CN115701348A - 白芦笋酵素及其提升肤况、生理代谢及肾脏机能用途 - Google Patents
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Abstract
一种白芦笋(Asparagus officinalis)酵素,其是由白芦笋经水萃取后再经由依序添加不同的多个菌种进行发酵的三阶段发酵而得。此外,此白芦笋酵素还适用于制备提升皮肤状况、促进生理代谢活性或保护肾脏机能的组合物。
Description
技术领域
本发明关于一种白芦笋酵素,特别是涉及一种白芦笋酵素及其用于制备提升皮肤状况、促进生理代谢活性及保护肾脏机能的组合物的用途。
背景技术
自有机及/或天然的饮食概念兴起后,生技公司及食品业者积极投入关于天然植物的相关产品的研发。为使植物相关产品对身体健康帮助有科学验证的基础,植物的活性成分分析及功效评估成为产品开发的重点项目。
原产于法国的白芦笋(white asparagus,Asparagus officinalis),拥有比一般蔬菜高达五倍以上的蛋白质、碳水化合物、多种维生素、多种胺基酸,特别是天门冬酰胺、天门冬氨酸。因此,生技公司及食品业者积极研究白芦笋的活性成分分析及功效评估并据以开发成为相关产品。
发明内容
在一些实施例中,一种白芦笋酵素,此白芦笋酵素是由白芦笋经水萃取后再经由依序添加不同的多个菌种进行发酵的三阶段发酵而得。
在一些实施例中,此些菌种为酵母菌、乳酸杆菌及醋酸菌。
在一些实施例中,一种白芦笋酵素用于制备提升皮肤状况的组合物的用途。
在一些实施例中,白芦笋酵素用以减少黑色素、减少肌肤泛红、提升肌肤光泽、减少肌肤斑点、减少肌肤蜡黄或减少肌肤松弛。
在一些实施例中,一种白芦笋酵素用于制备促进生理代谢活性的组合物的用途。
在一些实施例中,白芦笋酵素用以抑制发炎。
在一些实施例中,白芦笋酵素用以提升基础代谢率。
在一些实施例中,白芦笋酵素用以改善水肿。
在一些实施例中,白芦笋酵素用以促进排便顺畅。
在一些实施例中,一种白芦笋酵素用于制备保护肾脏机能的组合物的用途。
附图说明
图1是一实施例的白芦笋酵素的制作方法的流程图。
图2是图1中步骤S11的一实施例的流程图。
图3是白芦笋萃取液和白芦笋酵素的总多酚含量检测图。
图4是相对一氧化氮浓度的细胞实验结果图。
图5是相对黑色素含量的细胞实验结果图。
图6是相对PGE2分泌量的细胞实验结果图。
图7是相对丙酮酸含量的细胞实验结果图。
图8是经TGF-β诱导的肾脏上皮细胞的细胞实验结果图。
图9是第0周及第4周的所有受试者全身水肿指数的人体实验分析图。
图10是第0周及第4周的所有受试者下肢水肿指数的人体实验分析图。
图11是第0周及第4周的数值超标者下肢水肿指数的人体实验分析图。
图12是第0周及第4周的白天及晚上的晚上水肿严重者下肢水肿指数的人体实验分析图。
图13是第0周及第4周的所有受试者水肿状况问卷调查的问卷结果图。
图14是第0周及第4周的感受粪质坚硬或有便意但难以排出的问卷结果图。
图15是第0周及第4周的排便所需时间的问卷结果图。
图16是第0周及第4周的相对黑色素指数的人体实验分析图。
图17是第0周及第4周的相对肌肤泛红程度的人体实验分析图。
图18是第0周及第4周的相对肌肤皱纹程度的人体实验分析图。
图19是第0周及第4周的皮肤状况的问卷结果图。
图20是第0周及第4周的整体肤况满意度的问卷结果图。
其中,附图标记:
S10:步骤
S11:步骤
S111:步骤
S112:步骤
S113:步骤
具体实施方式
请参阅图1。在一些实施例中,白芦笋酵素是由白芦笋经水萃取(步骤 S10)后再经由依序添加不同的多个菌种进行发酵的三阶段发酵(步骤 S11)而得。
在一些实施例中,进行萃取所使用的白芦笋可为白芦笋的植株、根、茎、或叶。在一些实施例中,进行萃取的白芦笋为白芦笋的嫩茎。在一些实施例中,白芦笋的嫩茎系泛指冒出地表后二到三天且无晒到太阳的茎。
在一些实施例中,进行萃取的白芦笋可为原材料(即完整的嫩茎),或为经物理前处理而分离成碎片、颗粒或粉末等型态。所采用的物理前处理可包括下列至少一种:粗碎、切碎、打碎、剪碎、捣碎、及研磨。
在一些实施例中,进行萃取的白芦笋可为当天采收新鲜的、干燥后的或冷冻过的白芦笋。在一些实施例中,进行萃取的白芦笋可为冷冻过的白芦笋。
在一些实施例中,可先将白芦笋打碎成白芦笋颗粒,然后再以水进行萃取。举例来说,将白芦笋打碎成粒径为30mm以下的白芦笋颗粒,再将白芦笋颗粒以水进行萃取。在一些实施例中,进行萃取的白芦笋颗粒的粒径可为12mm以下。
在一些实施例中,以水于80-100℃下萃取白芦笋0.5-1小时以得到白芦笋萃取液,然后再加入菌种进行三阶段发酵来得到白芦笋酵素。举例来说,可将白芦笋(如粒径12mm以下的白芦笋颗粒)浸泡在95℃水中1小时,使白芦笋中的效性成分溶解至水中而得到白芦笋萃取液。
在一些实施例中,在萃取步骤(即步骤S10)中,水与白芦笋的重量比为5-20:1-3。在一些实施例中,在萃取步骤(即步骤S10)中,水与白芦笋的重量比为10:1。
在一些实施例中,在萃取完成后添加第一种菌种之前,可先将白芦笋萃取液冷却至室温以得到冷却的白芦笋萃取液,然后再殖入菌种。
在一些实施例中,在发酵步骤(即步骤S11)中,此些菌种为酵母菌、乳酸杆菌及醋酸菌。
在一些实施例中,三阶段发酵工艺系于白芦笋萃取液中依序添加酵母菌、乳酸杆菌及醋酸菌进行发酵。
请参阅图2。在一些实施例中,三阶段发酵工艺系于白芦笋萃取液中添加酵母菌进行第一次发酵以得到第一初发酵液(步骤S111)后,再于第一初发酵液中添加乳酸菌进行第二次发酵以得到第二初发酵液(步骤 S112),接着再于第二初发酵液中添加醋酸菌进行第三次发酵以得到第三初发酵液(步骤S113)。
在一些实施例中,步骤S111系于白芦笋萃取液中殖入0.1%啤酒酵母 (如,寄存编号BCRC20271的啤酒酵母)并在28℃-37℃下发酵1~2.5天,以得到第一初发酵液。在一些实施例中,殖入啤酒酵母后的白芦笋萃取液系在30℃下发酵1天。
在一些实施例中,在步骤S111中,藉由添加酵母菌于白芦笋萃取液中,得以使白芦笋萃取液发酵而生成酒精,藉以有利于提取出白芦笋内的有效成份。
在一些实施例中,第一初发酵液的pH值≦4.2,且其糖度约为9°Bx。在一些实施例中,第一初发酵液的pH值为4±0.2。
在一些实施例中,步骤S112系于第一初发酵液中殖入0.05%胚芽乳酸杆菌(如,寄存编号BCRC910760的胚芽乳酸杆菌)并在28℃-37℃下发酵 1~3天,以得到第二初发酵液。在一些实施例中,殖入胚芽乳酸杆菌后的第一初发酵液系在30℃下发酵1天。
在一些实施例中,在步骤S112中,藉由添加乳酸菌于第一初发酵液中,得以使第一初发酵液内的葡萄糖被消耗而降低糖度,并且产生乳酸而降低第一初发酵液的pH值。于此,降低第一初发酵液的pH值有利于进一步提取出白芦笋内的其他不同有效成分。
在一些实施例中,第二初发酵液的pH值≦3.7,且其糖度约为6°Bx。在一些实施例中,第二初发酵液的pH值为3.5±0.2。
在一些实施例中,步骤S113系于第二初发酵液中殖入5%乙酸醋酸菌 (如,寄存编号BCRC11688的乙酸醋酸菌)并在28℃-37℃下发酵3~10 天,以得到第三初发酵液。在一些实施例中,殖入乙酸醋酸菌后的第二初发酵液系在30℃下发酵5天。
在一些实施例中,在步骤S113中,藉由添加醋酸菌于第二初发酵液中,得以使第二初发酵液内的酒精被消耗,并且降低葡萄糖的含量。
在一些实施例中,第三初发酵液的pH值≦3.5,且其糖度为约为1.5° Bx。在一些实施例中,第三初发酵液的pH值为3.3±0.2。
在一些实施例中,于步骤S113后,将第三初发酵液过滤,以得到初发酵过滤液。在一些实施例中,以200目数的滤网过滤第三初发酵液,以得到初发酵过滤液。
在一些实施例中,将第三初发酵液或初发酵过滤液在55℃~65℃下进行减压浓缩,以得到发酵浓缩液。在一些实施例中,减压浓缩可在60℃下进行。
在一些实施例中,可将前述的初发酵过滤液或发酵浓缩液进行过滤而得到发酵原液。在一些实施例中,此过滤步骤可以200目数的滤网进行。
在一些实施例中,发酵原液的糖度约为2°Bx。在一些实施例中,发酵原液的pH值≦3.5。在一些实施例中,发酵原液的pH值为3.3±0.2。
在一些实施例中,可添加寡糖至发酵原液中来将发酵原液的糖度调整至 27°Bx,进而得到糖度调整后发酵原液。在一些实施例中,寡糖系由3~10 个单醣分子聚合而成的低聚糖。在一些实施例中,寡糖系为,但不限于,果寡糖、半乳寡糖、木寡糖或异麦芽寡糖。在一些实施例中,寡糖为含 40%~70%异麦芽寡糖的寡糖溶液。
应能理解的是,可依实际需求以三阶段发酵工艺所得的第三初发酵液、初发酵过滤液、发酵浓缩液、发酵原液或糖度调整后发酵原液作为白芦笋酵素。
在一些实施例中,前述的白芦笋酵素具有提升皮肤状况的能力。换言之,白芦笋酵素施予一个体时能提升此个体的皮肤状况。因此,白芦笋酵素适用于制备提升皮肤状况的组合物。
在一些实施例中,白芦笋酵素具有减少黑色素、减少肌肤泛红、提升肌肤光泽、减少肌肤斑点、减少肌肤蜡黄、减少肌肤松弛、或其任意组合等能力。换言之,白芦笋酵素施予一个体时能减少黑色素、减少肌肤泛红、提升肌肤光泽、减少肌肤斑点、减少肌肤蜡黄、减少肌肤松弛、或其任意组合。因此,白芦笋酵素适用于制备减少黑色素、减少肌肤泛红、提升肌肤光泽、减少肌肤斑点、减少肌肤蜡黄、减少肌肤松弛、或其任意组合的组合物。
在一些实施例中,前述的白芦笋酵素具有促进生理代谢活性的能力。换言之,白芦笋酵素施予一个体时能促进此个体的生理代谢活性。因此,白芦笋酵素适用于制备促进生理代谢活性的组合物。
在一些实施例中,白芦笋酵素具有抑制发炎能力。换言之,白芦笋酵素施予一个体时能抑制发炎。因此,白芦笋酵素适用于制备抑制发炎的组合物。
在一些实施例中,白芦笋酵素具有提升基础代谢率能力。换言之,白芦笋酵素施予一个体时能提升基础代谢率。因此,白芦笋酵素适用于制备提升基础代谢率的组合物。
在一些实施例中,白芦笋酵素具有改善水肿能力。换言之,白芦笋酵素施予一个体时能改善水肿。因此,白芦笋酵素适用于制备改善水肿的组合物。
在一些实施例中,白芦笋酵素具有促进排便顺畅能力。换言之,白芦笋酵素施予一个体时能促进排便顺畅。因此,白芦笋酵素适用于制备促进排便顺畅的组合物。
在一些实施例中,前述的白芦笋酵素具有保护肾脏机能的能力。换言之,白芦笋酵素施予一个体时能保护此个体的肾脏机能。因此,白芦笋酵素适用于制备保护肾脏机能的组合物。
在一些实施例中,白芦笋酵素具有抑制肾脏纤维化能力。换言之,白芦笋酵素施予一个体时能抑制肾脏纤维化。因此,白芦笋酵素适用于制备抑制肾脏纤维化的组合物。
在一些实施例中,在前述的组合物中,白芦笋酵素的有效施予量为5 mL/天。
在一些实施例中,制备所得的组合物可为食品组合物、化妆品组合物或保养品组合物。
在一些实施例中,当前述的组合物为食品组合物时,此食品组合物包含特定含量的白芦笋酵素。其中,此食品组合物的型态可为粉末、颗粒、溶液、胶体或膏体。
在一些实施例中,含有白芦笋酵素的食品组合物可为食品产品或食品添加物(food additive)。
在一些实施例中,含有白芦笋酵素的食品产品可为饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakery products)、健康食品 (health foods)或膳食补充品(dietary supplements)等。在一些实施例中,含有白芦笋酵素的食品产品可更包括佐剂。举例来说,佐剂可为麦芽糖糊精 (Maltodextrin)、苹果酸、蔗糖素、柠檬酸、水果香料、蜂蜜香料、甜菊糖苷或其组合等。关于选用的载剂的种类与数量是落在本领域技术人员的专业素养与例行技术范畴内。
在一些实施例中,含有白芦笋酵素的食品添加物可为调味料、甜味料、香料、pH值调整剂、乳化剂、着色料或稳定剂等。
在一些实施例中,当前述的组合物为化妆品组合物或保养品组合物。换言之,化妆品组合物或保养品组合物包含有效含量的白芦笋酵素。
在一些实施例中,含有白芦笋酵素的化妆品组合物或保养品组合物可为下列任一种型态:化妆水、凝胶、冻膜、泥膜、乳液、乳霜、唇膏、粉底、粉饼、蜜粉、卸妆油、卸妆乳、洗面奶、沐浴乳、洗发精、护发乳、防晒乳、护手霜、指甲油、香水、精华液及面膜。
在一些实施例中,含有白芦笋酵素的化妆品组合物或保养品组合物可视需要更包含外用品可接受成分。在一些实施例中,外用品可接受成分例如可为乳化剂、渗透促进剂、软化剂、溶剂、赋型剂、抗氧化剂、或其组合。
下列范例中若无特别叙明,则所使用的「%」符号是指重量百分比,以及所进行的实验步骤是在室温(约25℃)且常压(1atm)下进行。
例一
A.原料:
1.白芦笋(Asparagus officinalis),产地:法国。
2.二次水,又称RO水(逆渗透;Reverse Osmosis)或二次蒸馏水,以下简称「水」。
3.啤酒酵母,寄存于食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心 (BCRC),寄存编号BCRC20271。
4.胚芽乳酸杆菌,寄存于BCRC,寄存编号BCRC910760。
5.乙酸醋酸菌,寄存于BCRC,寄存编号BCRC11688。
6.以水与异麦芽寡糖所配制成的40%~70%异麦芽寡糖溶液。
B.制备流程:
1.将冷冻过的白芦笋嫩茎以粉碎机(型号:KJ-SD15G;厂牌: SAMPO)进行打碎,以形成粒径30mm以下的白芦笋颗粒。
2.将水加热至95℃后,投入白芦笋颗粒,并且使白芦笋颗粒于95℃的水中浸泡1小时,以形成白芦笋萃取液。于此,投入的白芦笋颗粒与水的重量比为1:10。将部份白芦笋萃取液于冷冻库中储存以待进行后续的测试。
3.于冷却后的白芦笋萃取液中殖入0.1%啤酒酵母,并在30℃下发酵1 天,以得到第一初发酵液。第一初发酵液的pH值为4,且其糖度约为9° Bx。
4.于第一初发酵液中殖入0.05%胚芽乳酸杆菌,并在30℃下发酵1 天,以得到第二初发酵液。第二初发酵液的pH值为3.5,且其糖度约为6° Bx。
5.于第二初发酵液中殖入5%乙酸醋酸菌,并在30℃下发酵5天,以得到第三初发酵液。第三初发酵液的pH值为3.3,且其糖度约为1.5°Bx。
6.将第三初发酵液以200目数的滤网进行过滤以得到初发酵过滤液。
7.将浓缩机(型号:Rotavapor R-100;厂牌:BUCHI)温度设定为 60℃,于此情况下,对初发酵过滤液进行减压浓缩而得到发酵浓缩液。
8.将发酵浓缩液以200目数的滤网进行过滤以得到发酵原液。发酵原液的pH值为3.3,且其糖度约为2°Bx。
9.于发酵原液中添加40%~70%异麦芽寡糖溶液以得到糖度调整后发酵原液,即为白芦笋酵素。于此,白芦笋酵素的糖度为27°Bx。并且,所制得的白芦笋酵素可储存于冷冻库中以待进行后续的测试。
例二
秤取10.0mg的没食子酸(Gallic acid)置于10mL容量瓶中,然后以水(H2O)定量至10mL,以得到没食子酸的储备溶液(stock solution)(即含1000ppm的没食子酸)。将没食子酸的储备溶液稀释10倍,即100μL 没食子酸的储备溶液加900μL的水,以得到100μg/mL没食子酸的初始溶液(即含100ppm的没食子酸)。然后,依据下表一配制0μg/mL、 20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、及100μg/mL的没食子酸的标准溶液,并分别取100μL的各浓度的标准溶液至玻璃试管中。加入 500μL的福林酚试剂(Folin-Ciocalteu's phenol reagent,购自Merck)至各玻璃试管内与标准溶液混合均匀并静置3分钟后,再加入400μL的7.5%碳酸钠混合均匀后反应30分钟以得到标准反应溶液。取200μL的标准反应溶液至96孔板中,并测量其在750nm下的吸光值,以获得标准曲线。
表一
标准溶液(μg/mL) | 0 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
初始溶液(μL) | 0 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
水(μL) | 100 | 80 | 60 | 40 | 20 | 0 |
分别取例一所制得的白芦笋萃取液和白芦笋酵素作为样本。将各样本以水稀释10倍后取100μL到离心管中。接着,加入500μL的福林酚试剂至各玻璃试管中与样本混合均匀并静置3分钟后,再加入400μL的7.5%碳酸钠混合均匀后反应30分钟以得到待测反应溶液。将装有待测反应溶液的玻璃试管进行震荡以确保无气泡后,取200μL的待测反应溶液至96孔板中,并测量待测反应溶液于750nm下的吸光值。
接着,利用标准曲线与内插法将待测反应溶液的吸光值换算成总多酚(Polyphenol)含量。于此,可得到白芦笋萃取液的总多酚含量为 202.29ppm(即为202.29μg/mL)及白芦笋酵素的总多酚含量为328.63ppm (即为328.63μg/mL),如图3所示。由此可知,白芦笋透过微生物发酵后,可增加总多酚含量为1.62倍。多酚类物质为富含于植物中的抗氧化物质,而近期文献更证实多酚具有美白、提升基础代谢率、抗发炎等功效。因此,相对于白芦笋萃取液,白芦笋酵素能提升总多酚含量,并进而提升其抗氧化活性。
例三
A.材料与仪器:
1.细胞株:小鼠巨噬细胞,购自ATCC(American type culture collection),细胞编号TIB-71,以下简称RAW 264.7细胞。
2.细胞培养基:DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium,购自 Gibco,产品编号12100-046),添加10%FBS(Fetal Bovine Serum,购自 Gibco,产品编号10437-028)以及1%抗生素(购自Gibco,产品编号 15240-062)。
3.LPS(Lipopolysaccharide,脂多醣),购自Sigma,产品编号SI- L2880-25MG。
4.Griess reagent:以Griess reagent kit(购自Life technologies,产品编号1445263)内的试剂A及试剂B,并以体积比1:1配制而成。
5.酵素免疫分析仪(ELISA reader),购自BioTek公司(美国)。
B.试验流程:
1.将RAW 264.7细胞以每孔1×104个的密度,接种于每孔含200uL的细胞培养基的96孔培养盘A中,并在37℃下培养24小时。试验组别包含:空白组、控制组、实验组A与实验组B。各组进行四重复(意即各组各有四孔)。
2.培养24小时后,将各组更换为200μL实验培养基。其中,空白组的实验培养基为不含LPS与样本的细胞培养基;控制组的实验培养基为含有 200ng/mL的LPS的细胞培养基;实验组A的实验培养基为含有200ng/mL 的LPS及1%(v/v)例一制得的白芦笋萃取液的细胞培养基;以及实验组B的实验培养基为含有200ng/mL的LPS及1%(v/v)例一制得的白芦笋酵素的细胞培养基。
3.将各组置于37℃反应24小时。
4.将反应后的各组于每孔中取出150μL实验培养基加入每孔含有 130μL的水的96孔培养盘B的对应孔中。
5.于96孔培养盘B的每孔中,再加入20μL Griess reagent,并避光反应 30分钟。
6.利用酵素免疫分析仪测量每孔548nm的吸光值(OD548值)。
C.试验结果:
所有组别的相对一氧化氮浓度系依下列公式计算:相对一氧化氮浓度 (%)=(各组OD548值/空白组OD548值)×100%。
空白组与其他各组的试验结果之间的统计学显著差异是以学生t检验 (studentt-test)统计分析得到。(图式中「*」代表在与空白组比较下其p 值小于0.05、「**」代表在与空白组比较下其p值小于0.01,以及「***」代表在与空白组比较下其p值小于0.001)。
请参阅图4。空白组未以LPS刺激也未使用样本进行处理,因此空白组的试验结果代表RAW 264.7细胞在正常的生理代谢情况下的表现。于此,在设定空白组的相对一氧化氮浓度为100%的情况下,控制组的相对一氧化氮浓度为108.4%,实验组A的相对一氧化氮浓度为109.9%,而实验组B的相对一氧化氮浓度为79.7%。也就是说,相对于空白组,控制组的小鼠巨噬细胞经由LPS刺激后,提升约8.4%的相对一氧化氮浓度;相对于空白组,实验组A的小鼠巨噬细胞经由LPS刺激,并添加白芦笋萃取液后,提升约 9.9%的相对一氧化氮浓度;而相对于空白组,实验组B的小鼠巨噬细胞经由LPS刺激,并添加白芦笋酵素后,显著降低约20.3%的相对一氧化氮浓度。相对于控制组,实验组A的小鼠巨噬细胞经由LPS刺激,并添加白芦笋萃取液后,提升约1.5%的相对一氧化氮浓度;而相对于控制组,实验组 B的小鼠巨噬细胞经由LPS刺激,并添加白芦笋酵素后,显著降低约28.7%的相对一氧化氮浓度。
在许多生物体内,在受到发炎反应相关细胞激素的刺激下,会释放出一氧化氮,因此透过一氧化氮的检测,可间接地评估发炎状态。
由此可知,不同于白芦笋萃取液,白芦笋酵素能明显地降低小鼠巨噬细胞经由LPS刺激后所提升的一氧化氮浓度,还远低于空白组(正常的生理代谢情况下)的一氧化氮浓度。而白芦笋萃取液不但无法降低小鼠巨噬细胞经由LPS刺激后所提升的一氧化氮浓度,还进一步提升一氧化氮浓度。换言之,白芦笋酵素能明显降低发炎状态,而白芦笋萃取液不但无法降低发炎状态,反而还进一步提升发炎状态。
因此,白芦笋酵素能够降低/抑制发炎状态,进而提升身体代谢,有效排除有害人体物质,强化体内环保。
例四
A.材料与仪器:
1.细胞株:小鼠黑色素瘤细胞,购自ATCC,细胞编号6475,以下简称B16F10细胞。
2.细胞培养基:DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium,购自 Gibco,产品编号12100-046),添加10%FBS(Fetal Bovine Serum,购自Gibco,产品编号10437-028)以及1%抗生素(购自Gibco,产品编号 15240-062)。
3.曲酸(Kojic acid),购自Sigma,产品编号K3125。
4. 1N NaOH:以水及NaOH(购自Sigma,产品编号221465)配制而成。
5.胰蛋白酶,购自Sigma,产品编号59427C。
6.酵素免疫分析仪(ELISA reader),购自BioTek公司(美国)。
B.试验流程:
1.将B16F10细胞以每孔1.5×105个的密度,接种于每孔含2mL的细胞培养基的6孔培养盘中,并在37℃下培养24小时。试验组别包含:空白组、曲酸组、实验组A与实验组B。各组进行三重复(意即各组各有三孔)。
2.培养24小时后,将各组更换为2mL实验培养基,并于37℃下继续培养48小时。其中,空白组的实验培养基为不含曲酸或样本的细胞培养基;曲酸组的实验培养基为含有0.2mg/mL的曲酸的细胞培养基,所述曲酸已被广泛认知为具有降低黑色素生成效果的物质;实验组A的实验培养基为含有1%(v/v)例一制得的白芦笋萃取液的细胞培养基;以及实验组B的实验培养基为含有1%(v/v)例一制得的白芦笋酵素的细胞培养基。
3.移除培养后的各组的实验培养基,并以PBS进行润洗2次。
4.于润洗后,添加200μL胰蛋白酶至各孔中反应3分钟。反应后,添加6mL细胞培养基以终止反应。而后收集各孔中的悬浮细胞与细胞培养基至对应的离心试管内,将各离心试管离心使细胞沉淀。
5.移除各组离心试管内的上清液,并以PBS清洗沉淀细胞2次后,再以200μL PBS重新悬浮细胞,以形成细胞悬浮液。
6.将细胞悬浮液以液态氮冷冻10分钟后,置于室温约30分钟至完全解冻。
7.完全解冻后,将离心试管离心。而后移除离心试管内的上清液,再以 120μL1NNaOH重新悬浮细胞沉淀后,使离心试管于60℃作用1小时使黑色素溶出,以获得各组的待检测样本。
8.将100μL各组的待检测样本移入一96孔培养盘。利用酵素免疫分析仪测量每孔405nm的吸光值(OD405值)。
C.试验结果:
所有组别的相对黑色素含量系依下列公式计算:相对黑色素含量(%) =(各组OD405值/空白组OD405值)×100%。
空白组与其他各组的试验结果之间的统计学显著差异是以学生t检验 (studentt-test)统计分析得到。(图式中「*」代表在与空白组比较下其p 值小于0.05、「**」代表在与空白组比较下其p值小于0.01,以及「***」代表在与空白组比较下其p值小于0.001)。
请参阅图5。空白组未使用曲酸或样本进行处理,因此空白组的试验结果代表B16F10细胞在正常的生理代谢情况下的表现。于此,在设定空白组的相对黑色素含量为100%的情况下,曲酸组的相对黑色素含量为54.99%,实验组A的相对黑色素含量为85.16%,而实验组B的相对黑色素含量为 81%。也就是说,相对于空白组,曲酸组的B16F10细胞在添加曲酸后,显著降低约45.01%的相对黑色素含量;相对于空白组,实验组A的B16F10 细胞在添加白芦笋萃取液后,显著降低约14.84%的相对黑色素含量;而相对于空白组,实验组B的B16F10细胞在添加白芦笋酵素后,显著降低约 19%的相对黑色素含量。
由此可知,白芦笋酵素及白芦笋萃取液皆能明显地降低B16F10细胞的黑色素含量,且白芦笋酵素的降低黑色素含量的能力相较白芦笋萃取液优异。换言之,白芦笋酵素具有降低黑色素含量的效果,进而有益于减少个体的黑色素,提升个体皮肤的通透、亮白程度。
例五
A.材料与仪器:
1.细胞株:人类初代皮肤角质细胞(Human primary epidermal keratinocytes),购自ATCC,细胞编号PCS-200-011,以下简称HPEK-50 细胞。
2.细胞培养基:角质细胞专用的无血清培养基(Keratinocyte-SFM),购自Thermo,产品编号17005042。
3.Prostaglandin E2(PGE2,前列腺素)ELISA kit,购自abcam,产品编号ab133021。
4.酵素免疫分析仪(ELISA reader),购自BioTek公司(美国)。
B.试验流程:
1.将HPEK-50细胞以每孔2×104个的密度,接种于每孔含1mL的细胞培养基的24孔培养盘中,并在37℃下培养24小时。试验组别包含:空白组、控制组、实验组A与实验组B。各组进行三重复(意即各组各有三孔)。
2.培养24小时后,将各组更换为1mL实验培养基,并于37℃下继续培养3小时。其中,空白组及控制组的实验培养基为不含样本的细胞培养基;实验组A的实验培养基为含有1%(v/v)例一制得的白芦笋萃取液的细胞培养基;以及实验组B的实验培养基为含有1%(v/v)例一制得的白芦笋酵素的细胞培养基。
3.移除培养后的各组的实验培养基,并添加1mL PBS。
4.对控制组、实验组A与实验组B的HPEK-50细胞进行UVB(紫外光,照射能量为820mJ)照射,并照射13.33分钟。
5.UVB照射后,将各组更换为1mL实验培养基,并于37℃下继续培养18小时。其中,空白组及控制组的实验培养基为不含样本的细胞培养基;实验组A的实验培养基为含有1%(v/v)例一制得的白芦笋萃取液的细胞培养基;以及实验组B的实验培养基为含有1%(v/v)例一制得的白芦笋酵素的细胞培养基。
6.将培养后的各组于每孔中取出100μL的实验培养基,并使用PGE2 ELISA Kit测定各组HPEK-50细胞的PGE2分泌量。依照PGE2ELISA Kit 所提供的试验流程进行,并利用酵素免疫分析仪测量每孔405nm的吸光值 (OD405值)。
C.试验结果:
所有组别的相对PGE2分泌量系依下列公式计算:相对PGE2分泌量 (%)=(各组OD405值/空白组OD405值)×100%。
空白组与控制组以及控制组与实验组(实验组A和实验组B)的试验结果之间的统计学显著差异是以学生t检验(student t-test)统计分析得到。 (图式中「#」代表在与空白组比较下其p值小于0.05、「##」代表在与空白组比较下其p值小于0.01,以及「###」代表在与空白组比较下其p值小于0.001;图式中「*」代表在与控制组比较下其p值小于0.05、「**」代表在与控制组比较下其p值小于0.01,以及「***」代表在与控制组比较下其 p值小于0.001)。
请参阅图6。空白组未以UVB刺激也未使用样本进行处理,因此空白组的试验结果代表HPEK-50细胞在正常的生理代谢情况下的表现。于此,在设定空白组的相对PGE2分泌量为100%的情况下,控制组的相对PGE2 分泌量为143.6%,实验组A的相对PGE2分泌量为139.7%,而实验组B的相对PGE2分泌量为98.5%。也就是说,相对于空白组,控制组的HPEK-50 细胞经由UVB刺激后,显著提升约43.6%的相对PGE2分泌量;相对于空白组,实验组A的HPEK-50细胞经由UVB刺激,并添加白芦笋萃取液后,提升约39.7%的相对PGE2分泌量;而相对于空白组,实验组B的 HPEK-50细胞经由UVB刺激,并添加白芦笋酵素后,降低约1.5%的相对 PGE2分泌量。相对于控制组,实验组A的HPEK-50细胞经由UVB刺激,并添加白芦笋萃取液后,降低约3.9%的相对PGE2分泌量;而相对于控制组,实验组B的HPEK-50细胞经由UVB刺激,并添加白芦笋酵素后,显著降低约45.1%的相对PGE2分泌量。
当皮肤透过紫外线的照射之下,紫外线会刺激角质细胞合成前列腺素(prostaglandin),前列腺素会刺激黑色素细胞的生长,并同时促进酪胺酸酶活性,加速黑色素生成,进而造成皮肤变黑。
由此可知,不同于白芦笋萃取液,白芦笋酵素能明显地降低HPEK-50 细胞经由UVB刺激后所提升的PGE2分泌量,还远低于空白组(正常的生理代谢情况下)的PGE2分泌量。而白芦笋萃取液虽然可降低HPEK-50细胞经由UVB刺激后所提升的PGE2分泌量,仍远高于空白组的PGE2分泌量。由前述试验结果可知,白芦笋酵素能预防细胞受UV刺激而分泌前列腺素,还能抑制受UV刺激的细胞的前列腺素的分泌作用。白芦笋酵素藉由降低PGE2分泌量,进而抑制黑色素细胞的生长及抑制酪胺酸酶活性,从而减少黑色素生成及减少黑色素,使个体肌肤更为通透、亮白。
例六
A.材料与仪器:
1.细胞株:小鼠成肌细胞,购自ATCC(American type culture collection),细胞编号ATCC CRL-1772TM,以下简称C2C12细胞。
2.细胞培养基:DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium,购自 Gibco,产品编号12100-046),添加10%FBS(Fetal Bovine Serum,购自 Gibco,产品编号10437-028)以及1%抗生素(购自Gibco,产品编号 15240-062)。
3.分化培养基:DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium,购自 Gibco,产品编号12100-046),添加2%马血清(购自Gibco,产品编号 16050-122)以及1%抗生素(购自Gibco,产品编号15240-062)。
4.Pyruvate(丙酮酸)Colorimetric/Fluorometric Assay Kit,购自 BioVision,产品编号K609。
5.酵素免疫分析仪(ELISA reader),购自BioTek公司(美国)。
B.试验流程:
1.将C2C12细胞以每孔1×106个的密度,接种于每孔含2mL的细胞培养基的6孔培养盘中,并在37℃下培养至细胞满度至八成。试验组别包含:空白组、实验组A与实验组B。各组进行三重复(意即各组各有三孔)。
2.细胞满度至八成后,将各组更换为2mL分化培养基,以诱导C2C12 细胞分化为肌小管,并在37℃下培养至细胞分化为肌小管。
3.细胞分化为肌小管后,将各组更换为2mL实验培养基,并于37℃下继续培养48小时。其中,空白组的实验培养基为不含样本的分化培养基;实验组A的实验培养基为含有1%(v/v)例一制得的白芦笋萃取液的分化培养基;以及实验组B的实验培养基为含有1%(v/v)例一制得的白芦笋酵素的分化培养基。
4.移除培养后的各组的实验培养基,并以PBS进行润洗1次。
5.于润洗后,添加100μL Pyruvate Assay Buffer(Pyruvate Colorimetric/Fluorometric Assay Kit内的试剂其中之一)至每孔中以裂解细胞,形成细胞裂解液。
6.收集各孔中的细胞裂解液至对应的离心试管内,将各离心试管离心使细胞沉淀。
7.收集离心试管内的上清液,并使用Pyruvate Colorimetric/FluorometricAssay Kit测定各组的丙酮酸含量。依照Pyruvate Colorimetric/Fluorometric AssayKit所提供的试验流程进行,并利用酵素免疫分析仪测量每孔570nm 的吸光值(OD570值)。
C.试验结果:
所有组别的相对丙酮酸含量系依下列公式计算:相对丙酮酸含量(%) =(各组OD570值/空白组OD570值)×100%。
空白组与其他各组的试验结果之间的统计学显著差异是以学生t检验 (studentt-test)统计分析得到。(图式中「*」代表在与空白组比较下其p 值小于0.05、「**」代表在与空白组比较下其p值小于0.01,以及「***」代表在与空白组比较下其p值小于0.001)。
请参阅图7。空白组未使用样本进行处理,因此空白组的试验结果代表肌小管在正常的生理代谢情况下的表现。于此,在设定空白组的相对丙酮酸含量为100%的情况下,实验组A的相对丙酮酸含量为117.1%,而实验组 B的相对丙酮酸含量为128.0%。也就是说,相对于空白组,实验组A的肌小管在添加白芦笋萃取液后,提升约17.1%的相对丙酮酸含量;而相对于空白组,实验组B的肌小管在添加白芦笋酵素后,显著提升约28.0%的相对丙酮酸含量。
由此可知,白芦笋酵素及白芦笋萃取液皆能明显提升细胞的丙酮酸含量,且白芦笋酵素的提升丙酮酸含量的能力相较白芦笋萃取液优异。意即,白芦笋酵素具有提升丙酮酸含量的效果。由于骨骼肌细胞的生理代谢作用为基础代谢率的主要调控因子之一,并且丙酮酸为生理代谢作用的终产物,因此能透过丙酮酸含量来评估基础代谢率的作用情形。换言之,白芦笋酵素能透过提升丙酮酸含量来提升个体的基础代谢率,进而强化体内环保。
例七
A.材料与仪器:
2.细胞培养基:MEM(Minimum essential medium,购自Gibco,产品编号41500-034),添加10%FBS(Fetal Bovine Serum,购自Gibco,产品编号10437-028)以及1%抗生素(购自Gibco,产品编号15240-062)。
3.TGF-β1,购自Sigma,产品编号T7039。
4.甲醛(Formaldehyde),购自景名,产品编号TG1794-4-0000-72NI。
5.TritonTMX-100,购自Sigma,产品编号9002-93-1。
6.F-actin染色试剂(ActinRedTM 555ReadyProbesTM reagent),购自 Thermo,产品编号R37112。
7.Hoechst(Hoechst 33342),购自Thermo,产品编号62249。
8.显微镜,购自ZEISS。
B.试验流程:
1.将MDCK细胞以每孔2×104个的密度,接种于每孔含500μL的细胞培养基的24孔培养盘中,并在37℃下培养24小时。试验组别包含:空白组、控制组、实验组A与实验组B。各组进行二重复(意即各组各有二孔)。
2.培养24小时后,将各组更换为500μL实验培养基,并于37℃下继续培养48小时。其中,空白组的实验培养基为不含TGF-β1与样本的细胞培养基;控制组的实验培养基为含有5ng/mL的TGF-β1的细胞培养基,所述TGF-β1已被广泛认知会促进肾脏纤维化;实验组A的实验培养基为含有5ng/mL的TGF-β1及1%(v/v)例一制得的白芦笋萃取液的细胞培养基;以及实验组B的实验培养基为含有5ng/ml的TGF-β1S及1%(v/v)例一制得的白芦笋酵素的细胞培养基。
3.移除培养后的各组的实验培养基,并以PBS进行润洗2次。
4.于润洗后,移除各组的PBS,并添加10%甲醛固定细胞15分钟。
5.移除各组的10%甲醛,并以PBS进行润洗2次。
6.移除各组的PBS,并添加0.5%TritonTMX-100进行细胞打洞10分钟。
7.移除各组的0.5%TritonTMX-100,并以PBS进行润洗2次。
8.移除各组的PBS,并添加F-actin染色试剂,在37℃下进行细胞染色 30分钟。
9.移除各组的F-actin染色试剂,并以PBS进行润洗2次。
10.移除各组的PBS,并添加Hoechst(染色体积比1:2000)进行细胞染色5分钟。
11.以显微镜观察并拍摄细胞纤维化状况。
C.试验结果:
请参阅图8。空白组未以TGF-β1刺激也未使用样本进行处理,因此空白组的试验结果代表MDCK细胞在正常的生理代谢情况下的表现,其细胞排列较为致密。控制组、实验组A与实验组B均藉由添加TGF-β1进行诱导,使其细胞趋向肾脏纤维化。可观察到,相对于空白组,控制组的细胞胀大并且排列松散,其表示细胞已趋向肾脏纤维化。透过与空白组相比可见,实验组A的细胞有胀大且排列松散的情形,但透过与控制组相比可见,其细胞胀大且排列松散的情况有所改善,其表示白芦笋萃取液能改善肾脏纤维化。透过与空白组相比可见,实验组B的细胞有胀大且排列松散的情形,但透过与控制组相比可见,其细胞胀大且排列松散的情况有所改善,其表示白芦笋酵素能改善肾脏纤维化。并且,透过与实验组A相比可见,实验组 B的细胞排列较为致密,且细胞排列松散的改善程度相较白芦笋萃取液优异。
肾脏组织受到各种致病原因损伤后,会导致肾脏发炎,更甚者造成肾脏纤维化因而无法排除代谢异物及水分,最终导致身体机能下降。
由此可知,白芦笋酵素及白芦笋萃取液皆能改善肾脏纤维化,且白芦笋酵素改善肾脏纤维化的能力相较白芦笋萃取液优异。换言之,白芦笋酵素具有保护肾脏机能,包括改善肾脏损伤、改善肾脏发炎及/或改善肾脏纤维化,进而促进生理代谢活性,以提升个体的肾脏机能及身体机能。
例八
A.试验流程:
令8位易水肿的20-65岁成人受试者每日服用一瓶50mL试验饮品(其含有5mL的使用例一所制得的白芦笋酵素),连续使用4周(即28日)。
受试者于开始服用前(第0周)及服用28日(第4周)后,进行水肿状况问卷调查并使用人体成分分析仪InBody 770进行体组成检测。
其中,体组成检测包含全身水肿指数及下肢水肿指数。人体成分分析仪 InBody770系应用生物电阻抗分析法(BIA),利用微电流对人体进行全身水肿指数及下肢水肿指数的测量。全身水肿指数为全身的细胞外水分(ECW)/ 身体总水分(TBW)的比值;而下肢水肿指数为左脚和右脚的细胞外水分/身体总水分的比值的平均值。
当水肿指数超标(≧0.390)时,即代表身体处于水肿状态;当水肿指数正常(<0.390)时,即代表身体处于正常状态。
下述若无特别注明,水肿指数即为白天水肿指数,系受试者于上午9点检测所得的水肿指数;晚上水肿指数,则系受试者于下午6点检测所得的水肿指数。
其中,水肿状况问卷调查为针对早上容易脸部浮肿、下肢易肿胀、脚踝按压有凹陷状况、手脚冰冷及四肢容易麻项目进行自我评估,其进行自我评估及计分方式如下表二。各受试者自我评估水肿状况,判断该些水肿状况 (早上容易脸部浮肿、下肢易肿胀、脚踝按压有凹陷状况、手脚冰冷及四肢容易麻)的严重程度。其中,0分是指无此情况,1分是指轻微,2分是指中度,3分是指严重,以及4分是指非常严重。
表二
B.试验结果:
第0周与第4周的检测及自我评估结果之间的统计学显著差异是以学生 t检验(student t-test)统计分析得到。(图式中「*」代表在与第0周比较下其p值小于0.05、「**」代表在与第0周比较下其p值小于0.01,以及「***」代表在与第0周比较下其p值小于0.001)。
当细胞外水分增加时,表示体内水分代谢不良,便容易出现水肿状况。
1.关于「所有受试者全身水肿指数」的检测结果,其显示于图9。8位受试者在服用试验饮品前(第0周)以人体成分分析仪InBody 770所检测出来全身水肿指数为0.385;8位受试者在持续服用试验饮品4周后,以人体成分分析仪InBody 770所检测出来全身水肿指数为0.382。换言之,相较于服用试验饮品前(第0周),持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者全身水肿指数显著降低0.003,减少0.78%,并且改善人数比率高达100%。由此可知,白芦笋酵素确实可减少全身水肿指数,并促进受试者体内水分代谢及改善受试者水肿状况,即白芦笋酵素具有改善水肿、提升水分代谢及帮助排水。
2.关于「所有受试者下肢水肿指数」的检测结果,其显示于图10。8位受试者在服用试验饮品前(第0周)以人体成分分析仪InBody 770所检测出来下肢水肿指数为0.387;8位受试者在持续服用试验饮品4周后,以人体成分分析仪InBody 770所检测出来下肢水肿指数为0.383。换言之,相较于服用试验饮品前(第0周),持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者下肢水肿指数显著降低0.004,减少1.03%,并且改善人数比率高达100%。由此可知,白芦笋酵素确实可减少下肢水肿指数,并促进受试者下肢水分代谢及改善受试者下肢水肿状况,即白芦笋酵素具有改善下肢水肿、提升下肢水分代谢及帮助下肢排水。
3.关于「数值超标者下肢水肿指数」的检测结果,其显示于图11。其中,「数值超标者」即代表水肿指数≧0.390的受试者(系8位所有受试者中的3位)。3位数值超标者(水肿指数≧0.390的受试者)在服用试验饮品前(第0周)以人体成分分析仪InBody 770所检测出来下肢水肿指数为 0.393;3位数值超标者在持续服用试验饮品4周后,以人体成分分析仪InBody 770所检测出来下肢水肿指数为0.388。换言之,相较于服用试验饮品前(第0周),持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者下肢水肿指数降低0.005,减少1.27%,并且水肿指数由超标降至正常。由此可知,白芦笋酵素确实可减少数值超标者下肢水肿指数,并促进数值超标者下肢水分代谢及改善数值超标者下肢水肿状况,即白芦笋酵素具有改善数值超标者下肢水肿、提升数值超标者下肢水分代谢及帮助数值超标者下肢排水,进而使身体处于水肿状态的受试者回复为正常状态。
4.关于「晚上水肿严重者下肢水肿指数」的检测结果,其显示于图 12。其中,「晚上水肿严重者」即代表晚上水肿指数≧0.390且晚上水肿指数数值高于白天水肿指数数值的受试者(系8位所有受试者中的2位)。2 位晚上水肿严重者(晚上水肿指数≧0.390的受试者)在服用试验饮品前 (第0周)以人体成分分析仪InBody 770所检测出来白天下肢水肿指数为 0.390,晚上下肢水肿指数为0.398;2位晚上水肿严重者在持续服用试验饮品4周后,以人体成分分析仪InBody 770所检测出来白天下肢水肿指数为 0.388,晚上下肢水肿指数为0.390。换言之,相较于服用试验饮品前(第0 周),持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者白天下肢水肿指数降低0.002,减少0.51%,并且水肿指数由超标降至正常;晚上下肢水肿指数显著降低0.008,减少2.01%。由此可知,白芦笋酵素确实可减少白天及晚上下肢水肿指数,并促进受试者白天及晚上水分代谢及改善受试者白天及晚上水肿状况,即白芦笋酵素具有改善白天及晚上水肿、提升白天及晚上水分代谢及帮助白天及晚上排水。
5.关于「水肿状况问卷调查」的自我评估结果,其显示于图13。将8 位受试者在服用试验饮品前(第0周)自我评估的水肿状况严重程度视为 100%。其中,水肿状况包含早上容易脸部浮肿、下肢易肿胀、脚踝按压有凹陷状况、手脚冰冷及四肢容易麻。8位受试者在持续服用试验饮品4周后,其早上容易脸部浮肿严重程度为64.3%;其下肢易肿胀严重程度为56.3%;其脚踝按压有凹陷状况严重程度为41.7%;其手脚冰冷严重程度为 30.4%;以及其四肢容易麻严重程度为33.3%。换言之,相较于服用试验饮品前(第0周),持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者早上容易脸部浮肿情况显著减少35.7%;持续服用4周含有5mL 白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者下肢易肿胀情况显著减少43.7%;持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者脚踝按压有凹陷状况情况显著减少58.3%;持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者手脚冰冷情况显著减少69.6%;以及持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者四肢容易麻情况显著减少66.7%。换言之,受试者感觉早上容易脸部浮肿、下肢易肿胀、脚踝按压有凹陷状况、手脚冰冷及四肢容易麻的严重程度有所减轻。由此可知,白芦笋酵素确实可改善水肿状况,即白芦笋酵素具有改善早上容易脸部浮肿、下肢易肿胀、脚踝按压有凹陷状况、手脚冰冷及四肢容易麻,并改善循环不良状况。
例九
A.试验流程:
令8位易水肿的20-65岁成人受试者每日服用一瓶50mL试验饮品(其含有5mL的使用例一所制得的白芦笋酵素),连续使用4周(即28日)。
受试者于开始服用前(第0周)及服用28日(第4周)后,进行排便状况问卷调查。
其中,排便状况问卷调查为针对感受粪质坚硬或有便意但难以排出,以及排便所需时间项目进行自我评估,其进行自我评估及计分方式如下表三。各受试者自我评估排便状况,判断该些排便状况(粪质坚硬或有便意但难以排出)的严重程度。其中,0分是指正常,1分是指轻微,2分是指中等,3 分是指严重,以及4分是指非常严重。
表三
B.试验结果:
第0周与第4周的自我评估结果之间的统计学显著差异是以学生t检验(studentt-test)统计分析得到。(图式中「*」代表在与第0周比较下其p 值小于0.05、「**」代表在与第0周比较下其p值小于0.01,以及「***」代表在与第0周比较下其p值小于0.001)。
1.关于「感受粪质坚硬或有便意但难以排出」的自我评估结果,其显示于图14。将8位受试者在服用试验饮品前(第0周)自我评估的粪质坚硬严重程度及有便意但难以排出严重程度视为100%。8位受试者在持续服用试验饮品4周后,其粪质坚硬严重程度为43.8%;以及其有便意但难以排出严重程度为58.3%。换言之,相较于服用试验饮品前(第0周),持续服用 4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者粪质坚硬情况显著减少56.2%;以及持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者有便意但难以排出情况显著减少41.7%。换言之,受试者感觉粪质坚硬及便意但难以排出的严重程度有所减轻。由此可知,白芦笋酵素确实可改善排便状况,即白芦笋酵素具有改善粪质坚硬及便意但难以排出,促进排便顺畅。
2.关于「排便所需时间」的自我评估结果,其显示于图15。8位受试者在服用试验饮品前(第0周)自我评估的排便所需时间少于5分钟的有2位 (即为25.0%),5~10分钟的有4位(即为50.0%),以及20~30分钟的有 2位(即为25.0%)。8位受试者在持续服用试验饮品4周后,其排便所需时间少于5分钟的有5位(即为62.5%),5~10分钟的有2位(即为25.0%),以及10~20分钟的有1位(即为12.5%)。换言之,相较于服用试验饮品前(第0周),持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者显著地减少排便所需时间。由此可知,白芦笋酵素确实可改善排便状况,即白芦笋酵素具有缩短排便所需时间,促进排便顺畅。
例十
A.试验流程:
令7位20-65岁健康成人受试者每日服用一瓶50mL试验饮品(其含有 5mL的使用例一所制得的白芦笋酵素),连续使用4周(即28日)。
受试者于开始服用前(脸部已清洁,第0周)及服用28日(脸部已清洁,第4周)后,进行肌肤检测及肤况问卷调查。其中,肌肤检测为依据不同肌肤检测项目,使用对应的仪器及测量方式,纪录脸部肌肤的数值、并拍摄服用前及服用后的照片。肌肤检测项目包含肌肤黑色素(skin melanin)、肌肤泛红(skin redness)及肌肤皱纹(skin wrinkle)。(于服用前及服用后进行检测时,受试者所在的测试区域的温度与湿度为一致,以减少外界的温湿度等因素会对肌肤所造成的影响)。
肌肤黑色素系使用购自德国Courage+Khazakaelectronic公司的肌肤黑色素指数检测探头MX18(C+K Multi Probe Adapter System, Germany)对同一受试者在服用试验饮品前,以及服用28日后的面部肌肤进行检测。此检测探头系透过测定特定波长的光照在人体皮肤上后的反射量来确定皮肤中黑色素的含量并得到一数值(黑色素指数),可代表皮肤的黑色素含量。测量数值越高,说明皮肤中黑色素含量越高。相对黑色素指数 (%)=(各组黑色素指数/第0周黑色素指数)×100%。
肌肤泛红系使用购自美国Canfield scientific公司的VISIA高阶数字肤质检测仪(VISIA Complexion Analysis System)对同一受试者在服用试验饮品前,以及服用28日后的面部肌肤进行检测。此检测仪系透过RBX偏振光技术对面部肌肤进行拍摄,检测皮肤深层血管或血红素并得到一数值(肌肤泛红程度值),可代表皮肤的泛红状况。测量数值越高,说明皮肤泛红状况越严重。相对肌肤泛红程度(%)=(各组肌肤泛红程度值/第0周肌肤泛红程度值)×100%。
肌肤皱纹系使用购自美国Canfield scientific公司的VISIA高阶数字肤质检测仪(VISIA Complexion Analysis System)对同一受试者在服用试验饮品前,以及服用28日后的面部肌肤进行检测。此检测仪系透过高分辨率的相机镜头对面部肌肤进行拍摄,藉由标准白光照射、检测皮肤阴影的变化,即可检测皱纹的长度与深度进行分析计算并得到一数值(肌肤皱纹程度值),可代表皮肤的皱纹程度。测量数值越高,说明皮肤皱纹程度越严重。相对肌肤皱纹程度(%)=(各组肌肤皱纹程度值/第0周肌肤皱纹程度值) ×100%。
肤况问卷调查为针对皮肤状况(包含肌肤黯淡无光泽、皮肤斑点、肤色蜡黄及皮肤松弛)进行自我评估,其进行自我评估及计分方式如下表四。各受试者自我评估皮肤状况,判断该些皮肤状况的严重程度。其中,0分是指无困扰,1分是指轻微,2分是指中等,3分是指严重,以及4分是指非常严重。
表四
严重程度 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 |
肌肤黯淡无光泽 | |||||
皮肤斑点 | |||||
肤色蜡黄 | |||||
皮肤松弛 |
肤况问卷调查亦针对整体肤况满意度进行自我评估,其进行自我评估及计分方式如下表五。各受试者自我评估整体肤况,判断该些整体肤况满意度。其中,分数越高,表示自我评估整体肤况越好。
表五
满意度 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
整体肤况满意度 |
B.试验结果:
第0周与第4周的检测及自我评估结果之间的统计学显著差异是以学生 t检验(student t-test)统计分析得到。(图式中「*」代表在与第0周比较下其p值小于0.05、「**」代表在与第0周比较下其p值小于0.01,以及「***」代表在与第0周比较下其p值小于0.001)。
1.关于「肌肤黑色素」的检测结果,其显示于图16。将7位受试者在服用试验饮品前(第0周)以肌肤黑色素指数检测探头MX18 所检测出来相对黑色素指数视为100%。受试者在持续服用试验饮品4周后,其相对黑色素指数为92.6%。换言之,相较于服用试验饮品前(第0 周),持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者相对黑色素指数减少7.4%,并且改善人数比率达71.4%(5位)。由此可知,白芦笋酵素确实可减少肌肤黑色素,并改善受试者肌肤状况,即白芦笋酵素具有减少肌肤黑色素,使个体肌肤通透、亮白,进而提升皮肤状况。
2.关于「肌肤泛红」的检测结果,其显示于图17。将7位受试者在服用试验饮品前(第0周)以VISIA高阶数字肤质检测仪所检测出来相对肌肤泛红程度视为100%。受试者在持续服用试验饮品4周后,其相对肌肤泛红程度为84.7%。换言之,相较于服用试验饮品前(第0周),持续服用4 周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者相对肌肤泛红程度显著减少15.3%,并且改善人数比率达85.7%(6位)。由此可知,白芦笋酵素确实可减少肌肤泛红,并改善受试者肌肤状况,即白芦笋酵素具有减少肌肤泛红,进而提升皮肤状况。
3.关于「肌肤皱纹」的检测结果,其显示于图18。将7位受试者在服用试验饮品前(第0周)以VISIA高阶数字肤质检测仪所检测出来相对肌肤皱纹程度视为100%。受试者在持续服用试验饮品4周后,其相对肌肤皱纹程度为86.2%。换言之,相较于服用试验饮品前(第0周),持续服用4 周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者相对肌肤皱纹程度显著减少13.8%,并且改善人数比率达85.7%(6位)。由此可知,白芦笋酵素确实可减少肌肤皱纹及减少肌肤细纹,并改善受试者肌肤状况,即白芦笋酵素具有减少肌肤皱纹及减少肌肤细纹,进而提升皮肤状况。
4.关于「皮肤状况」的自我评估结果,其显示于图19。将7位受试者在服用试验饮品前(第0周)自我评估的皮肤状况严重程度视为100%。其中,皮肤状况包含肌肤黯淡无光泽、皮肤斑点、肤色蜡黄及皮肤松弛。7位受试者在持续服用试验饮品4周后,其肌肤黯淡无光泽严重程度为56.3%;其皮肤斑点严重程度为46.7%;其肤色蜡黄严重程度为33.3%;其皮肤松弛严重程度为45.5%。换言之,相较于服用试验饮品前(第0周),持续服用 4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者肌肤黯淡无光泽情况显著减少43.7%;持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者皮肤斑点情况显著减少53.3%;持续服用4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者肤色蜡黄情况显著减少66.7%;持续服用 4周含有5mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者皮肤松弛情况显著减少54.5%。换言之,受试者感觉肌肤黯淡无光泽、皮肤斑点、肤色蜡黄及皮肤松弛的严重程度有所减轻。由此可知,白芦笋酵素确实可改善肌肤黯淡无光泽、皮肤斑点、肤色蜡黄及皮肤松弛,即白芦笋酵素具有提升皮肤状况。
5.关于「整体肤况满意度」的自我评估结果,其显示于图20。将7位受试者在服用试验饮品前(第0周)自我评估的整体肤况满意度视为 100%。7位受试者在持续服用试验饮品4周后,其整体肤况满意度为 129.7%。换言之,相较于服用试验饮品前(第0周),持续服用4周含有5 mL白芦笋酵素的试验饮品后可使此些受试者整体肤况满意度显著增加 29.7%。换言之,受试者对于整体肤况的满意度有所提升。由此可知,白芦笋酵素确实可改善整体肤况的满意度,即白芦笋酵素具有提升皮肤状况。
综上,任一实施例的白芦笋酵素,其能提升皮肤状况、促进生理代谢活性或保护肾脏机能。换言之,任一实施例的白芦笋酵素适用于制备提升皮肤状况、促进生理代谢活性或保护肾脏机能的组合物。在一些实施例中,白芦笋酵素或其所制得的组合物还具有下列一种或多种功能:减少黑色素、减少肌肤泛红、减少肌肤细纹、提升肌肤光泽、减少肌肤斑点、减少肌肤蜡黄及 /或减少肌肤松弛。在一些实施例中,白芦笋酵素或其所制得的组合物还具有下列一种或多种功能:抑制发炎、提升基础代谢率、改善水肿及/或促进排便顺畅。在一些实施例中,白芦笋酵素或其所制得的组合物还具有下列一种或多种功能:抑制肾脏纤维化。
当然,本发明还可有其它多种实施例,在不背离本发明精神及其实质的情况下,熟悉本领域的技术人员可根据本发明作出各种相应的改变和变形,但这些相应的改变和变形都应属于本发明权利要求的保护范围。
Claims (10)
1.一种白芦笋酵素,其特征在于,所述白芦笋酵素是由白芦笋经水萃取后再经由依序添加不同的多个菌种进行发酵的三阶段发酵而得。
2.如权利要求1所述的白芦笋酵素,其特征在于,所述多个菌种为酵母菌、乳酸杆菌及醋酸菌。
3.一种如权利要求1所述的白芦笋酵素用于制备提升皮肤状况的组合物的用途。
4.如权利要求3所述的用途,其特征在于,所述白芦笋酵素用以减少黑色素、减少肌肤泛红、提升肌肤光泽、减少肌肤斑点、减少肌肤蜡黄或减少肌肤松弛。
5.一种如权利要求1所述的白芦笋酵素用于制备促进生理代谢活性的组合物的用途。
6.如权利要求5所述的用途,其特征在于,所述白芦笋酵素用以抑制发炎。
7.如权利要求5所述的用途,其特征在于,所述白芦笋酵素用以提升基础代谢率。
8.如权利要求5所述的用途,其特征在于,所述白芦笋酵素用以改善水肿。
9.如权利要求5所述的用途,其特征在于,所述白芦笋酵素用以促进排便顺畅。
10.一种如权利要求1所述的白芦笋酵素用于制备保护肾脏机能的组合物的用途。
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