Gly Lys Phe Leu His Ser Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe 1 5 10 15 Val Gly Glu Ile Met Asn Ser 20 <210> 81 <211> 25 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Pleurocidin fish <400> 81 Gly Trp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Ala Ala His Val Gly Lys His Val 1 5 10 15 Gly Lys Ala Ala Leu Thr His Tyr Leu 20 25 <210> 82 <211> 36 <212> PRT <213> Aedes aegypti <400> 82 Gly Gly Leu Lys Lys Leu Gly Lys Lys Leu Glu Gly Ala Gly Lys Arg 1 5 10 15 Val Phe Asn Ala Ala Glu Lys Ala Leu Pro Val Val Ala Gly Ala Lys 20 25 30 Ala Leu Arg Lys 35 <210> 83 <211> 40 <212> PRT <213> Drosophila melanogaster <400> 83 Gly Trp Leu Lys Lys Ile Gly Lys Lys Ile Glu Arg Val Gly Gln His 1 5 10 15 Thr Arg Asp Ala Thr Ile Gln Gly Leu Gly Ile Pro Gln Gln Ala Ala 20 25 30 Asn Val Ala Ala Thr Ala Arg Gly 35 40 <210> 84 <211> 21 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Buforin II vertebrate <400> 84 Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His 1 5 10 15 Arg Leu Leu Arg Lys 20 <210> 85 <211> 39 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Sarcotoxin IA Fly <400> 85 Gly Trp Leu Lys Lys Ile Gly Lys Lys Ile Glu Arg Val Gly Gln His 1 5 10 15 Thr Arg Asp Ala Thr Ile Gln Gly Leu Gly Ile Ala Gln Gln Ala Ala 20 25 30 Asn Val Ala Ala Thr Ala Arg 35 <210> 86 <211> 17 <212> PRT <213> Apis mellifera <400> 86 Ala Asn Arg Pro Val Tyr Ile Pro Pro Pro Arg Pro Pro His Pro Arg 1 5 10 15 Leu <210> 87 <211> 24 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Ascaphine 5 Frog <400> 87 Gly Ile Lys Asp Trp Ile Lys Gly Ala Ala Lys Lys Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15 Val Ala Ser His Ile Ala Asn Gln 20 <210> 88 <211> 22 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Nigrocine 2 Frog <400> 88 Gly Leu Leu Ser Lys Val Leu Gly Val Gly Lys Lys Val Leu Cys Gly 1 5 10 15 Val Ser Gly Leu Val Cys 20 <210> 89 <211> 24 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Pseudin 1 Rana Frog <400> 89 Gly Leu Asn Thr Leu Lys Lys Val Phe Gln Gly Leu His Glu Ala Ile 1 5 10 15 Lys Leu Ile Asn Asn His Val Gln 20 <210> 90 <211> 18 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Ranalexin Frog <400> 90 Phe Leu Gly Gly Leu Ile Val Pro Ala Met Ile Cys Ala Val Thr Lys 1 5 10 15 Lys Cys <210> 91 <211> 26 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Melittin bee <400> 91 Gly Ile Gly Ala Val Leu Lys Val Leu Thr Thr Gly Leu Pro Ala Leu 1 5 10 15 Ile Ser Trp Ile Lys Arg Lys Arg Gln Gln 20 25 <210> 92 <211> 25 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Lycotoxin 1 Spider <400> 92 Ile Trp Leu Thr Ala Leu Lys Phe Leu Gly Lys His Ala Ala Lys Lys 1 5 10 15 Leu Ala Lys Gln Gln Leu Ser Lys Leu 20 25 <210> 93 <211> 19 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Parasin 1 Fish <400> 93 Lys Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr 1 5 10 15 Arg Ser Ser <210> 94 <211> 39 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Buforin I Toad <400> 94 Ala Gly Arg Gly Lys Gln Gly Gly Lys Val Arg Ala Lys Ala Lys Thr 1 5 10 15 Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gln Phe Pro Val Gly Arg Val His Arg 20 25 30 Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr 35 <210> 95 <211> 34 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Dermaseptin 1 Frog <400> 95 Ala Leu Trp Lys Thr Met Leu Lys Lys Leu Gly Thr Met Ala Leu His 1 5 10 15 Ala Gly Lys Ala Ala Leu Gly Ala Ala Ala Asp Thr Ile Ser Gln Gly 20 25 30 Thr Gln <210> 96 <211> 12 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Bactenecin 1 Cow <400> 96 Arg Leu Cys Arg Ile Val Val Ile Arg Val Cys Arg 1 5 10 <210> 97 <211> 21 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Thanatin Insect <400> 97 Gly Ser Lys Lys Pro Val Pro Ile Ile Tyr Cys Asn Arg Arg Thr Gly 1 5 10 15 Lys Cys Gln Arg Met 20 <210> 98 <211> 19 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Brevinin 1T Rana frogs <400> 98 Val Asn Pro Ile Ile Leu Gly Val Leu Pro Lys Val Cys Leu Ile Thr 1 5 10 15 Lys Lys Cys <210> 99 <211> 26 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Ranateurin 1 Rana frog <400> 99 Ser Met Leu Ser Val Leu Lys Asn Leu Gly Lys Val Gly Leu Gly Phe 1 5 10 15 Val Ala Cys Lys Ile Asn Ile Lys Gln Cys 20 25 <210> 100 <211> 46 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Esculentin 1 Rana frogs <400> 100 Gly Ile Phe Ser Lys Leu Gly Arg Lys Lys Ile Lys Asn Leu Leu Ile 1 5 10 15 Ser Gly Leu Lys Asn Val Gly Lys Glu Val Gly Met Asp Val Val Arg 20 25 30 Thr Gly Ile Lys Ile Ala Gly Cys Lys Ile Lys Gly Glu Cys 35 40 45 <210> 101 <211> 17 <212> PRT <213> Limulus polyphemus <400> 101 Arg Trp Cys Phe Arg Val Cys Tyr Arg Gly Ile Cys Tyr Arg Lys Cys 1 5 10 15 Arg <210> 102 <211> 25 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Androctonin Scorpion <400> 102 Arg Ser Val Cys Arg Gln Ile Lys Ile Cys Arg Arg Arg Gly Gly Cys 1 5 10 15 Tyr Tyr Lys Cys Thr Asn Arg Pro Tyr 20 25 <210> 103 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103 Asp Cys Tyr Cys Arg Ile Pro Ala Cys Ile Ala Gly Glu Arg Arg Tyr 1 5 10 15 Gly Thr Cys Ile Tyr Gln Gly Arg Leu Trp Ala Phe Cys Cys 20 25 30 <210> 104 <211> 38 <212> PRT <213> unknown <220> <223> beta-defensin cow <400> 104 Asn Pro Val Ser Cys Val Arg Asn Lys Gly Ile Cys Val Pro Ile Arg 1 5 10 15 Cys Pro Gly Ser Met Lys Gln Ile Gly Thr Cys Val Gly Arg Ala Val 20 25 30 Lys Cys Cys Arg Lys Lys 35 <210> 105 <211> 18 <212> PRT <213> unknown <220> <223> theta-defensin monkey <400> 105 Gly Phe Cys Arg Cys Leu Cys Arg Arg Gly Val Cys Arg Cys Ile Cys 1 5 10 15 Thr Arg <210> 106 <211> 40 <212> PRT <213> unknown <220> <223> defensin (sapecin A) insect <400> 106 Ala Thr Cys Asp Leu Leu Ser Gly Thr Gly Ile Asn His Ser Ala Cys 1 5 10 15 Ala Ala His Cys Leu Leu Arg Gly Asn Arg Gly Gly Tyr Cys Asn Gly 20 25 30 Lys Ala Val Cys Val Cys Arg Asn 35 40 <210> 107 <211> 46 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Thionin (crambin) plant <400> 107 Thr Thr Cys Cys Pro Ser Ile Val Ala Arg Ser Asn Phe Asn Val Cys 1 5 10 15 Arg Ile Pro Gly Thr Pro Glu Ala Ile Cys Ala Thr Tyr Thr Gly Cys 20 25 30 Ile Ile Ile Pro Gly Ala Thr Cys Pro Gly Asp Tyr Ala Asn 35 40 45 <210> 108 <211> 50 <212> PRT <213> unknown <220> <223> defensin from radish <400> 108 Gln Lys Leu Cys Gln Arg Pro Ser Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly 1 5 10 15 Asn Asn Asn Ala Cys Lys Asn Gln Cys Ile Arg Leu Glu Lys Ala Arg 20 25 30 His Gly Ser Cys Asn Tyr Val Phe Pro Ala His Cys Ile Cys Tyr Phe 35 40 45 Pro Cys 50 <210> 109 <211> 44 <212> PRT <213> Drosophila melanogaster <400> 109 Asp Cys Leu Ser Gly Arg Tyr Lys Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn 1 5 10 15 Glu Thr Cys Arg Arg Val Cys Lys Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His 20 25 30 Cys Ser Pro Ser Leu Lys Cys Trp Cys Glu Gly Cys 35 40 <210> 110 <211> 25 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110 Asp Thr His Phe Pro Ile Cys Ile Phe Cys Cys Gly Cys Cys His Arg 1 5 10 15 Ser Lys Cys Gly Met Cys Cys Lys Thr 20 25 <210> 111 <211> 44 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Bac 5 Cow <400> 111 Arg Phe Arg Pro Pro Ile Arg Arg Pro Pro Ile Arg Pro Pro Phe Tyr 1 5 10 15 Pro Pro Phe Arg Pro Pro Ile Arg Pro Pro Ile Phe Pro Pro Ile Arg 20 25 30 Pro Pro Phe Arg Pro Pro Leu Gly Arg Pro Phe Pro 35 40 <210> 112 <211> 39 <212> PRT <213> unknown <220> <223> PR-39 Pig <400> 112 Arg Arg Arg Pro Arg Pro Pro Tyr Leu Pro Arg Pro Arg Pro Pro Pro 1 5 10 15 Phe Phe Pro Pro Arg Leu Pro Pro Arg Ile Pro Pro Gly Phe Pro Pro 20 25 30 Arg Phe Pro Pro Arg Phe Pro 35 <210> 113 <211> 20 <212> PRT <213> unknown <220> <223> Pyrrhocoricin Insect <400> 113 Val Asp Lys Gly Ser Tyr Leu Pro Arg Pro Thr Pro Pro Arg Pro Ile 1 5 10 15 Tyr Asn Arg Asn 20 <210> 114 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 114 Asp Ser His Ala Lys Arg His His Gly Tyr Lys Arg Lys Phe His Glu 1 5 10 15 Lys His His Ser His Arg Gly Tyr 20 <210> 115 <211> 34 <212> PRT <213> Limulus polyphemus <400> 115 Gly Phe Lys Leu Lys Gly Met Ala Arg Ile Ser Cys Leu Pro Asn Gly 1 5 10 15 Gln Trp Ser Asn Phe Pro Pro Lys Cys Ile Arg Glu Cys Ala Met Val 20 25 30 Ser Ser <210> 116 <211> 18 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 116 Gly Phe Phe Ile Pro Ala Val Ile Leu Pro Ser Ile Ala Phe Leu Ile 1 5 10 15 Val Pro <210> 117 <211> 5 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 117 Phe Phe Val Ala Pro 1 5 <210> 118 <211> 13 <212> PRT <213> unknown <220> <223> alpha4-helix of T4 lysozyme <400> 118 Pro Asn Arg Ala Lys Arg Val Ile Thr Thr Phe Arg Thr 1 5 10 <210> 119 <211> 27 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 119 Lys Arg Trp Val Lys Arg Val Lys Arg Val Lys Arg Trp Val Lys Arg 1 5 10 15 Val Val Arg Val Val Lys Arg Trp Val Lys Arg 20 25 <210> 120 <211> 25 <212> PRT <213> artificial <220> <223> synthetic sequence <400> 120 Gly Lys Pro Gly Trp Leu Ile Lys Lys Ala Leu Val Phe Lys Lys Leu 1 5 10 15 Ile Arg Arg Pro Leu Lys Arg Leu Ala 20 25 <210> 121 <211> 291 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S and C50S plus SMAP-29 <400> 121 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys 290 <210> 122 <211> 291 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V and S232 plus SMAP-29 <400> 122 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys 290 <210> 123 <211> 291 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M and A160T plus SMAP-29 <400> 123 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys 290 <210> 124 <211> 291 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C50S, I122M and A160T plus SMAP-29 <400> 124 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys 290 <210> 125 <211> 291 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C23S and C50S plus SMAP-29 <400> 125 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Ser Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys 290 <210> 126 <211> 291 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S plus SMAP-29 <400> 126 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys 290 <210> 127 <211> 291 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206N, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S plus SMAP-29 <400> 127 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Asn Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys 290 <210> 128 <211> 290 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S and C50S plus SMAP-29 without Met <400> 128 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Ser 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Thr 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys 290 <210> 129 <211> 290 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V and S232 plus SMAP-29 without Met <400> 129 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Cys 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Ile 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys 290 <210> 130 <211> 290 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M and A160T plus SMAP-29 without Met <400> 130 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Cys 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Ile 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys 290 <210> 131 <211> 290 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C50S, I122M and A160T plus SMAP-29 without Met <400> 131 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Ser 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Thr 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys 290 <210> 132 <211> 290 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C23S and C50S plus SMAP-29 w/o Met <400> 132 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Ser Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Ser 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Thr 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys 290 <210> 133 <211> 290 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S plus SMAP-29 without Met <400> 133 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Ser 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Ile 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys 290 <210> 134 <211> 290 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206N, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S plus SMAP-29 without Met <400> 134 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Ser 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Ile 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Asn Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys 290 <210> 135 <211> 6 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> His-Tag (6x) <400> 135 His His His His His His 1 5 <210> 136 <211> 299 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S and C50S plus SMAP-29 and HisTag <400> 136 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 137 <211> 299 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V and S232 plus SMAP-29 and HisTag <400> 137 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 138 <211> 299 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M and A160Tplus SMAP-29 and HisTag <400> 138 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 139 <211> 299 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C50S, I122M and A160Tplus SMAP-29 and HisTag <400> 139 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 140 <211> 299 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C23S and C50Splus SMAP-29 and HisTag <400> 140 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Ser Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 141 <211> 299 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50Splus SMAP-29 and HisTag <400> 141 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 142 <211> 299 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206N, S232T, I122M, A160T, C14S and C50Splus SMAP-29 and HisTag <400> 142 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Ser Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Ile Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Asn Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 143 <211> 298 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S and C50S plus SMAP-29 and HisTag, w/o Met <400> 143 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Ser 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Thr 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 144 <211> 298 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V and S232 plus SMAP-29 and HisTag, w/o Met <400> 144 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Cys 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Ile 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 145 <211> 298 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M and A160Tplus SMAP-29 and HisTag, w/o Met <400> 145 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Cys 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Ile 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 146 <211> 298 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C50S, I122M and A160Tplus SMAP-29 and HisTag, w/o Met <400> 146 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Ser 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Thr 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 147 <211> 298 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with C14S, C23S and C50Splus SMAP-29 and HisTag, w/o Met <400> 147 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Ser Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Ser 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Thr 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 148 <211> 298 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S and C50Splus SMAP-29 and HisTag, w/o Met <400> 148 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Ser 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Ile 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 149 <211> 298 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> mutated KZ144 with T82I, A206N, S232T, I122M, A160T, C14S and C50S plus SMAP-29 and HisTag, w/o Met <400> 149 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys Lys 1 5 10 15 Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30 Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln Thr 35 40 45 Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile Phe 50 55 60 Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Ser 65 70 75 80 Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 90 95 Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro Ile 100 105 110 Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu 115 120 125 Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile 130 135 140 Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr 145 150 155 160 Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn 165 170 175 Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg 180 185 190 Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu 195 200 205 Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr 210 215 220 Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Asn Ala Arg Arg Phe 225 230 235 240 Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu 245 250 255 Ala Gln Ala Asn Pro Thr Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys 260 265 270 Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His 275 280 285 Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 150 <211> 190 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KZ144 fragment 71-260 with Y75A <400> 150 Pro Pro Ile Pro Ala Lys Thr Ile Pro Met Pro Thr Ala Asn Lys Ser 1 5 10 15 Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu Asn Ala Thr Gly 20 25 30 Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser Ile Glu Ser Ala Phe 35 40 45 Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr Gly Trp Phe Gln 50 55 60 Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu Asn Tyr Gly Met Lys 65 70 75 80 Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg Lys Asp Pro Arg 85 90 95 Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys Glu Asn Met Asn Ile 100 105 110 Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr Asp Leu Tyr Leu 115 120 125 Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg Phe Leu Thr Thr Gly 130 135 140 Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu Ala Gln Ala Asn 145 150 155 160 Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys Thr Ile Gln Glu 165 170 175 Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His Arg Lys 180 185 190 <210> 151 <211> 299 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> KZ144 plus SMAP-29 and HisTag <400> 151 Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys Ile Ala His Gly Val Lys 1 5 10 15 Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg Ile Ile Arg Ile Ala Gly Gly Ser 20 25 30 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 35 40 45 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 50 55 60 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 75 80 Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 90 95 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Met Pro 100 105 110 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 115 120 125 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135 140 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 145 150 155 160 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met Ile Glu 165 170 175 Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 180 185 190 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu Ile Lys 195 200 205 Glu Asn Met Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215 220 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 225 230 235 240 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 245 250 255 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265 270 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280 285 His Arg Lys Leu Glu His His His His His His 290 295 <210> 152 <211> 256 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> KZ144 without N-terminal methionine, with selenomethionine instead of methionine residues <220> <221> misc_feature <222> (79)..(79) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (93)..(93) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (142)..(142) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (148)..(148) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (170)..(170) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (179)..(179) <223> Xaa is selenomethionine <220> <221> misc_feature <222> (250)..(250) <223> Xaa is selenomethionine <400> 152 Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln 1 5 10 15 Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly Ile 20 25 30 Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 35 40 45 Cys Leu Asp Ser Asp Gly Ile Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 55 60 Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro Ile Pro Tyr Lys Thr Ile Pro Xaa Pro 65 70 75 80 Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Xaa Asn Ala Val 85 90 95 Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 100 105 110 Ile Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Ile Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 115 120 125 Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Xaa Ile Glu 130 135 140 Asn Tyr Gly Xaa Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu 145 150 155 160 Arg Lys Asp Pro Arg Ile Ser Ala Leu Xaa Gly Ala Glu Leu Ile Lys 165 170 175 Glu Asn Xaa Asn Ile Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 180 185 190 Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg 195 200 205 Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys 210 215 220 Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser Ile Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 225 230 235 240 Lys Thr Ile Gln Glu Val Tyr Asn Leu Xaa Asn Ile Leu Arg Pro Val 245 250 255

Claims (92)

  1. SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성(sequence identity)을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 상기에서 SEQ ID NO: 1은 하기에 의해 특징화 되고:
    X1은 부재(absent) 또는 임의의 아미노산, 특히 M,
    X14는 임의의 아미노산, 바람직하게는 S, R 또는 N, 더욱 바람직하게는 S 또는 R
    X23은 임의의 아미노산, 바람직하게는 S, R 또는 N, 더욱 바람직하게는 S
    X50은 임의의 아미노산, 바람직하게는 S, R 또는 N, 더욱 바람직하게는 S 또는 N
    X82는 임의의 아미노산, 바람직하게는 T 또는 I
    X122는 임의의 아미노산, 바람직하게는 I 또는 M
    X122는 임의의 아미노산, 바람직하게는 I 또는 M
    X149는 임의의 아미노산, 바람직하게는 M 또는 P
    X154는 임의의 아미노산, 바람직하게는 L 또는 T
    X160은 임의의 아미노산, 바람직하게는 A 또는 T
    X167은 임의의 아미노산, 바람직하게는 I 또는 L
    X167은 임의의 아미노산, 바람직하게는 I 또는 L
    X179는 임의의 아미노산, 바람직하게는 N 또는 F
    X180은 임의의 아미노산, 바람직하게는 M 또는 E
    X186은 임의의 아미노산, 바람직하게는 V 또는 Y
    X206은 임의의 아미노산, 바람직하게는 A, N 또는 V
    X212는 임의의 아미노산, 바람직하게는 T 또는 N
    X224는 임의의 아미노산, 바람직하게는 P 또는 Q
    X230은 임의의 아미노산, 바람직하게는 N 또는 Y
    X232는 임의의 아미노산, 바람직하게는 S 또는 T일 수 있음;
    및 상기에서 폴리펩티드는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열도, SEQ ID NO:3의 아미노산 서열도 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열도 포함하지 않음.
  2. 제1항에 있어서,
    폴리펩티드가 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열 내에서 하기 중 적어도 하나를 나타내는, 폴리펩티드:
    X14는 C가 아님;
    X23은 C가 아님;
    X50은 C가 아님;
    X82는 I
    X122는 M
    X149는 P
    X154는 T
    X160은 T
    X167은 L
    X179는 F
    X180은 E
    X186은 Y
    X206은 N 또는 V
    X212는 N
    X224는 Q
    X230은 Y 및/또는
    X232는 T.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    X14는 S, R 또는 N, 더욱 바람직하게는 S 또는 R
    X23은 S, R 또는 N, 더욱 바람직하게는 S
    X50은 S, R 또는 N, 더욱 바람직하게는 S 또는 N
    X82는 T 또는 I
    X122는 I 또는 M
    X149는 M 또는 P
    X154는 L 또는 T
    X160은 A 또는 T
    X167은 I 또는 L
    X179는 N 또는 F
    X180은 M 또는 E
    X186은 V 또는 Y
    X206은 A, N 또는 V
    X212는 T 또는 N
    X224는 P 또는 Q
    X230은 N 또는 Y
    X232는 S 또는 T인, 폴리펩티드.
  4. 제2항 또는 제3항에 있어서,
    SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 나타내는 서열이, 제2항 또는 제3항에서 정의된 SEQ ID NO: 1의 서열과, X1, X14, X23, X50, X82, X122, X149, X154, X160, X167, X179, X180, X186, X206, X212, X224, X230 및/또는 X232에서 선택되는 하나 이상의 잔기에서만 상이한, 폴리펩티드.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열 내 위치 115에서 글루탐산 잔기를 나타내는, 폴리펩티드.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99,5% 또는 심지어 100%의 서열 상동성을 나타내는, 폴리펩티드.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 SEQ ID NO: 1의 서열을 포함하는, 폴리펩티드.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    X14는 C가 아닌, 폴리펩티드.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    X23은 C가 아닌, 폴리펩티드.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
    X50은 C가 아닌, 폴리펩티드.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    X14 및 X23는 C가 아닌, 폴리펩티드.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
    X14 및 X50은 C가 아닌, 폴리펩티드
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
    X23 및 X50은 C가 아닌, 폴리펩티드.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서
    X14도, X23도, X50도, C가 아닌, 폴리펩티드.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서
    X14는 S인, 폴리펩티드.
  16. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
    X14는 R인, 폴리펩티드.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
    X23은 S인, 폴리펩티드.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    X50은 S인, 폴리펩티드.
  19. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
    X50은 N인, 폴리펩티드.
  20. 제1항 내지 제15항 및 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    X14 및 X23은 S인, 폴리펩티드.
  21. 제1항 내지 제15항, 제17항 및 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    X14 및 X50은 S인, 폴리펩티드.
  22. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    X23 및 X50은 S인, 폴리펩티드.
  23. 제1항 내지 제15항, 제17항 및 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
    X14, X23 및 X50은 S인, 폴리펩티드.
  24. 제16항에 있어서,
    X14는 R 및 X50은 S인, 폴리펩티드.
  25. 제15항에 있어서,
    X14는 S 및, X50은 N인, 폴리펩티드.
  26. 제16항에 있어서,
    X14는 R 및, X50은 N인 폴리펩티드.
  27. 제16항에 있어서,
    X149는 P인, 폴리펩티드.
  28. 제27항에 있어서,
    X160은 T인, 폴리펩티드.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
    X82는 I인, 폴리펩티드.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
    X122는 M인, 폴리펩티드.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    X149는 P인, 폴리펩티드.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서,
    X154는 T인, 폴리펩티드.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
    X160은 T인, 폴리펩티드.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,
    X167은 L인, 폴리펩티드.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
    X179는 F인, 폴리펩티드.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서,
    X180은 E인, 폴리펩티드.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
    X186은 Y인, 폴리펩티드.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
    X206은 V인, 폴리펩티드.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
    X206은 N인, 폴리펩티드.
  40. 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서,
    X212는 N인, 폴리펩티드.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
    X224는 Q인, 폴리펩티드.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
    X230은 Y인, 폴리펩티드.
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    X232는 T인, 폴리펩티드.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
    X122는 M 및 X160은 T인, 폴리펩티드.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서,
    X82는 I, X206은 V, 및 X232는 T인, 폴리펩티드.
  46. 제27항에 있어서,
    X160은 A인, 폴리펩티드.
  47. 제45항에 있어서,
    X122는 M 및 X160은 T인, 폴리펩티드.
  48. 제45항에 있어서,
    X122는 M인, 폴리펩티드.
  49. 제21항에 있어서,
    X122는 M 및 X160은 T인, 폴리펩티드.
  50. 제47항에 있어서,
    X14는 S 및 X50은 S인, 폴리펩티드.
  51. 제49항에 있어서,
    X82는 I, X206은 N 및 X232는 T인, 폴리펩티드.
  52. 제51항에 있어서,
    X149는 P인, 폴리펩티드.
  53. 제51항에 있어서,
    Ml80은 E인, 폴리펩티드.
  54. 제51항에 있어서,
    X186은 Y인, 폴리펩티드.
  55. 제51항에 있어서,
    X230은 Y인, 폴리펩티드.
  56. 제24항에 있어서,
    X82는 I, X122는 M, X206은 V, 및 X232는 T인, 폴리펩티드.
  57. 제56항에 있어서,
    X160은 T인, 폴리펩티드.
  58. 제56항 또는 제57항에 있어서,
    X149는 P인, 폴리펩티드.
  59. 제24항에 있어서,
    X82는 I, X122는 M, X160은 T, X206은 V, 및 X232는 T인, 폴리펩티드.
  60. 제25항에 있어서,
    X82는 I, X122는 M, X160은 T, X206은 V, 및 X232는 T인, 폴리펩티드.
  61. 제26항에 있어서,
    X82는 I, X122는 M, X149는 P, X206은 V, 및 X232는 T인, 폴리펩티드.
  62. 제61항에 있어서,
    X167은 L인, 폴리펩티드.
  63. 제61항에 있어서,
    X179는 F인, 폴리펩티드.
  64. 제61항에 있어서,
    X212는 N인, 폴리펩티드.
  65. 제61항에 있어서,
    X224는 Q인, 폴리펩티드.
  66. 제61항에 있어서,
    X154는 T인, 폴리펩티드.
  67. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서,
    X1은 M이 아닌, 폴리펩티드.
  68. 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
    SEQ ID NO: 1은 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 49로 구성된 군에서 선택되는 서열인, 폴리펩티드.
  69. 제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 SEQ ID NO: 6 내지 SEQ ID NO: 49로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는, 폴리펩티드.
  70. 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 양친매성 펩티드, 양이온성 펩티드, 다가양이온성 펩티드, 소수성 펩티드, 자연적으로 발생하는 항균성 펩티드, 스시 펩티드 및 디펜신으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 하나의 아미노산 서열 스트레치를 부가적으로 포함하는, 폴리펩티드.
  71. 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 양친매성 펩티드, 양이온성 펩티드, 다가양이온성 펩티드, 소수성 펩티드, 자연적으로 발생하는 항균성 펩티드, 스시 펩티드 및 디펜신의 군에서 선택되는 적어도 두 개의 구별되는 아미노산 서열 스트레치를 포함하는, 폴리펩티드.
  72. 제70항 또는 제71항에 있어서,
    적어도 하나의 아미노산 서열 스트레치가 폴리펩티드의 N- 또는 C-말단에 존재하는, 폴리펩티드.
  73. 제70항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 KRK 및 SEQ ID NO: 50 내지 SEQ ID NO: 120으로 구성된 군에서 선택되는 적어도 하나의 부가적인 아미노산 서열 스트레치를 포함하는, 폴리펩티드.
  74. 제70항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 SMAP-29의 아미노산 서열인, SEQ ID NO: 76을 가지는 적어도 하나의 부가적인 아미노산 서열 스트레치를 포함하는, 폴리펩티드.
  75. 제74항에 있어서,
    SMAP-29의 서열인, SEQ ID NO: 76이 SEQ ID NO: 1과 적어도 약 90%의 서열 상동성을 나타내는 서열의 폴리펩티드 N-말단(N-terminally) 내 위치되는, 폴리펩티드.
  76. 제70항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 SEQ ID NO: 121 내지 SEQ ID NO: 134 중 어느 것에서 선택된 아미노산 서열과 적어도 91,5%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, 폴리펩티드가 SEQ ID NO: 2의 아미노산 서열도, SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열도, SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열도 포함하지 않는, 폴리펩티드.
  77. 제76항에 있어서,
    폴리펩티드가 SEQ ID NO: 121 내지 SEQ ID NO: 134 중 어느 것에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 98,5%, 적어도 약 98,75%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 99,5%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩티드.
  78. 제1항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 SEQ ID NO: 121 내지 SEQ ID NO: 134 로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는, 폴리펩티드.
  79. 제1항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 태그 서열을 추가로 포함하는, 폴리펩티드.
  80. 제79항에 있어서,
    태그가 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 보이는 아미노산 서열의 C-말단(C-terminally)에 위치되는, 폴리펩티드.
  81. 제79항 또는 제80항에 있어서,
    태그가 SEQ ID NO: 1의 서열과 적어도 90%의 서열 상동성을 보이는 아미노산 서열과 직접적으로 또는 1 내지 10개의 아미노산 잔기, 바람직하게는 1 내지 5개의 아미노산 잔기, 심지어 더욱 바람직하게는 1 내지 2개 아미노산의 짧은 링커를 통해서 연결되는, 폴리펩티드.
  82. 제79항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 His-태그, 바람직하게는 SEQ ID NO: 135에 따른 His 태그를 포함하는, 폴리펩티드.
  83. 제79항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 SEQ ID NO: 136 내지 SEQ ID NO: 149 중 어느 것에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 91,5%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하고, 폴리펩티드가 SEQ ID NO: 2 아미노산 서열도, SEQ ID NO: 3 아미노산 서열도 포함하지 않는, 폴리펩티드.
  84. 제83항에 있어서,
    폴리펩티드가 SEQ ID NO: 136 내지 SEQ ID NO: 149 중 어느 것에서 선택되는 아미노산 서열과 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 98,5%, 적어도 약 98,75%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 99,5%의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는, 폴리펩티드.
  85. 제1항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 약 320개의 아미노산을 초과하지 않는, 바람직하게는 약 310개의 아미노산을 초과하지 않는 전체 길이를 가지는, 폴리펩티드.
  86. 제1항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 SEQ ID NO: 136 내지 SEQ ID NO: 149로 구성된 군에서 선택되는 서열을 포함하는, 폴리펩티드.
  87. 제1항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리펩티드가 그람-음성 박테리아의, 특히 슈도모나스 및/또는 캄필로박터 박테리아의 펩티도글리칸을 분해하는, 폴리펩티드.
  88. 제1항 내지 제87항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산.
  89. 제88항에 따른 핵산을 포함하는 벡터.
  90. 제1항 내지 제87항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제88항에 따른 핵산 및/또는 제89항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  91. 제1항 내지 제87항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩티드, 제88항에 따른 핵산, 제89항에 따른 벡터 및/또는 제90항에 따른 숙주 세포를 포함하는 조성물.
  92. 제91항에 있어서,
    조성물이 약학적으로 허용가능한 희석제, 첨가제 또는 담체를 포함하는 약학적 조성물인, 조성물.
KR1020167015821A 2013-11-14 2014-11-14 개질된 kz144 엔도리신 서열 KR102302044B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EPPCT/EP2013/073869 2013-11-14
PCT/EP2013/073869 WO2015070911A1 (en) 2013-11-14 2013-11-14 Modified kz144 endolysin sequence
PCT/EP2014/074671 WO2015071436A1 (en) 2013-11-14 2014-11-14 Modified kz144 endolysin sequence

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20160085342A true KR20160085342A (ko) 2016-07-15
KR102302044B1 KR102302044B1 (ko) 2021-09-15

Family

ID=49582760

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020167015821A KR102302044B1 (ko) 2013-11-14 2014-11-14 개질된 kz144 엔도리신 서열

Country Status (10)

Country Link
US (1) US10184120B2 (ko)
JP (1) JP6745720B2 (ko)
KR (1) KR102302044B1 (ko)
CN (1) CN105793419B (ko)
AU (1) AU2014350104B2 (ko)
BR (1) BR112016011091B1 (ko)
CA (1) CA2929686C (ko)
EA (1) EA035959B1 (ko)
MX (1) MX2016006277A (ko)
WO (2) WO2015070911A1 (ko)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2728682C2 (ru) 2015-09-17 2020-07-31 Контрафект Корпорейшн Применение лизина для восстановления/увеличения антибактериальной активности антибиотиков в присутствии легочного сурфактанта, который ингибирует указанные антибиотики
CN109072211B (zh) * 2016-04-28 2023-10-27 莱桑多股份公司 抗沙门氏菌的抗菌剂
US11208646B2 (en) 2016-05-27 2021-12-28 Sasinapas Co., Ltd. Endolysin variant
WO2018100408A1 (en) * 2016-11-30 2018-06-07 Sasinapas Co.,Ltd. Modified peptides
JP2020515295A (ja) * 2017-04-03 2020-05-28 サシナパス コーポレイション リミテッド 改変されたグラム陰性エンドリシン
CN111304181B (zh) * 2020-02-17 2021-11-23 华东理工大学 一种基因工程改造后的副溶血性弧菌噬菌体裂解酶及其制备方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010149792A2 (en) * 2009-06-26 2010-12-29 Katholieke Universiteit Leuven, K.U. Leuven R&D Antimicrobial agents
KR20120059576A (ko) * 2009-08-24 2012-06-08 뤼산도 홀딩 아게 신규한 엔도리신 ＯＢＰｇｐＬＹＳ
KR20130142837A (ko) * 2012-06-20 2013-12-30 한국외국어대학교 연구산학협력단 슈도모나스 에루기노사의 박테리오파아지 및 그 용도

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1289092C (en) * 1987-01-15 1991-09-17 Robert A. Hallewell Thermostable human cu/zn superoxide dismutase muteins
EP0285123A3 (en) 1987-04-03 1989-02-01 Stabra AG A method for complete mutagenesis of nucleic acids
ZA936811B (en) * 1992-10-28 1995-03-15 Upjohn Co Somatotropin modifications
JPH08127540A (ja) * 1994-09-09 1996-05-21 Takeda Chem Ind Ltd 抗潰瘍医薬
CN101952424A (zh) * 2007-08-22 2011-01-19 海格罗斯投资有限责任公司 用于人类和动物葡萄球菌感染的新蛋白
GB0815484D0 (en) 2008-08-26 2008-10-01 Univ Leuven Kath Antibacterial agents
JP6034188B2 (ja) 2009-06-26 2016-11-30 ライサンド アクツィエンゲゼルシャフト 抗微生物剤
DK2563916T3 (en) * 2010-04-27 2015-10-05 Lysando Ag METHOD FOR REDUCING biofilms
GB201018518D0 (en) * 2010-11-03 2010-12-15 Univ Leuven Kath Novel endolysin
EP2468856A1 (en) 2010-12-23 2012-06-27 Lysando Aktiengesellschaft Antimicrobial Agents

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010149792A2 (en) * 2009-06-26 2010-12-29 Katholieke Universiteit Leuven, K.U. Leuven R&D Antimicrobial agents
JP2012530509A (ja) * 2009-06-26 2012-12-06 カトリック ユニバーシテイト ルーベン ケイ．ユー． ルーベン アール アンド ディー 抗微生物剤
KR20120059576A (ko) * 2009-08-24 2012-06-08 뤼산도 홀딩 아게 신규한 엔도리신 ＯＢＰｇｐＬＹＳ
KR20130142837A (ko) * 2012-06-20 2013-12-30 한국외국어대학교 연구산학협력단 슈도모나스 에루기노사의 박테리오파아지 및 그 용도

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015071436A1 (en) 2015-05-21
WO2015070911A1 (en) 2015-05-21
AU2014350104B2 (en) 2020-03-05
CN105793419A (zh) 2016-07-20
CA2929686C (en) 2023-08-08
EA035959B1 (ru) 2020-09-07
KR102302044B1 (ko) 2021-09-15
EA201691004A1 (ru) 2017-01-30
CA2929686A1 (en) 2015-05-21
US20160281074A1 (en) 2016-09-29
CN105793419B (zh) 2021-06-01
BR112016011091B1 (pt) 2024-02-06
JP2016537979A (ja) 2016-12-08
JP6745720B2 (ja) 2020-08-26
BR112016011091A2 (pt) 2017-12-05
NZ719338A (en) 2022-03-25
AU2014350104A1 (en) 2016-05-12
US10184120B2 (en) 2019-01-22
MX2016006277A (es) 2017-01-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102302044B1 (ko) 개질된 kz144 엔도리신 서열
KR20160079116A (ko) 개질된 el188 엔도리신 서열
AU2021282524B2 (en) New Antimicrobial Agents Against Staphylococcus Aureus
KR102560651B1 (ko) 엔테로코커스 박테리아에 대한 신규한 항미생물제
CN109072211B (zh) 抗沙门氏菌的抗菌剂
Kim et al. Design and engineering of antimicrobial peptides based on LPcin-YK3, an antimicrobial peptide derivative from bovine milk
EP3068877B1 (en) Modified kz144 endolysin sequence
EP3068878B1 (en) Modified el188 endolysin sequence
NZ719338B2 (en) Modified kz144 endolysin sequence

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant