KR20140063596A - 보존안정성이 우수한 s-아데노실-l-메티오닌 함유 조성물 - Google Patents

보존안정성이 우수한 s-아데노실-l-메티오닌 함유 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은, S-아데노실-L-메티오닌과, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 대두다당류, 카세인 나트륨 및 제인으로부터 선택되는 적어도 1종의 첨가물을 함유하는 조성물이며, S-아데노실-L-메티오닌이, S-아데노실-L-메티오닌 생산능을 가지는 미생물을 배양하여 얻어진 S-아데노실-L-메티오닌 함유 균체로부터 추출된 것이며, 상기 조성물 중의 상기 첨가물의 함유량이, 상기 조성물 중의 S-아데노실-L-메티오닌에 대한 질량비로서 0.05~15배량의 범위인 조성물, 상기 조성물을 이용한 성형체 및 상기 조성물의 제조방법이다. 본 발명은, 수용성의 생리활성 물질로서 유용한 S-아데노실-L-메티오닌을 고농도로 포함한 보존안정성이 우수하고, 나아가서는 생체흡수성이 우수한 조성물, 상기 조성물을 이용한 성형체 및 상기 조성물의 제조방법을 제공한다.

Description

보존안정성이 우수한 S-아데노실-L-메티오닌 함유 조성물{COMPOSITION CONTAINING S-ADENOSYL-L-METHIONINE WITH EXCELLENT STORAGE STABILITY}
본 발명은, 수용성의 생리활성 물질로서 유용한 S-아데노실-L-메티오닌을 고농도로 포함한 보존안정성이 우수한 조성물, 이 조성물을 이용한 성형체 및 이 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
S-아데노실-L-메티오닌(이하, SAMe라고 기재함)은 생체내에 널리 존재한다. SAMe는, 핵산, 신경전달물질, 인지질, 호르몬, 단백질 등의 합성·대사에서 여러 가지 트랜스메틸라제에 의한 메틸화 반응의 메틸기 공여체로서 중요한 역할을 하고 있는 수용성의 생리활성 물질이다. SAMe는, 인체의 거의 모든 세포에서 관찰되는데, 여러 가지 생화학 반응에서의 공동 인자로서 작용하며, 메틸기 전이, 유황기 전이, 및 아미노프로필기 전이의 3가지 대사 경로에 의해 대사된다. 예를 들면, 연골의 유지나 뇌내 물질의 생합성에 반드시 필요한 물질이다. 최근 SAMe의 기능 연구를 통해 지방간, 고지혈증, 동맥경화증, 불면증, 알코올성 간염, 노인성 치매증 등에 대한 치료 효과에 대해서도 보고되고 있다. 이와 같이 SAMe는, 중요한 생리활성 물질로서, 구미 제국에서 울병, 간장질환 및 관절염 등의 치료약, 혹은 건강식품으로서 널리 이용되고 있다.
이에 따라, SAMe를 저비용으로, 간편하게 제조 공급하는 것이 크게 요구되고 있다. 종래, SAMe의 제조방법으로서는, 전구 물질인 L-메티오닌을 함유시킨 배지를 이용하여 발효 생산하는 방법, 미생물로부터 단리 정제된 SAMe 합성효소(메티오닌 아데노실 트란스퍼라제)를 이용하여, 아데노신 5'-삼인산(ATP)과 L-메티오닌을 기질로 하여 SAMe를 효소적으로 합성하는 방법 및 합성법에 의한 방법 등이 알려져 있다.
효소적 합성법에 대해서는, 미생물로부터 단리 정제한 SAMe 합성효소(메티오닌 아데노실 트란스퍼라제)를 이용하여, 아데노신 5'-삼인산(adenosine-5'-triphosphate)(ATP)과 L-메티오닌을 기질로 하여 SAMe를 효소적으로 합성하는 방법이다. 이 방법은, 발효법과 비교할 때, SAMe의 생산량이 많아, 균체로부터의 SAMe 추출 조작이 필요 없는 등의 이점이 있다. 그러나, 효소의 조제가 번잡하다는 점, 얻어지는 효소의 활성이 미약하다는 점, ATP 분해효소 등의 방해 물질을 제거할 필요가 있다는 점, 나아가, 기질인 ATP가 매우 고가라는 점 등의 여러 가지 문제를 가지므로, 반드시 실용적인 방법이라고는 할 수 없었다.
또한, 최근 유전자 공학의 발전에 따라, 클론화된 SAMe 합성효소 유전자를 이용함으로써 이 효소의 조제가 보다 간편해져, 효소 조제의 문제는 해결되고 있다. 그러나, 여전히 고가의 ATP를 기질로 사용할 필요가 있는 등, 다른 실용상의 문제는 해결되지 않았다.
또한, SAMe는 열적으로 불안정하고 상온에서도 용이하게 분해되는 성질을 가진다는 점에서, 의약품, 건강식품으로서 사용하는데 있어서 커다란 장애가 되고 있다. 그 대책으로서, 보존안정성의 향상을 목적으로 한 많은 시도가 이루어져 왔다. 예를 들면, 상술한 제조 방법으로 얻어진 SAMe의 조성물을 크로마토그래피 등에 의해 정제한 후, 황산이나 p-톨루엔설폰산과의 염, 또는 부탄디설폰산과의 염 등으로 함으로써 SAMe의 안정화를 도모하는 방법, 또는, 정제된 SAMe에 첨가물 처리를 행하여, SAMe 조성물로서 안정화를 도모하는 방법이 일반적이다. 그러나, 많은 노력과 비용이 필요하기 때문에, 치료약이나 건강식품으로서 중요한 SAMe를 저비용으로 제조해서 제공하는 것은 매우 어려웠었다.
그리고, 최근 SAMe를 보다 저비용으로, 정제 공정이 적고, 간편하게 제조할 수 있는 SAMe 생산능을 가지면서 경구 섭취가 가능한 미생물을 이용한, SAMe 함유 미생물(예를 들면, 비특허문헌 1 참조), SAMe 함유 미생물 엑기스에 대하여 연구가 행해지고 있다(예를 들면, 특허문헌 1~4, 비특허문헌 2 참조). 그러나, 현 상황에서 SAMe 함유 미생물 엑기스는, 정제된 SAMe, SAMe 조성물에 비해 보존안정성이 낮다는 문제가 있다.
일본특허공개 2005-229812호 공보 일본특허공개 2008-012464호 공보 국제공개 제2009/081833호 특허 제4479932호 공보 국제공개 제2011/1260303호
비특허문헌 1: Schlenk F., DePalma R.E., J.Biol.Chem. 1037-1050(1957) 비특허문헌 2: Biochemica et Biophysica Acta, 1573, 105-108(2002)
본 발명의 목적은, SAMe를 고농도로 포함하는 보존안정성이 우수한 조성물 및 이 조성물을 저비용으로 간편하게 제조할 수 있는 프로세스, 이 조성물을 이용한 성형체를 제공하는 것에 있다.
본 발명의 발명자 등은, 상기 과제를 해결하기 위하여, SAMe를 고농도로 함유하면서, 안정된 상태로 장기간 보존할 수 있는 조성물에 대하여 예의 검토한 결과, SAMe 함유 효모 균체와, 특정의 증점제를 함유하는 SAMe 함유 건조 효모 조성물이 보존안정성이 우수한 것을 발견하여 특허 출원하고 있다(특허문헌 5 참조). 그러나, SAMe 함유 효모 균체로부터 추출된 SAMe 함유 추출물을 함유하는 조성물에 대해서는 검토되지 않았다.
따라서, 본 발명자 등은, SAMe 함유 추출물을 이용하여, SAMe를 고농도로 함유하면서, 안정된 상태로 장기간 보존할 수 있는 성능적으로 우수한 조성물, 및 이 조성물을 경제적으로 생산할 수 있는 방법에 대하여 예의 검토한 결과, 이하에 나타낸 항목에 의해 해결할 수 있는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
〔1〕 S-아데노실-L-메티오닌과, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 대두다당류, 카세인 나트륨 및 제인으로부터 선택되는 적어도 1종의 첨가물을 함유하는 조성물이며, S-아데노실-L-메티오닌이, S-아데노실-L-메티오닌 생산능을 가지는 미생물을 배양하여 얻어진 S-아데노실-L-메티오닌 함유 균체로부터 추출된 것이며, 이 조성물 중의 이 첨가물의 함유량이, 이 조성물 중의 S-아데노실-L-메티오닌에 대한 질량비로서 0.05~15배량의 범위인 조성물.
〔2〕 상기 미생물이 사카로미세스속에 속하는 미생물인 상기 〔1〕에 기재된 조성물.
〔3〕 상기 사카로미세스속에 속하는 미생물이 사카로미세스·세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)인 상기 〔2〕에 기재된 조성물.
〔4〕 상기 조성물이 고체인 상기 〔1〕~〔3〕 중 어느 하나에 기재된 조성물.
〔5〕 상기 〔4〕에 기재된 조성물을 이용하여 성형된 성형체.
〔6〕 S-아데노실-L-메티오닌과, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 대두다당류, 카세인 나트륨 및 제인으로부터 선택되는 적어도 1종의 첨가물을 함유하는 조성물의 제조방법으로서, S-아데노실-L-메티오닌 생산능을 가지는 미생물을 배양하여 얻어진 S-아데노실-L-메티오닌 함유 균체로부터 추출된 S-아데노실-L-메티오닌 함유 추출액에, 이 첨가물을, 이 S-아데노실-L-메티오닌 함유 추출액 중의 S-아데노실-L-메티오닌에 대한 질량비로서 0.05~15배량의 범위에서 혼합하고, 얻어진 혼합물을 건조시키는 조성물의 제조방법.
본 발명에 의해, 고농도로 SAMe를 포함하고 보존안정성이 우수한 조성물, 이 조성물을 경제적으로 생산할 수 있는 방법, 및 이 SAMe 함유 조성물을 이용한 성형체를 제공하는 것이 가능해진다.
또한, 본 발명에 의해 얻어지는 이 SAMe 함유 조성물은 생체 흡수성도 우수하다.
본 발명의 조성물은, SAMe와, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 대두다당류, 카세인 나트륨(casein sodium) 및 제인으로부터 선택되는 적어도 1종의 첨가물을 함유하는 조성물이며, SAMe가, SAMe 생산능을 가지는 미생물을 배양하여 얻어진 SAMe 함유 균체로부터 추출된 것이며, 이 조성물 중의 이 첨가물의 함유량이, 이 조성물 중의 SAMe에 대한 질량비로서 0.05~15배량의 범위인 것을 특징으로 한다.
이하, 본 발명에 대하여 상세하게 설명한다.
본 발명의 보존안정성이 우수하고 고농도로 SAMe를 포함한 조성물은, 미생물을 배양하여 얻어진 SAMe 함유 미생물 균체로부터 추출하여 얻어진 SAMe와 특정의 첨가물을 함유한다.
또한, SAMe를 포함한 조성물에는, 5'-뉴클레오티드, 유리 아미노산, 항산화 작용을 가지고 간기능 개선에 도움이 되는 글루타티온, 면역력의 증진 작용이나 정장 작용을 가지는 β-글루칸이나 식물섬유 등의 유용성분이 많이 포함되어 있어, 건강식품 등으로서 널리 이용되고 있다.
본 발명에 사용되는 미생물의 종류는, SAMe 생산능을 가지면서 경구 섭취 가능한 것이면 되는데, 예를 들면 사카로미세스(Saccharomyces)속, 칸디다(Candida)속, 피치아(Pichia)속, 뮤코(Mucor)속, 리조푸스(Rhizopus)속, 브레비박테리움(Brevibacterium)속, 코리네박테리움(Corynebacterium)속, 에셔리키아(Esherichia)속, 스트렙토미세스(Streptomyces)속 등에 속하는 미생물을 들 수 있다. 이 중, 사카로미세스속에 속하는 미생물이 바람직하고, 특히, 사카로미세스·세레비시아가 보다 호적하다.
미생물을 배양할 때에 사용하는 탄소원은, 미생물이 자화(資化: assimilated)될 수 있는 것이면 특별한 제한 없이, 예를 들면, 글루코오스, 자당, 전분, 폐당밀 등의 탄수화물, 에탄올 등의 알코올, 또는 아세트산 등의 유기산을 들 수 있다. 질소원 역시, 사용하는 미생물이 자화될 수 있는 것이면 특별한 제한 없이, 예를 들면, 암모니아, 질산, 요소 등의 무기체 질소 화합물, 또는 미생물 엑기스, 맥아 엑기스 등의 유기체 질소 화합물을 포함하는 것을 들 수 있다. 또한, 무기염류로서는, 인산, 칼륨, 나트륨, 마그네슘, 칼슘, 철, 아연, 망간, 코발트, 구리, 몰리브덴 등의 염이 이용된다. 나아가, SAMe의 골격 구성에 관여하는 메티오닌, 아데닌, 아데노실 리보뉴클레오시드를 첨가하여 배양할 수도 있다.
배양 온도 및 배양액의 pH는 사용하는 미생물의 종류에 따라 다르지만, 배양 온도로서는 20~35℃의 범위를, 배양액의 pH로서는 pH4~7의 범위를 들 수 있다.
또한, 균체 내의 SAMe 함량을 높이려면, 호기적으로 배양하는 것이 바람직하다. 배양조는, 통기 가능하며 필요에 따라 교반할 수 있는 것이면 되는데, 예를 들면, 기계적 교반 배양조, 에어리프트식(air-lift) 배양조 및 기포탑형 배양조 등을 이용할 수 있다.
배지의 공급 방법은, 탄소원, 질소원, 각종 무기염류, 각종 첨가제 등을, 일괄 혹은 개별적으로 연속적 또는 간헐적으로 공급한다. 예를 들면, 자당, 에탄올 등의 기질은 다른 배지 성분과의 혼합물로서 배양조에 공급할 수도 있고, 또한 다른 배지 성분과는 별도로 독립적으로 배양조에 공급할 수도 있다.
배양액의 pH 제어는, 산, 알칼리 용액에 의해 이루어진다. 알칼리로서는 질소원으로 사용되는 암모니아, 요소, 또는 비질소계 염기, 예를 들면, 가성소다(sodium hydroxide), 가성가리(potassium hydroxide) 등을 이용하여 pH를 제어하는 것이 바람직하다. 산으로서는 무기산, 예를 들면, 인산, 황산, 질산, 또는 유기산이 이용된다. 또한, 무기염류인 인산염, 칼륨염, 나트륨염, 질산염 등을 이용하여 pH를 제어할 수도 있다.
이러한 조건으로 배양하여, 목표량의 SAMe가 미생물 균체 중에 축적된 단계에서 배양액을 배출하여 미생물 균체를 분리한다. 분리 방법으로서는, 균체의 분리와 세정을 효율적으로 행할 수 있는 방법이면 특별한 제한은 없지만, 향류형 이스트 세퍼레이터(counterflow yeast separator)나 분리막을 이용한 한외 여과 장치(限外濾過裝置; ultrafiltration system)를 호적한 예로 들 수 있다.
이어서, 분리한 미생물 균체로부터 SAMe를 추출하고, SAMe를 함유하는 추출액을 얻은 후, 당해 추출액에 첨가물을 첨가 혼합 처리하여 액상의 조성물로 한다.
SAMe를 함유하는 추출액을 얻는 방법으로서는, 분리한 미생물 균체의 분리농축물에 대하여, 단백질 분해효소, 세포벽 용해효소 등을 첨가하여 추출하는 방법, 미생물 중의 효소를 이용하여 자기소화에 의해 추출하는 방법, 고압분산처리 등의 고압분쇄에 의해 추출하는 방법, 무기산(광산, mineral acid), 유기산을 첨가하고 혼합하는 방법, 가열 처리하는 방법 등을 들 수 있다.
SAMe를 함유하는 추출액은, SAMe를 함유하는 미생물 균체에 비해, 고형분이 적어, 물에 분산, 용해시키기 쉬우므로, 식품, 조미료 등에 용이하게 첨가할 수 있다. 또한, SAMe 성분의 농축이 가능하다.
본 발명에서 사용하는 첨가물로서는, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 대두다당류, 카세인 나트륨 및 제인으로부터 선택되는 적어도 1종이다. 이들의 첨가물은 단독으로 또는 2종 이상을 조합하여 이용할 수 있다. 이 중 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 대두다당류가 보다 바람직하다.
대두다당류는, 헤미셀룰로오스를 주성분으로 하는 수용성 다당류이며, 갈락토스, 아라비노스, 갈락투론산, 자일로스, 푸코스, 람노스 등의 당으로 구성된 다당류이며, 구체적으로는 Freund Corporation제의 시판품(상품명 「헤미로스(へミロㅡス」)을 호적하게 이용할 수 있다. 제인이란, 옥수수 유래의 단백질이며, 이 단백질 가수분해물 또는 나트륨염이나 칼륨염 등의 염을 사용할 수도 있다. 본 발명에서, 특정의 첨가물을 이용함으로써, 조성물 중의 SAMe의 보존안정성이 향상되고, 나아가서는 SAMe의 생체 흡수성이 향상된다. 본 발명에서 사용하는 첨가물은, 식품, 화장품, 의약품 용도로 범용되고 있으며, 안전하게 사용할 수 있다. 이들의 첨가물은, 적절히 합성한 것을 사용할 수도 있고, 시판품을 사용할 수도 있다.
첨가물의 첨가량으로서는, 건조전 SAMe 함유 추출액 중 SAMe에 대한 질량비로서 0.05~15배량의 범위가 되도록 하는 것이 필요하며, 0.1~13.5배량의 범위가 되도록 하는 것이 바람직하고, 0.15~13.5배량의 범위가 되도록 하는 것이 보다 바람직하다. 첨가물의 상기 첨가량이 0.05배량을 밑돌면 조성물 중의 SAMe의 보존안정성이 불충분해지며, 15배량을 넘으면 불필요할 뿐만 아니라 이 조성물 중의 SAMe의 보존안정성이 용량 의존적으로 저하되는 경향을 나타낸다.
SAMe 함유 추출액과 첨가물의 혼합시간은, 1분~24시간의 범위인 것이 바람직하다. 1분을 밑돌면 조성물 중의 SAMe의 보존안정성이 불충분해지며, 24시간을 넘으면 불필요해질 뿐만 아니라, 이 조성물 중의 SAMe 성분의 감소가 일어날 가능성이 있다. 혼합 중에 이 조성물 중의 SAMe의 보존안정성, 나아가서는 생체흡수성이 증가하고, 또한 후술하는 이 조성물의 건조공정에서의 수율도 향상되며, 또한 SAMe를 함유하는 조성물 특유의 악취(臭氣; odor)도 마스킹된다.
첨가물의 첨가혼합 처리를 행한 후에, 액상의 조성물을 건조시킴으로써 수분을 증발시켜 고체의 건조 조성물이 된다. 건조방법으로서는, 스프레이 드라이어에 의한 분무건조법, 동결건조법 등의 방법을 들 수 있다.
건조 조건으로서는, 분무건조법에서는, 입구온도 210℃ 이하, 출구온도 110℃ 이하에서 건조시키는 것이 바람직하다. 동결건조법에서는, 최종 선반 온도(final shelf temperature) 30℃ 이하에서 건조시키는 것이 바람직하다. 본 발명의 건조조성물은, 보존안정성의 관점에서, 그 수분 함량이 5.0질량% 이하, 바람직하게는 3.0질량% 이하, 보다 바람직하게는 1.0질량% 이하가 되도록 하는 것이 바람직하다.
조성물 중의 첨가물의 함유량으로서는, 조성물 중의 SAMe에 대한 질량비로서 0.05~15배량의 범위이며, 0.1~13.5배량의 범위인 것이 바람직하고, 0.15~13.5배량의 범위인 것이 보다 바람직하다. 첨가물의 상기 함유량이 0.05배량을 밑돌면 조성물 중의 SAMe의 보존안정성이 불충분해지며, 15배량을 넘으면 이 조성물 중의 SAMe의 보존안정성이 용량 의존적으로 저하되는 경향을 나타낸다.
조성물 중의 SAMe의 함유량으로서는, 조성물의 건조질량에 대하여 1질량% 이상인 것이 바람직하고, 3질량% 이상인 것이 보다 바람직하고, 8질량% 이상인 것이 더욱 바람직하다.
얻어진 건조조성물은 고체이며, 용이하게 성형 가공할 수 있다. 이 건조 SAMe 함유 조성물을 이용하여 성형된 성형체는 여러 가지 용도로 사용된다. 예를 들면, 건조 SAMe 함유 조성물을 파쇄하여 분말상으로 하거나, 분말상의 SAMe 함유 조성물에 필요에 따라 다른 생리활성 성분이나 부형제 등의 첨가제를 첨가한 후에 압축 타정하여 정제상의 조성물이 되고, 다시, 그 표면을 피복하거나 할 수도 있다. 또한, 분체를 과립상으로 조립하거나, 분체나 조립한 과립을 채워 캡슐화할 수도 있다.
실시예
이하, 본 발명을 실시예 및 비교예를 들어 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이들의 예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1-1~1-3
(a) 미생물 균체의 배양
전술한 공지의 배양법에 따라, L-메티오닌 함유 배지(Shiozaki S., et all, J. Biotechnology, 4, 345-354(1986))에 사카로미세스속에 속하는 미생물 사카로미세스·세레비시아 IFO 2346을 접종하여, 배양 온도 27~29℃에서 호기적으로 통기 교반하면서 6일간 배양했다. 그 결과, 균체 농도 3.5질량%, SAMe 함량 205mg/g의 미생물 균체 배양액 18L를 얻었다.
(b) 미생물 균체의 집균
상기의 미생물 균체 배양액 18L를 연속 로터리형 원심분리기(Hitachi, Ltd. HIMAC CENTRIFUGE CR10B2)로 처리하여, 균체 농도가 건조물 환산으로 18질량%에 상당하는 액상의 미생물 균체 농축물 3.4kg을 얻었다.
(c) 미생물 균체 농축물로부터 SAMe를 함유하는 추출액의 추출
상기의 미생물 균체 농축물 3.4kg에 50질량% 황산을 첨가하여 pH를 3.5로 조정했다. 이 미생물 균체 농축물을 50℃에서 30분간 가열 교반 후, 즉시 원심관으로 옮겨, 원심분리기(Hitachi, Ltd. HIMAC CENTRIFUGE CR10B2)로 냉각 원심분리 처리 후, 상청액을 SAMe 함유 추출액으로서 회수했다.
(d) SAMe 함유 추출액에 첨가물의 첨가
상기의 SAMe 함유 추출액에 하이드록시프로필셀룰로오스(Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)(이하, HPC라고 약칭함)를, 표 1에 나타낸 바와 같이 건조전 SAMe 함유 추출액 중 SAMe에 대한 질량비로서 0.19, 1.92, 13.46배량 첨가하여 실온에서 30분간 교반 혼합하고, HPC를 첨가한 액상의 SAMe 함유 조성물을 얻었다.
(e) SAMe 및 첨가물을 함유하는 건조조성물의 제조
상기의 HPC를 첨가한 액상의 SAMe 함유 조성물을 동결건조기(ULVAC, Inc.제)의 동결건조용 스테인레스 트레이에 부어 넣고 -50℃에서 동결한 후, 최종 선반 (棚段; shelf) 온도 25℃의 조건으로 36시간 동결건조했다. 얻어진 건조조성물(고체)을 추가로 분쇄함으로써, SAMe 및 HPC를 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다.
얻어진 건조조성물을 밀폐 유리 용기 안에 채워, 40℃, RH 75%의 가속시험 조건 하에서 보존안정성 시험을 행했다. 표 1에 40℃, RH 75%의 가속 보존안정성 시험 결과를 나타냈다. 또한, SAMe 잔존율은, 건조조성물로부터 과염소산을 이용한 공지의 방법으로 SAMe를 추출하고, 액체 크로마토그래피를 이용한 비교 정량법으로 실시했다. 보존 후의 악취의 유무에 대해서는 5명의 패널리스트에 의한 관능 검사로 구했다.
본 발명의 SAMe 측정에서는, 이하의 조건의 액체 크로마토그래피를 사용했다.
이용된 분석 조건:
칼럼: 나칼라이 테스크(Nacalai Tesque) 주식회사제, 상품명 COSMOSIL, 4.6φ×100mm
용리액: 0.2M KH2PO4 수용액/메탄올=95/5(질량비)
유속: 0.7mL/분, 검출기: UV(260nm), SAMe 유지시간: 약 150초
비교예 1
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 HPC를, 건조전 SAMe 함유 추출액 중 SAMe에 대한 질량비로서 0.02배량 첨가한 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐, SAMe 및 HPC를 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 1에 나타낸다.
실시예 1-4
실시예 1-1~1-3의 (a) 내지 (c)와 동일한 방법으로 하여 얻어진 SAMe 함유 추출액에 대하여, (d)의 조작으로 HPC를 이 추출액 중 SAMe에 대한 질량비로서 0.19배량 첨가하는 조작을 행하고, 실온에서 30분간 교반 혼합하고, HPC를 첨가한 액상의 SAMe 함유 조성물을 얻었다.
얻어진 HPC를 첨가한 액상의 SAMe 함유 조성물을 미립자화 장치로서 2유체 노즐을 가지는 미니스프레이 드라이어 B-290(Metrohm사제)을 이용하여, 건조실의 입구온도 135℃, 출구온도 80℃, 통액속도 1.2g/분의 조건으로 분무건조하고, SAMe 및 HPC를 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 2에 나타낸다.
실시예 2
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 첨가물로서 카르복시메틸셀룰로오스를 건조전 SAMe 함유 추출액 중 SAMe에 대한 첨가물의 질량비로서 0.19배량 첨가한 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐, SAMe 및 카르복시메틸셀룰로오스를 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 1에 나타낸다.
실시예 3-1~3-3
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 첨가물을 대두다당류(Freund Corporation제, 제품명 「헤미로스」로 변경한 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐, SAMe 및 대두다당류를 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 1, 및 표 2에 나타낸다.
비교예 2
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 대두다당류(Freund Corporation제, 제품명 「헤미로스」를 건조전 SAMe 함유 추출액 중 SAMe에 대한 첨가물의 질량비로서 0.02배량 첨가한 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐, SAMe 및 대두다당류를 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 1에 나타낸다.
실시예 3-4
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 첨가물을 대두다당류(Freund Corporation제, 제품명 「헤미로스」로 변경한 것 이외는, 실시예 1-4와 마찬가지로 처리하여, 분무건조를 거쳐, SAMe 및 대두다당류를 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 2에 나타낸다.
비교예 3-1
SAMe 함유 추출액에 첨가물을 첨가하지 않은 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐 SAMe를 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 얻어진 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 1에 나타낸다.
비교예 3-2
SAMe 함유 추출액에 첨가물을 첨가하지 않은 것 이외는, 실시예 1-4와 마찬가지로 처리하여, 분무건조를 거쳐, SAMe를 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 2에 나타낸다.
비교예 4~9
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 첨가물을, 각각 표 1에 나타낸 트레할로스, 구연산, EDTA, DL-사과산, 갈락토스 또는 γ-사이클로덱스트린으로 변경하고, 이 첨가물을 건조전 SAMe 함유 추출액 중 SAMe에 대한 첨가물의 질량비로서 2.31배량 첨가한 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐, SAMe 및 첨가물을 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 1에 나타낸다.
비교예 10~13
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 첨가물을 각각 표 1에 나타내는 셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 타마린드검, 또는 쉘락으로 변경하고, 이 첨가물을 건조전 SAMe 함유 추출액 중 SAMe에 대한 첨가물의 질량비로서 0.19배량 첨가한 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐, SAMe 및 첨가물을 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 이 조성물의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 1에 나타낸다.
[표 1]
Figure pct00001

[표 2]
Figure pct00002

실시예 4-1~4-3
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 첨가물을 카세인 나트륨으로 변경한 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐, SAMe 및 카세인 나트륨을 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 얻어진 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 3, 4에 나타낸다.
비교예 14
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 카세인 나트륨을 건조전 SAMe 함유 추출액 중 SAMe에 대한 첨가물의 질량비로서 0.02배량 첨가한 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐, SAMe 및 카세인 나트륨을 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 3에 나타낸다.
실시예 4-4
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 첨가물을 카세인 나트륨으로 변경한 것 이외는, 실시예 1-4와 마찬가지로 처리하여, 분무건조를 거쳐, SAMe 및 카세인 나트륨을 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 4에 나타낸다.
실시예 5-1~5-3
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 첨가물을 미결정성 제인(KOBAYASHI PERFUMERY CO., LTD.제, 상품명: Kobayashi zein DP)으로 변경한 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐, SAMe 및 제인을 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 얻어진 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 3, 4에 나타낸다.
비교예 15
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 미결정성 제인(KOBAYASHI PERFUMERY CO., LTD.제, 상품명: Kobayashi zein DP)을 건조전 SAMe 함유 추출액 중 SAMe에 대한 첨가물의 질량비로서 0.02배량 첨가한 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐, SAMe 및 제인을 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 3에 나타낸다.
실시예 5-4
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 첨가물을 미결정성 제인(KOBAYASHI PERFUMERY CO., LTD.제, 상품명: Kobayashi zein DP)으로 변경한 것 이외는, 실시예 1-4와 마찬가지로 처리하여, 분무건조를 거쳐, SAMe 및 제인을 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 4에 나타낸다.
비교예 16~19
SAMe 함유 추출액에 첨가하는 첨가물을, 각각 표 3에 나타낸, 카세인, 젤라틴, 대두단백 또는 완두단백으로 변경하고, 이 첨가물을 이 추출액 중 SAMe에 대한 질량비로서 2.31배량 첨가한 것 이외는, 실시예 1-1~1-3과 마찬가지로 처리하여, 동결건조를 거쳐, SAMe 및 첨가물을 함유하는 분말상의 건조조성물을 얻었다. 이 조성물 중의 SAMe 함량, 및 이 조성물의 밀폐유리용기 중, 40℃, RH 75%의 가속조건 하의 보존안정성 시험의 결과, 관능검사의 결과를 표 3에 나타낸다.
[표 3]
Figure pct00003

[표 4]
Figure pct00004

<생체흡수성 시험>
실시예 1-1, 실시예 2, 실시예 3-1, 실시예 4-1, 실시예 5-1, 및 비교예 13에서 얻어진, SAMe 및 첨가물을 함유하는 분말상의 건조조성물, 그리고 비교예 3-1에서 얻어진, SAMe를 함유하는 분말상의 건조조성물에 대하여, 문헌(J of Chromatography B, 863, 94-100(2008))에 기재된 방법과 마찬가지로 SD계 랫트(수컷, 8주령, 동물수: 각 군 n=3)를 이용하여 생체흡수성 시험을 실시했다.
랫트에 대한 분말상의 건조조성물의 투여량은, SAMe로서 300mg/kg-랫트의 투여량이 되도록 분말상의 건조조성물을 증류수에 분산한 상태로 랫트에 경구투여하고, 경구투여 후 0.5, 1, 2, 3 및 5시간 후의 랫트의 혈액을 채취했다. 채취한 혈액은 신속하게 원심분리하고, 혈장성분의 분리, 과염소산을 이용한 SAMe 성분의 추출, LC-MS-MS법(Liquid chromatography coupled with mass spectrometry)으로 분석했다.
생체흡수성 시험의 결과, 경구투여 2시간 후의 혈장 중 SAMe 농도가 가장 높았다. 각 분말상의 건조조성물의 경구투여 1시간 후 및 2시간 후의 생체흡수성 시험의 결과를 표 5에 나타낸다.
[표 5]
Figure pct00005

표 5로부터, 본 발명에 속하는 첨가물을 첨가한 SAMe 함유 조성물은, 첨가처리를 행하지 않은 SAMe 함유 조성물보다 생체흡수성이 향상되고, 또한 쉘락을 첨가한 SAMe 함유 조성물은, 첨가처리를 행하지 않은 SAMe 함유 조성물보다 생체흡수성이 낮은 것이 확인되었다.
또한, 생체흡수성 시험에 이용된 분석기기, 조건은 이하와 같다.
(LC-MS-MS법)
LC-MS-MS장치: Thermo사제 Accela, LTQ orbitrap Discovery
(HPLC조건)
칼럼: GL Sciences Inc.제 Intersil ODS-3(4.6mm×150mm)
유속: 0.5mL/min, 칼럼오븐: 40℃, 검출기: UV(260nm), SAMe 유지시간: 약 145초, 주입량: 10μL
용리액: 2mmol/L 헵타플루오로 부티르산 수용액: 아세토니트릴=30:70
(MS조건)
Ion Source: ESI
Ion Polarity Mode: Positive
Scan Mode Type: FT Full mass
Resolution: 30000
Mass Range: m/z 360-410
[산업상의 이용가능성]
본 발명의 조성물을 이용함으로써, 의약·농약이나 건강식품용의 생리활성 물질로서 유용한 SAMe를 보존안정성이 우수하고, 나아가서는 생체흡수성도 우수한 조성물로서 시장에 공급하는 것이 가능하다. 본 발명의 제조방법은, S-아데노실-L-메티오닌을 고농도로 포함하고, 보존안정성이 우수하며, 나아가서는 생체흡수성도 우수한 조성물을, 저비용으로 간편하게 제조하는 방법으로서 이용할 수 있다.

Claims (6)

  1. S-아데노실-L-메티오닌과, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 대두다당류, 카세인 나트륨 및 제인으로부터 선택되는 적어도 1종의 첨가물을 함유하는 조성물이며, S-아데노실-L-메티오닌이, S-아데노실-L-메티오닌 생산능을 가지는 미생물을 배양하여 얻어진 S-아데노실-L-메티오닌 함유 균체로부터 추출된 것이며, 상기 조성물 중의 상기 첨가물의 함유량이, 상기 조성물 중의 S-아데노실-L-메티오닌에 대한 질량비로서 0.05~15배량의 범위인 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 미생물이, 사카로미세스속에 속하는 미생물인 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 사카로미세스속에 속하는 미생물이 사카로미세스·세레비시아인 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물이 고체인 조성물.
  5. 제4항에 기재된 조성물을 이용하여 성형된 성형체.
  6. S-아데노실-L-메티오닌과, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 대두다당류, 카세인 나트륨 및 제인으로부터 선택되는 적어도 1종의 첨가물을 함유하는 조성물의 제조방법으로서, S-아데노실-L-메티오닌 생산능을 가지는 미생물을 배양하여 얻어진 S-아데노실-L-메티오닌 함유 균체로부터 추출된 S-아데노실-L-메티오닌 함유 추출액에, 상기 첨가물을, 상기 S-아데노실-L-메티오닌 함유 추출액 중의 S-아데노실-L-메티오닌에 대한 질량비로서 0.05~15배량의 범위에서 혼합하고, 얻어진 혼합물을 건조시키는 조성물의 제조방법.
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