KR20130023606A - 회화나무꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물은 세포에 독성을 일으키지 않으면서, 티로시나제의 활성을 억제하고, 멜라닌의 생성을 효과적으로 억제하여 미백 효과를 나타내기 때문에 피부 미백용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다. 또한 본 발명에 따른 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물은 슈퍼옥사이드 생성을 억제하고 자유라디칼 소거 효과가 뛰어나, 항산화 효과를 가지며, 피부 주름 개선 효과를 나타내기 때문에 피부 노화 억제 및 피부 주름 개선용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

회화나무꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물 {Composition for whitening of the skin comprising an extract of Sophora japonica L., Leguminosae }

본 발명은 회화나무꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 회화나무꽃 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 억제 또는 피부 주름 개선용 조성물에 관한 것이다

피부는 외부 환경과 직접 접하면서 인체를 보호하며 생화학적이고 물리적인 기능을 가지고 있는 중요한 조직으로, 크게 3가지 즉, 표피 (epidermis), 진피 (dermis), 그리고, 피하 (hypodermis)로 나누어진다.

미백제란 자외선에 의한 기미, 주근깨 등을 완화시키고, 멜라닌 색소의 생성을 억제하기 위하여 개발된 제품으로 작용메카니즘에 따라 자외선 차단, 사이토킨(cytokine) 조절, 멜라닌 (melanin) 합성 저해, 티로시나제 (tyrosinase) 활성 저해, 박리촉진등으로 나누어진다.

피부색에 영향을 주는 색소로는 멜라닌, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데 이중 가장 중요한 것은 멜라닌으로 멜라닌의 생성은 인종과 지역, 성별, 나이에 따라 달라지며 과잉 생성된 멜라닌은 기미, 주근깨와 자외선 노출로 인한 태닝과 같은 부분, 또는 전체적인 색소침착, 그 외에 여드름 및 흉터 등의 원인이 된다.

멜라닌의 생합성은 아미노산의 일종인 티로신 (tyrosine)이 멜라노사이트 (melanocyte) 멜라노좀 (melanosome)에서 티로시나제 (tyrosinase)에 의해 산화되어 디하이드록시 페닐알라닌 (dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 이루어진다. 이 후 일련의 효소적 산화과정 및 비효소적 산화과정을 거쳐 갈색 (pheomelanin), 흑색 (eumelanin)의 중합체로 형성된다. 이러한 생합성 과정은 멜라노좀 이라는 특수한 형태의 갈색 세포 내 소기관에서 진행되며 멜라닌 과립을 포함하는 멜라노좀은 핵 주변 부위에서 수지상 돌기 끝부분으로 이동, 케라티노사이트의 식세포작용에 의해 세포질 내로 이동하고 이들은 케라티노사이트의 핵 주변에 축적된다.

멜라닌의 합성과 멜라노좀의 수, 주위의 케라티노사이트로의 이동은 유전적인 요소뿐 아니라 호르몬과 자외선 등의 영향을 받는다. 그 밖에 티로시나제의 발현 및 멜라닌의 합성, 전송에 관여하는 세포 내 조절인자인 사이토킨, 구리, 아연, 철 등의 금속 이온 및 인터페론, 프로스타글란딘, 히스타민 등이 관여하는 것으로 알려져 있다. 이러한 멜라닌 생성에 가장 중요한 역할을 하는 것은 티로시나제로 이 효소의 활성을 억제하여 피부의 미백효과를 기대할 수 있다.

현재 미백제의 개발은 멜라노사이트 내에서 멜라닌 생성을 억제하는 것, 멜라노사이트 자극물질을 조절하는 것, 멜라닌 배설을 촉진하는 것으로 크게 3가지 방향으로 이루어지고 있다. 특히 멜라닌 생성을 억제하기 위해 티로시나제의 활성부위의 필수요소인 Cu를 제어하거나 티로시나제 관련 단백질인 TRP-1, TRP-2의 필수요소인 Fe를 제어하는 효소활성을 불활성시키거나, 멜라닌 생성 중간체의 생성을 억제하는 물질 개발에 집중하고 있다.

현재까지 알려진 티로시나제 저해제로 알부틴, 하이드로퀴논 (hydroquinone), 하이드록시애니졸 (hydroxyanisole), 아스코르브산 (ascorbic acid) 유도체, 코직산 (kojic acid), 레티노이드 (retinoids) 등이 있으나, 일부 저해제는 돌연변이를 유발하여 발암가능성이 있다는 실험결과가 있으며 그 외에도 안전성과 경제성, 경피를 통한 흡수성 등의 문제점이 있다. 이러한 문제점 때문에, 강한 저해활성을 지니며 안전성 및 경제성이 모두 보장되는 저해제의 개발이 요구되고 있다. 또한, 미백화장품 소재개발 연구는 멜라노좀까지의 침투능력, 케라티노사이트와의 상호관계, 표피세포의 분화재생 능력 등 다각적인 검토가 필요하며, 기존 미백물질들의 한계점과 문제점을 극복하고 보다 우수한 원료물질을 찾기 위하여 안전성이 입증되어 있는 천연물 중에서 유효소재를 탐색할 필요성이 있다.

한편, 회화나무(Sophora japonica L., Leguminosae)의 꽃봉오리를 말린 것을 괴화 (Sophorae Flos)라고 하여 한방에서 항고혈압, 출혈치료, 해열, 수렴, 지혈, 진정등의 목적으로 처방하고 있다. 성분으로 플라보노이드 화합물이 많으며 그 외 트리털피노이드 (triterpenoid)류도 함유하고 있다. 꿀을 많이 함유하고 있는 회화나무 꽃은 황색염료로 사용하며 괴화차로 만들어 고혈압의 예방에 쓰기도 한다. 그러나 아직까지 회화나무꽃 추출물의 미백효과에 관한 연구는 없다.

이에 본 발명자들은 천연물 유래 조성물을 개발하고자 노력한 결과, 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물이 티로시나제 억제 활성 및 멜라닌 생성 억제 효과가 뛰어나고, 항산화 활성 및 피부 주름 개선효과가 뛰어나, 미백용 조성물 또는 피부 노화 억제 및 피부 주름 개선용 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 세포 독성이 없으면서도 안정적으로 피부에 작용하여, 멜라닌 생성을 감소시키는 피부 미백용 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 항산화 활성 및 피부 주름 개선 효과가 뛰어난 피부 노화 억제 및 피부 주름 개선용 조성물을 제공하는데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 약학적 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 식품용 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 억제 및 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 억제 및 피부 주름 개선용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물은 세포에 독성을 일으키지 않으면서, 티로시나제의 활성을 억제하고, 멜라닌의 생성을 효과적으로 억제하여 미백 효과를 나타내기 때문에 피부 미백용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다. 또한 본 발명에 따른 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물은 슈퍼옥사이드 생성을 억제하고 자유라디칼 소거 효과가 뛰어나, 항산화 효과를 가지며, 피부 주름 개선 효과를 나타내기 때문에 피부 노화 억제 및 피부 주름 개선용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 회화나무꽃 추출물의 티로시나제 활성 억제 효과를 확인한 그림이다.
도 2은 회화나무꽃 추출물의 멜라닌 생성 억제 효과를 확인한 그림이다.
도 3는 회화나무꽃 추출물의 항산화 활성을 확인한 그림이다.
도 4은 회화나무꽃 추출물의 슈퍼옥사이드 생성 억제 활성을 확인한 그림이다.
도 5는 회화나무꽃 추출물의 자유 라디칼 소거 효과를 확인한 그림이다.
도 6는 회화나무꽃 추출물의 피부 주름 개선 효과를 확인한 그림이다
도 7은 회화나무꽃 추출물의 세포 독성을 확인한 그림이다.
도 8 및 도 9는 회화나무꽃 향기 성분을 분석한 그림이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

회화나무(Sophora japonica L., Leguminosae)는 콩과에 속하는 낙엽활엽교목이다. 잎은 어긋나고 15～40개의 소엽으로 된 우상복엽이다. 소엽은 난상피침형이며, 가장자리가 밋밋하고 길이는 2.3～6㎝이다. 꽃은 8월에 피고 황백색이며 원추화서(圓錐花序: 원뿔 모양의 꽃)차례에 달린다. 열매는 잘록잘록한 꼬투리이며, 길이 5～8㎝로서 10월에 익는다.

본 발명의 회화나무꽃 추출물은 하기와 같은 방법으로 제조된다.

회화나무꽃을 물로 세척하여 이물질을 제거한 후 그늘에서 건조하고 분쇄한다. 회화나무꽃은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 분쇄된 회화나무꽃에 적당한 양의 용매를 첨가하여 완전히 침지되도록 한다. 회화나무꽃은 물, 탄소수 1내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매를 이용하여 추출한다. 바람직하게는 메탄올을 이용한다.

본 발명의 회화나무꽃 분획물은 하기와 같은 방법으로 제조된다.

상기 메탄올 추출물에 물을 가한 다음, 유기용매인 염화메틸렌을 부가한 후 진탕하여 유기용매층과 물층을 1차 분리하고, 상기 물층에 유기용매인 에틸아세테이트를 다시 첨가한 후 진탕하여 유기용매층과 물층을 2차 분리하고, 상기 물층에 유기용매인 부탄올을 다시 첨가한 후 진탕하여 유기용매층과 물층을 3차 분리하는 추출 및 분획공정을 통해 수득한다.

본 발명에 따른 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물 또는 피부 노화 억제 및 피부 주름 개선용 조성물은 경구, 비경구 사용이 가능하며, 비경구 사용시 피부에 도포하는 방법이 사용될 수 있으며, 제형에 따라 바람직한 사용 방법을 선택할 수 있다.

또 다른 관점으로서, 본 발명의 피부 미백용 조성물 또는 피부 노화 억제 및 피부 주름 개선용 조성물은 피부학적으로 허용된 담체와 혼합하여 화장용 조성물로서 제공될 수 있다.

본 발명의 조성물에서 상기 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 50 중량 %의 양으로 함유될 수 있다.

본 발명의 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 화장용 조성물로부터 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 본 발명의 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 화장품 이외에도 피부학적으로 허용된 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수도 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형 (리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 비누, 연고, 스프레이, 계면활성제 함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 또는 콘실 스틱 (conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말 (foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

목적한 제형에 따라 이용할 수 있는 "피부학적으로 허용된 담체"는 정제수, 오일, 왁스, 지방산, 지방산 알코올, 지방산 에스테르, 계면활성제, 흡습제 (humectant), 증점제 (thickening agent), 항산화제, 점도 안정화제 (viscosity stabilizer), 킬레이팅제, 완충제, 방부제, 저급 알코올 등이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니며, 그 종류와 농도는 다양하고, 당업자가 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 수정 및 변경할 수 있는 부분을 포함한다. 필요에 따라 미백제, 보습제, 항염증제, 항박테리아제, 항진균제, 비타민, 자외선 차단제, 항생제, 여드름 방지제, 향수, 염료가 포함될 수도 있으며, 이들은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 양으로 본 발명에 따른 화장용 조성물에 포함될 수 있다. 조성물 총 중량 당 0.001 내지 50 중량%가 적합하다. 상기 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물의 함량이 0.001 중량 % 미만인 경우에는 뚜렷한 효과를 기대할 수 없고, 50 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 보이지 않는다.

구체적으로 상기 오일로는 수소화 식물성유, 파마자유, 면실유, 올리브유, 야자인유, 호호바유, 아보카도유가 이용될 수 있고, 왁스로는 밀랍, 경랍, 카르나우바, 칸델릴라, 몬탄, 세레신, 액체 파라핀, 라놀린이 이용될 수 있다. 지방산으로는 스테아르산, 리놀레산, 리놀렌산, 올레산이 이용될 수 있고, 지방산 알코올로는 세틸 알코올, 옥틸 도데칸올, 올레일 알코올, 판텐올, 라놀린 알코올, 스테아릴 알코올, 헥사데칸올이 이용될 수 있으며, 지방산 에스테르로는 이소프로필 미리스테이트, 이소프로필 팔미테이트, 부틸 스테아레이트 등이 이용될 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

계면활성제의 예로는 소듐 스테아레이트, 소듐 세틸설페이트, 폴리옥시에틸렌 라우릴에테르 포스페이트, 소듐 N-아실 글루타메이트와 같은 음이온 계면활성제; 스테아릴디메틸벤질암모늄 클로라이드 및 스테아릴트리메틸암모늄 클로라이드와 같은 양이온 계면활성제; 알킬아미노에틸글리신 하이드로클로라이드 및 레시틴과 같은 양성 계면활성제; 글리세린 모노스테아레이트, 소르비탄 모노스테아레이트, 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 올레일에테르, 폴리에틸렌 글리콜 모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미테이트, 폴리옥시에틸렌 코코넛 지방산 모노에탄올아르니드(monoethaolarnide), 폴리옥시프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌 캐스터유, 폴리옥시에틸렌 라놀린과 같은 비이온성 계면활성제 등이 포함된다.

흡습제에는 글리세린, 1,3-부틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜이 이용될 수 있으며, 저급 알코올로는 에탄올, 이소프로판올이 이용 가능하다. 증점제의 예에는 알긴산 나트륨, 카제인산 나트륨, 젤라틴 한천, 크산탄 고무, 전분, 셀룰로오스 에테르 (예, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 카르복시메틸 셀룰로오스, 하이드록시 프로필메틸 셀룰로오스), 폴리비닐 피롤리돈, 폴리비닐 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소듐 카르복시메틸 셀룰로오스 등이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

항산화제로는 부틸레이티드 하이드록시톨루엔, 부틸레이티드 하이드록시아니솔, 프로필 갈레이트, 시트르산, 에톡시퀸(ethoxyquin)이 이용 가능하고, 킬레이팅제로는 디소듐 에데테이트, 에탄하이드록시 디포스페이트가 이용 가능하며, 완충제로는 시트르산, 소듐 시트레이트, 붕산, 보랙스(borax), 디소듐 하이드로젠 포스페이트가 이용 가능하고, 방부제로는 메틸 파라하이드록시벤조에이트, 에틸 파라하이드록시벤조에이트, 디하이드로아세트산, 살리실산, 벤조산이 이용 가능하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 피부 미백 조성물은 상기 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 피부 미백 활성성분을 1 종 이상 함유할 수 있다. 피부 미백 활성 성분으로는 코지산 및 이의 유도체, 알부틴, 아스코르브산 및 이의 유도체, 하이드로퀴논 및 이의 유도체, 레조르시놀, 사이클로알카논, 메틸렌디옥시페닐 알칸올, 2,7-디니트로인다졸, 덩굴귤 추출물, 쌀 추출물, 감초 추출물과 같은 식물 추출물 등이 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

또 다른 관점으로서, 본 발명의 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물은 약학적으로 허용된 담체와 혼합하여 약학적 조성물로서 제공할 수 있다.

본 발명의 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물은 상기 유효성분 이외에 약학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

상기 약학적 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 포함하여 약학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.

상기 조성물의 유효량은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효 성분에 대한 치료상 유효 투여량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은, 성인의 경우, 1 일 1 회 내지 수 회 투여 시, 0.1 ㎎/kg 내지 250 ㎎/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.

또 다른 관점으로서, 본 발명의 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물은 식품학적으로 허용된 담체와 혼합하여 식품 조성물로서 제공될 수 있다. 본 발명의 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 식품 또는 음료 첨가물로 사용할 경우, 상기 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 상기 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물의 혼합양은 그의 사용목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿 류, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있다. 음료수로 제형화 할 경우에 회화나무꽃 추출물 이외에 첨가되는 액체 성분으로는 이제 한정되지는 않으나, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드 (예, 포도당, 과당 등), 디사카라이드 (예, 말토오스, 수크로오스 등) 및 폴리사카라이드 (예, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당), 및 자일리톨, 소르비톨, 에리스리톨 등의 당 알코올이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제[타우마린, 스테비아 추출물 (예, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (예, 사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다.

다른 양태로서, 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 증진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 식품 조성물은 과일 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 단독으로 또는 조합으로 사용될 수 있으며, 이러한 첨가제의 비율은 조성물 전체 중량당 0.001 내지 50 중량 %의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 상세히 설명한다. 본 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. 회화나무꽃 추출물 및 분획물의 제조

회화나무꽃을 잘 건조시키고 분말로 한 다음, 메탄올로 가열하면서 3시간 추출하였다. 용매와 물을 모두 증발시킨 후, 동결건조기로 건조하여 분말로 된 추출물을 얻어 이 후 실험에 사용하였다.

또한, 상기 메탄올 추출물에 물을 가한 다음, 유기용매인 염화메틸렌을 부가한 후 진탕하여 유기용매층과 물층을 1차 분리하고, 상기 물층에 유기용매인 에틸아세테이트를 다시 첨가한 후 진탕하여 유기용매층과 물층을 2차 분리하고, 상기 물층에 유기용매인 부탄올을 다시 첨가한 후 진탕하여 유기용매층과 물층을 3차 분리하는 추출 및 분획공정을 통해 분획물을 수득하여, 이 후 실험에 사용하였다.

실시예 2. 티로시나제 억제효과 검정

티로시나제는 L-DOPA로부터 멜라닌을 형성하는데 작용하는 효소로서 기질인 L-DOPA로부터 멜라닌의 생성을 억제하는 효과를 측정하였다. 효소반응은 Sodium phosphate 완충액(1/15M pH6.8) 1.8 ml, 기질 1.5mM L-DOPA 1.0 ml, 10 mg의 샘플을 DMSO 1 ml에 녹인 용액 0.1 ml을 사용하였다. 코직산 (Kojic acid, 양성대조약물)은 200 ug/ml용액 0.1 ml을 사용하였다. 효소(Tyrosinase 1000U/ml)용액 0.1 ml을 가한 후 10분 동안 배양시킨 뒤 ice bath에서 효소활성을 중지시킨 다음 475nm에서 흡광도를 측정하였다.

실험결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 회화나무꽃 추출물과 분획물 중에서 에틸아세테이트분획이 약 25%의 티로시나제 억제효과를 나타내었으며 그 다음으로는 염화메틸렌분획이 약 18%의 티로시나제 억제 효과를 나타내었다. 미백화장품의 원료로서 단일화합물인 코직산은 약 66%의 효과를 보였다. 많은 화합물이 함유된 분획물이 25%의 효과를 보인 것은 매우 우수한 효과라고 볼 수 있다.

실시예 3. 멜라닌 생성 억제 효과 검정

B16 마우스 멜라노마 세포 (murine melanoma cell)를 추출물을 함유하는 배지에서 배양하고 PBS로 세척한 다음, 함유되어 있는 멜라닌의 양을 405 nm에서 흡광도를 측정하여 계산하였다. 양성대조물질로 알부틴 (arbutin)을 사용하였다.

실험 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 회화나무꽃 추출물의 멜라닌생성 억제율은 12.5 - 50 μg/ml에서는 큰 차이가 없지만 100 μg/ml에서는 확실히 억제되어 피부미백에 큰 영향을 미치는 멜라닌의 생성을 효과적으로 억제함을 확인할 수 있었다.

실시예 4. 지질과산화 억제 활성 검정

과산화지질 함량 측정은 Ohkawa등의 방법에 준해 실시하였다.

화합물은 DMSO에 녹여 5mg/ml의 농도로 맞추어 사용하였으며 양성대조약물은 DMSO에 녹인 아스코르브산 (ascorbic acid) 1.0 mg/ml을 사용하였다. 0.1M potasium phosphate 완충액 (pH 7.4) 0.65 ml, 샘플 0.05 ml, homogenate 0.1 ml을 가한 후 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 이후 8.1% SDS 0.2 ml, acetate 완충액 (pH 3.5) 1.5 ml, 0.8% 2-thiobarbituric acid 1.5 ml를 첨가한 후, 95℃에서 1시간 반응시켰다. 실온으로 식힌 후 n-BuOH:Pyridin (15:1) 5 ml 첨가 후 3,000rpm에서 10분간 원심분리한 후, 상징액을 532nm에서 흡광도를 측정하였다. 과산화지질의 함량은 조직 1g당 MDA (malondialdehyde)의 양을 nmole로 나타내었다.

실험결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 회화나무꽃 추출물과 분획물 중에서 에틸아세테이트분획이 약 57%로 지질과산화 억제효과가 좋게 나타났으며 그 다음으로는 메탄올추출물과 염화메틸렌분획이 34 - 37% 정도로 비슷하였다. 에틸아세테이트분획의 효과는 양성대조화합물인 아스코르브산(비타민 C) 보다도 지질과산화 억제활성이 높아 피부노화를 억제하는 효과가 좋음을 알 수 있었다.

실시예 5. 슈퍼옥사이드 생산 억제 검정

Gotoh와 Niki의 방법(NBT assay)에 따라 측정하였다. 화합물은 DMSO에 녹여 5 mg/ml의 농도로 맞추어 사용하였다. 양성대조군은 DMSO에 녹인 아스코르브산 1 mg/ml을 사용하였다. 샘플 30 ul, 30 mM의 EDTA (pH 7.4) 100 ul, 50 mM의 NaOH에 녹인 30 mM Hypoxanthine 10 ul, 1.42 mM NBT(nitro blue tetrazolium) 200 ul를 첨가하여 3분간 상온에서 반응시켰다. 반응 후 0.5U/ml xanthine oxidase 100 ul를 첨가한 후 50 mM phosphate 완충액 (pH 7.4)를 이용하여 최종 부피를 3 ml로 조정하였다. 상온에서 20분간 반응시킨 후 560 nm에서 흡광도를 측정하였다.

실험결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 회화나무꽃 추출물과 분획물 중에서 에틸아세테이트분획이 약 79%의 가장 좋은 효과를 보였으며 부탄올 분획(약 78%)도 이와 비슷하였다. 메탄올추출물도 70% 이상의 효과를 보임에 따라 이들은 모두 양성대조화합물인 아스코르브산(비타민 C) 보다도 효과가 높아 피부 세포를 손상시키는 슈퍼옥사이드의 생성을 억제하는 효과가 좋음을 알 수 있었다.

실시예 6. 자유라디칼 소거 효과 검정

Blosi 방법을 사용하여 측정하였다. 화합물은 DMSO에 녹여 10 mg/ml의 농도로 맞추어 사용하였고 양성대조군은 DMSO에 녹인 아스코르브산 1 mg/ml을 사용하였다. 각 시료 0.1 ml에 DPPH radical 1.5×10^-5M ethanol 용액 4 ml를 첨가하여 실온에서 30분 반응 후 520 nm에서 흡광도를 측정하였다. DPPH 라디칼 소거능은 시료첨가군과 비첨가군의 백분율을 산출하여 표시하였다.

DPPH scavenging activity (%) = [(A_DPPH-A_s)/A_DPPH]x100

실험결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 회화나무꽃 추출물과 분획물 중에서 메탄올추출물과 부탄올분획이 100%의 매우 우수한 자유라디칼 소거효과를 보였다. 이들은 모두 양성대조화합물인 아스코르브산(비타민 C) 보다도 효과가 높아 피부세포를 손상시키는 자유라디칼을 소거시키는 효과가 좋음을 알 수 있었다.

실시예 7. 피부주름 개선 효과 검정

Elastase는 엘라스틴 (elastine)을 분해하는 효소로 과하게 분비되었을 경우 피부의 엘라스틴이 분해되어 피부의 탄력을 잃게 된다. 효소반응은 Tris-Cl (0.12M, pH8.0)에 N-succinyl-Ala-Ala-Ala- p-nitroanilide (1 mM)을 첨가한 기질용액 1300 ul, 10 mg의 샘플을 DMSO 1 ml에 녹인 용액 7.5 ul를 사용하였다. 코직산 (Kojic acid)은 200 ug/ml 용액 7.5 ul를 사용하였다. 그리고 Tris-Cl (0.12 M, pH 8.0) 용액 92.5 ul를 첨가 후 10분간 전배양한 뒤, 효소 (Elastase 0.0375U/ml)용액 100 ul를 가한 후 10분 동안 배양하고 410 nm에서 흡광도를 측정하였다.

실험결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, 회화나무꽃 추출물과 분획물 중에서 염화메틸렌분획이 약 25%의 피부주름개선효과를 나타낸대 비해 다른 분획들은 효과를 보이지 않았다.

실시예 8. 세포 독성

B16 BL6 세포주를 2.5×105 cell/ml로 6 Well에 2ml씩 분주하여 72시간 동안 37 ℃, 5 % CO2 배양기에서 배양하였다. 72시간 동안 24시간마다 배지 교체 후 1시간 안정 후 농도별로 시료를 처리하였다. 72시간 후 1 mg/ml의 MTT(Thiazoll Blue Tetrazolium Bromide) 100 μl 첨가 후 4 시간 배양하고 formazan을 DMSO 1 ml에 녹여 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

실험 결과, 도 7에 나타낸 바와 같이, 회화나무꽃 추출물의 경우, 12.5 μg/ml, 25 μg/ml, 50 μg/ml에서는 모두 세포생존율이 99%로 측정되어 이들 농도에서는 세포독성이 없었으나 100 μg/ml 이상에서는 85% - 40%로 측정되어 100 μg/ml 이상의 농도에서는 세포독성이 있음을 알 수 있었다.

실시예 9. 향기 성분 분석

회화나무꽃의 향기성분을 GC-MS(가스크로마토그래프-질량분석시스템) 기기를 이용하여 다음과 같은 조건하에서 분석하였으며 분석결과는 도 8 및 도 9에 나타내었다.

Column - HP5MS (0.25 um X 0.25 mm, 30 m)

Carrier gas - He 1 ml/min

Split ratio - 20 : 1

Oven condition - 100 ℃ 2min → 5 ℃/min 300 ℃

이하, 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다. 그러나 본 발명의 조성물을 포함하는 제형은 이제 한정되는 것은 아니다.

제제예 1. 화장료 조성물의 제조

1.1 유연 화장수 ( 스킨 )

회화나무꽃 추출물 10.00 (%)

1,3-부틸렌글리콜 1.00 (%)

디소듐이디티에이 0.05 (%)

알란토인 0.10 (%)

디포타슘글리시리제이트 0.05 (%)

시트릭애씨드 0.01 (%)

소듐시트레이트 0.02 (%)

글리세레스-26 1.00 (%)

알부틴 2.00 (%)

하이드로제네이티드캐스터오일 1.00 (%)

에탄올 30.00 (%)

보존제 미량

착색제 미량

착향제 미량

정제수 잔량

1.2 영양 크림

회화나무꽃 추출물 10.00 (%)

1,3-부틸렌 글리콜 7.0 (%)

글리세린 1.0 (%)

D-판테놀 0.1 (%)

식물 추출물 3.2 (%)

마그네슘알루미늄실리케이트 0.3 (%)

PEG-40 스테아레이트 1.2 (%)

스테아릭애씨드 2.0 (%)

폴리소르베이트 60 1.5 (%)

친유형글리세릴스테아레이트 2.0 (%)

소르비탄세스퀴올리에이트 1.5 (%)

세테아릴알코올 3.0 (%)

미네랄오일 4.0 (%)

스쿠알란 3.8 (%)

카르릴릭/카프릭트리글리세라이드 2.8 (%)

식물성 오일 1.8 (%)

디메치콘 0.4 (%)

디포타슘글리시리제이트 미량

알란토인 미량

소듐 히아루로네이트 미량

토코페릴아세테이트 적량

트리에탄올아민 적량

보존제 적량

착향제 적량

정제수 잔량

제제예 2. 약학적 조성물의 제조

2.1 산제의 제조

회화나무꽃 추출물 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

2.2 정제의 제조

회화나무꽃 추출물 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

2.3 캅셀제의 제조

회화나무꽃 추출물 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

2.4 주사제의 제조

회화나무꽃 추출물 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO₄2H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 (2 ml) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 3 : 식품용 조성물의 제조

3-1. 밀가루 식품의 제조

본 발명의 회화나무꽃 추출물 0.5～5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

3-2. 유제품의 제조

본 발명의 회화나무꽃 추출물 5 ～ 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

Claims (7)

1. 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
   
2. 제 1항에 있어서,
   상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 및 이들의 혼합용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매로 추출한 것인 조성물.
   
3. 제 1항에 있어서,
   상기 분획물은 염화메틸렌 분획물, 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물인 조성물.
   
4. 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 약학적 조성물.
   
5. 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 식품용 조성물.
   
6. 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 억제 또는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
   
7. 회화나무꽃 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 억제 또는 피부 주름 개선용 약학적 조성물.

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