KR20140129184A

KR20140129184A - 지방 세포를 포함하는 세포 제제

Info

Publication number: KR20140129184A
Application number: KR1020147025823A
Authority: KR
Inventors: 마사노리 사에키
Original assignee: 마사노리 사에키
Priority date: 2012-02-24
Filing date: 2013-02-22
Publication date: 2014-11-06
Also published as: KR102159844B1; WO2013125674A1; CN111671774A; CA2865383A1; CN104203257A; RU2746915C2; RU2014138500A; EP2818173A4; JPWO2013125674A1; SG10201800017RA; EP2818173B1; JP5572777B2; US20150044179A1; SG11201405110TA; CA2865383C; EP2818173A1

Abstract

본 발명의 주목적은 골 관절 질환의 치료, 및 퇴행되었거나 또는 손상된 근육을 회복시키는 데 유용한 세포 제제를 제공하는 것이다.
본 발명은 지방 세포를 포함하는 골 관절 질환 치료용 세포 제제, 및 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 근육 회복용 세포 제제를 제공한다.

Description

지방 세포를 포함하는 세포 제제{CELL PREPARATION INCLUDING FAT CELL}

본 발명은 골간 관절(interosseous joint) 질환에 의해 야기되는 통증의 완화 및 이 질환의 치료에 유용한 세포 제제에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 퇴행성 근육 또는 손상된 근육의 복구에 유용한 세포 제제에 관한 것이다.

인간 연조직의 체적을 늘리는 일환으로, 히알루론산 주사, 지방 세포 이식 등이 알려져 있으며, 얼굴 주름의 제거, 함몰(excavation) 치료 및 유방 재건과 같이 미용학적 수술, 성형 수술 등의 분야에 종종 사용된다. 그러나, 히알루론산 주사에 의한 치료가 용이하지만, 주입된 히알루론산은 약 반년 내에 흡수되어 효과의 지속성(durability)이 불량하다는 단점이 있다. 또한, 지방 세포 이식의 경우, 지방 세포는 종종 이식 후에 괴사하거나 또는 생체에 흡수된다. 따라서, 재수술이 필요할 수 있거나 또는 어떤 경우 흉터가 생길 수 있는 단점이 있다.

이러한 단점들을 없애기 위해, 아디포스 줄기 세포(adipose stem cell)의 이식이 제안되었으며, 아디포스 줄기 세포를 효율적으로 분리하는 방법이 개발된 바 있다 (예를 들어, 특허 문헌 1 및 2 참조). 아디포스 줄기 세포를 이식함으로써, 이식 후 세포의 고정비(fixation ratio)가 향상되며, 연조직의 재생에서 소정의 효과가 인지된다. 그러나, 이러한 방법으로 수득되는 아디포스 줄기 세포는 일부 경우 불순물을 포함할 수 있으며, 이 불순물은 이식 후 지방 세포의 괴사 또는 덩어리(lump) (석회화)를 야기할 가능성이 있다. 지방 세포는 일반적으로 지방흡입술에 의해 수득되며, 흡입된 아디포스는 지방 세포와 아디포스 줄기 세포 외에도 매우 다양한 불순물들을 포함하는 혼합물이다. 이러한 혼합물로부터 제거되어야 하는 불순물들로는, 혈액 (특히 적혈구), 패탈/바이탈 세포(fatal/vital cell), 노화 세포 등을 포함한다. 한편, 특허 문헌 3에서, 지방흡입술에 의해 수집되며 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 혼합물로부터, 가중 필터(weight filter)가 구비된 주사기를 사용하여 원심분리에 의해, 석회화 또는 지방 괴사를 야기하는 불순물을 제거함으로써 제조되는 건강한 농축 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제 (Condensed Rich Fat: CRF (상표 등록됨))를 주사하는 방법이 제안되어 있다. 이러한 방법으로, 세포의 고정비는 향상되며, 덩어리 형성과 같은 문제는 거의 발생하지 않는다. 따라서, 이러한 방법이 광범위하게 수용되고 있다.

전술한 바와 같이, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포의 분리 및 농축을 위한 매우 다양한 기술이 개발되며, 안전하며 고정성(fixability)이 우수한 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포가 제공될 예정이다. 그러나, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포의 이식은 지금까지 대부분의 경우 연조직 재생에 적용되어 왔으며, 예를 들어, 관절통 완화 또는 관절 조직 재생에 있어서 이들 세포의 효능은 충분히 검증되지 않았다. 또한, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 손상된 근육에 투여함으로써 근육이 복구되는지도 알려져 있지 않다.

특허 문헌 1: JP 2005-519883 W 특허 문헌 2: JP 2007-509601 W 특허 문헌 3: JP 2007-533396 W

본 발명의 주목적은 골간 관절 질환에 의해 야기되는 통증의 완화 및 이 질환의 치료에 유용한 세포 제제를 제공하는 것이다. 또한, 본 발명의 또 다른 목적은 손상된 근육의 복구에 유용한 세포 제제를 제공하는 것이다.

본 발명자들은 상기 문제점들을 해결하기 위해 성실히 연구를 수행하였으며, 관절통으로 호소하는 환자에게 지방 세포를 주사하면 조기에 증상을 완화할 뿐만 아니라 그 효과가 지속된다는 것을 발견하였다. 나아가, 본 발명자들은 또한, 지방 세포와 아디포스 줄기 세포의 조합을 주사하면 상기 관절통 완화 외에도 골 조직 또는 연골 조직이 효율적으로 재생된다는 것을 발견하였다. 또한, 본 발명자들은, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 근육 손상 부위에 투여하면 손상된 근육이 복구된다는 것을 발견하였다. 이들 발견을 토대로 연구를 보다 계속한 결과, 본 발명이 완성되었다.

즉, 본 발명은 세포 제제, 골간 관절 통증의 완화 방법, 골간 관절 조직의 재생 방법, 근육 복구 방법, 및 하기의 측면들을 제공한다:

항목 1. 지방 세포를 포함하는, 골간 관절 질환 치료용 세포 제제.

항목 2. 항목 1에 있어서, 중배엽성 줄기 세포를 추가로 포함하는 세포 제제.

항목 3. 항목 1에 있어서, 중배엽성 줄기 세포가 아디포스 줄기 세포인, 세포 제제.

항목 4. 항목 1에 있어서, 지방 세포 1개 당 중배엽성 줄기 세포를 1개 내지 10개로 포함하는, 세포 제제.

항목 5. 항목 1에 있어서, 지방 세포가 감마선 조사를 받은 세포인, 세포 제제.

항목 6. 항목 1에 있어서, 골간 관절 질환이 척추 질환, 관절 질환, 자가면역 질환 및 골괴사로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 한 종류인, 세포 제제.

항목 7. 골간 관절 질환용 치료제의 제조를 위한, 지방 세포를 포함하는 세포 제제의 용도.

항목 8. 골간 관절 질환의 치료에 사용하기 위한, 지방 세포를 포함하는 세포 제제.

항목 9. 지방 세포를 포함하는 세포 제제를 골간 관절 질환 환자의 골간 간절에 투여하는 단계를 포함하는, 골간 관절 통증을 완화하는 방법.

항목 10. 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 골간 관절 질환 환자의 골간 관절에 투여하는 단계를 포함하는, 골간 관절을 재생하는 방법.

항목 11. 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는, 근육 복구용 세포 제제.

항목 12. 항목 11에 있어서, 중배엽성 줄기 세포가 아디포스 줄기 세포인, 세포 제제.

항목 13. 항목 11에 있어서, 지방 세포 1개 당 중배엽성 줄기 세포를 1개 내지 10개로 포함하는, 세포 제제.

항목 14. 항목 11에 있어서, 지방 세포가 감마선 조사를 받은 세포인, 세포 제제

항목 15. 근육 복구용 제제의 제조를 위한, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제의 용도.

항목 16. 근육 복구에 사용되는, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제.

항목 17. 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 근육 손상 환자의 근육 손상 부위에 투여하는 단계를 포함하는, 근육을 복구시키는 방법.

본 발명의 지방 세포를 포함하는 세포 제제에 의해, 지방 세포, 이 지방 세포 등의 주변에 존재하는 ECM (세포외 기질)에 의해 관절 등의 활강(sliding)을 개선함으로써, 관절통을 조기에 완화할 수 있으며, 골간 관절 질환에 의해 유발되는 통증의 완화에서 우수한 효과가 수득될 수 있다. 또한, 예를 들어, 본 발명의 세포 제제를 추간판(intervertebral disk) 등에 주사함으로써, 세포 제제는 쿠션(cushion)으로 작용하고 척추체(vertebral body)의 움직임을 양호하게 하는 효과(개선)를 발휘한다. 나아가, 본 발명의 세포 제제에 의한 관절통 완화 효과는 장기간 지속된다.

또한, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 본 발명의 세포 제제에 의해, 골간 관절 질환에 의해 유발되는 통증은 지방 세포에 의해 완화되며, 이러는 동안 중배엽성 줄기 세포에 의한 골 조직, 연골 조직 또는 연조직과 같은 관절 조직의 재생이 증강된다. 또한, 지방 세포와 중배엽성 줄기 세포의 조합을 사용하면, 상기 통증이 완화될 수 있을 뿐만 아니라, 지방 세포의 작용에 의해 중배엽성 줄기 세포가 환부(affected area)에 유지되기 때문에 중배엽성 줄기 세포의 점유 퍼센트(take percentage)와 조직의 재생 효율이 보다 더 증강될 수 있다. 따라서, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 본 발명의 세포 제제는 골간 관절 질환의 치료에 보다 효과적이다.

또한, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 본 발명의 세포 제제는 근육의 퇴행 또는 수술에 의한 근육의 절제로 손상된 근육에서 탁월한 복구 효과를 가진다. 또한, 세포 제제에 의해, 근육 손상에 의해 유발되는 통증이 조기에 완화될 수 있으며, 따라서, 세포 제제는 환자의 QOL (생활의 질(Quality of Life))의 개선에도 기여한다.

통상적으로, 아디포스 줄기 세포와 같은 중배엽성 줄기 세포를 배양함으로써 조직을 복구하는 방법이 이용되는 경우, 배양 등을 하는 동안 오염되어 이식 후 감염 질환이 야기될 가능성이 있다. 그러나, 본 발명의 세포 제제에 포함되는 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포는 세포 배양 단계를 수행하지 않고도 흡입된 아디포스 등으로부터 직접 분리 및 농축될 수 있기 때문에, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포는 오픈 에어(open air)와의 접촉 없이 제조될 수 있다. 따라서, 감염 질환 등이 발병할 위험이 없다. 또한, 본 발명의 세포 제제는 일반적으로, 골간 관절 질환의 치료나 근육 복구가 필요한 환자 자신으로부터 수집되는 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포로부터 제조되기 때문에, 세포 제제는 면역거부의 문제가 없으며 매우 안전하다.

도 1(a)는 세포 제제의 투여 전 개체 A의 좌측 무릎 관절을 보여주는 X-선 사진이며, 도 1(b)는 세포 제제의 투여 후 약 1개월째에 개체 A의 좌측 무릎 관절을 보여주는 X-선 사진이다.
도 2(a)는 세포 제제의 투여 전 개체 B의 우측 및 좌측 무릎 관절을 보여주는 X-선 사진이며, 도 2(b)는 세포 제제의 투여 후 약 1개월째에 개체 B의 우측 및 좌측 무릎 관절을 보여주는 X-선 사진이다.
도 3은 세포 제제의 투여에 의해 골 조직의 재생이 증강되었으며 골괴사가 개선되었거나 또는 사라진 것을 보여주는 MR 영상의 대표도이다.

1. 세포 제제

본 발명은 후술하는 골간 관절 질환 치료용 세포 제제 및 근육의 복구를 위한 세포 제제를 제공한다. 세포 제제는 본원의 하기에서 상세히 설명될 것이다.

(1-1) 골간 관절 질환 치료용 세포 제제

본 발명은 골간 관절 질환 치료용 세포 제제를 제공하며, 이 제제는 지방 세포를 포함하는 것을 특징으로 한다.

지방 세포는 지방을 합성, 저장 및 방출하는 기능을 가지며 아디포스 조직을 형성하는 세포이다. 또한, 지방 세포는 완전히 분화되기 때문에, 이 세포는 세포 분열을 수행하지 않는다. 지방 세포는 백색 지방 세포 및 갈색 지방 세포로 분류된다. 이 세포들 중 어느 것이나 본 발명에 사용될 수 있으며, 또는 이들 세포 모두의 혼합물이 사용될 수 있다. 본 발명에서, 지방 세포의 기원은 구체적으로 한정되지 않으며, 예를 들어, 포유류의 지방 세포, 바람직하게는 영장류의 지방 세포, 보다 바람직하게는 인간 지방 세포가 사용된다. 본 발명에서, 지방 세포로서, 지방 세포가 단독으로 사용될 수 있거나, 또는 지방 세포 주변의 세포외 기질 (ECM)과 지방 세포의 혼합물이 사용될 수 있다. 구체적으로는, 본 발명에서, 수집된 지방 세포는 그 자체로 사용될 수 있거나, 또는 수집된 지방 세포로부터 세포외 기질을 제거하여 제조된 지방 세포가 사용될 수 있다.

지방 세포는 아디포스 조직으로부터 수집된다. 아디포스 조직의 수집 방법은 구체적으로 한정되지 않으며, 적절하게는 예를 들어, 지방흡입술, 지방제거술, 및 탈지(defatting)를 비롯하여 통상적으로 알려진 방법으로부터 선택된다. 지방흡입술은 상대적으로 용이하며 최소 침습적이기 때문에, 지방흡입술에 의한 수집이 바람직하다. 수집된 지방으로부터 지방 세포를 수득하는 방법은 구체적으로 한정되지 않으며, 바람직하게는 후술하는 방법 2. 세포 제제 제조 방법이다.

또한, 본 발명의 골간 관절 질환 치료용 세포 제제는 중배엽성 줄기 세포를 추가로 포함할 수 있다. 중배엽성 줄기 세포를 포함함으로써, 골간 관절에서 조직의 재생이 증강되며, 본 발명의 세포 제제에 의한 치료 효과가 보다 더 증가될 것이다.

본 발명의 세포 제제에 사용되는 중배엽성 줄기 세포는 주로 중간 줄기 세포를 말하는데, 이는 뼈, 연골, 심근, 및 지방과 같은 중배엽성 조직에 속하는 세포로 분화한다. 중배엽성 줄기 세포의 기원은 구체적으로 한정되지 않으며, 예를 들어, 포유류의 중배엽성 줄기 세포, 바람직하게는 영장류의 중배엽성 줄기 세포, 보다 바람직하게는 인간 중배엽성 줄기 세포가 사용된다.

중배엽성 줄기 세포의 일례로, 아디포스 줄기 세포, 골수 줄기 세포, 조혈모세포 등이 구체적으로 언급되며, 이들 줄기 세포는 통상적으로 알려진 방법에 따라 세포 종류에 따라 각각의 조직으로부터 수득될 수 있다.

본 발명에서, 중배엽성 줄기 세포의 일례로, 아디포스 줄기 세포가 바람직하게 언급된다. 아디포스 줄기 세포는 아디포스 조직으로부터 수집될 수 있다. 아디포스 줄기 세포의 소스로서 사용되는 아디포스 조직은 또한, 상기 지방 세포와 함께 지방흡입술, 지방제거술 및 탈지와 같은 방법 중 임의의 방법에 의해 수집될 수도 있으며, 이 방법은 바람직하게는, 아디포스 줄기 세포의 유출 또는 손상을 방지하는 관점과 보다 안전한 수집의 관점에서 지방흡입술이다. 또한, 수집된 지방으로부터 아디포스 줄기 세포를 수득하는 방법의 바람직한 일례는 후술하는 방법 2. 세포 제제 제조 방법이다.

본 발명의 세포 제제가 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 경우, 중배엽성 줄기 세포가 지방 세포와의 혼합물 상태로 사용되는 것이 바람직하다. 본 발명의 세포 제제가 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 경우, 세포 제제 내 중배엽성 줄기 세포의 함량은, 골간 관절 질환에 대해 치료 효과가 수득될 수 있는 한, 구체적으로 한정되지 않는다. 중배엽성 줄기 세포의 함량이 높을수록, 보다 탁월한 치료 효과가 수득될 수 있는 한편, 그 함량은 예를 들어, 지방 세포 1개 당 중배엽성 줄기 세포 1개 이상, 바람직하게는 5개 이상, 보다 바람직하게는 1개 내지 10개, 더욱 바람직하게는 5개 내지 10개이다. 또한, (1c) 및 (2c)의 단계를 포함하는 후술하는 방법 (c)에 의해 제조되는 세포 제제의 경우, 세포 제제 1 mL에 포함되는 중배엽성 줄기 세포의 수는 일반적으로 100,000개 이상, 보다 바람직하게는 150,000개 이상, 더욱 바람직하게는 150,000개 내지 200,000개이다.

본 발명의 세포 제제에서, 자가 이식을 목적으로 자가 지방 세포 (및 자가 중배엽성 줄기 세포)를 사용함으로써, 증상의 조기 개선이 가능할 뿐만 아니라 면역거부가 회피될 수 있다. 그러나, 또 다른 개인으로부터 유래되는 지방 세포 (및 중배엽성 줄기 세포)를 사용하는 본 발명의 세포 제제의 제조는 상기에 의해 제한을 받지 않는다. 또 다른 개인으로부터 유래되는 세포를 사용하는 경우, 예를 들어, 또 다른 개인으로부터 수집한 지방 세포 (지방 세포 주변의 세포외 기질 (ECM) 포함)를 이식 전에 감마선 조사 등을 하여 항원성을 제거하는 처리를 수행하는 것이 바람직하다. 중배엽성 줄기 세포는 일반적으로 면역원성을 가지지 않는 세포이지만, 상기 처리를 수행한 중배엽성 줄기 세포가 필요에 따라 사용될 수도 있다.

본 발명의 세포 제제의 바람직한 일례로, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제가 언급될 수 있다. 일반적으로, 아디포스 조직은 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함한다. 따라서, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제로서, 수집된 아디포스 조직는 그 자체로 사용될 수 있거나, 또는 수집된 아디포스 조직으로부터 불순물 (예를 들어, 지방 (소위 확장액(tumescent fluid)), 노화된 지방 세포, 혈액, 및 조직액의 수집 시 주사되는 마취액)을 제거함으로써 제조되는 세포 제제, 수집된 아디포스 조직으로부터 불순물 및 지방 세포 일부를 제거함으로써 제조되는 세포 제제 등이 사용될 수 있다. 세포 제제를 제조하는 방법의 바람직한 일례는 후술하는 방법 (a) 내지 (c)를 포함한다.

또한, 통상적으로 알려진 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 소염제, 진통제, 면역억제제 등은 필요에 따라 본 발명의 세포 제제 첨가될 수 있다. 또한, 콜라겐, 섬유아세포, 성장 인자, 증식제, 사이토카인 등이 본 발명의 효과가 무효화되지 않는 한 본 발명의 세포 제제에 첨가될 수 있다.

또한, 예를 들어, PRP(혈소판 풍부 혈장(Platelet Rich Plasma))와 같이 조직 재생 작용이 알려져 있는 또 다른 세포 제제가 본 발명의 세포 제제와 함께 사용될 수 있다. 또한, 로사탄(losartan)과 같은 안지오텐신 II 수용체 안타고니스트를 PRP에 첨가함으로써, 연골 조직의 재생 효과를 보다 더 높일 수 있다. 그러나, 조직 재생 효율을 향상시키는 면에서, 예를 들어, 연골 조직 재생이 예상되는 사례에 사용하기 전에 VEGF(혈관 내피 성장 인자)를 PRP로부터 제거하는 것이 바람직하며, 뼈 재생이 예상되는 사례에 사용하기 전에 BMP(뼈 형태 발생 단백질(bone morphogenetic protein))를 제거하는 것이 바람직하다.

본 발명의 골간 관절 질환 치료용 세포 제제는 골간 관절 질환에 대해 탁월한 치료 효과를 나타낸다. 골간 관절은 뼈들의 연결부를 말하며, 연골 또는 연골과 섬유성 연결 조직의 조합에 의해 연결되는 연골질 관절(cartilaginous joint), 관절낭(joint capsule)을 덮고 있는 활막 및 연골에 의해 연결되는 활막 관절(synovial joint), 및 섬유성 연결 조직에 의해 연결되는 섬유성 관절(fibrous join)을 포함한다. 본 발명에서, 골간 관절은 특히, 연골질 관절과 활막 관절에 의해 연결되며 이동성을 가지는 부위를 지칭한다. 골간 관절의 일례로, 척추 관절(vertebral joint), 무릎 관절, 족관절(foot joint), 발가락 관절(toe joint), 엉덩이 관절, 손 관절, 주관절(elbow joint), 견관절(shoulder joint), 손가락 관절, 견봉쇄골 관절(acromioclavicular joint), 천장 관절(sacroiliac joint) 등이 구체적으로 언급될 수 있다. 또한, 예를 들어, 무릎 관절의 경우, 인대 및 반월판과 같은 연조직이 상기 골간 관절에 포함되며, 척추 관절의 경우, 디스크 (추간판) 등이 상기 골간 관절에 포함된다.

또한, 골간 관절 질환의 일례로는, 탈장 (탈출(prolapse)), 변형, 퇴행, 및 염증을 포함하며, 구체적으로는 추간판 이동 및 변형성 척추증(spondylosis deformans)과 같은 척추 질환; 골관절염 (엉덩이 골관절염 및 무릎 골관절염 포함) 및 만성 관절증과 같은 관절 질환; 류마티스 관절염과 같은 자가면역 질환; 및 무릎 관절의 특발성 골괴사 및 대퇴골두(femoral head)의 골괴사와 같은 골괴사를 포함한다. 바람직하게는, 추간판 이동, 골관절염, 만성 관절증, 무릎 관절의 특발성 골괴사 및 대퇴골두의 골괴사가 언급될 수 있다.

본 발명의 세포 제제의 투약량은 이 투약량이 골간 관절 질환에 대해 치료 효과를 제공할 수 있는 한, 구체적으로 한정되지 않으며, 투여 부위의 크기, 질환의 병소, 질환의 정도, 환자의 성별, 체격 등에 따라 적절하게 설정될 수 있다. 예를 들어, 투약량은 지방 세포의 수로 변환 시, 100,000개 내지 4,000,000개 세포, 바람직하게는 200,000개 내지 2,000,000개 세포, 더욱 바람직하게는 200,000개 내지 1,000,000개 세포이다. 예를 들어, (1c) 및 (2c)의 단계를 포함하며 후술하는 방법 (c)에 의해 수득되는 세포 제제가 사용되는 경우, 투약량은 0.5 mL 내지 20 mL, 바람직하게는 1 mL 내지 10 mL, 더욱 바람직하게는 1 mL 내지 5 mL이다. 또한, 예를 들어, 무릎 관절의 경우, 1 mL 내지 20 mL, 바람직하게는 1 mL 내지 10 mL, 더욱 바람직하게는 5 mL 내지 10 mL의 세포 제제가 투여될 수 있다. 또한, 추간판의 경우, 0.5 mL 내지 20 mL, 바람직하게는 1 mL 내지 15 mL, 더욱 바람직하게는 1 mL 내지 2 mL의 세포 제제가 투여될 수 있다.

투여 방법의 예로는, 골간 관절 질환의 부위 (예를 들어, 관절 열극(joint space) 및 추간판)에 주사기, 캐뉼러 등을 사용하여 주사하는 방법을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다. 또한, 주사 시, 보다 더 탁월한 치료 효과는 주사 부위를 바늘 또는 캐뉼러의 팁(tip)으로 자극함으로써 수득될 수 있다. 자극 방법의 예로는, 세포 제제의 주사 시 모든 방향에서 어슷 절단(obliquely cut)된 캐뉼러의 팁을 회전시킴으로써 주사 부위를 자극하는 방법을 포함하지만 구체적으로는 이들로 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 세포 제제가 이들 질환을 앓고 있는 환자에게 투여되는 경우, 세포 제제는 필요에 따라 공지된 방법에 의한 치료를 수행한 후 투여될 수 있다. 예를 들어, 추간판 이동의 경우, 본 발명의 세포 제제는 탈출된 추간판을 PLDD (경피적 레이저 추간판 감압술(Percutaneous Laser Disc Decompression))와 같은 통상적으로 공지된 방법에 의해 제거한 후 투여 (주사)될 수 있다. 본 발명의 세포 제제에 포함된 지방 세포의 작용에 의해, 골간 관절 질환 (관절통)에 의해 유발된 통증이 완화되며, 나아가 중배엽성 줄기 세포가 포함되는 경우, 골간 관절에서 골 조직, 연골 조직, 연조직 등이 이 세포의 작용에 의해 재생된다.

(1-2) 근육 복구용 세포 제제

본 발명은 근육 손상 부위에서 근육을 복구할 수 있는 세포 제제를 제공하며, 이 세포 제제는 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 근육 복구용 세포 제제에 사용되는 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포, 및 세포 제제에서의 이들 두 세포의 함량 등은 "(1-1) 골간 관절 질환 치료용 세포 제제"의 섹션에 기술된다. 또한, 본 발명의 근육 복구용 세포 제제의 바람직한 측면으로서, 지방 세포, 및 중배엽성 줄기 세포인 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제가 언급될 수 있다. 아디포스 줄기 세포를 수득하는 방법의 예로는, 후술하는 방법 2. 세포 제제 제조 방법을 포함한다.

또한, 근육 복구용 세포 제제에, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포 외에도 통상적으로 공지된 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 소염제, 진통제, 면역억제제 등이 필요에 따라 첨가될 수도 있다. 또한, 콜라겐, 섬유아세포, 성장 인자, 증식제, 사이토카인 등이 본 발명의 효과가 무효화되지 않는 한 첨가될 수 있다.

또한, 예를 들어, PRP (혈소판 풍부 혈장)와 같이, 조직 재생 작용이 알려져 있는 또 다른 세포 제제는 본 발명의 효과가 무효화되지 않는 한 본 발명의 세포 제제와 함께 사용될 수 있다. 그러나, 근육 조직의 재생 효능을 보다 더 향상시키는 면에서, 사용 전에 형질전환 성장 인자 β1 (TGF β1)를 제거하는 것이 바람직하다.

본 발명의 근육 복구용 세포 제제는 근육 손상 부위에 적용되는 경우 탁월한 근육 복구 효과를 발휘한다. 근육 손상으로는, 근변성증, 근섬유증, 근육 섬유의 파괴 또는 괴사, 근위축증, 근육 마비, 근육 약화 등 외에도, 근육이 수술, 상해 등에 의해 절단된 사례를 포함한다. 또한, 본 발명의 세포 제제가 적용되는 근육의 부위 또는 종류의 예로는, 동체 근육(trunk muscle) (상지 및 하지의 근육 및 대흉근(pectoralis major) 포함)과 같은 골격근; 방광 괄약근과 같은 평활근; 및 심근을 포함하지만, 구체적으로는 이들로 한정되는 것은 아니다. 예를 들어, 본 발명의 세포 제제를 상지 근육의 손상 부위에 투여함으로써, 근육 손상으로 인한 통증이 조기에 완화될 수 있으며, 근육이 복구되어, ROM (이동 반경(Range of Motion))의 확장(expansion) 또는 상지의 운동 기능의 향상이 실현될 수 있다. 또한, 방광 괄약근의 근육 약화, 손상 등으로 인해 요실금 또는 빈뇨와 같은 배뇨 장애가 있는 환자의 방광 괄약근에 본 발명의 세포 제제를 투여함으로써, 방광 괄약근의 근육 강도를 높임으로써 요실금, 실금 등의 문제가 안전하고 용이하게 해결될 수 있다. 또한, 본 발명의 세포 제제는 또한, 심근 경색, 허혈-재관류 손상, 근이영양증(muscular dystrophy) (예를 들어, 뒤셴 근이영양증(Duchenne's muscular dystrophy;DMD)) 또는 근염 (근질환)과 같은 근육 질환을 앓고 있는 환자의 근육 손상 부위에 적용될 수 있다.

또한, 근육 손상은 종종 통증을 동반하지만, 이 통증은 본 발명의 근육 복구용 세포 제제를 근육 손상 부위에 투여함으로써 조기에 완화될 수 있다. 본 발명의 한정적인 해석을 기대하지 않으며, 이러한 통증 완화 효과는 근육 복구용 세포 제제에 포함되는 지방 세포로 인한 것으로 생각된다.

근육 복구를 목적으로 사용되는 경우 본 발명의 세포 제제의 투약량은, 이 투약량이 근육 복구 효과를 제공할 수 있는 한 구체적으로 한정되지 않으며, 투여 부위의 크기, 질환의 병소, 질환의 정도, 및 환자의 성별, 체격 등에 따라 적절하게 설정될 수 있다. 예를 들어, 손상된 근육 10 mL의 단위 용적 당 투약량은 지방 세포의 수로 변환 시, 100,000개 내지 4,000,000개 세포, 바람직하게는 200,000개 내지 2,000,000개 세포, 더욱 바람직하게는 200,000개 내지 1,000,000개 세포이다. 또한, (1c) 및 (2c)의 단계를 포함하는 후술하는 방법 (c)에 의해 수득되는 세포 제제가 사용되는 경우, 손상된 근육 10 mL의 단위 용적 당 투약량은 0.5 mL 내지 20 mL, 바람직하게는 1 mL 내지 10 mL, 더욱 바람직하게는 1 mL 내지 5 mL이다.

근육 복구를 목적으로 사용되는 경우 본 발명의 세포 제제의 투여 방법은 구체적으로 한정되지 않으며, 통상적으로 공지된 투여 방법이 이용될 수 있다. 예를 들어, 주사기, 캐뉼러 등을 이용해 근육 손상 부위에 주사하는 방법이 언급될 수 있다.

2. 세포 제제의 제조 방법

본 발명에서, 지방 세포는 수집될 수 있으며, 필요에 따라 분리 및 농축되어 본 발명의 세포 제제가 제조될 수 있다. 또한, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 제조하는 경우, 이들 세포의 혼합물로서 수집되는 지방 세포가 사용될 수 있거나, 또는 각각의 세포는 개별적으로 수집된 후 다른 세포와 혼합되어 본 발명의 세포 제제가 제공될 수 있다. 예를 들어, 중배엽성 줄기 세포가 아디포스 줄기 세포인 경우, 이 아디포스 줄기 세포는 지방 세포와 동일한 조직으로부터 동시에 제조되고 용이하게 제조될 수 있기 때문에, 아디포스 조직 유래의 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포의 혼합물을 수득하여 본 발명의 세포 제제를 제공하는 것이 바람직하다. 또한, 보다 용이하게는, 이들 세포를 포함하는 아디포스 조직이 사용될 수 있다.

아디포스 조직으로부터 본 발명의 세포 제제를 제조하는 경우, 후술하는 방법 (a) 내지 (c)가 바람직한 방법으로 언급될 수 있다. 그러나, 이들 방법은 지방 이외의 조직으로부터 본 발명의 세포 제제를 제조하는 것을 한정하지 않으며, 본 발명의 세포 제제는, 심지어 본 발명의 세포 제제가 아디포스 조직 이외의 조직 (예를 들어, 혈액, 골수 흡입물(aspirate), 또는 근육)으로부터 제조되는 경우에도, 후술하는 방법에 따라 세포의 종류 또는 특성을 고려하여 적절하게 조건을 설정함으로써 제조될 수도 있다. 방법 (a) 내지 (c)는 각각 본원의 하기에서 상세히 기술될 것이다.

방법 (a)

본 발명의 세포 제제를 제조하는 방법 (a)는, 수집된 지방으로부터 액상 분획을 제거하여 세포성 분획을 제공하는 단계 (1a)를 포함한다.

본원에서, 수집된 지방은 지방흡입술, 지방제거술, 탈지 등에 의해 아디포스 조직으로부터 수집된 아디포스 조직 유래의 세포성 분획과 액상 분획의 혼합물을 지칭한다. 세포성 분획은 지방 세포, 아디포스 줄기 세포 및 불순물 (혈구, 패탈/바이탈 세포, 노화 세포 등)을 포함한다. 또한, 액상 분획은 확장액, 세포성 조직액 등을 포함한다.

세포성 분획으로부터의 액상 분획의 분리는, 수집된 지방을 그대로 방치하여 세포성 분획을 침전시킴으로써 쉽게 수행할 수 있다. 액상 분획을 제거하는 방법의 예로는, 경사분리(decantation) 및 흡입을 포함하지만, 구체적으로는 이들로 한정되는 것은 아니다. 또한, 원심분리, 여과 등이 필요에 따라 수행될 수 있다.

원심분리 및 여과 조건은, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포가 손상되지 않고 불순물이 제거될 수 있는 한, 구체적으로 한정되지 않는다. 조건의 예로는, 700 x g 내지 2,500 x g에서 1분 내지 15분, 바람직하게는 2,000 x g 내지 2,200 x g에서 5분 내지 10분의 조건을 포함한다.

또한, 여과가 수행되는 경우, 예를 들어, 지방이 수집된 부분 (확장액) 등에 투여되는 혈액, 조직액, 마취제는, 수집된 지방을 기공 크기가 10 ㎛ 내지 300 ㎛, 바람직하게는 10 ㎛ 내지 150 ㎛, 보다 바람직하게는 10 ㎛ 내지 100 ㎛, 더욱 바람직하게는 15 ㎛ 내지 20 ㎛인 메쉬 필터에 통과시킴으로써 제거되며, 필터 상에는 지방 세포와 아디포스 줄기 세포의 혼합물이 남게 된다. 또한, 이러한 메쉬 필터가 구비된 용기는 불순물을 포함하는 수집된 지방으로 채워질 수 있으며, 지방은 원심분리처리될 수 있다.

따라서, 액상 분획이 제거된 지방 세포 (세포외 기질 포함) 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 아디포스 조직이 수득될 수 있으며, 아디포스 조직은 본 발명의 세포 제제로서 사용될 수 있다.

방법 (b)

본 발명의 세포 제제를 제조하는 방법 (b)는, 이 방법이 하기의 단계들을 포함하는 것을 특징으로 한다:

(1b) 수집된 지방으로부터 액상 분획을 제거하여 세포성 분획을 수득하는 단계; 및

(2b) 단계 (1b)에서 수득되는 세포성 분획 중 적어도 일부로부터 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 분리하는 단계.

본원에서, 단계 (1b)는 상기 단계 (1a)에서 기술된 바와 같다. 단계 (2b)에서, 지방 세포를 포함하는 세포 제제가 제조되는 경우, 단계 (1b)에서 수득되는 세포성 분획 전체는 단계 (2b)의 처리를 받을 수 있으며, 분리된 지방 세포만이 사용될 수 있다. 또한, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제가 제조되는 경우, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제는 아디포스 줄기 세포를 단계 (1b)에서 수득되는 세포성 분획 중 적어도 일부, 바람직하게는 그 양의 절반으로부터 분리하고, 추가로 아디포스 줄기 세포를 단계 (1b)에서 수득되는 세포성 분획에 첨가함으로써 수득될 수 있다.

본원에서, 아디포스 줄기 세포의 분리 방법의 예로는 특허 문헌 1에 기술된 방법을 포함한다. 보다 구체적으로는, 세포간 접합부(intercellular junction)를 분해함으로써 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포의 분리를 촉진하기 위해, 프로테아제가 세포성 분획에 첨가된다. 프로테아제의 예로는, 콜라게나제, 트립신, 및 리파제를 포함한다. 이로부터 선택되는 1종의 프로테아제가 단독으로 사용될 수 있거나, 또는 2종 이상의 프로테아제들이 조합해서 사용될 수 있다.

효소로 처리된 세포성 분획으로부터 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 분리하는 방법은 구체적으로 한정되지 않으며, 통상적으로 공지된 방법으로부터 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 방법은 원심분리, 여과 등일 수 있다. 원심분리 조건은, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포가 세포 손상 없이 분리될 수 있는 한, 구체적으로 한정되지 않는다. 조건의 예로는, 100 x g 내지 500 x g에서 1분 내지 20분, 바람직하게는 100 x g 300 x g에서 5분 내지 10분의 조건을 포함한다. 세포성 분획을 이러한 원심분리로 처리함으로써, 아디포스 줄기 세포는 침전물로서 수득될 수 있으며, 지방 세포는 상층액에서 농축된다. 또한, 여과가 수행되는 경우, 아디포스 줄기 세포는 기공 크기가 10 ㎛ 내지 100 ㎛, 바람직하게는 10 ㎛ 내지 50 ㎛, 더욱 바람직하게는 15 ㎛ 내지 20 ㎛인 메쉬 필터에 세포성 분획 또는 이의 현탁액을 통과시킴으로써 필터 상에서 수득될 수 있으며, 지방 세포가 여과물에서 수득될 수 있다.

효소로 처리한 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포는 바람직하게는 분리 후에 세정 처리를 받으며, 세정은 인산염 완충 식염수(PBS), 염수, 링거액, 덱스트란 등으로 수행될 수 있다. 세정 처리는 필요에 따라 여러 번 반복될 수 있거나, 또는 세정 후에 세포를 수집하는 경우 세포는 필요에 따라 원심분리될 수 있다. 원심분리 조건은, 효소로 처리한 세포성 분획으로부터 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 분리하는 경우에 적용되는 조건을 따를 수 있다.

세정 후, 본 발명의 단계 (2b)에서 분리되는 지방 세포는 본 발명의 세포 제제로서 사용될 수 있다. 본 발명의 방법 (b)에서 수득되는 지방 세포를 사용해 수득되는 본 발명의 세포 제제는 골간 관절 질환에 의해 유발되는 통증의 완화에 탁월한 효과를 나타낸다.

나아가, 본 발명의 방법 (b)는 단계 (1b)에서 수득되는 세포성 분획을 단계 (2b)에서 수득되는 아디포스 줄기 세포와 혼합하는 단계 (3b)를 단계 (2b) 이후에 포함할 수 있다. 본 방법의 단계 (3b)에서, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제는 단계 (1b)에서 수득되는 세포성 분획을 단계 (2b)에서 수득되는 아디포스 줄기 세포와 혼합함으로써 수득될 수 있다. 이로써 제조된 세포 조제물은 아디포스 줄기 세포를 고농도로 포함하며, 골간 관절 질환에 의해 유발되는 통증의 완화에 효과적일 뿐만 아니라, 골간 관절 조직의 재생에 있어 탁월한 효과를 발휘한다. 또한, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 이러한 세포 제제는 손상된 근육에서 우수한 근육 복구 효과를 나타내며, 동시에 근육 손상에 의해 유발되는 통증의 완화에도 탁월한 효과를 발휘한다.

방법 (c)

본 발명의 세포 제제의 제조를 위한 방법 (c)은 하기의 단계들을 포함한다:

(1c) 수집된 지방으로부터 액상 분획을 제거하여, 세포성 분획을 수득하는 단계; 및

(2c) 단계 (1c)에서 수득된 세포성 분획으로부터 불순물을 제거하여, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포의 농축물을 수득하는 단계.

본원에서, 단계 (1c)는 단계 (1a)에서 기술된 바와 같다. 단계 (2c)에서, 세포성 분획은 불순물을 제거함으로써 농축된다. 불순물의 제거 방법 및 농축 방법은 구체적으로 한정되지 않으며, 통상적으로 공지된 방법으로부터 적절하게 선택될 수 있다. 용이한 방법으로서, 예를 들어, 특허 문헌 3에 기술된 가중 필터가 구비된 주사기를 사용함으로써, 분해된 지방 세포, 패탈/바이탈 세포 및 노화 세포로부터 방출되는 유리 오일(free oil)과 같은 불순물을 제거하여, 건강한 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포의 농축물을 수득한다. 이러한 주사기는 시중적으로 입수가능하며, 이의 구체적인 예는 LIPOMAX-SC용으로 제작된 주사기 (대한민국, 서울 소재의 Medikan International Inc.사에서 제작)이다.

보다 구체적으로는, 필터가 구비된 주사기가 수집된 지방으로 채워지며, 지방은 원심분리에 의해 액상 분획 및 세포성 분획으로 분리된다. 나아가, 유리 오일 (배유(drainage oil))은 필터에 의해 분리된다. 본원에서 분리되는 액상 분획은 세포성 분획으로부터 완전히 분리되지 않은 액체이며 단계 (1c)에서 혼합된다. 즉, 주사기에서, 유리 오일, 지방 세포와 아디포스 줄기 세포의 농축물, 및 액상 분획은 각각 상부층, 중간층 및 하부층에서 분리된다. 중간층 이외의 층들을 폐기함으로써, 건강한 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포의 농축물이 수득될 수 있으며, 이 농축물은 본 발명의 세포 제제로서 사용될 수 있다. 건강한 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포가 선별 및 농축되기 때문에, 이런 식으로 수득되는 세포 제제는 이식 후에 괴사, 석회화 등을 거의 유발하지 않으며, 골간 관절 질환 증상의 완화 및 치료, 손상된 근육의 복구, 및 근육 손상으로 인한 통증의 완화에 보다 더 유용하다.

지방을 액상 분획 및 세포성 분획으로 분리하는 원심분리 조건은, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포가 손상되지 않으며 불순물이 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포로부터 분리되는 한, 구체적으로 한정되지 않는다. 조건의 예로는, 700 x g 내지 2,500 x g에서 1분 내지 15분, 바람직하게는 2,000 x g 내지 2,200 x g에서 5분 내지 10분의 조건을 포함한다.

또한, 필터의 기공 크기는, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포는 기공을 통과할 수 없으며 불순물은 기공을 통과할 수 있는 한, 구체적으로 한정되지 않는다. 크기는 예를 들어, 10 ㎛ 내지 300 ㎛, 바람직하게는 10 ㎛ 내지 150 ㎛, 보다 바람직하게는 10 ㎛ 내지 100 ㎛, 더욱 바람직하게는 15 ㎛ 내지 20 ㎛이다.

또한, 본 발명의 방법 (c)는, 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 단계 (2c)에서 수득된 농축물 중 적어도 일부로부터 분리하고, 수득된 아디포스 줄기 세포를 단계 (2c)에서 수득된 농축물과 추가로 혼합하는 단계 (3c')를 포함할 수 있다. 아디포스 줄기 세포의 분리 방법은 상기 방법 (b)의 단계 (2b)에 기술된 바와 같다. 본 방법의 단계 (3c')에서, 아디포스 줄기 세포가 프로테아제를 사용해 분리되는 경우, 단계 (2c)에서 수득되는 농축물 1 cc 당 일반적으로 약 700,000개 이상, 바람직하게는 약 1,500,000개 이상, 더욱 바람직하게는 약 2,000,000개 이상의 아디포스 줄기 세포가 수득될 수 있다. 건강한 지방 세포가 선별 및 농축되고 더욱이 아디포스 줄기 세포가 고농도로 포함되기 때문에, 본 방법의 단계 (3c')를 통해 제조되는 세포 제제는 골간 관절 질환의 치료 및 손상된 근육의 복구에 있어 보다 더 탁월한 효과를 나타낸다.

또한, 본 방법의 단계 (3c')에서 분리되는 지방 세포는 세정될 수 있으며, 이후 본 발명의 세포 제제로서 사용될 수 있다. 건강한 지방 세포가 선별 및 농축되기 때문에, 본원에서 수득되는 지방 세포는 골간 관절 질환, 또는 근육 손상에 의해 유발되는 통증의 완화에 보다 더 탁월한 효과를 나타낸다.

또한, 본 발명의 방법 (c)는, 단계 (2c) 후에 수득된 농축물에서 지방 세포를 미분화(micronizing)하고, 미분화된 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 혼합물로서 분리하는 단계 (3c'')를 포함할 수 있다. 지방 세포의 미분화는 당해 기술분야에서 일반적으로 이용되는 방법에 의해 수행될 수 있으며, 구체적으로 한정되지 않는다. 예를 들어, 지방 세포는 필요에 따라 드릴(drill) 등으로 절단되며, 이후 미분화된 지방 세포와 아디포스 줄기 세포의 혼합물이 분리된다. 분리 방법으로서, 상기 원심분리 조건이 적용될 수 있다. 본 방법의 단계 (3c'')를 단계 (2c) 이후에 수행하는 경우, 농축물이 주사기에 남아 있는 동안 농축물은 미분화 및 지방 세포의 원심분리 처리를 받을 수 있다. 유리 오일은 원심분리 후 미분화된 지방 세포와 아디포스 줄기 세포의 혼합물로부터 분리되기 때문에, 유리 오일은 폐기되어, 미분화된 지방 세포와 아디포스 줄기 세포의 혼합물이 수득될 수 있다.

이러한 분리 단계를 수행함으로써, 미세한(finer) 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 고농도로 포함하는 세포 제제가 제조될 수 있다. 본원에서, 미세(fine) 지방 세포란, 게이지(gauge)가 26 내지 30, 바람직하게는 18 내지 30인 바늘을 통과할 수 있는 크기의 지방 세포를 지칭한다. 본 방법의 단계 (3c'')에서, 지방 세포를 미분화하는 처리는 적어도 1회, 바람직하게는 1회 내지 수회, 보다 바람직하게는 1회 내지 2회 수행될 수 있다. 지방 세포를 미분화함으로써, 세포 제제의 단위 용적 당 아디포스 줄기 세포의 농도는 증가될 수 있으며, 골간 관절 질환 또는 근육 손상으로 인한 통증의 완화 효과, 골간 관절 내 조직의 재생 효과, 및 근육 복구 효과는 보다 더 뚜렷하게 나타날 수 있다.

또한, 단계 (3c'')에서 수득되는 미분화된 지방 세포와 아디포스 줄기 세포의 혼합물 중 적어도 일부로부터 아디포스 줄기 세포를 분리하고, 수득되는 아디포스 줄기 세포를 단계 (2c)에서 수득되는 농축물과 혼합하는 단계 (4c'')가 포함될 수 있다. 아디포스 줄기 세포의 분리 방법은 방법 (b)의 단계 (2b)에서 기술된 바와 같다.

본 방법의 단계 (4c'')에서 아디포스 줄기 세포를 분리함으로써 수득되는 지방 세포는 세정될 수 있으며, 이후에 지방 세포를 포함하는 본 발명의 세포 제제로서 사용될 수 있다. 세정은 아디포스 줄기 세포의 경우 수행되는 상기 세정 처리와 동일한 방법으로 수행될 수 있다. 건강한, 미분화된 지방 세포가 선별 및 농축되기 때문에, 본원에서 수득되는 지방 세포는 골간 관절 질환 또는 근육 손상으로 유발되는 통증의 완화에 보다 더 탁월한 효과를 발휘한다.

본 발명의 방법 (c)에서, 특허 문헌 3에 기술된 주사기를 사용하여, 모든 단계는 세포를 오픈 에어와 접촉시키는 일 없이 수행될 수 있다. 예를 들어, 캐뉼러 등은 특허 문헌 3에 기술된 주사기에 부착될 수 있으며, 주사기는 지방흡입술에 의해 수집된 지방으로 채워질 수 있고, 지방은 불순물 제거 처리 및 농축 처리를 받아 세포 제제가 수득될 수 있다. 이후, 세포 제제의 투여 시에도, 세포 제제는 주사기에서 세포 제제 주사용 주사기로 직접 옮겨진 다음 환부에 투여될 수 있기 때문에, 오염과 같은 문제점을 가지지 않고 높은 안전성을 가진 세포 제제가 수득될 수 있다. 용이한 방법으로서, 본 발명의 방법 (c)는 시중적으로 입수가능한 키트를 사용해 수행될 수 있으며, 이러한 키트의 구체적인 예는 LIPOMAX-SC (Medikan International Inc.사에서 제작됨)이다.

본 발명의 세포 제제는 상기 방법 중 임의의 방법으로 수득될 수 있으며, 세포 제제는 바람직하게는 방법 (b) 또는 (c), 보다 바람직하게는 방법 (c), 더욱 바람직하게는 방법 (c)의 단계 (3'') 또는 (4'')를 통해 제조되는 미분화된 지방 세포를 포함하는 세포 제제인 것이 바람직하다. 불순물이 제거되고 미분화된, 건강한 지방 세포가 고농도로 포함되기 때문에, 방법 (c)의 단계 (4'')를 통해 수득되는 미분화된 지방 세포를 포함하는 세포 조제물은 골간 관절 질환의 치료 (특히 통증 완화)에 우수한 효과를 나타낸다. 방법 (c)의 단계 (3'')를 통해 수득되는 미분화된 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제는 미분화된, 건강한 지방 세포 외에도 아디포스 줄기 세포를 고농도로 포함한다. 이러한 세포 제제는 골간 관절 질환의 치료 및 근육의 복구에 매우 더 탁월한 효과를 나타낼 수 있다.

3. 골간 관절 질환에 의해 유발되는 통증의 완화 방법

본 발명은 골간 관절의 통증을 완화하는 방법을 제공하며, 이 방법은 지방 세포를 포함하는 세포 제제를 골간 관절 질환을 앓고 있는 환자의 골간 관절에 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 통증 완화 방법에 사용되는 지방 수집 방법, 지방 세포의 분리 방법, 세포 제제의 제조 방법, 환자 등에의 투여 방법은 "1. 세포 제제" 및 "2. 세포 제제의 제조 방법"이라는 섹션에 기술된 바와 같다. 본 발명의 통증 완화 방법에서, 세포 제제의 치료적 유효량은 골간 관절의 통증 완화가 필요한 환자에게 투여된다. 투약량 형태는 구체적으로 한정되지 않으며, 통증 완화가 예상되는 위치 및 범위, 환자의 연령 등에 따라 통상적으로 공지된 방법으로부터 적절하게 선택될 수 있다.

4. 골간 관절 조직의 재생 방법

본 발명은 골간 관절 조직을 재생하는 방법을 제공하며, 이 방법은 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 골간 관절 질환을 앓고 있는 환자의 골간 관절에 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 조직을 재생하는 방법에 사용되는 지방의 수집 방법, 중배엽성 줄기 세포의 분리 방법, 세포 제제의 제조 방법, 환자 등에의 투여 방법은 "1. 세포 제제" 및 "2. 세포 제제의 제조 방법"이라는 섹션에 기술된 바와 같다. 본 발명의 조직의 재생 방법에서, 세포 제제의 치료적 유효량은 조직 재생이 필요한 환자에게 투여된다. 투약량 형태는 구체적으로 한정되지 않으며, 재생이 예상되는 위치 및 범위, 환자의 연령 등에 따라 통상적으로 공지된 방법으로부터 적절하게 선택될 수 있다.

5. 근육 복구 방법

본 발명은 근육 복구 방법을 제공하며, 이 방법은 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 근육 손상을 앓고 있는 환자의 근육 손상 부위에 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 근육 복구 방법에 사용되는 지방의 수집 방법, 중배엽성 줄기 세포의 분리 방법, 세포 제제의 제조 방법, 환자 등에의 투여 방법은 "1. 세포 제제" 및 "2. 세포 제제의 제조 방법"이라는 섹션에 기술된 바와 같다. 본 발명의 근육 복구 방법에서, 세포 제제의 치료적 유효량은 근육 손상 부위의 근육 복구가 필요한 환자에게 투여된다. 투약량 형태는 구체적으로 한정되지 않으며, 근육 복구가 예상되는 위치 및 범위, 환자의 연령 등에 따라 통상적으로 공지된 방법으로부터 적절하게 선택될 수 있다.

6. 기타

본 발명은 골간 관절 질환용 치료제의 제조를 위한 지방 세포를 포함하는 세포 제제의 용도, 및 골간 관절 질환의 치료에 사용되는 지방 세포를 포함하는 세포 제제를 제공한다. 나아가, 본 발명은 근육 복구제의 제조를 위한 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제의 용도, 및 근육 복구에 사용되는 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 제공한다. 지방 세포, 중배엽성 줄기 세포, 세포 조제물, 골간 관절 질환, 근육 손상 등은 전술한 바와 같다.

실시예

세포 제제의 제조

세포 제제의 제조를 위해, LIPOMAX-SC (대한민국 서울 소재의 Medikan International Inc.사에서 제작) 키트를 사용하였다. 본 발명의 세포 제제의 제조 단계에서, 세포를 오픈 에어와 전혀 접촉시키지 않으면서 단계를 수행할 수 있었다. 구체적인 방법은 하기와 같다.

(i) 주사기 (LIPOMAX-SC용으로 제작된 주사기: 대한민국 서울 소재의 Medikan International Inc.사에서 제작)를 사용하여, 지방흡입술을 각 개체에서 수행하였다. 수집된 지방을 함유하는 주사기를 실온 (약 25℃)에서 약 10분간 그대로 방치하여, 지방을 세포성 분획 및 액상 분획으로 분리하고, 확장액을 함유하는 액상 분획을 폐기하였다. 잔여 세포성 분획을 시험예 2에서 아디포스 조직으로 사용하였다. 이후, 주사기를 2,200 x g에서 8분간 원심분리하였다. 원심분리에 의해, 세포성 분획을 상부층 (유리 오일), 중간층 (지방 세포 및 아디포스 줄기 세포) 및 하부층 (세포성 조직액과 같은 액상 분획)의 세 층으로 분리하였다. 이후, 중간층만 주사기에 남겨 두었으며, 상부층 및 하부층은 폐기하였고, 이로써 지방 세포와 아디포스 줄기 세포의 농축물을 수득하였다. 농축물에 겔화(gelling) 처리를 수행하여, 상대적으로 큰 지방 세포를 미분화하였다. 겔화 처리는 1회 내지 3회 수행하였다. 드릴 (Filler-Geller 커터: Medikan International, Inc.사에서 제작)을 겔화에 사용하여 미분화용 지방 세포를 절단하고, 지방 세포를 추가로 2,200 x g에서 5분간 원심분리하여, 미분화된 지방 세포와 아디포스 줄기 세포를 포함하는 혼합물을 수득하였다. 그렇게 수득되는 혼합물을 후술하는 시험예 2 내지 5에서 미분화된 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제로서 사용하였다.

(ii) 다음, 아디포스 줄기 세포를 추출하였다. 단계 (i)의 지방 세포와 아디포스 줄기 세포의 혼합물에, 0.4% 프로테아제 수용액 (상표명: 콜라게나제; Worthington Biochemical Corp.사에서 제조)을 혼합물과 동일한 양으로 첨가하고, 혼합물을 약하게 흔들었다. 이후, 혼합물을 38℃에서 45분간 인큐베이션하였다.

(iii) 인큐베이션 후, 원심분리를 200 x g에서 5분간 수행하고, 상층액을 수집하였다. 지방 세포를 상층액에서 농축시키고, 아디포스 줄기 세포를 침전물에서 농축시켰다.

(iv) 다음, 덱스트란 (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.사에서 제조) 약 50 mL을 단계 (iii)에서 수득한 침전물 (아디포스 줄기 세포의 농축물) 2 mL 내지 3 mL에 첨가하고, 혼합물을 약하게 흔들었다. 이후, 원심분리를 200 x g에서 5분간 수행하고, 상층액을 폐기하여, 아디포스 줄기 세포의 세정을 수행하였다. 절차를 3회 반복하였다. 본 방법의 단계에서 수득한 아디포스 줄기 세포의 농축물을 후술하는 시험예 1의 대조군에서 사용하였다. 또한, 단계 (iii)에서 수득한 지방 세포를 포함하는 상층액에 동일한 세정 처리를 수행하고, 이후 후술하는 시험예 1에서 지방 세포 (및 세포외 기질)로서 사용하였다.

나아가, 각각의 환자로부터 유래되는 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 사용하기 때문에, 상기 절차를 각각의 환자에 대해 수행하였다.

시험예 1. 골관절염에 의해 유발되는 통증을 완화하는 효과 (1)

상기 단계 (iv)에서 수득한 지방 세포 (세포외 기질 포함)를 무릎 골관절염을 앓고 있는 개체에게 투여하고, 증상의 변화를 관찰하였다.

개체는 2명의 여성이었다 (4가지 사례 (두 여성 모두 자신의 두 무릎 모두에서 관절 질환을 앓고 있었음); 평균 연령: 68.5세). 사용되는 지방은 각 개체의 하복부에서 수집하였다. 수집된 지방의 양은 각각 102 mL 및 95 mL였다. 지방 세포 (세포외 기질 포함)를 상기 세포 제제의 제조 방법에 따라 수집된 지방으로부터 수득하고, 지방 세포 7 mL을 각 개체의 무릎 관절 각각에 주사하였다. 또한, 대조군으로서, 히알루론산 (Suvenyl (CHUGAI PHARMACEUTICAL CO., LTD.사에서 제조: 2.5 mL) 또는 상기 단계 (iv)에서 수득한 아디포스 줄기 세포 7 mL (두 개체에서, 지방을 수집하는 부위는 하복부였으며; 수집된 지방의 양은 각각 102 mL 및 95 mL이었음)을 무릎 골관절염을 앓고 있는 또 다른 2명의 개체의 무릎 관절에 주사하였다. 본 시험예 1에서, 무릎 관절에 주사할 때, 캐뉼러의 팁을 모든 방향에서 회전시킴으로써 주사 부위를 자극하는 절차는 수행하지 않았다.

그 결과, 지방 세포를 주사한 개체에서, 주사한 첫날부터 무릎 관절 통증이 감소하였으며, 그 효과는 약 1달간 지속되었다. 또한, 히알루론산 또는 아디포스 줄기 세포를 주사한 개체와 비교한 결과, 무릎 관절 통증의 완화 효과는 보다 조기부터 발달하였으며, 통증 완화 효과 또한 두드러졌다.

시험예 2. 골관절염에 의해 유발되는 통증을 완화하는 효과 (2)

상기 단계 (i)에서 수득한 아디포스 조직을 무릎 골관절염을 앓고 있는 개체에게 투여하고, 증상의 변화를 관찰하였다. 개체는 3명의 여성이었다 (6가지 사례 (각각의 개체는 자신의 두 무릎 모두에서 관절 질환을 앓고 있었음); 평균 연령: 69.7세). 사용되는 지방은 각 개체의 하복부에서 수집하였다. 수집된 지방의 양은 각각 95 mL, 100 mL 및 105 mL였다. 아디포스 조직을 상기 세포 제제의 제조 방법의 단계 (i)에 따라 수집된 지방으로부터 수득하고, 아디포스 조직 7 mL을 각 개체의 무릎 관절 각각에 주사하였다. 또한, 대조군으로서, 히알루론산 (Suvenyl (CHUGAI PHARMACEUTICAL CO., LTD.사에서 제조: 2.5 mL)을 무릎 골관절염을 앓고 있는 또 다른 개체의 무릎 관절에 주사하였다. 본 시험예 2에서, 무릎 관절에 주사할 때, 캐뉼러의 팁을 모든 방향에서 회전시킴으로써 주사 부위를 자극하는 절차는 수행하지 않았다.

그 결과, 아디포스 조직을 주사한 3명의 개체 중 임의의 개체에서, 무릎 관절 통증을 완화하는 효과가 히알루론산을 주사한 개체에서보다 조기에 발달하였으며, 그 효과는 1달 이상 지속되었다.

시험예 3. 골관절염 조직의 재생 효과

상기 단계 (i)에서 제조한 미분화된 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제 (5 mL 내지 10 mL, 아디포스 줄기 세포 약 750,000개 내지 2,000,000개 포함)을 무릎 골관절염을 앓고 있는 9명의 여성의 무릎 관절 (14가지 사례; 평균 연령: 68.7세)에, 팁이 어슷 절단된 캐뉼러를 사용해 주사하였다. 질환 병소, 지방흡입술의 특정 부위, 수집된 지방의 양, 세포 제제의 주사량, 및 캐뉼러를 모든 방향에서 회전시킴으로써 주사 부위를 자극하는 절차의 존재 또는 부재를 하기 표 1에 나타낸다. 각 개체에 대한 치료, 무릎 관절 열극(fissure)의 측정 결과, 및 무릎 골관절염의 X-선 확인의 평가 기준인 켈그렌 및 로렌스 분류화(Kellgren and Lawrence)를 토대로 하는 평가 결과는 하기 표 1에 요약한다.

개체 A

개체 B

개체 C

개체 D

개체 F

개체 G

개체 H

개체 I

무플 골관절염

좌측

우측

좌측

우측

좌측

우측

좌측

우측

좌측

우측

좌측

지방이 수집되는 부위

하복부

대퇴골

하복부

대퇴골

수집된 지방의 양

50 mL

82 mL

90 mL

80 mL

94 mL

76 mL

96 mL

102 mL

캐뉼러에 의해 주사 부위를 자극하는 절차의 존재 또는 부재

+

++

+

-

+

세포 제제의 주사량

5 mL

7 mL

8 mL

7 mL

8 mL

6 mL

7 mL

8 mL

6 mL

8 mL

9 mL

관절 열극(mm)

치료 전

2

0

-

1.6

0

*

2.4

-

치료 후

3.3

2.6

-

3

1.8

4.4

-

켈그렌 및 로렌스 분류화(등급)

치료 후 일수

3.5 주

5 주

3 주

12 주

7 주

11 주

7.5 주

8 주

2 주

치료 전

IV

II

III

IV

II

IV

III

II

III

IV

-

치료 후

II

I

II

III

I

II

I

II

III

-

* 표에서, 무릎 골관절염에 관해, 좌측은 개체가 좌측 무릎에 질환을 가지고 있으며, 우측은 개체가 우측 무릎에 질환을 가지고 있음을 의미한다.

* 표에서, 캐뉼러에 의해 주사 부위를 자극하는 절차의 존재 또는 부재에 관해, +는 자극의 존재를 의미하며, ++는 강한 자극의 존재를 의미하고, -는 자극의 부재를 의미한다.

* 표에서, 관절 열극의 크기에 관해, -는 크기가 측정되지 않았음을 의미하며, *는 치료 후 크기가 거의 변하지 않았음을 의미한다.

* 표에서, 치료 후 일수는, 켈그렌 및 로렌스 분류화를 토대로 하는 등급이 변할 때까지, 치료시부터 경과한 일수를 의미한다.

* 표에서, 켈그렌 및 로렌스 분류화에 관해, -는 치료 후 일수가 적어서 평가가 수행되지 않았음을 의미한다.

또한, 특정 평가 항목 및 켈그렌 및 로렌스 분류화의 평가 기준은 하기와 같다.

등급	관절 열극의 협소화(narrowing)	골세포	경화(consolidation)	관절 윤곽(outline of joint)의 변형
I	의심스러움(doubted)	가능함	없음	없음
II	가능함(possible)	명료함	없음	없음
III	명료함(clear)	중간정도임	중간정도임	가능함
IV	중간정도임(moderate)	상당함(profound)	상당함	명료함

대표적인 예로서, 개체 A 및 B의 무릎 관절의 X-선 사진을 도 1 및 2에 도시한다.

개체 A

치료 시 연령: 72세, 여성

병력: 무릎 골관절염 (좌측 무릎)

좌측 무릎 관절에, 세포 제제 5 mL을 주사하였다. 세포 제제의 주사 전과 주사 후 약 1달째에 촬영한 개체 A의 좌측 무릎 관절 외부의 관절 열극의 X-선 사진을 도 1에 도시한다.

개체 B

치료 시 연령: 60세, 여성

병력: 무릎 골관절염 (우측 및 좌측 무릎 모두)

우측 및 좌측 무릎 관절에, 세포 제제 7 mL을 각각 주사하였다. 세포 제제의 주사 전과 주사 후 약 1달째에 촬영한 개체 B의 우측 및 좌측 무릎 관절 외부의 관절 열극의 X-선 사진을 도 2에 도시한다.

(결과)

치료 후 5일 이내에 (평균: 2일), 무릎 관절 통증은 모든 개체에서 상당히 개선되었으며, 개선된 통증의 상태는 상기 기간 이후에도 지속되었다. 또한, 지팡이에 의지하여 보행하였던 2명의 개체는 지팡이 없이도 보행할 수 있게 되었다. 나아가, 서있기가 어려웠던 2명의 개체는 설 수 있게 되었으며, 보행도 모든 개체에서 상당히 향상되었다.

대표적인 개체 A 및 B의 X-선 사진 확인에 따라, 무릎 골관절염의 개선 및 관절 열극의 확장을 도시하였다. 즉, 도 1에 도시한 바와 같이, 개체 A의 좌측 무릎 관절의 관절 열극이 치료 전에 2.0 mm인 한편 (도 1(a)), 치료 후 약 1달째의 관절 열극은 3.3 mm로 확장되었다 (도 1(b)). 보다 구체적으로는, 켈그렌 및 로렌스 분류화의 등급이 치료 전에 IV 등급이었던 한편, 치료 후 약 1달째에 등급은 II로 개선되었다. 또한, 도 2에 도시한 바와 같이, 개체 B의 우측 및 좌측 무릎 관절의 관절 열극이 치료 전에 0 mm인 한편 (도 2(a)), 치료 후 약 1달째의 관절 열극은 2.6 mm로 확장되었다 (도 2(b)). 보다 구체적으로는, 켈그렌 및 로렌스 분류화의 등급이 치료 전에 IV 등급이었던 한편, 치료 후 약 1달째에 등급은 II로 개선되었다.

본 시험예 3의 결과에 따르면, 무릎 관절 조직의 재생은 미분화된 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 무릎 골관절염을 앓고 있는 개체의 무릎 관절에 주사함으로써 향상되는 것으로 나타났다. 한편, 상기 시험예 1의 대조군으로서 아디포스 줄기 세포를 주사한 개체의 X-선 사진 확인에 따르면, 조직 재생은 확인되었지만, 조직 재생의 진행 속도 및 증상의 개선은 개체 A 및 B에서보다 명백히 더 느렸다.

시험예 4. 골괴사 조직의 재생 효과

상기 단계 (i)에서 제조한 미분화된 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제 (5 mL 내지 10 mL, 약 750,000개 내지 2,000,000개의 아디포스 줄기 세포를 포함)을, 무릎 골관절염과 함께 골괴사가 부가적으로 발병한 시험예 3의 3명의 개체인 개체 A, B 및 J의 골괴사 부위에 주사하였다. 개체 J의 경우, 질환 병소, 지방흡입술의 특정 부위, 수집된 지방의 양, 및 세포 제제의 주사량은 하기 표 3에 나타낸다. 또한, 개체 A의 무릎 관절의 MR 영상을 도 3에 대표예로서 도시한다.

		개체 J
무릎 골관절염		우측	좌측
지방이 수집되는 부위		하복부, 양측 대퇴골
수집된 지방의 양		212 mL
캐뉼러에 의해 주사 부위를 자극하는 절차의 존재 또는 부재		+	+
세포 제제의 주사량		10 mL	9 mL
치료 전 골괴사 영상의 존재 또는 부재		존재함	존재함
켈그렌 및 로렌스 분류화 (등급)	치료 후 일수	12주	12주
	치료 전	IV	IV
	치료 후	III	III

개체 중 임의의 개체에서, 보행 장애(walking difficulty) 및 통증과 같은 증상은 세포 제제를 관절에 주사한 후 2일 이내에 상당히 개선되었다. 또한, 개체 J의 경우, 표 3에 나타낸 바와 같이, 켈그렌 및 로렌스 분류화의 등급은 치료 전에 IV 등급인 한편, 증상은 치료 후 약 3개월째에 III 등급으로 향상되었다. 나아가, 개체 A의 무릎 관절의 MR 영상에서 도시한 바와 같이 (도 3), 골괴사 영상의 상당한 개선은 세포 제제를 관절에 주사한 후 1개월째에 확인되었으며, 골괴사는 주사 후 3개월째에 소멸하였다. 개체 A 및 B의 무릎 관절에 대한 MR 영상을 촬영한 경우, 골괴사 및 뼈 부종(bone edema)의 영상의 개선 또는 소멸은 세포 제제를 개체 중 어느 한 개체에 주사한 후 1개월 내지 3개월째에 확인하였다.

시험예 5. 근육 복구 효과

상기 단계 (i)에서 제조한 미분화된 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제 (10 mL 내지 50 mL, 약 4,000,000개 내지 20,000,000개의 아디포스 줄기 세포 포함)을 대퇴사두근(quadriceps femoris) 근육 손상, 상완의 삼각근(deltoid muscle) 손상 또는 대흉근 손상을 가진 개체의 근육 손상 부위에 주사하였다 (4명의 남성; 평균 연령: 37.8세, 20명의 여성; 평균 연령: 33.8세). 세포 제제 제조의 경우, 개체의 하복부 또는 대퇴골로부터 수집된 지방 (수집된 지방의 양: 50 mL 내지 200 mL)을 사용하였다.

세포 제제의 주사 후, 근육 손상에 의해 유발된 통증의 개선에 있어, 그 결과는 하기와 같았다: 주사때부터 통증이 아주 약간만 느껴졌음 (8명의 개체: 여성); 주사때부터 통증이 약간만 느껴졌음 (4명의 개체: 남성); 주사 후 1일째에 통증이 사라졌음 (10명의 개체: 여성); 및 주사 후 2일 내지 3일째에 통증이 사라졌음 (2명의 개체: 여성). 즉, 근육 손상으로 인한 통증은 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제의 주사에 의해 조기에 개선되는 것으로 확인되었다.

또한, 상지 관절의 이동 반경 (ROM: 이동 반경)은 세포 제제의 주사 후 3주 내지 1개월 이내에 모든 개체에서 확장되었으며, 이동 기능의 향상이 확인되었다. 즉, 세포 제제를 근육 손상 부위에 투여함으로써 근육은 복구되는 것으로 확인되었다.

3. 결론

전술한 바와 같이, 골간 관절 질환에 의해 유발되는 통증은 지방 세포를 무릎 골관절염 환자의 환부에 주사함으로써 조기에 완화될 수 있으며, 더욱이 그 효과는 장기간 지속되는 것으로 확인되었다 (시험예 1). 또한, 아디포스 조직을 주사한 경우, 통증은 시험예 1의 사례와 같이 조기에 완화되었으며, 그 효과는 보다 장기간 지속되었다 (시험예 2). 나아가, 미분화된 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포 (아디포스 줄기 세포)를 고농도로 포함하는 세포 제제를 환부에 주사함으로써, 상기 통증 완화 효과 외에도 환부 조직의 재생이 증강되었다 (시험예 3). 더욱이, 아디포스 줄기 세포만 주사한 사례 (시험예 1의 대조군)와 미분화된 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 주사한 사례 (시험예 3)를 비교한 경우, 조직 재생 효과는 미분화된 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 주사한 경우 상승작용적으로 증가되었다. 또한, 미분화된 지방 세포 및 아디포스 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 골괴사 부위에 주사한 경우 (시험예 4), 괴사 부분의 골 조직의 재생이 확인되었다. 나아가, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 근육 손상 부위에 투여함으로써 근육이 복구되는 것으로 확인되었다 (시험예 5). 지방 세포, 및 아디포스 줄기 세포와 같은 중배엽성 줄기 세포가 조합해서 사용되는 경우, 중배엽성 줄기 세포가 지방 세포 (세포외 기질 포함)의 작용에 의해 환부에서 유지되므로, 중배엽성 줄기 세포의 이식(engraftment) 효율 및 조직 재생 효율이 증가되는 것으로 생각할 수 있다.

상기 시험예에 따르면, 본 발명의 세포 제제는 골간 관절 질환의 치료 및 근육 복구에 탁월한 효과를 나타내는 것으로 확인되었다.

Claims

지방 세포를 포함하는, 골간 관절(interosseous joint) 질환 치료용 세포 제제.
제1항에 있어서, 중배엽성 줄기 세포를 추가로 포함하는 세포 제제.
제1항에 있어서, 중배엽성 줄기 세포가 아디포스 줄기 세포(adipose stem cell)인, 세포 제제.
제1항에 있어서, 지방 세포 1개 당 중배엽성 줄기 세포를 1개 내지 10개로 포함하는, 세포 제제.
제1항에 있어서, 상기 지방 세포가 감마선 조사를 받은 세포인, 세포 제제.
제1항에 있어서, 상기 골간 관절 질환이 척추 질환, 관절 질환, 자가면역 질환 및 골괴사로 이루어진 군으로부터 선택되는 임의의 한 종류인, 세포 제제.
골간 관절 질환용 치료제의 제조를 위한, 지방 세포를 포함하는 세포 제제의 용도.
골간 관절 질환의 치료에 사용하기 위한, 지방 세포를 포함하는 세포 제제.
지방 세포를 포함하는 세포 제제를 골간 관절 질환 환자의 골간 관절에 투여하는 단계를 포함하는, 골간 관절 통증을 완화하는 방법.
지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 골간 관절 질환 환자의 골간 관절에 투여하는 단계를 포함하는, 골간 관절을 재생하는 방법.
지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는, 근육 복구용 세포 제제.
제11항에 있어서, 상기 중배엽성 줄기 세포가 아디포스 줄기 세포인, 세포 제제.
제11항에 있어서, 지방 세포 1개 당 중배엽성 줄기 세포를 1개 내지 10개로 포함하는, 세포 제제.
제11항에 있어서, 상기 지방 세포가 감마선 조사를 받은 세포인, 세포 제제.
근육 복구용 제제의 제조를 위한, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제의 용도.
근육 복구에 사용되는, 지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제.
지방 세포 및 중배엽성 줄기 세포를 포함하는 세포 제제를 근육 손상 환자의 근육 손상 부위에 투여하는 단계를 포함하는, 근육을 복구시키는 방법.