KR20150030951A - 구제역 아시아1 혈청형의 표준백신 바이러스의 방어항원을 발현하는 재조합 구제역 바이러스 및 이의 제조 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 구제역 아시아1 혈청형의 표준백신 바이러스의 방어항원을 발현하는 재조합 구제역 바이러스 및 이의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 재조합 구제역 바이러스는 As1/Shamir/89의 VP1 단백질 또는 VP1 단백질의 에피토프를 발현하는 효과가 우수하여, 구제역 아시아1형을 포함하는 구제역의 예방에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

구제역 아시아1 혈청형의 표준백신 바이러스의 방어항원을 발현하는 재조합 구제역 바이러스 및 이의 제조 방법{Recombinant foot and mouth disease virus expressing protective antigen of Asia1 type standard vaccine strain and producing method thereof}

본 발명은 구제역 아시아1 혈청형의 표준백신 바이러스의 방어항원을 발현하는 재조합 구제역 바이러스 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.

구제역(Foot-and-mouth disease; FMD)은 발굽이 둘로 갈라진 동물에 감염되는 바이러스 수포성 질병으로, 빠른 질병 전파력을 가진다. 구제역은 세계동물보건기구(OIE)에 의하여 국가간 전파가 가능한 질병으로 분류되고 있으며, 이로 인한 경제적 손실이 커 매우 중요한 질병이다. 이러한 특성 때문에, 축산물의 국가간 교역에 있어 구제역은 발생유무가 매우 중요한 점검요소로 여겨지고 있다. 구제역 병원체는 단일가닥의 양극성 RNA 바이러스 형태이며, 피코나비리데(Piconaviridae)과 아프소바이러스(Aphthovirus)속에 속하는 것으로 알려져 있다. 또한, 구제역은 7개의 다른 혈청형(A, O, C, Asia1, SAT 1, SAT 2, SAT 3)에 따라 분류된다.

구제역 바이러스 O형 중에서도 약 8가지 이상의 여러 지역형이 있다. 엄격하게 개발한다면 이러한 지역형에 대한 백신을 모두 개발하여 백신주로 사용하여야 하지만, 모든 백신주 개발을 위해서는 야외주를 지속적으로 세포에 배양하여 적절한 증식력을 지녀야 한다. 그러나, 이러한 방법은 시간이 많이 소요되고 결과가 좋으리라는 보장도 없다.

또한, 구제역 바이러스(Foot-and-mouth disease virus)는 대부분 동물에 병

원성을 나타내는 병원체이다. 여러번의 계대 등 여러 연구자들의 시도에서도 병원

성이 유지되기 때문에 현재까지 구제역 바이러스에 대한 병원성이 줄어든 약독화 백신으로 사용되는 것은 국제적으로는 금기시된 일이다.

구제역에 대해 약독화 바이러스를 사용하는 것은 병원성의 회복에 대한 문제점을 안고 있으며 또한 생독백신을 사용하면 야외 감염된 구제역 바이러스와 구분이 어려운 단점이 있어 구제역 발생시 효과적으로 접종하여 방역하는 체계를 구축하기 어렵다.

따라서, 기존의 백신 바이러스를 이용하여 필요로 하는 백신주를 신속하게

개발하여 사용할 수 있도록 적절한 시기에 제작 가능한 형태로 만들어져야 할 것이다.

한편, 구제역 바이러스 O형 Manisa 주는 O형 백신에서 가장 널리 쓰이는 백신 바이러스로 알려져 있고, ME-SA(중동-남아시아 지역형, PanAsia 지역형을 포함)에 대한바이러스에 대한 방어가 가능하다.그러나, 우리나라 주변에는 O형 이외에도 아시아1 형 및 A형의 발생이 있는데, 상기 아시아1 혈청형은 유전형이 group I-VI로 구분되어 분류할 수 있다. 상기 아시아1 혈청형은 아시아 지역에만 국한되어 발생한다고 하나, 2000년에 터키 및 그리스에 상기 바이러스가 전파되었을 뿐만 아니라, 최근 아시아1 혈청형의 발생 증가가 보고되고 있다.

최근 동아시아 지역에 발생되어 복잡하게 진행 중으로서, 아프가니스탄, 인

도, 이란, 말레이시아, 네팔, 파키스탄 및 태국 등의 동남아시아에서 발생하였는데

2004년 말에서 2006년을 통하여 아시아1 혈청형 바이러스는 중국의 자치구, 미얀마, 몽골, 동러시아, 타지키스탄, 베트남 등지에서 발생하였다.

2005년 이후 중국을 비롯한 동아시아에서 발생한 아시아1 혈청형 유전형 V는 인도에서 25년 전에 분리된 바이러스와 밀접하게 유전적으로 관련성이 있는 바이러스로 확인되었고, 또한 2009년 바레인에서 발생된 아시아1형 바이러스는 인도에서온 것으로 추정되고 있는 유전형이다. 특히, 2007년 북한의 아시아1형 발생은 충격적이었다. 우리나라 주변에 유전형 V가 발생하고 있으므로, 이들 바이러스에 대한 백신의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다.

이에 발명자들은 구제역 아시아 1형 혈청형에 대해 적절하게 방어하기 위하여, As1/Shamir/89주의 VP1 또는 이의 일부 염기서열을 치환 또는 삽입한 아시아1형 유전형 V 바이러스 (Asia1/MOG/2005)의 P1 유전자를 구제역 바이러스 O manisa 백신주의 P1 유전자와 치환시킴으로써, 본 발명의 재조합 구제역 바이러스를 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 Asia/Shamir/89의 VP1 단백질 또는 이의 에피토프를 발현하는 구제역 O형 바이러스의 유전자를 포함하는 재조합 벡터 및 이로부터 제조된 재조합 구제역 바이러스를 제공함에 있다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 재조합 벡터 및 재조합 바이러스의 제조방법을 제공함에 있다.

또한, 본 발명의 또 다른 목적은 상기 재조합 구제역 바이러스를 유효성분으로 포함하는 구제역 예방용 백신 조성물을 제공함에 있다.

또한, 본 발명의 또 다른 목적은 상기 백신 조성물을 이용하여 구제역을 예방하는 방법을 제공함에 있다.

본 발명은 구제역 O형 바이러스의 P1 유전자가 아시아1 혈청형 유전형 V 바이러스의 P1 유전자로 치환되고, 상기 치환된 P1 유전자 중 VP1 부위가 Asia/Shamir/89의 VP1 유전자 또는 그 일부 염기서열로 치환 또는 삽입된, 구제역 O형 바이러스의 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.

또한, 상기 벡터에 의하여 제조된 재조합 구제역 바이러스를 제공한다.

또한, 본 발명은

1) 구제역 O형 바이러스의 유전자를 재조합 벡터에 삽입하는 단계;

2) 상기 1)단계의 재조합 벡터에서 구제역 O형 바이러스의 P1 유전자를 아시아1 혈청형 유전형 V 바이러스의 P1 유전자로 치환하는 단계; 및

3) 상기 2)단계의 재조합 벡터의 P1 유전자 중 VP1 부위가 As1/Shamir/89의 VP1 유전자 또는 그 일부 염기서열로 치환 또는 삽입시키는 단계;를 포함하는 재조합 벡터의 제조방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 방법에 의하여 제조된 재조합 벡터를 세포에 도입하여 증식시키는 단계;를 포함하는 재조합 구제역 바이러스의 제조방법을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 상기 As1/Shamir/89의 VP1 유전자는 서열번호 11의 염기서열로 표시되는 것을 특징으로 한다. 상기 일부 염기서열은 에피토프를 코딩하는 염기서열, 바람직하게는 VP1 단백질의 140 내지 160 번째 아미노산 서열을 코딩하는 염기서열이다.

상기 As1/Shamir/89 구제역 바이러스는 구제역 아시아1형 백신 표준주로서, 아시아 1형 구제역 바이러스에 대한 방어효과를 갖고 있다.

상기 구제역 O형 바이러스의 유전자는 구제역 O형 백신주 Manisa의 전체 유전자인 것을 특징으로 한다. 상기 전체 유전자 부위 중에서 3B1 부위, 3B2 부위 및 3B3 부위로 구성된 3B 부위에서 3B1 부위 일부를 치환시키고, 3B2 부위 일부를 결실시킬 수 있다. 상기 유전자 3B1 부위의 치환 부위는 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 3B1 부위의 22 내지 36bp 부위이고, 유전자 3B2 부위의 결실 부위는 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 3B2 부위의 37 내지 105bp 부위가 바람직하나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서 "구제역 바이러스 O형 Manisa 주"는 O형 백신에서 가장 널리 쓰이는 백신 바이러스로서, O형 중 ME-SA(중동-남아시아형, PanAsia 지역형을 포함)에 대한 바이러스에 대한 방어가 가능한 것으로 알려져 있다.

아시아 1 혈청형 바이러스의 유전형은 그룹 Ι 내지 Ⅵ로 구분될 수 있고, 본 발명에서는 아시아1 혈청형 유전형 V 바이러스가 바람직하고, 더욱 바람직하게는 Asia1/MOG/2005 바이러스인 것을 특징으로 한다. 상기 Asia1/MOG/2005 바이러스의 전체 서열은 GeneBank 승인번호 EF614458.1로 등록되어 있다.

본 발명의 재조합 벡터는 도 3의 개열지도로 표시되는 pOm3B-AsM-ShamVP1 벡터일 수 있고, 상기 재조합 벡터는 서열번호 14의 염기서열로 표시될 수 있다. 또한, 본 발명의 재조합 벡터는 도 4의 개열지도로 표시되는 pOm3B-AsM-ShamVP1epi 일 수 있고, 서열번호 15의 염기서열로 표시될 수 있다.

본 발명에서 용어 "벡터(vector)"는 적합한 숙주 내에서 DNA를 발현시킬 수 있는 적합한 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 DNA 서열을 함유하는 DNA 제조물을 의미한다. 벡터는 플라스미드, 파지 입자 또는 간단하게 잠재적 게놈 삽입물일 수 있다. 적당한 숙주로 형질전환되면, 벡터는 숙주 게놈과 무관하게 복제하고 기능할 수 있거나, 또는 일부 경우에 게놈 그 자체에 통합될 수 있다. 플라스미드가 현재 벡터의 가장 통상적으로 사용되는 형태이므로, 본 발명의 명세서에서 "플라스미드(plasmid)" 및 "벡터(vector)"는 때로 상호 교환적으로 사용된다. 본 발명의 목적상, 플라스미드 벡터를 이용하는 것이 바람직하다. 이러한 목적에 사용될 수 있는 전형적인 플라스미드 벡터는 (a) 숙주세포당 수백 개의 플라스미드 벡터를 포함하도록 복제가 효율적으로 이루어지도록 하는 복제 개시점, (b) 플라스미드 벡터로 형질전환된 숙주세포가 선발될 수 있도록 선별 표지 및 (c) 외래 DNA 절편이 삽입될 수 있는 제한효소 절단부위를 포함하는 구조를 지니고 있다. 적절한 제한효소 절단부위가 존재하지 않을지라도, 통상의 방법에 따른 합성 올리고뉴클레오타이드 어댑터(oligonucleotide adaptor) 또는 링커(linker)를 사용하면 벡터와 외래 DNA를 용이하게 라이게이션(ligation)할 수 있다. 본 발명의 재조합 벡터 및 재조합 구제역 바이러스는 통상의 유전자조작법, 형질전환법에 의해 제조될 수 있으며, 적은 양으로 형성된 바이러스를 세포배양을 통한 연속 계대로 적절한 양의 바이러스를 수득할 수 있다.

본 발명에서 "P1 유전자"는 P1 단백질을 코딩하는 염기서열로, VP1, VP2, VP3 및 VP4 부위를 포함할 수 있으며, 본 발명에서는 상기 부위는 단백질을 코딩하는 염기서열, 단백질을 코딩하지 않은 염기서열 및 유전자를 포함하는 개념으로 사용된다.

본 발명의 세포는 개과 동물, 고양이과 동물, 멧돼지과 동물, 소과 동물, 사슴과 동물, 기린과 동물, 페커리과 동물, 낙타과 동물, 하마과 동물, 말과 동물, 맥과 동물, 코뿔소과 동물, 족제비과, 토끼과, 설치류 및 영장류의 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 세포에서 유래된 것일 수 있고, 바람직하게는 염소 혀 세포 (ZZ-R) 및 햄스터 신장 세포 (BHK-21), 흑염소 신장세포 (BGK), 돼지 신장세포 (IBRS-2) 및 소 신장세포 (LF-BK)로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상인 세포인 것을 특징으로 하나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명은 상기 재조합 구제역 바이러스를 유효성분으로 포함하는 구제역 예방용 백신 조성물을 제공한다.

본 발명의 재조합 구제역 바이러스는 아시아1형 구제역의 표준백신의 VP1 단백질 또는 이의 에피토프를 발현하는 효과가 우수하므로, 구제역 아시아1형을 포함한 구제역의 예방에 유용하게 사용될 수 있다.

상기 백신은 생백신, 약독화된 백신, 또는 사백신등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 구제역은 아시아1형 구제역인 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 재조합 구제역 바이러스과 함께 구제역 감염의 예방 효과가 우수한 공지의 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 조성물은, 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약학적으로 허용가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로오스 용액, 수크로오스 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 개체의 무게, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 상기 재조합 구제역 바이러스의 투여량은 개체 1두당 약 1×10⁰ 내지 1×10²⁰ cells, 바람직하게는 약 1×10¹ 내지 1×10¹⁵ cells로 투여하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명의 재조합 구제역 바이러스는 구제역 바이러스 O Manisa의 유전자 일부를 조작하여 작성하여 제작하는 원리이기 때문에 동물에 병원성을 약화시킴으로써, 소독제 실험 또는 항바이러스 실험 등 실험실 내에서 다루기에 병원성 바이러스보다 더욱 안전하게 사용 가능할 수 있고, 바이러스 역가가 원래의 바이러스와 크게 차이를 보이지 않으면서, 한국, 동아시아, 중국 또는 대만 등에서 발생하는 바이러스 지역형을 효과적으로 방어할 수 있다.

또한, 본 발명은 재조합 구제역 바이러스를 개체에 투여하는 단계;를 포함하는 구제역의 예방 방법을 제공한다.

상기 개체는 멧돼지과 동물, 소과 동물, 사슴과 동물, 기린과 동물, 페커리과 동물, 낙타과 동물, 하마과 동물, 코뿔소과 동물로 이루어진 군 중 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 재조합 구제역 바이러스는 As1/Shamir/89의 VP1 단백질 또는 VP1 단백질의 에피토프를 발현하는 효과가 우수하여, 구제역 아시아1형을 포함하는 구제역의 예방에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 구제역 O형 백신주 Manisa의 전체 유전자를 클로닝하고 아시아1 혈청형 바이러스의 P1 유전자를 플라스미드에 삽입하는 모식도를 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 구제역 아시아1 혈청형 백신 표준주의 방어 항원이 발현되는 재조합 구제역 바이러스의 게놈 모식도를 나타낸 도이다.
도 3은 구제역 아시아1 혈청형 백신 표준주의 VP1 방어 단백질 유전자가 삽입된 재조합 플라스미드(pOm3B-AsM-ShamVP1)의 모식도를 나타낸 도이다.
도 4는 구제역 아시아1 혈청형 백신 표준주의 VP1 에피토프 (epitope; 140-160의 아미노산)를 코딩하는 염기서열이 삽입된 재조합 플라스미드(pOm3B-AsM-ShamVP1epi)의 모식도를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 재조합 구제역 바이러스가 감염된 세포의 세포변성효과를 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 재조합 구제역 바이러스가 햄스터 세포주(BHK-21)에서 증식시킨 후, 염소 태아 혀 세포주(ZZ-R)에 감염시킨 후 바이러스 역가를 나타낸 도이다.

이하, 본 발명의 내용을 실험예를 통하여 구체적으로 설명한다. 그러나, 하기의 실험예는 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 권리범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.

[ 실시예 1] 재조합 플라스미드 pO - Manisa 및 pOm - AsMOG - P1 의 제조

1.재조합 플라스미드 pO - Manisa 제조

구제역 O형 Manisa 바이러스 전체 유전자 (GenBank Accession No. AY593823.1)를 PCR에 의하여 증폭하고, 플라스미드 (pBluescript SK II)에 O-Manisa 유전자를 삽입하여 재조합 플라스미드 pO-Manisa를 제조하였다.

보다 구체적으로, 상기 PCR 증폭은 다음과 같은 방법으로 실시하였다.

일반적으로 cDNA 합성시 사용되는 랜덤 프라이머를 이용하여 O-Manisa 바이러스에 대한 cDNA 작성 후, 상기 cDNA를 이용하여 O-Manisa 바이러스 유전자 정보를 기초로 증폭이 가능한 특이 프라이머 (GenBank Accession No. AY593823.1를 기초로 5'- 및 3'- 유전자의 각 20 mers씩에 해당)를 작성하여 PCR을 수행하였다.

PCR을 5X 완충액 (FINNZYMES, 10 ㎕), 10 mM dNTPs (1 ㎕), Phusion enzyme (2 U/㎕, 0.5 ㎕) 및 멸균증류수 (35.5 ㎕)를 이용하여 98 ℃에서 30초 후, 98 ℃에서 10초, 65 ℃에서 30초, 72 ℃에서 2분 30초를 한 주기로 25 주기를 수행한 후, 최종 72 ℃에서 10분간 반응을 수행한 후, PCR 산물을 플라스미드 (pBluescript SK Ⅱ)에 삽입하여 pO-Manisa를 제조하였다.

2. 재조합 플라스미드 pOm - Manisa -3B2d의 제조

상기 1-1에서 제조한 O-Manisa(GenBank Accession No. AY593823.1)를 포함하는 플라스미드를 일반적으로 널리 사용되는 생체 외 돌연변이생성법 (in vitro mutagenesis)을 이용하여 일부 유전자 3B 부위 (region)가 치환(3B 부위중 22-36 bp 위치, gagcgtcagaaacct; 서열번호 1) 및 결손(3B 부위 중 37-105 bps 부위, ctgagagtga aaaccaagtt gccacaacag gagggaccct acgctggccc gatggataga cagaaaccg; 서열번호 2)된 재조합 플라스미드 pO-Manisa-3B2d (특허출원 10-2012-0152084, 2012.12.24)를 제조하였다.

3. 재조합 플라스미드 pOm - AsMOG - P1 제조

상기 실시예 1-2에서 제조된 재조합 플라스미드(pO-Manisa-3B2d) 중에서, 방어 항원인 P1 단백질을 코딩하는 유전자를 구제역 아시아 1 혈청형 유전형 V 바이러스인 Asia1/MOG/2005 바이러스 (GenBank Accession No. EF614458.1)의 방어 항원인 P1 단백질을 코딩하는 유전자로 치환하여 재조합 유전자가 삽입된 플라스미드 (pOm-AsMOG-P1)를 제조하였다. 상기 P1 단백질을 코딩하는 유전자는 하기와 같이 치환시켰다. 서열번호 3의 정방향 프라이머(5'-GGAGCCGGGCAATCCAGTCCGGCGACC-3') 및 서열번호 4의 역방향 프라이머(5'-CTGTTTCTCAGGTGCAATGATCTCCTG-3')를 이용하여, Asia1/MOG/2005 바이러스(GenBank Accession No. EF614458.1)의 P1 유전자를 PCR에 의하여 증폭시켰다.

이때, 상기 PCR은 하기와 같이 수행하였다. 5X 완충액 (FINNZYMES, 10 ㎕), 10mM dNTPs (1 ㎕), Phusion enzyme (2 U/㎕, 0.5 ㎕), 멸균증류수 (35.5 ㎕)의 용량으로 98 ℃에서 30초 후, 98 ℃에서 10초, 65 ℃에서 30초, 72 ℃에서 60초를 한 주기로 25 주기로 PCR을 수행하 후, 최종 72 ℃에서 10분 동안 반응을 실시하였다.

서열번호 5의 정방향 프라이머(5'-CTTCTAAATTTTGACCTGCTCAAATTGGCGGG-3') 및 서열번호 6의 역방향 프라이머 (5'-CTTGAGCCTTTTCTGGACCTTTGTTTTCCAC-3')를 이용하여, 실시예 2에서 제조한 O형 Manisa의 전체 유전자에서 P1 유전자가 제거된 벡터를 상기와 같은 조건에서 PCR을 수행하였다.

그 후, 증폭된 P1 유전자와의 결찰반응 (TAKARA Long Ligation kit)을 수행하였으며, 최종적으로 전체 염기서열 분석을 통하여 적절히 클로닝(pOm-AsMOG-P1)된 것을 확인하였다(pOm-AsMOG-P1, 특허출원 10-2013-0073428, 2013.6.26).

상기의 구제역 O형 백신주 Manisa의 전체 유전자를 클로닝하고 아시아 1 혈청형 P1 방어 단백질 유전자를 플라스미드에 삽입하는 단계의 모식도(pOm-AsMOG-P1)를 도 1에 나타내었다.

< 실시예 2> 본 발명의 VP1 또는 VP1의 140-160 아미노산 부위가 치환된 재조합 구제역 바이러스의 제조.

1. 본 발명의 pOm3B - Asm - ShamVP1 플라스미드 제조.

실시예 1에서 제조된 플라스미드 (pOm-AsMOG-P1)를 기초로 하여 백신 표준주인 As1/Shamir/89주의 VP1 증폭을 위한 프라이머는 서열번호 7의 정방향 프라이머(5'-ACCACCACCACTGGCGAATCAGCAGAT-3') 및 서열번호 8의 역방향 프라이머 (5'-CTGCTTCTCAGGTGCAATGATCTCC-3')를 사용하였고, 벡터를 증폭시키기 위해 서열번호 9의 정방향 프라이머 (5'-CTTCTAAATTTTGACCTGCTCAAATTGGCGGG-3') 및 서열번호 10의 역방향 프라이머 (5'-CTGTTGGCGGGCATCCACCGGCAGTCG-3') 를 사용하여 증폭 후, As1/Shamir/89주의 VP1 유전자 (서열번호 11에 나타냄)와 pOm-AsMOG-P1을 결찰하여, 본 발명의 pOm3B-AsM-ShamVP1 플라스미드를 제조하였다. 본 발명의 재조합 플라스미드를 제조하는 과정을 도 2에 나타내었고, pOm3B-AsM-ShamVP1 (전체서열을 서열번호 14에 나타냄) 플라스미드의 모식도를 도 3에 나타내었다.

도 3에 나타난 바와 같이, pOm-AsMOG-P1의 VP1 부위가 As1/Shamir/89주의 VP1 부위로 치환됨을 확인하였다.

2. 본 발명의 pOm3B - Asm - ShamVP1epi 플라스미드 제조

또한, As1/Shamir/89주의 VP1 유전자의 아미노산 서열 140-160 부위를 코딩하는 염기서열을 삽입하기 위하여, VP1의 에피토프인 140-160 아미노산 서열을 코딩하는 염기서열을 증폭을 위한 프라이머로 서열번호 12의 정방향 프라이머(5'-GCCCTCGCACAAAGGTTGCGCAGAGTGAACAACC-3') 및 서열번호 13의 역방향 프라이머 (5'-CGCCATGTCGCCGCGCCTTGCGAGGGCGGCAAG-3')를 사용하여 VP1 에피토프를 증폭한 후, pOm-AsMOG-P1에 삽입하여, pOm3B-AsM-SharmVP1epi (전체서열을 서열번호 15에 나타냄)를 제조하였다. 이의 모식도를 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타난 바와 같이, pOm-AsMOG-P1에 VP1의 140 내지 160 아미노산 서열을 코딩하는 염기서열이 삽입됨을 확인하였다.

3. 본 발명의 플라스미드를 이용한 재조합 구제역 바이러스의 제조

재조합 구제역 바이러스의 회복은 확보된 상기 재조합 플라스미드(pOm3B-AsM-ShamVP1 또는 pOm3B-AsM-ShamVP1epi)를 제한효소로 반응시켜 유전자를 단일 조각편으로 작성하고, BHKT7-9 세포(T7 RNA polymerase가 발현되는 세포주)에 리포펙타민 형질전환 시약 (라이프 테크놀로지)을 이용하여 정제된 DNA를 형질도입하여 2 내지 3일 동안 배양 후, 형성된 재조합 바이러스를 확보하였다. 이 후, 확보된 바이러스를 ZZ-R (염소 태아 혀) 세포 또는 BHK-21 (어린 햄스터 신장) 세포에서 연속계대를 통해 접종하여 바이러스를 증식시켰다. 이 후, 세포 변성 효과를 도 5에 나타내었다. 또한, 본 발명의 재조합 구제역 바이러스를 햄스터 세포주(BHK-21)에서 증식시킨 후, 염소 태아 혀 세포주(ZZ-R)에 감염시킨 후 바이러스 역가를 도 6에 나타내었다.

도 5에 나타난 바와 같이, 본 발명의 구제역 바이러스가 감염된 세포에서 재조합 바이러스가 재형성되어 형광항체법으로 바이러스 감염의 검출이 가능함을 확인하였고, 세포를 변성시키는 효과가 있다는 것을 확인하였다.

도 6에 나타난 바와 같이, 본 발명의 구제역 바이러스가 염소 태아 혀 세포주(ZZ-R)에 감염된 경우, 바이러스 역가가 높음을 확인하였다.

<110> Animal and plant quaratine agency <120> Recombinant foot and mouth disease virus expressing protective antigen of Asia1 type standard vaccine strain and producing method thereof <130> P1-52 <160> 15 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is DNA sequece of substitution region in 3B of O-Manisa <400> 1 gagcgtcaga aacct 15 <210> 2 <211> 69 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is DNA sequece of deletion region in 3B of O-Manisa <400> 2 ctgagagtga aaaccaagtt gccacaacag gagggaccct acgctggccc gatggataga 60 cagaaaccg 69 <210> 3 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is forward primer for P1 of Asia1/MOG/2005 virus <400> 3 ggagccgggc aatccagtcc ggcgacc 27 <210> 4 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is reverse primer for P1 of Asia1/MOG/2005 virus <400> 4 ctgtttctca ggtgcaatga tctcctg 27 <210> 5 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is forward primer for P1-deleted-O-manisa virus <400> 5 cttctaaatt ttgacctgct caaattggcg gg 32 <210> 6 <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is reverse primer for P1-deleted-O-manisa virus <400> 6 cttgagcctt ttctggacct ttgttttcca c 31 <210> 7 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is forward primer for VP1 of As1/Shamir/89 virus <400> 7 accaccacca ctggcgaatc agcagat 27 <210> 8 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is reverse primer for VP1 of As1/Shamir/89 virus <400> 8 ctgcttctca ggtgcaatga tctcc 25 <210> 9 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is forward primer for pOm-AsMOG-P1 vector <400> 9 cttctaaatt ttgacctgct caaattggcg gg 32 <210> 10 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is reverse primer for pOm-AsMOG-P1 vector <400> 10 ctgttggcgg gcatccaccg gcagtcg 27 <210> 11 <211> 582 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is VP1 DNA sequence of As1/Shamir/89 virus <400> 11 tatggaggag agactcagac agccagacgg cttcacactg acgtcgcctt cattcttgac 60 aggtttgtga aactcactgc tcccaagaac atccaaaccc tcgatctcat gcagatcccc 120 tcacacacgc tggttggagc actacttcgt tctgcgacgt actacttctc agacctggag 180 gtcgcgcttg tccacacagg cccggtcacc tgggtgccca acggcgcgcc caaggatgct 240 ctaaacaacc agaccaaccc aactgcctat cagaagcaac ccatcacccg cctggcactc 300 ccctacaccg ccccccatcg tgtgctggca acagtgtaca acgggaagac ggcgtacggg 360 gaaacgacct caaggcgcgg cgacatggcg gccctcgcac aaaggttgag cgctcggctg 420 cccacctcct tcaactacgg cgccgtgaag gccgacacca tcactgagct tttgatccgc 480 atgaagcgcg cggagacata ttgccctagg cctttactag cccttgacac cactcaggac 540 cgccgcaaac aggagatcat tgcacctgag aagcaggttt tg 582 <210> 12 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is forward primer for VP1 protein`s epitope of As1/Shamir/89 virus <400> 12 gccctcgcac aaaggttgcg cagagtgaac aacc 34 <210> 13 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is reverse primer for VP1 protein`s epitope of As1/Shamir/89 virus <400> 13 cgccatgtcg ccgcgccttg cgagggcggc aag 33 <210> 14 <211> 11019 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is full DNA sequence of pOm3B-AsM-SharmVP1 <400> 14 ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc 60 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga 120 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc 180 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc 240 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag 300 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa 360 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac 420 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg 480 caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg 540 gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg ttttcccagt cacgacgttg 600 taaaacgacg gccagtgagc atatgtaata cgactcacta tagggttgaa agggggcgct 660 agggtctcac ccctagcatg ccaacgacag ctcctacgtc gcactccaca ctaacgtttg 720 tgtgcgcgcg ggaaccgatg gacttttgtt cacccaccta cagttggact cacggcaccg 780 cgtggccatt ttagctgggt tgtgcggacg aacactgctt gcgcatctcg cgtgaccggt 840 tagtactctt accactatcc gcctacttgg tcgttagcgc tgtcctgggc actcttgttg 900 ggggctgttc aacgctctac ggtctcccct gcgtaacaga ctacggtgtt ggggccgctt 960 cgtgcgagcc gatcgcttgg tgtgcctcgg ctgtcgcccg aagcccgcct ttcacccccc 1020 cccccccccc ccccctaggt tttaccgtcg ttcccgacgt taatggggaa acaaccacaa 1080 gcttaacacc gtcttgcccg acgtaaaagg gctgcaacca aaaagcttgt gccgcctttc 1140 ccggcgttaa tgggaggtaa ccacaagaca aaccttcacc cggaagtaaa acggcaactt 1200 cacacagttt tgcccgtttt cgtgagaaat gggccgtcaa cgcacgaaac gcgccgtcgc 1260 ttgaggagga cttgtacaaa cacgatctat gcaggtttcc acaactgaca caaaccgtgc 1320 aacttgaaac cccgcctggt ctttccaggt ctagaggggc gacattttgt actgtgcttg 1380 actccacgct cggtccacta gcgagtgtta gtagtagcac tgttgcttcg tagcggagca 1440 tgatggccgt gggagcttcc ccttggtaac aaggacccac ggggccaaaa gccacgtcct 1500 accggaccca tcatgtgtgc aaacccagca cggcaacttt actgcgaaaa ccactttaag 1560 gtgacactga tactggtact caatcactgg tgacaggcta aggatgccct tcaggtaccc 1620 cgaggtaaca cgcgacactc gggatctgag aaggggactg gggcttcttt aaaagtgccc 1680 agtttaaaaa gcttctatgc ctgaataggc gaccggaggc cggcgccttt tcactgtttt 1740 actactgttt tcatgaatac aactgactgt ttcaccgccc tgttacacgc tctcagagag 1800 atcaaaacac tgtttctttt acggacacaa ggaaagatgg aattcacact ttacaacggt 1860 gagaagaaaa ccttctactc cagacccaac aaccacgaca actgctggct taacaccatt 1920 ctccagttgt tcaggtatgt tgatgagcct ttctttgact gggtctacga ctcgcctgaa 1980 aacctcactc ttgaggcaat caaacagttg gaagagacaa ccggtcttga gctgcacgag 2040 ggtggaccac ccgctctcgt catctggaac atcaaacact tgcttcacac cggaatcggc 2100 actgcctcac gccctagcga ggtgtgtatg gtggacggaa cggacatgtg tttagctgat 2160 tttcatgctg gcattttcct gaaaggacag gaacatgctg tgttcgcctg tgtcacctcc 2220 aacgggtggt acgcgattga tgacgaggac ttttaccctt ggacaccgga cccgtccgac 2280 gttctggtgt ttgtcccgta cgatcaagaa ccgcttaacg gagagtggaa aacaaaggtc 2340 cagaaaaggc tcaagggagc cgggcaatcc agtccggcga ccgggtcgca gaaccagtca 2400 ggcaacactg gaagcatcat taacaactac tacatgcagc agtaccagaa ctccatggac 2460 acgcaacttg gagataacgc tatcagcgga ggctccaacg agggttccac ggacaccaca 2520 tccacacaca caaacaacac ccaaaacaat gattggttct cacgcttggc cagttcggcc 2580 tttagcggac tgtttggtgc tcttttggct gacaagaaaa cggaggagac aactctgctt 2640 gaagaccgca tactcaccac cagaaatggc cacacgacgt cgacgacaca gtcgagtgtt 2700 ggcgtaacat atggttacgc tgtggctgag gacgcggtat ctgggcctaa cacctcaggc 2760 ctggagaccc gcgtgacaca ggctgaacgg ttcttcaaga aacacctgtt tgactggacg 2820 ccggatttgt catttggaca ctgtcactac ttggaactcc cctctgaaca caagggcgtg 2880 tttggcagcc tcatgagctc ttatgcttac atgaggaacg ggtgggacat tgaggtgacc 2940 gctgttggaa atcagttcaa tggtggttgt ctcctcgtcg cactcgtgcc ggagctgaaa 3000 gagctcgaca cgcggcagaa gtatcagtta accctcttcc cacaccagtt cattaacccg 3060 cgcactaaca tgacggctca cattaacgtg ccgtacgtgg gtgtcaacag gtacgaccag 3120 tacgagctcc acaaaccgtg gacgcttgtg gtgatggtgg tggccccgct taccgtcaaa 3180 actggtggtt ctgaacagat caaggtttac atgaatgcag cgccgaccta cgtgcacgtg 3240 gcaggagaac tgccctcgaa agaggggata gttcctgtgg cgtgtgtgga cggttacggc 3300 aacatggtaa ccacggaccc gaagacggct gaccccgtct acgggaaagt gtctaacccc 3360 cccagaacaa gcttccctgg gcgcttcaca aacttccttg atgtagcgga ggcgtgtcca 3420 accttcctcc gcttcggaga agtaccattt gtgaagacgg tgaactctgg tgaccgcttg 3480 cttgccaagt ttgacgtgtc cctcgctgcg gggcacatgt ccaacaccta cttggcaggt 3540 ttggcacagt actacacaca gtacagcggc actatgaata tccacttcat gttcactgga 3600 cccacggatg ccaaagcccg ctacatggtg gcttacatac ctcctggtat gacaccgcca 3660 acggacccgg agcgggctgc acactgcatt cattctgagt gggacactgg actcaattct 3720 aaatttacct tttctatccc ttacctttct gctgcagact atgcttacac tgcttctgac 3780 gtggctgaga ccacgagtgt gcagggatgg gtgtgtattt accagatcac ccacggtaaa 3840 gctgaaggtg acgcgctggt cgtgtccgtc agcgctggca aggactttga gtttcgactg 3900 ccggtggatg cccgccaaca gaccaccacc actggcgaat cagcagatcc agtcacaacc 3960 acggttgaga actatggagg agagactcag acagccagac ggcttcacac tgacgtcgcc 4020 ttcattcttg acaggtttgt gaaactcact gctcccaaga acatccaaac cctcgatctc 4080 atgcagatcc cctcacacac gctggttgga gcactacttc gttctgcgac gtactacttc 4140 tcagacctgg aggtcgcgct tgtccacaca ggcccggtca cctgggtgcc caacggcgcg 4200 cccaaggatg ctctaaacaa ccagaccaac ccaactgcct atcagaagca acccatcacc 4260 cgcctggcac tcccctacac cgccccccat cgtgtgctgg caacagtgta caacgggaag 4320 acggcgtacg gggaaacgac ctcaaggcgc ggcgacatgg cggccctcgc acaaaggttg 4380 agcgctcggc tgcccacctc cttcaactac ggcgccgtga aggccgacac catcactgag 4440 cttttgatcc gcatgaagcg cgcggagaca tattgcccta ggcctttact agcccttgac 4500 accactcagg accgccgcaa acaggagatc attgcacctg agaagcagct tctaaatttt 4560 gacctgctca aattggcggg agatgtggag tccaaccctg ggcccttctt cttctccgac 4620 gtcaggtcaa atttctcaaa actggtagaa accatcaatc agatgcagga ggacatgtca 4680 acaaaacacg ggcctgactt taaccggttg gtgtccgcat ttgaggaatt ggccactgga 4740 gtgaaggcta tcagggccgg tctcgacgag gccaaaccct ggtacaaact catcaagctc 4800 ctgagccgct tgtcgtgcat ggccgctgta gcagcacggt caaaggaccc agtccttgtg 4860 gccatcatgc tggctgacac cggtcttgag attctggaca gcacctttgt cgtgaagaag 4920 atctccgact cgctctccag tctctttcac gtgccggccc ccgtcttcag tttcggagcc 4980 ccgattctgt tggccgggtt ggtcaaagtc gcctcgagtt tcttccggtc cacacccgaa 5040 gaccttgaga gagcagaaaa acagctcaaa gcacgtgaca ttaacgacat attcgccatt 5100 ctcaagaacg gcgagtggct ggtcaagctg atccttgcca tccgcgactg gatcaaagcg 5160 tggatcgcct cagaagaaaa gtttgtcacc atgacggact tggtgcctgg tatccttgaa 5220 aagcagcggg atctcaacga cccgagtaag tacaaggaag ccaaggagtg gctcgacaac 5280 gcgcgccagg cgtgtttgaa gagcgggaac gttcacattg ccaatttgtg caaagtggtc 5340 gccccggcac ccagcaagtc gagacccgaa cccgtggtcg tttgcctccg cggcaaatcc 5400 ggccagggga agagtttcct tgcgaacgtg ctcgcgcaag caatctccac ccacttcacc 5460 ggcagaactg attcggtttg gtactgcccg cctgaccctg accacttcga cggttacaac 5520 cagcagaccg ttgtcgtgat ggacgatttg ggccagaacc ccgatggcaa ggacttcaag 5580 tacttcgccc agatggtttc gaccacgggg ttcatcccgc ccatggcctc gcttgaggac 5640 aaaggcaagc ctttcaacag caaagtcatc attgctacca ccaacctgta ctcgggtttc 5700 accccgagaa caatggtgtg tcctgacgcg ctgaaccgga ggttccactt tgacatcgac 5760 gtgagtgcca aggacgggta caaagttaac aacaaattgg acataatcaa agctcttgaa 5820 gacacccaca ccaacccagt ggcgatgttc caatacgact gtgcccttct aaacggtatg 5880 gcagttgaaa tgaagagaat gcaacaggat atgttcaagc ctcaaccacc cctccagaac 5940 gtgtaccaac tcgttcacga ggtgattgaa cgggtcgagc tccacgagaa ggtgtcgagc 6000 cacccgattt tcaaacagat atcaattcct tcccaaaagt ctgtgttgta cttcctcatt 6060 gagaaaggcc aacacgaagc agcaattgaa ttctttgagg gaatggtgca tgactccatc 6120 aaggaagagc tccggcccct catccaacag acctcatttg tgaaacgcgc ttttaagcgc 6180 ctgaaggaaa actttgagac tgttgccctg tgtttgactc ttttggcaaa catagtgatc 6240 atgatccgcg agactcgcaa gagacaacag atggtggacg atgcagtgaa tgactacatt 6300 gagaaggcaa acatcaccac agatgacaag actcttgacg aggcggaaaa gaaccctcta 6360 gagaccagcg gtgccagcac tattggtttc agagagagaa ctctcccggg gcacaaggcg 6420 agcgatgacg tgagctccga gcccgccaaa cccgtggagg accgaccaca agctgaaggg 6480 ccctacgccg gaccacttaa gaaaccagtg gcattgaaag tgagagcaag agccccggtc 6540 gtgaaggagg gaccctacga gggaccggtg aagaagcctg tcgctttgaa agtgaaagcc 6600 aagaacttga ttgtcactga gagtggtgcc ccaccgaccg acttgcagaa gatggtcatg 6660 ggcaacacta agcctgttga gctcatcctc gacgggaaga cggtagccat ctgctgtgct 6720 accggagtgt ttggcactgc ctacctcgta cctcgtcacc tcttcgcgga gaagtacgac 6780 aagataatgt tggacggtag agccatgaca gacagtgact acagagtgtt tgagtttgag 6840 attaaagtaa aaggacagga catgctctca gacgctgcac tcatggtgct tcaccgtggg 6900 aaccgcgtga gagacatcac gaaacatttt cgtgacacag caagaatgaa gaaaggcacc 6960 cccgttgtcg gtgtgatcaa caacgccgac gttgggagac tgattttctc tggagaggcc 7020 cttacctaca aagacattgt agtgtgcatg gatggagaca ccatgccggg cctgtttgcc 7080 tacagagccg ccaccaaggc tggttactgc gggggagccg ttctcgccaa ggacggagcc 7140 gacacattca tcgttggcac ccactccgca ggtggtaacg gagttggata ctgctcgtgc 7200 gtgtccaggt ccatgctcct gaaaatgaag gcacacattg accctgaacc acaccacgag 7260 gggttgattg ttgataccag agatgtggaa gagcgcgtgc atgtcatgcg taaaaccaag 7320 cttgcaccca ccgtggcaca cggtgtgttt aaccctgaat ttggtcccgc tgccttgtcc 7380 aacaaggacc cgcggctgaa cgaaggggtt gtcctcgatg aagtcatctt ctccaaacac 7440 aagggagaca cgaaaatgtc tgaggaggac aaagcgctgt tccgccgctg cgctgccgac 7500 tacgcgtcgc acttgcacag cgtgctgggg acggcaaatg ccccattgag catctatgag 7560 gccatcaaag gcgtcgacgg gctcgatgcc atggagccgg acaccgcgcc cggcctcccc 7620 tgggccctcc aggggaaacg ccgtggtgcg ttgattgact tcgagaacgg cacggtcgga 7680 cccgaagtcg aggctgccct aaagctcatg gagaaaagag agtacaaatt tgcttgccag 7740 accttcctga aagacgagat tcgtccgatg gaaaaagtac gtgctggcaa gactcgcatt 7800 gtcgacgttt tgcccgtgga acacattctt tacaccagga tgatgattgg cagattctgt 7860 gctcaaatgc acacaaacaa tggaccgcag attggctcag cggtcggttg caatcctgat 7920 gttgattggc aaagatttgg cacacatttt gctcagtaca gaaacgtgtg ggatgtggac 7980 tattcggcct ttgatgctaa ccactgcagt gacgcaatga acatcatgtt tgaggaggta 8040 tttcgcacag acttcggttt ccacccaaat gctgagtgga ttctgaagac tcttgtgaac 8100 acggagcacg cctatgagaa caaacgtatc actgttgagg gcgggatgcc gtctggctgt 8160 tccgcgacaa gcatcatcaa cacaattttg aacaacattt atgtgctcta cgctcttcgt 8220 agacactatg agggagttga gctggacacc tacaccatga tctcctacgg agatgacatc 8280 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gctcggtcgt tcggctgcgg cgagcggtat cagctcactc aaaggcggta atacggttat 9180 ccacagaatc aggggataac gcaggaaaga acatgtgagc aaaaggccag caaaaggcca 9240 ggaaccgtaa aaaggccgcg ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc 9300 atcacaaaaa tcgacgctca agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc 9360 aggcgtttcc ccctggaagc tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg 9420 gatacctgtc cgcctttctc ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta 9480 ggtatctcag ttcggtgtag gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg 9540 ttcagcccga ccgctgcgcc ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac 9600 acgacttatc gccactggca gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag 9660 gcggtgctac agagttcttg aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga aggacagtat 9720 ttggtatctg cgctctgctg aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat 9780 ccggcaaaca aaccaccgct ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc 9840 gcagaaaaaa aggatctcaa gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt 9900 ggaacgaaaa ctcacgttaa gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct 9960 agatcctttt aaattaaaaa tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt 10020 ggtctgacag ttaccaatgc ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc 10080 gttcatccat agttgcctga ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac 10140 catctggccc cagtgctgca atgataccgc gagacccacg ctcaccggct ccagatttat 10200 cagcaataaa ccagccagcc ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg 10260 cctccatcca gtctattaat tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata 10320 gtttgcgcaa cgttgttgcc attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta 10380 tggcttcatt cagctccggt tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt 10440 gcaaaaaagc ggttagctcc ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag 10500 tgttatcact catggttatg gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa 10560 gatgcttttc tgtgactggt gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc 10620 gaccgagttg ctcttgcccg gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt 10680 taaaagtgct catcattgga aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc 10740 tgttgagatc cagttcgatg taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta 10800 ctttcaccag cgtttctggg tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa 10860 taagggcgac acggaaatgt tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca 10920 tttatcaggg ttattgtctc atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac 10980 aaataggggt tccgcgcaca tttccccgaa aagtgccac 11019 <210> 15 <211> 11055 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> it is full DNA sequence of pOm3B-AsM-SharmVP1epi <400> 15 ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc 60 attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga 120 gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc 180 caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc 240 ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag 300 cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa 360 agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac 420 cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg 480 caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg 540 gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg ttttcccagt cacgacgttg 600 taaaacgacg gccagtgagc atatgtaata cgactcacta tagggttgaa agggggcgct 660 agggtctcac ccctagcatg ccaacgacag ctcctacgtc gcactccaca ctaacgtttg 720 tgtgcgcgcg ggaaccgatg gacttttgtt cacccaccta cagttggact cacggcaccg 780 cgtggccatt ttagctgggt tgtgcggacg aacactgctt gcgcatctcg cgtgaccggt 840 tagtactctt accactatcc gcctacttgg tcgttagcgc tgtcctgggc actcttgttg 900 ggggctgttc aacgctctac ggtctcccct gcgtaacaga ctacggtgtt ggggccgctt 960 cgtgcgagcc gatcgcttgg tgtgcctcgg ctgtcgcccg aagcccgcct ttcacccccc 1020 cccccccccc ccccctaggt tttaccgtcg ttcccgacgt taatggggaa acaaccacaa 1080 gcttaacacc gtcttgcccg acgtaaaagg gctgcaacca aaaagcttgt gccgcctttc 1140 ccggcgttaa tgggaggtaa ccacaagaca aaccttcacc cggaagtaaa acggcaactt 1200 cacacagttt tgcccgtttt cgtgagaaat gggccgtcaa cgcacgaaac gcgccgtcgc 1260 ttgaggagga cttgtacaaa cacgatctat gcaggtttcc acaactgaca caaaccgtgc 1320 aacttgaaac cccgcctggt ctttccaggt ctagaggggc gacattttgt actgtgcttg 1380 actccacgct cggtccacta gcgagtgtta gtagtagcac tgttgcttcg tagcggagca 1440 tgatggccgt gggagcttcc ccttggtaac aaggacccac ggggccaaaa gccacgtcct 1500 accggaccca tcatgtgtgc aaacccagca cggcaacttt actgcgaaaa ccactttaag 1560 gtgacactga tactggtact caatcactgg tgacaggcta aggatgccct tcaggtaccc 1620 cgaggtaaca cgcgacactc gggatctgag aaggggactg gggcttcttt aaaagtgccc 1680 agtttaaaaa gcttctatgc ctgaataggc gaccggaggc cggcgccttt tcactgtttt 1740 actactgttt tcatgaatac aactgactgt ttcaccgccc tgttacacgc tctcagagag 1800 atcaaaacac tgtttctttt acggacacaa ggaaagatgg aattcacact ttacaacggt 1860 gagaagaaaa ccttctactc cagacccaac aaccacgaca actgctggct taacaccatt 1920 ctccagttgt tcaggtatgt tgatgagcct ttctttgact gggtctacga ctcgcctgaa 1980 aacctcactc ttgaggcaat caaacagttg gaagagacaa ccggtcttga gctgcacgag 2040 ggtggaccac ccgctctcgt catctggaac atcaaacact tgcttcacac cggaatcggc 2100 actgcctcac gccctagcga ggtgtgtatg gtggacggaa cggacatgtg tttagctgat 2160 tttcatgctg gcattttcct gaaaggacag gaacatgctg tgttcgcctg tgtcacctcc 2220 aacgggtggt acgcgattga tgacgaggac ttttaccctt ggacaccgga cccgtccgac 2280 gttctggtgt ttgtcccgta cgatcaagaa ccgcttaacg gagagtggaa aacaaaggtc 2340 cagaaaaggc tcaagggagc cgggcaatcc agtccggcga ccgggtcgca gaaccagtca 2400 ggcaacactg gaagcatcat taacaactac tacatgcagc agtaccagaa ctccatggac 2460 acgcaacttg gagataacgc tatcagcgga ggctccaacg agggttccac ggacaccaca 2520 tccacacaca caaacaacac ccaaaacaat gattggttct cacgcttggc cagttcggcc 2580 tttagcggac tgtttggtgc tcttttggct gacaagaaaa cggaggagac aactctgctt 2640 gaagaccgca tactcaccac cagaaatggc cacacgacgt cgacgacaca gtcgagtgtt 2700 ggcgtaacat atggttacgc tgtggctgag gacgcggtat ctgggcctaa cacctcaggc 2760 ctggagaccc gcgtgacaca ggctgaacgg ttcttcaaga aacacctgtt tgactggacg 2820 ccggatttgt catttggaca ctgtcactac ttggaactcc cctctgaaca caagggcgtg 2880 tttggcagcc tcatgagctc ttatgcttac atgaggaacg ggtgggacat tgaggtgacc 2940 gctgttggaa atcagttcaa tggtggttgt ctcctcgtcg cactcgtgcc ggagctgaaa 3000 gagctcgaca cgcggcagaa gtatcagtta accctcttcc cacaccagtt cattaacccg 3060 cgcactaaca tgacggctca cattaacgtg ccgtacgtgg gtgtcaacag gtacgaccag 3120 tacgagctcc acaaaccgtg gacgcttgtg gtgatggtgg tggccccgct taccgtcaaa 3180 actggtggtt ctgaacagat caaggtttac atgaatgcag cgccgaccta cgtgcacgtg 3240 gcaggagaac tgccctcgaa agaggggata gttcctgtgg cgtgtgtgga cggttacggc 3300 aacatggtaa ccacggaccc gaagacggct gaccccgtct acgggaaagt gtctaacccc 3360 cccagaacaa gcttccctgg gcgcttcaca aacttccttg atgtagcgga ggcgtgtcca 3420 accttcctcc gcttcggaga agtaccattt gtgaagacgg tgaactctgg tgaccgcttg 3480 cttgccaagt ttgacgtgtc cctcgctgcg gggcacatgt ccaacaccta cttggcaggt 3540 ttggcacagt actacacaca gtacagcggc actatgaata tccacttcat gttcactgga 3600 cccacggatg ccaaagcccg ctacatggtg gcttacatac ctcctggtat gacaccgcca 3660 acggacccgg agcgggctgc acactgcatt cattctgagt gggacactgg actcaattct 3720 aaatttacct tttctatccc ttacctttct gctgcagact atgcttacac tgcttctgac 3780 gtggctgaga ccacgagtgt gcagggatgg gtgtgtattt accagatcac ccacggtaaa 3840 gctgaaggtg acgcgctggt cgtgtccgtc agcgctggca 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aacacgggcc tgactttaac 4740 cggttggtgt ccgcatttga ggaattggcc actggagtga aggctatcag ggccggtctc 4800 gacgaggcca aaccctggta caaactcatc aagctcctga gccgcttgtc gtgcatggcc 4860 gctgtagcag cacggtcaaa ggacccagtc cttgtggcca tcatgctggc tgacaccggt 4920 cttgagattc tggacagcac ctttgtcgtg aagaagatct ccgactcgct ctccagtctc 4980 tttcacgtgc cggcccccgt cttcagtttc ggagccccga ttctgttggc cgggttggtc 5040 aaagtcgcct cgagtttctt ccggtccaca cccgaagacc ttgagagagc agaaaaacag 5100 ctcaaagcac gtgacattaa cgacatattc gccattctca agaacggcga gtggctggtc 5160 aagctgatcc ttgccatccg cgactggatc aaagcgtgga tcgcctcaga agaaaagttt 5220 gtcaccatga cggacttggt gcctggtatc cttgaaaagc agcgggatct caacgacccg 5280 agtaagtaca aggaagccaa ggagtggctc gacaacgcgc gccaggcgtg tttgaagagc 5340 gggaacgttc acattgccaa tttgtgcaaa gtggtcgccc cggcacccag caagtcgaga 5400 cccgaacccg tggtcgtttg cctccgcggc aaatccggcc aggggaagag tttccttgcg 5460 aacgtgctcg cgcaagcaat ctccacccac ttcaccggca gaactgattc ggtttggtac 5520 tgcccgcctg accctgacca cttcgacggt tacaaccagc agaccgttgt cgtgatggac 5580 gatttgggcc agaaccccga tggcaaggac ttcaagtact tcgcccagat ggtttcgacc 5640 acggggttca tcccgcccat ggcctcgctt gaggacaaag gcaagccttt caacagcaaa 5700 gtcatcattg ctaccaccaa cctgtactcg ggtttcaccc cgagaacaat ggtgtgtcct 5760 gacgcgctga accggaggtt ccactttgac atcgacgtga gtgccaagga cgggtacaaa 5820 gttaacaaca aattggacat aatcaaagct cttgaagaca cccacaccaa cccagtggcg 5880 atgttccaat acgactgtgc ccttctaaac ggtatggcag ttgaaatgaa gagaatgcaa 5940 caggatatgt tcaagcctca accacccctc cagaacgtgt accaactcgt tcacgaggtg 6000 attgaacggg tcgagctcca cgagaaggtg tcgagccacc cgattttcaa acagatatca 6060 attccttccc aaaagtctgt gttgtacttc ctcattgaga aaggccaaca cgaagcagca 6120 attgaattct ttgagggaat ggtgcatgac tccatcaagg aagagctccg gcccctcatc 6180 caacagacct catttgtgaa acgcgctttt aagcgcctga aggaaaactt tgagactgtt 6240 gccctgtgtt tgactctttt ggcaaacata gtgatcatga tccgcgagac tcgcaagaga 6300 caacagatgg tggacgatgc agtgaatgac tacattgaga aggcaaacat caccacagat 6360 gacaagactc ttgacgaggc ggaaaagaac cctctagaga ccagcggtgc cagcactatt 6420 ggtttcagag agagaactct cccggggcac aaggcgagcg atgacgtgag ctccgagccc 6480 gccaaacccg tggaggaccg accacaagct gaagggccct acgccggacc acttaagaaa 6540 ccagtggcat tgaaagtgag agcaagagcc ccggtcgtga aggagggacc ctacgaggga 6600 ccggtgaaga agcctgtcgc tttgaaagtg aaagccaaga acttgattgt cactgagagt 6660 ggtgccccac cgaccgactt gcagaagatg gtcatgggca acactaagcc tgttgagctc 6720 atcctcgacg ggaagacggt agccatctgc tgtgctaccg gagtgtttgg cactgcctac 6780 ctcgtacctc gtcacctctt cgcggagaag tacgacaaga taatgttgga cggtagagcc 6840 atgacagaca gtgactacag agtgtttgag tttgagatta aagtaaaagg acaggacatg 6900 ctctcagacg ctgcactcat ggtgcttcac cgtgggaacc gcgtgagaga catcacgaaa 6960 cattttcgtg acacagcaag aatgaagaaa ggcacccccg ttgtcggtgt gatcaacaac 7020 gccgacgttg ggagactgat tttctctgga gaggccctta cctacaaaga cattgtagtg 7080 tgcatggatg gagacaccat gccgggcctg tttgcctaca gagccgccac caaggctggt 7140 tactgcgggg gagccgttct cgccaaggac ggagccgaca cattcatcgt tggcacccac 7200 tccgcaggtg gtaacggagt tggatactgc tcgtgcgtgt ccaggtccat gctcctgaaa 7260 atgaaggcac acattgaccc tgaaccacac cacgaggggt tgattgttga taccagagat 7320 gtggaagagc gcgtgcatgt catgcgtaaa accaagcttg cacccaccgt ggcacacggt 7380 gtgtttaacc ctgaatttgg tcccgctgcc ttgtccaaca aggacccgcg gctgaacgaa 7440 ggggttgtcc tcgatgaagt catcttctcc aaacacaagg gagacacgaa aatgtctgag 7500 gaggacaaag cgctgttccg ccgctgcgct gccgactacg cgtcgcactt gcacagcgtg 7560 ctggggacgg caaatgcccc attgagcatc tatgaggcca tcaaaggcgt cgacgggctc 7620 gatgccatgg agccggacac cgcgcccggc ctcccctggg ccctccaggg gaaacgccgt 7680 ggtgcgttga ttgacttcga gaacggcacg gtcggacccg aagtcgaggc tgccctaaag 7740 ctcatggaga aaagagagta caaatttgct tgccagacct tcctgaaaga cgagattcgt 7800 ccgatggaaa aagtacgtgc tggcaagact cgcattgtcg acgttttgcc cgtggaacac 7860 attctttaca ccaggatgat gattggcaga ttctgtgctc aaatgcacac aaacaatgga 7920 ccgcagattg gctcagcggt cggttgcaat cctgatgttg attggcaaag atttggcaca 7980 cattttgctc agtacagaaa cgtgtgggat gtggactatt cggcctttga tgctaaccac 8040 tgcagtgacg caatgaacat catgtttgag gaggtatttc gcacagactt cggtttccac 8100 ccaaatgctg agtggattct gaagactctt gtgaacacgg agcacgccta tgagaacaaa 8160 cgtatcactg ttgagggcgg gatgccgtct ggctgttccg cgacaagcat catcaacaca 8220 attttgaaca acatttatgt gctctacgct cttcgtagac actatgaggg agttgagctg 8280 gacacctaca ccatgatctc ctacggagat gacatcgtgg ttgcaagtga ctacgatctg 8340 gattttgagg ctctcaaacc ccacttcaaa tctcttggtc aaaccatcac tccagctgac 8400 aaaagcgaca aaggttttgt tcttggtcac tccattaccg atgtcacttt cctcaaaaga 8460 cacttccaca tggactatgg aactgggttt tacaaacctg tgatggcctc aaagaccctc 8520 gaggccattc tctcctttgc acgccgtggg accatacagg agaagttgat ctccgtggca 8580 ggactcgccg tccactcagg acctgacgag taccggcgtc tctttgagcc cttccagggt 8640 ctcttcgaga ttccaagcta cagatcactt tacctgcgtt gggtgaacgc cgtgtgcggt 8700 gacgcataat ccctcagatg tcacaattgg cagaaagact ctgaggcgag cgacgccgta 8760 ggagtgaaaa gcccgaaagg gcttttcccg cttcctattc caaaaaaaaa aaaaaaaaac 8820 tagttctaga gcggccgcca ccgcggtgga gctccagctt ttgttccctt tagtgagggt 8880 taattgcgcg cttggcgtaa tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc 8940 tcacaattcc acacaacata cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat 9000 gagtgagcta actcacatta attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc 9060 tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg 9120 ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag 9180 cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag 9240 gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc 9300 tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc 9360 agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc 9420 tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt 9480 cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg 9540 ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat 9600 ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag 9660 ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt 9720 ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc 9780 cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta 9840 gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag 9900 atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga 9960 ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa 10020 gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa 10080 tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc 10140 ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga 10200 taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa 10260 gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt 10320 gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg 10380 ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc 10440 aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg 10500 gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag 10560 cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt 10620 actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt 10680 caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac 10740 gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac 10800 ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag 10860 caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa 10920 tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga 10980 gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc 11040 cccgaaaagt gccac 11055

Claims (20)

1. 구제역 O형 바이러스의 P1 유전자가 아시아1 혈청형 유전형 V 바이러스의 P1 유전자로 치환되고, 상기 치환된 P1 유전자 중 VP1 부위가 Asia/Shamir/89의 VP1 유전자 또는 그 일부 염기서열로 치환 또는 삽입된, 구제역 O형 바이러스의 유전자를 포함하는 재조합 벡터.
2. 제 1항에 있어서, 상기 As1/Shamir/89의 VP1 유전자는 서열번호 11의 염기서열로 표시되는 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터.
3. 제 1항에 있어서, 상기 As1/Shamir/89의 VP1의 일부 염기서열은 에피토프를 코딩하는 염기서열인 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터.
4. 제 3항에 있어서, 상기 에피토프를 코딩하는 염기서열은 As1/Shamir/89의 VP1 단백질의 140 내지 160 번째 아미노산 서열을 코딩하는 염기서열인 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터.
5. 제 1항에 있어서, 상기 구제역 O형 바이러스의 유전자는 구제역 O형 백신주 Manisa의 전체 유전자인 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터.
6. 제 5항에 있어서, 상기 구제역 O형 백신주 Manisa의 전체 유전자는 3B 부위 중 3B1 부위의 염기서열이 하나 이상 치환 또는 3B2 부위 일부가 결실된 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터.
7. 제 6항에 있어서, 상기 유전자 3B1 부위의 치환 부위는 서열번호 1의 염기서열로 표시되는 3B1 부위의 22 내지 36번째 염기서열 부위이고, 3B2 부위의 결실 부위는 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 3B2 부위의 37 내지 105번째 염기서열 부위인 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터.
8. 제 1항에 있어서, 구제역 아시아1 혈청형 유전형 V 바이러스는 Asia1/MOG/2005 바이러스인 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터.
9. 제 1항에 있어서, 상기 재조합 벡터는 도 3의 개열지도로 표시되는 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터.
   [도 3]
   

   

   
   
   
10. 제 1항에 있어서, 상기 재조합 벡터는 도 4의 개열지도로 표시되는 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터.
    [도 4]
    

    
11. 제 1항에 있어서, 상기 재조합 벡터는 서열번호 14 또는 서열번호 15의 염기서열로 표시되는 것을 특징으로 하는, 재조합 벡터.
12. 제 1항 내지 제 11항 중 어느 한 항의 재조합 벡터에 의하여 제조된 재조합 구제역 바이러스.
13. 1) 구제역 O형 바이러스의 유전자를 재조합 벡터에 삽입하는 단계;
    2) 상기 1)단계의 재조합 벡터에서 구제역 O형 바이러스의 P1 유전자를 아시아1 혈청형 유전형 V 바이러스의 P1 유전자로 치환하는 단계; 및
    3) 상기 2)단계의 재조합 벡터의 P1 유전자 중 VP1 부위가 As1/Shamir/89의 VP1 유전자 또는 그 일부 염기서열로 치환 또는 삽입시키는 단계;를 포함하는 재조합 벡터의 제조방법.
14. 제 13항에서 제조된 재조합 벡터를 세포에 도입하여 증식시키는 단계;를 포함하는 재조합 구제역 바이러스의 제조방법.
15. 제 14항에 있어서, 상기 세포는 개과 동물, 고양이과 동물, 멧돼지과 동물, 소과 동물, 사슴과 동물, 기린과 동물, 페커리과 동물, 낙타과 동물, 하마과 동물, 말과 동물, 맥과 동물, 코뿔소과 동물, 족제비과, 토끼과, 설치류 및 영장류의 세포로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 세포에서 유래된 것을 특징으로 하는, 재조합 구제역 바이러스의 제조방법.
16. 제 14항에 있어서, 상기 세포는 염소 혀 세포 (ZZ-R) 및 햄스터 신장 세포 (BHK-21), 흑염소 신장세포 (BGK), 돼지 신장세포 (IBRS-2) 및 소 신장세포 (LF-BK)에서 선택된 1 종 이상의 세포인 것을 특징으로 하는, 재조합 구제역 바이러스의 제조방법.
17. 제 12항의 재조합 구제역 바이러스를 유효성분으로 포함하는 구제역 예방용 백신 조성물.
18. 제 17항에 있어서, 상기 백신은 생백신, 약독화된 백신, 또는 사백신인 것을 특징으로 하는, 구제역 예방용 백신 조성물.
19. 제 12항의 재조합 구제역 바이러스를 개체에 투여하는 단계;를 포함하는 구제역의 예방 방법.
20. 제 19항에 있어서, 상기 개체는 멧돼지과 동물, 소과 동물, 사슴과 동물, 기린과 동물, 페커리과 동물, 낙타과 동물, 하마과 동물, 코뿔소과 동물로 이루어진 군 중 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 구제역의 예방 방법.
    
    
    
    
    
    

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