CN104203257A - 含有脂肪细胞的细胞制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种对于骨接合部的疾病的治疗、及引起变性或损伤的肌肉的修复有用的细胞制剂。本发明提供一种含有脂肪细胞的用于治疗骨接合部的疾病的细胞制剂、以及含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的肌肉修复用细胞制剂。

Description

含有脂肪细胞的细胞制剂
技术领域
本发明涉及一种对于起因于骨接合部的疾病的疼痛的缓和、及该疾病的治疗有用的细胞制剂。另外，本发明涉及一种对于变性或损伤的肌肉的修复有用的细胞制剂。
背景技术
作为使人的软组织的体积增大的方法，已知有透明质酸注入、脂肪细胞的移植等，多在面部的皱纹除去、凹陷治疗、乳房重建等美容外科、形成外科等领域中使用。然而，通过透明质酸注入进行的治疗虽然容易，但所注入的透明质酸在约半年被吸收，因此，存在缺乏效果的持续性这样的问题。另外，对于脂肪细胞的移植，有时在移植后脂肪细胞在生物体内坏死或被吸收。因此，存在需要重新手术或根据情况产生瘢痕这样的缺点。
为了消除这些缺点，提出有脂肪干细胞的移植，开发有一种有效地分离脂肪干细胞的方法(例如参照专利文献1及2)。通过移植脂肪干细胞，改善移植后的细胞的存留率，对软组织再生确认到一定的效果。然而，通过这样的方法得到的脂肪干细胞中有时含有杂质，其有可能导致脂肪细胞在移植后坏死或发硬(钙化)。脂肪细胞一般而言通过脂肪抽吸得到，但所抽吸的脂肪为除脂肪细胞及脂肪干细胞以外还含有各种杂质的混合物。作为应从这样的混合物中除去的杂质，可以举出：血液(特别是红血球)、死活细胞、衰老细胞等。与此相对，提出有一种注入含有使用专利文献3中所记载的安装有重力过滤器的注射器经过离心分离从通过脂肪抽吸采集的含有脂肪细胞及脂肪干细胞的混合物中除去了成为钙化及脂肪坏死的原因的杂质的健康的浓缩脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂(CondensedRich Fat：CRF(注册商标))的方法。根据这样的方法，细胞的存留率提高，也不易产生硬块等问题，因此，正被广泛接受。
如上所述，关于脂肪细胞及脂肪干细胞的分离及浓缩，开发有各种技术，正在提供安全且存留性优异的脂肪细胞及脂肪干细胞。然而，迄今为止，脂肪细胞及脂肪干细胞的移植大部分应用于软组织的再生，对于例如有关关节痛的缓和及关节内的组织再生的这些细胞的有效性未充分进行研究。另外，关于通过向损伤的肌肉给药脂肪细胞及脂肪干细胞来进行肌肉的修复也未被知晓。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特表2005-519883号公报
专利文献2：日本特表2007-509601号公报
专利文献3：日本特表2007-533396号公报
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的主要的目的在于，提供一种对于起因于骨接合部的疾病的疼痛的缓和、及该疾病的治疗有用的细胞制剂。另外，本发明的其它的目的在于，提供一种对于损伤的肌肉的修复有用的细胞制剂。
用于解决课题的手段
本发明人等为了解决上述课题进行了潜心研究，结果发现，如果向申诉关节痛的患者注入脂肪细胞，则在早期症状得到缓和且其效果持续。进而，发现如果组合注入脂肪细胞和脂肪干细胞，则除所述关节痛的缓和以外，还可高效地再生关节内的骨组织及软骨组织。另外，本发明人发现，通过向肌肉损伤部位给药含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂，可修复损伤的肌肉。本发明是基于这些见解进一步重复进行了研究而完成的。
即，本发明提供下述样态的细胞制剂、骨接合部的疼痛缓和方法、骨接合部的组织再生方法、肌肉修复方法等。
项1.一种用于治疗骨接合部的疾病的细胞制剂，其含有脂肪细胞。
项2.根据项1所述的细胞制剂，其还含有中胚层系干细胞。
项3.根据项1所述的细胞制剂，其中，所述中胚层系干细胞为脂肪干细胞。
项4.根据项1所述的细胞制剂，其中，相对于1个脂肪细胞，含有1～10个中胚层系干细胞。
项5.根据项1所述的细胞制剂，其中，所述脂肪细胞为经γ射线照射的细胞。
项6.根据项1所述的细胞制剂，其中，所述骨接合部的疾病为选自由脊椎疾病、关节疾病、自身免疫性疾病及骨坏死症构成的组中的任一种。
项7.含有脂肪细胞的细胞制剂在制造骨接合部的疾病的治疗剂中的应用。
项8.一种骨接合部的疾病的治疗中所使用的含有脂肪细胞的细胞制剂。
项9.一种缓和骨接合部的疼痛的方法，其包含向具有骨接合部的疾病的患者的骨接合部给药含有脂肪细胞的细胞制剂的工序。
项10.一种骨接合部的组织再生方法，其包含向具有骨接合部的疾病的患者的骨接合部给药含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂的工序。
项11.一种肌肉修复用细胞制剂，其含有脂肪细胞及中胚层系干细胞。
项12.根据项11所述的细胞制剂，其中，所述中胚层系干细胞为脂肪干细胞。
项13.根据项11所述的细胞制剂，其中，相对于1个脂肪细胞，含有1～10个中胚层系干细胞。
项14.根据项11所述的细胞制剂，其中，所述脂肪细胞为经γ射线照射的细胞。
项15.含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂在制造肌肉修复用制剂中的应用。
项16.一种肌肉修复中所使用的含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂。
项17.一种肌肉修复方法，其包含向具有肌肉损伤的患者的肌肉损伤部位给药含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂的工序。
发明的效果
根据本发明的含有脂肪细胞的细胞制剂，可通过脂肪细胞、存在于脂肪细胞周边的ECM(细胞外基质)等改善关节等的滑动而快速缓和关节痛，可得到起因于骨接合部的疾病的疼痛缓和优异的效果。另外，例如通过向椎间板等注入本发明的细胞制剂，起到缓冲的作用，发挥使椎体的运动良好的(改善的)效果。进而，利用本发明的细胞制剂得到的关节痛的缓和效果长期持续。
另外，根据含有脂肪细胞和中胚层系干细胞的本发明的细胞制剂，利用脂肪细胞缓和起因于骨接合部的疾病的疼痛，其间通过中胚层系干细胞促进骨组织、软骨组织、软组织等关节内的组织再生。另外，通过组合使用脂肪细胞和中胚层系干细胞，不仅上述疼痛得到缓和，而且通过脂肪细胞的作用将中胚层系干细胞保持于患部，可更进一步促进中胚层系干细胞的植入效率及组织再生效率，因此，含有脂肪细胞和中胚层系干细胞的本发明的细胞制剂对于骨接合部的疾病的治疗进一步有效。
另外，含有脂肪细胞和中胚层系干细胞的本发明的细胞制剂对于因肌肉的变性及手术导致的肌肉的切除而损伤的肌肉具有优异的修复效果。另外，根据该细胞制剂，可在早期缓和肌肉损伤导致的疼痛，因此，也有助于患者的QOL(Quality of Life)的提高。
目前，在采用培养脂肪干细胞等中胚层系干细胞进行组织修复的方法的情况下，有可能在培养等的过程中被污染(contamination)，也有在移植后引起感染症的担心。然而，本发明的细胞制剂中所含的脂肪细胞及中胚层系干细胞可在不经过细胞培养工序的情况下从抽吸脂肪等中直接分离、浓缩，因此，可在不与大气接触的情况下制备。因此，也不存在感染症等的担心。另外，本发明的细胞制剂通常使用从需要骨接合部的疾病的治疗或肌肉的修复的患者本人采集的脂肪细胞及中胚层系干细胞来制备，因此，没有免疫排斥反应的问题，安全性高。
附图说明
图1图1(a)为表示给药细胞制剂前的受试者A的左膝关节的X射线照片，图1(b)为表示自细胞制剂的给药开始约1个月后的受试者A的左膝关节的X射线照片；
图2图2(a)为表示给药细胞制剂前的受试者B的左右膝关节的X射线照片，图2(b)为自细胞制剂的给药开始约1个月后的受试者B的左右膝关节的X射线照片；
图3为表示通过给药细胞制剂促进骨组织的再生，骨坏死改善、消失的MR图像的代表例。
具体实施方式
1.细胞制剂
本发明提供一种以下的用于治疗骨接合部的疾病的细胞制剂、及肌肉修复用细胞制剂。下面，对各细胞制剂进行详述。
(1-1)用于治疗骨接合部的疾病的细胞制剂
本发明提供一种用于治疗骨接合部的疾病的细胞制剂，其特征在于，含有脂肪细胞。
所谓脂肪细胞(fat cell)为具有合成、储存、释放脂肪的功能，形成脂肪组织的细胞。另外，脂肪细胞由于完全分化，因此，不会引起细胞分裂。脂肪细胞中存在白色脂肪细胞及褐色脂肪细胞，但在本发明中可以使用它们的任一者，也可以使用两者的混合物。在本发明中，脂肪细胞的来源没有特别限定，但例如使用哺乳类的脂肪细胞，优选使用灵长类的脂肪细胞、进一步优选使用人脂肪细胞。在本发明中，作为脂肪细胞，也可以仅单独使用脂肪细胞，但也可以使用存在于脂肪细胞周边的细胞外基质(extracellular matrix：ECM)和脂肪细胞的混合物。具体而言，在本发明中，作为脂肪细胞，可以直接使用所采集的脂肪组织，另外，也可以使用从所采集的脂肪组织中除去了细胞外基质的材料。
脂肪细胞可从脂肪组织中采集。作为脂肪组织的采集方法没有特别限定，可从现有公知的方法中适宜选择，但可以举出例如脂肪抽吸、脂肪切除、除脂术等。从较容易且微创的方面考虑，优选利用脂肪抽吸的采集。作为由所采集的脂肪得到脂肪细胞的方法，没有特别限定，但可优选举出：下述2.细胞制剂的制备方法中所记载的方法。
另外，本发明的用于治疗骨接合部的疾病的细胞制剂也可以进一步含有中胚层系干细胞。通过进一步含有中胚层系干细胞，可促进骨接合部中的组织再生，更进一步提高本发明的细胞制剂的治疗效果。
本发明的细胞制剂中所使用的中胚层系干细胞主要是指分化为骨、软骨、心肌、脂肪等属于中胚层系的组织的细胞的中间干细胞。中胚层系干细胞的来源没有特别限定，但例如使用哺乳类的中胚层系干细胞，优选使用灵长类的中胚层系干细胞，进一步优选人中胚层系干细胞。
作为中胚层系干细胞，具体而言，可例示脂肪干细胞、骨髄干细胞、造血干细胞等，这些干细胞可依据现有公知的方法并根据细胞的种类由各组织得到。
在本发明中，作为中胚层系干细胞，可优选例示脂肪干细胞。脂肪干细胞可从脂肪组织中采集。成为脂肪干细胞的供给源的脂肪组织与上述的脂肪细胞同样，可通过脂肪抽吸、脂肪切除、除脂术等的任一方法采集，但从防止脂肪干细胞的流出或损伤、可更安全地采集这样的观点考虑，优选为脂肪抽吸。另外，作为由采集脂肪得到脂肪干细胞的方法，可优选举出下述2.细胞制剂的制备方法中所记载的方法。
在本发明的细胞制剂含有中胚层系干细胞的情况下，优选使用脂肪细胞和中胚层系干细胞混合存在的状态的材料。在本发明的细胞制剂含有中胚层系干细胞的情况下，作为细胞制剂中的中胚层系干细胞的含量，只要在可得到骨接合部的疾病的治疗效果的范围就有特别限定，认为中胚层系干细胞的含量越多，越可得到更进一步优异的治疗效果，例如可以举出：相对于1个脂肪细胞，中胚层系干细胞至少为1个以上，优选为5个以上，更优选为1～10个，进一步优选为5～10个。另外，在通过包含工序(1c)及(2c)的下述方法(c)制备的细胞制剂的情况下，可以举出：每1mL该细胞制剂中所含的中胚层系干细胞数通常为10万个以上，优选为15万个以上，进一步优选为15～20万个。
在本发明的细胞制剂中，出于自身移植的目的，使用源自自身的脂肪细胞(及中胚层系干细胞)，由此除早期的症状改善以外，还可以避免免疫排斥反应。但是，并不限制使用源自他人的脂肪细胞(及中胚层系干细胞)制备本发明的细胞制剂。在使用源自他人的细胞的情况下，优选相对于在移植前从他人采集的脂肪细胞(包含存在于脂肪细胞周边的细胞外基质(ECM))进行例如γ射线照射等用于除去抗原性的处理。中胚层系干细胞通常为不具有免疫原性的细胞，但也可以根据需要使用供于上述处理的细胞。
作为本发明的细胞制剂的优选的一个例子，可以举出：含有脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂。通常，脂肪组织中含有脂肪细胞和脂肪干细胞。因此，作为含有脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂，可以直接使用所采集的脂肪组织，另外，也可以使用从所采集的脂肪组织中除去了杂质(例如在脂肪采集时所注入的麻醉液(所谓膨胀液)、老化的脂肪细胞、血液、组织液等)的细胞制剂、从所采集的脂肪组织中除去了杂质和一部分的脂肪细胞的细胞制剂等。作为该细胞制剂的制备方法的优选的例子，可以举出后述的方法(a)～(c)。
另外，本发明的细胞制剂中可以根据需要添加现有公知的药学上所容许的载体、赋形剂、消炎剂、镇痛剂、免疫抑制剂等。另外，也可以在不损害本发明的效果的范围添加胶原、成纤维细胞、生长因子、增殖因子、细胞因子等。
另外，也可以将例如PRP(Platelet Rich Plasma：多血小板血浆)等已知有组织再生作用的其它的细胞制剂与本发明的细胞制剂并用。进而，通过在PRP中添加氯沙坦(Losartan)等血管紧张素II受体拮抗药，可更进一步提高软骨组织的再生效果。但是，从组织再生效率提高这样的观点考虑，在例如期待软骨组织的再生的情况下，优选从PRP中除去VEGF(血管内皮细胞生长因子)来使用，在期待骨再生的情况下，优选除去BMPs(骨形成蛋白)来使用。
本发明的用于治疗骨接合部的疾病的细胞制剂对于骨接合部的疾病发挥优异的治疗效果。所谓骨接合部是指骨的连结部分，包含通过软骨或软骨和纤维性结缔组织的组合连接的软骨性连结、通过软骨及包裹关节囊的滑膜进行连接的滑膜性连结、及通过纤维性结缔组织连接的纤维性的连结，但在本发明中，特别是指通过软骨性连结及滑膜性连结连接的具有可动性的部分。作为骨接合部，具体而言，可例示：脊椎关节、膝关节、足关节、足趾关节、髋关节、手关节、肘关节、肩关节、手指关节、肩锁关节、骶髂关节等。另外，例如在膝关节的情况下，韧带、半月板等软组织也包含于上述骨接合部，在脊椎关节的情况下，椎间盘(椎间板)等也包含于上述骨接合部。
另外，所谓骨接合部的疾病，可以举出：疝病(脱出)、变形、变性、炎症等，具体而言，可例示椎间板疝、变形性脊椎症等脊椎疾病；变形性关节症(包含变形性髋关节症、变形性膝关节症等)、慢性关节症等关节疾病；类风湿性关节炎等自身免疫性疾病；膝关节特发性骨坏死症、股骨头坏死症等骨坏死症等，可优选举出椎间板疝、变形性关节症、慢性关节症、膝关节特发性骨坏死症、股骨头坏死症。
关于本发明的细胞制剂的给药量，只要在可得到相对于骨接合部的疾病的治疗效果的范围就没有特别限定，可根据给药处的大小、疾病的部位、疾病的程度、患者的性别、体格等适宜设定，例如可以举出：换算为脂肪细胞数为10万～400万个，优选为20万～200万个，进一步优选为20万～100万个。例如在使用通过包含工序(1c)及(2c)的下述方法(c)得到的细胞制剂的情况下，可以举出其给药量为0.5～20mL，优选为1～10mL，进一步优选为1～5mL。另外，例如可以相对于膝关节给药细胞制剂1～20mL、优选1～10mL、进一步优选5～10mL。另外，可相对于椎间板给药细胞制剂0.5～20mL、优选1～15mL、进一步优选1～2mL。
作为给药方法，可以举出；在骨接合部的疾病处(例如关节腔、椎间板(椎间圆板)等)中使用注射器、插管等注入的方法，但并不限定于这些。另外，在注入时，通过用注射针或插管的前端刺激注入处，可得到更进一步优异的治疗效果。刺激的方法没有特别限定，例如可以举出：使前端被倾斜切断的插管在注入细胞制剂时前后左右旋转来刺激注入部位的方法。
在对具有这些疾病的患者给药本发明的细胞制剂的情况下，可以根据需要在利用公知的方法进行处置后给药。例如如果为椎间板疝的情况，则可以将脱出的椎间板用PLDD(Percutaneous Laser Disc Decompression)等现有公知的方法除去后，给药(注入)本发明的细胞制剂。通过本发明的细胞制剂中所含的脂肪细胞的作用，起因于骨接合部的疾病的疼痛(关节痛)得到缓和，进而，在含有中胚层系干细胞的情况下，通过该细胞的作用，可再生骨接合部中的骨组织、软骨组织、软组织等。
(1-2)肌肉修复用细胞制剂
本发明提供一种可在肌肉损伤部位修复肌肉的细胞制剂，其特征在于，含有脂肪细胞及中胚层系干细胞。
关于本发明的肌肉修复用细胞制剂中所使用的脂肪细胞及中胚层系干细胞、以及细胞制剂中的两者的含量等，如上述“(1-1)用于制造骨接合部的疾病的细胞制剂”的栏中所记载所述。另外，作为本发明的肌肉修复用细胞制剂的优选的样态，可例示含有脂肪细胞和作为中胚层系干细胞的脂肪干细胞的细胞制剂。作为得到脂肪干细胞的方法，可以举出例如下述2.细胞制剂的制备方法中所记载的方法。
另外，在肌肉修复用细胞制剂中，除脂肪细胞及中胚层系干细胞以外，还可以根据需要添加现有公知的药学上允许的载体、赋形剂、消炎剂、镇痛剂、免疫抑制剂等。另外，也可以在不损坏本发明的效果的范围添加胶原、成纤维细胞、生长因子、增殖因子、细胞因子等。
另外，只要不损坏本发明的效果，则也可以将例如PRP(Platelet RichPlasma：多血小板血浆)等已知有组织再生作用的其它的细胞制剂与本发明的细胞制剂并用。但是，从更进一步提高肌肉组织的再生效率的观点考虑，优选除去转化生长因子β1(TGFβ1)而使用。
本发明的肌肉修复用细胞制剂在应用于肌肉损伤部位时发挥优异的肌肉修复效果。肌肉损伤除肌肉变性、肌肉的纤维化、肌肉纤维的破坏及坏死、肌肉萎缩、肌肉麻痹、肌无力等以外，也包含因手术或外伤等切除肌肉的情况。另外，应用本发明的细胞制剂的肌肉的部位及种类没有特别限定，例如可以举出：躯干肌肉(包含上肢或下肢的肌肉、大胸肌)等骨格肌；膀胱括约肌等平滑肌；心肌。例如通过对上肢的肌肉的损伤部位给药本发明的细胞制剂，肌肉损伤所致的疼痛在早期得到缓和，进而，通过修复肌肉，可实现上肢的ROM(Range of Motion：关节可动域)的扩大及运动功能的改善。另外通过对膀胱括约肌的肌无力或损伤等所致的尿失禁、频尿等呈现排尿障碍的患者的膀胱括约肌给药本发明的细胞制剂，可提高膀胱括约肌的肌肉力量而安全且容易地消除尿失禁、漏尿等问题。另外，也可以应用于具有心肌梗塞、缺血再灌注损伤、肌肉萎缩(例如Duchenne肌肉萎缩(DMD))、肌炎(肌病)等肌肉疾病的患者的肌肉损伤部位。
另外，肌肉损伤多伴有疼痛，但通过对肌肉损伤部位给药本发明的肌肉修复用细胞制剂，可在早期缓和疼痛。并不期望本发明的限定性的解释，但认为这样的疼痛缓和效果取决于肌肉修复用细胞制剂中所含的脂肪细胞。
出于肌肉修复的目的使用本发明的细胞制剂时的给药量只要在可得到肌肉修复效果的范围就没有特别限定，可根据给药处的大小、疾病的部位、疾病的程度、患者的性别、体格等适宜设定。例如作为损伤肌肉的每单位容积10mL的给药量，可以举出：换算为脂肪细胞数为10～400万个，优选为20～200万个，进一步优选为20～100万个。另外，在使用通过包含工序(1c)及(2c)的下述方法(c)得到的细胞制剂的情况下，可以举出例如损伤肌肉的每单位容积10mL为0.5～20mL，优选为1～10mL，进一步优选为1～5mL。
出于肌肉修复的目的使用本发明的细胞制剂时的给药方法没有特别限定，可以采用现有公知的给药方法，例如可以举出：用注射器、插管等向肌肉损伤部位注入的方法。
2.细胞制剂的制备方法
在本发明中，可以采集脂肪细胞，根据需要进行分离、浓缩，制备成本发明的细胞制剂。另外，在制备含有脂肪细胞和中胚层系干细胞的细胞制剂的情况下，可以使用以这些细胞的混合物的形式采集的材料，也可以分别采集各自的细胞，然后，混合两者而制成本发明的细胞制剂。例如在中胚层系干细胞为脂肪干细胞的情况下，由于可以由与脂肪细胞相同的组织同时制备且简单，因此，可以由脂肪组织得到脂肪细胞和脂肪干细胞的混合物，优选制成本发明的细胞制剂。另外，更简单而言，也可以使用含有这些细胞的脂肪组织。
在由脂肪组织制备本发明的细胞制剂的情况下，作为优选的方法，可例示下述方法(a)～(c)。但是，并不限制由脂肪以外的组织制备本发明的细胞制剂，即使在由脂肪组织以外的组织(例如血液、骨髓液、肌肉等)制备本发明的细胞制剂的情况下，也可以依据下述方法，考虑细胞的种类及性质，适宜设定条件来制备本发明的细胞制剂。以下，对方法(a)～(c)分别进行详述。
方法(a)
制备本发明的细胞制剂的方法(a)包含(1a)从所采集的脂肪中除去液体级分，得到细胞级分的工序。
在此，所采集的脂肪是指通过脂肪抽吸、脂肪切除、除脂术等从脂肪组织中所采集的源自脂肪组织的细胞级分及液体级分的混合物。细胞级分中包含脂肪细胞、脂肪干细胞及杂质(血球、死活细胞、衰老细胞等)。另外，液体级分中包含膨胀液、细胞组织液等。
液体级分和细胞级分的分离简单而言可通过将所采集的脂肪静置使细胞级分沉降来分离。液体级分的除去方法没有特别限定，例如可以举出：倾析、抽吸等。另外，也可以根据需要进行离心分离、过滤等。
离心分离及过滤的条件只要不会使脂肪细胞及脂肪干细胞损伤，且可除去杂质就没有特别限定，例如可以举出：700～2500×g且1～15分钟、优选2000～2200×g且5～10分钟的条件。
另外，如果在进行过滤的情况下，可以使所采集的脂肪通过具有例如10～300μm、优选10～150μm、更优选10～100μm、进一步优选15～20μm的孔大小的网格状过滤器来除去在采集血液、组织液、脂肪处所给药的麻醉药(膨胀液)等，在过滤器上得到脂肪细胞及脂肪干细胞的混合物。另外，也可以在备有这样的网格状过滤器的容器中填充所采集的含有杂质的脂肪，供于离心分离。
这样，可得到除去了液体级分的含有脂肪细胞(包含细胞外基质)及脂肪干细胞的脂肪组织，可将其用作本发明的细胞制剂。
方法(b)
制备本发明的细胞制剂的方法(b)的特征在于，包含下述工序。
(1b)从所采集的脂肪中除去液体级分，得到细胞级分的工序；及
(2b)从上述工序(1b)中得到的细胞级分的至少一部分中分离脂肪细胞和脂肪干细胞的工序。
在此，工序(1b)如上述方法(1a)中记载所述。在工序(2b)中，在制备含有脂肪细胞的细胞制剂的情况下，将工序(1b)中得到的全部细胞级分供于工序(2b)的处理，可以仅使用所分离的脂肪细胞。另外，在制备含有脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂的情况下，从工序(1b)中得到的细胞级分的至少一部分、优选一半量中分离脂肪干细胞，进而将其添加在工序(1b)中得到的细胞级分中，由此可以制成含有脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂。
在此，作为分离脂肪干细胞的方法，例如可以举出：专利文献1中记载的方法。更具体而言，为了通过分解细胞间的结合来易于分离脂肪细胞和脂肪干细胞，在细胞级分中添加蛋白质分解酶。作为蛋白质分解酶，可例示：胶原酶、胰蛋白酶、脂酶等，可以单独使用选自它们中的1种，也可以组合使用2种以上。
作为从经酶处理的细胞级分中分离脂肪细胞和脂肪干细胞的方法，没有特别限定，可从现有公知的方法中适宜选择，例如可以举出离心分离、过滤等。作为离心分离的条件，只要可不损伤脂肪细胞及脂肪干细胞地分离就没有特别限定，例如可以举出：100～500×g且1～20分钟、优选100～300×g且5～10分钟的条件。通过供于这样的离心分离，可以以沉淀物的形式得到脂肪干细胞，在上清液中将脂肪细胞浓缩。另外，如果在进行过滤的情况下，可通过使细胞级分或其悬浮液通过具有10～100μm、优选10～50μm、进一步优选15～20μm的孔大小的网格状过滤器在过滤器上得到脂肪干细胞，可在滤液中得到脂肪细胞。
经酶处理的脂肪细胞及脂肪干细胞优选在分离后供于清洗处理，清洗通过磷酸缓冲溶液(PBS)、生理盐水、林格氏液、葡聚糖等来进行。清洗处理可根据需要重复多次，也可以在清洗后回收细胞时，根据需要供于离心分离。作为离心分离的条件，只要依据在从上述的经酶处理的细胞级分中分离脂肪细胞和脂肪干细胞时所采用的条件即可。
将本工序(2b)中所分离的脂肪细胞清洗后，可用作本发明的细胞制剂。使用本方法(b)中得到的脂肪细胞得到的本发明的细胞制剂对于起因于骨接合部的疾病的疼痛的缓和发挥优异的效果。
进而，本方法(b)在上述工序(2b)之后，也可以包含将上述工序(1b)中得到的细胞级分和工序(2b)中得到的脂肪干细胞混合的工序(3b)。在本工序(3b)中，可以将工序(1b)中得到的细胞级分和工序(2b)中得到的脂肪干细胞混合，得到含有脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂。如上制备的细胞制剂以高浓度含有脂肪干细胞，不仅对于起因于骨接合部的疾病的疼痛的缓和有效，而且，可以相对于骨接合部的组织再生发挥优异的效果。另外，含有这样的脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂可以相对于损伤的肌肉发挥优异的肌肉修复效果，并且对于起因于肌肉损伤的疼痛的缓和也发挥优异的效果。
方法(c)
制备本发明的细胞制剂的方法(c)包含下述工序：
(1c)从所采集的脂肪中除去液体级分，得到细胞级分的工序；以及
(2c)从上述工序(1c)中得到的细胞级分中除去杂质，得到脂肪细胞及脂肪干细胞的浓缩物的工序。
在此，关于工序(1c)，如上述方法(1a)中记载所述。在工序(2c)中，从细胞级分中除去杂质进行浓缩。作为杂质除去及浓缩的方法，没有特别限定，可从现有公知的方法中适宜选择，简单而言，通过使用具备例如专利文献3中所记载的重力过滤器的注射器，可以除去从破裂的脂肪细胞中游离的游离油、死活细胞、衰老细胞等杂质，得到健康的脂肪细胞及脂肪干细胞的浓缩物。这样的注射器可商业获得，具体而言，可例示LIPOMAX-SC用中所制造的注射器(Medikan Corp.制，韩国首尔)。
更具体而言，在内部具备过滤器的注射器中填充所采集的脂肪，通过离心分离将脂肪分离为液体级分和细胞级分，进而，利用过滤器分离游离油(排液油)。在此所分离的液体级分在工序(1c)中不会完全分离而混合存在于细胞级分中。即，在注射器中，在上层分离有游离油、在中间层中分离有脂肪细胞及脂肪干细胞的浓缩物以及在下层分离有液体级分，通过将中间层以外废弃，可得到健康的脂肪细胞及脂肪干细胞的浓缩物，可将其用作本发明的细胞制剂。如上得到的细胞制剂浓缩、选择有健康的脂肪细胞和脂肪干细胞，因此，不易产生移植后的坏死、钙化等，对于骨接合部的疾病的症状的缓和及治疗、以及损伤的肌肉的修复及肌肉损伤所致的疼痛的缓和进一步有用。
作为用于将上述脂肪分离为液体级分和细胞级分的离心分离的条件，只要为不会损伤脂肪细胞及脂肪干细胞，且可分离杂质和脂肪细胞及脂肪干细胞的条件就没有特别限定，例如可以举出：700～2500×g且1～15分钟、优选2000～2200×g且5～10分钟的条件。
另外，过滤器的孔大小只要为脂肪细胞及脂肪干细胞不会通过、且杂质可通过的程度就没有特别限定，例如为10～300μm，优选为10～150μm，更优选为10～100μm，进一步优选为15～20μm。
另外，本方法(c)也可以含有工序(3c’)，所述工序(3c’)从工序(2c)中得到的浓缩物的至少一部分中分离脂肪细胞和脂肪干细胞，将得到的脂肪干细胞进一步混合在上述工序(2c)中得到的浓缩物中。脂肪干细胞的分离的方法如上述方法(b)的工序(2b)中记载所述。在本工序(3c’)中，在使用蛋白质分解酶分离脂肪干细胞的情况下，每1cc工序(2c)中得到的浓缩物，通常可得到约70万个以上、优选约150万个以上、进一步优选约200万个以上的脂肪干细胞。经过本工序(3c’)制备的细胞制剂除选择、浓缩有健康的脂肪细胞以外，还以高浓度含有脂肪干细胞，因此，可以相对于骨接合部的疾病的治疗、及损伤的肌肉的修复发挥更进一步优异的治疗效果。
另外，可以将本工序(3c’)中所分离的脂肪细胞在清洗后用作本发明的细胞制剂。在此得到的脂肪细胞由于选择、浓缩有健康的脂肪细胞，因此，可以对于起因于骨接合部的疾病或肌肉损伤的疼痛的缓和发挥进一步优异的效果。
另外，本方法(c)也可以含有工序(3c”)，所述工序(3c”)在上述工序(2c)之后，将得到的浓缩物中的脂肪细胞微细化，将微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞以混合物的形式分离。脂肪细胞的微细化可通过该技术领域中通常采用的方法进行，没有特别限定，例如根据需要利用钻头等将脂肪细胞切割后，将微细化的脂肪细胞和脂肪干细胞的混合物分离。作为分离方法，可以采用上述离心分离的条件。在进行本工序(3c”)时，在上述工序(2c)之后，将浓缩物直接填充在注射器中，供于脂肪细胞的微细化及离心分离。离心分离后，在注射器中分离有游离油和微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的混合物，因此，将游离油废弃，可得到微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的混合物。
通过经过这样的分离工序，可制备以高浓度含有微细的脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂。在此，微细的脂肪细胞是指具有可通过26～30G(Gauge)、优选18～30G的注射针的程度的大小的脂肪细胞。在本工序(3c”)中，可以进行至少1次、优选1～多次、更优选1～2次将脂肪细胞微细化的处理。通过将脂肪细胞微细化，可以提高细胞制剂的每单位容积的脂肪干细胞的浓度，可更进一步显著地发挥源自骨接合部的疾病或肌肉损伤的疼痛的缓和效果、骨接合部内的组织再生效果、及肌肉修复效果。
另外，也可以含有工序(4c”)，所述工序(4c”)从工序(3c”)中得到的微细化的脂肪细胞和脂肪干细胞的混合物的至少一部分中分离脂肪干细胞，将得到的脂肪干细胞混合在上述工序(2c)中得到的浓缩物中。脂肪干细胞的分离的方法如上述方法(b)的工序(2b)中记载所述。
将通过本工序(4c”)分离脂肪干细胞而得到的脂肪细胞清洗后，可用作本发明的含有脂肪细胞的细胞制剂。清洗可通过对上述的脂肪干细胞进行清洗处理同样的方法进行。在此得到的脂肪细胞由于选择、分离有健康的微细化的脂肪细胞，因此，对于起因于骨接合部的疾病或肌肉损伤的疼痛的缓和发挥进一步显著优异的效果。
在本方法(c)中，通过使用专利文献3中所记载的注射器，可以在不使细胞与大气接触的情况下实施全部工序。例如，在专利文献3中所记载的注射器上安装插管等并填充通过脂肪抽吸采集的脂肪，直接供于杂质的除去及浓缩处理等，可以得到细胞制剂。然后，在给药细胞制剂时，也可以从注射器直接移至用于注入细胞制剂的注射器，对患部进行给药，因此，可以制成没有污染等问题的安全性高的细胞制剂。简单而言，也可以使用可商业获得的试剂盒进行本方法(c)，作为这样的试剂盒，具体而言，可例示LIPOMAX-SC(MEDIKAN Corp.制)等。
通过以上的任一方法，均可以得到本发明的细胞制剂，但优选为含有经过优选方法(b)或(c)，更优选方法(c)、进一步优选方法(c)的工序(3”)或工序(4”)制备的微细化的脂肪细胞的细胞制剂。含有经过方法(c)的工序(4”)得到的微细化的脂肪细胞的细胞制剂除去杂质，以高浓度含有微细化的健康的脂肪细胞，对于骨接合部的疾病的治疗(特别是疼痛的缓和)发挥显著的效果。含有经过方法(c)的经过工序(3”)得到的微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂除微细化的健康的脂肪细胞以外，以高浓度含有脂肪干细胞。这样的细胞制剂对于骨接合部的疾病的治疗、及肌肉修复发挥进一步显著优异的效果。
3.起因于骨接合部的疾病的疼痛缓和方法
本发明提供一种缓和骨接合部的疼痛的方法，特征在于，包含向具有骨接合部的疾病的患者的骨接合部给药含有脂肪细胞的细胞制剂的工序。
关于本发明的缓和疼痛的方法中所使用的脂肪的采集方法、脂肪细胞的分离方法、细胞制剂的制备方法、对患者的给药方法等，如上述“1.细胞制剂”及“2.细胞制剂的制备方法”的栏中记载所述。在本发明的缓和疼痛的方法中，对需要缓和骨接合部的疼痛的患者给药治疗有效量的细胞制剂。给药形态没有特别限定，可根据期待疼痛缓和的位置、范围、患者的年龄等从现有公知的方法中适宜选择。
4.骨接合部的组织再生方法
本发明提供一种骨接合部的组织再生方法，其特征在于，包含向具有骨接合部的疾病的患者的骨接合部给药含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂的工序。
关于本发明的组织再生方法中所使用的脂肪的采集方法、中胚层系干细胞的分离方法、细胞制剂的制备方法、对患者的给药方法等，如上述“1.细胞制剂”及“2.细胞制剂的制备方法”的栏记载所述。在本发明的组织再生方法中，向需要组织再生的患者给药治疗有效量的细胞制剂。给药形态没有特别限定，可根据期待再生的组织的种类、位置、范围、患者的年龄等从现有公知的方法中适宜选择。
5.肌肉修复方法
本发明提供一种肌肉修复方法，其特征在于，包含向具有肌肉损伤的患者的肌肉损伤部位给药含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂的工序。
关于本发明的肌肉修复方法中所使用的脂肪的采集方法、中胚层系干细胞的分离方法、细胞制剂的制备方法、对患者的给药方法等，如上述“1.细胞制剂”及“2.细胞制剂的制备方法”的栏中记载所述。在本发明的肌肉修复方法中，向需要肌肉修复的患者的肌肉损伤部位给药治疗有效量的细胞制剂。给药形态没有特别限定，可根据期待肌肉修复的位置、范围、患者的年龄等从现有公知的方法中适宜选择。
6.其它
本发明提供含有脂肪细胞的细胞制剂在制造骨接合部的疾病的治疗剂中的应用、用于骨接合部的疾病的治疗的含有脂肪细胞的细胞制剂。进而，本发明提供含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂在制造肌肉修复剂中的应用、以及用于肌肉修复的含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂。关于脂肪细胞、中胚层系干细胞、细胞制剂、骨接合部的疾病、肌肉损伤等，如上所述。
实施例
细胞制剂的制备
细胞制剂的制备使用LIPOMAX-SC(Medikan Corp.制，韩国首尔)试剂盒。在本细胞制剂的制备工序中，可在使细胞完全不与大气接触的情况下进行。具体的方法如下所述。
(i)使用注射器(LIPOMAX-SC用中所制造的注射器：Medikan Corp.制，韩国首尔)由各受试者进行脂肪抽吸。将含有所采集的脂肪的注射器在约10分钟室温(约25℃)下静置，分离成细胞级分和液体级分，将含有膨胀液的液体级分作为废液。将剩余的细胞级分作为脂肪组织使用于试验例2。然后，将注射器以2200×g进行8分钟离心分离。通过离心分离分离为上层(游离油)、中间层(脂肪细胞及脂肪干细胞)、下层(细胞组织液等液体级分)这三层。然后，仅将中间层残留在注射器内并废弃上下层，由此得到脂肪细胞和脂肪干细胞的浓缩物。对该浓缩物进行凝胶化(Gelling)处理，进行较大的脂肪细胞的微细化。凝胶化处理进行1～3次。凝胶化使用钻头(Filler Geller Cutter：MEDIKAN公司制)切割脂肪细胞进行微细化，进而以2200×g进行5分钟离心分离，由此，得到含有微细化的脂肪细胞和脂肪干细胞的混合物。将如上得到的混合物作为含有微细化的脂肪细胞和脂肪干细胞的细胞制剂用于下述试验例2～5。
(ii)接着，进行脂肪干细胞的提取。在上述工序(i)中得到的脂肪细胞及脂肪干细胞的混合物中添加与该混合物等量的蛋白质分解酶(商品名：Collagenase；Worthington Biochemical Corp.制)的0.4％水溶液，平稳地振荡，然后，在38℃下进行45分钟培养。
(iii)培养后，以200×g进行5分钟离心分离，采集上清液。在该上清液中浓缩有脂肪细胞，在沉淀中浓缩有脂肪干细胞。
(iv)接着，对工序(iii)中得到的沉淀(脂肪干细胞的浓缩物)2～3mL添加葡聚糖(大塚制药(株)制)约50mL，平稳地振荡后，以200×g进行5分钟离心分离并将上清液废弃，由此进行脂肪干细胞的清洗。重复3次该操作。将通过本工序得到的脂肪干细胞的浓缩物用于下述试验例1的比较对照组。另外，将工序(iii)中得到的含有脂肪细胞的上清供于同样的清洗处理后，作为脂肪细胞(及细胞外基质)用于下述试验例1。
另外，由于脂肪细胞及脂肪干细胞使用源自各患者的细胞，因此，上述操作对各患者进行。
试验例1.起因于变形性关节症的疼痛的缓和效果(1)
向具有变形性膝关节症的受试者给药上述工序(iv)中得到的脂肪细胞(含有细胞外基质)，观察症状的变化。
受试者为女性2名(4症例(两受试者均在两膝关节具有疾病)：平均年龄68.5岁)。脂肪使用从各受试者的下腹部采集的脂肪。脂肪采集量分别为102mL、95mL。依据上述细胞制剂的制备方法由所采集的脂肪得到脂肪细胞(含有细胞外基质)，向各受试者的膝关节分别注入7mL。另外，将具有变形性膝关节症的另2名受试者作为比较对照组，向膝关节注入透明质酸(Suvenyl(中外制药(株)制)：2.5mL)、或上述工序(iv)中得到的脂肪干细胞7mL(脂肪采集部位均为下腹部；脂肪采集量分别为102mL、95mL)。在本试验例1中，在向膝关节进行注入时，未进行使插管的前端前后左右旋转而刺激注入部位的操作。
其结果，在注入脂肪细胞的受试者中，从注入当天减轻膝关节痛，其效果持续约1个月。另外，如果与注入透明质酸或脂肪干细胞的受试者相比，早期明显表现出膝关节痛的缓和效果，疼痛的缓和效果也显著。
试验例2.起因于变形性关节症的疼痛的缓和效果(2)
对具有变形性膝关节症的受试者给药上述工序(i)中得到的脂肪组织，观察症状的变化。另外，受试者为女性3名(6症例(各受试者均在两膝关节中存在疾病)：平均年龄69.7岁)。脂肪使用从各受试者的下腹部中采集的脂肪。脂肪采集量分别为95mL、100mL、105mL。依照上述细胞制剂的制备方法的工序(i)从所采集的脂肪得到脂肪组织，向各受试者的膝关节分别注入7mL。另外，具有变形性膝关节症的另1名的受试者作为比较对照，向膝关节注入透明质酸(Suvenyl(中外制药(株)制)：2.5mL)。在本试验例2中，在向膝关节进行注入时，未进行使插管的先端前后左右旋转而刺激注入部位的操作。
其结果，注入了脂肪组织的3名受试者与注入了透明质酸的受试者相比，均迅速出现关节痛的缓和效果，其效果持续1个月以上。
试验例3.相对于变形性关节症的组织再生效果
对于变形性膝关节症的女性9名(14症例：平均年龄68.7岁)，使用前端被倾斜切割的插管向膝关节注入含有上述工序(i)中制备的微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂(5～10mL、含有约75万～200万个脂肪干细胞)。将疾病部位、脂肪抽吸的具体的部位、所采集的脂肪的量、细胞制剂的注入量、有无通过使插管的前端前后左右旋转来刺激注入部位的操作示于下表1。将相对于各受试者的处置、膝关节间隙的测量结果、及利用成为变形性膝关节症的X射线观察结果的评价基准的Kellgren&Lawrence分类得到的评价结果归纳于下表1。
[表1]
另外，Kellgren&Lawrence分类的具体的评价项目及评价基准如下所述。
[表2]
Grade 关节间隙狭窄 形成骨刺 硬化影像 关节轮廓的变形
I 疑似 有可能性 无 无
II 有可能性 明确 无 无
III 明确 中等程度 中等程度 有可能性
IV 中等程度 显著 显著 明确
作为代表例，将下述受试者A及B的膝关节的X射线照片示于图1及2。
受试者A
施行手术时年龄72岁女性
既往症：变形性膝关节症(左膝)
向左膝关节注入细胞制剂5mL。将细胞制剂的注入前及从注入开始约1个月后拍摄的受试者A的左膝关节外侧关节间隙的X射线照片示于图1。
受试者B
施行手术时年龄60岁女性
既往症：变形性膝关节症(左右两膝)
向左右的膝关节分别各注入7mL细胞制剂。将在细胞制剂的注入前及从注入开始约1个月后拍摄的受试者B的左右膝关节内侧关节间隙的X射线照片示于图2。
(结果)
在治疗当天～5天以内(平均2天)，全部受试者的膝关节的疼痛显著改善，然后，疼痛改善状态均持续。另外，柱拐行走的2名受试者可以不用拐杖行走。进而，站立困难的2名受试者能够站立，全部受试者的行走显著改善。
根据代表受试者A及B的X射线照片观察结果，显示变形性关节症的改善及关节间隙的扩大。即，如图1所示，受试者A的左膝关节在治疗前关节间隙为2.0m(图1(a))，结果在治疗后约1个月扩大至3.3mm(图1(b))。更具体而言，在治疗前Kellgren&Lawrence分类为IV，结果从治疗开始约1个月改善症状到II。另外，如图2所示，受试者B的左右膝关节在治疗前关节间隙为0mm(图2(a))，治疗后约1个月扩大至2.6mm(图2(b))。更具体而言，在治疗前Kellgren&Lawrence分类为IV，结果从治疗开始约1个月改善症状到II。
由本试验例3的结果显示，通过向具有变形性膝关节症的受试者的膝关节注入含有微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂，可促进膝关节内的组织再生。与此相对，作为上述试验例1的比较对照组，在关于注入有脂肪干细胞的受试者的X射线照片的观察结果中，虽然确认到组织再生，但组织再生的进行速度及症状的改善明显比受试者A及B慢。
试验例4.相对于骨坏死的组织再生效果
除变形性膝关节症以外，相对于并发有骨坏死的试验例3的3名受试者A、B及J，向骨坏死部位注入含有上述工序(i)中制备的微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂(含有约75～200万个5～10mL脂肪干细胞)。关于受试者J，将疾病部位、脂肪抽吸的具体的部位、所采集的脂肪的量、细胞制剂的注入量示于下表3。另外，将受试者A的膝关节MR图像作为代表例示于图3。
[表3]
在任一受试者中，向关节内注入细胞制剂后～2天以内行走困难、疼痛等症状均得到显著改善。另外，关于受试者J，如表3所示，在治疗前Kellgren&Lawrence分类为IV，结果从治疗到约3个月改善症状到III。进而，如受试者A的膝关节的MR图像(图3)所示，在向关节内注入细胞制剂后1个月确认到骨坏死影像的显著的改善，3个月后骨坏死消失。拍摄关于受试者A及B的膝关节的MR图像，结果任一受试者中均发现在注入注入细胞制剂后1个月～3个月骨坏死影像及骨浮肿影像的改善或消失。
试验例5.肌肉修复效果
对于具有大腿四头肌损伤、上臂三角肌损伤或大胸肌损伤的受试者(男性4名：平均年龄37.8岁、女性20名：平均年龄33.8岁)，向肌肉损伤的部位注入含有上述工序(i)中制备的微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂(10～50mL、含有约400～2000万个脂肪干细胞)。细胞制剂的制备使用从受试者的下腹部或大腿部采集的脂肪(脂肪采集量：50～200ml)。
关于注入细胞制剂后的起因于肌肉损伤的疼痛的改善情况为：从注入后开始几乎未感觉到疼痛(8名：女性)、注入后不太感觉到疼痛(4名：男性)、注入后1天疼痛消失(10名：女性)、注入后2～3天疼痛消失(2名：女性)。即，显示通过注入含有脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂，早期地改善肌肉损伤所致的疼痛。
另外，在注入细胞制剂后3周～1个月以内，在全部受试者中，上肢的关节可动域(ROM：Range of Motion)扩大，确认到运动功能的改善。即，显示通过向肌肉损伤部位注入上述细胞制剂，可修复肌肉。
3.总结
如上所述，显示如果向变形性膝关节症的患者的患部注入脂肪细胞，则可以在早期缓和起因于骨接合部的疾病的疼痛，而且其效果长期持续(试验例1)。另外，在注入脂肪组织的情况下，与试验例1同样地在早期疼痛得到缓和，其效果的持续更进一步长期地持续(试验例2)。进而，通过向患部注入以高浓度含有微细化的脂肪细胞及中胚层系干细胞(脂肪干细胞)的细胞制剂，除上述的疼痛缓和效果以外，可促进患部组织的再生(试验例3)。而且，如果比较仅注入脂肪干细胞的情况下(试验例1的比较对照组)和注入含有微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂的情况(试验例3)，则在注入含有微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂的情况下，协同提高组织再生效果。另外，如果向骨坏死部位(试验例4)注入含有微细化的脂肪细胞及脂肪干细胞的细胞制剂，则确认到坏死的部分的骨组织的再生。进而，显示通过向肌肉损伤部位给药脂肪细胞及中胚层系干细胞，可修复肌肉(试验例5)。认为如果组合使用脂肪细胞和脂肪干细胞这样的中胚层系干细胞，则通过脂肪细胞(含有细胞外基质)的作用，可在患部保持中胚层系干细胞，提高中胚层系干细胞的植入效率及组织再生效率。
由以上的试验例显示，本发明的细胞制剂对于骨接合部的疾病的治疗、及肌肉修复发挥优异的效果。

Claims (17)

1.一种用于治疗骨接合部的疾病的细胞制剂，其含有脂肪细胞。
2.根据权利要求1所述的细胞制剂，其中，所述细胞制剂还含有中胚层系干细胞。
3.根据权利要求1所述的细胞制剂，其中，所述中胚层系干细胞为脂肪干细胞。
4.根据权利要求1所述的细胞制剂，其中，所述细胞制剂相对于1个脂肪细胞含有1～10个中胚层系干细胞。
5.根据权利要求1所述的细胞制剂，其中，所述脂肪细胞为经γ射线照射的细胞。
6.根据权利要求1所述的细胞制剂，其中，所述骨接合部的疾病为选自由脊椎疾病、关节疾病、自身免疫性疾病及骨坏死症构成的组中的任一种。
7.含有脂肪细胞的细胞制剂在制造骨接合部的疾病的治疗剂中的应用。
8.一种用于骨接合部的疾病的治疗的含有脂肪细胞的细胞制剂。
9.一种缓和骨接合部的疼痛的方法，其包含向具有骨接合部的疾病的患者的骨接合部给药含有脂肪细胞的细胞制剂的工序。
10.一种骨接合部的组织再生方法，其包含向具有骨接合部的疾病的患者的骨接合部给药含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂的工序。
11.一种肌肉修复用细胞制剂，其含有脂肪细胞及中胚层系干细胞。
12.根据权利要求11所述的细胞制剂，其中，所述中胚层系干细胞为脂肪干细胞。
13.根据权利要求11所述的细胞制剂，其中，所述细胞制剂相对于1个脂肪细胞含有1～10个中胚层系干细胞。
14.根据权利要求11所述的细胞制剂，其中，所述脂肪细胞为经γ射线照射的细胞。
15.含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂在制造肌肉修复用制剂中的应用。
16.一种用于肌肉修复的含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂。
17.一种肌肉修复方法，其包含向具有肌肉损伤的患者的肌肉损伤部位给药含有脂肪细胞及中胚层系干细胞的细胞制剂的工序。
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