KR20150064436A - 신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신선초 뿌리 또는 줄기 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 신선초의 줄기 및 뿌리 주정추출물은 항균 및 항염 효과가 우수하므로 피부 조직의 염증 현상을 완화할 수 있으며, 피부에 다른 자극이나 부작용 없이 안전하여 여드름 예방 및 치료를 목적으로 한 약제, 발효식품, 음료, 건강기능식품, 화장료 조성물 등으로 이용될 수 있다.

Description

신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 조성물{Composition for prevention and treatment of acne, containing spirits extract from Angelica as effective factor}
본 발명은 여드름 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
일반적으로 여드름은 주로 사춘기의 남녀에게 발생하며 안면, 상흉부, 배부 및 상지에 폐쇄성 또는 개방성 면포, 구진, 농포, 결절 등 다양한 피부병변을 나타내는 모낭피지선의 염증성 질환이다. 대부분의 피부질환이 생명에 지장이 없다 할지라도 환자의 정신상태와 대인관계 및 일상생활에 중요한 영향을 미친다. 특히, 외부에 노출된 부위에 존재하고 반흔을 남기는 경우 대인관계에 영향을 받으며, 정신의학적인 문제로 우울, 불안, 사회적 고립, 사회불안, 신체 불만족을 초래할 수 있다. 따라서 여드름은 단순히 피부질환으로 간과할 문제가 아닌 인간 삶의 질에도 중요한 영향을 미칠 수 있다는 점을 알 수 있다(Rapp D. A et al., Anger and acne: implications for quality of life, patient satisfaction and clinical care., J. Dermatol., 2004). 여드름의 발병 원인은 아직 명확히 규명되어 있지 않으나, 유전적, 환경적 요인을 배제한다면 피지의 과다형성, 비정상적인 모낭각화증, 프로피오니박테리움 아크네스의 증식 및 염증 반응 등이 관여하고, 그 외 호르몬이나 면역학적 요소도 영향을 미친다고 인정되고 있다(Toyoda M. and Morohashi M., Pathogenesis of acne., Med. Electron Microsc., 2001).
여드름 발생 기전을 살펴보면, 여드름 발생부위 모낭 지선에서 안드로겐이 과도하게 합성되면 모낭지선에 있는 피지선 세포 수용체와 안드로겐의 결합이 증가한다. 이렇게 되면 피지선 세포의 분열에 의해 생성되는 피지의 정상적인 조성이 변하여 피지 내 지방성분인 아실세라마이드의 리놀리산과 콜레스테롤의 함량이 감소되고 스쿠알린과 유리 지방산의 함량이 증가한다. 이러한 지방조성의 변화로 인하여 모낭 내의 콜레스테롤과 콜레스테롤 설페이트간의 불균형을 초래하여 모낭 내 각질 형성 세포간의 결합을 증진시켜 모낭 정체 각화증이 초래된다. 그 결과 모낭 내에 정체된 피지는 모낭을 막아 공기의 순환을 차단하게 되어 모낭 내부는 모낭 내부에 상재하는 혐기성 세균이 잘 자랄 수 있는 환경이 된다. 지방 친화성이며 호기성 미생물인 스테필로코커스 에피더미디스는 외모낭 또는 모낭의 중간에서 성장하고 혐기성 미생물인 프로피오닐박테리움 아크네스는 모낭의 안쪽에서 성장한다. 여드름 유발균인 프로피오닐박테리움 아크네스는 지방 분해 효소와 화학주성인자를 분비하여 유리지방산을 만들고 백혈구가 모낭 주위에 모이게 하여 이들이 모낭벽을 자극한 후, 파괴하여 모낭 내용물이 진피 내로 유출됨으로 염증 반응이 일어난다.
여드름 원인균인 프로피오닐박테리움 아크네스는 피부 내에 존재하는 상재균으로 정상상태에서는 피부면역시스템에 의해 관용된다. 그러나 안드로겐의 과다 분비에 의한 피부지상조성의 불균형 및 프로피오니박테리움 아크네스의 증식으로 인하여 피부면역시스템이 작동되어 여드름과 같은 피부질환이 발생한다(Koreck A. et al., The role of innate immunity in the pathogenesis of acne., Dermatology., 2003).
현재까지 여드름을 치료 또는 완화시키기 위한 방법으로는 피지 과분비 억제를 위해 비정상적인 남성 호르몬의 분비를 제어하는 항안드로겐제 등의 여성 호르몬의 사용, 여드름균의 생장을 억제하는 항균제 및 항생제의 사용, 항염증 작용을 하는 비스테로이드계 소염제를 사용하는 방법이 이용되어 왔다. 또한 최근에는 알파-리덕테이즈 억제제를 이용하여 피지 과분비를 억제하는 방법 등이 제안되어 왔다.
그러나 여성호르몬제를 사용하는 방법은 여드름 치료과정 중에 부작용으로 피부 염증이 발생할 우려가 높으며, 장기 투여 시 그에 따른 부작용 발생 사례가 다수 보고되어 있어 사용이 자제되고 있으며, 5 알파-리덕테이즈 억제제도 그 실효성이 떨어지는 것으로 보고되어 있다. 여드름 균에 대한 전형적인 항균제로 레조시놀, 유황, 벤조일퍼옥사이드, 테트라사이클린, 에리스로마이신, 또는 매크로사이클린 등을 들 수 있으나, 내성 문제를 비롯한 항생제 특유의 부작용 측면에서 여러 문제점을 드러내고 있다.
종래 사용되던 호르몬제 또는 화합물 제제들의 부작용을 줄이기 위하여 최근에는 천연물 제제에 대하여 연구가 진행되고 있다. 이 예로서, 한국등록특허 제0467031호, 한국등록특허 제0491746호, 한국공개특허 제1999-0025848호, 한국등록특허 제0993676호 등이 있으며, 조성물로는 모황련, 적작약, 강활, 치자, 호장근추출물, 벤조일 퍼옥사이드, 레티노익액시드, 베타-글리시레틴산, 2-[2-(3-헵틸-4-메틸-2티아졸린-2-이리딘)메탄]-3-헵틸-4-메틸 티아졸리니움 아이오다이드(감광소), 살시실산, 석류풀, 개구릿대, 개면마, 상산 등을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관해 개시하고 있지만, 여드름 개선에 대한 만족할 만한 효과를 제공하지 못하고, 피부에 자극을 유발시키며, 식이가 불가하고 독성이 있다.
신선초는 미나리과에 속하는 아열대성 다년생 초본으로, 명일엽, 신립초, 선삼초 등으로 불리고, 고혈압, 당뇨, 간장병, 신경통, 동맥경화 등의 성인병을 예방하기 위한 목적으로 차, 생즙, 분말 등의 다양한 형태로 이용되어져 오고 있다. 신선초에 함유된 성분 연구로는 xanthoangelol 유도체, xanthotoxin, bergapten, imperatorin, oxypeucedani, oxypucedanin hydrate 등의 물질이 분리 되었으며, 신선초 지상부 추출물을 대상으로 혈압상승 억제 작용, 콜레스테롤 합성 저해 작용 등에 관한 연구가 보고 되어져 왔다. 지금까지 신선초에 대한 식품 개발 및 많은 생리활성에 대한 연구가 진행되어 왔지만 지상부에 국한된 연구가 주를 이루고 있으며, 신선초의 줄기 및 뿌리에 대한 연구는 미진하며 특히, 항균· 항염증 효과를 이용한 여드름 예방 및 치료용 화장료 및 식이제재는 전무한 실정이다.
이에 본 발명자들은 인체에 무해한 천연물질 유래의 여드름 예방 및 치료제의 필수 항목인 항균 효과 및 항염 효과를 갖는 물질을 검색하던 중 본 발명의 신선초의 줄기 및 뿌리 추출물이 여드름성 피부의 개선에 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
대한민국 특허공개 제2012-0076706호(발명의 명칭: 티로시나아제 활성 및 멜라닌 생성 억제 기능을 갖는 명일엽 추출분말 함유 피부 미백제, 출원공개일: 2012.07.10.) 대한민국 특허공개 제2011-0017801호(발명의 명칭: 게르마늄을 이용해 주름과 검버섯을 없애는 기능성 미백 화장품, 출원공개일:2011.02.22.) 대한민국 특허공개 제2007-0095588호(발명의 명칭: 아토피성 피부질환 치료용 천연 특수 한방 조성물 및 그 제조방법, 출원공개일:2007.10.01.)
본 발명은 신선초 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 약학적 조성물, 발효유, 기능성 음료, 건강기능식품, 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 신선초 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 약학적 조성물, 발효유, 기능성 음료, 건강기능식품, 화장료 조성물을 제공하는 것을 특징으로 한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 신선초 주정추출물은 신선초의 줄기 또는 뿌리에서 추출된 것으로 추출용매는 50% 주정(酒精)인 것이 바람직하다.
본 발명의 신선초 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 약학적 조성물은 단독 또는 약제학적으로 사용되는 부형제들과 함께 약제학적으로 통상으로 사용되는 방법에 따라 정제, 캡슐제 등과 같은 제재형태로 제제화 하여 사용될 수 있다.
사람의 경우, 통상적인 1일 투여량은 1~30mg/kg 체중의 범위일 수 있고, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 실제 투여량은 투여경로, 환자의 연령, 성별 및 체중, 건강상태 및 질환의 중증도 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 한다.
물론, 본 발명의 신선초 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 약학적 조성물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.
또한, 본 발명의 신선초 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 조성물은 식품, 식품첨가제, 음료, 음료첨가제, 발효유, 건강기능식품 등으로 사용될 수 있다. 식품, 식품첨가제, 음료, 음료첨가제, 또는 건강기능식품으로 사용되는 경우, 각종 식품류, 발효유, 육류, 음료수, 초콜렛, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 알코올 음료, 비타민 복합제, 주류 및 그 밖의 건강기능식품일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
특히, 신선초 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 발효유는 신선초 주정추출물, 유산균 배양액 및 혼합과즙시럽을 일정비율로 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 용기에 포장하여 발효유를 제조한다.
또한, 신선초 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 기능성 음료는 혼합과즙시럽, 신선초 주정추출물 및 물을 일정한 비율로 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 기능성 음료를 제조한다.
또한, 신선초 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 건강기능식품은 상기 신선초 주정추출물을 포함하는 것 이외에 영양보조 성분으로 비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드, 올리고당 등이 첨가될 수 있으며 여타의 식품 첨가물이 첨가되어도 무방하다.
또한, 본 발명은 신선초 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 화장료 조성물로 사용할 수 있다. 상기 화장료 조성물로 사용하는 경우에는 본 발명에 따른 신선초 주정추출물 외에 기타 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 맞게 임의로 선정한 물질을 첨가할 수 있다. 예를 들어, 정제수, 유분, 계면활성제, 보습제, 고급 알코올, 증저점제, 킬레이트제, 색소, 지방산, 산화방지제, 방부제, 왁스, pH 조절제, 향료 등이 첨가될 수 있다. 또한 본 발명의 신선초 주정 추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 화장료 조성물의 제형은 특별히 제한되는 바가 없으며, 예를 들면, 영양 크림, 수렴 화장수, 유연 화장수, 로션, 에센스, 영양젤, 마사지 크림, 마스크 팩 등의 제형을 가질 수 있다.
본 발명의 신선초의 줄기 및 뿌리 주정추출물은 항균 및 항염 효과가 우수하므로 피부 조직의 염증 현상을 완화할 수 있으며, 피부에 다른 자극이나 부작용 없이 안전하여 여드름 예방 및 치료를 목적으로 한 약제, 발효식품, 음료, 건강기능식품, 화장료 조성물 등으로 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 신선초 줄기 및 뿌리 주정추출물에 의한 TNF-α의 상대적 유전자 발현 억제 효과를 농도별로 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 신선초 줄기 및 뿌리 주정추출물에 의한 IL-6의 상대적 유전자 발현 억제 효과를 농도별로 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 신선초 줄기 및 뿌리 주정추출물에 의한 IL-1β의 상대적 유전자 발현 억제 효과를 농도별로 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 신선초 줄기 및 뿌리 주정추출물에 의한 TNF-α 생성 억제 효과를 농도별로 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 신선초 줄기 및 뿌리 주정추출물에 의한 IL-1β 생성 억제 효과를 농도별로 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 신선초 줄기 및 뿌리 주정추출물에 의한 NO 생성 억제 효과를 농도별로 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 신선초 줄기 및 뿌리 주정추출물에 의한 인간 정상 섬유아세포에서의 생존력을 농도별로 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 신선초 줄기 및 뿌리 주정추출물에 의한 인간 각질형성세포에서의 생존력을 농도별로 나타낸 그래프이다.
도 9는 마우스 귀 부종 모델에서 본 발명의 신선초 줄기 및 뿌리 주정추출물에 의한 항염증 활성을 확인한 귀의 현미경 사진이다.
도 10은 마우스 귀 부종 모델에서 본 발명의 신선초 줄기 및 뿌리 주정추출물에 의한 항균활성을 귀에 남아있는 생균수로 표기하여 농도별로 나타낸 그래프이다.
도 11은 마우스 귀 부종 모델에서 본 발명의 신선초 줄기 및 뿌리 주정추출물에 의한 항염증 활성을 귀의 두께로 표기하여 농도별로 나타낸 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 다음의 실시예는 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니며, 본 발명의 기술적 사상의 범위 내에서 당업자에 의한 통상적인 변화가 가능하다.
<실시예 1>
신선초 주정추출물의 제조
1-1. 신선초 잎 주정추출물의 제조
신선초의 잎 부분을 따로 취하여 차광된 상태로 실온에서 2주 동안 통풍 건조 후 분쇄하여 분말형태로 사용하였다. 건조된 분말 형태의 신선초의 잎 부분을 50% 식용 주정(酒精)을 사용하여 추출하였다. 추출한 후, Advantec사 90mm 정성여과지를 사용하여 여과하였으며, 추출수율을 높이기 위해 여과지에 남아 있는 여과 케이크를 2회 반복하여 추출 및 여과하는 과정을 반복하여 실시하였다. 상기 수득한 추출액을 합하여 Advantec사 90mm 정성여과지를 사용하여 재 여과를 하였으며, 재 여과된 여과액을 감압 농축하여 용매를 제거한 다음, 동결 건조하여 본 발명의 신선초 잎 주정추출물의 동결건조 분말을 제조하였다.
1-2. 신선초 줄기 주정추출물의 제조
신선초의 줄기 부분을 따로 취하여 차광된 상태로 실온에서 2주 동안 통풍 건조 후 분쇄하여 분말형태로 사용하였다. 건조된 분말 형태의 신선초의 줄기 부분을 50% 식용 주정(酒精)을 사용하여 추출하였다. 추출한 후, Advantec사 90mm 정성여과지를 사용하여 여과하였으며, 추출 수율을 높이기 위해 여과지에 남아 있는 여과 케이크를 2회 반복하여 추출 및 여과하는 과정을 반복하여 실시하였다. 상기 수득한 추출액을 합하여 Advantec사 90mm 정성여과지를 사용하여 재 여과하였으며, 재 여과된 여과액을 감압 농축하여 용매를 제거한 다음, 동결 건조하여 본 발명의 신선초 줄기 주정추출물의 동결건조 분말을 제조하였다.
1-3. 신선초 뿌리 주정추출물의 제조
신선초의 뿌리 부분을 따로 취하여 차광된 상태로 실온에서 2주 동안 통풍 건조 후 분쇄하여 분말형태로 사용하였다. 건조된 분말 형태의 신선초의 뿌리 부분을 50% 식용 주정(酒精)을 사용하여 추출하였다. 추출한 후, Advantec사 90mm 정성여과지를 사용하여 여과하였으며, 추출 수율을 높이기 위해 여과지에 남아 있는 여과케이크를 2회 반복하여 추출 및 여과하는 과정을 반복하여 실시하였다. 상기 수득한 추출액을 합하여 Advantec사 90mm 정성여과지를 사용하여 재 여과하였으며, 상기 재 여과된 여과액을 감압 농축하여 용매를 제거한 다음, 동결 건조하여 본 발명의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조 분말을 제조하였다.
<실시예 2>
신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물의 제조
본 발명의 신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 약학조성물의 제제 예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
정제의 제조
상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 또는 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조 분말 100㎎, 옥수수전분 100㎎, 유당 100㎎ 및 폴리비닐피롤리돈 97㎎을 균질하게 혼합하여 습식과립법으로 과립화하고 스테아린산 마그네슘 2㎎을 가하여 혼합한 후 1정이 400㎎이 되도록 타정하였다.
캡슐제의 제조
상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 또는 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조 분말 100㎎, 옥수수 전분 100㎎, 유당 100㎎, 스테아린산 마그네슘 2㎎을 완전히 혼합한 후 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 경질 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<실시예 3>
신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 발효유의 제조
유산균 배양액과 본 발명의 신선초 주정추출물 및 혼합과즙시럽으로 구성된 발효유를 제조하는 방법은 다음과 같다.
먼저, 유산균 배양액은 원유 95.36중량%와 탈지분유(또는 혼합분유) 4.6중량%를 교반하여 15℃에서의 비중은 1.0473~1.0475, 적정산도는 0.200~0.220%, pH는 6.65~6.70, 20℃에서의 브릭스(Brixo)는 16.3~16.5% 정도가 되도록 혼합하였다. 혼합 후에 이를 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)하고 40℃로 냉각한 뒤, 스트렙토코커스 써모필러스균과 유당분해효소(Valley laboratory, USA)를 각기 0.02중량%씩 첨가하고 6시간 동안 배양하여 BCP 배지에서의 총 유산균수가 1.0 ⅹ109cfu/㎖ 이상, 적정산도가 0.89~0.91%, pH는 4.55~4.65가 되도록 하여 제조하였다.
그 다음, 혼합과즙시럽은 액상과당 13중량%, 백설탕 5중량%, 혼합과즙농축액 56Brixo 10.9중량%, 펙틴 1.0중량%, 후레쉬 후르츠 믹스 에센스 0.1중량% 및 정제수 70중량%를 30~35℃에서 교반하여 혼합한 후 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)한 후 냉각하여 제조하였다.
그런 다음, 상기 유산균배양액 69.5중량%와 상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 또는 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조 분말 0.1중량% 및 상기 혼합과즙시럽 30.4중량%를 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각하여 신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유한 발효유를 제조하였다.
<실시예 4>
신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료의 제조
본 발명의 신선초 주정추출물 및 혼합과즙시럽으로 구성된 기능성 음료를 제조하는 방법은 다음과 같다.
먼저, 혼합과즙시럽은 액상과당 13중량%, 백설탕 2.5중량%, 갈색설탕 2.5중량%, 혼합과즙농축액 56Brixo 10.9중량%, 펙틴 1.0중량%, 후레쉬 후르츠 믹스 에센스 0.1중량% 및 정제수 70중량%를 30~35℃에서 교반하여 혼합한 후 UHT 열처리(135℃에서 2초간 살균)한 후 냉각하여 제조하였다.
그리고 상기의 방법으로 제조된 혼합과즙시럽 30.4중량%와 상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 또는 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조분말 0.1중량% 및 나머지 정제수 69.5중량%를 조합하여 150bar에서 균질한 후 10℃ 이하로 냉각한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 기능성 음료를 제조하였다.
<실시예 5>
신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 건강기능식품의 제조
상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 또는 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조 분말 0.1중량%에 영양보조성분(비타민 B1, B2, B5, B6, E 및 초산에스테르, 니코틴산 아미드) 및 올리고당을 상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 또는 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조 분말 100중량부에 대하여 10중량부가 되도록 첨가하여 고속회전 혼합기에서 혼합하였다. 상기 혼합물 100중량부에 대하여 멸균 정제수 10중량부를 첨가, 혼합하고 직경 1~2mm의 과립상으로 성형하였다. 상기 성형된 과립은 40~50℃의 진공건조기에서 건조시킨 후 12~14 메쉬(mesh)를 통과시켜 균일하게 과립을 제조하였다. 상기와 같이 제조된 과립은 적당량씩 압출 성형되어 정제 또는 분말로 되거나 경질캡슐에 충전되어 경질캡슐제품으로 제조하였다.
<실시예 6>
신선초 주정추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료의 제조
유연화장수
상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 또는 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조 분말 0.01중량%, 글리세린 3중량%, 부틸렌 글리콜 2중량%, 프로필렌 글리콜 2중량%, 카복시비닐폴리머 0.1중량%, 에탄올 10중량%, 트리에탄올아민 0.1중량% 및 잔량의 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수를 혼합하여 통상의 유연화장수 제조방법에 따라 제조하였다.
영양화장수
상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 또는 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조분말 0.01중량%, 밀납 4중량%, 폴리소르베이트 60 1.5중량%, 소르비탄세스퀴올레이트 0.5중량%, 유동파라핀 5중량%, 스쿠알란 5중량%, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5중량%, 글리세린 3중량%, 부틸렌 글리콜 3중량%, 프로필렌 글리콜 3중량%, 카복시비닐폴리머 0.1중량%, 트리에탄올아민 0.2중량%, 잔량의 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수를 혼합하여 통상의 영양화장수 제조방법에 따라 제조하였다.
영양크림
상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 또는 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조분말 0.01중량%, 밀납 10중량%, 폴리소르베이트 60 1.5중량%, 소르비탄세스퀴올레이트 0.5중량%, 유동파라핀 10중량%, 스쿠알란 5중량%, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5중량%, 글리세린 5중량%, 부틸렌 글리콜 3중량%, 프로필렌 글리콜 3중량%, 트리에탄올아민 0.2중량% 및 잔량의 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수를 혼합하여 통상의 영양크림 제조방법에 따라 제조하였다.
맛사지 크림
상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 또는 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조분말 0.01중량%, 밀납 10중량%, 폴리소르베이트 60 1.5중량%, 소르비탄세스퀴올레이트 0.8중량%, 유동파라핀 40중량%, 스쿠알란 5중량%, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 4중량%, 글리세린 5중량%, 부틸렌 글리콜 3중량%, 프로필렌 글리콜 3중량%, 트리에탄올아민 0.2중량% 및 잔량의 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수를 혼합하여 통상의 맛사지 크림 제조방법에 따라 제조하였다.
팩
상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 또는 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 동결건조분말 0.01중량%, 폴리비닐알콜 13중량%, 소듐카복시메틸셀룰로스 0.2중량%, 알란토인 0.1중량%, 에탄올 5중량%, 노닐페닐에테르 0.3중량% 및 잔량의 방부제, 미량색소, 미량향료 및 미량정제수를 혼합하여 통상의 팩 제조방법에 따라 제조하였다.
<비교예 1>
1-1. 신선초 잎 추출물의 제조
추출용매로 증류수(주정 농도 0%)를 사용하는 것을 제외하고 상기 실시예 1-1의 신선초 잎 주정추출물의 제조방법과 동일하게 신선초의 잎 추출물을 제조하였다.
1-2. 신선초 줄기 추출물의 제조
추출용매로 증류수(주정 농도 0%)를 사용하는 것을 제외하고 상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물의 제조방법과 동일하게 신선초의 줄기 추출물을 제조하였다.
1-3. 신선초 뿌리 추출물의 제조
추출용매로 증류수(주정 농도 0%)를 사용하는 것을 제외하고 상기 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 제조방법과 동일하게 신선초의 뿌리 추출물을 제조하였다.
<비교예 2>
2-1. 신선초 잎 추출물의 제조
추출용매로 주정의 농도가 25%인 주정을 사용하는 것을 제외하고 상기 실시예 1-1의 신선초 잎 주정추출물의 제조방법과 동일하게 신선초의 잎 추출물을 제조하였다.
2-2. 신선초 줄기 추출물의 제조
추출용매로 주정의 농도가 25%인 주정을 사용하는 것을 제외하고 상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물의 제조방법과 동일하게 신선초의 줄기 추출물을 제조하였다.
2-3. 신선초 뿌리 추출물의 제조
추출용매로 주정의 농도가 25%인 주정을 사용하는 것을 제외하고 상기 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 제조방법과 동일하게 신선초의 뿌리 추출물을 제조하였다.
<비교예 3>
3-1. 신선초 잎 추출물의 제조
추출용매로 주정의 농도가 75%인 주정을 사용하는 것을 제외하고 상기 실시예 1-1의 신선초 잎 주정추출물의 제조방법과 동일하게 신선초의 잎 추출물을 제조하였다.
3-2. 신선초 줄기 추출물의 제조
추출용매로 주정의 농도가 75%인 주정을 사용하는 것을 제외하고 상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물의 제조방법과 동일하게 신선초의 줄기 추출물을 제조하였다.
3-3. 신선초 뿌리 추출물의 제조
추출용매로 주정의 농도가 75%인 주정을 사용하는 것을 제외하고 상기 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물의 제조방법과 동일하게 신선초의 뿌리 추출물을 제조하였다.
<시험예 1>
항균활성 시험
1-1. 신선초의 추출부위에 따른 생육저지환 측정(Paper disc assay)
상기 실시예 1-1의 신선초 잎 주정추출물, 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 및 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물과 비교물질인 테트라사이클린(tetracycline)의 여드름균에 대한 항균력을 확인하기 위하여 생육저지환 측정(paper disc assay)을 실시하였다.
(1)시험균주인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 을 활성화시키기 위해서 Reinforced clostridial medium(BD사)에서 48시간 동안 혐기적으로 전 배양하였다. 이렇게 준비한 균 배양액을 Reinforced clostridial medium 배지에 희석하여 준비하였다. 또한 Reinforced clostridial medium 고체 배지에 각 100㎕씩의 균액을 멸균된 면봉으로 도말하여 균을 도포하였다. 상기 균액이 도말된 고체 배지 위에 직경 8mm의 원형여과지(paper disc)를 올려놓은 후, 실시예 1-1의 신선초 잎 주정추출물, 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물, 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물 각각을 원형여과지 최종 농도가 1㎎/disc가 되도록 20㎕씩 점적하고, 비교 물질인 테트라사이클린(tetracycline)은 0.05㎎/disc가 되도록 하였다. 이 후 37℃의 배양기에서 가스팩을 장착하여 혐기상태가 유지된 트레이에서 48시간 배양하였다. 원형여과지 주변에 생긴 균 성장 저지영역을 관찰하고 저지환의 크기를 측정함으로 항균력을 평가하였다.
(2)시험균주로 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828를 사용한 것을 제외하고는 상기 시험예 1의 시험균주 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919에 대한 생육저지환 측정방법과 동일하게 시험하였다.
그 결과를 표 1에 나타내었다.
P. acnes ATCC6919 P. acnes ATCC11828
실시예 1-1 13.71mm 19.93mm
실시예 1-2 26.18mm 29.52mm
실시예 1-3 23.23mm 20.41mm
테트라사이클린 27.68mm 24.24mm
상기의 표 1에서 확인할 수 있는 바와 같이 신선초 줄기 주정추출물(실시예 1-2)과 신선초 뿌리 주정추출물(실시예 1-3)이 신선초 잎 주정추출물(실시예 1-1)에 비하여 생육저지환을 크게 형성함을 확인할 수 있었다. 이에 따라 신선초 뿌리 주정추출물 및 신선초 줄기 주정추출물에 대한 항균 및 항염 활성에 대한 추가 실험을 진행하였다.
1-2. 주정의 농도에 따른 생육저지환 측정(Paper disc assay)
상기 실시예 1의 신선초 잎, 줄기 및 뿌리 주정추출물, 비교예 1 내지 3의 신선초 잎, 줄기 및 뿌리 추출물에 대하여 주정의 농도에 따른 비교물질인 테트라사이클린(tetracycline)의 여드름균에 대한 항균력을 확인하기 위하여 생육저지환 측정(paper disc assay)을 실시하였다.
(1)시험균주인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 을 활성화시키기 위해서 Reinforced clostridial medium(BD사)에서 48시간 동안 혐기적으로 전 배양하였다. 이렇게 준비한 균 배양액을 Reinforced clostridial medium 배지에 희석하여 준비하였다. 또한 Reinforced clostridial medium 고체 배지에 각 100㎕씩의 균액을 멸균된 면봉으로 도말하여 균을 도포하였다. 상기 균액이 도말된 고체 배지 위에 직경 8mm의 원형여과지(paper disc)를 올려놓은 후, 실시예 1-1의 신선초 잎 주정추출물, 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물, 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물 각각을 원형여과지 최종 농도가 1㎎/disc가 되도록 20㎕씩 점적하고, 비교 물질인 테트라사이클린(tetracycline)은 0.05㎎/disc가 되도록 하였다. 이 후 37℃의 배양기에서 가스팩을 장착하여 혐기상태가 유지된 트레이에서 48시간 배양하였다. 원형여과지 주변에 생긴 균 성장 저지영역을 관찰하고 저지환의 크기를 측정함으로 항균력을 평가하였다.
(2)비교예 1 내지 3의 신선초의 잎, 줄기 및 뿌리 추출물 각각에 대하여도 상기 시험예 (1)과 동일한 방법으로 시험을 하였다.
(3)시험균주로 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828를 사용한 것을 제외하고는 상기 시험예 2의 (1) 및 (2)의 시험균주 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919에 대한 생육저지환 측정방법과 동일하게 시험하였다.
그 결과를 표 2에 나타내었다.
Figure pat00001
상기의 표 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물에서 주정의 농도가 50% 및 75%에서 생육저지환 크게 형성됨을 확인할 수 있었다. 그런데, 주정 농도는 경제성 측면에서 75%보다는 50%가 유리하며, 수용성에서도 유리하기 때문에 주정 50%에 대한 신선초의 줄기 및 뿌리 주정추출물에 대해 항균· 항염증에 대한 실험을 진행하였다.
1-3. 최소 억제 농도(Minimal inhibitory concentration, MIC) 측정
균에 대한 최소 억제 농도 시험에는 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828, 스타필로코커스 에피더미디스 (Staphylococcus epidermidis) ATCC12228 및 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus) ATCC6538을 사용하였다.
분석 전, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 및 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828은 혐기 조건, 37℃에서 48시간 동안 Reinforced clostridial medium에서 배양하였다.
스타필로코커스 에피더미디스 (Staphylococcus epidermidis) ATCC12228 및 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus) ATCC6538은 Muller hinton broth(BD사)에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다.
시험관 내 항균활성은 96 웰 마이크로타이터 플레이트(microtiter plate)에서 액체 배지 희석법에 의해 측정하였다.
상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물과 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물 2계열 희석액은 10㎎/㎖부터 4.88㎍/㎖까지의 농도가 되도록 액체 배지에 희석하여 시료 희석 계열을 준비하였다.
상기 전 배양한 균액을 재 희석하여 최종 균액 농도가 107CFU/㎖이 되도록 한 뒤, 최종적으로 105CFU의 균이 접종되어 있는 배지에 계단 희석된 시료를 첨가하였다. 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 및 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828 균주의 마이크로타이터 플레이트는 혐기 조건, 37℃에서 48시간 배양하였고, 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) ATCC12228 및 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus) ATCC6538 균주의 마이크로타이터 플레이트는 37℃에서 18시간 배양하였다. 최소 억제 농도는 균의 성장을 관찰 할 수 없는 최소 농도로 결정하였으며, 균액이 탁하거나 흐린 배지는 제외하였다.
그 실험 결과를 표 3에 나타내었다.
Figure pat00002
상기의 표 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 신선초의 줄기 및 뿌리 주정추출물은 아젤릭산이나 벤조일퍼옥사이드와 같은 화합물의 항균효과가 1,000㎍/㎖로 보고되는 것에 비해 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC11828, 스타필로코커스 에피더미디스 (Staphylococcus epidermidis) ATCC12228 및 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus) ATCC6538에 대해 항균 활성이 우수함을 확인할 수 있었다.
<시험에 2>
항염증 효과 측정
2-1. 염증성 사이토카인 유전자 발현 억제능 확인(real-time PCR)
TNF-α 유전자 발현억제
생쥐 대식세포주(mouse macrophage)인 RAW264.7을 6웰 플레이트에 각각 1.25ⅹ105/㎖으로 분주하여 준비한 다음, 18시간 이후에 세포 부착을 확인하였다.
본 시험예에서는 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 및 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물을 동결 건조하여 제조한 것을 사용하였다.
상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 및 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물을 각각 10㎍/㎖, 50㎍/㎖, 100㎍/㎖, 200㎍/㎖ 농도로 RAW264.7 세포에 처리하고, 30분 이후에 염증유발인자인 LPS(Lipopolysaccharide) 1㎍/㎖를 처리하였고, 5시간 배양한 후 RAW264.7 세포로부터 total RNA를 추출하였다.
Total RNA에는 mRNA가 포함되어 있으므로 oligo(dT)와 역전사효소를 이용하여 cDNA를 합성하였다.
본 시험에서는 염증인자인 TNF-α의 발현여부를 관찰하고자 하는 것이므로 TNF-α에 대한 5' 프라이머 및 3' 프라이머를 이용하여 실시간 PCR(real-time polymerase chain reaction) 방법을 통해 증폭시킨 후 정량 및 정성 분석을 하였다.
RAW264.7 세포에 아무 것도 처리하지 않은 군을 음성대조군으로 하고, RAW264.7 세포에 LPS 만을 처리한 군을 양성대조군으로 하였다.
그 결과를 도 1에 나타내었다.
음성대조군을 "No Treat", 양성대조군을 "Control"으로 표시하였다.
시험결과는 GAPDH(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)에 의한 상대적 발현량으로 나타내었다.
도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, LPS로 활성화된 RAW264.7 세포에서 발현되는 TNF-α는 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물에 의해 농도 의존적으로 TNF-α 유전자 발현이 억제됨을 알 수 있었다. 이러한 결과로부터 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물이 염증 억제 작용을 나타내는 것을 알 수 있다.
IL-6 유전자 발현억제
상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 및 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물을 각각 10㎍/㎖ 농도로 RAW264.7 세포에 처리하는 것을 제외하고 상기 TNF-α 유전자 발현억제 시험방법과 동일한 방법으로 시험하였다.
그 결과를 도 2에 나타내었다.
음성대조군을 "No Treat", 양성대조군을 "Control"으로 표시하였다.
시험결과는 GAPDH(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)에 의한 상대적 발현량으로 나타내었다.
도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, LPS로 활성화된 RAW264.7 세포에서 발현되는 IL-6은 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물에 의해 IL-6 유전자 발현이 억제됨을 알 수 있었다.
IL-1β 유전자 발현억제
상기 IL-6 유전자 발현억제 시험방법과 동일한 방법으로 시험을 하였다.
그 결과를 도 3에 나타내었다.
음성대조군을 "No Treat", 양성대조군을 "Control"으로 표시하였다.
시험결과는 GAPDH(Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)에 의한 상대적 발현량으로 나타내었다.
도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, LPS로 활성화된 RAW264.7 세포에서 발현되는 IL-1β는 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물에 의해 IL-1β 유전자 발현이 억제됨을 알 수 있었다.
2-2. 염증성 사이토카인 발현 억제능 확인(ELISA)
TNF-α 발현억제
인간 단핵구 세포주인 THP-1 세포주를 1ⅹ106으로 분주하고, 혈청이 없는 조건에서 열처리로 불활성화 된 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 100㎍/㎖를 상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 및 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물을 각각 10㎍/㎖, 50㎍/㎖, 100㎍/㎖ 농도로 함께 THP-1 세포에 처리한 후 48시간 동안 배양하였다. THP-1 세포 배지로 분비된 TNF-α의 양을 ELISA kit(BD science)를 사용하여 정량적으로 측정하였다.
THP-1 세포에 아무 것도 처리하지 않은 군을 음성대조군으로 하고, THP-1 세포에 열처리로 불활성화 된 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)만을 처리한 군을 양성대조군으로 하였다.
그 결과를 도 4에 나타내었다.
음성대조군을 "No Treat", 양성대조군을 "Control"으로 표시하였다.
도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919로 활성화된 THP-1 세포에서 발현되는 TNF-α는 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물에 의해 농도 의존적으로 TNF-α 단백질 발현이 억제됨을 알 수 있었다. 이러한 결과로부터 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물이 염증억제 작용을 나타내는 것을 알 수 있다.
IL-1β 발현억제
상기 TNF-α 발현억제 시험방법과 동일한 방법으로 시험을 하였다.
그 결과를 도 5에 나타내었다.
음성대조군을 "No Treat", 양성대조군을 "Control"으로 표시하였다.
도 5에서 확인할 수 있는 바와 같이, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919로 활성화된 THP-1 세포에서 발현되는 TNF-α는 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물에 의해 농도 의존적으로 TNF-α 단백질 발현이 억제됨을 알 수 있었다. 이러한 결과로부터 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물이 염증 억제 작용을 나타내는 것을 알 수 있다.
일산화질소(NO)의 양 측정
생쥐 대식세포주(mouse macrophage)인 RAW264.7을 24 웰 플레이트에 각각 1.25ⅹ105/㎖으로 분주하여 준비한 다음, 상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 및 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물을 각각 10㎍/㎖, 50㎍/㎖, 100㎍/㎖, 200㎍/㎖ 농도로 RAW264.7 세포에 처리하고, 60분 이후에 염증유발인자인 LPS(Lipopolysaccharide) 1㎍/㎖를 처리하였고, 18시간 배양한 후 배양액을 수거하여 NO(Nitric Oxide)의 양을 ELISA kit를 사용하여 정량적으로 측정하였다.
그 결과를 도 6에 나타내었다.
음성대조군을 "No Treat", 양성대조군을 "Control"으로 표시하였다.
도 6에서 확인할 수 있는 바와 같이, LPS로 활성화된 RAW264.7 세포의 일산화질소(NO)는 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물에 의해 농도 의존적으로 일산화질소(NO)의 양이 감소됨을 알 수 있었다. 이러한 결과로부터 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물이 염증억제 작용을 나타내는 것을 알 수 있다.
<시험예 3>
세포 독성 분석
인간 정상 섬유아세포
인간 정상 섬유아세포는 10% FBS(Gibco), 1% Antibiotic-antimycotic이 함유된 디엠이엠(DMEM) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 항온기에서 배양하였고, 이후 96 웰 플레이트에 3ⅹ104cells/㎖로 분주하여 배양시켰다. 24시간 이후에 상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 및 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물을 각각 10㎍/㎖, 50㎍/㎖, 100㎍/㎖의 농도로 단계 희석하여 처리하였으며, 단계 희석은 무혈청 디엠이엠(DMEM)을 사용하였다. 음성대조군으로는 멸균수와 DMSO를 사용하였다. 이후에 Tetrazolium salt를 넣어주고 4시간을 다시 배양시켰다. 배양된 배지를 제거한 뒤, DMSO를 첨가하여 포르마잔 결정을 녹였다. 흡광광도계를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과를 도 7에 나타내었다.
인간 각질형성세포
인간 각질형성세포주를 사용한 것을 제외하고는 상기 인간 정상 섬유아세포의 세포독성 시험방법과 동일한 방법으로 시험하였다.
그 결과를 도 8에 나타내었다.
도 7 및 도 8에서 확인할 수 있는 바와 같이, MTT 분석 결과 인간 각질형성세포주와 인간 정상 섬유아세포에서 본 발명의 신선초 줄기 주정추출물과 신선초 뿌리 주정추출물이 고농도에서 80% 이상이 생존력을 나타내는 결과를 통해 피부에 안전함을 확인할 수 있었다.
<시험예 4>
동물 효능 평가
4-1. 마우스의 귀 조직의 진피 두께 측정
마우스 귀 부종 모델은 여드름 원인 균주인 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919에 의해 유도된 염증반응을 통해 평가한다. 실험에 사용한 ICR 마우스는 6주령 암컷(20~22g)으로 입수 시, 체중에 의해 무작위로 그룹핑하였다. ICR 마우스의 귀에 진피 내 투여를 통해 1ⅹ107CFU/20㎕의 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 균액을 접종하여, 상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 및 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물을 각각 100㎎/㎏, 200㎎/㎏의 농도로 각각 경구투여 혹은 귀에 도포하여 효능을 평가하였다. 대조군에는 동량의 인산완충식염수(PBS)를 투여하였다. 투여 이후 7일간 경구 투여 및 도포하여 희생하였고, 조직학적 관찰을 위해 양쪽 귀를 채취하여 H&E 염색을 통해 귀 조직의 진피 두께를 비교하였다. 각 귀 조직의 두께는 채취된 귀 조직의 절편을 마이크로 현미경을 통해 관찰하여 프로그램의 방법대로 측정하였다.
또한, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919가 접종된 대조군 귀와 인산완충식염수(PBS)가 접종된 정상 대조군 귀의 두께를 비교하였다. 식이 및 음수는 시험기간 중 자유 섭취하게 하였다.
그 결과를 도 9에 나타내었다.
a는 여드름 원인균주 대신 PBS를 귀에 접종한 정상 대조군,
b는 여드름 원인균주를 접종한 대조군이고,
c는 신선초 뿌리 주정추출물을 200mg/kg으로 섭취한 실험군,
d는 신선초 줄기 주정추출물을 200mg/kg으로 섭취한 실험군을 나타낸다.
도 9에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물에 의해 염증 반응에 의한 귀의 부종이 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
4-2. 체내 항균활성 측정
본 발명의 신선초 뿌리 주정추출물 및 신선초 줄기 주정추출물의 체내 항균 활성을 확인하기 위해 ICR 마우스의 양쪽 귀에 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919를 접종하였다. 균 접종 이후 1시간, 4시간 이후에 신선초 뿌리 주정추출물 및 신선초 줄기 주정추출물을 각각 100㎎/kg, 200㎎/kg씩 도포 및 경구투여 하였고, 7일간 매일 1회씩 신선초 뿌리 주정추출물 및 신선초 줄기 주정추출물을 투여하였다. 7일 이후에 희생하여 희생 후에 얻어진 귀 조직에 남아있는 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919의 생균수를 측정하기 위해 양쪽 귀를 절단하고 젖은 페이퍼 타올을 통해 귀의 표면에 남아 있는 균을 제거한 뒤에 200㎕의 인산완충식염수와 함께 균질화하여 단계희석 후 Reinforced clostridial differential Agar에 도말하여 48시간 동안 혐기적으로 배양하여 콜로니화 된 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919를 확인하였다. 통계처리는 student T test를 통해 검정하였으며, 통계적 유의성은 P value가 0.05 미만인 경우 유의적인 것으로 판단하였다.
그 결과를 도 10에 나타내었다.
도 10에서 확인할 수 있는 바와 같이, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 균액 대신 인산완충식염수(PBS)를 접종한 정상 대조군에서는 어떠한 균도 관찰할 수 없었으며, 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 균액을 접종하고 아무런 처리를 하지 않은 음성 대조군에서는 평균 5.64 Log10CFU/ear의 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 균을 확인할 수 있었다. 본 발명의 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물을 경구 투여한 군에서는 농도별 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 균수의 감소가 있음을 알 수 있었다. 특히, 신선초 뿌리 주정추출물을 200㎎/kg을 섭취한 그룹에서 유의적인 항균 활성을 확인할 수 있었다. 이와 같은 사실을 통하여 본 발명의 신선초 뿌리 주정추출물 및 줄기 주정추출물의 여드름 원인균에 대한 체내 항균 활성이 있음을 알 수 있다.
4-3. 체내 항염증활성 측정
신선초 뿌리 주정추출물 및 신선초 줄기 주정추출물의 체내 항염증 활성을 확인하기 위해 ICR 마우스의 귀에 진피 내 투여를 통해 1ⅹ107CFU/20㎕의 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 균액을 접종하여, 상기 실시예 1-2의 신선초 줄기 주정추출물 및 실시예 1-3의 신선초 뿌리 주정추출물을 각각 200㎎/㎏의 농도로 각각 경구투여 혹은 귀에 도포하였고, 7일간 매일 1회씩 투여하였다. 7일 이후에 희생하여 희생 후에 얻어진 ICR 마우스의 귀의 절편을 0.3㎛로 하여 현미경을 통해 면역세포의 침윤성 및 귀의 두께를 측정하였다. 귀의 두께 측정은 현미경을 사용하여 관찰 프로그램 내 두께 측정방법으로 측정하였다. 통계처리는 student T test를 통해 검정하였으며 통계적 유의성은 P value를 통해 확인하였으며, P값이 0.05 미만일 경우, 유의적인 것으로 판단하였다.
그 결과를 도 11에 나타내었다.
도 11에서 확인할 수 있는 바와 같이, 조직분석을 통해서 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 생균 접종 부위에서의 염증 및 부종을 확인하였으며, 염증 반응 이후의 피부 세포의 세포 괴사 및 조직 손상을 확인하였다.
귀의 두께로 판단한 염증 지표는 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes) ATCC6919 생균을 접종하지 않고 인산완충식염수를 접종한 정상 대조군과 여드름 원인 균주를 접종한 대조군 사이에서 유의적으로 귀의 두께가 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 귀의 두께가 증가하는 것은 염증과 관련한 면역세포의 침윤성과 연관지어 생각할 수 있으며, 신선초 줄기 주정추출물 및 신선초 뿌리 주정추출물 200㎎/kg을 경구 및 도포하였을 경우 유의적으로 귀의 두께가 감소하는 것을 확인하였다.

Claims (15)

  1. 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 신선초 주정(酒精)추출물은 신선초의 줄기 또는 뿌리에서 추출된 것을 특징으로 하는 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 약학 조성물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 신선초 주정(酒精)추출물의 추출용매는 50% 주정(酒精)인 것을 특징으로 하는 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 약학 조성물.
  4. 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 발효유.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 신선초 주정(酒精)추출물은 신선초의 줄기 또는 뿌리에서 추출된 것을 특징으로 하는 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 발효유.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서,
    상기 신선초 주정(酒精)추출물의 추출용매는 50% 주정(酒精)인 것을 특징으로 하는 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 발효유.
  7. 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 기능성 음료.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 신선초 주정(酒精)추출물은 신선초의 줄기 또는 뿌리에서 추출된 것을 특징으로 하는 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 기능성 음료.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서,
    상기 신선초 주정(酒精)추출물의 추출용매는 50% 주정(酒精)인 것을 특징으로 하는 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 기능성 음료.
  10. 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 건강기능식품.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 신선초 주정(酒精)추출물은 신선초의 줄기 또는 뿌리에서 추출된 것을 특징으로 하는 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 건강기능식품.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서,
    상기 신선초 주정(酒精)추출물의 추출용매는 50% 주정(酒精)인 것을 특징으로 하는 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 건강기능식품.
  13. 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 화장료 조성물.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 신선초 주정(酒精)추출물은 신선초의 줄기 또는 뿌리에서 추출된 것을 특징으로 하는 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 화장료 조성물.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서,
    상기 신선초 주정(酒精)추출물의 추출용매는 50% 주정(酒精)인 것을 특징으로 하는 신선초 주정(酒精)추출물을 유효성분으로 함유하는 여드름 예방 및 치료용 화장료 조성물.
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