KR20160000826A - 초음파 추출법에 의한 조밥나물 추출물 및 그의 제조방법과 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 초음파 추출법에 의한 조밥나물 추출물 및 그의 제조방법과 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 조밥나물의 유용성분 파괴를 최소화하기 위해 초음파 추출법으로 조밥나물 추출물을 추출하여, 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선 효과가 우수하고 피부 자극에 대한 부작용이 없는 조밥나물 추출물을 수득하는 것이다.
또한, 조밥나물 추출물을 이용한 화장료 조성물을 제공함으로써, 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하여 항산화, 항염증, 아토피 피부를 개선하는 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 조밥나물과, 물 또는 에탄올 또는 1,3-부틸렌글리콜 중 어느 하나 이상의 용매를 혼합한 후 침적하여 조밥나물 침적물을 얻는 단계(T1)와 상기 조밥나물 침적물을 초음파 추출기에 투입하고 초음파로 조사하여 조밥나물 추출물을 얻는 단계(S2)로 이루어진 것을 특징으로 하는 초음파 추출법에 의한 조밥나물 추출물 제조방법인 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 조밥나물과 물, 에탄올 및 1,3-부틸렌글리콜 혼합 용매를 혼합한 후 침적하여 조밥나물 침적물을 얻는 단계(S1)와 상기 조밥나물 침적물을 초음파 추출기에 투입하고 초음파로 조사하여 조밥나물 추출물을 얻는 단계(S2)로 이루어진 조밥나물 추출물의 제조방법인 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 단계(T1) 또는 단계(S1)에서 상기 조밥나물과 용매를 혼합한 후 4 내지 50 ℃에서 1 내지 24 시간 동안 침적하여 조밥나물 침적물을 얻는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 단계(S2)에서 얻은 조밥나물 추출물을 냉각, 여과, 농축하는 단계(S3)를 더 포함하여 이루어진 조밥나물 추출물의 제조방법인 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명에서 조밥나물 추출물은 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하는 작용을 가져서, 항산화, 항염증, 아토피 피부 개선으로 선택되는 효과를 가지며, 피부 자극에 대한 부작용이 없는 효과를 가지는 것을 특징으로 한다.
아울러, 본 발명은 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증, 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 총 중량대비 0.01 내지 10 중량%의 액상 조밥나물 추출물이 포함되는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물은 총 중량대비 0.001 내지 5 중량%의 분말 조밥나물 추출물이 포함되는 것을 특징으로 한다.

Description

초음파 추출법에 의한 조밥나물 추출물 및 그의 제조방법과 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물{The hieracium umbellatum extracts by ultrasonic extraction and its manufacturing method and the hieracium umbellatum extraction as active ingredient cosmetic composition for improving of an antioxidant, anti-inflammatory, atopic skin}

본 발명은 초음파 추출법에 의한 조밥나물 추출물 및 그의 제조방법과 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 조밥나물의 유용성분 파괴를 최소화하기 위해 초음파 추출법으로 조밥나물 추출물을 추출하여, 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선 효과가 우수하고 피부 자극에 대한 부작용이 없는 조밥나물 추출물을 수득하는 것이다.

또한, 조밥나물 추출물을 이용한 화장료 조성물을 제공함으로써, 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하여 항산화, 항염증, 아토피 피부를 개선하는 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 과도한 자외선이나 오염물질 등에 노출되면 홍반, 부종, 가려움 등의 피부자극 및 염증반응이 유발된다. 이러한 피부 트러블은 미관상 문제가 될 뿐만 아니라, 염증반응과정에서 생성되는 물질들이 부수적으로 색소 침착을 일으키고, 피부 탄력섬유의 붕괴를 촉진시켜 피부 주름을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 또한, 피부 손상에는 자유라디칼과 관련된 것으로 알려져 있다.

자유라디칼 이론은 1950년대 중반 디 하만(D. Harman)에 의해서 제시되었으며, 최근 학회와 관련업계에서 주목을 받고 있다. 자유라디칼은 세포를 파괴하거나 피부 진피층의 결합조직을 절단하거나 교차 결합을 일으키므로 주름형성, 피부암, 세포 살상, 류마티스성 관절염, 아토피성 피부염, 여드름 등 여러 가지 문제를 발생시킨다.

자유라디칼이 생성되는 원인은 백혈구의 식작용, 미토콘드리아에서의 ATP 생산과정 중 전자 전달계, 미엘로퍼 옥사이드(Myeloper Oxide(MPO))의 작용, 자외선, 담배, 정상적인 대사 과정, 스트레스, 공해 물질, 세균으로 알려져 있다.

상기 식작용이란 세포체가 이물 혹은 박테리아 등을 자기 체내에 받아들여서 이것을 분해, 무해화(無害化)하는 작용을 말한다.

물론 인체에는 항산화 물질(라디칼 소거제)인 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 (SuperOxide Dismutase : SOD), 카탈라아제, 비타민 E, 비타민 C, 유비퀴놀 (Uviquinol)있지만, 나이, 공해, 자외선, 스트레스에 의해 항산화 체계가 무력화되고, 자유라디칼이 점차 증가하게 된다.

증가된 자유라디칼은 진피의 결합조직인 콜라겐(Collagen), 엘라스틴 (Elastin), 히아루론산(Hyaluronic acid)을 파괴하여 피부의 일정 부위 침하 현상(주름)을 일으키며, 또한, 세포막의 지질 부분을 산화시켜 세포의 파괴 현상이 발생되어 피부염, 여드름, 피부암의 질병을 유발하게 되는 것이다.　

상기 자유라디칼은 멜라닌 형성과정 중 자발적인 산화반응(도파퀴논 → 멜라닌)에 관여하여 기미, 주근깨 등의 원인 및 주름생성의 원인이 되기도 한다. (대한 화장품학회지 23권 1호 75~132)　

염증은 해로운 주위 환경, 즉 세균과 같은 외부 이물질의 침입과 기계적 손상으로부터 생체를 보호하는 생리적인 반응이다. 이 염증 현상은 여러 종류의 다핵형 백혈구(PMNs)와 면역 물질의 많은 증가를 초래하고, 이들 세포들은 염증성 세포 산물인 다양한 종류의 단백질 분해효소와 사이토카인(cytokine)을 분비함으로써 치료 및 방어를 할 수 있게 한다. 엘라스타제(Elastase), 히알루리니다제(hyalurinidase) 및 리폭시게나아제(lipoxygenase)와 같은 효소들은 염증 시 생성되는 단백질 및 지질 분해 효소들로 잘 알려져 있다.

한편 이들의 작용은 인접해 있는 조직 세포와 비 조직세포 성분들에게도 해로운 손상을 일으켜, 만성염증의 심각한 조직 손상을 가져올 수 있다.

이처럼 과다 염증은 단백질 분해 효소들에 의해 세포 및 결합조직의 손상을 입히고, 결합 조직의 손상은 피부의 탄력을 감소시켜 주름의 원인이 될 뿐 아니라, 세포의 재생 및 증식에도 나쁜 영향을 미치게 되어 빠른 피부노화를 초래하게 되고, 피부에 국소적인 홍반과 부어 오름이 나타나게 된다. 만일, 결합조직이 심각하게 손상되고 염증반응이 지속된다면 정상적인 조직구조와 기능을 회복시키는 일은 훨씬 어렵게 된다.

염증과 함께 백혈구의 수치를 촉진시키는 매개체의 생성은 아라키돈산(arachidonic acid)을 통한 과정에 의해서도 이루어진다. 이 경로는 시클로옥시게나아제(cyclooxygenase)에 의한 과정과 리폭시게나아제(lipoxygenase)에 의한 과정으로 되어 있으며 이들 효소에 의해 생성된 류코트리엔(leukotriene)과 프로스타글란딘(prostagladine)이 염증 유발 인자로 작용한다. 따라서 리폭시게나아제(lipoxygenase)와 시클로옥시게나아제(cyclooxygenase) 저해제는 염증유발물질의 생성 억제뿐만 아니라 염증 시 생성되는 자유라디칼에 의한 세포막 파괴와 지질의 과산화반응을 억제하는 물질로서 항염증 작용을 나타낼 수 있다. 또한, 과다 염증에 의해 생성되는 단백질 및 지질분해효소들을 억제함으로써 그로 인해 손상되는 세포들을 보호하여 피부노화를 억제할 수 있으며, 아토피성 피부를 개선할 수 있다.

일 예로 자유라디칼의 발생을 억제시키는 종래 기술로는 J. Korean Soc Food Sci Nutr. 39(2). 159~164(2010) '국화과 식물 중 에탄올 추출물의 항산화 효과'가 게시되어 있는데, 이는 국화과 15종 식물 꽃 추출물의 총 폴리페놀과 총 플라보노이드의 함량, DPPH 및 ABTS radical 소거능, Fe^{2 +} chelating 효과 및 linoleic acid의 과산화 억제활성을 분석하여 국화과 식물 추출물에서 항산화 효과를 확인한 것이다.

그리고 상기 종래 기술의 제조방법은 국화과 식물을 수확 직후 수세하여 동결건조 한 다음 분쇄하는 단계;와 분쇄한 건조시료를 80 % 에탄올 용매로 60 ℃에서 6시간 동안 환류냉각추출 한 후 감압여과를 하는 단계;와 여과 후 잔사는 2회 반복추출하여 총 3회 반복 추출하는 단계로 이루어져 있다.

상기 종래 기술의 제조방법으로 추출된 국화과 식물 추출물은 항산화 효과를 가지는 추출물을 얻을 수 있지만 식물 종에 따라 항산화 효과가 다르게 나타났으며, 상기 제조방법인 경우 항산화 활성을 가지는 추출물의 양이 적게 나오는 문제점이 있다.

또한, 국화과 식물에 직접 열이 가해져 열로 인한 많은 약효 성분의 파괴와 손실, 그리고 각종 유용성분에 대한 불안정성을 가지는 단점이 있다.

이에 따라 천연 식물의 과실에 존재하는 다양한 유용성분의 성분 파괴를 최소화하고 효과적으로 추출할 수 있는 방법이 요구된다.

즉, 각종 스트레스원에 의한 피부 자극 및 염증을 감소시키고, 화장품 사용으로 인한 부작용을 줄이기 위해서는, 항염증, 항산화 및 피부자극 완화 효능이 있는 물질을 개발하는 것이 절실히 요구되며, 이와 함께 인체에 부작용이 적은 천연물의 유용성분의 성분 파괴를 최소화면서 이를 효과적으로 추출할 수 있는 방법이 함께 필요하다.

따라서, 이러한 자유라디칼과 염증에 의한 피부 트러블의 개선을 위해서는 항산화, 항염 및 아토피 피부의 개선효과가 우수하며, 부작용이 없는 천연 추출물의 개발, 그 추출물을 함유하는 화장료의 개발 및 최적의 추출 방법에 대한 개발이 필수적이다.

본 발명은 상기와 같은 문제를 해결하기 위해 안출된 것으로, 조밥나물 추출물로서, 조밥나물 추출물이 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하는 작용을 가져서, 항산화, 항염증, 아토피 피부 개선으로 선택되는 효과를 가지며, 피부 자극에 대한 부작용이 없는 조밥나물 추출물을 제공하는 데 목적이 있다.

또한, 본 발명은 항산화 활성을 가지는 추출물의 양이 적게 나오고, 원료에 열이 가해져 열로 인한 많은 약효 성분의 파괴와 손실을 가져다 주는 일반 열수 추출법의 단점을 개선하기 위해 1,3-부틸렌글리콜이 포함된 혼합 용매로 침적한 후 초음파 추출법으로 조밥나물 추출물을 얻는 제조방법을 제공하는 데 목적이 있다.

아울러, 본 발명은 조밥나물 추출물을 이용하여 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물을 제공함으로써, 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하여 항산화, 항염증, 아토피 피부를 개선하는 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물을 제공하는 데 목적이 있다.

본 발명은 조밥나물과, 물 또는 에탄올 또는 1,3-부틸렌글리콜 중 어느 하나 이상의 용매를 혼합한 후 침적하여 조밥나물 침적물을 얻는 단계(T1)와 상기 조밥나물 침적물을 초음파 추출기에 투입하고 초음파로 조사하여 조밥나물 추출물을 얻는 단계(S2)로 이루어진 것을 특징으로 하는 초음파 추출법에 의한 조밥나물 추출물 제조방법인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 조밥나물과 물, 에탄올 및 1,3-부틸렌글리콜 혼합 용매를 혼합한 후 침적하여 조밥나물 침적물을 얻는 단계(S1)와 상기 조밥나물 침적물을 초음파 추출기에 투입하고 초음파로 조사하여 조밥나물 추출물을 얻는 단계(S2)로 이루어진 조밥나물 추출물의 제조방법인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 단계(T1) 또는 단계(S1)에서 상기 조밥나물과 용매를 혼합한 후 4 내지 50 ℃에서 1 내지 24 시간 동안 침적하여 조밥나물 침적물을 얻는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 단계(S2)에서 얻은 조밥나물 추출물을 냉각, 여과, 농축하는 단계(S3)를 더 포함하여 이루어진 조밥나물 추출물의 제조방법인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에서 조밥나물 추출물은 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하는 작용을 가져서, 항산화, 항염증, 아토피 피부 개선으로 선택되는 효과를 가지며, 피부 자극에 대한 부작용이 없는 효과를 가지는 것을 특징으로 한다.

아울러, 본 발명은 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증, 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 총 중량대비 0.01 내지 10 중량%의 액상 조밥나물 추출물이 포함되는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 총 중량대비 0.001 내지 5 중량%의 분말 조밥나물 추출물이 포함되는 것을 특징으로 한다.

상기와 같이 본 발명에 따른 조밥나물 추출물은 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하는 작용을 가져서, 항산화, 항염증, 아토피 피부 개선으로 선택되는 효과를 가지며, 피부 자극에 대한 부작용이 없는 효과가 있다.

또한, 본 발명은 항산화 활성을 가지는 추출물의 양이 적게 나오고, 원료에 열이 가해져 열로 인한 많은 약효 성분의 파괴와 손실을 가져다 주는 일반 열수 추출법의 단점을 개선하기 위해 1,3-부틸렌글리콜이 포함된 혼합 용매로 침적한 후 초음파 추출법으로 조밥나물 추출물을 얻는 제조방법을 제공하는 효과가 있다.

아울러, 본 발명은 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하여 항산화, 항염증, 아토피 피부를 개선하고, 피부 자극에 대한 부작용이 없는 화장료 조성물을 제공하는 효과가 있다.

도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 초음파 추출법에 의한 조밥나물 추출물 제조방법을 보여주는 플로우 차트.

본 발명은 산화, 염증 반응 및 아토피 증상에 대한 피부의 방어 기작을 조밥나물 식물을 기초로 연구하였다. 그 결과 조밥나물을 초음파 추출법으로 추출한 조밥나물 추출물이 현저한 항산화, 항염증 및 아토피 피부를 개선하는 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 초음파 추출법에 의한 조밥나물 추출물 제조방법을 보여주는 플로우 차트이다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명은 조밥나물과, 물 또는 에탄올 또는 1,3-부틸렌글리콜 중 어느 하나 이상의 용매를 혼합한 후 4 내지 50 ℃에서 1 내지 24 시간 동안 침적하여 조밥나물 침적물을 얻는 단계(T1)와 상기 조밥나물 침적물을 초음파 추출기에 투입하고 초음파로 조사하여 조밥나물 추출물을 얻는 단계(S2)로 이루어진 것을 특징으로 하는 초음파 추출법에 의한 조밥나물 추출물 제조방법인 것을 특징으로 한다.

본 발명은 조밥나물과 물, 에탄올 및 1,3-부틸렌글리콜 혼합 용매를 혼합한 후 4 내지 50 ℃에서 1 내지 24 시간 동안 침적하여 조밥나물 침적물을 얻는 단계(S1)와 상기 조밥나물 침적물을 초음파 추출기에 투입하고 초음파로 조사하여 조밥나물 추출물을 얻는 단계(S2)로 이루어진 조밥나물 추출물의 제조방법인 것을 특징으로 한다.

일반적으로 초음파란 인간의 가청주파수 영역인 16 Hz 내지 16 KHz 범위보다 더 높은(>16 KHz) 주파수를 갖는 음파(音波)를 칭하는 것이다. 초음파를 발생시키면 그 초음파가 매질을 통과할 때 발생하는 공동현상(cavitation)이 화학반응에 영향을 미치게 함으로서 화학반응을 촉진시키도록 할 수 있다. 여러 가지 화학반응에 초음파를 이용할 때 그 반응도를 향상시키는 에너지원은 공동현상이며, 공동현상은 공동화 기포에서 핵의 생성, 기포의 성장, 충분히 성장한 기포의 폭발적 파열 등 3단계로 진행된다.

초음파 에너지를 추출에 이용하면 초음파 진동에 의한 공동현상(cavitation)에 의해 매우 큰 에너지를 발생하게 된다. 또한 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로는 높은 압력을 유도하여 혼합 효과를 높여주게 된다.

초음파 추출은 용매추출에 비해 매우 짧은 시간에 추출이 완료되며 초임계 유체 추출공정에 비해 약 10배 이상으로 추출시간이 단축된다. 이는 초음파 추출의 경우 초음파의 공동효과에 의한 높은 압력으로 세포 내부조직이 파괴되어 지방질의 이동거리가 짧아지고 확산이 용이하게 일어나기 때문으로 여겨진다.

본 발명에서 조밥나물과 혼합 용매를 혼합한 후 침적하여 조밥나물 침적물을 얻는 단계(T1)는 상기 조밥나물을 물 또는 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 탄소수 1 내지 4의 글리콜 용매 중에서 선택된 어느 하나 이상의 추출용매에 4 내지 50 ℃에서 1 내지 24시간 침적시킨 후 초음파 추출을 한다.

본 발명에서 조밥나물과 혼합 용매를 혼합한 후 침적하여 조밥나물 침적물을 얻는 단계(S1)는 상기 조밥나물과 혼합 용매는 1 : 1 내지 1 : 10 중량부의 혼합비를 가지며, 상기 조밥나물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 탄소수 1 내지 4의 글리콜 또는 이들의 혼합 용매 중에서 선택된 어느 하나 이상의 추출용매에 4 내지 50 ℃에서 1 내지 24시간 침적시킨 후 초음파 추출을 한다.

상기 탄소수 1 내지 4의 알코올은 메탄올, 에탄올, n-프로판올, iso-프로판올, n-부탄올, iso-부탄올, tert-부탄올이며, 보다 바람직하게는 에탄올이며, 상기 글리콜은 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 에틸렌글리콜이며, 바람직하게는 1,3-부틸렌글리콜이다. 보다 바람직하게는 에탄올, 1,3-부틸렌글리콜 및 물의 혼합 용매를 사용할 수 있다.

본 발명에서 상기 조밥나물 침적물을 초음파 추출기에 투입하고 초음파로 조사하여 조밥나물 추출물을 얻는 단계(S2)는 상기 단계(S1 또는 T1)에서 얻은 조밥나물 침적물을 초음파 추출기에 넣고 초음파가 조밥나물에 잘 전달될 수 있도록 위치를 조정하고 초음파를 작동하여 추출한다.

상기 초음파는 20 내지 60 KHz의 초음파를 100 내지 700 watt출력을 이용하여 추출한다. 바람직하게는 20 내지 60 KHz의 초음파를 200 내지 400 watt 출력을 이용한다. 상기 출력 범위는 조밥나물의 조직이 파쇄되어 침전물이 발생하지 않도록 하는 최적의 범위이다.

상기 초음파 추출 시 온도는 4 내지 50 ℃, 바람직하게는 15 내지 40 ℃로 유지하는 것이 바람직하며, 20분 내지 20시간 동안 추출하고, 1 내지 3회 반복 추출한다. 상기 온도 범위는 조밥나물이 삶아지지 않고 형태를 유지할 수 있는 최적의 범위이다.

본 발명은 상기 단계(S2)에서 얻은 조밥나물 추출물을 냉각, 여과, 농축하는 단계(S3)를 더 포함하여 이루어진 조밥나물 추출물의 제조방법인 것을 특징으로 한다.

상기 단계(S2)에서 얻은 조밥나물 추출물을 냉각시키고 냉각된 추출물을 여과 및 농축하는 단계(S3)는 상기 단계(S2)에서 초음파로 추출 후 용매가 증발되는 것을 방지하기 위하여 냉각 콘덴서로 냉각을 하고, 마지막으로 추출 용매를 감압 농축기로 농축하여 수득될 수 있다. 0.2 내지 2 ㎛의 필터로 여과하고 감압 농축기로 농축하여 수득할 수 있다.

상기 초음파 추출을 통하여 유효성분을 저렴한 비용으로 효과적으로 수득 할 수 있을 뿐만 아니라 각 유효성분들은 추출 후에 각각의 유효성이 잘 발현되어 시너지 효과를 얻을 수 있게 된다.

본 발명에서 조밥나물 추출물은 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하는 작용을 가져서, 항산화, 항염증, 아토피 피부 개선으로 선택되는 효과를 가지며, 피부 자극에 대한 부작용이 없는 효과를 가지는 것을 특징으로 한다.

상기 조밥나물 추출물은 자유라디칼 소거, 항염증 및 아토피 피부 개선 효과가 우수하고 피부 자극에 대한 부작용이 없는 천연의 안전 제제에 해당하며, 생산비용이 저렴하다. 본 발명에서 조밥나물 추출물은 농축된 액상일 수도 있고, 건조된 분말형태일 수도 있다.

상기 조밥나물(Hieraci㎛ ㎛bellat㎛ L.)은 국화과(Compositae)의 식물로서 높이 60~90㎝에 이르는 여러해 살이 풀이다. 잎은 버들모양이고 톱니가 성글게 있다. 여름철에 노란꽃이 핀다. 각지의 산과 들에서 자란다. 성분으로는 전초에 이눌린, 탄닌질, 잎에 아스코르빈산이 있다. 민간에서 전초를 달여 기침, 폐결핵, 선병, 꽃돋이, 피똥에 수렴성 피멎이약, 아품멎이약으로 쓰며 여러 가지 피부병때에 씻는다. 어린잎은 산나물로 먹는다.　 생약명으로는 산류국이라고 불리우며, 중약에서는 종독을 치료하는데 사용하였다. (약초의 성분과 이용, 과학 백과사전 출판사편, 일월서각, 1994, 중약대사전, 중약대사전편찬위원회, 도서출판 정담, 1997)

본 발명은 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증, 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

상기 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증, 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물은 매우 우수한 항염, 항산화의 효능을 나타내며, 적용 제품들에서 우수한 안정성을 나타낸다. 또한, 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제, 자유라디칼의 소거의 효과를 가지며, 피부 자극 및 염증 완화 효과를 가진다.

본 발명에서 화장료 조성물은 조밥나물 추출물이 포함되는 것을 특징으로 하는데, 화장료 조성물 총 중량대비 0.01 내지 10 중량%의 상기 단계(S2)에서 얻은 액상 조밥나물 추출물이 포함되고, 바람직하게는 0.1 내지 5 중량%의 액상 조밥나물 추출물이 포함된다.

또는 상기 조밥나물 추출물은 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 분말화 시킬 수 있는데, 상기 화장료 조성물에는 분말 조밥나물 추출물을 건조중량으로서 0.001 내지 5 중량%의 분말 조밥나물 추출물이 포함되고, 바람직하게는 0.01 내지 3중량%의 분말 조밥나물 추출물이 포함된다.

상기 액상 조밥나물 추출물과 분말 조밥나물 추출물은 화장료 조성물 총 중량대비 0.01 중량%(액상)과 0.001 중량%(분말) 미만인 경우 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유라디칼의 소거 효과가 나타나지 않는 문제가 있으며, 10 중량%(액상)과 5 중량%(분말) 초과인 경우 건조 피부를 가진 사람에게 피부 가려움과 따끔거림이 발생되는 문제가 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분인 조밥나물 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 색소 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 팩, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성 오일, 식물성 오일, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 중 어느 하나 이상을 선택하여 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 글리세롤, 글리세린, 지방족 에스테르, 페녹시에탄올, 트리에탄올아민, 폴리에틸렌 글리콜, 밀납, 폴리솔베이트 60, 솔비탄세스퀴오레이드, 파라핀, 소르비탄 스테아레이트, 친유형 모노스테아린산 글리세린, 스테아린산, 글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트, 카르복시폴리머, 시토스테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 세라마이드, 콜레스테롤, 스테아레스-4, 디세틸포스페이트, 마카다미아 오일, 카르복시비닐폴리머, 산탄검 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 어느 하나 이상을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 글리세린, 부틸렌글리콜 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오즈, 소디움히아루로네이트, 페녹시에탄올, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 스테아린산, 세틸알코올, 글리세릴모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트, 솔비탄세스퀴올레이트, 글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트, 왁스, 파리핀, 스쿠알란, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드, 카르복시비닐폴리머, 트리에탄올아민, 아가 또는 트라칸트 중 어느 하나 이상을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 중 어느 하나 이상을 선택하여 사용할 수 있다.

이하, 본 발명은 실시예, 비교예, 실험예 및 제형예에 의해 상세히 설명한다.

하기 실시예, 비교예, 실험예 및 제형예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예, 비교예, 실험예 및 제형예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1 > 조밥나물을 물, 에탄올 및 1,3- 부틸렌글리콜 혼합 용매에 혼합하고 침적하여 조밥나물 침적물을 얻은 후 초음파 추출법에 의해 조밥나물 추출물을 추출하는 조밥나물 추출물의 제조

건조한 조밥나물 1,000 g을 삼베포에 담아 정제수 6,000 g, 에탄올 1,000 g 및 1,3-부틸렌글리콜 3,000 g을 혼합한 혼합 용매 10,000 g에 넣고 혼합하여 약 3시간 동안 침적하였다. 조밥나물은 강원도 태백시 인근에서 채취하여 사용하였다. 상기의 혼합물을 초음파 추출기(우성초음파 제조)에 넣고 초음파 추출을 진행하였다. 초음파가 조밥나물에 고르게 전달될 수 있도록 조밥나물을 싼 삼베포의 위치를 조정하고 추출기의 온도는 30 ℃로 유지하며 초음파의 출력을 200 watt까지 올려 약 2시간 추출하였다. 삼베포에 싸인 조밥나물을 제거하고 추출액을 0.8 ㎛ 필터로 여과하여 조밥나물 추출물을 얻었다. 여과한 조밥나물 추출물을 1주일간 실온에서 방치하고 0.45 ㎛ 필터로 여과한 후 감압 농축기를 이용하여 50 ℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 139.62 g을 얻었다.

< 실시예 2 > 조밥나물을 물 용매에 혼합하고 침적하여 조밥나물 침적물을 얻은 후 조밥나물 추출물을 초음파 추출법에 의해 추출하는 조밥나물 추출물의 제조

용매를 물로 하여 실시예 1과 동일한 방법으로 조밥나물 추출물을 제조하여, 건조 중량 107.38 g을 수득하였다.

< 실시예 3 > 조밥나물을 에탄올 용매에 혼합하고 침적하여 조밥나물 침적물을 얻은 후 조밥나물 추출물을 초음파 추출법에 의해 추출하는 조밥나물 추출물의 제조

용매를 에탄올로 하여 실시예 1과 동일한 방법으로 조밥나물 추출물을 제조하여, 건조 중량 117.69 g을 수득하였다.

< 실시예 4 > 조밥나물을 30%의 1,3- 부틸렌글리콜 용매에 혼합하고 침적하여 조밥나물 침적물을 얻은 후 조밥나물 추출물을 초음파 추출법에 의해 추출하는 조밥나물 추출물의 제조

용매를 30%의 1,3-부틸렌글리콜 수용액으로 하여 실시예 1과 동일한 방법으로 조밥나물 추출물을 제조하여, 건조 중량 109.21 g을 수득하였다.

< 실시예 5 > 조밥나물을 30%의 에탄올 수용액 용매에 혼합하고 침적하여 조밥나물 침적물을 얻은 후 조밥나물 추출물을 초음파 추출법에 의해 추출하는 조밥나물 추출물의 제조

용매를 30%의 에탄올 수용액으로 하여 실시예 1과 동일한 방법으로 조밥나물 추출물을 제조하여, 건조 중량 115.11 g을 수득하였다.

< 비교예 1 > 조밥나물을 물, 에탄올 및 1,3- 부틸렌글리콜 혼합 용매에 혼합하여 열 추출법에 의해 추출하는 조밥나물 추출물의 제조

건조한 조밥나물 1,000 g을 삼베포에 담아 정제수 6,000 g, 에탄올 1,000 g 및 1,3-부틸렌글리콜 3,000 g을 혼합한 혼합 용매 10,000 g에 넣고 혼합하여 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100 ℃로 5시간 끓여서 추출하여 약재를 제거 한 후 300 메쉬 필터로 여과하고, 1주일간 방치하여 침전물을 0.45 ㎛ 필터로 여과하였다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50 ℃에서 완전히 농축하여 건조 중량 103.52 g을 얻었다. 조밥나물은 강원도 태백시 인근에서 채취하여 사용하였다.

< 비교예 2 > 조밥나물을 물 용매에 혼합하여 열 추출법에 의해 추출하는 조밥나물 추출물의 제조

용매를 물로 하여 비교예 1과 동일한 방법으로 조밥나물 추출물을 제조하여, 건조 중량 79.23 g을 수득하였다.

< 비교예 3 > 조밥나물을 에탄올 용매에 혼합하여 열 추출법에 의해 추출하는 조밥나물 추출물의 제조

용매를 에탄올로 하여 비교예 1과 동일한 방법으로 조밥나물 추출물을 제조하여, 건조 중량 95.72 g을 수득하였다.

< 비교예 4 > 조밥나물을 30%의 1,3- 부틸렌글리콜 용매에 혼합하여 열 추출법에 의해 추출하는 조밥나물 추출물의 제조

용매를 30%의 1,3-부틸렌글리콜 수용액으로 하여 비교예 1과 동일한 방법으로 조밥나물 추출물을 제조하여, 건조 중량 84.34 g을 수득하였다.

< 비교예 5 > 조밥나물을 30%의 에탄올 용매에 혼합하여 열 추출법에 의해 추출하는 조밥나물 추출물의 제조

용매를 30%의 에탄올 수용액으로 하여 비교예 1과 동일한 방법으로 조밥나물 추출물을 제조하여, 건조 중량 90.22 g을 수득하였다.

< 실험예 1 > 조밥나물 추출물에 의한 세포 증식 및 독성 확인

상기 실시예 1~5와 비교예 1~5에서 제조된 조밥나물 추출물 건조분말을 이용하여 세포 증식에 미치는 영향을 확인하였다.

세포 증식 및 독성 확인을 위하여 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였다.

배양하고 있는 세포 3T3(fibroblast cell line)을 96 웰 마이크로플레이트에 5,000 세포/웰로 분주(分株)하여 30분간 항온조에서 배양하고, 시료를 농도 별 각각 0.01, 0.05, 0.1, 0.5(%,W/V))로 투여하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후, 티아졸린 블루(Thiazoline blue)를 투여하고 4시간 동안 추가 배양을 하였다. 배양액을 모두 버리고 마이크로플레이트의 각 웰에 반응 정지액을 가하고 5분간 교반한 후, 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료 주입량만큼 10 % 우태아혈청(Fetal Bovine Ser㎛, FBS) 배지를 투여하여 세포 성장의 최적 조건으로 동시배양을 하였으며, 대조군의 세포증식을 100 %로 하고 시료 투입 실험군의 세포 증식율을 계산하였다.

세포증식 효과는 계산식 1에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

< 계산식 1 >

조밥나물 추출물에 의한 세포 증식 및 독성 완화 효과

농도 (%)	세포증식효과(%)
	실시예					비교예
	1	2	3	4	5	1	2	3	4	5
대조군	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
0.01	7.8	6.5	5.6	5	5.8	2.8	2.2	1.3	1.2	1.6
0.05	13.2	10.2	9.7	7.9	9.7	6.1	5.7	4.2	4.5	5.1
0.1	20.8	17.3	15.8	14.3	16.1	12.6	10.7	9.8	8.9	10.3
0.5	28.6	23.2	19.7	17.6	20.7	17.1	13.9	11.5	10.8	14.3

표 1에 나타낸 바와 같이, 세포 성장 최적 조건에서의 세포 증식을 100 %로 하였을 때, 실시예 1~5와 비교예 1~5에서 제조된 조밥나물 추출물은 세포 독성이 없으며 실시예와 비교예 모두에서 세포 증식효과가 있음을 확인하였다. 특히, 실시예 1~5는 비교예 1~5보다 월등한 세포 증식효과를 나타내었으며, 실시예 1의 추출물이 가장 우수한 세포 증식효과를 나타내었다.

< 실험예 2 > 조밥나물 추출물에 의한 자유라디칼 소거 효과 확인

상기 실시예 1~5와 비교예 1~5에서 제조된 조밥나물 추출물 건조분말을 이용하여 자유라디칼(Free Radical) 소거에 미치는 영향을 확인하였다.

자유라디칼(Free Radical) 소거에 미치는 영향을 확인하기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였다.

DPPH(1,1-디페닐-2피크릴-히드라질)법 (참조:Blois.M.S.Nature 181, 1190, 1958)을 사용하여 실험을 수행하였으며, DPPH와 Quercetin은 시그마(SIGMA)사의 것을 사용하였다. 0.2 mM DPPH 메탄올 용액 1ml에 여러 농도(5, 10, 20, 30 ppm)의 실시예 1~5와 비교예 1~5의 용액 2 ml를 첨가하고 교반한 후 실온에서 10분간 반응 시켰다. 그 후, 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 공시험으로 각 시료 대신 정제수를 사용하였다.

하기 계산식 2를 이용하여 자유라디칼의 변화를 측정하였고 그 결과를 표 2에 나타내었다.

< 계산식 2 >

조밥나물 추출물에 의한 자유라디칼 소거 효과

	자유라디칼소거 효과(%)
농도	실시예					비교예
(ppm)	1	2	3	4	5	1	2	3	4	5
0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
5	13.7	9.8	11.9	9.7	11.5	6.2	4.5	6	4.8	6.3
10	48.6	38.8	40.2	44.1	43.9	29.6	18.5	25.7	20.3	28.1
20	88.7	82.5	86.3	84.1	85.9	68.2	42.7	51.9	48.6	58.1
30	98.8	96.7	98.3	96.2	98.3	89.3	77.6	80.8	86.2	88.9
SC50	13.01	14.27	13.75	13.92	13.59	18.00	21.42	19.91	20.18	18.77

표 2에 나타낸 바와 같이, 초음파 추출법에 의하여 추출한 조밥나물 추출물인 실시예 1~5의 자유라디칼 소거 효과가 비교예 1~5에서 제조된 조밥나물 추출물의 자유라디칼 소거 효과 보다 우수한 것을 확인할 수 있었다. 특히 실시예 1은 실시예 2~5와 비교예 1~5에서 제조된 조밥나물 추출물보다 그 효과가 매우 우수한 것을 확인할 수 있었다.

< 실험예 3 > 조밥나물 추출물에 의한 리폭시게나아제 활성 억제 효과 확인

상기 실시예 1~5와 비교예 1~5에서 제조된 조밥나물 추출물 건조분말을 이용하여 리폭시게나아제(Lpoxygenase) 활성 억제 효과를 확인하였다.

리폭시게나아제(Lpoxygenase) 활성 억제에 미치는 영향을 확인하기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였다.

TBAS법을 사용하여 실험을 수행하였으며, 실험에 사용하는 Linoleic acid와 Lipoxygenase, Thiobabitulic acid는 시그마(SIGMA)사의 것을 사용하였다. 1 mM Linoleic acid 1 ml에 여러 농도( 5, 10, 20, 30, 40 ppm)의 실시예 1~5와 비교예 1~5를 0.05 ml 첨가하고 Lipoxygenase 0.95 ml를 투여 후 교반하여 25 ℃에서 10분간 반응을 시킨다. 그리고 Trichloroacetic acid를 0.5 ml, Thiobarbiturlic acid를 1 ml 첨가한 후, 10분간 heating하고 얼음물에서 2~3분간 냉각시켜 반응을 종료시킨다. 반응이 종결된 반응액에 Butanol 2 ml를 넣고 4,000 g로 5분간 원심분리 한 후 535 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 공시험으로 각 시료 대신 정제수를 사용하였다.

하기 계산식 3를 이용하여 Lipoxygenase 활성억제 효과를 구하고 그 결과를 표 3에 나타내었다.

< 계산식 3 >

조밥나물 추출물에 의한 리폭시게나아제 활성억제 효과

	리폭시게나아제 활성억제 효과(%)
농도	실시예					비교예
(ppm)	1	2	3	4	5	1	2	3	4	5
0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
10	8.9	6.5	8.1	5.5	7.7	3.2	1.3	3.7	1.4	2.9
30	30.4	25.9	28.3	26.7	27.3	9.6	6.7	11.3	6.9	8.7
50	58.7	49.1	51.9	50.5	55.5	28.7	19.9	27.6	22.3	26.9
70	79.6	70.8	73.1	71.9	78.1	60.1	49.7	62.3	48.1	58.2
90	96.9	95.3	96.7	94.6	98.3	89.9	79.9	85.7	81.3	84.7
100	-	-	-	-	-	98.9	95.3	96.4	96.1	98.6
IC50	45.47	49.82	48.11	49.54	46.56	58.13	64.25	58.88	63.68	59.79

표 3에 나타낸 바와 같이 초음파 추출법으로 추출한 조밥나물 추출물인 실시예 1~5의 리폭시게나아제 활성억제 효과가 비교예 1~5에서 제조된 조밥나물 추출물의 리폭시게나아제 활성억제 효과보다 우수한 것을 확인할 수 있었다.

< 실험예 4 > 조밥나물 추출물에 의한 히아루로니다아제 활성 억제 효과 확인

상기 실시예 1~5와 비교예 1~5에서 제조된 조밥나물 추출물 건조분말을 이용하여 히아루로니다아제 활성 억제효과를 확인하였다.

히아루로니다아제 활성 억제에 미치는 영향을 확인하기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였다.

Morgan-Elson 법을 응용한 방법으로, Hyaluronidase의 최종 효소 활성을 400NF unit/㎖, HA의 최종 농도를 0.4 ㎎/㎖로 하고 활성제인 Compound 48/80 buffer 용액 (0.1 ㎎/㎖)을 사용하여 불활성형 Hyaluronidase의 활성화 단계의 저해작용을 중심으로 Hyaluronidase 활성을 측정하였다. 시료는 buffer에 용해하여 시료 용액으로 하고 대조군은 시료용액 대신에 buffer를 사용하였다. 또한 각각의 blank로는 효소용액 대신에 buffer를 사용하였으며, 대조군으로는 녹차 추출물을 사용하였다.

하기 계산 식4를 이용하여 히아루로니다아제 활성억제 효과를 구하고 그 결과를 표 4에 나타내었다.

< 계산식 4 >

조밥나물 추출물에 의한 히아루로니다아제 활성억제 효과

	히아루로니다아제 활성억제 효과(%)
농도	실시예					비교예
(%)	1	2	3	4	5	1	2	3	4	5
0	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0
0.5	19.7	10.5	16.7	10.9	16.8	8.8	7.6	9.6	7.1	8.2
1	39.2	23.9	36.3	21.6	35.4	22.7	18.6	19.9	20.8	23.6
3	75.3	46.7	75.2	48.1	77.7	45.2	40.7	39.5	44.2	44.2
5	96.8	94.9	98.1	96.2	98.2	88.6	85.2	87.2	84.1	89.7
IC50	2.10	2.72	2.15	2.70	2.13	3.18	3.34	3.26	3.29	3.16

표 4에 나타낸 바와 같이, 초음파 추출법으로 추출한 조밥나물 추출물인 실시예 1~5의 히아루로니다아제 활성억제 효과가 비교예 1~5에서 제조된 조밥나물 추출물의 히아루로니다아제 활성억제 효과보다 우수한 것을 확인할 수 있었다.

< 실험예 5 > 조밥나물 추출물의 면역세포 탈과립화 억제 효과

상기 실시예 1~7에서 제조된 추출물 건조분말에 대하여 면역세포의 탈과립화 효과를 측정하였다.

< 실험방법 >

본 발명의 파테놀라이드를 RBL-2H3 세포주(Rat mast cell line)에 처리하여 안티젠에 의한 탈과립화를 억제하는 효과를 나타낸 것이다.　RBL-2H3 세포주를 1 % 어린 소 혈청(Fetal bovine ser㎛)과 L-글루타민(Glutamine)을 포함하는 둘베코(Dulbeccos)에 의해 수정된 이글(Eagle)의 배지(Dulbeccos' modified Eagle's medi㎛, 이하 DMEM)을 이용하여 37 ℃, 5 % CO₂ 인큐베이터에서 배양하며, 고착성을 갖는 세포를 트립신(Trypsin)-EDTA 용액을 사용하여 부유시키며 이를 분리, 회수하여 실험에 이용하였다.

RBL-2H3 세포주를 활성인자(Dinitrophenol-conjugated h㎛an ser㎛ alb㎛in, (DNP-HSA)-specific IgE)로 활성화 시킨 후 활성화된 세포에 안티젠(DNP-HSA) 50 ng/mL을 처리하고 추출물 각각을 5, 25, 125 ㎍/㎖로 처리하여 60분 및 120분 동안 배양하였다.　이후 엘리사 관측기(ELISA reader)를 이용하여 배지 내로 분비된 β-헥소사미니다제(hexosaminidase) 양을 측정하였다.　β-헥소사미니다제 분비 양의 억제는 면역세포의 탈과립화를 방지함을 의미한다.

조밥나물 추출물에 의한 탈과립화 억제 효과

		Degranulation (Inhibition rate (%))
		5 μg/ml	25 μg/ml	125 μg/ml
실시예	1	7.86±1.52	18.12±0.47	31.95±2.77
	2	3.57±2.09	10.14±2.33	14.88±1.54
	3	3.01±0.78	10.34±1.86	25.41±0.62
	4	5.44±1.63	12.69±0.56	16.23±0.13
	5	6.37±0.38	15.88±1.35	26.57±3.83
비교예	1	7.91±0.04	11.67±0.63	19.68±0.97
	2	-1.66±2.14	8.91±0.45	13.23±2.43
	3	1.63±0.24	6.81±0.59	14.77±0.66
	4	2.33±1.12	8.16±1.37	16.37±1.08
	5	4.22±0.09	10.82±2.15	16.98±0.37

표 5에 나타낸 바와 같이, 초음파 추출법으로 추출한 조밥나물 추출물인 실시예 1~5의 탈과립화억제 효과가 비교예 1~5에서 제조된 조밥나물 추출물의 히아루로니다아제 활성억제 효과보다 우수한 것을 확인할 수 있었다.

< 실험예 6 > 조밥나물 추출물을 포함하는 화장료 조성물의 자극 완화 임상 평가

조밥나물 추출물을 포함하는 화장료 조성물의 자극 완화 임상 평가를 위하여 하기 표 6에 기재된 조성으로 조밥나물 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제조하였다.

자극 완화 임상 평가를 위한 화장료 조성물의 구성

번호	원 료	처방예	비교예
1	조밥나물 추출물 건조 분말 (실시예1)	3.0	-
2	스테아린산	2.0	2.0
3	세틸알콜	2.0	2.0
4	글리세릴모노스테아레이트	2.0	2.0
5	폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트	0.5	0.5
6	솔비탄세스퀴올레이트	0.5	0.5
7	글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트	1.0	1.0
8	왁스	1.0	1.0
9	유동파라핀	4.0	4.0
10	스쿠알란	4.0	4.0
11	카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0	4.0
12	카르복시비닐폴리머	0.3	0.3
13	부틸렌글리콜	5.0	5.0
14	글리세린	3.0	3.0
15	트리에탄올아민	0.5	0.5
16	정제수	잔량	잔량
17	물	-	3.0

상기 실험예 6의 화장료 조성물을 제조하기 위하여 표 6에 기재된 12, 13, 14 및 16번을 혼합 교반하면서 80 ~ 85 ℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11번을 80 ~ 85 ℃사이로 가열하여 용해한 후 15를 투입 교반하여 제조부에 투입하고 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35 ℃까지 냉각하고 1번을 투입하여 25 ℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.

상기 비교예의 화장료 조성물을 제조하기 위하여 표 6에 기재된 12, 13, 14 및 16번을 혼합 교반하면서 80 ~ 85 ℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11번을 80 ~ 85 ℃사이로 가열하여 용해한 후 15번을 투입 교반하여 제조부에 투입하고 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35 ℃까지 냉각하고 17번을 투입하여 25 ℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.

상기에서 제조된 화장료의 자극완화 효과를 간이 임상평가를 통해 확인하였다.

실험예 6 화장료의 피부 자극개선 효과를 평가하기 위해, 20~30대 지원자 10명을 대상으로 다음과 같은 실험을 실시하였다. 지원자의 피부자극 측정 조건을 동일하게 하기 위하여 실험부위를 깨끗하고 마른 상태로 유지하였으며, 최소 30분간 항온항습(20 ℃, 상대습도 40~60 %)이 유지되는 곳에서 피부 안정을 취한 후 진행하였다. 피부의 자극측정은 일회용 면도기를 이용하여 코 아래 부분을 제모 후 인중을 중심으로 좌측에는 실험예 6을 우측에는 비교예 1를 도포하여 20분 경과 후 설문 평가를 통하여 피부 자극 정도를 평가하여 평가하였다. 자극측정은 하기 표 7 및 표 8의 기재된 내용을 바탕으로 지원자의 자가 설문 평가를 통해 시행하였으며 실험예 6과 비교예를 가지고 피부 자극의 차이를 비교하였다.

피부자극평가기준

0	1	2	3
자극없음	약간 있음	보통	자극있음

피부자극평가항목 및 설문지

홍반 (Erythema)	부종 (Edema)	가려움 (Itching)	따끔거림 (Prickling)

설문 조사 결과를 표 9에 나타내었다.

분류	홍반 (Erythema)	부종 (Edema)	가려움 (Itching)	따끔거림 (Prickling)
처방예	0	0	0.6	0.4
비교예	0	0	1.9	1.7

표 9에 나타낸 바와 같이, 초음파 추출법으로 추출한 조밥나물 추출물(실시예 1)을 함유하는 실험예 6의 화장료가 추출물 대신 물(비교예)을 보정하여 제조한 화장료에 비해 자극완화효과가 매우 우수하다는 것을 확인할 수 있었다.

< 제형예 1 > 조밥나물 추출물을 함유하는 화장수의 제조

실시예 1의 조밥나물 추출물 건조 분말을 함유한 화장료 중 화장수(스킨로션)의 제형예는 표 10과 같다.

조밥나물 추출물을 함유하는 화장수의 구성

번호	원 료	함량(중량%)
1	조밥나물 추출물 건조 분말(실시예1)	1.0
2	글리세린	3.0
3	부틸렌 글리콜	2.0
4	프로필렌 글리콜	2.0
5	폴리옥시에칠렌 경화피마자유	1.0
6	에탄올	10.0
7	트리에탄올아민	0.1
8	방부제	미량
9	색소	미량
10	향료	미량
11	정제수	잔량

상기 화장수를 제조하기 위하여, 표 10에 기재된 11번에 2,3,4 및 8번을 순서대로 투입하고 교반하여 용해시킨 후, 5번을 60 ℃ 정도 가열하여 용해시킨 후, 10번을 투입하여 용해한 후 11번에 투입하였다. 마지막으로 1,6,7 및 9번을 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시켰다.

< 제형예 2 > 조밥나물 추출물을 함유하는 영양로션의 제조

실시예 1의 조밥나물 추출물 건조 분말을 함유한 화장료 중 영양로션의 제형예는 표 11과 같다.

조밥나물 추출물을 함유하는 영양로션의 구성

번호	원 료	함량(중량%)
1	조밥나물 추출물 건조 분말(실시예1)	2.0
2	밀납	1.0
3	폴리솔베이트 60	1.5
4	솔비탄 세스퀴올레이트	0.5
5	유동 파라핀	10.0
6	소르비탄 스테아레이트	1.0
7	친유형 모노스테아린산 글리세린	0.5
8	스테아린산	1.5
9	글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트	1.0
10	프로필렌글리콜	3.0
11	카르복시폴리머	0.1
12	트리에탄올아민	0.2
13	방부제	미량
14	색소	미량
15	향료	미량
16	정제수	잔량

상기 영양로션을 제조하기 위하여, 표 11에 기재된 10, 11, 13 및 16번을 혼합 교반하면서 80 ~ 85 ℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 12번을 80 ~ 85 ℃사이로 가열 용해한 후 유화하였다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50 ℃까지 냉각한 뒤 15번을 투입하고 45 ℃까지 냉각한 뒤 14번을 투입하고 35 ℃에 1번을 투입하여 25 ℃까지 냉각한 뒤 숙성시켰다.

< 제형예 3 > 조밥나물 추출물을 함유하는 영양크림의 제조

실시예 1의 조밥나물 추출물 건조 분말을 함유한 화장료 중 영양크림의 제형예는 표12와 같다.

조밥나물 추출물을 함유하는 영양크림의 구성

번호	원 료	함량(중량%)
1	조밥나물 추출물 건조 분말(실시예1)	3.0
2	스테아린산	2.0
3	세틸알콜	2.0
4	글리세릴모노스테아레이트	2.0
5	폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트	0.5
6	솔비탄세스퀴올레이트	0.5
7	글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트	1.0
8	왁스	1.0
9	유동파라핀	4.0
10	스쿠알란	4.0
11	카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
12	카르복시비닐폴리머	0.3
13	부틸렌글리콜	5.0
14	글리세린	3.0
15	트리에탄올아민	0.5
16	정제수	잔량

상기 영양크림을 제조하기 위하여 표 12에 기재된 12, 13, 14 및 16번을 혼합 교반하면서 80 ~ 85 ℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11번을 80 ~ 85 ℃사이로 가열하여 용해한 후 15번을 투입 교반하여 제조부에 투입하고 유화하였다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35 ℃까지 냉각하고 1번을 투입하여 25 ℃까지 냉각한 뒤 숙성시켰다.

< 제형예 4 > 조밥나물 추출물을 함유하는 에센스의 제조

실시예 1의 조밥나물 추출물 건조 분말을 함유한 화장료 중 에센스의 제형예는 표 13과 같다.

조밥나물 추출물을 함유하는 에센스의 구성

번호	원 료	함량(중량%)
1	조밥나물 추출물 건조 분말(실시예1)	3.0
2	시토 스테롤	1.7
3	폴리글리세릴 2-올레이트	1.5
4	세라마이드	0.7
5	스테아레스-4	1.2
6	콜레스테롤	1.5
7	디세틸포스페이트	0.4
8	농글리세린	5.0
9	마카다미아 오일	15.0
10	카르복시비닐폴리머	0.2
11	산탄검	0.2
12	방부제	미량
13	향료	미량
14	정제수	잔량

상기 에센스를 제조하기 위하여 표 13에 기재된 2, 3, 4, 5 및 6번을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 1, 7, 8 및 14번을 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루이다이져를 통과하고 이어 9번을 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루이다이져에 재차 통과시켰다 그리고 10, 11, 12 및 13번을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시켰다.

본 발명에서 설명한 것은 초음파 추출법에 의한 조밥나물 추출물 및 그의 제조방법과 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물을 위한 실시예에 불과한 것으로, 본 발명은 상기 실시예에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 수 있으며, 단지 본 실시예는 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

Claims (6)

1. 조밥나물 추출물을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물에 있어서,
   상기 조밥나물 추출물은 파장 20 내지 60 KHz 및 100 내지 700 Watt로 초음파 추출하는 것을 특징으로 하는 항산화, 항염증, 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
   
2. 제 1 항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 총 중량대비 0.01 내지 10 중량%의 액상 조밥나물 추출물이 포함되는 것을 특징으로 하는 항산화, 항염증, 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
   
3. 제 1 항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 총 중량대비 0.001 내지 5 중량%의 분말 조밥나물 추출물이 포함되는 것을 특징으로 하는 항산화, 항염증, 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
   
4. 제 1 항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 팩, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더 중 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 항산화, 항염증, 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
   
5. 제 2 항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 팩, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더 중 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 항산화, 항염증, 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.
   
6. 제 3 항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 팩, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더 중 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 항산화, 항염증, 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물.

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