KR20140109220A - 산국 에센셜 오일을 유효성분으로 함유하는 피부 재생용 화장료 및 피부 외용제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 산국(Chrysanthemum boreale Makino)으로부터 수증기 증류법(steam distillation)을 통해 분리되는 에센셜 오일(essential oil)을 포함하는 피부 탄력유지와 재생용 화장료 및 상처치유용 피부 외용제 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 피부 표피 각질형성세포의 증식과 이동 및 type IV 콜라젠 합성과 분비를 유도하여 피부의 탄력유지와 재생 및 상처 치유뿐만 아니라 진피 섬유아세포의 증식을 억제시켜 상처치유과정에서 발생할 수 있는 비대 흉터, 켈로이드 등의 부작용 없이 피부 재생을 유도할 수 있는 피부 탄력유지와 재생 및 상처치유용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

Description

산국 에센셜 오일을 유효성분으로 함유하는 피부 재생용 화장료 및 피부 외용제 조성물{Cosmetic composition for skin cell regeneration and the use there of containing essential oil of Chrysanthemum boreale Makino}

본 발명은 산국(Chrysanthemum boreale)으로부터 분리된 유용성분을 포함하는 피부용 의약 또는 화장료 조성물에 대한 것이다.

피부(skin)는 표피(epidermis)와 진피(dermis), 피하지방층(subcutis)의 3개의 층으로 구성되어 있으며, 외부로부터의 물리적 충격과 화학적 변화를 완충시켜 인체 내부 환경을 유지하고 몸을 보호하는 생체의 장벽기능을 하는 조직이다.

피부의 가장 바깥층에 위치하고 있는 표피층은 각질층, 투명층, 과립층, 유극층, 기저층으로 있으며, 표피의 95%를 구성하고 있는 각질형성세포(keratinocyte)가 피부에 침투하는 세균, 화학 물질 등에 효율적으로 방어 역할을 하고 다양한 사이토카인을 분비하여 피부의 염증반응과 면역반응에 관여한다. 또한 각질형성세포의 증식과 이동은 type IV 콜라젠(collagen)과 라미닌(laminin) 등의 합성을 유도하여 피부의 탄력유지와 재생 및 상처 치유를 촉진하고, 기저막 형성에 중요한 역할을 한다. 기저막(basement membrane)은 표피와 진피의 경계부에 위치하며, type IV 또는 VII 콜라젠, 라미닌, fibronection 등의 당단백질(glycoprotein)과 heparan sulface와 같은 glycosaminoglycans로 구성되어 있다. 이러한 기저막은 피부 세포들의 부착과 증식 등 피부 세포의 기능을 조절하고, 유해물질의 투과를 선택적으로 조절하는 장벽 역할, 표피와 진피의 상호작용, 상처 치유 등 피부에서 다양한 역할을 수행하는 중요한 구조물이다. 특히, 기저막의 주요 구조 단백질인 type IV 또는 VII 콜라젠 등의 합성과 분비는 기저막 형성에 있어 중요한 요소이며, 기저막 형성 유도는 피부의 장벽기능을 향상시키고, 피부의 탄력 개선 및 손상된 피부의 재생과 상처 치유를 촉진하는 것으로 알려졌다.

진피층은 표피의 아래층에 존재하고 피부 부피의 대부분을 차지하고 있다. 진피는 섬유아세포(fibroblast)와 이의 부산물인 콜라젠, 엘라스틴(elastin), dermal matrix 등으로 이루어져있으며, 피부의 유연성과 탄력성, 장력을 유지할 뿐만 아니라 외부 자극으로 인해 손상된 피부 조직은 섬유아세포의 콜라젠과 섬유소질 등의 생산을 통해 진피층이 기질을 형성하여 파괴된 피부 조직을 복원하는 역할을 한다. 그러나, 상처 치유 과정에서 섬유아세포의 과도한 증식은 콜라젠과 섬유소질의 과잉 분비로 인해 피부에 비대흉터, 켈로이드, 피부섬유종, 피부경화와 같은 다양한 부작용과 피부 질환을 발생시킨다.

최근, 환경 오염과 오존층 파괴와 같은 지구 환경의 변화와 스트레스, 노화로 인해 피부의 광노화, 부종, 아토피, 피부암 등 피부 건강이 위협을 받고 있는 가운데 현대인들의 미용에 대한 관심이 증가되면서 병리학적 측면에서 뿐만 아니라 미용적인 측면에도 피부가 주목을 받고 있다.

이에 따라, 피부 노화, 상처 및 피부 병변으로 인하여 생리활성이 저하된 각질형성세포의 증식과 이동 및 type IV 콜라젠 합성과 분비를 유도하여 피부의 탄력유지와 재생 및 상처 치유를 유도하고, 섬유아세포의 증식을 억제하여 상처치유 과정에서 발생할 수 있는 비대 흉터, 켈로이드와 같은 부작용을 유발시키지 않으면서 피부 질환을 예방할 수 있는 소재 개발의 필요성이 절실히 요구되고 있다.

한편, 산국(山菊, Chrysanthemum boreale Makino)은 국화과에 속하는 다년생 초본류로 우리나라 전역의 산간 지역에 널리 분포하는 야생 국화이다. 산국은 9~10월에 걸쳐 1~1.5cm 크기의 노란색 꽃을 피우며, 주로 에센셜 오일(essential oil)과 flavonoid 배당체, sesquiterpenoids, chrysanthemin 등을 주성분으로 함유하고 있다.

한방에서 산국의 효능은 중추신경 진정작용, 혈압강하 작용, 빈혈, 두통 완화, 결핵균과 각종 바이러스에 대한 억제효과에 사용한다고 알려 있으며, 특히 에센셜 오일의 구성 성분으로 알려진 camphor, camohene, germacrene 등이 항암효과가 뛰어나며, 라디칼 소거 활성 기능과 다양한 생리 활성을 갖는 것으로 알려졌다.

천연물 유래 에센셜 오일은 식물의 2차 대사 산물 중 인체에 약리효과를 나타내는 휘발성 화학물질로, 주로 알코올, 알데하이드, 에스테르, 케톤 등의 여러가지 유기화합물로 구성되어 있다. 에센셜 오일의 독특한 향기 성분과 치료 성분은 피부, 순환계, 후각계를 통해 스트레스 해소, 피로 회복, 근육 이완 등의 효과를 나타낼 뿐만 아니라 항균작용, 면역 증진, 항알러지 작용이 있어 오래전부터 질병의 치료와 예방에 활용되었으며 노화 예방과 같은 미용에도 효과가 있다.

에센셜 오일의 이러한 효능·효과는 현대에도 이어져 제약이나 식품뿐만 아니라 화장품 분야까지 다양하게 연구 및 활용되고 있다. 특히 화장품 분야에 있어 최근에는 합성 향료 대신 에센셜 오일을 선호하는 경향이 증가하고 있어 에센셜 오일의 수요가 점점 증가하고 있는 추세이다.

본 발명자들은 산국 에센셜 오일이 피부 표피 각질형성세포의 증식과 이동 및 type IV 콜라젠 합성과 분비를 유도하고, 진피 섬유아세포의 증식을 억제하는 작용이 있음을 확인하였다. 이러한 효과는 표피 각질형성세포의 증식과 이동 및 type IV 콜라젠 합성과 분비를 유도함으로써 피부의 탄력유지와 재생 및 상처 치유를 가능하게 할 뿐만 아니라 섬유아세포의 증식을 억제시킴으로써 과도한 섬유아세포의 증식으로 인한 비대흉터, 켈로이드 등의 피부 질환 예방 작용이 있음을 나타낸다.

이에 따라, 본 발명은 상기한 효과를 나타내는 산국 에센셜 오일을 유효성분으로 함유하는 피부의 탄력유지와 재생용 화장료 및 상처치유용 피부 외용제에 이용될 수 있는 천연물 유래의 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 상기한 효과를 나타내는 산국 에센셜 오일을 활용하여 상처치유 과정에서 발생할 수 있는 비대흉터 및 켈로이드 형성의 부작용이 없고, 피부의 탄력유지와 재생 및 상처 치유 기능을 갖는 화장품 또는 의약품 및 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이 목적이다.

본 발명자들은 피부의 탄력유지와 재생용 화장품 및 상처치유용 피부 외용제 조성물을 개발하기 위해 연구하던 중, 산국 에센셜 오일이 피부 표피 각질형성세포의 증식과 이동 및 type IV 콜라젠 합성과 분비를 촉진하고 진피 섬유아세포의 증식을 억제하는 작용이 있음을 확인하였다. 이러한 효과를 나타내는 산국 에센셜 오일을 활용하면 피부의 탄력유지와 재생용 화장품 원료와 상처 치유 효과를 갖는 의약품 원료 조성물로서의 활용 가능함을 확인하여 본 발병을 완성하기에 이르렀다.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 산국(Chrysanthemum boreale)의 에센셜 오일(essential oil) 성분을 포함하는 피부 재생용 조성물이다.

여기서, 상기 에센셜 오일 성분은 산국 추출물의 지용성 성분인 것이 바람직하다.

그리고, 상기 산국 추출물은 산국 증류액인 것이 가능하다.

또한, 상기 지용성 성분은 상기 증류액으로부터 수용액 성분이 제거된 것일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 피부 재생용 조성물은, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 더 포함하고, 상기 에센셜 오일 성분은 0.0001~1.0 ㎍/ml 범위 내로 포함되는 것이 바람직하다.

또한, 상기 에센셜 오일 성분은 0.1~1.0 ㎍/ml 범위 내로 포함되는 것이 더욱 바람직하다.

또한, 상기 에센셜 오일 성분은 표피 각질세포의 증식이나 또는 이동을 촉진시키는 것이 가능하다.

이와 함께, 본 발명은 산국(Chrysanthemum boreale)의 에센셜 오일(essential oil) 성분을 포함하고, 진피 섬유아세포의 증식을 억제시키는 상처 치유용 피부 외용제 조성물일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 에센셜 오일 성분 또는 조성물은 표피 각질형성세포내 세린-트레오닌 키나제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나제(Erk 1/2)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 키나제의 인산화 과정 또는 신호전달 과정을 유도하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명에 따른 에센셜 오일 성분 또는 조성물은 표피 각질형성세포의 type IV 콜라젠 합성과 분비를 촉진시키는 것이 가능하다.

또한, 본 발명에 따른 에센셜 오일 성분 또는 조성물은 표피 각질형성세포의 type I 콜라젠 합성과 분비에 영향을 미치는 않는 것일 수 있다.

한편, 본 발명의 다른 실시형태는, 산국(Chrysanthemum boreale)을 수증기 증류법(steam distillation)으로 증류하여 증류액을 얻고, 상기 얻은 증류액으로부터 에센셜 오일 성분을 분리하는 산국 증류액의 추출방법인 것도 가능하다.

또한, 본 발명은 상기 추출방법으로 얻은 에센셜 오일 성분을 포함하는 피부 재생용 조성물일 수도 있다.

또한, 본 발명은 상기 추출방법으로 얻은 에센셜 오일 성분을 포함하는 화장료 조성물일 수도 있다.

기타 실시예들의 구체적인 사항들은 상세한 설명 및 도면들에 포함되어 있다.

본 발명에 따른 산국 에센셜 오일을 함유하는 피부 탄력유지와 재생용 및 상처 치유 기능을 갖는 피부 외용제 조성물은 피부 친화적이면서, 피부 표피 각질형성세포의 증식과 이동 및 type IV 콜라젠의 합성과 분비를 유도하고 진피 섬유아세포의 증식을 매우 효과적으로 억제한다.

이러한 효과는 피부 재생과 상처치유를 가능하게 하고, 상처 치유 과정에서 발생할 수 있는 비대 흉터 및 켈로이드의 형성이 없는 피부 탄력유지와 재생용 및 상처치유 기능을 갖는 피부 외용제 화장품 또는 의약품 원료 조성물로 사용될 수 있는 것을 가능하게 한다.

도 1은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따라 산국으로부터 에센셜 오일을 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이고,
도 2는 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따라 산국에서 분리한 에센셜 오일의 분석 결과 도표이고,
도 3은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따라 산국 에센셜 오일이 표피 각질형성세포와 진피 섬유아세포의 독성에 미치는 효과를 나타낸 그래프이고,
도 4는 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따라 산국 에센셜 오일이 표피 각질형성세포의 증식에 미치는 효과를 나타내는 그래프이고,
도 5은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따라 산국 에센셜 오일이 진피 섬유아세포의 증식에 미치는 효과를 나타내는 그래프이고,
도 6은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따라 산국 에센셜 오일이 표피 각질형성세포의 이동에 미치는 효과를 나타낸 그래프이고,
도 7은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 산국 에센셜 오일이 표피 각질혈성세포내 세린/트레오닌 단백질 키나제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나제(Erk 1/2)의 인산화에 미치는 영향을 나타낸 결과이고,
도 8은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따라 산국 에센셜 오일이 표피 각질형성세포의 type IV 콜라젠 합성과 분비에 미치는 효과를 나타낸 그래프이고,
도 9는 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따라 산국 에센셜 오일이 표피 각질형성세포의 type I 콜라젠 합성과 분비에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.

본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시 예를 가질 수 있는 바, 특정 실시 예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에서 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.

본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.

제1, 제2 등의 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성요소들은 상기 용어들에 의해 한정되어서는 안 된다. 상기 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다.

본 발명은 산국(Chrysanthemum boreale Makino)의 에센셜 오일(essential oil) 성분을 포함하는 피부 재생용 조성물이다. 또한, 본 발명은 피부 탄력유지용 조성물이거나 피부의 상처 치유 기능을 가지는 의약 또는 화장품 조성물일 수 있다.

상기 에센셜 오일 성분은 산국으로부터 얻을 수 있고, 산국의 추출물에서 얻은 것이 바람직하며, 산국의 증류 추출물로부터 얻은 것이 더욱 바람직하다. 더욱 구체적으로, 상기 에센셜 오일 성분은 산국을 증류하여 얻은 것으로, 예들 들어 산국을 수증기 증류법(steam distillation)을 이용하여 추출한 에센셜 오일일 수 있고, 산국 증류액에서 수용액 성분이 제거된 것이 가능하다.

또한, 본 발명에 따른 산국 에센셜 오일은 에탄올, 메탄올과 같은 유기 용매를 이용한 추출이 아닌 증류수를 이용한 수증기 증류법을 통하여 추출된 산국 에센셜 오일 성분을 포함하는 것을 특징으로 하여, 표피 각질형성세포의 증식과 이동 및 type IV collagen의 합성과 분비를 유도하고 진피의 섬유아세포의 증식을 억제시킴로써, 피부 탄력유지와 재생 및 상처 치유를 가능하게 하는 효과가 있다.

이러한 본 발명에 있어서 산국 에센셜 오일은 0.0001~1.0 ㎍/㎖ 범위(바람직하게는, 0.1~1.0 ㎍/㎖ 범위) 내의 농도에서 피부 세포(각질형성세포 및 섬유아세포)가 높은 세포 생존율을 나타내고, 산국 에센셜 오일로 인한 피부 질환이나 부작용 등의 위험 없이 높은 안전성을 가지며, 세포 친화적이서 피부 탄력유지와 재생 및 상처치유를 위한 화장품 또는 의약품 원료로서 바람직하다.

본 발명에 의한 산국 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하였다. 그 중에서도, 상기 산국 에센셜 오일은 0.01, 0.1㎍/㎖의 농도에서 각질형성세포의 증식을 효과적으로 유도하였다.

또한, 본 발명에 의한 산국 에센셜 오일은 성분이 진피 섬유아세포의 증식을 효과적으로 억제하였다.

또한, 본 발명에 의한 산국 에센셜 오일은 진피 섬유아세포의 증식을 농도 의존적으로 억제하였다. 그 중에서도, 상기 산국 에센셜 오일은 1 ㎍/㎖의 농도에서 진피 섬유아세포의 증식을 유의하게 억제하였다.

또한, 본 발명에 의한 산국 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 이동을 농도 의존적으로 유도하였다. 그 중에서도, 상기 산국 에센셜 오일은 0.1 ㎍/㎖의 농도에서 표피 각질형성세포의 이동을 유의하게 유도하였다.

또한, 본 발명에 의한 산국 에센셜 오일은 표피 각질형성세포내 세린/트레오닌 키나제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나제(Erk 1/2)의 인산화를 농도 의존적으로 유도하였다. 특히, 산국 에센셜 오일 0.1 ㎍/㎖의 농도에서 세린/트레오닌 키나제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나제(Erk 1/2)의 인산화를 유의하게 유도하였다.

또한, 본 발명에 의한 산국 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 type IV 콜라젠 분비와 합성을 촉진시켰다. 그 중에서도, 상기 산국 에센셜 오일 0.1 ㎍/㎖의 농도에서 표피 각질형성세포의 type IV 콜라젠 합성과 분비를 유의하게 촉진시켰다.

또한, 본 발명에 의한 산국 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 type I 콜라젠 분비와 합성에 영향을 미치지 않았다.

상술한 바와 같은 본 발명에 따른 산국 에센셜 오일은 피부 노화와 주름, 상처 및 피부 병변으로 인하여 생리활성이 저하된 각질형성세포의 증식을 유도하여 피부의 탄력유지와 재생, 상처 치유의 유도를 통해 피부 탄력유지와 재생용 및 상처 치유용 피부 외용제로 널리 활용될 수 있다.

즉, 본 발명은 산국(Chrysanthemum boreale Makino)으로부터 수증기 증류법(steam distillation)을 통해 분리되는 에센셜 오일을 포함하는 피부 재생용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 피부 표피 각질형성세포(keratinocyte)의 증식과 이동을 유도하고, type IV 콜라젠(collagen)의 합성과 분비를 촉진시키며, 진피 섬유아세포의 증식을 억제하는 효능을 갖는 산국 에센셜 오일을 유효성분으로 하여, 섬유아세포의 과도한 증식으로 발생할 수 있는 비대흉터와 켈로이드 형성 없이, 피부의 탄력유지와 재생 및 상처 치유 효과가 있는 화장품 또는 의약품 및 피부 외용제 조성물을 제공할 수 있다.

도 1 은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따라 산국으로부터 에센셜 오일 성분을 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이고, 여기에 나타난 바와 같이, 본 발명은 산국을 수증기 증류법(steam distillation)으로 증류하여 증류액을 얻고, 상기 얻은 증류액으로부터 에센셜 오일 성분을 분리하는 산국 증류액의 추출방법일 수 있다.

예를 들어, 건조하지 않은 산국의 꽃 부분(꽃으로부터 5 cm)을 수증기 증류법으로 증류시킨 다음, 저온 냉각시켜서 추출물을 얻고, 그것으로부터 지용성층을 분리/정제함으로써, 산국 에센셜 오일을 획득할 수 있다.

상기 수증기 증류법과 추출물로부터 에센셜 오일을 분리하는 방법은 이 기술 분야에서 널리 알려진 다양한 방법에 의해 수행될 수 있다.

상술한 바와 같이 본 발명은 산국에 대하여 수증기 증류법으로 얻은 에센셜 오일이 표피 각질형성세포의 증식과 이동 및 type IV 콜라젠의 합성과 분비를 유도하여 피부 탄력, 재생 등에 유용함을 확인한 것이 특징이다.

또한, 상술한 바와 같은 본 발명에 따른 산국 에센셜 오일은 피부 진피 섬유아세포의 증식을 억제하여 상처 치유 과정에서 발생할 수 있는 비대 흉터, 켈로이드와 같은 부작용을 유발시키지 않으면서 피부 질환을 예방에 활용될 수 있다.

상기한 바와 같이, 본 발명은 산국의 에센셜 오일을 유효성분으로 함유하며, 이에 따라 피부 탄력유지와 재생용 및 상처치유용 피부 외용제 조성물일 수도 있다.

이와 함께, 본 발명은 산국 에센셜 오일을 유효성분으로 함유하는 화장료 또는 의약품 조성물인 것도 가능하다.

이와 함께, 본 발명에 따른 조성물은 활성 성분으로서의 상기한 산국의 에센셜 오일과 함께, 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 결합제, 붕괴제, 글리덴트(glident), 희석제, 윤활제, 착색제, 감미제, 향미제, 방부제 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 공지된 방법으로 적절한 용량 레벨로 통상적인 고체 또는 액체 담체 또는 희석제 및 통상적인 약제학적으로 제조된 애주번트 중에서 제조될 수 있다.

바람직하게, 상기 산국 에센셜 오일은 정맥내 투여에 적합하거나, 경구 투여에 적합하거나, 흡입 투여에 적합하다. 투여 형태로는 예를 들면, 환약, 정제, 필름 정제, 코팅 정제, 캡슐, 리포좀 제제, 마이크로 및 나노 제제, 분말 및 침착물을 들 수 있다. 또한, 본 발명은 또한 피부, 피내, 위내, 피부내 (intracutan), 혈관내, 정맥내, 근육내, 복강내, 비강내, 질내, 구강내, 경피적 (percutan), 직장, 피하, 설하, 국소, 또는 경피 투여를 포함한 비경구 투여용 약제학적 제제를 포함하며, 제제는 전형적인 비히클 및/또는 희석제 이외에도, 본 발명의 산국 에센셜 오일을 함유한다.

본 발명은 또한 약제학적 제제 및/또는 영양 보조 식품으로서 신생아 (newborn), 유아 (toddler), 및 소아(infant)에게 산국 증류액 성분을 경구 투여하기 위한 제제로서 포유동물 밀크, 인공 포유동물 밀크, 및 포유동물 밀크 대용품을 포함한다.

본 발명의 산국 에센셜 오일은 또한 이의 약제학적으로 활성인 염의 형태로 투여될 수 있다. 적절한 약제학적으로 활성인 염은 산부가염 및 알칼리염 또는 알칼리 토금속염을 포함한다. 예를 들면, 나트륨, 칼륨, 리튬, 마그네슘 또는 칼슘염이 얻어질 수 있다. 본 발명의 산국 에센셜 오일은 유기산 및 무기산과 약제학적으로 허용 가능한 염을 생성한다.

본 발명의 약제학적 조성물은 전형적으로 원하는 투여 형태에 대하여, 즉, 정제, 캡슐 (고체, 반고체 또는 액체 충전), 구성용 분말, 통상적인 약무와 일치하는 에어로졸 제제 형태의 경구 투여를 위해 선택된 적절한 담체 물질과 함께 투여될 수 있다.

본 발명의 또 하나의 측면은 본 발명의 산국 에센셜 오일을 포함하는 약제학적 조성물을 후술하는 질환을 치료하는데 효과적인 치료적 유효량으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 피부 재생 및 상처치유 방법에 관한 것이다.

본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하여, 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다. 또한, 피부 탄력과 재생 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다.

본 발명은 하기의 실시예에 의하여 보다 더 잘 이해 될 수 있으며, 하기의 실시예는 본 발명의 예시 목적을 위한 것이며, 첨부된 특허청구범위에 의하여 한정되는 보호범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.

실시예 1: 산국 에센셜 오일의 제조

도 1은 산국으로부터 에센셜 오일을 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이고, 여기에서 나타난 바와 같이, 본 발명은 산국을 수증기 증류법으로 증류하여 얻는 추출물에서 수용액 성분을 제거한 산국 에센셜 오일이다.

본 실시예에서 산국은 호서대학교(아산, 한국) 실습지에서 자생된 산국을 9~10월에 걸쳐 채취된 것을 사용하였다. 산국 꽃이 피기 직전의 꽃망울로부터 5 cm 줄기가 포함되도록 채취하여 세척 후, 생초 20 kg씩 수증기 증류법을 이용하여 얻은 추출물(10 L)을 수용액 성분을 분리하여 에센셜 오일(50 ml)을 획득하였고, 4℃의 저온고에서 보관하였다.

실험예 1. 산국 에센셜 오일의 성분 분석

상기 실시예 1의 수증기 증류법으로 추출한 산국 에센셜 오일의 성분 분석은 KBSI(korea basic science institute, seoul center)에 의뢰하였다. 더욱 구체적으로는,

gas chromatography/ mass spectrometer(6890N GC/5975i MS, Agilent, USA)를 사용하였고, GC/MS의 column은 DB5-MS(30 m X 250㎛, 0.25㎛)를 사용하였으며, carrier gas는 He를 사용하여 1 ml/분으로 흐르게 하여 분석하였다. Oven의 온도는 40℃-2℃/분-230℃-5℃/분-300℃(5분)으로 유지하였으며, injection의 온도는 280℃에서 분석하였다. 또한 Interface의 온도는 300℃, ion source의 온도는 230℃, analyzer의 온도는 150℃에서 분석하였으며, Mass range는 50~800 m/z에서 분석하였다.

그 결과, 도 2 나타난 바와 같이, 총 42개의 성분으로 구성되어 있음을 확인할 수 있었으며, camphor, β-Cubebene, piperitone, β-Thujone 등의 높은 함량순으로 나열하여 나타내었다.

실험예 2. 산국 에센셜 오일이 피부세포(각질세포 및 섬유아세포)에 미치는 독성조사

본 발명의 산국 에센셜 오일 성분이 피부세포(각질세포 및 섬유아세포)에 미치는 독성을 확인하기 위하여, 본 실험예에서 사용한 농도의 산국 증류액 성분을 이용하여 하기와 같이 조사하였다.

사람유래 표피 각질세포(HaCat)와 사람유래 진피 섬유아세포(CCD-986sk)를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 DMEM, RPMI1640 배지를 이용하여 배양하고 본 발명의 실험예에 활용하였다. 표피 각질세포와 진피 섬유아세포의 독성 측정은, 산국 에센셜 오일 성분을 0.001~10 μg/ml로 처리하고 24시간 배양 후 엠티티(MTT) 분석법으로 측정하였다.

그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 산국 에센셜 오일 성분 0.001~1 μg/ml의 농도에서는 유의한 세포독성이 관찰되지 않았으나(75% 이상 viability), 10 μg/ml의 농도에서는 매우 낮은 생존율(10% 이하 viability)을 나타내었다. 따라서 본 발명에 따른 산국 에센셜 오일 성분의 농도는 1 μg/ml 이하의 농도가 바람직하다.

실험예 3. 산국 에센셜 오일 표피 각질세포 및 진피 섬유아세포 증식 효과 측정

상기 실시예 1에서 얻은 산국 에센셜 오일 성분 피부 세포(표피 각질세포 및 진피 섬유아세포)의 증식에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 상기 실험예 2에서 제시된 산국 에센셜 오일 성분의 농도로, 하기와 같이 조사하였다.

사람유래 표피 각질세포(HaCat)와 사람유래 진피 섬유아세포(CCD-986sk)를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 DMEM, RPMI1640 배지를 이용하여 배양하고 본 발명의 실험예에 활용하였다. 피부 세포(표피 각질세포 및 진피 섬유아세포)를 96 well microtiter plate에 각 well 당 세포수 5 X 10³/100 μl/well이 되도록 주입하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 부착시켰다. 산국 에센셜 오일 0.001~1 μg/ml 농도로 각 well에 100 μl씩 처리하여 24시간동안 배양시켰다. Ez-cytox와 DMEM 또는 RPMI 1640을 1:1로 혼합하여 각 well 당 20 μl 씩 처리한 후 배양기에서 30분간 반응시켰다. ELISA plate reader(Synerge2, BioTek, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도 측정 후, 백분율로 환산하여 산국 에센셜 오일의 피부 세포 증식에 대한 결과를 확보하였다.

도 4는 본 발명의 실시예 1에 의해 추출된 산국 에센셜 오일의 표피 각질형성세포의 증식 효과를 나타낸 그래프이고, 도 5는 본 발명의 실시예 1에 의해 추출된 산국 에센셜 오일의 진피 섬유아세포의 증식 효과를 나타낸 그래프이다. 여기서, 음성대조군은 산국 에센셜 오일을 이용하지 않은 것이고, 양성대조군은 종래에 상처치유 및/또는 피부 재생에 활용되고 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/ml)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 4 및 도 5에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 산국 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하였고, 진피 섬유아세포의 증식을 억제시키는 것으로 나타났다. 즉, 표피성장인자(50 ng/ml)에 의한 표피 각질형성세포의 증식은 128.52±2.59% 유도가 되었으며, 양성 대조군가 비교하여 산국 에센셜 오일 0.01 ㎍/ml 농도에서 128.41±4.84%의 증식 유도율을 나타내었고, 0.1 ㎍/ml의 농도에서 176.32±7.74%의 증식 유도율을 나타내어, 각질형성세포의 증식을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

또한 산국 에센셜 오일은 진피 섬유아세포의 증식을 농도 의존적으로 억제시켰으며, 특히 산국 에센셜 오일 1 ㎍/ml 농도에서 71.93±2.46%의 증식 억제율을 나타내어, 섬유아세포의 증식을 유의하게 억제하는 것으로 나타났다.

실험예 4. 산국 에센셜 오일이 표피 각질형성세포의 이동에 미치는 효과 조사

상기 실시예 1에 의해 얻은 산국 에센셜 오일 성분이 표피 각질세포의 이동에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 상기 실험예1에서 제시된 산국 에센셜 오일의 농도로, 하기와 같이 조사하였다.

사람유래 표피 각질세포(HaCat)과 사람유래 진피 섬유아세포(CCD-986sk)를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 DMEM, RPMI1640 배지를 이용하여 배양하고 본 발명의 실험 예에 활용하였다. 48 well chemotactic boyden chamber를 사용하여 표피 각질세포의 이동률을 조사하였다. 먼저, lower chamber에 산국 에센셜 오일을 각각 0.0001~1 μg/ml 의 농도를 처리하고, type I 콜라젠이 코팅이 된 8 μm pore의 poly-carbonate membrane을 올려 주었다. 이후, upper chamber에 표피 각질세포를 well당 1×10⁶ cell/ml씩 처리하였다. Chamber를 37℃ 배양기에서 약 90분간 배양시킨 후, membrane을 Diff-Quick solution으로 염색 및 고정하였다. Membrane을 통과하여 이동한 세포의 수를 세어, 백분율로 환산하였다.

도 6은 본 발명의 일 실시예 1에 의해 추출된 산국 에센셜 오일의 표피 각질세포의 이동효과를 나타내는 그래프이며, 음성 대조군은 산국 에센셜 오일을 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처치유 및/또는 피부재생에 활용되는 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 5 ng/ml)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이, 산국 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 이동을 농도 의존적으로 유도하였고, 특히 산국 에센셜 오일 0.1 ㎍/ml의 농도에서 145.12±7.27%의 최대 이동률을 나타내어, 산국 에센셜 오일이 각질형성세포의 이동을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

실험예 5. 산국 에센셜 오일이 표피 각질형성세포내 신호전달 과정에 미치는 영향 조사

상기 실시예 1에 의해 얻은 산국 에센셜 오일이 표피 각질형성세포의 증식과 이동을 조절하는 주요 신호전달과정인 세린/트레오닌 키나제(Akt)와 세포외 신호조절 키나제(Erk 1/2)의 인산화 과정에 미치는 효과를 측정하기 위해서, 상기 실험예1에서 제시된 산국 에센셜 오일의 농도로, 각각의 특이항체 (P-Akt, Akt, P-Erk 1/2, Erk 1/2)를 이용하여 면역블롯 (Immuno Blot)법을 활용하였다.

도 7은 본 발명의 일 실시예 1에 의해 추출된 산국 에센셜 오일의 표피 각질형성세포내 세린/트레오닌 키나제(Akt)와 세포외 신호조절 키나제(Erk 1/2)의 인산화 과정에 미치는 영향을 나타낸 결과이며, 음성 대조군은 산국 에센셜 오일을 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처치유 및/또는 피부 재생에 활용되는 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/ml)를 이용한 것이다.

그 결과, 도 7에 나타난 바와 같이, 산국 에센셜 오일은 농도 의존적으로 표피 각질형성세포내 세린/트레오닌 키나제(Akt)와 세포외 신호조절 키나제(Erk 1/2)의 인산화를 유도하였으며, 특히, 산국 에센셜 오일 0.1 ㎍/ml 농도에서 양성 대조군에 비해 세포내 세린/트레오닌 키나제(Akt)와 세포외 신호조절 키나제(Erk 1/2)의 인산화가 매우 유의하게 유도되는 것으로 나타났다.

실험예 6. 산국 에센셜 오일이 표피 각질형성세포의 type I 또는 IV 콜라젠 합성과 분비에 미치는 영향

상기 실시예 1에 의해 얻은 산국 에센셜 오일이 표피 각질형성세포의 type IV 콜라젠 합성과 분비에 미치는 효과를 측정하기 위해서, 상기 실험예1에서 제시된 산국 에센셜 오일의 농도로, 하기와 같이 조사하였다.

96 well microtiter plate에 monoclonal anti-collagen I 또는 IV Ab, (2 ㎍/well/PBS)를 주입 후 12시간 동안 RT에서 코팅하였다. Blocking buffer로 1시간 동안 blocking 후, 각각의 샘플을 well당 100㎕씩 처리하여 RT에서 90분 동안 반응시켰다. 샘플은 산국 에센셜 오일을 처리하지 않은 표피 각질형성세포의 배양액(CM)과 세포 용해물(Lysate), 산국 에센셜 오일 0.1 ㎍/ml 농도로 처리된 표피 각질형성세포의 배양액(CM)과 세포 용해물(Lysate)을 처리하였다. 그 후, polyclonal anti-collagen I 또는 IV Ab를 각 well에 처리하여 RT에서 90분 동안 반응시킨 다음, streptavidin-POD를 각 well에 처리하여 RT에서 60분 동안 반응시켰다. Supersinal ELISA pico chemiluminescent substrate를 각 well 당 100㎕씩 주입하여 10분 동안 반응시킨 후, ELISA plate reader를 이용하여 luminescence 정도를 측정하였고, 산국 에센셜 오일의 표피 각질형성세포의 type I 또는 IV 콜라젠 합성과 분비에 대한 결과를 확보하였다.

그 결과, 도 8에 나타난 바와 같이, 산국 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 type IV 콜라젠 합성과 분비를 유의하게 촉진시켰다. 특히, 표피 각질형성세포의 배양액(CM)에서 산국 에센셜 오일에 의한 각질형성세포의 type IV 콜라젠 합성과 분비가 135.18±0.78% 유도되었으며, 이는 산국 에센셜 오일이 표피 각질형성세포의 type IV 콜라젠 합성과 분비를 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.

그러나, 결과 도 9에 나타난 바와 같이, 산국 에센셜 오일은 표피 각질형성세포의 type I 콜라젠 합성과 분비에는 영향을 미치지 않은 것으로 나타났다.

한편, 상기에서는 본 발명을 특정의 바람직한 실시예에 관련하여 도시하고 설명하였지만, 이하의 특허청구범위에 의해 마련되는 본 발명의 기술적 특징이나 분야를 이탈하지 않는 한도 내에서 본 발명이 다양하게 개조 및 변화될 수 있다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명백한 것이다.

Claims (14)

1. 산국(Chrysanthemum boreale)의 에센셜 오일(essential oil) 성분을 포함하는 피부 재생용 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 에센셜 오일 성분은 산국 추출물의 지용성 성분인 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
3. 제2항에 있어서,
   상기 산국 추출물은 산국 증류액인 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
4. 제3항에 있어서,
   상기 지용성 성분은 상기 증류액으로부터 수용액 성분이 제거된 것임을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 더 포함하고,
   상기 에센셜 오일 성분은 0.0001~1.0 ㎍/ml 범위 내로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
6. 제5항에 있어서,
   상기 에센셜 오일 성분은 0.1~1.0 ㎍/ml 범위 내로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
   상기 에센셜 오일 성분은 표피 각질세포의 증식이나 또는 이동을 촉진시키는 것을 특징으로 하는 피부 재생용 조성물.
   
8. 산국(Chrysanthemum boreale)의 에센셜 오일(essential oil) 성분을 포함하고,
   진피 섬유아세포의 증식을 억제시키는 상처 치유용 피부 외용제 조성물.
   
9. 제8항에 있어서,
   표피 각질형성세포내 세린-트레오닌 키나제(Akt) 및 세포외 신호조절 키나제(Erk 1/2)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 키나제의 인산화 과정 또는 신호전달 과정을 유도하는 것을 특징으로 하는 상처 치유용 피부 외용제 조성물.
   
10. 제8항에 있어서,
    표피 각질형성세포의 type IV 콜라젠 합성과 분비를 촉진시키는 것을 특징으로 하는 상처 치유용 피부 외용제 조성물.
    
11. 제8항에 있어서,
    표피 각질형성세포의 type I 콜라젠 합성과 분비에 영향을 미치는 않는 것을 특징으로 하는 상처 치유용 피부 외용제 조성물.
    
12. 산국(Chrysanthemum boreale)을 수증기 증류법(steam distillation)으로 증류하여 증류액을 얻고,
    상기 얻은 증류액으로부터 에센셜 오일 성분을 분리하는 산국 증류액의 추출방법.
    
13. 제12항에 따른 추출방법으로 얻은 에센셜 오일 성분을 포함하는 피부 재생용 조성물.
    
14. 제12항에 따른 추출방법으로 얻은 에센셜 오일 성분을 포함하는 화장료 조성물.
    

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