KR20160004684A - 오공교의 제조방법, 상기 방법으로 제조된 오공교, 상기 오공교를 이용하여 오공교 약침을 제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교 약침 - Google Patents

Abstract

본 발명은 오공교의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교에 관한 것으로서, 구체적으로는, 오공을 분쇄하는 단계; 유기용매와 무기용매를 배합하여 오공을 추출하는 단계; 오공 추출물을 균질화하는 단계; 및 오공 추출물을 초음파파쇄하는 단계;를 포함하여 오공교를 제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교에 관한 것이다.
본 발명은 상기 오공교를 이용하여 오공교 약침을 제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교 약침에 관한 것으로서, 구체적으로는, 오공교를 제조하는 단계; 제조된 오공교를 주사용수와 혼합하는 단계; 오공교 혼합액을 추출하는 단계; 오공교 혼합액을 농축하는 단계; 오공교 혼합 농축액을 1차 파쇄 및 균질화하는 단계; 오공교 혼합 농축액을 2차 파쇄하는 단계; 및 오공교 혼합 농축액을 여과하는 단계;를 포함하는, 오공교를 이용하여 오공교 약침을 제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교 약침에 관한 것이다.
본 발명의 제조 방법으로 제조된 오공교 및 오공교를 이용하여 제조된 약침은 오공 성분의 추출 효율이 높으며, 알라닌 함유율이 높음으로써 독성 및 부작용이 낮은 효과를 보유하고 있다.

Description

오공교의 제조방법, 상기 방법으로 제조된 오공교, 상기 오공교를 이용하여 오공교 약침을 제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교 약침{A METHOD FOR MAKING GEL OF SCOLOPENDRA SUBSPINIPES, THE GEL, A METHOD FOR MAKING MEDICINE ACUPUNCTURE LIQUID COMPRISING THE GEL, AND THE MEDICINE ACUPUNCTURE LIQUID}

본 발명은 오공교의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교에 관한 것으로서, 구체적으로는, 오공을 분쇄하는 단계; 유기용매와 무기용매를 배합하여 오공을 추출하는 단계; 오공 추출물을 균질화하는 단계; 및 오공 추출물을 초음파파쇄하는 단계;를 포함하여 오공교를 제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교에 관한 것이다.

본 발명은 상기 오공교를 이용하여 오공교 약침을 제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교 약침에 관한 것으로서, 구체적으로는, 오공교를 제조하는 단계; 제조된 오공교를 주사용수와 혼합하는 단계; 오공교 혼합액을 추출하는 단계; 오공교 혼합액을 농축하는 단계; 오공교 혼합 농축액을 1차 파쇄 및 균질화하는 단계; 오공교 혼합 농축액을 2차 파쇄하는 단계; 및 오공교 혼합 농축액을 여과하는 단계;를 포함하는, 오공교를 이용하여 오공교 약침을 제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교 약침에 관한 것이다.

본 발명은 오공교를 제조할시 유기용매와 무기용매를 3:7 ~ 6:4의 조성비로 배합하여 오공을 감압추출하고, 오공 추출물을 15 ~ 60분 초음파파쇄하는 것을 기술적 특징으로 하고 있다.

본 발명은 오공교 약침을 제조할시 오공교 혼합액을 고속 호모게나이져(homogenizer)를 사용하여 15,000 ~ 19,000 rpm으로 5 ~ 15분 동안 1차 파쇄 및 균질화한 후, 초음파파쇄기(sonicator)를 사용하여 20 ~ 65℃에서 20 ~ 40분 동안 초음파 10 ~ 130 kHz 펄스(pulse)를 7 ~ 11초 주입하고 1 ~ 5초 휴지하는 것을 복수 회 수행하여 2차 파쇄하는 것을 기술적 특징으로 하고 있다.

본 발명의 제조 방법으로 제조된 오공교 및 오공교를 이용하여 제조된 약침은 오공 성분의 추출 효율이 높으며, 알라닌 함유율이 높음으로써 독성 및 부작용이 낮은 효과를 보유하고 있다.

오공은 절지동물문에 속하는 지네(Scolopendra subspinipes)의 별칭으로서, 개미산, 콜레스테롤, 용혈성 단백질 및 히스타민 등의 성분을 보유하고 있으며, 경풍, 경련, 류마티스 관절염, 신경통, 안면신경마비 및 파상풍 등에 약효가 있고, 항경련작용, 소염작용 및 억균작용 등의 효능을 보유하여 오래 전부터 약재로 사용되어 왔다.

그러나 오공은 독성이 있어 위장 점막에 자극을 주어 오심, 구토, 복통 또는 변혈 등이 발생할 수 있고, 복부 또는 하지에 홍반, 소양(가려움증) 등이 발생할 수 있으며, 전신에 홍진이 발생할 수 있다.

기존에도 오공의 독성을 완화하는 방법이 존재해 왔으며, 오공의 독성을 완화하는 가공법으로는 대표적으로 생강을 얇게 썰어 용기에 담고 오공을 생강 위에 놓은 후 생강이 연소될 때까지 가열하는 것을 3회 반복하는 방법이 있다.

그러나 상기 방법은 생강의 연소를 3회나 반복하므로, 연소된 생강에서 발암물질인 벤조피렌이 발생되며, 상기 생강 위에 배치된 오공에도 벤조피렌이 포함되므로 안전성이 매우 낮다. 또한 오공에 열이 가해지므로 단백질 성분이 주를 이루는 오공 성분이 변성되며, 그에 따라 오공의 약효가 감소할 확률이 높다.

따라서 오공의 독성 및 부작용을 완화하면서도 오공에 함유된 성분을 변성시키지 않고 효율적으로 추출하여 오공의 약효를 유지하는 가공 방법이 필요한 실정이다.

또한, 오공은 근래에 약침(藥鍼)으로도 가공되어 사용되고 있다.

약침은 약침 요법에 사용되는 약액을 지칭하는데, 한약재 등에서 추출 또는 정제하여 제조된다. 약침 요법은 침구치료와 한약치료를 결합하여 발전시킨 치료법으로서, 상기 약침을 경혈, 피부 밑, 또는 관절 내에 주입하는 요법이다.

약침 요법을 수행할시에는 약침이 목적 부위에 직접 투여되므로 복용, 도포 등 기타 약 투여 방식에 비하여 약효가 빠르게 나타난다는 장점이 있으나, 그에 따라 약효가 지나치게 강하여 부작용이 나타날 우려가 있다.

본래 독성이 있는 오공을 약침으로 제조하여 체내에 주입할시 오공 자체의 부작용이 더욱 심화되어 발현할 수 있으므로, 오공 자체의 독성을 완화하면서도 오공에 함유된 성분을 약화시키지 않을 오공 약침 제조 방법이 절실하다 하겠다.

한편, 오공 내에 함유된 알라닌(Alanin)은 아미노산의 일종으로서, 간 대사를 촉진하여 유해물질을 무독화하고, 간 내 모세혈관으로부터 간으로 질소를 운반하여 무독화하는 역할을 하는 단백질이다. 따라서 오공에 함유된 알라닌의 함량을 증진하면 오공의 독성 및 부작용을 완화시킬 수 있다.

이에 본 출원인은 호모게나이져 및 초음파파쇄기를 사용하여 오공교를 제조함으로써, 알라닌의 함량이 높아 독성 및 부작용이 적으면서도 오공 성분의 추출 효율을 높인 오공교의 제조방법, 상기 방법으로 제조된 오공교, 상기 오공교를 이용하여 오공교 약침을 제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교 약침을 제공할 수 있다고 판단하여 본 발명을 안출하였다.

한편, 본 발명과 연관된 선행 문헌을 살펴보면, 대한민국 등록특허공보 제10-0415815호(이하 선행 문헌 A)에는 우슬, 오공, 두충, 오가피, 방풍을 주성분으로 함유하는 의약 조성물 및 이를 주성분으로 함유하는 약학적 제제에 관하여 기재되어 있으며, 대한민국 등록특허공보 제10-0415826호(이하 선행 문헌 B)에는 구척과 천수근의 분말이나 또는 기타 용매로 추출한 엑스에서 선택된 1종 이상의 성분을 주성분으로 함유하고, 오공 및 기타 약재에서 선택된 1종 이상의 보조생약 또는 기타 용매로 추출한 엑스로 조성된 조성물이 기재되어 있다.

또한 대한민국 공개특허공보 제10-2011-0019977호(이하 선행 문헌 C)에는 힐초근 및 연자육을 유효성분으로 함유한 약침에 관하여 기재되어 있으며, 대한민국 공개특허공보 제10-2007-0120250호(이하 선행 문헌 D)에는 비 침습성 약침주입기의 피부투과를 높이는 생분해성 나노입자에 관하여 기재되어 있다.

선행 문헌 A 및 B의 목적은 골다공증, 류마티스 관절염 및 디스크 증상을 치료하는 것이며, 상기 선행 문헌 A 및 B에는 부종 억제 정도, 골다공증 억제 정도, 활액막 세포 생존 유무, 연골 조직 파괴 정도 등을 측정하는 등 각 문헌에서 나타내고자 한 오공의 효과에 대한 실험예만 각각 기재되어 있을뿐, 오공의 추출 효율 및 오공의 독성 및 부작용을 완화시키기 위한 방안 및 그에 따른 효과에 관하여는 전혀 암시 또는 기재가 되어 있지 않다.

또한 선행 문헌 C의 목적은 스트레스, 공황장애 및 그로 인하여 유발되는 증상을 치료하는 것이며, 선행 문헌 D의 목적은 미소한 입자 직경을 가진 비 침습성 약물주입기 경피투여용 나노입자 제형을 제조하여 피부 및 근육의 약물 주입시 투과율을 높이는 것이다.

상기 선행 문헌 C에는 뒷다리 부종 발생률, 관절염 지표, TNF-α, IL-1 및 IL-6의 mRNA 발현 등 상기 문헌에서 나타내고자 한 오공의 효과에 대한 실험예만 기재되어 있으며, 선행 문헌 D에는 사이즈에 따른 비 침습성 약침주입기의 피부 투과도 및 근육 투과도를 측정하는 등 각 문헌에서 나타내고자 한 오공의 효과에 대한 실험예만 각각 기재되어 있다.

따라서 상기 선행 문헌 A, B, C 및 D의 목적은 본 발명에서의 오공의 독성 및 부작용을 완화시키면서도 오공 성분의 추출 효율을 증진하는 오공의 가공 방법을 제공하려는 목적과 매우 상이하다 하겠다.

대한민국 등록특허공보 제10-0415815호 (2004. 01. 08) 대한민국 등록특허공보 제10-0415826호 (2004. 01. 08) 대한민국 등록특허공보 제10-2011-0019977호 (2011. 03. 02) 대한민국 공개특허공보 제10-2007-0120250호 (2007. 12. 24)

본 발명의 목적은 오공 성분의 추출 효율 및 알라닌 함유율이 높음으로써 독성 및 부작용이 낮은 효과를 보유한 오공교의 제조방법, 상기 방법으로 제조된 오공교, 상기 오공교를 이용하여 오공교 약침을 제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교 약침을 제공하는데에 있다.

본 발명은 오공을 분쇄하는 단계; 유기용매와 무기용매를 배합하여 오공을 추출하는 단계; 오공 추출물을 균질화하는 단계; 및 오공 추출물을 초음파파쇄하는 단계;를 포함하는 오공교의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교를 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.

본 발명은 오공교를 주사용수와 혼합하는 단계; 오공교 혼합액을 추출하는 단계; 오공교 혼합액을 농축하는 단계; 오공교 혼합 농축액을 1차 파쇄 및 균질화하는 단계; 오공교 혼합 농축액을 2차 파쇄하는 단계; 및 오공교 혼합 농축액을 여과하는 단계;를 포함하는 오공교 약침의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 오공교 약침을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.

본 발명에 따른 제조방법으로 제조된 오공교 및 상기 오공교를 이용하여 제조된 오공교 약침은 오공 성분의 추출 효율이 높은 효과 및 알라닌 함유율이 높아 독성 및 부작용이 낮은 효과를 보유하고 있으며, 근골격계 질환, 통증, 신경계통 질환 및 운동신경원질환, 근육영양장애, 샤르코마리투스 등 희귀난치성 신경근육질환을 치료하는 데에 사용될 수 있다.

도 1은 오공교를 제조하는 방법을 시계열적으로 나타낸 플로우 차트이다.
도 2는 오공교를 이용하여 오공교 약침을 제조하는 방법을 시계열적으로 나타낸 플로우 차트이다.
도 3은 유기용매와 무기용매의 조성비를 4:6으로 설정하여 오공을 추출한 후, 15 ~ 30분 초음파파쇄하여 제조한 오공교 샘플 1의 성분을 분석한 표이다.
도 4는 유기용매와 무기용매의 조성비를 4:6으로 설정하여 오공을 추출한 후, 30 ~ 60분 초음파파쇄하여 제조한 오공교 샘플 2의 성분을 분석한 표이다.
도 5는 유기용매와 무기용매의 조성비를 3:7로 설정하여 오공을 추출한 후, 30 ~ 60분 초음파파쇄하여 제조한 오공교 샘플 3의 성분을 분석한 표이다.
도 6은 기존의 알코올 추출 방법으로 제조한 오공 추출물의 성분을 분석한 표이다.

본 명세서 및 청구 범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.

따라서 본 명세서에 기재된 실시예, 참조예 및 도면에 기술된 사항은 본 발명의 가장 바람직한 일 예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.

실시예 1. 오공교의 제조

도 1은 오공교를 제조하는 방법을 시계열적으로 나타낸 플로우 차트이다.

(1) 오공을 분쇄하는 단계

오공을 분쇄한다. 이 때 오공은 발과 머리 및 꼬리를 제거한 것 및 어떤 처리도 가하지 않은 것 등을 사용할 수 있다.

오공은 체내에 주입되므로, 오공의 분쇄 입자 크기를 되도록 미소하게 하기 위하여 크러셔 내벽에 반발판을 설치하여 타격 반발을 반복하는 방법을 사용하여 오공을 분쇄한다.

필요에 따라 터보밀, 슈퍼미크론밀, 포트밀, 튜브밀, 코니칼밀, 제트분쇄기, 디스크밀, 핀 밀, 스탬프밀, 슈레더, 해머밀, 해머 크러셔, 콘 크러셔, 조 크러셔, 커터밀, 에지런너, 롤러밀, 레이몬드밀 및 터보미크론 밀 또는 제트밀 등을 사용하여 물리적 단위 조작을 사용할 수 있다.

크러셔 하부에 추가적으로 스크린 또는 그리드를 설치하여 분급할 수 있다.

(2) 유기용매 및 무기용매를 사용하여 오공을 추출하는 단계

유기용매 및 무기용매를 사용하여 오공 추출물을 제조한다.

오공 추출물을 제조하기 전후 단계에 세척, 탈수, 건조 또는 살균 등의 공정을 수행할 수 있으며, 각 공정의 순서는 유동적이다. 각 공정은 다양한 방법을 사용할 수 있다.

유기용매 및 무기용매를 사용하여 오공 추출물을 제조하는 단계는, 다양한 극성을 보유한 용매를 사용하여 오공 내 아미노산의 추출 효율성을 높이기 위하여 사용되었다.

오공의 추출은 유기용매 및 무기용매를 사용한 진공감압추출법을 사용하여 수행된다.

조건에 따라 이산화탄소 초임계 추출법, 수증기 증류법, 진공추출법, 감압추출법, 마이크로 웨이브 공정 추출법, 퍼콜레이션 추출법 등의 다양한 추출 방법이 사용될 수 있다.

진공감압추출기의 내부 조건은 60 ~ 70℃ 이하에서 3 ~ 7시간 가수분해 교반되는 것으로 설정되며, 조건에 따라 다양하게 설정될 수 있다.

추출에 사용되는 유기용매는 에탄올, 메탄올, 지방유, 글리세린, 마유, 플로필렌글리콜, 에테르, 클로르포름, 석유에테르, 헥산, 벤젠, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 아세톤, 부탄올 및 이소프로판올 등에서 선택될 수 있으며, 추출에 사용되는 무기용매는 물, 액체암모니아, 삼염화안티몬 및 불화수소 등에서 선택될 수 있다.

유기용매 및 무기용매의 배합비는 3:7 ~ 4:6으로 조성되며 조건에 따라 다양하게 설정될 수 있다.

또한, 분배계수가 다른 2가지 이상의 용매를 동시에 사용하여 추출할 수도 있으며, 2가지 이상의 용매를 사용하여 2차 이상 추출할 수 있다.

추출 시간 역시 달라질 수 있으며, 2가지 이상의 추출 방법을 사용하여 2차 이상 추출할 수 있다.

(3) 오공 추출물을 균질화하는 단계

오공 추출물을 균질화한다.

오공 추출물을 균질화할시 고속 호모게나이져를 사용하며, 조건에 따라 기계적 분산 및 계면 활성제를 가하여 유화 분산하는 방법 등을 사용할 수 있다.

고속 호모게나이져의 조건은 다양하게 설정될 수 있다.

(4) 오공 추출물을 초음파파쇄하는 단계

오공 추출물을 초음파파쇄한다.

초음파파쇄 시간은 15 ~ 60분 동안 수행될 수 있으며, 조건에 따라 다양하게 설정될 수 있다.

초음파파쇄기는 초음파 특유의 공동 효과(cavitation)로 인하여 분자운동을 유발시키며, 상기 분자 운동이 활성화 에너지로 작용하여 추출, 농축 등의 공정 수행시 반응성을 향상시키는 효과를 보유하고 있으며, 단백질 생산 공정에도 도입되어 온 기기로써, 초음파파쇄기를 사용하여 시료를 파쇄하면 시료 내에 함유된 단백질의 생성률이 증진될 수 있다.

상기와 같은 초음파파쇄기의 특성을 이용하여 왕지네 성분을 효율적으로 추출하기 위하여 왕지네 추출물의 초음파파쇄를 수행한다.

오공 추출물의 파쇄 방법은 조건에 따라, 커터밀, 슈레더, 해머밀, 에지런너, 롤러밀, 레이몬드밀 및 터보미크론 밀 등의 기계를 사용하여 자동으로 파쇄하는 방법과, 막자 및 막자 사발 등을 사용하여 수동으로 파쇄하는 방법 등 다양한 방법을 사용할 수 있다.

오공을 분쇄하는 단계, 유기용매 및 무기용매를 사용하여 오공을 추출하는 단계, 오공 추출물을 균질화하는 단계 및 오공 추출물을 초음파 파쇄하는 단계는 복수 회 수행될 수 있으며, 상기 단계들을 모두 수행한 후 소금 및/또는 산을 첨가할 수 있다. 산은 인산, 탄산, 아세트산, 구연산 및 붕산 등에서 1종 이상 선택될 수 있다.

또한 소금 및/또는 산의 중량비는 다양하게 설정될 수 있다.

실시예 2. 오공교를 이용한 오공교 약침의 제조

도 2는 오공교를 이용하여 오공교 약침을 제조하는 방법을 시계열적으로 나타낸 플로우 차트이다.

(1) 오공교를 제조하는 단계

실시예 1에 기재된 과정과 동일한 과정으로 오공교를 제조한다.

(2) 오공교를 주사용수와 혼합하는 단계

오공교를 주사용수와 혼합하여 오공교 혼합액을 제조한다.

이 때 오공교와 주사용수의 조성비는 1 : 1000로 조정되며, 오공교와 주사용수를 혼합한 액 1 중량부에 알코올 7 ~ 9 중량부를 혼합하여 오공교 혼합액 내의 알코올 비율이 70 ~ 90%가 되도록 한다.

설계 조건에 따라, 교반기를 사용하여 오공교 혼합액을 교반할 수 있으며, 교반 시간은 2 ~ 4시간 수행된다. 교반 시간은 조건에 따라 다양하게 수행될 수 있다.

(3) 오공교 혼합액을 추출하는 단계

오공교 혼합액을 추출한다.

오공교 혼합액을 추출시 디컴프레셔를 이용한 감압추출이 수행되며, 조건에 따라 용매 추출법, 이산화탄소 초임계 추출법, 수증기 증류법, 진공추출법, 감압추출법, 마이크로 웨이브 공정 추출법, 퍼콜레이션 추출법 등의 다양한 추출 방법이 사용될 수 있다.

(4) 오공교 혼합액을 농축하는 단계

오공교 혼합액을 농축한다.

오공교 혼합액을 농축할시 감압농축법을 사용하며, 조건에 따라 증발 농축, 동결 농축, 건조 농축, 막 농축, 진공 농축 및 감압 농축 등의 다양한 방법이 사용될 수 있다.

감압 농축은 2 ~ 5시간 동안 60 ~ 80℃에서 로타리 바큠 이바포레이터(rotary vacuum evaporator)를 사용하여 수행된다.

또한, 2가지 이상의 농축 방법을 사용하여 2차 이상 농축할 수 있다.

오공교 혼합액을 감압 농축함으로써, 오공교를 주사용수와 혼합하는 단계에서 첨가된 알코올이 끓는점의 차이에 의한 추출법으로 증발되고 농축된 오공교 혼합액이 남게 된다.

(5) 오공교 혼합 농축액을 1차 파쇄 및 균질화하는 단계

오공교 혼합 농축액을 1차 파쇄 및 균질화한다.

오공교 혼합 농축액의 1차 파쇄 및 균질화는 오공교 혼합 농축액 내의 오공 세포벽을 파쇄하여 성분을 효율적으로 수득하기 위하여 수행된다.

오공교 혼합 농축액을 1차 파쇄 및 균질화할시 고속 호모게나이져가 사용되며, 호모게나이져의 조건은 15,000 ~ 19,000 rpm으로 5 ~ 15분간 설정할 수 있으며 다양하게 조건을 설정할 수 있음은 물론이다.

조건에 따라, 호모게나이져 외에도 커터밀, 슈레더, 해머밀, 에지런너, 롤러밀, 레이몬드밀 및 터보미크론 밀 등의 기계를 사용하여 자동으로 파쇄하는 방법과, 막자 및 막자 사발 등을 사용하여 수동으로 파쇄하는 방법 등에서 다양하게 선택될 수 있음은 물론이다.

(6) 오공교 혼합 농축액을 2차 파쇄하는 단계

오공교 혼합 농축액의 pH를 조절한 후 2차 파쇄한다.

오공교 혼합 농축액의 2차 파쇄 역시 오공교 혼합 농축액 내의 오공 세포벽을 2차 파쇄하여 성분을 더욱 효율적으로 수득하기 위하여 수행되었다.

오공교 혼합 농축액을 2차 파쇄할시 1N NaOH 및 1N HCl를 용매로 사용하여 오공교 혼합 농축액의 pH를 6.8 ~ 7.2로 조절한 후, 초음파파쇄기를 사용하여 파쇄한다.

오공교 혼합 농축액의 pH를 중성으로 조절하여, 체내에 주입하였을시의 안전성을 위하여 pH를 6.8 ~ 7.2로 조절한다.

또한 초음파파쇄기의 사용 조건을 20 ~ 65℃에서 20 ~ 40분 동안 초음파 10 ~ 130 kHz 펄스(pulse)를 7 ~ 11초간 주입하고 1 ~ 5초간 휴지하는 것을 복수 회 수행하는 것으로 설정한다. 초음파 파쇄기의 조건이 다양하게 설정될 수 있음은 물론이다.

조건에 따라서, 커터밀, 슈레더, 해머밀, 에지런너, 롤러밀, 레이몬드밀 및 터보미크론 밀 등의 기계를 사용하여 자동으로 파쇄하는 방법과, 막자 및 막자 사발 등을 사용하여 수동으로 파쇄하는 방법 등 기타 방법을 사용할 수 있음은 물론이다.

(7) 오공교 혼합 농축액을 여과하는 단계

오공교 혼합 농축액을 여과한다.

오공교 혼합 농축액의 여과는 막 직경 8 um 와트만 여과지로 2번 여과한 후, 막 직경 0.4 um 멤브레인 필터, 엔도톡신제거용 필터 및 막 직경 0.2 um 멤브레인 필터를 여과하여 수행되며, 조건에 따라 크로마토크래피, 감압 여과 및 흡인 여과 등 다양한 방법이 사용될 수 있다.

필요에 따라 멸균 또는 살균 등의 과정이 각 단계 수행 전후에 수행될 수 있다. 멸균 또는 살균이 수행되는 횟수는 제한되지 않는다.

오공교 혼합 농축액 멸균시 100 ~ 140℃, 10 ~ 20lb psi 압력 단위에서 고온고압멸균기를 사용하며, 조건에 따라 저온멸균, UV 멸균, 자외선 멸균 및 화염멸균 등 다양한 방법이 사용될 수 있다.

실험예 1. 오공교 제조방법에 따른 성분 비교

본 실험예 1은 실시예 1에 기재된 과정으로 제조된 시료를 사용하여 수행하였다.

(1) 실험 과정

① 유기용매와 무기용매의 조성비를 각각 달리하고, 초음파파쇄를 수행하는 시간을 각각 달리한 오공교 시료를 3군 준비하고, 기존의 알코올추출 방법으로 추출한 오공 추출물 시료를 1군 준비하여 30 ul씩 건조하였다.

유기용매와 무기용매의 조성비 및 초음파파쇄 수행 시간 설정 시간에 따른 각 군의 분류는 다음과 같다.

샘플 번호	유기용매 중량비	무기용매 중량비	초음파 파쇄 시간(분)
1	4	6	15 ~ 30
2	4	6	30 ~ 60
3	3	7	30 ~ 60

② MeOH, H₂0, TEA 및 PITC(phenylisothiocyanate)를 혼합한 용액 20 ul씩을 시료에 주입하고 상온에서 30분간 반응시켜 유도체화하였다.

③ 시료를 건조시킨 후, 건조된 시료를 NaHAc, TEA, EDTA 및 CH3CN을 혼합하여 제조한 용매 200 ul 에 용해하였다.

④ 용해된 시료를 0.45μm 필터로 여과한 후, 미량원심분리(mircocentrifuge) 하였다.

⑤ 미량원심분리한 시료 상층액을 채취하여 HPLC의 오토샘플러(autosampler)에 안치한 후, HPLC를 수행하였다.

(2) 실험 결과

도 3은 유기용매와 무기용매의 조성비를 4:6으로 설정하여 오공을 추출한 후, 15 ~ 30분 초음파파쇄하여 제조한 오공교 샘플 1의 성분을 분석한 표이다.

도 4는 유기용매와 무기용매의 조성비를 4:6으로 설정하여 오공을 추출한 후, 30 ~ 60분 초음파파쇄하여 제조한 오공교 샘플 2의 성분을 분석한 표이다.

도 5는 유기용매와 무기용매의 조성비를 3:7로 설정하여 오공을 추출한 후, 30 ~ 60분 초음파파쇄하여 제조한 오공교 샘플 3의 성분을 분석한 표이다.

도 6은 기존의 알코올 추출 방법으로 제조한 오공 추출물의 성분을 분석한 표이다.

실험 결과, 기존의 알코올 추출 방법으로 제조한 오공 추출물은 총 영양 성분 함량은 기존 오공 추출물의 분석 결과를 나타낸 도 6을 살펴본 결과 8384.99 nmol/mL이었으나, 본 발명에 따른 오공교 제조방법으로 제조되어 용매의 조성비를 조정하고 파쇄시간을 달리하여 각각 제조한 오공교는 상기 오공 추출물보다 총 영양 성분 함량이 낮았다.

본 발명에 따른 오공교 제조방법으로 제조한 오공교의 총 영양 성분 함량은 샘플 1의 분석 결과를 나타낸 도 3을 살펴본 결과 27291.32 nmol/mL였고, 샘플 2의 분석 결과를 나타낸 도 4를 살펴본 결과 22672.43 nmol/mL였으며, 샘플 3의 분석 결과를 나타낸 도 5를 살펴본 결과 30449.79 nmol/mL로 나타났다. 기존의 방법으로 제조한 오공 추출물 총 영양 성분 함량의 약 3배에 달하는 것을 관찰할 수 있었다.

또한 알라닌 함량을 살펴보면, 기존 오공 추출물의 분석 결과를 나타낸 도 6 을 살펴본 결과 알라닌 함량이 1584.70 nmol/mL였으나, 본 발명에 따른 오공교 제조방법으로 제조된 오공교의 알라닌 함량은 샘플 1의 분석 결과를 나타낸 도 3을 살펴본 결과 5890.33 nmol/mL였고, 샘플 2의 분석 결과를 나타낸 도 4를 살펴본 결과 6074.17 nmol/mL였으며, 샘플 3의 분석 결과를 나타낸 도 5를 살펴본 결과 6383.95 nmol/mL로, 기존의 방법으로 제조한 오공 추출물 알라닌 함량의 약 3 ~ 4배에 달하는 것을 관찰할 수 있었다.

이로써, 본 발명에 따른 방법으로 제조한 오공교는 기존의 알코올 추출 방법으로 제조한 오공 추출물보다 총 영양 성분 함량 및 알라닌 함량이 현저히 높다는 결론을 도출할 수 있다.

Claims (7)

1. 오공을 분쇄하는 단계; 유기용매와 무기용매를 배합하여 오공을 추출하는 단계; 오공 추출물을 균질화하는 단계; 및 오공 추출물을 초음파파쇄하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는, 오공교의 제조방법.
   
2. 청구항 1에 있어서,
   상기 유기용매와 무기용매를 배합하여 오공을 추출하는 단계에서 추출 방법은 감압추출이고, 유기용매와 무기용매의 조성비는 3:7 ~ 6:4이며,
   상기 오공 추출물을 초음파파쇄하는 단계에서 파쇄 시간은 15 ~ 60분인 것을 특징으로 하는, 오공교의 제조방법.
   
3. 청구항 1에 있어서,
   상기 오공교에는 알라닌(ALA)이 5890.33 ~ 6383.95 nmol/mL 함유되어 있는 것을 특징으로 하는, 오공교의 제조방법.
   
4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 기재된 방법으로 제조된 오공교.
   
5. 청구항 4에 기재된 오공교를 주사용수와 혼합하는 단계; 오공교 혼합액을 추출하는 단계; 오공교 혼합액을 농축하는 단계; 오공교 혼합 농축액을 1차 파쇄 및 균질화하는 단계; 및 오공교 혼합 농축액을 2차 파쇄하는 단계;를 포함하여 제조되는 것을 특징으로 하는 오공교 약침의 제조 방법.
   
6. 청구항 5에 있어서,
   상기 오공교 혼합 농축액을 1차 파쇄 및 균질화하는 단계는 고속 호모게나이져(homogenizer)를 사용하여 15,000 ~ 19,000 rpm으로 5 ~ 15분 동안 수행되며,
   상기 오공교 혼합 농축액을 2차 파쇄하는 단계는 초음파파쇄기(sonicator)를 사용하여 20 ~ 65℃에서 20 ~ 40분 동안 초음파 10 ~ 130 kHz 펄스(pulse)를 7 ~ 11초 주입하고 1 ~ 5초 휴지하는 것을 복수 회 수행되는 것을 특징으로 하는 오공교 약침의 제조 방법.
   
7. 청구항 6에 기재된 방법으로 제조된 오공교 약침.

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