KR20160021084A - 사람에서 고형 종양의 치료를 위한 씨. 노비 - Google Patents

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바이오메드 밸리 디스커버리즈, 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 특히, 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 콜로니 형성 단위(CFU)를 포함하는 씨. 노비 CFU, 바람직하게는 씨. 노비 NT CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함한다. 사람에 존재하는 고형 종양을 용적축소시키는 방법, 사람에 존재하는 고형 종양을 제거하는 방법, 사람의 종양 세포를 현미경적으로 정확히 절제하는 방법, 사람에서 하나 이상의 부위로 전이된 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는 방법, 씨. 노비 CFU, 바람직하게는 씨. 노비 NT CFU의 단위 용량, 및 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하기 위한 키트가 또한 제공된다.

Description

사람에서 고형 종양의 치료를 위한 씨. 노비{C. NOVYI FOR THE TREATMENT OF SOLID TUMORS IN HUMANS}
본 발명은 특히, 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하기 위한 방법, 사람에 존재하는 고형 종양을 용적축소시키기 위한 방법, 사람의 종양 세포를 현미경적으로 정확히 절제하는 방법 및 사람에 존재하는 고형 종양을 제거하거는 방법을 제공한다. 씨. 노비(C. novyi) CFU의 단위 용량 및 키트가 또한 제공된다.
관련 출원에 관한 상호참조
본 발명은 2013년 3월 29일자로 출원된 미국 가특허 출원 제61/806,497호에 대한 이익을 주장하며, 이의 전문은 본원에서 인용에 의해 포함된다.
사람 암을 성공적으로 표적화하고 파괴하는 전략은 정상 조직과 악성 조직 간의 차이를 인지하고 있다[참조: Dang et al., 2001]. 이러한 차이는 유전적 이상이 있는 경우 또는 보다 전체론적으로 종양에서의 생리학적 이상이 있는 경우와 같이 분자적 수준에서 확인될 수 있다.
악성 고형 종양은 통상적으로 괴사성 중심(core)과 생존성 가장자리(rim)로 이루어진다. 현재까지 치료적 중재는 종양의 잘 혈관화된 외부 쉘에 중점을 두어왔으나, 내부 저산소 중심을 표적화하는 중재는 거의 없었다[참조: Jain et al., 2001]. 종양의 내부 중심은 종양을 정상 조직과 구분짓는 독특한 특징을 갖고 있다. 상기 중심은 혈관 공급이 불량하고 이에 따라 영양분 및 산소가 결핍되어 있다. 급성 세포 괴사의 한 부위로서, 기능적 혈관 공급의 부족은 파괴된 유해 세포의 제거를 제한하고 낮은 pH를 야기한다. 이러한 환경은 대부분의 사람 세포의 성장에 적합하지 않고 특정 혐기성 세균의 성장에 적합한 환경이다. 60년보다 더 전에, 이러한 개념은 조사자들로 하여금 클로스트리듐 히스톨리티쿠스(Clostridium histolyticus)의 포자를 종양-보유 동물에게 주사하도록 이끌었다[참조: Parker et al., 1947]. 놀랍게도, 상기 세균은 오직 종양의 괴사성 중심에서만 발아하였고 종양을 액화시켰다. 1950년대 및 1960년대에, 클로스트리듐 뷰티리쿰(Clostridium butyricum)으로부터의 포자가 상당히 진행된 각종 악성 고형 종양 환자에게 주사되었다[참조: Mose, 1967; Mose, 1972]. 많은 환자들이 현저한 발아 및 종양 대부분의 파괴를 나타냈으나, 상기 환자들의 매우 불량한 건강 및 많이 진행된 병기로 인해서 이들의 임상적 관리가 어려웠으며 완전한 임상 반응의 부재는 이러한 접근법을 다시 추구하는 것을 억눌렀다.
고형 종양의 성공적 치료는 여전이 충족되지 못한 의학적 목표로 남아있다. 따라서, 고형 종양의 치료법을 찾아내야할 필요성이 있다. 본 발명은 이러한 필요성 및 다른 필요성을 충족하는 것에 관한 것이다.
본 발명의 하나의 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는 방법이다. 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 콜로니 형성 단위(CFU: colony forming unit)를 포함하는 씨. 노비 CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양을 용적축소시키는 방법이다. 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하는 씨. 노비 CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함한다.
본 발명의 추가의 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양을 용적축소시키기 위한 방법이다. 상기 방법은 사이클당 약 1×104개 포자를 포함하는 씨. 노비 NT 포자의 단위 용량을 1 내지 4회 사이클로 사람에게 종양 내로 투여함을 포함하며, 상기 씨. 노비 NT의 각 단위 용량은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁되어 있다.
본 발명의 추가 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는 방법이다. 상기 방법은 사이클당 약 1×104개 포자를 포함하는 씨. 노비 NT 포자의 단위 용량을 1 내지 4회 사이클로 사람에게 종양 내로 투여함을 포함하며, 상기 씨. 노비 NT 포자의 각 단위 용량은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁되어 있다.
본 발명의 또 다른 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양을 제거하는 방법이다. 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하는 씨. 노비 CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함하며, 이때 상기 종양은 정상 조직의 가장자리(margin)를 남기며 제거된다.
본 발명의 추가 실시형태는 씨. 노비 CFU의 단위 용량이다. 상기 단위 용량은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하며, 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는데 효과적이다.
본 발명의 추가의 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하기 위한 키트이다. 상기 키트는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하는 씨. 노비 CFU의 단위 용량, 및 상기 키트 사용에 관한 설명서를 포함한다.
본 발명의 또 다른 실시형태는 사람에서 종양 세포를 현미경적으로 정확히 절제하는 방법이다. 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하는 씨. 노비 NT 콜로니 형성 단위(CFU)의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함한다.
본 발명의 추가 실시형태는 사람에서 하나 이상의 부위로 전이된 고형 종양의 효과를 치료하거나 또는 개선하는 방법이다. 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 적어도 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하는 씨. 노비 NT 콜로니 형성 단위(CFU)의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함한다.
도 1a 및 도 1b는 방사선 치료 및 정맥내(IV) 씨. 노비 NT 주사 후 시험 피험체 "사샤(Sasha)"(도 1a) 및 "샘슨(Sampson)"(도 1b)의 우측 원위 요골/척골상의 개 골육종의 다양한 영상을 도시한다.
도 2a는 동계 신경아교종 세포주(F98)의 동소 이식 후 F433 피셔(Fisher) 래트의 생존을 보여주는 케플란-마이어(Kaplan-Meier) 곡선을 도시한다. 바깥쪽 선 - 종양 이식 후 12일 내지 15일째에 종양에 주사된 씨. 노비-NT 포자. 안쪽 선 - 대조군. 도 2b는 F98 신경아교종 세포주의 동소 이식 후 3마리의 대표적 F433 피셔 래트에서 생물발광(Xenogen imaging system)을 도시한다. 영상은 0일(처리 전 - 씨. 노비-NT 포자 주사 당일), 씨. 노비-NT 포자의 IT 주사 후 1일째 및 씨. 노비-NT 포자의 IT 주사 후 2일째에 획득되었다. 도 2c는 0일(처리 전), 씨. 노비-NT 포자의 IT 주사 후 1일째 및 씨. 노비-NT 포자의 IT 주사 후 2일째의 루시페라제 활성(백만 단위의 계수)을 도시한다.
도 3a 및 도 3b, 및 도 4a 및 도 4b는 현미경적 뇌 종양 병변 내의 발아된 씨. 노비-NT 세균을 도시한다. 상기 도에서, 그램 염색은 증식성 씨. 노비-NT 세균(흰색 또는 검은색 화살촉)이 종양(T) 및 성상 미세침윤(S)으로 국소화되었지만 정상 뇌 조직(Br)에서는 그렇지 않음을 나타냈다. 도 3a는 종양과 정상 뇌의 계면을 보여주는 100x 배율이다. 도 3b는 종양과 정상 뇌의 계면을 보여주는 400x 배율이다. 도 4a는 정상 뇌, 종양 및 신생물 조직의 성상 미세침윤을 보여주는 100x 배율이다. 도 4b는 성상 미세침윤 병변에서 씨. 노비-NT 발아를 보여주는 400x 배율이다.
도 5는 서열결정(sequencing)된 샘플에 대한 요약 데이터 표이다.
도 6은 개 육종에서 카피수 변경의 표이다.
도 7a 내지 도 7f는 씨. 노비-NT 요법에 대한 부분 반응을 보여주는 개 11-R01로부터의 사진 및 CT 영상이다. 영상은 처리 전부터 씨. 노비-NT 포자의 1차 IT 투약 후 70일째까지에 걸쳐 촬영된 것이다. 도 7a는 말초 신경초 종양의 처리 전 영상을 도시한다. 도 7b는 그 규모가 종양으로 한정된, 연구 3일째의 농양 형성을 도시한다. 도 7c는 자발적 농양 파열 및 괴사성 및 화농성 물질의 분비 후 의학적 괴사조직제거를 도시한 것이며, 이는 2차 유합에 의해 치유될 수 있었다. 도 7d는 상처가 연구 70일째까지 완전하게 치유되었으며 종양 최장 직경의 77.6% 감소가 주지되었음을 도시한다. 도 7e는 귓바퀴와 두개골의 교차점에 있는 종양(원으로 표시)의 규모를 보여주는, 1차 처리 4일 전에 촬영된 처리 전 CT 영상이다. 도 7f는 종양의 거의 완벽한 용적축소를 보여주는 연구 10일째의 처리 후 CT 영상이다.
도 8a 내지 도 8d는 씨. 노비-NT 요법에 대한 완전 반응을 보여주는 개 04-R03으로부터의 사진 및 CT 영상이다. 영상은 처리 전부터 씨. 노비-NT 포자의 1차 IT 투약 후 60일째까지에 걸쳐 촬영된 것이다. 도 8a는 연조직 육종의 처리 전 영상을 도시한다. 도 8b는 씨. 노비-NT 포자의 3차 투약 후 1일째, 연구 15일째에 형성된 종양 국소화된 농양을 도시한다. 도 8c는 종양 용적축소가 연구 27일째까지 완벽하였으며 건강한 육아 조직이 형성되었음을 도시한다. 도 8d는 상처가 연구 60일째까지 완벽하게 치유되었으며 잔류 종양이 주지되지 않았음(완전 반응)을 도시한다. 도 8e는 전완상의 종양(원으로 표시)의 규모를 보여주는, 1차 처리 5일 전에 촬영된 처리 전 CT 영상이다. 도 8f는 종양 덩어리의 완벽한 소실을 보여주는 연구 62일째의 처리 후 CT 영상이다.
도 9는 씨. 노비 NT 포자의 초기 IT 투약부터 임상 과정의 완료까지의 개 11 -R01의 종양의 크기를 도시한다.
도 10a는 씨. 노비 NT 포자의 IT 투약 후 시험 피험체 "드레이크(Drake)"(04-R01)에서 개 연조직 육종의 사진(상부 패널) 및 CT 영상(하부 패널)을 도시한다. CT 영상 중 원으로 표시된 영역은 종양 위치를 나타낸다. 도 10b는 씨. 노비 NT의 초기 IT 투약부터 3회의 후속적 투약을 통한 임상 과정의 완료까지 드레이크의 종양의 크기를 도시한다.
도 11은 씨. 노비 NT 포자의 초기 IT 투약부터 2회의 후속적 투약을 통한 임상 과정의 완료까지 개 04-R03의 종양의 크기를 도시한다.
도 12a는 IT 씨. 노비 NT 포자가 4회 사이클로 투여된 임상 과정에 걸쳐서 8마리의 시험 피험체(11-R02, 04-R02, 26-R01, 16-R02, 04-R05, 16-R03, 11-R04 및 04-R06)의 종양 크기를 도시한다. 도 12b는 필수적 절단 또는 데이터 컷오프(cutoff)로 인해 완전한 임상 과정으로부터의 데이터가 입수될 수 없었던 3마리 시험 피험체(04-R08, 01-R02 및 10-R02)의 종양 크기를 도시한다.
도 13은 실시예 6 및 7에 개시된 IT 연구에서 처리된 종양에 대한 주사 계획을 도시한다.
도 14a 내지 14d는 사람 환자로부터의 CT 및 MRI 영상을 도시한다. 도 14a는 척수내 및 척수외에 공기가 모여있다는 증거를 입증하는, 조영제가 이용된 3일째의 처리 후 CT를 도시한다. 도 14b는 연조직 및 가능하게는 인접 뼈를 수반하는 조영제 증강 종괴를 보여주는 우측 상부 상완골의 처리 전 MRI(가돌리늄 조영제를 이용한 T1)를 도시한다. 도 14c는 기준선과 비교해 종양 종괴에서의 감소된 조영제 증강을 입증하는, 4일째의 처리 후 MRI를 도시한다. 도 14d는 진행중인 괴사와 일치하는 상완골 비-증강 종괴를 보여주는 29일째의 처리 후 MRI를 도시한다. 종양은 화살촉으로 강조되어 있다.
도 15a 내지 도 15d는 씨. 노비-NT 포자로 처리된 사람 환자에서의 광범위한 종양 괴사를 도시한다. 도 15a 및 15b는 생존성 종양(평활근육종) 세포를 각각 40x 및 100x 배율로 보여주는, 처리 전 종양 생검을 도시한다. 도 15c 및 15d는 종양 세포의 광범위한 괴사를 각각 40x 및 100x 배율로 보여주는, 씨. 노비-NT 포자를 IT 주사한지 4일 후의 처리 후 종양 생검을 도시한다.
도 16a 내지 도 16d는 3갈래 바늘(three-tined needle)을 사용하는 IT 주사 과정의 다양한 양상을 도시한다. 도 16a는 3갈래 바늘의 사진을 도시한다. 도 16b 및 16c는 상기 바늘 삽입 전과 후의 표적 주사 부위의 컴퓨터 단층촬영(CT) 영상을 도시한다. 도 16d는 바늘의 3갈래의 확대된 영상을 도시한다. 도 16e는 상기 바늘의 삽입점을 결정하기 위해 측정치가 오버레이된 CT 영상을 도시한다.
본 발명의 하나의 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는 방법이다. 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 콜로니 형성 단위(CFU)를 포함하는 씨. 노비 CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "치료하다" "치료하는" "치료" 및 이들의 문법적 변형어는 개개의 피험체(예: 사람 환자)를 이 피험체, 예를 들면, 환자에서 생리학적 반응 또는 결과를 수득하는 것이 요망되는 프로토콜, 용법, 과정 또는 치료제를 받도록 함을 의미한다. 특히, 본 발명의 방법 및 조성물은 질환 증상의 발달을 늦추거나 질환 또는 병태의 발병을 지연시키거나, 질환 발달의 진행을 중단시키는데 사용될 수 있다. 그러나, 모든 치료된 피험체가 특정 치료 프로토콜, 용법, 과정 또는 치료제에 반응할 수 없기 때문에, 치료는 목적하는 생리학적 반응 또는 결과가 각각의 모든 피험체 또는 피험체, 예를 들면, 환자, 집단에서 달성되는 것을 요구하지 않는다. 따라서, 소정의 피험체 또는 피험체, 예를 들면, 환자, 집단은 치료에 반응하지 못하거나 치료에 불충분하게 반응할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "개선시키다", "개선시키는" 및 이들의 문법적 변형어는 피험체에서 질환의 증상의 중증도를 감소시키는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "고형 종양"은 세포 증식의 비정상적 종괴를 의미한다. 고형 종양은 체내의 어느 곳에서라도 발생할 수 있다. 고형 종양은 암성(악성) 또는 비암성(양성)일 수 있다. 본 발명에 따르는 고형 종양의 예는 부신피질 암종, 항문 종양/암, 방광 종양/암, 골 종양/암(예를 들면, 골육종), 뇌 종양, 유방 종양/암, 카르시노이드 종양, 암종, 자궁경부 종양/암, 결장 종양/암, 자궁내막 종양/암, 식도 종양/암, 간외 담도 종양/암, 유잉 계열 종양(Ewing family of tumors), 두개외 생식세포 종양, 안구 종양/암, 담낭 종양/암, 위 종양/암, 생식세포 종양, 임신성 융모성 종양, 두경부 종양/암, 하인두 종양/암, 섬세포 암종, 신장 종양/암, 후두 종양/암, 평활근육종, 백혈병, 입술 및 구강 종양/암, 간 종양/암(예를 들면, 간세포 암종), 폐 종양/암, 림프종, 악성 중피종, 메르켈 세포 암종, 균상식육종, 골수이형성증후군, 골수증식 장애, 비인두 종양/암, 신경모세포종, 경구 종양/암, 구인두 종양/암, 골육종, 난소 상피 종양/암, 난소 생식세포 종양, 췌장 종양/암, 부비강 및 비강 종양/암, 부갑상선 종양/암, 음경 종양/암, 뇌하수체 종양/암, 형질세포 신생물, 전립선 종양/암, 횡문근육종, 직장 종양/암, 신장세포 종양/암, 신우 및 요관의 이행세포 종양/암, 타액선 종양/암, 세자리 증후군, 피부 종양(예를 들면, 피부 t-세포 림프종, 카포시 육종, 비만세포 종양 및 흑색종), 소장 종양/암, 연조직 육종, 위 종양/암, 고환 종양/암, 흉선종, 갑상선 종양/암, 요도 종양/암, 자궁 종양/암, 질 종양/암, 외음부 종양/암 및 윌름스 종양을 포함한다. 바람직하게는, 고형 종양은 연조직 육종, 간세포 암종, 유방암, 췌장암 및 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 보다 바람직하게는, 고형 종양은 후복막 평활근육종과 같은 평활근육종이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "단위 용량"은 피험체, 예를 들면, 사람에게 단일 용량으로 투여되는 의약의 양을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "씨. 노비"는 클로스트리듐 노비(Clostridium novyi) 종에 속하는 세균 또는 이로부터 유래된 세균을 의미한다. 예를 들면, ATCC(#19402)로부터 상업적으로 입수할 수 있는 클로스트리듐 노비는 그램-양성 혐기성 세균이다. 클로스트리듐 노비로부터 유래된 세균은, 예를 들면, 천연 클로스트리듐 노비를 특정한 특징을 지니는 클론에 대해 스크리닝함으로써 생성시킬 수 있다. 바람직한 씨. 노비 세균은 포유동물, 예를 들면, 사람과 같은 피험체에 대해 비독성이거나 최소한으로 독성인 세균이다. 예를 들면, 바람직한 씨. 노비, 씨. 노비 NT는, 예를 들면, 유전공학 방법에 의해 또는 선별 과정을 통해 이의 단일 전신 독소(α-독소) 유전자를 상실한 천연 클로스트리듐 노비로부터 유래된 세균이다. 씨. 노비 NT는, 예를 들면, 문헌[참조: Dang et ai, 2001] 및 미국 특허 제7,344,710호에 개시된 과정을 사용하여 생성시킬 수 있다. 따라서, 본 발명은 씨. 노비 뿐만 아니라 씨. 노비 NT 세균을 포함한다.
약동학적 연구는, 씨. 노비 NT 포자가 정맥내 투여되는 경우 순환으로부터 신속하게 제거되고(99% 초과의 포자가 1시간 이내에 제거된다) 세망내피계 내에 격리됨을 나타낸다. 장기간 분포 연구는 이들 포자가 결국 모든 조직으로부터 1년 이내에 제거됨을 보여준다. 포자 형태(휴면기)로 전달된 씨. 노비 NT는 종양의 저산소 영역에 노출되는 경우 발아한다(포자에서 영양형 상태(vegetative state)로의 전이). 따라서, 씨. 노비 NT의 독성은 건강한 환자에서보다 종양-보유 환자에서 더 큰 것으로 예상된다.
건강한 마우스 및 토끼는 씨. 노비 NT가 정맥내 투여되는 경우 치료 용량과 상관없이 독성의 명백한 임상 징후(이환율, 사망율 또는 임상 양상(clinical appearance))를 나타내지 않았다. 그러나, 부검시 조직 검사는 치료-용량 의존적인 것으로 보이는 육안적 및 현미경적 염증 변화 둘 다를 보여주었다. 주로 간, 비장 및 부신에서의 이러한 검사결과는 5×108개 포자/kg 이상의 용량에서 주지되었다. 보다 낮은 용량을 투여받은 건강한 동물은 부검시 육안적 또는 현미경적 이상을 나타내지 않았다. 높은 용량을 투여받은 동물에서, 염증의 해소는 이미 28일째에 명백하였으며 모든 염증 징후는 투여 후 1년까지 모든 동물에서 없었다. 씨. 노비 NT 포자가 비-종양 저산소 조직에서 발아할 수 있는지를 결정하기 위해, 죽상동맥경화판 및 실험적 심근경색증이 있는 노령 마우스를 씨. 노비 NT로 처리하는 연구를 실시하였다. 이러한 혈관 병변 내에 포자 국소화 또는 발아의 증거는 없었다. 상기 연구의 마지막에, 이들 마우스에서 (기존의 심혈관 병변 이외의) 임상적 또는 병리적 이상은 주지되지 않았다. 이러한 연구들은 씨. 노비 NT가 건강한 동물에서 명백한 임상적 및 최소한의 병리적 독성을 유발하지 않았음을 입증하였다.
포자를 면역적격 종양-보유 마우스에게 정맥내(IV) 주사하는 것은 종양의 용해 및 강한 염증 반응을 초래한다. 마우스에서, 3가지 결과중 하나가 통상 관찰된다: 마우스의 한 서브세트(25 내지 35%)는 치유되고(1년 동안 관찰한 후 종양 재발이 없음) 본래의 종양에 대해 장기간 면역을 발현한다[참조: Agrawal et al., 2004]. 다른 서브세트(65 내지 75%)는 완전한 임상 반응을 경험하지만, 재발과 함께 본래 종양이 재증식된다. 마지막으로, 나머지 서브세트(실험에 따르면 0 내지 20%)는 종양 파괴를 겪게되나, 요법을 시작한지 2 내지 5일 후 심각한 임상적 독성을 발현한다. 수분보충과 같은 비교적 간단한 조치는 흔히 상기 징후들을 완전히 제거하면서 이러한 독성을 감소시키는데 적절하다. 보다 큰 동물(토끼)에서의 연구는 씨. 노비 NT 요법의 사용시 동일한 치유율 및 재발율을 보여주지만, 마우스의 서브세트에서 관찰된 생명에 위협적인 임상적 독성은 보여주지 않는다. 처리 관련 사망은 종양-보유 마우스에서는 관찰되었지만, 씨. 노비 NT 포자로 처리된 토끼에서는 관찰되지 않았다[참조: Diaz et al., 2005]. 이러한 연구들에서, 독성은 포자 용량과 종양 크기 둘 다와 관련되었다. 빈사 마우스에서, 특정한 임상적 실험 또는 병리적 말단기관 손상은 주지되지 않았으며, 유일한 유의적인 소견은 간비종대였다. 치유된 마우스는 간 및 비장에서 잔류 염증 변화가 드물었지만, 그 외에는 미처리된 동물과 다를 바 없었다. 이러한 연구들은 종양-보유 동물에서의 독성이 큰 종양을 갖는 마우스에서는 현저할 수 있지만(사망) 보다 큰 동물(토끼)에서는 최소한이었고 마우스에서 수분보충 또는 항생제로 관리될 수 있었음을 보여준다.
종양 보유 개에서 단일 제제로서 정맥내 주사된 씨. 노비 NT 포자(1×109개 포자/m2)를 이용한 이전의 연구는 생명에 위협적인 독성을 생성하지 않았다. 상기 개는 처리 후 수일 동안 수액요법(2 내지 4 ml/kg/시간)으로 유지되었으며, 이는 독성을 감소시킬 수 있었다. 불행하게도, 상기 치료에 대한 측정가능한 종양 반응은 없었다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "콜로니 형성 단위"("CFU")는 세포의 응집물(또는 콜로니)을 발생시킬 수 있는 세균의 생존성 형태를 의미한다. 이러한 생존성 형태는 영양 형태(vegetative form) 및 포자 형태를 포함하며, 본 발명은 개별적으로 및 조합하여 사용되는 상기 형태 둘 다를 포함한다. 콜로니 형성 단위 검정은 당업계에 공지되어 있다[참조: 예를 들면, Breed et al., 1916]. 씨. 노비의 증식을 지지하기 위한 배지는 시판되고 있으며, 예를 들면, Reinforced Clostridial Medium(RCM)(제조원: Difco(BD, 뉴저지주 프랭클린 레이크스))가 있다. 상기 제시한 바와 같이, 단위 용량은 약 1×103 내지 1×107, 예를 들면, 약 1×103 내지 1×104, 약 1×104 내지 1×105, 약 1×105 내지 1×106 또는 약 1×106 내지 1×107 씨. 노비 CFU를 포함한다.
상기 실시형태의 하나의 양상에서, 단위 용량은 약 1×106 내지 1×107 씨. 노비 CFU를 포함한다. 상기 실시형태의 또 다른 양상에서, 단위 용량은 약 1×104 씨. 노비 CFU를 포함한다. 놀랍게도, 사람 치료를 위한 본원에 개시된 용량은 종양학적 징후에 대해 치료 효과가 있는 출발 용량으로서 전형적인, 비-설치류 최고 비-중증 독성 용량(HNSTD)의 1/6을 사용하여 본 발명자들의 비-설치류 모델로부터 단순 추정하여 예상할 수 있는 것보다 예상외로 낮다[참조: 예를 들면, Senderowicz, A.M., "Information needed to conduct first-in human oncology trials in the United States: a view from a former FDA medical reviewer." Clin. Canc. Res., 2010, 16:1719-25].
바람직하게는, 본 발명에서 씨. 노비는 씨. 노비 NT이다.
상기 실시형태의 또 다른 양상에서, 단위 용량은 약 1×106 내지 1×107 씨. 노비 NT 포자를 포함한다. 상기 실시형태의 추가 양상에서, 단위 용량은 약 1×104 씨. 노비 NT 포자를 포함한다.
상기 실시형태의 추가적 양상에서, 투여 단계는 단위 용량을 단일 위치에서 종양 내로 주사함을 포함한다. 상기 실시형태의 또 다른 양상에서, 투여 단계는 단위 용량을 다수의 독특한 위치, 예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10곳 또는 10곳 초과의 독특한 위치에서 종양 내로 주사함을 포함한다. 바람직하게는, 투여 단계는 단위 용량을 1 내지 5곳의 독특한 위치에서 종양 내로, 예를 들면, 도 13에 도시된 배치형태(configuration)로 주사함을 포함한다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 투여 단계는 단위 용량을 5곳 이상의 독특한 위치에서 종양 내로 주사함을 포함한다. 다수부위 주사는 본원에 개시된 바와 같이, 바람직하게는 Quadra-Fuse®(Rex-Medical, 펜실베이니아주 콘쇼호켄)와 같은 다중갈래 바늘(multi-tined needle)을 사용하여 수행할 수 있다. 본 발명에서, 상기 주지된 바와 같은 투여 단계는 종양 내로의 직접 주사를 포함하나, 씨. 노비 또는 씨. 노비 NT와 같은 활성제를 종양으로 투여하는 다른 방법도 또한 실시된다. 이러한 방법은 이식, 경피 전달 및 경점막 전달을 포함한다.
상기 실시형태의 또 다른 양상에서, 상기 방법은 복수의 치료 사이클, 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30회 또는 30회 초과의 치료 사이클로 사람에게 투여함을 추가로 포함하고, 이때 각각의 치료 사이클은 씨. 노비 NT 포자의 하나의 단위 용량과 같은 씨. 노비 CFU의 하나의 단위 용량을 고형 종양 내로 주사함을 포함한다. 바람직하게는, 1 내지 10회의 치료 사이클로 투여된다. 보다 바람직하게는, 2 내지 4회의 치료 사이클로 투여된다. 각 치료 사이클 간의 간격은 가변적일 수 있다. 하나의 바람직한 실시형태에서, 각 치료 사이클 간의 간격은 약 5 내지 100일이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 각 치료 사이클 간의 간격은 약 7일이다.
상기 실시형태의 추가적 양상에서, 상기 방법은 씨. 노비 NT 포자와 같은 씨. 노비 CFU의 각 투여 전, 투여 동안 및/또는 투여 후 정맥내(IV) 수액을 사람에게 투여함을 추가로 포함한다. 환자를 수분보충하기 위한 IV 수액은 본원에서 개시되어 있으며 당업계에 널리 공지되어 있다. 이러한 수액은 혈액과 등장성인 수액, 예를 들면, 0.9% 염화나트륨 용액 또는 락테이트화 링거액일 수 있다.
상기 실시형태의 다른 양상에서, 상기 방법은 항생제의 제1 과정(course)을 씨. 노비 NT 포자와 같은 씨. 노비 CFU에 의해 유발되는 유해 부작용을 치료하거나 완화시키는데 효과적인 용량으로 일정 기간 동안 사람에게 제공함을 추가로 포함한다. 본 발명에서, 유해 부작용(또는 유해사례, 이는 유해 부작용과 교환하여 사용된다)는 감염(예를 들면, 개방된 상처에 의해 유발되는 감염), 구토, 혈변배설 및 열을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
하나의 바람직한 실시형태에서, 항생제는 씨. 노비 투여 후 2주 동안 투여된다. 이러한 항생제의 비제한적 예는 아목시실린, 클라불라네이트, 메트로니다졸 및 이들의 조합을 포함한다.
다른 바람직한 실시형태에서, 상기 방법은 항생제의 제2 과정을 씨. 노비에 의해 유발되는 유해 부작용을 치료하거나 완화시키는데 효과적인 용량으로 일정 기간 동안 사람에게 제공함을 추가로 포함한다. 항생제의 제2 과정은 항생제의 제1 과정의 완료 후 시작할 수 있고 1 내지 6개월, 예를 들면, 3개월 동안 수행한다. 바람직하게는, 제2 과정에서 사용되는 항생제는 독시사이클린이지만, 의료 전문가에 의해 승인된 어떠한 항생제라도 사용될 수 있다.
상기 실시형태의 추가 양상에서, 상기 방법은, 예를 들면, 사람에게 화학요법, 방사선 요법, 면역요법 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 요법을 실시함으로써 공동치료 프로토콜을 이용함을 추가로 포함한다.
공동치료 요법에서 사용되는 씨. 노비, 예를 들면, 씨. 노비 NT 포자 및 항암제(들)은 의사가 가장 적절한 것으로 간주한다면 동시에 또는 상이한 시간에 사람에게 투여될 수 있다. 씨. 노비, 예를 들면, 씨. 노비 NT 포자 및 기타 항암제(들)이 상이한 시간에, 예를 들면, 순차적 투여에 의해 투여되는 경우, 씨. 노비, 예를 들면, 씨. 노비 NT 포자는 다른 항암제 전에 사람에게 투여될 수 있다. 대안으로, 다른 항암제(들)은 씨. 노비, 예를 들면, 씨. 노비 NT 포자 전에 사람에게 투여될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "화학요법"은 본 발명의 치료법인 씨. 노비, 예를 들면, 씨. 노비 NT와 양립할 수 있고 암 세포 또는 암 세포와 연관되거나 이를 지지하는 세포에 대항하여 세포독성제 및/또는 세포증식억제제를 사용하는 임의의 치료학적 용법을 의미한다. 바람직한 실시형태에서, 화학요법은 사람에게 항대사물질, 미세관 저해제, DNA 손상제, 항생제, 항혈관신생제, 혈관 차단제(vascular disrupting agent), 분자표적 치료제(molecularly targeted agent) 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 제제(agent)를 투여함을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "항대사물질"은 정상 대사작용의 부분인 세포의 화학물질 사용을 감소시키거나 저해하는 물질이다. 본 발명에 따르는 항대사물질제 또는 이의 유사체의 비제한적 예는 항엽산제, 푸린 저해제, 피리미딘 저해제 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "항엽산제"는 세포에 의한 엽산(비타민 B9)의 사용을 변경하거나 감소시키거나 저해하는 물질이다. 항엽산제의 비제한적 예는 메토트렉세이트(DuraMed Pharmaceuticals, Inc.), 페메트렉세드(Eli Lilly), 프랄락트렉세이트(Spectrum Pharmaceuticals), 아미노프테린(Sigma Aldrich), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "푸린"은 융합된 6원 및 5원 질소-함유 환을 함유하는 화합물이다. 세포 대사작용에 중요한 푸린의 비제한적 예는 아데닌, 구아닌, 하이포크산틴 및 크산틴을 포함한다. "푸린 저해제"는 푸린의 생산 또는 세포에 의한 푸린의 사용을 변경하거나 감소시키거나 억제하는 물질이다. 푸린 저해제의 비제한적 예는 메토트렉세이트(DuraMed Pharmaceuticals, Inc.), 페메트렉세드(Eli Lilly), 하이드록시우레아(Bristol-Myers Squibb), 2-머캅토푸린(Sigma-Aldrich), 6-머캅토푸린(Sigma-Aldrich), 플루다라빈(Ben Venue Laboratories), 클로파라빈(Genzyme Corp.), 넬라라빈(GlaxoSmithKline), 프랄라트렉세이트(Spectrum Pharmaceuticals), 6-티오구아닌(Gate Pharmaceuticals), 포로데신(BioCryst Pharmaceuticals), 펜토스타틴(Bedford Laboratories), 사파시타빈(Cyclacel Pharmaceuticals, Inc.), 아미노프테린(Sigma Aldrich), 아자티오프린(GlaxoSmithKline), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "피리미딘"은 6원 질소-함유 환을 함유하는 화합물이다. 세포 대사작용에 중요한 피리미딘의 비제한적 예는 우라실, 티민, 사이토신 및 오르트산을 포함한다. "피리미딘 저해제"는 피리미딘의 생산 또는 세포에 의한 피리미딘의 사용을 변경하거나 감소시키거나 억제하는 물질이다. 피리미딘 저해제의 비제한적 예는 5-플루오로우라실(Tocris Bioscience), 테가푸르(LGM Pharma), 카페시타빈(젤로다)(Roche), 클라드리빈(LGM Pharma), 젬시타빈(Eli Lilly), 시타라빈(Bedford Laboratories), 데시타빈(Eisai Inc.), 플록스우리딘(Bedford Laboratories), 5-아자시티딘(Pharmion Pharmaceuticals), 독시플루리딘(Cayman Chemicals), 티아라빈(Access Pharmaceuticals), 트록사시타빈(SGX Pharmaceuticals), 랄티트렉세드(AstraZeneca), 카르모푸르(Santa Cruz Biotechnology, Inc.), 6-아자우라실(MP Biomedicals, LLC), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 바람직한 양상에서, 항대사물질제는 5-플루오로우라실(Tocris Bioscience), 테가푸르(LGM Pharma), 카페시타빈(젤로다)(Roche), 클라드리빈(LGM Pharma), 메토트렉세이트(DuraMed Pharmaceuticals, Inc.), 페메트렉세드(Eli Lilly), 하이드록시우레아(Bristol-Myers Squibb), 2-머캅토푸린(Sigma-Aldrich), 6-머캅토푸린(Sigma-Aldrich), 플루다라빈(Ben Venue Laboratories), 젬시타빈(Eli Lilly), 클로파라빈(Genzyme Corp.), 시타라빈(Bedford Laboratories), 데시타빈(Eisai Inc.), 플록수리딘(Bedford Laboratories), 넬라라빈(GlaxoSmithKline), 프랄라트렉세이트(Spectrum Pharmaceuticals), 6-티오구아닌(Gate Pharmaceuticals), 5-아자시티딘(Pharmion Pharmaceuticals), 독시플루리딘(Cayman Chemicals), 포로데신(BioCryst Pharmaceuticals), 펜토스타틴(Bedford Laboratories), 사파시타빈(Cyclacel Pharmaceuticals, Inc.), 티아라빈(Access Pharmaceuticals), 트록사시타빈(SGX Pharmaceuticals), 랄티트렉세드(AstraZeneca), 아미노프테린(Sigma Aldrich), 카르모푸르(Santa Cruz Biotechnology, Inc.), 아자티오프린(GlaxoSmithKline), 6-아자우라실(MP Biomedicals, LLC), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "미세관 저해제"는 개별적 미세관 단위의 중합 또는 탈중합과 같은 미세관의 기능을 방해하는 물질이다. 본 발명의 하나의 양상에서, 미세관 저해제는 미세관-탈안정화제, 미세관-안정화제 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 본 발명의 미세관 저해제는 또한 탁산, 빈카 알칼로이드, 에포틸론 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 본 발명에 따르는 미세관 저해제의 비제한적 예는 BT-062(Biotest), HMN-214(D. Western Therapeutics), 에리불린 메실레이트(Eisai), 빈데신(Eli Lilly), EC-1069(Endocyte), EC-1456(Endocyte), EC-531(Endocyte), 빈타폴라이드(Endocyte), 2-메톡시에스트라디올(EntreMed), GTx-230(GTx), 트라투주맙 엠탄신(Hoffmann-La Roche), 크롤리불린(Immune Pharmaceuticals), D1302A-마이탄시노이드 접합체(ImmunoGen), IMGN-529(ImmunoGen), 로르보투주맙 메르탄신(ImmunoGen), SAR-3419(ImmunoGen), SAR-566658(ImmunoGen), IMP-03138(Impact Therapeutics), 토포테칸/빈크리스틴 배합물(LipoCure), BPH-8(Molecular Discovery Systems), 포스브레타불린 트로메타민(OXiGENE), 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨(Pfizer), 빈크리스틴(Pierre Fabre), 빈플루닌(Pierre Fabre), 비노렐빈(Pierre Fabre), RX-21101(Rexahn), 카바지탁셀(Sanofi), STA-9584(Synta Pharmaceuticals), 빈블라스틴, 에포틸론 A, 파투필론(Novartis), 익사베필론(Bristol-Myers Squibb), 에포틸론 D(Kosan Biosciences), 파클리탁셀(Bristol-Myers Squibb), 도세탁셀(Sanofi-Aventis), HAI 아브락산, DJ-927(Daiichi Sankyo), 디스코데르몰라이드(CAS 번호 127943-53-7), 엘레우테로빈(CAS 번호: 174545-76-7), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 DNA 손상제는 알킬화제, 백금계 제제, 인터칼레이팅제 (intercalating agent) 및 DNA 복제 저해제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "알킬화제"는 하나 이상의 알킬 그룹(CnHm, 여기서, n 및 m은 정수이다)을 핵산에 첨가하는 물질이다. 본 발명에서, 알킬화제는 질소 머스타드, 니트로소우레아, 알킬 설포네이트, 트리아진, 에틸렌이민 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 질소 머스타드의 비제한적 예는 메클로에타민(Lundbeck), 클로람부실(GlaxoSmithKline), 사이클로포스파미드(Mead Johnson Co.), 벤다무스틴(Astellas), 이포스파미드(Baxter International), 멜팔란(Ligand), 멜팔란 플루펜아미드(Oncopeptides) 및 약제학적으로 허용되는 이들의 염을 포함한다. 니트로소우레아의 비제한적 예는 스트렙토조신(Teva), 카르무스틴(Eisai), 로무스틴(Sanofi) 및 약제학적으로 허용되는 이들의 염을 포함한다. 알킬 설포네이트의 비제한적 예는 부설판(Jazz Pharmaceuticals) 및 약제학적으로 허용되는 이의 염을 포함한다. 트리아진의 비제한적 에는 다카르바진(Bayer), 테모졸로미드(Cancer Research Technology) 및 약제학적으로 허용되는 이들의 염을 포함한다. 에틸렌이민의 비제한적 예는 티오테파(Bedford Laboratories), 알트레타민(MGI Pharma) 및 약제학적으로 허용되는 이들의 염을 포함한다. 다른 알킬화제는 프로린닥(ProLindac)(Access), Ac-225 BC-8(Actinium Pharmaceuticals), ALF-2111(Alfact Innovation), 트로포스파미드(Baxter International), MDX-1203(Bristol-Myers Squibb), 티오우레이도부티로니트릴(CellCeutix), 미토부로니톨(Chinoin), 미토락톨(Chinoin), 니무스틴(Daiichi Sankyo), 글루포스파미드(Eleison Pharmaceuticals), HuMax-TAC 및 PBD ADC 배합물(Genmab), BP-C1(Meabco), 트레오설판(Medac), 니푸르티목스(Metronomx), 임프로설판 토실레이트(Mitsubishi tanabe Pharma), 라니무스틴(Mitsubishi tanabe Pharma), ND-01(NanoCarrier), HH-1(Nordic Nanovector), 22P1G 세포 및 이포스파미드 배합물(Nuvilex), 에스트라무스틴 포스페이트(Pfizer), 프레드니무스틴(Pfizer), 루르비넥테딘(PharmaMar), 트라벡테딘(PharmaMar), 알트레아타민(Sanofi), SGN-CD33A(Seattle Genetics), 포테무스틴(Servier), 네다플라틴(Shionogi), 헵타플라틴(Sk Holdings), 아파지쿠온(Spectrum Pharmaceuticals), SG-2000(Spirogen), TLK-58747(Telik), 라로무스틴(Vion Pharmaceuticals), 프로카바진(Alkem Laboratories Ltd.) 및 약제학적으로 허용되는 이들의 염을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "백금계 제제"는 금속 백금을 함유하는 항암 물질 및 이러한 물질의 유사체이다. 백금은 임의의 산화 상태로 존재할 수 있다. 본 발명의 백금계 제제는 1,2-디아미노사이클로헥산(DACH) 유도체, 페난트로이미다졸 Pt(II) 착물, 백금 IV 화합물, 2핵 및 3핵 백금 화합물, 데메틸칸타리딘-삽입된 백금 착물, 백금-컨쥬게이트된 화합물, 시스플라틴 나노입자 및 중합체 미셀(polymer micelle), 입체 장애된 백금 착물, 옥살리플라틴(Debiopharm), 사트라플라틴(Johnson Matthey), BBR3464(Novuspharma S.p.A.), ZD0473(Astra Zeneca), 시스플라틴(Nippon Kayaku), JM-11(Johnson Matthey), PAD(시스-디클로로비스사이클로펜틸아민 백금(II)), MBA((트랜스-1,2-디아미노사이클로헥산)비스브로모아세테이토 백금(II)), PHM((1,2-사이클로헥산디아민)말로네이토 백금(II)), SHP((1,2-사이클로헥산디아민)설페이토 백금(II)), 네오-PHM((트랜스-R,R-1,2-사이클로헥산디아민)말로네이토 백금(II)), 네오-SHP((트랜스-R,R-1,2-사이클로헥산디아민)설페이토 백금(II)), JM-82(Johnson Matthey), PYP((1,2-사이클로헥산디아민)비스피루베이토 백금(II)), PHIC((1,2-사이클로헥산디아민)이소시트레이토 백금(II)), TRK-710((트랜스-R,R-1,2-사이클로헥산디아민)[3-아세틸-5-메틸-2,4(3H,5H)-푸란디오네이토] 백금(II)), BOP((1,2-사이클로옥탄디아민)비스브로모아세테이토 백금(II)), JM-40(Johnson Matthey), 엔로플라틴(UnionPharma), 제니플라틴(LGM Pharma), Cl-973(Parke-Davis), 로바플라틴(Zentaris AG/Hainan Tianwang International Pharmaceutical), 사이클로플라탐(LGM Pharma), WA2114R(미보플라틴/로바플라틴)(Chembest Research Laboratories, Ltd.), 헵타플라틴(SKI2053R)(SK Chemicals), TNO-6(스피로플라틴)(Haihang Industry Co., Ltd.), 오람플라틴(테트라플라틴)(LGM Pharma), JM-9(이프로플라틴)(Johnson Matthey), BBR3610(Novuspharma S.p.A.), BBR3005(Novuspharma S.p.A.), BBR3571(Novuspharma S.p.A.), BBR3537(Novuspharma S.p.A.), 아로플라틴(L-NDDP)(BOC Sciences), Pt-ACRAMTU({[Pt(en) Cl(ACRAMTU-S)](NO3)2(en = 에탄-1,2-디아민, ACRAMTU = 1-[2-(아크리딘-9-일아미노)에틸]-1,3-디메틸티오우레아)}), 시스플라틴 부하된 리포좀(LiPlasomes), SPI-077(Alza), 리포플라틴(Regulon), 리폭살(Regulon), 카보플라틴(Johnson Matthey), 네다플라틴(Shionogi Seiyaku), 미리플라틴 수화물(Dainippon Sumitomo Pharma), 오르마플라틴(LGM Pharma), 에놀플라틴(Lederle Laboratories), CI973(Parke-Davis), 페길화된(PEGylated) 시스플라틴, 페길화된 카보플라틴, 페길화된 옥살리플라틴, 트랜스플라틴(트랜스-디아민디클로로백금(II); 혼합된 Z:트랜스-[PtCl2{Z-HN=C(OMe)Me}(NH3)]), CD-37(에스트라디올-백금(II) 하이브리드 분자), 피코플라틴(Poniard Pharmaceuticals),
Figure pct00001
AH44[참조: Komeda et al., 2006; Harris et al., 2005; Qu et al., 2004], 트리플라틴NC(Harris et al., 2005; Qu et al., 2004), 프로린닥(Access), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "인터칼레이팅제"는 독소루비신(아드리아마이신), 다우노루비신, 이다루비신, 미톡산트론, 약제학적으로 허용되는 이들의 염, 프로드럭 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
DNA 복제 저해제의 비제한적 예는 토포이소머라제 저해제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 사용되는 바와 같은, "토포이소머라제 저해제"는 토포이소머라제의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. 본 발명에 따르는 토포이소머라제 저해제는 토포이소머라제 I, 토포이소머라제 II, 또는 토포이소머라제 I과 토포이소머라제 II 둘다를 저해할 수 있다. 본 발명에 따르는 토포이소머라제 I 저해제의 비제한적 예는 이리노테칸(Alchemia), APH-0804(Aphios), 캄프토테신(Aphios), 코시테칸(BioNumerik), 토포테칸(GlaxoSmithKline), 벨로테칸 하이드로클로라이드(Chon Kun Dang), 피르테칸 페골(Enzon), HN-30181A(Hanmi), hRS7-SN-38(Immunomedics), 라베투주맙-SN-38(Immunomedics), 에티리노테칸 페골(Nektar Therapeutics), NK-012(Nippon Kayaku), SER-203(Serina Therapeutics), 시미테칸 하이드로클로라이드 프로드럭(Shanghai HaiHe Pharmaceuticals), 지마테칸(Sigma-Tau), 나미테칸(Sigma-Tau), SN-38(Supratek Pharma), TLC-388 하이드로클로라이드(Taiwan Liposome Company), 라멜라린 D(PharmaMar), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다. 본 발명에 따르는 토포이소머라제 II형 저해제의 비제한적 예는 Adva-27a(Advanomics), 조프타렐린 독소루비신(Aeterna Zentaris), 발루비신(Anthra Pharmaceuticals), 라족산(AstraZeneca), 독소루비신(Avena Therapeutics), 암사크린(Bristol-Myers Squibb), 에토포시드 포스페이트(Bristol-Myers Squibb), 에토포시드(Novartis), 덱스라족산(Cancer Research Technology), 시타라빈/다우노루비신 배합물(Celator Pharmaceuticals), CAP7.1(CellAct Pharma), 알독소루비신(CytRx), 암루비신 하이드로클로라이드(Dainippon Sumitomo Pharma), 보사록신(Dainippon Sumitomo Pharma), 다우노루비신(Gilead Sciences), 밀라투주맙/독소루비신 배합물(Immunomedics), 아클라루비신(Kyowa Hakko Kirin), 미톡산트론(Meda), 피라루비신(Meiji), 에피루비신(Pfizer), 테니포시드(Novartis), F-14512(Pierre Fabre), 엘리프티늄 아세테이트(Sanofi), 조루비신(Sanofi), 덱스라족산(TopoTarget), 소부족산(Zenyaku Kogyo), 이다루비신(Pfizer), HU-331(Cayman Chemical), 아우린트리카복실산(Sigma Aldrich), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
본 발명에 따르는 화학치료 항생제는 악티노마이신, 안트라사이클린, 발루비신, 에피루비신, 블레오마이신, 플리카마이신, 미토마이신, 약제학적으로 허용되는 이들의 염, 프로드럭 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "항혈관신생제"란 용어는 기존의 혈관으로부터의 신생 혈관 형성을 방지하거나 지연시키는 임의의 화합물을 의미한다. 본 발명에서, 항혈관신생제의 예는 페갑타닙, 라니비주맙, 베바시주맙(아바스틴), 카복시아미도트리아졸, TNP-470, CM101, IFN-α, IL-12, 혈소판 인자 4, 수라민, SU5416, 트롬보스폰딘, VEGFR 길항제, 혈관신생억제 스테로이드 및 헤파린, 연골 유래의 혈관신생 저해 인자, 매트릭스 메탈로프로테이나제 저해제, 안지오스타틴, 엔도스타틴, 2-메톡시에스트라디올, 테코갈란, 프로락틴, ανβ3 저해제, 리노마이드, VEGF-Trap, 아미노스테롤, 코르티손, 티로신 키나제 저해제, 항혈관신생 siRNA, 보체계 저해제, 혈관 차단제 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 항혈관신생제는 베바시주맙이다.
본 발명의 VEGFR 길항제는 파조파닙, 레고라페닙, 렌바티닙, 소라페닙, 수니티닙, 악시티닙, 반데타닙, 카보잔티닙, 바탈라닙, 세막산닙, ZD6474, SU6668, AG-013736, AZD2171, AEE788, MF1/MC-18F1, DC101/IMC-1C11, 라무시루맙 및 모테사닙을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. VEGFR 길항제는 또한 베바시주맙, 아플리베르셉트, 2C3, r84, VEGF-Trap 및 라니비주맙과 같은 VEGF 저해제를 포함할 수 있다.
본 발명의 혈관신생억제 스테로이드는 혈관신생 또는 신혈관증식을 저해하거나 감쇠시키거나 방지하거나, 병적인 혈관화의 퇴행을 유발하는 임의의 스테로이드를 포함한다. 본 발명의 혈관신생억제 스테로이드는 유럽 특허원 제EP1236471 A2호에 개시된 것들 뿐만 아니라 미국 특허 제4,599,331호 개시된 20-치환된 스테로이드, 미국 특허 제4,771,042호에 개시된 21-하이드록시 스테로이드, 국제 출원 제 WO 1987/02672호에 개시된 C11-관능화된 스테로이드, 6α-플루오로17α,21-디하이드록시-16α-메틸프레그나-4,9(11)-디엔-3,20-디온 21-아세테이트, 6α-플루오로-17α,21-디하이드록시-16β-메틸프레그나-4,9(11)-디엔-3,20-디온, 6α-플루오로-17α,21-디하이드록시-16β-메틸프레그나-4,9(11)-디엔-3,20-디온 21-포스포노옥시 및 약제학적으로 허용되는 이들의 염, 하이드로코르티손, 테트라하이드로코르티솔, 17α-하이드록시-프로게스테론, 11α-에피하이드로코르티손, 코르텍솔론, 코르티코스테론, 데스옥시코르티코스테론, 덱사메타손, 코르티손 21-아세테이트, 하이드로코르티손 21-포스페이트, 17α-하이드록시-6α-메틸프레그나-4-엔-3,20-디온 17-아세테이트, 6α-플루오로-17α,21-디하이드록시-16α-메틸프레그나-4,9(11)-디엔-3,20-디온 및 Δ9(11)-에티안산 에스테르를 포함하며, 모두 국제 출원 제WO 1990/015816 A1호에 개시되어 있다.
연골 유래의 혈관신생 저해 인자는 펩타이드 트로포닌 및 콘드로모둘린 I를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 매트릭스 메탈로프로테이나제 저해제는 마리마스타트 및 SC903과 같은 석시닐 하이드록사메이트, CGS27023A와 같은 설폰아미드 하이드록사메이트, 포스핀아미드 하이드록사메이트, BAY12-9566과 같은 카복실레이트 저해제, 화합물 B와 같은 티올 저해제, 아미노메틸 벤즈이미다졸 유사체, 레가세핀과 같은 펩타이드 및 미노사이클린과 같은 테트라사이클린을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
ανβ3 저해제는 IS20I, P11 펩타이드, EMD 85189 및 66203, RGD 펩타이드, S 36578-2와 같은 RGD 모사체, 에키스타틴, 이량체의 세포외 도메인을 표적으로 하는 비탁신과 같은 ανβ3 인테그린에 대한 항체 또는 항체 단편, 실렌지타이드, 및 S247과 같은 펩티도모사체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
항혈관신생 siRNA는 혈관신생 동안 하향조절되는 mRNA를 표적으로 하는 siRNA, 임의로 VEGF 또는 VEGFR mRNA를 표적으로 하는 페길화된 siRNA 및 UPR(폴딩되지 않은 단백질 반응)-IRE1α, XBP-1 및 ATF6 mRNA를 표적으로 하는 siRNA를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 추가로, 길이가 최소 21개 뉴클레오타이드인 siRNA는 표적화 서열과 상관없이 신혈관증식[참조: Kleinman, et al., 2008]을 억제하고 본 발명의 항혈관신생 siRNA 내에 포함될 수 있다.
보체계 저해제는 가용성 보체 수용체 1형, 긴 상동성 반복부-A가 결여된 가용성 보체 수용체 1형, 가용성 보체 수용체 1형-시알릴 루이스x(Sialyl Lewisx), 보체 수용체 2형, 가용성 붕괴 가속화 인자, 가용성 막 보조인자 단백질, 가용성 CD59, 붕괴 가속화 인자-CD59 하이브리드, 막 보조인자 단백질-붕괴 가속화 인자 하이브리드, C1 저해제 및 C1q 수용체와 같은 변형된 고유 보체 성분, 항-C5 모노클로날 항체 및 항-C5 단일 쇄 Fν와 같은 보체-저해성 항체, C5a 수용체를 표적으로 하는 길항제 펩타이드 및 유사체와 같은 보체 활성화의 합성 억제제, 및 헤파린 및 관련 글루코사미노글리칸 화합물과 같은 보체 활성화를 차단하는 천연 발생 화합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 추가의 보체계 저해제는 마크리데스(Makrides)[참조: Makrides, 1998]에 의해 개시되었다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "혈관 차단제"라는 용어는 기존의 혈관구조, 예를 들면, 종양 혈관구조를 표적으로 하고, 상기 혈관구조를 손상시키거나 파괴하고/하거나 중심 종양 괴사를 유발하는 임의의 화합물을 의미한다. 본 발명에서, 혈관 차단제의 예는 ABT-751(Abbott), AVE8062(Aventis), BCN105(Bionomics), BMXAA(Antisoma), CA-4-P(OxiGene), CA-1-P(OxiGene), CYT997(Cytopia), MPC-6827(Myriad Pharmaceuticals), MN-029(MediciNova), NPI-2358(Nereus), Oxi4503(Oxigene), TZT-1027(Daichi Pharmaceuticals), ZD6126(AstraZeneca 및 Angiogene), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함하나, 이제 제한되지는 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "분자표적 치료제"는 피험체에게 투여시, 단일 분자 또는 분자들의 그룹, 바람직하게는 종양 성장 및 진행에 관여하는 단일 분자 또는 분자들의 그룹의 기능을 간섭하는 물질이다. 본 발명의 분자표적 치료제의 비제한적 예는 신호전달(signal transduction) 저해제, 유전자 발현 및 기타 세포 기능의 조절제, 면역계 조절제, 항체-약물 접합체(ADC) 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "신호전달 저해제"는 예를 들면 세포외 신호전달 분자가 세포 표면 수용체를 활성화시키는 경우 세포들 간의 의사소통을 차단하는 물질이다. 본 발명의 신호전달 저해제의 비제한적 예는 역형성 림프종 키나제(ALK) 저해제, B-Raf 저해제, 상피 성장 인자 저해제(EGFRi), ERK 저해제, 야누스(Janus) 키나제 저해제, MEK 저해제, 라파마이신의 포유동물 표적(mTor) 저해제, 포스포이노시티드 3-키나제 저해제(PI3Ki) 및 Ras 저해제를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "역형성 림프종 키나제(ALK) 저해제"는 (i) 예를 들면, ALK에 결합함으로써 ALK와 직접 상호작용하고 (ii) ALK의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. 본 발명의 역형성 림프종 키나제(ALK) 저해제의 비제한적 예는 크리조티닙(Pfizer, 뉴욕주 뉴욕), CH5424802(Chugai Pharmaceutical Co., 일본 도쿄), GSK1838705(GlaxoSmithKline, 영국), 추가이(Chugai) 13d(Chugai Pharmaceutical Co., 일본 도쿄), CEP28122(Teva Pharmaceutical Industries, Ltd., 이스라엘), AP26113(Ariad Pharmaceuticals, 마이애미주 캠브리지), 세팔론(Cephalon) 30(Teva Pharmaceutical Industries, Ltd., 이스라엘), X-396(Xcovery, Inc., 플로리다주 웨스트 팜 비치), 암젠(Amgen) 36(Amgen Pharmaceuticals, 캘리포니아주 싸우전드 옥스), ASP3026(Astellas Pharma US, Inc., 일리노이주 노쓰브룩) 및 암젠 49(Amgen Pharmaceuticals, 캘리포니아주 싸우전드 옥스), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 본 발명의 "B-Raf 저해제"는 (i) 예를 들면, B-Raf에 결합하여 B-Raf와 직접 상호작용하고 (ii) B-Raf의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. B-Raf 저해제는 이의 각각의 결합 방식에 따라서 2가지 유형으로 분류될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같은, "1형" B-Raf 저해제는 활성 입체구조의 키나제의 ATP 결합 부위를 표적으로 하는 저해제이다. "2형" B-Raf 저해제는 키나제의 불활성 입체구조에 우선적으로 결합하는 저해제이다. 본 발명의 1형 B-Raf 저해제의 비제한적 예는 다음을 포함한다:
화합물 7
Figure pct00002
[참조: Li et al., 2010]
화합물 9
Figure pct00003
화합물 10
Figure pct00004
화합물 13
Figure pct00005
화합물 14
Figure pct00006
, 다브라페닙(GlaxoSmithKline), GDC-0879(Genentech), L-779450 B-Raf(Merck), PLX3202(Plexxikon), PLX4720(Plexxikon), SB-590885(GlaxoSmithKline), SB-699393(GlaxoSmithKline), 베무라페닙(Plexxikon), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합. 바람직하게는, 1형 RAF 저해제는 다브라페닙 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염이다.
본 발명의 2형 B-Raf 저해제의 비제한적 예는 다음을 포함한다:
화합물 15
Figure pct00007
[참조: Li et al., 2010],
화합물 16
Figure pct00008
화합물 18
Figure pct00009
화합물 19
Figure pct00010
화합물 20
Figure pct00011
화합물 21
Figure pct00012
화합물 22
Figure pct00013
화합물 23
Figure pct00014
화합물 24
Figure pct00015
화합물 25
Figure pct00016
화합물 26
Figure pct00017
화합물 27
Figure pct00018
화합물 28
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화합물 30
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화합물 31
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화합물 39
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화합물 40
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, 소라니페닙(Onyx Pharmaceuticals), ZM-336372(AstraZeneca), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합.
기타 B-Raf 저해제는, 제한 없이, AAL881(Novartis); AB-024(Ambit Biosciences), ARQ-736(ArQule), ARQ-761(ArQule), AZ628(Axon Medchem BV), BeiGene-283(BeiGene), BIIB-024(MLN 2480)(Sunesis & Takeda), b raf 저해제(Sareum), BRAF 키나제 저해제(Selexagen Therapeutics), BRAF siRNA 313(tacaccagcaagctagatgca) 및 253(cctatcgttagagtcttcctg)[참조: Liu et al., 2007], CTT239065(Institute of Cancer Research), DP-4978(Deciphera Pharmaceuticals), HM-95573(Hanmi), GW 5074(Sigma Aldrich), ISIS 5132(Novartis), LErafAON(NeoPharm, Inc.), LBT613(Novartis), LGX 818(Novartis), 파조파닙(GlaxoSmithKline), PLX5568(Plexxikon), RAF-265(Novartis), RAF-365(Novartis), 레고라페닙(Bayer Healthcare Pharmaceuticals, Inc.), RO 5126766(Hoffmann-La Roche), TAK 632(Takeda), TL-241(Teligene), XL-281(Exelixis), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "EGFR 저해제"는 (i) 예를 들면, EGFR에 결합함으로써 EGFR과 직접 상호작용하고 (ii) EGFR의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. 본 발명에 따르는 EGFR 저해제의 비제한적 예는 (+)-아에로플리시닌-1(CAS # 28656-91-9), 3-(4-이소프로필벤질리데닐)-인돌린-2-온, ABT-806(Life Science Pharmaceuticals), AC-480(Bristol-Myers Squibb), 아파티닙(Boehringer Ingelheim), AG 1478(CAS # 153436-53-4), AG 494(CAS # 133550-35-3), AG 555(CAS # 133550-34-2), AG 556(CAS # 133550-41-1), AG 825(CAS # 149092-50-2), AG-490(CAS # 134036-52-5), 안트로퀴노놀(Golden Biotechnology), AP-26113(Ariad), ARRY334543(CAS # 845272-21-1), AST 1306(CAS # 897383-62-9), AVL-301(Celgene), AZD8931(CAS # 848942-61-0), BIBU 1361(CAS # 793726-84-8), BIBX 1382(CAS # 196612-93-8), BMS-690514(Bristol-Myers Squibb), BPIQ-I(CAS # 174709-30-9), 카네르티닙(Pfizer), 세툭시맙(Actavis), 시파티닙(Jiangsu Hengrui Medicine), CL-387,785(Santa Cruz Biotech), 화합물 56(CAS # 171745-13-4), CTX-023(CytomX Therapeutics), CUDC-101(Curis), 다코미티닙(Pfizer), DAPH(CAS # 145915-58-8), 다프네틴(Santa Cruz Biotech), 도비티닙 락테이트(Novartis), EGFR 저해제(CAS # 879127-07-8), 에피티닙(Hutchison China MediTech), 에르브스타틴 유사체(CAS # 63177-57-1), 에를로티닙(Astellas), 게피티닙(AstraZeneca), GT-MAB 5.2-GEX(Glycotope), GW 583340(CAS # 388082-81-3), GW2974(CAS # 202272-68-2), HDS 029(CAS # 881001-19-0), 하이퍼리신(Santa Cruz Biotech), 이코티닙 하이드로클로라이드(Betapharma), JNJ-26483327(Johnson & Johnson), JNJ-28871063(Johnson & Johnson), KD-020(Kadmon Pharmaceuticals), 라파티닙 디토실레이트(GlaxoSmithKline), 라벤두스틴 A(Sigma), 라벤두스틴 C(Sigma), LY-3016859(Eli Lilly), MEHD-7945A(Hoffmann-La Roche), MM-151(Merrimack), MT-062(Medisyn Technologies), 네시투무맙(Eli Lilly), 네라티닙(Pfizer), 니모투주맙(Center of Molecular Immunology), NT-004(NewGen Therapeutics), 판티우무맙(Amgen), PD 153035(CAS # 153436-54-5), PD 161570(CAS # 192705-80-9), PD 168393, PD 174265(CAS # 216163-53-0), 피로티닙(Sihuan Pharmaceutical), 포지오티닙(Hanmi), PP 3(CAS # 5334-30-5), PR-610(Proacta), 피로티닙(Jiangsu Hengrui Medicine), RG-13022(CAS # 136831-48-6), 린도페피무트(Celldex Therapeutics), RPI-1(CAS # 269730-03-2), S-222611(Shionogi), TAK 285(CAS # 871026-44-7), TAS-2913(Taiho), 텔리아티닙(Hutchison China MediTech), 타이르포스틴 47(RG-50864, AG-213)(CAS # 118409-60-2), 타이르포스틴 51(CAS # 122520-90-5), 타이르포스틴 AG 1478(CAS # 175178-82-2), 타이르포스틴 AG 183(CAS # 126433-07-6), 타이르포스틴 AG 528(CAS # 133550-49-9), 타이르포스틴 AG 99(CAS # 118409-59-9), 타이르포스틴 B42(Santa Cruz Biotech), 타이르포스틴 B44(Santa Cruz Biotech), 타이르포스틴 RG 14620(CAS # 136831-49-7), 반데타닙(AstraZeneca), 바를리티닙(Array BioPharma), 바탈라닙(Novartis), WZ 3146(CAS # 1214265-56-1 ), WZ 4002(CAS # 1213269-23-8), WZ8040(CAS # 1214265-57-2), XL-647(Exelixis), Z-650(HEC Pharm), ZM 323881(CAS # 324077-30-7), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다. 바람직하게는, EGFR 저해제는 파니투무맙, 에를로티닙, 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "ERK 저해제"는 (i) 예를 들면, ERK에 결합함으로써, ERK1 및 ERK2를 포함하는 ERK와 직접 상호작용하고 (ii) ERK 단백질 키나제의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. 따라서, MEK 저해제 및 RAF 저해제와 같은 ERK의 상류에서 작용하는 저해제는 본 발명에 따르는 ERK 저해제가 아니다. 본 발명의 ERK 저해제의 비제한적 예는 AEZS-131(Aeterna Zentaris), AEZS-136(Aeterna Zentaris), SCH-722984(Merck & Co.), SCH-772984(Merck & Co.), SCH-900353(MK-8353)(Merck & Co.), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은,"야누스 키나제 저해제"는 (i) 예를 들면, 야누스 키나제에 결합함으로써, 야누스 키나제와 직접 상호작용하고 (ii) 야누스 키나제의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. 본 발명의 야누스 키나제는 Tyk2, Jak1, Jak2 및 Jak3을 포함한다. 본 발명의 야누스 키나제 저해제의 비제한적 예는 룩솔리티닙(Incyte Corporation, Wilmington, DE), 바리시티닙(Incyte Corporation, Wilmington, DE), 토파시티닙(Pfizer, New York, NY), VX-509(Vertex Pharmaceuticals, Inc., Boston, MA), GLPG0634(Galapagos NV, Belgium), CEP-33779(Teva Pharmaceuticals, Israel), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "MEK 저해제"는 (i) 예를 들면, MEK에 결합함으로써, 야누스 키나제와 직접 상호작용하고 (ii) MEK의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. 따라서, RAS 저해제 및 RAF 저해제와 같은 MEK의 상류에서 작용하는 저해제는 본 발명에 따르는 MEK 저해제가 아니다. MEK 저해제는 이 저해제가 ATP와 경쟁하는지 여부에 따라 2가지 유형으로 분류될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같은, "1형" MEK 저해제는 MEK에 대한 결합에 대해 ATP와 경쟁하는 저해제이다. "2형" MEK 저해제는 MEK에 대한 결합에 대해 ATP와 경쟁하지 않는 저해제이다. 본 발명에 따르는 1형 MEK 저해제의 비제한적 예는 벤타마피모드(Merck KGaA), L783277(Merck), RO092210(Roche), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다. 바람직하게는, 1형 MEK 저해제는 RO092210(Roche) 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염이다. 본 발명에 따르는 2형 MEK 저해제의 비제한적 예는 안트락스 독소, 안트락스 독소의 치사 인자 부분, ARRY-142886(6-(4-브로모-2-클로로-페닐아미노)-7-플루오로-3-메틸-3H-벤조이미다졸-5-카복실산(2-하이드록시-에톡시)-아미드)(Array BioPharma), ARRY-438162(Array BioPharma), AS-1940477(Astellas), MEK162(Array BioPharma), PD 098059(2-(2'-아미노-3'-메톡시페닐)-옥사나프탈렌-4-온), PD 184352(CI-1040), PD-0325901(Pfizer), 피마세르팁(Santhera Pharmaceuticals), 레파메티닙(AstraZeneca), 셀루메티닙(AZD6244)(AstraZeneca), TAK-733(Takeda), 트라메티닙(Japan Tobacco), U0126(1,4-디아미노-2,3-디시아노-1,4-비스(2-아미노페닐티오)부타디엔)(Sigma), RDEA1 19(Ardea Biosciences/Bayer), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다. 바람직하게는, 2형 MEK 저해제는 트라메티닙 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염이다. 다른 MEK 저해제는 제한 없이, 안트로퀴노놀(Golden Biotechnology), AS-1940477(Astellas), AS-703988(Merck KGaA), BI-847325(Boehringer Ingelheim), E-6201(Eisai), GDC-0623(Hoffmann-La Roche), GDC-0973, RG422, RO4987655, RO5126766, SL327, WX-554(Wilex), YopJ 폴리펩타이드, 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "mTOR 저해제"는 (i) 예를 들면, mTOR에 결합함으로써, mTOR과 직접 상호작용하고 (ii) mTOR의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. 본 발명에 따르는 mTOR 저해제의 비제한적 예는 조타롤리무스(AbbVie), 우미롤리무스(Biosensors), 템시롤리무스(Pfizer), 시롤리무스(Pfizer), 시롤리무스 나노크리스탈(Elan Pharmaceutical Technologies), 시롤리무스 트랜스덤(TransDerm), 시롤리무스-PNP(Samyang), 에버롤리무스(Novartis), 바이올리무스 A9(Biosensors), 리다포롤리무스(Ariad), 라파마이신, TCD-10023(Terumo), DE-109(MacuSight), MS-R001(MacuSight), MS-R002(MacuSight), MS-R003(MacuSight), 페르세이바(MacuSight), XL-765(Exelixis), 퀴나크린(Cleveland BioLabs), PKI-587(Pfizer), PF-04691502(Pfizer), GDC-0980(Genentech and Piramed), 닥톨리십(Novartis), CC-223(Celgene), PWT-33597(Pathway Therapeutics), P-7170(Piramal Life Sciences), LY-3023414(Eli Lilly), INK-128(Takeda), GDC-0084(Genentech), DS-7423(Daiichi Sankyo), DS-3078(Daiichi Sankyo), CC-1 15(Celgene), CBLC-137(Cleveland BioLabs), AZD-2014(AstraZeneca), X-480(Xcovery), X-414(Xcovery), EC-0371(Endocyte), VS-5584(Verastem), PQR-401(Piqur), PQR-316(Piqur), PQR-311(Piqur), PQR-309(Piqur), PF-06465603(Pfizer), NV-128(Novogen), nPT-MTOR(Biotica Technology), BC-210(Biotica Technology), WAY-600(Biotica Technology), WYE-354(Biotica Technology), WYE-687(Biotica Technology), LOR-220(Lorus Therapeutics), HMPL-518(Hutchison China MediTech), GNE-317(Genentech), EC-0565(Endocyte), CC-214(Celgene) 및 ABTL-0812(Ability Pharmaceuticals)를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "PI3K 저해제"는 포스파티딜이노시톨-3 키나제(PI3K) 또는 Akt와 같은 하류 단백질의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. PI3K는 활성화되면 이노시톨 인지질 내의 이노시톨 환 3'-OH 그룹을 인산화시켜 2차 메신저 포스파티딜이노시톨-3,4,5-트리포스페이트(PI-3,4,5-P(3))를 생성시킨다. Akt는 인지질과 상호작용하여 인지질을 내막으로 전위시키고, 여기서 인지질은 인산화되고 활성화된다. 활성화된 Akt는 세포 생존, 세포 주기 진행 및 세포 성장의 조절에 관여하는 수많은 기질의 기능을 조절한다.
본 발명에 따르는 PI3K 저해제의 비제한적 예는 A-674563(CAS # 552325-73-2), AGL 2263, AMG-319(Amgen, 캘리포니아주 싸우전드 오크스), AS-041164(5-벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸렌-티아졸리딘-2,4-디온), AS-604850(5-(2,2-디플루오로-벤조[1,3]디옥솔-5-일메틸렌)-티아졸리딘-2,4-디온), AS-605240(5-퀴녹실린-6-메틸렌-1,3-티아졸리딘-2,4-디온), AT7867(CAS # 857531-00-1), 벤즈이미다졸 시리즈, 제넨테크(Genentech)(Roche Holdings Inc., 캘리포니아주 사우쓰 샌프란시스코), BML-257(CAS # 32387-96-5), CAL-120(Gilead Sciences, 캘리포니아주 포스터 시티), CAL-129(Gilead Sciences), CAL-130(Gilead Sciences), CAL-253(Gilead Sciences), CAL-263(Gilead Sciences), CAS # 612847-09-3, CAS # 681281-88-9, CAS # 75747-14-7, CAS # 925681-41-0, CAS # 98510-80-6, CCT128930(CAS # 885499-61-6), CH5132799(CAS # 1007207-67-1), CHR-4432(Chroma Therapeutics, Ltd., 영국 애빙던), FPA 124(CAS # 902779-59-3), GS-1101(CAL-101)(Gilead Sciences), GSK 690693(CAS # 937174-76-0), H-89(CAS # 127243-85-0), 호노키올(Honokiol), IC871 14(Gilead Science), IPI-145(Intellikine Inc.), KAR-4139(Karus Therapeutics, 영국 칠워쓰), KAR-4141(Karus Therapeutics), KIN-1(Karus Therapeutics), KT 5720(CAS # 108068-98-0), 밀테포신, MK-2206 디하이드로클로라이드(CAS # 1032350-13-2), ML-9(CAS # 105637-50-1), 탈트린돌 하이드로클로라이드, OXY-111A(NormOxys Inc., 매사추세츠주 브라이튼), 페리포신, PHT-427(CAS # 1191951-57-1), PI3 키나제 델타 저해제, 머크 KGaA(Merck & Co., 뉴저지주 화이트하우스 스테이션), PI3 키나제 델타 저해제, Genentech(Roche Holdings Inc.), PI3 키나제 델타 저해제, 인코젠(Incozen)(Incozen Therapeutics, Pvt. Ltd., 인도 하이브라바드), PI3 키나제 델타 저해제-2, 인코젠(Incozen Therapeutics), PI3 키나제 저해제, 로쉐-4(Roche Holdings Inc.), PI3 키나제 저해제, 로쉐(Roche Holdings Inc.), PI3 키나제 저해제, 로쉐-5(Roche Holdings Inc.), PI3-알파/델타 저해제, 경로 치료제(Pathway Therapeutics Ltd., South San Francisco, CA), PI3-델타 저해제, Cellzome(Cellzome AG, Heidelberg, Germany), PI3-델타 저해제, 인터류킨(Intellikine Inc., La Jolla, CA), PI3-델타 저해제, 경로 치료제-1(Pathway Therapeutics Ltd.), PI3-델타 저해제, 경로 치료제-2(Pathway Therapeutics Ltd.), PI3-델타/감마 저해제, 셀좀(Cellzome AG), PI3-델타/감마 저해제, 셀좀(Cellzome AG), PI3-델타/감마 저해제, 인터류킨(Intellikine Inc.), PI3-델타/감마 저해제, 인터류킨(Intellikine Inc.), PI3-델타/감마 저해제, 경로 치료제(Pathway Therapeutics Ltd.), PI3-델타/감마 저해제, 경로 치료제(Pathway Therapeutics Ltd.), PI3-감마 저해제 에보텍(Evotec)(Evotec), PI3-감마 저해제, 셀좀(Cellzome)(Cellzome AG), PI3-감마 저해제, 경로 치료제(Pathway Therapeutics Ltd.), PI3K 델타/감마 저해제, 인터류킨-1(Intellikine Inc.), PI3K 델타/감마 저해제, 인터류킨-1(Intellikine Inc.), 피크틸리십(GDC-0941)(Roche Holdings Inc.), PIK-90(CAS # 677338-12-4), SC-103980(Pfizer, 뉴욕주 뉴욕), SF-1126(Semafore Pharmaceuticals, 인디애나주 인디애나폴리스), SH-5, SH-6, 테트라하이드로 커큐민, TG100-115(Targegen Inc., San Diego, CA), 트리시리빈, X-339(Xcovery, West Palm Beach, FL), XL-499(Evotech, Hamburg, Germany), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다. 바람직하게는, PI3K/Akt 경로의 저해제는 픽틸리십(GDC-0941) 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "RAS 저해제"는 (i) 예를 들면, RAS에 결합함으로써, RAS와 직접 상호작용하고 (ii) RAS의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. 본 발명에 따르는 RAS 저해제의 비제한적 예는 파르네실 트랜스퍼라제 저해제(예를 들면, 티피파르닙 및 로나파르닙), 파르네실 그룹-함유 소분자(예를 들면, 살리라십 및 TLN-4601), 마우러(Maurer)[참조: Maurer, et al., 2012]에 의해 기술된 바와 같은 DCAI, 시마(Shima)[참조: Shima, et al., 2013]에 의해 기술된 바와 같은 Kobe0065 및 Kobe2602, 및 HBS 3[참조: Patgiri, et al., 2011], 및 AIK-4(Allinky), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "유전자 발현"은 DNA로부터의 정보가 폴리펩타이드의 형성에서 사용되도록 하는 과정이다. "유전자 발현 및 다른 세포 기능의 조절인자"는 유전자 발현 및 세포의 다른 기능에 영향을 미치는 물질이다. 이러한 조절인자의 비제한적 예는 호르몬, 히스톤 데아세틸라제 저해제(HDACi) 및 사이클린-의존적 키나제 저해제(CDKi) 및 폴리 ADP 리보스 폴리머라제(PARP) 저해제를 포함한다.
본 발명에서, "호르몬"은 신체의 한 부분의 세포에 의해 방출되어 신체의 또 다른 부분의 세포에 영향을 주는 물질이다. 본 발명에 따르는 호르몬의 비제한적 예는 프로스타글란딘, 류코트리엔, 프로스타사이클린, 트롬복산, 아밀린, 항뮐러리안 호르몬, 아디포넥틴, 부신피질자극 호르몬, 안지오텐시노겐, 안지오텐신, 바소프레신, 아트리오펩틴, 뇌 나트륨이뇨 펩타이드, 칼시토닌, 콜레시스토키닌, 코르티코트로핀-방출 호르몬, 엔세팔린, 엔도텔린, 에리트로포이에틴, 여포-자극 호르몬, 갈라닌, 가스트린, 그렐린, 글루카곤, 성선자극호르몬-방출 호르몬, 성장 호르몬-방출 호르몬, 사람 융모막 성선자극호르몬, 사람 태반 락토겐, 성장 호르몬, 인히빈, 인슐린, 소마토메딘, 렙틴, 립트로핀, 황체형성 호르몬, 멜라닌세포 자극 호르몬, 모틸린, 오렉신, 옥시토신, 췌장 폴리펩타이드, 부갑상선 호르몬, 프로락틴, 프로락틴 방출 호르몬, 릴락신, 레닌, 세크레틴, 소마토스타틴, 트롬보포이에틴, 갑상선 자극 호르몬, 테스토스테론, 데하이드로에피안드로스테론, 안드로스텐디온, 디하이드로테스토스테론, 알도스테론, 에스트라디올, 에스트론, 에스트리올, 코르티솔, 프로게스테론, 칼시트리올 및 칼시디올을 포함한다.
일부 화합물은 특정 호르몬의 활성을 간섭하거나 특정 호르몬의 생산을 중단시킨다. 본 발명에 따르는 호르몬 간섭 화합물의 비제한적 예는 타목시펜(Nolvadex®), 아나스트로졸(Arimidex®), 레트로졸(Femara®) 및 풀베스트란트(Faslodex®)를 포함한다. 이러한 화합물도 또한 본 발명에서 호르몬의 의미내에 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "HDAC 저해제"는 (i) 예를 들면, HDAC에 결합함으로써, HDAC와 직접적으로 상호작용하고 (ii) HDAC의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. 본 발명에 따르는 HDAC 저해제의 비제한적 예는 4SC-201(4SC AG), 4SC-202(Takeda), 아벡시노스타트(Celera), AN-1(Titan Pharmaceuticals, Inc.), 아피시딘(Merck & Co., Inc.), AR-42(Arno Therapeutics), ARQ-700RP(ArQule), 아부간(Avugane)(TopoTarget AS), 아젤라산-1-하이드록시메이트-9-아닐리드(AAHA), 벨리노스타트(TopoTarget), 부티레이트(Enzo Life Sciences, Inc.), CG-1255(Errant Gene Therapeutics, LLC), CG-1521(Errant Gene Therapeutics, LLC), CG-200745(CrystalGenomics, Inc.), 치다마이드(Shenzhen Chipscreen Biosciences), CHR-3996(Chroma Therapeutics), CRA-024781(Pharmacyclics), CS-3158(Shenzhen Chipscreen Biosciences), CU-903(Curis), DAC-60(Genextra), 엔티노스타트(Bayer), 히알루론산 부티르산 에스테르(HA-But), IKH-02(IkerChem), IKH-35(IkerChem), ITF-2357(Italfarmaco), ITF-A(Italfarmaco), JNJ-16241 199(Johnson & Johnson), KA-001(Karus Therapeutics), KAR-3000(Karus Therapeutics), KD-5150(Kalypsys), KD-5170(Kalypsys), KLYP-278(Kalypsys), KLYP-298(Kalypsys), KLYP-319(Kalypsys), KLYP-722(Kalypsys), m-카복시신남산 비스-하이드록스아미드(CBHA), MG-2856(MethylGene), MG-3290(MethylGene), MG-4230(MethylGene), MG-4915(MethylGene), MG-5026(MethylGene), MGCD-0103(MethylGene Inc.), 모세티노스타트(MethylGene), MS-27-275(Schering AG), NBM-HD-1(NatureWise), NVP-LAQ824(Novartis), OCID-4681-S-01(Orchid Pharmaceuticals), 옥삼플라틴((2E)-5-[3-[(페닐설포닐)아미놀 페닐]-펜트-2-엔-4-이노하이드록삼산), 파노비노스타트(Novartis), PCI-34051(Pharmacyclics), 페닐부티레이트(Enzo Life Sciences, Inc.), 피발로일옥시메틸 부티레이트(AN-9, Titan Pharmaceuticals, Inc.), 피바넥스(Titan Pharmaceuticals, Inc.), 프라시노스타트(SBIO), PX-117794(TopoTarget AS), PXD-118490(LEO-80140)(TopoTarget AS), 피록스아미드(수베로일-3-아미노피리딘아미드 하이드록삼산), 레스미노스타트(Takeda), RG-2833(RepliGen), 리콜린스타트(Acetylon), 로미뎁신(Astellas), SB-1304(S*BIO), SB-1354(S*BIO), SB-623(Merrion Research I Limited), SB-624(Merrion Research I Limited), SB-639(Merrion Research I Limited), SB-939(S*BIO), 스크립타이드(N-하이드록시-1,3-디옥소-1H-벤즈[de]이소퀴놀린-2(3H)-헥산 아미드), SK-7041(In2Gen/SK Chemical Co.), SK-7068(ln2Gen/SK Chemical Co.), 수베로일아닐리드 하이드록삼산(SAHA), 설폰아미드 하이드록삼산 트리부티린(Sigma Aldhch), 트리코스타틴 A(TSA)(Sigma Aldrich), 발프로산(VPA)(Sigma Aldrich), 보리노스타트(Zolinza), WF-27082B(Fujisawa Pharmaceutical Company, Ltd.), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다. 바람직하게는, HDAC 저해제는 로미뎁신, 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 이들의 조합이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "CDK"는 세포 주기를 조절하는 단백질 키나제의 한 패밀리(family)이다. 공지된 CDK는 cdk1, cdk2, ckd3, ckd4, cdk5, cdk6, cdk7, cdk8, cdk9, cdk10 및 cdk11을 포함한다. "CDK 저해제"는 (i) 예를 들면, CDK에 결합함으로써, CDK와 직접적으로 상호작용하고 (ii) CDK의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. 본 발명에 따르는 CDK 저해제의 비제한적 예는 2-하이드록시보헤민, 3-ATA, 5-요오도-인디루빈-3'-모노옥심, 9-시아노파울론, 알로이신 A, 알스테르파울론 2-시아노에틸, 알보시딥(Sanofi), AM-5992(Amgen), 아미노푸르발라놀 A, 아르시리아플라빈 A, AT-7519(Astex Pharmaceuticals), AZD 5438(CAS # 602306-29-6), BMS-265246(CAS # 582315-72-8), BS-181(CAS # 1092443-52-1), 부티롤락톤 I(CAS # 87414-49-1), Cdk/Crk 저해제(CAS # 784211-09-2), Cdk1/5 저해제(CAS # 40254-90-8), Cdk2 저해제 II(CAS # 222035-13-4), Cdk2 저해제 IV, NU6140(CAS # 444723-13-1), Cdk4 저해제(CAS # 546102-60-7), Cdk4 저해제 III(CAS # 265312-55-8), Cdk4/6 저해제 IV(CAS # 359886-84-3), Cdk9 저해제 II(CAS # 140651-18-9), CGP 74514A, CR8, CYC-065(Cyclacel), 디나시클립(Ligand), (R)-DRF053 디하이드로클로라이드(CAS # 1056016-06-8), 파스카플리신, 플라보피리돌, 하이그롤리딘, 인디루빈, LEE-011(Astex Pharmaceuticals), LY-2835219(Eli Lilly), 밀시클립 말레에이트(Nerviano Medical Sciences), MM-D37K(Maxwell Biotech), N9-이소프로필-올로무신, NSC 625987(CAS # 141992-47-4), NU2058(CAS # 161058-83-9), NU6102(CAS # 444722-95-6), 올로무신, ON-108600(Onconova), ON-123300(Onconova), 옥시인돌 I, P-1446-05(Piramal), P-276-00(Piramal), 팔보시클립(Pfizer), PHA-767491(CAS # 845714-00-3), PHA-793887(CAS # 718630-59-2), PHA-848125(CAS # 802539-81-7), 푸르발라놀 A, 푸르발라놀 B, R547(CAS # 741713-40-6), RO-3306(CAS # 872573-93-8), 로스코비틴, SB-1317(SBIO), SCH 900776(CAS # 891494-63-6), SEL-120(Selvita), 셀리시클립(Cyclacel), SNS-032(CAS # 345627-80-7), SU9516(CAS # 377090-84-1), WHI-P180(CAS # 21 1555-08-7), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다. 바람직하게는, CDK 저해제는 디나시클립, 팔보시클립, 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "폴리 ADP 리보스 폴리머라제(PARP) 저해제"는 폴리 ADP 리보스 폴리머라제(PARP) 또는 하류 단백질의 발현 또는 활성을 감소시키는 물질이다. 본 발명의 폴리 ADP 리보스 폴리머라제(PARP) 저해제의 비제한적 예는 PF01367338(Pfizer, New York, NY), 올라파립(AstraZeneca, United Kingdom), 이니파립(Sanofi-Aventis, Paris, France), 벨리파립(Abbott Laboratories, Abbott Park, IL), MK 4827(Merck, White House Station, NJ), CEP 9722(Teva Pharmaceuticals, Israel), LT-673(Biomarin, San Rafael, CA) 및 BSI 401(Sanofi-Aventis, Paris, France), 약제학적으로 허용되는 이들의 염 및 이들의 조합을 포함한다.
바람직한 실시형태에서, 화학요법은 젬시타빈, 탁솔, 아드리아마이신, 이포스파미드, 트라벡테딘, 파조파닙, 아브락산, 아바스틴, 에베롤리무스 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 제제를 사람에게 투여함을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "방사선요법"은 본 발명의 치료법인 씨. 노비, 예를 들면, 씨. 노비 NT와 양립할 수 있고 암 치료를 위해 방사선이 피험체, 예를 들면, 사람에게 전달되는 임의의 치료학적 용법을 의미한다. 방사선요법은, 예를 들면, 신체 외부의 기계(외부-빔 방사선 요법) 또는 신체 내부의 방사성 물질(근접방사선요법(brachytherapy), 전신 방사선 요법)에 의해, 예를 들면 사람 피험체에게 전달될 수 있다.
외부-빔 방사선 요법은 3차원 입체조형 방사선 요법, 강도변조 방사선 요법, 영상유도 방사선 요법, 토모테라피(tomotherapy), 정위 방사선수술, 신체 정위방사선요법, 양성자 요법, 및 전자 빔 요법과 같은 기타 하전 입자 빔 요법을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 외부-빔 방사선 요법은 암 치료에서 널리 사용되고 있으며 당업자에게 익히 공지되어 있다.
근접방사선요법은 피험체의 신체에 이식되거나 위치됨으로써 전달되는 방사선요법을 의미한다. 근접방사선요법은 간질(interstitial) 근접방사선요법, 강내 근접방사선요법 및 상공막 근접방사선요법을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 근접방사선요법 기술도 또한 암 치료에서 널리 사용되고 있고 당업자에게 익히 공지되어 있다.
전신 방사선 요법은 주사에 의해 피험체에게 전달되거나 피험체가 섭취하여 전달되는 방사선요법을 의미한다. 전신 방사선 요법의 한가지 예는 방사성요오드요법이다. 방사성요오드는 예를 들면, 사람과 같은 피험체에서 사용하기에 안전하고 효과적인 방사성표지된 요오드 분자이다. 본 발명에 따르는 방사성요오드의 비제한적 예는 123I, 124I, 125I, 131I 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 바람직하게는, 방사성요오드는 131I이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "면역요법"은, 본 발명의 치료법인 씨. 노비, 예를 들면, 씨. 노비 NT와 양립할 수 있고, 생산을 개시한 항원을 인식하고 이와 반응하는 항체 또는 감작 세포를 생산하는 면역계의 능력을 증대 또는 감소시킴으로써 면역반응을 변경하는 물질을 사용하는 임의의 항암 치료학적 용법을 의미한다. 면역요법제는 재조합, 합성 또는 천연 제제일 수 있으며 사이토카인, 코르티코스테로이드, 세포독성제, 티모신 및 면역글로불린을 포함할 수 있다. 일부 면역요법제는 체내에 천연적으로 존재하며 이들 중 어떠한 것들은 약리학적 제제로서 입수할 수 있다. 면역요법제의 예는 과립구-자극 인자(G-CSF), 인터페론, 이미퀴모드 및 세균으로부터의 세포성 막 분획, IL-2, IL-7, IL-12, CCL3, CCL26, CXCL7, 및 합성 사이토신 포스페이트-구아노신(CpG)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
하나의 바람직한 실시형태에서, 면역요법은 사람에게 면역 체크포인트 저해제(immune checkpoint inhibitor)를 투여함을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같은, "면역 체크포인트 저해제"는 면역반응의 감쇠에 관여하는 분자의 활성을 차단하는 물질을 의미한다. 이러한 분자는, 예를 들면, 세포독성 T-림프구-연관 항원 4(CTLA-4) 및 프로그램된 세포 사멸 단백질 1(PD-1)을 포함한다. 본 발명의 면역 체크포인트 저해제는 이필리무맙(Bristol-Myers Squibb), 트레멜리무맙(Pfizer), MDX-1106(Medarex, Inc.), MK3475(Merck), CT-011(CureTech, Ltd.), AMP-224(Amplmmune), MDX-1105(Medarex, Inc.), IMP321(Immutep S.A.) 및 MGA271(Macrogenics)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
상기 실시형태의 추가적 양상에서, 본 발명의 요법인 씨. 노비, 예를 들면, 씨. 노비 NT는 예를 들면, 화학요법, 방사선 요법, 면역요법 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 요법에 내성인 고형 종양에 대해 효과적이다.
상기 실시형태의 또 다른 양상에서, 고형 종양은 표준 요법에 불응성이거나, 고형 종양은 가용한 표준 요법이 없는 종양이지만, 본 발명의 요법인 씨. 노비, 예를 들면, 씨. 노비 NT는 이러한 종양에 대해 효과적이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "내성" 및 "불응성"은 서로 교환하여 사용된다. 요법에 "불응성"이란, 이전 요법 또는 요법들이 이 요법에 내성이 되기 전의 동일한 피험체와 비교해서 예를 들면, 암의 치료 또는 암 세포의 치사에서 감소된 효능을 가진다는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "표준 요법"이란 용어는 의료 전문가에 의해서 특정 암, 바람직하게는 특정 고형 종양의 치료에 적절한 것으로 일반적으로 인정되는 요법들을 의미한다. 표준 요법들은 상이한 종양 유형에 대해 동일하거나 상이할 수 있다. 표준 요법들은 전형적으로 예를 들면, 미국식품의약청과 같은 다양한 규제 기관에 의해 승인된 것들이다.
상기 실시형태의 추가 양상에서, 상기 방법은 사람에서 강력한 국소 염증 반응 및 후천성 면역반응을 유도한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "염증 반응"은 모세관 확장, 백혈구 침윤, 부기, 발적, 발열, 가려움, 통증, 기능 상실 및 이들의 조합을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는, 세포 손상, 병원체 또는 자극제에 대한 국소 반응이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "후천성 면역반응"은 피험체의 면역계의 B 세포 및 T 세포를 수반한다. 병원성 물질, 예를 들면, 암 세포에 노출되면, B 세포는 이 병원성 물질상의 병원성 항원에 대한 항체를 생성할 수 있고, T 세포는 궁극적 파괴를 위해 병원체를 표적으로 할 수 있게 된다. 소정의 항원에 특이적인 B 세포 및 T 세포의 특정한 집단은 면역계에 의해 보유되며 병원성 항원에 후속적으로 노출되는 경우에 소환된다. 따라서, 후천성 면역반응은 오래 지속되며, 숙주 피험체의 면역계에 소정의 병원성 항원-제시 병원체를 인식하고 파괴하는 지속적 능력을 제공한다.
본 발명의 또 다른 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양을 용적축소시키는 방법이다. 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하는 씨. 노비, 바람직하게는 씨. 노비 NT CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 고형 종양을 "용적축소시킨다"는 것은, 고형 종양에서 암의 크기 또는 암의 수를 감소시키는 것을 의미한다. 이러한 절차는 고식적이며 방사선 요법, 화학요법 또는 절단술을 포함하는 치료의 효능을 증진시키는데 사용될 수 있다. 이러한 실시형태에서, 고형 종양은 상기 제시된 바와 같다. 바람직하게는, 고형 종양은 연조직 육종, 간세포 암종, 유방암, 췌장암 및 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 보다 바람직하게는, 고형 종양은 후복막 평활근육종과 같은 평활근육종이다.
본 발명의 추가의 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양을 용적축소시키기 위한 방법이다. 상기 방법은 사이클당 약 1×104개 포자를 포함하는 씨. 노비 NT 포자의 단위 용량을 1 내지 4회 사이클로 사람에게 종양 내로 투여함을 포함하며, 씨. 노비 NT의 각 단위 용량은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁되어 있다. 이러한 실시형태에서, 고형 종양의 유형은 상기 제시된 바와 같다. 바람직하게는, 고형 종양은 연조직 육종, 간세포 암종, 유방암, 췌장암 및 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명의 추가 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는 방법이다. 상기 방법은 사이클당 약 1×104개 포자를 포함하는 씨. 노비 NT 포자의 단위 용량을 1 내지 4회 사이클로 사람에게 종양 내로 투여함을 포함하며, 씨. 노비 NT의 각 단위 용량은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁되어 있다. 고형 종양의 다양한 유형은 상기 제시된 바와 같다. 바람직하게는, 고형 종양은 연조직 육종, 간세포 암종, 유방암, 췌장암 및 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양을 제거하는 방법이다. 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하는 씨. 노비, 바람직하게는 씨. 노비 NT CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함하며, 이때 상기 종양은 정상 조직의 가장자리를 남기며 제거된다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 고형 종양의 "제거"는 과정이 모든 고형 종양을 제거함을 의미한다. 이러한 과정에서, 치료를 수행한 후, 종양이 한때 존재하였던 영역 주변에 정상 조직의 가장자리가 남겨진다. 상기 실시형태에서, 고형 종양의 유형은 상기 제시된 바와 같다. 바람직하게는, 고형 종양은 육종이다. 보다 바람직하게는, 고형 종양은 후복막 평활근육종과 같은 평활근육종이다.
본 발명의 추가 실시형태는 씨. 노비 CFU의 단위 용량이다. 상기 단위 용량은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하며, 사람에 존재하는 고형 종양의 효과의 치료 또는 개선에 효과적이다. 상기 제시한 바와 같이, 씨. 노비 CFU는 영양 형태 및 포자 형태일 수 있다.
상기 실시형태의 하나의 양상에서, 씨. 노비는 씨. 노비 NT이다. 바람직하게는, 단위 용량은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×104 내지 1×107 씨. 노비 NT 포자, 예를 들면, 약 1×106 내지 1×107 씨. 노비 NT 포자를 포함한다. 바람직하게는, 단위 용량은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중에 약 1×104 씨. 노비 NT 포자를 포함한다.
본 발명의 추가의 실시형태는 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선시키기 위한 키트이다. 상기 키트는 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하는 씨. 노비 CFU의 단위 용량 및 상기 키트 사용에 관한 설명서를 포함한다. 상기 키트는 하나 이상의 구획으로 나뉠 수 있으며 다양한 시약을 위한 하나 이상의 용기를 가질 수 있다. 상기 키트는 각 성분의 저장 및 수송을 지지하기 위해 추가 개조될 수 있다.
상기 실시형태의 하나의 양상에서, 키트는 씨. 노비 CFU에 의해 유발된 유해 부작용을 치료하거나 완화시키기에 효과적인 하나 이상의 항생제를 추가로 포함한다. CFU는 영양 형태 또는 포자 형태일 수 있다. 적합한 항생제는 상기 제시된 바와 같다. 바람직하게는, 키트는 1 내지 4회 치료 사이클을 수행하기 위해 씨. 노비의 1 내지 4회의 단위 용량을 추가로 포함한다.
상기 실시형태의 또 다른 양상에서, 씨. 노비는 씨. 노비 NT이다. 바람직하게는, 단위 용량은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중에 약 1×104 내지 1×107 씨. 노비 NT 포자, 예를 들면, 약 1×106 내지 1×107 씨. 노비 NT 포자 또는 약 1×104 씨. 노비 NT 포자를 포함한다. 또한 바람직하게는, 키트는 1 내지 4 치료 사이클을 수행하기 위해 씨. 노비 NT 포자의 1 내지 4회의 단위 용량을 추가로 포함한다.
본 발명의 다른 실시형태는 사람에서 종양 세포를 현미경적으로 정확히 절제하는 방법이다. 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 콜로니 형성 단위(CFU)를 포함하는 씨. 노비 NT CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "현미경적으로 정확히 절제"는 피험체에서 표적 조직, 예를 들면, 병원성 조직을 제거함을 의미하며, 상기 제거는 세포 수준에서 병원성 조직에 본질적으로 특이적이지만 인근의 "건강한" 조직을 최소한으로만 손상시키거나 손상시키지 않는다. 표적 조직의 제거는 아폽토시스(apoptosis), 괴사 및 세포 용해일 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 이러한 실시형태는, 예를 들면, 다중갈래 바늘과 같은 다중갈래 전달 장치를 사용하는 CT-유도 종양내 주사를 통한, 예를 들면, 본 발명의 씨. 노비 NT 포자의 정확한 전달에 의해 달성될 수 있다.
본 발명에서, 씨. 노비 NT 포자와 같은 씨. 노비 포자는 피험체, 예를 들면, 사람 환자에게 임의의 의학적으로 적절한 방식으로 종양 내로 전달된다. 예를 들면, 씨. 노비 NT 포자는 종양상의 하나 이상의 부위에서 사용되는 단일 바늘을 통해 전달될 수 있다. 대안으로, 다중갈래 바늘과 같은 다중갈래 전달 비히클을 예를 들면, 씨. 노비 NT 포자를 종양으로 전달하는데 사용할 수 있다. 예를 들면, 포자는 종양의 하나 이상의 부위에서 동일한 깊이로 또는 다수의 깊이로 전달될 수 있다. 선택된 전달 비히클은 수동으로 조작될 수 있거나 전자적으로 제어될 수 있다. 전달 비히클은 수동으로 또는 원격 제어식 장치를 통해 종양 상에 또는 종양 내에 배치되고/되거나 재배치될 수 있고, 주사 부위의 가시화는 CT 영상화와 같은 당업계에 공지된 다양한 영상화 기술을 사용하여 증대시킬 수 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 다중갈래 전달 비히클은 예를 들면, 문헌[참조: McGuckin, Jr. et al.], 미국 특허 제6,905,480호 및 제7,331,947호(이들은 본원에 인용에 의해 포함된다)에 개시된 것들을 포함한다.
본 발명의 추가 실시형태는 사람에서 하나 이상의 부위로 전이된 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는 방법이다. 상기 방법은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 콜로니 형성 단위(CFU)를 포함하는 씨. 노비 NT CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함한다. 바람직하게는, 적어도 하나의 전이 부위는 본래 고형 종양에서 원위부에 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "전이" 및 이의 문법적 변형어는 신체의 본래 1차 영역으로부터 신체의 2차 영역으로의 병원성 세포, 즉 종양 세포의 확산을 의미한다. 전이는 본래 1차 종양 부위로부터의 거리에 따라서 부위적 또는 원위 전이일 수 있다. 전위가 부위적 전이인지 또는 원위 전이인지 여부는 의사에 의해 결정될 수 있다. 예를 들면, 뇌로 확산된 유방암은 원위 전이인 반면, 팔 림프절 아래로의 유방암 세포의 전이는 부위적 전이이다.
본 발명에서, 본원에 개시된 화합물 또는 조성물의 "유효량" 또는 "치료학적 유효량"은 피험체에게 투여시 본원에 기술된 바와 같은 유익한 또는 목적하는 결과를 초래하기에 충분한 상기 화합물 또는 조성물의 양이다. 유효 용량형, 투여 방식 및 용량은 본원에 개시된 바와 같거나 의료 전문가에 의해 변형된 바와 같다. 당업자는 용량이 투여 경로, 배출속도, 치료 기간, 투여되는 임의의 기타 약물의 정체(identity), 환자의 연령과 신장 및 의료 분야에 널리 공지된 유사 요인들에 따라서 달라질 것임을 이해하고 있다. 일반적으로, 본 발명에 따른 조성물의 적합한 용량은 조성물의 이러한 양일 것이며, 이는 목적하는 효과를 초래하기 위해 효과적인 최저 용량이다. 본 발명의 조성물의 유효 용량은 전술되어 있다. 게다가, 본 발명의 조성물은 다른 치료와 병용하여 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 및 임의로 하나 이상의 기타 화합물, 약물, 성분 및/또는 물질과 혼합된 하나 이상의 활성 성분을 포함한다. 선택된 투여 경로와 상관없이, 본 발명의 제제/화합물은 당업자에게 공지된 통상의 방법에 의해 약제학적으로 허용되는 단위 용량형으로 제형화된다[참조: 예를 들면, Remington, The Science and Practice of Pharmacy(21st Edition, Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA.)].
약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액은 당업계에 널리 공지되어 있고[참조: 예를 들면, Remington, The Science and Practice of Pharmacy(21st Edition, Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA.) 및 The National Formulary(American Pharmaceutical Association, Washington, D.C.)], 당(예: 락토즈, 슈크로즈, 만니톨 및 소르비톨), 전분, 셀룰로즈 제제, 인산칼슘(예: 인산이칼슘, 인산삼칼슘 및 인산수소칼슘), 나트륨 시트레이트, 물, 수용액(예: 염수, 염화나트륨 주사액, 링거주사액, 덱스트로즈 주사액, 덱스트로즈 및 염화나트륨 주사액, 락테이트화 링거 주사액), 알코올(예: 에틸 알코올, 프로필 알코올 및 벤질 알코올), 폴리올(예: 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜), 유기 에스테르(예: 에틸 올레에이트 및 트리글리세라이드), 생분해성 중합체(예: 폴리락티드-폴리글리콜라이드, 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)), 탄성 매트릭스, 리포좀, 미립구, 오일(예: 옥수수유, 배아유, 올리브유, 피마자유, 참기름, 면실유 및 땅콩유), 코코아 버터, 왁스(예: 좌제 왁스), 파라핀, 실리콘, 탈크 등을 포함한다. 본 발명에 따르는 단위 용량에서 사용되는 각각의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액은 제형의 다른 성분과 양립가능하고 피험체에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용가능"해야 한다. 선택된 용량형 및 의도된 투여 경로, 예를 들면, IT에 적합한 담체 또는 용액은 당업계에 널리 공지되어 있고, 선택된 용량형 및 투여 방법을 위한 허용가능한 담체 또는 용액은 당업계의 통상의 기술을 사용하여 결정할 수 있다.
본 발명의 단위 용량은 임의로, 약제학적 조성물에서 통상적으로 사용되는 추가의 성분 및/또는 물질을 함유할 수 있다. 이러한 성분 및 물질은 당업계에 널리 공지되어 있고 (1) 충전제 또는 증량제, 예를 들면, 전분, 락토즈, 슈크로즈, 글루코즈, 만니톨 및 규산; (2) 결합제, 예를 들면, 카복시메틸셀룰로즈, 알기네이트, 젤라틴, 폴리비닐 피롤리돈, 하이드록시프로필메틸 셀룰로즈, 슈크로즈 및 아카시아; (3) 보습제, 예를 들면, 글리세롤; (4) 붕해제, 예를 들면, 아가-아가, 탄산칼슘, 감자전분 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 실리케이트, 나트륨 전분 글리콜레이트, 가교결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로즈 및 탄산나트륨; (5) 용액 지연제, 예를 들면, 파라핀; (6) 흡수 가속화제, 예를 들면, 4급 암모늄 화합물; (7) 습윤제, 예를 들면, 세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트; (8) 흡수제, 예를 들면, 카올린 및 벤토나이트 점토; (9) 윤활제, 예를 들면, 탈크, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 고체 폴리에틸렌 글리콜 및 나트륨 라우릴 설페이트; (10) 현탁화제, 예를 들면, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 및 소르비탄 에스테르, 미정질 셀룰로즈, 알루미늄 메타하이드록사이드, 벤토나이트, 아가-아가 및 트라가칸트; (11) 완충제; (12) 부형제, 예를 들면, 락토즈, 유당, 폴리에틸렌 글리콜, 동물성 및 식물성 지방, 오일, 왁스, 파라핀, 코코아 버터, 전분, 트라가칸트, 셀룰로즈 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 탈크, 살리실레이트, 산화아연, 수산화알루미늄, 규산칼슘 및 폴리아미드 분말; (13) 불활성 희석제, 예를 들면, 물 또는 기타 용매; (14) 보존제; (15) 표면활성제; (16) 분산제; (17) 방출조절제 또는 흡수지연제, 예를 들면, 하이드록시프로필메틸 셀룰로즈, 기타 중합체 매트릭스, 생분해성 중합체, 리포좀, 미립구, 알루미늄 모노스테아레이트, 젤라틴 및 왁스; (18) 불투명제; (19) 보조제; (20) 습윤제; (21) 유화제 및 현탁화제; (22) 가용화제 및 유화제, 예를 들면, 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일(특히, 면실유, 땅콩유, 옥수수유, 배아유, 올리브유, 피마자유 및 참기름), 글리세롤 테트라하이드로푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르; (23) 추진제, 예를 들면, 클로로플루오로탄화수소 및 휘발성의 비치환된 탄화수소, 예를 들면, 부탄 및 프로판; (24) 항산화제; (25) 제형이 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되로록 하는 제제, 예를 들면, 당 및 염화나트륨; (26) 증점제; (27) 피복 물질, 예를 들면, 레시틴; 및 (28) 감미제, 풍미제, 착색제, 방향제 및 보존제를 포함한다. 각각의 이러한 성분 또는 물질은 제형의 다른 성분과 양립가능하고 피험체에게 해롭지 않다는 의미에서 "허용가능"해야 한다. 선택된 용량형 및 의도된 투여 경로에 적합한 성분 및 물질은 당업계에 널리 공지되어 있고, 선택된 용량형 및 투여 방법을 위한 허용가능한 성분 및 물질은 당업계의 통상의 기술을 사용하여 결정할 수 있다.
액상 용량형은 약제학적으로 허용되는 에멀젼, 마이크로에멜젼, 액제 및 좌제를 포함한다. 액상 용량형은 당업계에서 통상적으로 사용되는 적합한 불활성 희석제를 함유할 수 있다. 불활성 희석제 이외에도, 경구 조성물은 또한 보조제, 예를 들면, 습윤제, 유화제 및 현탁화제, 착색제 및 보존제를 함유할 수 있다. 현탁제는 현탁화제를 함유할 수 있다.
종양내 투여를 위한 용량형은 액제, 분산제, 현탁제 또는 에멀젼 또는 멸균 산제를 포함한다. 활성제(들)/화합물(들)은 멸균 조건하에 적합한 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합될 수 있다.
본 발명의 단위 용량은 대안적으로, 사용 직전에 멸균 주사액 또는 분산액으로 재구성될 수 있는 멸균 산제와 함께 하나 이상의 활성제, 예를 들면, 씨. 노비 CFU 또는 씨. 노비 NT 포자를 포함할 수 있으며, 이는 적합한 항산화제, 완충제, 제형이 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되도록 하는 용질, 또는 현탁화제 또는 증점제를 함유할 수 있다. 적절한 유동성은, 예를 들면, 피복 물질을 사용함에 의해, 분산제의 경우에 요구되는 입자 크기를 유지시킴에 의해 그리고 표면활성제를 사용함에 의해 유지시킬 수 있다. 이러한 조성물은 또한 적합한 보조제, 예를 들면, 습윤제, 유화제 및 분산제를 함유할 수 있다. 등장제를 포함하는 것이 또한 바람직할 수 있다. 또한, 흡수를 지연시키는 제제를 포함시켜 주사가능한 약제학적 형태의 흡수가 연장되도록 할 수 있다.
종양 내로 주사가능한 데포(depot) 형태는 생분해성 중합체 내에 활성 성분의 마이크로캡슐화된 매트릭스를 형성시킴으로써 제조할 수 있다. 활성 성분 대 중합체의 비 및 사용되는 특정 중합체의 성질에 따라서, 활성 성분의 방출 속도가 제어될 수 있다. 주사가능한 데포 제형은 또한 활성 제제를 신체 조직과 양립가능한 리포좀 또는 마이크로에멀젼 중에 포획시켜 제조한다.
상기 주지된 바와 같이, 제형은 단위-용량 또는 다중-용량 밀봉된 용기, 예를 들면, 앰풀 및 바이알 내에 제시될 수 있고, 사용 직전에 오로지 멸균 액상 담체, 예를 들면, 주사용수의 첨가만을 필요로 하는 동결건조된 상태로 저장할 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 전술한 유형의 멸균 산제, 과립제 및 정제로부터 제조될 수 있다.
하기 실시예는 본 발명의 방법을 추가로 설명하기 위해 제공된다. 하기 실시예는 오직 예시적이며 본 발명의 범주를 어떠한 방식으로든 제한하려는 것은 아니다.
실시예
실시예 1
방사선과 병용된 씨. 노비 NT의 정맥내(IV) 투약
외부 빔 방사선 치료 후에 자발적 종양을 앓는 개에서의 씨. 노비 NT 포자의 단일 IV 투약의 연구를 수행하였다.
씨. 노비 NT 포자의 제조 및 최종 제형화는 하기 과정에 따라서 존스 홉킨스 디벨롭먼트 래보러터리(Johns Hopkins Development laboratory)에 의해 수행되었다. 문헌[참조: Dang et al., 2001]에 따라 생성된 씨. 노비 NT 포자를 풍부한 포자형성 배지에 접종시키고 혐기성 챔버에서 17 내지 19일 동안 37℃에서 항온배양하였다. 포자를 순차적인 연속적 퍼콜(Percoll) 구배 원심분리에 이어서 광범위한 포스페이트 완충된 염수 세척에 의해 정제하였다. 포자를 2 내지 8℃에서 저장하였다. 포자를 수송 전에 제조하고 멸균 포스페이트 완충된 염수에 현탁시키고 50ml의 0.9% 염화나트륨에 희석시켰다.
씨. 노비 NT 포자를 50ml 염수 백(bag)에서 재구성하고 밤새 시험 부위로 전달하였다. 방사선량은 20회 분할로 전달되는 약 54gy이다: 씨. 노비 NT IV 주사 전에 11회 및 주사 후 9회. 씨. 노비 NT 포자는 체표면적에 기초하여 1×109개 포자/m2의 용량에서 단일 주사로서 투여하였다. 포자를 불침투성 후면을 갖는 흡수성 패드 상에서 주사기로 이전시켰다. 3원 정지콕(3-way stopcock)이 부착된 22 게이지 바늘을 상기 백으로 삽입하였다. 폐쇄된 화학요법 시스템(ONGUARD™, TEVA Medical Ltd.)의 수(male) 부분을 상기 정지콕상의 포트에 부착시켰다. 가능한 최대의 내용물을 상기 백으로부터 회수하여 상기 폐쇄된 시스템의 암(female) 부분이 부착된 60 입방 센티미터(cc) 주사기 내로 넣었다. 상기 포자를 폐쇄된 화학요법 시스템의 수 말단이 부착된 IV 카테터를 통해 15분에 걸쳐서 각 피험체에게 주사하였다. 주입에 이어서 10cc 염수로 플러싱(flush)하였다. 피험체를 주입 후 6시간 동안 다음과 같이 면멸히 모니터링하였다: 처음 60분 동안 매 15분마다 활력징후, 혈압 및 산소 포화도를 모니터링한 다음, 다음 120분 동안 매 60분마다 모니터링. 그 다음 총 6시간 동안 매 60분마다 점검을 수행하였다.
시험 피험체를 치료의 초기 3주 동안 입원시켰다: 방사선 치료를 위해 2주 및 씨. 노비 NT IV 치료에 따르는 1주. 처리 후 6개월까지 1개월째, 2개월째, 3개월째 및 6개월째에 후속적 추적조사 방문이 이루어졌다. 샘플 처리 스케쥴에 대해 표 1 및 2를 참조한다.
Figure pct00031
Figure pct00032
2012년 9월 10일자로, 5마리의 개들을 상기 방식으로 처리하였다. 5마리 중, 2마리에서는 농양이 발생하였고 1마리는 질환 안정(stable disease) 상태를 유지하였고 2마리는 사망하였거나 안락사시켰다. 농양이 발생한 2마리 시험 피험체는 도 1a 및 도 1b에 도시한 바와 같이 처리 전반에 걸쳐서 사진을 촬영하였다.
도 1a는 처리 과정에 걸쳐서 우측 원위 요골/척골상에 위치한 개 골육종을 도시한다. 시험 피험체 사샤는 3일째에 열 및 부기를 나타냈고 6일째에 농양 파열을 나타냈다. 개방된 상처로 인해 항생제를 8일째에 시작하였고, 그 후에 괴사성 골 및 조직을 제거하였다. 사샤는 19회 방사선 치료 중 12회를 완료하였고, 2012년 9월 10일자로 치유 중이었으며 질환 안정 상태를 나타냈다.
도 1b는 처리 과정에 걸쳐서 우측 원위 요골/척골상에 위치한 개 골육종을 도시한다. 시험 피험체 샘슨은 5일째에 열 및 부기를 나타냈다. 6일째에, 농양을 절개하였고 항생제를 시작하였다. 샘슨은 20회 방사선 치료 중 14회를 완료하였고, 2012년 9월 10일자로 치유 중이었으며 질환 안정을 나타냈다.
나머지 피험체, 치퍼(Chipper), 베일리(Bailey) 및 루스킨(Ruskin)은 다양한 결과를 나타냈다. 치퍼는 좌측 하악골에 편평세포 암종 소견을 보였다. 처리 과정에 걸쳐서, 치퍼는 종양 부위에서 부기가 있었고 20회의 방사선 치료 중 20회를 받았다. 2012년 9월 10일자로 치퍼는 질환 안정 상태를 나타냈다.
다른 피험체 베일리는 좌측 액와부의 연조직 육종 소견을 보였다. 처리 동안, 베일리는 패혈증, 급성 신부전, 잠재적 파종 혈관내 응고 및 심정지를 경험하고 사망하였다. 그러나, 부검은 종양 내부의 모든 조직이 사멸하였고 종양 세포가 없었음을 보여주었다.
나머지 피험체, 루스킨은 우측 근위 상완골의 골육종을 나타냈다. 치료 동안 루스킨은 종양 부위의 부기가 있었고 20회의 방사선 치료 중 20회를 완료하였다. 그러나, 30일째에 종양 부위에서 다량의 화농성 물질이 생성되었고 루스킨은 신부전을 경험하였다. 소유주는 신장 상태가 개선되지 않아서 안락사시키기로 결정하였다. 2012년 9월 10일자로 부검 결과는 여전히 계류 중이었다.
실시예 2
IT-주사된 씨. 노비-UT 포자는 종양 조직을 특이적으로 표적화하고 래트의 생존을 연장시킨다 - 방법
세포주 및 조직 배양
렌티바이러스를 통해 루시퍼라제 작제물로 형질감염된 래트 F98 신경아교종 세포주를 10% 소 태아 혈청(FBS)과 1% 페니실린 및 스트렙토마이신이 보충된 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium; DMEM)에서 유지시켰다.
래트 실험
6주령 암컷 F344 피셔 래트(체중: 100 내지 150그램)을 국립 암 연구소로부터 구입하였다. 이식 절차를 위해, 암컷 F344 피셔 래트를 멸균 NaCl(0.9 %) 용액 중의 케타민 하이드로클로라이드(75mg/kg; 100mg/mL 케타민 HCI; Abbot Laboratories), 크실라진(7.5 mg/kg; 100 mg/mL Xyla-ject; Phoenix Pharmaceutical, Burlingame, CA) 및 에탄올(14.25 %)의 복강내(IP) 주사를 통해 마취시켰다. F98 신경아교종 세포(2×104)를 이전에 기술된 바와 같이[참조: Bai, et al., 2011] 천두공을 통해 브레그마에 대해 3 mm 외측 및 2 mm 전방에 위치한 우측 전두엽으로 정위적으로 이식하였다. 종양 크기를 종양 세포의 이식 후 12일째에 8mg/래트 D-루시페린 칼륨 염을 IP 주사하여 Xenogen 기구를 통해서 평가하였다. 이어서, 이전에 기술된 바와 같이[참조: Dang, et al., 2001, Bettegowda, et al., 2006] 생성시킨 3백만개 씨. 노비-NT 포자를 이전에 기술된 바와 동일한 좌표를 사용하여 두개내 종양 내로 정위적으로 주사하고, 래트를 처음 2일 동안 10 mg/kg/일의 IP 덱사메타손으로 처리하였다. 동물을 존스 홉킨스 동물 관리 및 사용 지침에 따라서 악화, 기면, 신경독성 또는 통증의 모든 징후에 대해 매일 관찰하였다. 곤란의 증상이 나타난 경우, 수분보충 및 독시사이클린(15mg/kg IP의 부하량에 이어서 유지로서 매 12시간마다 10 mg/kg)을 이용한 지지 요법을 시작하였고 7일의 기간 동안 지속하였다. 증상이 지속되고/되거나 쇠약을 초래한 경우, 빈사상태 동물을 안락사시켰다. IT 주사된 씨. 노비-NT 포자의 유효성을 케플란-마이어 생존 곡선 뿐만 종양 단면상의 나머지 종양 부하(tumor burden)에 의해 평가하였다. 나중을 위해, 뇌를 사후 수집하고 포름알데히드 속에 위치시키고 추가의 병리학적 연구를 위해 파라핀 속에 포매시켰다. 그램-염색된 슬라이드, 사프라닌으로 대조-염색된 슬라이드 및 H&E-슬라이드를 표준 절차 지침에 따라서 수득하였다.
통계 분석
케플란-마이어 생존 곡선을 작성하고 GraphPad Prism v.5.00(GraphPad Software, San Diego, CA)을 사용하여 만텔-콕스(Mantel-Cox) 시험으로 분석하였다.
실시예 3
IT-주사된 씨. 노비-NT 포자는 종양 조직을 특이적으로 표적화하고 래트의 생존을 연장시킨다 - 결과
진행성 신경아교종의 완벽한 수술적 절제는 거의 항상 불가능하며 이러한 종양은 냉혹하게 재발된다. 이러한 종양 유형이 일반적으로 전이되지는 않더라도, 이의 치료에 이용될 수 있는 매우 효과적인 의학적 요법이 없다. 따라서, 신경아교종은 씨. 노비-NT 포자의 국소 주사가 치료적으로 유용할 수 있는 종양 유형을 대표하는 것으로 보였다. 이러한 가능성을 평가하기 위해, F98 래트 신경아교종 세포를 6주령 F433 피셔 래트에 동소 이식하여, 빠른 속도로 사망에 이르게 하는 국소 침윤성 종양을 생성시켰다(도 2a). 이들 래트의 종양내로 씨. 노비-NT 포자를 주사한 결과, 이들 포자는 24시간 내에 발아되었고 24시간 내지 48시간에 걸쳐 종양 부하의 지표인 루시페라제 활성은 급격히 감소되었다(도 2b 및 2c). 씨. 노비-NT 발아는 영양 형태의 세균의 출현으로 입증되었다. 놀랍게도, 씨. 노비-NT는 단지 수 ㎛만 떨어진 인접 정상 세포를 피해서 정확히 종양으로 국소화되었다(도 3a 및 3b). 게다가, 이러한 영양형 세균은 정상 뇌 실질 내에 파묻힌 미세침윤성 종양 세포의 섬 내에서 특이적으로 증식하면서 동시에 이를 파괴시킬 수 있는 것으로 나타날 수 있다(도 4a 및 4b). 이러한 세균성 생물치료(biosurgery)는 이러한 극도로 공격적인 쥐 모델에서 유의적인 생존상 이점으로 이어졌다(도 2a, P-값 < 0.0001).
실시예 4
개 연조직 육종은 사람 종양과 유사하다 - 방법
서열결정을 위한 게놈 DNA 단리
IT 씨. 노비-NT 포자의 비교 연구에 참여한 개로부터의 게놈 DNA를 제조업자의 프로토콜에 따라서 QIAamp DNA 미니 키트(QIAGEN, Valencia, CA)를 사용하여 말초혈 림프구(PBL) 및 포르말린-고정된 파라핀-포매된 종양 조직으로부터 추출하였다.
서열결정 및 생물정보 분석
종양 및 정상 샘플의 게놈 정제, 라이브러리 작제, 엑솜 포획, 차세대 서열결정 및 생물정보 분석을 Personal Genome Diagnostics(PGDx, 메릴랜드주 볼티모어 소재)에서 수행하였다. 간략하게 언급하면, 종양 및 정상 샘플로부터의 게놈 DNA를 단편화하고 일루미나(Illumina) TruSeq 라이브러리 작제(일루미나, 캘리포니아주 샌 디에고 소재)를 위해 사용하였다. 엑손 영역을 제조업자의 지시(Agilent, 캘리포니아주 산타 클라라 소재)에 따라서 Agilent Canine All Exon 키트를 사용하여 용액 중에 포획하였다. 단편들의 각 말단으로부터 100개의 염기를 생성시키는 페어드-엔드(paired-end) 서열결정을 HiSeq 2000 게놈 분석기(일루미나, 캘리포니아주 샌 디에고 소재)를 사용하여 수행하였다. 태그를 CASAVA 1.7 소프트웨어(일루미나, 캘리포니아주 샌 디에고 소재)의 Eland 알고리즘을 사용하여 개 기준 서열(CanFam2.0)에 대해 정렬시켰다. 일루미나의 BaseCall 소프트웨어의 순결 필터를 사용하여 후속적 분석을 위한 서열 리드(sequence read)를 선택하였다. 이어서, CASAVA 1.7 소프트웨어(lllumina, San Diego, CA)의 ELAND 알고리즘을 적용하여 점 돌연변이와 작은 삽입 및 결실을 동정하였다. dbSNP131(CanFam2.0)에 기록된 공지된 다형성을 분석으로부터 제거하였다. 잠재적 체세포 돌연변이를 필터링하고 이전에 기술된 바와 같이[참조: Jones, et al., 2010] 육안으로 검사하였다.
실시예 5
개 연조직 육종은 사람 종양과 유사하다 - 결과
항암제의 전임상 동물 연구는 흔히 사람에서 관찰된 효과를 요약한 것이 아니다. 그러나, 개에서 임상적으로 사용된 치료제는 사람에게 유사한 독성 및 효과를 유도한다[참조: Paoloni, et al., 2008]. 개에서 조사되는 요법들은 전임상 동물 연구와 사람 임상 연구 간의 중요한 다리에 해당할 수 있다. 특히, 개 연조직 육종은 개의 많은 품종에서 흔하고 사람 연조직 육종의 특징과 매우 가까운 임상적 및 조직병리학적 특징을 갖기 때문에 훌륭한 모델이다[참조: Paoloni, et al., 2008, Vail, et al., 2000]. 그러나, 최근의 유전체학 진보가 사람들의 암 유전자학에 관한 지식을 현저하게 확장시켰으나, 개 암의 유전적 지형(genetic landscape)에 관해서는 알려진 것이 비교적 적다. 따라서, 개 종양이 사람의 종양과 유전적으로 유사한지 여부를 결정하기 위해, 비교 연구에 참여한 11마리의 개로부터의 종양의 엑솜 및 매치(match)된 정상 DNA를 서열결정하였다(도 5). 상기 분석은 32.9메가베이스(Mb)의 DNA를 포함하는 30,194개 명목 유전자(nominal gene)의 문의를 수반하였다. 개들 중 10마리는 연조직 육종(6마리 말초 신경초 종양)을 앓았으며 1마리는 연골모세포 골육종을 앓았다. 평균적으로, 생성된 서열의 15.7기가베이스(Gb)(범위: 8.1 내지 23.3Gb)가 게놈에 대해 맵핑되었고, 표적화된 영역 내의 염기의 92.1%가 종양 DNA 내의 적어도 10개의 독특한 리드에 의해 포괄되었다. 유사하게, 평균 16.3 Gb(범위: 14.6 내지 19.7 Gb)의 서열이 정상 DNA의 게놈에 대해 맵핑되었고, 이때 표적화된 염기의 93.6%가 적어도 10개의 독특한 리드에 의해 포괄되었다. 종양 내의 각각의 표적화된 염기에 대한 평균 포괄범위는 153배(범위: 73 내지 227배)였고 매치된 정상 샘플에서는 152배(범위: 130 내지 178배)였다.
엄격한 분석 기준을 사용하여 10개의 연조직 육종 중에서 156개의 체세포 돌연변이 및 28개의 체세포 카피수 변경을 동정하였다(표 3 및 도 6). 체세포 돌연변이의 범위는 종양당 평균 14개로서 0 내지 95였다. 연조직 육종에서 돌연변이 발생률은 낮았으며 평균적으로 Mb당 0.47(범위: Mb당 0.00 내지 2.89)였다. 95개의 체세포 변이(somatic alteration)가 있는 하나의 샘플을 제외하고, 사람 소아 횡문근양 종양[참조: Lee, et al., 2012] 및 다른 연조직 육종[참조: Joseph, et al., 2013]에서의 돌연변이율의 추정치와 유사하게, 돌연변이의 평균 발생율은 Mb당 0.21개의 돌연변이(범위: Mb당 0.00 내지 0.61)였다. 체세포 변이의 가장 흔한 유형은 C에서 T로의 편중(45.5%) 및 G에서 A로의 전이(34.0%; 표 4a 및 4b)를 갖는 미스센스 돌연변이었다.
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[표 4a]
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[표 4b]
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증폭 및 결실은 덜 흔하였으며 종양당 평균 3개(범위: 0 내지 17)였다(도 5). 10개의 연조직 육종 중 7개는 증폭 또는 결실을 함유하지 않았다. 연골모세포 골육종 엑솜은 연조직 육종과 유사하였고 14개의 체세포 돌연변이 및 4개의 증폭을 가졌다(표 3 및 도 6).
사람 종양에서 빈번하게 돌연변이되어 있는 4개의 종양 억제인자 유전자(NF1, MLL3, TP53 및 PTCH1)에서 단일 염기 치환이 동정되었다. 추가로, 사람 암에서 증폭되었지만 점-돌연변이되지 않은 것으로 나타난 종양유전자 MDM4는 하나의 개 종양에서 증폭된(그러나 점-돌연변이되지 않은) 것으로 확인되었다[참조: Lee, et al., 2012, Barretina, et al., 2010, Chmielecki, et al., 2013, Vogelstein, et al., 2013]. 하나 이상의 종양에서 돌연변이된 유전자는 오직 ATP7B(2가지 종양에서 미스센스 돌연변이) 및 AIG1(2가지 종양에서 증폭됨)이었다. 흥미롭게도, ATP7B에서의 돌연변이는 사람 지방육종에서도 확인되었다[참조: Joseph, et al., 2013]. 개 종양에서의 184개 체세포 돌연변이 중 22개는 이미 사람 연조직 육종에서 돌연변이되는 것으로 나타난 유전자에서 발생하였다(표 5).
Figure pct00055
상기 돌연변이들이 중요한 보존된 종양형성 경로를 의미하는 구동 돌연변이(driver mutation)를 나타내는지 여부를 결정하기 위해, 두 종 모두에서의 연조직 육종의 더 큰 연구가 요구될 것이다. 이와 상관없이, 개 종양의 유전적 지형은 유전자 변이의 수 및 돌연변이 범위의 측면에서 사람의 유전적 지형과 유사하였다. 구체적으로, 상기 유전적 지형은 개 종양이 사람에서의 유사 종양 유형보다 면역반응을 일으킬 가능성을 더 크게 만드는 매우 많은 수의 돌연변이를 가질 수 있다는 가능성을 배제한다.
실시예 6
씨. 노비 NT의 종양내(IT) 투여 - 연구 1 방법
본 발명의 방법의 안정성 및 효능을 조사하기 위해, 고형 종양이 자발적으로 발생한 16마리의 개에서 비교 연구를 수행하였다(표 6)
Figure pct00056
Figure pct00057
개들은 동물 임상조사 종양학 네트워크(Animal Clinical Investigation oncology network)(ACI, 워싱턴 DC)에 참여하는 다수의 지역에서 등록하였고, 등록 전에 소유주(들)로부터 서면 동의서를 입수하였다. 치료, 관리 및 연구 평가는 면허가 있는 수의 종양전문가에 의해 감독되었다. 자발적 고형 종양, 바람직하게는 표준 요법에 실패하였거나 또는 소유주(들)가 이러한 표준 요법을 거부한 연조직 육종이 있는 의뢰인 소유의 개들을 등록하였다. 참여는 최장 직경이 1 내지 7cm인 표적 병변을 갖는 종양 보유 개들로 제한되었다. 농양 발생이 파국적일 수 있는(예를 들면, 뇌로 확장된 비강 종양 또는 심각한 폐 전이성 질환) 영역에 위치하는 종양을 갖는 개들은 본 연구에서 배제되었다.
씨. 노비-NT 포자로 처리한 후 7일 이내에 전신 항생제 요법을 요구하거나 씨. 노비-NT 포자로 처리한 후 21일 내에 암 요법(화학요법, 방사선 요법 및 면역요법)을 요구하는 활발한 세균 감염 증거가 있는 개들은 부적격하였다. 개들은 0 또는 1의 활동 점수(표 7)를 갖고 등록을 위해 전체 연구 기간 동안 이용될 수 있어야 하는 것이 요구되었다. 항암제의 동시 사용 및 다른 임상 시험에의 참여는 금지되었다. 임신하였거나 임신할 가능성이 있는 개들은 본 연구에 포함시키지 않았다. 또한, 전체 연구 기간 동안 이용되지 못할 수도 있는 개들 및 조사자 또는 의료책임자에 의해 연구 등록에 부적합한 것으로 고려된 개들은 본 연구에 포함시키지 않았다.
활동 상태 평가
점수 설명
0 정상적 활동
1 제한된 활동; 준-질환(pre-disease) 상태로 인해 감소된 활동
2 저하됨; 오직 생명 활동만을 위한 보행, 허용되는 구역에서 지속적으로 배변 및 소변을 볼 수 있음
3 불능: 억지로 먹이를 먹여야만 하고/하거나 소변 및 배변이 허용되는 구역에 국한될 수 없음
4 사망
검사 방문 동안, 각 개에게 5자리 숫자 코드로 이루어진 고유한 연구 개 식별 번호(이는 스크리닝 개 번호의 순서대로 연속적이었다)가 배정되었다. 처음 2자리는 연구 지역(01 내지 99)을 나타냈고, 중간 자리는 연구 'R'을 나타냈고, 마지막 2자리는 연구 지역 내의 연구 개 번호(01 내지 99)를 기술하였다. 예를 들면, 지역 9에 등록된 11번째 개는 연구 개 번호 09-R11로 배정되었다. 연구 개 번호는 개들이 정해진 연구 지역에서 등록되도록 하기 위해 연대순으로 배정되었다. 개는 포함 및 배제 기준을 만족시킨 경우에 본 연구에서 등록된 것으로 고려되었다.
육안 병리학 및 조직병리학 검사를 산업 185에 관한 식품의약청의 CVM 지침에 따라서 수행하였다. 부검시, 다음의 조직들(표 8)을 육안 병리학 및 조직병리학을 위해 평가하였고 부검 보고서에 기록하였다. 뇌, 심장, 폐, 간, 비장, 신장, 근육, 뼈, 소장, 대장 및 육안적 이상이 있는 임의의 조직의 샘플을 미생물학을 위해 수거하였다.
육안 병리학 및 조직병리학에 의해 검사될 조직의 목록
뇌하수체 뇌 뼈 및 골수
갑상선 척수 골수 도말표본
부갑상선 안구 비장
부신 폐 위장
췌장 근육 십이지장
난소 유선 공장
자궁 간 회장
고환 담낭 결장
전립선 신장 맹장
부고환 방광 흉선
심장 림프절 주사 부위
심실 피부 임의의 비정상 조직
모든 개들은 임상적 관찰을 위해 0일(D0)부터 4일(D4)까지 및 이어서 임의로(조사자의 재량으로) 각각의 후속적 치료 후 24시간 내지 48시간 동안 입원시켰다. 씨. 노비 NT 치료 후 입원 동안 모든 연구 개들에게 수액을 투여하였다. 투약 당일에, 모든 개들에게 2시간 동안 4 ml/kg/h으로 정맥내(IV) 결정질을 투여하였다. 개들을 각각의 씨. 노비-NT 포자의 IT 주사 후 6시간 동안 면밀히 모니터링하였다. 다음 방문시(4일 후)에, 모든 개들에게 피하(SQ) 결정질을 20 ml/kg으로 투여하였다. 개가 입원하여 SQ 결정질이 투여될 예정이었던 날에 IV 결정질을 투여받은 경우, SQ를 투여할 필요가 없었다.
연구 방문 및 사건은 4회 투약 치료 용법의 예로서 표 9에 요약되어 있다. 투약 간격은 개가 반복 투약으로 처리될 경우 주 1회인 것으로 제시되었다. 유해사례 또는 조사자의 결정으로 인해 연구 과정 동안에 반복 투약을 위한 처리 지연이 발생하였다.
Figure pct00058
Figure pct00059
9마리의 중성화된 수컷, 1마리의 완전한(온전한) 수컷 및 6마리의 중성화된 암컷의 16마리 개들이 본 연구에 등록되었다(표 6). 이들의 통계자료 및 종양 특징은 표 6에 기재되어 있다. 등록된 환자견들은 다양한 품종, 체중 및 연령을 나타냈다. 환자견들은 이전에 다양한 조직학적 기원의 천연 발생 암으로 진단되었다: 13마리 개들은 연조직 육종(81.3%)으로 진단되었고, 1마리는 골육종(6.3%)으로 진단되었고, 1마리는 흑색종(6.3%)으로 진단되었고, 1마리는 비만세포 종양(6.3%)으로 진단되었다. 13개의 연조직 육종 중에서, 조직학적 아형은 11마리에 대해 입수될 수 있었으며 4개의 혈관주위세포종(30.8%), 3개의 말초 신경초 종양(23.1%), 1개의 윤활세포 육종(7.7%), 1개의 점액육종(7.7%), 1개의 횡문근육종(7.7%) 및 1개의 섬유육종(7.7%)을 포함하였다. 본 시험에서 개들의 평균 체중은 29.4kg(범위 8.1 내지 44.3 kg)이었고 이들의 평균 연령은 10.9세(범위: 7.2 내지 14.3세)였다. 13마리 개들은 연조직 육종으로 진단되었고, 각각 1마리씩 골육종, 악성 흑색종 및 비만세포 종양으로 진단되었다. 13개의 연조직 육종 중 6개를 면역조직화학(IHC)을 위해 이용할 수 있었다. 모든 6마리는 S100에 대해 양성이었고 평활근 액틴에 대해 음성이었는데, 이는 말초 신경초 종양이라 지칭되는 육종 아형의 진단을 시사한다. 종양 중 7개는 I등급이었고 5개는 II 등급이었고 4개는 III 등급이었다. 8마리 개들은 암으로 인해 이전에 외과적 요법을 받았었다.
자발적 개 종양에서 씨. 노비-NT 포자의 제조 및 IT 주사
비교 개 연구에서 사용하기 위한 씨. 노비-NT 포자는 이전에 기술된 바와 같이[참조: Dang, et al., 2001, Bettegowda, et al., 2006] 생성시켰다. 간략하게 언급하면, 성숙한 포자의 최대 수율을 보장하기 위해 세균을 적어도 2주 동안 포자형성 배지에서 배양하였다. 성숙한 포자를 2가지의 순차적인 연속적 퍼콜 구배에 이어서 세척 및 PBS 중 재현탁을 통해 정제하였다. 최종 생성물의 멸균성 시험을 생성물을 대두-카제인 분해 배지 및 티오글리콜레이트 배지에서 FDA 21CFR610.12 지침(Nelson Laboratories, 유타주 솔트 레이크 시티)에 따라서 배양함으로써 수행하였다. 포자가 미리 결정된 생존력 기준을 충족하는 것을 보장하기 위해 발아 효율 검정을 5% 말 혈액을 함유한 부르셀라(Brucella) 아가에서 혐기성 조건하에 수행하였다. 포자를 O-링 밀봉된 스크류 캡을 갖는 멸균 1.8mL 냉동바이알(cryovial)(Simport, 캐나다 벨로에일) 내에 1000㎕의 용적 및 1×109개 포자/mL의 농도로 포장해 넣었다. 씨. 노비-NT 냉동바이알을 2 내지 8℃에서 저장하였다. 투약을 위해, 포자 모액의 0.4 mL 분취액을 0.5mL 냉동바이알 내로 포장해 넣었다. 투약 후, 냉동바이알 및 사용되지 않은 씨. 노비-NT 포자를 생물안정성 수준 2 물질의 처리에 관한 해당 규정에 따라서 폐기하였다. IT 주사 전에, 포자를 1mL 주사기내로 회수해 넣기 전에 총 3회로 10초 동안 최대 속도로 혼합하면서 와류를 사용하여 재현탁시켰다. 주사 부위를 무균성으로 준비시켰다. 가능하다면, 초음파 또는 컴퓨터 단층촬영술(CT)을 사용하여 종양의 괴사성 영역을 동정하였다. 괴사성 영역이 동정되지 않는 경우, 주사를 종양의 중심을 향하도록 하였다. 바늘을 일단 미리 정해진 영역에 삽입하고 100㎕의 포자 현탁액(1×108 씨. 노비-NT 포자)을 일정한 압력으로 분배하였다. 주사 바늘을 천천히 제거하고 주사 부위를 멸균시켰다. 모든 개들에게 100㎕ 염수 중의 1×108개 포자의 IT 용량을 적어도 1회 사이클로 투여하였다(생물치료): 3마리 개들은 단일 치료 사이클을 받았고, 13마리 개들은 1회 내지 4회의 치료 사이클을 받았다. 개들은 사이클 간에 1주 간격으로 최대 4회 사이클의 생물치료를 받을 수 있다. 처리된 개들은 처음 IT 주사 후 적어도 90일 동안 추적조사하였다. 가능하다면 질환 진행 및 생존에 대한 연장된 추적조사가 보증되었다. 독성 또는 질환 진행의 경우 연구로부터의 조기 철수가 허용되었다.
연구 평가를 표 9에 기술된 바와 같이 수행하였다. 스크리닝 전 평가를 생물치료의 1차 사이클 1 내지 14일 전에 실시하였다. 개는 연구 동안 입원 환자견 및 외래 환자견 둘다로서 주기적으로 모니터링하였다. 실험실 샘플을 표 9에 정의된 바와 같이 취하였고, 이는 온혈구 계산, 혈청 생화학, 프로트롬빈 시간, 부분 트롬보플라스틴 시간 및 뇨분석을 포함한다. 영상화는 스크리닝시 수행하였고 국부 CT, 흉부 방사선촬영술 및 복부 초음파촬영술을 포함하였다. 추가의 영상화를 조사자의 재량에 따라 연구 동안 실시할 수 있다.
유해사례를, 가능한 한, 유해사례에 대한 수의과 협력 종양학-공통 용어 기준(Veterinary Co-operative Oncology Group - Common Terminology Criteria for Adverse Events; VCOG-CTCAE) v1.0[참조: Veterinary Co-operative Oncology Group, 2004]과 함께 약물 관련 문제에 대한 수의학 사전(Veterinary Dictionary for Drug Related Affairs; VeDDRA) rev.4[참조: European Medicines Agency, 2012]으로부터의 용어를 사용하여 평가하였다. 씨. 노비-NT 발아와 관련된 유해사례(표적 병변 반응)에 대한 용어는 표 10에 정의되어 있다. 적절한 VeDDRA 또는 표적 병변 반응 용어 부재하의 임상 관찰결과는 별도로 비부호화 징후로서 분류되었다(표 11). 씨. 노비-NT 요법과의 관련성은 조사자에게 보고함으로써 결정하였다.
씨. 노비-NT 활성과 연관된 종양 유해사례를 기술하기 위한 부호화된 용어
기관계 분류
(System Organ Class; SOC) 용어		 고수준 용어
(High Level Term; HLT)		 권장 용어
(Preferred Term; PT)		 저수준 용어
(Low Level Term; LLT)
표적 병변 반응 종양 염증 종양 농양 종양 농양
표적 병변 반응 종양 염증 종양 농양 종양 폐쇄성 상처
표적 병변 반응 종양 염증 종양 농양 종양 악취성
표적 병변 반응 종양 염증 종양 농양 종양 괴사
표적 병변 반응 종양 염증 종양 농양 종양 폐쇄성 상처
표적 병변 반응 종양 염증 종양 농양 종양 조직 손실
표적 병변 반응 종양 염증 종양 농양 종양 조직 딱지형성
표적 병변 반응 종양 염증 종양 농양 종양 궤양
표적 병변 반응 종양 염증 종양 경도(硬度) 변화 종양 경도 변화
표적 병변 반응 종양 염증 종양 경도 변화 종양 보다 단단한
표적 병변 반응 종양 염증 종양 경도 변화 종양 보다 무른
표적 병변 반응 종양 염증 종양 분비물 종양 출혈
표적 병변 반응 종양 염증 종양 분비물 종양 출혈성 분비물
표적 병변 반응 종양 염증 종양 분비물 종양 분비물
표적 병변 반응 종양 염증 종양 분비물 종양 화농성 분비물
표적 병변 반응 종양 염증 종양 분비물 종양 장액성 분비물
표적 병변 반응 종양 염증 종양 염증 증가된 종양 열
표적 병변 반응 종양 염증 종양 염증 증가된 종양 온기
표적 병변 반응 종양 염증 종양 염증 종양 부종성
표적 병변 반응 종양 염증 종양 염증 종양 염증
표적 병변 반응 종양 염증 종양 염증 종양 염증 반응
표적 병변 반응 종양 염증 종양 염증 종양 가려움
표적 병변 반응 종양 염증 종양 염증 종양 종창성
표적 병변 반응 종양 염증 종양 통증 종양 통증
표적 병변 반응 종양 염증 종양 피부 장애 종양 타박상
표적 병변 반응 종양 염증 종양 피부 장애 종양 변색
표적 병변 반응 종양 염증 종양 피부 장애 종양 홍반
표적 병변 반응 종양 염증 종양 피부 장애 종양 점상출혈
표적 병변 반응 종양 염증 기타 종양 장애 기타 종양 장애
표적 병변 반응 종양 염증 종양 통증 종양 불쾌
VeDDRA 에서 근본적인 임상적 실체(clinical entity) 또는 씨. 노비-NT 관련 표적 병변 반응에 기인하지 않는 징후
유해사례
(권장 용어)		 G-I G-II G-III G-IV (AE가 적어도 1회 발생 한) 개의 수 총계
비부호화 징후 15 2 1a 5 18
a 등급 IV 혈중 호산구의 감소가 조사자에 의해 보고되었다.
표적(주사된) 병변의 최장 직경 종양은 처리 후 0일째, 7일째, 14일째, 21일째, 60일째 및 90일째에 측정하였다(표 9). 비-표적 병변 및 새로운 병변은 기록하였지만 측정하지는 않았다. 최상의 전체 표적 반응을 21일째 연구 방문시에 또는 이후에 평가하였다: 완전 반응(CR)은 표적 병변의 완벽한 소실로서 정의되었고; 부분 반응(PR)은 표적 병변의 최장 직경의 적어도 30% 감소로서 정의되었고; 표적 질환 진행(progressive target disease)(PD)은 표적 병변의 최장 직경의 적어도 20% 증가 또는 새로운 비표적 병변의 출현으로서 정의되었다. 질환 안정(stable disease)(SD)은 CR, PR 또는 PD로서 정의되기에 불충분한 표적 병변의 최장 직경 감소 또는 증가로서 정의되었다. 씨. 노비-NT 관련 농양의 경우, 괴사성 조직의 내과적 또는 외과적 괴사조직제거는 조사자의 재량에 따랐다.
외과적 샘플 및 부검의 평가는 면허가 있는 수의 병리학자에 의해 실시되었다. 조직 검체를 10% 중성 완충 포르말린 속에 고정시키고 파라핀 속에 포매시켰다. H&E로 염색된 슬라이드 또는 그램 염색된 슬라이드를 표준 과정 지침에 따라서 평가용으로 제조하였다. 면역조직화학(IHC)을 위해, 포르말린-고정되고 파라핀 포매된 종양 조직을 5㎛로 절단하고 크실렌 속에서 탈파라핀화하고 등급화된 알코올을 통해서 재수화시켰다. 항원 복구(antigen retrieval)를 비차폐 용액(unmasking solution)(Vector Laboratories, 캘리포니아주 벌링게임)을 사용하여 수행하였다. 1차 항체 S100(DAKO, 캘리포니아주 카핀테리아) 및 항-평활근 액틴(DAKO, 캘리포니아주 카핀테리아)는 1:100에서 사용하였다. DAB로 표지된 2차 항체(Vector Laboratories, 캘리포니아주 벌링게임)는 1:500에서 사용하였다. 절편을 ABC 시약(Vector Laboratories, 캘리포니아주 벌링게임)과 함께 항온배양하고 헤마톡실린으로 대조염색하였다. 종양 등급은 공개된 기준[참조: Dennis, et al., 2011 , Patnaik, et al., 1984, Smedley, et al., 2011, Sabattini, et al., 2014]에 근거하여 각각에게 배정하였다.
실시예 7
씨. 노비-NT의 종양내(IT) 투여 - 연구 1 결과
모든 개들은 생물치료를 적어도 1회 사이클로 받았으며, 계획된 최대 64회 중 53회 사이클을 받았다. 대다수의 개들, 즉 16마리 중 10마리는 의도된 4회 사이클을 받았다. 생물치료의 사이클은 통상적으로 1주 간격이었다. 위약 없는 대조 또는 차폐가 사용되었다.
1차 사이클 후 조기 종양 반응, 독성 또는 질환 진행을 나타내는 개들의 경우, 후속적 사이클은 중단하였다. 가장 흔한 유해사례는 씨. 노비-NT 포자 주사 부위에서의 국소 감염과 일치하였으며 열(17회 발생), 종양 염증(12회 발생), 종양 농양(10회 발생), 식욕부진(9회 발생) 및 기면(6회 발생)(표 12)을 포함하였다. 주사된 표적 병변 부위에서의 염증 반응의 임상 징후는 종양 염증(12/14), 종양 농양(7/14), 종양 통증(5/14) 및 종양 분비물(4/14)(표 13)을 포함하여 16마리 개 중 14마리에서 관찰되었다(87.5%).
Figure pct00060
Figure pct00061
Figure pct00062
조기 발병 유해사례
조기 발병 유해사례는 1차 치료 사이클(13마리 개) 또는 단일 치료 사이클(3마리 개) 후 처음 7일 이내에 발생한 유해사례를 지칭한다. 다양한 유해사례(AE) 소견이 다수의 사례에서 주지되었다. 1차 치료 사이클(다수의 사이클로 처리된 13마리 개) 또는 단일 치료 사이클(오직 하나의 사이클로만 처리된 3마리 개) 후 7일 이내에 발생한 조기 발병 유해사례는 표 14에 요약되어 있다.
Figure pct00063
공통의 조기 발병 유해사례 소견은 표적 종양 병변 반응, 전신 징후 및 증상의 변경 및 혈액 및 림프계 이상을 포함하였다. 대다수의 조기 발병 유해사례는 경도(輕度) 내지 중등도(등급 I 내지 II)였으며, 종양 염증, 식욕부진, 종양 부종 및 열은 가장 흔히 관찰된 사례였다. 등급 III 종양 농양 및 등급 III 종양 염증은 두 사례(10-R02 및 16-R03)에서 주지되었다. 조기 발병 유해사례 소견은 씨. 노비-NT 치료법의 작용 기전에서 비롯되는 예상된 종양 염증 반응과 일치하는 것으로 보인다.
후기 발병 유해사례
3마리 개의 서브세트는 (2012년 12월 2일자로) 오직 단일 치료 사이클만을 받았다. 후기 발병 유해사례는 단일 치료 사이클 후 7일 후에 발생하는 유해사례를 지칭하며 3마리 개(04-R04, 10-R02 및 11-R01)에 대해 표 15에 요약되어 있다. 대다수의 후기 발병 유해사례는 경도 내지 중등도(등급 I 내지 II)였으며, 12가지의 후기 발병 소견 중 11가지는 단일 피험체 04-R04에서 주지되었다. 상기 개는 기준선에서의 LD 측정치가 94.5 mm인 우측 앞다리 상의 연골모세포 골육종 소견을 보였다(CT 측정치는 입수불가능). 질환 진행으로 인해 씨. 노비-NT 포자 주사 후 20일째에 절단을 실시하였다. 다른 두 피험체는 단일 치료 사이클에 대해 우수한 내용성을 나타냈다. 이들의 후기 발병 AE는 오직 미열(등급 I)로만 한정되었다.
Figure pct00064
요약하면, 1×108개 포자의 씨. 노비-NT IT 투여의 1회 치료 사이클 후에 관찰된 안정성 프로파일은 적합한 내용성(tolerability)을 시사하였다. 조기 발병 및 후기 발병 유해사례는 씨. 노비-NT의 작용 기전에서 비롯되는 예상된 종양 염증 반응과 일치하였다. 유해사례는 본원에 개시된 바와 같이 모니터링하고 관리하였다.
IT 투여에 의한 씨. 노비-NT의 다수의 치료 사이클을 받은 경우에 주지된 유해사례는 임의의 등급의 유해사례(AE)에 대해서는 표 9에 요약되어 있고 등급 III 이상 AE에 대해서는 표 10에 요악되어 있다.
다수의 치료 사이클 후의 유해사례 소견의 다양성 및 발생율은 단일 치료 사이클 후에 관찰된 것과 대체적으로 유사하였다. 마찬가지로, 유해사례의 발병은 단일 치료 사이클 후에 관찰된 것과 크게 일치하는 것으로 보였다: 모든 사례에서 169가지의 소견 중에서, 오직 30가지만이 사전 투약한지 7일 이상 후에 주지되었다. 유사하게, 종양 염증, 식욕부진 및 열은 가장 흔히 관찰된 유해사례였다. 1가지 이상의 사례에서 발생된 유해사례는 표적 병변 반응, 전신 징후 및 증상의 변경, 혈액 및 림프계 이상, 파행, 고혈압, 림프절병증, 설사 및 새로운 종괴를 포함하였다. 대다수(약 95%)의 소견은 강도가 경도 내지 중등도(등급 I 내지 II)였다.
중증 유해사례
중증 유해사례(등급 III 이상)는 5가지 사례에서 주지되었다(표 16). 피험체 04-R05는 등급 III 호중구 계수 증가를 경험하였다. 피험체 10-R01은 등급 III 빈혈, 기면, 근육 약화, 근염, 통증 및 횡와를 경험하였다. 광범위한 전이성 질환은 기준선에서는 관찰되지 않았으나 60일째에 사례 10-R01의 부검 후에 진단되었다; 질환 진행은 이러한 사례에서 유해사례 소견에 영향을 미쳤다. 피험체 10-R02는 등급 III 종양 농양을 경험하였다. 피험체 11-R01은 1차 치료 사이클 93일 후에 등급 IV 혈소판 계수 감소를 경험하였으나, 이는 중재 없이 해소되었다. 증상들은 93일째 방문 21일 후에 어떠한 의학적 치료 없이 해소되었다. 특히, 상기 피험체는 또한 스크리닝 및 기준선에서 각각 등급 I 및 등급 III 혈소판감소증 증상을 나타냈다. 피험체 16-R03은 등급 III 설사, 파행 및 종양 염증을 경험하였으며 이는 1주 이내에 해소되었다.
Figure pct00065
2마리 개는 연구 동안 새로운 종괴를 나타냈다. 직장 종괴가 82일째에 피험체 04-R04에서 동정되었으며 T1의 용해성 척추 병변이 9일째에 피험체 10-R01에서 동정되었다. 이러한 소견들은 전이 또는 2차의 분명한 병리상태를 나타낼 수 있다. 두 사례 모두에서, 씨. 노비-NT 요법과의 관련성은 불분명하였다.
씨. 노비-NT 요법으로부터의 반응
요약하면, 반려견에서 최대 4회 사이클 동안의 요법 사이클당 1×108개 포자의 용량에서의 씨. 노비-NT IT 치료는 내용성이 우수하다. 등급 III보다 큰, 가능하게도 또는 아마도 약물과 관련된 대부분의 유해사례는 1주일 이내에 해소되었다. 예상된 유해사례는 대체로 종양내 요법 후의 국소 염증성 변화와 연관되었으며 일반적으로 1주일 이내에 해소되었다. 유해사례 및 중증 유해사례는 본원에 개시된 바와 같이 효과적으로 모니터링되고 관리되었다.
씨. 노비-NT IT 투여가 생물학적 활성의 폭넓은 증거를 동반한다는 점을 고려하여, 1차 종양 반응의 예비평가를 RECIST 1.1을 사용하여 수행하였고 이는 하기 표 17에 요약되어 있다.
Figure pct00066
개들을 연구 21일째에 또는 이후에 최대 반응에 대해 평가하였다. 3마리는 요법에 대해 완전 반응(CR)을 나타냈고, 3마리는 부분 반응(PR)을 나타냈고, 5마리는 질환 안정(SD)을 나타냈고, 3마리는 질환 진행(PD)을 나타냈고, 2마리(04-R04 및 04-R08)는 주사된 종양이 21일째 전에 수술에 의해 절제되었기 때문에 반응에 대해 평가될 수 없었다. 생물치료에 대한 객관적 반응율은 37.5%였다(16마리 개 중 6마리; 95% 신뢰 구간: 15.2 내지 64.6%). 종양 농양 및 반응은 생물치료의 1 내지 4회 사이클 후에 발생되었다. 개 11-R01은 단일 사이클 후 PR을 경험하였고, 04-R03은 3회 사이클 CR을 나타냈고, 개 04-R02 및 04-R05는 4회 사이클 후 PR을 나타낸 한편, 04-R01 및 04-R06은 4회 사이클 후 CR을 나타냈다. 도 7a 내지 도 7f 및 도 8a 내지 도 8f는 각각 부분 반응(11-R01) 및 완전 반응(04-R03)과 함께 개에서의 대표적 변화를 도시한다. 농양은 괴사조직제거에 의해 해소되었으며, 상처 치유는 2 내지 4주 후에 완료되었다. 그러나, 현성(overt) 농양 형성은 항상 객관적 반응 후에 관찰되었다. 개 04-R01 및 04-R06은 생물치료를 4회 사이클로 받았으며 연구 방문 21일째까지 종양 염증이 관찰되었으며 농양은 관찰되지 않았다. 그렇다 해도, 완전 반응이 각각 42일째(계획되지 않은 방문) 및 60일째 연구 방문시에 이들 2마리 개에서 주지되었다.
각각의 피험체는 하기에서 보다 상세히 논의된다.
10세의 중성화된 수컷 말티즈 앤디(Andy)(11-R01, 도 7a 내지 도 7f)는 좌측 귓바퀴상에 등급 II 연조직 육종 소견을 보였다. 상기 개의 치료이력은 등록 전의 수술을 포함하였다. 상기 개는 2012년 6월 18일자로 씨. 노비-NT 포자의 단일 용량을 투여받았다. 앤디는 1일째(2012년 6월 19일)에 등급 I 종양 부기를 경험하였다. 농양 형성은 종양의 궤양화 및 화농성 괴사성 물질의 분비물을 초래하였다. 생성된 상처는 합병증 없이 치유되었다. 연장된 추적조사 기간 동안, 등급 IV 혈소판감소증이 93일째(2012년 9월 19일)에 관찰되었으며, 이는 수주 뒤에 통상의 추적조사 방문시에 해소되었다. 약 8mm의 두꺼워진 피부상 영역이 상처 치유 후에 남았다(연구 과정에 걸친 종양 측정치의 시간 경과에 대해 도 9를 참조한다). 이는 흉터 조직 또는 잔류 종양을 나타낼 수 있었다.
12세의 중성화된 암컷 라브라도 리트리버 몰리(Molly)(11-R02)는 좌측 후슬상에 등급 II 연조직 육종 소견을 보였다. 상기 개는 등록 전에 치료이력이 없었다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자의 3회 사이클에 이어서, 3차 IT 투약한지 7일 후에 1×108 씨. 노비-NT 포자의 1회의 IV 용량을 투여받았다. 상기 개의 1차, 2차 및 3차 IT 투약은 각각 2012년 7월 11, 2012년 7월 18일 및 2012년 7월 25일에 이루어졌다. 씨. 노비-NT 포자의 단일 IV 용량은 이전의 IT 투약시 관찰된 생물학적 활성 결여로 인해 2012년 8월 1일에 투여되었다. 주지된 유일한 유해사례는 3차 IT 투약 후의 등급 I 고혈압이었다. 고혈압은 일시적이고 자가-제한적이었으며, 1시간 이내에 해소되었다. 몰리의 종양은 조직학적 분석을 위해 30일째(2012년 8월 10일)에 수술에 의해 제거하였다. 종괴는 괴사 및 염증 영역을 갖는 연조직 육종인 것으로 확인되었다. 세균은 그램 염색으로 존재하지 않았으며, 이는 상기 사례에서 생물학적 활성이 결여되었음을 뒷받침한다.
13세의 중성화된 수컷 골든 리트리버 리키(Ricky)(10-R01)는 경구 흑색종 소견을 보였다. 상기 개의 치료이력은 등록 전의 수술을 포함하였다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 2회 사이클로 투여받았다. 씨. 노비-NT IT 치료는 2012년 8월 2일 및 2012년 8월 9일에 실시되었다. 9일째(2012년 8월 11일)에, 리키는 2차 치료 사이클 2일 후에 경부 통증 및 뒷다리 신경 결손이 갑작스럽게 발병하였다. 등급 III 빈혈도 주지되었다. MRI를 수행하였고 경부 지방조직염 및 경부 척수 압박 가능성 있는 것으로 밝혀졌다. 코르티코스테로이드 및 위장관 보호제를 투여하였고, 리키는 3일 후에 회복되었다. 경구 흑색종의 변화는 주지되지 않았고 추가의 씨. 노비-NT 치료는 실시되지 않았다. 21일째(2012년 8월 23일)에, MRI를 수행하였고 이전에 기술된 지방조직염이 개선된 것으로 나타났다; 그러나, 전이성 폐결절이 흉곽 CT상에서 주지되었다. 경구 흑색종의 절제를 수행하였다. 사람 티로시나제 흑색종 백신을 2012년 8월 30일자로 시작하였다. 42일째(2012년 9월 13일)에, 리키는 (코르티코스테로이드를 중단한지 2주 후 및) 흑색종 백신을 투여받은지 2주 후 재발성 경부 통증 및 앞다리 통증 소견을 보였다. 통증 의약에 의한 의학적 관리는 4일 후 개선을 야기하지 못하였으며, 따라서 코르티코스테로이드를 재개하였다. 46일째에, 등급 III 빈혈 및 상승된 BUN이 주지되었다. 추정상의 위장관 출혈은 위장관 보호제로 치료하였다. 60일째에, 리키는 의식을 잃고 쓰러졌으며 토혈증이 발생하였다. 인도적 안락사를 수행하였다. 부검에 의해 악하 림프절, 종격 림프절, 장간막 림프절, 신장 및 경추 영역의 척수주위 지방을 포함하는 파종 전이성 흑색종인 것으로 밝혀졌다. 위 또는 장 궤양화의 증거는 확인되지 않았다. 2가지 척추 통증 에피소드의 추정되는 원인은 전이성 흑색종이다. 씨. 노비-NT와의 관련성은 불분명하였다.
11세의 온전한 수컷 골든 리트리버 피네건(Finnegan)(04-R02)은 우측 외측 중수상의 연조직 육종(혈관주위세포종) 소견을 보였다. 상기 개의 치료이력은 등록 전의 수술을 포함하였다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 4회 사이클로 투여받았다. 유해사례는 경미하였으며 잘 용인되었다(well-tolerated). 종양은 4회 치료 사이클 후에 완벽히 제거되어, 종양 부위 주변에 정상 조직의 가장자리가 남겨졌다. 피네건은 각각 2012년 8월 3일, 2012년 8월 10일, 2012년 8월 17일 및 2012년 8월 24일에 1차, 2차, 3차 및 4차 치료 사이클을 받았다. 씨. 노비-NT의 투여는 오직 1차, 2차 및 3차 사이클 후에 보고된 등급 I 유해사례와만 연관되었다. 등급 I 및 II 유해사례는 4차 투약한지 48시간 후에 주지되었다. 종양 감염이 주지되었고, 열, 백혈구증가증, 호중구증가증 및 종양-연관 통증 및 농양 형성으로 이루어졌다. 감염은 농양 형성까지 진행되었으며, 전체 종양을 4차 투약한지 96시간 후에 최소 괴사조직제거로 제거하였다. 상기 방문시의 종양 측정치를, 그 날 늦게 육안적 종양을 완벽히 제거하기 전, 오전에 기록하였다. 25일째(2012년 8월 28일)에 개방된 상처 관리 대신에 다리를 절단하기로 하였고, 항생제를 투여하였다. 피네건은 별 탈없이 수술로부터 회복하였으며 이의 1차 치료 94일 후(2012년 11월 05일)에 완전히 종양이 없는 상태를 유지하고 있다.
7세의 중성화된 수컷 골든 리트리버 드레이크(Drake)(04-R01, 도 10a)는 우측 중간 상악에 연조직 육종(섬유육종) 소견을 보였다. 상기 개는 등록 전에 치료이력이 없었다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 4회 사이클로 투여받았다. 유해사례는 경미하였으며 잘 용인되었다. 종양은 4회 사이클 후에 완벽히 제거되어, 종양 부위 주변에 정상 조직의 가장자리가 남겨졌다. 드레이크는 각각 2012년 8월 13일, 2012년 8월 20일, 2012년 8월 27일 및 2012년 9월 4일에 1차, 2차, 3차 및 4차 치료를 받았다. 1차, 2차 및 3차 투약 사이의 간격은 7일인 한편, 3차 및 4차 투약 사이의 간격은 국경일을 기념하여 8일이었다. 씨. 노비-NT의 투여는 1차 사이클 24 내지 48시간 후에 보고된 등급 I 기면 및 식욕부진과 등급 II 구토 및 혈변배설을 포함하는 경미한 유해사례와 연관되었다. 이러한 AE는 항구토제 및 항생제로 성공적으로 치료되었다. 등급 I 종양 통증 및 부기를 포함하는 AE는 4차 투약한지 24시간 이내에 주지되었다. 추가로, 종양 감염 및 농양 형성의 증거가 관찰되지 않았다. 종양의 제거는 60일째(2012년 10월 12일)에 명백하였으며 종양은 측정할 수 없었다(연구 과정에 걸친 종양 측정치의 시간 경과에 대해 도 10b를 참조하라). 그 영역은 단단하였으며 약간 부푼 상태로 유지되었고, CT 스캔이 수행되었다. 드레이크는 1차 투약 후 86일째(2012년 11월 7일)에 종양이 없는 상태를 유지하고 있다.
9세의 중성화된 수컷 복서 백스터(Baxter)(04-R03, 도 8a 내지 도 8f)는 좌측 내측 전완상에 등급 II 연조직 육종 소견을 보였다. 상기 개는 등록 전에 치료이력이 없었다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 3회 사이클로 투여받았다. 유해사례는 경미하였으며 잘 용인되었다. 종양은 3회 주사 후에 완벽히 제거되어, 종양 부위 주변에 정상 조직의 가장자리가 남겨졌다. 백스터는 각각 2012년 8월 17일, 2012년 8월 24일 및 2012년 8월 31일에 씨. 노비-NT 포자의 1차, 2차 및 3차 용량을 투여받았다. 씨. 노비-NT의 투여는 내용성이 우수하였으며, 1차 또는 2차 투약 후에 연구 제제 관련 독성이 보고되지 않았다. 연구 관련 유해사례들은 3차 투약 후 24시간에 주지되었다. 상기 유해사례들은 종양 감염과 연관되었으며 열, 식욕부진, 기면 및 종양-연관 통증, 부기 및 출혈로 이루어졌다. 유해사례는 경미하였으며(등급 II 이하) 지지적 치료(supportive care) 및 진통제로 관리되었다. 씨. 노비-NT 관련 종양 감염은 전체 종양 및 농양 형성을 포함할 정도로 진행되었다. 2012년 9월 2일자로 종양을 외과적 괴사조직제거한 결과 AE가 빠르게 해소되었다. 상처 치유는 합병증 없이 이루어졌으며 2012년 10월 16일까지 완벽하였다. 백스터는 1차 치료 후 94일째(2012년 11월 19일)에 완전히 종양이 없는 상태를 유지하고 있다(연구 과정에 걸친 종양 측정치의 시간 경과에 대해 도 11을 참조하라).
7세의 중성화된 수컷 라브라도 리트리버 할리(Harley)(26-R01)는 우측 발에 등급 II 연조직 육종(혈관주위세포종) 소견을 보였다. 상기 개는 등록 전에 치료이력이 없었다. 상기 개는 씨. 노비-NT 포자를 4회 사이클로 투여받았다. 1차, 2차, 3차 및 4차 용량은 2012년 8월 20일, 2012년 8월 27일, 2012년 9월 4일 및 2012년 9월 10일에 투여되었다. 투약 간의 간격은 6 내지 8일이었다. 체온의 기준선 상승이 1차 및 2차 투약 시점에서 주지되었다. 씨. 노비-NT 포자의 IT 치료는 유해사례 보고 없이 내용성이 우수하였다. 요법에 대한 반응은 없었다.
11세의 난소적출된 암컷 세인트 버나드 잡종인 우르술라(Ursula)(04-R-04)는 우측 앞다리상에 연골모세포 골육종 소견을 보였다. 상기 개의 치료이력은 등록 전 수술을 포함하였다. 상기 개는 씨. 노비-NT 포자의 단일 IT 용량을 투여받았다. 전이성 질환은 등록시에 존재하지 않았다. 2012년 8월 31일자 1차 치료 후, 종양 농양 형성 및 종양주위 염증이 처음 24시간 이내에 명백하였으며 통증 의약, 온습포 및 정맥내 결정질로 의학적으로 관리되었다. 개선이 없는 후에, 종양/농양을 2일째(2012년 9월 2일)에 절개하였다. 중증도 장액혈액성 체액이 존재하였다. 혐기성 배양에 의해 씨. 노비를 단리하였다. 항생제를 4일째(2012년 9월 4일)에 투여하기 시작하였다. 절개부를 질행성 질환으로 인해 절단술을 수행하고자 한 날인 20일째(2012년 9월 20일)까지 개방된 상처로서 관리하였다. 조직병리학에 의해, 지속되는 연골모세포 골육종과 함께 심각한 괴사 및 출혈이 있는 것으로 밝혀졌다. 절단 후, 절개 부위 감염이 주지되었다. 배양물은 씨. 노비를 나타내지 않았다. 절단 후 보조 요법이 수행되지 않았다. 81일째(2012년 11월 21일)에, 우르술라는 직장 탈출증 소견을 보였으며 직장 폴립을 갖는 것으로 확인되었다. 이러한 평가 시점에서 수행된 흉부 방사선촬영술로 폐 전이가 밝혀졌다.
9세의 중성화된 수컷 라브라도 리트리버 가브리엘(Gabriel)(16-R02)은 좌측 외측 대퇴상에 등급 I 연조직 육종 소견을 보였다. 상기 개의 치료이력은 등록 전의 수술을 포함하였다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 4회 사이클로 투여받았다. 씨. 노비-NT의 IT 투여는 일반적으로 내용성이 우수하였으며, 등급 II 설사로 인해서 1차 투약과 2차 투약 간에 1주 지연이 있었으며, 상기 설사는 의학적 관리에 반응하였다. 가브리엘은 각각 2012년 9월 12일, 2012년 9월 26일, 2012년 10월 3일 및 2012년 10월 10일에 1차, 2차, 3차 및 4차 용량을 투여받았다. 독성은 경미하였고 주로 설사 및 구성적 증상(constitutive symptom)들로 이루어졌다. 등급 II 설사는 각각의 투약 후에 주지되었으며 의학적 관리에 잘 반응하였다. 1차 투약 후, 1주간의 투약 지연이 시행되었고 그 결과 1차 투약과 2차 투약 사이의 간격은 14일이 되었다. 투약 지연은 등급 II 설사의 경우 추가 투약을 위해 시행되지 않았다. 추가로, 등급 II 종양 부기가 4일째(2012년 9월 16일)에 관찰되었다. 종양 크기는 D0(2012년 9월 12일)부터 가장 최근의 연구 방문일인 D63(2012년 11월 14일)까지 안정하게 유지되었다.
13세의 중성화된 수컷 셔틀랜드 쉽독 버디(Buddy)(04-R05)는 우측 전환상에 연조직 육종(횡문근육종) 소견을 보였다. 상기 개의 치료이력은 등록 전의 수술, 화학요법 및 이전의 씨. 노비-NT 임상 시험을 포함하였다. 전이성 질환은 연구 참가 당시에 주지되지 않았다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 4회 사이클로 투여받았다. 씨. 노비-NT와 동시에 발생한 임상적으로 유의적인 유해사례는 요법의 3차 사이클 후의 등급 III 호중구감소증 및 열로 분류되었다. 이러한 유해사례는 정맥내 항생제 및 수액 요법에 의한 의학적 관리로 48시간 이내에 해소되었다. 버디는 2012년 9월 20일, 2012년 9월 27일, 2012년 10월 5일 및 2012년 10월 12일에 1차, 2차, 3차 및 4차 치료 사이클을 받았다. 경미한 종양 염증(홍반, 온기, 부기)이 4회 사이클 중 2회 사이클과 연관되어 주지되었다. 종양 크기의 일시적 감소가 4일째(2012년 9월 24일)에 주지되었다. 새로운 비표적 병변이 21일째(2012년 10월 12일)에 1차 종양 주위 가까이에서 주지되었다. 1차 표적 종양은 61일째에 안정하였다.
10세의 중성화된 암컷 셰퍼드 앰버(Amber)(16-R03)는 좌측 발, 손바닥 및 등쪽면에 등급 I 연조직 육종 소견을 보였다. 상기 개의 치료이력은 등록 전의 수술을 포함하였다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 4회 사이클로 투여받았다. 1차, 2차, 3차 및 4차 용량은 2012년 9월 26일, 2012년 10월 3일, 2012년 10월 15일 및 2012년 10월 24일에 투여되었다. 투약 간의 간격은 7 내지 12일이었다. 앰버는 1차 및 2차 투약 후에 등급 II 종양 부기 및 통증을 경험하였다. 등급 I 식욕부진이 2일째(2012년 9월 28일)에 주지되었다. 8일째(2012년 10월 4일, 2차 투약 후 1일째)에, 등급 I 열, 등급 II 종양 온기 및 등급 III 파행이 주지되었다. 상기 개의 종양을 절개하였고 진통제를 투여하였다. 등급 III 설사가 11일째(2012년 10월 7일)에 주지되었고 의학적으로 관리되었다. 종양 연관 유해사례 및 설사로 인해, 3차 투약은 19일째(2012년 10월 15일)까지 지연되었다. 등급 II 종양 부기가 씨. 노비-NT의 3차 투약 후 19일째에 다시 관찰되었고, 이는 진통제로 관리되었다. 4차 투약 후에는 유해사례가 주지되지 않았다.
9세의 중성화된 수컷 허스키 식스(Six)(11-R04)는 우측 발에 등급 I 연조직 육종 소견을 보였다. 상기 개는 등록 전에 치료이력이 없었다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 4회 사이클로 투여받았다. 식스는 각각 2012년 10월 1일, 2012년 10월 8일, 2012년 10월 15일 및 2012년 10월 22일에 1차, 2차, 3차 및 4차 용량을 투여받았다. 씨. 노비-NT 포자의 투여는 내용성이 우수하였으며 오직 경미한 유해사례만이 관찰되었다. 1차 투약 후, 등급 I 고혈압 및 열이 주지되었다. 열 및 고혈압은 자가-제한적이었으며 각각 투약 후 1시간 및 2시간 이내에 해소되었다. 4일째(2012년 10월 5일)에, 종양은 주관적으로 연성이었으며 작은 궤양화 영역이 이전의 생검 부위에서 관찰되었다. 궤양화는 가장 최근의 연구 방문일인 31일째(2012년 11월 1일)까지 지속되었다. 이러한 궤양화는 연구 제제 또는 연구 등록을 위해 요구되는 생검의 합병증과 연관될 수 있다.
11세의 난소적출된 암컷 라브라도 리트리버 벨(Belle)(04-R06)은 슬와 림프절까지 전이된 우측 뒷다리 3번째 발가락 상의 비만세포 종양 소견을 보였다. 상기 개는 등록 전에 치료이력이 없었다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 4회 사이클로 투여받았다. 유해사례는 경미하였으며 등급 I 열 및 등급 I 종양 염증으로 제한되었다. 벨은 2012년 10월 19일, 2012년 10월 26일, 2012년 11월 2일 및 2012년 11월 9일에 1차, 2차, 3차 및 4차 치료 사이클을 받았다. 등급 I 열은 씨. 노비-NT 치료 및 종양 염증과 동시에 발생하였다. 열 및 염증은 계획된 연구 방문시에 투여되는 피하 수액을 필요로 하는 프로토콜 외에 의학적 관리에 대한 필요성이 없이 자가-해소적이었다. 종양의 궤양화가 21일째(2012년 11월 9일)에 주지되었다. 개 소유주가 조사자에게 보낸 종양의 사진들은 궤양화의 해소 및 종괴의 현저한 퇴행을 보여주었다. 정확히 종양 반응을 평가하기 위해 46일째(2012년 12월 4일)에 계획되지 않은 방문을 수행하였다. 종양의 완전한 퇴행이 주지되었다.
7세의 난소적출된 암컷 독일 셰퍼드 잡종인 프리다(Frida)(11-R01)는 림프절 전이 가능성이 있는(CT에 기초하여) 우측 뒷발에 연조직 육종(혈관주위세포종) 소견을 보였다. 상기 개의 치료이력은 등록 전의 수술을 포함하였다. 상기 개는 본 임상 시험에 참여하기 위해 소유주와 함께 멕시코로부터 왔다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 3회 사이클로 투여받았다. 유해사례는 48시간 동안의 탈모 및 소멸성 열로 제한되었고, 이는 정맥내 수액 및 NSAID로 해소되었다. 프리다는 2012년 11월 6일, 2012년 11월 14일 및 2012년 11월 21일에 요법의 1차, 2차 및 3차 사이클을 받았다. 유일한 중요한 유해사례는 입원 및 수액을 필요로 하는 등급 I 열을 포함하였으며, 상기 등급 I 열은 4일째(2012년 11월 10일)에 시작하여 5일째(2012년 11월 11일)에 등급 II 열로 진행되었다. 열은 48시간 후에 해소되었다. 등급 I 열은 또한 요법의 3차 사이클 후 18일째(2012년 11월 24일)에 주지되었다. 종양 진행은 21일째(2012년 11월 27일)에 절단술을 촉구하였다.
7세의 중성화된 수컷 보더 콜리 미하(Mhija)(01-R02)는 좌측 흉부 옆구리쪽에 연조직 육종(말초 신경초 종양) 소견을 보였다. 상기 개는 등록 전에 치료이력이 없었다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 3회 사이클로 투여받았다. 유해사례는 경미하였으며 잘 용인되었다. 종양 염증, 열 및 장액혈액성 내지 점액농성 분비물은 아마 씨. 노비-NT 활성과 관련될 것이다. 씨. 노비-NT 포자의 4차 사이클이 계획된다. 미하는 2012년 11월 12일, 2012년 11월 20일 및 2012년 11월 27일에 1차, 2차 및 3차 용량을 투여받았다. 1차 투약과 2차 투약 사이의 간격은 8일인 한편, 2차 투약과 3차 투약 간의 간격은 7일이었다. 씨. 노비-NT의 투여는 경미한 등급 I 내지 II 독성과 연관되었다. 등급 I 오심 및 역류가 1차 투약 후 주지되었으며, 등급 I 식욕부진 및 기면이 3차 투약 후 주지되었다. 독성은 의학적 관리로 곧 해소되었다. 대부분의 독성은 종양 부위로 국소화되었고, 중증도가 등급 I 또는 II(열, 염증, 가려움, 장액혈액성 내지 점액농성 분비물 및 홍반)이었으며 씨. 노비-NT 투여 후 2일 이내에 발생하였다. 추가로, 등급 I 내지 II 복측 부종이 1차 및 3차 투약한지 2일 후에 관찰되었다.
10세의 중성화된 수컷 잡종견 탱크(Tank)(10-R02)는 우측 옆구리에 연조직 육종(혈관주위세포종) 소견을 보였다. 상기 개의 치료이력은 등록 전 수술을 포함하였다. 상기 개는 2012년 11월 12일자에 IT 씨. 노비-NT 포자를 1회 사이클로 투여받았다. 등급 I 열, 식욕 감소, 등급 II 종양 주변의 부종 및 등급 III 종양 농양이 치료 후 4일째(2012년 11월 16일)에 주지되었다. 통증 의약, IV 수액 및 광범위 항생제를 포함하는 의학적 관리를 사용하여 농양을 관리하였다. 종양 염증 및 주변 부종은 11일째(2012년 11월 23일)에 해소되었다. 탱크는 2012년 12월 3일에 2차 치료 사이클을 받았다. 사이클 간의 간격은 21일이었다. 2차 투약은 항생제 세척 기간으로 인해 지연되었다.
8마리 개로부터의 종양 측정치의 시간 경과는 도 12a에 도시되어 있다. 도 12b는 절단술 또는 데이터 컷오프로 인해 단축된 3가지 시간 경과를 도시한다.
요약하면, 사이클당 1×108 포자의 용량에서 IT 주사에 의해 최대 4회의 치료 사이클로 투여되는 씨. 노비-NT는 의미있는 생물학적 및 항종양 활성을 나타내고 천연 발생 고형 종형을 갖는 반려견에서 내용성이 우수한 것으로 보인다. 종양 반응은 신속하고, 유의적인 종양 괴사 및 주목할 만한 질환 퇴행은 씨. 노비-NT를 투여한지 수일 이내에 발생하였다. 대부분의 유해사례는 등급 1 및 등급 2로 한정되며, 씨. 노비-NT 치료제로부터 예상되는 기전에 기반한 종양 염증 반응과 일치한다. 몇몇 사례들은 진행 및 생존을 평가하기 위해 현재 장기간 추적조사 중에 있다.
실시예 8
씨. 노비-NT의 종양내(IT) 투여- 연구 2 방법
고형 종양(골육종 또는 비만세포 종양을 제외한)을 갖는 개를 치료하기 위해 IT 주사에 의해 투여되는 씨. 노비-NT 투여의 용량 및 용적을 규명하는 연구가 수행되고 있다.
임의의 체중, 품종, 성별 또는 연령의 고형 종양(골육종 또는 비만세포 종양을 제외한)을 갖는 개를 등록을 위해 스크리닝하였다. 포함 기준은, 각각의 개가 골육종 또는 비만세포 종양을 제외한 임의의 암으로 세포학적으로 또는 조직학적으로 진단되었고 각각의 개가 최장 직경이 1cm 이상인 적어도 1개의 측정가능한 종양 병변을 가졌다는 점을 제외하고, 실시예 6에 제시된 것과 유사하였다.
초기 스크리닝 방문 동안, 각 개에게 5자리 숫자 코드로 이루어진 고유한 연구 개 식별 번호(이는 스크리닝 개 번호의 순서대로 연속적이지 않을 수 있다)가 배정되었다. 처음 2자리는 연구 지역(01 내지 99)을 나타냈고, 중간 자리는 연구 'R'을 나타냈고, 마지막 2자리는 연구 지역 내의 연구 개 번호(01 내지 99)를 기술하였다. 예를 들면, 지역 9에 등록된 11번째 개는 연구 개 번호 09-R11로 배정되었다. 연구 개 번호는 개들이 정해진 연구 지역에서 등록되도록 하기 위해 연대순으로 배정되었다. 개는 포함 및 배제 기준을 만족시킨 경우에 본 연구에서 등록된 것으로 고려되었다.
육안 병리학, 조직병리학 및 부검을 실시예 6에 기술된 바와 같이 수행하였다.
씨. 노비-NT 포자를 수송 전에 상기 제시한 바와 같이 1×108개 포자/mL의 농도로 제조하고 2mL 냉동바이알 내의 멸균 염수에 현탁시켰다. 씨. 노비 치료의 각 사이클은 단일 표적 병변으로의 각 주사를 위한 1mL 포자 현탁액(1×108개 포자)의 최대 5회의 주사로 이루어졌다. 1×108개 포자를 함유하는 포자 현탁액을 각 1mL 주사를 위한 개별적 냉동바이알 내에 충전하고, 바이알, 주사기 및 바늘을 각 주사 후 폐기하였다.
주사 계획은 도 13에 도시되어 있다. 5곳의 1mL 주사 부위(사각형으로 나타냄)는 종양 내에 분배되었다: 종양 내의 중심 및 고르게 할당된 네(4)곳의 주사 부위. 각 1mL 주사를 위한 부위는 추가로 5곳의 방향변경 부위(표 13에서 원으로 나타냄)로 이루어졌다. 각각의 방형변경 부위에는 200㎕의 포자 현탁액이 투여되었다. 바늘을 먼저 주사 부위의 중심내로 향해지도록 한 다음, 바늘을 회수하지 않고 상기 주사 부위의 네 모퉁이로 고르게 방향변경하였다. 1차 1mL 주사가 완료되면, 바늘을 회수하고 주사기를 폐기하였다. 각 주사의 깊이는 가장 우수한 분배가 달성되도록 적절히 분배되어야 한다. 권장되는 주사기 크기는 각 주사마다 1mL였고, 권장되는 바늘은 22게이지 내지 25게이지였다. 바늘의 적절한 길이는 종양 병변의 깊이에 기초하여 선택되어야 한다.
모든 개들은 임상적 관찰을 위해 D0부터 D2까지 입원하였으며, 그 다음 임상적 관찰을 위해 조사자의 재량에 따라서 각각의 후속적 치료 후 24시간 내지 48시간 동안 입원시켰다. 씨. 노비 NT 치료 후 입원 동안 모든 연구 개들에게 수액을 투여하였다. 투약 당일에, 씨. 노비-NT로 치료한 후 2시간 동안 모든 개들에게 IV 결정질을 4 ml/kg/h로 투여하였다.
연구 방문 및 사건은 8회 사이클 치료 용법의 예로서 표 18에 요약되어 있다. 투약 간격은 개를 요법의 다수 사이클로 치료하고자 한 경우 주 1회인 것으로 제시되었다.
연구 방문 및 사건의 요약

스크리닝 사이클 1* 사이클
2 내지 8†		 D70±7일
 D90±7일
D-14 내지 D0 D0 D_
동의서 ×
통계자료 ×
체중 및 활력징후 × × × × ×
신체검사 × × × × ×
실험실 샘플 × × (×) (×) ×
조사 혈액 샘플 × × × × ×
조사 종양 샘플 ×
진단학적 영상화 × ×***
활동 점수 ×
포함/배제 기준 ×
등록 ×
종양 측정 × × × × ×
씨. 노비-NT* ×* ׆
결정질** ×** ×**
연구 완료 ׆†
*소유주들은 이들의 개를 D0부터 D2까지 연구소에 남겨놓을 것이며, IV 결정질은 병원에서 모든 개들에게 투여될 것이다. 후속적 사이클 동안, 조사자들은 D0에 비례하는 연구일수에 따라서 D 안에 기입할 것이다.
**개에게 IV 결정질이 투여될 것이다.
***흉부 방사선촬영술 단독.
†개는 8회 사이클을 받지 않을 수 있다. 본 연구 동안, 의료책임자, 조사자 및 후원자들 간의 협의를 통해서 후속적 투약 사이클을 계속할지의 여부가 사례별로 결정될 것이다,
††연구 완료 후 및 유해사례를 관리하기 위해 전신 항생제가 요구된 경우, 독시사이클린 5 내지 10mg/kg을 개에게 3개월 동안 PO BID로 투여하는 것이 권장되었다.
실시예 9
씨. 노비-NT의 종양내(IT) 투여- 연구 2 중간 결과
2012년 12월 2일자로, 2마리의 반려견이 본 연구에서 치료되었다. 두 동물은 모두 치료 사이클당 5곳의 독특한 IT 주사 부위에 5×108개 포자의 용량 수준이 투여되었다.
첫번째 개, 9세의 중성화된 수컷 벨기에 말리노이즈 버디(Buddy)(04-503)는 좌측 발목에 기준선에서의 LD 측정치가 69mm(CT에 따르면 4.4×3.3×0.7cm)인 연조직 육종 소견을 보였다. 상기 개의 치료이력은 등록 전의 수술을 포함하였다. 상기 개는 IT 씨. 노비-NT 포자를 2회 사이클로 투여받았다. 유해사례는 경미하였으며 등급 I 열 및 등급 I 종양 염증으로 한정되었다. 버디는 2012년 11월 21일 및 2012년 11월 28일에 1차 및 2차 치료 사이클을 받았다. 등급 I 열 및 종양 발적, 부기 및 통증 증가가 1차 주사 후 6시간 이내에 주지되었다. 열은 NSAID 카프로펜으로 치료한 후 6시간 이내에 해소되었다. 경미한 종양 궤양화가 2일째(2012년 11월 23일)에 주지되었다. 7일째(2012년 11월 28일)에, 종괴 크기의 약간의 감소가 주지되었다(-12.0%). 각각의 치료 사이클은 내용성이 우수하였으며 등급 I보다 큰 유해사례는 없었다.
두번째 개, 9세의 중성화된 수컷 휘튼 테리어 기네스(Guinness)(04-502)는 기준선에서의 LD 측정치가 122mm(CT에 따르면 9.1×9.3×14.5cm)인 좌측 어께의 편평세포 암종, 뒷다리의 저등급 혈관육종 및 폐 전이의 증거(CT에 근거)를 보였다. 상기 개의 치료이력은 등록 전의 수술을 포함하였다. 이미 존재하는 승모판 막 질환은 등록 전에 수행한 심초음파 기반으로 명백했다. 상기 개는 2012년 11월 28일에 IT 씨. 노비-NT 포자의 단일 용량을 투여받았다. 등급 III 열이 치료한지 6시간 이내에 주지되었으며 IV 수액으로 의학적으로 관리되었다. 1일째(2012년 11월 29일)에, 종괴의 농양, 화농성 분비물 및 호중구증가증이 인지되었다. IV 수액이 계속되었고 통증 의약(NSAID를 포함)이 시작되었다. 2일째(2012년 11월 30일)에, 진행성 종양 부기 및 패혈증 증거(열, 호중구감소증, 저할당증, 저알부민혈증)는 종양의 절개 및 세척(irrigation)을 촉구하였다. 광역 항생제, 헤타스타치 및 사람 알부민을 투여하였다. 3일째(2012년 12월 1일)에, 호흡 곤란을 초래하는 상태의 점진적 저하가 주지되었다. 안락사 용액을 투여하였다. 부검을 수행하였다. 임상적으로 유의적인 육안 소견은 증식성 심내막염, 화농성 폐 결절 및 전신의 피하 출혈 및 부종을 포함하였다. 다양한 조직 및 기관(폐, 간, 심장, 신장, 비장, GI, 위)로부터의 사후 혐기성 배양은 복수미생물 세균 증식(스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 이. 콜라이(E. coli), 스트렙토코커스(Streptococcus) 종)을 나타냈다; 종양 조직 및 방광을 제외한 모든 기관 및 조직으로부터의 혐기성 배양물은 씨. 노비-NT 증식에 대해 음성이었다. 감염된 조직의 조직병리학은 계류 중이다. 패혈성 독소혈증 쇼크는 가장 가능성이 큰 사망 원인으로서 고려되며, 씨. 노비-NT 요법과의 관련성은 이때는 알지 못하였다.
실시예 10
사람에서 씨. 노비-NT의 종양내(IT) 투여 - 방법
IT 주사된 씨. 노비-NT 포자의 I기 사람 임상 시험
씨. 노비-NT 포자의 단일 IT 주사의 개방-표지(open-label), 비무작위화(non-randomized), 다기관(multi-center) I기 안정성 시험이 치료-불응성 고형 종양을 갖는 환자에서 현재 진행중에 있다. 임상 시험 프로토콜은 각각의 참여 기관의 임상연구심의위원회(Institutional Review Board; IRB)에 의해 승인되었고, 모든 규제 단계는 식품의약안전청(FDA)의 지침(번호 NCT01924689)하에 수행되었다. 모든 환자들은 연구에 포함되기 전에 서면 동의서 양식(ICF)에 서명하도록 요구되었다.
본 I기 연구의 주요 목적은 IT 주사된 씨. 노비-NT의 안정성 프로파일, 용량 제한 독성(DLT) 및 최대 허용 용량(MTD)을 측정하는 것이었다. 또한, 본 치료제의 항종양 활성을 조사하였다.
I기 연구에서 씨. 노비-NT 포자의 제조 및 IT 주사
씨. 노비-NT 포자의 임상적 공급물을, 고무 마개를 갖고 부정 변경 방지 캡으로 알루미늄 밀봉된 1회용 2 mL 멸균 및 피로겐-비함유 I형 보로실리케이트 유리 바이알 내에 멸균 포스페이트 완충된 염수(PBS)에 현탁된 8.52×108개 포자/mL의 농도에서 1.0mL 충전 용적으로 포장해 넣었다. 상기 바이알을 제어된 온도 환경에서 일정한 온도 모니터링 하에 2 내지 8℃에서 저장하였다. GMP 생성물은 옴니아 바이올로지스(Omnia Biologies, Inc.)(메릴랜드주 록빌)에 의해 제조되고 제형화되었다.
환자가 본 시험에 등록된 후, 하나의 바이알이 본 연구 지역으로 수송되었다. 씨. 노비-NT의 추가 제조가 요구되었고 IT 주사일과 동일한 날에 수행되었다. 농축된 포자 현탁액의 희석을 배정된 코호트(cohort)에 기초하여 필요한 용량을 달성하기에 적절한 크기의 멸균 염수(0.9%) 주입 백을 사용하여 지정된 생물학적 안정성 캐비넷에서 수행하였다. 이어서, 주사 용적(3mL)을 상기 염수 백으로부터 빼내어 방사선촬영술 유도하에 주사하였다. 씨. 노비-NT 포자를 18게이지 다중갈래 바늘(Quadra-Fuse®, Rex-Medical, Conshohocken, PA)을 사용하여 주사하였다.
사람 임상 시험의 디자인 및 수행
본 연구는 표준 3+3 용량 증가 디자인이었다. 환자는 초음파 또는 방사선촬영술 유도하에 측정가능하거나 촉진가능하거나 동정가능하고 씨. 노비-NT 포자가 경피 주사될 수 있는 표적 종양을 갖는 진행성 악성 고형 종양에 걸린 것으로 진단되어야 했다. 표적 병변은 1cm 이상의 최장 직경을 가져야 하고 RECIST 1.1 기준에 의해 정의된 바와 같이 측정될 수 있어야 했다. 주요 적격성 기준은 치료 불응성 악성 종양의 병력; 18세 이상의 연령; 동부 협력 종양연구 그룹(Eastern Cooperative Oncology Group; ECOG) 활동 상태 ≤ 2; 응급실까지 45분 운전 시간의 거리 내에 머무를 수 있고 IT 주사 후 28일 동안 간병인이 있어야 함을 포함하였다. 주요 배제 기준은 임신; 1차 뇌 악성 종양 또는 뇌 전이; 임상적으로 유의적인 복수 또는 문맥전신 고혈압 또는 간경화증의 임상적 증거 또는 병력; 래스고 코마 스코어(Glasgow Coma Score; GCS) < 15; 혈청 크레아티닌 수준 > 1.5×정상치의 상한치, 혈액투석 또는 복막투석을 필요로 하는 만성 신부전증; 산소 포화도(SpO2) < 95 %(실내 공기); 평균 동맥혈압(BP) < 70 mmHg; 혈소판 계수 ≤ 100,000/mm3; 헤모글로빈 < 9.0g/dL; 절대 호중구 계수(ANC) < 1,000/mm3; 임상적으로 유의적인 흉막 삼출, 심낭 삼출, 주위 심낭 삼출 또는 심장 주변의 임의의 위치에서 1.0cm 초과의 임의의 삼출; 면역억제제를 이용한 치료를 계속 진행해야하는 필요성; 고형 기관 이식 이력; 전신 또는 국소 감염이었다.
적격한 환자들이 승인되어 용량 코호트로 등록되었다. 프로토콜 하에 환자들을 포자 투여 후에 입원시켰고 8일 동안 관찰하였고, 환자들은 12개월 동안의 일상적으로 계획된 추적조사 방문을 위해 임상 지역으로 돌아갔고, 이 시간 동안 안정성 및 효능의 평가가 수행되었다.
임상 반응 및 진행은 RECIST 버젼 1.1을 사용하여 평가하였다. 객관적 반응은 주사된 종양의 일련의 CT 또는 MRI 스캔 뿐만 아니라 원거리 전이(최대 5개의 표적 병변)에 의해 측정하였다. 감염성 합병증 또는 기타 치료 후 유해사례(treatment-emergent adverse event)에 대한 안전성 모니터링은 12개월 동안 지속적으로 수행하였다.
실시예 11
사람에서 씨. 노비-NT의 종양내(IT) 투여 - 결과
씨. 노비-NT는 첫번째 사람 환자에서 신속한 국소 종양 파괴를 야기한다
래트에서 관찰된 결과와 함께, 비교 개 시험에서의 생물치료의 유망한 결과 및 바람직한 위험/이익 프로파일은 사람에서 생물치료를 시도해볼 수 있는 근거를 제공하였다. 따라서, 표준 요법에 불응성이었거나 가용한 표준 요법이 없는 고형 종양을 갖는 사람 환자에서의 I기 조사 연구를 시작하였다(NCT01924689). 본 시험에 등록된 첫번째 환자가 본원에 보고된다: 2006년 8월에 후복막 평활근육종으로 진단된 53세 여성. 환자는 몇몇 외과적 절제술을 경험하였으며, 2007년 3월의 우측 근치 신장절제술 및 방사선 요법, 2008년 11월의 젬시타빈, 탁솔, 아드리아마이신 및 이포스파미드를 이용한 화학요법, 간 전이의 절제, 2009년 12월의 우측면 폐 전이의 다수의 설상 절제, 2010년 3월부터 2011년 4월까지의 트라벡테딘 치료, 2010년 12월의 좌측면 폐 전이의 다수의 설상 절제, 2011년 4월의 파조파닙 치료, 2011년 10월의 좌측 하엽절제술, 2012년 2월부터 2013년 1월까지의 HAI 아브락산, 젬시타빈 및 아바스틴, 2013년 2월부터 2013년 7월까지의 에베롤리무스 및 파조파닙 및 2013년 8월과 2013년 9월의 무자극성 동맥 간 색전술을 포함하여 다수의 화학요법 및 방사선요법 치료를 받았다. 그러나, 상기 환자는 진행된 상태로, 간, 폐, 복막 및 우측 어깨와 인접 우측 상완의 연조직에 전이성 질환이 존재하였다.
생물치료를, 1×104 씨. 노비-NT 포자의 예정된 출발 용량을 18게이지 다중갈래 바늘을 사용하여 상기 환자의 전이성 우측 어깨 종양 내로 주사하여 수행하였다(0일, 2013년 11월 19일).
3갈래 바늘을 사용하는 CT-유도하 종양내 주사
피험체를 펜타닐을 사용하여 중등도 진정 상태 하에 두고 35분 동안 익숙해지도록 하였다. 18게이지 Quadra-Fuse 장치(Rex Medical)(도 16a)를 3갈래 바늘(27g)을 표적 주사 영역(도 16b 및 16c)에 삽입함으로써 CT 유도하의 주사를 위해 사용하였다. 3개 갈래(각각 2개의 관통 구멍을 가짐, 4개의 유체 출구)(도 16d)를 단계적 들어가기(retraction) 과정 동안 씨. 노비-NT 포자의 1mL 분취액 용액이 주사되는 위치(도 16e)에서 4cm, 3cm 및 2cm가 되는 곳에 배치하였다. 상기 장치를 배치된 갈래가 바늘 캐뉼라 내로 완전히 들어간 후 제거하고 수동 압박을 사용하여 지혈을 달성하였다.
1일째에, 상기 환자는 견갑골까지 이어지는 경미한 우측 어깨 통증을 경험하였고, 이는 트라마돌 및 아세트아미노펜에 반응하였다. 2일째, 상기 환자의 통증은 하이드로모르폰을 이용하는 IV 통증 자가 조절법을 필요로 하였고, 상기 환자의 백혈구 계수는 ㎕당 18,300개로 증가하였고, 상기 환자에서 열이 발생하였고 최대 체온은 39.2℃였다. 3일째에, 상기 환자의 우측 어깨 및 견갑골의 통증은 조절하기가 어려웠다. 상기 환자의 최대 체온은 37.8℃였다. 우측 상지의 CT 스캔은 광범위한 종양 파괴와 함께 연조직 및 종양의 골 성분 내의 가스를 입증하였다(도 14a). 환자의 상완의 괴사가 논의되었다. 환자의 종양의 CT-유도하 흡인은 혐기성 배양 조건하의 씨. 노비-NT 증식을 나타냈다. 이어서, 환자는 항생제 사용을 개시하였으며 직후에 열이 감소되었다. 4일째에, 우측 상지의 MRI는 기준선과 비교하여 종양 종괴로 국한된 증강이 현저하게 감소되었음을 입증하였다(도 14b 및 14c). 종양으로부터의 생검은 많은 그램-양성 세균 및 생존성 종양 세포의 부재를 보여주었다. 생검시에, 경피 배출관을 종양 농양 내에 위치시켜 체액 및 파편이 배출되도록 하였다. 환자는 무열성 상태를 유지하였으며 환자의 백혈구 계수는 점차 정상화되었다. 환자는 항생제 사용을 지속하였으며 IV 진통을 위해 20일째까지 병원에 머물렀으며, 이때 환자는 경구 진통제로 이행되었다. 환자에게 프로토콜에 따라 메트로니다졸 및 독시사이클린이 경구 투여되었다. 29일째에, 추적조사 MRI는 종양 증강의 감소가 계속 진행 중임을 입증하였다(도 14d). 55일째에, 환자는 환자 노력에 의해 유도된 우측 근위 상완골의 병리적 골절의 결과로서 국소 통증 소견을 보였다. 후속적인 상완골의 부분 절제, 괴사조직제거 및 골수내 못고정 및 시멘트 스페이서를 이용한 내부고정은 통증을 현저하게 개선시켰고 움직임의 범위를 증가시켰다. 수술중 배양은 혐기성 배양 조건하의 씨. 노비-NT 증식을 나타냈다. 조직병리학 검사는 광범위한 종양 괴사와 함께 잔류 종양 세포의 작은 병터를 입증하였다(도 15a 내지 도 15d). 환자는 계속해서 모니터링되고 있으며 동부 협력 종양연구 그룹(Eastern Cooperative Oncology Group; ECOG)에 따른 활동 상태가 1이며, 감염의 임상적 징후가 없다.
문헌
Figure pct00068
Figure pct00069
본 출원에서 언급된 모든 문헌들은 본원에서 전문이 언급된 바와 같이 참조로 인용된다.
본 발명의 예시적 실시형태가 본원에서 기술되었지만, 본 발명은 이러한 기술된 것들로 제한되지 않으며, 본 발명의 범주 또는 취지에서 벗어남이 없이 다양한 변화 또는 변형이 당업자에 의해 이루어질 수 있는 것으로 이해되어야 한다.

Claims (62)

  1. 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 콜로니 형성 단위(CFU: colony forming unit)를 포함하는 씨. 노비(C. novyi) CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여하는 단계를 포함하는, 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 고형 종양이 연조직 육종, 간세포 암종, 유방암, 췌장암 및 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 고형 종양이 평활근육종인, 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 고형 종양이 후복막 평활근육종인, 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 단위 용량이 약 1×106 내지 1×107 씨. 노비 CFU를 포함하는, 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 단위 용량이 약 1×104 씨. 노비 CFU를 포함하는, 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 씨. 노비 CFU가 영양 형태(vegetative form) 및 포자 형태로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 씨. 노비가 씨. 노비 NT인, 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 단위 용량이 약 1×104 내지 1×107 씨. 노비 NT 포자를 포함하는, 방법.
  10. 제8항에 있어서, 상기 단위 용량이 약 1×106 내지 1×107 씨. 노비 NT 포자를 포함하는, 방법.
  11. 제8항에 있어서, 상기 단위 용량이 약 1×104 씨. 노비 NT 포자를 포함하는, 방법.
  12. 제1항에 있어서, 상기 투여 단계가 상기 단위 용량을 단일 위치에서 상기 종양 내로 주사함을 포함하는, 방법.
  13. 제1항에 있어서, 상기 투여 단계가 상기 단위 용량을 다수의 독특한 위치에서 상기 종양 내로 주사함을 포함하는, 방법.
  14. 제1항에 있어서, 상기 투여 단계가 상기 단위 용량을 1 내지 5곳의 독특한 위치에서 상기 종양 내로 주사함을 포함하는, 방법.
  15. 제1항에 있어서, 상기 투여 단계가 상기 단위 용량을 5곳 이상의 독특한 위치에서 상기 종양 내로 주사함을 포함하는, 방법.
  16. 제1항에 있어서, 복수의 치료 사이클로 사람에게 투여함을 추가로 포함하고, 여기서 각 치료 사이클이 상기 씨. 노비 CFU의 하나의 단위 용량을 상기 고형 종양 내로 주사함을 포함하는, 방법.
  17. 제16항에 있어서, 1 내지 10회의 치료 사이클로 투여되는, 방법.
  18. 제16항에 있어서, 2 내지 4회의 치료 사이클로 투여되는, 방법.
  19. 제16항에 있어서, 각 치료 사이클 사이의 간격이 약 5 내지 100일인, 방법.
  20. 제16항에 있어서, 각 치료 사이클 사이의 간격이 약 7일인, 방법.
  21. 제9항에 있어서, IV 수액을 각각의 상기 씨. 노비 NT 포자의 투여 전, 투여 동안 및/또는 투여 후 사람에게 투여함을 추가로 포함하는, 방법.
  22. 제9항에 있어서, 복수의 치료 사이클로 사람에게 투여함을 추가로 포함하고, 이때 각 치료 사이클이 상기 씨. 노비 NT 포자의 하나의 단위 용량을 상기 고형 종양 내로 주사함을 포함하는, 방법.
  23. 제22항에 있어서, 2 내지 4회의 치료 사이클로 투여되는, 방법.
  24. 제1항에 있어서, IV 수액을 각각의 상기 씨. 노비의 투여 전, 투여 동안 및/또는 투여 후 사람에게 투여함을 추가로 포함하는, 방법.
  25. 제1항에 있어서, 항생제의 제1 과정(course)을 상기 씨. 노비에 의해 유발되는 유해 부작용을 치료하거나 완화시키는데 효과적인 용량으로 일정 기간 동안 사람에게 제공함을 추가로 포함하는, 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상기 항생제가 씨. 노비 투여 후 2주 동안 투여되는, 방법.
  27. 제25항에 있어서, 상기 항생제가 아목시실린, 클라불라네이트, 메트로니다졸 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  28. 제25항에 있어서, 항생제의 제2 과정을 상기 씨. 노비에 의해 유발되는 유해 부작용을 치료하거나 완화시키는데 효과적인 용량으로 일정 기간 동안 사람에게 제공함을 추가로 포함하는, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 항생제의 제2 과정이 상기 항생제의 제1 과정의 완료 후 개시되어 1 내지 6개월 동안 수행되는, 방법.
  30. 제28항에 있어서, 상기 항생제의 제2 과정이 상기 항생제의 제1 과정의 완료 후 개시되어 3개월 동안 수행되는, 방법.
  31. 제28항에 있어서, 상기 제2 과정에서 사용되는 항생제가 독시사이클린인, 방법.
  32. 제1항에 있어서, 화학요법, 방사선 요법, 면역요법 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 요법을 사람에게 투여함을 추가로 포함하는, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 상기 면역요법이 사람에게 면역 체크포인트 저해제(immune checkpoint inhibitor)를 투여함을 포함하는, 방법.
  34. 제1항에 있어서, 상기 고형 종양이 화학요법, 방사선 요법, 면역요법 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 요법에 내성인, 방법.
  35. 제32항에 있어서, 상기 화학요법이 사람에게 항대사물질, 미세관 저해제, DNA 손상제, 항생제, 항혈관신생제, 혈관 차단제(vascular disrupting agent), 분자표적 치료제(molecularly targeted agent) 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 제제(agent)를 투여함을 포함하는, 방법.
  36. 제32항에 있어서, 상기 화학요법이 젬시타빈, 탁솔, 아드리아마이신, 이포스파미드, 트라벡테딘, 파조파닙, 아브락산, 아바스틴, 에베롤리무스 및 이들의 조합으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 제제를 사람에게 투여함을 포함하는, 방법.
  37. 제1항에 있어서, 상기 고형 종양이 표준 요법에 불응성이거나, 상기 고형 종양이 가용한 표준 요법이 없는 종양인, 방법.
  38. 제1항에 있어서, 사람에서 강력한 국소 염증 반응 및 후천성 면역반응을 유도하는, 방법.
  39. 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 콜로니 형성 단위(CFU)를 포함하는 씨. 노비 NT CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여하는 단계를 포함하는, 사람에서 종양 세포를 현미경적으로 정확히 절제하는, 방법.
  40. 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 적어도 약 1×103 내지 1×107 콜로니 형성 단위(CFU)를 포함하는 씨. 노비 NT CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여하는 단계를 포함하는, 사람에서 하나 이상의 부위로 전이된 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는 방법.
  41. 제40항에 있어서, 상기 하나 이상의 전이 부위가, 본래 고형 종양에서 원위부에 있는, 방법.
  42. 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하는 씨. 노비 CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여하는 단계를 포함하는, 사람에 존재하는 고형 종양을 용적축소시키는 방법.
  43. 제42항에 있어서, 상기 고형 종양이 연조직 육종, 간세포 암종, 유방암, 췌장암 및 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  44. 사람에 존재하는 고형 종양을 용적축소시키는 방법으로서, 사이클당 약 1×104개 포자를 포함하는 씨. 노비 NT 포자의 단위 용량을 1 내지 4회 사이클로 사람에게 종양 내로 투여함을 포함하며, 상기 씨. 노비 NT의 각 단위 용량이 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁되어 있는, 사람에 존재하는 고형 종양을 용적축소시키는 방법.
  45. 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는 방법으로서, 사이클당 약 1×104개 포자를 포함하는 씨. 노비 NT 포자의 단위 용량을 1 내지 4회 사이클로 사람에게 종양 내로 투여함을 포함하며, 상기 씨. 노비 NT의 각 단위 용량이 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁되어 있는, 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는 방법.
  46. 사람에 존재하는 고형 종양을 제거하는 방법으로서, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액에 현탁된 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하는 씨. 노비 CFU의 단위 용량을 사람에게 종양 내로 투여함을 포함하며, 이때 상기 종양은 정상 조직의 가장자리(margin)를 남기며 제거되는, 사람에 존재하는 고형 종양을 제거하는 방법.
  47. 제46항에 있어서, 상기 종양이 육종인, 방법.
  48. 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하고, 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하는데 효과적인 씨. 노비 CFU의 단위 용량.
  49. 제48항에 있어서, 상기 씨. 노비 CFU가 영양 형태 및 포자 형태로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 단위 용량.
  50. 제48항에 있어서, 상기 씨. 노비가 씨. 노비 NT인, 단위 용량.
  51. 제50항에 있어서, 상기 단위 용량이 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×104 내지 1×107 씨. 노비 NT 포자를 포함하는, 단위 용량.
  52. 제50항에 있어서, 상기 단위 용량이 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×106 내지 1×107 씨. 노비 NT 포자를 포함하는, 단위 용량.
  53. 제50항에 있어서, 상기 단위 용량이 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×104 씨. 노비 NT 포자를 포함하는, 단위 용량.
  54. 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하기 위한 키트로서, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×103 내지 1×107 CFU를 포함하는 씨. 노비 CFU의 단위 용량 및 상기 키트 사용에 관한 설명서를 포함하는, 사람에 존재하는 고형 종양의 효과를 치료하거나 개선하기 위한 키트.
  55. 제54항에 있어서, 씨. 노비 CFU에 의해 유발된 유해 부작용을 치료하거나 완화시키기에 효과적인 하나 이상의 항생제를 추가로 포함하는, 키트.
  56. 제54항에 있어서, 상기 씨. 노비 CFU가 영양 형태 및 포자 형태로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 키트.
  57. 제54항에 있어서, 상기 씨. 노비가 씨. 노비 NT인, 키트.
  58. 제57항에 있어서, 상기 단위 용량이 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×104 내지 1×107 씨. 노비 NT 포자를 포함하는, 키트.
  59. 제57항에 있어서, 상기 단위 용량이 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×106 내지 1×107 씨. 노비 NT 포자를 포함하는, 키트.
  60. 제57항에 있어서, 상기 단위 용량이 약제학적으로 허용되는 담체 또는 용액 중의 약 1×104 씨. 노비 NT 포자를 포함하는, 단위 용량.
  61. 제54항에 있어서, 1 내지 4회의 치료 사이클을 수행하기 위한 상기 씨. 노비의 1 내지 4회의 단위 용량을 추가로 포함하는, 키트.
  62. 제58항에 있어서, 1 내지 4회의 치료 사이클을 수행하기 위한 상기 씨. 노비의 NT 포자의 1 내지 4회의 단위 용량을 추가로 포함하는, 키트.
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