EA035959B1 - Последовательность модифицированного эндолизина kz144 - Google Patents

Abstract

Заявленное изобретение относится к полипептидам, содержащим аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность с последовательностью SEQ ID NO: 1. Упомянутые полипептиды предпочтительно расщепляют пептидогликан грамотрицательных бактерий, в частности бактерий Pseudomonas и/или Campylobacter. Дополнительно заявленное изобретение относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим упомянутые полипептиды, векторам, включающим упомянутые нуклеиновые кислоты и соответствующим клеткам-хозяинам. И, наконец, заявленное изобретение относится к композициям, содержащим упомянутые полипептиды, нуклеиновые кислоты, векторы и/или клетки-хозяева, согласно заявленному изобретению.

Description

Заявленное изобретение относится к полипептидам, содержащим аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1. Упомянутые полипептиды предпочтительно расщепляют пептидогликан грамотрицательных бактерий, в частности, бактерий Pseudomonas и/или Campylobacter. Дополнительно, заявленное изобретение относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим упомянутые полипептиды, векторам, включающим упомянутые нуклеиновые кислоты и соответствующим клеткам-хозяинам. И, наконец, заявленное изобретение относится к композициям, содержащим упомянутые полипептиды, нуклеиновые кислоты, векторы и/или клетки-хозяины, согласно заявленному изобретению.

Огромный, литический бактериофаг семейства Myoviridae ΦΚΖ (280 334 bp) инфицирует Pseudomonas aeruginosa, важный условно-патогенный нозокомиальный патоген, устойчивый ко многим широко используемым антибиотикам, и, следовательно, являющийся причиной многих проблем внутрибольничной среды. В 2007 г., Briers et al. (Molecular Microbiology (2007) 65(5), 1334-1344) секвенировали геном упомянутого бактериофага и идентифицировали эндолизин KZ144, высоколитическую гидролазу пептидогликана. В WO 2010/149792, был предложен слитый белок, содержащий последовательность упомянутого эндолизина в качестве ферментативного элемента для расщепления клеточной стенки грамотрицательных бактерий.

Помимо общего действия упомянутых эндолизина и слитых белков, оказалось, что по некоторым техническим причинам, эндолизиновый полипептид показывает субоптимальные свойства, в частности, что касается стабильности и процессинга. Таким образом, присутствовала необходимость разработки дополнительного эндолизинового энзима (фермента) с предпочительным улучшением свойств по данным параметрам. Соответственно, задачей заявленного изобретения является обеспечение наличия такого полипептида, который достигается практическим воплощением сущности изобретения, выраженной в прилагаемой формуле.

Далее следует краткое описание прилагаемых фигур, которые предназначены для более подробного иллюстрирования заявленного изобретения. Тем не менее, данные фигуры не носят ограничительного характера относительно сущности заявленного изобретения.

Фиг. 1 представляет SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 KZ144 эндолизин без N-терминального метионина, SEQ ID NO: 3 KZ144 эндолизин без N-терминального метионина и с остатками селенометионина вместо остатков метионина, SEQ ID NO: 4 KZ144 эндолизин с мутацией Е115А без N-терминального метионина и SEQ ID NO: 5 KZ144 эндо лизин.

Фиг. 2 представляет SEQ ID NO: 136 Слитый белок SMAP-29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID NO: 76), модифицированный KZ144 без N-терминального метионина и с C14S и C50S (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID NO: 28) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией; SEQ ID NO: 135).

SEQ ID NO: 137 Слитый белок SMAP-29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID NO: 76), модифицированный KZ144 без N-терминального метионина и с T82I, A206V и S232T (подчеркнуто сплошнопунктирной линией; SEQ ID NO: 29) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией; SEQ ID NO: 135).

SEQ ID NO: 138 Слитый белок SMAP-29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID NO: 76), модифицированный KZ144 без N-терминального метионина и с T82I, A206V, S232T, I122M; и А160Т (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID NO: 30) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией; SEQ ID NO: 135).

SEQ ID NO: 139 Слитый белок SMAP-29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID NO: 76), модифицированный KZ144 без N-терминального метионина и с C14S, C50S, I122M и А160Т (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID NO: 31) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией; SEQ ID NO: 135).

SEQ ID NO: 140 Слитый белок SMAP-29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID NO: 76), модифицированный KZ144 без N-терминального метионина и с C14S, C23S и C50S (подчеркнуто сплошнопунктирной линией; SEQ ID NO: 32) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией; SEQ ID NO: 135).

SEQ ID NO: 141 Слитый белок SMAP-29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID NO: 76), модифицированный KZ144 без N-терминального метионина и с T82I, A206V, S232T, I122M; А160Т, C14S и C50S (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID NO: 33) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией; SEQ ID NO: 135).

SEQ ID NO: 142 Слитый белок SMAP-29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID NO: 76), модифицированный KZ144 без N-терминального метионина и с T82I, A206N, S232T, I122M; А160Т C14S и C50S (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID NO: 49) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией; SEQ ID NO: 135).

SEQ ID NO: 151 Слитый белок SMAP-29 (подчеркнуто сплошной линией; SEQ ID NO: 76), KZ144 без N-терминального метионина (подчеркнуто сплошно-пунктирной линией; SEQ ID NO: 2) и гистидиновой меткой His-tag (подчеркнуто пунктирной линией; SEQ ID NO: 135).

В первом аспекте, заявленное изобретение относится к полипептиду, содержащему аминокислот

- 1 035959 ную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность с последовательностью SEQ ID NO: 1, в которой SEQ ID NO: 1 характеризуется тем, что

X1 может отсутствовать или любая аминокислота, в частности М,

Х14 - любая аминокислота, предпочтительно S, R или N, более предпочтительно S или R,

Х23 - любая аминокислота, предпочтительно S, R или N, более предпочтительно S,

Х50 - любая аминокислота, предпочтительно S, R или N, более предпочтительно S или N,

Х82 - любая аминокислота, предпочтительно Т или I,

X122 - любая аминокислота, предпочтительно I или М,

X149 - любая аминокислота, предпочтительно М или Р,

X154 - любая аминокислота, предпочтительно L или Т,

X160 - любая аминокислота, предпочтительно А или Т,

X167 - любая аминокислота, предпочтительно I или L,

X179 - любая аминокислота, предпочтительно N или Е,

X186 - любая аминокислота, предпочтительно V или Y,

Х206 - любая аминокислота, предпочтительно А, N или V,

Х212 - любая аминокислота, предпочтительно Т или N,

Х224 - любая аминокислота, предпочтительно Р или Q,

Х230 - любая аминокислота, предпочтительно N или Y,

Х232 - любая аминокислота, предпочтительно S или Т;

и в которой полипептид не содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, или SEQ ID NO: 3, или SEQ ID NO: 4.

Аминокислотные белковые остатки могут быть модифицированы, например, ковалентными прикреплениями различных групп, как, например, углеводы и фосфаты. Прочие вещества могут быть более свободно ассоциированы с полипептидными цепочками, как, например, гемы или липиды, приводя к образованию конъюгированных полипептидов, которые также обозначают термином полипептид, в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения. Термин в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, также включает белки. Таким образом, термин полипептид также относится к комплексам из двух или более аминокислотных полимерных цепей. Термин полипептид не включает воплощения полипептидов с вариативными модификациями, часто встречающимися в технике, как, например, биотинилирование, ацетилирование, пегилирование, химические изменения амино-, SH- или карбоксигрупп (например, защитных групп) и т.д. Термин полипептид согласно данному описанию не ограничен специфичной длиной аминокислотной полимерной цепи, но обычно имеет длину примерно более 50 аминокислот, примерно более 100 аминокислот или даже примерно более 150 аминокислот. Обычно, но не обязательно, типичный полипептид согласно заявленному изобретению не превышает примерно 750 аминокислот в длину. Как будет представлено в описании далее по тексту, полипептид согласно заявленному изобретению может также представлять собой слитый белок, а именно, слияние как минимум двух последовательностей аминокислот, не встречающееся в такой комбинации в естественном состоянии в природе.

В данном описании термин % идентичность последовательности, необходимо понимать следующим образом: две сравниваемые последовательности располагают на одной линии для максимальной корреляции между последовательностями. Данное действие может включать вставку гэпов в одной или обеих последовательностях для повышения соосности. Затем можно определить % идентичности по всей длине каждой из сравниваемых последовательностей (т.н. (глобальное) совмещение по всей длине), что в особенности подходит для последовательностей одинаковой или схожей длины, или вдоль более коротких, определенных участков (т.н. локальное совмещение), что более подходит для последовательностей различной длины. В контексте данного описания аминокислотная последовательность, демонстрирующая идентичность последовательности как минимум, например, 95% в сравнении с запрашиваемой (искомой) аминокислотной последовательностью, означает то, что исследуемая аминокислотная последовательность идентична запрашиваемой последовательности, за исключением того, что исследуемая аминокислотная последовательность может включать до пяти аминокислотных сдвигов на каждые 100 аминокислот запрашиваемой аминокислотной последовательности. Иными словами, для получения аминокислотной последовательности с как минимум 95% идентичностью с запрашиваемой аминокислотной последовательностью, в исследуемой последовательности может возникнуть необходимость инсерции, делеции или замены до 5% (5 из 100) аминокислотных остатков другими аминокислотами. Методы сравнения идентичности и гомологичности двух или более последовательностей хорошо известны специалистам в данной области техники. Процент идентичности двух последовательностей можно, например, определить при помощи математического алгоритма. Предпочтительным, но не ограничивающим, примером используемого математического алгоритма может являться алгоритм Карлина - Karlin et al. (1993), PNAS USA, 90:5873-5877. Такой алгоритм интегрирован в семейство программных продуктов BLAST, например, программа BLAST или NBLAST (см. также Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215, 403-410 или Altschul et al. (1997), Nucleic Acids Res, 25:3389-3402), доступные с сайта NCBI по адресу ncbi.nlm.nih.gov) и FASTA (Pearson (1990), Methods Enzymol. 83, 63-98; Pearson and Lipman (1988), Proc.

- 2 035959

Natl. Acad. Sci. U.S.A 85, 2444-2448.). Последовательности, которые идентичны другим, могут быть до определенной степени идентифицированы данными программами. Помимо этого, доступны программы в Wisconsin Sequence Analysis Package, версия 9.1 (Devereux et al., 1984, Nucleic Acids Res., 387-395), например программы BESTFIT и GAP, могут применять для определения % идентичности между двумя полипептидными последовательностями. BESTFIT использует алгоритм локальной гомологичности (Smith and Waterman (1981), J. Mol. Biol. 147, 195-197) и находит самый точный единственный участок схожести между двумя последовательностями. Если в данном описании есть ссылка на аминокислотную последовательность, демонстрирующую определенную степень идентичности последовательности в сравнении со стандартной (эталонной) последовательностью, то упомянутое различие в последовательности имеет место предпочтительно вследствие консервативных аминокислотных замен. Предпочтительно такая последовательность сохраняет активность стандартной последовательности, например, хотя, возможно, на более замедленном уровне. Кроме того, если в данном описании присутствует ссылка на последовательность, демонстрирующую, как минимум в определенном проценте идентичность последовательности, то 100%-ая идентичность последовательности предпочтительно не охвачена.

Консервативные аминокислотные замены, как они трактуются в данном описании, могут произойти в пределах группы аминокислот, которые имеют достаточно схожие физико-химические свойства, с тем, чтобы замена между членами группы сохранила биологическую активность молекулы (см., например, Grantham, R. (1974), Science 185, 862-864). В частности, консервативные аминокислотные замены являются предпочтительно заменами, в которых аминокислоты происходят из того же самого класса аминокислот (например, основные аминокислоты, кислые аминокислоты, полярные аминокислоты, аминокислоты с алифатическими боковыми цепями, аминокислоты с положительно или отрицательно заряженными боковыми цепями, аминокислоты с ароматическими радикалами в боковых цепях, аминокислоты, боковые цепи которых могут вступить в водородные связи, например, боковые цепи, у которых есть гидроксильная функция, и т.д.). Консервативные замены являются в данном случае, например, заменой основного аминокислотного остатка (Lys, Arg, His) другим основным аминокислотным остатком (Lys, Arg, His), заменой алифатического аминокислотного остатка (Gly, Ala, Val, Leu, lie) другим алифатическим аминокислотным остатком, заменой ароматического аминокислотного остатка (Phe, Tyr, Trp) другим ароматическим аминокислотным остатком, заменой треонина серином или лейцина изолейцином. Дополнительные консервативные аминокислотные замены известны специалистам в данной области техники.

Термин деления, в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, преимущественно относится к отсутствию 1, 2, 3, 4, 5 (или даже более 5) непрерывных аминокислотных остатков в производной последовательности в сравнении с соответствующей стартовой последовательностью, либо интра-секвенциально, либо на N- или С-конце.

Термин инсерция, в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, преимущественно относится к дополнительному интра-секвенционному присутствию 1, 2, 3, 4, 5 (или даже более 5) непрерывных аминокислотных остатков в производной последовательности в сравнении с соответствующей стартовой последовательностью.

Термин аддиция, в том смысле, в котором он используются в описании заявленного изобретения, преимущественно к дополнительному присутствию 1, 2, 3, 4, 5 (или даже более 5) непрерывных аминокислотных остатков на N- и/или С-конце производной последовательности в сравнении с соответствующей стартовой последовательностью.

Термин замена, в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к присутствию аминокислотного остатка, расположенного на определенной позиции производной последовательности, отличного от аминокислотного остатка, присутствующего или отсутствующего на соответствующей позиции в стартовой последовательности. Как упомянуто выше, данные замены предпочтительно являются консервативными.

Термин клеточная стенка, используемый в описании заявленного изобретения, относится ко всем компонентам, образующим внешнюю оболочку клетки грамотрицательной бактерии, обеспечивая, таким образом, ее целостность. В частности, термин клеточная стенка в том значении, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к пептидогликану, внешней мембране грамотрицательной бактерии с липополисахаридом, клеточной мембране бактерии, а также к дополнительным слоям на пептидогликане, как, например, капсулы, внешние белковые слои или слаймы.

Термин удлинение аминокислотной последовательности, в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к определенному удлинению аминокислотной последовательности в аминокислотной последовательности полипептида согласно заявленному изобретению. Упомянутая последовательность относится к последовательности катионного пептида, поликатионного пептида, амфипатичного пептида, гидрофобного пептида, суши-пептида и/или антимикробного пептида. Термин не включает обычные метки, такие как His-метки, а именно His5-метки, His6-метки, His7-метки, His8-меткu, His9-метки, His10-метки, His11-метки, His12-метки, His16-метки и His20-метки, Strep-метки, Avi-метки, Мус-метки, Gst-метки, JS-метки, цистеин-метки, FLAG-метки и прочие метки, известные в данной области техники, белки, связывающие тиоредоксин или мальтозу (МСБ). Предпочтительно удли

- 3 035959 нение аминокислотной последовательности в данном описании имеет длину от примерно 6 до примерно 39 аминокислотных остатков.

В описании заявленного изобретения термин катионный пептид преимущественно относится к пептиду с положительно заряженными аминокислотными остатками. Предпочтительно, катионный пептид имеет значение pKa (отрицательный десятичный логарифм константы диссоциации) равное 9,0 или выше. Как правило, по крайней мере, четыре аминокислотных остатка катионного пептида могут быть положительно заряженными, например, лизин или аргинин. Термин положительно заряженные относится к боковым цепочкам аминокислотных остатков, которые имеют чистый положительный заряд при примерно физических условиях. Термин катионный пептид, используемый в заявленном изобретении, также относится к поликатионным пептидам, а также включает катионные пептиды, которые содержат, например, менее 20%, предпочтительно менее 10% положительно заряженных аминокислотных остатков.

Термин поликатионный пептид, используемый в описании заявленного изобретения, предпочтительно относится к пептиду, состоящему из преимущественно положительно заряженных аминокислотных остатков, в частности, остатков лизина и/или аргинина. Пептид состоит из преимущественно положительно заряженных аминокислотных остатков, причем как минимум примерно 20, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или около 100% аминокислотных остатков представляют собой положительно заряженные аминокислотные остатки, в частности остатки лизина и/или аргинина. Те из аминокислотных остатков, которые не являются положительно заряженными, могут представлять собой нейтрально заряженные аминокислотные остатки и/или отрицательно заряженные аминокислотные остатки и/или гидрофобные аминокислотные остатки. Предпочтительно, те из аминокислотных остатков, которые не являются положительно заряженными, могут представлять собой нейтрально заряженные аминокислотные остатки, в частности серин и/или глицин.

Предпочтительными являются антимикробные пептиды. Антимикробный пептид может быть членом суперсемейства РНК-азы А, дефензином, кателицидином, гранулизином, гистатином, псориазином, дермицидином или гепсидином. Антимикробный пептид может встречаться в естественном виде у насекомых, рыб, растений, паукообразных насекомых, позвоночных животных или млекопитающих. Предпочтительно, антимикробный пептид может встречаться в естественном виде у насекомых, рыб, растений, паукообразных насекомых, позвоночных животных или млекопитающих. Предпочтительно антимикробный пептид может встречаться в естественном виде в хрене, тутовом шелкопряде, тарантуле (паук-волк), лягушке, предпочтительно в Xenopuslaevis, лягушках Rana, более предпочтительно в Ranacatesbeiana, жабе, предпочтительно азиатской жабе Bufobufogargarizans, у мух, предпочтительно у дрозофилы, более предпочтительно у малой дрозофилы, melanogaster, в Aedesaegypti, у медоносной пчелы, полевого шмеля, предпочтительно в Bombuspascuorum, у мясной мухи, предпочтительно в серой мясной мухе Sarcophaga, у обыкновенного сокола, в скорпионе, мечехвосте, зубатке, предпочтительно в Parasilurusasotus, корове, овцах, свиньях, у жвачных животных, обезьян и человека. Как используется в данном описании, антимикробный пептид (АМП) может, в частности, быть пептидом, который не является катионным пептидом, поликатионным пептидом, амфипатичным пептидом, суши-пептидом, дефензинами и гидрофобным пептидом, но, тем не менее, показывает антимикробную активность.

Термин суши-пептид, в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к белкам комплементарного контроля с короткими повторениями транскрипции. Суши модуль суши-пептидов функционирует как домен взаимодействия белок-белок в различных белках. Доказано, что пептиды, содержащие Sushi домен, показывают антимикробную активность. Предпочтительно суши-пептиды представляют собой натуральные пептиды.

Термин амфипатичный пептид, в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к пептидам, имеющим как гидрофильные, так и гидрофобные функциональные группы. Предпочтительно в контексте описания заявленного изобретения, термин амфипатичный пептид относится к пептиду, имеющему определенное расположение гидрофильных и гидрофобных групп, например, амфипатичные пептиды могут являться альфа-спиральными, с превалирующими неполярными боковыми цепями вдоль одной стороны спирали и полярными остатками вдоль остальной части поверхности.

Термин гидрофобная группа, в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к химическим группам, как, например, аминокислотные боковые цепи, которые преимущественно водонерастворимы, но растворимы в масляной фазе, причем растворимость в масляной фазе выше, чем растворимость в воде или водной фазе. В воде аминокислоты с гидрофобной боковой цепью взаимодействуют друг с другом для получения неводной среды. Примерами аминокислотных остатков с гидрофобными боковыми цепями являются остатки валина, изолейцина, лейцина, метионина, фенилаланина, триптофана, цистеина, аланина, тирозина и пролина.

Термин гидрофобный пептид, в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к гидрофобному пептиду, предпочтительно состоящему из преимущественно аминокислотных остатков с гидрофобными группами. Такой пептид предпочтительно состоит из преимущественно гидрофобных аминокислотных остатков, т.е., как минимум примерно 20, 30, 40, 50, 60, 70,

- 4 035959

75, 80, 85, 90, 95 или как минимум примерно 100% аминокислотных остатков, являющихся гидрофобными аминокислотными остатками. Те аминокислотные остатки, которые не являются гидрофобными, предпочтительно нейтральные и предпочтительно не гидрофильные.

Термин метка (маркер), в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, относится к аминокислотной последовательности, которая в традиционной области техники слита с или включена в другую аминокислотную последовательность с целью: а) улучшения экспрессии всей аминокислотной последовательности или полипептида, б) содействия очистке всей аминокислотной последовательности или полипептида, в) содействия иммобилизации всей аминокислотной последовательности или полипептида и/или г) содействия детекции (обнаружения) всей аминокислотной последовательности или полипептида. Примерами меток являются His метки, например His5-меткu, His6-метки, His7-меткu, His8-метки, His9-меткu, His10-метки, Hisn-метки, His12-метки, His16-метки и His20- метки, Strep-метки, Avi-метки, Мус-метки, GST-метки, JS-метки, цистеин-метки, FLAG-метки, НА-метки, тиоредоксин- или мальтоза-связывающие белки (МСБ), CAT, GFP, YFP и т.д. Специалистам в данной области техники известно большое количество меток, приемлемых для различных практических применений. Метка, например, может придавать меченому полипептиду свойство связывания с антителом в различных форматах твердофазного иммуноферментного анализа или прочих промышленных применениях.

Термин содержащий (включающий), в том смысле, в котором он используется в описании заявленного изобретения, не ограничивается понятием состоящий из (т.е. исключающий присутствие прочих дополнительных субстанций). Напротив, термин содержащий подразумевает возможное наличие дополнительного вещества. Термин содержащий охватывает преимущественно осуществимые варианты практического воплощения в объеме притязаний заявленного изобретения с формулировкой состоящий из (т.е. исключающий присутствие прочих дополнительных субстанций) и содержащий, но не [исключительно] состоящий из (т.е. требующий присутствия прочих дополнительных субстанций), с предпочтением первому варианту.

Полипептид согласно заявленному изобретению может демонстрировать в аминокислотной последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1 как минимум один (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 или даже все 17) из следующего перечня: Х14 не является С; Х23 не является С; Х50 не является С; Х82 является I; X122 является М; Х149 является Р; X154 является Т, X160 является Т; X167 является L; X179 является F; X180 является Е; X186 является Y; X206 является N или V, Х212 является N; X224 является Q; X230 является Y и/или Х232 является Т. Следует понимать, что номер, указывающий на позицию соответствующего аминокислотного остатка, представляет относительную позицию в последовательности согласно SEQ ID NO: 1, а не всю полную аминокислотную последовательность полипептида согласно заявленному изобретению, которая может быть и более длинной.

Новаторский полипептид демонстрирует, как упомянуто выше, как минимум 90% идентичность последовательности. Такой полипептид может вследствие этого иметь более высокий уровень идентичности последовательности, например, может иметь как минимум примерно 95%, как минимум примерно 96%, как минимум примерно 97%, как минимум примерно 98%, как минимум примерно 98,5%, как минимум примерно 99% (т.е., отклонение менее чем на 3 аминокислоты), как минимум примерно 99,3% (т.е., отклонение менее, чем на 2 аминокислоты), как минимум примерно 99,5%, как минимум примерно 99,6% или даже 100% идентичности последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1.

Новаторский полипептид, содержащий последовательность, разделяющую заданный уровень идентичности последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1 (или ее прочие специфические последовательности, см. далее по тексту) может, например, отклоняться от эталонной последовательности при помощи аддиции, замены, вставки (инсерции) или делеции одного или более аминокислотных остатков и всех возможных их комбинаций. Только лишь для ясности понимания, указано, что данные комбинации относятся к определенным позициям в последовательности. Делеция, сопровождаемая аддицией, или аддиция, сопровождаемая делецией одной или более аминокислот, в той же самой относительной позиции, не является комбинацией аддиции и делеции (или наоборот), но попадает в рамки термина замена. Предпочтительно отклонения в последовательности от последовательности SEQ ID NO: 1 (или ее прочих специфических последовательностей, см. далее по тексту) являются консервативными, т.е. консервативными заменами. Даже боле предпочтительно, отклонение в последовательности ограничивается теми позициями в SEQ ID NO: 1 (или ее прочих специфических последовательностях, см. далее по тексту), которые были определены как не критичные для ферментной активности, т.е. X1, Х14, Х23, Х50, Х82, Х122, Х149; Х160, Х167, Х179, Х180, Х186; Х206; Х212; Х224; Х230 и/или Х232.

Предпочтительно полипептид согласно заявленному изобретению демонстрирует в аминокислотной последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичности последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1 остаток глутаминовой килоты в позиции 115. Как показано в публикации Briers et al. (Molecular Microbiology (2007) 65(5), 1334-1344), мутация Е115А привела к потере активности примерно 70% энзима. Таким образом, поскольку новаторский полипептид, содержащий данную мутацию, не будет приводить к потере активности и может выполнять различные технические функции, несомненно предпочтительно, чтобы данная мутация отсутствовала в удлинении последова

- 5 035959 тельности согласно SEQ ID NO: 1 в пределах новаторского полипептида.

В особенно предпочтительном варианте практического воплощения заявленного изобретения, полипептид согласно заявленному изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 1.

Авторы заявленного изобретения обнаружили, что три остатка цистеина в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5 (KZ144 последовательность эндолизина) не играют существенной роли в ферментной активности. Так, в последовательности согласно SEQ ID NO: 1 (консенсусная последовательность согласно заявленному изобретению) новаторского полипептида (или как минимум 90% идентичности последовательности с ней), в некоторых воплощениях Х14 не является С, Х23 не является С, или Х50 не является С. Комбинации возможны, например, Х14 и Х23 не являются С, Х14 и Х50 не являются С, или Х23 и Х50 не являются С. Аналогично, также возможно, что ни Х14, ни Х23, ни Х50 не являются С. В принципе, данные аминокислотные остатки можно удалить или заменить любыми другими аминокислотами. Примерами таких других аминокислот являются S, R и N. Таким образом, Х14 может, например, являться S, N, или R; более предпочтительно S или R; наиболее предпочтительно R; X23 может, например, являться S, N, или R, более предпочтительно S; и Х50 может, например, являться S, N, или R, более предпочтительно S или N; наиболее предпочтительно N. X14, Х23 и Х50 могут, естественно, иметь различные аминокислотные замены, например Х14 может являться R, а Х23 и Х50 могут являться S; или Х14 и Х23 являются S, a X50 - N; Х14 может являться R, a X23 - S, X50 - N и т.п. Любая другая возможная комбинация также применима в данном изобретении. Предпочтительны консервативные аминокислотные замены. Особенно предпочтительна замена остатком серина остатка цистеина. Таким образом, особенно предпочтительные примеры согласно заявленному изобретению следующие: Х14 является S, X23 является S или Х50 является S. Конечно, возможны и такие варианты: Х14 и Х23 являются S, или Х14 и Х50 являются S, или Х23 и Х50 являются S. X14, Х23 и Х50 также могут быть все S. Отсутствие одного или более, или даже всех этих трех остатков цистеина обладает преимуществом в том, что снижается риск агрегации (например, путем нежелательного образования дисульфидных мостиков) полипептида согласно заявленному изобретению, что делает данный вариант предпочтительным воплощением заявленного изобретения.

Помимо необязательности наличия вышеупомянутых остатков цистеина авторы заявленного изобретения также обнаружили, что прочие различные остатки в последовательности SEQ ID NO: 5 также не являются незаменимыми и, более того, могут быть заменены другими остатками, увеличивая таким образом, например, теплоустойчивость новаторского полипептида. Примерами таких замен являются X82I, Х122М, Х149Р; Х154Т, Х160Т, X167L, X179F, Х180Е, X186Y, X206V, X206N, X212N, X230Y и Х232Т. Данные замены могут быть единичными или в любой комбинации. Типичной комбинацией является сочетание Х122М и Х160Т. Прочими неограничительными примерами комбинаций служат

X82I, X206V плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х160Т, X206V, плюс X232T;X82I, Х122М, Х160Т, X206N, плюс X232T;X82I, Х122М, X206V, плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х149Р, Х160Т, X206V, плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х160Т, Х180Е, X206V, плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х160Т, X186Y, X206V, плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х160Т, X206V, X230Y, плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х149Р, X206V, плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х149Р, Х160Т, X206V, плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х149Р, X206V, плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х149Р, X167L, X206V, плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х149Р, X179F, X206V, плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х149Р, X206V, X212N плюс Х232Т; X82I, Х122М, Х149Р, X206V, X224Q плюс Х232Т;

X82I, Х122М, Х149Р, Х154Т, X206V, плюс Х232Т и т.п. Естественно, данный второй тип аминокислотных модификаций можно комбинировать с вышеупомянутыми заменами цистеина в любой возможной комбинации.

Неограничивающими примерами данных комбинаций являются

X14S, X50S,

Х122М and Х160Т; X14S, X50S, X82I, Х122М, Х160Т, X206V, и Х232Т; X14S, X50S, X82I, Х122М, Х160Т, X206N, и X232T;X14S, X50S, X82I, Х122М, X206V, и Х232Т; X14S, X50S, X82I, Х122М, Х149Р, Х160Т, X206V, и Х232Т; X14S, X50S, X82I, Х122М, Х160Т, Х180Е, X206V, и Х232Т; X14S, X50S, X82I, Х122М,

- 6 035959

X160T, X186Y, X206V, и Х232Т; X14S, X50S, X82I, Х122М, Х160Т, X206V,

X230Y, и Х232Т; X14R, X50S,X82I, Х122М, Х160Т, X206V, и Х232Т; X14S,

X50N,X82I, Х122М, Х160Т, X206V, и Х232Т; X14R, X50S, X82I, Х122М, Х149Р,

X206V, и Х232Т; X14R, X50S, X82I, Х122М, Х149Р, Х160Т, X206V, и Х232Т;

X14R, X50N, X82I, Х122М, Х149Р, X206V, и Х232Т; X14R, X50N, X82I, Х122М,

Х149Р, X167L, X206V, и Х232Т; X14R, X50N, X82I, Х122М, Х149Р, X179F,

X206V, и Х232Т; X14R, X50N, X82I, Х122М, Х149Р, X206V, X212N, и Х232Т;

X14R, X50N, X82I, Х122М, Х149Р, X206V, X224Q и Х232Т; X14R, X50N, X82I, Х122М, Х149Р, Х154Т, X206V, и Х232Т; и т.п.

В SEQ ID NO: 1 (консенсусная последовательность согласно заявленному изобретению) первый аминокислотный остаток обозначен как либо отсутствующий, либо как любая аминокислота, в частности М. Результаты проведенных исследований, авторами заявленного изобретения, и из предшествующего уровня техники (см. WO 2010/149792) показывают, что N-терминальный метионин KZ144 является необязательным. Таким образом, в некоторых воплощениях заявленного изобретения, позиция X1 в последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 1 в новаторском полипептиде не является М. Если полипептид согласно заявленному изобретению демонстрирует, например, на N-терминальном конце последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 1, дополнительные элементы последовательности, таковые могут иметь полезные свойства, например, для повышения эффективности экспрессии в клетке-хозяине, в случае, если метионин в позиции 1 по SEQ ID NO: 1 удален или заменен на другую аминокислоту с целью избежать инициирующего кодона в соответствующей нуклеотидной последовательности, что может потенциально привести к одновременной экспрессии полипептида с отсутствующими дополнительными элементами последовательности, расположенными преимущественно на N-терминальном конце. С другой стороны, если отсутствуют дополнительные элементы последовательности на N-терминальном конце новаторского полипептида, X1, конечно, является предпочтительно метионином (например, для экспрессии). Однако для ферментной активности X1 никогда не требуется.

Последовательности, попадающие в определение SEQ ID NO: 1, которая в особенности была протестирована авторами изобретения, представляют собой, например, SEQ ID NOs: 6-27 (и соответствующие последовательности без N-терминального метионина, SEQ ID NOs: 28-49).

Следует понимать, что все вышеописанное касательно исходной последовательности SEQ ID NO: 1 относится в аналогичной степени и к более специфическим последовательностям. Так, исключительно для ясности понимания упомянуто, что полипептид согласно заявленному изобретению, содержащий последовательность, демонстрирующую как минимум 90% идентичность последовательности с исходной последовательностью SEQ ID NO: 1, как описано выше, может в предпочтительных вариантах практического воплощения несомненно демонстрировать аналогичным способом как минимум 90% идентичность последовательности с более специфическими последовательностями SEQ ID NO: 1, изложенными или даже раскрытыми в данном описании. Таким образом, в предпочтительных воплощениях заявленного изобретения полипептид согласно заявленному изобретению может, например, содержать последовательность, демонстрирующую как минимум 90% идентичность последовательности с последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 6-49, причем полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 3, ни SEQ ID NO: 4.

Полипептид согласно заявленному изобретению может содержать помимо энзимной аминокислотной последовательности, например, последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1 (или другими последовательностями, попадающими в данное определение), дополнительные удлинения аминокислотной последовательности, например, аналогичные раскрытым в WO 2010/149792. Полипептид согласно заявленному изобретению может, например, дополнительно содержать как минимум одно удлинение аминокислотной последовательности, выбираемое из группы, состоящей из амфипатичного пептида, катионного пептида, поликатионного пептида, гидрофобного пептида или натурального антимикробного пептида, как, например, суши-пептид и дефензин. Такие дополнительные удлинения аминокислотной последовательности могут улучшать антимикробные войства новаторского полипептида. В некоторых воплощениях новаторский полипептид может содержать как минимум два различных удлинения аминокислотной последовательности, выбираемое из группы: амфипатичный пептид, катионный пептид, поликатионный пептид, гидрофобный пептид или натуральный антимикробный пептид, как, например, суши-пептид и дефензин.

Данные одно или более дополнительные удлинения аминокислотной последовательности могут присутствовать на N- или С-концах последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1. Они могут, например, присутствовать на N- или С-концах новаторского полипептида. Предпочтительными примерами таких дополнительных удлинений аминокислотной последовательности (без ограничительного признака) являются последовательности KRK и SEQ ID NOs: 50-120, как описано подробно далее по тексту. Полипептид со

- 7 035959 гласно заявленному изобретению может содержать как минимум одно дополнительное удлинение аминокислотной последовательности, выбираемое из данной группы. Для дополнительной информации, в особенности, что касается общих и специфических характеристик возможных дополнительных удлинений аминокислотной последовательности, см. также, например, WO 2010/023207, WO 2010/149792, WO 2010/149795 и WO 2012/085259.

Примеры удлинений катионной и поликатионной аминокислотных последовательностей приведены в нижеследующей таблице.

Таблица 1

удлинение аминокислотной последовательности	длина	SEQ ID NO:
KRKKRK	6	SEQ ГО NO:50
KRXKR	5	SEQIDNO:51
KRSKR	5	SEQ ID NO:52
KRGSG	5	SEQ ID NO:53
KRKKRKKRK	9	SEQ ID NO:54
RRRRRRRRR	9	SEQ ID NO:55
КККККККК	8	SEQ ID NO:56
KRKKRKKRKK	10	SEQ ID NO:57
KRKKRKKRKKRK	12	SEQ ID NO:58
KRKKRKKRKKRKKR	14	SEQ ID NO:59
КККККККККККККККК	16	SEQ ID NO:60
KRKKRKKRKKRKKRKKRK	18	SEQIDNO:61
KRKKRKKRKKRKKRKKRKK	19	SEQ ID NO:62
RRRRRRRRRRRRRRRRRRR	19	SEQ ID NO:63
ККККККККККККККККККК	19	SEQ ID NO:64
KRKKRKKRKRSKRKKRKKRK	20	SEQ ID NO:65
KRKKRKKRKRSKRKKRKKRKK	21	SEQ ID NO:66
KRKKRKKRKKRKKRKKRKKRK	21	SEQ ID NO:67
KRKKRKKRKRGSGKRKKRKKRK	22	SEQ ID NO:68
KRKKRKKRKRGSGSGKRKKRKKRK	24	SEQ ID NO:69
KRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKK	25	SEQ ID NO:70
KRKKRKKRKRSKRKKRKKRKRSKRKKRKKRK	31	SEQIDNO:71
KRKKRKKRKRGSGSGKRKKRKKRKGSGSGKRKKRKK RK	38	SEQ ID NO:72
KRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRKKRK KRK	39	SEQ ID NO:73
KRKKRKKRKRSKRKKRKKRKRSKRKKRKKRKRSKRK KRKKRK	42	SEQ ID NO:74

Примеры антимикробных аминокислотных последовательностей, которые могут применять в практических воплощениях заявленного изобретения, приведены в нижеследующей табл. 2.

- 8 035959

Таблица 2

Пептид	Последовательность	SEQ ID NO
LL-37	LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRT ES	SEQ ГО NO:75
SMAP-29	RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG	SEQ ID NO:76
Индолицидин	ILPWKWPWWPWRR	SEQ ID NO:77
Протегрин	RGGRLCYCRRRFCVCVGR	SEQ ID NO:78
Цекропин Р1	SWLSKTAKKLENSAKKRISEGIAIAIQGGPR	SEQ ID NO:79
Магаинин	GIGKFLHSAKKFGKAFVGEIMNS	SEQ ID NO:80
Плейроцидин	GWGSFFKKAAHVGKHVGKAALTHYL	SEQIDNO:81
Цекропин А (A.aegypti)	GGLKKLGKKLEGAGKRVFNAAEKALPVVAGAK ALRK	SEQ ID NO:82
Цекропин А (D. melanogaster)	GWLKKIGKKIERVGQHTRDATIQGLGIPQQAANV AATARG	SEQ ID NO:83
Буфорин II	TRS SRAGLQFPVGRVHRLLRK	SEQ ID NO:84
Саркотоксин IA	GWLKKIGKKIERVGQHTRDATIQGLGIAQQAAN VAATAR	SEQ ID NO:85
Апидаэцин	ANRPVYIPPPRPPHPRL	SEQ ID NO:86
Аскафин 5	GIKDWIKGAAKKLIKTVASHIANQ	SEQ ID NO:87
Нигроцин 2	GLLSKVLGVGKKVLCGVSGLVC	SEQIDNO:88
Псевдин 1	GLNTLKKVFQGLHEAIKLINNHVQ	SEQ ID NO:89
Раналексин	FLGGLIVPAMICAVTKKC	SEQ ID NO:90
Мелттин	GIGAVLKVLTTGLPALISWIKRKRQQ	SEQIDNO:91
Ликотоксин 1	IWLTALKFLGKHAAKKLAKQQLSKL	SEQ ID NO: 92
Паразин 1	KGRGKQGGKVRAKAKTRSS	SEQ ID NO: 93
Буфорин I	AGRGKQGGKVRAKAKTRSSRAGLQFPVGRVHR LLRKGNY	SEQ ID NO: 94
Дермасептин 1	ALWKTMLKKLGTMALHAGKAALGAAADTISQG TQ	SEQ ID NO: 95
Бактенецин 1	RLCRIVVIRVCR	SEQ ID NO: 96
Танатин	GSKKPVPIIYCNRRTGKCQRM	SEQ ID NO: 97
Бревинин 1Т	VNPIILGVLPKVCLITKKC	SEQ ID NO: 98
Ранатеврин 1	SMLSVLKNLGKVGLGFVACKINIKQC	SEQ ID NO: 99

- 9 035959

Эскулетин 1	GIFSKLGRKKIKNLLISGLKNVGKEVGMDVVRTG IKIAGCKIKGEC	SEQ ID NO: 100
Тахилепсин	RWCFRVCYRGICYRKCR	SEQ ID NO: 101
Андроктонин	RSVCRQIKICRRRGGCYYKCTNRPY	SEQ ID NO: 102
Альфа-дефензин	DCYCRIPACIAGERRYGTCIYQGRLWAFCC	SEQ ID NO: 103
Бета-дефензин	NPVSCVRNKGICVPIRCPGSMKQIGTCVGRAVKC CRKK	SEQ ID NO: 104
Тета-дефензин	GFCRCLCRRGVCRCICTR	SEQ ID NO: 105
Дефензин (сапецин А)	ATCDLLSGTGINHSACAAHCLLRGNRGGYCNGK AVCVCRN	SEQ ID NO: 106
Тионин (crambin)	TTCCPSIVARSNFNVCRIPGTPEAICATYTGCIIIPG ATCPGDYAN	SEQ ID NO: 107
Дефензин из хрена	QKLCQRPSGTWSGVCGNNNACKNQCIRLEKARH GSCNYVFPAHCICYFPC	SEQ ID NO: 108
Дрозомицин	DCLSGRYKGPCAVWDNETCRRVCKEEGRSSGHC SPSLKCWCEGC	SEQ ID NO: 109
Г епсидин	DTHFPICIFCCGCCHRSKCGMCCKT	SEQ ID NO: 110
Вас 5	RFRPPIRRPPIRPPFYPPFRPPIRPPIFPPIRPPFRPPL GRPFP	SEQ ID NO: 111
PR-39	RRRPRPPYLPRPRPPPFFPPRLPPRIPPGFPPRFPPR FP	SEQ ID NO: 112
Пиррокорицин	VDKGSYLPRPTPPRPIYNRN	SEQ ID NO: 113
Гистатин 5	DSHAKRHHGYKRKFHEKHHSHRGY	SEQ ID NO: 114

Как минимум одним дополнительным удлинением аминокислотной последовательности может являться суши-пептид, описанный Ding JL, Li P, Но BCell Mol Life Sci. 2008 Apr;65(7-8):1202-19.The Sushi peptides: structural characterization and mode of action against Gram-negative bacteria. Особенно предпочтителен суши 1 пептид согласно SEQ ID NO: 115. Остальными предпочтительными суши-пептидами являются суши-пептиды S1 и S3 и их мультиплеты; FASEB J. 2000 Sep; 14(12):1801-13.

Предпочтительными гидрофобными пептидами являются Walmaghl с аминокислотной последовательностью согласно SEQ ID NO: 116 и гидрофобный пептид с аминокислотной последовательностью согласно Phe-Phe-Val-Ala-Pro (SEQ ID NO: 117).

Предпочтительными амфипатичными пептидами являются а4-спираль Т4 лизоцима согласно SEQ ID NO: 118 и WLBU2-βарианту, имеющие аминокислотную последовательность согласно SEQ ID NO: 119 и Walmagh 2 согласно SEQ ID NO: 120.

Как упомянуто выше, полипептид согласно заявленному изобретению может содержать как минимум одно дополнительное удлинение аминокислотной последовательности, выбираемое из группы, состоящей из: KRK и SEQ ID NOs: 50-120. Соответствующими примерами являются, например, полипептиды, содержащие последовательность, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 121-127 (и соответствующих последовательностей без N-терминального метионина, SEQ ID NOs: 128-134.

Полипептид согласно заявленному изобретению содержит аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1, причем полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 3, ни SEQ ID NO: 4. Таким образом, полипептид согласно заявленному изобретению может содержать аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум 91,5% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 121 - 134, причем полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 3, ни SEQ ID NO: 4.

Такой новаторский полипептид может, например, содержать последовательность, демонстрирующую более высокий уровень идентичности последовательности по сравнению с 91,5% аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 121-134, например, может демонстрировать как минимум примерно 95%, как минимум примерно 96%, как минимум примерно 97%, как минимум примерно 98%, как минимум примерно 98,5%, как минимум примерно 98,75%, как минимум примерно

- 10 035959

99% (например, отклонение менее 3 аминокислот), как минимум примерно 99,5% (например, отклонение менее 2 аминокислот), как минимум примерно 99,6% или даже 100% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 121-134.

В добавление, и вне зависимости от присутствия в новаторском полипептиде одного или более дополнительных удлинений аминокислотных последовательностей, упомянутых выше, полипептид может дополнительно содержать одну или более маркерных последовательностей. Такие маркерные последовательности могут присутствовать на N-терминальном или С-терминальном конце последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1. Они могут, например, быть расположены на N-терминальном или С-терминальном конце новаторского полипептида. В предпочтительном воплощении, одна или более маркерных последовательностей расположены на С-терминальном конце аминокислотной последовательности, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1.

Одна или более маркерных последовательностей могут, например, быть сцеплены с аминокислотной последовательностью, демонстрирующей как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1 напрямую или через короткий линкер из 1 до 10 аминокислотных остатков, предпочтительно из 1 до 5 аминокислотных остатков, более предпочтительно из 1 до 2 аминокислот. Линкерные последовательности предпочтительно являются лабильными (шарнирными) последовательностями, содержащими один или более остатков глицина. В технике известны многочисленные примеры меток, некоторые из которых были уже упомянуты выше. В контексте заявленного изобретения, особенно предпочтительной маркерной последовательностью является His-метка, предпочтительно His-метка согласно SEQ ID NO: 135.

Длина полипептида согласно заявленному изобретению, в принципе, не ограничена, но предпочтительно не является избыточно большой. Предпочтительно, полипептид согласно заявленному изобретению имеет общую длину, не превышающую примерно 320 аминокислот, предпочтительно не превышающую примерно 310 аминокислот.

Специфические примеры полипептидов согласно заявленному изобретению можно выбрать из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 136-142 (и соответствующих последовательностей без Nтерминального метионина, SEQ ID NOs: 143-149).

Полипептид согласно заявленному изобретению содержит аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 1, причем полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 3, ни SEQ ID NO: 4. Таким образом, полипептид согласно заявленному изобретению может содержать аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 91,5% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 136-149, причем полипептид не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 3, ни SEQ ID NO: 4.

Такой новаторский полипептид может, например, содержать последовательность, демонстрирующую более высокий уровень идентичности последовательности с 91,5% идентичности аминокислотной последовательности, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 136-149, например может демонстрировать как минимум примерно 95%, как минимум примерно 96%, как минимум примерно 97%, как минимум примерно 98%, как минимум примерно 98,5%, как минимум примерно 99%, как минимум примерно 99,25% (например, отклонение менее 3 аминокислот), как минимум примерно 99,5% (например, отклонение менее 2 аминокислот), как минимум примерно 99,6 или даже 100% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых SEQ ID NOs: 136-149. Отклонения от SEQ ID NOs: 136-149 могут, в частности, происходить в двух последовательностях, связывающих компоненты SMAP29 пептида, модифицированного KZ144 эндолизина и His-метки.

Полипептид согласно заявленному изобретению предпочтительно обладает способностью расщеплять пептидогликан грамотрицательных бактерий, в частности, бактерий Pseudomonas и/или Campylobacter. В частности, полипептид согласно заявленному изобретению предпочтительно обладает способностью расщеплять пептидогликан Pseudomonasaeroginosa, в частности Pseudomonasaeroginosa ПАО1, Campylobacterjejuni и/или Campylobacter coli.

Пептидогликан-расщепляющую активность на грамотрицательных бактериях можно измерить при помощи хорошо известных в данной области техники анализов, например, при помощи муралитических тестов, в которых происходит проникновение через или удаление внешней мембраны грамотрицательных бактерий (например, с хлороформом) для обеспечения доступа предполагаемого энзима (фермента) к пептидогликанному слою. Если энзим активен, расщепление пептидогликанного слоя приведет к снижению опалесцентности (мутности), которое можно измерить фотометрией (см., например, Briers et al., J. Biochem. Biophys Methods 70: 531-533, (2007).

Дополнительно заявленное изобретение относится к нуклеиновой кислоте, кодирующей полипептид согласно заявленному изобретению. Специалист в данной области техники, опираясь на принцип вырожденности генетического кода, будет иметь представление, каким способом можно генерировать

- 11 035959 данную нуклеиновую кислоту.

Дополнительно заявленное изобретение относится к вектору, например экспрессионному или клонирующему векторам, включающему нуклеиновую кислоту согласно заявленному изобретению.

Дополнительно заявленное изобретение относится к клетке-хозяину, содержащей полипептид согласно заявленному изобретению, нуклеиновую кислоту согласно заявленному изобретению и/или вектор согласно заявленному изобретению.

В дальнейшем аспекте заявленное изобретение относится к композиции, содержащей полипептид согласно заявленному изобретению, нуклеиновую кислоту согласно заявленному изобретению, вектор согласно заявленному изобретению и/или клетку-хозяин согласно заявленному изобретению. Предпочтительно упомянутая композиция представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую фармацевтически приемлемые разбавитель, эксципиент или носитель.

Как описано выше, полипептид согласно заявленному изобретению содержит аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1, отличающийся тем, что не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 3, ни SEQ ID NO: 4. Тем не менее, в дополнительном аспекте, и с некоторым отличием от вышеупомянутых полипептидов согласно заявленному изобретению, данное изобретение также дополнительно относится к полипептиду, содержащему аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум примерно 90% идентичность последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 1, отличающемуся тем, что не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 152, ни SEQ ID NO: 4. Дополнительно, упомянутый полипептид в данном аспекте также не содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. Все воплощения и комбинации полипептида согласно заявленному изобретению, раскрытые в данных описании, примерах или в формуле, и соответствующие нуклеиновые кислоты, векторы, клетки-хозяины и композиции, также специально рассчитаны в рамках данного дополнительного аспекта.

Примеры

Далее по тексту представлены специфические примеры, иллюстрирующие различные воплощения и аспекты заявленного изобретения. Тем не менее, не следует рассматривать данные воплощения как ограничивающие объем заявленного изобретения. Наоборот, различные модификации заявленного изобретения, в дополнение к приведенным в данном описании, сопроводительных чертежах и примерах, будут, как станет очевидно специалистам в данной области техники, находиться в границах объема прилагаемой формулы изобретения.

Пример 1. Идентификация мутаций, стабилизирующих KZ144 эндолизин

Для определения предпочтительных сайтов модификации в эндолизине KZ144 (SEQ ID NO: 5), авторы изобретения на первом этапе применили целевую дестабилизацию белка-мишени. С данной целью генерировали укороченный на N-терминальном конце KZ144 (SEQ ID NO: 150) и в его последовательность ввели мутации путем случайного мутагенеза (ПЦР сниженной точности), с последующим слитием и селекцией с использованием хлорамфеникольного теста (САТ-проба).

Температуру плавления белка предпочтительных образцов определили путем кругового дихроизма (КД). Изменения эллиптичности белков зарегистрировали при 220 нм как функцию температуры с использованием спектрометра Jasco J-815 CD и обработали в простой сигмовидной складчатой модели при помощи аналитического программного обеспечения JASCO. Температуры плавления белка (Tmelt) определили как среднюю точку конформационного перехода с уничтожением складок. Спектры зарегистрировали при концентрации белков 5.0-5.8 мкм при скорости нагрева 1°С/мин и времени инкубации 3 с в объеме 410 мкл в 1 мм свеопоглощающей кварцевой кюветы Hellma. Измерения провели в 50 мМ буфера NaPh buffer, 300 мМ NaCl при рН 7.4, 7.0, 6.2 и 5.7.

Некоторые из определенных самых предпочтительных образцов приведены в нижеследующей таблице.

Таблица 3

АА- Замена*	Растворимость	Тм	АТм
-	+	53,5	0
S232T	+	54,1	+ 0,6
A206V	+	55,8	+ 2,3
T82I-	+	54,3	+ 0,8
I122M А160Т	+	56,5	+ 3,0

^Необходимо отметить, что указанная позиция относится к позиции в последовательности KZ144, SEQ ID NO: 5, а не к позиции в SEQ ID NO: 150.

Таким образом, идентифицированные стабилизирующие мутации могут вводить в прочие последо

- 12 035959 вательности, например, в качестве полнодлинных последовательностей, также повышающих стабильность.

В последующем этапе в некоторые конструкты ввели серин для замены остатков цистеина С14, С23 и/или С50 (позиция, обозначенная относительно SEQ ID NO: 5; консервативные замены). Остальные опробованные заместители в указанных позициях - N и R.

На следующем этапе экспериментов, протестировали различные комбинации мутаций в контексте полнодлинного эндолизина KZ144 (SEQ ID NO: 5):

Таблица 4

АА-Замена		# мутаций	0 Тм	А Тм*
C14S C50S T82I A206V S232T	I122M	А160Т	7	57,6	+4,4
C14S C50S T82I I122M A206V N230Y S232T	А160Т	8	57,8	+4,6
C14S C50S T82I I122M М180Е A206V S232T	А160Т	8	57,7	+4,5
C14S C50S T82I I122M А160Т A206V S232T	М149Р	8	58,9	+5,7
C14S C50S T82I I122M V186Y A206V S232T	А160Т	8	56,7	+3,5
C14R C50S T82I A206V S232T	I122M	А160Т	7	59,9	+6,7
C14S C50S T82I A206V S232T	I122M	Т160А	7	58,3	+5,1
C14S C50N T82I A206V S232T	I122M	А160Т	7	58,5	+5,3
C14R C50S T82I I122M А160Т A206V S232T	М149Р	8	61	+7,9
C14R C50S T82I S232T М149Р	I122M	A206V	7	61,7	+8,5
C14R C50N T82I A206V S232T	I122M	М149Р	7	62,8	+9,6
C14R C50N T82I A206V S232T	I122M	М149Р	8	63,4	+10,2
C14R C50N T82I A206V S232T	I122M	М149Р	8	62,8	+9,6
C14R C50N T82I A206V S232T	I122M	М149Р	8	61,5	+8,3
C14R C50N T82I A206V S232T	I122M	М149Р	8	60,9	+7,7

*ΔΤΜ в сравнении с SEQ ID NO: 5

Пример 2. Температура плавления некоторых полипептидов согласно заявленному изобретению и минимальная ингибирующая концентрация выбранных бактериальных штаммов

Для построения полипептидов согласно SEQ ID NO 151 (без мутаций) и SEQ ID NOs: 136 -142 использовали литический фермент (gp144) фага KZ Pseudomonas aeruginosa. В качестве сливающейся с пептидом клетки, выбрали SMAP-29. SMAP-29 был обнаружен в лейкоцитах овец и состоит из 29 аминокислот (RGLRRLGRKIAHGVKKYGPTVLRIIRIAG; молекулярная масса: 3.3 КДа, SEQ ID NO: 76). Построен из максимум двух ЛПС-связывающих сайтов, которые соединены центральным шарниром.

Клонирование

Построили молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие соответствующие пептид и эндолизин при помощи сайта рестрикции aNdeI (5'-CAT ATG-3') на 5'-конце молекулы нуклеиновой кислоты и сайта рестрикции XhoI (5'-СТС GAG-3') на 3'-конце молекулы нуклеиновой кислоты. Пептид и эндолизин соединены посредством BamHI (5'-GGA ТСС-3').

- 13 035959

Построили слитые белки путем сшивки как минимум двух последовательностей нуклеиновой кислоты с использованием стандартных технологий клонирования, описанных, например, Sambrook et al. 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Для этого молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую пептидное удлинение, частично расщепили, используя соответствующие рестриктазы NdeI и BamHI. После этого расщепленные нуклеиновые кислоты, кодирующие пептидное удлинение, лигандировали в экспрессионном векторе рЕТ21 b (Novagen, Darmstadt, Germany), который перед этим также частично расщепили, используя соответствующие рестриктазы NdeI и BamHI. Затем, молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую эндолизин, частично расщепили, используя соответствующие рестриктазы BamHI и XhoI, с тем, чтобы лигандировать эндолизин в экспрессионном векторе pET21b (Novagen, Darmstadt, Germany), который перед этим также частично расщепили, используя соответствующие рестриктазы BamHI и XhoI.

Последовательность слития пептид-эндолизин контролировали при помощи секвенирования ДНК и корректные клоны трансформировали в E.coli BL21(DE3) pLysS (Novagen, Darmstadt, Germany) для экспрессии белка.

Очистка

Рекомбинантную экспрессию слитых белков осуществили в клетках Е. coli BL21(DE3) pLysS (Novagen, Darmstadt, Germany). Клетки выращивали до достижения оптической плотности OD_600hm=0.5-0.8. Затем индуцировали экспрессию слитого белка с 0.5 мМ ИПТГ (изопропилтиогалактозида) и провели экспрессию при 37°С в течение 4 ч.

Клетки собрали центрифугированием в течение 20 мин при 6000 г и разрушили ультразвуком на льду. Растворимую и нерастворимую фракции сырого экстракта E.coli сепарировали центрифугированием (Sorvall, SS34, 30 мин, 15000 об./мин). Все белки подвергли очистке при помощи Ni²⁺ аффинной хроматографии (Akta FPLC, GE Healthcare), с использованием С-концевой His₆-метки, кодированной вектором рЕТ21Ь. Образцы микрофильтрировали (0.2 мкм) перед каждым этапом хроматографии.

Ni²⁺ аффинную хроматографию провели в 4 последующих этапа, все при комнатной температуре:

1) Эквилибрация Histrap FF 5 мл колонки (GE Healthcare) с максимум 10 объемами колонки отмывочного буфера (20 мМ имидазола, 1 мМ NaCl и 20 мМ ГЭПЭС при pH 7,4) при скорости потока 3-5 мл/мин.

2) Загрузка всего лизата (с требуемым белком-мишенью) в Histrap FF 5 мл колонку при скорости потока 3-5 мл/мин.

3) Отмывка колонки с максимум 10 объемами колонки отмывочного буфера для удаления несвязанного белка.

4) Элюирование связанного белка-мишени из колонки с увеличивающимся градиентным режимом с 15 объемами колонки элюирующего буфера (500 мМ имидазола, 500 мМ NaCl и 20 мМ ГЭПЭС при pH 7,4) до 100% при скорости потока 3-5 мл/мин.

Хроматографию гидрофобного взаимодействия (ХГВ) осуществили в 5 последовательных этапов, все при комнатной температуре:

1) Эквилибрация HiScreen Phenyl HP 5 мл колонки (GE Healthcare) с максимум 5 объемами колонки отмывочного буфера (20 мМ сульфата аммония, 1 мМ NaCl и 20 мМ ГЭПЭС при pH 7,4) при скорости потока 1-2 мл/мин.

2) Приготовление образца (5 мг на 1 мл колонки белкового пула из этапа аффинной очистки Ni²⁺) начинают с первого приготовления концентрации белка 0.5 мг/мл путем добавления заранее определенного объема отмывочного буфера из этапа аффинной очистки Ni²⁺. Затем регулируют концентраию сульфата аммония путем поступенчатого добавления заранее определенного объема стокового раствора сульфата аммония (3.8 М) до окончательной концентрации примерно 850 мМ.

3) Загрузка подготовленного образца в колонку HiScreen Phenyl HP 5 мл при скорости потока 1-2 мл/мин.

4) Отмывка колонки с 5 объемами колонки отмывочного буфера для удаления несвязанного белка.

5) Элюирование белка-мишени из колонки с 40% элюирующего буфера (500 мМ NaCl и 20 мМ ГЭПЭС при pH 7,4) при скорости потока 1-2 мл/мин. Белок-мишень вымывается в размытом максимуме на данном этапе.

Замена буфера путем диализа мембраны:

Элюирующий пул этапа гидрофобной интерактивной хроматографии диализировали (мембрана: регенерированная целлюлоза с MWCO: 6000-8000D) в буер хранения (500 мМ NaCl и 20 мМ ГЭПЭС; pH7.4) при 4°С. Фактор диализа 160-250.

Характеризация

Температуры плавления, характеризующие стабильность полипептидов согласно SEQ ID NOs: 136142 при повышенных температурах, определили при помощи спектроскопии кругового дихроизма (CD), как упомянуто выше.

Активность полипептидов согласно SEQ ID NOs: 136 -142 определили на Р. aeroginasa, С. jejuni и С. coli и характеризовали, как определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК) на соответствующих штаммах.

- 14 035959

Определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК)

По аналогии с определением минимальной ингибирующей концентрации (МИК) для антибиотиков, МИК определили микроразбавлением. Тест на бактериях Campylobacter проводили полностью в микроаэрофильных условиях и при 42°С.

Схема проведения эксперимента:

Соответствующую, полученную за ночь, культуру разбавили 1:10. Ps. aeruginosa инкубировали при 37°С до OD6₀₀=0.6 (примерно 10 клеток/мл). Campylobacter sp. инкубировали микроаэрофильно до OD₆₀₀=0.08 (примерно 2,5х10⁸ клеток/мл). Бактериальную культуру разбавили до концентрации от 2х10⁵ до 8х10⁵ КОЕ на мл в среде Мюллера-Хинтона (со стандартизированным содержанием катионов) и разделили на требуемое количество трубок.

Целевой полипептид добавили в различных концентрациях (определена как конечная концентрация мкг/мл в среде Мюллера-Хинтона). В случае Ps. aeruginosa, добавили ЭДТК к конечной концентрации 2 мМ. В случае Campylobacter sp, ЭДТК не использовали.

Смесь инкубировали на ночь при 37°С для Ps. Aeruginosa и при 42°С для Campylobacter. Бактериальный рост был визуально определен по наличию опалесцентности (в сравнении с отрицательным контролем). МИК определили как концентрацию в трубке без бактериального роста. Положительный (без целевого пептида и/или ЭДТК) и отрицательный контроль (среда Мюллера-Хинтона без бактерий) включили в эксперимент.

Результаты приведены в нижеследующей таблице:

Таблица 5

ИМЦ на	ИМЦ на	ИМЦ на
ПОЛ1р	Camp, jejuni	Camp, coli
S82	S371	S344
[мкг/мл]	[мкг/мл]	[мкг/мл]

SEQ ID NO:	Мутации*	Концентрация [УФ]	Т [°C]	500 мкм ЭДТК	без ЭДТК	без ЭДТК
151		5,5 мкм	44,14	5	5	4
136	C14S C50S	5,2 мкм	49,07	5	5	4
137	T82I A206V S232T	5,4 мкм	45,4	5	4	3
138	T82I	5,5 мкм	47,57	7	7	4

- 15 035959

	A206V S232T I122M А160Т
139	C14S C5OS I122M А160Т	5,6 мкм	51,42	3-4	3	4
140	C14S C23S C5OS	5,3 мкм	50,31	5	3-4	2
141	T82I A206V S232T I122M А160Т C14S C5OS	5,9 мкм	51,68	3-6	5-7	5
142	T82I A206N S232T I122M А160Т C14S C5OS	5,3 мкм	50,64	3	5-7	5

Температуры плавления измерили CD, буфер: 50 мМ NaPh, pH 7.45 300 мМ NaCl

Необходимо отметить еще раз, что указанная позиция относится к позиции в последовательности KZ144, SEQ ID NO: 5, а не к позиции SEQ ID NO:, обозначенной в таблице.

Проведенные мутации не только повысили температуру плавления полипептидов SEQ ID NOs: 136142 в сравнении с полипептидом SEQ ID NO: 151, но также не повлияли на активность полипептида, даже в случае семикратной мутации SEQ ID NO: 141.

Пример 3. Теплоустойчивость полипептида согласно SEQ ID NO: 139 и SEQ ID NO: 141

Для демонстрации того, что повышенная температура плавления на самом деле не влияет на теплоустойчивость соответствующих мутированных полипептидов, изобретатели в качестве примера подвергли мутированные полипептиды SEQ ID NO: 139 и SEQ ID NO: 141 действию температур, заведомо превышающих температуру плавления нативного немутированного референтного полипептида (SEQ ID NO: 151).

С данной целью, оба полипептида подвергли длительному непосредственному нагреву при температурах 51 и 52°С. После этого определили активность на штамме Pseudomonas aeruginosa в качестве модельной системы в адаптированных условиях.

Результаты приведены в нижеследующей таблице.

Таблица 6

SEQ ГО NO:	Мутации	Концентрация [УФ]	Нагревание	ИМЦ на ПОЛ1р S82 [мкг/мл] 500 мкм ЭДТК
139	C14S		0	3-4

- 16 035959

	C50S I122M А160Т	5,3 мкм	1мин 5 ГС	12,5
2мин 5 ГС	15
2мин 52°С	17,6
141	T82I A206V S232T I122M А160Т C14S C50S		0	3-6
5,45 мкм	1мин 5 ГС	8
2мин 5 ГС	10
2мин 52°С	12,5

Белковый буфер: 50 мМ NaPh, pH 7.45 300 мМ NaCl

Как и ранее упомянуто, указанная позиция относится к позиции в пределах участка последовательности, соответствующего последовательности KZ144, SEQ ID NO: 5, а не к позиции в пределах полнодлинной последовательности SEQ ID NO: обозначенной в таблице.

Список последовательностей <110> ЛИСАНДО АГ <120> Последовательность модифицированного эндолизина KZ144 <130> LYS-021 PCT 1 <150> РСТ/ЕР2013/073869 <151> 2013-11-14 <160> 152 <170> версия для патентования 3.5 <210> 1 <211> 260 <212> PRT <213> искусственный <220>

<223> консенсусная последовательность <220>

<221> прочий_признак <222> (1)..(1)

<223> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту или отсутствовать;
	в частности метионин
<220>
<221>	прочий_признак
<222>	(14)..(14)
<223>	(1)..(1)
<223>	Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности

серин, аргинин или аспаргин

<220> <221> <222> <223>	прочий_признак (23)..(23) Хаа может представлять собой серин, аргинин или аспаргин	любую природную	аминокислоту,	в	частности
<220> <221> <222>	прочий_признак (50)..(50)
<223> <220> <221> <222>	Хаа может представлять собой серин, аргинин или аспаргин прочий_признак (82)..(82)	любую	природную	аминокислоту,	в	частности
<223> <220> <221> <222>	Хаа может представлять треонин или изолейцин прочий_признак (122)..(122)	собой	любую	природную	аминокислоту,	в	частности
<223> <220> <221> <222>	Хаа может представлять изолейцин или метионин прочий_признак (149)..(149)	собой	любую	природную	аминокислоту,	в	частности
<223>	Хаа может представлять метионин или пролин	собой	любую	природную	аминокислоту,	в	частности

- 17 035959 <220>

<221> прочий_признак <222> (154)..(154) <22 3> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности лейцин или треонин <220>

<221> прочий_признак <222> (160)..(160) <22 3> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности аланин или треонин <220>

<221> прочий_признак <222> (167)..(167) <223> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности изолейцин или лейцин <220>

<221> прочий_признак <222> (179)..(179) <223> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности аспарагин или фенилаланин <220>

<221> прочий_признак <222> (180)..(180) <223> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности метионин или глутаминовую кислоту <220>

<221> прочий_признак <222> (186)..(186) <223> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности валин или тирозин <220>

<221> прочий_признак <222> (206)..(206) <223> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности аланин, аспарагин или валин <220>

<221> прочий_признак <222> (212)..(212) <223> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности треонин или аспарагин <220>

<221> прочий_признак <222> (224)..(224) <223> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности пролин или глютамин <220>

<221> прочий_признак <222> (230)..(230) <223> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности аспарагин или тирозин <220>

<221> прочий_признак <222> (232)..(232) <223> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту, в частности серин или треонин <400> 1

Хаа Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Xaa Gin Leu 15 10 15

- 18 035959

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Xaa Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp 35 4045

Asn Xaa Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro Xaa Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Xaa Lys Ala Lys Thr Ser Ser

115 120125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Xaa Lys Tyr Gly Vai Xaa Thr Asp Pro Thr Gly Xaa

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg Xaa Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Xaa Xaa Asn lie Leu Arg Pro Xaa Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Xaa Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Xaa Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Xaa

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Xaa Pro Xaa lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 2 <211> 259 <212> PRT

- 19 035959 <213> неизвестен <220>

<223> KZ144 эндолизин без N-концевого метионина <400> 2

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg 1 5

Gly Asp Glu Vai Cys Gin Leu Gin

15

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr 20

Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 25 30

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin 35 40

Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 45

Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai

55

Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 60

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie 65 70

Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

80

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala 85

Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

95

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser

100

Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

105 110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu

115 120 lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr

130 135

Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai

145 150

Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

155 160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala

165

Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

170 175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro

180

Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

185 190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe

195 200

Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg

205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu

210 215

Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie

225 230

Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

235 240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn

Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

- 20 035959

245 250 255

His Arg Lys <210> 3 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> KZ144 без N-концевого метионина, с селенометионином вместо остатков метионина <220>

<221> прочий_признак <222> (79)..(79) <223> Хаа является селенометионин <220>

<221> прочий_признак <222> (93)..(93) <223> Хаа является селенометионин <220>

<221> прочий_признак <222> (142)..(142) <223> Хаа является селенометионин <220>

<221> прочий_признак <222> (148)..(148) <223> Хаа является селенометионин <220>

<221> прочий_признак <222> (170)..(170) <223> Хаа является селенометионин <220>

<221> прочий_признак <222> (179)..(179) <223> Хаа является селенометионин <220>

<221> прочий_признак <222> (250)..(250) <223> Хаа является селенометионин <400> 3

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Cys Gin Leu Gin 15 1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 35 4045

Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Xaa Pro 65 70 7580

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Xaa Asn Ala Vai 85 9095

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Xaa lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Xaa Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Xaa Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Xaa Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

210 215220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Xaa Asp Gly Lys Vai Ala Ala

245 250255

His Arg Lys <210> 4 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Мутированный KZ144 с E115A и без η-концевого метионина <220>

<221> прочий <222> (114)..(114) <223> мутация, соответствующая положению E115A в эндолизине KZ144

- 22 035959 <400> 4

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Cys Gin Leu Gin 15 1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn

4045

Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580

Thr

Ala Asn

Lys

Ser 85

Arg

Ala

Ala Ala

Thr 90

Pro Vai

Met

Asn

Ala 95

Vai

Glu

Asn

Ala

Thr

Gly

Vai

Arg

Ser

Gin

Leu

Leu

Leu

Thr

Phe

Ala

Ser

100 105 110 lie Ala Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

210 215220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

245 250255

His Arg Lys

- 23 035959 <210> 5 <211> 260 <212> PRT <213> неизвестен <220>

<22 3> phiKZgpl44 <400> 5

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Cys Gin Leu 15 1015

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp

4045

Asn Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai

Glu

Asn

Ala Thr 100

Gly Vai

Arg

Ser 105

Gin

Leu

Leu

Leu

Thr 110

Phe

Al a

Ser

lie

Glu

Ser Ala

Phe Asp

Tyr

Glu

lie

Lys

Al a

Lys

Thr

Ser

Ser

115 120 125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

- 24 035959

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235 240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250 255

Ala His Arg Lys

260 <210> 6 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S и C50S <400> 6

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp 1 5

Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu

15

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly 20

Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 25 30 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn

40

Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp 45

Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie

55

Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 60

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro 65 70 lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met

80

Pro Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala 85

Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala

95

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg

100

Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

105 110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr

115 120

Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser

125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu

130 135

Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

140

Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly

145 150

Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala

155 160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser

165

Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

170 175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg

180

Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

185 190

- 25 035959

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gln Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 7 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 с T82I, A206V и S232 <400> 7

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp 1 5

Arg Gly Asp Glu Vai Cys Gln Leu

15

Gln Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly 20

Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 25 30 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn

40

Gln Vai Vai Lys Phe Gln Lys Asp 45

Asn Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie

55

Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 60

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro 65 70 lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met

80

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala 85

Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala

95

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg

100

Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala

105 110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr

115 120

Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser

125

Ala Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu

130 135

Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

140

Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly

145 150

Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala

155 160

- 26 035959

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 8 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M и A160T <400> 8

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Cys Gin Leu 15 1015

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp 35 4045

Asn Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

- 27 035959

115

120

125

Al a

Thr

130

Gly

Trp

Phe

Gin

Phe

135

Leu

Thr

Gly

Thr

T rp 140

Lys

Thr

Met lie

Glu

145

Asn

Tyr

Gly

Met

Lys 150

Tyr

Gly

Vai

Leu

Thr

155

Asp

Pro

Thr

Gly

Thr

160

Leu

Arg

Lys

Asp

Pro

165

Arg lie

Ser

Al a

Leu

170

Met

Gly

Al a

Glu

Leu

175 lie

Lys

Glu

Asn

Met

180

Asn lie

Leu

Arg

Pro

185

Vai

Leu

Lys

Arg

Glu

190

Pro

Thr

Asp

Thr

Asp 195

Leu

Tyr

Leu

Al a

Hi s 200

Phe

Phe

Gly

Pro

Gly 205

Vai

Al a

Arg

Arg

Phe

210

Leu

Thr

Thr

Gly

Gin

215

Asn

Glu

Leu

Al a

Al a 220

Thr

Hi s

Phe

Pro

Lys 225

Glu

Al a

G1 n

Al a

Asn

230

Pro

Thr lie

Phe

Tyr 235

Asn

Lys

Asp

Gly

Ser

240

Pro

Lys

Thr lie

Gin

245

Glu

Vai

Tyr

Asn

Leu

250

Met

Asp

Gly

Lys

Vai

255

Al a

Al a

Hi s

Arg

Lys 260 <210> 9 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> Мутированный KZ144 c C14S, C50S, I122M и A160T <400> 9

Met Lys Vai Leu Arg Lys 1 5

Gly Asp Arg Gly Asp

Glu Vai Ser Gin Leu

Gin Thr Leu Leu Asn Leu

Cys Gly Tyr Asp Vai 25

Gly Lys Pro Asp Gly 30 lie Phe Gly Asn Asn Thr 35

Phe Asn Gin Vai Vai

Lys Phe Gin Lys Asp

Asn Ser Leu Asp Ser Asp 50

Gly lie Vai Gly Lys 55

Asn Thr Trp Ala Glu 60

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser 65 70

Pro Pro lie Pro Tyr 75

Lys Thr lie Pro Met

- 28 035959

Pro Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

115 120125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 10 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S, C23S и C50S <400> 10

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu

10 15

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Ser Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 25 30 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp

- 29 035959

4045

Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai

G1 u

Asn Ala Thr Gly Vai 100

Arg

Ser Gin 105

Leu

Leu

Leu

Thr 110

Phe

Ala

Ser

lie

Glu

Ser

Al a

Phe

Asp

Tyr

Glu

lie

Lys

Al a

Lys

Thr

Ser

Ser

115 120 125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 11 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S

- 30 035959 <400> 11

Met 1

Lys

Val

Leu

Arg 5

Lys

Gly

Asp

Arg

Gly 10

Asp

G1 u

Val

Ser

G1 n 15

Leu

G1 n

Thr

Leu

Leu 20

Asn

Leu cys

Gly

Tyr 25

Asp

Val

Gly

Lys

Pro 30

Asp

Gly lie

Phe

Gly 35

Asn

Asn

Thr

Phe

Asn 40

Gin

Val

Val

Lys

Phe 45

Gin

Lys

Asp

Asn

Ser 50

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly 55 lie

Val

Gly

Lys

Asn 60

Thr

T rp

Ala

Glu

Leu 65

Phe

Ser

Lys

Tyr

Ser 70

Pro

Pro lie

Pro

Tyr 75

Lys

Thr lie

Pro

Met 80

Pro lie

Ala

Asn

Lys 85

Ser

Arg

Al a

Al a

Al a 90

Thr

Pro

Val

Met

Asn 95

Ala

Val

Glu

Asn

Al a 100

Thr

Gly

Val

Arg

Ser

105

Gin

Leu

Leu

Leu

Thr

110

Phe

Ala

Ser lie

Glu

115

Ser

Al a

Phe

Asp

Tyr 120

Glu

Met

Lys

Ala

Lys 125

Thr

Ser

Ser

Ala

Thr

130

Gly

Trp

Phe

Gin

Phe

135

Leu

Thr

Gly

Thr

T rp 140

Lys

Thr

Met lie

Glu

145

Asn

Tyr

Gly

Met

Lys 150

Tyr

Gly

Val

Leu

Thr

155

Asp

Pro

Thr

Gly

Thr

160

Leu

Arg

Lys

Asp

Pro

165

Arg lie

Ser

Al a

Leu

170

Met

Gly

Ala

Glu

Leu

175 lie

Lys

Glu

Asn

Met

180

Asn lie

Leu

Arg

Pro

185

Val

Leu

Lys

Arg

Glu

190

Pro

Thr

Asp

Thr

Asp 195

Leu

Tyr

Leu

Al a

His

200

Phe

Phe

Gly

Pro

Gly 205

Val

Ala

Arg

Arg

Phe

210

Leu

Thr

Thr

Gly

Gin

215

Asn

Glu

Leu

Ala

Ala 220

Thr

His

Phe

Pro

Lys 225

Glu

Ala

G1 n

Al a

Asn

230

Pro

Thr lie

Phe

Tyr 235

Asn

Lys

Asp

Gly

Ser

240

Pro

Lys

Thr lie

Gin

245

Glu

Val

Tyr

Asn

Leu

250

Met

Asp

Gly

Lys

Val

255

Ala

Ala

His

Arg

Lys 260

- 31 035959 <210> 12 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206N, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S <400> 12

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu

1015

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp 35 4045

Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

115 120125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Asn Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

- 32 035959

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235 240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250 255

Ala His Arg Lys

260 <210> 13 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c N230Y, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S <400> 13

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu

1015

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp 35 4045

Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

115 120125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

- 33 035959

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Tyr Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 14 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 с M180E, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S <400> 14

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp

5

Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu

15

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly 20

Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 25 30 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn 35 40

Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp 45

Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie

55

Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 60

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro 65 70 lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met

80

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala 85

Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala

95

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg

100

Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

105 110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr

115 120

Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu

Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

- 34 035959

130135

Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu

145150

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu

165170

Lys Glu Asn Glu Asn lie Leu Arg Pro

180185

140

Thr Asp Pro Thr Gly Thr

155 160

Met Gly Ala Glu Leu lie

175

Leu Lys Arg Glu Pro Thr

190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe

195 200

Gly Pro Gly Vai Ala Arg

205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu

210 215

Ala Ala Thr His Phe Pro

220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe 225 230

Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

235 240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu

245 250

Met Asp Gly Lys Vai Ala

255

Ala His Arg Lys

260 <210> 15 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 с M149P, T82I и C50S <400> 15

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly 15 10

A206V, S232T, I122M, A160T, C14S

Asp Glu Vai Ser Gin Leu

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp 20 25

Vai Gly Lys Pro Asp Gly 30 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai 35 40

Vai Lys Phe Gin Lys Asp

Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly

55

Lys Asn Thr Trp Ala Glu 60

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro 65 70

Tyr Lys Thr lie Pro Met 75 80

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala 85 90

Thr Pro Vai Met Asn Ala 95

- 35 035959

Val Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

115 120125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 16 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c V186Y, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S <400> 16

Met 1

Lys

Val

Leu Arg 5

Lys

Gly Asp

Arg Gly 10

Asp

Glu

Val

Ser

Gin 15

Leu

Gin

Thr

Leu

Leu Asn

Leu

Cys Gly

Tyr Asp

Val

Gly

Lys

Pro

Asp

Gly

20

25

30

lie

Phe

Gly

Asn Asn

Thr

Phe Asn

Gin Val

Val

Lys

Phe

Gin

Lys

Asp

40 45

- 36 035959

Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

Ser lie Glu

Ser Ala Phe

Asp Tyr Glu 120

Met Lys

Ala

Lys 125

Thr

Ser Ser

115

Ala

Thr

Gly

Trp

Phe

G1 n

Phe

Leu

Thr

Gly

Thr

T rp

Lys

Thr

Met lie

130 135 140

Glu Asn Tyr Gly Met	Lys Tyr Gly Vai	Leu Thr Asp	Pro Thr Gly Thr
145	150	155	160

Leu Arg Lys Asp Pro

Arg

lie

Ser Ala Leu Met 170

Gly

Ala

G1 u

Leu 175

lie

165

Lys

G1 u

Asn

Met

Asn

lie

Leu

Arg

Pro

Tyr

Leu

Lys

Arg

G1 u

Pro

Thr

180 185 190

Asp

Thr Asp Leu 195

Tyr

Leu Ala

His 200

Phe

Phe Gly

Pro

Gly 205

Vai

Ala

Arg

Arg

Phe

Leu

Thr

Thr

Gly

G1 n

Asn

G1 u

Leu

Ala

Ala

Thr

His

Phe

Pro

210 215 220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 17 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14R и C50S <400> 17

- 37 035959

Met 1

Lys

Val

Leu

Arg 5

Lys

Gly

Asp

Arg

Gly 10

Asp

G1 u

Val

Arg

G1 n 15

Leu

G1 n

Thr

Leu

Leu 20

Asn

Leu cys

Gly

Tyr 25

Asp

Val

Gly

Lys

Pro 30

Asp

Gly lie

Phe

Gly 35

Asn

Asn

Thr

Phe

Asn 40

Gln

Val

Val

Lys

Phe 45

Gln

Lys

Asp

Asn

Ser 50

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly 55 lie

Val

Gly

Lys

Asn 60

Thr

T rp

Al a

Glu

Leu 65

Phe

Ser

Lys

Tyr

Ser 70

Pro

Pro lie

Pro

Tyr 75

Lys

Thr lie

Pro

Met 80

Pro lie

Ala

Asn

Lys 85

Ser

Arg

Ala

Ala

Ala 90

Thr

Pro

Val

Met

Asn 95

Ala

Val

G1 u

Asn

Al a 100

Thr

Gly

Val

Arg

Ser

105

G1 n

Leu

Leu

Leu

Thr

110

Phe

Ala

Ser lie

G1 u 115

Ser

Ala

Phe

Asp

Tyr 120

G1 u

Met

Lys

Ala

Lys

5

Thr

Ser

Ser

Al a

Thr

130

Gly

Trp

Phe

Gln

Phe

135

Leu

Thr

Gly

Thr

T rp 140

Lys

Thr

Met lie

Glu

145

Asn

Tyr

Gly

Met

Lys 150

Tyr

Gly

Val

Leu

Thr

155

Asp

Pro

Thr

Gly

Thr

160

Leu

Arg

Lys

Asp

Pro

165

Arg lie

Ser

Ala

Leu

170

Met

Gly

Al a

G1 u

Leu

175 lie

Lys

G1 u

Asn

Met

180

Asn lie

Leu

Arg

Pro

185

Val

Leu

Lys

Arg

G1 u 190

Pro

Thr

Asp

Thr

Asp 195

Leu

Tyr

Leu

Al a

His

200

Phe

Phe

Gly

Pro

Gly 205

Val

Ala

Arg

Arg

Phe

210

Leu

Thr

Thr

Gly

G1 n 215

Asn

Glu

Leu

Ala

Ala 220

Thr

His

Phe

Pro

Lys 225

Glu

Al a

G1 n

Ala

Asn

230

Pro

Thr lie

Phe

Tyr 235

Asn

Lys

Asp

Gly

Ser

240

Pro

Lys

Thr lie

Gln

245

Glu

Val

Tyr

Asn

Leu

250

Met

Asp

Gly

Lys

Val

255

Al a

Ala

His

Arg

Lys 260

- 38 035959 <210> 18 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M, C14S и C50S <400> 18

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Cys Gin Leu 15 1015

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp

4045

Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai	G1 u	Asn Ala Thr Gly Vai 100	Arg	Ser Gin 105	Leu	Leu	Leu	Thr 110	Phe	Ala
Ser	lie	Glu Ser Ala Phe Asp	Tyr	Glu Met	Lys	Ala	Lys	Thr	Ser	Ser

115 120 125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro

Arg

lie

Ser Ala Leu Met 170

Gly

Ala

G1 u

Leu 175

lie

165

Lys

G1 u

Asn

Met

Asn

lie

Leu

Arg

Pro

Vai

Leu

Lys

Arg

Glu

Pro

Thr

180 185 190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

- 39 035959

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250 255

Ala His Arg Lys

260 <210> 19 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и C50N <400> 19

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu

1015

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp 35 4045

Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

115 120125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

- 40 035959

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 20 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14R, C50S, T82I, I122M, M149P, A206V и

S232T <400> 20

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp

5

Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu

15

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly 20

Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 25 30 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn

40

Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp 45

Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie

55

Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 60

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro 65 70 lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met

80

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala 85

Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala

95

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg

100

Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

105 110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr

115 120

Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu

130 135

Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

140

- 41 035959

Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn	Met 180	Asn	lie	Leu Arg Pro 185	Vai	Leu	Lys	Arg	Glu 190	Pro	Thr
Asp Thr Asp	Leu	Tyr	Leu	Ala His Phe	Phe	Gly	Pro	Gly	Vai	Al a	Arg

195 200 205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 21 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14R, C50S, T82I, I122M, M149P, A160T, A206V и S232T <400> 21

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu

1015

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp

4045

Asn Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

- 42 035959

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

115 120125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 22 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, I122M, M149P, A206V, S232T, C14R и C50N <400> 22

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu

1015

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp 35 4045

Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

- 43 035959

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

115 120125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 23 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, I122M, M149P, I167L, A206V, S232T, C14R и C50N <400> 23

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu

10 15

- 44 035959

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp

4045

Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

115 120125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg Leu Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 24 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность

- 45 035959 <220>

<223> мутированный KZ144 with T82I, I122M, M149P, N179F, A206V, S232T, C14R и C50N <400> 24

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu

1015

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp 35 4045

Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

115 120125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala 145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg Leu Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Phe Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

- 46 035959

245 250 255

Ala His Arg Lys

260 <210> 25 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, I122M, M149P, A206V, T212N, S232T, C14R и C50N <400> 25

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu

1015

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp

4045

Asn Asn Leu 50	Asp Ser	Asp	Gly lie 55	Vai	Gly	Lys	Asn Thr 60	Trp	Ala	Glu
Leu Phe Ser	Lys Tyr	Ser	Pro Pro	lie	Pro	Tyr	Lys Thr	lie	Pro	Met

70 75 80

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai

Glu

Asn

Ala Thr 100

Gly Vai

Arg

Ser 105

Gin

Leu

Leu

Leu

Thr 110

Phe

Al a

Ser

lie

Glu

Ser Ala

Phe Asp

Tyr

Glu

Met

Lys

Al a

Lys

Thr

Ser

Ser

115 120 125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr 145	Gly	Pro Lys 150	Tyr	Gly Vai	Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala
155	160
Leu Arg Lys	Asp	Pro Arg	lie	Ser Ala	Leu Met Gly Ala Glu Leu	lie

165 170 175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr 180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg 195 200205

- 47 035959

Arg Phe Leu Asn Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 26 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223>

мутированный и C50N

KZ144 с

T82I, Ι122Μ, Μ149Ρ,

A206V, P224Q, S232T, C14R <400>

Met 1

Lys

Vai

Leu

Arg

Lys

Gly

Asp

Arg

Gly 10

Asp

Glu

Vai

Arg

Gin 15

Leu

G1 n

Thr

Leu

Leu 20

Asn

Leu cys

Gly

Tyr 25

Asp

Vai

Gly

Lys

Pro 30

Asp

Gly lie

Phe

Gly 35

Asn

Asn

Thr

Phe

Asn 40

G1 n

Vai

Vai

Lys

Phe 45

G1 n

Lys

Asp

Asn

Asn 50

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly 55 lie

Vai

Gly

Lys

Asn 60

Thr

T rp

Al a

Glu

Leu 65

Phe

Ser

Lys

Tyr

Ser 70

Pro

Pro

lie

Pro

Tyr 75

Lys

Thr

lie

Pro

Met 80

Pro

lie

Al a

Asn

Lys

Ser

Arg

Ala

Ala

Ala

Thr

Pro

Vai

Met

Asn

Ala

Vai

Glu Asn

Ala Thr Gly 100

Vai

Arg Ser 105

Gin

Leu

Leu

Leu

Thr 110

Phe

Ala

Ser

lie

Glu

Ser

Ala

Phe

Asp

Tyr

G1 u

Met

Lys

Ala

Lys

Thr

Ser

Ser

115

120

5

Ala

Thr

130

Gly

Trp

Phe

G1 n

Phe

135

Leu

Thr

Gly

Thr

Trp 140

Lys

Thr

Met lie

G1 u 145

Asn

Tyr

Gly

Pro

Lys 150

Tyr

Gly

Vai

Leu

Thr

155

Asp

Pro

Thr

Gly

Al a 160

- 48 035959

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Gin

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 27 <211> 260 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, I122M, M149P, L154T, A206V, S232T, C14R и C50N <400> 27

Met Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu

1015

Gin Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly 20 2530 lie Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp

4045

Asn Asn Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu 50 5560

Leu Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met 65 70 7580

Pro lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala 85 9095

Vai Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala

100 105110

- 49 035959

Ser lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser

115 120125

Ala Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie

130 135140

Glu Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Vai Thr Thr Asp Pro Thr Gly Ala

145 150 155160

Leu Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie

165 170175

Lys Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr

180 185190

Asp Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg

195 200205

Arg Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro

210 215220

Lys Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser

225 230 235240

Pro Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala

245 250255

Ala His Arg Lys

260 <210> 28 <211> 259 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S and C50S, без N-концевого метионина <400> 28

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg 1 5

Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin

15

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr 20

Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 25 30

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin

40

Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 45

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai

55

Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 60

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie 65 70

Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

80

- 50 035959

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 9095

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

210 215220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

Lys Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala

245 250255

His Arg Lys <210> 29 <211> 259 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V and S232, без N-концевого метионина <400> 29

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gin Leu Gin 15 10 15

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 25 30

- 51 035959

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 35 4045

Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

9095

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

210 215220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

245 250255

His Arg Lys <210> 30 <211> 259 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 с T82I, A206V, S232T, I122M и A160T, без

- 52 035959

N-концевого метионина <400> 30

Lys 1

Vai

Leu

Arg

Lys 5

Gly

Asp

Arg

Gly

Asp 10

Glu

Vai cys

Gin

Leu 15

Gin

Thr

Leu

Leu

Asn 20

Leu cys

Gly

Tyr

Asp 25

Vai

Gly

Lys

Pro

Asp 30

Gly lie

Phe

Gly

Asn 35

Asn

Thr

Phe

Asn

Gin 40

Vai

Vai

Lys

Phe

Gin 45

Lys

Asp

Asn cys

Leu 50

Asp

Ser

Asp

Gly lie 55

Vai

Gly

Lys

Asn

Thr 60

T rp

Al a

Glu

Leu

Phe 65

Ser

Lys

Tyr

Ser

Pro 70

Pro lie

Pro

Tyr

Lys 75

Thr lie

Pro

Met

Pro 80 lie

Al a

Asn

Lys

Ser 85

Arg

Al a

Al a

Al a

Thr 90

Pro

Vai

Met

Asn

Al a 95

Vai

Glu

Asn

Al a

Thr

100

Gly

Vai

Arg

Ser

Gin

105

Leu

Leu

Leu

Thr

Phe

110

Al a

Ser lie

Glu

Ser

115

Al a

Phe

Asp

Tyr

Glu

120

Met

Lys

Al a

Lys

Thr

125

Ser

Ser

Al a

Thr

Gly 130

T rp

Phe

Gin

Phe

Leu

135

Thr

Gly

Thr

T rp

Lys 140

Thr

Met lie

Glu

Asn

145

Tyr

Gly

Met

Lys

Tyr 150

Gly

Vai

Leu

Thr

Asp 155

Pro

Thr

Gly

Thr

Leu

160

Arg

Lys

Asp

Pro

Arg 165 lie

Ser

Al a

Leu

Met

170

Gly

Al a

Glu

Leu lie

175

Lys

Glu

Asn

Met

Asn

180 lie

Leu

Arg

Pro

Vai

185

Leu

Lys

Arg

Glu

Pro

190

Thr

Asp

Thr

Asp

Leu

195

Tyr

Leu

Al a

Hi s

Phe

200

Phe

Gly

Pro

Gly

Vai

205

Al a

Arg

Arg

Phe

Leu

210

Thr

Thr

Gly

Gin

Asn

215

Glu

Leu

Al a

Al a

Thr

220

Hi s

Phe

Pro

Lys

Glu

225

Al a

Gin

Al a

Asn

Pro

230

Thr lie

Phe

Tyr

Asn

235

Lys

Asp

Gly

Ser

Pro

240

Lys

Thr lie

G1 n

Glu

245

Vai

Tyr

Asn

Leu

Met

250

Asp

Gly

Lys

Vai

Al a 255

Al a

- 53 035959

His Arg Lys <210> 31 <211> 259 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S, C50S, I122M с A160T, без N-концевого метионина <400> 31

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin

1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 35 4045

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai 85 9095

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

- 54 035959

210 215220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

245 250255

His Arg Lys <210> 32 <211> 259 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутироваванный KZ144 c C14S, C23S и C50S, без N-концевого метионина <400> 32

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg

Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin

15

Thr Leu Leu Asn Leu Ser Gly Tyr 20

Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 25 30

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin 35 40

Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 45

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai

55

Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 60

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie 65 70

Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

80

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala 85

Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

95

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser

100

Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

105 110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu

115 120 lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala 125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr

130 135

Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai

145 150

Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

155 160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala

165

Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

170 175

- 55 035959

G1 u	Asn Met	Asn 180	lie Leu	Arg Pro	Vai 185	Leu Lys Arg	G1 u	Pro 190	Thr	Asp
Thr	Asp Leu 195	Tyr	Leu Ala	His Phe 200	Phe	Gly Pro Gly	Ala 205	Ala	Arg	Arg
Phe	Leu Thr 210	Thr	Gly Gin	Asn Glu 215	Leu	Ala Ala Thr 220	His	Phe	Pro	Lys
G1 u 225	Ala Gin	Al a	Asn Pro 230	Ser lie	Phe	Tyr Asn Lys 235	Asp	Gly	Ser	Pro 240
Lys	Thr lie	G1 n	Glu Vai 245	Tyr Asn	Leu	Met Asp Gly 250	Lys	Vai	Ala 255	Ala

His Arg Lys <210>

<211>

<212>

<213>

259

PRT искусственная последовательность <220>

<223>

мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, C50S, без N-концевого метионина

I122M, A160T, C14S и <400>

Lys 1

Vai

Leu

Arg

Lys 5

Gly

Asp

Arg

Gly

Asp 10

Glu

Vai

Ser

G1 n

Leu 15

G1 n

Thr

Leu

Leu

Asn 20

Leu cys

Gly

Tyr

Asp 25

Vai

Gly

Lys

Pro

Asp 30

Gly lie

Phe	Gly	Asn Asn Thr Phe 35	Asn Gin Vai 40	Vai	Lys	Phe	G1 n 45	Lys	Asp	Asn
Ser	Leu	Asp Ser Asp Gly	lie Vai Gly	Lys	Asn	Thr	T rp	Ala	G1 u	Leu

Phe 65

Ser

Lys

Tyr

Ser

Pro 70

Pro lie

Pro

Tyr

Lys 75

Thr lie

Pro

Met

Pro 80 lie

Ala

Asn

Lys

Ser 85

Arg

Ala

Ala

Ala

Thr 90

Pro

Vai

Met

Asn

Ala 95

Vai

G1 u

Asn

Ala

Thr

100

Gly

Vai

Arg

Ser

G1 n 105

Leu

Leu

Leu

Thr

Phe

110

Ala

Ser lie

G1 u

Ser

115

Al a

Phe

Asp

Tyr

G1 u 120

Met

Lys

Ala

Lys

Thr

125

Ser

Ser

Ala

- 56 035959

Thr	Gly Trp Phe 130	Gin Phe Leu 135	Thr Gly Thr	T rp	Lys 140	Thr	Met	lie	Glu
Asn	Tyr Gly Met	Lys Tyr Gly	Vai Leu Thr	Asp	Pro	Thr	Gly	Thr	Leu
145		150		155					160
Arg	Lys Asp Pro	Arg lie Ser	Ala Leu Met	Gly	Al a	Glu	Leu	lie	Lys

165 170 175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185 190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala 195	His	Phe Phe Gly 200	Pro Gly	Vai 205	Al a	Arg	Arg
Phe Leu Thr Thr Gly Gin	Asn	Glu Leu Ala	Ala Thr	His	Phe	Pro	Lys

210 215 220

G1 u Al a G1 n Al a 225	Asn Pro 230	Thr	lie Phe	Tyr	Asn Lys Asp 235	Gly	Ser	Pro 240
Lys Thr lie Gin	Glu Vai	Tyr	Asn Leu	Met	Asp Gly Lys	Vai	Al a	Al a

245 250 255

His Arg Lys <210> 34 <211> 259 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> Мутированный KZ144 c T82I, A206N, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S, без N-концевого метионина <400> 34

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin

10 15

Thr

Leu

Leu

Asn 20

Leu

Cys Gly Tyr

Asp 25

Vai

Gly

Lys

Pro

Asp 30

Gly

lie

Phe

Gly

Asn

Asn

Thr

Phe Asn Gin

Vai

Vai

Lys

Phe

Gin

Lys

Asp

Asn

40 45

Ser Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

lie 55

Vai

Gly Lys

Asn

Thr Trp 60

Ala

G1 u

Leu

50

Phe 65

Ser

Lys

Tyr

Ser

Pro 70

Pro

lie

Pro Tyr

Lys 75

Thr lie

Pro

Met

Pro 80

lie

Ala

Asn

Lys

Ser

Arg

Al a

Al a

Ala Thr

Pro

Val Met

Asn

Al a

Val

- 57 035959

Glu

Asn

Al a

Thr

100

Gly

Vai

Arg

Ser

Gin

105

Leu

Leu

Leu

Thr

Phe

110

Ala

Ser

lie Glu Ser

Ala Phe Asp

Tyr Glu 120

Met

Lys

Ala Lys

Thr 125

Ser

Ser

Ala

115

Thr

Gly

T rp

Phe

Gin

Phe

Leu

Thr

Gly

Thr

T rp

Lys

Thr

Met

lie

Glu

130

135

140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr	Gly Vai	Leu Thr Asp 155	Pro	Thr Gly Thr Leu 160
145	150
Arg	Lys Asp Pro Arg lie	Ser Ala	Leu Met Gly	Ala	Glu Leu lie Lys

165

170

175

G1 u

Asn

Met

Asn

180 lie

Leu

Arg

Pro

Vai

185

Leu

Lys

Arg

G1 u

Pro

190

Thr

Asp

Thr

Asp

Leu

195

Tyr

Leu

Al a

His

Phe 200

Phe

Gly

Pro

Gly

Asn

205

Ala

Arg

Arg

Phe

Leu

210

Thr

Thr

Gly

G1 n

Asn

215

G1 u

Leu

Ala

Ala

Thr

220

His

Phe

Pro

Lys

G1 u 225

Ala

G1 n

Al a

Asn

Pro

230

Thr lie

Phe

Tyr

Asn

235

Lys

Asp

Gly

Ser

Pro

240

Lys

Thr lie

G1 n

Glu

245

Vai

Tyr

Asn

Leu

Met

250

Asp

Gly

Lys

Vai

Ala 255

Ala

His

Arg

Lys <210>

<211>

<212>

<213>

259

PRT искусственная последовательность <220>

<223>

Мутированный и C50S , без

KZ144 c N230Y, T82I, A206V,

N-концевого метионина

S232T, I122M, A160T, C14S <400>

Lys 1

Vai

Leu

Arg

Lys 5

Gly

Asp

Arg

Gly

Asp 10

Glu

Vai

Ser

Gin

Leu 15

Gin

Thr

Leu

Leu

Asn 20

Leu cys

Gly

Tyr

Asp 25

Vai

Gly

Lys

Pro

Asp 30

Gly lie

Phe

Gly

Asn 35

Asn

Thr

Phe

Asn

G1 n 40

Vai

Vai

Lys

Phe

G1 n 45

Lys

Asp

Asn

- 58 035959

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

9095

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

210 215220

Glu Ala Gin Ala Tyr Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

245 250255

His Arg Lys <210> 36 <211> 259 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> Мутированный KZ144 с M180E, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S, без N-концевого метионина <400> 36

- 59 035959

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin 15 1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 35 4045

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

9095

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Glu Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

210 215220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

245 250255

His Arg Lys

- 60 035959 <210> 37 <211> 259 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> Мутированный KZ144 с M149P, T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S, без N-концевого метионина <400> 37

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gin Leu Gin

1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn

4045

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val

9095

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

210 215220

- 61 035959

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235 240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Al 245 250 255

His Arg Lys <210> 38 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Мутированный KZ144 c V186Y, T82I, A206V, S232T, I122M, и C50S, без N-концевого <400> 38

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg метионина

Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin

15

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr 20

Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 25 30

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin 35 40

Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 45

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai

55

Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 60

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie 65 70

Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

80 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala 85

Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

95

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser

100

Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

105 110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu

115 120

Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr

130 135

Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai

145 150

Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

155 160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala

165

Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

170 175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro

Tyr Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

- 62 035959

180 185 190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala 195	His	Phe Phe Gly 200	Pro Gly	Vai 205	Al a	Arg	Arg
Phe Leu Thr Thr Gly Gin	Asn	Glu Leu Ala	Ala Thr	His	Phe	Pro	Lys

210 215 220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235 240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

245 250 255

His Arg Lys <210> 39 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14R и C50S, без N-концевого метионина <400> 39

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu Gin

1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe	Gly	Asn Asn Thr Phe 35	Asn Gin 40	Vai	Vai	Lys	Phe Gin 45	Lys	Asp	Asn
Ser	Leu	Asp Ser Asp Gly	lie Vai	Gly	Lys	Asn	Thr Trp	Al a	Glu	Leu

55 60

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

9095

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

- 63 035959

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly val Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

210 215220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

Lys Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala

245 250255

His Arg Lys <210> 40 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 с T82I, A206V, S232T, I122M, C14S и C50S без N-концевого метионина <400> 40

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gin Leu Gin

1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn 35 4045

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val 85 9095

- 64 035959

Glu Asn Ala Thr

Gly

Vai

Arg

Ser

Gin 105

Leu

Leu

Leu

Thr

Phe 110

Al a

Ser

100

lie

Glu

Ser

Al a

Phe

Asp

Tyr

Glu

Met

Lys

Ala

Lys

Thr

Ser

Ser

Al a

115 120 125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu

Thr

Thr

Gly

Gin

Asn 215

Glu

Leu Ala

Ala

Thr 220

His

Phe

Pro

Lys

210

G1 u

Ala

G1 n

Al a

Asn

Pro

Thr

lie

Phe

Tyr

Asn

Lys

Asp

Gly

Ser

Pro

225 230 235 240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

245 250255

His Arg Lys <210> 41 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и C50N, без N-концевого метионина <400> 41

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin

1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 35 4045

Asn Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu

- 65 035959

5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val

9095

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

210 215220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

Lys Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala

245 250255

His Arg Lys <210> 42 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14R, C50S, T82I, I122M, M149P, A206V и S232T; без N-концевого метионина <400> 42

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gin Leu Gin 15 10 15

- 66 035959

Thr

Leu

Leu

Asn 20

Leu cys

Gly

Tyr

Asp 25

Vai

Gly

Lys

Pro

Asp 30

Gly lie

Phe

Gly

Asn 35

Asn

Thr

Phe

Asn

Gin 40 val val

Lys

Phe

Gin 45

Lys

Asp

Asn

Ser

Leu 50

Asp

Ser

Asp

Gly lie 55

Val

Gly

Lys

Asn

Thr 60

T rp

Al a

Glu

Leu

Phe 65

Ser

Lys

Tyr

Ser

Pro 70

Pro lie

Pro

Tyr

Lys 75

Thr lie

Pro

Met

Pro 80 lie

Al a

Asn

Lys

Ser 85

Arg

Al a

Al a

Al a

Thr 90

Pro

Val

Met

Asn

Al a 95

Val

Glu

Asn

Al a

Thr

100

Gly

Val

Arg

Ser

Gin

105

Leu

Leu

Leu

Thr

Phe

110

Al a

Ser lie

Glu

Ser

115

Al a

Phe

Asp

Tyr

Glu

120

Met

Lys

Al a

Lys

Thr

125

Ser

Ser

Al a

Thr

Gly 130

T rp

Phe

Gin

Phe

Leu

135

Thr

Gly

Thr

T rp

Lys 140

Thr

Met lie

Glu

Asn

145

Tyr

Gly

Pro

Lys

Tyr

150

Gly

Val

Leu

Thr

Asp 155

Pro

Thr

Gly

Al a

Leu

160

Arg

Lys

Asp

Pro

Arg 165 lie

Ser

Al a

Leu

Met

170

Gly

Al a

Glu

Leu lie

175

Lys

Glu

Asn

Met

Asn

180 lie

Leu

Arg

Pro

Val

185

Leu

Lys

Arg

Glu

Pro

190

Thr

Asp

Thr

Asp

Leu

195

Tyr

Leu

Al a

Hi s

Phe

200

Phe

Gly

Pro

Gly

Val

205

Al a

Arg

Arg

Phe

Leu

210

Thr

Thr

Gly

Gin

Asn

215

Glu

Leu

Al a

Al a

Thr

220

Hi s

Phe

Pro

Lys

Glu 225	Al a	G1 n Al a	Asn	Pro 230	Thr lie	Phe Tyr Asn 235	Lys	Asp	Gly	Ser	Pro 240
Lys	Thr	lie Gin	Glu	Val	Tyr Asn	Leu Met Asp	Gly	Lys	Val	Al a	Al a

245

250

255

Hi s

Arg

Lys <210> 43 <211> 259

- 67 035959 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14R, C50S, T82I, I122M, M149P, A160T, A206V и S232T; без N-концевого метионина <400> 43

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu Gin

1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 35 4045

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

9095

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala 195	His	Phe Phe Gly 200	Pro Gly	Vai 205	Al a	Arg	Arg
Phe Leu Thr Thr Gly Gin	Asn	Glu Leu Ala	Ala Thr	His	Phe	Pro	Lys

210 215 220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

- 68 035959

Lys Thr lie Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala

245 250 255

His Arg Lys <210> 44 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, I122M, M149P, A206V, S232T, C14R и C50N, без N-концевого метионина <400> 44

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Leu Gln

1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn

4045

Asn Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val

9095

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

- 69 035959

Thr Asp Leu

Tyr

Leu

Ala

His

Phe Phe 200

Gly Pro

Gly

Vai 205

Ala

Arg

Arg

195

Phe

Leu Thr 210

Thr

Gly

G1 n

Asn 215

Glu Leu

Ala Ala

Thr 220

His

Phe

Pro

Lys

G1 u 225

Ala Gin

Al a

Asn

Pro 230

Thr

lie Phe

Tyr Asn 235

Lys

Asp

Gly

Ser

Pro 240

Lys

Thr lie

G1 n

G1 u 245

Vai

Tyr

Asn Leu

Met Asp 250

Gly

Lys

Vai

Ala 255

Ala

His Arg Lys <210> 45 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Мутированный KZ144 c T82I, I122M, M149P, I167L, A206V, S232T, C14R и C50N, без N-концевого метионина <400> 45

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu Gin

1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 35 4045

Asn Leu Asp 50

Ser

Asp

Gly

lie Vai 55

Gly

Lys Asn Thr 60

Trp

Ala

G1 u

Leu

Phe

Ser

Lys

Tyr

Ser

Pro

Pro

lie

Pro

Tyr

Lys

Thr

lie

Pro

Met

Pro

70 75 80

lie Ala Asn

Lys Ser 85

Arg

Ala

Ala

Ala Thr 90

Pro

Vai

Met

Asn Ala 95

Vai

G1 u

Asn

Ala

Thr

Gly

Vai

Arg

Ser

G1 n

Leu

Leu

Leu

Thr

Phe

Ala

Ser

100 105 110

lie

Glu

Ser 115

Ala

Phe Asp

Tyr

Glu Met 120

Lys

Ala

Lys

Thr 125

Ser

Ser

Al a

Thr

Gly

T rp

Phe

Gin Phe

Leu

Thr Gly

Thr

T rp

Lys

Thr

Met

lie

G1 u

130 135 140

Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

- 70 035959

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg Leu Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys 165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp	Leu Tyr 195	Leu Ala	His	Phe Phe Gly Pro 200	Gly	Vai 205	Al a	Arg	Arg
Phe Leu	Thr Thr	Gly Gin	Asn	G1 u Leu Al a Al a	Thr	His	Phe	Pro	Lys

210 215 220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

245 250255

His Arg Lys <210> 46 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Мутированный KZ144 c T82I, I122M, M149P, N179F, A206V, S232T, C14R и C50N, без N-концевого метионина <400> 46

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu Gin

1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn

4045

Asn Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

9095

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110

- 71 035959 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg Leu Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Phe Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr

Asp Leu 195

Tyr

Leu Ala

His

Phe Phe Gly 200

Pro

Gly

Vai 205

Ala Arg

Arg

Phe

Leu

Thr

Thr

Gly

G1 n

Asn

G1 u

Leu

Ala

Ala

Thr

His

Phe

Pro

Lys

210 215 220

Glu Ala Gin 225	Al a	Asn Pro 230	Thr lie	Phe Tyr	Asn 235	Lys Asp Gly	Ser	Pro 240
Lys Thr lie	G1 n	Glu Vai	Tyr Asn	Leu Met	Asp	Gly Lys Vai	Ala	Ala

245 250 255

His Arg Lys <210> 47 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Мутированный KZ144 c T82I, I122M, M149P, A206V, T212N, S232T, C14R и C50N, без N-концевого метионина <400> 47

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Arg Gin Leu Gin

10 15

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 25 30

Phe	Gly Asn 35	Asn Thr	Phe Asn Gin 40	Vai Vai	Lys Phe Gin 45	Lys	Asp	Asn
Asn	Leu Asp	Ser Asp	Gly lie Vai	Gly Lys	Asn Thr Trp	Ala	G1 u	Leu

55 60

- 72 035959

Phe 65

Ser

Lys

Tyr

Ser

Pro 70

Pro lie

Pro

Tyr

Lys 75

Thr lie

Pro

Met

Pro 80

lie Ala Asn

Lys Ser 85

Arg

Ala

Ala

Ala Thr 90

Pro

Vai

Met

Asn Ala 95

Vai

Gl u

Asn

Ala

Thr

Gly

Vai

Arg

Ser

Gl n

Leu

Leu

Leu

Thr

Phe

Ala

Ser

100

105

110

lie	Glu	Ser 115	Al a	Phe Asp Tyr	Glu Met Lys 120	Ala	Lys	Thr 125	Ser	Ser	Ala
Thr	Gly	T rp	Phe	Gin Phe Leu	Thr Gly Thr	T rp	Lys	Thr	Met	lie	Gl u

130

135

140

Asn Tyr 145	Gly	Pro Lys Tyr Gly 150	Vai	Leu Thr Asp 155	Pro	Thr	Gly Ala	Leu 160
Arg Lys	Asp	Pro Arg lie Ser	Ala	Leu Met Gly	Al a	Glu	Leu lie	Lys

170

175

16!

Gl u	Asn Met Asn 180	lie Leu Arg Pro Vai 185	Leu	Lys Arg	Glu Pro 190	Thr	Asp
Thr	Asp Leu Tyr 195	Leu Ala His Phe Phe 200	Gly	Pro Gly	Vai Ala 205	Arg	Arg

Phe

Leu

210

Asn

Thr

Gly

Gin

Asn

215

Glu

Leu

Al a

Ala

Thr

220

His

Phe

Pro

Lys

Glu Ala Gin 225	Al a	Asn Pro 230	Thr lie	Phe Tyr	Asn Lys 235	Asp Gly	Ser	Pro 240
Lys Thr lie	Gl n	Glu Vai	Tyr Asn	Leu Met	Asp Gly	Lys Vai	Al a	Al a

245

250

255

His

Arg

Lys <210>

<211>

<212>

<213>

<220>

<223>

259

PRT

Искусственная последовательность

Мутировал KZ144 c T82I, I122M, M149P, A206V, <400>

и C50N, 48 без

N-концевого метионина

P224Q, S232T, C14R

Lys Vai 1

Leu

Arg

Lys 5

Gly Asp Arg

Gly Asp Glu Vai

Arg

Gin

Leu Gin 15

Thr Leu

Leu

Asn 20

Leu

Cys Gly Tyr

Asp Vai Gly Lys 25

Pro

Asp 30

Gly lie

- 73 035959

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin

40

Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 45

Asn Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai

55

Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 60

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie 65 70

Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

80 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala 85

Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

95

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser

100

Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

105 110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu

115 120

Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr

130 135

Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

140

Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Vai

145 150

Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

155 160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala

165

Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

170 175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro

180

Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

185 190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe

195 200

Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg Arg

205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu

210 215

Leu Ala Ala Thr His Phe Gin Lys

220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie

225 230

Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

235 240

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn

245

Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

250 255

His Arg Lys <210> 49 <211> 259 <212> PRT <213> Искусственная последовательность <220>

- 74 035959 <223> Мутированный KZ144 с T82I, I122M, М149Р, L154T, A206V, S232T, C14R и C50N, без N-концевого метионина <400> 49

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Arg Gin Leu Gin

1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn 35 4045

Asn Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro 65 70 7580 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val

9095

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Val Thr Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr

Thr

Gly

Gin

Asn Glu Leu Ala 215

Ala

Thr 220

His

Phe

Pro

Lys

210

G1 u

Ala

G1 n

Al a

Asn

Pro

Thr

lie

Phe

Tyr

Asn

Lys

Asp

Gly

Ser

Pro

225 230 235 240

Lys Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 245 250255

- 75 035959

His Arg Lys <210> 50 <211> 6 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 50

Lys Arg Lys Lys Arg Lys <210> 51 <211> 5 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <220>

<221> прочий_признак <222> (3)..(3) <223> Хаа может представлять собой любую природную аминокислоту <400> 51

Lys Arg Хаа Lys Arg <210> 52 <211> 5 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 52

Lys Arg Ser Lys Arg

5 <210> 53 <211> 5 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 53

Lys Arg Gly Ser Gly

5 <210> 54

- 76 035959 <211> 9 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 54

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> synthetic sequence <400> 55

Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg

5 <210> 56 <211> 8 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 56

Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys

5 <210> 57 <211> 10 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 57

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys 15 10 <210> 58 <211> 12 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 58

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 15 10

- 77 035959 <210> 59 <211> 14 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая	последовательность
<400> 59 Lys Arg Lys Lys Arg 1 5 <210> 60 <211> 16 <212> PRT <213> Искусственная <220> <223> синтетическая <400> 60	Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg 10 последовательность
Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 <210> 61 <211> 18 <212> PRT <213> Искусственная <220> <223> синтетическая <400> 61	Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 10 15 последовательность
Lys Arg Lys Lys Arg 1 5 Arg Lys	Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys 10 15

<210> <211> <212> <213>	62 19 PRT Искусственная
<220>
<223>	синтетическая последовательность
<400>	62
Lys Arg	1 Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys
1	5 10 15

Arg Lys Lys <210> 63 <211> 19

- 78 035959 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 63

Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg

10 15

Arg Arg Arg <210> 64 <211> 19 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 64

Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys

10 15

Lys Lys Lys <210> 65 <211> 20 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 65

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg

10 15

Lys Lys Arg Lys 20 <210> 66 <211> 21 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 66

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg

10 15

Lys Lys Arg Lys Lys 20

- 79 035959 <210> 67 <211> 21 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 67

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys

10 15

Arg Lys Lys Arg Lys 20 <210> 68 <211> 22 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 68

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Gly Ser Gly Lys Arg Lys

10 15

Lys Arg Lys Lys Arg Lys 20 <210> 69 <211> 24 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 69

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Gly Ser Gly Ser Gly Lys

10 15

Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 20 <210> 70 <211> 25 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 70

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys

- 80 035959

10 15

Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys 20 25 <210> 71 <211> 31 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 71

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg

10 15

Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 20 25 30 <210> 72 <211> 38 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 72

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Gly Ser Gly Ser Gly Lys 15 10 15

Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Gly Ser Gly Ser Gly Lys Arg Lys 20 25 30

Lys Arg Lys Lys Arg Lys 35 <210> 73 <211> 39 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 73

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys

10 15

Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg 20 25 30

Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 35

- 81 035959 <210> 74 <211> 42 <212> PRT <213> Искусственная <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 74

Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg 15 1015

Lys Lys Arg Lys Arg Ser Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys Arg 20 2530

Ser Lys Arg Lys Lys Arg Lys Lys Arg Lys 3540 <210> 75 <211> 37 <212> PRT <213> гомо сапиенс <400> 75

Leu Leu Gly Asp Phe Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys lie Gly Lys Glu 15 10 15

Phe Lys Arg lie Vai Gin Arg lie Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Vai 20 25 30

Pro Arg Thr G1 u Ser 35 <210> 76 <211> 29 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> SMAP-29 овцы <400> 76

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Vai Lys Lys

10 15

Tyr Gly Pro Thr Vai Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly 20 25 <210> 77 <211> 13 <212> PRT <213> неизвестно

- 82 035959 <220>

<223> Индолицидин бычий <400> 77 lie Leu Pro Trp Lys Trp Pro Trp Trp Pro Trp Arg Arg

10 <210> 78 <211> 18 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> Протегрин Свиной <400> 78

Arg Gly Gly Arg Leu Cys Tyr Cys Arg Arg Arg Phe Cys Vai Cys Vai

10 15

Gly Arg <210> 79 <211> 31 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> Цекропин Pl Млекопитающего (свинья) <400> 79

Ser Trp Leu Ser Lys Thr Ala Lys Lys Leu Glu Asn Ser Ala Lys Lys

10 15

Arg lie Ser Glu Gly lie Ala lie Ala lie Gin Gly Gly Pro Arg 20 25 30 <210> 80 <211> 23 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> Магаинин лягушки <400> 80

Gly lie Gly Lys Phe Leu His Ser Ala Lys Lys Phe Gly Lys Ala Phe

10 15

Vai Gly Glu lie Met Asn Ser 20 <210> 81 <211> 25 <212> PRT <213> неизвестно

- 83 035959 <220>

<223> Плевроцидин рыбы <400> 81

Gly Trp Gly Ser Phe Phe Lys Lys Ala Ala His Vai Gly Lys His Vai

10 15

Gly Lys Ala Ala Leu Thr His Tyr Leu 20 25 <210> 82 <211> 36 <212> PRT <213> Комар жёлтолихорадочный

<400> 82

Gly 1

Gly

Leu

Lys

Lys 5

Leu

Gly

Lys

Lys

Leu 10

Glu

Gly

Ala

Gly

Lys 15

Arg

Vai

Phe

Asn

Ala 20

Ala

Glu

Lys

Ala

Leu 25

Pro

Vai

Vai

Ala

Gly 30

Ala

Lys

Al a

Leu

Arg 35

Lys

<210> 83 <211> 40 <212> PRT <213> Дрозофила фруктовая <400> 83

Gly 1	T rp	Leu	Lys	Lys lie 5	Gly Lys	Lys lie Glu 10	Arg Vai	Gly	G1 n 15	His
Thr	Arg	Asp	Al a 20	Thr lie	Gin Gly	Leu Gly lie 25	Pro Gin	G1 n 30	Ala	Ala

Asn Vai Ala Ala Thr Ala Arg Gly 35 40 <210> 84 <211> 21 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> Буфорин II позвоночный <400> 84

Thr Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gin Phe Pro Vai Gly Arg Vai His

10 15

Arg Leu Leu Arg Lys

- 84 035959 <210> 85 <211> 39 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> Саркотоксин мухи <400> 85

Gly Trp Leu Lys Lys lie Gly Lys Lys lie Glu Arg Vai Gly Gin His

10 15

Thr Arg Asp Ala Thr lie Gin Gly Leu Gly lie Ala Gin Gin Ala Ala 20 25 30

Asn Vai Ala Ala Thr Ala Arg 35 <210> 86 <211> 17 <212> PRT <213> пчела медоносная домашняя <400> 86

Ala Asn Arg Pro Vai Tyr lie Pro Pro Pro Arg Pro Pro His Pro Arg

10 15

Leu <210> 87 <211> 24 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> аскафин 5 лягушки <400> 87

Gly lie Lys Asp Trp lie Lys Gly Ala Ala Lys Lys Leu lie Lys Thr

10 15

Vai Ala Ser His lie Ala Asn Gin <210> 88 <211> 22 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> Nigrocine 2 лягушки <400> 88

Gly Leu Leu Ser Lys Vai Leu Gly Vai Gly Lys Lys Vai Leu Cys Gly

10 15

- 85 035959

Val Ser Gly Leu Vai Cys 20 <210> 89 <211> 24 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> псеудин 1 бурой лягщшки <400> 89

Gly Leu Asn Thr Leu Lys Lys Val Phe Gin Gly Leu His Glu Ala lie 15 10 15

Lys Leu lie Asn Asn His Val Gin 20 <210> 90 <211> 18 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> раналексин лягушки <400> 90

Phe Leu Gly Gly Leu lie Val Pro Ala Met lie Cys Ala Val Thr Lys

10 15

Lys Cys <210> 91 <211> 26 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> мелиттин пчелы <400> 91

Gly lie Gly Ala Val Leu Lys Val Leu Thr Thr Gly Leu Pro Ala Leu 15 10 15 lie Ser Trp lie Lys Arg Lys Arg Gin Gin 20 25 <210> 92 <211> 25 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> ликотоксин 1 паучий <400> 92

- 86 035959 lie Trp Leu Thr Ala Leu Lys Phe Leu Gly Lys His Ala Ala Lys Lys 15 10 15

Leu Ala Lys Gin Gin Leu Ser Lys Leu 20 25 <210> 93 <211> 19 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> паразин 1 рыбий <400> 93

Lys Gly Arg Gly Lys Gin Gly Gly Lys Vai Arg Ala Lys Ala Lys Thr

10 15

Arg Ser Ser <210> 94 <211> 39 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> буфорин 1 жабий <400> 94

Ala Gly Arg Gly Lys Gin Gly Gly Lys Vai Arg Ala Lys Ala Lys Thr

10 15

Arg Ser Ser Arg Ala Gly Leu Gin Phe Pro Vai Gly Arg Vai His Arg 20 25 30

Leu Leu Arg Lys Gly Asn Tyr 35 <210> 95 <211> 34 <212> PRT <213> неивестно <220>

<223> дермасептин 1 лягушки <400> 95

Ala Leu Trp Lys Thr Met Leu Lys Lys Leu Gly Thr Met Ala Leu His 15 10 15

Ala Gly Lys Ala Ala Leu Gly Ala Ala Ala Asp Thr lie Ser Gin Gly 20 25 30

Thr Gin

- 87 035959 <210> 96 <211> 12 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> бактеницин 1 бычий <400> 96

Arg Leu Cys Arg lie Vai Vai lie Arg Vai Cys Arg 15 10 <210> 97 <211> 21 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> танацин насекомых <400> 97

Gly Ser Lys Lys Pro Vai Pro lie lie Tyr Cys Asn Arg Arg Thr Gly

10 15

Lys Cys Gin Arg Met 20 <210> 98 <211> 19 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> бревинин IT бурых лягушек <400> 98

Vai Asn Pro lie lie Leu Gly Vai Leu Pro Lys Vai Cys Leu lie Thr

10 15

Lys Lys Cys <210> 99 <211> 26 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> ранатеурин 1 бурых лягушек <400> 99

Ser Met Leu Ser Vai Leu Lys Asn Leu Gly Lys Vai Gly Leu Gly Phe

10 15

Vai Ala Cys Lys lie Asn lie Lys Gin Cys

- 88 035959 <210> 100 <211> 46 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> эскулентин 1 бурых лягушек <400> 100

Gly lie Phe Ser Lys Leu Gly Arg 1 5

Lys Lys lie Lys Asn Leu Leu lie

15

Ser Gly Leu Lys Asn Vai Gly Lys 20

Glu Vai Gly Met Asp Vai Vai Arg 25 30

Thr Gly lie Lys lie Ala Gly Cys 35 40 <210> 101 <211> 17 <212> PRT <213> мечехвост <400> 101

Arg Trp Cys Phe Arg Vai Cys Tyr 1 5

Lys lie Lys Gly Glu Cys

Arg Gly lie Cys Tyr Arg Lys Cys

15

Arg <210> 102 <211> 25 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> андроктонин скорпионий <400> 102

Arg Ser Vai Cys Arg Gin lie Lys lie Cys Arg Arg Arg Gly Gly Cys 15 10 15

Tyr Tyr Lys Cys Thr Asn Arg Pro Tyr 20 25 <210> 103 <211> 30 <212> PRT

<213> гомо сапиенс

<400> 103

Asp Cys Tyr Cys Arg lie Pro Ala Cys lie Ala Gly Glu Arg Arg Tyr

15 10 15

Gly Thr Cys lie Tyr Gin Gly	Arg Leu Trp Ala Phe Cys Cys
20	25	30
<210> 104 <211> 38 <212> PRT <213> неизвестно <220> <223> бета-дефензин бычий
<400> 104
Asn Pro Vai Ser Cys Vai Arg 1 5	Asn Lys	Gly 10	lie	cys	Vai	Pro	lie 15	Arg
Cys Pro Gly Ser Met Lys Gin lie Gly 20 25 Lys Cys Cys Arg Lys Lys 35 <210> 105 <211> 18 <212> PRT <213> неизвестно <220> <223> тэта-дефензин обезьяний <400> 105	Thr	cys	Vai	Gly	Arg 30	Al a	Vai
Gly Phe Cys Arg Cys Leu Cys 1 5 Thr Arg <210> 106 <211> 40 <212> PRT <213> неизвестно <220> <223> дефензин (сапецин A)	Arg Arg Gly 10 насекомых	Vai	cys	Arg	cys	lie 15	cys
<400> 106
Ala Thr Cys Asp Leu Leu Ser 1 5	Gly Thr	Gly 10	lie	Asn	His	Ser	Ala 15	cys
Ala Ala His Cys Leu Leu Arg 20 Lys Ala Vai Cys Vai Cys Arg 35	Gly Asn 25 Asn 40	Arg	Gly	Gly	Tyr	cys 30	Asn	Gly

<210> 107 <211> 46

- 90 035959 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> тионин (крембин) растений <400> 107

Thr Thr Cys Cys Pro Ser lie Val 1 5

Ala Arg Ser Asn Phe Asn Val Cys

15

Arg lie Pro Gly Thr Pro Glu Ala 20 lie Cys Ala Thr Tyr Thr Gly Cys 25 30 lie lie lie Pro Gly Ala Thr Cys

40

Pro Gly Asp Tyr Ala Asn <210> 108 <211> 50 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> дефенхзин из редиски <400> 108

Gin Lys Leu Cys Gin Arg Pro Ser 1 5

Gly Thr Trp Ser Gly Val Cys Gly

15

Asn Asn Asn Ala Cys Lys Asn Gin

Cys lie Arg Leu Glu Lys Ala Arg 25 30

His Gly Ser Cys Asn Tyr Val Phe 35 40

Pro Ala His Cys lie Cys Tyr Phe 45

Pro Cys <210> 109 <211> 44 <212> PRT <213> дрозофила фруктовая <400> 109

Asp Cys Leu Ser Gly Arg Tyr Lys 1 5

Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn

15

Glu Thr Cys Arg Arg Val Cys Lys

Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His 25 30

Cys Ser Pro Ser Leu Lys Cys Trp

40

Cys Glu Gly Cys <210> 110 <211> 25 <212> PRT <213> гомо сапиенс

- 91 035959 <400> 110

Asp Thr His Phe Pro lie Cys lie Phe Cys Cys Gly Cys Cys His Arg 15 10 15

Ser Lys Cys Gly Met Cys Cys Lys Thr 20 25 <210> 111 <211> 44 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> БАК 5 бычий <400> 111

Arg Phe Arg Pro Pro lie Arg Arg Pro Pro lie Arg Pro Pro Phe Tyr

1015

Pro Pro Phe Arg Pro Pro lie Arg Pro Pro lie Phe Pro Pro lie Arg 20 2530

Pro Pro Phe Arg Pro Pro Leu Gly Arg Pro Phe Pro

35	40
<210> 112 <211> 39 <212> PRT <213> неизвестно <220> <223> PR-39 свинья <400> 112 Arg Arg Arg Pro Arg Pro	Pro Tyr Leu Pro Arg Pro Arg Pro Pro Pro

10 15

Phe Phe Pro Pro Arg Leu Pro Pro Arg lie Pro Pro Gly Phe Pro Pro 20 2530

Arg Phe Pro Pro Arg Phe Pro 35 <210> 113 <211> 20 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> пиррокорицин насекомых <400> 113

Vai Asp Lys Gly Ser Tyr Leu Pro Arg Pro Thr Pro Pro Arg Pro lie

10 15

Tyr Asn Arg Asn 20 <210> 114 <211> 24 <212> PRT <213> гомо сапиенс <400> 114

Asp Ser His Ala Lys Arg His His Gly Tyr Lys Arg Lys Phe His Glu 15 10 15

Lys His His Ser His Arg Gly Tyr 20 <210> 115 <211> 34 <212> PRT <213> Limulus polyphemus (мечехвост) <400> 115

Gly Phe Lys Leu Lys Gly Met Ala Arg lie Ser Cys Leu Pro Asn Gly

10 15

Gin Trp Ser Asn Phe Pro Pro Lys Cys lie Arg Glu Cys Ala Met Val 20 25 30

Ser Ser <210> 116 <211> 18 <212> PRT <213> искусственный <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 116

Gly Phe Phe lie Pro Ala Val lie Leu Pro Ser lie Ala Phe Leu lie

10 15

Val Pro <210> 117 <211> 5 <212> PRT <213> искусственный <220>

<223> синтетическая последовательность <400> 117

Phe Phe Val Ala Pro

- 93 035959 <210> 118 <211> 13 <212> PRT <213> неизвестно <220>

<223> альфа4-спираль лизоцима T4 <400> 118

Pro Asn Arg Ala Lys	Arg Vai lie Thr Thr	Phe Arg	Thr
1 5	10
<210> 119 <211> 27 <212> PRT <213> искусственный <220> <223> синтетическая <400> 119 Lys Arg Trp Vai Lys	последовательность Arg Vai Lys Arg Vai	Lys Arg	Trp Vai Lys Arg
1 5 Vai Vai Arg Vai Vai 20 <210> 120 <211> 25 <212> PRT <213> искусственный <220> <223> синтетическая <400> 120 Gly Lys Pro Gly Trp	10 Lys Arg Trp Vai Lys 25 последовательность Leu lie Lys Lys Ala	Arg Leu Vai	15 Phe Lys Lys Leu
1 5 lie Arg Arg Pro Leu 20 <210> 121 <211> 291 <212> PRT <213> искусственная <220> <223> мутированный <400> 121 Met Arg Gly Leu Arg	10 Lys Arg Leu Ala 25 последовательность KZ144 c C14S и C50S Arg Leu Gly Arg Lys	15 ПЛЮС SMAP-29 lie Ala His Gly Vai Lys
1 5 Lys Tyr Gly Pro Thr	10 Vai Leu Arg lie lie	Arg lie	15 Ala Gly Gly Ser

- 94 035959

2530

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gln Leu Gln

4045

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn 65 70 7580

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

165 170175

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

180 185190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg

225 230 235240

Phe Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gln Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

Lys Thr lie Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala

275 280285

His Arg Lys

- 95 035959

290 <210> 122 <211> 291 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V и S232 плюс SMAP-29 <400> 122

Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys 15 1015

Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser 20 2530

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gin Leu Gin

4045

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

165 170175

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

180 185190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg

225 230 235240

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

Lys Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala

275 280285

His Arg Lys

290 <210> 123 <211> 291 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M и A160T плюс SMAP-29 <400> 123

Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys

1015

Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser 20 2530

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gin Leu Gin 35 4045

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140

- 97 035959 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

165 170175

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

180 185190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg

225 230 235240

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

Lys Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala

275 280285

His Arg Lys

290 <210> 124 <211> 291 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S, C50S, I122M и A160T плюс SMAP-29 <400> 124

Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys 15 1015

Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser 20 2530

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gin Leu Gin

4045

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

- 98 035959

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

165 170175

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

180 185190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg

225 230 235240

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

275 280285

His Arg Lys

290 <210> 125 <211> 291 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S, C23S и C50S плюс SMAP-29 <400> 125

- 99 035959

Met 1

Arg

Gly

Leu

Arg 5

Arg

Leu

Gly

Arg

Lys 10 lie

Al a

Hi s

Gly

Vai 15

Lys

Lys

Tyr

Gly

Pro 20

Thr

Vai

Leu

Arg lie 25 lie

Arg lie

Al a

Gly 30

Gly

Ser

Lys

Vai

Leu 35

Arg

Lys

Gly

Asp

Arg 40

Gly

Asp

Glu

Vai

Ser 45

Gin

Leu

Gin

Thr

Leu 50

Leu

Asn

Leu

Ser

Gly 55

Tyr

Asp

Vai

Gly

Lys 60

Pro

Asp

Gly lie

Phe 65

Gly

Asn

Asn

Thr

Phe 70

Asn

Gin

Vai

Vai

Lys 75

Phe

Gin

Lys

Asp

Asn 80

Ser

Leu

Asp

Ser

Asp 85

Gly lie

Vai

Gly

Lys 90

Asn

Thr

T rp

Al a

Glu 95

Leu

Phe

Ser

Lys

Tyr

100

Ser

Pro

Pro lie

Pro

105

Tyr

Lys

Thr lie

Pro

110

Met

Pro

Thr

Al a

Asn

115

Lys

Ser

Arg

Al a

Al a 120

Al a

Thr

Pro

Vai

Met

125

Asn

Al a

Vai

Glu

Asn

130

Al a

Thr

Gly

Vai

Arg 135

Ser

Gin

Leu

Leu

Leu

140

Thr

Phe

Al a

Ser lie

145

Glu

Ser

Al a

Phe

Asp 150

Tyr

Glu lie

Lys

Al a 155

Lys

Thr

Ser

Ser

Al a 160

Thr

Gly

T rp

Phe

Gin

165

Phe

Leu

Thr

Gly

Thr

170

T rp

Lys

Thr

Met lie

175

Glu

Asn

Tyr

Gly

Met

180

Lys

Tyr

Gly

Vai

Leu

185

Thr

Asp

Pro

Thr

Gly 190

Al a

Leu

Arg

Lys

Asp 195

Pro

Arg lie

Ser

Al a 200

Leu

Met

Gly

Al a

Glu

205

Leu lie

Lys

Glu

Asn

210

Met

Asn lie

Leu

Arg 215

Pro

Vai

Leu

Lys

Arg 220

Glu

Pro

Thr

Asp

Thr

225

Asp

Leu

Tyr

Leu

Al a 230

Hi s

Phe

Phe

Gly

Pro

235

Gly

Al a

Al a

Arg

Arg 240

Phe

Leu

Thr

Thr

Gly 245

Gin

Asn

Glu

Leu

Al a 250

Al a

Thr

Hi s

Phe

Pro

255

Lys

Glu

Al a

Gin

Al a 260

Asn

Pro

Ser lie

Phe 265

Tyr

Asn

Lys

Asp

Gly 270

Ser

Pro

- 100 035959

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

275 280 285

His Arg Lys

290 <210> 126 <211> 291 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S плюс SMAP-29 <400> 126

Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Vai Lys

1015

Lys Tyr Gly Pro Thr Vai Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser 20 2530

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin 35 4045

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

165 170175

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

180 185190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

- 101

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg

225 230 235240

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

Lys Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala

275 280285

His Arg Lys

290 <210> 127 <211> 291 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206N, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S плюс SMAP-29 <400> 127

Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys

1015

Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser 20 2530

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gin Leu Gin

4045

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val

115 120125

- 102 035959

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp	Phe Gin 165	Phe Leu	Thr Gly Thr Trp 170	Lys	Thr Met	lie 175	G1 u
Asn Tyr Gly	Met Lys	Tyr Gly	Vai Leu Thr Asp	Pro	Thr Gly	Thr	Leu

180 185 190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Asn Ala Arg Arg

225 230 235240

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

275 280285

His Arg Lys

290 <210> 128 <211> 290 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S и C50S плюс SMAP-29 без Met <400> 128

Arg Gly Leu Arg Arg Leu

Gly

Arg Lys lie Ala 10

His

Gly

Vai

Lys 15

Lys

1

5

Tyr

Gly

Pro

Thr

Vai

Leu

Arg

lie

lie

Arg

lie

Al a

Gly Gly

Ser

Lys

20

25

30

Vai

Leu

Arg

Lys

Gly

Asp

Arg

Gly

Asp

G1 u

Vai

Ser

G1 n

Leu

G1 n

Thr

40 45

103 035959

Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie Phe

5560

Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn Ser 65 70 7580

Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 9095

Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro Thr

100 105110

Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai Glu

115 120125

Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser lie

130 135140

Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr

145 150 155160

Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu Asn

165 170175

Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg

180 185190

Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys Glu

195 200205

Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr

210 215220

Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg Phe

225 230 235240

Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu

245 250255

Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys

260 265270

Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala His

275 280285

Arg Lys

290 <210> 129 <211> 290 <212> PRT <213> искусственная последовательность

- 104 035959 <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V и S232 плюс SMAP-29 без Met <400> 129

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Vai Lys Lys 15 1015

Tyr Gly Pro Thr Vai Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser Lys 20 2530

Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Cys Gin Leu Gin Thr 35 4045

Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie Phe 50 5560

Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn Cys 65 70 7580

Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 9095

Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro lie

100 105110

Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai Glu

115 120125

Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser lie

130 135140

Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr

145 150 155160

Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu Asn

165 170175

Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg

180 185190

Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys Glu

195 200205

Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr

210 215220

Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg Arg Phe

225 230 235240

Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu

245 250255

105 035959

Ala Gln Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys

260 265 270

Thr lie Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His

275 280 285

Arg Lys

290 <210> 130 <211> 290 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M и A160T плюс SMAP-29 без Met <400> 130

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys Lys

1015

Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser Lys 20 2530

Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln Thr

4045

Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie Phe 50 5560

Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Cys 65 70 7580

Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 9095

Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro lie

100 105110

Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu

115 120125

Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser lie

130 135140

Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr

145 150 155160

Gly Trp Phe Gln Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu Asn

165 170175

- 106 035959

Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg

180 185190

Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys Glu

195 200205

Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr

210 215220

Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg Arg Phe

225 230 235240

Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu

245 250255

Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys

260 265270

Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala His

275 280285

Arg Lys

290 <210> 131 <211> 290 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S, C50S, I122M и A160T плюс SMAP-29 без Met <400> 131

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Vai Lys Lys

1015

Tyr Gly Pro Thr Vai Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser Lys 20 2530

Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin Thr

4045

Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie Phe 50 5560

Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn Ser 65 70 7580

Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 9095

107 035959

Ser

Lys

Tyr

Ser

100

Pro

Pro lie

Pro

Tyr

105

Lys

Thr lie

Pro

Met

110

Pro

Thr

Ala

Asn

Lys 115

Ser

Arg

Ala

Ala

Al a 120

Thr

Pro

Vai

Met

Asn

125

Al a

Vai

Glu

Asn Ala Thr Gly 130

Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr

Phe

Ala

Ser

lie

135

140

G1 u

Ser

Ala

Phe

Asp

Tyr

G1 u

Met

Lys

Ala

Lys

Thr

Ser

Ser

Ala

Thr

145

150

155

160

Gly

Trp

Phe

G1 n

Phe

165

Leu

Thr

Gly

Thr

Trp 170

Lys

Thr

Met lie

G1 u 175

Asn

Tyr

Gly

Met

Lys

180

Tyr

Gly

Vai

Leu

Thr

185

Asp

Pro

Thr

Gly

Thr

190

Leu

Arg

Lys

Asp

Pro

195

Arg lie

Ser

Ala

Leu

200

Met

Gly

Ala

Glu

Leu

205 lie

Lys

Glu

Asn

Met

210

Asn lie

Leu

Arg

Pro

215

Vai

Leu

Lys

Arg

G1 u 220

Pro

Thr

Asp

Thr

Asp 225

Leu

Tyr

Leu

Ala

His

230

Phe

Phe

Gly

Pro

Gly 235

Ala

Ala

Arg

Arg

Phe

240

Leu Thr Thr	Gly	Gin Asn 245	Glu	Leu	Ala Ala Thr 250	His	Phe	Pro Lys 255	Glu
Al a G1 n Al a	Asn	Pro Ser	lie	Phe	Tyr Asn Lys	Asp	Gly	Ser Pro	Lys

260

265

270

Thr lie

G1 n 275

G1 u

Vai

Tyr

Asn

Leu

280

Met

Asp

Gly

Lys

Vai

285

Ala

Ala

His

Arg

Lys 290 <210>

<211>

<212>

<213>

132

290

PRT искусственная последовательность <220>

<223>

мутированный

KZ144 c

C14S, C23S и C50S плюс SMAP-29 без Met <400>

132

Arg Gly 1

Leu

Arg

Arg 5

Leu Gly

Arg Lys lie Ala His Gly Vai

Lys Lys 15

Tyr Gly

Pro

Thr 20

Vai

Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly

Ser Lys

- 108 035959

Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gin Leu Gin Thr 35 4045

Leu Leu Asn Leu Ser Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie Phe 50 5560

Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn Ser 65 70 7580

Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 9095

Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro Thr

100 105110

Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu

115 120125

Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser lie

130 135140

Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr

145 150 155160

Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu Asn

165 170175

Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg

180 185190

Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys Glu

195 200205

Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr

210 215220

Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg Phe

225 230 235240

Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu

245 250255

Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys

260 265270

Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His

275 280285

Arg Lys

290

- 109 035959 <210> 133 <211> 290 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S плюс SMAP-29 без Met <400> 133

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Vai Lys Lys 15 1015

Tyr Gly Pro Thr Vai Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser Lys 20 2530

Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin Thr

4045

Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie Phe 50 5560

Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn Ser 65 70 7580

Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 9095

Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro lie

100 105110

Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai Glu

115 120125

Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser lie

130 135140

Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr

145 150 155160

Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu Asn

165 170175

Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg

180 185190

Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys Glu

195 200205

Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr

210 215220

- 110 035959

Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg Phe

225 230 235240

Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu

245 250255

Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys

260 265270

Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His

275 280285

Arg Lys

290 <210>

<211>

<212>

<213>

134

290

PRT искусственная последовательность

<220> <223> мутированный KZ144 c T82I, A206N, C50S плюс SMAP-29 без Met <400> 134 Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie 1 5 10

, S232T,

I122M, A160T, C14S и

Ala

His

Gly Val

Lys Lys 15

Tyr

Gly

Pro

Thr

Val

Leu

Arg

lie

lie

Arg

lie

Ala

Gly

Gly

Ser

Lys

20

25

30

Val

Leu

Arg

Lys

Gly

Asp

Arg

Gly

Asp

G1 u

Val

Ser

G1 n

Leu

G1 n

Thr

35

40

45

Leu

Leu

Asn

Leu

cys

Gly

Tyr

Asp

Val

Gly

Lys

Pro

Asp

Gly

lie

Phe

50

55

60

Gly

Asn

Asn

Thr

Phe

Asn

Gin

Val

Val

Lys

Phe

Gin

Lys

Asp

Asn

Ser

65

70

75

80

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly

lie

Val

Gly

Lys

Asn

Thr

Trp

Ala

G1 u

Leu

Phe

85

90

95

Ser

Lys

Tyr

Ser

Pro

Pro

lie

Pro

Tyr

Lys

Thr

lie

Pro

Met

Pro

lie

100

105

110

Al a

Asn

Lys

Ser

Arg

Ala

Al a

Al a

Thr

Pro

Val

Met

Asn

Ala

Val

Glu

115

120

125

Asn

Al a

Thr

Gly

Val

Arg

Ser

Gin

Leu

Leu

Leu

Thr

Phe

Ala

Ser

lie

130

135

140

111

Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr

145 150 155160

Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu Asn

165 170175

Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg

180 185190

Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys Glu

195 200205

Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr

210 215220

Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Asn Ala Arg Arg Phe

225 230 235240

Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu

245 250255

Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys

260 265270

Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His

275 280285

Arg Lys

290 <210> 135 <211> 6 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> His-метка (6x) <400> 135

His His His His His His

5 <210> 136 <211> 299 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S и C50S плюс SMAP-29 и His-метка <400> 136

Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys 15 10 15

- 112 035959

Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser 20 2530

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gin Leu Gin

4045

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp Phe Gin

Phe Leu Thr

Gly

Thr 170

T rp

Lys

Thr Met

lie 175

Glu

165

Asn

Tyr

Gly

Met

Lys

Tyr

Gly

Val

Leu

Thr

Asp

Pro

Thr

Gly

Ala

Leu

180 185 190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys 195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp 210 215220

Thr Asp Leu 225	Tyr Leu Ala 230	His	Phe	Phe Gly Pro 235	Gly	Ala Ala	Arg Arg 240
Phe Leu Thr	Thr Gly Gin	Asn	G1 u	Leu Ala Ala	Thr	His Phe	Pro Lys

245 250 255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro 260 265270

Lys Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala 275 280285

- 113 035959

His Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290 295 <210> 137 <211> 299 <212> PRT <213> His-Tag <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V и S232 плюс SMAP-29 и His-метка <400> 137

Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys 15 1015

Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser 20 2530

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gin Leu Gin

4045

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

165 170175

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

180 185190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

- 114 035959

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg Arg

225 230 235240

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

275 280285

His Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290295 <210> 138 <211> 299 <212> PRT <213> His-Tag <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M и A160Tplus SMAP-29 и His-метка <400> 138

Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Vai Lys

1015

Lys Tyr Gly Pro Thr Vai Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser 20 2530

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Cys Gin Leu Gin

4045

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140

- 115 035959

lie Glu Ser Ala 145	Phe Asp 150	Tyr	Glu Met	Lys	Ala 155	Lys	Thr Ser	Ser	Ala 160
Thr Gly Trp Phe	Gin Phe	Leu	Thr Gly	Thr	T rp	Lys	Thr Met	lie	G1 u

165

170

175

Asn

Tyr

Gly

Met

180

Lys

Tyr

Gly

Vai

Leu

185

Thr

Asp

Pro

Thr

Gly 190

Thr

Leu

Arg

Lys

Asp 195

Pro

Arg lie

Ser

Ala 200

Leu

Met

Gly

Ala

Glu

205

Leu lie

Lys

G1 u

Asn

210

Met

Asn lie

Leu

Arg 215

Pro

Vai

Leu

Lys

Arg 220

Glu

Pro

Thr

Asp

Thr Asp Leu 225	Tyr Leu	Ala 230	His	Phe Phe Gly Pro 235	Gly Vai	Al a	Arg	Arg 240
Phe Leu Thr	Thr Gly	Gin	Asn	G1 u Leu Al a Al a	Thr His	Phe	Pro	Lys

245

250

255

Glu

Ala

Gin

Ala 260

Asn

Pro

Thr lie

Phe 265

Tyr

Asn

Lys

Asp

Gly 270

Ser

Pro

Lys

Thr lie

275

G1 n

Glu

Vai

Tyr

Asn

280

Leu

Met

Asp

Gly

Lys 285

Vai

Al a

Al a

His

Arg 290

Lys

Leu

Glu

His

His

295

His

His

His

His <210>

<211>

<212>

<213>

139

299

PRT искусственная последовательность <220>

<223>

мутированный Hi зметка

KZ144 C

C14S, C50S,

I122M и

A160Tplus SMAP-29 И <400>

139

Met 1	Arg Gly	Leu	Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie	Ala	His	Gly	Vai 15	Lys
5	10
Lys	Tyr Gly	Pro 20	Thr Vai	Leu Arg lie lie Arg 25	lie	Ala	Gly 30	Gly	Ser
Lys	Vai Leu 35	Arg	Lys Gly	Asp Arg Gly Asp Glu 40	Vai	Ser 45	G1 n	Leu	G1 n
Thr	Leu Leu	Asn	Leu Cys	Gly Tyr Asp Vai Gly	Lys	Pro	Asp	Gly	lie

- 116 035959

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

165 170175

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

180 185190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg

225 230 235240

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

275 280285

His Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290295 <210> 140 <211> 299 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S, C23S и c50Splus SMAP-29 и His-метка

117 035959 <400> 140

Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys 15 1015

Lys Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser 20 2530

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gin Leu Gin

4045

Thr Leu Leu Asn Leu Ser Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp Phe Gin

Phe Leu Thr

Gly

Thr 170

T rp

Lys

Thr Met

lie 175

Glu

165

Asn

Tyr

Gly

Met

Lys

Tyr

Gly

Val

Leu

Thr

Asp

Pro

Thr

Gly

Ala

Leu

180 185 190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg

225 230 235240

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

- 118 035959

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

275 280 285

His Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290 295 <210> 141 <211> 299 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и c50Splus SMAP-29 и His-метка <400> 141

Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Vai Lys

1015

Lys Tyr Gly Pro Thr Vai Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser 20 2530

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin

4045

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

165 170175

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

180 185190

- 119 035959

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg Ari

225 230 23524i

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

275 280285

His Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290295 <210> 142 <211> 299 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206N, S232T, I122M, A160T, C14S и c50Splus SMAP-29 и His-метка <400> 142

Met Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Vai Lys

1015

Lys Tyr Gly Pro Thr Vai Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser 20 2530

Lys Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin

4045

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie 50 5560

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn 65 70 7580

Ser Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 85 9095

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110

- 120 035959 lie Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai 115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser 130 135140

lie Glu Ser 145	Al a	Phe Asp 150	Tyr Glu	Met Lys Ala 155	Lys	Thr	Ser	Ser	Ala 160
Thr Gly Trp	Phe	Gin Phe	Leu Thr	Gly Thr Trp	Lys	Thr	Met	lie	Glu

165 170 175

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu

180 185190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Asn Ala Arg Arg

225 230 235240

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

275 280285

His Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290295 <210> 143 <211> 298 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S и C50S plus SMAP-29 и His-метка, без Met <400> 143

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Vai Lys Lys 15 10 15

Tyr Gly Pro Thr Vai Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser Lys 20 25 30

Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin Thr

- 121 035959

4045

Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie Phe 50 5560

Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn Ser 65 70 7580

Leu Asp Ser Asp Gly lie Vai Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 9095

Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro Thr

100 105110

Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai Glu

115 120125

Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser lie

130 135140

Glu ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr ser ser Ala Thr

145 150 155160

Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu Asn

165 170175

Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg

180 185190

Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys Glu

195 200205

Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr

210 215220

Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg Phe

225 230 235240

Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu

245 250255

Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys

260 265270

Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala His

275 280285

Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290295 <210> 144

- 122 035959 <211> 298 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V и S232 plus SMAP-29 и His-метка без Met <400> 144

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys Lys

1015

Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser Lys 20 2530

Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gin Leu Gin Thr 35 4045

Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie Phe 50 5560

Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn Cys 65 70 7580

Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 9095

Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro lie

100 105110

Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu

115 120125

Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser lie

130 135140

Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr

145 150 155160

Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu Asn

165 170175

Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu Arg

180 185190

Lys

Asp

Pro 195

Arg lie

Ser

Ala Leu Met 200

Gly

Al a

Glu

Leu 205

lie

Lys

Glu

Asn

Met

Asn

lie Leu

Arg

Pro Val Leu

Lys

Arg

Glu

Pro

Thr

Asp

Thr

210 215 220

Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg Phe

225 230 235240

- 123 035959

Leu Thr Thr Gly Gln Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu

245 250255

Ala Gln Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys

260 265270

Thr lie Gln Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His

275 280285

Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290295 <210> 145 <211> 298 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M и A160Tplus SMAP-29 и His-метка, без Met <400> 145

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys Lys 15 1015

Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser Lys 20 2530

Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gln Leu Gln Thr

4045

Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie Phe 50 5560

Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gln Val Val Lys Phe Gln Lys Asp Asn Cys 65 70 7580

Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 9095

Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro lie

100 105110

Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu

115 120125

Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gln Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser lie

130 135140

Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr

145 150 155160

- 124 035959

Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu Asn

165 170175

Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg

180 185190

Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys Glu

195 200205

Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr

210 215220

Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Vai Ala Arg Arg Phe

225 230 235240

Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu

245 250255

Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys

260 265270

Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala His

275 280285

Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290295 <210> 146 <211> 298 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S, C50S, I122M и A160Tplus SMAP-29 и His-метка, без Met <400> 146

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Vai Lys Lys

1015

Tyr Gly Pro Thr Vai Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser Lys 20 2530

Vai Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Vai Ser Gin Leu Gin Thr

4045

Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Vai Gly Lys Pro Asp Gly lie Phe 50 5560

Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Vai Vai Lys Phe Gin Lys Asp Asn Ser 65 70 7580

125 035959

Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 9095

Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro Thr

100 105110

Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu

115 120125

Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser lie

130 135140

Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr

145 150 155160

Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu Asn

165 170175

Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg

180 185190

Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys Glu

195 200205

Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr

210 215220

Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg Phe

225 230 235240

Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu

245 250255

Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys

260 265270

Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His

275 280285

Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290295 <210> 147 <211> 298 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c C14S, C23S и c50Splus SMAP-29 и His-метка, без Met <400> 147

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys Lys

- 126 035959

Tyr

Gly

Pro

Thr 20

Vai

Leu

Arg lie lie 25

Arg lie

Ala

Gly Gly 30

Ser

Lys

Vai

Leu

Arg 35

Lys

Gly

Asp

Arg

Gly 40

Asp

G1 u

Vai

Ser

G1 n 45

Leu

G1 n

Thr

Leu

Leu 50

Asn

Leu

Ser

Gly

Tyr 55

Asp

Vai

Gly

Lys

Pro 60

Asp

Gly lie

Phe

Gly 65

Asn

Asn

Thr

Phe

Asn 70

G1 n

Vai

Vai

Lys

Phe 75

G1 n

Lys

Asp

Asn

Ser 80

Leu

Asp

Ser

Asp

Gly 85 lie

Vai

Gly

Lys

Asn 90

Thr

T rp

Ala

G1 u

Leu 95

Phe

Ser

Lys

Tyr

Ser

100

Pro

Pro lie

Pro

Tyr 105

Lys

Thr lie

Pro

Met

110

Pro

Thr

Ala

Asn

Lys 115

Ser

Arg

Al a

Al a

Al a 120

Thr

Pro

Vai

Met

Asn

125

Ala

Vai

Glu

Asn

Ala 130

Thr

Gly

Vai

Arg

Ser

135

Gin

Leu

Leu

Leu

Thr

140

Phe

Ala

Ser lie

Glu

145

Ser

Ala

Phe

Asp

Tyr 150

Glu lie

Lys

Al a

Lys 155

Thr

Ser

Ser

Ala

Thr

160

Gly

T rp

Phe

G1 n

Phe

165

Leu

Thr

Gly

Thr

T rp 170

Lys

Thr

Met lie

Glu

175

Asn

Tyr

Gly

Met

Lys 180

Tyr

Gly

Vai

Leu

Thr

185

Asp

Pro

Thr

Gly

Ala

190

Leu

Arg

Lys

Asp

Pro

195

Arg lie

Ser

Al a

Leu

200

Met

Gly

Ala

Glu

Leu

205 lie

Lys

Glu

Asn

Met

210

Asn lie

Leu

Arg

Pro

215

Vai

Leu

Lys

Arg

Glu

220

Pro

Thr

Asp

Thr

Asp 225

Leu

Tyr

Leu

Al a

His

230

Phe

Phe

Gly

Pro

Gly 235

Ala

Ala

Arg

Arg

Phe 240

Leu

Thr

Thr

Gly

Gin

245

Asn

Glu

Leu

Al a

Al a 250

Thr

His

Phe

Pro

Lys 255

Glu

Ala

Gin

Ala

Asn

260

Pro

Ser lie

Phe

Tyr 265

Asn

Lys

Asp

Gly

Ser

270

Pro

Lys

Thr lie

Gin

G1 u

Vai

Tyr

Asn

Leu

Met

Asp

Gly

Lys

Vai

Ala

Ala

His

- 127 035959

275 280 285

Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290 295 <210> 148 <211> 298 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206V, S232T, I122M, A160T, C14S и c50Splus SMAP-29 и His-метка, без Met <400> 148

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys Lys

1015

Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser Lys 20 2530

Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Ser Gin Leu Gin Thr 35 4045

Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie Phe 50 5560

Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn Ser 65 70 7580

Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu Phe 85 9095

Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro lie

100 105110

Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu

115 120125

Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser lie

130 135140

Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu Met Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala Thr

145 150 155160

Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu Asn

165 170175

Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Thr Leu Arg

180 185190

Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys Glu

195 200205

- 128 035959

Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp Thr

210 215220

Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Val Ala Arg Arg Phe

225 230 235240

Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys Glu

245 250255

Ala Gin Ala Asn Pro Thr lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro Lys

260 265270

Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Val Ala Ala His

275 280285

Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290295 <210> 149 <211> 298 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> мутированный KZ144 c T82I, A206N, S232T, I122M, A160T, C14S и C50S plus SMAP-29 и His-метка, без Met <400> 149

Arg Gly Leu Arg Arg Leu Gly Arg Lys lie Ala His Gly Val Lys Lys

1015

Tyr Gly Pro Thr Val Leu Arg lie lie Arg lie Ala Gly Gly Ser Lys 20 2530

Val	Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp	G1 u	Val	Ser Gin Leu 45	G1 n	Thr
35	40
Leu	Leu Asn Leu Cys Gly Tyr	Asp Val	Gly	Lys	Pro Asp Gly	lie	Phe

55 60

Gly Asn Asn 65	Thr	Phe	Asn Gin Val Val 70	Lys	Phe 75	Gin	Lys	Asp Asn	Ser 80
Leu Asp Ser	Asp	Gly	lie Val Gly Lys	Asn	Thr	T rp	Ala	Glu Leu	Phe

90 95

Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro lie

100 105110

Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Met Asn Ala Val Glu

115 120125

- 129 035959

Asn Ala

Thr

Gly

Vai

Arg

Ser 135

Gin

Leu

Leu

Leu

Thr 140

Phe

Al a

Ser

lie

130

G1 u

Ser

Al a

Phe

Asp

Tyr

Glu

Met

Lys

Al a

Lys

Thr

Ser

Ser

Al a

Thr

145

150

155

160

Gly

T rp

Phe

G1 n

Phe

165

Leu

Thr

Gly

Thr

T rp 170

Lys

Thr

Met lie

Glu

175

Asn

Tyr

Gly

Met

Lys 180

Tyr

Gly

Vai

Leu

Thr

185

Asp

Pro

Thr

Gly

Thr

190

Leu

Arg

Lys

Asp

Pro

195

Arg lie

Ser

Al a

Leu

200

Met

Gly

Al a

Glu

Leu

205 lie

Lys

Glu

Asn Met

Asn

lie

Leu Arg Pro 215

Vai

Leu

Lys Arg

Glu 220

Pro

Thr

Asp

Thr

210

Asp

Leu

Tyr

Leu

Ala His Phe

Phe

Gly

Pro Gly

Asn

Al a

Arg

Arg

Phe

225

230

235

240

Leu

Thr

Thr

Gly

Gin

245

Asn

Glu

Leu

Al a

Al a 250

Thr

Hi s

Phe

Pro

Lys 255

Glu

Al a

Gin

Al a

Asn

260

Pro

Thr lie

Phe

Tyr 265

Asn

Lys

Asp

Gly

Ser

270

Pro

Lys

Thr lie

Gin

275

G1 u

Vai

Tyr

Asn

Leu

280

Met

Asp

Gly

Lys

Vai

285

Al a

Al a

Hi s

Arg

Lys 290

Leu

G1 u

Hi s

Hi s

Hi s 295

Hi s

Hi s

Hi s <210>

<211>

<212>

<213>

150

190

PRT искусственная последовательность <220>

<223>

KZ144 фрагмент 71-260 c Y75A <400>

150

Pro

Arg

Vai

Asp

Pro

Al a

Arg

Tyr

lie

Pro

Ala Lys 5

Thr

lie

Pro

Met 10

Pro

Thr

Al a

Asn

Lys 15

Ser

Al a

Al a 20

Thr Pro

Vai

Met

Asn 25

Al a

Vai

Glu

Asn

Al a 30

Thr

Gly

Ser 35

G1 n

Leu Leu

Leu

Thr 40

Phe

Al a

Ser

lie

Glu 45

Ser

Al a

Phe

Glu

lie

Lys Ala

Lys

Thr

Ser

Ser

Al a

Thr

Gly

T rp

Phe

Gin

- 130 035959

50

55

60

Phe

Leu

Thr

Gly

Thr

Trp

Lys

Thr

Met

lie

Glu

Asn

Tyr

Gly

Met Lys

65

70

75

80

Tyr

Gly

Vai

Leu

Thr

Asp

Pro

Thr

Gly

Ala

Leu

Arg

Lys

Asp

Pro Arg

lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu 100	Leu 105	lie	Lys	Glu	Asn Met 110	Asn	lie
Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu	Pro	Thr	Asp	Thr	Asp Leu	Tyr	Leu

115

120

125

Ala	His 130	Phe	Phe	Gly	Pro	Gly Ala Ala Arg Arg Phe	Leu	Thr	Thr	Gly
135	140
G1 n	Asn	G1 u	Leu	Ala	Ala	Thr	His Phe Pro Lys Glu	Ala	G1 n	Ala	Asn

145

150

155

160

Pro

Ser lie

Phe

Tyr 165

Asn

Lys

Asp

Gly

Ser

170

Pro

Lys

Thr lie

G1 n 175

G1 u

Vai

Tyr

Asn

Leu

180

Met

Asp

Gly

Lys

Vai

185

Ala

Al a

His

Arg

Lys 190 <210>

<211>

<212>

<213>

151

299

PRT искусственная последовательность <220>

<223>

KZ144 plus SMAP-29 и

His-метка <400>

151

Met 1

Arg

Gly

Leu

Arg 5

Arg

Leu

Gly

Arg

Lys 10 lie

Ala

His

Gly

Vai 15

Lys

Lys

Tyr

Gly

Pro 20

Thr

Vai

Leu

Arg lie 25 lie

Arg lie

Ala

Gly 30

Gly

Ser

Lys

Vai

Leu 35

Arg

Lys

Gly

Asp

Arg 40

Gly

Asp

Glu

Vai cys 45

Gin

Leu

Gin

Thr	Leu 50	Leu	Asn	Leu Cys	Gly 55	Tyr	Asp	Vai	Gly	Lys 60
Phe	Gly	Asn	Asn	Thr	Phe	Asn	Gin	Vai	Vai	Lys	Phe

Pro

Gin

Asp

Gly lie

Lys

Asp

Asn 80 cys

Leu

Asp

Ser

Asp 85

Gly lie

Vai

Gly

Lys 90

Asn

Thr

T rp

Ala

G1 u 95

Leu

- 131 035959

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Met Pro

100 105110

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Vai Met Asn Ala Vai

115 120125

Glu Asn Ala Thr Gly Vai Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

130 135140 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

145 150 155160

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Met lie Glu

165 170175

Asn Tyr Gly Met Lys Tyr Gly Vai Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

180 185190

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Met Gly Ala Glu Leu lie Lys

195 200205

Glu Asn Met Asn lie Leu Arg Pro Vai Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

210 215220

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg

225 230 235240

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

245 250255

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

260 265270

Lys Thr lie Gin Glu Vai Tyr Asn Leu Met Asp Gly Lys Vai Ala Ala

275 280285

His Arg Lys Leu Glu His His His His His His

290295 <210> 152 <211> 256 <212> PRT <213> искусственная последовательность <220>

<223> KZ144 без N-концевого метионина, с селенометионином вместо остатков метионина <220>

<221> прочий_признак <222> (79)..(79) <223> Хаа является селенометионином

- 132 035959 <220>

<221> прочий_признак <222> (93)..(93) <223> Хаа является селенометионином <220>

<221> прочий_признак <222> (142)..(142) <223> Хаа является селенометионином <220>

<221> прочий_признак <222> (148)..(148) <223> Хаа является селенометионином <220>

<221> прочий_признак <222> (170)..(170) <223> Хаа является селенометионином <220>

<221> прочий_признак <222> (179)..(179) <223> Хаа является селенометионином <220>

<221> прочий_признак <222> (250)..(250) <223> Хаа является селенометионином <400> 152

Lys Val Leu Arg Lys Gly Asp Arg Gly Asp Glu Val Cys Gin Leu Gin 15 1015

Thr Leu Leu Asn Leu Cys Gly Tyr Asp Val Gly Lys Pro Asp Gly lie 20 2530

Phe Gly Asn Asn Thr Phe Asn Gin Val Val Lys Phe Gin Lys Asp Asn

4045

Cys Leu Asp Ser Asp Gly lie Val Gly Lys Asn Thr Trp Ala Glu Leu 50 5560

Phe Ser Lys Tyr Ser Pro Pro lie Pro Tyr Lys Thr lie Pro Xaa Pro 65 70 7580

Thr Ala Asn Lys Ser Arg Ala Ala Ala Thr Pro Val Xaa Asn Ala Val 85 9095

Glu Asn Ala Thr Gly Val Arg Ser Gin Leu Leu Leu Thr Phe Ala Ser

100 105110 lie Glu Ser Ala Phe Asp Tyr Glu lie Lys Ala Lys Thr Ser Ser Ala

115 120125

Thr Gly Trp Phe Gin Phe Leu Thr Gly Thr Trp Lys Thr Xaa lie Glu

130 135140

Asn Tyr Gly Xaa Lys Tyr Gly Val Leu Thr Asp Pro Thr Gly Ala Leu

145 150 155160

Arg Lys Asp Pro Arg lie Ser Ala Leu Xaa Gly Ala Glu Leu lie Lys

165 170175

Glu Asn Xaa Asn lie Leu Arg Pro Val Leu Lys Arg Glu Pro Thr Asp

180 185190

Thr Asp Leu Tyr Leu Ala His Phe Phe Gly Pro Gly Ala Ala Arg Arg

195 200205

Phe Leu Thr Thr Gly Gin Asn Glu Leu Ala Ala Thr His Phe Pro Lys

210 215220

Glu Ala Gin Ala Asn Pro Ser lie Phe Tyr Asn Lys Asp Gly Ser Pro

225 230 235240

Lys Thr lie Gin Glu Val Tyr Asn Leu Xaa Asn lie Leu Arg Pro Val

Claims (14)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум 90% идентичность с последовательностью SEQ ID NO: 1, в которой SEQ ID NO: 1 отличается тем, что

   - 133 035959

   X1 является любой аминокислотой, в частности М, или отсутствует;

   Х14 является любой аминокислотой, предпочтительно S, R или N, более предпочтительно S или R;

   Х23 является любой аминокислотой, предпочтительно S, R или N, более предпочтительно S;

   Х50 является любой аминокислотой, предпочтительно S, R или N, более предпочтительно S или N;

   Х82 является любой аминокислотой, предпочтительно Т или I;

   Х122 является любой аминокислотой, предпочтительно I или М;

   Х149 является любой аминокислотой, предпочтительно М или Р;

   X154 является любой аминокислотой, предпочтительно L или Т;

   X160 является любой аминокислотой, предпочтительно А или Т;

   X167 является любой аминокислотой, предпочтительно I или L;

   X179 является любой аминокислотой, предпочтительно N или F;

   X180 является любой аминокислотой, предпочтительно М или Е;

   X186 является любой аминокислотой, предпочтительно V или Y;

   Х206 является любой аминокислотой, предпочтительно А, N или V;

   Х212 является любой аминокислотой, предпочтительно Т или N;

   Х224 является любой аминокислотой, предпочтительно Р или Q;

   Х230 является любой аминокислотой, предпочтительно N или Y;

   Х232 является любой аминокислотой, предпочтительно S или Т;

   отличающийся тем, что полипептид расщепляет пептидогликан грамотрицательных бактерий.
2. 2. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что демонстрирует в аминокислотной последовательности, демонстрирующей как минимум 90%-ную идентичность с последовательностью SEQ ID NO: 1 как минимум один из следующего перечня:

   Х14 не является С;

   Х23 не является С;

   Х50 не является С;

   Х82 является I;

   X122 является М;

   X149 является Р;

   X154 является Т;

   X160 является Т;

   X167 является L;

   X179 является F;

   X180 является Е;

   X186 является Y;

   Х206 является N или V;

   Х212 является N;

   Х224 является Q;

   Х230 является Y и/или

   Х232 является Т.
3. 3. Полипептид по п.1 или 2, в котором

   Х14 является S, R или N, более предпочтительно S или R;

   Х23 является S, R или N, более предпочтительно S;

   Х50 является S, R или N, более предпочтительно S или N;

   Х82 является Т или I;

   X122 является I или М;

   X149 является М или Р;

   X154 является L или Т;

   X160 является А или Т;

   X167 является I или L;

   X179 является N или F;

   X180 является М или Е;

   X186 является V или Y;

   Х206 является А, N или V;

   Х212 является Т или N;

   Х224 является Р или Q;

   Х230 является N или Y;

   Х232 является S или Т.
4. 4. Полипептид по пп.2, 3, в котором последовательность, демонстрирующая как минимум 90% идентичность с последовательностью SEQ ID NO: 1, отклоняется от последовательности SEQ ID NO: 1, как определено в пп.2, 3 только в одном или более остатках, выбираемых из X1, Х14, Х23, Х50, Х82, Х122, Х149, Х154, Х160, Х167, Х179, Х180, Х186, Х206, Х212, Х224, Х230 и/или Х232.
5. 5. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что демонстрирует в

   - 134 035959 аминокислотной последовательности последовательность с как минимум 90% идентичностью с последовательностью SEQ ID NO: 1 остаток глутаминовой кислоты в позиции 115.
6. 6. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что содержит последовательность SEQ ID NO: 1.
7. 7. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, в котором X14, Х23 и/или Х50 не являются С.
8. 8. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, в котором SEQ ID NO: 1 представляет собой последовательность, выбираемую из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NOs: 6-49.
9. 9. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что содержит последовательность, выбираемую из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NOs: 6-49.
10. 10. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что содержит как минимум одно удлинение аминокислотной последовательности, выбираемое из группы, состоящей из KRK и SEQ ID NOs: 50-120.
11. 11. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что содержит как минимум одно удлинение аминокислотной последовательности с аминокислотной последовательностью SMAP-29, SEQ ID NO: 76.
12. 12. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что содержит аминокислотную последовательность, демонстрирующую как минимум 91,5% идентичность с аминокислотной последовательностью, выбираемой из любых последовательностей SEQ ID NOs: 121-134, и при этом не содержит ни аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, ни SEQ ID NO: 3, ни SEQ ID NO: 4.
13. 13. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что содержит последовательность, выбираемую из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NOs: 121-134 или содержит последовательность, выбираемую из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NOs: 136-149.
14. 14. Полипептид по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что расщепляет пептидогликан бактерий Pseudomonas и/или Campylobacter.