KR20150030725A

KR20150030725A - 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드로 제조된 항폐암 약물 및 그의 용도

Info

Publication number: KR20150030725A
Application number: KR1020157000970A
Authority: KR
Inventors: 시왕 왕; 윈룽 장; 옌화 셰
Original assignee: 더 폴쓰 밀리터리 메디컬 유니버시티
Priority date: 2012-09-18
Filing date: 2013-02-26
Publication date: 2015-03-20
Also published as: WO2014044028A1; CN102988486A

Abstract

본 발명은 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드가 항폐암 약물을 제조함에 있어서의 용도 및 계피유 및/또는 신남 알데히드로 제조된 항폐암 약물에 관한 것이다. MTT등 방법을 이용하여 연구하고 증명하였는 바, 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드는 비소세포형 폐암세포 A549에 대해 현저한 억제작용이 있지만 신남 알데히드의 최종 대사산물 계피산은 A549에 대해 억제작용이 없거나 억제작용이 극히 약하다. 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드는 항폐암 약물을 제조하는데 사용 가능하다.

Description

계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드로 제조된 항폐암 약물 및 그의 용도{ANTI LUNG CANCER DRUG MADE OF OLEUM CASSIAE AND MAJOR CONSTITUENT CINNAMALDEHYDE THEREOF AND USE THEREOF}

본 발명은 의약기술 분야에 속하고 구체적으로 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드가 항폐암 약물을 제조함에 있어서의 용도에 관한 것이다.

계피는 녹나무과 계피(Cinnamomum cassia Presl)의 건조한 나무껍질이다. 계피유는 육계유라고도 하는 바 계피의 건조한 껍질, 잎을 수증기로 증류하여 얻은 휘발성 기름이고, 황색 또는 황갈색의 맑은 액체(clear liquor)이고, 계피 특유의 향이 나고, 맛이 달며, 상대밀도가 1.055-1.070이며, 굴절률이 1.602-1.614이다. GC-MS 분석연구를 통하여 실증한 바로는 계피유의 화학성분은 주요하게 신남 알데히드, 초산 신나밀, 살리실 알데히드와 계피산 등이고, 또한 신남 알데히드의 상대함량은 무려 87%이상에 달하며; 계피유는 비교적 강한 휘발성을 갖고 있고, 빛과 열을 만나면 불안정하여, 휘발성 기름의 약리작용에 현저한 영향이 있다. 신남 알데히드는 일명 유계 알데히드, 페닐아크롤레인(phenylacrolein)으로도 칭하고, 화학명칭은 3-페닐-2-아크롤레인이며, 영문 명칭은 Cinnamic aldehyde이고; 강렬한 계피향을 갖고 있으며 또한 오래 유지된다. 신남 알데히드는 물, 글리세린, 석유 에테르에 용해되기 어렵고, 에탄올, 에테르에 쉽게 용해되며, 수증기와 함께 휘발 가능하고; 강산성 또는 강염기성 매질 중에서 불안정하며, 쉽게 변색을 초래하고, 공기중에서 쉽게 산화되며; 신남 알데히드는 체내에서 산화반응을 일으켜 계피산(桂皮酸)(또는 육계산(肉桂酸))으로도 칭한다)으로 전화된다.

연구를 통해 발견 한 바로는 계피산은 항균작용[李小芳等．桂皮酸-8-韆基惜棲稀土配合物的合成、抑菌活性及其對DNA的作用．天然産物桔究與開發，2012；24(2)：160-163]（이소방 등. 계피산-8-히드록시퀴놀린희토착물의 합성, 항균활성 및 DNA에 대한 그의 작용. 천연산물 연구와 개발, 2012; 24(2): 160-163）, 항암작용[呂俊明等. 桂皮酸聯合 Ndfipl 對人肝癌玖胞 SMMC-7721 細胞增殖與凋亡的協同效應. 實用臨床醫藥雜誌， 2011； 15（2）： 27-30；張剋儉等. 桂皮酸誘導NB細胞凋亡. 武漢大學學報-醫學版， 2003， 24（4）： 327；朱文淵等. 桂皮酸協同維生素 C 對HL-60的細胞誘導分化. 腫瘍防治硏究， 2003， 30（2）： 92]（여준명 등. 계피산연합Ndfipl의 인간 간암세포SMMC-7721세포 증식과 사멸에 대한 시너지 효과. 실용임상의약잡지, 2011; 15(2): 27-30;장각검 등. 계피산이 NB세포의 사멸을 유도. 무한대학학보- 의학판, 2003, 24(4): 327; 주문염 등. 계피산 연합 비타민C 의 HL-60의 세포에 대한 유도 분화. 종양 방지 연구, 2003, 30(2): 92]이 있고, 체외에서 흑색종 및 간암세포의 증식을 억제 가능하고 또한 그의 분화를 촉진시킬 수 있으며 (黃褘等. 桂皮酸柔道BEL-7402人肝癌玖胞分化的硏究. 實用腫瘍雜誌，2000, 15: 12)（황위 등. 계피산이 BEL-7402 인간 간암세포 분화를 유도하는데 관한 연구. 실용암잡지, 2000, 15: 12）, DNA에 간접적으로 결합하여 일부 유전자의 발현을 제어할 수 있고, 종양 세포의 생장 증식을 차단하고 배 독성을 나타내지 않으며 [zhang Q H, ShengH P, LohTT. Bcl-2 protects HL-60 cells from apoptosis by stabilixzing their intracellular calcium pools. Life Sci, 2001, 68(2): 873]; 별도의 보도에 따르면 계피산은 결핵병 등의 치료에 사용 가능하다[李文蘭等. 不同來源桂皮酸的藥物動力學桔究，中國中藥雜誌， 2008； 33（10）： 1192-1195]等（이문란 등. 부동한 원산지의 계피산의 약물동력학 비교 연구, 중국중약잡지, 2008; 33(10): 1192-1195）.. 계피산 등은 의약, 식품 첨가제, 화장품, 농업용화학품 등 분야에서 광범히 응용된다[劉景陶等. 桂皮酸衍生物的合成. 求醫問藥（下半月刊），2012；10（1）：351-352]（류경도 등. 계피산 유도체의 합성. 구의문약（하반월간）, 2012; 10(1): 351-352）.

계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드는 다양한 생리 활성과 약용 가치를 가지고 있다. 이성(易醒) 등 [肉桂油微乳中桂皮酸含量的高效液相色譜法測定.時珍國醫國藥，2011；22（6）：1325-1326](계피유 마이크로 에멀젼 중 신남 알데히드 함량의 고속액체 크로마토그래피 측정.시진국의국약, 2011: 22(6): 1325-1326]의 보도에 따르면 "계피유는 의약, 식품 및 경화학공업에 광범하게 사용된다. 현대 연구가 나타낸 바로는 계피유는 항균, 항종양, 항궤양, 혈당강하, 항혈전, 해열, 진통, 진경, 강정, 살충, 항산화 등 다양한 작용을 갖고 있다. 신남 알데히드는 계피유의 주요 활성물질이고, 계피유 중 신남 알데히드의 함량이 매우 높은 바, 약 80-95%이다. 신남 알데히드는 혈액 중에서 매우 불안정하며, 내복 또는 정맥투약하여 혈액에 진입된 후 신속히 약리성이 비교적 낮은 계피산으로 산화되며, 또한 역전환이 불가하다".

전기의 연구가 증명 한 바로는 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드가 항혈전 작용[黃敬群等. 桂皮酸對抗血小板聚集和血栓形成的特点.中國臨床康復；2006；10（31）：34-36]（황경군 등. 항혈소판응집과 혈전 형성에 대한 신남 알데히드의 특점. 중국임상재활; 2006; 10(31): 34-36）및 항종양 작용[黃敬群等.桂皮酸對裸鼠人胃癌細胞移植瘤生長及凋亡的影響. 解放軍藥學學報，2006；22（5）：343-346]（황경군 등. 누드 마우스 인간 위암세포 이식 종양의 생장 및 사멸에 대한 신남 알데히드의 영향. 해방군약학학보, 2006; 22(5): 343-346）을 갖고 있고, 또한 항콕사키바이러스작용을 통해 바이러스성 심근염을 치료 [丁媛媛等. 桂皮酸對小鼠柯薩奇病毒誘發病毒性心肌炎的作用. 天然産物硏究與開發，2010；22（5）：769-776；Yuanyuan Ding,ed al.Influence of Cinnamaldehyde on Viral Myocarditis in Mice. Am J Med Sci. 2010; 340(2): 114-20] （정원원 등. 마우스 콕사키 바이러스 유발 바이러스성 심근염에 대한 신남 알데히드의 작용. 천연산물의 연구와 개발, 2010； 22（5）： 769-776； Yuanyuan Ding,ed al.Influence of Cinnamaldehyde on Viral Myocarditis in Mice. Am J Med Sci.2010;340(2):114-20）하는 등 약리 작용을 처음으로 발견하였으며, 이미 2007년에 중국 발명 특허를 제출하였으며 출원번호는 각각 200410073298.5와 200610042919.2이다.

본 발명의 목적은 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드가 항폐암 약물을 제조함에 있어서의 용도를 제공하는 것이다.

본 발명의 목적을 실현하기 위하여, 본 발명이 제공한 항폐암 약물의 유효성분은 계피유 및/또는 신남 알데히드, 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드, 또는 계피유 및/또는 신남 알데히드, 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드 함유 리포솜 또는 나노입자이고, 임의로 적당한 량의 부형제를 함유한다.

전술한 항폐암 약물은 하기 중량부의 원료로 제조된다:

성분I 0.5-10

부형제 9.5-90

그중, 성분 I는 계피유 및/또는 신남 알데히드, 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드, 또는 계피유 및/또는 신남 알데히드, 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드 함유 리포솜 또는 나노입자이다.

약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드는 계피유 및/또는 신남 알데히드의 칼륨염, 나트륨염, 메틸에스테르, 에틸에스테르, 벤질 에스테르 또는 아미드이고, 부형제는 접착제, 충전제, 윤활제, 항산화제, 교미제，조용매，가용화제, 유화제 또는 분산제에서 선택되는 하나 이상이다. .

상기 항폐암 약물은 산제, 정제, 환제, 캡슐제, 연질캡슐, 나노입자, 합제, 에멀젼 또는 주사제 등 제형으로 제조 가능하다.

몇가지 상기 항폐암 약물의 제조방법을 열거해 본다면:

우선 원료약 질량 검측을 진행한다: 계피유 및/또는 신남 알데히드 원료약을 취하여 《중국약전》2010판 1부 P378 계피유 항목 하의 가스크로마토그래피를 참조하여 계피유 및/또는 신남 알데히드 원료약 중의 신남 알데히드의 함량을 검측한다. 그중 계피유 중 신남 알데히드의 함량은 반드시 75%이상이어야 하며; 신남 알데히드 원료약중 신남 알데히드의 함량은 98%이상이어야 한다.

그 다음에, 계피유 및/또는 신남 알데히드의 염, 에스테르, 아미드, 리포솜 등의 제조를 진행한다: 중량부의 요구에 따라, 검측 합격된 계피유 및/또는 신남 알데히드 원료약을 취하고, 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드의 요구에 따라, 계피유 및/또는 신남 알데히드를 각각 칼륨염 또는 나트륨염, 메틸에스테르/ 또는 에틸에스테르/ 또는 벤질 에스테르, 아미드, 리포솜으로 제조하는 바 구체제조방법은 하기와 같다:

A. 신남 알데히드 아미노산 시프염기 칼륨염의 제조: 글리신 칼륨염을 취하여 반응 용기에 넣고, 메틸 알콜을 넣어 글리신 칼륨염 메틸알콜 용액을 제조하고, 질소를 넣어 보호하고, 실온 조건하에서 검측 합격된 중량부의 계피유 및/또는 신남 알데히드 원료약을 점적하는 동시에 교반하며, 점적이 완료된 후 계속하여 실온 조건하에서 백색 고체가 석출될 때까지30분간 반응하고, 보온 반응을 2시간 진행하면, 용액이 담홍색을 띄게 되며, 여과하고, 고체를 백색이 될 때까지 무수 에테르로 세척하고, 진공건조하여 신남 알데히드 아미노산 시트염기 칼륨염을 얻는다.

B. 계피산 메틸의 제조: 신남 알데히드와 메틸알코올을 촉매의 조건하에서 계피산 메틸로 합성한다. V₂O₅/H₂O₂를 촉매로 할 경우, 수확률이 95%이고, PhI(OCOCH₃)₂/I₂를 촉매로 할 경우, 수확률이 83%이다.

C. 에틸파라메톡시신나메이트의 제조: p-메톡시벤조산(p-methoxybenzoic acid) 7.2g(0.04mol), 에탄올 24ml(0.4mol)과 파라톨루엔설폰산 1g을 100ml 삼각 플라스크에 넣고, 환류냉각관을 설치하고, 자력 교반을 작동시키며, 수욕 가열을 진행하고, 환류반응을 2.5시간 진행한다. 약간 냉각된 후, 증류장치로 바꿔 사용하여, 수욕에서 과량의 에탄올을 증발시켜 낸다(회수). 다음 냉각시키고, 반응물을 빙수 중에 주입하며, 점차적으로 큰 덩어리의 유백색 고체가 석출된다. 고체물을 가루로 만들어 흡인 여과시켜, 각각 물, Na₂Co₃용액과 물로 충분히 침적시키고, 세척하고, 수분을 빼내고，건조되도록 말린 후 7.5g의 유백색 고체를 얻는 바 산율은 91%이다. 고체물을 적당한 량의 에테르에 용해시켜 추가로 정제하고, 에테르층이Na₂CO₃에 의해 충분히 세척된 후, 중성이 될 때까지 물로 세척하며, Na₂So₄를 건조하고 밤을 지내여 Na₂So₄를 여과해 낸다, 수욕 상에서 에테르를 증발시켜 제거하고 잔여물을 냉각시켜 천천히 백색 결정이 석출되면 얻는다.

D. 벤질신나메이트의 제조: 증류수 50ml, 계피산 나트륨(등몰의 계피산과 수산화나트륨을 반응시켜 얻음) 0.05mol, 염화벤질 0.06mol, 일정한 량의 촉매(테트라부틸암모늄 염화물)을 담은 250ml 플라스크를 개장을 거친 전자 레인지에 넣고, 구형 응축관을 전자 레인지 꼭대기의 작은 구멍을 통과하여 둥근 바닥 플라스크와 연결하고, 일정한 공률의 마이크로파를 선택 사용하여 일정한 시간 동안 복사 한 후, 실온이 될 때까지 정치하여 냉각시키며(static cool down), 반응액을 분액 깔때기 중에 부어 넣고 정치하여 분층 된 후 유기상을 중성이 될 때까지 물로 세척하고, 수증기 증류를 통하여 과량의 염화벤질을 제거한 후, 식기 전에 분액을 진행하여 반응하지 않은 계피산 나트륨을 제거하여 조제품을 얻는다. 조제품에 대하여 감압 증류를 진행하여, 먼저 220-245℃/2926Pa의 분획(fraction)을 수집하고 계속 감압 증류를 진행하여 228-230/2926Pa의 분획(fraction) 수집하며, 즉 정제품을 얻는다.

E. 계피 아미드의 제조: 교반기와 온도계를 장착한 삼구플라스크 중에 에탄올 15.5g(0.25mol)과 테트라히드로푸란 18ml를 넣고, 교반하면서 이미 얻은 신나모일 클로라이드 20.8g(0.125mol)과 테트라히드로푸란 20ml의 혼합액을 반응 병 중에 점적시키고, 이때 연기가 생기고, 또한 온도가 상승한다. 냉수욕으로 반응 체계의 온도를 10℃-15℃로 제어하고, 다 점적시킨 후 30분간 계속 교반 반응한 다음 반응액을 빙수-염산 혼합액 120ml-150ml 중에 부어 넣어, 고체가 석출되게 되며, 고체를 여과하여 건조시키고, 조생성물(crude product)을 에틸 에스테르 150ml를 사용하여 재결정(recrystallization)을 진행하여 백색의 고체 산품을 얻는다.

제제 성형: 계피유 및/또는 신남 알데히드 원료약, 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드, 또는 계피유 및/또는 신남 알데히드, 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드 함유 리포솜 또는 나노입자 및 한가지 또는 여러가지 부형제를 취하여 제제 통칙에 따라 임상에서 비소세포형 폐암 질병 치료에 사용 가능한 여러가지 제제로 각각 제조한다.

본 발명에서 MTT 등 방법을 이용하여 연구하고 증명한 바로는 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드가 비소세포형 폐암세포 A549에 대해 현저한 억제 작용이 있으며, 또한 신남 알데히드의 최종 대사산물 계피산이 A549에 대해 억제 작용이 없거나 억제작용이 극히 약하며, 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드는 비소세포형 폐암 치료 약물로 개발 할수 있는 전망을 갖고 있다는 것을 나타낸다. 그 장점은 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드 원료가 매우 풍부하고 가격이 저렴하며 부작용이 작고 제형 선택이 용이하며, 제제 성분이 명확하고, 제조공정 및 그의 질량 표준을 쉽게 제어할 수 있으며 양호한 시장 순응성을 갖고 있다.

도 1은 본 발명의 실시예1중 계피유의 상이한 농도에서의 비소세포형 폐암세포 A549의 생장 곡선도이다.
도 2는 본 발명의 실시예1중 신남 알데히드의 상이한 농도에서의 비소세포형 폐암세포 A549의 생장 곡선도이다.
도 3은 본 발명의 실시예1중 계피산의 상이한 농도에서의 비소세포형 폐암세포 A549의 생장 곡선도이다.
도 4는 본 발명의 실시예 1중0.05mg/ml 시스플라티늄(cis-platinum) 주사액 양성대조군이 비소세포형 폐암세포 A549에 대한의 생장 곡선도이다.
도 5는 본 발명의 실시예1중 MTT방법에 따라 상등액을 수집하여 HPLC 검측을 진행한 결과이며; 그중, 5.429에 대응하는 피크는 계피산이고, 8.277에 대응하는 피크는 신남 알데히드이다.
도 6은 본 발명의 실시예1중 MTT방법에 따라 상등액을 수집하여 HPLC 검측을 진행한 기준선 즉 공백 샘플의 검측결과이다.
도 7은 본 발명의 실시예1중 MTT방법에 따라 상등액을 수집하여 HPLC 검측을 진행한 결과이며; 그중 5.613에 대응하는 피크는 계피산 표준품이다.
도 8은 본 발명의 실시예1중 MTT방법에 따라 상등액을 수집하여 HPLC 검측을 진행한 결과이며; 그중 5.650에 대응하는 피크는 계피산이고, 8.461에 대응하는 피크는 신남 알데히드이다.
도 9는 본 발명의 실시예1중 MTT방법에 따라 상등액을 수집하여 HPLC 검측을 진행한 결과이며; 그중 5.615에 대응하는 피크는 계피산이고, 8.450에 대응하는 피크는 신남 알데히드이다.
도 10은 본 발명의 실시예1중 MTT방법에 따라 상등액을 수집하여 HPLC 검측을 진행한 결과이며; 그중 5.655에 대응하는 피크는 계피산이고, 8.469에 대응하는 피크는 신남 알데히드이다.

하기 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것이며 본 발명의 범위를 한정하기 위한 것이 아니다. 구체적으로 지적하지 않은 경우, 실시예 중에서 사용되는 기술수단은 당해 분야의 기술자가 숙지한 통상적인 수단이고, 사용한 원료는 모두 시판품이다.

[실시예 1] 비소세포형 폐암세포 A549에 대한 계피유, 신남 알데히드와 계피산의 작용에 대한 실험 연구

1.1 재료 및 유래

비소세포형 폐암세포 A549는 중국의학과학원종양연구소로부터 구입한 것이다.

1.2 실험방법

0.25%의 트립신을 사용하여 단층 배양세포 A549를 소화시키고, 10%의 우태아 혈청 함유 RPMI1640 배양액을 사용하여 단일 세포 현탁액을 제조하고, 96 웰 플레이트 중에 각 웰에 약 10⁴개의 세포를 접종하며, 각 웰의 체적은 100㎕이다. 배양 플레이트를 CO₂ 인큐베이터에 넣고, 37℃, 5% CO₂ 및 포화습도 조건 하에서 하루동안 배양한다.

계피유, 신남 알데히드와 계피산을 모두 최종 농도 0.05%, 0.04%, 0.03%, 0.02% 와 0.01%가 되도록 제조하고, 양성 대조군은 임상에서 응용되고 있는 시스플라티늄(cis-platinum) 주사액(남경제약공장유한공사)이고 최종 농도가 0.05mg/ml이며, 용매는 모두 우태아 혈청을 포함하고 있지 않는 RPMI1640배양액이다.

세포를 하루동안 배양한 후, 제조된 3가지 시약(매 한가지 시약은 5개 농도를 제조함)을 각각 96웰 세포 배양 플레이트 중에 넣고, 매개 농도에 4개의 중복 웰(復孔)을 설치하고, 매개 웰에 100㎕를 넣은 다음 CO₂ 인큐베이터에 계속 넣어두고, 37℃, 5% CO₂및 포화습도 조건하에서 11시간 배양시킨 후 매개 웰에 MTT용액(5mg/ml) 20㎕를 넣고 37 ℃ 조건하에서 4시간 계속 부화시키고, 배양을 마치며, 웰내 상등액을 흡인 제거하고, 매개 웰에 DMSO 150㎕를 넣고 10분간 흔들어 포르마잔이 충분히 용해되게 한다. 490nm의 파장을 선택하여 BIV-TEK INSTRUMENTS INC에서 매개 웰의 광 흡수치(표 1-표 4)를 측정하며, 시약 농도를 가로축으로 하고 광흡수치(A)를 세로축으로 하여 세포 성장 곡선도(도 1-도 4)를 제작하였다.

계피유의 상이한 농도에서의 A549의 MTT측정 광흡수치 (A/490nm)

중복 웰	농도(%)
중복 웰	공백	0.01	0.02	0.03	0.04	0.05
1	1.295	1.196	0.511	0.323	0.24	0.207
2	1.238	1.441	0.555	0.345	0.264	0.235
3	1.113	1.403	0.463	0.358	0.256	0.255
4	1.022	1.345	0.433	0.365	0.257	0.206
평균치	1.167	1.346	0.490	0.347	0.254	0.225

신남 알데히드의 상이한 농도에서의 A549의 MTT측정 광흡수치 (A/490nm)

중복 웰	농도(%)
중복 웰	공백	0.01%	0.02%	0.03%	0.04%	0.05%
1	1.473	0.902	0.259	0.208	0.211	0.163
2	1.355	0.871	0.27	0.295	0.281	0.235
3	1.353	1.028	0.303	0.282	0.277	0.214
4	1.355	0.998	0.332	0.278	0.266	0.212
평균치	1.384	0.94975	0.291	0.26575	0.25875	0.206

계피산의 상이한 농도에서의 A549의 MTT측정 광흡수치 (A/490nm)

중복 웰	농도(%)
중복 웰	공백	0.01%	0.02%	0.03%	0.04%	0.05%
1	1.171	1.516	1.511	2.099	2.073	1.018
2	1.000	1.08	1.535	1.862	1.976	0.98
3	1.027	1.032	1.474	0.941	1.16	1.013
4	1.187	1.101	1.522	1.102	1.037	1.002
평균치	1.096	1.182	1.510	1.501	1.561	1.003

시스플라티늄 주사액에서의 A549의 MTT측정 광흡수치 (A/490nm)

중복 웰	공백	시스플라티늄(농도 0.05mg/ml)
1	0.63	0.254
2	0.599	0.243
3	0.558	0.247
4	0.535	0.264
평균치	0.5805	0.252

표 1-표 4 및 그의 대응되는 세포 생장 곡선도로부터 보아 낼수 있는 바와 같이, 양성 대조군 시스플라티늄 주사액과의 대비를 통하여 계피유 및 그의 주성분인 신남 알데히드는 A549에 대해 현저한 억제작용이 있으며 또한 최적 농도가 모두 0.05%이며; 계피산은 억제작용을 발생하지 않거나 극히 약한 억제작용을 발생한다. 계피유 및 신남 알데히드는 체내에서 불안정하며 추가로 계피산으로 쉽게 대사된다. 이로부터 알수 있는 바, A549에 대하여 억제작용을 발생하는 것은 계피유와 신남 알데히드이고, 최종 대사산물 계피산은 A549에 대하여 억제작용을 하지 않거나 극히 약한 억제작용을 한다.

계피유, 신남 알데히드와 계피산을 농도가 0.05%인 용액으로 제조하고, MTT방법에 따라 각각 96 웰 플레이트에서 배양 된 세포 중에 넣고, 각각 3시간 동안 배양된 세포상등액을 수집하며, 10000r, 4℃에서 10분간 원심처리를 진행하고, 상등액을 취하여 HPLC검측을 진행하며, 그의 이동상은 아세토니트릴-0.3% 인산=1:1(v/v)이고, 상이한 피크출현시간(appearance time)을 기록하고 또한 그에 포함된 약물 성분 및 그의 함량을 추가로 분석한다.

계피유 및 신남 알데히드는 체내에서 불안정하며 추가로 계피산으로 쉽게 대사되는 바, MTT결과(도 5-도 10)를 종합하면, 3시간 반응 한 후 계피유와 신남 알데히드는 모두 효과를 나타냈고 또한 계피산 피크가 나타났지만 계피산은 합격품 도보와 뚜렷한 차이가 없는 바, A549에 대해 억제 작용을 하는 것은 계피유와 신남 알데히드이고, 그의 최종 대사산물 계피산은 A549에 대해 억제작용을 하지 않거나 극히 약한 억제작용을 한다는 것을 제시한다.

이상 실험결과는 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드는 비소세포형 폐암세포 A549에 대해 현저한 억제작용이 있으며, 폐암을 치료하는 약물로 개발될 전망이 있다는 것을 표명한다.

[실시예 2] 계피유 및/또는 신남 알데히드 고체 제제의 제조

1.1 계피유 및/또는 신남 알데히드 함유 마이크로 캡슐: pH조절법을 이용하여 적당한 량의 젤라틴과 아라비아 고무를 용해한 후 혼합하고, 소정 질량부의 계피유 및/또는 신남 알데히드를 넣고, 고속분산기로 혼합유화시킨 다음 다른 용기에 이동시켜 증류수를 넣어 원하는 농도가 될 때까지 희석하고, 40℃에서 교반하고, 또한 10% 초산용액을 점적하여 체계를 pH4-5까지 조절하고, 15분간 온도를 유지(항온)한 후 빙수욕으로 온도를 10℃정도까지 낮추고 10% 수산화나트륨 용액으로 pH를 6.0까지 조절하고, 글루타민 아미노 전이효소를 넣어 마이크로 캡슐을 동화시켜 마이크로 캡슐 분산액을 얻는다. 흡인 여과를 거치고 물로 세척하여 습한 마이크로 캡슐 분산액을 얻고, 분무 건조를 거친 후 계피유 및/또는 신남 알데히드 마이크로 캡슐을 얻는다.

1.2 계피유 및/또는 신남 알데히드 β-시클로덱스트린 내포 화합물:에탄올,아세톤, 이소케톨과 에틸 에스테르를 계피유의 용매로 한다. β-시클로덱스트린(β-CD)을 90℃ 증류수 중에 넣어 포화용액을 제조하고 800r/min 조건 하에서 용매에 용해된 계피유(β-CD와 계피유의 원료 투입 중량비는 13:1임)를 천천히 점적시키고 1시간 교반한 후 냉장고에 넣어 24시간 냉장하고, 여과하고 또한 소량의 증류수를 사용하여 세척하여 부분적인 내포되지 않은 β-CD를 씻어내고, 저온에서 24h 동안 진공 건조시키고, 연마한 후, 80 메쉬를 통과하여 조제 내포 화합물을 얻는다. 조제 내포 화합물을 에틸 에스테르로 3번 세척한 후 말리면 푸석한 형태의 백색 내포 화합물 분말을 얻는다.

1.3 고체 마이크로 캡슐 중 신남 알데히드 함량 검측: 《중국약전》 2010년판 1부 부록VIE "가스크로마토그래피"에 따라 고체 마이크로 캡슐과 내포 화합물 분말 중의 신남 알데히드의 함량을 검측한다.

1.4 제제성형: 《중국약전》 2010년판 1부 부록I "제제통칙"에 따라 예를 들어 전분 및/또는 유당 등과 같은 적합한 부형제를 사용하여, 연질재료를 제조하고 각각 신남 알데히드를 표시함량으로 하는 환제, 산제 과립제, 정제, 캡슐제 등 제제를 제조하여 얻는다.

[실시예 3] 계피유 및/또는 신남 알데히드 액체 제제의 제조

1.1 계피유 및/또는 신남 알데히드 함유 용액: 실온 조건하에서 계피유 및/또는 신남 알데히드를 취하여 용기중에 넣고 적당한 량의 조용매/또는 가용화제, 분산제 등을 넣고 충분히 혼합한 다음 증류수를 천천히 점적시키는 동시에 교반하한다. 시작 할 때 체계의 점착성이 비교적 작고, 물의 량의 증가에 따라, 체계는 점차적으로 걸죽해지고 혼탁해지며, 체계가 걸죽하고 혼탁한 상태로부터 희박하고, 맑게 될 때까지 증류수 점적과 교반을 계속 진행하여 계피유 및/또는 신남 알데히드 함유 용액을 얻으며; 이때의 물주입량을 기록한다.

1.2 계피유 및/또는 신남 알데히드의 리포솜: 박막처리법/주입법/동결융해법 중의 임의의 한가지 제조방법을 사용할 수 있다. 예를 들면 실온조건 하에서, 계피유 및/또는 신남 알데히드, 부형제, 예를 들면 인질재료를 취하여 용기 중에 넣고 에탄올 등 용매를 넣고 혼합액으로 혼합한 후 균일하게 교반하고 유기용제를 휘발시키고 용기 중의 박막을 얻어, 증류수 또는 완충용액을 사용하여 박막을 용해시키고, 균질, 교반, 와류(vortex) 또는 초음파 처리를 통하여 리포솜을 얻는다.

1.3 계피유 및/또는 신남 알데히드 용액 또는 리포솜 중의 신남 알데히드 함량을 검측한다: 《중국약전》 2010년판 1부 부록VIE 《가스크로마토그래피》에 따라 신남 알데히드의 함량을 검측한다.

1.4 제제성형: 《중국약전》 2010년판 1부 부록I "제제통칙"에 따라, 적당한 량의 교미제/또는 유화제 및/또는 분산제 등 부형제를 첨가할 수 있고 각각 신남 알데히드를 표시함량으로 하는 합제, 점적 환제(pill)，주사제 등 제제로 제조한다.

비록 이상에서 본 발명에 관하여 일반적인 설명 및 구체적 실시방법을 통해 상세한 서술을 진행하였지만 본 발명의 기초상에서 그에 대해 일정한 수정과 개진을 할 수 있는 바 이는 당해 분야의 기술자에 있어서 자명한 것이다. 따라서, 본 발명의 주지를 벗어나지 않는 기초상에서 진행되는 수정 또는 개진은 모두 본 발명이 보호하고자 하는 범위에 속한다.

산업상 이용 가능성

본 발명은 MTT등 방법을 이용하여 연구하고 증명하였는 바 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드가 비소세포형 폐암세포 A549에 대해 현저한 억제작용이 있지만 신남 알데히드의 최종 대사산물 계피산은 A549에 대해 억제작용이 없거나 억제작용이 극히 약하다. 계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드는 항폐암 약물을 제조하는데 사용 가능하며 그 원료가 풍부하고 가격이 저렴하며 독부작용이 적고 제형 선택이 용이하며 제제성분이 명확하고 제조공정 및 그 질량표준을 쉽게 제어할수 있어 양호한 시장 순응성과 응용 전망을 갖고 있다.

Claims

계피유 및 그의 주성분 신남 알데히드가 항폐암 약물을 제조함에 있어서의 용도.
유효성분이 계피유 및/또는 신남 알데히드, 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드, 또는 계피유 및/또는 신남 알데히드, 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드 함유 리포솜 또는 나노입자이고 적당한 량의 임의의 부형제를 함유하는 것을 특징으로 하는 항폐암 약물.
제2항에 있어서,
상기 항폐암 약물은 하기 중량부의 원료로 제조되고:
성분I 0.5-10
부형제 9.5-90;
그중, 성분 I가 계피유 및/또는 신남 알데히드, 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드, 또는 계피유 및/또는 신남 알데히드, 또는 그들의 약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드 함유 리포솜 또는 나노입자이며;
약학적으로 허용 가능한 염, 에스테르 또는 아미드는 계피유 및/또는 신남 알데히드의 칼륨염, 나트륨 염, 메틸에스테르, 에틸에스테르, 벤질 에스테르 또는 아미드이고, 부형제는 접착제, 충전제, 윤활제, 항산화제, 교미제, 조용매, 가용화제, 유화제 또는 분산제에서 선택되는 하나 이상인, 항폐암 약물.
제2항 또는 제3항에 있어서,
상기 약물은 산제, 정제, 환제, 캡슐, 나노입자, 합제, 에멀젼 또는 주사제로 제조 가능한 것을 특징으로 하는 항폐암 약물.