KR20160055827A - 통증 및/또는 섬유증의 조절에 지방 조직-유래 세포를 사용하는 방법 - Google Patents

통증 및/또는 섬유증의 조절에 지방 조직-유래 세포를 사용하는 방법 Download PDF

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KR20160055827A
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Abstract

본 발명의 측면은 의약 분야, 구체적으로 통증 및/또는 섬유증을 조절하는 것에 대한 지방 조직 및 그의 구성요소의 효과에 관한 것이다.

Description

통증 및/또는 섬유증의 조절에 지방 조직-유래 세포를 사용하는 방법 {METHODS OF USING ADIPOSE TISSUE-DERIVED CELLS IN THE MODULATION OF PAIN AND/OR FIBROSIS}
본 발명의 측면은 의약 분야, 구체적으로 통증의 연구 및 섬유증의 연구, 및 통증 및/또는 섬유증을 조절 및/또는 개선시키는 것에 대한 지방 조직 및 그의 구성요소의 효과에 관한 것이다.
추정상 8천6백만명의 사람들, 또는 전체 미국인들 중 3분의 1은 만성 통증을 앓고 있다. 급성 통증은 종종, 가능한 손상에 대한 신호를 보내도록 촉발되는 정상 감각이며, 만성 통증은 다양하다. 만성 통증은 지속된다. 통증 신호는 신경계에서 수주, 수개월, 심지어 수년 동안 점화되도록 유지된다.
통증의 기원은 특정한 사건, 예컨대 물리적 외상 (예를 들어, 염좌된 배부), 심각한 감염, 또는 통증의 진행 중인 원인, 예를 들어 관절염, 암, 귀 감염일 수 있다. 일부 사람들은 또한 신체 손상의 어떠한 과거 손상 또는 증거의 부재 하에도 만성 통증을 앓고 있다. 흔한 만성 통증 호소증상은 두통, 요통, 암 통증, 관절염 통증, 신경성 통증 (말초 신경 또는 중추 신경계 자체에 대한 손상으로부터 유발된 통증), 및 심인성 통증 (과거 질환 또는 손상으로 인한 것이 아닌 통증, 또는 신경계 내부 또는 외부 손상의 임의의 가시적 징후)을 포함한다.
사람은 2종 이상의 공존하는 만성 통증 상태를 가질 수 있다. 종종, 이들 장애가 공통 원인을 공유하는지의 여부는 명백하지 않다.
경피증은 섬유증 및 만성 통증과 연관된 자가면역 류마티스성 질환이고, 다양한 다른 합병증을 일으킬 수 있다. 전신 경화증 또는 경피증은 피부 및 내부 기관의 미세혈관 이상 및 진행성 섬유증을 특징으로 한다. 경피증을 앓는 개체는 종종 손 침범과 관련된 일상 활동에서의 불능을 호소한다. 경피증 손에 대한 치료적 개입은 섬유증이 아니라 혈관 징후의 치료에 주로 집중되어 왔다.
경피증과 연관된 통증 또는 섬유증에 대한 어떠한 유효 치료도 오늘날 존재하지 않는다. 따라서, 의학 분야에서, 예를 들어 경피증 및 섬유증 및/또는 만성 통증을 특징으로 하는 다른 장애에서 통증을 억제하고 섬유증을 조절하는 개선된 조성물 및 방법이 필요하다.
한 측면에서, 개체에게 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 통증, 섬유증 또는 이들 둘 다를 치료 또는 조절하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 치료 유효량은 상기 통증, 섬유증, 또는 통증과 섬유증의 검출가능한 개선을 일으키기에 충분한 양이다.
또 다른 측면에서, 개체에게 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 비정상적 감각 상태, 예컨대 감각이상, 이질통 및 통각과민을 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 치료 유효량은 상기 통증의 검출가능한 개선을 일으키기에 충분한 양이다.
구체적 실시양태에서, 상기 방법은 통증 완화를 필요로 하는 개체 또는 통증을 앓고 있는 개체를 확인하는 것을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 방법은 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 투여 전에 상기 개체에서 통증의 하나 이상의 제1 수준을 결정하고, 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 투여 후에 상기 개체에서 통증의 하나 이상의 제2 수준을 결정하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 상기 치료 유효량은 상기 통증의 상기 하나 이상의 제2 수준을 통증의 상기 하나 이상의 제1 수준에 비해 감소시킨다.
보다 구체적인 실시양태에서, 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 상기 치료 유효량은 위약의 투여로 인한 개선을 초과하거나 또는 그보다 더 장기간-지속되는, 상기 통증의 검출가능한 개선을 유발한다.
보다 구체적인 실시양태에서, 통증의 상기 하나 이상의 제1 수준 및 통증의 상기 하나 이상의 제2 수준은 통증 평가 척도에 의해 결정된다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 통증 평가 척도는 수치적 통증 강도 척도; 통증 성질 평가 척도; 단순 기술적 통증 강도 척도; 시각 상사 척도; 왕-베이커(Wong-Baker) FACES 통증 등급화 척도; FLACC 척도; CRIES 척도; 또는 COMFORT 척도이다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 방법은 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 투여 전에 상기 개체에서 통증의 하나 이상의 생리학적 지표의 제1 수준을 결정하고, 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 투여 후에 상기 개체에서 통증의 하나 이상의 생리학적 지표의 제2 수준을 결정하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 상기 치료 유효량은 상기 제2 수준을 상기 제1 수준에 비해 감소시킨다.
보다 구체적인 실시양태에서, 통증의 상기 생리학적 지표는 개체에서의 심박수이다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 개체에서의 상기 심박수는 상기 투여 전의 상기 개체에서의 상기 심박수에 비해 상기 투여 후에 낮아진다. 또 다른 보다 구체적인 실시양태에서, 통증의 상기 생리학적 지표는 상기 개체의 수축기압이다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 개체의 상기 수축기압은 상기 투여 전의 상기 개체에서의 상기 수축기압에 비해 상기 투여 후에 낮아진다. 또 다른 보다 구체적인 실시양태에서, 통증의 상기 생리학적 지표는 상기 개체의 확장기압이다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 개체의 상기 확장기압은 상기 투여 전의 상기 개체에서의 상기 확장기압에 비해 상기 투여 후에 낮아진다.
통증을 치료하는 방법의 또 다른 실시양태에서, 상기 통증은 신경병증성 통증이다. 구체적 실시양태에서, 상기 신경병증성 통증은 당뇨병성 신경병증으로 인한 것이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 신경병증성 통증은 상기 개체에서 신경에 대한 손상으로 인한 것이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 신경병증성 통증은 약물로 인한 것이다. 특정의 구체적 실시양태에서, 상기 약물은 백금-함유 항암 약물, 예를 들어 옥살리플라틴, 카르보플라틴 또는 시스플라틴, 또는 또 다른 화학요법 약물, 예컨대 파클리탁셀 또는 빈크리스틴이거나 또는 이를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 신경병증성 통증은 바이러스, 예를 들어 바이러스성 질환, 예컨대 바리셀라 조스터, 포진 (예를 들어, 단순 포진) 또는 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)로 인한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 통증은 방사선 손상, 예를 들어 암 치료의 일부인 방사선 손상으로 인한 것이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 신경병증성 통증은 염증, 예를 들어 신경염증, 신경염으로 인한 것이다.
통증을 치료하는 방법의 또 다른 실시양태에서, 상기 통증은 염증성 통증이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 통증은 골통이다. 구체적 실시양태에서, 상기 골통은 암과 연관되어 있거나 또는 그로 인한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 통증은 암으로 인한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 통증은 외음부통으로 인한 것이거나 또는 그와 연관된 통증, 간질성 방광염으로 인한 것이거나 또는 그와 연관된 통증, 또는 퇴행성 관절 질환, 예컨대 골관절염으로 인한 통증이다. 특정 실시양태에서, 상기 통증은 스테로이드 요법에 대해 비반응성이다. 특정의 다른 실시양태에서, 상기 통증은 비스테로이드성 항염증 요법에 대해 비반응성이다. 특정의 다른 실시양태에서, 상기 통증은 오피오이드 요법에 대해 비반응성이다. 특정의 다른 실시양태에서, 상기 통증은 비-특이적 또는 혼합 뮤/델타 오피오이드 요법에 대해 비반응성이다.
임의의 상기 실시양태의 구체적 실시양태에서, 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 CD31-인 세포를 포함한다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 추가로 CD34+이고, 예를 들어 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 CD31- 및 CD34+이다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 추가로 CD45-이다. 즉, 일부 실시양태에서, 세포는 CD31-, CD34+, CD45-이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 CD146+이다. 일부 실시양태에서, 세포는 CD31-, CD34+, CD45-, CD146+이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 CD45+인 세포를 포함하고, 보다 구체적인 실시양태에서는 CD45+ 및 CD206+이다.
특정 실시양태에서, 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 국부로, 예를 들어 국소로 또는 국부 주사 (피하, 근육내 등)에 의해 투여되도록 제제화된다. 특정의 다른 실시양태에서, 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 전신으로, 예를 들어 정맥내로 또는 동맥내로 또는 림프계를 통해 투여되도록 제제화된다.
바람직한 실시양태는 통증의 조절을 필요로 하는 대상체에게 지방-유래 재생 세포의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 통증을 조절하는 방법을 포함한다. 일부 측면에서, 이들 방법은 상기 대상체를, 통증을 경험하는 개체로서 선택, 확인 또는 분류하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 선택, 확인 또는 분류는 의사 또는 임상 또는 진단 평가에 의해 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 지방-유래 재생 세포의 투여 전에, 그 후에 또는 그 동안에 상기 대상체에서 통증을 결정 또는 측정하는 것을 추가로 포함한다.
다른 실시양태는 섬유증의 조절을 필요로 하는 대상체에게 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 섬유증을 조절하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 대상체를, 섬유증을 경험하거나 또는 섬유화 질환을 갖는 개체로서 선택, 확인 또는 분류하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 선택, 확인 또는 분류는 의사 또는 임상 또는 진단 평가에 의해 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 지방-유래 재생 세포의 투여 전에, 그 후에 또는 그 동안에 상기 대상체에서 또는 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플에서, 섬유증 또는 그의 마커, 예컨대 TNF-알파의 양 또는 수준을 결정 또는 측정하는 것을 추가로 포함한다. 추가 실시양태는 관절의 운동 범위의 개선을 필요로 하는 대상체에게 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 관절의 운동 범위를 개선시키는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 대상체를, 관절 운동성의 손실 또는 관절의 운동 범위의 감소를 경험하는 개체로서 선택, 확인 또는 분류하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 선택, 확인 또는 분류는 의사 또는 임상 또는 진단 평가에 의해 이루어진다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 상기 지방-유래 재생 세포의 투여 전에, 그 후에 또는 그 동안에 상기 대상체의 관절의 운동성 또는 운동 범위를 결정 또는 측정하는 것을 추가로 포함한다. 임의의 상기 언급된 실시양태에서, 상기 지방-유래 재생 세포는 줄기 세포를 포함할 수 있다. 임의의 상기 언급된 실시양태에서, 상기 지방-유래 재생 세포는 전구체 세포를 포함할 수 있다. 임의의 상기 언급된 실시양태에서, 상기 지방-유래 재생 세포는 전구 세포를 포함할 수 있다. 임의의 상기 언급된 실시양태에서, 상기 대상체는 경피증을 가질 수 있다.
정의
본원에 사용된 용어 "약"은 명시된 수치를 지칭하는 경우에, 명시된 수치의 플러스 또는 마이너스 10% 내의 값을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "유래"는 단리되거나 또는 달리 정제된 것을 의미한다. 예를 들어, 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 지방 조직으로부터 단리된 것이다. 용어 "유래"는 조직, 예를 들어 지방 조직으로부터 직접 단리된 세포로부터 대규모 배양된 (예를 들어, 분할하는 세포의 대부분이 3, 4, 5배 또는 그 미만의 세포 배가를 겪는 배양 조건에 놓인) 세포, 또는 1차 단리물로부터 배양 또는 확장된 세포를 포괄하지는 않는다. 따라서, "지방-유래 줄기 및 재생 세포"는 지방 조직으로부터 얻어진 세포를 지칭하며, 여기서 세포는 대규모 배양된 것은 아니다.
본원에 사용된 세포는 특정한 마커가 검출가능한 경우에 그 마커에 대해 "양성"이다. 예를 들어, 지방-유래 재생 세포는, 예를 들어 CD73이 지방-유래 줄기 또는 재생 세포 상에서 백그라운드보다 (예를 들어, 임의의 주어진 검정에 대해 이소형 대조군 또는 실험 음성 대조군에 비해) 검출가능하게 더 큰 양으로 검출가능한 경우에, CD73에 대해 양성이다. 세포는 또한 마커가 그 세포를 적어도 1종의 다른 세포 유형과 구별하기 위해 사용될 수 있거나 또는 존재하거나 또는 세포에 의해 발현되는 경우에 세포를 선택 또는 단리하기 위해 사용될 수 있는 경우에, 그 마커에 대해 양성이다.
일부 문맥에서, 용어 "지방 조직"은 지방세포 및 혈관 세포를 비롯한 다수의 세포 유형을 함유하는 조직을 지칭한다. 지방 조직은 성체 줄기 세포 (ASC) 및 내피 전구 및 전구체 세포를 비롯한 다수의 재생 세포 유형을 포함한다. 따라서, 지방 조직은 지방을 축적하는 결합 조직을 비롯한 지방을 지칭한다.
일부 문맥에서, 용어 "지방 조직의 단위"는 개별 또는 측정가능한 양의 지방 조직을 지칭한다. 지방 조직의 단위는 단위의 중량 및/또는 부피를 결정함으로써 측정될 수 있다. 본원의 개시내용을 참조하여, 지방 조직의 단위는 대상체로부터 제거되는 지방 조직의 전체 양, 또는 대상체로부터 제거되는 지방 조직의 전체 양 미만인 양을 지칭할 수 있다. 따라서, 지방 조직의 단위는 지방 조직의 또 다른 단위와 조합되어, 개별 단위의 합계인 중량 또는 부피를 갖는 지방 조직의 단위를 형성할 수 있다.
일부 문맥에서, 용어 "부분"은 전체 미만인 물질의 양을 지칭한다. 부차 부분은 50% 미만인 양을 지칭하고, 주요 부분은 50% 초과의 양을 지칭한다. 따라서, 대상체로부터 제거되는 지방 조직의 전체 양 미만인 지방 조직의 단위는 제거되는 지방 조직의 일부분이다.
본원에 사용된 "재생 세포"는 기관, 조직 또는 생리적 단위 또는 시스템의 구조 또는 기능의 완전 또는 부분 재생, 복구 또는 치환을 일으키거나 또는 그에 기여하여 치료적, 구조적 또는 미용적 이익을 제공하는, 본원에 개시된 실시양태의 시스템 및 방법을 사용하여 얻어진 임의의 이종 또는 동종 세포를 지칭한다. 재생 세포의 예는 ASC, 내피 세포, 내피 전구체 세포, 내피 전구 세포, 대식세포, 섬유모세포, 혈관주위세포, 평활근 세포, 지방전구세포, 분화 또는 탈분화 지방세포, 각질세포, 단능 및 다능 전구 및 전구체 세포 (및 그의 자손), 및 림프구를 포함한다.
일부 문맥에서, 용어 "전구 세포"는 하나 이상의 특이적 기능을 수행하고 자가-재생 능력이 제한되거나 없는 1종 이상의 세포 유형으로 분화하는 능력으로 단능, 이능 또는 다능인 세포를 지칭한다. 본원에 개시된 전구 세포의 일부는 만능일 수 있다.
일부 문맥에서, 용어 "지방 조직-유래 세포"는 성숙한 지방세포 및 결합 조직으로부터 활성 세포 구성요소를 분리하기 위해 프로세싱된, 지방 조직으로부터 추출된 세포를 지칭한다. 분리는 부분 또는 완전 분리일 수 있다. 즉, "지방 조직-유래 세포"는 일부 지방세포 및 결합 조직을 함유하거나 함유하지 않을 수 있고, 응집체 또는 부분 탈응집된 형태 (예를 들어, 세포외 매트릭스에 의해 연결되는 2개 이상의 세포를 포함하는 혈액 또는 림프관의 단편)로 존재하는 일부 세포를 함유하거나 함유하지 않을 수 있다. 이러한 분획은 "지방 조직-유래 세포", "지방-유래 세포", "지방-유래 재생 세포" 또는 "ADC"로서 본원에 언급되어 있다. 전형적으로, ADC는 지방 조직으로부터 세포를 세척하고 분리함으로써 얻어진 세포의 펠릿을 지칭한다. 펠릿은 전형적으로 세포의 현탁액을 원심분리하여 세포가 원심분리 용기의 바닥에 응집되도록 하거나 또는 대안적으로 세포를 상이한 방식으로 농축시킴으로써 얻어진다.
도 1은 하기 실시예 1에 기재된 바와 같은, 환자의 손가락에 지방-유래 세포의 주사 부위를 마킹하는 것을 나타내는 사진이다.
도 2는 하기 실시예 1에 기재된 바와 같은, 절개부를 주사 부위에 만드는 것을 나타내는 사진이다.
도 3은 하기 실시예 1에 기재된 바와 같은, 주사 부위에 대한 지방-유래 세포의 전달을 나타내는 사진이다.
도 4는 하기 실시예 1에 기재된 바와 같은, 치료 시점 및 치료 후 2개월에서 환자의 레이노(Raynaud) 중증도 점수를 나타내는 그래프이다.
도 5는 레이노 중증도 점수의 >30% 악화, 레이노 중증도 점수의 10-33% 악화, 불변하는 레이노 중증도 점수 (-10% 내지 +10%), 개선된 레이노 중증도 점수 (10%-33%) 및 레이노 중증도 점수의 주요 개선 (>33%)을 나타내는 연구 환자의 수를 나타내는 막대 그래프이다.
도 6은 하기 실시예 1에 기재된 바와 같은, 기준선 (치료 시점) 및 치료 후 2개월에서의 환자의 경피증 건강 평가 설문지 (SHAQ) 점수를 나타내는 그래프이다.
도 7은 SHAQ 점수의 >30% 악화, SHAQ 점수의 10-33% 악화, 불변하는 SHAQ 점수 (-10% 내지 +10%), 개선된 SHAQ 점수 (10%-33%) 및 SHAQ 점수의 주요 개선 (>33%)을 나타내는 연구 환자의 수를 나타내는 막대 그래프이다.
도 8은 하기 실시예 1에 기재된 바와 같은, 치료 시점 및 치료 후 2개월에서의 환자의 코친(Cochin) 점수를 나타내는 그래프이다.
도 9는 하기 실시예 1에 기재된 바와 같은, 치료 후 2개월에 타이핑과 연관된 운동을 묘사하는 연구 환자의 손의 사진이다.
도 10은 하기 실시예 1에 기재된 바와 같은, 치료 후 2개월에 가위 조작에 사용되는 손 운동을 묘사하는 연구 환자의 손의 사진이다.
도 11은 하기 실시예 1에 기재된 바와 같은, 손 통증 (시각 상사 척도 "VAS"); 코친 손 기능 척도 ("CHFS"), 레이노 상태 점수 ("RCS"); 및 경피증 건강 평가 설문지 ("SHAQ")에 대한 기준선, 2개월 추적, 6개월 추적 점수를 나타내는 그래프이다.
통증을 치료하는 방법
지방-유래 줄기 및 재생 세포, 예를 들어 본원 및 미국 특허 번호 7,390,484에 기재되고 그에서 제조된 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 투여를 포함하는, 통증을 치료하는 방법이 본원에 기재되어 있다.
통증은 일반적으로 실제 또는 잠재적 조직 손상과 연관되어 있거나 또는 이러한 손상의 관점에서 기재된 불쾌한 감각 및 정서적 경험으로서 정의된다. 문헌 [Merskey H, Bogduk N, eds., Classification of Chronic Pain, International Association for the Study of Pain (IASP) Task Force on Taxonomy, IASP Press: Seattle, 209-214, 1994]. 통증의 지각은 매우 주관적이기 때문에, 통증은 효과적으로 진단 및 치료하기에 가장 어려운 병리상태 중 하나이다. 통증은 자극 (예를 들어, 화염, 예기 또는 둔기 충격, 또는 돌발적 허혈성 사건에 대한 노출) 직후에 유발되는 것을 의미하는 급성, 또는 비교적 빈번한 간격으로 지속 및/또는 재발되는 것을 의미하는 만성일 수 있다.
한 측면에서, 통증을 갖는 개체에게 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체를 치료하는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 치료 유효량은 상기 통증 또는 상기 통증과 연관된 증상의 검출가능한 개선을 일으키기에 충분한 양이다. 한 실시양태에서, 환자는 통증의 억제 또는 치료를 필요로 하는 것으로서 확인된다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 투여 전에 상기 개체에서 통증의 제1 수준을 결정하고, 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 투여 후에 상기 개체에서 통증의 제2 수준을 결정하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 상기 치료 유효량은 상기 통증의 상기 제2 수준을 통증의 상기 제1 수준에 비해 감소시킨다.
특정 실시양태에서, 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 치료 유효량은, 투여 시에, 위약의 투여에 비해 개체에서 통증의 더 크거나 또는 더 장기간-지속되는 개선을 유발한다.
특정 실시양태에서, 통증은 침해수용성 통증이다. 침해수용성 통증은 유해 자극, 예컨대 염증성 화학적 매개체가 조직 손상, 질환 또는 염증 후에 방출되는 경우에 전형적으로 도출되며, 손상 부위에서 감각 수용체 (침해수용체)가 정상적으로 기능함으로써 검출된다. 예를 들어, 문헌 [Koltzenburg, M. Clin. J. of Pain 16:S131-S138 (2000)]을 참조한다. 침해수용성 통증의 원인의 예는 화학 또는 열 화상, 피부의 창상 및 좌상, 골관절염, 류마티스 관절염, 건염 및 근막 통증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 침해수용성 통증은 염증에 의해 자극된다.
특정의 다른 실시양태에서, 통증은 신경병증성 통증이다. 신경병증성 통증은 신경계의 손상 또는 장애를 반영하며, "신경계에서의 원발성 병변 또는 기능장애에 의해 개시되거나 또는 그로 인한 통증"으로서 정의되어 왔다. 문헌 [Merskey H, Bogduk N, eds., Classification of Chronic Pain, International Association for the Study of Pain (IASP) Task Force on Taxonomy, IASP Press: Seattle, 209-214, 1994]. 구체적 실시양태에서, 신경병증성 통증은 말초 뉴런의 변경된 흥분성을 특징으로 한다. 다른 구체적 실시양태에서, 신경병증성 통증은 당뇨병성 신경병증, 포진후 신경통, 삼차 신경통, 염증 (예를 들어, 신경염증, 신경염)과 연관된 통증, 및 졸증후 통증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 신경병증성 통증은 연속적 에피소드이며, 예를 들어 작열통, 자통, 천자통, 전격통, 전기충격-유사, 날카롭게 찌른 듯함, 쥐어짜는 듯함, 심부 동통 또는 연축성으로서 기재된다. 특정의 다른 실시양태에서, 신경병증성 통증을 갖는 개체는 부분 또는 완전 감각 결핍, 비정상적 또는 생소한 불쾌한 감각 (감각이상), 비-유해 자극으로부터 유발된 통증, 또는 상기 초-역치 자극에 반응하는 통증의 불균형 지각 (통각과민)을 추가로 경험한다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 신경병증성 통증은 복합 부위 통증 증후군 (CRPS)이다. 구체적 실시양태에서, CRPS는 신경 손상의 부재 하에 사지에 이환된다 (제I형 CRPS). 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 제I형 CRPS는 반사 교감신경 이영양증 (RSD)을 포함한다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 RSD는 제I기 RSD 또는 "초기 RSD"이다. 초기 RSD에서, 통증은 손상으로부터 예상되는 것보다 더 중증이며, 이는 작열통 또는 동통 성질을 갖는다. 이는 사지의 의존성, 물리적 접촉 또는 정서적 전복에 의해 증가될 수 있다. 이환 부위는 전형적으로 부종성이 되고, 고체온 또는 저체온일 수 있고, 증가된 손발톱 및 모발 성장을 나타낼 수 있다. 방사선 사진은 초기 골 변화를 나타낼 수 있다. 또 다른 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 RSD는 제II기 RSD 또는 "확립된 RSD"이다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 확립된 RSD는 통증 이외에도, 부종성 조직의 경화; 피부의 다한증과 망상 피반 또는 청색증; 탈모; 손발톱의 굴곡짐, 갈라짐 또는 부서짐; 건성 손의 발생; 및/또는 피부 및 피하 조직의 주목할만한 위축을 포함한다. 통증은 우세한 특색으로 남아있다. 또 다른 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 RSD는 제III기 RSD 또는 "말기 RSD"이다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 말기 RSD는 근위부에 퍼진 통증; 비가역적 조직 손상; 얇고 번들거리는 피부; 및 방사선 사진 상의 가시적인 골 탈염을 포함한다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 신경병증성 통증은 약물, 예를 들어 화학요법 약물 또는 항암 약물로 인한 통증이다. 구체적 실시양태에서, 약물은 백금-함유 약물, 탁산, 에포틸론, 식물 알칼로이드 또는 탈리도미드이거나 또는 이를 포함한다. 보다 구체적인 실시양태에서, 약물은 보르테조밉, 카르보플라틴 (예를 들어, 파라플라틴(PARAPLATIN)®), 시스플라티눔 (예를 들어, 플라티놀(PLATINOL)®), 시타라빈 (예를 들어, 시토사르(CYTOSAR)®, Ara-C), 도세탁셀 (예를 들어, 탁소테레(TAXOTERE)®), 에토포시드/VP-16 (베페시드(VEPESID)®), 겜시타빈 (예를 들어, 겜자르(GEMZAR)®), 할라벤(HALAVEN)® (에리불린 메실레이트), 헥사메틸멜라민 (예를 들어, 헥살린(HEXALIN)®), 파클리탁셀 (예를 들어, 탁솔(TAXOL)®; 아브락산(ABRAXANE)™), 옥살리플라틴 (예를 들어, 엘록사틴(ELOXATIN)®), 수라민, 탈리도미드 (예를 들어, 탈로미드(THALOMID)®), 빈블라스틴 (예를 들어, 벨반(VELBAN)®; 알카반(ALKABAN)-AQ®), 빈크리스틴 (예를 들어, 온코빈(ONCOVIN)®, 빈카사르(VINCASAR) PFS®, 빈크렉스(Vincrex)), 또는 비노렐빈 (나벨빈(NAVELBINE)®)이거나 또는 이를 포함한다.
특정의 다른 구체적 실시양태에서, 약물은 항생제이다. 특정의 다른 실시양태에서, 약물은 스타틴이다.
특정의 다른 구체적 실시양태에서, 약물은 암로디핀 (예를 들어, 노바스크(NORVASC)®, 로트릴(Lotril) 또는 로트렐(Lotrel)), 아토르바스타틴 (예를 들어, 리피토르(LIPITOR)®), 둘록세틴 (예를 들어, 심발타(CYMBALTA)®), 프레가발린 (리리카(LYRICA)®), 알로퓨리놀 (예를 들어, 로퓨림(LOPURIM)®, 질로프림(ZYLOPRIM)®), 아미노디핀베르글레이트, 아미오다론 (예를 들어, 코르데론(CORDERONE)®, 파세론(PACERONE)®), 아미오디핀, 아미트립틸린 (예를 들어, 엘라빌(ELAVIL)™, 엔뎁(ENDEP)™, 바나트립(VANATRIP)™), 메트로니다졸 (예를 들어, 플라질(FLAGYL)®, 메트로겔(METROGEL)™), 니트로푸란토인 (예를 들어, 푸라단틴(FURADANTIN)®, 마크로비드(MACROBID)®, 마크로단틴(MACRODANTIN)®, 니트로 마크로(NITRO MACRO)), 퍼헥실린, 비토린(VYTORIN)®, 시프로플록사신 (예를 들어, 시프로(CIPRO)®, 프로퀸(PROQUIN)®), 디술푸람 (예를 들어, 안타부스(ANTABUSE)), 졸피뎀 (예를 들어, 암비엔(AMBIEN)®), 부스피론 (예를 들어, 부스파르(BUSPAR)), 클로나제팜 (예를 들어, 클로노핌(KLONOPIM), 세베르클론(CEBERKLON), 발팍스(VALPAX)), 알라프라졸람 (예를 들어, 자낙스(XANAX)®), 페닐로인 (딜란틴(DILANTIN)®), 시탈로프람 (예를 들어, 셀렉사(CELEXA)), 둘록세틴 (예를 들어, 심발타(CYMBALTA)®), 벤락사핀 (예를 들어, 에펙소르(EFFEXOR), 에펙소르 XR®), 노르트립틸린 (예를 들어, 아벤틸(AVENTYL) HCL, 파멜로르(PAMELOR)), 세르트랄린 (예를 들어, 졸로프트(ZOLOFT)®), 파록세틴 (예를 들어, 팍실(PAXIL), 팍실 CR®), 아테놀롤 (예를 들어, 테노르민(TENORMIN), 세노르민(SENORMIN)), 페린도프릴 (예를 들어, 아세온(ACEON)), 알타스 (예를 들어, 라미프릴(RAMIPRIL)®), 로사르탄 (예를 들어, 코자(COZAAR)®, 하이자(HYZAAR)®), 히드랄라진 (예를 들어, 아프레솔린(APRESOLINE)®), 히드로클로로티아지드 (예를 들어, 히드로디우릴(HYDRODIURIL)™, 에지드(EZIDE)™, 히드로-파(HYDRO-PAR)™, 마이크로지드(MICROZIDE)™), 리시노프릴 (예를 들어, 프리니빌(PRINIVIL)®, 제스트릴(ZESTRIL)®), 텔미사르탄 (예를 들어, 미카르디스(MICARDIS)™), 퍼헥실린, 프라조신 (예를 들어, 미니프레스(MINIPRESS)®), 리시노프릴 (예를 들어, 프리니빌®, 제스트릴®), 로바스타틴 (예를 들어, 알토코르(ALTOCOR)®, 메바코르(MEVACOR)®), 카듀엣(CADUET)®, 로수바스타틴 (예를 들어, 크레스토르(CRESTOR)®), 플루바스타틴 (예를 들어, 레스콜(LESCOL)®, 레스콜® XL), 심바스타틴 (예를 들어, 조코르(ZOCOR)®), 세리바스타틴 (예를 들어, 리포베이(LIPOBAY)™), 겜피브로질 (예를 들어, 로피드(LOPID)®), 프라바스타틴 (예를 들어, 프라바콜(PRAVACHOL)®, 프라비가드(PRAVIGARD) PAC™), d4T (스타부딘, 예를 들어 제리트(ZERIT)®), ddC (잘시타빈; 예를 들어 히비드(HIVID)®), ddI (디다노신, 예를 들어 비덱스(VIDEX)® EC), 이소니아지드 (예를 들어, 터비지드(TUBIZID)®), 디아미노디페닐술폰 (DDS, 답손)이거나 또는 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, 신경병증성 통증은 약물, 예를 들어 화학요법 약물 또는 항암 약물로 인한 통증이 아니다. 구체적 실시양태에서, 신경병증성 통증은 백금-함유 약물, 탁산, 에포틸론, 식물 알칼로이드 또는 탈리도미드로 인한 통증이 아니다. 보다 구체적인 실시양태에서, 신경병증성 통증은 보르테조밉, 카르보플라틴 (예를 들어, 파라플라틴®), 시스플라티눔 (예를 들어, 플라티놀®), 시타라빈 (예를 들어, 시토사르®, Ara-C), 도세탁셀 (예를 들어, 탁소테레®), 에토포시드/VP-16 (베페시드®), 겜시타빈 (예를 들어, 겜자르®), 할라벤® (에리불린 메실레이트), 헥사메틸멜라민 (예를 들어, 헥살린®), 파클리탁셀 (예를 들어, 탁솔®; 아브락산™), 옥살리플라틴 (예를 들어, 엘록사틴®), 수라민, 탈리도미드 (예를 들어, 탈로미드®), 빈블라스틴 (예를 들어, 벨반®; 알카반-AQ®), 빈크리스틴 (예를 들어, 온코빈®, 빈카사르 PFS®, 빈크렉스), 또는 비노렐빈 (나벨빈®)으로 인한 통증이 아니다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 CRPS는 신경 손상의 존재 하에 사지에 이환된다 (제II형 CRPS). 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 제II형 CRPS는 작열통을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 CRPS는 교감신경 유지 통증 증후군을 포함한다. 특정 실시양태에서, CRPS의 증상은 통증, 자율신경 기능장애, 부종, 운동 장애, 이영양증, 위축, 작열통, 이질통 (가벼운 접촉으로의 통증)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, CRPS-관련 통증은 팽만 및 관절 압통, 증가된 발한, 온도에 대한 감수성 및/또는 피부의 색 변화를 동반한다.
특정의 다른 구체적 실시양태에서, 신경병증성 통증은 식이 결핍으로 인한 것이거나 또는 그와 관련된 신경병증성 통증이다. 보다 구체적인 실시양태에서, 식이 결핍은 비타민 B12 (코발라민, 시아노코발라민) 결핍이다. 또 다른 보다 구체적인 실시양태에서, 식이 결핍은 비타민 B6 (피리독신, 피리독살 포스페이트) 결핍이다. 또 다른 보다 구체적인 실시양태에서, 식이 결핍은 비타민 B1 (티아민) 결핍이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 식이 결핍으로 인한 신경병증성 통증을 갖는 개체는 비만치료 수술을 받았던 것이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 신경병증성 통증은 알콜중독 또는 통증을 갖는 개체에 의한 알콜의 소비로 인한 것이거나 또는 그와 관련되어 있다.
특정 실시양태에서, 통증은 외음부통으로 인한 것이거나 또는 그와 연관되어 있다. 외음부통은 외음부의 통증, 예를 들어 외음부 또는 질 감염 또는 피부 질환에 의해 설명되지 않는 통증이다. 한 실시양태에서, 외음부통의 통증은 외음부 영역에, 예를 들어 외음부 전정염 또는 전정통과 같이 전정 영역에 국부성이다. 또 다른 실시양태에서, 외음부통의 통증은 음핵, 예를 들어 음핵통으로 확장될 수 있다. 외음부통의 원인의 예는 성교통증, 외음부를 신경지배하는 신경에 대한 손상 또는 자극, 염증에 대한 유전적 소인, 알레르기, 자가면역 장애 (예를 들어, 홍반성 루푸스 또는 쇼그렌 증후군), 감염 (예를 들어, 효모 감염, HPV 또는 박테리아성 질증) 및 신경병증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 외음부통의 예시적인 증상은 외음부, 대음순, 소음순 또는 전정부 상의 또는 그 주위의 미만성 통증 또는 작열감을 제한 없이 포함한다.
특정 실시양태에서, 통증은 간질성 방광염으로 인한 것이거나 또는 그와 연관되어 있다. 방광 통증 증후군으로도 공지된 간질성 방광염은 만성 상태이며, 종종 예를 들어 방광과 연관된 통증 또는 압력, 배뇨와 연관된 통증, 자극성 배뇨, 빈뇨, 절박, 또는 골반에서의 통증 또는 압력이다. 간질성 방광염의 병리상태 및 발병기전은 명백하게 이해되지는 않는다. 그러나, 여러 가능한 원인, 예를 들어 혈관 장애, 자가면역, 염증, 누출성 방광 내층, 비만 세포, 스트레스, 및 유전적, 신경성 및 내분비 원인이 제안되어 왔다. 한 실시양태에서, 간질성 방광염의 진단은, 예를 들어 골반통 절박/빈뇨 (PUF) 환자 조사, 또는 칼륨 감수성 시험으로도 공지된 KCl 시험에 의해 행해질 수 있다.
특정의 다른 실시양태에서, 통증은 내장통이다.
특정의 다른 실시양태에서, 통증은 수술후 통증, 예컨대 수술 동안 초래된 조직에 대한 외상으로부터 유발된 것이다.
특정의 다른 실시양태에서, 통증은 혼합 통증이며, 예를 들어 침해수용성 및 신경병증성 구성요소를 갖는 만성 통증이다. 구체적 실시양태에서, 상기 혼합 통증은 암 통증 또는 요통이다.
특정의 다른 실시양태에서, 통증은 편두통 통증, 또는 두통, 예를 들어 혈관성 두통, 군발성 두통 또는 독성 두통으로부터의 통증이다.
일부 실시양태에서, 통증은 전신 경화증, 또는 경피증, 예를 들어 미만성 또는 전신 경피증으로부터의 것이다. 또 다른 실시양태에서, 통증은 레이노병으로부터의 것이다.
구체적 실시양태에서, 통증과 연관된 상기 증상은 자율신경 기능장애, 운동 개시에 대한 무능, 심약, 진전, 근육 연축, 이상긴장증, 이영양증, 위축, 부종, 강직, 관절 압통, 증가된 발한, 온도에 대한 감수성, 가벼운 접촉 (이질통), 피부에 대한 색 변화, 고체온 또는 저체온, 증가된 손발톱 및 모발 성장, 초기 골 변화, 다한증과 망상 피반 및 청색증, 탈모, 굴곡지거나, 갈라지거나 또는 부서진 손톱, 건성 손, 미만성 골다공증, 비가역적 조직 손상, 얇고 번들거리는 피부, 관절 구축, 및 현저한 골 탈염 중 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 개체에게 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 투여하는 것은 통증의 치료를 위해 제시/사용되는 1종 이상의 약물, 예를 들어 가바펜틴과 연관된 동반 부작용 없이 개체에서 통증의 감소를 유발한다. 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 사용하는 것은 지방-유래 줄기 및 재생 세포가 투여되는 개체에서 통증의 감소를 유발하지만, 상기 개체의 감각 및/또는 운동 협동 결핍을 유발하지는 않는다.
통증 평가 척도
한 실시양태에서, 통증을 갖는 개체에게 투여되는 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 치료 유효량은 개체에서 통증의 검출가능한 감소를 유발하는 양이다. 감소는 개체에게 검출가능하거나, 관찰자에게 검출가능하거나, 또는 이들 둘 다일 수 있다. 본원에 제공된 치료 방법의 특정 실시양태에서, 개체에서의 통증의 수준은 개체에 의해, 예를 들어 의사에 의해 안내된 바와 같이, 또는 예비 치료 후처리의 일부로서, 하나 이상의 개별 통증 척도에 따라 평가된다. 특정의 다른 실시양태에서, 개체에서의 통증의 수준은 관찰자에 의해 하나 이상의 관찰자 통증 척도를 사용하여 평가된다. 지방-유래 줄기 및 재생 세포를 투여하기 전 및 후에 통증의 수준을 방법에 따라 평가하는 경우에, 각각의 평가에 대해 동일한 척도가 바람직하게 사용된다. 개체에서의 통증은 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 투여 전에 1회, 또는 1회 초과, 예를 들어 2, 3, 4 또는 5회 평가되고, 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 투여 후에 1회, 또는 1회 초과, 예를 들어 2, 3, 4 또는 5회 평가될 수 있다.
한 실시양태에서, 개체에서의 통증은 0-10의 수치적 통증 강도 척도에 의해 평가된다. 이러한 척도에서, 0은 통증 없음과 같고, 10은 최악의 통증과 같다. 특정 실시양태, 예를 들어 통증 성질 평가 척도에서, 통증은 하나 초과의 수치 설명어로 예를 들어 통증이 얼마나 "뜨겁게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "강렬하게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "날카롭게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "둔하게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "춥게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "민감하게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "압박하게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "가렵게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "쏘는듯하게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "무감각하게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "얼얼하게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "전기오듯이" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "죄는 듯이" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "고동치게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "퍼지게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "아리게" 느껴지는가에 대해 0-10, 통증이 얼마나 "묵직하게" 느껴지는가에 대해 0-10, 및/또는 통증이 얼마나 "불쾌하게" 느껴지는가에 대해 0-10으로 나누어진다.
또 다른 실시양태에서, 개체에서의 통증은 단순 기술적 통증 강도 척도에 의해 평가된다. 이러한 척도에서, 통증은, 예를 들어 "통증 없음", "경증 통증", "중등 통증", "중증 통증", "매우 중증 통증" 또는 "가능한 최악의 통증"과 같이 기재된다.
또 다른 실시양태에서, 개체에서의 통증은 시각 상사 척도에 의해 평가된다. 시각 상사 척도에서, 개체에게는 수직선으로 이루어진 그래프가 제시되며; 선 중 1개의 말단은 "통증 없음"으로 표지되고, 나머지 말단은 "가능한 최악의 통증"으로 표지되어 있다. 개체에게는 개체에 의해 지각되는 통증의 수준을 나타내는 2개의 말단 사이의 포인트에 선을 마킹하도록 요청된다.
또 다른 실시양태에서, 개체에서의 통증은 왕-베이커 FACES 통증 등급화 척도에 의해 평가된다. FACES 통증 등급화 척도에서, 통증의 수준은 행복 내지 점점 더 불행으로 보이는 일련의 만화 얼굴, 전형적으로 6개의 얼굴에 의해 제시되어 있다. 구체적 실시양태에서, 얼굴에는 "아프지 않음", "매우 약간 아픔", "약간 더 아픔", "훨씬 더 아픔", "완전 많이 아픔" 및 "최악으로 아픔"과 같은 어구가 아래 문자로 되어 있다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 얼굴에는 "통증 없음", "경증이고 신경쓰이는 통증", "계속되고 불편하고 성가신 통증", "괴롭고 비참한 통증", "강렬하고 지독하고 무서운 통증" 및 "가능한 최악이고 견딜 수 없고 극심한 통증"과 같은 어구가, 단독으로 또는 수치 0 내지 10 척도를 동반하여 아래 문자로 되어 있다.
특정 실시양태에서, 개체에서의 통증은 FLACC (얼굴, 하지, 활성, 울음 및 진정) 척도에 의해 평가된다. 구체적 실시양태에서, 각각의 5가지 특징은 예를 들어 0 내지 2로 등급화되며, 여기서 2는 통증을 나타내고, 0은 통증 없음을 나타낸다. 점수는 개별적으로 또는 총계로 사용될 수 있다.
특정의 다른 실시양태에서, 개체에서의 통증은 CRIES (울음, SaO2 (헤모글로빈 포화)를 위한 O2 필요, 증가된 활력 징후 (혈압 및 심박수, 표정 및 수면)) 척도에 의해 평가된다. 구체적 실시양태에서, 각각의 5가지 특징은 예를 들어 0 내지 2로 등급화되며, 여기서 2는 통증을 나타내고, 0은 통증 없음을 나타낸다. 점수는 개별적으로 또는 총계로 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 개체에서의 통증은 각각이 1-5의 척도로 등급화되는 9가지 상이한 특징 (각성도, 평온, 호흡 곤란, 울음, 신체 운동, 근긴장도, 안면 긴장, 혈압 및 심박수)을 평가하는 COMFORT 척도에 의해 평가되며, 여기서 1은 전혀 또는 거의 통증 없음을 나타내고, 5는 최대의 통증을 나타낸다. 점수는 개별적으로 또는 총계로 사용될 수 있다.
통증의 생리학적 지표
본원에 사용된 "통증의 치료" 등은 통증의 완전 제거; 통증을 앓고 있는 개체에 의한 통증의 주목할만한 감소; 통증, 또는 객관적 기준 (예를 들어, 심박수, 혈압, 근긴장도 등)에 의한 통증의 지표의 검출가능한 감소; 또는 임의의 2종 또는 모든 3종의 조합을 포함할 수 있다. 특정의 다른 실시양태에서, 개체에서의 통증은 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 투여 전에 또는 그 후에, 또는 이들 둘 다에 생리학적 기준, 스트레스의 생리학적 기준에 의해 평가될 수 있다. 이러한 생리학적 기준은 객관적으로 측정가능한 기준, 예컨대 심박수 또는 혈압, 예를 들어 개체에서의 비-통증 상태에 비해 또는 예상 정상치 (예를 들어, 120 수축기압 및 80 확장기압; 분당 박동수 60)에 비해 상승된 심박수 또는 혈압, 또는 스트레스 호르몬, 예를 들어 코르티솔, 노르에피네프린의 상승된 수준 등을 포함할 수 있다. 이러한 생리학적 기준은 주관적으로 측정가능한 기준, 예컨대 안면 표정, 근육 긴장 (근긴장도), 발한, 진전 등을 또한 포함하거나 또는 그 대신에 포함할 수 있다.
따라서, 특정 실시양태에서, 통증을 갖는 개체에게 투여되는 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 치료 유효량은 개체에서 심박수의 검출가능한 감소, 예를 들어 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% 또는 50% 감소; 분당 심박수 120 (bpm) 이상으로부터 110 bpm 미만으로의 심박수의 감소; 110 bpm 이상으로부터 100 bpm 미만으로의 감소; 100 bpm 이상으로부터 90 bpm 미만으로의 감소; 90 bpm 이상으로부터 80 bpm 미만으로의 감소; 120 bpm 이상으로부터 100 bpm 미만으로의 감소; 100 bpm 이상으로부터 90 bpm 미만으로의 감소; 100 bpm 이상으로부터 80 bpm 미만으로의 감소; 130 bpm 이상으로부터 100 bpm 미만으로의 감소; 120 bpm 이상으로부터 90 bpm 미만으로의 감소; 110 bpm 이상으로부터 80 bpm 미만으로의 감소; 또는 120 bpm 이상으로부터 80 bpm 미만으로의 감소를 유발한다.
특정의 다른 실시양태에서, 통증을 갖는 개체에게 투여 시에 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 치료 유효량은 개체에서 혈압의 검출가능한 감소, 예를 들어 개체의 수축기압, 확장기압 또는 이들 둘 다의 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% 또는 50% 감소; 200 이상으로부터 190 미만으로의 개체의 수축기압의 감소; 190 이상으로부터 180 미만으로의 수축기압의 감소; 180 이상으로부터 170 미만으로의 수축기압의 감소; 170 이상으로부터 160 미만으로의 수축기압의 감소; 160 이상으로부터 150 미만으로의 수축기압의 감소; 150 이상으로부터 140 미만으로의 수축기압의 감소; 140 이상으로부터 130 미만으로의 수축기압의 감소; 200 이상으로부터 180 미만으로의 수축기압의 감소; 190 이상으로부터 170 미만으로의 수축기압의 감소; 180 이상으로부터 160 미만으로의 수축기압의 감소; 170 이상으로부터 150 미만으로의 수축기압의 감소; 160 이상으로부터 140 미만으로의 수축기압의 감소; 150 이상으로부터 130 미만으로의 수축기압의 감소; 200 이상으로부터 170 미만으로의 수축기압의 감소; 190 이상으로부터 160 미만으로의 수축기압의 감소; 180 이상으로부터 150 미만으로의 수축기압의 감소; 170 이상으로부터 140 미만으로의 수축기압의 감소; 160 이상으로부터 130 미만으로의 수축기압의 감소; 200 이상으로부터 160 미만으로의 수축기압의 감소; 190 이상으로부터 150 미만으로의 수축기압의 감소; 180 이상으로부터 140 미만으로의 수축기압의 감소; 200 이상으로부터 130 미만으로의 수축기압의 감소; 200 이상으로부터 150 미만으로의 수축기압의 감소; 190 이상으로부터 140 미만으로의 수축기압의 감소; 180 이상으로부터 130 미만으로의 수축기압의 감소; 200 이상으로부터 140 미만으로의 수축기압의 감소; 190 이상으로부터 130 미만으로의 수축기압의 감소; 또는 200 이상으로부터 130 미만으로의 수축기압의 감소; 140 이상으로부터 130 미만으로의 개체의 확장기압의 감소; 130 이상으로부터 120 미만으로의 확장기압의 감소; 120 이상으로부터 110 미만으로의 확장기압의 감소; 110 이상으로부터 100 미만으로의 확장기압의 감소; 100 이상으로부터 90 미만으로의 확장기압의 감소; 140 이상으로부터 120 미만으로의 확장기압의 감소; 110 이상으로부터 90 미만으로의 확장기압의 감소; 140 이상으로부터 110 미만으로의 확장기압의 감소; 130 이상으로부터 100 미만으로의 확장기압의 감소; 120 이상으로부터 90 미만으로의 확장기압의 감소; 140 이상으로부터 100 미만으로의 확장기압의 감소; 130 이상으로부터 90 미만으로의 확장기압의 감소; 또는 140 이상으로부터 90 미만으로의 확장기압의 감소를 유발한다.
특정 실시양태에서, 통증을 갖는 개체에게 투여 시에 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 치료 유효량은 개체에서 1종 이상의 시토카인 (예를 들어, 염증촉진 시토카인)의 양의 검출가능한 감소를 유발한다. 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 통증을 갖는 개체에게 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 투여하는 것은 개체에서 TNF-α, IL-2, IL-3, IL-6, IL-12, IL-17, IL-18 및/또는 인터페론-γ, 또는 그의 임의의 조합의 양의 감소를 유발한다. 개체에서의 시토카인 감소의 평가는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있으며, 예를 들어 개체의 혈장 내 시토카인 수준은, 예를 들어 ELISA를 사용하여 측정될 수 있다.
특정 실시양태에서, 통증을 갖는 개체에게 투여 시에 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 치료 유효량은 개체에서 1종 이상의 시토카인의 검출가능한 증가를 유발한다. 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 통증을 갖는 개체에게 지방-유래 줄기 및 재생 세포를 투여하는 것은 개체에서 IL-10의 양의 증가를 유발한다. 개체에서의 시토카인 수준의 증가의 평가는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있으며, 예를 들어 개체의 혈장 내 시토카인 수준은, 예를 들어 ELISA를 사용하여 측정될 수 있다.
특정 실시양태에서, 통증을 갖는 개체에게 투여 시에 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 치료 유효량은 개체에서 1종 이상의 스트레스 호르몬의 검출가능한 증가를 유발한다. 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 통증을 갖는 개체에게 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 투여하는 것은 개체에서 코르티솔의 양의 감소를 유발한다. 다른 예시적인 스트레스 호르몬은 코르티코트로핀-방출 인자, 아드레노코르티코트로핀, 8-리포트로핀, 3-엔도르핀, 바소프레신, 프로락틴 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 개체에서의 코르티솔 수준의 감소의 평가는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있으며, 예를 들어 개체의 타액 또는 혈장 또는 혈청 내 코르티솔 수준은, 예를 들어 ELISA 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 다른 방법을 사용하여 측정될 수 있다.
특정 실시양태에서, 통증을 갖는 개체에게 투여 시에 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 치료 유효량은 개체에서 1종 이상의 케모카인의 양의 검출가능한 감소를 유발한다. 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 통증을 갖는 개체에게 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 투여하는 것은 개체에서 CCL2, CCL12 및/또는 CXCL1, 또는 그의 임의의 조합의 양의 감소를 유발한다. 개체에서의 케모카인의 평가는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있으며, 예를 들어 개체의 혈장 내 케모카인 수준은, 예를 들어 ELISA 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 다른 방법을 사용하여 측정될 수 있다.
특정 실시양태에서, 통증을 갖는 개체에게 투여 시에 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 치료 유효량은 개체에서 1종 이상의 세포 유형의 활성화 및/또는 분화의 검출가능한 감소를 유발한다. 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 통증을 갖는 개체에게 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 투여하는 것은 개체에서 수지상 세포, T 세포 및/또는 대식세포, 또는 그의 임의의 조합의 활성화 및/또는 분화의 감소를 유발한다. 개체에서의 특이적 세포 유형의 활성화 및/또는 분화의 평가는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어 개체의 특이적 영역에 존재하는 특이적 세포 마커의 측정, 예를 들어 혈액의 세포와 연관되어 있거나 또는 특이적 조직/기관에서 발견되는 세포와 연관된 특이적 세포 마커의 측정/평가를 사용하여 달성될 수 있다.
통증과 연관되어 있거나 또는 그의 원인이 되는 염증 반응의 억제
염증은 통증의 유일한 공급원은 아니다. 그러나, 특정 실시양태에서, 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 염증과 관련되어 있거나 또는 그로 인한 통증을 개선시키기 위해 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 개체 내 면역 세포(들)를 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 유효량과 접촉시키는 것을 포함하는, 개체에서 통증을 개선시키는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 유효량은 (1) 상기 개체에서 면역 반응을 검출가능하게 억제하고, (2) 상기 개체에서 통증을 검출가능하게 감소시키는 양이다. 구체적 실시양태에서, 상기 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 혼합 림프구 반응 (MLR) 검정 또는 회귀 검정에서 T 세포 증식을 검출가능하게 억제한다. 접촉은, 예를 들어 개체에게 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 또는 국부로, 전신으로 또는 국지적으로 (또는 이들의 조합에 의해) 투여함으로써 달성될 수 있다. 따라서, 개체 내 면역 세포(들)를 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 유효량과 접촉시키는 것을 포함하는, 개체에서 통증을 개선시키는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 유효량은 (1) 상기 개체에서 면역 및/또는 염증 반응을 검출가능하게 조절, 예를 들어 억제하고, 및 (2) 상기 개체에서 통증을 검출가능하게 감소시키는 양이다. 구체적 실시양태에서, 개체 내 면역 세포(들)를 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 유효량과 접촉시키는 것은 개체에서 TNF-α, IL-2, IL-3, IL-6, IL-12, IL-17, IL-18 및/또는 인터페론-γ, 또는 그의 임의의 조합의 양의 감소를 유발한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 개체 내 면역 세포(들)를 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 유효량과 접촉시키는 것은 개체에서 CCL2, CCL12 및/또는 CXCL1, 또는 그의 임의의 조합의 양의 감소를 유발한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 개체 내 면역 세포(들)를 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 유효량과 접촉시키는 것은 개체에서 IL-10의 양의 증가를 유발한다.
또 다른 실시양태에서, 개체에게 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 통증을 개선시키는 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 유효량은 (1) 상기 개체에서 면역 및/또는 염증 반응을 검출가능하게 조절, 예를 들어 억제하고, (2) 상기 개체에서 통증을 검출가능하게 감소시키는 양이다. 구체적 실시양태에서, 상기 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 혼합 림프구 반응 (MLR) 검정 또는 회귀 검정에서 T 세포 증식을 검출가능하게 억제한다. 투여는 국부로, 전신으로 또는 국지적으로 (또는 이들의 조합에 의해) 수행될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 개체에게 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 유효량을 투여하는 것은 개체에서 TNF-α, IL-2, IL-3, IL-6, IL-12, IL-17, IL-18 및/또는 인터페론-γ, 또는 그의 임의의 조합의 양의 감소를 유발한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 개체에게 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 유효량을 투여하는 것은 개체에서 CCL2, CCL12 및/또는 CXCL1, 또는 그의 임의의 조합의 양의 감소를 유발한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 개체에게 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 유효량을 투여하는 것은 개체에서 IL-10의 양의 증가를 유발한다.
이러한 방법의 맥락에서 "면역 세포"는 면역계 (적응성 또는 선천성)의 임의의 세포, 특히 T 세포 및 NK (자연 킬러) 세포, 수지상 세포 및 대식세포를 의미한다. 따라서, 방법의 다양한 실시양태에서, 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 다수의 면역 세포와 접촉하며, 여기서 다수의 면역 세포는 다수의 T 세포 (예를 들어, 다수의 CD3+ T 세포, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포) 및/또는 자연 킬러 세포이거나 또는 이를 포함한다. 방법의 맥락에서 "면역 반응"은 면역 세포에 의해 정상적으로 지각되는 자극에 대한 면역 세포에 의한 임의의 반응, 예를 들어 항원의 존재에 대한 반응일 수 있다. 다양한 실시양태에서, 면역 반응은 수혈 또는 이식편에 존재하는 항원과 같은 외래 항원 또는 자가면역 질환에서와 같은 자가-항원에 대해 반응하는 T 세포 (예를 들어, CD3+ T 세포, CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포)의 증식일 수 있다. 면역 반응은 또한 이식편 내에 함유된 T 세포의 증식일 수 있다. 면역 반응은 또한 자연 킬러 (NK) 세포의 임의의 활성, 수지상 세포의 성숙, T 세포의 분화, M1 또는 M2 계열로의 대식세포의 스큐잉 등일 수 있다.
예를 들어 염증의 감소에 의한 통증의 감소 또는 개선에 사용되는 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 또한 단일 종, 예를 들어 수용자의 종, 또는 기능을 감소 또는 억제시킬 면역 세포의 종으로부터 유래될 수 있거나, 또는 다수의 종으로부터 유래될 수 있다.
다양한 실시양태에서, 지방-유래 세포의 상기 접촉 또는 투여는 통증을 앓는 개체에서 면역 기능 (예를 들어, 항원에 대해 반응하는 T 세포 증식) 또는 염증을, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 부재 하의 면역 기능에 비해 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 억제하기에 충분하다. 생체내 문맥에서 이러한 억제는, 예를 들어 개체로부터의 T 세포의 샘플을 사용하여 시험관내 검정 (하기 참조)으로 결정될 수 있으며; 즉, 시험관내 검정에서의 억제의 정도는 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 특정한 수, 및 개체에서의 억제의 정도에 대한 수용자 개체 내 면역 세포의 수에 대해 외삽될 수 있다.
지방-유래 줄기 및 재생 세포는, 예를 들어 CD4+ 또는 CD8+ T 세포, 수지상 세포 (DC), 및 지방-유래 줄기 및 재생 세포를 약 10:1:2 비로 조합하여 포함하는 MLR에서 시험될 수 있으며, 여기서 T 세포는 염료, 예컨대 예를 들어 딸세포에 분배되는 CFSE로 염색되고, 여기서 T 세포는 약 6일 동안 증식되도록 한다. T 세포 및/또는 DC 세포는 치료할 개체로부터 얻어질 수 있으며, 예를 들어 개체에 대해 자가일 수 있거나, 또는 개체와 동종일 수 있다. 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은, 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 존재 하의 6일에서의 T 세포 증식이 DC의 존재 및 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 부재 하의 T 세포 증식에 비해 검출가능하게 감소되는 경우에 면역억제성이다. MLR의 한 실시양태에서, 예를 들어 지방 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 배양물로부터 해동 또는 수확될 수 있다. 약 20,000개의 지방-유래 줄기 및 재생 세포를 100 μl의 배지 (RPMI 1640, 1 mM HEPES 완충제, 항생제, 및 5% 풀링된 인간 혈청)에 재현탁시키고, 웰의 바닥에 2시간 동안 부착되도록 한다. CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 밀테니이(Miltenyi) 자기 비드로 전체 말초 혈액 단핵 세포로부터 단리한다. 세포를 CFSE 염색하고, 웰당 100,000개의 T 세포 (CD4+ T 세포 단독, CD8+ T 세포 단독, 또는 동등량의 CD4+ 및 CD8+ T 세포)를 첨가한다. 웰 내 부피를 200 μl로 만들고, MLR이 진행되도록 한다.
특정 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 항염증 활성 (즉, 면역억제 활성)은 통증을 앓고 있는 개체에게 투여되기 전에 결정된다. 이는, 예를 들어 통증의 개선을 위해 투여될 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 샘플의 면역억제 활성을 결정함으로써 달성될 수 있다. 이러한 활성은, 예를 들어 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 샘플을, 예를 들어 MLR 또는 회귀 검정에서 시험함으로써 결정될 수 있다. 한 실시양태에서, MLR은 이러한 샘플을 사용하여 수행되며, 샘플인 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등에 의해 입증되는 면역억제의 정도는 이러한 검정에서 결정된다. 통증 개선의 정도는 샘플링된 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 면역억제 활성과 상관관계가 있는 것으로 예상된다. 따라서, MLR은 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 특정한 집단 또는 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등이 염증에 기인하는 통증을 개선시키는 절대적 및 상대적 능력을 결정하는 방법으로서 본원에 개시된 실시양태에 사용될 수 있는 하나의 예시적인 방법이다.
MLR의 파라미터는 더 많은 데이터를 제공하거나 또는 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 샘플 또는 지방-유래 줄기 및 재생 세포가 면역억제하며 따라서 통증을 개선시키는 능력을 최선으로 결정하기 위해 달라질 수 있다. 예를 들어, 지방-유래 줄기 및 재생 세포에 의한 면역억제는 검정에 존재하는 지방 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 수에 대략 비례하여 증가하는 것으로 보이기 때문에, MLR은 한 실시양태에서 반응마다 2가지 이상의 수의 지방-유래 줄기 및 재생 세포, 예를 들어 1×103, 3×103, 1×104 및/또는 3×104개의 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등으로 수행될 수 있다. 검정에서의 T 세포의 수에 비한 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 수는 또한 변경될 수 있다. 예를 들어, 비교적 더 큰 수의 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등 또는 T 세포가 또한 사용될 수 있음에도 불구하고, 검정에서의 지방-유래 줄기 및 재생 세포 및 T 세포는, 예를 들어 약 10:1 내지 약 1:10 중 임의의 비, 바람직하게는 약 1:5로 존재할 수 있다.
회귀 검정 또는 BTR 검정은 유사한 방식으로 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상체에서의 면역억제 및/또는 면역조절은, 대상체에게 지방-유래 세포를 투여하기 전 및 후에 다양한 시토카인, 면역 세포 등의 수준을 본원에 기재된 바와 같이 시험함으로써 결정될 수 있다.
지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 공지 또는 예상된 수의 개체 내 면역 세포, 예를 들어 T 세포에 대해 약 10:1 내지 약 1:10, 바람직하게는 약 1:5의 비로 개체에게 투여될 수 있다. 그러나, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 비제한적 예에서 약 10,000:1, 약 1,000:1, 약 100:1, 약 10:1, 약 1:1, 약 1:10, 약 1:100, 약 1:1,000 또는 약 1:10,000의 비로 개체에게 투여될 수 있다. 일반적으로, 수용자 킬로그램당 약 1×105 내지 약 1×108개의 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등, 바람직하게는 수용자 킬로그램당 약 1×106 내지 약 1×107개의 세포가 면역억제를 실시하기 위해 투여될 수 있다. 예를 들어, 다양한 실시양태에서, 수용자 킬로그램당 약 1×105 내지 약 1×108개의 지방-유래 줄기 세포가 면역억제를 위해 투여된다. 다양한 실시양태에서, 수용자 킬로그램당 약 1×105 내지 약 1×108개의 지방-유래 재생 세포가 면역억제를 위해 투여된다. 예를 들어, 다양한 실시양태에서, 수용자 킬로그램당 약 1×105 내지 약 1×108개의 지방-유래 전구 세포가 면역억제를 위해 투여된다. 다양한 실시양태에서, 개체 또는 대상체에게 투여되는 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은, 약 1×105, 3×105, 1×106, 3×106, 1×107, 3×107, 1×108, 3×108, 1×109, 3×109개, 그 이상 또는 그 이하, 또는 그 초과의 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 포함한다.
지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 또한 1종 이상의 제2 유형의 줄기 또는 기질 세포, 예를 들어 골수, 제대혈, 근육, 치수, 양막 등로부터의 중간엽 줄기 세포 또는 중간엽 기질 세포와 함께 투여될 수 있다. 이러한 제2 줄기 세포는 상기 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등과 함께, 예를 들어 약 1:10 내지 약 10:1의 비로 개체에게 투여될 수 있다.
지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등, 및 생체내 면역 세포의 접촉 또는 근접을 용이하게 하기 위해, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등, 및 면역 세포를 서로 접촉하도록 만들기에 충분한 임의의 경로에 의해 개체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 지방-유래 줄기 및 재생 세포는, 예를 들어 정맥내로, 근육내로, 복강내로, 안내로, 비경구로, 척수강내로, 피하로, 림프계 내로 (예를 들어, 림프관 또는 림프절 내로), 또는 기관, 예를 들어 손가락, 췌장 등 내로 직접 개체에게 투여될 수 있다. 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 통증 부위 또는 통증을 유발하는 신경 손상 부위의 통증을 앓고 있는 개체의 영역에 투여될 수 있다. 생체내 투여를 위해, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 하기 기재된 바와 같이 제약 조성물로서 제제화될 수 있다.
또 다른 측면에서, 통증을 앓고 있는 개체에게 투여되는 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 1종 이상의 항염증 시토카인을 발현하도록 유전자 조작된 것이다. 구체적 실시양태에서, 상기 항염증 시토카인은 IL-10, IL)-1 수용체 길항제, IL-4, IL-6, IL-10, IL-11, IL-13, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다.
제2 치료 조성물 및 제2 요법
임의의 상기 개체에서 통증을 치료하는 방법에서, 방법은 제2 치료 조성물 또는 제2 요법, 예를 들어 항통증 의약 또는 요법의 투여를 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 제2 활성제는 통증을 완화하거나, 염증 반응을 억제 또는 조절하거나, 진정 효과 또는 항신경통 효과를 제공하거나, 또는 환자 편안함을 보장할 수 있다.
특정 실시양태에서, 제2 치료 조성물은 오피오이드 진통제, 비-마약성 진통제, 항염증제, cox-2 억제제, 알파-아드레날린성 수용체 효능제 또는 길항제, 케타민, 마취제, NMDA 길항제, 면역조절제, 면역억제제, 항우울제, 항경련제, 항고혈압제, 불안완화제, 칼슘 채널 차단제, 근육 이완제, 코르티코스테로이드, 고압 산소, JNK 억제제, 통증을 완화하는 것으로 공지된 다른 치료제, 및 그의 제약상 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 입체이성질체, 클라트레이트, 전구약물 및 약리학적 활성 대사물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정 실시양태에서, 제2 치료 조성물은 오피오이드이다. 오피오이드는, 예를 들어 중증 통증을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 오피오이드 진통제의 예는 옥시코돈 (예를 들어, 옥시콘틴(OXYCONTIN)®), 모르핀 술페이트 (예를 들어, MS 콘틴(MS CONTIN)®, 두라모르프(DURAMORPH)® 및/또는 아스트라모르프(ASTRAMORPH)®), 메페리딘 (예를 들어, 데메롤(DEMEROL)®) 및 펜타닐 경피 패치 (예를 들어, 두라게식(DURAGESIC)®), 및 다른 공지된 통상적인 의약을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 옥시코돈 (예를 들어, 옥시콘틴®)은 오피오이드의 장기간-작용하는 형태이며, 예를 들어 CRPS의 초기 및 후기 단계에서 사용될 수 있다.
비-마약성 진통제 및 항염증제는, 예를 들어 임신 및 모유수유 동안 통증의 치료를 위해 사용될 수 있다. 비-스테로이드성 항염증 약물 (NSAID)은, 예를 들어 통증 증후군의 초기 단계에서 사용될 수 있다. 항염증제의 예는 살리실산 아세테이트 (예를 들어, 아스피린), 이부프로펜 (예를 들어, 모트린(MOTRIN)®, 애드빌(ADVIL)® 등), 케토프로펜 (예를 들어, 오루바일(ORUVAIL)®), 로페콕시브 (예를 들어, 비옥스(VIOXX)®), 나프록센 소듐 (예를 들어, 아나프록스(ANAPROX)®, 나프렐란(NAPRELAN)®, 나프로신(NAPROSYN)® 등), 케토롤락 (예를 들어, 아쿨라(ACULAR)®) 또는 다른 공지된 통상적인 의약을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 구체적 cox-2 억제제는 셀레콕시브 (예를 들어, 셀레브렉스(CELEBREX))이다.
항우울제인 제2 치료 화합물의 예는 노르트립틸린 (파멜로르®), 아미트립틸린 (엘라빌®), 이미프라민 (토프라닐(TOFRANIL)®), 독세핀 (시네콴(SINEQUAN)®), 클로미프라민 (아나프라닐(ANAFRANIL)®), 플루옥세틴 (프로작(PROZAC)®), 세르트랄린 (졸로프트®), 네파조돈 (세르존(SERZONE)®), 벤라팍신 (에펙소르®), 트라조돈 (데시렐(DESYREL)®), 부프로피온 (웰부트린(WELLBUTRIN)®) 및 다른 공지된 통상적인 의약을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어 의사 처방 참고집, 329, 1417, 1831 및 3270 (제57판, 2003년)을 참조한다.
항경련 약물인 제2 치료 화합물의 예는 카르바마제핀, 옥스카르바제핀, 가바펜틴 (뉴론틴(NEURONTIN)®), 페닐로인, 소듐 발프로에이트, 클로나제팜, 토피라메이트, 라모트리진, 조니사미드 및 티아가빈을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어 의사 처방 참고집, 2563 (제57판, 2003년)을 참조한다.
본원에 기재된 실시양태에 유용한 다른 제2 치료 화합물은 코르티코스테로이드 (예를 들어, 프레드니손, 덱사메타손 또는 히드로코르티손), 경구 활성 클래스 Ib 항부정맥제 (예를 들어, 멕실레틴), 칼슘 채널 차단제 (예를 들어, 니페디핀), 베타-차단제 (예를 들어, 프로프라놀롤), 알파-차단제 (예를 들어, 페녹시벤즈아민), 및 알파2-아드레날린성 효능제 (예를 들어, 클로니딘)를 포함하나, 이에 제한되지는 않으며, 이는 또한 면역조절 화합물과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어 의사 처방 참고집, 1979, 2006 및 2190 (제57판, 2003년)을 참조한다.
상기 치료제의 임의의 조합이 투여될 수 있다. 이러한 치료제는 지방-유래 줄기 및 재생 세포와의 임의의 조합으로, 동시에 또는 개별 치료 과정으로서 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 제2 치료제는 지방-유래 세포와 병용으로 (예를 들어, 단일 조성물로, 또는 동시에 투여되는 상이한 조성물로) 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 지방-유래 세포의 투여 전에 또는 그 후에 투여된다. 바람직하게는, 제2 치료제는 지방-유래 세포 투여 24시간 내에 투여된다.
상기 열거된 제2 치료 화합물의 일부 (예를 들어, 플루옥세틴)는, 유익한 효과를 가짐에도 불구하고, 그 자체로 부작용으로서 소수의 수용자에서 신경병증성 통증을 일으킬 수 있다는 점에 주목해야 한다. 일반적으로, 이러한 화합물은 투여자에게 안전한 것으로 간주되지만; 관련 기술분야의 통상의 기술자 (예를 들어, 의사)는 추가의 신경병증성 통증의 위험에 비한 이러한 제2 치료 화합물을 투여하는 것의 상대 이익을 결정할 수 있을 것이다.
본원에 기재된 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 제약 조성물, 예를 들어 정맥내, 근육내 또는 복강내 주사에 적합한 제약 조성물 형태로 통증을 앓고 있는 개체에게 투여될 수 있다. 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 단일 용량으로 또는 다중 용량으로 개체에게 투여될 수 있다. 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등이 다중 용량으로 투여되는 경우에, 용량은 통증을 완화하도록 설계된 치료 요법의 일부일 수 있거나, 또는 통증의 기저 원인을 치료하도록 설계된 장기간 치료 요법의 일부일 수 있다. 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등이 제2 치료제 또는 제2 유형의 줄기 세포와 함께 투여되는 실시양태에서, 지방-유래 세포 및 제2 치료제 및/또는 제2 유형의 줄기 세포는 동시에 (예를 들어, 단일 조성물로서 또는 개별 조성물로) 또는 상이한 횟수로 투여될 수 있으며, 예를 들어 투여는 서로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 10, 20, 30, 40 또는 50분 내에, 또는 서로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20 또는 22시간 내에, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10일 내에 또는 그 초과에서 일어날 수 있다.
경피증
경피증은 섬유증 및 만성 통증과 연관된 자가면역 류마티스성 질환이다. 이는 국부 경피증 또는 전신 경피증으로서 분류된다. 국부 경피증은 반상경피증 (달라지는 크기의 피부 상의 왁스상 패치) 또는 선형 경피증 (팔 또는 하지 상의 또는 이마 상의 경화된 왁스상 피부의 줄무늬 또는 선)으로서 하위분류되는 반면에; 전신 경피증은 제한성 (CREST 증후군 - 석회증, 레이노 현상, 식도 기능장애, 수지경화증 및 모세혈관확장증) 또는 미만성 (피부 비후가 더 급속하게 발생하고, 제한성 질환에서보다 더 많은 피부 영역, 및 내부 기관의 "경화증" 또는 섬유성 경화가 발생할 더 높은 위험성을 수반함)으로 분류된다. 이들은 많은 상이한 징후를 포함하는 광범위한 카테고리이다.
제한성 및 미만성 둘 다의 경피증은 폐의 혈관이 협소화되는 상태인 폐고혈압을 동반하여, 숨가쁨을 유발하는 폐를 통한 혈류 장애 뿐만 아니라 폐 섬유증으로 이어질 수 있다는 점이 가장 유의하다. 신체의 혈관에서의 염증은 그의 협소화로 이어진다. 염증으로부터의 추가의 손상 및 증가된 혈압의 충격은 더 작은 동맥의 파괴로 이어질 수 있다. 그 결과, 섬유증이 일어난다. 이러한 과정은 파괴적인 연관성을 가질 수 있고, 심장 및 폐는 효율의 유의한 손실을 겪을 수 있다. 폐동맥 고혈압 (PAH)은 경피증 환자에서의 주요 사망 원인이다.
전신 피부병변없는 경피증은, 피부 변화가 결여되지만 전신 증상을 갖는 경피증의 한 형태이다. 경피증의 전신 형태는 심장의 (심장) 문제를 일으킬 수 있다. 전신 경피증은 부정맥, 심막 삼출, 반흔형성, 좌 및 우심실 기능장애, 심근 허혈, 심장 재형성 및 심부전을 일으킬 수 있다.
경피증으로부터의 중증 합병증은 하기를 포함한다:
심장: 치료되지 않은 고혈압은 심장을 압박하며; 불규칙한 심장 리듬 및 심장의 확대는 심부전으로 이어진다.
신장: 악성 고혈압이 급성 신부전을 발생시키고 일으키는 경피증 신발증.
폐: 모든 환자 중 3분의 2는 호흡기 문제, 예컨대 숨가쁨, 기침, 호흡 곤란, 폐포염 (폐 공기 주머니의 염증), 폐렴 및 암을 앓고 있다.
소화기계: 때때로 다량 출혈될 수 있는 식도 손상, 산 역류, 위전정부 혈관 확장 (GAVE).
피부 및 관절: 손목 터널 증후군, 관절통 및 강직.
구강: 편평한 백색 패치, 부착된 치은 점막의 손실, 치은 후퇴, 및 치주 인대 (PDL) 공간의 미만성 광폭화. 연하곤란은 설측 및 식도 점막하에서의 콜라겐 침착으로부터 유발될 수 있다. 하악, 오구 돌기 및 관절융기의 후지의 재흡수. 구강의 비탄력성.
여러 다른 상태가 섬유증의 발생과 연관되어 있다. 이러한 상태의 예는 화학요법제 (예를 들어, 블레오마이신 등) 또는 방사선요법으로의 치료에 대해 속발성인 국부 및/또는 전신 섬유증, 외상 (예를 들어, 화상, 우발적 외상, 외과적 절개 또는 개입 등)에 대해 속발성인 섬유증이다. 이러한 상태와 연관된 섬유증은 빈번하게 이환 부위의 감소된 기능, 예를 들어 관절 또는 피부 표면의 감소된 운동 범위, 치유 장애, 감소된 순응도로 이어진다. 일부 경우에, 이는 반흔 조직을 침습 절제하고 정상 조직 (예컨대, 분할된 두께 피부 이식편)에 이식하는 것에 의해, 또는 반흔, 및 인접 조직으로부터의 연관 유착을 해제하는 다른 외과적 절차에 의해 치료될 수 있다. 속발성 섬유증, 및 기능 결손 및 통증의 재발은 이들 접근법 후에 흔하다. 따라서, 덜 침습적인 접근법 관점 및 효능 관점 둘 다에서 개선된 접근법이 실질적으로 필요하다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 지방-유래 세포는 미만성 경피증을 갖는 대상체에서 폐, 심장, 신장 및 관절에서의 섬유증을 개선시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 지방-유래 세포는 제한성 경피증과 연관된 증상을 개선시키거나 또는 치료한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 경피증 또는 전신 경화증을 치료 또는 예방하는 방법은 지방-유래 세포를 다중 용량으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 경피증 또는 전신 경화증을 치료 또는 예방하는 방법은 지방-유래 세포의 다중 용량을 일정 기간에 걸쳐, 예를 들어 매 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7일 또는 그 초과마다, 매 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월마다, 매 1.5년마다, 매 2년마다, 또는 임의의 양의 사이 시간에 걸쳐 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 지방-유래 세포로의 치료는, 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 지방-유래 세포를 투여한 후 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 1년 또는 그 초과까지, 기준선 (지방-유래 세포의 투여 전)으로부터 예를 들어 5% 초과, 10% 초과, 20% 초과, 30% 초과, 40% 초과 또는 50% 초과의 코친 점수의 유의한 개선을 유발한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 지방-유래 세포로의 치료는, 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 지방-유래 세포를 투여한 후 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 1년 또는 그 초과까지, 기준선 (지방-유래 세포의 투여 전)으로부터 예를 들어 5% 초과, 10% 초과, 20% 초과, 30% 초과, 40% 초과 또는 50% 초과의 통증의 VAS 점수의 유의한 개선을 유발한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 지방-유래 세포로의 치료는, 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 지방-유래 세포를 투여한 후 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 1년 또는 그 초과까지, 기준선 (지방-유래 세포의 투여 전)으로부터 예를 들어 5% 초과, 10% 초과, 20% 초과, 30% 초과, 40% 초과 또는 50% 초과의 SHAQ 점수 (경피증 건강 평가 설문지)의 유의한 개선을 유발한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 지방-유래 세포로의 치료는, 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 지방-유래 세포를 투여한 후 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 1년 또는 그 초과까지, 기준선 (지방-유래 세포의 투여 전)으로부터 예를 들어 5% 초과, 10% 초과, 20% 초과, 30% 초과, 40% 초과 또는 50% 초과의 변형 로드난(mRodnan) 피부 점수의 유의한 개선을 유발한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 지방-유래 세포로의 치료는, 대상체에게 본원에 기재된 바와 같은 지방-유래 세포를 투여한 후 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 7개월, 적어도 8개월, 적어도 9개월, 적어도 10개월, 적어도 11개월, 적어도 1년 또는 그 초과까지, 기준선 (지방-유래 세포의 투여 전)으로부터 예를 들어 5% 초과, 10% 초과, 20% 초과, 30% 초과, 40% 초과 또는 50% 초과의 대상체의 손발톱 주름 내 거대-모세관 수의 유의한 감소를 유발한다.
레이노 현상
레이노 현상은 손가락, 발가락 및 때때로 다른 영역의 변색을 일으키는, 한랭 또는 정서적 스트레스에 반응하여 과도하게 감소된 혈류를 특징으로 한다. 이러한 상태는 또한 손발톱이 길이방향 굴곡부로 부서지는 것을 초래할 수 있다. 레이노 증후군은 각각의 영역으로의 혈액 공급을 감소시키는 혈관연축의 결과로서 발생한다. 레이노 현상은 그 자체로는 단지 증상 (불편)을 동반하는 징후 (저관류)이다. 발병기전에 연관시키는 경우에, 이는 그 원인이 공지되지 않은 레이노병 (원발성 레이노 현상으로도 공지됨)의 일부, 또는 공지된 원발성 질환, 가장 흔하게는 결합 조직 장애, 예컨대 전신 홍반성 루푸스로 인한 증후군인 레이노 증후군 (속발성 레이노 현상)의 일부일 수 있다.
레이노 현상에 대한 현행 요법은 (i) 긴 기간 및 빈번한 부작용 (예를 들어, 체위성 고혈압)으로 인해 바람직하지 않은, 예를 들어 칼슘 채널 차단제 또는 베타 차단제와 함께 경구로 또는 정맥내로 전달되는 매일의 예방 의약을 필요로 하거나, 또는 (ii) 개시가 느려서, 증상이 (급성으로) 발생하기 때문에 증상을 치료하기에는 신뢰할만하지 않다. 따라서, 레이노 현상의 치료가 필요하다.
속발성 레이노 현상의 다양한 원인은 공지되어 있으며, 예를 들어 결합 조직 장애, 예컨대 경피증, 전신 홍반성 루푸스, 류마티스 관절염, 쇼그렌 증후군, 피부근염, 다발근염, 혼합 결합 조직 질환, 한랭 응집소 질환, 엘러스-단로스 증후군 등을 포함한다. 섭식 장애, 예컨대 신경성 식욕부진이 또한 레이노 현상을 일으킬 수 있다. 폐쇄성 장애, 예컨대 아테롬성동맥경화증, 버거병, 다카야스 동맥염, 쇄골하 동맥류, 흉곽 출구 증후군 등이 또한 레이노 현상을 일으킬 수 있다. 약물, 예컨대 베타 차단제, 화학요법제 (예를 들어, 블레오마이신 등), 시클로스포린, 브로모크립틴, 에르고타민, 술파살라진, 자극 의약 (예를 들어, ADHD의 치료에 사용되는 의약), 탄저병 백신 등이 또한 레이노 현상을 일으킬 수 있다. 물리적 외상, 예컨대 자동차 사고 또는 다른 외상성 사건에서 지속되는 것, 라임병, 갑상선기능저하증, 한랭글로불린혈증, 악성종양, 만성 피로 증후군, 반사 교감신경 이영양증, 손목 터널 증후군, 마그네슘 결핍, 다발성 경화증 및 지단홍통증 (레이노와는 반대로, 뜨겁고 따뜻한 사지)이 레이노 환자에서 종종 공존하며, 레이노 현상을 일으키는 것으로 또한 공지되어 있다. 본원에 개시된 지방-유래 세포 (예를 들어, 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 세포 및 전구체 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 세포 및 다른 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등)는 상기 중 임의의 하나 이상으로부터 발생하는 레이노 현상의 치료에 유용하다. 이와 같이, 본원에 기재된 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 원발성 또는 속발성 레이노 증후군을 치료 또는 예방할 수 있다.
관련 기술분야에 공지된 다양한 시험이 레이노 현상을 진단하기 위해 사용될 수 있다. 통상의 기술자는, 레이노병의 진단을 위해 미래에 개발되는 시험이 또한 본원에 기재된 실시양태에 유용하다는 것을 용이하게 이해할 것이며, 본원에 개시된 실시양태에서 레이노병의 진단에 유용한 시험의 비제한적 예는 하기를 포함한다:
(1) 수족지 동맥 압력: 압력은 손을 냉각시키기 전 및 후에 손가락의 동맥에서 측정된다. 적어도 15 mmHg의 감소가 진단성 (양성)이다.
(2) 도플러 초음파: 혈류를 평가하기 위한 것.
(3) 전체 혈구 계수: 이는 만성 질환 또는 신부전의 빈혈을 시사하는 정상적혈구성 빈혈을 밝힐 수 있다.
(3) 우레아 및 전해질에 대한 혈액 시험: 이는 신장애를 밝힐 수 있다.
(4) 갑상선 기능 검사: 이는 갑상선기능저하증을 밝힐 수 있다.
(5) 류마티스 인자, 적혈구 침강 속도 및 C-반응성 단백질에 대한 자가항체 스크린 시험: 이는 특이적 원인 질병 또는 전반적 염증 과정을 밝힐 수 있다.
(6) 손발톱 주름 혈관계: 이는 현미경 하에 검사될 수 있다.
지방-유래 세포는 (원발성이든지 또는 속발성이든지 간에) 레이노 현상의 하나 이상의 증상을 치료 또는 예방할 수 있고, 예를 들어 본원에 기재되고 본원에 개시된 진단 방법을 사용하는 것을 포함하나, 이에 제한되지는 않으며, 레이노 현상을 갖는 대상체가 스트레스 또는 한랭에 노출되는 경우에 발생하는 혈관수축을 예방하거나 또는 그 정도를 감소시키는 것; 및 피부 동맥 순환의 한랭-유발 또는 스트레스-유발 혈관수축을 역전 또는 경감시키는 것을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
섬유증을 치료하는 방법
섬유증은 신장, 심장, 폐, 간, 피부 및 관절을 비롯한 내부 기관의 세포외 매트릭스 구성요소의 침착을 특징으로 하는 상태이다.
폐 섬유증은 우세한 섬유화 질환 중 하나이다. 특발성 폐 섬유증 (IPF)은 공지되지 않은 병인의, 진행성 섬유증을 갖는 폐포 벽의 만성 염증을 특징으로 한다. IPF 또는 잠재성 섬유화 폐포염은 특발성 간질성 폐 질환의 경우 중 50 내지 60%를 초래한다 (IPF에 대한 검토에 대해, 문헌 [Khalil N and O'Connor 2004 및 Selman et al. 2004] 참조).
간질성 폐렴의 특이적 조직병리학적 패턴인 통상성 간질성 폐렴 (UIP)은 IPF에서 폐 생검 시에 발견되는 전형적인 패턴이다. 낮은 배율에서, 조직은 정상 폐, 간질성 염증, 섬유증 및 벌집의 교호 영역으로 불균질하게 보인다. 간질성 염증은 제II형 폐포세포의 증식증과 연관된, 림프구, 형질 세포 및 조직구의 폐포 중격 침윤물로 이루어진다. 초기 및 활성 질환 부위인 증식하는 섬유모세포의 산란된 초점 (섬유모세포 초점)을 통상적으로 폐포내 위치에서 또한 볼 수 있음에도 불구하고, 섬유증 구역은 치밀한 무세포성 콜라겐으로 주로 구성된다. 벌집 영역은, 세기관지 상피로 빈번하게 라이닝되고 점액으로 채워진 낭성 섬유화 공기공간으로 구성된다. 호중구는 점액에 풀링될 수 있다. 평활근 증식증은 종종 섬유증 및 벌집 영역에서 발생한다. 흉막하 및 중격주위 분포, 패치형 특징 및 일시적 불균질성은 UIP를 확인함에 있어서 가장 도움이 되는 특색이다.
간질성 염증 및 섬유증의 동일한 패턴은 콜라겐 혈관 장애 (예를 들어, RA, SLE, 진행성 전신 경화증, 혼합 결합 조직 질환, 당뇨병), 진폐증 (예를 들어, 석면증), 방사선 손상, 및 (예를 들어, 니트로푸란토인에 의한) 특정 약물-유발 폐 질환에서 발생한다.
IPF의 임상 과정은 진행성이고; 중앙 생존기간은 진단 후 4 내지 6년이다. 프레드니손은 IPF의 경우에 통상의 치료이다. 치료에 대한 반응은 가변적이지만, 반흔형성이 우세하기 전보다 더 이전의 세포 단계인 더 초기의 질환을 갖는 환자는 코르티코스테로이드 또는 세포독성 요법으로 개선될 가능성이 더 많은 것으로 보인다. 지지적 및 완화적 치료는 저산소혈증을 완화하기 위한 고농도의 O2, 박테리아 감염이 발생하는 경우에는 항생제를 포함한다. 폐 이식은 말기 폐 질환을 갖는 환자에서 성공적이었다. 간의 섬유증은 세포외 매트릭스의 생성과 분해 사이의 불균형으로부터 유발되고 기존 섬유의 붕괴 및 축합에 의해 두드러지게 되는 결합 조직의 간에서의 축적과 관련되어 있다 (검토를 위해, 문헌 [Afdhal NH and Nunes D. 2004. Kershenobich and Weissbrod. 2003. Pinzani and Rombouts 2004] 참조).
간 섬유증은 매우 다양한 작용제에 의해 유발될 수 있는 간세포 괴사 또는 손상, 예를 들어 간 항상성을 방해하는 임의의 과정 (특히, 염증, 독성 손상, 당뇨병, 지방간염 또는 변경된 간 혈류) 및 간의 감염 (바이러스, 박테리아, 진균 및 기생충)에 대한 흔한 반응이다. 지질 이상 (고셔병); 글리코겐 축적 질환 (특히, 제III형, 제IV형, 제VI형, 제IX형 및 제X형); .알파..서브.1-항트립신 결핍; 철-과적 증후군 (혈색소증) 및 구리 축적 질환 (윌슨병)에서 보이는 바와 같은 외인성 물질의 축적; 독성 대사물의 축적 (티로신혈증, 프룩토스혈증 및 갈락토스혈증에서와 같음); 및 퍼옥시솜 장애 (젤베거 증후군)를 비롯한, 대사의 선천성 이상으로부터 유발되는 다수의 축적 장애는 종종 섬유증과 연관되어 있다. 다수의 화학물질 및 약물, 특히 알콜, 메토트렉세이트, 이소니아지드, 옥시페니사틴, 메티아이도파, 클로르프로마진, 톨부타미드 및 아미오다론은 섬유증을 일으킨다. 간 순환의 방해 (예를 들어, 만성 심부전, 버드-키아리 증후군, 정맥-폐쇄성 질환, 문맥 혈전증) 및 담즙 흐름에 대한 만성 폐쇄는 섬유증으로 이어질 수 있다. 마지막으로, 선천성 간 섬유증은 상염색체 열성 기형이다.
정상 간은 간세포, 및 콜라겐 (우세하게 제I형, 제III형 및 제IV형) 및 당단백질 (예를 들어, 피브로넥틴, 라미닌) 및 여러 프로테오글리칸 (예를 들어, 헤파란 술페이트, 콘드로이틴 술페이트, 더마탄 술페이트, 히알루로네이트)을 비롯한 비콜라겐 단백질로 구성된, 세포외 매트릭스 내에 분포된 동모양혈관으로 이루어진다. 문맥로에서만 정상적으로 발견되는 섬유모세포는 콜라겐, 대형 당단백질 및 프로테오글리칸을 생산할 수 있다.
다른 간 세포 (특히, 성상 세포, 간세포 및 지방-축적 쿠퍼, 및 내피 세포)는 또한 세포외 매트릭스 구성요소를 생산할 수 있다. 디세(Disse) 공간에서 동모양혈관 내피 아래에 위치하는 지방-축적 세포는 과량의 세포외 매트릭스를 증식시키고 생산할 수 있는 섬유모세포의 전구체이다. 콜라겐의 활성 침착으로부터의 섬유증의 발생은 간 세포 손상, 특히 괴사 및 염증 세포의 결과이다. 이들 세포로부터 방출되는 정확한 인자는 공지되어 있지는 않지만, 1종 이상의 시토카인 또는 지질 과산화의 산물일 가능성이 있다. 쿠퍼 세포 및 활성화 대식세포는 염증성 시토카인을 생산한다. 새로운 섬유모세포가 괴사성 간 세포 주위에 형성되고; 증가된 콜라겐 합성은 반흔형성으로 이어진다. 정지 성상 세포는 섬유증의 상향조절로 이어지도록 활성화될 수 있다. 섬유증은 활성 섬유생성으로부터 및 정상 및 변경된 콜라겐의 분해 장애로부터 유래할 수 있다. 지방-축적 세포, 쿠퍼 세포 및 내피 세포는 제I형 콜라겐, 여러 프로테오글리칸, 및 변성된 콜라겐의 클리어런스에 있어서 중요하다. 이들 세포의 활성의 변화는 섬유증의 정도를 변형시킬 수 있다. 조직병리학자에 대해, 섬유성 조직은 기존 섬유의 수동적 붕괴 및 축합으로 더 명백해질 수 있다.
따라서, 콜라겐의 증가된 합성 또는 감소된 분해는 간 기능에 영향을 미치는 과도한 결합 조직의 활성 침착을 유발한다: (1) 세포주위 섬유증은 세포 영양을 손상시키고, 간세포 위축을 유발한다. (2) 디세 공간 내에서, 섬유성 조직은 동모양혈관 주위에 축적되고, 혈액으로부터 간세포로의 물질의 자유 통과를 방해한다. (3) 간 세정맥 및 문맥로 주위의 섬유증은 간 혈류를 방해한다. 간을 가로지르는 정맥 저항은 문맥 분지로부터 동모양혈관, 및 최종적으로 간정맥까지 증가한다. 모든 3가지 경로가 수반될 수 있다.
문맥로를 중심 정맥과 연결하는 섬유상 밴드는 또한 문합성 채널을 촉진한다: 정상 간세포를 우회하는 동맥 혈액은 원심성 간정맥으로 션트되며, 이는 간 기능을 추가로 악화시키고 간세포 괴사를 두드러지게 할 수 있다. 이들 과정이 제시하는 정도는 간 기능장애의 크기를 결정한다: 예를 들어, 선천성 간 섬유증에서, 대형 섬유상 밴드는 문맥 영역을 우세하게 침범하지만, 통상적으로 간 실질을 남긴다. 선천성 간 섬유증은 따라서 간세포 기능이 보존된 문맥 고혈압으로서 제시된다.
경피증은 피부 및 내부 기관의 섬유증을 특징으로 하며 기관 부전 및 사망으로 이어지는 결합 조직의 질환이다 (문헌 [Black et al., 1998; Clements and Furst, 1996]; 검토를 위해, 문헌 [Varga J. 2004. Chung and Utz, 2004. Rhew and Barr, 2004] 참조). 경피증은 폭넓은 징후 및 다양한 치료적 연관성을 갖는다. 이는 국부 경피증, 전신 경화증, 경피증-유사 장애 및 피부병변없는 경피증을 포함한다 (문헌 [Smith, 2000]). 국부 경피증은 피부에 제한성인 섬유증 및 징후와 연관된 희귀 피부과 질환이며, 전신 경화증은 내부 기관 침범에 대한 가변적 위험 및 피부 질환의 정도의 변동을 갖는 다기관 질환이다. 전신 경화증은 미만성 또는 제한성일 수 있다. 제한성 전신 경화증은 CREST (석회증, 레이노, 식도 기능장애, 수지경화증, 모세혈관확장증)로도 칭한다. 경피증-유사 장애는 산업 환경 노출과 관련된 것으로 여겨진다. 피부병변없는 질환에서, 피부 변화 없이 내부 기관 침범이 존재한다.
경피증 및 특히 전신 경화증의 주요 징후는 섬유증에 의한 부적절한 과도한 콜라겐 합성 및 침착, 내피 기능장애, 연축, 붕괴 및 소멸이다.
경피증은 1백만명당 대략 19명의 경우인 안정한 발생률을 갖는 희귀 질환이다. 경피증의 원인은 공지되어 있지 않다. 그러나, 유전적 소인이 중요하다. 이상은 자가면역, 및 내피 세포 및 섬유모세포 기능의 변경을 수반한다. 사실상, 전신 경화증은 아마도 자가면역 질환 중 가장 중증이며, 진단 5년 이내에 50% 사망률이 보고되어 있다 (문헌 [Silman, 1991]).
진단의 관점에서, 중요한 임상 파라미터는 중수지절 관절에 대해 근위부의 피부 비후이다. 레이노 현상은 경피증의 빈번하고 매우 보편적인 구성요소이다. 이는 한랭 노출 시의 피부 색 변화에 의해 진단된다. 허혈 및 피부 비후는 레이노병의 증상이다.
여러 기저 생물학적 과정은 질환의 개시, 중증도 및 진행에 연루되어 있으며, 혈관 기능장애, 내피 세포 활성화 및 손상, 백혈구 축적, 자가-항체 생산, 및 치명적으로는 사망으로 이어질 수 있는 비제어된 섬유화 반응을 포함한다 (문헌 [Clements and Furst, 1996]). 섬유모세포는 이러한 질환의 발병기전에 있어서 중추적 역할을 갖는다. 경피증을 갖는 환자로부터 얻어진 1차 섬유모세포는 생체내에서 보여진 질환의 많은 특징적 특성, 두드러지게는 증가된 세포외 매트릭스, 두드러지게는 콜라겐 및 피브로넥틴의 합성 및 침착, 및 변경된 성장 인자 및 시토카인, 예컨대 TGF-β 및 CTGF의 생산을 나타낸다 (문헌 [Strehlow and Korn, 1998 및 LeRoy, 1974]).
본원에 개시된 실시양태는 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 사용하는, 경피증과 연관된 섬유증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 섬유증의 치료에 관한 것이다. 다양한 유형의 경피증이 존재한다. 전신 경화증으로도 칭하는 다기관 섬유증 형태는 피부 침범의 정도에 따라 2가지 하위유형을 포함한다: 제한성 피부 형태는 사지에 이환되는 반면에, 미만성 하위유형은 또한 체간부를 침범한다. 전신 질환 이외에도, 예를 들어 피부, 때때로 관절 및 근육의 특정 영역을 침범하지만 내부 기관은 침범하지 않는 반상경피증을 비롯한 국부 질환 형태가 존재한다. 전신 경화증의 주요 특징은 피부 및 내부 기관의 광범위 미세혈관 손상 및 진행성 섬유증이다. 가장 분명한 임상 증상은 통상적으로 피부의 경화 및 연관된 반흔형성이다. 피부는 당기거나, 적색빛이거나 또는 비늘형으로 보일 수 있다. 대부분 기관 부전으로 인해 발생하는 합병증을 관리하는 것에서의 지금까지의 진전에도 불구하고, 여전히 치유도 질환-특이적 치료도 존재하지 않는다. 게다가, 간, 신장, 폐, 심장 및 심막, 안구, 피부, 구강, 췌장, 위장관, 뇌, 유방, 골수, 골, 비뇨생식기, 종양 또는 상처가 이환될 수 있다.
본원에 기재된 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 류마티스 관절염, 루푸스, 병원성 섬유증, 섬유화 질환, 섬유화 병변, 예컨대 쉬스토소마 자포니쿰(Schistosoma japonicum) 감염, 방사선 손상, 자가면역 질환, 라임병, 화학요법 유발 섬유증, 방사선-유발 섬유증, HIV 또는 감염-유발 초점성 경화증, 척수 수술 반흔형성으로 인한 실패 요통 증후군, 수술 반흔형성 후 복부 유착, 섬유낭 형성, 척수 손상 후 섬유증, 수술-유발 섬유증, 점막 섬유증, 투석으로 인한 복막 섬유증, 및 아달리무맙-연관 폐 섬유증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
구체적으로, 간에서, 본원에 기재된 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 알콜, 약물 및/또는 화학적으로 유발된 간경변증, 간 이식 후 허혈-재관류 손상, 괴사성 간염, B형 간염, C형 간염, 원발성 담즙성 간경변증 및 원발성 경화성 담관염을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
신장과 관련하여, 본원에 기재된 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 증식성 및 경화성 사구체신염, 신성 섬유화 피부병증, 당뇨병성 신병증, 신장 세관간질성 섬유증 및 초점성 분절성 사구체경화증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
폐와 관련하여, 본원에 기재된 세포, 예를 들어 ADC, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 폐 간질성 섬유증, 사르코이드증, 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 천식, 만성 폐쇄성 폐 질환, 미만성 폐포 손상 질환, 폐고혈압, 네오나탈 기관지폐 이형성증, 만성 천식 및 기종을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다. 잠재성 섬유화 폐포염, 미만성 간질성 섬유증, 특발성 간질성 폐렴, 함만-리치 증후군, 규폐증, 석면증, 베릴륨중독증, 석탄 작업자의 진폐증, 흑색 폐 질환, 석탄 채광자의 질환, 채광자의 천식, 탄분증 및 탄분규폐증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 폐 섬유증에 대한 여러 하위명칭 또는 동의어가 존재한다.
심장 및/또는 심막과 관련하여, 본원에 기재된 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 심근 섬유증, 아테롬성동맥경화증, 관상 동맥 재협착, 울혈성 심근병증, 심부전 및 다른 허혈후 상태를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
안구와 관련하여, 본원에 기재된 지방-유래 세포, 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 그레이브스병의 안구돌출, 증식성 유리체망막병증, 전낭 백내장, 각막 섬유증, 수술로 인한 각막 반흔형성, 섬유주절제술-유발 섬유증, 진행성 망막하 섬유증, 다초점성 육아종성 맥락망막염 및 다른 안구 섬유증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
피부와 관련하여, 본원에 기재된 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 듀피트렌 구축, 경피증, 켈로이드 반흔형성, 건선, 화상으로 인한 비대성 반흔형성, 아테롬성동맥경화증, 재협착, 화학요법 노출로부터 발생하는 피부 섬유증 및 척수 손상으로 인한 가성경피증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
구강 및/또는 식도와 관련하여, 본원에 기재된 세포, 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 치주 질환 반흔형성, 약물에 대해 속발성인 치은 비대 및 선천성 식도 협착을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
췌장과 관련하여, 본원에 기재된 세포, 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 췌장 섬유증, 기질 재형성 췌장염 및 기질 섬유증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
위장관과 관련하여, 본원에 기재된 세포, 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 콜라겐성 결장염, 융모성 위축, 음와 증식증, 폴립 형성, 크론병의 섬유증 및 치유 중인 위 궤양을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
뇌와 관련하여, 본원에 기재된 세포, 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 신경교 반흔 조직을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
유방과 관련하여, 본원에 기재된 세포, 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 유방암에 대한 섬유낭성 질환 및 결합조직형성 반응, 유방 악성종양을 위한 치료에 대해 속발성인 암 및 섬유증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
골수와 관련하여, 본원에 기재된 세포, 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 골수이형성증 및 신생물성 질환에서의 섬유증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
골과 관련하여, 본원에 기재된 세포, 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 류머티스 판누스 형성을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
비뇨생식기계와 관련하여, 본원에 기재된 세포, 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 자궁내막증, 자궁 유섬유종, 난소 유섬유종 및 페이로니병을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 상태로부터 유발되는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
방사선 유발 손상과 관련하여, 본원에 기재된 세포, 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 두경부암, 난소암, 전립선암, 폐암, 위장암, 결장암 및 유방암의 치료와 관련되어 있으나, 이에 제한되지는 않는 섬유증을 치료 또는 예방할 수 있다.
줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 집단을 제조하는 방법
일부 실시양태에서, 세포 프로세싱 유닛, 구배 침강, 여과, 또는 이들 접근법 중 임의의 하나 이상의 조합을 사용하여 지방 조직을 프로세싱하여, 본원에 개시된 실시양태에 유용한 정화, 농후화, 농축, 단리 또는 정제된 지방-유래 세포의 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단 등을 얻는다. 일반적으로, 지방 조직을 먼저 대상체 (예를 들어, 포유동물, 가축, 설치류, 말, 개, 고양이 또는 인간)으로부터 제거한 다음, 이를 프로세싱하여, 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단 등을 얻는다. 동종 이식을 위해, 적절한 공여자는 관련 기술분야에 공지된 방법, 예를 들어 골수 공여자의 선택에 사용되는 방법을 사용하여 선택될 수 있다. 환자로부터 수집되는 지방 조직의 부피는 약 1 cc 내지 약 2000 cc로, 일부 실시양태에서 최대 약 3000 cc로 달라질 수 있다. 제거되는 조직의 부피는 환자별로 달라질 것이며, 연령, 신체 체형, 응고 프로파일, 혈류역학적 안정성, 부족 또는 손상의 중증도, 동반이환률 및 의사 선호도를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 수많은 인자에 의존할 것이다.
지방 조직은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법에 의해 얻어질 수 있다. 예를 들어, 지방 조직은 흡입-보조 지방성형술, 초음파-보조 지방성형술 또는 절제 지방절제술에 의해 대상체로부터 제거될 수 있다. 추가로, 절차는 이러한 절차의 조합, 예컨대 절제 지방절제술 및 흡입-보조 지방성형술의 조합을 포함할 수 있다. 조직 또는 그의 일부 분획이 대상체로 재이식되도록 의도되는 경우에, 지방 조직은 세포 구성요소의 생존율을 보존하고, 잠재적 감염성 유기체, 예컨대 박테리아 및/또는 바이러스로의 조직의 오염 가능성을 최소화하는 방식으로 수집되어야 한다. 따라서, 조직 추출은 오염을 최소화하기 위해 멸균 또는 무균 방식으로 수행되어야 한다. 흡입-보조 지방성형술은, 다른 기술, 예컨대 초음파-보조 지방성형술과 연관될 수 있는 줄기 세포 손상에 대한 최소 가능성으로 조직을 수집하는 최소 침습적 방법을 제공하기 때문에, 지방 조직을 환자로부터 제거하기에 바람직할 수 있다.
따라서, 지방 조직은 지방-유래 줄기 세포, 지방-유래 재생 세포, 지방-유래 줄기 및 재생 세포 등이 용이하게 농후화되는 세포 집단의 풍부한 공급원을 제공한다. 지방 조직의 수집은 또한 더 환자-친화적이며, 예를 들어 유사한 부피의 피부 또는 훨씬 더 큰 부피의 편도의 수집보다 더 낮은 이환율과 연관되어 있다.
흡입-보조 지방성형술 절차에 대해, 지방 조직은 캐뉼라를 환자에 존재하는 지방 조직 데포 내로 또는 그 근방으로 삽입하고, 이어서 지방을 흡입 장치 내로 흡인시킴으로써 수집된다. 일부 실시양태에서, 소형 캐뉼라는 시린지에 커플링될 수 있고, 지방 조직은 수동력을 사용하여 흡인될 수 있다. 시린지 또는 다른 유사한 장치를 사용하는 것은 비교적 중간 양의 지방 조직 (예를 들어, 0.1 ml 내지 수백 밀리리터의 지방 조직)을 수확하기에 바람직할 수 있다. 이러한 비교적 소형 장치를 사용하는 절차는 단지 국부 마취만을 필요로 한다. 더 큰 부피의 지방 조직 (예를 들어, 수백 밀리리터 초과)은 공여자 및 수집 절차를 수행하는 사람의 재량으로 전신 마취를 필요로 할 수 있다. 더 큰 부피의 지방 조직을 제거하고자 하는 경우에는, 비교적 더 대형의 캐뉼라 및 자동화 흡입 장치를 사용할 수 있다.
절제 지방절제술 절차는 지방 조직-함유 조직 (예를 들어, 피부)이 절차의 부수적인 부분으로서 제거되며; 즉, 수술의 1차 목적이 조직 (예를 들어, 비만치료 또는 미용 수술에서의 피부)의 제거이고, 지방 조직이 1차 관심 조직과 함께 제거되는 절차를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 피하 지방 조직은 또한 지방 조직이 피부의 동반 제거 없이 피하 공간으로부터 절제되는 절제 지방절제술에 의해 추출될 수 있다.
수집되는 조직의 양은 공여자의 체질량 지수, 접근가능한 지방 조직 수확 부위의 생체이용률, 동반 및 기존 의약 및 상태 (예컨대, 항응고제 요법), 및 조직을 수집하는 임상 목적을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 수많은 변수에 의존할 수 있다. 조혈 줄기 세포 (수용자의 혈액 세포-형성 능력을 재생시키기 위해 사용되는 골수 또는 제대혈-유래 줄기 세포)의 이식 경험은 생착이 역치 효과를 갖는 세포 용량-의존성인 것을 나타낸다 (둘 다 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Smith, et al., 1995; Barker, et al., 2001]). 따라서, "많을수록 좋다"는 일반적 원리가 다른 변수에 의해 설정된 한계치 내에서 적용되는 것, 및 실현가능한 경우에 수확이 가능한 한 많은 조직을 수집하는 것이 가능하다.
이어서, 환자로부터 제거된 지방 조직을 콜라겐, 지방세포, 혈액 및 염수를 제거하기 위한 추가 프로세싱을 위한 장치 (예를 들어, 세포 프로세싱 유닛, 원심분리 또는 여과 유닛) 내에 수집하여, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 포함하는 세포 집단을 얻는다. 바람직하게는 ADRC를 함유하는 지방-유래 세포의 집단을, 오염 콜라겐, 지방세포, 혈액 및 염수로부터 유리시킨다. 지방 조직 (지방세포)의 주요 오염 세포는 낮은 밀도를 가지며, 부유에 의해 용이하게 제거된다.
정제, 농축 및 단리된 지방-유래 세포의 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단, 줄기 세포 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단 등을 얻기 위한 지방 조직 프로세싱 및 그의 변형은, 예를 들어 모두 그 전문이 본원에 참조로 명백하게 포함되는 2002년 12월 9일에 출원된 발명의 명칭 "SYSTEMS AND METHODS FOR TREATING PATIENTS WITH PROCESSED LIPOASPIRATE CELLS"의 미국 출원 일련 번호 10/316,127 (미국 특허 출원 공개 번호 2003/0161816), 및 2004년 6월 25일에 출원된 발명의 명칭 "SYSTEMS AND METHODS FOR SEPARATING AND CONCENTRATING REGENERATIVE CELLS FROM TISSUE"의 미국 출원 일련 번호 10/877,822 (미국 특허 출원 공개 번호 2005/0084961); 2001년 9월 14일에 출원된 미국 출원 일련 번호 60/322,070의 이익을 주장하는 2002년 9월 12일에 출원된 발명의 명칭 "PRESERVATION OF NON EMBRYONIC CELLS FROM NON HEMATOPOIETIC TISSUES"의 미국 출원 일련 번호 10/242,094; 2004년 7월 2일에 출원된 발명의 명칭 "SYSTEMS AND METHODS FOR ISOLATING AND USING CLINICALLY SAFE ADIPOSE DERIVED REGENERATIVE CELLS"의 미국 출원 일련 번호 10/884,638에 기재된 방법을 사용하여 바람직하게 수행된다. 상기 출원은 밀폐된 멸균 유체/조직 경로를 유지하도록 구성된 시스템에서 지방-유래 세포를 프로세싱하는 것을 개시하고 있다. 이는 밀폐된 경로 내에서 조직 및 유체 요소의 전달을 가능하게 하는 밀폐된 멸균 용기 및 튜빙의 사전 조립된 연결된 세트의 사용에 의해 달성될 수 있다. 이러한 프로세싱 세트는 장치 내로 삽입되는 일련의 프로세싱 시약 (예를 들어, 염수, 효소 등)에 연결될 수 있으며, 이는 시약의 첨가, 온도 및 프로세싱 시기를 제어하여 작업자가 과정을 수동으로 관리할 필요를 경감시킬 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 조직 추출로부터 프로세싱 및 수용자에게의 배치에 이르는 전체 절차는 사실상 이러한 절차를 겪는 환자의 동일한 설비에서, 심지어 동일한 실내에서 수행된다.
많은 응용분야에 대해, 활성 세포 집단의 제조는 지방 조직의 성숙한 지방-적재 지방세포 구성요소의 고갈을 필요로 한다. 이는 조직을 먼저 세정하여 유리 지질 (파쇄된 지방세포로부터 방출됨) 및 말초 혈액 성분 (조직 수확 동안 절제된 혈관으로부터 방출됨)의 존재를 감소시킨 다음, 유리 무손상 지방세포 및 결합 조직 매트릭스로부터의 다른 세포 집단을 탈응집시키는 일련의 세척 및 탈응집 단계에 의해 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등에는 혈관 내피 세포 (BEC), BEC 전구세포 (EPC), 및 지방 조직-유래 줄기 세포, 지방 조직-유래 기질 세포, 및 다른 세포 요소가 제공된다. 일부 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 응집체 또는 부분 탈응집된 단편 형태인 세포, 예를 들어 세포외 매트릭스에 의해 연결된 2개 이상의 혈관 세포를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 응집체는 세포외 매트릭스에 의해 연결된 10개 초과의 세포 또는 100개 초과의 세포를 포함하는 대형 응집체 또는 단편을 포함한다. 이러한 응집체는 여러 세포가 서로 그의 원래 배향과 근사하게 연결되도록 유지되는 혈액 또는 림프관 단편 (비제한적 예로서, 프로세싱 전에 조직에서 함께 결합된 세포외 매트릭스의 일부 또는 전부에 의해 연결된 혈관 내피 세포 및 혈관주위세포 또는 평활근 세포 포함)을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 특정한 실시양태에서, 이러한 응집체는 프로세싱 전에 조직에 있었던 것보다 더 적은 지방세포와 접촉 또는 회합된 수백개의 세포를 포함할 수 있다.
세정은 임의적이지만 바람직한 단계이며, 여기서 조직을, 유리 지질 및 단세포 구성요소, 예컨대 혈액 내 상기 구성요소를 세척 제거하여 무손상 지방 조직 단편을 남게 하기 위한 용액과 혼합한다. 한 실시양태에서, 환자로부터 제거된 지방 조직을 등장성 염수 또는 다른 생리학적 용액(들), 예를 들어 백스터 인크.(Baxter Inc.)의 플라스말라이트(Plasmalyte)® 또는 애보트 랩스(Abbott Labs)의 노르모졸(Normosol)®과 혼합한다. 무손상 지방 조직 단편은, 여과, 경사분리, 침강 또는 원심분리를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방식으로 유리 지질 및 세포로부터 분리될 수 있다. 일부 실시양태에서, 지방 조직은 본원에 논의된 바와 같이, 조직 수집 용기 내에 배치된 필터를 사용함으로써 비-지방 조직으로부터 분리된다. 다른 실시양태에서, 지방 조직은 물질을 분리하기 위한 경사분리, 침강 및/또는 원심분리 기술을 사용하는 조직 수집 용기를 사용하여 비-지방 조직으로부터 분리된다.
이어서, 무손상 조직 단편을 기계적 힘 (민싱 포스 또는 전단력), 초음파 또는 다른 물리적 에너지, 레이저, 마이크로웨이브, 단일 또는 조합 단백질분해 효소, 예컨대 콜라게나제, 트립신, 리파제, 리버라제 H1, 뉴클레아제, 또는 그 전문이 본원에 참조로 명백하게 포함되는 미국 특허 번호 5,952,215, "Enzyme composition for tissue dissociation"에 개시된 바와 같은 블렌드자임(Blendzyme) 패밀리의 구성원, 및 펩신으로의 효소적 소화, 또는 기계적 및 효소적 방법의 조합을 비롯한 임의의 통상적인 기술 또는 방법을 사용하여 탈응집시킨다. 예를 들어, 무손상 조직 단편의 세포 구성요소를 그 전문이 본원에 참조로 명백하게 포함되는 미국 특허 번호 5,372,945에 개시된 바와 같은 지방 조직 내 미세혈관 내피 세포를 수집하는 방법과 유사한, 지방 조직의 콜라게나제-매개 해리를 사용하는 방법에 의해 탈응집시킬 수 있다. 사용될 수 있는 콜라게나제를 사용하는 추가의 방법은, 예를 들어 둘 다 그 전문이 본원에 참조로 명백하게 포함되는 미국 특허 번호 5,830,741, "Composition for tissue dissociation containing collagenase I and II from clostridium histolyticum and a neutral protease" 및 문헌 [Williams, et al., 1995, "Collagenase lot selection and purification for adipose tissue digestion," Cell Transplant 4(3):281-9]에 개시되어 있다. 유사하게, 트웬티맨(Twentyman) 등 (그 전문이 본원에 참조로 명백하게 포함되는 문헌 [Twentyman, et al., 1980, "Use of bacterial neutral protease for disaggregation of mouse tumours and multicellular tumor spheroids," Cancer Lett. 9(3):225-8])에 개시된 바와 같이, 중성 프로테아제를 콜라게나제 대신에 사용할 수 있다. 게다가, 본원에 기재된 방법은 효소의 조합, 예컨대 콜라게나제 및 트립신의 조합, 또는 효소, 예컨대 트립신 및 기계적 해리의 조합을 사용할 수 있다.
이어서, 지방 조직-유래 세포, 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 성숙한 지방세포의 수를 감소시킴으로써 탈응집된 조직 단편으로부터 얻을 수 있다. 이어서, 탈응집된 지방 조직의 현탁액 및 지방 조직이 탈응집된 액체를 또 다른 용기, 예컨대 세포 수집 용기에 통과시킨다. 조직 수집 용기로부터 현탁액을 회수하고 이를 세포 수집 용기로 압박하는 펌프, 예컨대 연동 펌프를 사용함으로써 1개 이상의 도관을 통해 현탁액을 세포 수집 용기로 흐르게 할 수 있다. 다른 실시양태는 밀폐된 시스템을 유지하면서 중력 또는 진공을 사용하는 것을 사용할 수 있다. 현탁액 중 세포의 분리는 부양성 밀도 침강, 원심분리, 정화, 여과, 고체 상 모이어티에 대한 차등 부착 및 그로부터의 용리, 항체-매개 선택, 전하의 차이, 면역자기 비드, 형광 활성화 세포 분류 (FACS) 또는 다른 수단에 의해 달성될 수 있다. 이들 다양한 기술의 예 및 이러한 기술을 수행하기 위한 장치는 모두 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 6,277,060; 6,221,315; 6,043,066; 6,451,207; 5,641,622; 및 6,251,295에서 찾아볼 수 있다. 밀폐된 시스템을 유지하면서, 많은 이들 장치를 세포 프로세싱 유닛 내에 도입할 수 있다.
일부 실시양태에서, 회전 막 필터를 사용하여 현탁액 중 세포를 현탁액의 무세포 구성요소로부터 분리한다. 다른 실시양태에서, 원심분리를 사용하여 현탁액 중 세포를 무세포 구성요소로부터 분리한다. 하나의 이러한 예시적 실시양태에서, 세포 수집 용기는 (예를 들어, 수동으로 또는 로봇공학에 의해) 원심분리기에 넣도록 구조화된 가요성 백일 수 있다. 다른 실시양태에서, 가요성 백을 사용하지 않는다. 원심분리 후, 본원에 논의된 바와 같이, ADRC를 함유하는 세포 구성요소는 펠릿을 형성한 다음, 이를 세포가 1개 이상의 도관을 통해 혼합 용기에 통과될 수 있도록 완충 용액과 재현탁시킬 수 있다. 재현탁 유체는 임의의 적합한 수단에 의해 제공될 수 있다. 예를 들어, 완충제가 세포 수집 용기 상의 포트에 주입될 수 있거나, 또는 세포 수집 용기가 저장소를 파열시킴으로써 세포의 펠릿과 혼합될 수 있는 완충제의 저장소를 포함할 수 있다. 회전 막 필터가 사용되는 경우에, 세포가 분리 절차 후 액체의 부피에 남아있기 때문에 재현탁은 임의적이다.
한 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 하위집단을 표면, 예를 들어 플라스틱에 대한 단기간 부착에 의해 다른 세포로부터 선택한다. 한 실시양태에서, 선택의 목적을 위한 부착의 지속기간은 대략 1시간이다. 제2 실시양태에서, 표면에 대한 부착의 지속기간은 24시간이다.
본원에 기재된 일부 실시양태는 지방 조직을 완전 탈응집시켜 활성 세포를 성숙한 지방세포 및 결합 조직으로부터 분리하는 방법에 관한 것임에도 불구하고, 추가 실시양태는 지방 조직을 단지 부분 탈응집시키는 방법에 관한 것이다. 예를 들어, 부분 탈응집은 1종 이상의 효소로 수행될 수 있으며, 이는 그렇지 않으면 효소가 그 위에 남아있어 조직을 완전 탈응집시키는 시간 양에 비해 조기에 지방 조직의 적어도 일부로부터 제거된다. 이러한 과정은 더 적은 프로세싱 시간을 필요로 할 수 있으며, 다수의 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등이 부분 또는 완전 접촉하도록 유지되는 조직 구성요소의 단편을 생성시킬 것이다. 또 다른 실시양태에서, 기계적 힘 (예를 들어, 초음파 에너지 또는 전단력)을 인가하여 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등, 및/또는 프로세싱 전에 조직에 회합되어 있었던 성숙한 지방세포의 전부 또는 일부로부터 단리된 지방-유래 세포를 포함하는 단편을 제조한다.
일부 실시양태에서, 조직을 멸균 완충 등장성 염수로 세척하고, 적절한 탈응집을 제공하기에 충분한 콜라게나제 농도, 온도 및 기간 동안 콜라게나제와 함께 인큐베이션한다. 바람직한 실시양태에서, 사용되는 콜라게나제 효소는 관련 기관 (예를 들어, 미국 식품 의약품국)에 의해 인간 사용에 대해 승인된 것일 것이다. 적합한 콜라게나제 제제는 재조합 및 비-재조합 콜라게나제를 포함한다. 비-재조합 콜라게나제는 인디애나주 인디애나폴리스 소재의 에프. 호프만-라 로슈 리미티드(F. Hoffmann-La Roche Ltd.) 및/또는 뉴욕주 린브룩 소재의 어드밴스 바이오팩쳐스 코포레이션(Advance Biofactures Corp.)으로부터 얻을 수 있다. 재조합 콜라게나제는 또한 미국 특허 번호 6,475,764에 개시된 바와 같이 얻을 수 있다.
한 실시양태에서, 용액은 콜라게나제를 약 10 μg/ml 내지 약 50 μg/ml (예를 들어, 10μg/ml, 20μg/ml, 30μg/ml, 40μg/ml, 또는 50μg/ml)의 농도로 함유하고, 이를 약 30℃ 내지 약 38℃에서 약 20분 내지 약 60분 동안 인큐베이션한다. 이들 파라미터는 시스템이 적절한 시간 프레임에서 원하는 세포 집단을 추출하기에 효과적인 것을 확인하기 위해 실험 연구에 의해 최적화되는 콜라게나제 효소의 공급원에 따라 달라질 것이다. 특정한 바람직한 농도, 시간 및 온도는 20 μg/ml 콜라게나제 (중성 프로테아제 디스파제; 로슈의 블렌드자임 1과 혼합됨) 및 약 37℃에서 45분 동안의 인큐베이션이다. 대안적인 바람직한 실시양태는 0.5 단위/ml 콜라게나제 (중성 프로테아제 써모리신; 블렌드자임 3과 혼합됨)를 적용한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 사용되는 콜라게나제 효소는 관련 기관 (예를 들어, 미국 식품 의약품국)에 의해 인간 사용에 대해 승인된 물질이다. 사용되는 콜라게나제에는 미세-기관 및 오염물, 예컨대 내독소가 없어야 한다.
탈응집 후, 활성 세포 집단을 세척/세정하여 탈응집 과정의 첨가제 및/또는 부산물 (예를 들어, 콜라게나제 및 새로 방출된 유리 지질)을 제거할 수 있다. 이어서, 활성 세포 집단을 상기 논의된 바와 같이, 원심분리 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자를 공지된 다른 방법에 의해 농축시킬 수 있다. 이들 프로세싱후 세척/농축 단계는 개별적으로 또는 동시에 적용될 수 있다. 한 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 농축시키고, 세포 집단을 연속 유동 회전 막 시스템 등, 예컨대 예를 들어 모두 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 5,034,135 및 5,234,608에 개시된 시스템을 통해 통과시킴으로써 콜라게나제를 제거한다.
상기 이외에도, 줄기 세포, 재생 세포, 줄기 세포 및 재생 세포 등을 포함하는 지방-유래 세포 집단을 추가로 정제하기 위해 적용될 수 있는 많은 공지된 세척후 방법이 존재한다. 이들은 양성 선택 (표적 세포의 선택), 음성 선택 (원치 않는 세포의 선택적 제거) 둘 다, 또는 그의 조합을 포함한다. 본원 및 문헌에 기재된 바와 같은 유동 세포측정법에 의한 분리 이외에도, 세포를 (예를 들어, 유전영동 또는 다양한 원심분리 방법 등에 의해) 전하 또는 크기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 수많은 다양한 파라미터를 기준으로 하여 분리할 수 있다.
세포 프로세싱에 사용되는 스테이지형 메카니즘의 많은 다른 형태는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 예를 들어, 세척 및 탈응집 동안의 조직 및 염수의 혼합은 교반에 의해 또는 유체 재순환에 의해 발생할 수 있다. 세포 세척은 연속 유동 메카니즘, 예컨대 회전 막 접근법, 차등 부착, 차등 원심분리 (차등 침강, 속도 또는 구배 분리를 포함하나, 이에 제한되지는 않음), 또는 수단의 조합에 의해 매개될 수 있다. 유사하게, 추가의 구성요소는, 성장 인자 또는 다른 생물학적 반응 조절제의 첨가, 및 세포와 상기 세포를 수용자에게 이식하도록 의도된 천연 또는 합성 구성요소와의 혼합을 비롯한 세포의 추가의 조작을 가능하게 한다.
프로세싱후 조작은 세포 배양 또는 추가의 세포 정제를 또한 포함할 수 있다 (문헌 [Kriehuber, et al., 2001; Garrafa, et al., 2006]). 일부 실시양태에서, 일단 지방-유래 세포 집단, 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등이 얻어지면, 이를 세포 분류 장치 및/또는 구배 침강을 사용하여 추가로 정화, 농축, 농후화, 단리 또는 정제한다. 이들 기능을 수행하기 위한 메카니즘은 기재된 장치 내에 통합될 수 있거나, 또는 개별 장치에 도입될 수 있다. 그러나, 다수의 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 농축된 집단의 치료 유효량은 (예를 들어, 피부경화증, 레이노 증후군 또는 다른 섬유증-관련 질환 및 장애에서의) 통증 및/또는 섬유증의 감소를 위한 의약을 제조하기 위해 사용되며, 여기서 상기 세포의 농축된 집단은 상기 세포를 환자에게 투여하기 전에 배양시키지 않으면서, 통증 및/또는 섬유증의 감소를 필요로 하는 환자에게 투여될 것이다. 즉, 일부 실시양태는, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 농축된 집단의 치료 유효량을, 상기 세포를 환자에게 투여하기 전에 배양시키지 않으면서, 통증, 섬유증 또는 이들 둘 다의 감소를 필요로 하는 환자에게 투여하는, 통증, 섬유증 또는 이들 둘 다를 감소시키는 방법에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서, 조직 제거 시스템 및 프로세싱 세트는 치료 받는 환자의 부근, 예컨대 수술실 또는 외래환자 절차실에 (효과적으로 환자의 침상에) 존재할 것이다. 이는 신속하고 효율적인 조직 수확 및 프로세싱을 가능하게 하고, 시편 취급/라벨링 오류 기회를 감소시켜서, 단일 외과적 절차 과정으로 전체 과정을 수행하는 것을 가능하게 한다.
2004년 7월 2일에 출원된 발명의 명칭 "SYSTEMS AND METHODS FOR ISOLATING AND USING CLINICALLY SAFE ADIPOSE DERIVED REGENERATIVE CELLS"의 미국 출원 번호 10/884,638에 기재된 바와 같이, 1종 이상의 첨가제를 프로세싱 동안 및/또는 그 후에 세포에 첨가할 수 있다. 첨가제의 일부 예는 세척 및 탈응집을 최적화하는 작용제, 프로세싱 동안에 활성 세포 집단 (예를 들어, 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등)의 생존율을 향상시키는 첨가제, 항미생물제 (예를 들어, 항생제), 지방세포 및/또는 적혈구를 용해시키는 첨가제, 또는 관심 세포 집단을 농후화시키는 첨가제 (고체 상 모이어티에 대한 차등 부착에 의함, 또는 세포 집단의 실질적인 감소 또는 농후화를 달리 촉진함)를 포함한다.
본원에 기재된 바와 같이 얻어진 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 관련 기술분야에 공지된 접근법에 따라 배양할 수 있고, 배양된 세포를 여러 구체화된 방법으로 사용할 수 있다. 예를 들어, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을, 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Ng, et al., Nov 2004, "Interstitial flow differentially stimulates blood and lymphatic endothelial cell morphogenesis in vitro," Microvasc Res. 68(3):258-64]에 기재된 바와 같이, 낮은 또는 높은 소 태아 혈청 또는 유사한 제품의 존재 하에 콜라겐-코팅된 접시 또는 3D 콜라겐 겔 배양물 상에서 내피 세포 기초 배지에서 배양할 수 있다. 대안적으로, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 다른 세포외 매트릭스 단백질-코팅된 접시 상에서 배양할 수 있다. 사용될 수 있는 세포외 매트릭스 단백질의 예는 피브로넥틴, 라미닌, 비트로넥틴 및 제IV형 콜라겐을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 젤라틴, 또는 배양 용기 내로의 내피 세포의 부착을 유사하게 촉진하는 임의의 다른 화합물 또는 지지체가 ADRC를 배양하기 위해 또한 사용될 수 있다.
지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 시험관내 배양하기 위해 사용될 수 있는 기초 배양 배지의 예는 EGM, RPMI, M199, MCDB131, DMEM, EMEM, 맥코이(McCoy) 5A, 이스코브(Iscove) 배지, 변형 이스코브 배지, 또는 관련 기술분야에 혈액 내피 세포의 성장을 지지하는 것으로 공지된 임의의 다른 배지를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. ADRC를 배양하기 위해 사용될 수 있는 기초 배양 배지에 첨가될 수 있는 보충 인자 또는 화합물의 예는 아스코르브산, 헤파린, 내피 세포 성장 인자, 내피 성장 보충제, 글루타민, HEPES, Nu 혈청, 소 태아 혈청, 인간 혈청, 말 혈청, 혈장-유래 말 혈청, 철-보충 소 혈청, 페니실린, 스트렙토마이신, 암포테리신 B, 염기성 및 산성 섬유모세포 성장 인자, 인슐린-성장 인자, 성상세포 조건화 배지, 섬유모세포 또는 섬유모세포-유사 세포 조건화 배지, 탄산수소나트륨, 표피 성장 인자, 소 뇌하수체 추출물, 황산마그네슘, 이소부틸메틸크산틴, 히드로코르티손, 덱사메타손, 디부티릴 시클릭 AMP, 인슐린, 트랜스페린, 소듐 세레나이트, 에스트라디올, 프로게스테론, 성장 호르몬, 안지오제닌, 안지오포이에틴-1, Del-1, 폴리스타틴, 과립구 콜로니-자극 인자 (G-CSF), 에리트로포이에틴, 간세포 성장 인자 (HGF) /산란 인자 (SF), 렙틴, 미드카인, 태반 성장 인자, 혈소판-유래 내피 세포 성장 인자 (PD-ECGF), 혈소판-유래 성장 인자-BB (PDGF-BB), 플레이오트로핀 (PTN), 프로그래뉼린, 프로리페린, 형질전환 성장 인자-알파 (TGF-알파), 형질전환 성장 인자-베타 (TGF-베타), 종양 괴사 인자-알파 (TNF-알파), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)/혈관 투과성 인자 (VPF), 인터류킨-3 (IL-3), 인터류킨 7 (IL-7), 인터류킨-8 (IL-8), 에프린, 매트릭스 메탈로프로테이나제 (예컨대, MMP2 및 MMP9), 또는 관련 기술분야에 내피 세포의 생존, 증식 또는 분화를 촉진하는 것으로 공지된 임의의 다른 화합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
세포의 추가의 프로세싱은 또한 하기를 포함할 수 있다: 세포 확장 (1종 이상의 재생 세포 유형) 및 세포 유지 (세포 시트 세정 및 배지 교환 포함); 하위배양; 세포 시딩; 일시적 형질감염 (벌크 공급으로부터 형질감염된 세포의 시딩 포함); 수확 (효소적, 비-효소적 수확 및 기계적 스크레이핑에 의한 수확 포함); 세포 생존율 측정; 세포 플레이팅 (예를 들어, 마이크로타이터 플레이트 상에서, 확장을 위한 개별적 웰로부터의 세포의 피킹, 세포의 새로운 웰로의 확장 포함); 고처리량 스크리닝; 세포 요법 적용; 유전자 요법 적용; 조직 공학 적용; 치료 단백질 적용; 바이러스 백신 적용; 뱅킹 또는 스크리닝을 위한 재생 세포 또는 상청액의 수확, 세포 성장, 용해, 접종, 감염 또는 유도의 측정; 세포주 (하이브리도마 세포 포함)의 생성; 투과성 연구를 위한 세포의 배양; RNAi 및 바이러스 내성 연구를 위한 세포; 녹-아웃 및 트랜스제닉 동물 연구를 위한 세포; 친화도 정제 연구; 구조 생물학 적용; 검정 개발 및 단백질 공학 적용.
일반적으로, 지방-유래 세포의 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단, 줄기 세포 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 집단를 단리하기에 유용한 시스템은 a) i) 대상체로부터 제거된 지방 조직을 수용하도록 구조화된 조직 수집 유입구 포트, 및 ii) 상기 대상체로부터의 지방-유래 세포 집단을 보유하고 지방세포, 혈액 및 염수를 통과시키도록 구성된, 조직 수집 용기 내에 배치된 필터를 포함하는 조직 수집 용기; b) 밀폐된 경로가 유지되도록 도관에 의해 조직 수집 용기에 커플링된 혼합 용기 또는 세포 프로세싱 챔버를 포함하며, 여기서 상기 혼합 용기는 상기 세포 집단을 수용하고, 상기 혼합 용기는 적어도 1종의 첨가제를 상기 지방-유래 세포의 집단에 도입하기 위한 첨가제 포트; 및 환자에게 투여하기 위해 혼합 용기 또는 세포 프로세싱 챔버로부터의 상기 지방-유래 세포의 집단의 제거를 가능하게 하도록 구성된 유출구 포트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 혼합 용기 또는 세포 프로세싱 용기는 세포 농축 장치, 예컨대 회전 막 필터 및/또는 원심분리기를 추가로 포함한다. 본원에 개시된 실시양태의 측면은 도관에 의해 상기 혼합 챔버 또는 세포 프로세싱 챔버에 부착되고 밀폐된 경로를 유지하면서 상기 혼합 챔버 또는 세포 프로세싱 챔버로부터 세포를 수용하도록 구성된 세포 분류기를 또한 포함한다. 상기 실시양태의 측면은 도관에 의해 상기 혼합 챔버 또는 세포 프로세싱 챔버에 부착되고 밀폐된 경로를 유지하면서 상기 지방-유래 세포의 집단을 수용하도록 구성된 원심분리기를 또한 포함할 수 있으며, 여기서 상기 원심분리기는 상기 지방-유래 세포의 집단의 추가의 분리 및 정제에 적합한 구배를 포함한다 (예를 들어, 피콜-하이파크). 상기 지방-유래 세포의 집단을 수용하도록 구성된 상기 구배를 함유하는 상기 원심분리기는, 상기 혼합 용기 또는 세포 프로세싱 챔버 내에 또한 함유될 수 있다.
단리된 세포 집단 중 ADRC 및 ADRC 하위세트의 측정
집단 중 특정 세포의 존재를 결정하기 위한 본원에 기재된 지방-유래 세포의 집단의 측정, 분석 또는 특징화는 관련 기술분야에서 이용가능한 임의의 수의 단백질 및/또는 RNA 검출 검정을 사용하여 세포 프로세싱 유닛의 밀폐된 시스템 내에서 또는 세포 프로세싱 유닛의 밀폐된 시스템 외부에서 착수될 수 있다. 추가로, 지방-유래 세포 또는 특정 세포 (예를 들어, 줄기 세포, 전구 세포, 전구체 세포 등)의 측정, 분석 또는 특징화는 단리 절차 (예를 들어, 특정 세포 유형 (예를 들어, 재생 세포)에 대해 특이적인 항체를 사용하는 세포 분류 또는 특정 세포 유형에 대해 선택적인 배지를 사용하는 구배 분리)의 일부일 수 있거나, 또는 그를 동반할 수 있다.
일부 실시양태에서, 단리된 세포 집단의 측정 또는 특징화는 특정 세포 유형 (예를 들어, 지방-유래 재생 세포, 지방-유래 줄기 세포, 지방-유래 전구체 세포, 지방-유래 전구 세포, 내피 세포, 내피 전구체 세포 등)에 대해 특유하거나 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 관심 특정한 세포 유형의 존재를 확인하는 것으로 달리 간주되는 단백질 마커의 존재 또는 부재를 검출함으로써 수행된다. 상기 단백질 또는 마커에 대해 특이적인 항체 프로브를 사용하는 통상적인 웨스턴 블롯 이외에도, 세포 표면 마커 발현 시에 활용되는 면역선택 기술이 관련 기술분야에 공지되고 문헌에 기재된 수많은 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 이러한 접근법은 CD34-양성 세포의 분리를 위한 와츠(Watts) 등에 의해 기재된 바와 같은 수동, 자동화, 반자동화 장치 (문헌 [Watts, et al., 2002, Variable product purity and functional capacity after CD34 selection: a direct comparison of the CliniMACS (v2.1) and Isolex 300i (v2.5) clinical scale devices," Br J Haematol. 2002 Jul;118(1):117-23])와 함께 고체 기질 (예를 들어, 자기 비드)에 직접 또는 간접 연결된 항체를 사용하여, 패닝, 형광 활성화 세포 분류기 (FACS)의 사용, 또는 다른 수단에 의해 수행될 수 있다.
분리, 측정 및 특징화는 또한 세포 집단 중에 존재하는 특정 세포 유형에 의해 발현되지만 1종 이상의 다른 세포 유형 또는 하위집단에 의해서는 발현되지 않는 세포 표면 마커 또는 마커 조합을 인식하는 항체를 사용하는 양성 선택에 의해 달성될 수 있다. 분리, 측정 및 특징화는 또한 ADRC에 대한 인식가능한 결합을 나타내지 않는 항체 또는 항체 조합을 사용하여 단리된 지방-유래 세포의 집단으로부터 원치 않는 세포 유형을 제거하는 음성 선택에 의해 달성될 수 있다. 특히 ADRC에 의해 특이적으로 발현되는 마커를 기재하였다. 음성 선택에 사용될 수 있는 항체의 예는 내피 세포에 의해 발현되는 마커를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 음성 선택에 적용될 수 있는 관련 기술분야에 널리 공지된 많은 다른 항체가 존재한다. ADRC에 대한 마커의 상대 특이성은 정제 및/또는 특징화 또는 측정 전략에 또한 활용될 수 있다. 예를 들어, 형광-표지된 리간드는 세포의 FACS-기반 분류에 사용될 수 있거나, 또는 고체 기질에 직접 또는 간접 접합된 리간드는 상기 기재된 면역선택 접근법과 유사한 방식으로 분리하기 위해 사용될 수 있다.
특이적 세포 유형 (예를 들어, 재생 세포의 구체적 유형)의 존재 또는 부재를 결정하기 위한 지방-유래 세포 집단의 측정 및 특징화는 특유하거나 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 ADRC의 존재 또는 부재를 나타내는 마커인 것으로 달리 간주되는 단백질을 코딩하는 1종 이상의 RNA의 분석을 또한 수반할 수 있다. 일부 실시양태에서, 예를 들어 단리된 세포 집단 또는 그의 일부분을, 예를 들어 CD45, CD11b, CD14, CD68, CD90, CD73, CD31 및/또는 CD34 중 1종 이상을 코딩하는 RNA의 존재 또는 부재에 대해 분석한다. 상기 RNA의 검출은 노던(Northern) 혼성화, PCR-기반 방법론, 전사 유출 검정, 유전자 어레이 및 유전자 칩을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야의 통상의 기술자가 이용가능한 임의의 기술에 의해 달성될 수 있다.
ADRC 및 ADRC 하위세트를 포함하는 조성물
상기 언급된 접근법에 따르면, 원료 지방 조직을 프로세싱하여 성숙한 지방세포 및 결합 조직을 실질적으로 제거하여, 대상체의 신체에 배치하기에 적합한 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 포함하는 불균질한 다수의 지방 조직-유래 세포를 얻는다. 추출된 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 성숙한 지방세포 및 결합 조직이 실질적으로 없는 이들 세포를 포함하는 순수한 조성물로 제공되거나, 또는 불활성 성분 (예를 들어, 담체) 또는 제2 활성 성분 (예를 들어, 지방-유래 줄기 세포 및/또는 지방-유래 내피 세포)와 조합되어 제공될 수 있다. 세포는 수용자에게 단독으로 배치되거나, 또는 생물학적 물질, 예컨대 세포, 조직, 조직 단편 또는 세포 성장 및/또는 분화의 자극제, 지지체, 보철 또는 의료 장치와 조합되어 (예를 들어, 단일 조성물로 또는 공-투여됨) 배치될 수 있다. 예를 들어 본원에 논의된 바와 같이, 조성물은 추가의 구성요소, 예컨대 세포 분화 인자, 성장 프로모터, 면역억제제 또는 의료 장치를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포는 임의의 상기 언급된 첨가제와 함께, 수용자에게 치료 이익을 제공할 의도로 단일 수술 절차의 맥락에서 이들이 얻어졌던 사람에게 배치 (예를 들어, 자가 전달)된다.
따라서, 본 발명의 측면은 정화, 농후화, 농축, 단리 또는 정제된 지방-유래 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 포함하거나, 그로 이루어지거나, 또는 그로 본질적으로 이루어진 조성물, 및 이들 세포와, 비프로세싱된 지방 조직, 지방세포, 콜라겐 매트릭스 또는 지지체, 세포 분화 인자, 성장 프로모터, 면역억제제, 지방-유래 줄기 세포 및/또는 전구 세포를 함유하는 프로세싱된 지방 조직, 및 농후화된 양의 ADRC를 이미 함유하는 세포 집단을 포함하나, 이에 제한되지 않는 생물학적 물질, 첨가제, 지지체, 보철 또는 의료 장치와의 혼합물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상기 언급된 조성물은 전체 지방-조직 세포 집단에 비해 0.5%-1%, 1-2%, 2%-4%, 4%-6%, 6%-8%, 8%-10%, 10%-20%, 20%-30%, 30%-40%, 40%-50%, 50%-60%, 60%-70%, 70%-80%, 80%-90%, 또는 90%-100% 이상의 ADRC인 양 또는 농도의 정화, 단리 또는 정제된 ADRC를 포함한다. 일부 실시양태에서, ADRC는, 예를 들어 CD45, CD11b, CD14, CD68, CD90, CD73, CD31 및/또는 CD34의 일정 양을 발현한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 임의의 이용가능한 제약 화학 기술을 사용하여, 적어도 1종의 제약상 허용되는 희석제, 아주반트 또는 담체 물질을 포함하는 조성물로 제제화된다. 일반적으로, 이는 인간 또는 동물에 유해할 수 있는 불순물이 본질적으로 없는 조성물을 제조하는 것을 수반한다.
적절한 염 및 완충제는 ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단의 흡수를 안정화시키고 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다. 본원에 고려된 조성물은 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 유효량을 제약상 허용되는 담체 또는 수성 매질 중에 포함할 수 있다.
본원에 기재된 조성물의 투여는 표적 조직이 해당 경로를 통해 이용가능한 한 임의의 통상적인 경로를 통할 수 있다. 본원에 기재된 방법에 따라 투여되는 조성물은, 예를 들어 정맥내, 동맥내, 림프내, 피하, 피내, 근육내, 유방내, 복강내, 척수강내, 안구후, 폐내 (예를 들어, 기간 방출); 경구, 설하, 비강, 항문, 질 또는 경피 전달에 의해, 스프레이 또는 다른 직접적 적용에 의해, 또는 특정한 부위에서의 외과적 이식에 의해 대상체에게 도입될 수 있다. 각각의 이들 투여 방법에서, 조성물은 작용 부위에서의 조성물의 체류를 증가시키거나 또는 작용 부위에서의 조성물의 트래픽을 용이하게 하는 특성을 갖는 담체 또는 다른 물질을 포함하거나 포함하지 않을 수 있다. 도입은 단일 용량 또는 일정 시간에 걸친 다수의 용량으로 이루어질 수 있다. 세포 요법제를 위한 비히클은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 문헌에 기재되어 왔다. 예를 들어, 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. (1990, Mack Publ. Co, Easton Pa. 18042) pp 1435-1712]을 참조한다. 멸균 용액은 필요한 양의 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을, 본원에 기재된 다른 구성요소 중 1종 이상을 갖거나 갖지 않는 적절한 완충제 중에 도입함으로써 제조된다.
본원에 기재된 임의의 2종 이상의 작용제와의 조합 요법은 또한 본 발명의 한 측면으로서 고려된다. 유사하게, 본원에 기재되거나, 새로운 키트로서 함께 포장되거나, 또는 단일 조성물로서 함께 제제화되는 작용제의 모든 조합은 본 발명의 한 측면으로서 간주된다. 본 발명의 측면에 따라 사용하기 위한 조성물은 바람직하게는 제약상 허용되는 담체와 함께 제제화된 지방-유래 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 포함한다. 세포는 의도된 치료 효과를 향상시키거나, 제어하거나, 또는 달리 유도하기 위한 첨가제와 함께 또한 적용될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 지방-유래 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을, 세포 집단을 농후화하기 위한 항체-매개 양성 및/또는 음성 세포 선택의 사용에 의해 추가로 정제하여, 효능을 증가시키거나, 이환율을 감소시키거나, 또는 절차의 용이성을 용이하게 할 수 있다. 유사하게, 세포는 이식된 세포의 운명을 지지 및/또는 유도함으로써 생체내 조직 조작을 용이하게 하는 생체적합성 매트릭스와 함께 적용될 수 있다. 동일한 방식으로, 세포는, 세포에 의해 제공되는 치료 반응을 촉진하는 것으로 여겨지거나 또는 촉진하도록 의도된 유전자 산물을 발현하도록 하는 유전자 조작 후에 투여된다.
지방-유래 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 단독으로 적용되거나, 또는 다른 세포, 조직, 조직 단편, 성장 인자, 생물학적 활성 또는 불활성 화합물, 재흡수성 플라스틱 스캐폴드 또는 집단의 전달, 효능, 내약성 또는 기능을 향상시키도록 의도된 다른 첨가제와 조합되어 적용될 수 있다. ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단은 DNA의 삽입에 의해 또는 세포 배양물 내 배치에 의해, 구조적 또는 치료적 목적의 유도를 위해 세포의 기능을 변화, 향상 또는 보충하도록 하는 방식으로 또한 변형될 수 있다.
추가의 실시양태에서, 지방-유래 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은 세포가 생착 부위 내에서, 즉 종양 내에서 전구약물을 활성화하는 것을 가능하게 하는 전구약물 전환 효소를 코딩하는 유전자와 조합된다. 유전자 (또는 유전자의 조합)의 첨가는 아데노바이러스 형질도입, "유전자 총", 리포솜-매개 형질도입, 및 레트로바이러스 또는 렌티바이러스-매개 형질도입, 플라스미드 또는 아데노-연관 바이러스를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야에 공지된 임의의 기술에 의한 것일 수 있다. 세포는 형질도입이 계속되거나 계내에서 개시될 수 있도록 하는 시간에 걸쳐, 유전자를 세포에 방출시키고/거나 제시할 수 있는 유전자 전달 비히클을 보유하는 담체 물질과 함께 이식될 수 있다. 특히 세포 및/또는 세포를 함유하는 조직을 상기 세포 및/또는 조직이 얻어졌던 환자 이외의 환자에게 투여하는 경우에, 이식의 거부를 감소시키고, 바람직하게는 방지하기 위해 1종 이상의 면역억제제를 상기 세포 및/또는 조직을 수용하는 환자에게 투여할 수 있다.
또한 추가의 실시양태는 지방-유래 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 생체외 형질감염시키고, 후속적으로 이들 형질감염된 세포를 대상체에게 전달하는 것에 관한 것이다. 이러한 실시양태는 전달된 유전자의 생체내 수준을 상향조절하고, 유전자(들)의 과소발현으로부터 유발되거나 또는 유전자의 상향조절에 대해 달리 반응성인 질환 또는 장애로부터의 완화를 제공하기에 효과적인 접근법일 수 있는 것으로 간주된다 (예를 들어, 모두 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Gelse, et al., 2003, "Articular cartilage repair by gene therapy using growth factor-producing mesenchymal cells," Arthritis Rheum. 48:430-41; Huard, et al, 2002, "Muscle-derived cell-mediated ex vivo gene therapy for urological dysfunction," Gene Ther. 9:1617-26; Kim, et al., 2002, "Ex vivo gene delivery of IL-1Ra and soluble TNF receptor confers a distal synergistic therapeutic effect in antigen-induced arthritis," Mol. Ther. 6:591-600] 참조). 지방-유래 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 적절한 세포에 전달하는 것은 생체외에서, 계내에서, 또는 벡터, 보다 특히 바이러스 벡터 (예를 들어, 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스 또는 레트로바이러스)에 의해 생체내에서, 또는 물리적 DNA 전달 방법 (예를 들어, 리포솜 또는 화학 처리)의 사용에 의해 생체외에서 실행된다. 예를 들어, 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Anderson, 1998, "Human Gene Therapy," Nature Suppl. to vol. 392 (6679):25-20]을 참조한다. 유전자 요법 기술은 또한 모두 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Friedmann, 1989, "Progress toward human gene therapy," Science 244(4910):1275-1281, Verma (1990), "Gene therapy." Scientific American 263(5): 68-84, 및 Miller (1992), "Human gene therapy comes of age," Nature, 357:455-460]에 검토되어 있다. 지방-유래 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을, 증식시키거나 또는 이러한 세포에 대해 원하는 효과 또는 그의 활성을 생성시키기 위해 첨가제 (예를 들어, 분화 또는 췌장 세포 형성을 유발하는 화합물)의 존재 하에 생체외 배양할 수 있다. 이어서, 처리된 세포를 대상체에게 도입할 수 있다.
일부 실시양태에서, 생체외 유전자 요법은 국부로, 예를 들어 섬유증 반흔 부위에서 수행된다. 예를 들어, 카테터-매개 전달을 사용함으로써, 지방-유래 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 포유동물 대상체에게 전달할 수 있다. 국부 전달을 위한 물질 및 방법은, 예를 들어 본원에 참조로 명백하게 포함되는 문헌 [Lincoff, et al. (1994), "Local drug delivery for the prevention of restenosis. Fact, fancy, and future," Circulation, 90: 2070-2084]에 검토되어 있다. 예를 들어, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등을 주입-관류 풍선 카테터 (바람직하게는 미세다공성 풍선 카테터), 예컨대 관상동맥내 약물 주입에 대한 문헌에 기재된 것에 의해 대상체에게 제공할 수 있다. 예를 들어, 모두 그 전문이 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 5,713,860 (Intravascular Catheter with Infusion Array); 미국 특허 번호 5,087,244; 미국 특허 번호 5,653,689; 문헌 [Wolinsky, et al. (1990) (Wolinsky Infusion Catheter), "Use of a perforated balloon catheter to deliver concentrated heparin into the wall of the normal canine artery," J. Am. Coll. Cardiol. 15: 475-481; 및 Lambert et al., 1993, "Local drug delivery catheters: functional comparison of porous and microporous designs," Coron. Artery Dis. 4: 469-475]을 참조한다. 부위-유도 체세포 유전자 요법을 위한 이러한 카테터의 사용은, 예를 들어 본원에 참조로 명백하게 포함되는 문헌 [Mazur, et al., 1994, "Coronary restenosis and gene therapy," Texas Heart Institute Journal 21: 104-111]에 기재되어 있다.
본 발명의 측면은 또한 지방-유래 세포, 예를 들어 ADRC (줄기 세포, 전구 세포, 전구체 세포, 또는 줄기 세포 및 전구 세포 및/또는 전구체 세포의 조합)를 치료 폴리펩티드를 코딩하는 유전자로 생체외 형질감염시키고, 형질감염된 세포를 포유동물 대상체에게 투여하는 것에 관한 것이다. 혈관 이식편에 유전자 변형된 내피 세포를 시딩하기 위한 절차는, 예를 들어 그 전문이 본원에 참조로 명백하게 포함되는 미국 특허 번호 5,785,965, "VEGF gene transfer into endothelial cells for vascular prosthesis"에 기재되어 있다.
일부 실시양태에서, 투여 단계는 포유동물 대상체에 보철 또는 의료 장치 (예를 들어, 혈관내 스텐트)를 이식하는 것을 포함하며, 여기서 스텐트는 ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단으로 코팅 또는 함침되어 있다. 형질감염된 내피 세포로 코팅 또는 시딩된 판막, 스텐트 또는 이식편을 구성하기 위한 예시적인 물질은 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Pavcnik, et al., 2004, "Second-generation percutaneous bioprosthetic valve: a short-term study in sheep," Eur. J. Endovasc. Surg. 40:1223-1227, 및 Arts, et al., 2002, "Contaminants from the Transplant Contribute to Intimal Hyperplasia Associated with Microvascular Endothelial Cell Seeding," Eur. J. Endovasc. Surg. 23:29-38]에 기재되어 있다. 또한, 본원에 참조로 포함되는 2005년 12월 22일에 출원된 발명의 명칭 "CELL-LOADED PROSTHESIS FOR REGENERATIVE INTRALUMINAL APPLICATIONS"의 미국 특허 출원 일련 번호 11/317,422를 참조한다. 예를 들어, 한 변형에서, ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단을 포함하는 합성 판막은 정사각형 스테인레스 스틸 스텐트에 봉합된다. 정사각형 스텐트는 배치 동안 판막을 위한 앵커를 제공하도록 각각의 말단에 짧은 바브를 가지며, 점막하 막은 판막 개구를 생성하도록 스텐트의 대각선 축에서 슬릿팅된다.
합성 판막의 표면은, 예를 들어 이식 전에 1-3일 동안 합성 판막을 적절한 세포 배양 배지에 배치하여 판막 표면이 세포로 완전 피복되도록 함으로써, 재생 세포를 포함하는 (예를 들어, 줄기 세포를 포함하거나, 전구 세포를 포함하거나, 전구체 세포, 또는 다른 재생 세포 - 그의 임의의 조합 포함 -를 포함하는) 형질감염 또는 비-형질감염 지방-유래 세포 집단으로 코팅될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 투여 단계는 포유동물 대상체에 혈관내 스텐트를 이식하는 것을 포함하며, 여기서 스텐트는 상기 인용된 문헌에 기재되고 문헌 [Lincoff, et al., 1994]에 검토된 바와 같이 코팅 또는 함침되어 있다. 스텐트를 형성하기 위한 금속 또는 중합체 와이어는, 재생 세포를 포함하는 (예를 들어, 줄기 세포를 포함하거나, 전구 세포를 포함하거나, 전구체 세포를 포함하거나, 또는 다른 재생 세포 - 그의 임의의 조합 포함 -를 포함하는) 형질감염 또는 비-형질감염된 지방-유래 세포 집단으로 함침된 다공성 생체적합성 중합체 또는 겔과 같은 조성물로 코팅된다 (또는 그에 침지될 수 있거나 또는 다르게는 사용 직전에 그로 용이하게 코팅될 수 있음). 와이어는 통상적인 물질 및 기술, 예컨대 혈관내 혈관성형술 카테터삽입을 사용하여 혈관 내강에 이식하기에 적합한 스텐트로 권선, 직조, 또는 달리 형성될 수 있다. 이러한 방식으로 개선될 수 있는 예시적인 스텐트는 모두 그 전문이 본원에 참조로 명백하게 포함되는 미국 특허 번호 5,800,507 및 5,697,967 (메드트로닉, 인크.(Medtronic, Inc.), 재협착의 치료를 제공할 수 있는 피브린 및 용리성 약물을 포함하는 내벽 스텐트를 기재하고 있음); 미국 특허 번호 5,776,184 (메드트로닉, 인크., 중합체, 및 상기 중합체와의 고체 또는 고체/용액인 치료 물질을 포함하는 다공성 코팅을 갖는 스텐트를 기재하고 있음); 미국 특허 번호 5,799,384 (메드트로닉, 인크., 신체 내강을 접촉시키기 위한 생체적합성 중합체 표면을 갖는 가요성 원통형 금속 스텐트를 기재하고 있음); 및 미국 특허 번호 5,824,048, 5,679,400 및 5,779,729에 기재 및 도시되어 있다.
본원에 개시된 바와 같이, 재생 세포를 포함하는 (예를 들어, 줄기 세포를 포함하거나, 전구 세포를 포함하거나, 전구체 세포를 포함하거나, 또는 다른 재생 세포 - 그의 임의의 조합 포함 -를 포함하는) 지방-유래 세포 집단은 추가의 프로세싱 또는 세포를 추가로 정제, 변형, 자극 또는 달리 변화시키기 위한 이어지는 추가의 절차 없이, 대상체에게 제공되거나, 또는 손상된 조직에 직접 적용되거나 또는 손상된 조직에 근접하게 적용될 수 있다. 예를 들어, 환자로부터 얻어진 세포는, 투여 전에 세포를 배양하지 않으면서, 상기 환자에게 다시 제공될 수 있다. 여러 실시양태에서, 지방 조직의 수집 및 프로세싱 뿐만 아니라 ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단의 투여는 환자의 침상에서 수행된다. 바람직한 실시양태에서, 세포는 이들이 이식될 사람의 지방 조직으로부터 추출되어, 이식편에 대한 항원성 및/또는 면역원성 반응과 연관된 잠재적인 합병증이 감소된다. 그러나, 또 다른 개체로부터 추출된 세포의 사용이 또한 고려된다.
본원에 개시된 본 발명에 따르면, 지방 조직-유래 세포는 환자로부터 지방 조직을 수확한 후에 곧 환자에게 전달될 수 있다. 예를 들어, 세포는 지방 조직-유래 재생 세포 (예를 들어, 지방-유래 줄기 세포, 전구 세포, 전구체 세포, 또는 재생 세포의 임의의 조합)의 조성물을 얻기 위한 지방 조직의 프로세싱 직후에 투여될 수 있다. 한 실시양태에서, 바람직한 전달 시기는 부종의 진단 또는 환자가 부종이 발생할 위험에 놓일 가능성이 있는 절차의 진단 후에 수시간 내지 수일 정도에서 일어나야 한다. 또 다른 실시양태에서, 수확, 및 특정 경우에 치료는, 췌장 장애가 유발될 가능성이 있는 절차 이전에 일어날 수 있다. 궁극적으로, 전달 시기는 환자 이용률 및 지방 조직을 프로세싱하는데 필요한 시간에 의존할 것이다. 또 다른 실시양태에서, 전달 시기는, 환자에게 전달될 세포가 본원에 논의된 바와 같은 추가의 변형, 정제, 자극 또는 다른 조작에 적용되는 경우에 비교적 더 길 수 있다. 게다가, ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단은 다수회 투여될 수 있다. 예를 들어, 세포는 연장된 기간 (예를 들어, 수시간)에 걸쳐 계속 투여될 수 있거나, 또는 일정 기간에 걸쳐 연장되는 다수의 주사로 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 세포는 1회 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10회 또는 그 초과)의 주사로 대상체의 이환 조직에 투여될 수 있다. 예로서, 일부 실시양태에서, 경피증을 갖는 대상체에게는 본원에 개시된 바와 같은 지방-유래 세포가 각각의 손가락에 1개 또는 다수의 다양한 부위에 투여될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태는 손가락의 각각의 측면, 예를 들어 제1 및 제2 지골 옆의 손가락의 각각의 측면 상에 세포를 투여하는 것을 제공한다.
환자에게 투여되는 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 세포 및 다른 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 수는 지방 조직 프로세싱 후의 세포 수율과 관련되어 있을 수 있다. 또한, 전달되는 용량은 환자에 대한 세포의 전달 경로에 의존할 것이다. 췌장내 전달 시스템이 사용되는 경우에는 이들 시스템 및 방법이 췌장 상태를 치료하기 위한 가장 직접적인 경로를 제공할 수 있기 때문에 더 적은 세포가 필요할 수 있다. 환자에게 투여되는 세포 용량은 또한 수확되는 지방 조직의 양 및 (이용가능한 지방 조직의 양의 척도로서의) 공여자의 체질량 지수에 의존성일 것이다. 수확되는 조직의 양은 또한 손상 또는 부족의 정도에 의해 결정될 것이다. 다수의 조직 수확을 사용하거나 또는 적용들 사이의 세포의 적절한 저장과 함께 단일 수확을 사용하는 다수의 처리는 본 발명의 범주 내에 포함된다.
지방-유래 세포 - 예를 들어, 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 세포 및 다른 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등 -의 총수 중 일부분은 후속 사용을 위해 보유되거나 또는 동결보존될 수 있다. 프로세싱된 지방 조직의 부분은 환자에게 투여되기 전에 저장될 수 있다. 단기간 저장 (예를 들어, 6시간 미만)을 위해, 세포는 영양 용액으로 보충하거나 보충하지 않으면서 밀봉된 용기 내에서 실온 이하에서 저장될 수 있다. 중간기간 저장 (예를 들어, 48시간 미만)은 바람직하게는 2-8℃에서 등삼투성 완충 용액 (예를 들어, 플라스말라이트®) 중에서 세포 부착을 방지하는 물질로 구성되거나 또는 그로 코팅된 용기 내에서 수행된다. 장기간 저장은 바람직하게는 둘 다의 내용이 본원에 참조로 명백하게 포함되는 2002년 9월 13일에 출원된 PCT 출원 번호 PCT/US02/29207 및 2001년 9월 14일에 출원된 미국 특허 출원 일련 번호 60/322,070에 개시된 바와 같이, 세포 기능의 보유를 촉진하는 조건 하에 세포의 적절한 동결보존 및 저장에 의해 수행된다.
일부 실시양태에서, 지방-유래 세포 (예를 들어, 농후화, 농축, 단리 또는 정제된 ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단)의 그를 필요로 하는 대상체에게 제공되는 양은 약 10,000, 20,000, 30,000, 40,000, 50,000, 60,000, 70,000, 80,000, 90,000, 100,000, 110,000, 120,000, 130,000, 140,000, 150,000, 160,000, 170,000, 180,000, 190,000, 또는 200,000개 이상의 세포이고, 상기 지방-유래 세포 집단 중 ADRC의 양 (예를 들어, 줄기 세포, 전구 세포, 전구체 세포, 또는 상이한 유형의 재생 세포의 조합 - 예컨대 줄기 세포 및 전구 세포의 조합 -의 양)은 총 지방-유래 세포 집단 중 0.5%-1%, 1-2%, 2%-4%, 4%-6%, 6%-8%, 8%-10%, 10%-20%, 20%-30%, 30%-40%, 40%-50%, 50%-60%, 60%-70%, 70%-80%, 80%-90%, 또는 90%-100% 이상일 수 있다. 용량은 일정 기간에 걸쳐 투여하기 위해 또는 이환 조직의 상이한 부분에, 예를 들어 국부 주사에 의해 주사하기 위해 여러 더 작은 용량으로 나누어질 수 있다. 그러나, 이러한 투여량은 원하는 치료 효과가 달성되도록 여러 자릿수로 조정될 수 있다.
지방-유래 세포 (예를 들어, 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 세포 및 다른 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등)은 또한 이식되기 전에 스캐폴드 물질 상의 세포 배양물에 적용될 수 있다. 따라서, 조직 조작된 판막, 췌장 혈관 및 다른 구조는 수용자에게 삽입 또는 이식되기 전에 ADRC를 사용하여 천연 또는 합성 매트릭스 또는 스캐폴드 상에서 합성될 수 있다.
많은 투여 경로가 본원에 기재된 치료제에 적합할 수 있다. 일부 변형에서, 경구, 정맥내, 동맥내 및 다른 전신 투여가 사용된다. 일부 변형에서, 부종성 사지 또는 신의 다른 부분으로의 국부 전달, 예컨대 부종 부위에서의 피하 투여가 고려된다.
일부 실시양태에서, 지방-유래 세포 (예를 들어, 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 세포 및 다른 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등)를 의도된 이익 부위에 직접 투여하는 것이 바람직하다. 이는 조직 내로의 국부 주사, 췌장 구조 또는 췌장 혈관 내로의 직접 주사에 의해, 적합한 캐뉼라의 삽입을 통해, 동맥 또는 정맥 주입 (역행성 유동 메카니즘 포함)에 의해, 또는 본원에 개시되거나 관련 기술분야에 공지된 다른 수단에 의해 달성될 수 있다.
지방-유래 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포, 재생 세포, 줄기 세포 및 다른 재생 세포를 포함하는 세포 집단 등은 정맥 또는 동맥 주입 (역행성 유동 주입 포함, 및 혈액 및/또는 림프관 내로의 주입 포함) 또는 직접 주사에 의한 전신 투여를 포함하는 여러 경로에 의해 적용될 수 있다. 특히 말초 정맥 접근에 의한 전신 투여는, 혈액으로부터 췌장으로의 세포의 천연 수송에 의존하여 최소 침습적이라는 이점을 갖는다. ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단은 단일 볼루스로, 느린 주입을 통해, 또는 수시간만큼 분리된 시차를 둔 일련의 적용을 통해 주입될 수 있거나, 또는 제공된 세포는 수일 또는 수주 동안 적절하게 저장된다. ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단은 또한 풍선을 사용함으로써 관심 영역을 통한 세포의 제1 통과가 증진되도록 하는 카테터삽입의 사용에 의해 적용될 수 있다. 말초 정맥 접근과 같이, ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단은 단일 볼루스로 또는 다수의 더 작은 분취물로 카테터를 통해 주입될 수 있다. 세포는 또한 간질 공간 내로 주사되거나, 또는 스프레이 또는 시트 형태로 적용될 수 있다.
상기에 사전에 제시된 바와 같이, 바람직한 실시양태에서, 지방-유래 세포 집단, 예를 들어 줄기 세포, 재생 세포, 줄기 세포 및 다른 재생 세포를 포함하는 세포 집단 등은 환자에게 직접 투여된다. 즉, 활성 세포 집단 (예를 들어, ADRC, 전구 세포, 줄기 세포 및/또는 그의 조합)은, 환자에게 투여되기 전에 시스템으로부터 제거되거나 또는 시스템의 외부 환경에 노출되지 않으면서, 환자에게 투여된다. 밀폐된 시스템을 제공하는 것은 환자에게 투여되는 물질의 오염 가능성을 감소시킨다. 따라서, 밀폐된 시스템에서 지방 조직을 프로세싱하는 것은 활성 세포 집단이 멸균일 가능성이 더 많기 때문에 현존 방법에 비해 이점을 제공한다. 일부 실시양태에서, ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단이 외부 환경에 노출되거나 또는 시스템으로부터 제거되는 유일한 시간은 세포를 적용 장치 내로 회수하고 환자에게 투여할 때이다. 다른 실시양태에서, 적용 장치는 또한 밀폐된 시스템의 일부일 수 있다. 따라서, 완전 밀폐된 시스템은 대상체로부터의 지방 조직의 제거 (예를 들어, 캐뉼라)로부터 대상체에게의 도입 (예를 들어, 적용 장치)까지 유지된다. 따라서, 이들 실시양태에 사용되는 세포는 배양 또는 동결보존을 위해 프로세싱될 수 있고, 추가의 프로세싱 없이 환자에 투여될 수 있거나, 또는 다른 조직, 세포 또는 첨가제와 혼합된 후에 환자에게 투여될 수 있다.
다른 실시양태에서, ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단의 적어도 일부분은 후속 이식/주입을 위해 저장될 수 있다. 집단은, 세포의 집단의 일부가 환자에게 바로 적용되는 동안에 후속 적용을 위해 보유되도록 1개 초과의 분취물 또는 단위로 나누어질 수 있다. 둘 다의 내용이 본원에 참조로 명백하게 포함되는 2001년 9월 14일에 출원된 미국 출원 일련 번호 60/322,070의 이익을 주장하는 2002년 9월 12일에 출원된 발명의 명칭 "PRESERVATION OF NON EMBRYONIC CELLS FROM NON HEMATOPOIETIC TISSUES"의 미국 특허 출원 일련 번호 10/242,094에 개시된 바와 같이, 세포 뱅크에서의 세포의 전부 또는 일부의 중간기간 내지 장기간 저장은 또한 본 발명의 범주 내이다. 프로세싱 말기에, 농축된 세포는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 수용자에게 배치하기 위한 전달 장치, 예컨대 시린지 내에 로딩될 수 있다. 첨가제를 갖거나 갖지 않는 ADRC를 포함하는 지방-유래 세포 집단은 하기 섹션에 기재된 바와 같은 여러 치료 방법에 사용될 수 있다.
통증 모델
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은, 예를 들어 동물 통증 모델에서 통증을 감소시키거나 또는 개선시키는 그의 능력을 특징으로 한다. 예를 들어, 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 배치 또는 로트를 제조하는 경우에, 배치 또는 로트의 샘플은 1종 이상의 동물 통증 모델을 사용하여 시험될 수 있다. 이어서, 통증 검정에서 허용되는 통증 감소를 생성하는 샘플이 얻어졌던 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 미래 사용을 위해, 예를 들어 임의의 유형의 통증의 개선을 위해, 또는 특이적 유형의 통증의 개선을 위해 선택될 수 있다. 시험되는 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 치료상 유효한 것으로 간주되는 하나의 검정에서 시험되고/거나 효능을 나타내어야 하며; 다수의 또는 모든 동물 통증 모델에서의 시험이 필요하지는 않은 것으로 이해되어야 한다. 특정 실시양태에서, 샘플인 지방-유래 줄기 및 재생 세포는 1종 이상의 관련 유형의 통증 또는 특정한 환자 집단를 치료하는 것에 관련된 통증과 관련된 통증 검정에서 시험될 수 있다.
특정 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등은, 예를 들어 아세트산-유발 내장통 모델에서 시험될 수 있다. 이러한 연구는, 예를 들어 아세트산 투여 전에 투여되는 비히클 또는 지방-유래 줄기 및 재생 세포 (예를 들어, 1×106 내지 1×108개)와 함께, 아세트산을 약 10 mL/kg의 용량 부피로 마우스에게 복강내 투여함으로써 수행될 수 있다. 몸부림의 수는 처음 5분을 버린 후에 후속 20분 동안 기록된다. 각각의 실험은 하기 군을 함유한다: 비히클+2-5회 용량의 지방-유래 줄기 및 재생 세포+양성 대조군; n=10마리/군.
특정의 다른 실시양태에서, 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 샘플은, L5 및 L6 척수 신경이 치밀하게 라이게이션되어 안정하고 장기간-지속되는 신경병증성 통증을 유발하는 청(Chung) 척수 신경 라이게이션 모델을 사용하여 시험될 수 있다.
특정의 다른 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 샘플은 일련의 탁솔 주사의 투여 후에 래트에서 통증이 경시적으로 발생하는 말초 신경병증의 탁솔 검정을 사용하여 시험될 수 있다.
특정의 다른 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 샘플은 베넷(Bennet) 신경병증성 통증 (이질통) 모델을 사용하여 시험될 수 있으며, 여기서 좌골 신경 중 하나 주위에 느슨한 결찰기의 적용에 유발되는 통증은 가벼운 기계적 자극에 이환된 뒷발의 예리한 회피에 의해 제시된다.
특정의 다른 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 샘플은 카라기난 투여-유발 통증 모델을 사용하여 시험될 수 있다.
특정의 다른 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 샘플은 완전 프로인트(Freund) 아쥬반트 신경병증성 통증 (예를 들어, 이질통) 모델을 사용하여 시험될 수 있다. 예를 들어, 군당 5마리의 래트를, 예를 들어 1×106 내지 1×107개 i.v.의 내부 용량으로 사용할 수 있으며, 여기서 효능은 CFA-유발 뒷발 통각과민의 감소에 의해 결정된다. 비대응표본 스튜던트 t 검정이 비히클 대조군과 처리군 사이의 비교를 위해 적용될 수 있다. 양성 대조군으로서 다른 통증 의약 (os당 mg/kg), 예를 들어 아스피린>100; 시클로스포린 A>100; 덱사메타손>30; 가바펜틴~200; 인도메타신>10; 또는 모르핀 30이 사용될 수 있다.
특정의 다른 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 샘플은 통증-조작 화합물로서 페닐퀴논 (PQ)을 사용하여, 예를 들어 조건당 5마리를 마우스, 예를 들어 1×106 내지 1×107개 i.v.의 내부 용량, 1시간 전처리, 이어서 5분 관찰 기간 동안 PQ (2 mg/kg i.p.)-유발 몸부림의 감소의 결정을 사용하여 시험될 수 있다.
특정의 다른 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 샘플은, 예를 들어 수술후 통증의, 뒷발 절개 모델을 사용하여 시험될 수 있다.
특정의 다른 실시양태에서, 지방-유래 세포, 예를 들어 줄기 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포, 줄기 및 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포 등의 샘플은 꼬리 치기 모델을 사용하여 시험될 수 있으며, 여기서 꼬리 치기 통증 자극에 대한 반응은 지방-유래 줄기 및 재생 세포의 투여 전 및 후에 평가된다.
본원에 제공된 통증 검정은 단지 비제한적 예이며; 관련 기술분야에 공지된 다른 검정이 또한 사용될 수 있다.
실시예
실시예 1
경피증은 피부 또는 다른 기관에서의 콜라겐의 과도한 침착을 특징으로 하는 만성 질환이다. 경피증은 국부성 또는 전신성일 수 있다. 질환의 국부 형태는 무능화하면서 치명적이지 않은 경향이 있다. 미만성 경피증 또는 전신 경화증으로서 나타나는 질환의 전신 형태는 심장, 신장, 폐 또는 장 손상의 결과로서 치명적일 수 있다. 경피증의 3가지 유형은 전신성인 미만성 경피증 및 제한성 (CREST 증후군) 경피증, 및 피부에 제한성인 반상경피증/선형 경피증이다. 미만성 경피증은 가장 중증인 형태이며, 여기서 희생자는 급속한 발병, 광범위 피부 경화, 및 특히 폐 및 위장관에 대한 유의한 내부 기관 손상을 경험한다.
경피증의 제한성 형태는 훨씬 더 경증이며, 더 느린 발병 및 진행을 나타낸다. 피부 경화는 통상적으로 손 및 얼굴에 한정되고, 내부 기관 침범은 미만성 형태에서보다 덜 중증이다. 전형적으로, 레이노 현상은 수년만큼 경피증에 선행할 수 있다. 레이노 현상은 한랭에 노출된 말초--특히 손 및 발--의 작은 동맥의 혈관수축으로 인한 것이며, 전형적으로 3상의 색 변화--재가온 시에 먼저 백색, 이어서 청색, 및 최종적으로 적색--을 특징으로 한다. 제한성 형태는 종종 CREST 증후군으로서 지칭되며, 여기서 "CREST"는 5가지 주요 특색인 석회증 (연부 조직, 예를 들어 피부에서의 칼슘 침착), 레이노 증후군, 식도 운동장애, 수지경화증 (손가락의 경피증) 및 모세혈관확장증 (거미 정맥)에 대한 두문자어이다.
인간 임상 시험을 수행하였으며, 여기서 12명의 경피증 환자 (평균 연령 54.5±10.3세; 범위 34-68세)를 지방-유래 재생 세포로 치료하였다. 모든 환자는 14.3±7.7 (평균 ± 표준 편차)의 질환 지속기간 (범위 5세 내지 34세)을 갖는 경피증과 연관 레이노 증후군으로 진단 받았었다.
사전 동의 및 치료전 평가인 기준선의 완성 후, 환자를 마취하고, 멸균 필드에 위치시켰다. 소수의 0.5cm 자창 절개부를 11 블레이드 스칼펠을 사용하여 생성시켰다. 크실로카인 및 아드레날린으로 보충된 락테이트 링거액을 포함하는 팽창 용액을, 흡인될 지방 1 부피에 대해 용액 대략 1 부피의 비로 피하 조직 내에 침윤시켰다.
에피네프린이 혈관수축을 유발하도록 충분한 시간을 허용한 후, 지방 조직을 2mm 직경 메르세데스(Mercedes)-스타일 지방흡입 캐뉼라 (캘리포니아주 산타 바바라 소재의 멘터(Mentor))를 사용하여 동일한 절개부 부위를 통해 흡인하였다. 지방 조직 대략 120g을 흡인하였다. 이어서, 절개부 부위를 그 영역에 적용된 봉합사 및 압박 붕대로 밀폐하였다.
지방-유래 세포, 예를 들어 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포를, 본원에 기재된 방법을 사용하여 프로세싱하였다. 이어서, 5mL 유출물을 10ml의 최종 부피로 락테이트 링거액으로 희석하였다 (수족지당 1mL).
ADRC를 뭉툭한 캐뉼라를 통해 주사에 의해 피하 및 피하 공간 내로 주사하였다. 각각의 손가락에 대해 2회의 주사를 수행하였다 (수족지의 길이를 따라 외측으로 수족지의 각각의 측면 상에서 1회; 측면당 ~0.5mL 주사). 먼저, 각각의 손가락과 엄지손가락의 양쪽 등외측 측면 상의 주사 부위를 도 1에 나타낸 바와 같이 마킹하였다.
절개부를 도 2에 나타낸 바와 같이 예리한 바늘 (25G)을 사용하여 제1 주사 부위에 만들었다.
이어서, 뭉툭한 캐뉼라를 절개부 부위에 삽입하였다. 도 3에 나타낸 바와 같이, 캐뉼라에 부착된 1mL 시린지를 사용하여 손가락당 ADRC 1mL (손가락의 각각의 측면에 0.5mL)를 전달하였다. 정확한 주사를 수행하기 위해, 치료 외과의에 의해 필요에 따라 확대를 사용하였다.
이어서, 주사 부위를 건식 드레싱으로 밀폐하고, 후속 주사를 모든 20회의 주사가 완료될 때까지 상기와 같이 수행하였다.
평가
본 연구를 위한 1차 종점은 통증 (시각 상사 척도; VAS 의해 평가된 바와 같음), 레이노 중증도 점수, 및 손 기능의 2가지 폭넓은 평가; 코친 점수 및 경피증 건강 평가 설문지였다. 이들을 치료 전에 (기준선) 수행하고, 치료 후에 간격을 두고 수행하였다. 2 및 6개월 추적 시점에 대한 데이터가 본원에 제공되어 있다.
1. 레이노 중증도 점수
레이노 증후군은 자극, 예컨대 한랭이 사지, 특히 손가락 말단에 대한 혈관수축 및 혈류의 손실을 유발하는 통증성 상태이다. 이 때, 중증 허혈의 주기에는 재관류 및 유의한 통증이 이어진다. 경피증 환자는 빈번하게 각각 1시간 이상 지속되는 다수의 매일의 레이노 에피소드를 가질 수 있다. 레이노 점수 (RS)는 질환의 중증도의 검증된 환자-기록 척도이다.
기준선에서의 평균 RS는 28±5 (평균 ± 표준 편차; 범위 20-34)였다. 치료 2개월 후, RS는 평균 12±8 (범위 1.5-26)로 개선되었다. 이러한 변화는 통계적으로 유의하였다 (대응표본 T 검정에 의해 p<0.001). 모든 환자는 2개월 타임프레임에 걸쳐 RS의 개선을 나타내었다. 2개월에서의 평균 및 표준 편차 (굵은 선)와 함께 각각의 환자에 대한 데이터를 나타내는 그래프가 도 4에 제시되어 있다. 조합된 군에 대한 데이터를 나타내는 그래프는 도 11에 제시되어 있다.
데이터는 도 5에 나타내 바와 같이 모든 환자가 그의 레이노 상태 점수 ("RCS")의 최소 20% 개선을 나타내었다는 것을 추가로 제시한다. 모든 환자에 걸쳐, 기준선으로부터 2개월까지 RCS의 53.7% 감소가 관찰되었고 (p<.0001), 6개월에 67.5% 감소에 도달하였다 (p<.0001). 도 11을 참조한다. 이들 데이터 뿐만 아니라 하기 기재된 손 통증 (VAS) 및 손발톱주름 모세관검사에 대한 데이터는 본원에 개시된 지방-유래 재생 세포가 경피증의 혈관 징후를 개선시키는데 유용하다는 것을 입증한다.
2. 통증
통증은 경피증을 갖는 환자에 대해 빈번한 문제이다. 이는 레이노 증후군, 수족지 궤양의 존재, 및 손의 강직 및 제한성 운동 범위와 같은 다른 인자로부터 발생한다.
통증을, 환자가 그의 현재 통증에 대한 그의 감각을, 예를 들어 100mm 선 위에 표시를 한 1 내지 100의 척도 상에 기록하는 표준 시각 상사 척도를 사용하여 평가하였다. 이는 경피증을 비롯한 임상 상태의 넓은 어레이에서 통증을 평가하기 위한 매우 폭넓게 사용되며 잘 검증된 도구이다.
기준선에서의 평균 통증은 59.4±17.2 (평균 ± 표준 편차; 범위 20-80)였다. 치료 2개월 후, 통증 점수는 평균 21.6±17.5 (범위 0-40)로 개선되었다. 이러한 변화는 통계적으로 유의하였다 (대응표본 T 검정에 의해 p<0.001). 12명 환자에 대한 집합적 데이터는 도 11에 제공되어 있다.
VAS 도구를 사용하여 평가된 통증 변화의 관련성 연구는 0-4mm의 점수가 "통증 없음"으로서, 5-44mm가 "경증 통증", 45-75가 "중등 통증"으로서, 및 75-100가 "중증 통증"으로서 평가될 수 있는 것으로 제시하였다. 이들 기준에 의해, 치료 전 중증 통증의 2명의 환자가 존재하였으며; 치료 후에는 없었으며-사실상, 치료 전 중증 통증의 환자 둘 다가 치료 2개월 후에 통증 없음을 나타내었다. 동일한 기준에 의해, 치료 전 중등 통증을 나타내는 9명의 환자가 존재하였지만, 치료 2개월 후에는 단지 1명만 존재하였다. 12명의 환자 중 11명 (92%)은 기준선의 단지 1명의 환자 (8%)에 비해 단지 경증 또는 통증 없음을 가졌다. VAS 도구의 동일한 연구는 33%의 통증 변화가 환자에게 임상적으로 유의한 것으로 제시하였다. 치료된 12명의 환자 중 9명 (75%)이 적어도 33%의 통증 감소를 나타내었다.
3. 건강 평가 설문지
질환 상태, 예컨대 경피증은 환자의 전반적 건강 및 삶의 질에 대해 유의한 손해를 준다. 경피증 건강 평가 설문지 (SHAQ)는 경피증을 갖는 환자에서 건강을 평가하기 위한 잘 확립되고 검증된 도구이다.
건강을, 표준 SHAQ를 사용하여 평가하였다. 기준선에서의 평균 점수는 1.28±0.31 (평균 ± 표준 편차; 범위 0.8-1.9)였다. 치료 2개월 후, 평균 SHAQ 점수는 평균 0.66±0.56 (범위 0-1.5)으로 개선되었다. 이러한 변화는 통계적으로 유의하였다 (대응표본 T 검정에 의해 p<0.001). 평균 및 표준 편차 (굵은 선)과 함께 각각의 환자에 대한 데이터를 나타내는 그래프는 하기에 제시되어 있다.
연구는 이러한 유형의 ≥0.2의 점수 변화가 환자에게 증상적으로 유의한 것으로 제시하였다. 본 연구에서 관찰된 평균 개선은 0.6이었다. 추가로, 12명의 환자 중 10명은 0.2 초과의 SHAQ의 개선을 나타내었다. 이러한 군에서의 SHAQ의 평균 개선은 0.75±0.35 (범위 0.3 내지 1.3)였다. 2개월에서의 데이터가 도 6 및 7에 제시되어 있다. 비교로서, 경피증의 치료에 대해 유럽 연합에서 승인된 정맥내 약물인 일로프로스트의 281명의 환자 임상 시험은, 전체적 SHAQ의 평균 개선이 0.23±0.64였다. 환자 지각 건강 상태의 45.2% 개선이 2개월에서 관찰되었고 (p=0.001), 도 11에 제공되어 있는 6개월 데이터를 나타내는 그래프에 의해 평가 시에 환자 지각 건강 상태의 42.4% 개선이 6개월에서 관찰되었다.
도 11에 나타낸 바와 같이, 환자의 대부분은 SHAQ 점수의 주요 개선을 나타내었다. SHAQ는 HAQ의 개선이 의사 전반적 평가의 개선과 연관되어 있기 때문에 임상 실시에서 SSc 상태 변화의 유용한 마커로 또한 간주될 수 있다. 이러한 전반적 측면은 치료 부위 (손)에 대해 원위부의 영역에서 환자에게 이익을 적용하는 개입의 능력을 제시하며, 얼굴 및 다른 영역에서의 경피증 증상의 개선에 대한 환자 기록과 일치한다. 이들 데이터는 본원에 개시된 지방-유래 재생 세포가 경피증을 갖는 대상체의 전체적 및 전반적 건강 상태에 있어서 지속적인 (예를 들어, 6개월보다 긴) 개선에 유용한 것을 입증한다.
4. ADRC는 손 장애: 코친 척도, 그립 강도, 핀치 강도, 카판디(Kapandji) 지수, 코너 거리 및 손가락 운동성을 개선시킴
코친 손 기능 척도 ("CHFS")는 손 기능의 폭넓게 사용되는 입증된 환자-기록 척도이다. 이러한 도구는, 환자의 손으로의 일상적 작업, 예컨대 버튼 및 지퍼를 움직이고 식품을 제조하는 것을 수행하는 환자의 능력을 평가한다.
손 기능을, 코친 도구를 사용하여 평가하였다. 기준선에서의 평균 점수는 48.5±11.0 (평균 ± 표준 편차; 범위 30-69)이었다. 치료 2개월 후, 평균 코친 점수는 평균 25.5±16.5 (범위 2-48)로 개선되었다. 이러한 변화는 통계적으로 유의하였다 (대응표본 T 검정에 의해 p<0.001). 평균 및 표준 편차 (굵은 선)과 함께 각각의 환자에 대한 2개월 데이터를 나타내는 그래프는 도 8에 제시되어 있다. 기준선에 비해 CHFS의 47.4% (p <0.001) 및 56.0% (p <0.001) 감소가 각각 치료후 2 및 6 개월에 관찰되었다. 데이터는 하기 표 1에 제시되어 있다. 2 및 6개월 CHFS 데이터는 도 11에 그래프로 제시되어 있다.
CHFS에 의해 평가 시의 손 기능의 개선은 또한 손 강도 및 제1 코너 거리의 유의한 증가와 연관되어 있었다. 그립 강도를 관련 기술분야-허용된 자마르(Jamar) 점수에 의해 평가하였다. 문헌 [Schmidt, et al. (1970), Arch Phys Med Rehabil. 51:321-7]을 참조한다. 그립 강도는 6개월에서, 기준선에 비해 우세 손에 대해 + 4.8 (± 6.4) kg (p=0.033) 및 비-우세 손에 대해 + 4.0 (± 3.5) kg (p=0.033)의 평균으로 증가하였다. 게다가, 핀치 강도 점수의 유의한 증가가 6개월에 관찰되었다. 구체적으로, 핀치 강도는 우세 손에 대해 +1.0 (±1.1) kg (p = 0.009), 및 비-우세 손에 대해 + 0.8 (±1.2) kg (p= 0.050)의 평균으로 개선되었다.
대상체는 제1 코너 거리, 뿐만 아니라 제2, 제3 및 제4 코너 거리의 합계 (밀리미터)의 측정에 의해 평가 시에 개선된 손 기능을 나타내었다. 대상체는 또한 원위 손바닥 라인에 대한 핑거 패드의 거리에 의해 측정 시에 손가락 굴곡의 유의한 개선을 나타내었다. 데이터는 하기 표 1에 제시되어 있다.
<표 1> 손 기능의 평가
Figure pct00001
*M2에 대한 기준선으로부터의 P 값, **M6에 대한 기준선으로부터의 P 값
CHFS= 코친 손 기능 척도
DPL= 원위 손바닥 라인
중앙은 p를 윌콕슨(Wilcoxon) 검정으로 계산하였을 때에 주어짐
5. ADRC는 경피증의 혈관 징후를 개선시킴
수족지 궤양은 경피증을 갖는 환자에서 비교적 흔하다. 본 연구에서 12명의 환자 중 5명은 기준선에서 수족지 궤양을 가졌다. 수족지 궤양의 치유를 2 및 6개월 추적 방문에서 기록하였다. 데이터는 하기 표 2에 제시되어 있다.
<표 2> 수족지 궤양 결과
Figure pct00002
경피증의 혈관 징후는, 예를 들어 문헌 [Lee, et al. (1983) J. Rheumatol. 10:930-938]에 기재된 바와 같이, 손발톱주름 모세관 현미경검사 시험을 사용하여 또한 평가할 수 있다. 이러한 시험에서, 하기 파라미터를 측정한다: (1) 모세관 루프의 수/손가락; (2) 슬러지의 존재 또는 부재; (3) 확대된 모세관 루프의 수 (정상 구심성, 전이 및 원심성 사지 폭의 4x 초과); (4) 거대 모세관 루프의 수/손가락 (모세관 사지의 정상 폭의 10x 이상); 및 (5) 무혈관 점수. 무혈관 점수를 위해, 각각의 손가락을 0 내지 3으로부터 등급화하였으며, 여기서 0= 무혈관 부위 없음; 1= 1-2의 개별 무혈관 부위; 2= > 2개의 개별 무혈관 부위; 3= 광범위한 융합성 무혈관 부위. 2 및 6개월 데이터는 하기 표 3에 제시되어 있다.
<표 3> 혈관 징후에 대한 자가 지방-유래 재생 세포 주사의 효과
Figure pct00003
*M2에 대한 기준선으로부터의 P 값, **M6에 대한 기준선으로부터의 P 값
중앙은 p를 윌콕슨 검정으로 계산하였을 때에 주어짐
상기 데이터는 ADRC가 경피증의 혈관 징후를 개선시키는 것을 제시한다.
6. ADRC는 수지경화증 및 섬유증을 개선시킴
수지경화증 및 섬유증의 유의한 개선이 또한 관찰되었다.
변형 로드난 피부 점수 (MRSS)는 피부 피부 두께를 평가하기 위해 가장 폭넓게 사용되는 시험이며, 미만성 피부 전신 경화증을 갖는 환자에서 질환 중증도 및 사망률 위험의 관련 기술분야-인식된 대용 방책이다: 피부 비후의 증가는 내부 기관의 침범 및 증가된 사망률과 연관되어 있다. 추가로, 피부 두께 점수의 개선은 더 유리한 결과와 연관되어 있다. 문헌 [Czirjak, et al. (2008) Rheumatolology 47(suppl. 5): 44-45]을 참조한다. 총 피부 표면적은 17개의 상이한 영역: 손가락, 손, 전완, 팔, 발, 하지 및 넓적다리 (쌍으로), 및 얼굴, 흉부 및 복부로 임의적으로 나누어진다. 각각의 이들 영역에서, 피부 점수를 수촉진에 의해 평가한다. 피부 점수는 비침범 피부에 대해 0, 경증 비후에 대해 1, 중등 비후에 대해 2, 및 중증 비후 (피골상접 피부)에 대해 3이다. 총 피부 점수는 개별 영역의 피부 점수의 합계이며, 최대 가능 점수는 51이다. 피부 점수는 피부 섬유증의 정도와 상관관계가 있는 경향이 있으며, 이는 또한 섬유증의 정도 및 내부 기관의 기능장애, 예컨대 폐 섬유증, 경피증 심장 질환, 신질환 및 위장 침범과 상관관계가 있다.
손에 집중된 MRSS의 어떠한 유의한 변화도 기준선으로부터 제2개월 또는 제6개월까지 관찰되지 않았다. 그러나, MRSS의 적어도 25% 감소가 4명의 환자에서 관찰되었으며, 손등 부분 상에서 피부 연화가 나타났다. 전반적 MRSS는 기준선 (평균±SD 13.9±9.8)으로부터 제2개월 (11.7±9.8; p = 0.010) 및 제6개월 (11.5±10.1; p=0.013)까지 유의하게 감소하였다. 5명의 환자는 제6개월에 전반적 MRSS의 적어도 25% 감소를 나타내었다. 데이터는 하기 표 4에 제시되어 있다.
고리 크기로서 측정되는 손가락의 직경은, 경피증에서 또한 수족지의 연부 조직 변화의 지시자이다. 문헌 [Serup, J. (1985) Dermatology 171:41-44]을 참조한다. 기준선에 비해, 고리 크기로서 측정되는 손가락의 직경의 유의한 개선은 제2개월 및 제6개월의 환자에서 관찰되었다. 데이터는 표 4에 제시되어 있다. 데이터는 본원에 개시된 바와 같은 지방-유래 재생 세포로의 치료가 피부 부종의 개선으로 이어질 수 있는 것을 시사한다.
<표 4> 수지경화증 및 손 섬유증에 대한 ADRC 주사의 효과
Figure pct00004
*기준선으로부터 제2개월까지의 P 값
**기준선으로부터 제6개월까지의 P 값
MRSS = 변형 로드난 피부 점수
환자는 또한 그의 질환의 전신 증상의 개선, 즉 치료 부위 (손가락)에 대해 원위부의 해부학적 위치에서의 증상의 개선을 기록하였다.
환자 A: 인용
환자: 치료 후, 내가 당신에게 말한 바와 같이, 나는 10개의 새로운 손가락을 얻었다는 느낌이 있었다. 나는 더 이상 이전에 느꼈던 것과 동일한 느낌이 없었다. 나는 훨씬 더 유연성을 느끼고; 나는 통증도 더 이상 갖지 않고, 내 손, 내 전완 및 내 어깨에서 이러한 전기오는 유형 통증도 더 이상 갖지 않는다. 내 손가락은 내가 레이노 증후군을 가졌었던 때에 비해 덜 청색이다. 내 손가락은 여전히 약간 백색이지만, 나는 이전보다 훨씬 더 활동적이다. 나는 통증 없이 자연스럽게 (인식하지 않고) 모든 것을 할 수 있다. 나는 매우 행복하다. 그러나, 내 오른손에서, 나는 여전히 약간의 "무게감"을 느끼고, 내 손가락은 내 왼손에 비해 여전히 약간 팽만되어 있다.
의사: 그래서, 당신의 일상 생활에서의 변화는 어떤 것이 있습니까?
환자: 모든 것이 변했다. 이전에, 나는 내 모발을 펴거나 말릴 수 없었고; 나는 편지를 분류할 수 없었고, 나는 캔 박스를 열 수도, 야채를 깎을 수도, 고기를 자를 수도, 접시를 세척할 수도, ...을 만들 수도 없었다. 페인트칠, 톱질...과 같은 내가 할 수 없었던 많은 것들이 존재했으나, 이제 나는 자연스럽게 인식하지 않고 모든 것을 할 수 있다.
환자 B: 인용
환자: 나는 손을 사용할 수 없었다. 나는 그렇게 고기를 자르곤 했었다. 나는 고기를 자를 수 없었다.
의사: 그리고, 이제는?
환자: 이제, 나는 모든 것을 할 수 있고, 나는 키보드를 사용할 수 있고, 내 손가락끝에서 이러한 전기오는 느낌이 더 이상 없다. 이전에, 나는 통증 및 내 손가락끝에서 이러한 "전기오는" 느낌이 있었다.
의사: 당신은 당신의 손가락끝에 어떠한 종류의 통증이 있었습니까?
환자: 그것은 전기오는 유형 통증 같았고, 나는 어디에서든지 이러한 전기오는 통증을 끊임없이 느끼곤 했었다.
기타 인용:
내 손가락은 5년만에 처음으로 그의 정상 색으로 돌아왔다.
나는 어떠한 더통증도 전혀 더 이상 느끼지 않는다.
나는 더 이상 춥지 않고, 나는 항상 글로브를 끼던 것을 중단했다.
나는 내 아이의 고기를 자르고, 머리를 빗을 수 있고, 나는 정상 생활로 돌아왔다.
나는 일하러 돌아왔다 [비서].
이들 데이터는 본원에 개시된 지방-유래 세포가, 예를 들어 경피증을 갖는 대상체에서 통증 및 섬유증을 치료하기에 유용하다는 것을 입증한다. 특히, 데이터는 본원에 개시된 지방-유래 재생 세포가 경피증을 갖는 대상체에서 혈관 기능 및 섬유증을 개선시키기에 유용하다는 것을 입증한다.
실시예 2
지방-유래 세포를 사용하는 신경병증성 통증의 치료
미국인들 중 적어도 30%에게 이환되는 상태인 만성 통증, 예를 들어 신경병증성 통증은 예를 들어 신경계의 장애로 인한 것이고, 신경병증으로도 공지되어 있으며, 손상되거나, 기능장애이거나 또는 훼손된 신경 섬유를 비롯한 조직 손상을 동반하거나 또는 그로 인한 것일 수 있다. 신경병증성 통증은 또한, 예를 들어 병리학적 병변, 신경변성 과정 또는 말초 또는 중추 신경계의 부분의 장기간 기능장애로 인한 것일 수 있다. 그러나, 신경병증성 통증은 어떠한 인식가능한 조직 손상도 분명하지 않은 경우에도 또한 존재할 수 있다.
신경병증은 말초 신경계 (뇌 및 척수 외부의 신경계 부분)의 신경이 손상되는 경우에 발생하는 장애의 집합어이다. 이러한 상태는 일반적으로 말초 신경병증으로서 지칭되며, 이는 가장 흔하게는 신경 축삭에 대한 손상으로 인한 것이다. 신경병증은 통상적으로 손 및 발에서 통증 및 무감각을 일으킨다. 이는 외상성 손상, 감염, 대사 장애 및 독소에 대한 노출로부터 유발될 수 있다. 신경병증의 가장 흔한 원인 중 하나는 당뇨병이다. 신경병증은 근육 운동을 제어하는 신경 (운동 신경) 및 감각, 예컨대 추위 또는 통증을 검출하는 신경 (감각 신경)에 이환될 수 있다. 일부 경우 - 자율 신경병증 -에, 이는 내부 기관, 예컨대 심장, 혈관, 방광 또는 장기에 이환될 수 있다.
따라서, 또 다른 측면에서, 개체에게 ADRC를 포함하는 조성물의 치료 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 만성 통증을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 구체적 실시양태에서, 만성 통증, 예를 들어 신경병증성 통증은 신경염 (예를 들어, 다발신경염, 상완 신경염, 시신경염, 전정 신경염, 두개 신경염, 또는 비소 신경염), 당뇨병 (예를 들어, 당뇨병성 신경병증), 말초 신경병증, 반사 교감신경 이영양증 증후군, 환상지통, 절단후 통증, 포진후 신경통, 대상포진, 중추성 통증 증후군 (예를 들어, 뇌, 척수 및/또는 뇌간에 대한 손상으로 인한 통증), 길랑-바레 증후군, 퇴행성 디스크 질환, 암, 다발성 경화증, 신장 장애, 알콜중독, 인간 면역결핍 바이러스-관련 신경병증, 와텐버그 이동성 감각 신경병증, 섬유근육통 증후군, 작열통, 척수 손상, 또는 화학적 작용제, 예를 들어 트리클로로에틸렌 또는 답손 (디아미닐-디페닐 술폰)에 대한 노출이거거나, 또는 그로 인한 것이다. 구체적 실시양태에서, 말초 신경병증은 단일신경병증 (단일 말초 신경에 대한 손상)이고; 다발신경병증 (신체의 다양한 부분에 빈번하게 위치하는 1개 초과의 말초 신경에 대한 손상), 다발성 단일신경염 (비인접 신경 줄기에 대한 동시적 또는 순차적 손상) 또는 자율 신경병증이다. 말초 신경병증, 예를 들어 다발성 단일신경염은, 예를 들어 당뇨병, 혈관염 (예를 들어, 결절성 다발동맥염, 베게너 육아종증 또는 처그-스트라우스 증후군), 류마티스 관절염, 홍반성 루푸스 (SLE), 사르코이드증, 아밀로이드증 또는 한랭글로불린혈증으로 인한 것일 수 있다.
신경병증성 통증의 수준은, 예를 들어 시각 상사 척도 (VAS), 수치적 통증 강도 척도, 그래픽 등급화 척도, 구두 등급화 척도, 통증 얼굴 척도 (얼굴 통증 척도), 수치적 통증 강도 및 통증 불쾌감 척도, 간략 통증 일람 (BPI), 메모리얼 통증 평가, 알더 헤이(Alder Hey) 선별 통증 점수, 댈러스(Dallas) 통증 설문지, 통증계 통증 지수 (DPI), 얼굴 하지 활성 울음 진정 척도, 레쿠에슨(Lequesne) 척도, 맥길(McGill) 통증 설문지 (MPQ), 설명어 차등 척도 (DDS), 경부통 및 장애 척도 (NPAD), 수치적 11-포인트 박스 (BS-11), 롤랜드-모리스(Roland-Morris) 요통 설문지, 또는 왕-베이커 FACES 통증 평가 척도에 의해 평가할 수 있다. 개체에게 조성물을 투여한 후 이들 통증 평가 중 하나 이상의 개선이 치료상 유효한 것으로 간주된다.
조성물은, 예를 들어 국부로, 신경병증성 통증의 부위로부터 원위부에, 개체의 신체의 손상된 영역에서 기능하는 신경 또는 신경의 세트, 예를 들어 개체가 신경병증성 통증을 경험하고 있는 신체 영역에 투여될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 척추를 따라 신경 줄기가 척주로부터 발생하는 임의의 지점에, 예를 들어 자궁경부 신경, 흉부 신경 또는 요추 신경 중 임의의 것에 투여될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 조성물은 신경이 C1, C2, C3, C4, C5, C6, 또는 C7, 또는 T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8, T9, T10, T11 또는 T12, 또는 L1, L2, L3, L4 또는 L5에서, 또는 천골에서 발생하는 지점에서 척수에 인접하게 투여될 수 있다.
지방-유래 세포를 포함하는 조성물로 신경병증성 통증을 치료하기 위한 생체내 모델
하기는 만성 통증성 말초 단일신경병증에 대한 래트 모델이다.
말초 단일신경병증은 래트에서 하기와 같이 외과적으로 유발시켰다. 래트를 소듐 펜토바르비탈로 마취시켰다 (40 mg/kg. i.p.). 공통 좌골 신경을 이두근 대퇴골을 통해 비절개 박리에 의해 넓적다리의 중간 수준에서 노출시켰다. 좌골 신경의 삼분기에 대해 근위부에, 약 7 mm의 신경을 부착 조직으로부터 유리시키고, 4개의 결찰기 (4.0 크로믹 거트)를 약 1 mm 간격으로 그 주위에 느슨하게 묶었다. 이렇게 하여 영향을 받는 신경의 길이는 45 mm 길이이다. 결찰기는 40x 배율로 보았을 때에 신경의 직경이 겨우 간신히 조여진 것으로 보이도록 묶었다. 원하는 조임 정도가 부족하지만, 표재 신경외막 혈관계를 통한 순환을 구속하지 않았다. 절개부를 층에서 밀폐하였다. 각각의 동물에서, 좌골 신경을 라이게이션하지 않은 것을 제외하고는 동일한 절개를 반대쪽에서 수행하였다. 래트 대조군을 사용하였으며, 여기서 일부 래트는 수술하지 않고; 나머지는 양쪽 모의 절차 (라이게이션 없이 좌골 노출)를 받았다.
후속적으로, 각각의 군을 ADRC 또는 위약으로 치료하였다. 동물을 수술후 처음 14일 동안 매 1 또는 2일마다, 및 그 후에는 약 매주 간격으로 검사하였다. 이들 검사 동안, 각각의 래트를 테이블에 놓고, 1-2분 동안 주의깊게 관찰하였다. 동물의 보행, 영향 받은 뒷발의 자세, 뒷발 피부의 상태, 및 존재하는 경우에 자가절단의 정도에 주목하였다. 명백한 조직 손상을 수반하는 자가절단이 물어뜯은 발톱 끝에 의해 나타날 수도 있기 때문에 발톱의 상태에 특히 주의하였다. 식욕, 및 유해 방사열 및 화학유발 통증에 대한 통각과민 반응을 비롯한 래트의 수술후 투여후 거동을 관찰하였다.
유해열에 대한 반응의 평가
래트를 윈도우 유리의 높인 바닥 위에 거꾸로 놓인 투명한 플라스틱 케이지 (18x28x13 cm) 아래에 놓았다. 유리 바닥 아래의 방사열 공급원을 뒷발바닥에 조준하였다. 자극 개시는 뒷발로부터 반사된 광을 수용하도록 배치된 광전지에 의해 제어되는 타이머를 활성시켰다. 뒷발 회피 반사는 광전지의 광을 중단시키고, 타이머를 자동적으로 중단시켰다. 지연시간은 가장 근접하게 0.1초로 측정되었다. 뒷발을 연속적 시험 사이에 5분 간격으로 교대로 시험하였다. 5회의 지연시간 측정을 각각의 시험 세션에서 각각의 뒷발에 대해 취하였다. 측면당 5회의 지연시간을 평균하고, 점수차를 라이게이션된 측면의 평균 지연시간으로부터 대조 측면의 평균 지연시간을 뺌으로써 산출하였다. 점수차를 각각의 치료군에 대해 비교하였다.
실시예 3
재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포를 사용하는 비-국부 섬유증의 치료
화학요법은 광범위 섬유증과 종종 연관되어 있다. 이러한 임상 관찰은, 블레오마이신과 같은 작용제를 국부로 또는 전신으로 전달하여, 피부 두께의 유의한 증가에 의해 증명되는 바와 같은 (이는 조직학적 평가에 의해 측정될 수 있음) 섬유증을 유발한 동물 모델로 확장되어 왔다. 하나의 이러한 모델에서, 블레오마이신을 마우스의 피부 내로 주사한다. 블레오마이신-처리 마우스에 대한 ADRC의 국부 또는 전신 (예를 들어: 혈관내) 전달은 감소된 섬유증을 나타내는 처리 영역에서 피부 두께의 감소 및 혈관분포도의 개선으로 이어진다.
구체적으로, 블레오마이신 (0.1mL; 300 μg/ml)을 26-게이지 바늘을 사용하여 견갑골 사이 영역 및 양쪽 측복부에 연속 4주 동안 주당 7일 동안 피하 주사에 의해 마우스에게 전달한다. 블레오마이신 손상 완료 1주일 후, 마우스를 ADRC로 처리한다. 피부 섬유증을 조직학적 분석에 의해 BLM 주사-후 5 및 13주에 평가한다. 결과는, ADRC로의 처리가 블레오마이신에 의해 유발된 피부 병변을 피부 두께가 정상 비-손상 피부의 것과 구별가능하지 않을 정도로 교정한는 것을 나타낸다. 유사하게, ADRC로의 처리는 혈관분포도의 유의한 증가와 연관되어 있다.
유사하게, 블레오마이신을 전신으로 또는 흡입에 의해 투여하는 것은 폐 섬유증 모델이다. 이러한 방식으로 손상된 동물을 ADRC로 처리하는 것은 감소된 섬유증 및 폐 기능의 결과적 개선으로 이어질 수 있다.
등가물
본원에 개시된 조성물 및 방법은 본원에 기재된 구체적 실시양태에 의해 범주가 제한되어서는 안된다. 사실상, 기재된 것 이외에도 조성물 및 방법의 다양한 변형이 상기 기재 및 첨부 도면으로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백해질 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구범위의 범주 내에 포함되도록 의도된다.
다양한 공개, 특허 및 특허 출원이 본원에 인용되어 있으며, 그의 개시내용은 그 전문이 참조로 포함된다.

Claims (16)

  1. 통증의 조절을 필요로 하는 대상체에게 지방-유래 재생 세포의 치료 유효량을 투여하는 것
    을 포함하는, 상기 대상체에서 통증을 조절하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 대상체를, 통증을 경험하는 개체로서 선택, 확인 또는 분류하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 선택, 확인 또는 분류가 의사 또는 임상 또는 진단 평가에 의해 이루어지는 것인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방-유래 재생 세포의 투여 전에, 그 후에 또는 그 동안에 상기 대상체에서 통증을 결정 또는 측정하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  5. 섬유증의 조절을 필요로 하는 대상체에게 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 치료 유효량을 투여하는 것
    을 포함하는, 상기 대상체에서 섬유증을 조절하는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 대상체를, 섬유증을 경험하거나 또는 섬유화 질환을 갖는 개체로서 선택, 확인 또는 분류하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 선택, 확인 또는 분류가 의사 또는 임상 또는 진단 평가에 의해 이루어지는 것인 방법.
  8. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방-유래 재생 세포의 투여 전에, 그 후에 또는 그 동안에 상기 대상체에서 또는 상기 대상체로부터 얻어진 생물학적 샘플에서, 섬유증 또는 그의 마커, 예컨대 TNF-알파의 양 또는 수준을 결정 또는 측정하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  9. 관절의 운동 범위의 개선을 필요로 하는 대상체에게 재생 세포를 포함하는 지방-유래 세포의 치료 유효량을 투여하는 것
    을 포함하는, 상기 대상체에서 관절의 운동 범위를 개선시키는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 대상체를, 관절 운동성의 손실 또는 관절의 운동 범위의 감소를 경험하는 개체로서 선택, 확인 또는 분류하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서, 상기 선택, 확인 또는 분류가 의사 또는 임상 또는 진단 평가에 의해 이루어지는 것인 방법.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방-유래 재생 세포의 투여 전에, 그 후에 또는 그 동안에 상기 대상체의 관절의 운동성 또는 운동 범위를 결정 또는 측정하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방-유래 재생 세포가 줄기 세포를 포함하는 것인 방법.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방-유래 재생 세포가 전구체 세포를 포함하는 것인 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지방-유래 재생 세포가 전구 세포를 포함하는 것인 방법.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 경피증을 갖는 것인 방법.
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