KR20160025303A - 오메프라졸을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 오메프라졸(omeprazole)의 피부 미백의 신규 용도에 관한 것으로, 자세하게는 오메프라졸을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 오메프라졸 화합물은 우수한 안정성과 더불어 티로시나아제의 발현 및 활성을 저해하는 기작을 통하여 멜라닌 생성을 효과적으로 억제할 수 있으므로, 이를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 피부에 자극 없이 멜라닌 색소 억제를 통한 우수한 미백 효과를 나타낼 수 있어 기능성 화장료 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

오메프라졸을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물{Cosmetic composition for skin whitening comprising of omeprazole}

본 발명은 오메프라졸(omeprazole)의 피부 미백의 신규 용도에 관한 것으로, 자세하게는 오메프라졸을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부 환경과 직접 접하면서 인체를 보호하며 생화학적 및 물리적인 기능을 가지고 있는 아주 중요한 조직이다. 이 조직은 크게 3가지, 즉, 표피, 진피, 그리고 피하조직으로 나누어진다. 사람의 피부색은 주로 피부 세포 속에 들어있는 멜라닌(melanin)을 함유하는 멜라노좀(melanosome)의 숫자, 크기, 종류 및 분포도에 따라 다르게 나타난다.

멜라노좀은 멜라닌 세포에 의해 생산되고, 표피에서 생성되는 검은 색소인 멜라닌은 멜라노사이트라는 세포에서 생산된다. 멜라닌은 햇빛 중 자외선의 빛에너지를 흡수하여 더 깊숙이 있는 세포들이 자외선에 의해 손상되는 것을 막아주는 역할을 한다. 이러한 멜라닌이 비정상적으로 적게 생산되면 백반증과 같은 피부병변이 유발되고 반대로 자외선 등에 의해 멜라닌이 과도하게 합성되면 피부에 손상을 줄 뿐만 아니라 기미, 주근깨를 형성하게 되고, 더 나아가 피부암의 원인이 되기도 한다.

멜라닌 형성과정에서 가장 중요한 역할을 하는 것은 티로시나아제 효소로 알 려져 있으며, 이 효소는 조직 중에 존재하는 티로신이라고 하는 아미노산에 작용하는 도파퀴논을 생성시키며 이 도파퀴논으로부터 여러 단계의 자동 산화과정을 거쳐 흑색 색소인 멜라닌이 생성된다. 따라서 멜라닌 생성을 억제할 수 있는 단계의 어느 과정 중에 작용하느냐에 따라 다음과 같은 여러 방법으로 미백용 조성물을 만들 수 있다.

첫 번째로는 멜라닌 생성의 주원인인 자외선을 차단할 수 있는 성분을 함유시키는 것으로, 이 방법에 의한 조성물은 광 산란제 또는 광 차단제를 함유함으로써 자외선에 의한 DNA 손상 또는 염증을 줄여 글루코사민과 같은 티로시나아제가 활성을 나타내기 위해 필요한 코어 탄수화물의 합성을 저해함으로써 멜라닌 생성을 억제시킬 수 있다(미백 A 단계에 작용). 두 번째는 효소산(코지산), 루시놀, 에릭산 또는 알부틴과 같이, 멜라닌 생성에 관여하는 티로시나아제의 기능을 방해하는 물질을 사용하는 것이다(미백 B 단계에 작용). 세 번째로는 도파크롬을 안정화하여 흑색 멜라닌인 유-멜라닌(Eu-Melanin)으로의 진행을 저지할 수 있는 방법이 있다(미백 C 단계에 작용). 네 번째는 티로신이 도파와 도파크롬을 거쳐 복잡한 산화와 축합 반응을 거치는 동안에, 강한 항산화 효과를 발휘하여 미백효과를 낼 수 있는 비타민 C와 같은 물질을 사용하는 것이다(미백 D 단계에 작용). 다섯 번째로는, 효소 또는 AHA(Alpha Hydroxy Acid)등을 사용하여, 생성된 멜라닌을 각질층에서 제거 및 환원시켜 줄 수 있는 방법도 있다(미백 E 단계에 작용).

종래의 화장품 분야에서는 미백 성분으로서, 예를 들면, 코지산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나아제 효소활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민 C(L-Ascorbic acid) 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물이 사용되어 왔다. 그러나 상기 티로시나아제 효소활성을 억제하는 물질은 처방계 중에서의 안정성이 낮기 때문에 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성 문제 등으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다.

이에 본 발명자들은 탁월한 미백 효과를 나타낼 수 있는 소재를 찾고자 모색하던 중, 오메프라졸(omeprazole) 화합물에 주목하여 그것의 미백 효과를 실험한 결과, 오메프라졸 화합물이 티로시나아제 발현 및 활성을 농도 의존적으로 저해함으로써 멜라닌의 합성을 효과적으로 억제할 수 있다는 사실을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

한국공개특허 제10-2012-0054375호 한국공개특허 제10-2008-0022010호

따라서 본 발명의 목적은 인체에 안정하면서 멜라닌 억제 활성이 우수하여 피부 미백에 효과적인 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 인체에 안정하면서 멜라닌 억제 활성이 우수하여 피부 미백에 효과적인 건강기능식품을 제공하는 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 오메프라졸(omeprazole) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 오메프라졸은 멜라닌 생성을 억제할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 오메프라졸은 티로시나아제의 발현 및 활성을 저해하는 기작을 통하여 멜라닌 생성을 억제할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 오메프라졸은 조성물에 10 내지 50μM의 농도로 포함될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스파우더로 이루어진 군으로부터 선택된 1종으로 제형화될 수 있다.

또한, 본 발명은 오메프라졸(omeprazole) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 오메프라졸은 멜라닌 생성을 억제할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 오메프라졸은 티로시나아제의 발현 및 활성을 저해하는 기작을 통하여 멜라닌 생성을 억제할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 건강기능식품은 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 오메프라졸(omeprazole) 화합물은 우수한 안정성과 더불어 티로시나아제의 발현 및 활성을 저해하는 기작을 통하여 멜라닌 생성을 효과적으로 억제할 수 있으므로, 이를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 피부에 자극 없이 멜라닌 색소 억제를 통한 우수한 미백 효과를 나타낼 수 있어 기능성 화장료 조성물로서 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 타이로시나제에 대한 오메프라졸의 효과에 대한 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 Melan-a 세포에서 멜라닌 생성의 억제에 대한 오메프라졸의 효과를 나타낸 사진이다.
도 3은 B16F10 세포에서 멜라닌 생성의 억제에 대한 오메프라졸의 효과를 나타낸 사진이다.
도 4는 Melan-a 세포와 B16F10 세포에서 대조 약물로 PTU를 사용하여 오메프라졸의 멜라닌 함량 및 세포 생존율을 나타난 그래프이다.
도 5는 타이로시나제, TRP-1, TRP-2, MITF의 단백질 발현에 대한 오메프라졸의 세포내 효과를 비교분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 Melan-a 세포에서 오메프라졸 처리에 따른 멜라닌 생성에 관련된 단백질의 발현을 관찰한 것이다.

본 발명은 하기 화학식 1의 오메프라졸(omeprazole) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물 및 건강기능식품을 제공함에 그 특징이 있다.

<화학식 1>

본 발명의오메프라졸(omeprazole)은 IUPAC 명명법으로 6-methoxy-2-((4-methoxy-3,5-dimethylpyridin-2-yl) methylsulfinyl)-1H-benzo[d]imidazole이고, 분자식은 C₁₇H₁₉N₃O₃S이고, 분자량은 345.4이다.

상기와 같은 특징을 갖는 오메프라졸(omeprazole)은 위 식도 역류증(Lind T 등, Alimentary Pharmacology & Therapeutics 2000, 14(7):861-867), 소화성 궤양(Fuccio, Lorenzo 등, Annals of internal medicine 147.8 (2007): 553-562), 미란성 식도염(Winstead 등, Current treatment options in gastroenterology 7.1 (2004): 71-76), 졸링어-엘리슨 증후군(Metz 등, Aliment Pharmacol Ther. 1993 Dec;7(6):597-610) 등에 효과적임이 보고되었다.

그러나 현재까지 피부 미백과 관련하여 연구된 바 없다.

본 발명자들은 인체에 안정하면서도 탁월한 미백 효과를 나타낼 수 있는 소재를 찾고자 모색하던 중 오메프라졸에 주목하여 그것의 미백 효과를 실험한 결과, 오메프라졸이 티로시나아제 발현 및 활성을 농도 의존적으로 저해함으로써 멜라닌의 합성을 효과적으로 억제할 수 있다는 사실을 최초로 규명하였으며, 따라서 본 발명은 오메프라졸의 피부 미백 활성이라는 신규 용도를 제공함에 그 특징이 있다.

본 발명에 따른 상기 오메프라졸(omeprazole)은 염, 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하며, 상기 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.

본 발명에 따른 오메프라졸(omeprazole)은 시중에서 판매되는 것을 사용할 수도 있으며, 또는 천연으로부터 분리되거나 당업계에 공지된 화학적 합성법으로 제조된 것을 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 조성물은 상술한 오메프라졸(omeprazole)뿐만 아니라, 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 상술한 오메프라졸(omeprazole) 이외에, 오메프라졸과 반응하여 피부보호 효과를 손상시키지 않는 한도에서 종래부터 사용되어오던 유기 자외선 차단제를 혼합하여 사용할 수도 있다.

상기 유기 자외선 차단제로는 글리세릴파바, 드로메트리졸트리실록산, 드로메트리졸, 디갈로일트리올리에이트, 디소듐페닐디벤즈이미다졸테트라설포네이트, 디에칠헥실부타미도트리아존, 디에칠아미노하이드록시벤조일헥실벤조에이트, 디이에이-메톡시신나메이트, 로우손과 디하이드록시아세톤의 혼합물, 메칠렌비스-벤조트리아졸릴테트라메칠부틸페놀, 4-메칠벤질리덴캠퍼, 멘틸안트라닐레이트, 벤조페논-3(옥시벤존),벤조페논-4, 벤조페논-8(디옥시페벤존), 부틸메톡시디벤조일메탄, 비스에칠헥실옥시페놀메톡시페닐트리아진, 시녹세이트, 에칠디하이드록시프로필파바, 옥토크릴렌, 에칠헥실디메칠파바, 에칠헥실메톡시신나메이트, 에칠헥실살리실

레이트, 에칠헥실트리아존, 이소아밀-p-메톡시신나메이트, 폴리실리콘-15(디메치코디에칠벤잘말로네이트), 테레프탈릴리덴디캠퍼설포닉애씨드 및 그 염류, 티이에이-살리실레이트 및 아미노벤조익애씨드(파바)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.

본 발명의 일 구체예에 있어서, 본 발명의 오메프라졸(omeprazole)의 함량은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001-20 중량%이며, 바람직하게는 0.5-20 중량%이며, 보다 바람직하게는 1.0-20 중량%이다. 상기 오메프라졸의 함량이 0.0001 중량% 미만이면 오메프라졸에 의한 미백 효과가 크게 감소되고, 20 중량%를 초과하는 경우에는 피부 자극을 초래할 수 있으며, 제형상의 문제점이 발생할 수 있다.

또한, 본 발명의 다른 구체예에 있어서, 본 발명의 오메프라졸(omeprazole)은 조성물에 10 내지 100μM의 농도로 포함될 수 있다. 상기 오메프라졸의 농도가 10μM 미만이면 오메프라졸에 의한 미백 효과가 크게 감소될 수 있으며, 100μM을 초과하는 경우 세포에 독성을 줄 수 있기 때문이다.

한편, 본 발명에 따른 상기 화장료 조성물은 오메프라졸(omeprazole)을 나노리포좀 내부에 함유시켜 안정화하여 제형화할 수도 있다. 상기 오메프라졸을 나노리포좀 내부에 함유시키면, 오메프라졸의 성분이 안정화되어 제형화시 침전형성, 변색, 변취 등의 문제점을 해결할 수 있으며, 성분의 용해도 및 경피흡수율을 높일 수 있어 상기 화합물로부터 기대되는 효능을 최대로 발현시킬 수 있다.

본 발명에서 나노리포좀은 통상적인 리포좀의 형태를 갖는 것으로서 평균 입자 지름이 10~500nm인 리포좀을 의미한다. 본 발명의 바람직한 구현 예에 따르면, 나노리포좀의 평균 입자 지름은 50~300nm이다. 나노리포좀의 평균 입자 지름이 300nm를 초과하는 경우에는 본 발명에서 달성하고자 하는 기술적 효과 중 피부침투의 개선 및 제형 안정성의 개선이 매우 미약하다.

본 발명에 따라 상기 화합물(오메프라졸)을 안정화하는데 사용되는 나노리포좀은 폴리올, 유성성분, 계면활성제, 인지질, 지방산 및 물을 포함하는 혼합물에 의해 제조될 수 있다.

본 발명의 나노리포좀에 이용되는 폴리올은 특히 제한되지 않으며, 바람직하게는 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 메틸프로판디올, 이소프로필렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 에리스리톨, 자일리톨, 솔비톨 및 이의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상이다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 10~80 중량%, 바람직하게는 30~70 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 유성(oil) 성분은 당업계에 공지된 다양한 오일이 이용될 수 있으며, 바람직하게는 헥사데칸 및 파라핀 오일과 같은 하이드로카본계 오일, 에스테르계의 합성오일, 디메치콘 및 사이크로메치콘계와 같은 실리콘 오일, 해바라기유, 옥수수유, 대두유, 아보카도유, 참깨유 및 어유와 같은 동식물성 오일, 에톡시레이티드 알킬에테르계오일, 프로폭시레이티드 알킬에테르계오일, 피토스핑고신, 스핑고신 및 스핑가닌과 같은 스핑고노이드 지질, 세레브로사이드 콜레스테롤, 시토스테롤 콜레스테릴설페이트, 시토스테릴설페이트, C₁₀-₄₀ 지방알콜 및 이의 혼합물이다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 1.0~30.0중량%일 수 있으며, 바람직하게는 3.0~20.0 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 계면활성제는 당업계에 공지된 어떠한 것도 사용할 수 있다. 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용될 수 있다. 바람직하게는 음이온성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제이다. 음이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알킬아실글루타메이트, 알킬포스페이트, 알킬락틸레이트, 디알킬포스페이트 및 트리알킬포스페이트를 포함한다. 비이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알콕시레이티드 알킬에테르, 알콕시레이티드 알킬에스테르, 알킬폴리글리코사이드, 폴리글리세릴에스테르 및 슈가에스테르를 포함한다. 특히 바람직한 계면활성제는 비이온성 계면활성제에 속하는 폴리솔베이트류이다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.1~10 중량%일 수 있으며, 바람직하게는 0.5~5.0 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 또 다른 성분인 인지질은 양쪽친화성 지질이 이용되며, 천연 인지질(예를 들어, 난황 레시틴 또는 대두 레시틴, 스핑고마이엘린) 및 합성 인지질(예를 들어, 디팔미토일포스파티딜콜린 또는 수첨 레시틴)을 포함하며, 바람직하게는 레시틴이다. 특히, 대두 또는 난황에서 추출한 천연 유래의 불포화 레시틴 또는 포화 레시틴이 바람직하다. 통상적으로 천연 유래의 레시틴은 포스파티딜콜린의 양이 23~95 중량%, 그리고 포스파디딜에탄올아민의 양이 20 중량% 이하이다. 본 발명의 나노리포좀의 제조에 있어서, 인지질의 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.5~20.0 중량%이며, 바람직하게는 2.0~8.0 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀 제조에 이용되는 지방산은 고급 지방산으로서, 바람직하게는 C_12-22 알킬 체인의 포화 또는 불포화 지방산으로서, 예컨대, 라우린산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아린산, 올레산 및 리놀레산을 포함한다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.05~3.0 중량%일 수 있으며, 바람직하게는 0.1~1.0 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 물은 일반적으로 탈이온화된 증류수이며, 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 5.0~40 중량%일 수 있다.

나노리포좀의 제조는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 이루어질 수 있으나, 가장 바람직하게는 상기 성분들을 포함하는 혼합물을 고압 호모게나이저에 적용하여 제조된다. 고압 호모게나이저에 의한 나노리포좀의 제조는 소망하는 입자 크기에 따라 다양한 조건(예: 압력, 횟수 등)으로 실시할 수 있으며, 바람직하게는 600~1200bar의 압력 하에서 1~5 회 고압 호모게나이저를 통과하도록 하여 나노리포좀을 제조할 수 있다.

본 발명에 따른 피부 개선용 화장료 조성물은 상기 오메프라졸(omeprazole)을 나노리포좀 충 중량 기준으로 0.1~20.0 중량%로 함유할 수 있다.

본 발명은 또한 오메프라졸(omeprazole)을 유효성분으로 포함하는 피부 미백 개선용 식품 조성물을 제공한다.

이러한 식품 조성물은 유효성분인 오메프라졸을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 향미제는 천연 향미제(타우마틴), 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 상기 약제학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등이 있으며 이에 국한되는 것은 아니다.

또한 상기 식품 조성물은 유효성분인 오메프라졸(omeprazole) 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

본 발명은 또한 오메프라졸(omeprazole)을 유효성분으로 포함하는 피부 미백 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 건강기능식품은 피부 미백 개선을 목적으로, 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다.

본 발명에서 건강기능식품이라 함은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.

본 발명의 건강기능식품은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 식품 첨가물로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전청에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.

상기 식품 첨가물 공전에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼슘, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물; 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물; L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류 등을 들 수 있다.

예를 들어, 정제 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 오메프라졸(omeprazole)을 부형제, 결합제, 붕해제 및 다른 첨가제와 혼합한 혼합물을 통상의 방법으로 과립화한 다음, 활택제 등을 넣어 압축성형하거나, 상기 혼합물을 직접 압축 성형할 수 있다. 또한 상기 정제 형태의 건강기능식품은 필요에 따라 교미제 등을 함유할 수도 있다.

캅셀 형태의 건강기능식품 중 경질 캅셀제는 통상의 경질 캅셀에 본 발명의 유효성분인 오메프라졸(omeprazole)을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 충진하여 제조할 수 있으며, 연질 캅셀제는 오메프라졸(omeprazole)을 부형제 등의 첨가제와 혼합한 혼합물을 젤라틴과 같은 캅셀기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질 캅셀제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.

환 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 오메프라졸(omeprazole)과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 성형하여 조제할 수 있으며, 필요에 따라 백당이나 다른 제피제로 제피할 수 있으며, 또는 전분, 탈크와 같은 물질로 표면을 코팅할 수도 있다.

과립 형태의 건강기능식품은 본 발명의 유효성분인 오메프라졸(omeprazole)과 부형제, 결합제, 붕해제 등을 혼합한 혼합물을 기존에 공지된 방법으로 입상으로 제조할 수 있으며, 필요에 따라 착향제, 교미제 등을 함유할 수 있다.

상기 건강기능식품은 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류 등일 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1>

오메프라졸(omeprazole)의 항산화 활성 분석

본 발명에 따른 오메프라졸의 항산화 효과를 조사하기 위하여 FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching), CUPRAC(CUPric Reducing Antioxidant Capacity) 및 ABTS 항산화 실험을 하였다.

FRAP 항산화 실험을 위한 반응액은 300mM 아세테이트 버퍼 (pH 3.6) : 10mM 2,4,6-트리스피리딜-s-트리아진(2,4,6-tripyridyl-s-triazine, TPTZ) : 20mM 염화제2철(FeCl_{3 ·}6H₂O) 을 10 : 1 : 1의 부피비로 섞어 실험 직전에 FRAP 솔루션을 만들어 시료 6μl와 FRAP 솔루션 194μl를 혼합한 후 실온에서 빛을 차단한 상태로 10분 후 595nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료 활성은 대조군 대비 활성 증가배율로 나타내었다. 양성 대조군은 아스코르브산(ascorbic acid) 를 사용하였다.

CUPRAC 항산화 실험을 위한 반응 액은 물 : 10mM 염화구리(CuCl₂) : 75mM 네오쿠프로인(Neocuproine)을 100 : 1 : 1의 부피로 혼합하여 실험 직전 CUPRAC 솔루션을 만들어 시료 6μl와 CUPRAC 솔루션 194μl를 혼합한 37℃에서 빛을 차단한 상태로 20분 배양 한 후 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료 활성은 대조군 대비 활성 증가배율로 나타내었다. 양성 대조군은 아스코르브산(ascorbic acid)를 사용하였다.

ABTS 항산화 실험을 위한 반응액은 7mM ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)와 140mM 과황산칼륨(otassium persulfate) 용액을 혼합하여 14시간 동안 어두운 곳에 방치하여 ABTS+ 라디칼을 형성시킨 후 이 용액을 740nm에서 흡광도 값이 0.7 ± 0.02 이 되도록 50% ethanol로 희석하였다. 희석된 ABTS+ 라디칼 용액 100μl에 5μl sample를 가하여 실온에서 빛을 차단한 상태로 배양하여 10분 후에 740nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료 활성은 대조군 대비 억제 활성으로 나타내었다. 양성 대조군은 아스코르브산(ascorbic acid)를 사용하였다.

분석 결과, 상기 표 1에 나타낸 바와 같이, FRAP 항산화 활성은 양성대조군인 아스코르브산 50μM의 농도에서 11.32배 증가되는 것이 확인된 반면, 오메프라졸은 100μM에서 5배 그리고 200μM에서 9.19배 증가되는 것이 관찰되었다. CUPRAC 항산화 활성은 양성 대조군인 아스코르브산 50μM의 농도에서 8.74배 증가되는 것이 확인된 반면, 오메프라졸은 100μM에서 3배 그리고 200μM에서 4.34배 증가되는 것이 관찰되었다. ABTS 항산화 활성은 대조군 대비 억제 활성으로 나타내었다. 아스코르브산 50μM에서 55.36 % 억제가 관찰된 반면, 오메프라졸 처리군 200μM에서 55.1 % 억제 활성이 관찰되어 반수 최대 억제 농도 값 (IC₅₀)이 213.9μM로 산출되었다.

< 실시예 2>

오메프라졸(omeprazole)의 티로시나아제 저해 활성 분석

티로시나아제에 대한 저해효과는 in vitro에서 mushroom tyrosinase assay에 따라 L-티로신에서 L-도파의 히드록실화 정도를 분광학적 실험법을 이용하여 측정하였다.

타이로시나제 저해 활성은 0.1M 인산완충용액(pH 6.5) 150μl에 1.5mM 타이로신을 녹인 기질액 50μl을 가하고, 시료 3μl를 첨가하여 혼합한 혼합액에 버섯 타이로시나아제(mushroom tyrosinase)(200U/㎖) 50μl을 첨가하고 37℃에서 20분간 반응시킨 후, 반응액 중에 생성된 도파크롬(dopachrome)을 효소 분광흡도 분석기(microplate reader)를 이용하여 490nm에서 흡광도를 측정 하여 비교하였다. 오메프라졸을 첨가하지 않은 동일한 혼합물을 대조구로 사용하였다. 양성대조군으로 알부틴을 사용하였다.

타이로시나아제 효소 활성 저해율은 다음 계산식에 의해 산출하였다.

% 저해율 = (A-B)/A × 100

A: 시료를 첨가하지 않았을 때의 흡광도

B: 시료를 첨가하였을 때의 흡광도

분석 결과, 도 1에서 나타낸 바와 같이, 대조 약물인 알부틴의 농도가 증가함에 따라 타이로시나제 활성이 유의적으로 증가하여 반수 최대 억제 농도(half maximal inhibitory concentration, IC₅₀) 값이 416.6μM로 확인되었으며, 오메프라졸도 농도 유의적으로 활성이 증가하는 것이 관찰되었으며 반수 최대 억제 농도 값 (IC₅₀)이 173.8μM로 확인되어 오메프라졸이 알부틴보다 2.4배 타이로시나아제 억제 활성이 높은 것으로 확인되었다.

< 실시예 3>

오메프라졸(omeprazole)의 멜라닌 생성 억제 효과

본 발명자들은 오메프라졸의 멜라닌 생성의 억제에 대한 오메프라졸의 효과를 확인하기 위하여 B16F10 세포에서 멜라닌 생성 억제 효과를 분석하였다.

먼저, 실험에 사용된 세포주는 마우스 유래 멜라노마 세포인 B16F10으로서 한국 세포주 은행(Korean Cell Line Bank, KCLB)로부터 구입하였으며, 멜라닌 생성 세포주는 10% 소태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS), 페니실린 G(penicillin G, 100IU/mL), 스트렙토마이신(streptomycin, 100㎍/mL)을 포함한 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium)배지에서 배양시켰다. 100 파이 컬쳐 디쉬(culture dish)에 세포현탁액을 넣고 37℃, 5% CO₂ 조건에서 융합 성(confluent)이 되게 자라게 되면 100μM 아이소부틸 메틸 잔틴(isobutylmethylxanthine, IBMX)을 첨가 하여 멜라닌 생성을 증가 시킨 후, 24 웰 플레이트에 1 × 10⁵ cells/well의 농도로 다시 접종하고 100μM 아이소부틸 메틸 잔틴을 첨가 후 24 시간 배양하였다. 웰 당 990μl의 100μM 아이소부틸 메틸 잔틴이 첨가된 배지를 매일 갈아주면서 10μl의 시료를 3 일간 처리한 후 배양하였다. 멜라닌 생성 정도를 관찰하기 위해 현미경 하에 멜라닌 형성능을 관찰하였다. 대조군으로 아이소부틸 메틸 잔틴이 첨가되지 않은 세포를 사용하였고, 양성 대조군으로 알부틴(Arbutin)을 사용하였다.

분석 결과, 도 2에서 나타낸 바와 같이, 아이소부틸 메틸 잔틴을 첨가하지 않은 대조군(vechicle)보다 아이소부틸 메틸 잔틴 100μM을 첨가한 세포에서 검게 생성된 멜라닌이 관찰 되었지만, 아이소부틸 메틸 잔틴과 오메프라졸을 동시에 처리한 세포의 멜라닌이 양성 대조군인 500μM 알부틴 처리한 세포와 같이 감소되는 것이 관찰되었다.

따라서 이러한 결과를 토대로 본 발명자들은 오메프라졸의 피부 미백 효과를 가진 화장료 조성물로 활용할 수 있다는 것을 알 수 있었다.

< 실시예 4>

Melan -a 세포에서 멜라닌 생성양의 측정과 세포 생존률을 분석

멜라닌 생성 세포주는 마우스 유래 멜라노사이트 멜란-에이(melan-a)를 10% 소태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS), 페니실린 G(penicillin G, 100IU/mL), 스트렙토마이신(streptomycin, 100㎍/mL)이 함유된 RPMI(Roswell Park Memorial Institute)1640 배지에서 200nM 12-O-테트라데카노일포르볼-13-아세트산(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate, TPA)를 첨가하여 배양시켰다. 100 파이 컬쳐 디쉬(culture dish)에 세포현탁액을 넣고 37℃, 5% CO₂ 조건에서 융합 성(confluent)이 되게 자라게 되면 24 웰 플레이트에 1 × 10⁵ cells/well의 농도로 다시 접종하고 24 시간 배양하였다. 웰 당 990μl의 배지를 매일 갈아주면서 10μl의 시료를 3 일간 처리한 후 1 일간 더 배양하였다. 멜라닌 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 배지 제거 후 인산염완충식염수(phosphate buffer saline : PBS)로 세척하고 곧 1N NaOH 1ml를 가하여 멜라닌을 녹인 후 400nm에서 UV 흡수도를 측정하였다. 세포생존율에 미치는 영향을 측정하기 위하여 멜라닌 함량 측정과 같은 조건으로 배양 한 후, 배지 제거 후 인산염완충식염수로 세척하고 5mg/ml로 제조된 MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 용액을 배지에 900μl에 100μl 씩 첨가한 후 37℃에서 1시간 배양 후 MTT 용액을 완전 제거한 후 각 웰 당 1ml의 디메틸설폭사이드(Dimethyl Sulfoxide, DMSO)를 첨가하여 포마잔을 녹여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로 시료가 첨가되지 않은 세포를 사용하였고, 양성 대조군으로 페닐티오요소(phenylthiourea, PTU)을 사용하였고 실험은 3회 이상 반복한 결과를 나타내었다.

분석 결과, 도 3에서 나타낸 바와 같이, 오메프라졸을 처리하지 않은 세포에서는 멜라닌이 현미경 하에 관찰되었지만, 오메프라졸을 농도별로 처리한 결과 대조군에 비해 멜라닌 색이 흐려지는 것이 관찰되었다. 또한, 도 4에서 나타낸 바와 같이 오메프라졸을 농도별로 처리한 결과, 세포 생존율에는 영향을 미치지 않지만, 멜라닌 생성이 농도 의존적으로 감소되는것이 확인되었으며, 반수 최대 억제 농도 값 (IC₅₀)은 162.7μM으로 산출되었다.

< 실시예 5>

타이로시나아제 , TRP -1, TRP -2, MITF 의 단백질 발현에 대한 오메프라졸의 세포 내 효과 분석

마우스 유래 멜라노사이트 멜란-에이(melan-a)를 6-웰 플레이트에 1 × 10⁵세포/웰 씩 분주하고 하루 동안 배양하였다. 이어 시료를 매일 갈아주며 3일 동안 배양하였다. 세포의 배지를 제거 한 후 인산완충식염수로 세척한 후 인산완충액(lysis buffer) (50mM Tris, pH 7.4, 0.1 SDS, 1 NP-40, 150mM NaCl, 1mM PMSF, 10mM NaF,10ug/ml aprotinin, 10ug/ml leupeptin, 10mM Na3VO4)를 사용하여 세포 용해물(cell lysate)를 제조하였다. 동량(20μg)의 단백질을 함유한 세포 용해물(cell lysate)를 10% SDS-PAGE로 분리한 후, 니트로셀룰로오스 막(nitrocellulose membrane)을 사용하여 웨스턴 블로팅(western blotting)을 수행하였다. 이어 5% 탈지분유(skim milk)를 1시간 동안 상온에서 처리하여 막을 블로킹을 실시한 후, 1차 항체로서 항-티로시나아제 항체(anti-tyrosinase antibody) 또는 항 TRP-1, -2 항체(anti-TRP-1, -2 antibody) 또는 작은 안구증 연관 전사 요소(Microphthalmia-associated transcription factor, MITF)를 5% 탈지분유에 1: 1000 비율로 희석하여 4℃에서 하룻밤 동안 반응시켰다. 블롯(blot)을 TTBS 완충액 (25mM Tris, pH 7.5, 150mM NaCl, 0.05% Tween-20)으로 3회 세척하고 2차 항체 (horseradish peroxidase-conjugated anti-goat IgG)를 5% 탈지분유에 1:5000 비율로 희석하여 상온에서 2시간 동안 반응시켰다. 다시 블롯(blot)을 TTBS 완충액으로 3회 세척하고 ECL 키트(enhanced chemiluminescence kit)와 반응시킨 다음 화학발광법(chemiluminescence)을 이용하여 현상하여 밴드를 확인 하였다.

분석 결과, 도 5에서 나타낸 바와 같이 상기 오메프라졸은 티로시나아제, TRP-2 및 MITF의 단백질 발현을 각각 오메프라졸 200μM 농도에서 각각 50%, 80% 및 70% 저해 능력이 확인되었으며, 이는 오메프라졸이 멜라닌 생성에 관련된 단백질의 발현을 감소시킴으로써 멜라닌 생성을 억제할 수 있음을 알 수 있었다.

< 실시예 6>

오메프라졸에 의한 신호 단백질 발현 분석

마우스 유래 멜라노사이트 멜란-에이(melan-a)를 6-웰 플레이트에 1 × 10⁵세포/웰 씩 분주하고 3일 동안 세포의 배지를 교환한 후, 인산완충식염수로 세척한 후 파쇄완충액(lysis buffer) (50mM Tris, pH 7.4, 0.1% SDS, 1% NP-40, 150mM NaCl, 1mM PMSF, 10mM NaF, 10ug/ml aprotinin, 10ug/ml leupeptin, 10mM Na3VO4)을 사용하여 세포 용해물(cell lysate)를 제조하였다. 동량(20μg)의 단백질을 함유한 세포 용해물(cell lysate)를 10% SDS-PAGE로 분리한 후, 니트로셀룰로오스 막(nitrocellulose membrane)을 사용하여 세포의 신호분자에 대한 웨스턴 블로팅(western blotting)을 수행하였다. 5% 탈지분유(skim milk)를 1시간 동안 상온에서 처리하여 비특정한 단백질의 결합을 억제하한 후, 1차 항체로서 항-이알케이 항체(anti-ERK antibody), 항-인산화된 이알케이 항체(anti-p-ERK antibody), 인산화된 에스에이피케이/제이엔케이 항체(anti-p-SAPK/JNK antibody), 인산화된 p38 항체(anti-p-p38 antibody), 그리고 인산화된 엔에프카파비 항체(anti-p-NF-κB antibody)를 5% 탈지분유에 1: 500 비율로 희석하여 4℃에서 하룻밤 동안 반응시켰다. 블롯(blot)을 TTBS 완충액(25mM Tris, pH 7.5, 150mM NaCl, 0.05% Tween-20)으로 10분간 3회 세척하고, 2차 항체 (horseradish peroxidase-conjugated anti-goat IgG)를 5% 탈지분유에 1:1000 비율로 희석하여 상온에서 1시간 동안 반응시켰다. 다시 블롯(blot)을 TTBS 완충액으로 10분간 3회 세척하고 ECL 키트(enhanced chemiluminescence kit)와 반응시킨 다음 화학발광법(chemiluminescence)을 이용하여 각각의 항체에 반응하는 단백질 밴드의 증강 유무를 비교하였다.

분석 결과, 도 6에서 나타낸 바와 같이 상기 오메프라졸을 각각 50, 100 및 200μM 농도로 처리한 결과, 항-이알케이 항체(anti-ERK antibody)는 각 농도에서 변화를 나타내지 않았다. 같은 패턴으로 항-인산화된 이알케이 항체, 에스에이피케이/제이엔케이 항체, 및 인산화된 엔에프카파비 항체는 오메프라졸의 농도에 의존적으로 변화를 나타내지 않았다. 그러나 인산화된 p38 항체(anti-p-p38 antibody)는 농도 의존적으로 이의 발현이 1200% 급격히 증가되는 양상을 나타내었다. 이는 오메프라졸이 멜라닌 생성에 관련된 단백질의 발현을 감소시킴과 동시에 세포 내에서 핵 내로 전달되기 직전에 최종 신호전달은 p38 단백질의 인산화를 통하여 핵 내로 전달됨을 알 수 있었다.

결론적으로, 오메프라졸 화합물이 티로시나아제 활성 및 발현을 저해하는 기작을 통해 멜라닌 합성을 효과적으로 억제할 수 있으므로, 미백 기능성 소재로서 유용하게 사용될 수 있다고 판단된다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (9)

1. 하기 화학식 1의 오메프라졸(omeprazole) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물:
   <화학식 1>
   

   
2. 제1항에 있어서,
   상기 오메프라졸은 멜라닌 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
3. 제2항에 있어서,
   상기 오메프라졸은 티로시나아제의 발현 및 활성을 저해하는 기작을 통하여 멜라닌 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 오메프라졸은 조성물에 10 내지 50μM의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스파우더로 이루어진 군으로부터 선택된 1종으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
6. 하기 화학식 1의 오메프라졸(omeprazole) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 건강기능식품:
   <화학식 1>
   

   
7. 제6항에 있어서,
   상기 오메프라졸은 멜라닌 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 건강기능식품.
8. 제7항에 있어서,
   상기 오메프라졸은 티로시나아제의 발현 및 활성을 저해하는 기작을 통하여 멜라닌 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 건강기능식품.
9. 제6항에 있어서,
   상기 건강기능식품은 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 사탕류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제 및 건강보조식품류로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 건강기능식품.

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