KR101637396B1 - 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 상세하게는 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액 또는 상기 발효액을 추출한 발효 추출액을 수득하여, 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선 효과가 우수하고 피부 자극에 대한 부작용이 없으며, 상기 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 화장료 조성물을 제공함으로써, 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하여 항산화, 항염증 및 아토피 피부를 개선하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효시켜 수득한 벌노랑이 발효액을 함유하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물이며, 상기 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효시켜 수득한 벌노랑이 발효물의 추출액을 함유하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물이고, 상기 벌노랑이는 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 추출 용매를 사용하여 추출되는 것이 바람직하다.
아울러, 본 발명은 벌노랑이 추출액을 얻는 단계(S10)와, 상기 벌노랑이 추출액에 균주 사카로미세스를 접종하여 1차 발효액을 얻는 단계(S20)와, 상기 1차 발효액에서 균주 아스퍼질러스를 접종하여 2차 발효액을 얻는 단계(S30)와, 상기 2차 발효액에서 배양균을 제거한 후 열수 추출법을 이용하여 벌노랑이 발효 추출액을 얻는 단계(S40), 및 상기 단계(S30)의 벌노랑이 발효액 또는 상기 단계(S40)의 벌노랑이 발효 추출액에 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 색소 및 향료를 포함하여 화장료 조성물을 얻는 단계(S50)로 이루어지는 것을 특징으로 한다.

Description

벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법{Cosmetic composition for improving anti-oxidation, anti-inflammatory and atopic skin and method of preparing the same}

본 발명은 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 상세하게는 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액 또는 상기 발효액을 추출한 발효 추출액을 수득하여, 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선 효과가 우수하고 피부 자극에 대한 부작용이 없는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 화장료 조성물을 제공함으로써, 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하여 항산화, 항염증 및 아토피 피부를 개선하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.

피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 과도한 자외선이나 오염물질 등에 노출되면 홍반, 부종, 가려움 등의 피부자극 및 염증반응이 유발된다. 이러한 피부 트러블은 미관상 문제가 될 뿐만 아니라, 염증반응과정에서 생성되는 물질들이 부수적으로 색소 침착을 일으키고, 피부 탄력섬유의 붕괴를 촉진시켜 피부 주름을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 또한, 피부 손상에는 자유라디칼과 관련된 것으로 알려져 있다.

자유라디칼 이론은 1950년대 중반 디 하만(D. Harman)에 의해서 제시되었으며, 최근 학회와 관련업계에서 주목을 받고 있다. 자유라디칼은 세포를 파괴하거나 피부 진피층의 결합조직을 절단하거나 교차 결합을 일으키므로 주름형성, 피부암, 세포 살상, 류마티스성 관절염, 아토피성 피부염, 여드름 등 여러 가지 문제를 발생시킨다.

자유라디칼이 생성되는 원인은 백혈구의 식작용, 미토콘드리아에서의 ATP 생산과정 중 전자 전달계, 미엘로퍼 옥사이드(Myeloper Oxide(MPO)의 작용, 자외선, 담배, 정상적인 대사 과정, 스트레스, 공해 물질, 세균으로 알려져 있다.

상기 식작용이란 세포체가 이물 혹은 박테리아 등을 자기 체내에 받아들여서 이것을 분해, 무해화(無害化)하는 작용을 말한다.

물론 인체에는 항산화 물질(라디칼 소거제)인 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 (SuperOxide Dismutase : SOD), 카탈라아제, 비타민 E, 비타민 C, 유비퀴놀 (Uviquinol)있지만, 나이, 공해, 자외선, 스트레스에 의해 항산화 체계가 무력화되고, 자유라디칼이 점차 증가하게 된다.

증가된 자유라디칼은 진피의 결합조직인 콜라겐(Collagen), 엘라스틴 (Elastin), 히아루론산(Hyaluronic acid)을 파괴하여 피부의 일정 부위 침하 현상(주름)을 일으키며, 또한, 세포막의 지질 부분을 산화시켜 세포의 파괴 현상이 발생되어 피부염, 여드름, 피부암의 질병을 유발하게 되는 것이다.　

상기 자유라디칼은 멜라닌 형성과정 중 자발적인 산화반응(도파퀴논 → 멜라닌)에 관여하여 기미, 주근깨 등의 원인 및 주름생성의 원인이 되기도 한다. (대한 화장품학회지 23권 1호 75~132)　

염증은 해로운 주위 환경, 즉 세균과 같은 외부 이물질의 침입과 기계적 손상으로부터 생체를 보호하는 생리적인 반응이다. 이 염증 현상은 여러 종류의 다핵형 백혈구(PMNs)와 면역 물질의 많은 증가를 초래하고, 이들 세포들은 염증성 세포 산물인 다양한 종류의 단백질 분해효소와 사이토카인(cytokine)을 분비함으로써 치료 및 방어를 할 수 있게 한다. 엘라스타제(Elastase), 히알루리니다제(hyalurinidase) 및 리폭시게나아제(lipoxygenase)와 같은 효소들은 염증 시 생성되는 단백질 및 지질 분해 효소들로 잘 알려져 있다.

한편 이들의 작용은 인접해 있는 조직 세포와 비 조직세포 성분들에게도 해로운 손상을 일으켜, 만성염증의 심각한 조직 손상을 가져올 수 있다.

이처럼 과다 염증은 단백질 분해 효소들에 의해 세포 및 결합조직의 손상을 입히고, 결합 조직의 손상은 피부의 탄력을 감소시켜 주름의 원인이 될 뿐 아니라, 세포의 재생 및 증식에도 나쁜 영향을 미치게 되어 빠른 피부노화를 초래하게 되고, 피부에 국소적인 홍반과 부어 오름이 나타나게 된다. 만일, 결합조직이 심각하게 손상되고 염증반응이 지속된다면 정상적인 조직구조와 기능을 회복시키는 일은 훨씬 어렵게 된다.

염증과 함께 백혈구의 수치를 촉진시키는 매개체의 생성은 아라키돈산(arachidonic acid)을 통한 과정에 의해서도 이루어진다. 이 경로는 시클로옥시게나아제(cyclooxygenase)에 의한 과정과 리폭시게나아제(lipoxygenase)에 의한 과정으로 되어 있으며 이들 효소에 의해 생성된 류코트리엔(leukotriene)과 프로스타글란딘(prostagladine)이 염증 유발 인자로 작용한다. 따라서 리폭시게나아제(lipoxygenase)와 시클로옥시게나아제(cyclooxygenase) 저해제는 염증유발물질의 생성 억제뿐만 아니라 염증 시 생성되는 자유라디칼에 의한 세포막 파괴와 지질의 과산화반응을 억제하는 물질로서 항염증 작용을 나타낼 수 있다. 또한, 과다 염증에 의해 생성되는 단백질 및 지질분해효소들을 억제함으로써 그로 인해 손상되는 세포들을 보호하여 피부노화를 억제할 수 있으며, 아토피성 피부를 개선할 수 있다.

현재 일반적으로 사용되고 있는 항산화 효과가 있는 종래 기술로는 대한민국 등록특허공보 제10-1315325호가 개시되어 있는데, 이는 항산화 성분을 함유하는 피부주름 개선용 및 피부미백용 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 상기 피부 외용제 조성물은 리포익산(Lipoic Acid), 토코페롤(Tocopherol), 코엔자임(Coenzyme) Q10, 셀레늄(Selenium) 및 비타민(Vitamin) C로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상의 항산화 성분을 함유하여 자유라디칼을 소거하거나 항산화와 관련된 피부 내 방어인자의 활성을 높임으로써, 우수한 피부주름의 개선효과 및 피부미백 효과를 갖는 항산화 성분을 함유하는 피부주름 개선용 및 피부미백용 피부외용제 조성물에 관한 것이다.

상기 종래 기술의 피부 외용제 조성물은 자유 라디칼 소거 효과를 가지는 물질로 화장료나 의약품에 배합함으로써, 주름 및 기타 피부 질환을 방지하는 방법으로 이용되어 왔는데, 가격이 고가일 뿐만 아니라 배합 시 안정성이 좋지 못하여 실질적인 효과를 얻기가 어려운 문제점이 있다.

즉, 각종 스트레스원에 의한 피부 자극 및 염증을 감소시키고, 화장품 사용으로 인한 부작용을 줄이기 위해서는, 항염증, 항산화 및 피부자극 완화 효능이 있는 물질을 개발하는 것이 절실히 요구되며, 이와 함께 인체에 부작용이 적은 천연물의 유용성분의 성분 파괴를 최소화면서 이를 효과적으로 추출할 수 있는 방법이 함께 필요하다.

따라서, 이러한 자유라디칼과 염증에 의한 피부 트러블의 개선을 위해서는 항산화, 항염증 및 아토피 피부의 개선효과가 우수하며, 부작용이 없는 천연 추출물의 개발, 그 추출물을 함유하는 화장료의 개발 및 최적의 추출 방법에 대한 개발이 필수적이다.

본 발명은 상기와 같은 문제를 해결하기 위해 안출된 것으로, 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액 또는 상기 발효액을 추출한 발효 추출액을 수득하여, 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선 효과가 우수하고 피부 자극에 대한 부작용이 없는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법을 제공하는 데 목적이 있다.

또한, 본 발명은 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 화장료 조성물을 제공함으로써, 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하여 항산화, 항염증 및 아토피 피부를 개선하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법을 제공하는 데 목적이 있다.

본 발명은 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효시켜 수득한 벌노랑이 발효액을 함유하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효시켜 수득한 벌노랑이 발효물의 추출액을 함유하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에서 상기 벌노랑이는 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 추출 용매를 사용하여 추출되는 것이 바람직하다.

아울러, 본 발명은 벌노랑이 추출액을 얻는 단계(S10)와, 상기 벌노랑이 추출액에 균주 사카로미세스를 접종하여 1차 발효액을 얻는 단계(S20)와, 상기 1차 발효액에서 균주 아스퍼질러스를 접종하여 2차 발효액을 얻는 단계(S30)와, 상기 2차 발효액에서 배양균을 제거한 후 열수 추출법을 이용하여 벌노랑이 발효 추출액을 얻는 단계(S40), 및 상기 단계(S30)의 벌노랑이 발효액 또는 상기 단계(S40)의 벌노랑이 발효 추출액에 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 색소 및 향료를 포함하여 화장료 조성물을 얻는 단계(S50)로 이루어지는 것을 특징으로 한다.

상기와 같이 본 발명에 따른 벌노랑이 발효액 또는 발효 추출액은 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액 또는 상기 발효액을 추출한 발효 추출액으로 수득한 것으로, 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선 효과가 우수하고 피부 자극에 대한 부작용이 없는 효과가 있다.

또한, 본 발명은 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 화장료 조성물을 제공함으로써, 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유 라디칼을 소거하여 항산화, 항염증 및 아토피 피부를 개선하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법을 제공하는 효과가 있다.

도 1은 본 발명의 실시예에 따른 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 보여주는 플로우 차트.

본 발명은 산화, 염증 반응 및 아토피 증상에 대한 피부의 방어 기작을 항산화 효과와 유효성을 극대화시키는 발효기술을 기초로 하여 연구하였다. 그 결과, 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액이 현저하게 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선 효과를 나타냄을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

본 발명에 따른 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증, 아토피 개선용 화장료 조성물에 대하여 설명하면 다음과 같다.

상기 벌노랑이는 콩과에 속하는 여러해살이 풀로 우리나라 중부 이남이나 일본, 중국, 히말리야의 숲이나 풀밭의 반그늘이나 양지에 자생하며, 한방에서는 벌노랑이의 전초 및 꽃, 뿌리를 약재로 사용하고 있고, 학명은 Lotus corniculatus var. japonica Regel이다.

벌노랑이는 시안화수소가 함유되어 호흡과 소화기능을 촉진하는데 도움을 주고, 암을 치료하는데도 효과가 있다.

또한, 벌노랑이는 열을 내리고 갈증을 멈추게 하며, 기력부족을 보충해주고, 체력소모로 인한 피로감을 줄여주는 효과가 있다.

본 발명은 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효시켜 수득한 벌노랑이 발효액을 함유하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

또한, 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효시켜 수득한 벌노랑이 발효액으로부터 추출한 발효 추출액을 함유하는 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선용 화장료 조성물인 것을 특징으로 한다.

상기 벌노랑이의 바람직한 건조 중량비는 벌노랑이 10 내지 40 중량%가 되는 것이 바람직하며, 상기 벌노랑이는 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 추출 용매를 사용하여 추출되는 것이 바람직하다.

상기 벌노랑이는 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 벌노랑이 추출액이 제조될 수 있다.

일 예로, 본 발명의 조성물의 유효성분인 벌노랑이는 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 사용하여 추출하거나 벌노랑이를 상기 용매를 이용하여 추출한 후, 이를 혼합하여 제조할 수 있다.

상기 용매는 알코올이 좋으며, 바람직하게는 에탄올이 좋은데, 에탄올은 더욱 바람직하게 70% 에탄올인 것이 좋다. 상기 추출 용매의 적합한 첨가량은 벌노랑이 건조 중량의 1 내지 30배이며, 더욱 바람직하게는 10 내지 30배이며, 가장 바람직하게는 20배이다.

한편, 본 발명의 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액은 상술한 추출법에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제과정을 거친 추출물도 포함한다.

예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액에 포함된다고 해석한다.

또한, 본 발명의 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액은 발효액을 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조된 것을 포함하기도 한다.

본 발명의 벌노랑이 발효액 또는 벌노랑이 발효 추출액은 상기 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액 또는 상기 발효액을 추출한 발효 추출액으로써, 자유라디칼 소거, 항염증 및 아토피 피부 개선 효과가 우수하고 피부 자극에 대한 부작용이 없는 천연의 안전 제제에 해당하며, 생산비용이 저렴하다.

본 발명에서, 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액은 농축된 액상일 수도 있고, 건조된 분말형태일 수도 있다.

상기 사카로미세스는 자낭균류에 속하는 효모의 1속으로, 난형 또는 타원형이며 다극 출아로 증식하는 유포자 효모로, 상기 사카로미세스는 사카로미세스 바이아누스(Saccharomyces bayanus), 사카로미세스 바울라디(Saccharomyces boulardii), 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae), 사카로미세스 케발리에리(Saccharomyces chevalieri), 사카로미세스 다이레넨시스 (Saccharomyces dairenensis), 사카로미세스 엘립소이두스(Saccharomyces ellipsoideus), 사카로미세스 유바야누스(Saccharomyces eubayanus), 사카로미세스 엑시구스(Saccharomyces exiguus), 사카로미세스 플로렌시노(Saccharomyces florentinus), 사카로미세스 우바룸(Saccharomyces uvarum) 등으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상의 균주인 것이 바람직하다.

상기 사카로미세스는 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)가 바람직하며, 상기 사카로미세스 세레비시아는 자낭균류에 속하는 대표적인 효모로, 빵효모(baker's yeast), 맥주효모(brewery yeast), 및 양조에 사용하는 효모이다.

상기 아스퍼질러스는 우리 주변에서 흔하게 볼 수 있는 불완전 균류로서 산업적으로 많이 이용되는 속으 균이다. 이 속의 균들은 효소활성(amylase & Protease) 강하기 때문에 오래전부터 발효식품에 이용하고 있다. 상기 아스퍼질러스는 아스퍼질러스 프라브스 (Aspergillus flavus Link), 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae(Ahlb) Cohn), 아스퍼질러스 소자에(Aspergillus sojae Sakaguchi & Yamada), 아스퍼질러스 타마리(Aspergillus tamarii Kita) 등으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상의 균주인 것이 바람직하다.

상기 아스퍼질러스는 아스퍼질러스 오리자에(Aspergillus oryzae)가 더 바람직하다.

본 발명의 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증, 아토피 개선용 화장료 조성물은 매우 우수한 항염, 항산화의 효능을 나타내며, 적용 제품들에서 우수한 안정성을 나타낸다. 또한, 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제, 자유라디칼의 소거 등의 효과를 가지며, 피부 자극 및 염증 완화 효과를 가진다.

본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액 또는 상기 발효액을 추출한 발효 추출액은 화장료 조성물 중 총 중량대비 0.01 내지 20.0 중량%이며, 바람직하게는 0.1 내지 15.0 중량%이며, 보다 바람직하게는 1 내지 10.0 중량%이다.

상기 벌노랑이 발효액 또는 발효액을 추출한 발효 추출액은 화장료 조성물 총 중량대비 0.01 중량% 미만인 경우 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유라디칼의 소거 효과가 나타나지 않는 문제가 있으며, 20 중량% 초과인 경우 건조 피부를 가진 사람에게 피부 가려움과 따끔거림이 발생되는 문제가 있다.

본 발명의 벌노랑이 발효액 또는 발효액을 추출한 발효 추출액은 항산화, 항염증 및 아토피 피부 개선의 효과를 가지며, 건조 피부를 가진 사람을 제외하고는 피부 자극에 대한 부작용이 없기 때문에, 100 중량% 벌노랑이 발효액 또는 100 중량% 벌노랑이 발효 추출액을 화장료 조성물로 사용할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효한 발효액 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 색소 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 팩, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 중 어느 하나 이상을 선택하여 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 글리세롤, 글리세린, 지방족 에스테르, 페녹시에탄올, 트리에탄올아민, 폴리에틸렌 글리콜, 밀납, 폴리솔베이트 60, 솔비탄세스퀴오레이드, 파라핀, 소르비탄 스테아레이트, 친유형 모노스테아린산 글리세린, 스테아린산, 글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트, 카르복시폴리머, 시토스테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 세라마이드, 콜레스테롤, 스테아레스-4, 디세틸포스페이트, 마카다미아 오일, 카르복시비닐폴리머, 산탄검 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 중 어느 하나 이상을 선택하여 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 글리세린, 부틸렌글리콜 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오즈, 소디움히아루로네이트, 페녹시에탄올, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 스테아린산, 세틸알코올, 글리세릴모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트, 솔비탄세스퀴올레이트, 글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트, 왁스, 파리핀, 스쿠알란, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드, 카르복시비닐폴리머, 트리에탄올아민, 아가 또는 트라칸트 중 어느 하나 이상을 선택하여 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 중 어느 하나 이상을 선택하여 이용될 수 있다.

본 발명에 따른 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물의 제조방법은 첨부 도면을 참조하여 설명하면 다음과 같다.

도 1은 본 발명에 따른 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 보여주는 플로우 차트이다.

이하, 본 발명에 대한 바람직한 실시 내용은 첨부한 도면을 참조하여 설명하며, 본 발명의 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물의 제조방법은 하기 단계를 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명은 벌노랑이 추출액을 얻는 단계(S10)와, 상기 벌노랑이 추출액에 균주 사카로미세스를 접종하여 1차 발효액을 얻는 단계(S20)와, 상기 1차 발효액에서 균주 아스퍼질러스를 접종하여 2차 발효액을 얻는 단계(S30)와, 상기 2차 발효액에서 배양균을 제거한 후 열수 추출법을 이용하여 벌노랑이 발효 추출액을 얻는 단계(S40), 및 상기 단계(S30)의 벌노랑이 발효액 또는 상기 단계(S40)의 벌노랑이 발효 추출액에 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 색소 및 향료를 포함하여 화장료 조성물을 얻는 단계(S50)로 이루어지는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 제조방법을 각 단계별로 나누어서 설명하면 다음과 같다.

상기 벌노랑이 추출액을 얻는 단계(S10)를 수행한다.

상기 벌노랑이를 정제수로 세척하고 건조한 다음 모두 분쇄한 후 50 내지 200 메시(mesh)의 체를 이용하여 미세한 분쇄물을 얻는다. 상기 벌노랑이 분쇄물에 100 내지 300 g/L의 증류수를 가하고 중탕 조건에서 3 내지 7시간씩 3회 환류추출하고 냉침을 한다. 그 후, 3 내지 8 ㎛ 여과지로 여과하여 추출액을 제조하여 발효 과정의 추출액으로 사용한다.

상기 벌노랑이 추출액에 균주 사카로미세스를 접종하여 1차 발효액을 얻는 단계(S20)를 수행한다.

상기 단계(S10)에서 얻은 벌노랑이 추출액에 균주 사카로미세스와 YM Broth 배지를 넣어 20 내지 25 ℃ 호기적 조건에서 80 내지 150 시간 발효하여 1차 발효를 진행한다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거한 후, 더 이상 배양되지 않도록 멸균 처리를 한다.

상기 1차 발효액에서 균주 아스퍼질러스를 접종하여 2차 발효액을 얻는 단계(S30)를 수행한다.

상기 단계(S20)에서 얻은 1차 발효액에 균주 아스퍼질러스와 Potato Dextose Broth 배지를 넣어 22 내지 28 ℃ 호기적 조건에서 80 내지 150 시간 발효하여 2차 발효를 진행한다. 역시 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거한 후, 더 이상 배양되지 않도록 멸균 처리를 한다.

상기 단계(S30)에서 수득한 벌노랑이 2차 발효액은 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.01 내지 20.0 중량%이 포함될 수 있다.

상기 벌노랑이 2차 발효액은 화장료 조성물 총 중량대비 0.01 중량% 미만인 경우 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유라디칼의 소거 효과가 나타나지 않는 문제가 있으며, 20 중량% 초과인 경우 건조 피부를 가진 사람에게 피부 가려움과 따끔거림이 발생되는 문제가 있다.

상기 2차 발효액에서 배양균을 제거한 후 열수 추출법을 이용하여 벌노랑이 발효 추출액을 얻는 단계(S40)를 수행한다.

상기 2차 발효액에 멸균 및 방부제를 투여한 후, 열수 추출법으로 벌노랑이 발효 추출액을 얻는다. 상기 배양균을 제거한 벌노랑이 발효액을 최종 70 %(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하고, 3 내지 7시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 3 내지 8 ㎛ 여과지로 여과한다. 여과가 완료 후 벌노랑이 발효 추출액을 얻는다.

상기 단계(S40)에서 수득한 벌노랑이 발효 추출액은 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.01 내지 20.0 중량%이 포함될 수 있다.

상기 벌노랑이 발효 추출액은 화장료 조성물 총 중량대비 0.01 중량% 미만인 경우 리폭시게나아제, 히아루로니다아제의 활성억제 및 자유라디칼의 소거 효과가 나타나지 않는 문제가 있으며, 20 중량% 초과인 경우 건조 피부를 가진 사람에게 피부 가려움과 따끔거림이 발생되는 문제가 있다.

상기 단계(S30)의 벌노랑이 발효액 또는 상기 단계(S40)의 벌노랑이 발효 추출액에 안정화제, 비타민, 안료, 색소 및 향료를 포함하여 화장료 조성물을 얻는 단계(S50)로 이루어지는 것을 특징으로 한다.

이하, 본 발명의 제조예, 실시예, 비교예, 시험예 및 제형예에 의해 상세히 설명한다.

하기 제조예, 실시예, 비교예, 시험예 및 제형예는 본 발명을 예시하는 것일뿐, 본 발명이 하기 제조예, 실시예, 비교예, 시험예 및 제형예에 한정되는 것이 아니다.

[ 제조예 ] 본 발명의 벌노랑이 추출액 제조방법

벌노랑이를 정제수로 세척하고 건조한 다음 모두 분쇄한 후 벌노랑이 분쇄물을 200 g/L가 되도록 10 %(V/V) 에탄올 수용액을 가하고 중탕 조건에서 5 시간씩 3회 환류추출하고 냉침하였다. 그 후, 6 ㎛의 여과지(와트만(whatman) #3)로 여과하여 추출액을 제조하여 발효 과정의 추출액으로 사용하였다.

또한, 상기의 발효액을 50 ℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하여 효능 평가 시에 사용하였다.

[ 실시예 ] 본 발명의 벌노랑이 발효액 및 벌노랑이 발효 추출액의 제조방법

상기 제조예에서 제조된 벌노랑이 추출액에 균주 Saccharomyces cerevisiae와 YM Broth 배지를 넣어 24 ℃ 호기적 조건에서 120 시간 발효하여 1차 발효를 진행한다. 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거한 후, 더 이상 배양되지 않도록 멸균(121℃, 15분, 1.5기압)하였다.

2차 발효를 위하여 1차 발효액을 Aspergillus oryzae (KTCT 6292)와 potato dextrose broth(PDB) 배지를 넣어 26 ℃ 호기적 조건에서 96 시간 발효하여 2차 발효를 진행한다. 역시 배양 후 배양액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거한 후, 더 이상 배양되지 않도록 멸균(121℃, 15분, 1.5기압)하였다.

발효가 완료된 벌노랑이 발효물을 멸균 및 방부제를 투여한 후 여과하여 벌노랑이 발효액을 제조하였다.

발효 후, 배양균을 1차 제거한 벌노랑이 발효물을 최종 70 %(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5 시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 6 ㎛의 여과지(와트만(whatman) #3)로 여과하였다. 여과가 한 후 얻어진 추출액을 농축조로 이송하여 50 ℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다.

[ 비교예 1] 송이버섯 균사체를 함유한 벌노랑이 송이버섯 발효액 제조방법의 비교예 1

본 비교예 1에서는 제조예 1에서 수득된 벌노랑이 추출액을 송이버섯 균사체로 벌노랑이 송이버섯 발효액을 제조하였다. 송이버섯을 제외한 나머지 실험방법은 실시예 1과 동일하였다.

[ 비교예 2] 능이버섯 균사체를 함유한 벌노랑이 송이버섯 발효액 제조방법의 비교예 2

본 비교예 2에서는 제조예 1에서 수득된 벌노랑이 추출액을 능이버섯 균사체로 발효시켜 벌노랑이 능이버섯 발효액을 제조하였다. 능이버섯을 제외한 나머지 실험방법은 실시예 1과 동일하였다.

[ 시험예 1] 본 발명의 벌노랑이 2차 발효액에 의한 세포 증식 및 독성 확인

상기 실시예, 비교예 1~2에서 제조된 벌노랑이 발효액 건조분말 및 제조예에서 제조한 건조분말에 대하여 세포 증식에 미치는 영향을 확인하였다.

세포 증식 및 독성 확인을 위하여 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였다.

배양하고 있는 세포 3T3(fibroblast cell line)을 96 웰 마이크로플레이트에 5,000 세포/웰로 분주(分株)하여 30분간 항온조에서 배양하고, 시료를 농도 별 각각 0.01, 0.05, 0.1, 0.5(%,W/V))로 투여하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후, 티아졸린 블루(Thiazoline blue)를 투여하고 4시간 동안 추가 배양을 하였다. 배양액을 모두 버리고 마이크로플레이트의 각 웰에 반응 정지액을 가하고 5분간 교반한 후, 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료 주입량만큼 10 % 우태아혈청(Fetal Bovine Ser㎛, FBS) 배지를 투여하여 세포 성장의 최적 조건으로 동시배양을 하였으며, 대조군의 세포증식을 100 %로 하고 시료 투입 실험군의 세포 증식율을 계산하였다.

세포증식 효과는 계산식 1에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

[계산식 1]

본 발명의 벌노랑이 2차 발효액에 의한 세포 증식 및 독성 완화 효과

농도 (%)	세포증식효과(%)
	실시예	비교예 1	비교예 2	제조예
대조군	0	0	0	0
0.01	12.8	6.2	5.3	4.2
0.05	19.6	11.5	9.1	5.4
0.1	27.5	16.3	10.5	10.1
0.5	33.1	17.2	13.1	16.5

표 1에 나타낸 바와 같이, 세포 성장 최적 조건에서의 세포 증식을 100 %로 하였을 때, 실시예와 비교예 1~2에서 제조된 벌노랑이 발효액 및 제조예에서 제조된 벌노랑이 추출액은 세포 독성이 없으며, 실시예, 비교예 1~2, 제조예 모두에서 세포 증식효과가 있음을 확인하였다. 특히, 실시예는 비교예 1~2보다 월등한 세포 증식효과를 나타내었으며, 실시예의 벌노랑이 발효액이 가장 우수한 세포 증식효과를 나타내었다.

[시험예 2] 본 발명의 벌노랑이 2차 발효액에 의한 자유라디칼 소거 효과 확인

상기 실시예, 비교예 1~2에서 제조된 벌노랑이 발효액 및 제조예에서 제조한 벌노랑이 추출액에 대하여 자유라디칼(Free Radical) 소거에 미치는 영향을 확인하였다.

자유라디칼(Free Radical) 소거에 미치는 영향을 확인하기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였다.

DPPH(1,1-디페닐-2피크릴-히드라질)법 (참조:Blois.M.S.Nature 181, 1190, 1958)을 사용하여 실험을 수행하였으며, DPPH와 Quercetin은 시그마(SIGMA)사의 것을 사용하였다. 0.2 mM DPPH 메탄올 용액 1ml에 여러 농도(5, 10, 20, 30 ppm)의 실시예, 비교예 1~2, 제조예의 용액 2 ml를 접종하고 교반한 후 실온에서 10분간 반응 시켰다. 그 후, 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 공시험으로 각 시료 대신 정제수를 사용하였다.

하기 계산식 2를 이용하여 자유라디칼의 변화를 측정하였고 그 결과를 표 2에 나타내었다.

[계산식 2]

본 발명의 벌노랑이 2차 발효액에 의한 자유라디칼 소거 효과

농도 (㎍/㎖)	자유라디칼 소거효과(%)
	실시예	비교예 1	비교예 2	제조예
0	0	0	0	0
10	28.2	5.7	7.3	10.7
50	49.6	22.5	28.2	19.6
70	63.1	40.6	50.6	43.7
100	95.7	79.5	86.2	87.3
300	99.3	96.2	97.1	98.2
SC50	49.16	117.51	104.64	109.43

표 2에 나타낸 바와 같이, 실시예에서 제조된 벌노랑이 발효액의 자유라디칼 소거 효과가 비교예 1~2에서 제조된 벌노랑이 발효액 및 제조예에서 제조된 벌노랑이 추출액의 자유라디칼 소거 효과 보다 우수한 것을 확인할 수 있었다.

상기 SC50은 유해 활성산소 소거활성(scavenging activity)을 말하며, 여기서 SC50은 유해 활성산소(free radical)를 50% 감소시키는 필요한 시료의 농도를 말한다.

[ 시험예 3] 본 발명의 벌노랑이 2차 발효액에 의한 리폭시게나아제 활성 억제 효과 확인

상기 실시예, 비교예 1~2에서 제조된 벌노랑이 발효액 및 제조예에서 제조한 벌노랑이 추출액에 대하여 리폭시게나아제(Lpoxygenase) 활성 억제 효과를 확인하였다.

리폭시게나아제(Lpoxygenase) 활성 억제에 미치는 영향을 확인하기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였다.

TBAS법을 사용하여 실험을 수행하였으며, 실험에 사용하는 Linoleic acid와 Lipoxygenase, Thiobabitulic acid는 시그마(SIGMA)사의 것을 사용하였다. 1 mM Linoleic acid 1 ml에 여러 농도( 5, 10, 20, 30, 40 ppm)의 실시예, 비교예 1~2, 제조예의 용액을 0.05 ml 접종하고 Lipoxygenase 0.95 ml를 투여 후 교반하여 25 ℃에서 10분간 반응을 시킨다. 그리고 Trichloroacetic acid를 0.5 ml, Thiobarbiturlic acid를 1 ml 접종한 후, 10분간 heating하고 얼음물에서 2~3분간 냉각시켜 반응을 종료시킨다. 반응이 종결된 반응액에 Butanol 2 ml를 넣고 4,000 g로 5분간 원심분리 한 후 535 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 공시험으로 각 시료 대신 정제수를 사용하였다.

하기 계산식3를 이용하여 Lipoxygenase 활성억제 효과를 구하고 그 결과를 표 3에 나타내었다.

[계산식 3]

본 발명의 벌노랑이 2차 발효액에 의한 리폭시게나아제 활성억제 효과

농도 (㎍/㎖)	리폭시게나아제 활성억제효과(%)
	실시예	비교예 1	비교예 2	제조예
0	0	0	0	0
50	9.1	4.2	2.5	6.6
100	33.9	11.1	10.5	18.2
300	63.7	38.7	33.1	39.2
500	98.2	82.6	85.5	84.9
1,000	98.9	95.6	97.2	97.5
SC50	236.84	434.22	436.21	412.03

표 3에 나타낸 바와 같이 실시예에서 제조된 벌노랑이 발효액의 리폭시게나아제 활성억제 효과가 비교예 1~2에서 제조된 벌노랑이 발효액 및 제조예에서 제조된 벌노랑이 추출액의 리폭시게나아제 활성억제 효과보다 우수한 것을 확인할 수 있었다.

[ 시험예 4] 본 발명의 벌노랑이 2차 발효액에 의한 히아루로니다아제 활성 억제 효과 확인

상기 실시예, 비교예 1~2에서 제조된 벌노랑이 발효액 및 제조예에서 제조한 벌노랑이 추출액에 대하여 히아루로니다아제 활성 억제효과를 확인하였다.

히아루로니다아제 활성 억제에 미치는 영향을 확인하기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였다.

Morgan-Elson 법을 응용한 방법으로, Hyaluronidase의 최종 효소 활성을 400NF unit/㎖, HA의 최종 농도를 0.4 ㎎/㎖로 하고 활성제인 Compound 48/80 buffer 용액 (0.1 ㎎/㎖)을 사용하여 불활성형 Hyaluronidase의 활성화 단계의 저해작용을 중심으로 Hyaluronidase 활성을 측정하였다. 시료는 buffer에 용해하여 시료 용액으로 하고 대조군은 시료용액 대신에 buffer를 사용하였다. 또한 각각의 blank로는 효소용액 대신에 buffer를 사용하였으며, 대조군으로는 녹차 추출물을 사용하였다.

하기 계산 식4를 이용하여 히아루로니다아제 활성억제 효과를 구하고 그 결과를 표 4에 나타내었다.

[계산식 4]

본 발명의 벌노랑이 2차 발효액에 의한 히아루로니다아제 활성억제 효과

농도 (㎍/㎖)	히아루로니다아제 활성억제효과(%)
	실시예	비교예 1	비교예 2	제조예
0	0	0	0	0
0.1	21.6	8.7	5.6	10.8
0.5	46.3	22.6	19.9	29.6
1	78.7	50.7	46.2	57.1
3	96.5	80.3	78.5	87.3
5	99.1	95.8	95.3	98.2
SC50	0.97	1.98	2.08	1.75

표 4에 나타낸 바와 같이, 실시예에서 제조된 벌노랑이 발효액의 히아루로니다아제 활성억제 효과가 비교예 1~2에서 제조된 벌노랑이 발효액 및 제조예에서 제조된 벌노랑이 추출액의 히아루로니다아제 활성억제 효과보다 우수한 것을 확인할 수 있었다.

[ 시험예 5] 본 발명의 벌노랑이 발효액을 포함하는 화장료 조성물의 자극 완화 임상 평가

본 발명의 벌노랑이 발효액을 포함하는 화장료 조성물의 자극 완화 임상 평가를 위하여 하기 표 5에 기재된 조성으로 벌노랑이 2차 발효액 건조분말을 포함하는 화장료 조성물(처방예)과 벌노랑이 2차 발효액 건조분말을 포함하지 않은 화장료 조성물(비교예 3)를 제조하여 자극 완화 임상 평가를 실시하였다.

자극 완화 임상 평가를 위한 화장료 조성물의 구성

번 호	원 료	처방예	비교예3
1	벌노랑이 2차 발효액 건조 분말 (실시예)	3.0	-
2	스테아린산	2.0	2.0
3	세틸알콜	2.0	2.0
4	글리세릴모노스테아레이트	2.0	2.0
5	폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트	0.5	0.5
6	솔비탄세스퀴올레이트	0.5	0.5
7	글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트	1.0	1.0
8	왁스	1.0	1.0
9	유동파라핀	4.0	4.0
10	스쿠알란	4.0	4.0
11	카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0	4.0
12	카르복시비닐폴리머	0.3	0.3
13	부틸렌글리콜	5.0	5.0
14	글리세린	3.0	3.0
15	트리에탄올아민	0.5	0.5
16	정제수	잔량	잔량
17	물	-	3.0

상기 처방예의 화장료 조성물을 제조하기 위하여 표 5에 기재된 12, 13, 14 및 16번을 혼합 교반하면서 80 ~ 85 ℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11번을 80 ~ 85 ℃사이로 가열하여 용해한 후 15를 투입 교반하여 제조부에 투입하고 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35 ℃까지 냉각하고 1번을 투입하여 25 ℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.

상기 비교예 3의 화장료 조성물을 제조하기 위하여 표 5에 기재된 12, 13, 14 및 16번을 혼합 교반하면서 80 ~ 85 ℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11번을 80 ~ 85 ℃사이로 가열하여 용해한 후 15번을 투입 교반하여 제조부에 투입하고 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35 ℃까지 냉각하고 17번을 투입하여 25 ℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.

상기에서 제조된 화장료의 자극완화 효과를 간이 임상평가를 통해 확인하였다.

처방예 화장료의 피부 자극개선 효과를 평가하기 위해, 20~30대 여성 지원자 50명을 대상으로 다음과 같은 실험을 실시하였다. 지원자의 피부자극 측정 조건을 동일하게 하기 위하여 실험부위를 깨끗하고 마른 상태로 유지하였으며, 최소 30분간 항온항습(20 ℃, 상대습도 40~60 %)이 유지되는 곳에서 피부 안정을 취한 후 진행하였다. 피부의 자극측정은 일회용 면도기를 이용하여 코 아래 부분을 제모 후 인중을 중심으로 좌측에는 처방예를 우측에는 비교예 3을 도포하여 20분 경과 후 설문 평가를 통하여 피부 자극 정도를 평가하였다. 자극측정은 하기 표 6 및 표 7의 기재된 내용을 바탕으로 지원자의 자가 설문 평가를 통해 시행하였으며 처방예와 비교예를 가지고 피부 자극의 차이를 비교하였다.

피부자극평가기준

0	1	2	3
자극 없음	약간 없음	보통	자극 있음

피부자극평가항목 및 설문지

홍반 (Erythema)	부종 (Edema)	가려움 (Itching)	따끔거림 (Prickling)

설문 조사 결과를 표 8에 나타내었다.

분류	홍반 (Erythema)	부종 (Edema)	가려움 (Itching)	따끔거림 (Prickling)
처방예	0	0	0.3	0.3
비교예 3	0	0	1.7	1.8

표 8에 나타낸 바와 같이, 벌노랑이 2차 발효액(실시예)을 함유하는 처방예의 화장료가 추출물 대신 물(비교예 3)을 보정하여 제조한 화장료에 비해 자극완화효과가 매우 우수하다는 것을 확인할 수 있었다.

상기에서와 같이 세포증식 효과, 자유라디칼 소거 효과, 리폭시게나아제 활성 억제 효과 및 히아루로니다아제 활성 억제 효과가 높으며, 피부 자극 완화 효과가 매우 우수한 본 발명의 벌노랑이 2차 발효액을 함유하여 여러 제형의 화장품을 제조할 수 있다.

하기에서는 벌노랑이 2차 발효액을 함유하여 제조된 여러 제형의 화장품의 제조방법을 설명한다.

[ 제형예 1] 본 발명의 벌노랑이 2차 발효액을 함유하는 화장수의 제조

실시예의 벌노랑이 2차 발효액 건조 분말을 함유한 화장료 중 화장수(스킨로션)의 제형예는 표 9와 같다.

본 발명의 벌노랑이 2차 발효액을 함유하는 화장수의 구성

번호	원료	함량(중량%)
1	벌노랑이 2차 발효액 건조 분말(실시예)	1.0
2	글리세린	3.0
3	부틸렌 글리콜	2.0
4	프로필렌 글리콜	2.0
5	폴리옥시에칠렌 경화피마자유	1.0
6	에탄올	10.0
7	트리에탄올아민	0.1
8	방부제	미량
9	색소	미량
10	향료	미량
11	정제수	잔량

상기 화장수를 제조하기 위하여, 표 9에 기재된 11번에 2,3,4 및 8번을 순서대로 투입하고 교반하여 용해시킨 후, 5번을 60 ℃ 정도 가열하여 용해시킨 후, 10번을 투입하여 용해한 후 11번에 투입하였다. 마지막으로 1,6,7 및 9번을 투입하여 충분히 교반한 뒤 숙성시켰다.

[ 제형예 2] 본 발명의 벌노랑이 2차 발효액을 함유하는 영양로션의 제조

실시예의 벌노랑이 2차 발효액 건조 분말을 함유한 화장료 중 영양로션의 제형예는 표 10과 같다.

본 발명의 벌노랑이 2차 발효액을 함유하는 영양로션의 구성

번호	원료	함량(중량%)
1	벌노랑이 2차 발효액 건조 분말(실시예)	2.0
2	밀납	1.0
3	폴리솔베이트 60	1.5
4	솔비탄 세스퀴올레이트	0.5
5	유동 파라핀	10.0
6	소르비탄 스테아레이트	1.0
7	친유형 모노스테아린산 글리세린	0.5
8	스테아린산	1.5
9	글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트	1.0
10	프로필렌글리콜	3.0
11	카르복시폴리머	0.1
12	트리에탄올아민	0.2
13	방부제	미량
14	색소	미량
15	향료	미량
16	정제수	잔량

상기 영양로션을 제조하기 위하여, 표 10에 기재된 10, 11, 13 및 16번을 혼합 교반하면서 80 ~ 85 ℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 12번을 80 ~ 85 ℃사이로 가열 용해한 후 유화하였다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50 ℃까지 냉각한 뒤 15번을 투입하고 45 ℃까지 냉각한 뒤 14번을 투입하고 35 ℃에 1번을 투입하여 25 ℃까지 냉각한 뒤 숙성시켰다.

[ 제형예 3] 본 발명의 벌노랑이 2차 발효액을 함유하는 영양크림의 제조

실시예의 벌노랑이 2차 발효액 건조 분말을 함유한 화장료 중 영양크림의 제형예는 표11와 같다.

본 발명의 벌노랑이 2차 발효액을 함유하는 영양크림의 구성

번호	원료	함량(중량%)
1	벌노랑이 2차 발효액 건조 분말(실시예)	3.0
2	스테아린산	2.0
3	세틸알콜	2.0
4	글리세릴모노스테아레이트	2.0
5	폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트	0.5
6	솔비탄세스퀴올레이트	0.5
7	글리세릴모노스테아레이트/글리세릴스테아레이트/폴리옥시에틸렌스테아레이트	1.0
8	왁스	1.0
9	유동파라핀	4.0
10	스쿠알란	4.0
11	카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
12	카르복시비닐폴리머	0.2
13	부틸렌글리콜	5.0
14	글리세린	3.0
15	트리에탄올아민	0.5
16	정제수	잔량

상기 영양크림을 제조하기 위하여 표 12에 기재된 12, 13, 14 및 16번을 혼합 교반하면서 80 ~ 85 ℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11번을 80 ~ 85 ℃사이로 가열하여 용해한 후 15번을 투입 교반하여 제조부에 투입하고 유화하였다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35 ℃까지 냉각하고 1번을 투입하여 25 ℃까지 냉각한 뒤 숙성시켰다.

[ 제형예 4] 본 발명의 벌노랑이 2차 발효액을 함유하는 에센스의 제조

실시예의 벌노랑이 2차 발효액 건조 분말을 함유한 화장료 중 에센스의 제형예는 표 12과 같다.

본 발명의 벌노랑이 2차 발효액을 함유하는 에센스의 구성

번호	원료	함량(중량%)
1	벌노랑이 2차 발효액 건조 분말(실시예)	3.0
2	시토 스테롤	1.7
3	폴리글리세릴 2-올레이트	1.5
4	세라마이드	0.7
5	스테아레스-4	1.2
6	콜레스테롤	1.5
7	디세틸포스페이트	0.4
8	농글리세린	5.0
9	마카다미아 오일	15.0
10	카르복시비닐폴리머	0.2
11	산탄검	0.2
12	방부제	미량
13	향료	미량
14	정제수	잔량

상기 에센스를 제조하기 위하여 표 12에 기재된 2, 3, 4, 5 및 6번을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 1, 7, 8 및 14번을 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루이다이져를 통과하고 이어 9번을 일정한 온도에서 서서히 접종하여 균질화한 후 다시 마이크로플루이다이져에 재차 통과시켰다 그리고 10, 11, 12 및 13번을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시켰다.

본 발명에서 설명한 것은 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법을 위한 실시예에 불과한 것으로, 본 발명은 상기 실시예에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 수 있으며, 단지 본 실시예는 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

Claims (11)

1. 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효시켜 수득한 벌노랑이 발효액을 함유하는 것을 특징으로 하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물.
   
2. 벌노랑이를 사카로미세스로 1차 발효, 아스퍼질러스로 2차 발효시켜 수득한 벌노랑이 발효액으로부터 추출한 발효 추출액을 함유하는 것을 특징으로 하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물.
   
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
   상기 벌노랑이는 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트 및 1,3-부틸렌 글리콜로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 추출 용매를 사용하여 추출되는 것을 특징으로 하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물.
   
4. 제 1 항에 있어서,
   상기 벌노랑이 발효액은 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.01 내지 20.0 중량%이 포함되는 것을 특징으로 하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물.
   
5. 제 2 항에 있어서,
   상기 벌노랑이 발효 추출액은 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.01 내지 20.0 중량%이 포함되는 것을 특징으로 하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물.
   
6. 제 1 항에 있어서,
   상기 벌노랑이 발효액은 항산화, 항염증, 아토피 피부 개선으로 선택되는 효과를 가지며, 피부 자극에 대한 부작용이 없는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물.
   
7. 제 2 항에 있어서,
   상기 벌노랑이 발효 추출액은 항산화, 항염증, 아토피 피부 개선으로 선택되는 효과를 가지며, 피부 자극에 대한 부작용이 없는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물.
   
8. 벌노랑이 추출액을 얻는 단계(S10);
   상기 벌노랑이 추출액에 균주 사카로미세스를 접종하여 1차 발효액을 얻는 단계(S20);
   상기 1차 발효액에 균주 아스퍼질러스를 접종하여 2차 발효액을 얻는 단계(S30)로 이루어지는 것을 특징으로 하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
   
9. 제 8 항에 있어서,
   상기 2차 발효액에서 배양균을 제거한 후 열수 추출법을 이용하여 벌노랑이 발효 추출액을 얻는 단계(S40); 및
   상기 단계(S30)의 벌노랑이 발효액 또는 상기 단계(S40)의 벌노랑이 발효 추출액에 안정화제, 비타민, 안료, 색소 및 향료를 더 포함하여 화장료 조성물을 얻는 단계(S50)로 이루어지는 것을 특징으로 하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
   
10. 제 8 항에 있어서,
    상기 단계(S30)에서 수득한 벌노랑이 2차 발효액은 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.01 내지 20.0 중량%이 포함되는 것을 특징으로 하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
    
11. 제 9 항에 있어서,
    상기 단계(S40)에서 수득한 벌노랑이 발효 추출액은 화장료 조성물 총 중량에 대해 0.01 내지 20.0 중량%이 포함되는 것을 특징으로 하는 벌노랑이 발효액을 유효성분으로 하는 항산화, 항염증 및 아토피 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
    

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