KR20140047576A - 항 바이러스제 - Google Patents

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KR20140047576A
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KR1020137021117A
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마크 보리소비치 발라조브스키
빅토르 게오르기예비치 안토노브
알레산드르 니콜라예비치 벨리야에브
알렉세이 블라디미로비치 에레민.
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아이비 팜 리미티드 라이어빌리티 컴퍼니
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Abstract

본 발명은 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신(bis-(γ-L-glutamyl)- L-cysteinyl-glycine) 또는 그의 염, 이노신(inosine) 및, 팔라듐(palladium), 코퍼와 (γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신에 의하여 형성된 배위화합물(coordination compound)의 조합; 상기 조합을 기본으로 한 약제학적 조성물 및 항-바이러스성 제제, 및 바이러스성 질환의 치료 방법을 제공한다.

Description

항 바이러스제{ANTIVIRAL AGENT}
본 발명은 생물 무기(bioinorganic) 화학 및 의학, 특히 항 바이러스 의약 제제의 제조에 관한 것으로, 바이러스성 질병의 치료를 위한 의학 및 수의학에 이용될 수 있다.
인터페론, 인터루킨 및 뉴클레오사이드는 일반적으로 바이러스성 질환의 치료에 이용된다. 이러한 치료는 급성 단계의 질환에서는 효과적이지만, 만성화된 질환에서는 부적절하다.
인터페론 치료는 부작용을 동반한다. 가장 일반적으로 나타나는 부작용은 인플루엔자 유사 증후군, 위장관 및 심인성 이상 증후군, 골수 억제의 징후 및 갑상선 및 부갑상선 기능 장애이다. 이러한 인터페론의 많은 부작용 반응들은, 바이러스성 질환 치료에 널리 이용되고 있는 뉴클레오사이드(리바비린(ribavirin), 비다라빈(vidarabine), 리보미딜(ribomidil) 등)의 합성 변형 유사체들(analogs)에 의하여 강화된다.
치료로 인한 합병증은 만성 간염의 임상 사례들 중 10-42%에서 관찰되며, 따라서 전문가들은 이러한 치료를 합병증의 위험만큼 상당히 위험한 것으로 간주하고 있다. 또한, 현재, 특히 만성 바이러스성 간염에 있어서 저-독성의 효과적인 치료 수단들이 없으므로, 이러한 치료 수단의 개발은 현대 약학 및 의학에 있어 시급한 일 중 하나이다.
특허 RU2153350 및 RU2153351에서 이노신의 항 바이러스 활성을 강화시키는 약리 용액을 개시하고 있으며, 바람직하게는 시스플라틴과 산화형 글루타티온의 배위 화합물을 이용하는 것이다. 그러나 시스플라틴은 백금(Pt)의 착화합물로, 독성 및 변이원성(mutagenicity) 위험과 연관되어 있어, 이를 포함하는 약물의 사용이 제한적이다.
본 발명의 목적은 질환의 만성화 과정에 효과적이고 최소한의 부작용을 갖는 광범위한 항 바이러스제를 제작하는 데 있다.
상기 목적은 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신[bis-(γ-L-glutamyl)- L-cysteinyl-glycine] 또는 그의 염, 이노신(inosine), 및 팔라듐(palladium), 코퍼(copper)와 (γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신에 의하여 형성된 배위화합물(coordination compound)의 조합으로 달성된다. 상기 조합을 “본 발명에 따른 제제”로 언급한다.
본 조합의 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신은 바람직하게는 디소듐염(disodium salt)의 형태로 제공된다.
바람직하게는, 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신 디소듐염:이노신:팔라듐:코퍼의 몰비 범위는 100-10000:100-10000:1-10:1-10이며, 예컨대 1000:1000:1:1이다.
바람직하게는, 팔라듐의 소스는 시스-디아미노디클로로팔라듐(cis-diaminodichloropalladium)이고, 코퍼의 소스는 코퍼 디클로라이드(copper dichloride)이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 조합은 팔라듐 시스-디아미노디클로라이드, 코퍼 디클로라이드 및 (γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신을 기본으로 하는 촉매제를 포함하며, 상기 촉매제는 인 시투(in situ) 하게 제조될 수 있다.
다른 실시예에 따르면, 이러한 촉매제는 미리 사전에 제조될 수 있다.
제시된 조합은 항 바이러스 활성을 나타내어, 감염성 질환, 특히 바이러스성 질환의 치료에 이용할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 조합 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이다.
이러한 약제학적 조성물은 항 바이러스 활성을 나타내어, 감염성 질환, 특히 바이러스성 질환의 치료에 이용할 수 있다.
또한, 본 발명은 아세테이트 완충액(acetate buffer)에 상기 조합을 첨가한 용액을 포함하는 항 바이러스제이다.
바람직하게는, 상기 제제의 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신 디소듐염:이노신:팔라듐:코퍼의 몰비 범위는 100-10000:100-10000:1-10:1-10이며, 예컨대 1000:1000:1:1이다.
상기 제제는 인플루엔자 바이러스, C 형 간염 바이러스, B 형 간염 바이러스, 진드기 매개 뇌염 바이러스, 리프트 밸리 열 바이러스 및 베네수엘라 말 뇌염 바이러스로 구성된 군으로부터 선택되는 바이러스의 치료에 이용할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 조합, 조성물 또는 제제의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 바이러스성 질환의 치료 방법이다. 상기 바이러스성 질환은 인플루엔자 바이러스, C 형 간염 바이러스 B 형 간염 바이러스, 진드기 매개 뇌염 바이러스, 리프트 밸리 열 바이러스 및 베네수엘라 말 뇌염 바이러스로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 제제는 항-바이러스 효과 및 인터페로노겐 효과를 나타낸다.
이노신은 1,9-디하이드로-9-β-D-리보퓨라노실-6H-퓨린-6-온(1,9-dihydro-9-beta-D-ribofuranosyl-6H-purin-6-one), 즉 리보퓨라노실-히포크산틴 (ribofuranosyl-hypoxanthine)이다.
이노신은 신진 대사 과정 및 ATP 전구체의 자극제인 동화 작용제이며, 에너지 균형을 증가시키고, 심근 관상 동맥 혈액 순환과 신진 대사 과정을 향상시킨다. 이노신은 항-저산소 효과를 나타내며, IHD (심근 경색, 협심증), 심근증, 심장 주기 이상, 심근염, 심근이영양증, 간 질환 (간염, 간경변, 간지방 이영양증), 위 및 십이지장 궤양 및 개방각 녹내장에 이용된다.
글루타티온, 즉 γ-글루타미닐-시스테이닐-글리신(gamma-glutaminyl-cysteinyl-glycine)은 3 개의 아미노산 잔기(글루타민산, 시스테인 및 글리신)로 형성된 트리펩타이드이다.
글루타티온은 모든 살아있는 유기체에 존재하며, 가역반응에 있어서 시스테인의 설프히드릴기(-SH) 때문에 산화-환원 반응에 있어 매우 중요하다:
Figure pct00001
본 명세서에서, 환원형 글루타티온(GSH)은 (γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신[(γ-L-glutamyl)-L-cysteinyl-glycine]을 의미한다.
글루타티온의 산화형(GSSG)은 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신[bis-(γ-L-glutamyl)-L-cysteinyl-glycine]을 의미한다.
별 다른 지시가 없는 경우, 본 명세서에서 글루타티온은 환원형 글루타티온을 가르킨다.
글루타티온은 양이온, 특히 Na와 염을 형성할 수 있다.
본 발명에 따른 조합은 d-금속류를 포함한다. d-금속류인 팔라듐 및 코퍼의 소스로는, 물에 용해되어 착화합물을 형성하는 이들의 다양한 염일 수 있다. 특히, CuCl2 또는 CuBr2와 같은 코퍼(II)의 단순 염을 수용액에 첨가하는 경우, 수용액 내에서 가수분해 및 코퍼(II)의 올리고뉴클레어 아쿠아하이드록시-복합체(oligonuclear aquahydroxy-complex)의 형성이 수반되는 수화 반응이 일어난다. 또한 팔라듐은 이들의 적합한 염의 형태, 특히 시스-디아미노디클로로팔라듐(cis-diaminodichloropalladium)로 첨가될 수 있다.
본 발명에 따른 제제의 제조를 위한 반응(GSSGNa2/inosine/Pd/Cu = 1000/1000/1/1):
Figure pct00002

본 발명에 따른 제제의 제조는 여러 가지 방법으로 수행 할 수 있다.
본 발명에 따른 제제를 제조하는 과정의 일 구현예에서, 본 발명은 팔라듐-코퍼 촉매제(팔라듐, 코퍼 및 γ-L-글루타밀-L-시스테이닐-글리신의 배위화합물)의 사전 제조(실시예 1의 단계 1)를 포함하며, 차후 반응 물질에 결과물인 촉매제 용액을 첨가하고, 산화가 수행되며, 이노신 용액과 상기 결과물 용액을 혼합하고, 여과 및 동결-건조한다.
또 다른 구현예에서, 팔라듐-코퍼 촉매제의 인 시추 제조(실시예 1)에 대한 이형(variant)이 제시되며, 이는 산화가 수행되며, 이노신 용액과 상기 결과물 용액을 혼합하고, 여과 및 동결-건조한다.
세 번째 구현예(실시예 3)에서, 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신(팔라듐과 코퍼의 배위화합물이 포함된)의 디소듐 염 용액을 진공-승화 건조(동결-건조)시키는 추가적인 단계의 도입으로 별도의 제조 이형이 제공되며, 그 뒤 동결-건조된 물질을 용해하여, 이노신 용액과 혼합하고, 여과 및 동결-건조한다.
최종 구현예는, 에너지 및 물질적인 면에서 가장 비용이 많이 들지만, 이노신 산화 과정이라는 이차 과정의 부재와 관련된 이점을 갖는다.
티올 RSH의 촉매 산화 동안 팔라듐의 가장 중요한 기능 중 하나는, 배위화합물, 즉 팔라듐 이온에 티올레이트(thiolate) 이온 RS의 첨가에 의한 산물의 형성이며, 그 뒤 이들의 산화 및 배위다면체(coordination polyhedron)의 분해가 일어난다.
코퍼-팔라듐 촉매제를 이용한 촉매 시스템의 실험 조사는, 팔라듐(II)의 이핵 티올레이트-브리지 화합물(binuclear thiolate-bridge compound)에 비해, 이들의 상당히 큰 촉매 효율을 보여준다. 코퍼 CuI k(SR)m의 티올레이트 복합체를 포함하는 산화된 글루타티온 GSSG의 수용액과 대조적으로, 1H NMR, IR 분광법 및 HPLC 데이터에 따르면, Pd-Cu를 포함하는 수용액은 분해 과정에 대하여 저항성을 갖는다.
결과들은 Pd-Cu 촉매제 내의 Pd-Cu 비율이 1:0.2에서 1:2의 범위일 때 최적임을 보여준다.
GSSG로의 GSH의 경 선택적 산화(mild selective oxidation) 과정에서, 상기 결론은 코퍼(I)의 티올레이트 복합체가 이들의 촉매 활성을 변형하거나 촉매 활성을 조절하는 화학적 위치로 간주되는 되는 반면, 팔라듐(II)의 이핵 티올레이트 브리지 복합체는 산화 촉매제의 기본적인 기능을 수행한다는 것을 나타낸다. 따라서, 기능적 이핵 팔라듐 배위화합물 예컨대, 화학식 [Pd2 II(-SR)2(NH3)4]을 갖는 배위화합물과, 코퍼 염 CuX2(상기 X = Cl- 또는 Br-)으로부터 형성되고 티올 배지에서 해당 코퍼(I) 화합물의 티올레이트 유도체로 전환되며 {CuI k(SR)m} 유형의 조절 위치를 갖는 글루타티온의 바이덴테이트(bidentate)-브리지 배위(bidentate-bridge coordination)의 조합은, Pd2 II 및 CuI의 복합체를 기반으로 한 촉매 시스템의 활성을 조절하는 가장 효과적인 접근법 중의 하나를 개시한다.
비교 가능한 양의 Cu, Pd 및 GSH를 포함하는 복합체 화합물의 제제는 상기 제시된 조합의 생물학적 효과를 제공한다.
약제학적으로 허용가능한 부형제는 본 발명에 따른 약제학적 조성물을 제조하기 위해 이용된다. 특히, 무기성 또는 유기성 담체(vehicle)이다. 유당, 옥수수 전분 또는 그의 파생물, 탈크, 스테아르 산 또는 그의 염 등을 예컨대 정제, 코팅 정제, 알약 및 하드 젤라틴 캡슐용 담체로 이용할 수 있다. 소프트 젤라틴 캡슐에 적합한 담체는, 예를 들어, 식물성 기름, 왁스, 지방, 반고체 및 액체 폴리올 등이다. 용액 및 시럽 제제용으로 적합한 담체는, 예컨대, 물, 폴리올, 자당, 전화당(invert sugar) 등이다. 좌약용으로 적당한 담체는, 예를 들어, 자연 또는 경화 오일, 왁스, 지방, 반고체 또는 액체 폴리올 등이 있다.
또한, 약제학적 조성물은 보존제, 용해제, 안정제, 습윤제, 유화제, 감미료, 착색제, 교취제, 삼투압 조절용 염, 완충액, 봉쇄제 또는 산화방지제 및 기타 필요 성분들을 을 포함할 수 있다.
일반적으로, 본 발명에 따른 모든 산물 및 방법들은 본 명세서에 기재되거나 당업계에 공지된 선행 기술로부터 알려진 어떠한 적합한 성분 및 단계들로 구성되거나 필수적으로 구성되어 택일적으로 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 산물 또는 방법들은 추가적으로 또는 택일적으로, 선행 기술에 공지된 산물 또는 방법에 이용되거나, 또는 본 발명의 기술적 결과를 달성하기 위해서 필수적이지 않은 어떠한 특정 성분, 또는 단계, 또는 개체도 제외할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 제제의 단일 투여 후 실험동물 혈청 내 IFN-α의 역학적 변화의 전형적인 프로파일을 보여준다. 혈청 IFN-α 수준 (U/ml)은 Y 축에 나타내었다. 별모양은 대조군과 비교하여 통계학적으로 신뢰성 있는 차이를 나타낸다. p<0.05
실시예
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.
실시예 1: 본 발명에 따른 제제의 제조
단계 1. 시스-[Pd(NH3)2Cl2] 20 mg(94.6 μmol)을 증류수 20 ml에 현탁시키고, GSH 30 mg(97.6 μmol)을 상기 결과물 현탁액에 첨가하여 균일한 연노란색 용액이 될 때 까지 교반시킨다.
단계 2. 코퍼 클로라이드 디하이드레이트(copper(II) chloride dihydrate) 14.52 mg(85.2 μmol)을 함유한 용액 5 ml을 상기 제조된 반응 혼합물에 첨가한다. 상기 결과물인 촉매제의 연노란색 용액의 pH를 0.01M 소듐 하이드록사이드(sodium hydroxide) 용액으로 5.5-6.0으로 적정한다.
단계 3. GSH 58.19 g (0.189 mol)을 유리 비커에 넣은 후, 교반하면서 증류수 200 ml을 첨가하고 10-15℃로 냉각시킨다. 별도로 NaOH 7.57 g(0.189 mol)을 증류수 50-60 ml에 용해시키고, 결과물 용액을 GSH 현탁액에 첨가하되 격렬하게 교반시키고 상기 반응 물질이 15-20℃ 이상이 되지 않도록 하며, 균일하고 반투명한 용액이 될 때까지 계속 교반시키면서 첨가한다.
필요시, 상기 반응 혼합물의 pH를 0.01M 소듐 하이드록사이드 용액으로 5.5-6.0으로 적정한다. 이전에 준비된 촉매제 용액을 상기 결과물 반응 시스템에 첨가하고, 상기 비커를 얼음조(5-10℃)로 옮기고, 갓 준비된 1M 히드로겐 퍼록사이드(hydrogen peroxide) 용액 100-102 ml(~ 0.1 mol)을 조금씩 첨가하여 45-60 분 이상 격렬하게 교반시킨다. HPLC를 이용하여 상기 반응이 완료될 때까지 진행되었는지 확인한다.
별도로 이노신(ribofuranosyl hypoxanthine) 25.38 g(0.095 mol)을 열수(60-70℃) 150 ml에 용해시킨다. 용해가 완전히 끝난 후, 상기 용액을 상온온도로 냉각시키고, 상기 반응 혼합물에 첨가한다. 여과 멸균 한 후, 상기 용액을 동결시키고, 진공-승화(동결) 건조한다.
상기 결과물 제조에 있어서 GSSG-이노신팔라듐코퍼의 몰비는 1000-1000-1-0.9이다.
실시예 2: 본 발명에 따른 제제의 제조
환원형 글루타티온 (reduced glutathione) 330 g (1.074 mol)을 물 3100 ml에 현탁시킨다. 16 % 수용액 형태의 소듐 히드록사이드 42.96 g (1.074 mol)을 상기 결과물 현탁액에 첨가하고 지속적으로 냉각 교반시킨다. 시스-디아미노디클로로팔라듐 0.1135 g (0.537 mmol) 및 코퍼 클로라이드 디히드레이트 0.0915 g(0.537 mmol)를 상기 결과물 용액에 첨가한 후, 6% 소듐 히드록사이드 용액 304.5 g(0.537 mol)을 첨가하여 온도를 확인하면서 교반시킨다(15℃ 이하). 퍼록사이드를 첨가한 후, 상기 결과물 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 둔다. 최소량의 물에 용해된 이노신 144 g(0.537 mol)을 산화형 글루타티온의 상기 결과물 용액에 첨가하고, 0.22 필터로 여과한 후 동결-건조시킨다. 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신 리보푸라노실-히포크산틴-디소듐:시스-디아미노디클로로팔라듐:코퍼 디클로라이드(1000:1:1 비율)의 수득율은 99%이다.
실시예 3. 본 발명에 따른 제제의 제조
단계 1
환원형 글루타티온 330 g (1.074 mol)을 물 3100 ml에 현탁시킨다. 16 % 수용액 형태의 소듐 히드록사이드 42.96 g (1.074 mol)을 상기 결과물 현탁액에 첨가한다. 그 후, 상기 반응 물질을 냉각시키고, 시스-디아미노디클로로팔라듐 0.1135 g (0.537 mmol) 및 코퍼 클로라이드 디히드레이트 0.0915 g(0.537 mmol)를 첨가한다. 6% 소듐 히드록사이드 용액 304.5 g(0.537 mol)을 상기 결과물 용액에 첨가하여 온도를 확인하면서 교반시킨다(15℃ 이하). 상기 결과물 용액을 상온에서 1.5 시간 동안 둔 후, 0.22 필터로 여과하고 동결-건조시켜서 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신의 디소듐 염 365 g을 획득한다(물 4%, Pd-57 mg, Cu-34 mg).
단계 2
이전 단계에서 제조된 상기 동결-건조 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신의 디소듐 염을 최소량의 물에 용해한 후, 이노신을 물에 녹인 용액(144 g, 0.537 mol)에 첨가한다. 상기 결과물 용액을 0.22 필터로 여과하고 동결-건조시킨다. 상기 두 단계에서의 수득율은 98%이다.
실시예 4. 본 발명에 따른 제제의 의약 형태 제조
1 L 용기에 소듐 아세테이트 트리하이드레이트 13.6 g 및 본 발명에 따른 제제 60 g을 물 0.8 L에 첨가하고, 용해될 때까지 교반시킨 후, 총 부피를 1.0 L로 적정한다. pH 값은 pH 미터기를 이용하여 확인하고, 20% 아세트산을 첨가하여 pH 6.0±0.2로 적정한다. 0.22 μ 살균 필터를 이용하여 살균 여과를 한 후, 유리 앰플(1 ml/1 앰플)에 채운다. 그 결과, 조성물을 함유한 정맥 또는 근육 내 주사용 앰플 970 개가 획득되며, 이는 3 년 동안 규범의 요구 사항을 준수하고 다음과 같은 구성을 포함한다:
본 발명에 따른 제제 60 g
소듐 아세테이트 트리하이드레이트 13.6 g
아세트산 pH 6.0
물 1000 ml
실시예 5. 병원성 DNA 및 RNA 바이러스에 의하여 유발되는 질환의 치료에 있어서 본 발명에 따른 제제의 생체 내 치료적 반응
이노신은 항-바이러스 효과를 비롯하여 광범위한 약리적 활성을 가지며, 다른 생물학적 활성 분자들과 결합하여 향상시킬 수 있다. 특허 RU2153350 및 RU2153351에서 이노신의 항-바이러스 효과를 강화시키는 관련 약리 용액을 개시하고 있으며, 바람직하게는 시스플라틴 및 산화 글루타티온의 배위 화합물을 이용하는 것이다. 상기 강화 효과는, 타겟의 산화 조절 반응 복합체를 촉진시키는 시스플라틴 및 산화 글루타티온의 배위 화합물의 효과로 인하여 달성되며, 이노신 작용에 대한 민감도가 향상된다. 상기 조성물이 시스플라틴 및 산화 글루타티온의 배위 화합물보다 높은 촉매 활성을 갖는 배위 화합물을 포함하고 있으므로, 이노신의 항-바이러스 효과를 강화시키는 메커니즘이 배위 화합물의 촉매 활성에 관련되어 있다면, 본 발명에 따른 상기 제제는 유사하거나 보다 현저한 효과를 나타낼 것이다.
상기 조사의 목적은, 다양한 바이러스성 감염 치료에 있어서 본 발명에 따른 제제의 치료적 효과를 확인하는 것이다.
테스트 화합물
비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신 리보푸라노실히포크산틴-디소듐:시스-디아미노디클로로팔라듐:코퍼 디클로라이드(1000:1:1 비율)(본 발명에 따른 제제)
비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신 리보푸라노실히포크산틴-디소듐:시스-디아미노디클로로팔라듐 (참조 제제 1)
아비돌(Arbidol)의 의약형태, 시리즈 970609 (참조 제제 2)
실험 모델
- 베네수엘라 말 뇌염( VEE ) 바이러스( Venezuelan equine encephalitis ( VEE ) virus ), 병원성 균주 트리니다드(Trinidad)-
차후 실험 동물의 감염을 위한 바이러스-함유 물질은 발생 9-11 일째인 계 배아들(chick embryos)(30-50 마리)을 이용하여 축적하였다. 먼저, 바이러스-함유 현탁액을 연속적으로 10 배씩 5번을 희석하여 바이러스-함유 희석액 5 개를 준비하였다. 바이러스-함유 현탁액의 각 희석액을 0.2 ml씩 발생중인 계 배아의 요막 공간에 주입시켰다. 바이러스-함유 현탁액을 주입한 곳은 녹인 파라핀으로 밀봉하였다. 그 후, 발생중인 계 배아를 37 ± 0.5℃ 온도의 온도조절장치에 18 시간 동안 위치시킨다. 오보스코프(ovoscope)를 이용하여 주기적으로 이들의 생존율을 측정하였다. 배양 시간 경과 후, 온도조절장치에서 발생중인 계 배아의 생존율을 측정하였고, 항생제(1 ml 당 100 unit의 페니실린, 1 ml 당 200 unit의 스트렙토마이신)를 첨가한 생리 식염수를 이용하여 살아있는 배아의 “도체(carcass)”로부터 바이러스-함유 물질의 10% 현탁액을 제조하였다. 상기 결과물 현탁액을 10 분 동안 1.5-2.0 만 rev/min 속도로 3 ± 0.5℃ 온도에서 원심 분리하였다. 상기 상층액을 1.0 ml 바이알에 분주하고 차후 실험 동물(쥐)의 감염에 이용한다. 상기 초기 바이러스 역가는 107-108 LD50/ml이다.
- 리프트 밸리 열 바이러스( Rift Valley fever ( RVF ) virus ), 병원성 균주 8-87-
실험 동물의 감염을 위한 바이러스-함유 물질은 태어난 지 3-5 일째인 새끼 마우스(10-15 마리)를 이용하여 축적하였다. 먼저, 바이러스-함유 물질을 연속적으로 10 배씩 5번을 희석하여 바이러스-함유 희석액 5 개를 준비하였다. 상기 각 희석액을 0.2 ml씩 새끼 마우스의 뇌에 주입시키고, 24-48 시간 동안 관찰하였다. 시간이 경과한 후, 마우스를 에테르로 희생하여 뇌를 적출하고, 페니실린 바이얼에 넣어 - 20 ± 0.5℃ 온도의 냉동고에서 보관하였다. 차후에, 10% 뇌 현탁액을 바이러스-함유 물질로 이용하였다. 상기 초기 바이러스 역가는 105-106 LD50/ml이다.
- 진드기 매개 뇌염 바이러스( tick - borne encephalitis ( TE ) virus ), 병원성 균주 압세타로브(Absetarov)-
실험 동물의 감염을 위한 바이러스-함유 물질은 태어난 지 3-5 일째인 새끼 마우스를 이용하여 축적하였다. 먼저, 바이러스-함유 물질을 연속적으로 10 배씩 5번을 희석하여 바이러스-함유 희석액 5 개를 준비하였다. 상기 바이러스 함유 물질은 이미 감염된 마우스 뇌의 10% 현탁액을 원심분리한 것 또는 건조-동결 상태에서 재수화된 바이러스-함유 물질을 포함한다. 상기 각 희석액을 0.2 ml씩 새끼 마우스의 뇌에 주입시키고, 24-48 시간 동안 관찰하였다. 시간이 경과한 후, 마우스를 에테르로 희생하여 뇌를 적출하고, 페니실린 바이얼에 넣어 -20 ± 0.5℃ 온도의 냉동고에서 보관하였다. 차후에, 10% 뇌 현탁액을 바이러스-함유 물질로 이용하였다. 상기 초기 바이러스 역가는 102-103 LD50/ml이다.
- 인플루엔자 A 바이러스( influenza A virus ), 균주 А/ Aichi /02/68 ( H 3 N 2 )-
바이러스-함유 물질은 발생 9-11 일째인 계 배아들을 이용하여 획득하였다. 실험 동물의 감염을 위한 바이러스-함유 물질은, 병원성 균주인 А/Aichi/02/68(H3N2)을 함유한 바이러스-함유 요막액으로 감염된 마우스 5 마리를 이용하여 축적하였다. 감염 3 일 후, 마우스의 폐를 적출하여 10 배 부피의 멸균 생리 식염수로 균질화하고, 별도의 실험에서 동물이 치사되는 수준을 적정하여 상기 균질액 내 바이러스의 감염 활성을 결정하였다. 바이러스 역가는 Reed 및 Muench (Am.J.Hyg., 1938, 27:493-497) 그룹의 방법을 이용하여 계산하였다.
본 발명에 따른 제제의 효과를 평가하는 실험을 16-18 g 무게의 비-근친교배 수컷 흰 마우스로 수행하였다(360 마리).
I.P. Ashmarin 및 A.A. Vorob'yev에 의하여 변형된 Kerber 방법으로 기준을 계산하여, 각 원인균에 대한 LD50을 비-근친교배 수컷 흰 마우스에서 결정하였다.
실험군(해당 제작에 따른) 및 대조군 동물들의 생존율 지표 값을 비교하여 상기 제제의 효과를 확인하였다. 실험군 및 대조군 동물들의 생존율은 V.S. 유전자의 표를 이용하여 결정하였다. 상기 감염된 동물들을 21 일 동안 관찰하였고, 실험군 및 대조군 동물들의 생존 동물 및 죽은 동물의 수를 매일 기록하였다.
결과의 통계 처리 방법
실험 결과의 통계 처리는, 기존의 통계적 방법을 구현하는 특별 프로그램을 이용하여 개인용 컴퓨터에서 수행하였다.
본 발명에 따른 제제의 항-바이러스 활성 연구 결과
EDVI(especially dangerous viral infections) 및 인플루엔자의 모든 실험 모델에서, 두 가지 방식을 이용하여 본 발명에 따른 제제 및 비교 제제의 효과를 평가하였다:
- 감염 24 시간 전, 감염 동시 시간, 감염 후 24 시간, 48 시간 및 72 시간(방식 1- 긴급 예방); 및
- 감염 동시 시간 및 감염 후 24 시간, 48 시간 및 72 시간(방식 2-초기 원인 제거 치료).
본 발명에 다른 제제 및 참조 1은, 체중 1 kg 당 30 mg/kg의 단일 용량(10 g/마우스)으로 0.5 ml을 주입하였다.
인플루엔자 감염 처리 시 이용되는 비교 제제는 아비돌(Arbidol)의 의약형태인 시리즈 970609 (참조 제제 2)이며, 이를 감염 1 시간 후에 투여하고, 5 일 동안 60 mg 용량으로 하루에 한 번씩 경구 투여하였다.
베네수엘라 말 뇌염 바이러스 감염 실험에서 본 발명에 따른 제제의 효과
결과는 표 1에 나타내었다.
베네수엘라 말 뇌염 바이러스 감염 실험에서 긴급 예방 및 원인 제거 치료를 위한 제제인 본 발명에 따른 제제의 효과
제제 제제 투여 방식 원인균의 감염량 (LD50) 그룹당 동물수 죽은 동물 수(%) 생존 동물 수(%)
본 발명에 따른 제제 1 12 10 0 100*
2 10 0 100*
2 12 10 0 100*
2 10 0 100*
참조 제제 1 1 12 10 60 40
2 10 40 60
2 12 10 50 50
2 10 40 60
감염 대조군 비투여 12 10 100 0
비투여 2 10 100 0
* - 통계학적으로 신뢰성있는 대조군과의 차이 p<0.05
표 1에 나타낸 결과들은, 상기 제제들이 VEE에 관련된 예방 효과를 나타낸다는 것을 보여준다. 본 발명에 따른 제제는 상기 조건하에서 가장 효과적임을 입증하였다. 방식 1에 따라 제제를 이용하는 경우(감염 24 시간 전, 감염 동시 시간, 감염 후 24 시간, 48 시간 및 72 시간), 감염된 마우스는 VEE 바이러스의 감염량에 상관없이 100% 생존율을 나타내었고, 대조군은 100% 사망률을 나타내었다. 그러나, 방식 2에 따라 제제를 이용하는 경우(감염 동시 시간 및 감염 후 24 시간, 48 시간 및 72 시간), 원인균의 감염량에 의존적인 이러한 조건하에서 LD50 값 12인 원인균 용량으로 감염시 100% 예방 효과를 나타내었고, LD50 값 2인 원인균 용량으로 감염시 100% 예방 효과를 나타내었다. 참조 제제 1을 이용하는 경우, 원인균의 감염량에 따라 예방 효과 지표는 본 발명에 따른 제제를 이용하는 경우보다 40-60% 낮았다.
따라서, 상기 결과에 기반하여 본 발명에 따른 제제가 VEE 감염과 관련하여 가장 효과적이라는 결론을 내릴 수 있다. 긴급 예방 방식에 따라 이용하는 경우, 100% 사망률을 나타낸 대조군에 비해 본 발명에 따른 제제는 감염된 동물에 대해 100% 예방 효과를 제공하였다.
리프트 밸리 열 바이러스 감염 실험에서 본 발명에 따른 제제의 효과
결과는 표 2에 나타내었다.
리프트 밸리 열 바이러스 감염 실험에서 긴급 예방 및 원인 제거 치료를 위한 제제인 본 발명에 따른 제제의 효과
제제 제제 투여 방식 원인균의 감염량 (LD50) 그룹당 동물수 죽은 동물 수(%) 생존 동물 수(%)
본 발명에 따른 제제 1 12 10 0 100*
2 10 0 100*
2 12 10 0 100*
2 10 0 100*
참조 제제 1 1 12 10 40 60
2 10 40 60
2 12 10 70 30
2 10 45 55
감염 대조군 비투여 12 10 100 0
비투여 12 10 100 0
* - 통계학적으로 신뢰성있는 대조군과의 차이 p<0.05
표 1에 나타낸 결과들은, 본 발명에 따른 제제를 이용하는 경우, RVF에 관련하여 가장 효과적인 예방 및 치료 효과를 나타낸다는 것을 보여준다. 투여 방식에 상관없이, 상기 제제는 100% 사망률을 나타낸 대조군에 비해 감염된 동물에 대해 100% 예방 효과를 제공하였다.
진드기 매개 뇌염 바이러스 감염 실험에서 본 발명에 따른 제제의 효과
결과는 표 3에 나타내었다.
진드기 매개 뇌염 바이러스 감염 실험에서 긴급 예방 및 원인 제거 치료를 위한 제제인 본 발명에 따른 제제의 효과
제제 제제 투여 방식 원인균의 감염량 (LD50) 그룹당 동물수 죽은 동물 수(%) 생존 동물 수(%)
본 발명에 따른 제제 1 12 10 0 100*
2 10 0 100*
2 12 10 0 100*
2 10 0 100*
참조 제제 1 1 12 10 20 80*
2 10 0 100*
2 12 10 20 80*
2 10 20 80*
감염 대조군 비투여 12 10 100 0
비투여 2 10 100 0
* - 통계학적으로 신뢰성있는 대조군과의 차이 p<0.05
상기 결과들은, 상기 제제들을 LD50 값 2인 원인균 용량으로 감염된 동물에 이용하는 경우, 100% 사망률을 나타낸 대조군에 비하여 상기 평가된 모든 제제들은 감염된 동물들이 80-100%의 생존율을 보이며 거의 동일한 예방 효과를 나타냈다. 이와 동시에, 상기 제제들을 LD50 값 12인 원인균 용량으로 감염된 동물에 이용하는 경우, 본 발명에 따른 제제는 보다 현저한 효과를 나타냈다.
인플루엔자(병원성 균주А/ Aichi /02/68) 바이러스 감염 실험에서 본 발명에 따른 제제의 효과
결과는 표 4에 나타내었다.
인플루엔자(병원성 균주А/Aichi/02/68) 바이러스 감염 실험에서 긴급 예방 및 원인 제거 치료를 위한 제제인 본 발명에 따른 제제의 효과
제제 제제의 용량 (mg/kg) 방식 사망률 사망 예방
(%)		 MST (일) MST 증가 (일)
본 발명에 따른 제제 30 -24, +1, +24, 48, +72 12/15 20,0 8,5 1,8
+1, +24, +48, 72 9/15 40,0 11.2 3,1
아비돌
970609		 60 +1 h 및 이후 5 일 10/15 33,3 9,3 2,6
대조군-용량(제제 비투여) 15/15 - 6,7 -
대조군-위약(제제 비투여) 0/15 - 14,0 -
상기 결과들은, 인플루엔자 바이러스 균주А/Aichi/02/68(H3N2)로 비강 감염된 흰 마우스에서 본 발명에 따른 제제가 인플루엔자 감염과 관련하여 아비돌보다 높은 특이 활성을 갖는다는 것을 보여준다.
결론
상기 전체 결과들은, 본 발명에 따른 제제가 DNA 및 RNA 바이러스 모두에 의하여 발생되는 다양한 바이러스성 질환들에 대하여 예방 및 치료 효과를 갖는다는 나타낸다.
실시예 6. 본 발명에 따른 제제의 인터페론 생산 유도능 확인
DNA 및 RNA 바이러스 모두에 의해 발생되는 각종 바이러스성 질환에 관련된 본 발명에 따른 제제의 치료 효능은, 탁월한 항-바이러스 활성을 갖는 생리 활성 물질인 인터페론의 내생적 생산을 증가시키는 효능에 의한 것일 수 있다.
본 실험의 목적: 본 발명에 따른 제제의 인터페론 생산 촉진 효능 확인.
테스트 화합물: 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신 리보푸라노실-히포크산틴-디소듐:시스-디아미노디클로로팔라듐:코퍼 디클로라이드(1000:1:1 비율)(본 발명에 따른 제제)
실험 방법
30 mg/kg 용량의 본 발명에 따른 제제를 투여한 실험 동물 혈청 내 인터페론 알파(IFN-α)을 측정하여 본 발명에 따른 제제의 인터페로노겐 특성(interferonogenic property)을 평가하였고, 상기 실험 결과는 효과적인 것으로 나타났다 (실시예 3 참조). 상기 제제를 단일 용량으로 피하 투여하였다.
대조군에게는 위약 (0.85 % 소듐 클로라이드 용액)을 피하 투여하였다. 제제 주입 2, 4, 8, 16, 24, 32, 36, 40 및 48 시간 후, 멸균 조건에서 후안와 부비동(retro-orbital sinus)으로부터 실험군(각각의 테스트 제제를 투여) 및 대조군의 혈액을 채취하였다. 5 마리의 혈액을 하나의 샘플로 합쳤다. 표준 방법에 의해 준비된 혈청에서 인터페론 축적의 역학을 확인하였다. 러시아 과학 아카데미의 세포학 연구소(상트 페테르부르크)에서 얻은 153번째 계대 배양한 L-929 세포(계대 배양한 생쥐 섬유아세포)를 이용하여 실험동물의 혈청 내 IFN-α 활성을 적정하였다. 준비된 샘플 내 IFN-α는 마이크로 방법을 이용하여 적정하였다. 배지를 이용하여 필요한 농도(3-4 105 세포/ml)로 희석된 L-929 세포를 96-웰 플레이트의 웰에 넣고 24 시간 동안 온도조절장치에서 배양하였다. 세포 배양은 전체 적정 과정동안 동일한 조건으로 배양하였다: +37℃온도, CO2 5% 및 습도 98%. 웰 바닥에 세포 단일층을 형성시킨 후, 플레이트 내 배양 배지를 제거하고 유지 배지를 주입하였고, 테스트 샘플을 연속적으로 2 배씩 희석하였다(한 쌍의 웰). 24 시간의 배양 후, 테스트 샘플을 제거하고, 작용 용액(100 CPD50)에 포함된 EMC 테스트 바이러스를 주입하였다. 상기 결과들은 24 시간 후 도립현미경을 이용하여 확인하였다. IFN 역가는 테스트 바이러스 CPD에 대하여 50% 보호가 관찰되는 최종 혈청 희석액의 반대 값이다.
실험 결과
본 발명에 따른 제제의 단일 투여 후 실험 동물의 혈청 내 IFN-α의 역학적 변화는 도 1에 나타내었다.
상기 결과들은, 본 발명에 따른 제제를 투여한 지 2 시간 후부터 IFN-α수준이 5-6 배 증가하기 시작하고, 백그라운드 값을 45-50 배 초과하여 16-24 시간 후에는 최고점에 도달했으며, 본 발명에 따른 제제를 투여한 지 48 시간 후에는 정상 값으로 돌아왔음을 보여준다. IFN-α 수준의 역학적 변화는 본 발명에 따른 제제가 인터페로노겐 활성을 갖는다는 것을 나타낸다. 내생적 IFN-α는 외생적 인터페론 제제 보다 확실한 이점을 갖는다: 인터페로노겐을 인체 내로 주입시킨 경우, 인터페론은 항원성이 전시되지 않은 채로 생산되며; 외생적 인터페론 제제의 내재된 부작용은 발생하지 않고; 인체 내 유도된 IFN-α의 합성은 균형을 이루며, 인터페론 과다에 대하여 인체를 보호하는 제어 및 조절 메카니즘(억제-번역)를 행하고; 인터페로노겐의 단일 투여는 내생적 IFN-α의 상대적으로 지속적인 순환을 제공한다. 본 발명에 따른 제제의 작용은 인터페로노겐의 상술한 효과에 해당한다.
따라서, 본 발명에 따른 제제는 IFN-α의 생산을 강화시킨다.
실시예 7. 만성 C형 간염(chronic viral hepatitis C, CVHC)에서 본 발명에 따른 제제 (GSSGNa2/inosine/Pd/Cu)의 치료 효과
여성 환자 번호 1 : 나이 48 세.
진단 : CVHC, 복제 단계 (PCR HСV + - 3.60х107 copies/ml = 9.00х106 IU/ml), 중간 수준 활성. 만성 자가 면역 갑상선염. 갑상선기능저하증.
유병기간: 20 년
상기 병력은 페길레이티드 인터페론, 리바비린, 기타 항-바이러스성 제제 및 인터페론 유도제를 포함한 항-바이러스 치료에 대한 불내성(intolerance)을 보여주고 있다. 정기적으로 L-티록신 150 mg을 하루에 한 번씩 아침에 투여하였다.
쇠약, 우 늑골하부 불편감, 불쾌한 뒷맛, 식욕부진, 수면 부족 및 과민성을 호소하였다.
지난 5 년 동안 자주 우 늑골하부의 쑤시는 통증, 쇠약, 소변색의 주기적인 변화가 보고되었다.
조사 후 (표 5의 3 열의 결과), 치료는 본 발명에 따른 제제의 의약 형태로 60 mg을 외래 환자과에서 일주일에 3 번씩 근육 내 주사하고, 2 일의 휴식기를 두었다(토요일, 일요일).
본 발명에 따른 제제의 의약 형태를 이용한 치료 동안 실험실 진단 기준 값에 있어서의 역학적 변화
기준 기준값 치료 전 4 주 후 12 주 후 24 주 후
1 2 3 4 5 6
바이러스량 PCR HСV(copies/ml) - 9.60х107 3.03 х106 1.42х106 2.65 х103
혈액의 생화학적 분석
ALT(U/L) 0-45 194 156 95 64
AST(U/L) 5-34 206 198 112 83
GGTP(U/L) 9-36 216.75 186.24 164.65 96.20
ALP(U/L) 240 302 298 246 180
총 빌리루빈(mg/dl) 0.2-1.2 6.45 3.31 1.45 0.96
직접 빌리루빈(mg/dl) 0-0.5 4.45 1.52 1.02 0.44
총 단백질(g/dl) 6.4-8.3 6.0 6.3 6.7 7.4
알부민(g/dl) 3.2-5.0 3.2 3.5 3.7 4.2
글로불린(g/dl) 2.7-3.3 2.8 2.7 3.0 3.0
Alb./Glob. 1.2-2.0 1.14 1.3 1.23 1.4
페리틴(ng/ml) 6-223 446.73 394.66 356.07 256.21
혈중 철분 μg/dl 25-156 201.2 200.07 184.27 159.87
혈액 분석
적혈구(х1012/L) 4.0-5.6 3.58 3.67 4.98 4.82
헤모글로빈(g/dl) 12-16 8.7 9.3 10.1 11.8
적혈구 용적량(%) 27-31 21 27 27 31
백혈구(х109/L) 4-11 3.6 3.62 4.8 5.2
호중구(%) 45-70 40 44.9 50 56
호염구(%) 0.5-1 0 0.6 0.8 1
호산구(%) 1-5 1 2.4 2.2 2
단핵백혈구(%) 1-8 4 4.3 4 3
림프구(%) 25-40 55 48.1 43 38
혈소판(х109/l) 180-320 90.2 133 159 212
혈액 응고 체계
프로트롬빈 시간(s) 10-12.5 17.3 15.3 14.1 11.1
활성화 부분트롬빈 시간(s) 20-36 42 40 36 30
트롬빈 시간(s) 10-13.5 17.6 16.0 13.9 12.8
부분트롬빈 시간(s) 10-12 17.4 16.1 12.7 11.9
출혈 시간(분) 4 분 미만 8 8 6 4
혈액 응고 시간(분) 5-10 분 9 9 8,3 8
본 발명에 따른 제제의 의약 형태는 잘 관용된다. 주사 후, 환자의 활력 개선이 보고되었다. 치료에 대한 반응의 객관적인 기준은 바이러스량에 있어서의 역학적 변화이며, 이는 치료 한달 후 3 배, 세달 후 60 배, 치료 6 달후에는 4 대수 이상으로 감소하였다. 이러한 바이러스량의 감소는 세포용해 반응의 감소(치료 종료시 아미노기 전이효소의 정상화) 및 간세포의 생리학적 최적 기능 활성 회복(혈액 단백질의 정상화)을 동반하였다. 상기 제제의 치료 효과는 혈액의 세포내 조성 및 응고 시스템 활성을 정상화시키는 것이다.
검사에서, 간은 늑골궁 아래에서 0.5 cm 연장되었다. 간의 가장자리는 부드럽지만 딱딱하지 않았다.
상기 치료의 특정 특징 중 하나는 매 3 주마다 L-티록신의 필요 투여량을 감소시켜야 한다는 것이다. 상기 치료 종료시, L-티록신의 투여량은 절반이 되었다.
따라서, 본 발명에 따른 제제의 의약 형태의 이용은 특정 항-바이러스성 치료제에 대하여 불내성을 갖는 만성 바이러스성 C형 간염을 치료할 수 있도록 하였으며, 이는 본 발명에 따른 제제의 항-바이러스성 활성을 확인한 것이다.

Claims (19)

  1. 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신[bis-(γ-L-glutamyl)- L-cysteinyl-glycine] 또는 그의 염, 이노신(inosine), 및 팔라듐(palladium), 코퍼(copper)와 (γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신에 의하여 형성된 배위화합물(coordination compound)의 조합.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신은 디소듐염(disodium salt)의 형태인 것을 특징으로 하는 조합.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신 디소듐염:이노신:팔라듐:코퍼의 몰비 범위는 100-10000:100-10000:1-10:1-10인 것을 특징으로 하는 조합.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신 디소듐염:이노신:팔라듐:코퍼의 몰비 범위는 1000:1000:1:1인 것을 특징으로 하는 조합.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 팔라듐의 소스는 시스-디아미노디클로로팔라듐(cis-diaminodichloropalladium)인 것을 특징으로 하는 조합.
  6. 제 1 항에 있어서, 상기 코퍼의 소스는 코퍼 디클로라이드인 것을 특징으로 하는 조합.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항에 있어서, 상기 조합은 팔라듐 시스-디아미노디클로라이드(palladium cis-diaminodichloride), 코퍼 디클로라이드 및 (γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신을 기본으로 하는 촉매제를 포함하며, 상기 촉매제는 인 시투(in situ) 하게 제조되는 것을 특징으로 하는 조합.
  8. 제 1 항 내지 제 6 항에 있어서, 상기 조합은 팔라듐 시스-디아미노디클로라이드(palladium cis-diaminodichloride), 코퍼 디클로라이드 및 (γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신을 기본으로 하는 촉매제를 포함하며, 상기 촉매제는 미리 사전에 제조되는 것을 특징으로 하는 조합.
  9. 제 1 항에 있어서, 상기 조합은 항-바이러스성 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 조합.
  10. 제 1 항에 있어서, 상기 조합은 감염성 질환, 특히 바이러스성 질환들의 치료 용도인 것을 특징으로 하는 조합.
  11. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항의 조합 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  12. 제 11 항에 있어서, 상기 조성물은 항-바이러스성 활성을 나타내는 것을 특징으로 하는 조성물.
  13. 제 12 항에 있어서, 상기 조성물은 감염성 질환, 특히 바이러스성 질환들의 치료 용도인 것을 특징으로 하는 조성물.
  14. 제 1 항의 조합을 아세테이트 완충액(acetate buffer)에 첨가한 용액을 포함하는 항-바이러스제.
  15. 제 14 항에 있어서, 상기 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신 디소듐염:이노신:팔라듐:코퍼의 몰비 범위는 100-10000:100-10000:1-10:1-10인 것을 특징으로 하는 항-바이러스제.
  16. 제 15 항에 있어서, 상기 비스-(γ-L-글루타밀)-L-시스테이닐-글리신 디소듐염:이노신:팔라듐:코퍼의 몰비 범위는 1000:1000:1:1인 것을 특징으로 하는 조합.
  17. 제 14 항에 있어서, 상기 항-바이러스제는 인플루엔자 바이러스(influenza virus), C 형 간염 바이러스(hepatitis C virus), B 형 간염 바이러스(hepatitis B virus), 진드기 매개 뇌염 바이러스(tick-borne encephalitis virus), 리프트 밸리 열 바이러스(Rift Valley fever virus) 및 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(Venezuelan equine encephalitis virus)로 구성된 군으로부터 선택되는 바이러스의 치료용인 것을 특징으로 하는 항-바이러스제.
  18. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항의 조합의 약제학적 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 바이러스성 질환의 치료 방법.
  19. 제 18 항에 있어서, 상기 바이러스성 질환은 인플루엔자, C 형 간염, B 형 간염. 진드기 매개 뇌염, 리프트 밸리 열 및 베네수엘라 말 뇌염으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
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