WO2013125674A1 - 脂肪細胞を含む細胞製剤 - Google Patents

脂肪細胞を含む細胞製剤 Download PDF

Info

Publication number
WO2013125674A1
WO2013125674A1 PCT/JP2013/054483 JP2013054483W WO2013125674A1 WO 2013125674 A1 WO2013125674 A1 WO 2013125674A1 JP 2013054483 W JP2013054483 W JP 2013054483W WO 2013125674 A1 WO2013125674 A1 WO 2013125674A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cell preparation
cell
stem cells
adipocytes
cells
Prior art date
Application number
PCT/JP2013/054483
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
正典 佐伯
Original Assignee
Saeki Masanori
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Saeki Masanori filed Critical Saeki Masanori
Priority to EP13752335.3A priority Critical patent/EP2818173B1/en
Priority to JP2014500177A priority patent/JP5572777B2/ja
Priority to US14/380,703 priority patent/US20150044179A1/en
Priority to RU2014138500A priority patent/RU2746915C2/ru
Priority to CA2865383A priority patent/CA2865383C/en
Priority to SG11201405110TA priority patent/SG11201405110TA/en
Priority to CN201380010803.9A priority patent/CN104203257A/zh
Priority to KR1020147025823A priority patent/KR102159844B1/ko
Publication of WO2013125674A1 publication Critical patent/WO2013125674A1/ja

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/35—Fat tissue; Adipocytes; Stromal cells; Connective tissues
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3839—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by the site of application in the body
    • A61L27/3843—Connective tissue
    • A61L27/3852—Cartilage, e.g. meniscus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3839—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by the site of application in the body
    • A61L27/3873—Muscle tissue, e.g. sphincter
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3886—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells comprising two or more cell types
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/06—Materials or treatment for tissue regeneration for cartilage reconstruction, e.g. meniscus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/24—Materials or treatment for tissue regeneration for joint reconstruction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/30—Materials or treatment for tissue regeneration for muscle reconstruction

Definitions

  • the present invention relates to a cell preparation useful for alleviating pain caused by a disease at an interosseous junction and treating the disease.
  • the present invention also relates to a cell preparation useful for repairing degenerated or damaged muscle.
  • Hyaluronic acid injection, adipocyte transplantation, etc. are known as means for increasing the volume of soft tissue in humans, and are widely used in the fields of cosmetic surgery such as facial wrinkle removal, depression treatment, breast reconstruction, and plastic surgery.
  • the treatment with hyaluronic acid injection is easy, but the injected hyaluronic acid is absorbed in about half a year, so that there is a problem that the effect is insufficient.
  • fat cells may be necrotized or absorbed in vivo after transplantation. For this reason, there is a drawback that re-operation is required or, in some cases, scarring occurs.
  • adipose stem cells In order to eliminate these drawbacks, transplantation of adipose stem cells has been proposed, and methods for efficiently separating adipose stem cells have been developed (see, for example, Patent Documents 1 and 2).
  • adipose stem cells By transplanting adipose stem cells, the cell colonization rate after transplantation has been improved, and a certain effect on soft tissue regeneration has been observed.
  • an adipose stem cell obtained by such a method may contain impurities, which may cause fat cell necrosis or lumping (calcification) after transplantation.
  • Adipocytes are generally obtained by liposuction, but the aspirated fat is a mixture containing various impurities in addition to adipocytes and adipose stem cells.
  • Examples of impurities to be removed from such a mixture include blood (particularly erythrocytes), dead and active cells, and senescent cells. On the other hand, it is subjected to centrifugation using a syringe equipped with a weight filter described in Patent Document 3, and impurities that cause calcification and fat necrosis are collected from a mixture containing fat cells and adipose stem cells collected by liposuction.
  • a method of injecting the removed cell preparation Condensed Rich Fat: CRF (registered trademark)
  • CRF registered trademark
  • adipocytes and adipose stem cells that are safe and have excellent colonization properties are being provided.
  • transplantation of adipocytes and adipose stem cells has been mostly applied to soft tissue regeneration.
  • the effectiveness of these cells for the relief of joint pain and tissue regeneration in joints has been fully investigated.
  • the present inventor has found that when fat cells are injected into a patient complaining of joint pain, the symptoms are alleviated at an early stage and the effect is sustained. Furthermore, it has been found that when adipocytes and adipose stem cells are injected in combination, bone tissue and cartilage tissue in the joint are efficiently regenerated in addition to the relief of the joint pain. The present inventor has also found that damaged muscle is repaired by administering a cell preparation containing adipocytes and mesodermal stem cells to the site of muscle damage. The present invention has been completed as a result of further research based on these findings.
  • the present invention provides a cell preparation of the following aspect, a method for relieving pain at an interosseous joint, a tissue regeneration method for an interosseous joint, a muscle repairing method, and the like.
  • Item 1. A cell preparation for treating diseases of an interosseous junction, including adipocytes.
  • Item 2. Item 2. The cell preparation according to Item 1, further comprising mesodermal stem cells.
  • Item 3. Item 2. The cell preparation according to Item 1, wherein the mesodermal stem cell is an adipose stem cell.
  • Item 4. Item 2. The cell preparation according to Item 1, wherein 1 to 10 mesodermal stem cells are contained per fat cell.
  • Item 5. Item 2.
  • the cell preparation according to Item 1 wherein the fat cells are cells that have been irradiated with ⁇ rays.
  • Item 6. Item 2. The cell preparation according to Item 1, wherein the disease of the interosseous junction is any one selected from the group consisting of spinal diseases, joint diseases, autoimmune diseases, and osteonecrosis.
  • Item 7. Use of a cell preparation containing adipocytes for the manufacture of a therapeutic agent for diseases of the interosseous joint.
  • a method for alleviating pain at an interosseous joint comprising a step of administering a cell preparation containing an adipocyte to an interosseous joint of a patient having a disease at the interosseous joint.
  • Item 10. A tissue regeneration method for an interosseous joint, comprising a step of administering a cell preparation containing an adipocyte and a mesodermal stem cell to an interosseous joint of a patient having an interosseous joint disease.
  • Item 11 A cell preparation for muscle repair comprising adipocytes and mesodermal stem cells.
  • Item 12. The cell preparation according to Item 11, wherein the mesodermal stem cell is an adipose stem cell.
  • Item 13. Item 12.
  • Item 12. The cell preparation according to Item 11, wherein the fat cells are cells that have been irradiated with ⁇ -rays.
  • Item 15. Use of a cell preparation comprising adipocytes and mesodermal stem cells for the manufacture of a preparation for muscle repair.
  • Item 16. A cell preparation comprising adipocytes and mesodermal stem cells used for muscle repair.
  • a method for repairing a muscle comprising a step of administering a cell preparation containing an adipocyte and a mesodermal stem cell to a muscle injury site of a patient having muscle injury.
  • the cell preparation containing fat cells of the present invention slippage of joints and the like is improved by fat cells and ECM (extracellular matrix) existing around fat cells, and joint pain can be relieved at an early stage.
  • ECM extracellular matrix
  • the effect excellent in the pain relief resulting from the disease of an interjunction part can be acquired.
  • by injecting the cell preparation of the present invention into an intervertebral disc or the like it plays the role of a cushion and has the effect of improving (improving) the movement of the vertebral body.
  • the joint pain alleviating effect of the cell preparation of the present invention lasts for a long time.
  • the pain caused by the disease of the interosseous junction is alleviated by the adipocytes, while bone tissue and cartilage tissue caused by mesoderm stem cells are reduced.
  • tissue regeneration in a joint such as a soft tissue is promoted.
  • the cell preparation of the present invention containing adipocytes and mesoderm stem cells is more effective for the treatment of diseases of the interosseous junction.
  • the cell preparation of the present invention containing adipocytes and mesodermal stem cells has an excellent repair effect on muscles damaged by muscle degeneration or muscle resection by surgery.
  • pain due to muscle damage can be relieved at an early stage, which contributes to improvement of QOL (Quality of Life) of patients.
  • adipocytes and mesodermal stem cells contained in the cell preparation of the present invention can be directly separated and concentrated from aspirated fat and the like without going through a cell culture step, they must come into contact with the outside air. Can be prepared without. Therefore, there is no worry about infectious diseases.
  • the cell preparation of the present invention is usually prepared using adipocytes and mesodermal stem cells collected from patients who need treatment for diseases of interosseous joints or muscle repair, immune rejection reaction It is safe without problems.
  • FIG. 1 (a) is an X-ray photograph showing the left knee joint of subject A before administration of the cell preparation
  • FIG. 1 (b) is the left knee joint of subject A about one month after administration of the cell preparation
  • FIG. 2A is an X-ray photograph showing the left and right knee joints of subject B before administration of the cell preparation
  • FIG. 2B is the left and right knee joints of subject B about one month after administration of the cell preparation.
  • FIG. FIG. 3 is a typical example of an MR image showing that bone cell regeneration is promoted by administration of a cell preparation, and osteonecrosis is improved and disappeared.
  • Cell preparation The present invention provides a cell preparation for treating the following diseases of the interosseous joint and a cell preparation for muscle repair. Hereinafter, each cell preparation will be described in detail.
  • the present invention provides a cell preparation for treating diseases of interosseous joints, characterized by containing adipocytes.
  • a fat cell is a cell that has the function of synthesizing, storing, and releasing fat, and that forms adipose tissue.
  • Adipocytes do not undergo cell division because they are completely differentiated.
  • the fat cells include white fat cells and brown fat cells. In the present invention, any of these may be used, or a mixture of both may be used.
  • the origin of adipocytes is not particularly limited.
  • mammalian adipocytes preferably primate adipocytes, more preferably human adipocytes are used.
  • as fat cells only fat cells can be used alone, but a mixture of extracellular matrix (ECM) existing around fat cells and fat cells may be used.
  • ECM extracellular matrix
  • the collected adipose tissue may be used as it is as the adipocyte, or one obtained by removing the extracellular matrix from the collected adipose tissue may be used.
  • Adipocytes are collected from adipose tissue.
  • the method for collecting adipose tissue is not particularly limited, and can be appropriately selected from conventionally known methods. Examples thereof include liposuction, lipotomy, and defatting. Collection by liposuction is preferable because it is relatively easy and minimally invasive.
  • the method for obtaining fat cells from the collected fat is not particularly limited, but preferably the following 2. The method described in the preparation method of a cell formulation is mentioned.
  • the cell preparation for treating a disease of the interosseous joint of the present invention may further contain mesodermal stem cells.
  • mesodermal stem cells tissue regeneration at the interosseous junction is promoted, and the therapeutic effect of the cell preparation of the present invention is further enhanced.
  • the mesodermal stem cells used in the cell preparation of the present invention mainly mean intermediate stem cells that differentiate into cells belonging to mesodermal tissues such as bone, cartilage, myocardium and fat.
  • the origin of mesodermal stem cells is not particularly limited, and for example, mammalian mesodermal stem cells, preferably primate mesodermal stem cells, more preferably human mesoderm stem cells are used.
  • mesodermal stem cells include adipose stem cells, bone marrow stem cells, hematopoietic stem cells, and the like, and these stem cells can be obtained from each tissue according to the type of cells according to a conventionally known method.
  • the mesodermal stem cells are preferably exemplified by adipose stem cells.
  • Adipose stem cells can be collected from adipose tissue.
  • the adipose tissue that is the source of adipose stem cells can be collected by any of the methods such as liposuction, lipectomy, degreasing, etc., similar to the above-mentioned adipocytes, but prevents outflow and damage of adipose stem cells, From the viewpoint that it can be collected more safely, liposuction is preferred.
  • the method for obtaining adipose stem cells from the collected fat is preferably 2.
  • the method described in the preparation method of a cell formulation is mentioned.
  • the cell preparation of the present invention contains mesodermal stem cells
  • the content of the mesodermal stem cells in the cell preparation is not particularly limited as long as the therapeutic effect on the disease of the interosseous joint is obtained. Although it is considered that a higher therapeutic effect can be obtained as the content of the germ layer stem cell is larger, for example, at least one mesodermal stem cell, preferably 5 or more, more than one adipocyte. Preferably 1-10, more preferably 5-10.
  • the number of mesodermal stem cells contained per 1 mL of the cell preparation is usually 100,000 or more, preferably 150,000 or more, more preferably 150,000 to 200,000.
  • the preparation of the cell preparation of the present invention by using self-derived adipocytes (and mesodermal stem cells) for the purpose of autotransplantation, immune rejection can be avoided in addition to early improvement of symptoms.
  • the preparation of the cell preparation of the present invention using an adipocyte (and mesoderm stem cell) derived from another person is not limited.
  • adipocyte and mesoderm stem cell
  • Mesodermal stem cells are usually cells that do not have immunogenicity, but those subjected to the treatment may be used if necessary.
  • adipose tissue contains adipocytes and adipose stem cells. Therefore, as a cell preparation containing adipocytes and adipose stem cells, the collected adipose tissue may be used as it is, and impurities (for example, an anesthetic solution (injected at the time of adipose collection) ( So-called Tumecent liquid), aged adipocytes, blood, tissue fluid, etc.) removed, or impurities and some adipocytes removed from collected adipose tissue may be used.
  • impurities for example, an anesthetic solution (injected at the time of adipose collection) ( So-called Tumecent liquid), aged adipocytes, blood, tissue fluid, etc.
  • impurities and some adipocytes removed from collected adipose tissue may be used.
  • the method for preparing the cell preparation include methods (a) to (c) described later.
  • conventionally known pharmaceutically acceptable carriers, excipients, anti-inflammatory agents, analgesics, immunosuppressants and the like can be added to the cell preparation of the present invention as necessary.
  • collagen, fibroblasts, growth factors, growth factors, cytokines, etc. may be added as long as the effects of the present invention are not impaired.
  • tissue regeneration such as PRP (Platelet Rich Plasma)
  • PRP Platinum Rich Plasma
  • an angiotensin II receptor antagonist such as losartan
  • the regeneration effect of the cartilage tissue is further enhanced.
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • BMPs bone morphogenetic protein
  • the cell preparation for treating a disease of the interosseous joint of the present invention has an excellent therapeutic effect on the disease of the interosseous joint.
  • the interosseous joint refers to the connecting part of the bone, by cartilage or a combination of cartilage and a fibrous connective tissue, a synovial connection connected by a synovium that wraps the cartilage and joint capsule, and a fibrous connective tissue In the present invention, it refers to a portion having mobility that is connected by a cartilage connection and a synovial connection.
  • the interosseous joint examples include a spinal joint, a knee joint, an ankle joint, a toe joint, a hip joint, a wrist joint, an elbow joint, a shoulder joint, a finger joint, an acromioclavicular joint, and a sacroiliac joint.
  • soft tissues such as ligaments and meniscus
  • a disc intervertebral disc
  • diseases of the interosseous joint include hernia (prolapse), deformation, degeneration, inflammation, etc.
  • spinal diseases such as intervertebral disc herniation, osteoarthritis, etc .; osteoarthritis (degenerative Hip arthritis, knee osteoarthritis, etc.), joint diseases such as chronic arthropathy; autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis; osteonecrosis such as idiopathic osteonecrosis of the knee joint, femoral head necrosis, etc.
  • Preferred examples include intervertebral hernia, osteoarthritis, chronic arthropathy, idiopathic osteonecrosis of the knee joint, and femoral head necrosis.
  • the dosage of the cell preparation of the present invention is not particularly limited as long as the therapeutic effect on the disease of the interosseous joint is obtained, the size of the administration site, the site of the disease, the degree of the disease, the sex of the patient, although it can be appropriately set depending on the physique and the like, examples include 100,000 to 4,000,000, preferably 200,000 to 2,000,000, and more preferably 200,000 to 1,000,000 in terms of the number of fat cells.
  • the dosage is 0.5 to 20 mL, preferably 1 to 10 mL, more preferably 1 to 5 mL. It is done.
  • 1-20 mL of cell preparation preferably 1-10 mL, more preferably 5-10 mL can be administered to the knee joint.
  • 0.5-20 mL of cell preparation preferably 1-15 mL, more preferably 1-2 mL can be administered to the intervertebral disc.
  • Examples of the administration method include, but are not limited to, a method of injecting into a disease site (for example, joint space, intervertebral disc (intervertebral disc), etc.) of the interosseous joint using a syringe, a cannula, or the like.
  • a disease site for example, joint space, intervertebral disc (intervertebral disc), etc.
  • the injection site is stimulated by the tip of the injection needle or cannula, so that a further excellent therapeutic effect can be obtained.
  • the method of stimulation is not particularly limited, for example, when injecting a cell preparation, a cannula whose tip is cut obliquely is rotated back and forth and left and right to stimulate the injection site.
  • the cell preparation of the present invention When the cell preparation of the present invention is administered to a patient having these diseases, it may be administered after treatment by a known method as necessary.
  • the prolapsed intervertebral disc is removed by a conventionally known method such as PLDD (Percutaneous Laser Disc Decompression), and then the cell preparation of the present invention can be administered (injected).
  • the pain (joint pain) resulting from the disease of the interosseous joint is alleviated by the action of the fat cells contained in the cell preparation of the present invention, and when the mesodermal stem cells are contained, the interosseous junction is caused by the function of the cells. Bone tissue, cartilage tissue, soft tissue, etc. in the part are regenerated.
  • (1-2) Cell preparation for muscle repair The present invention provides a cell preparation capable of repairing muscle at the site of muscle injury, comprising adipocytes and mesodermal stem cells.
  • adipocytes and mesoderm stem cells used in the cell preparation for muscle repair of the present invention are used to treat the above-mentioned “(1-1) interosseous joint disease”.
  • a cell preparation containing adipocytes and adipose stem cells that are mesodermal stem cells is exemplified. Examples of methods for obtaining adipose stem cells include the following 2. The method described in the preparation method of a cell formulation is mentioned.
  • adipocytes and mesodermal stem cells in addition to adipocytes and mesodermal stem cells, conventionally known pharmaceutically acceptable carriers, excipients, anti-inflammatory agents, analgesics, immunosuppressants, etc. Can be added.
  • collagen, fibroblasts, growth factors, growth factors, cytokines, etc. may be added as long as the effects of the present invention are not impaired.
  • TGF ⁇ 1 transforming growth factor ⁇ 1
  • the cell preparation for muscle repair of the present invention exhibits an excellent muscle repair effect when applied to a muscle damage site.
  • muscle damage includes cases where the muscle is removed by surgery or trauma.
  • the site and type of muscle to which the cell preparation of the present invention is applied are not particularly limited.
  • skeletal muscles such as trunk muscles (including upper and lower limb muscles and pectoralis major muscles); smoothness of bladder sphincters and the like Muscle; myocardium.
  • the cell preparation of the present invention For example, by administering the cell preparation of the present invention to the muscle damage site of the upper limb, pain due to muscle damage is relieved at an early stage, and further, the muscle is repaired to enable ROM (range of motion) of the upper limb. Expansion and improvement of motor function.
  • the cell preparation of the present invention to the bladder sphincter of a patient exhibiting urinary incontinence due to weakness or damage of the bladder sphincter, urination, etc., the urinary incontinence and urine leakage Such problems can be solved safely and easily.
  • the present invention can also be applied to a muscle injury site of a patient having a muscular disease such as myocardial infarction, ischemia reperfusion injury, muscular dystrophy (for example, Duchenne muscular dystrophy (DMD)), myositis (myopathy).
  • a muscular disease such as myocardial infarction, ischemia reperfusion injury, muscular dystrophy (for example, Duchenne muscular dystrophy (DMD)), myositis (myopathy).
  • the pain can be relieved at an early stage by administering the cell preparation for muscle repair of the present invention to the site of muscle damage.
  • a pain relieving effect is considered to be due to fat cells contained in the cell preparation for muscle repair.
  • the dose when using the cell preparation of the present invention for the purpose of muscle repair is not particularly limited as long as the muscle repair effect can be obtained, and the size of the administration site, the site of the disease, the degree of the disease, the patient's It can be set as appropriate according to gender, physique and the like.
  • the dose per unit volume of 10 mL of injured muscle is 100 to 4 million, preferably 200 to 2 million, more preferably 200 to 1 million in terms of the number of fat cells.
  • the cell preparation obtained by the following method (c) including steps (1c) and (2c) is used, for example, 0.5 to 20 mL, preferably 1 to 10 mL, more preferably 1 per 10 mL unit volume of damaged muscle. Up to 5 mL.
  • the administration method in the case of using the cell preparation of the present invention for the purpose of muscle repair is not particularly limited, and a conventionally known administration method can be adopted.
  • a method of injecting into a muscle injury site with a syringe, cannula, etc. can be mentioned.
  • fat cells can be collected, separated and concentrated as necessary, and prepared as the cell preparation of the present invention.
  • a cell preparation containing adipocytes and mesodermal stem cells it is also possible to use a cell sample collected as a mixture of these cells. Collect each cell individually, and then mix both.
  • the cell preparation of the present invention may be used.
  • the mesodermal stem cell is an adipose stem cell
  • it can be prepared from the same tissue as the adipocyte at the same time and is convenient. It is preferable. More simply, adipose tissue containing these cells may be used.
  • the following methods (a) to (c) are exemplified as preferable methods.
  • the preparation of the cell preparation of the present invention from a tissue other than fat is not limited, and the preparation of the cell preparation of the present invention from a tissue other than adipose tissue (for example, blood, bone marrow fluid, muscle, etc.).
  • the cell preparation of the present invention can be prepared by appropriately setting conditions in consideration of the type and properties of the cells.
  • the methods (a) to (c) will be described in detail.
  • Method (a) for preparing the cell preparation of the present invention includes the step (1a) of removing a liquid fraction from the collected fat to obtain a cell fraction.
  • the collected fat refers to a mixture of a cell fraction and a liquid fraction derived from adipose tissue collected from adipose tissue by liposuction, lipotomy, degreasing, and the like.
  • the cell fraction contains adipocytes, adipose stem cells, and impurities (blood cells, dead / alive cells, senescent cells, etc.).
  • the liquid fraction includes a tumecent liquid, a cell tissue liquid, and the like.
  • the separation of the liquid fraction and the cell fraction can be carried out simply by allowing the collected fat to stand and allowing the cell fraction to settle.
  • the method for removing the liquid fraction is not particularly limited, and examples thereof include decantation and suction. Moreover, you may perform centrifugation, filtration, etc. as needed.
  • the conditions for centrifugation and filtration are not particularly limited as long as they do not damage fat cells and adipose stem cells and can remove impurities.
  • 700 to 2500 ⁇ g for 1 to 15 minutes, preferably 2000 to 2200 ⁇ g for 5 A condition of ⁇ 10 minutes is mentioned.
  • the collected fat is subjected to a mesh filter having a hole size of, for example, 10 to 300 ⁇ m, preferably 10 to 150 ⁇ m, more preferably 10 to 100 ⁇ m, and still more preferably 15 to 20 ⁇ m.
  • the mixture of fat cells and adipose stem cells can be obtained on the filter by removing blood, tissue fluid, anesthetic (tumecent solution) and the like administered to the site where the fat is collected.
  • a container including such a mesh filter may be filled with collected fat containing impurities and subjected to centrifugation.
  • adipose tissue containing adipocytes (including extracellular matrix) and adipose stem cells from which the liquid fraction has been removed can be obtained, and this can be used as the cell preparation of the present invention.
  • Method (b) for preparing the cell preparation of the present invention comprises the following steps. (1b) a step of removing a liquid fraction from the collected fat to obtain a cell fraction; and (2b) separating adipocytes and adipose stem cells from at least a part of the cell fraction obtained in the step (1b). Process.
  • step (1b) is as described in the above method (1a).
  • all the cell fraction obtained in step (1b) is subjected to the treatment of step (2b), and only the separated adipocytes are separated.
  • the adipose stem cells are separated from at least a part, preferably half, of the cell fraction obtained in step (1b), and further separated in step (1b). ) To obtain the cell preparation containing adipocytes and adipose stem cells.
  • examples of the method for separating adipose stem cells include the method described in Patent Document 1. More specifically, a proteolytic enzyme is added to the cell fraction in order to facilitate separation of adipocytes and adipose stem cells by decomposing bonds between cells.
  • proteolytic enzymes include collagenase, trypsin, lipase and the like, and one kind selected from these may be used alone, or two or more kinds may be used in combination.
  • the method for separating fat cells and adipose stem cells from the cell fraction treated with the enzyme is not particularly limited and may be appropriately selected from conventionally known methods, and examples thereof include centrifugation and filtration. Centrifugation conditions are not particularly limited as long as they can be separated without damaging fat cells and adipose stem cells. For example, 100 to 500 ⁇ g for 1 to 20 minutes, preferably 100 to 300 ⁇ g for 5 to 5 minutes. A condition of 10 minutes is mentioned. By subjecting to such centrifugation, adipose stem cells are obtained as a precipitate, and the adipocytes are concentrated in the supernatant.
  • the cell fraction or suspension thereof is passed through a mesh filter having a hole size of 10 to 100 ⁇ m, preferably 10 to 50 ⁇ m, more preferably 15 to 20 ⁇ m.
  • Adipose stem cells can be obtained on top, and adipocytes can be obtained in the filtrate.
  • the enzyme-treated adipocytes and adipose stem cells are preferably subjected to a washing treatment after separation, and washing can be performed with a phosphate buffer solution (PBS), physiological saline, Ringer's solution, dextran, or the like.
  • PBS phosphate buffer solution
  • the washing treatment may be repeated a plurality of times as necessary, and may be subjected to centrifugation as necessary when cells are collected after washing. Centrifugation may be performed according to the conditions employed when separating adipocytes and adipose stem cells from the enzyme-treated cell fraction.
  • the cell preparation of the present invention obtained by using the fat cells obtained by the present method (b) has an excellent effect on alleviating pain caused by the disease of the interosseous joint.
  • this method (b) includes the step (3b) of mixing the cell fraction obtained in the step (1b) and the adipose stem cell obtained in the step (2b) after the step (2b). May be included.
  • the cell fraction obtained in step (1b) and the adipose stem cells obtained in step (2b) can be mixed to obtain a cell preparation containing adipocytes and adipose stem cells.
  • the cell preparation thus prepared contains a high amount of adipose stem cells and is effective not only for the relief of pain caused by diseases of the interosseous joint, but also excellent for tissue regeneration of the interosseous joint. It is effective.
  • such a cell preparation containing adipocytes and adipose stem cells has an excellent muscle repairing effect on damaged muscles, and also has an excellent effect on alleviating pain caused by muscle damage.
  • Method (c) The method (c) for preparing the cell preparation of the present invention is as follows: (1c) removing the liquid fraction from the collected fat to obtain a cell fraction; and (2c) removing impurities from the cell fraction obtained in the step (1c) to concentrate adipocytes and adipose stem cells. Obtaining a product.
  • step (1c) is as described in the above method (1a).
  • impurities are removed from the cell fraction and concentrated.
  • the method for removing and concentrating impurities is not particularly limited, and can be appropriately selected from conventionally known methods. However, for convenience, the method is broken by using, for example, a syringe equipped with a weight filter described in Patent Document 3. Impurities such as free oil, dead and active cells, and senescent cells released from fat cells are removed, and a healthy fat cell and adipose stem cell concentrate is obtained.
  • a syringe is commercially available. Specifically, a syringe manufactured for LIPOMAX-SC (manufactured by Medikan Corp., Seoul, Korea) is exemplified.
  • the collected fat is filled in a syringe equipped with a filter inside, and the fat is separated into a liquid fraction and a cell fraction by centrifugation, and free oil (drained oil) is further separated by a filter. ) Are separated.
  • the liquid fraction separated here is not completely separated in the step (1c) but is mixed in the cell fraction. That is, in the syringe, free oil in the upper layer, a concentrate of fat cells and adipose stem cells in the intermediate layer, and a liquid fraction in the lower layer are separated, and a healthy fat cell and adipose stem cell concentrate by discarding other than the intermediate layer And can be used as the cell preparation of the present invention.
  • the cell preparation obtained in this manner has selected and concentrated healthy adipocytes and adipose stem cells, it is less likely to cause necrosis, calcification, etc. after transplantation, It is more useful for treatment and repair of damaged muscles and relief of pain due to muscle damage.
  • Centrifugation conditions for separating the fat into a liquid fraction and a cell fraction are not particularly limited as long as impurities, fat cells, and adipose stem cells can be separated without damaging adipocytes and adipose stem cells. Although not limited, for example, conditions of 700 to 2500 ⁇ g for 1 to 15 minutes, preferably 2000 to 2200 ⁇ g for 5 to 10 minutes can be mentioned.
  • the pore size of the filter is not particularly limited as long as fat cells and adipose stem cells do not pass through and impurities can pass through.
  • the pore size of the filter is 10 to 300 ⁇ m, preferably 10 to 150 ⁇ m, more preferably 10 to 100 ⁇ m. More preferably, it is 15 to 20 ⁇ m.
  • adipocytes and adipose stem cells were separated from at least a part of the concentrate obtained in step (2c), and the obtained adipose stem cells were further obtained in the step (2c).
  • a step (3c ′) of mixing with the concentrate may be included.
  • the method for separating adipose stem cells is as described for step (2b) of method (b) above.
  • adipose stem cells when adipose stem cells are separated using a proteolytic enzyme, it is usually about 700,000 or more, preferably about 1.5 million or more, more preferably 1 cc of the concentrate obtained in step (2c). Can obtain about 2 million or more adipose stem cells.
  • the cell preparation prepared through this step (3c ′) contains adipose stem cells at a higher concentration in addition to the selection and concentration of healthy adipocytes. In addition, it has an even better therapeutic effect on the repair of damaged muscles.
  • the adipocytes separated in this step (3c ′) can be used as the cell preparation of the present invention after washing. Since the adipocytes obtained here are selected and concentrated as healthy adipocytes, the adipocytes are more effective in alleviating pain caused by diseases at the interosseous junction or muscle damage.
  • the fat cells in the obtained concentrate are refined, and the refined fat cells and adipose stem cells are separated as a mixture (3c ′′). May be included.
  • a fat cell can be refined by a method usually employed in the art, and is not particularly limited. For example, if necessary, a fat cell is cut with a drill or the like, Isolate the mixture of adipose stem cells. As the separation method, the above-mentioned centrifugation conditions can be employed.
  • the concentrate may be filled in a syringe and subjected to refinement and centrifugation of adipocytes.
  • the free oil and the mixture of micronized adipocytes and adipose stem cells are separated in the syringe, so that the free oil can be discarded to obtain a mixture of micronized adipocytes and adipose stem cells. it can.
  • a cell preparation containing fine fat cells and adipose stem cells at a high concentration can be prepared through such a separation step.
  • the fine fat cells refer to fat cells having a size that can pass through an injection needle of 26 to 30 gauge, preferably 18 to 30 gauge.
  • the treatment for refining fat cells can be performed at least once, preferably 1 to several times, more preferably 1 to 2 times.
  • adipose stem cells are separated from at least a part of the mixture of the refined adipocytes and adipose stem cells obtained in the step (3c ′′), and the obtained adipose stem cells are concentrated in the step (2c).
  • a step (4c ′′) of mixing with the product may be included.
  • the method for separating adipose stem cells is as described for step (2b) of method (b) above.
  • the adipocytes obtained by separating the adipose stem cells in this step (4c ′′) can be used as a cell preparation containing the adipocytes of the present invention after washing.
  • the washing can be performed by the same method as the washing treatment performed on the adipose stem cells described above. Since the fat cells obtained here are selected and enriched with healthy, refined fat cells, the fat cells are more effective in relieving pain caused by diseases of the interosseous joint and muscle damage. It is.
  • this method (c) by using the syringe described in Patent Document 3, all the steps can be performed without bringing the cells into contact with the outside air.
  • a syringe described in Patent Document 3 is fitted with a cannula or the like, filled with fat collected by liposuction, and directly subjected to removal of impurities, concentration treatment, and the like to obtain a cell preparation.
  • this method (c) can also be carried out using a commercially available kit. Specific examples of such a kit include LIPOMAX-SC (manufactured by MEDIKAN Corp.). Is done.
  • the cell preparation of the present invention can be obtained by any of the above methods, the method (b) or (c) is preferred, the method (c) is more preferred, and the method (c) is more preferred.
  • a cell preparation containing finely divided adipocytes prepared through (3 ′′) or step (4 ′′) is preferable.
  • the cell preparation containing micronized adipocytes obtained through the step (4 '') of the method (c) contains impurities at a high concentration and contains fine adipose fat cells, It has a remarkable effect on the treatment of diseases of the interosseous joint (especially pain relief).
  • the cell preparation containing finely divided adipocytes and adipose stem cells obtained through the step (3 ′′) of the method (c) contains adipose stem cells at a high concentration in addition to finely divided healthy adipocytes.
  • Such a cell preparation can exert a significantly more excellent effect on the treatment of diseases of the interosseous joint and muscle repair.
  • the present invention relates to a method for alleviating pain caused by a disease of an interosseous joint, comprising the step of administering a cell preparation containing a fat cell to an interosseous joint of a patient having an interosseous disease, A method of alleviating pain at an interosseous joint is provided.
  • a therapeutically effective amount of a cell preparation is administered to a patient in need of pain relief at the interosseous joint.
  • the dosage form is not particularly limited, and can be appropriately selected from conventionally known methods according to the position, range, age of the patient and the like where pain relief is expected.
  • Tissue regeneration method of interosseous joint includes a step of administering a cell preparation containing adipocytes and mesodermal stem cells to an interosseous joint of a patient having an interosseous disease.
  • the present invention provides a tissue regeneration method for an interosseous joint.
  • tissue regeneration method of the present invention a therapeutically effective amount of a cell preparation is administered to a patient in need of tissue regeneration.
  • the dosage form is not particularly limited, and can be appropriately selected from conventionally known methods according to the type, position, range, age of the patient, and the like of the tissue expected to be regenerated.
  • Muscle Repair Method provides a muscle repair method comprising the step of administering a cell preparation containing adipocytes and mesodermal stem cells to a muscle injury site of a patient having muscle damage.
  • a therapeutically effective amount of cell preparation is administered to the site of muscle injury in a patient in need of muscle repair.
  • the administration form is not particularly limited, and can be appropriately selected from conventionally known methods according to the position, range, age of the patient and the like where muscle repair is expected.
  • the present invention provides the use of a cell preparation containing adipocytes for the production of a therapeutic agent for an interosseous joint disease, and a cell preparation containing adipocytes used for the treatment of an interosseous joint disease. Furthermore, the present invention provides use of a cell preparation containing adipocytes and mesodermal stem cells for the production of a muscle repair agent, and a cell preparation containing adipocytes and mesodermal stem cells used for muscle repair. Adipocytes, mesoderm stem cells, cell preparations, interosseous joint diseases, muscle damage, etc. are as described above.
  • the mixture was separated into three layers by centrifugation, an upper layer (free oil), an intermediate layer (adipocytes and adipose stem cells), and a lower layer (liquid fraction such as cell tissue fluid). Then, the concentrate of fat cells and adipose stem cells was obtained by leaving only the intermediate layer in the syringe and discarding the upper and lower layers. A gelling process was performed on the concentrate to refine relatively large adipocytes. The jelliing treatment was performed 1 to 3 times. For jelliing, use a drill (FillerGeller cutter: manufactured by MEDIKAN) to cut and refine fat cells, and further centrifuge at 2200 ⁇ g for 5 minutes to contain fine fat cells and adipose stem cells A mixture was obtained. The mixture thus obtained was used in the following Test Examples 2 to 5 as a cell preparation containing finely divided adipocytes and adipose stem cells.
  • a drill FrillerGeller cutter: manufactured by MEDIKAN
  • adipose stem cells were extracted.
  • a 0.4% aqueous solution of proteolytic enzyme (trade name: Collagenase; manufactured by Worthington Biochemical Corp.) in the same amount as the mixture is added and gently added.
  • proteolytic enzyme trade name: Collagenase; manufactured by Worthington Biochemical Corp.
  • step (iv) Next, about 50 mL of dextran (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) was added to 2-3 mL of the precipitate (concentrate of adipose stem cells) obtained in step (iii), and after gently shaking, Adipose stem cells were washed by centrifuging at 200 ⁇ g for 5 minutes and discarding the supernatant. This operation was repeated three times. The adipose stem cell concentrate obtained by this step was used in the comparative control group of Test Example 1 below. In addition, the supernatant containing adipocytes obtained in step (iii) was subjected to the same washing treatment, and then used as an adipocyte (and extracellular matrix) in Test Example 1 below.
  • dextran manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.
  • the adipocytes (including extracellular matrix) obtained in the above step (iv) were administered to a subject having osteoarthritis of the knee, and the change in symptoms was observed.
  • the subjects were 2 women (4 cases (both subjects had disease in both knee joints): average age 68.5 years).
  • the fat collected from the lower abdomen of each subject was used.
  • the amount of fat collected was 102 mL and 95 mL, respectively.
  • Adipocytes (including extracellular matrix) were obtained from the collected fat according to the method for preparing a cell preparation, and 7 mL was injected into each subject's knee joint.
  • hyaluronic acid (Smony (manufactured by Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.): 2.5 mL), or fat obtained in the above step (iv), was compared with another two subjects having osteoarthritis of the knee.
  • Stem cells (7 mL) were injected into the knee joint (the fat collection sites were all in the lower abdomen; the fat collection amounts were 102 mL and 95 mL, respectively).
  • Test Example 1 when injection into the knee joint was performed, the tip of the cannula was rotated back and forth and left and right to stimulate the injection site.
  • knee joint pain was reduced from the day of injection, and the effect was sustained for about one month.
  • the relief effect of the knee joint pain was clearly expressed from the early stage, and the pain relief effect was also remarkable.
  • the adipose tissue obtained in the above step (i) was administered to a subject having knee osteoarthritis, and changes in symptoms were observed.
  • the subjects were 3 women (6 cases (each subject had diseases in both knee joints): average age 69.7 years).
  • the fat collected from the lower abdomen of each subject was used.
  • the amount of fat collected was 95 mL, 100 mL, and 105 mL, respectively.
  • Adipose tissue was obtained from the collected fat according to step (i) of the method for preparing a cell preparation, and 7 mL was injected into each subject's knee joint.
  • hyaluronic acid (Smony (manufactured by Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.): 2.5 mL) was injected into the knee joint as another control subject having osteoarthritis of the knee.
  • Test Example 2 when injecting into the knee joint, the operation of stimulating the injection site by rotating the tip of the cannula back and forth and left and right was not performed.
  • Test Example 3 Tissue regeneration effect on osteoarthritis Fine adipocytes and adipose stem cells prepared in the above step (i) for 9 women with osteoarthritis of the knee (14 cases: average age 68.7 years)
  • a cell preparation (5 to 10 mL, containing about 750,000 to 2 million adipose stem cells) was injected into the knee joint using a cannula with an obliquely cut tip.
  • Table 1 below shows the site of the disease, the specific site of liposuction, the amount of collected fat, the amount of cell preparation injected, and the presence or absence of an operation that stimulates the injection site by rotating the tip of the cannula back and forth and left and right It is.
  • Table 1 below summarizes the treatment results for each subject, the measurement results of the knee joint space, and the evaluation results according to the Kellgren & Lawrence classification, which are the evaluation criteria for the X-ray findings of knee osteoarthritis.
  • FIGS. 1 shows X-ray photographs of the left knee joint lateral joint space taken by subject A before and about one month after the injection of the cell preparation.
  • FIG. 2 shows X-ray photographs of the medial joint space of the left and right knee joints of subject B taken before and after injection of the cell preparation about 1 month after injection.
  • the left knee joint of the subject A had a joint space of 2.0 m before the treatment (FIG. 1 (a)), and up to 3.3 mm in about one month after the treatment. Enlarged (FIG. 1 (b)). More specifically, before the treatment, when it was IV of Kellgren & Lawrence classification, the symptoms improved to II in about one month after the treatment.
  • the left and right knee joints of subject B had a joint space of 0 mm before treatment (FIG. 2 (a)), and expanded to 2.6 mm approximately one month after treatment. (FIG. 2 (b)). More specifically, before the treatment, when it was IV of Kellgren & Lawrence classification, the symptoms improved to II in about one month after the treatment.
  • tissue regeneration in the knee joint was promoted by injecting a cell preparation containing finely divided adipocytes and adipose stem cells into the knee joint of a subject having knee osteoarthritis. It was shown that.
  • tissue regeneration was observed in the X-ray photograph of the subject into which the adipose stem cells were injected as the comparative control group of Test Example 1, the progress of the tissue regeneration and the improvement of the symptom were improved by the subject A. It was clearly slower than B and B.
  • Test Example 4 Tissue regeneration effect on osteonecrosis
  • three subjects A, B and J of Test Example 3 who had osteonecrosis were refined in the above step (i).
  • a cell preparation containing adipocytes and adipose stem cells (containing about 7 to 2 million 5-10 mL adipose stem cells) was injected into the osteonecrosis site.
  • Table 3 below shows the disease site, specific site of liposuction, the amount of collected fat, and the amount of cell preparation injected for subject J.
  • the knee joint MR image of the subject A is shown in FIG. 3 as a representative example.
  • Test Example 5 Muscle repair effect For subjects having quadriceps injury, deltoid brachial muscle injury or greater pectoral muscle injury (4 men: average age 37.8 years, 20 women: average age 33.8 years)
  • the cell preparation (10-50 mL, containing about 4 to 20 million adipose stem cells) containing the micronized adipocytes and adipose stem cells prepared in i) was injected into the site where the muscle was damaged.
  • fat collected from the lower abdomen or thigh of the subject (amount of collected fat: 50 to 200 ml) was used.
  • the range of motion (ROM: Range of Motion) of the upper limbs was expanded and the improvement of the motor function was observed in all subjects. That is, it was shown that the muscle was repaired by administering the cell preparation to the site of muscle damage.
  • adipocytes and mesodermal stem cells such as adipose stem cells are used in combination, the mesodermal stem cells are retained in the affected area by the action of the adipocytes (including extracellular matrix), and the mesodermal stem cells are engrafted. It is thought that efficiency and organization regeneration efficiency are improved.
  • the cell preparation of the present invention has an excellent effect in the treatment of diseases of the interosseous joint and muscle repair.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

【課題】本発明は、骨間接合部の疾患の治療、及び変性や損傷を起こした筋肉の修復に有用な細胞製剤を提供することを主な課題とする。 【解決手段】本発明は、脂肪細胞を含む骨間接合部の疾患を治療するための細胞製剤、ならびに脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む筋肉修復用細胞製剤を提供する。

Description

脂肪細胞を含む細胞製剤
　本発明は、骨間接合部の疾患に起因する痛みの緩和、及び当該疾患の治療に有用な細胞製剤に関する。また、本発明は、変性したり損傷した筋肉の修復に有用な細胞製剤に関する。
　ヒトの軟部組織のボリュームを増大させる手段として、ヒアルロン酸注入、脂肪細胞の移植等が知られており、顔面のシワ除去、陥凹治療、乳房再建等の美容外科、形成外科等の分野で多用されている。しかしながら、ヒアルロン酸注入による治療は、容易である反面、注入されたヒアルロン酸が約半年で吸収されてしまうため効果の持続性に乏しいという問題がある。また、脂肪細胞の移植についても、移植後に生体内で脂肪細胞が壊死したり、吸収されてしまうことがある。そのため、再手術が必要となったり、場合によっては瘢痕を生じるという欠点が存在する。
　これらの欠点を解消するため、脂肪幹細胞の移植が提案され、効率的に脂肪幹細胞を分離する方法が開発されている（例えば特許文献１及び２を参照）。脂肪幹細胞を移植することによって、移植後の細胞の定着率が改善され、軟部組織再生に一定の効果が認められている。しかしながら、このような方法で得られる脂肪幹細胞には不純物が含まれる場合があり、これが原因で移植後に脂肪細胞が壊死したり、しこり（石灰化）を生じる可能性があった。脂肪細胞は、一般的に脂肪吸引により得られるが、吸引された脂肪は、脂肪細胞や脂肪幹細胞の他に様々な不純物が含まれた混合物である。このような混合物から除去すべき不純物としては、血液（特に赤血球）、死活細胞、老化細胞等が挙げられる。これに対して、特許文献３に記載されるウェイトフィルターを装着したシリンジを用いて遠心分離にかけ、脂肪吸引により採取した脂肪細胞や脂肪幹細胞を含む混合物から石灰化や脂肪壊死の原因となる不純物を除去した、健全な濃縮脂肪細胞と脂肪幹細胞を含む細胞製剤（Ｃｏｎｄｅｎｓｅｄ　Ｒｉｃｈ　Ｆａｔ：ＣＲＦ（登録商標））を注入する方法が提案されている。このような方法によれば、細胞の定着率が向上し、しこり等の問題も生じにくいため、広く受け入れられつつある。
　このように、脂肪細胞及び脂肪幹細胞の分離及び濃縮について様々な技術が開発され、安全で定着性に優れた脂肪細胞及び脂肪幹細胞が提供されつつある。しかしながら、これまで脂肪細胞及び脂肪幹細胞の移植は、軟部組織の再生に適用されることがほとんどであり、例えば関節痛の緩和や関節内の組織再生に関するこれらの細胞の有効性については十分に検討されていなかった。また、脂肪細胞及び脂肪幹細胞を損傷された筋肉に投与することによって筋肉の修復がされることについても知られていなかった。
特表２００５－５１９８８３号公報 特表２００７－５０９６０１号公報 特表２００７－５３３３９６号公報
　本発明は、骨間接合部の疾患に起因する痛みの緩和、及び当該疾患の治療に有用な細胞製剤を提供することを主な目的とする。また、本発明は、損傷した筋肉の修復に有用な細胞製剤を提供することを他の目的とする。
　本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、関節痛を訴える患者に脂肪細胞を注入すると、早期に症状が緩和され且つその効果が持続することを見出した。更に、脂肪細胞と脂肪幹細胞とを組合わせて注入すると、前記関節痛の緩和に加え、関節内の骨組織や軟骨組織が効率よく再生されることを見出した。また、本発明者は、脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤を筋肉損傷部位に投与することにより損傷した筋肉が修復されることを見出した。本発明は、これらの知見に基づいて更に研究を重ねた結果完成されたものである。
　即ち、本発明は、下記態様の細胞製剤、骨間接合部の疼痛緩和方法、骨間接合部の組織再生方法、筋肉修復方法等を提供する。
項１．脂肪細胞を含む、骨間接合部の疾患を治療するための細胞製剤。
項２．更に、中胚葉系幹細胞を含む、項１に記載の細胞製剤。
項３．前記中胚葉系幹細胞が脂肪幹細胞である、項１に記載の細胞製剤。
項４．脂肪細胞１個に対して中胚葉系幹細胞が１～１０個含まれる、項１に記載の細胞製剤。
項５．前記脂肪細胞がγ線照射された細胞である、項１に記載の細胞製剤。
項６．前記骨間接合部の疾患が、脊椎疾患、関節疾患、自己免疫疾患及び骨壊死症からなる群より選択されるいずれか１種である、項１に記載の細胞製剤。
項７．骨間接合部の疾患の治療剤の製造のための脂肪細胞を含む細胞製剤の使用。
項８．骨間接合部の疾患の治療に使用される脂肪細胞を含む細胞製剤。
項９．脂肪細胞を含む細胞製剤を、骨間接合部の疾患を有する患者の骨間接合部に投与する工程を含む、骨間接合部の疼痛を緩和する方法。
項１０．脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤を、骨間接合部の疾患を有する患者の骨間接合部に投与する工程を含む、骨間接合部の組織再生方法。
項１１．脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む、筋肉修復用細胞製剤。
項１２．前記中胚葉系幹細胞が脂肪幹細胞である、項１１に記載の細胞製剤。
項１３．脂肪細胞１個に対して中胚葉系幹細胞が１～１０個含まれる、項１１に記載の細胞製剤。
項１４．前記脂肪細胞がγ線照射された細胞である、項１１に記載の細胞製剤。
項１５．筋肉修復用製剤の製造のための脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤の使用。
項１６．筋肉修復に使用される脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤。
項１７．脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤を、筋肉損傷を有する患者の筋肉損傷部位に投与する工程を含む、筋肉修復方法。
　本発明の脂肪細胞を含む細胞製剤によれば、脂肪細胞や脂肪細胞周辺に存在するＥＣＭ（細胞外基質）等によって関節等のすべりが改善されて関節痛を早期に緩和することができ、骨間接合部の疾患に起因する疼痛緩和に優れた効果を得ることができる。また、例えば、本発明の細胞製剤を椎間板等に注入することにより、クッションの役目を果たし、椎体の動きをよくする（改善する）効果を奏する。更に、本発明の細胞製剤による関節痛の緩和効果は、長期に亘って持続する。
　また、脂肪細胞と中胚葉系幹細胞を含む本発明の細胞製剤によれば、脂肪細胞により骨間接合部の疾患に起因する疼痛が緩和され、その間に、中胚葉系幹細胞による骨組織、軟骨組織、軟部組織等の関節内の組織再生が促される。また、脂肪細胞と中胚葉系幹細胞を組合せて用いることにより、前述の疼痛が緩和されるのみならず、脂肪細胞のはたらきによって中胚葉系幹細胞が患部に保持され、中胚葉系幹細胞の生着効率及び組織再生効率がより一層促進されることから、脂肪細胞と中胚葉系幹細胞を含む本発明の細胞製剤は骨間接合部の疾患の治療に更に有効である。
　また、脂肪細胞と中胚葉系幹細胞を含む本発明の細胞製剤は、筋肉の変性や手術による筋肉の切除によって損傷された筋肉に対して優れた修復効果を有する。また、当該細胞製剤によれば筋肉損傷による痛みを早期に緩和することができるため、患者のＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ）の向上にも寄与するものである。
　従来、脂肪幹細胞等の中胚葉系幹細胞を培養して組織修復する方法が採用される場合には、培養等の過程で汚染（コンタミネーション）される可能性があり、移植後に感染症を引き起こすおそれもあった。しかしながら、本発明の細胞製剤に含まれる脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞は、細胞培養の工程を経ることなく吸引脂肪等から直接的に分離、濃縮することが可能であるため、外気と接触することなく調製され得る。従って、感染症等の心配もない。また、本発明の細胞製剤は、通常、骨間接合部の疾患の治療又は筋肉の修復を要する患者本人から採取された脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を用いて調製されるため、免疫拒絶反応の問題のない安全性の高いものである。
図１（ａ）は細胞製剤を投与する前の被験者Ａの左膝関節を示すＸ線写真であり、図１（ｂ）は細胞製剤の投与から約１か月後の被験者Ａの左膝関節を示すＸ線写真である。 図２（ａ）は細胞製剤を投与する前の被験者Ｂの左右膝関節を示すＸ線写真であり、図２（ｂ）は細胞製剤の投与から約１か月後の被験者Ｂの左右膝関節を示すＸ線写真である。 図３は、細胞製剤を投与することによって骨組織の再生が促され、骨壊死が改善、消失したことを示すＭＲ画像の代表例である。
１．細胞製剤
　本発明は、以下の骨間接合部の疾患を治療するための細胞製剤、及び筋肉修復用細胞製剤を提供する。以下、各細胞製剤について詳述する。
(1-1)骨間接合部の疾患を治療するための細胞製剤
　本発明は、脂肪細胞を含むことを特徴とする、骨間接合部の疾患を治療するための細胞製剤を提供する。
　脂肪細胞（ｆａｔ　ｃｅｌｌ）とは、脂肪を合成、貯蔵、放出する機能を有し、脂肪組織を形成する細胞である。また、脂肪細胞は、完全に分化しているため細胞分裂を起こさない。脂肪細胞には、白色脂肪細胞及び褐色脂肪細胞が存在するが、本発明においてはこれらのいずれを用いてもよく、両者の混合物を使用してもよい。本発明において脂肪細胞の由来は特に限定されないが、例えば、哺乳類の脂肪細胞、好ましくは霊長類の脂肪細胞、更に好ましくはヒト脂肪細胞を使用する。本発明において、脂肪細胞としては、脂肪細胞のみを単独で使用することもできるが、脂肪細胞周辺に存在する細胞外基質（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｍａｔｒｉｘ：ＥＣＭ）と脂肪細胞の混合物を使用してもよい。具体的には、本発明では、脂肪細胞として、採取された脂肪組織をそのまま使用してもよく、また採取された脂肪組織から細胞外基質を取り除いたものを使用してもよい。
　脂肪細胞は、脂肪組織から採取される。脂肪組織の採取方法としては、特に限定されず、従来公知の方法から適宜選択され得るが、例えば脂肪吸引、脂肪切除、除脂術等が挙げられる。比較的容易且つ低侵襲であることから、脂肪吸引による採取が好ましい。採取された脂肪から脂肪細胞を得る方法としては、特に限定されないが、好ましくは下記２．細胞製剤の調製方法に記載される方法が挙げられる。
　また、本発明の骨間接合部の疾患を治療するための細胞製剤は、更に中胚葉系幹細胞を含んでいてもよい。中胚葉系幹細胞を更に含むことにより、骨間接合部における組織再生が促され、本発明の細胞製剤による治療効果がより一層高められる。
　本発明の細胞製剤に使用される中胚葉系幹細胞は、主に、骨、軟骨、心筋、脂肪等の中胚葉系の組織に属する細胞に分化する中間幹細胞を指す。中胚葉系幹細胞の由来は特に限定されないが、例えば、哺乳類の中胚葉系幹細胞、好ましくは霊長類の中胚葉系幹細胞、更に好ましくはヒト中胚葉系幹細胞を使用する。
　中胚葉系幹細胞として具体的には、脂肪幹細胞、骨髄幹細胞、造血幹細胞等が例示され、これらの幹細胞は従来公知の方法に従って細胞の種類に応じて各組織から得ることができる。
　本発明において、中胚葉系幹細胞として好ましくは脂肪幹細胞が例示される。脂肪幹細胞は、脂肪組織から採取することができる。脂肪幹細胞の供給源となる脂肪組織は、前述の脂肪細胞と同様、脂肪吸引、脂肪切除、除脂術等のいずれかの方法により採取することができるが、脂肪幹細胞の流出や損傷を防ぎ、より安全に採取できるという観点から、好ましくは脂肪吸引である。また、採取された脂肪から脂肪幹細胞を得る方法として好ましくは、下記２．細胞製剤の調製方法に記載される方法が挙げられる。
　本発明の細胞製剤が中胚葉系幹細胞を含む場合、脂肪細胞と中胚葉系幹細胞が混在した状態のものを使用することが好ましい。本発明の細胞製剤が中胚葉系幹細胞を含む場合、細胞製剤中の中胚葉系幹細胞の含有量としては、骨間接合部の疾患の治療効果が得られる範囲であれば特に限定されず、中胚葉系幹細胞の含有量が多いほどより一層優れた治療効果が得られると考えられるが、例えば、脂肪細胞１個に対して中胚葉系幹細胞が、少なくとも１個以上、好ましくは５個以上、より好ましくは１～１０個、更に好ましくは５～１０個が挙げられる。また、工程（１ｃ）及び（２ｃ）を含む下記方法（ｃ）により調製された細胞製剤の場合、当該細胞製剤１ｍＬあたりに含まれる中胚葉系幹細胞の数が、通常１０万個以上、好ましくは１５万個以上、更に好ましくは１５～２０万個が挙げられる。
　本発明の細胞製剤において、自家移植を目的として、自己由来の脂肪細胞（及び中胚葉系幹細胞）を使用することにより、早期の症状改善に加えて、免疫拒絶反応を回避することもできる。但し、本発明の細胞製剤を、他人由来の脂肪細胞（及び中胚葉系幹細胞）を用いて調製することを制限するものではない。他人由来の細胞を使用する場合は、移植前に他人から採取した脂肪細胞（脂肪細胞周辺に存在する細胞外基質（ＥＣＭ）を含む）に対し、例えばγ線照射等の抗原性を除去するための処理を行うことが好ましい。中胚葉系幹細胞は通常免疫原性を有さない細胞であるが、必要に応じて、前記処理に供したものを使用してもよい。
　本発明の細胞製剤の好適な一例として、脂肪細胞と脂肪幹細胞を含むものが挙げられる。通常、脂肪組織には、脂肪細胞と脂肪幹細胞が含まれている。そのため、脂肪細胞と脂肪幹細胞を含む細胞製剤としては、採取された脂肪組織をそのまま使用してもよく、また、採取された脂肪組織から不純物（例えば、脂肪採取の際に注入される麻酔液（所謂チュメセント液）、老化した脂肪細胞、血液、組織液等）を除去したもの、採取された脂肪組織から不純物と一部の脂肪細胞を除去したもの等を使用してもよい。当該細胞製剤の調製方法の好適な例としては、後述する方法（ａ）～（ｃ）が挙げられる。
　また、本発明の細胞製剤には、必要に応じて従来公知の薬学的に許容される担体、賦形剤、消炎剤、鎮痛剤、免疫抑制剤等を添加することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲でコラーゲン、線維芽細胞、成長因子、増殖因子、サイトカイン等を添加してもよい。
　また、例えばＰＲＰ（Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ｒｉｃｈ　Ｐｌａｓｍａ：多血小板血漿）等の組織再生作用が知られている他の細胞製剤を、本発明の細胞製剤と併用してもよい。更に、ＰＲＰにロサルタン等のアンジオテンシンII受容体拮抗薬を添加することによって、より一層軟骨組織の再生効果が高められる。但し、組織再生効率が向上するという観点から、例えば軟骨組織の再生を期待する場合にはＰＲＰからＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子）を除去し、骨再生を期待する場合にはＢＭＰｓ（骨形成タンパク質）を除去して使用することが好ましい。
　本発明の骨間接合部の疾患を治療するための細胞製剤は、骨間接合部の疾患に対して優れた治療効果を奏する。骨間接合部とは骨の連結部分を指し、軟骨又は軟骨と線維性結合組織の組み合わせによってつながる軟骨性連結、軟骨及び関節包を包む滑膜によってつながる滑膜性連結、及び線維性結合組織によりつながる線維性の連結が包含されるが、本発明においては特に、軟骨性連結及び滑膜性連結によってつながる可動性を有する部分を指す。骨間接合部として具体的には、脊椎関節、膝関節、足関節、足趾関節、股関節、手関節、肘関節、肩関節、手指関節、肩鎖関節、仙腸関節等が例示される。また、例えば膝関節の場合、靭帯、半月板等の軟部組織、脊椎関節の場合、ディスク（椎間板）等も前記骨間接合部に包含される。
　また、骨間接合部の疾患とは、ヘルニア（脱出）、変形、変性、炎症等が挙げられ、具体的には、椎間板ヘルニア、変形性脊椎症等の脊椎疾患；変形性関節症（変形性股関節症、変形性膝関節症等を含む）、慢性関節症等の関節疾患；関節リウマチ等の自己免疫性疾患；膝関節特発性骨壊死症、大腿骨頭壊死症等の骨壊死症等が例示され、好ましくは椎間板ヘルニア、変形性関節症、慢性関節症、膝関節特発性骨壊死症、大腿骨頭壊死症が挙げられる。
　本発明の細胞製剤の投与量については、骨間接合部の疾患に対する治療効果が得られる範囲であれば特に限定されず、投与箇所の大きさ、疾患の部位、疾患の程度、患者の性別、体格等によって適宜設定され得るが、例えば、脂肪細胞数に換算して１０万～４００万個、好ましくは２０万～２００万個、更に好ましくは２０万～１００万個が挙げられる。例えば、工程（１ｃ）及び（２ｃ）を含む下記方法（ｃ）で得られる細胞製剤を用いる場合、その投与量は０．５～２０ｍＬ、好ましくは１～１０ｍＬ、更に好ましくは１～５ｍＬが挙げられる。また、例えば、膝関節に対しては、細胞製剤１～２０ｍＬ、好ましくは１～１０ｍＬ、更に好ましくは５～１０ｍＬを投与することができる。また、椎間板に対しては、細胞製剤０．５～２０ｍＬ、好ましくは１～１５ｍＬ、更に好ましくは１～２ｍＬを投与することができる。
　投与方法としては、骨間接合部の疾患箇所（例えば、関節腔、椎間板（椎間円板）等）に、注射器、カニューレ等を使用して注入する方法が挙げられるが、これらに限定されない。また、注入の際、注射針やカニューレの先端で注入箇所を刺激することによって、より一層優れた治療効果が得られる。刺激の方法は特に限定されないが、例えば、先端が斜めにカットされたカニューレを、細胞製剤を注入する際、前後左右に回転させて注入部位を刺激する方法が挙げられる。
　本発明の細胞製剤をこれらの疾患を有する患者に投与する場合、必要に応じて公知の方法による処置を行った後に投与してもよい。例えば、椎間板ヘルニアの場合であれば脱出した椎間板を、ＰＬＤＤ（Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ　Ｌａｓｅｒ　Ｄｉｓｃ　Ｄｅｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ）等の従来公知の方法で除去した後に、本発明の細胞製剤を投与（注入）することができる。本発明の細胞製剤に含まれる脂肪細胞の作用により、骨間接合部の疾患に起因する痛み（関節痛）が緩和され、更に、中胚葉系幹細胞を含む場合、当該細胞のはたらきによって骨間接合部における骨組織、軟骨組織、軟部組織等が再生される。
(1-2)筋肉修復用細胞製剤
　本発明は、脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含むことを特徴とする、筋肉損傷部位において筋肉を修復することが可能な細胞製剤を提供する。
　本発明の筋肉修復用細胞製剤において使用される脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞、ならびに細胞製剤中の両者の含有量等については、前記「（1-1）骨間接合部の疾患を治療するための細胞製剤」の欄に記載される通りである。また、本発明の筋肉修復用細胞製剤の好ましい態様として、脂肪細胞と、中胚葉系幹細胞である脂肪幹細胞とを含む細胞製剤が例示される。脂肪幹細胞を得る方法としては、例えば下記２．細胞製剤の調製方法に記載される方法が挙げられる。
　また、筋肉修復用細胞製剤においても、脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞の他、必要に応じて従来公知の薬学的に許容される担体、賦形剤、消炎剤、鎮痛剤、免疫抑制剤等を添加することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲でコラーゲン、線維芽細胞、成長因子、増殖因子、サイトカイン等を添加してもよい。
　また、本発明の効果を損なわない限り、例えば、ＰＲＰ（Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ｒｉｃｈ　Ｐｌａｓｍａ：多血小板血漿）等の組織再生作用が知られている他の細胞製剤を、本発明の細胞製剤と併用してもよい。但し、筋組織の再生効率をより一層高める観点から、トランスフォーミング増殖因子β１（ＴＧＦβ１）を除去して使用することが好ましい。
　本発明の筋肉修復用細胞製剤は、筋肉損傷部位に適用した場合に優れた筋肉修復効果を奏する。筋肉損傷には、筋肉変性、筋肉の線維化、筋線維の破壊や壊死、筋委縮、筋麻痺、筋力低下等に加え、手術や外傷等により筋肉を切除した場合も含まれる。また、本発明の細胞製剤が適用される筋肉の部位や種類は特に限定されないが、例えば、体幹筋（上肢又は下肢の筋肉、大胸筋を含む）等の骨格筋；膀胱括約筋等の平滑筋；心筋が挙げられる。例えば、上肢の筋肉の損傷部位に本発明の細胞製剤を投与することにより、筋肉損傷による痛みが早期に緩和され、更に筋肉が修復されることによって上肢のＲＯＭ（Ｒａｎｇｅ　ｏｆ　Ｍｏｔｉｏｎ：関節可動域）の拡大や運動機能の改善が実現される。また、膀胱括約筋の筋力低下や損傷等による尿失禁、頻尿等の排尿障害を呈する患者の膀胱括約筋に本発明の細胞製剤を投与することによって、膀胱括約筋の筋力を高めて尿失禁、尿漏れ等の問題を安全且つ容易に解消することができる。また、心筋梗塞、虚血再灌流障害、筋ジストロフィー（例えば、Ｄｕｃｈｅｎｎｅ筋肉ジストロフィー（ＤＭＤ））、筋炎（ミオパチー）等の筋疾患を有する患者の筋肉損傷部位に対して適用することもできる。
　また、筋肉損傷は痛みを伴うことが多いが、本発明の筋肉修復用細胞製剤を筋肉損傷部位に投与することによって、早期に痛みを緩和することができる。本発明の限定的な解釈を望むものではないが、このような疼痛緩和効果は、筋肉修復用細胞製剤に含まれる脂肪細胞によるものと考えられる。
　筋肉修復を目的として本発明の細胞製剤を使用する場合の投与量は、筋肉修復効果が得られる範囲であれば特に限定されず、投与箇所の大きさ、疾患の部位、疾患の程度、患者の性別、体格等によって適宜設定され得る。例えば、損傷筋肉の単位容積１０ｍＬあたりの投与量としては、脂肪細胞数に換算して１０～４００万個、好ましくは２０～２００万個、更に好ましくは２０～１００万個が挙げられる。また、工程（１ｃ）及び（２ｃ）を含む下記方法（ｃ）で得られる細胞製剤を用いる場合、例えば損傷筋肉の単位容積１０ｍＬあたり０．５～２０ｍＬ、好ましくは１～１０ｍＬ、更に好ましくは１～５ｍＬが挙げられる。
　筋肉修復を目的として本発明の細胞製剤を使用する場合の投与方法は特に限定されず、従来公知の投与方法を採用することができ、例えば、筋肉損傷部位に注射器、カニューレ等で注入する方法が挙げられる。
２．細胞製剤の調製方法
　本発明においては、脂肪細胞を採取し、必要に応じて分離、濃縮を行い、本発明の細胞製剤として調製することができる。また、脂肪細胞と中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤を調製する場合には、これらの細胞の混合物として採取したものを使用してもよく、それぞれの細胞を個別に採取し、その後、両者を混合して本発明の細胞製剤としてもよい。例えば、中胚葉系幹細胞が脂肪幹細胞である場合には、脂肪細胞と同じ組織から同時に調製でき簡便であるため、脂肪組織から脂肪細胞と脂肪幹細胞の混合物を得て、本発明の細胞製剤とすることが好ましい。また、より簡便には、これらの細胞を含む脂肪組織を使用してもよい。
　脂肪組織から本発明の細胞製剤を調製する場合、好ましい方法として、下記方法（ａ）～（ｃ）が例示される。但し、脂肪以外の組織から本発明の細胞製剤を調製することを制限するものではなく、脂肪組織以外の組織（例えば、血液、骨髄液、筋等）から本発明の細胞製剤を調製する場合であっても下記方法に準じて、細胞の種類や性質を考慮し、適宜条件を設定して本発明の細胞製剤を調製することができる。以下、方法（ａ）～（ｃ）についてそれぞれ詳述する。
　方法（ａ）
　本発明の細胞製剤を調製する方法（ａ）は、（１ａ）採取された脂肪から液体画分を除去し、細胞画分を得る工程を含む。
　ここで、採取された脂肪とは、脂肪吸引、脂肪切除、除脂術等により脂肪組織から採取された、脂肪組織由来の細胞画分及び液体画分の混合物を指す。細胞画分には、脂肪細胞、脂肪幹細胞及び不純物（血球、死活細胞、老化細胞等）が含まれる。また、液体画分には、チュメセント液、細胞組織液等が含まれる。
　液体画分と細胞画分の分離は、簡便には、採取された脂肪を静置することによって細胞画分を沈降させて分離することができる。液体画分の除去方法は特に限定されないが、例えば、デカンテーション、吸引等が挙げられる。また、必要に応じて遠心分離、濾過等を行ってもよい。
　遠心分離及び濾過の条件は、脂肪細胞及び脂肪幹細胞を損傷せず、且つ不純物を除去できれば特に限定されないが、例えば、７００～２５００×ｇで１～１５分間、好ましくは２０００～２２００×ｇで５～１０分間の条件が挙げられる。
　また、濾過を行う場合であれば、採取された脂肪を、例えば１０～３００μｍ、好ましくは１０～１５０μｍ、より好ましくは１０～１００μｍ、更に好ましくは１５～２０μｍの穴大きさを有する網目状フィルターを通過させることにより血液、組織液、脂肪を採取する箇所に投与された麻酔薬（チュメセント液）等を除去してフィルター上に脂肪細胞及び脂肪幹細胞の混合物を得ることができる。また、このような網目状フィルターを備えた容器に、採取された不純物を含む脂肪を充填し、遠心分離に供してもよい。
　斯して、液体画分が除去された、脂肪細胞（細胞外基質を含む）及び脂肪幹細胞を含む脂肪組織を得ることができ、これを本発明の細胞製剤として使用することができる。
　方法（ｂ）
　本発明の細胞製剤を調製する方法（ｂ）は、下記工程を含むことを特徴とする。
（１ｂ）採取された脂肪から液体画分を除去し、細胞画分を得る工程；及び
（２ｂ）前記工程（１ｂ）で得られた細胞画分の少なくとも一部から脂肪細胞と脂肪幹細胞を分離する工程。
　ここで、工程（１ｂ）は上記方法（１ａ）に記載の通りである。工程（２ｂ）において、脂肪細胞を含む細胞製剤を調製する場合には、工程（１ｂ）において得られた細胞画分の全てを工程（２ｂ）の処理に供して、分離される脂肪細胞のみを使用することができる。また、脂肪細胞と脂肪幹細胞を含む細胞製剤を調製する場合には、工程（１ｂ）において得られた細胞画分の少なくとも一部、好ましくは半量から脂肪幹細胞を分離し、更にこれを工程（１ｂ）で得られた細胞画分に添加することによって、脂肪細胞と脂肪幹細胞を含む細胞製剤とすることができる。
　ここで、脂肪幹細胞を分離する方法としては、例えば、特許文献１に記載の方法が挙げられる。より具体的には、細胞間の結合を分解することにより脂肪細胞と脂肪幹細胞を分離しやすくするために、細胞画分にタンパク質分解酵素を添加する。タンパク質分解酵素としては、コラゲナーゼ、トリプシン、リパーゼ等が例示され、これらから選択される１種を単独で使用してもよく、２種以上を組合せて使用することもできる。
　酵素処理された細胞画分から脂肪細胞と脂肪幹細胞を分離する方法としては、特に限定されず、従来公知の方法から適宜選択され得るが、例えば、遠心分離、濾過等が挙げられる。遠心分離の条件としては、脂肪細胞及び脂肪幹細胞を傷つけることなく分離できるものであれば特に限定されないが、例えば、１００～５００×ｇで１～２０分、好ましくは１００～３００×ｇで５～１０分間の条件が挙げられる。このような遠心分離に供することによって、脂肪幹細胞が沈殿物として得られ、上清中に脂肪細胞が濃縮される。また、濾過を行う場合であれば、細胞画分又はその懸濁液を１０～１００μｍ、好ましくは１０～５０μｍ、更に好ましくは１５～２０μｍの穴大きさを有する網目状フィルターを通過させることによりフィルター上に脂肪幹細胞を得ることができ、濾液中に脂肪細胞を得ることができる。
　酵素処理された脂肪細胞及び脂肪幹細胞は、分離後、洗浄処理に供されることが好ましく、洗浄はリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）、生理食塩水、リンゲル液、デキストラン等により行うことができる。洗浄処理は、必要に応じて複数回繰り返してもよく、洗浄後に細胞を回収する際、必要に応じて遠心分離に供してもよい。遠心分離の条件としては前記の酵素処理された細胞画分から脂肪細胞と脂肪幹細胞を分離する際に採用される条件に従えばよい。
　本工程（２ｂ）で分離される脂肪細胞を洗浄後、本発明の細胞製剤として使用することができる。本方法（ｂ）で得られる脂肪細胞を用いて得られる本発明の細胞製剤は、骨間接合部の疾患に起因する痛みの緩和に優れた効果を奏する。
　更に、本方法（ｂ）は、前記工程（２ｂ）の後、前記工程（１ｂ）で得られた細胞画分と、工程（２ｂ）で得られた脂肪幹細胞とを混合する工程（３ｂ）を含んでもよい。本工程（３ｂ）では、工程（１ｂ）において得られた細胞画分と、工程（２ｂ）で得られた脂肪幹細胞を混合し、脂肪細胞及び脂肪幹細胞を含む細胞製剤を得ることができる。このようにして調製される細胞製剤は、脂肪幹細胞を高濃度で含み、骨間接合部の疾患に起因する痛みの緩和に有効であるのみならず、骨間接合部の組織再生に対して優れた効果を奏するものである。また、このような脂肪細胞及び脂肪幹細胞を含む細胞製剤は、損傷した筋肉に対して優れた筋肉修復効果を奏すると共に、筋肉損傷に起因する疼痛の緩和に対しても優れた効果を奏する。
　方法（ｃ）
　本発明の細胞製剤を調製する方法（ｃ）は下記：
（１ｃ）採取された脂肪から液体画分を除去し、細胞画分を得る工程；ならびに
（２ｃ）前記工程（１ｃ）で得られた細胞画分から不純物を除去し、脂肪細胞及び脂肪幹細胞の濃縮物を得る工程、を含む。
　ここで、工程（１ｃ）については、上記方法（１ａ）に記載の通りである。工程（２ｃ）においては、細胞画分から不純物を除去して濃縮する。不純物除去及び濃縮の方法としては特に限定されず、従来公知の方法から適宜選択され得るが、簡便には、例えば特許文献３に記載されるウェイトフィルターを備えたシリンジを使用することにより、壊れた脂肪細胞から遊離したフリーオイル、死活細胞、老化細胞等の不純物が除去され、健全な脂肪細胞及び脂肪幹細胞の濃縮物が得られる。このようなシリンジは商業的に入手可能であり、具体的にはＬＩＰＯＭＡＸ－ＳＣ用に製造されたシリンジ（Ｍｅｄｉｋａｎ　Ｃｏｒｐ．製，韓国　ソウル）が例示される。
　より具体的には、内部にフィルターが備えられたシリンジ中に採取された脂肪を充填し、遠心分離によって脂肪を液体画分と細胞画分に分離し、更にフィルターによって、フリーオイル（排液オイル）が分離される。ここで分離される液体画分は、工程（１ｃ）において完全に分離されずに細胞画分中に混在していたものである。即ち、シリンジ中に、上層にフリーオイル、中間層に脂肪細胞及び脂肪幹細胞の濃縮物ならびに下層に液体画分が分離され、中間層以外を廃棄することによって健全な脂肪細胞及び脂肪幹細胞の濃縮物を得ることができ、これを本発明の細胞製剤として使用することができる。このようにして得られる細胞製剤は、健全な脂肪細胞と脂肪幹細胞が選択、濃縮されていることから、移植後の壊死、石灰化等を生じにくく、骨間接合部の疾患の症状の緩和及び治療、並びに損傷した筋肉の修復及び筋肉損傷による疼痛の緩和に一層有用である。
　前記脂肪を液体画分と細胞画分に分離するための遠心分離の条件としては、脂肪細胞及び脂肪幹細胞を損傷することなく、且つ不純物と脂肪細胞及び脂肪幹細胞が分離され得る条件であれば特に限定されないが、例えば、７００～２５００×ｇで１～１５分間、好ましくは２０００～２２００×ｇで５～１０分間の条件が挙げられる。
　また、フィルターの穴大きさは、脂肪細胞及び脂肪幹細胞が通過せず、且つ不純物が通過できる程度であれば特に限定されないが、例えば１０～３００μｍ、好ましくは１０～１５０μｍ、より好ましくは１０～１００μｍ、更に好ましくは１５～２０μｍである。
　また、本方法（ｃ）は、工程（２ｃ）で得られた濃縮物の少なくとも一部から脂肪細胞と脂肪幹細胞を分離し、得られた脂肪幹細胞を、更に前記工程（２ｃ）で得られた濃縮物に混合する工程（３ｃ’）を含んでもよい。脂肪幹細胞の分離の方法は、上記方法（ｂ）の工程（２ｂ）について記載される通りである。本工程（３ｃ’）において、タンパク質分解酵素を用いて脂肪幹細胞を分離した場合、工程（２ｃ）で得られた濃縮物１ｃｃあたり通常約７０万個以上、好ましくは約１５０万個以上、更に好ましくは約２００万個以上の脂肪幹細胞を得ることができる。本工程（３ｃ’）を経て調製される細胞製剤は、健全な脂肪細胞が選択、濃縮されていることに加え、脂肪幹細胞をさらに高濃度で含むことから、骨間接合部の疾患の治療、及び損傷した筋肉の修復に対してより一層優れた治療効果を奏するものである。
　また、本工程（３ｃ’）で分離される脂肪細胞を、洗浄後、本発明の細胞製剤として使用することができる。ここで得られる脂肪細胞は、健全な脂肪細胞が選択、濃縮されているため、骨間接合部の疾患や筋肉損傷に起因する痛みの緩和により一層優れた効果を奏するものである。
　また、本方法（ｃ）は、前記工程（２ｃ）の後、得られた濃縮物中の脂肪細胞を微細化し、微細化された脂肪細胞及び脂肪幹細胞を混合物として分離する工程（３ｃ’’）を含んでもよい。脂肪細胞を微細化は、当該技術分野において通常採用される方法により行うことができ、特に限定されないが、例えば、必要に応じてドリル等によって脂肪細胞をカッティングした後、微細化された脂肪細胞と脂肪幹細胞の混合物を分離する。分離方法としては、前記遠心分離の条件を採用することができる。本工程（３ｃ’’）を行う際、前記工程（２ｃ）の後、濃縮物をシリンジに充填したまま、脂肪細胞の微細化および遠心分離に供してもよい。遠心分離後、シリンジ中にフリーオイルと、微細化された脂肪細胞及び脂肪幹細胞の混合物とが分離されるため、フリーオイルを廃棄し、微細化された脂肪細胞及び脂肪幹細胞の混合物を得ることができる。
　このような分離工程を経ることにより微細な脂肪細胞と脂肪幹細胞を高濃度で含有する細胞製剤を調製することができる。ここで、微細な脂肪細胞とは、２６～３０ゲージ、好ましくは１８～３０ゲージの注射針を通過できる程度の大きさを有する脂肪細胞を指す。本工程（３ｃ’’）において、脂肪細胞を微細化する処理を少なくとも１回、好ましくは１～数回、より好ましくは１～２回行うことができる。脂肪細胞を微細化することによって、細胞製剤の単位容積あたりの脂肪幹細胞の濃度を高くすることができ、骨間接合部の疾患や筋肉損傷に由来する疼痛の緩和効果、骨間接合部内の組織再生効果、及び筋肉修復効果がより一層顕著に発揮される。
　また、工程（３ｃ’’）で得られた微細化された脂肪細胞と脂肪幹細胞の混合物の少なくとも一部から脂肪幹細胞を分離し、得られた脂肪幹細胞を前記工程（２ｃ）で得られた濃縮物に混合する工程（４ｃ’’）を含んでもよい。脂肪幹細胞の分離の方法は、上記方法（ｂ）の工程（２ｂ）について記載される通りである。
　本工程（４ｃ’’）で脂肪幹細胞が分離されて得られる脂肪細胞を、洗浄後、本発明の脂肪細胞を含む細胞製剤として使用することができる。洗浄は、前述の脂肪幹細胞に対して行う洗浄処理と同様の方法によって行うことができる。ここで得られる脂肪細胞は、健全な微細化された脂肪細胞が選択、濃縮されているため、骨間接合部の疾患や筋肉損傷に起因する痛みの緩和に更に顕著に優れた効果を奏するものである。
　本方法（ｃ）において、特許文献３に記載されるシリンジを使用することにより、細胞を外気に接触させることなく全ての工程を実施することができる。例えば、特許文献３に記載されるシリンジにカニューレ等を装着して脂肪吸引により採取された脂肪を充填し、そのまま不純物の除去及び濃縮処理等に供し、細胞製剤を得ることができる。その後、細胞製剤を投与する際も、シリンジから直接、細胞製剤を注入するためのシリンジに移し、患部に投与することができるため、汚染等の問題のない安全性の高い細胞製剤とすることができる。簡便には、本方法（ｃ）を商業的に入手可能なキットを使用して行うこともでき、そのようなキットとしては、具体的には、ＬＩＰＯＭＡＸ－ＳＣ（ＭＥＤＩＫＡＮ　Ｃｏｒｐ．製）等が例示される。
　以上のいずれの方法によっても、本発明の細胞製剤を得ることができるが、好ましくは方法（ｂ）又は（ｃ）であり、より好ましくは方法（ｃ）、更に好ましくは方法（ｃ）の工程（３’’）又は工程（４’’）を経て調製される、微細化された脂肪細胞を含む細胞製剤であることが好ましい。方法（ｃ）の工程（４’’）を経て得られる微細化された脂肪細胞を含む細胞製剤は、不純物が除去され、微細化された健全な脂肪細胞を高濃度で含有するものであり、骨間接合部の疾患の治療（特に痛みの緩和）に対して顕著な効果を奏する。方法（ｃ）の工程（３’’）を経て得られる微細化された脂肪細胞及び脂肪幹細胞を含む細胞製剤は、微細化された健全な脂肪細胞に加え、脂肪幹細胞を高濃度で含有する。このような細胞製剤は、骨間接合部の疾患の治療、及び筋肉修復に対して更に顕著に優れた効果を発揮することができる。
３．骨間接合部の疾患に起因する疼痛緩和方法
　本発明は、脂肪細胞を含む細胞製剤を、骨間接合部の疾患を有する患者の骨間接合部に投与する工程を含むことを特徴とする、骨間接合部の疼痛を緩和する方法を提供する。
　本発明の疼痛を緩和する方法において使用される脂肪の採取方法、脂肪細胞の分離方法、細胞製剤の調製方法、患者への投与方法等については、前記「１．細胞製剤」及び「２．細胞製剤の調製方法」の欄に記載の通りである。本発明の疼痛を緩和する方法においては、治療的有効量の細胞製剤を、骨間接合部の疼痛の緩和を必要とする患者に投与する。投与形態は特に限定されず、疼痛緩和が期待される位置、範囲、患者の年齢等に応じて従来公知の方法から適宜選択することができる。
４．骨間接合部の組織再生方法
　本発明は、脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤を、骨間接合部の疾患を有する患者の骨間接合部に投与する工程を含むことを特徴とする、骨間接合部の組織再生方法を提供する。
　本発明の組織再生方法において使用される脂肪の採取方法、中胚葉系幹細胞の分離方法、細胞製剤の調製方法、患者への投与方法等については、前記「１．細胞製剤」及び「２．細胞製剤の調製方法」の欄に記載の通りである。本発明の組織再生方法においては、治療的有効量の細胞製剤を、組織再生を必要とする患者に投与する。投与形態は特に限定されず、再生が期待される組織の種類、位置、範囲、患者の年齢等に応じて従来公知の方法から適宜選択することができる。
５．筋肉修復方法
　本発明は、脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤を、筋肉損傷を有する患者の筋肉損傷部位に投与する工程を含むことを特徴とする、筋肉修復方法を提供する。
　本発明の筋肉修復方法において使用される脂肪の採取方法、中胚葉系幹細胞の分離方法、細胞製剤の調製方法、患者への投与方法等については、前記「１．細胞製剤」及び「２．細胞製剤の調製方法」の欄に記載の通りである。本発明の筋肉修復方法においては、治療的有効量の細胞製剤を、筋肉修復を必要とする患者の筋肉損傷部位に投与する。投与形態は特に限定されず、筋肉修復が期待される位置、範囲、患者の年齢等に応じて従来公知の方法から適宜選択することができる。
６．その他
　本発明は、骨間接合部の疾患の治療剤の製造のための脂肪細胞を含む細胞製剤の使用、骨間接合部の疾患の治療に使用される脂肪細胞を含む細胞製剤を提供する。更に、本発明は、筋肉修復剤の製造のための脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤の使用、ならびに筋肉修復に使用される脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤を提供する。脂肪細胞、中胚葉系幹細胞、細胞製剤、骨間接合部の疾患、筋肉損傷等に関しては前述の通りである。
細胞製剤の調製
　細胞製剤の調製には、ＬＩＰＯＭＡＸ－ＳＣ（Ｍｅｄｉｋａｎ　Ｃｏｒｐ．製，韓国　ソウル）キットを使用した。本細胞製剤の調製工程においては、細胞を全く外気に触れさせることなく行うことが可能であった。具体的な方法は以下の通りである。
(i)シリンジ（ＬＩＰＯＭＡＸ－ＳＣ用に製造されたシリンジ：Ｍｅｄｉｋａｎ　Ｃｏｒｐ．製，韓国　ソウル）を用いて、各被験者から脂肪吸引を行った。採取された脂肪を含むシリンジを約１０分間室温（約２５℃）で静置して細胞画分と液体画分に分離し、チュメセント液が含まれる液体画分を廃液した。残された細胞画分を、脂肪組織として試験例２に使用した。その後、シリンジを２２００×ｇで８分間遠心分離にかけた。遠心分離により、上層（フリーオイル）、中間層（脂肪細胞及び脂肪幹細胞）、下層（細胞組織液等の液体画分）の三層に分離した。その後、中間層のみをシリンジ内に残して上下層を廃棄することにより、脂肪細胞と脂肪幹細胞の濃縮物を得た。この濃縮物に対してジェリリング（Ｇｅｌｌｉｎｇ）処理を行い、比較的大きな脂肪細胞の微細化を行った。ジェリリング処理は、１～３回行った。ジェリリングには、ドリル（ＦｉｌｌｅｒＧｅｌｌｅｒカッター：ＭＥＤＩＫＡＮ社製）を用い、脂肪細胞をカッティングして微細化し、更に２２００×ｇで５分間遠心分離することにより、微細化された脂肪細胞と脂肪幹細胞を含む混合物を得た。斯して得られた混合物を、微細化された脂肪細胞と脂肪幹細胞を含む細胞製剤として下記試験例２～５において使用した。
(ii)次に脂肪幹細胞の抽出を行った。前記工程(i)で得られた脂肪細胞及び脂肪幹細胞の混合物に、当該混合物と同量のタンパク質分解酵素（商品名：コラゲネーズ；Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｒｐ．製）の０．４％水溶液を添加し、穏やかに振とうし、その後３８℃で４５分間インキュベーションを行った。
(iii)インキュベーション後、２００×ｇで５分間遠心分離を行い、上清を採取した。この上清には脂肪細胞が濃縮され、沈殿には脂肪幹細胞が濃縮されていた。
(iv)次に、工程(iii)で得られた沈殿（脂肪幹細胞の濃縮物）２～３ｍＬに対し、デキストラン（大塚製薬（株）製）を約５０ｍＬ添加し、穏やかに振とうした後、２００×ｇで５分間遠心分離を行って上清を廃棄することにより、脂肪幹細胞の洗浄を行った。この操作を３回繰り返した。本工程により得られる脂肪幹細胞の濃縮物を、下記試験例１の比較対照群において使用した。また、工程(iii)で得られた脂肪細胞を含む上清を、同様の洗浄処理に供した後、脂肪細胞（及び細胞外基質）として下記試験例１において使用した。
　なお、脂肪細胞及び脂肪幹細胞は各患者由来のものを使用したため、上述の操作を各患者について行った。
試験例１．変形性関節症に起因する疼痛緩和効果（１）
　上記工程(iv)で得られた脂肪細胞（細胞外基質を含む）を、変形性膝関節症を有する被験者に投与し、症状の変化を観察した。
　被験者は女性２名（４症例（両被験者共に両膝関節に疾患あり）：平均年齢６８．５歳）であった。脂肪は、各被験者の下腹部から採取されたものを使用した。脂肪採取量はそれぞれ１０２ｍＬ、９５ｍＬであった。採取された脂肪から上記細胞製剤の調製方法に従って脂肪細胞（細胞外基質を含む）を得て、各被験者の膝関節にそれぞれ７ｍＬ注入した。また、変形性膝関節症を有する別の２名の被験者を比較対照群として、ヒアルロン酸（スベニール（中外製薬(株)製）：２．５ｍＬ）、又は上記工程(iv)において得られた脂肪幹細胞７ｍＬ（脂肪採取部位はいずれも下腹部；脂肪採取量は、それぞれ１０２ｍＬ、９５ｍＬ）を膝関節に注入した。本試験例１においては、膝関節に注入を行う際、カニューレの先端を前後左右に回転させて注入部位を刺激する操作は行わなかった。
　その結果、脂肪細胞を注入した被験者では、注入当日から膝関節痛が軽減され、その効果が約１か月に亘って持続した。また、ヒアルロン酸又は脂肪幹細胞を注入した被験者に比べると、膝関節痛の緩和効果が明らかに早期から発現され、痛みの緩和効果も顕著であった。
試験例２．変形性関節症に起因する疼痛緩和効果（２）
　上記工程(i)で得られた脂肪組織を、変形性膝関節症を有する被験者に投与し、症状の変化を観察した。なお、被験者は女性３名（６症例（各被験者とも両膝関節に疾患あり）：平均年齢６９．７歳）であった。脂肪は、各被験者の下腹部から採取されたものを使用した。脂肪採取量はそれぞれ９５ｍＬ、１００ｍＬ、１０５ｍＬであった。採取された脂肪から上記細胞製剤の調製方法の工程(i)に従って脂肪組織を得て、各被験者の膝関節にそれぞれ７ｍＬ注入した。また、変形性膝関節症を有する別の１名の被験者を比較対照として、ヒアルロン酸（スベニール（中外製薬(株)製）：２．５ｍＬ）を膝関節に注入した。本試験例２においては、膝関節に注入を行う際、カニューレの先端を前後左右に回転させて注入部位を刺激する操作は行わなかった。
　その結果、脂肪組織を注入した被験者３名は、いずれもヒアルロン酸を注入した被験者よりも関節痛の緩和効果が早く出現し、その効果が１か月以上に亘って持続した。
試験例３．変形性関節症に対する組織再生効果
　変形性膝関節症の女性９名（１４症例：平均年齢６８．７歳）に対して、上記工程(i)で調製された微細化された脂肪細胞及び脂肪幹細胞を含む細胞製剤（５～１０ｍＬ、脂肪幹細胞を約７５万～２００万個を含む）を、先端が斜めにカットされたカニューレを用いて膝関節に注入した。疾患部位、脂肪吸引の具体的な部位、採取された脂肪の量、細胞製剤の注入量、カニューレの先端を前後左右に回転させることにより注入部位を刺激する操作の有無については下表１に示される。各被験者に対する処置、膝関節裂隙の計測結果、及び変形性膝関節症のＸ線所見の評価基準となっているＫｅｌｌｇｒｅｎ＆Ｌａｗｒｅｎｃｅ分類による評価結果を下表１に要約する。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　また、Ｋｅｌｌｇｒｅｎ＆Ｌａｗｒｅｎｃｅ分類の具体的な評価項目及び評価基準は以下の通りである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
　代表例として下記被験者Ａ及びＢの膝関節のＸ線写真を図１及び２に示す。
被験者Ａ
施術時年齢７２歳　女性
既往症：変形性膝関節症（左膝）
　細胞製剤５ｍＬを左膝関節に注入した。細胞製剤の注入前及び注入から約１か月後に撮影した被験者Ａの左膝関節外側関節裂隙のＸ線写真を図１に示す。
被験者Ｂ
施術時年齢６０歳　女性
既往症：変形性膝関節症（左右両膝）
　細胞製剤それぞれ７ｍＬずつを左右の膝関節に注入した。細胞製剤の注入前及び注入から約１か月後に撮影した被験者Ｂの左右膝関節内側関節裂隙のＸ線写真を図２に示す。
（結果）
　治療当日～５日以内（平均２日）で全被験者において膝関節の疼痛が顕著に改善し、その後も疼痛改善状態が持続していた。また、杖歩行をしていた２名は杖なしで歩行することができた。さらに、立ち上がり困難の２名は立ち上がり可能になり、全被験者で歩行が顕著に改善した。
　代表被験者Ａ及びＢのＸ線写真所見によると、変形性関節症の改善及び関節裂隙の拡大が示された。即ち、図１に示されるように、被験者Ａの左膝関節は、治療前では関節裂隙が２．０ｍであったところ（図１（ａ））、治療後約１か月で３．３ｍｍまで拡大した（図１（ｂ））。より具体的には、治療前ではＫｅｌｌｇｒｅｎ＆Ｌａｗｒｅｎｃｅ分類のＩＶであったところ、治療から約１か月でＩＩまで症状が改善された。また、図２に示されるように、被験者Ｂの左右膝関節は、治療前では関節裂隙が０ｍｍであったところ（図２（ａ））、治療後約１か月で２．６ｍｍまで拡大した（図２（ｂ））。より具体的には、治療前ではＫｅｌｌｇｒｅｎ＆Ｌａｗｒｅｎｃｅ分類のＩＶであったところ、治療から約１か月でＩＩまで症状が改善された。
　本試験例３の結果より、変形性膝関節症を有する被験者の膝関節に、微細化された脂肪細胞及び脂肪幹細胞を含む細胞製剤を注入することによって、膝関節内の組織再生が促されたことが示された。これに対して、上記試験例１の比較対照群として脂肪幹細胞が注入された被験者についてのＸ線写真の所見では、組織再生は認められるものの、組織再生の進行速度や症状の改善は、被験者Ａ及びＢに比べ明らかに遅かった。
試験例４．骨壊死に対する組織再生効果
　変形性膝関節症に加え、骨壊死を合併していた試験例３の被験者Ａ、Ｂ及びＪの３名に対し、上記工程（ｉ）で調製された微細化された脂肪細胞及び脂肪幹細胞を含む細胞製剤（５～１０ｍＬ脂肪幹細胞を約７５～２００万個を含む）を、骨壊死部位に注入した。被験者Ｊに関し、疾患部位、脂肪吸引の具体的な部位、採取された脂肪の量、細胞製剤の注入量について下表３に示す。また、被験者Ａの膝関節ＭＲ画像を代表例として図３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　いずれの被験者においても、細胞製剤を関節内に注入直後～２日以内に歩行困難、疼痛等の症状が著しく改善された。また、被験者Ｊについて、表３に示されるように治療前ではＫｅｌｌｇｒｅｎ＆Ｌａｗｒｅｎｃｅ分類のＩＶであったところ、治療から約３か月でＩＩＩまで症状が改善された。更に、被験者Ａの膝関節のＭＲ画像（図３）に示されるように、関節内に細胞製剤を注入後１か月において骨壊死像の著しい改善が認められ、３か月後には骨壊死が消失していた。被験者Ａ及びＢの膝関節についてのＭＲ画像を撮影したところ、いずれの被験者でも細胞製剤を注入後１か月～３か月で骨壊死像及び骨浮腫像の改善又は消失が見られた。
試験例５．筋肉修復効果
　大腿四頭筋損傷、上腕三角筋損傷又は大胸筋損傷を有する被験者（男性４名：平均年齢３７．８歳、女性２０名：平均年齢３３．８歳）に対し、上記工程（ｉ）で調製された微細化された脂肪細胞及び脂肪幹細胞を含む細胞製剤（１０～５０ｍＬ、脂肪幹細胞を約４００～２０００万個を含む）を、筋肉を損傷している部位に注入した。細胞製剤の調製には、被験者の下腹部又は大腿部から採取された脂肪（脂肪採取量：５０～２００ｍｌ）を使用した。
　細胞製剤を注入後の筋肉損傷に起因する痛みの改善については、注入後から殆ど痛みを感じることがない（８名：女性）、注入後からあまり痛みを感じることがない（４名：男性）、注入後１日で痛みが消失した（１０名：女性）、注入後２～３日で痛みが消失した（２名：女性）となった。即ち、脂肪細胞及び脂肪幹細胞を含む細胞製剤の注入により、早期から筋肉損傷による痛みが改善されることが示された。
　また、細胞製剤を注入後３週間～１か月以内に全ての被験者において、上肢の関節可動域（ＲＯＭ：Ｒａｎｇｅ　ｏｆ　Ｍｏｔｉｏｎ）が拡大され、運動機能の改善が認められた。即ち、筋肉損傷部位に前記細胞製剤を投与することにより筋肉が修復されることが示された。
３．まとめ
　以上より、脂肪細胞を変形性膝関節症の患者の患部に注入すると、骨間接合部の疾患に起因する痛みを早期に緩和することができ、しかもその効果が長期に亘って持続することが示された（試験例１）。また、脂肪組織を注入した場合には、試験例１と同様に早期に痛みが緩和され、その効果の持続がより一層長期に亘って持続した（試験例２）。更に、微細化された脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞（脂肪幹細胞）を高濃度で含む細胞製剤を患部に注入することにより、前述の疼痛緩和効果に加えて、患部組織の再生が促された（試験例３）。しかも、脂肪幹細胞のみを注入した場合（試験例１の比較対照群）と、微細化された脂肪細胞及び脂肪幹細胞を含む細胞製剤を注入した場合（試験例３）を比較すると、微細化された脂肪細胞及び脂肪幹細胞を含む細胞製剤を注入した場合には、組織再生効果が相乗的に高められた。また、微細化された脂肪細胞及び脂肪幹細胞を含む細胞製剤を骨壊死部位（試験例４）に注入すると、壊死していた部分の骨組織の再生が認められた。更に、脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を筋肉損傷部位に投与することにより筋肉が修復されることが示された（試験例５）。脂肪細胞と、脂肪幹細胞のような中胚葉系幹細胞とを組合せて用いると、脂肪細胞（細胞外基質を含む）のはたらきによって、中胚葉系幹細胞が患部に保持され、中胚葉系幹細胞の生着効率や組織再生効率が高められると考えられる。
　以上の試験例より、本発明の細胞製剤は骨間接合部の疾患の治療、及び筋肉修復に優れた効果を奏することが示された。

Claims (17)

  1. 脂肪細胞を含む、骨間接合部の疾患を治療するための細胞製剤。
  2. 更に、中胚葉系幹細胞を含む、請求項１に記載の細胞製剤。
  3. 前記中胚葉系幹細胞が脂肪幹細胞である、請求項１に記載の細胞製剤。
  4. 脂肪細胞１個に対して中胚葉系幹細胞が１～１０個含まれる、請求項１に記載の細胞製剤。
  5. 前記脂肪細胞がγ線照射された細胞である、請求項１に記載の細胞製剤。
  6. 前記骨間接合部の疾患が、脊椎疾患、関節疾患、自己免疫疾患及び骨壊死症からなる群より選択されるいずれか１種である、請求項１に記載の細胞製剤。
  7. 骨間接合部の疾患の治療剤の製造のための脂肪細胞を含む細胞製剤の使用。
  8. 骨間接合部の疾患の治療に使用される脂肪細胞を含む細胞製剤。
  9. 　脂肪細胞を含む細胞製剤を、骨間接合部の疾患を有する患者の骨間接合部に投与する工程を含む、骨間接合部の疼痛を緩和する方法。
  10. 　脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤を、骨間接合部の疾患を有する患者の骨間接合部に投与する工程を含む、骨間接合部の組織再生方法。
  11. 脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む、筋肉修復用細胞製剤。
  12. 前記中胚葉系幹細胞が脂肪幹細胞である、請求項１１に記載の細胞製剤。
  13. 脂肪細胞１個に対して中胚葉系幹細胞が１～１０個含まれる、請求項１１に記載の細胞製剤。
  14. 前記脂肪細胞がγ線照射された細胞である、請求項１１に記載の細胞製剤。
  15. 筋肉修復用製剤の製造のための脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤の使用。
  16. 筋肉修復に使用される脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤。
  17. 　脂肪細胞及び中胚葉系幹細胞を含む細胞製剤を、筋肉損傷を有する患者の筋肉損傷部位に投与する工程を含む、筋肉修復方法。
PCT/JP2013/054483 2012-02-24 2013-02-22 脂肪細胞を含む細胞製剤 WO2013125674A1 (ja)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP13752335.3A EP2818173B1 (en) 2012-02-24 2013-02-22 Cell preparation including fat cell
JP2014500177A JP5572777B2 (ja) 2012-02-24 2013-02-22 脂肪細胞を含む細胞製剤
US14/380,703 US20150044179A1 (en) 2012-02-24 2013-02-22 Cell preparation including fat cell
RU2014138500A RU2746915C2 (ru) 2012-02-24 2013-02-22 Клеточный препарат, включающий жировые клетки
CA2865383A CA2865383C (en) 2012-02-24 2013-02-22 Cell preparation including fat cell
SG11201405110TA SG11201405110TA (en) 2012-02-24 2013-02-22 Cell preparation including fat cell
CN201380010803.9A CN104203257A (zh) 2012-02-24 2013-02-22 含有脂肪细胞的细胞制剂
KR1020147025823A KR102159844B1 (ko) 2012-02-24 2013-02-22 지방 세포를 포함하는 세포 제제

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2012038323 2012-02-24
JP2012-038323 2012-02-24

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013125674A1 true WO2013125674A1 (ja) 2013-08-29

Family

ID=49005851

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2013/054483 WO2013125674A1 (ja) 2012-02-24 2013-02-22 脂肪細胞を含む細胞製剤

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20150044179A1 (ja)
EP (1) EP2818173B1 (ja)
JP (1) JP5572777B2 (ja)
KR (1) KR102159844B1 (ja)
CN (2) CN104203257A (ja)
CA (1) CA2865383C (ja)
RU (1) RU2746915C2 (ja)
SG (2) SG10201800017RA (ja)
WO (1) WO2013125674A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020009147A1 (ja) * 2018-07-04 2020-01-09 正典 佐伯 幹細胞濾液製剤及びその調製方法

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105168251A (zh) * 2015-09-09 2015-12-23 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种干细胞制剂及其制备方法与应用
US10420802B2 (en) 2015-12-10 2019-09-24 Aesthetics Biomedical, Inc. Topical formulation for skin care
WO2018195177A1 (en) * 2017-04-18 2018-10-25 Texas Scottish Rite Hospital For Children Device and method for treating osteonecrosis
US10758253B2 (en) * 2017-04-18 2020-09-01 Texas Scottish Rite Hospital For Children Device and method for treating osteonecrosis
US10624615B2 (en) 2017-10-06 2020-04-21 Stephen S Ho Apparatus and method for collecting and isolating cells
CN109876195B (zh) * 2019-02-22 2021-12-10 王亚楠 一种可诱导快速成骨的骨填充材料的制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005519883A (ja) 2001-12-07 2005-07-07 マクロポー バイオサージェリー インコーポレイテッド 処理済み脂肪吸引細胞で患者を治療するためのシステムと方法
JP2007509601A (ja) 2003-11-04 2007-04-19 株式会社バイオマスター 脂肪組織から幹細胞を調製するための方法およびシステム
JP2007525422A (ja) * 2003-02-20 2007-09-06 サイトリ セラピューティクス インコーポレイテッド 心臓血管疾患の治療における脂肪組織由来細胞の使用方法
JP2007533396A (ja) 2004-06-23 2007-11-22 メディカン カンパニー リミテッド 脂肪吸入移植用注射器のピストン
JP2009501526A (ja) * 2005-07-15 2009-01-22 コグネート セラピューティクス，インコーポレーテッド ヒト脂肪由来細胞の免疫表現型および免疫原性

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6429013B1 (en) * 1999-08-19 2002-08-06 Artecel Science, Inc. Use of adipose tissue-derived stromal cells for chondrocyte differentiation and cartilage repair
CN1901802B (zh) * 2003-02-20 2010-12-29 马克罗珀尔生物外科公司 用脂肪组织来源的细胞治疗心血管疾病的方法
US9694034B2 (en) * 2005-10-31 2017-07-04 Bio Solution Co., Ltd. Artificial cartilage containing chondrocytes obtained from costal cartilage and preparation process thereof
KR100679642B1 (ko) * 2005-11-16 2007-02-06 주식회사 알앤엘바이오 인간 지방조직 유래 다분화능 줄기세포 및 이를 함유하는세포치료제
CN101077427A (zh) * 2006-05-25 2007-11-28 上海国睿生命科技有限公司 同种异体脂肪干细胞构建的组织工程化软骨
KR100803576B1 (ko) * 2006-06-14 2008-02-15 주식회사 인피트론 지방줄기세포 및 지방세포를 포함한 이식용 조성물
JP5240715B2 (ja) * 2006-08-08 2013-07-17 国立大学法人名古屋大学 脂肪組織由来多分化能幹細胞を含有する細胞製剤
US20080195007A1 (en) * 2007-02-12 2008-08-14 Yury Podrazhansky Method and device for using vibroacoustic stimulaton to enhance the production of adult stem cells in living organisms
AU2009201915C1 (en) * 2008-08-22 2015-02-26 Regeneus Ltd Therapeutic methods

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005519883A (ja) 2001-12-07 2005-07-07 マクロポー バイオサージェリー インコーポレイテッド 処理済み脂肪吸引細胞で患者を治療するためのシステムと方法
JP2007525422A (ja) * 2003-02-20 2007-09-06 サイトリ セラピューティクス インコーポレイテッド 心臓血管疾患の治療における脂肪組織由来細胞の使用方法
JP2007509601A (ja) 2003-11-04 2007-04-19 株式会社バイオマスター 脂肪組織から幹細胞を調製するための方法およびシステム
JP2007533396A (ja) 2004-06-23 2007-11-22 メディカン カンパニー リミテッド 脂肪吸入移植用注射器のピストン
JP2009501526A (ja) * 2005-07-15 2009-01-22 コグネート セラピューティクス，インコーポレーテッド ヒト脂肪由来細胞の免疫表現型および免疫原性

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AARON W. B. JOE, ET AL.: "Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis, (+Methods online and Supplementary Information)", NAT. CELL BIOL., vol. 12, February 2010 (2010-02-01), pages 153 - 163+16 PP, XP055082083 *
B. SEYOUM, A. FITE, A.B. ABOU-SAMRA: "Effects of 3T3 adipocytes on interleukin-6 expression and insulin signaling in L6 skeletal muscle cells", BIOCHEM. BIOPHYS. RES. COMMUN., vol. 410, no. 1, 2011, pages 13 - 18, XP028231223 *
BERNAT BAEZA-RAJA AND PURA MUÑOZ-CÁNOVES: "p38 MAPK-induced Nuclear Factor-?B Activity Is Required for Skeletal Muscle Differentiation: Role of Interleukin-6", MOL. BIOL. CELL, vol. 15, April 2004 (2004-04-01), pages 2013 - 2026, XP002505646 *
S. YAMASAKI: "Cytokines regulate fibroblast-like synovial cell differentiation to adipocyte-like cells", RHEUMATOLOGY, vol. 43, 2004, pages 448 - 452, XP055082079 *
See also references of EP2818173A4

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020009147A1 (ja) * 2018-07-04 2020-01-09 正典 佐伯 幹細胞濾液製剤及びその調製方法
JPWO2020009147A1 (ja) * 2018-07-04 2021-03-11 正典 佐伯 幹細胞濾液製剤及びその調製方法
JP6999196B2 (ja) 2018-07-04 2022-01-18 正典 佐伯 幹細胞濾液製剤及びその調製方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN111671774A (zh) 2020-09-18
EP2818173B1 (en) 2021-09-22
US20150044179A1 (en) 2015-02-12
SG10201800017RA (en) 2018-02-27
JPWO2013125674A1 (ja) 2015-07-30
EP2818173A1 (en) 2014-12-31
KR102159844B1 (ko) 2020-09-24
KR20140129184A (ko) 2014-11-06
SG11201405110TA (en) 2014-11-27
RU2746915C2 (ru) 2021-04-22
CA2865383C (en) 2022-04-26
JP5572777B2 (ja) 2014-08-13
CA2865383A1 (en) 2013-08-29
RU2014138500A (ru) 2016-04-10
EP2818173A4 (en) 2015-11-04
CN104203257A (zh) 2014-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5572777B2 (ja) 脂肪細胞を含む細胞製剤
WO2013125663A1 (ja) 製剤注入具
JP2022027930A (ja) 幹細胞濾液製剤及びその調製方法
JP6471259B2 (ja) 毛髪再生用の細胞製剤
KR101038616B1 (ko) 뼈 및 연골 질환의 치료, 예방, 또는 완화용 약제학적 조성물
KR101521411B1 (ko) 뼈 및 연골을 포함한 관절질환 치료용 조성물 및 이의 제조방법
US20170354754A1 (en) Systems and methods for treating a wound with wound packing
US20150174171A1 (en) Compositions and methods for the treatment and alleviation of bone and cartilage diseases or injuries and hair loss
Tremolada et al. Mesenchymal Stromal Cells and Micro Fragmented Adipose Tissue: New Horizons of Effectiveness of Lipogems. J
Sampson et al. Education and standardization of orthobiologics: Past, present & future
US20200155608A1 (en) Therapeutic Treatments Via Intravenous Infusion Of Mesenchymal Stem Cells
Park et al. Acute host reaction after anterior cruciate ligament reconstruction
CN115025121B (zh) 一种复合细胞制剂及其制备方法与应用
Fantasia et al. Microfractured and purified adipose tissue (Lipogems™ system) injections for treatment of atrophic vaginitis
Barnes et al. Autologous fat harvest and preparation for optimal predictable outcomes
RU2700974C1 (ru) Способ лечения остеоартроза коленных суставов
Malhotra Role of Stem Cell Therapy for Pain
Perić et al. Mes-enchymal Stem Cells in the Treatment of Knee Osteoarthritis
KR20130105157A (ko) 탈모 질환의 치료, 예방, 또는 완화용 약제학적 조성물
Bullock Changing the Game in Orthopedics
INJECTION et al. LIPO-STEM™
KNEE LIPO-STEM (DUO)™

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 13752335

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2014500177

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2865383

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14380703

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2013752335

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20147025823

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2014138500

Country of ref document: RU