KR20140016251A - 티올기의 균일한 선택적 산화를 위한 팔라듐-구리 촉매 - Google Patents

티올기의 균일한 선택적 산화를 위한 팔라듐-구리 촉매 Download PDF

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마크 보히소비치 발라조브스키
빅터 게오르기예비치 안토노브
알렉센더 니콜라비치 벨랴예프
알렉세이 블라디미로비치 어레민
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아이비 팜 리미티드 라이어빌리티 컴퍼니
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Abstract

티올의 균일한 선택적 산화의 팔라듐-구리 촉매는 하기 화학식을 갖는, 팔라듐(II)의 작용성 2핵 티올레이트-브릿지된 배위 화합물을 조합하고, 구리(I)의 티올레이트 착물을 변형시키는 것으로 제안되며,
[화학식 I]
[Pd2 II(μ-SR)2(NH3)4]·{CuI k(SR)m},
상기 식에서
SR은 글루타티온 및 아세틸시스테인의 잔기를 포함하는 군으로부터 선택된 티올레이트 리간드의 잔기이고,
k = 2 내지 14이며,
m ≥ 3k이다.
또한, 촉매적 조합물, 약학적 조합물, 약제학적 조성물 및 환자의 기관에서 표시한 촉매에 기반한 치료적 작용 방법이 제안된다.

Description

티올기의 균일한 선택적 산화를 위한 팔라듐-구리 촉매{PALLADIUM-COPPER CATALYSTS FOR THE HOMOGENEOUS SELECTIVE OXIDATION OF THIOL GROUPS}
본 발명은 생-무기 화학, 의학 화학 및 의학, 구체적으로는 의학 제품의 제조 분야에 관한 것이며, 이는 생-무기 화학, 약리학, 의학 및 수의학적 실행에서 사용될 수 있다.
약동학 및/또는 약력학을 최적화하고/하거나 약제학적 작용제(agent) 분자의 화학적 변형에 의해 독성을 감소시키고/시키거나 그것을 다른 화학적 화합물(들)과 함께 사용함으로써 약학적 분자의 치료적 효과를 증강시키는 것은 더 생리적으로 최적인 용량에서 그것의 활성이 존재하는 약제학적 제품의 새로운 생성을 만들기 위한 영역 중 하나이다.
따라서, 다수의 조합 작용제는 구성에 아목시실린 및 클라블란산을 함유하는 아목시클래브(Amoxiclav), 및 신장 효소 다이하이드로펩티다제의 특이적 억제제인 실라스타틴과 조합된 이미페넴을 함유하는 티에남(Tienam)을 포함하는 것으로 알려져 있다. 클라블란산은 박테리아 효소에 의한 아목시실린의 파괴를 방지하는 반면, 실라스타틴은 신장에서 이미페넴의 대사를 억제하는데, 이는 신장 및 요로에서 변경되지 않은 항생제의 농도를 실질적으로 증가시킨다.
그러나, 질병의 치료에 잠재적으로 유용한 다수의 다른 약제학적 작용제가 있지만, 그것들에 대한 하나 또는 다른 형태의 내성 때문에 원하는 효과가 제공되지 않는다.
현재, 물질 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드(GSSG) 또는 산화된 글루타티온이 공지되어 있는데, 이는 그 자체에 다양한 약학적 활성을 소유한다. 특히, 산화된 글루타티온은 다양한 종류의 화학적 변형을 수행하는 과정: 인산화반응, 글루타티오닐화, 산화 및 기타를 개시할 수 있다는 것이 발견되었는데, 이는 리간드에 대해 고친화도를 갖는 특정 구조적 변형 및 생리적 작용을 수행하는 능력의 형성에 선행한다. 산화된 글루타티온은 항바이러스, 항박테리아, 항종양 및 항섬유증 작용을 포함하는, 복잡한 신체의 보호 반응을 제어하는 사이토카인의 광역 스펙트럼 생성을 확인할 수 있는 것으로 나타났다. 당뇨병, 허혈성 심장질환, 바이러스성 간염, 악성 종양, 화농성 감염, 및 다수의 다른 것을 포함하는 다양한 질병의 치료를 위해 약학적으로 활성인 분자와 조합된 산화된 글루타티온 및 시스플라틴의 복합 화합물을 포함하는 착물의 생성을 위해 다수의 약학적 용액이 제안되었다. 특히, 이노신의 항바이러스 활성을 강화하는 바이러스성 B형 및 C형 간염의 약물-내성 형태의 치료를 위한 약학적 용액이 제안되었고, 산화된 글루타티온과 함께 유기 염의 형태로 사용되었다(RU 2153350, RU2153351).
그러나, RU 2153350에 개시된 산화된 글루타티온 생성물의 구성은 백금의 착화합물인 시스플라틴을 포함하는데, 이것의 사용은 독성 및 돌연변이유발 작용의 위험과 관련된다. 사실 백금은 그것이 최소량으로 사용될 때 촉매적 효과를 나타낸다.
반복적으로 부여될 때 산화된 글루타티온의 구성에서 백금의 독성 작용의 위험은 세포에 대한 실험에서 증명되었는데, 여기서 5일의 과정에 걸친 착물 백금 화합물의 매일의 도입은 배양물의 증식적 활성의 억제 및 그것의 사멸을 초래하였다. 산화된 글루타티온의 사용은 또한 가능한 약학적 용액에서 어떤 제한을 부과하는데, 그것이 주로 비경구 투여의 의학적 형태를 생성할 수 있기 때문이다. 따라서, 약동학 및/또는 약력학을 최적화함으로써 약학적 분자의 치료적 효과를 증강시키는 능력을 지니는, 장용, 비경구 및 다른 가능한 투여 방법의 의학적 형태의 생성에 적합한 신규 생성물을 개발할 필요가 존재한다.
본 문제는 팔라듐(II)의 작용성 2핵 티올레이트-브릿지된 배위 화합물을 조합하는 티올의 균일한 선택적 산화의 팔라듐-구리 촉매를 제안하고, 하기 화학식을 갖는 구리의 티올레이트 착물을 변형시킴으로써 해결된다.
[화학식 I]
[Pd2 II(μ-SR)2(NH3)4]·{CuI k(SR)m},
상기 식에서,
SR은 글루타티온 및 아세틸시스테인의 잔기를 포함하는 군으로부터 선택된 티올레이트 리간드의 잔기이며,
k = 2 내지 14이고,
m ≥ 3k이다.
바람직하게는, 산화는 티올 잔기 사이의 다이설파이드 결합의 형성에 의한 티올의 균일한 선택적 산화인 한편, 산화되어 촉매 기능을 부여하는 티올은 N-아세틸-시스테인 또는 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신이다.
바람직하게는, 촉매는 팔라듐(II) 및 대응되는 티올의 단핵 아미네이트 착물과 구리(II) 및 대응되는 티올의 염으로부터 형성되는 착물의 반응에 의해 얻어진다.
의도적으로, 본 발명의 촉매에서 Pd:Cu의 몰비는 1:0.1 내지 1:2의 범위, 더 바람직하게는 1:0.2 내지 1:1의 범위에 있다.
본 발명의 촉매는 치료에 사용될 수 있다.
또한 아세틸시스테인, 글루타티온, 그것의 용매화합물 및 염 중에서 선택된 티올에 의해, 그리고 본 발명의 촉매에 의해 형성된 촉매적 조합물이 제안된다.
바람직하게는, 촉매는 티올의 몰 당 1·10-2 내지 1·10-7 g의 양인 조합으로 존재한다. 제안된 조합은 단지 아세틸 시스테인 다이설파이드 및/또는 글루타티온, 그것의 용매화합물 및 염, 및 본 발명의 촉매로 본질적으로 이루어질 수 있다.
본 발명의 조합물은 치료에 사용될 수 있다.
또한 표시된 촉매적 조합물 및 조합물의 성분과 추가 반응을 시작할 수 있는 약학적으로 활성인 화합물을 포함하는 약학적 조합물이 제안된다.
약학적으로 활성인 화합물의 치료적 활성을 증강시키는 이 조합물을 사용하는 것이 바람직하다.
표시된 약학적으로 활성인 화합물은 퓨린 또는 피리미딘 염기 또는 이들의 유도체로부터 선택된 의학적 또는 생리적으로 활성인 분자일 수 있다.
이 조합물은 감염성 및 비감염성 질병의 치료에 사용될 수 있다.
약학적으로 활성인 화합물은, 예를 들어 리바비린일 수 있다.
또한 기재된 촉매 또는 조합물 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제안된다. 이러한 약제학적 조성물은 약학적으로 활성인 화합물의 치료적 활성을 증강시킨다.
또한 약학적으로 활성인 화합물의 치료적 활성을 증강시키는 환자 유기체에 대한 치료작용 방법이 제안되되, 치료가 필요한 환자에게 유효량의 본 발명에 따른 촉매, 조합물 또는 조성물이 부여된다.
도 1은 시스템: "GSH - H2O2 - [PdII 2(μ-SG)2(NH3)4]에서 Pd:Cu의 몰 수 비의 함수로서 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드의 축적을 도시한 도면(tg(α)는 Pd-Cu 촉매의 존재에서 과산화수소의 글루타티온 산화의 반응에 대한 기울기임, L=n(Cu)/n(Pd), 25±0.1℃, CGSH 2 ㎎/㎖, pH 6.0, Cpd 3.4e-6 몰/리터).
도 2는 2핵 팔라듐 착물 [Pd2(μ-SG)2(NH3)4]2+ (25±0.1℃, CGSH = 2 ㎎/㎖, pH = 5.3, CM = 6.5e-6 몰/리터)과 비교하여 과산화수소에 의한 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신의 산화 반응에서 {CuI k(SR)m}의 상대적 촉매 효능을 도시한 도면.
도 3은 팔라듐 및 구리 착물에 의한 및 이원 Pd-Cu 촉매에 의한 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신의 산화 곡선을 도시한 도면(25±0.1℃, CGSH 2 ㎎/㎖, pH 6.0, CM 6.3e-6 몰/리터).
시스플라틴의 사용이 없이 또는 다른 금속의 사용에 의해 얻은 제제 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드를 사용하기 위한 발명자의 노력은 더 낮은 치료적 이점을 야기하였다.
본 발명자들은 RU 2153350의 방법에 의해 얻어지는 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드의 다수의 약학적 활성 효과가 펩타이드 특성의 분자 조성물에서 설프하이드릴 기의 다이설파이드로 촉매적 산화를 초래하는 제조 능력에 관련된다는 것을 발견하였다.
본 발명자들은 본 발명의 제안된 촉매의 도움에 의해 달성된 제어가능한 촉매작용을 수행할 필요를 확인하였다.
팔라듐(II)의 2핵 티올레이트-브릿지된 배위 화합물에 첨가된 구리(I)의 티올레이트 착물은 유의하게 속도가 변할 수 있지만, 티올의 산화 정도는 변하지 않는다. 예로서, 도 1은 시스템 "GSH - H2O2 - [PdII 2(μ-SG)2(NH3)4]·{CuI k(SR)m}"에서 Pd:Cu 비의 함수로서 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드(GSSG) 축적 곡선을 도시한다.
도 1에 제시된 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 구리(I) 이온에 의해 변형된 팔라듐 촉매의 촉매적 효능은 Pd:Cu 비가 1:0 내지 1:2로 변함에 따라 증가된다.
Cu2 + 이온은 그 자체가 티오아미노산의 산화를 효과적으로 촉매할 수 있어서 그것에 -S-S- 결합을 형성한다는 것이 잘 알려져 있다. 따라서, 제안된 Pd-Cu 이원 촉매 시스템에서 Pd:Cu 비의 변화 영역을 확인하기 위하여, 본 발명자들은 팔라듐(II)의 2핵 티올레이트-브릿지된 착물, 구리(I)의 티올레이트 착물, 및 그것의 상호연동의 촉매적 효능을 개별적으로 고려하였다.
2핵 팔라듐 착물에 의한 티올의 산화
티올 RSH의 촉매적 산화에서, 팔라듐의 가장 중요한 기능 중 하나는 그것의 이후의 산화 및 배위 다면체의 붕괴에 의한 팔라듐 이온에 대한 배위 착물-티올레이트 이온 RS-의 첨가 생성물-의 형성이다.
금속의 배위 구체에 리간드로서 유입되는 티올레이트 이온의 공간 근접성은 2핵 팔라듐(II) 착물에서 용이하게 달성될 수 있는데, 여기서 티올레이트 이온 RS-는 바이덴테이트 브릿지 배위를 취하여서, Pd2 II(μ-SR)2 골격의 형성을 야기한다.
티올레이트 이온의 산화에 대해, 본 발명자들은 팔라듐(II) - [Pd2(μ-OH)2(NH3)4]2+의 2핵 하이드록소-브릿지된 암모늄 착물의 참여에 의한 촉매적 주기를 고려하는데, 이에 대해 다음의 반응이 우세한 것으로 시험되었다:
[Pd2(μ-OH)2(NH3)4]2++2RSH . [Pd2(μ-SR)2(NH3)4]2++2H2O (5)
[Pd2(μ-SR)2(NH3)4]2++H2O2 . {[Pd2(μ-SR)2(NH3)4(OH)2]2+}# (6)
{[Pd2(μ-SR)2(NH3)4(OH)2]2+}# . [Pd2(μ-OH)2(NH3)4]2++RSSR (7)
식 (5) 및 (7)은 촉매 [Pd2(μ-OH)2(NH3)4]2+가 소모되고 한번 더 재생되는 단계를 구성한다. 반응식 (6)은 불안정 중간체 팔라듐 착물 {[Pd2(μ-SR)2(NH3)4(OH)2]2+}의 형성에 의해 가능한 주요 단계이다.
양자 화학 계산은, 과산화수소에 의한 2핵 금속 골격 Pd2 II(μ-SR)2의 산화에서, 중간체 2금속성 화합물의 대부분의 에너지-효율이 단일 팔라듐 원자에 OH 기 둘 다의 첨가라는 것을 나타내는데, 이는 골격 PdIIPdIV(μ-SR)2를 갖는 2핵 혼합-원자가 착물로서 중간체를 고려하는 것을 가능하게 한다. 이 골격은 환원될 때, 차례로 티올레이트 브릿지 기를 산화시킨다.
배위 화합물의 양자 화학 계산은 프로그램 재규어(Jaguar) 7.5에 의해 6-31G** 염기에서 DFT B3LYP의 방법에 의해 수행되었다. Pd 원자에 대해, 본 발명자들은 대응되는 원자가 염기를 갖는 HW 골격의 효과적인 유사퍼텐셜(pseudopotential)을 사용하였다. 정상 진동의 주파수 분석은 모든 화합물의 구조가 잠재적인 에너지 표면 상에서 최소로 기체 상에 대응되는 기하학의 최적화에 의해 얻어진다는 것을 나타내었다. 화합물의 용매화 에너지는 분극성 연속체 모델(polarizable continuum model)에서 계산되었다. 기본 작용의 수를 감소시키기 위하여, 글루타티온, 아세틸시스테인, 또는 티오글라이콜산 RSH의 분자는 대부분의 구성요소 티올, CH3SH에 의해 모델링되었다.
중간체 배위 화합물 PdIIPdIV의 불안정에 대한 이유는 내부 구체에서 산화제(이온 PdIV) 및 환원제(리간드 μ-SR)의 존재와 관련되는데, 이는 구체내 산화환원 과정을 유발한다. 이 과정은 이온 PdIV에 티올 배위 브릿지 쌍으로부터 2개 전자의 동시발생 전달을 포함하는데, 이는 Pd-SR 브릿지 결합의 파괴 및 다이설파이드 R2S2에 2개 티올 라디칼 RS·의 결합을 야기한다. 나중에, 환원된 팔라듐 다이머의 배위 구체에서, 브릿지 위치 내로 사전에 PdIV에 배위된 리간드 OH-의 분자내 재그룹화가 일어난다. 결과는 화합물 [Pd(NH3)2(μ-OH)]2 2+의 형성인데, 이는 고려사항 하에서 촉매적 주기의 시작이다(반응식 1).
[반응식 1]
Figure pct00001
과산화수소(O2 또는 임의의 다른 산화제)의 부재시, 2핵 티올레이트-브릿지된 팔라듐(II) 착물의 수용액은 티오아미노산의 산화를 촉매하지 않는다는 것이 주목되어야 한다.
과산화수소에 의한 글루타티온(GSH)의 산화 과정에서 화합물 [Pd2(μ-SG)2(NH3)4]2+의 촉매 기능의 효능 평가는 고-효율 액체 크로마토그래피(high-efficiency liquid chromatography: HELC) 방법에 의해 수행되는데, 이는 현재 사용되는 시스-[Pt(NH3)2Cl2]의 촉매적 효능보다 더 큰(~ 30%) 촉매적 효능을 나타내었다.
구리(I) 착물에 의한 티올의 산화
CuCl2 또는 CuBr2와 같은 구리(II)의 단순 염이 수용액에 위치될 때, 그것들은 수화되고, 후속하여 가수분해 및 구리(II)의 올리고핵 아쿠아하이드록소-착물의 형성을 수반한다.
티올을 함유하는 수용액 중에서 이들 구리(II)의 아쿠아하이드록소-착물은 거의 즉각적으로 환원되며, 구리(I)의 티올레이트 착물-CuI k(SR)m을 형성하는데, 여기서 k = 2 내지 14이고, m ≥ 3k이다. CuI k(SR)m의 조성 및 구조는 가장 다양한 특성을 가질 수 있는데, 2핵(k = 2) 내지 14-고리(k =14) 배위 화합물의 범위에 있으며; 흔치 않게는, 상이한 구조의 화합물의 혼합물이 형성된다. 그러나, 이들 착물의 조성 및 구조가 무엇이든지, 그것들은 모두 임의의 주어진 산화제 작용하에, 매우 약한 산화제일지라도 -S-H 기의 다이설파이드 브릿지 -S-S-로 산화 과정을 촉매한다.
예로서, 도 2는 2핵 팔라듐 착물 [Pd2(μ-SG)2(NH3)4]2+와 비교하여 과산화수소에 의한 과산화수소의 산화 반응에서 CuI k(SR)m 착물의 상대적인 촉매적 유효성의 조사 결과를 나타낸다.
도 2에 제시된 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, CuI k(SR)m 착물은 산과 과정의 촉매로서 현저히 더 효율적으로 작용한다. 그러나, CuI k(SR)m 착물을 함유하는 글루타티온 다이설파이드의 수용액은, 1H NMR, IR 분광법 및 HELC 데이터에 따라 불안정하며, 호기성 조건에서, 얻어진 다이설파이드의 더 철저한 산화 과정은 30 내지 60분에 시작된다. 이는 티올의 그것의 다이설파이드 형태로 산화의 선택적 촉매로서 CuI k(SR)m 배위 화합물을 사용하는 것을 사실상 불가능하게 한다.
Cu - Pd 촉매의 사용에 의한 티올의 산화
구리-팔라듐 촉매 [Pd2 II(μ-SR)2(NH3)4]·{CuI k(SR)m}의 사용에 의한 촉매적 시스템의 실험적 연구는 2핵 티올레이트-브릿지된 팔라듐(II) 화합물[Pd2 II(μ-SR)2(NH3)4]과 비교하여 훨씬 더 큰 촉매적 효능을 보여준다(도 3). 그러나 구리 CuI k(SR)m의 티올레이트 착물을 함유하는 산화된 글루타티온 GSSG의 수용액과 달리, Pd-Cu 촉매를 함유하는 수용액은 구리 원자의 농도가 1H NMR, IR 분광법 및 HELC 데이터에 따라 팔라듐 이온의 농도를 초과하지 않는 경우 분해 과정에 대해 안정하다. 놀랍게도, 호기성 조건에서 1:1 초과의 Pd:Cu 비는 GSSG의 느린 분해를 수반한다. 따라서, 단지 1:2의 Pd:Cu 비에 의해, GSSG 농도의 감소는 약 1주에 96% 수준에 도달된다.
연구는 촉매의 작업 활성을 다르게 할 필요에 따라서 Pd-Cu 촉매의 Pd:Cu 비가 1:0.2 내지 1:2의 범위에 있다는 것을 보여준다.
요약하면, GSSG로 티올 GSH의 약한 선택적 산화 과정에 대해, 팔라듐(II)의 작용성 2핵 티올레이트-브릿지된 착물이 산화 촉매의 주된 기능을 하는 반면, 구리(I)의 티올레이트 착물은 그것의 촉매적 활성을 변경시키거나, 다시 말해서, 그것의 촉매적 활성을 제어하는 화학적 부위로서 고려되어야 하는 것으로 결론지을 수 있다.
따라서, 티올 매질 내에서 구리(I) 착물의 대응되는 티올레이트 유도체로 전환되는 CuX2(X= Cl- 또는 Br-)의 구리 염으로부터 형성된 제어 부위{CuI k(SR)m}를 갖는 글루타티온 또는 아세틸시스테인의 바이덴테이트(bidentate) 브릿지 배위와 작용성 2핵 팔라듐배위 화합물 [Pd2 II(μ-SR)2(NH3)4]의 조합물은 본 발명자들에게 팔라듐 Pd2 II 및 CuI 착물에 기반한 촉매적 시스템 활성의 제어에 대해 가장 효과적인 접근 중 하나를 보여준다.
작용적 화학 부위[Pd2 II(μ-SR)2(NH3)4]와 비교하여 화학식 [Pd2 II(μ-SR)2(NH3)4]·{CuIk(SR)m}의 팔라듐-구리 촉매의 촉매적 효능의 증가는 과산화수소가 PdII 이온이 아닌, {CuI k(SR)m} 이온을 산화시킨다는 사실에 기인한다.
산화환원 반응
{CuI k(SR)m} + 2 H2O2 = {CuII k(SR)m} + 2 OH· + 2 OH-에 의해
{CuII k(SR)m}을 형성하는 화학적 제어 부위는 반응식 2에 따라 작용 부위 [Pd2 II(μ-SR)2(NH3)4]의 산화제의 부분으로 작용한다.
[반응식 2]
Figure pct00002
2가지 흔한 유형의 전이 상태는 d-구성요소, 소위 내부-구체 및 외부-구체 유형의 배위 화합물의 산화화원 반응을 위해 존재한다. 외부-구체 유형에 대해, 2가지 금속 이온의 배위 껍질은 서로를 건드리지 않는다. 내부-구체 유형에 대해, 2가지 금속 이온은 브릿지 리간드에 의해 결합되는데, 이는 배위 껍질 둘 다에 의해 공유된다.
양자 화학 계산의 결과는, 2핵 금속 골격 Pd2 II에 기반한 촉매적 시스템에서, 중간체 혼합된 Cu-Pd 이금속성 중심이 수용액 중에서 형성될 것이라는 것을 나타내는데: [CuII(μ-SR)2PdII]#(중간체), 이는 {CuI k(SR)m} 및 [PdII(μ-SR)PdIV(OH)2]로 용이하게 불균형을 이룬다.
최외각 분자 오비탈(molecular orbitals: MO)의 구조 분석은 PdII 이온만을 함유하는 2핵 착물에 기반한 것보다 혼합된 Cu-Pd 배위 화합물에 기반한 촉매적 시스템의 실험적으로 발견된 더 빠른 반응성을 설명한다.
촉매적 과정에서 금속의 원자 d-오비탈(atomic d-orbital: d-AO)의 개입은 종종 과정의 높은 활성화 에너지를 결정하는 분자 오비탈(MO)의 대칭에 의해 반응 단계에서 발생에 대한 장애를 제거한다. 대칭에 의해 금지된 반응에 대해 금속 이온에 의한 촉매작용을 설명하는 것에서 주된 생각은 전이 금속의 이온이 에너지에 대해 함께 가깝게 놓여있는 접근가능한 d-AO를 가진다는 것이다. 이는 금속 이온에 배위되는 분자가 금속의 특정 d-오비탈에 그것의 전자 쌍을 내주도록 하고, 금속의 다른 d-오비탈로부터 그것을 수용하도록 한다.
중심 CuII(μ-SR)2PdII가 있는 배위 화합물에서 최외각 MO의 특성 분석은 그것의 가장 높이 점유된 분자 오비탈(highest occupied molecular orbital: HOMO)이 z큰 정도의 구리의 d-AO로 이루어지고, 이온 PdIV를 함유하는 산화된 생성물을 형성하기에 적합하지 않다는 것을 나타낸다. 일어나는 과정에 대해, PdII의 4d-오비탈의 큰 부분과 함께 가장 낮게 점유된 분자 오비탈(lowest unoccupied molecular orbital: LUMO)에 대한 쌍을 전달하는 것이 필요하다. 이 MO 에너지의 더 작은 차이로 전이 상태를 달성하는데 더 적은 에너지 소모가 필요하다. 혼합된 2금속성 중심 CuII(μ-SR)2PdII에 의한 논의 하에 배위 화합물에서, 이들 오비탈 사이의 에너지 차이는 2.61 eV이다. 중심 PdII(μ-SR)2PdII을 갖는 배위 화합물에서, 대응하는 점유 및 미점유 오비탈의 에너지 차이는 훨씬 더 크다: 4.18 eV(PtII(μ-SR)2PtII에 대해, 4.79 eV임).
따라서, CuI 및 PdII의 일시적으로 형성된 혼합 착물에 기반한 티올의 선택적 산화를 위한 촉매 시스템은 유사한 PdII 착물을 기반으로 한 시스템보다 더 큰 활성을 가져야 한다. 이에 대한 이유는 구리 d-오비탈의 에너지 수준이다.
주기에서 중간체 2금속성 중심 [CuII(μ-SR)2PdII]#의 형성은 식 [Pd2 II(μ-SR)2(NH3)4] {CuI k(SR)m}의 촉매의 촉매적 유효성 증가를 설명하는 한편, 활성 2금속성 중심 [CuII(μ-SR)2PdII]#의 적절하게 결정된 수는 팔라듐-구리 촉매의 전반적인 활성을 변화시킬 수 있다.
본 발명의 제안된 촉매는 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 및/또는 N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드와 결합될 수 있는데, 이는 천연 생물학적 활성화 촉매적 활성을 둘 다 갖는 조합물을 형성한다. 과량의 티올은 촉매반응의 주기에 필요한 물질을 제조함과 동시에 적은, 매우 적은 양의 촉매를 즉시 제조하고 이용하게 한다.
제제의 구성에서 N-아세틸-시스테인 및/또는 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드의 유리 분자는 양이온성 또는 음이온성 형태, 또는 중성 분자 형태일 수 있다.
반대이온은 무기 이온, 예컨대 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 셀레늄, 망간, 아연, 바나듐 및 기타 화학 원소, 또는 유기 화합물의 이온, 예컨대 생물학적 활성을 지니는 다양한 화학기로부터 유래된 유기 분자의 아미노산, 지방족 및 방향족 이온일 수 있다(실시예 12).
본 발명에 따른 조합물은 또한 다른 약학적으로 활성인 화합물, 특히 퓨린 및/또는 피리미딘 염기, 이들의 유도체 또는 이들에 기반한 화합물을 함유할 수 있다(실시예 10 및 11).
약학적으로 활성인 화합물은 의학적 및/또는 생물학적으로 활성인 물질의 분자, 특히 퓨린 및/또는 피리미딘 염기 및 그것에 기반한 화합물, 예컨대: 아데노신(9-β-D-리보푸라노실아데닌), 구아노신(9-β-D-리보푸라노실구아니딘), 데스옥시아데노신(9-β-D-데스옥시리보푸라노실아데닌), 데스옥시구아노신(9-β-D-데스옥시리보푸라노실구아니딘), 9-β-D-리보푸라노실아데닌 모노, 다이, 트라이포스페이트, 9-β-D-리보푸라노실구아니딘 모노, 다이, 트라이포스페이트, 9-β-D-데스옥시리보푸라노실아데닌 모노, 다이, 트라이포스페이트(코디세핀), 9-β-D-데스옥시리보푸라노실구아니딘 모노, 다이, 트라이포스페이트, 사이티딘(4-아미노-1-[3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일]피리미딘-2-온), 1-[(2R,4S,5R)-4-하이드록시-5-(하이드록시)테트라하이드로푸란-2-일]-5-피리딘-2,4-다이온, 데스옥시사이티딘 (4-아미노-1-[4-하이드록시-5-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-일]피리미딘-2-온), 티미딘 또는 데스옥시티미딘 1-[(2R,4S,5R)-4-하이드록시-5-(하이드록시)테트라하이드로푸란-2-일]-5-메틸피리딘-2,4-다이온, 이노신 9-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)옥솔란-2-일]-6,9-다이하이드로-3H-퓨린-6-온, 리바베린: 1-(3,4-다이하이드록시-5-하이드록시메틸-테트라하이드로푸란-2-일)-1H-[1,2,4]트라이아졸-3-카복실산 아마이드, 자나미비어 (2R,3R,4S)-4-[(다이아미노메틸리덴)아미노]-3-아세트아미도-2-[(1R,2R)-1,2,3-트라이하이드록시프로필]-3,4-다이하이드로-2H-피란-6-카복실산, 팜사이클로비어: 2-[2-(2-아미노-9H-퓨린-9-일)에틸]-1,3-프로판다이올 다이아세테이트(에스터), 간사이클로비어: (2-아미노-1,9-다이하이드로-9-2-하이드록시-1-(하이드록시메틸)에톡시메틸-6H-퓨린-6-온), 지도뷰딘(3'-아자이도-3'-데스옥시티미딘), 아사이클로비어: 2-아미노-9-((2-하이드록시에톡시)메틸)-1H-퓨린-6(9H)-온, 플루오르유라실: 5-플루오로-1H-피리미딘-2,4-다이온, 1-(2,3-다이데스옥시-베타-D-글라이세로펜트-2-에노푸라노실) 티미딘, 플루오로티오유라실: 5-플루오로-1H-피리미딘-2-티온-4-온, 티오유라실: 1H-피리미딘-2-티온-4-온, S-아데노실호모시스테인: 4[5-(6-아미노-퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시-테트라하이드로-푸란-2-일메틸설파닐]-2-머캅토-뷰타논산, S-아데노실메티오닌: (2S)-2-아미노-4-[[(2S,3S,4R,5R)-5-(6-아미노퓨린-9-일)-3,4-다이하이드록시옥솔란-2-일]메틸-메틸설포니오]뷰타노에이트, 사이클릭 아데노신 모노포스페이트(cAMP) 6-(6-아미노-퓨린-9-일)-2-옥소-테트라하이드로-2λ-5-퓨로[3,2-d][1,2,3]d-아이소옥소포스피닌-2,7다이올, 8-클로로-cAMP: 6-(6-아미노-8 클로로-퓨린-9-일)-2-옥소테트라하이드로-2λ-5-퓨로[3,2-d][1,2,3]d-아이소옥소포스피닌-2,7다이올, N6,2'-O-다이뷰티릴-8-SH-cAMP, N6,2'-O-다이뷰티릴-8-SH-cAMP, 사이클리칼 구아노신모노포스페이트 cGMP, N6-모노뷰티릴-8-S-메틸-cAMP, 포미신: 2-(7-아미노-1P-피라졸로 [4,3-d] 피리미딘-3-일)-5-하이드록시메틸-테트라하이드로푸란-3,4-다이올, -메틸아이소구아노신: 6-아미노-1-메틸-1,9-다이하이드로-퓨린-2-온을 구성하는 치료적 목적으로 사용된 임의의 물질을 의미한다.
약학적으로 활성인 화합물은 반데르발스 힘(이온 결합, 수소 결합 및 다른 비공유 결합)에 의해 과량의 N-아세틸-시스테인 및/또는 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드에 결합될 수 있다.
본 발명에 따른 조합물은, (N-아세틸-시스테인 및/또는 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신의) 다이설파이드 및 약학적으로 활성인 물질로부터 본 발명의 팔라듐-구리 촉매의 화학적 특성의 특징을 고려하여, 당업계에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 바람직하게는, 제조에서 본 발명에 따른 촉매의 공유는 지방족 티올-N-아세틸-시스테인 및/또는 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신의 다이설파이드의 몰 당 1·10-2 내지 1·10-7 g이다.
본 발명에 따라 제안된 팔라듐-구리 촉매 또는 본 발명의 촉매적 조합물은 퓨린 및/또는 피리미딘 염기 또는 그것에 기반한 유도체의 치료적 활성을 강화하기 위하여 사용될 수 있다. 본 명세서의 내용에서, 약학적으로 활성인 화합물의 치료적 효능의 증가는 1회 또는 섭생 용량의 저하, 또는 전반적인 독성의 저하 및 이 약학적으로 활성인 화합물에 대해 보통의 치료적 용량 이하로 부여되는 더 확연한 치료적 효과의 달성이다.
본 발명에 따른 팔라듐-구리 촉매, 본 발명에 따른 촉매적 조합물 및 약학적 조합물은 약제학적 조성물의 형태로 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물을 얻기 위해, 약제학적으로 허용가능한 부형제를 사용한다. 특히, 이들은 무리 또는 무기 비히클이다. 예를 들어 정제, 껍질-코팅된 정제, 로젠지 및 경질 젤라틴 캡슐과 같이 락토스, 옥수수 전분 또는 그것의 유도체, 탈크, 스테아르산 또는 그것의 염 등이 사용될 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐에 대한 적합한 비히클은, 예를 들어 식물성 오일, 왁스, 지방, 반고체 및 액체 폴리올 등이 있다. 용액 및 시럽을 생성하는데 적합한 비히클은, 예를 들어 물, 폴리올, 사카로스, 전화당, 글루코스 등이 있다. 좌약에 대한 적합한 비히클은, 예를 들어 천연 또는 고형화된 오일, 왁스, 지방, 반고체 또는 액체 폴리올 등이다.
게다가, 약제학적 조성물은 보존제, 가용화제, 안정제, 향미제, 에멀젼화제, 감미제, 착색제, 중화제, 삼투압 조절제, 완충제, 가리움제 또는 항산화제 및 다른 필수 성분을 함유할 수 있다.
본 발명에 따른 팔라듐-촉매 또는 촉매적 조합물 및 효능이 강화된 약학적으로 활성인 물질은 동일한 제형으로 또는 별개의 제형으로 제공될 수 있다. 별개의 제형으로 그것들을 투여하는 것은 동시에(정제와 같은 2개의 고체 제형을 동시에 취함, 동시 주사, 특히 동일 주사기에서) 또는 연속적으로, 환자에게 하나의 제형이 우선 부여되거나 투여된 다음, 다른 제형이 부여되거나 투여될 때, 행해질 수 있다. 투여 사이의 간격은 상승적 효과가 관찰되는 시점까지 증가될 수 있지만, 바람직하게는 1시간 이하이다. 최적의 투여 순서는 효능이 강화된(흡수 속도, 분포, 제거속도, 세포 또는 기관 자극반응적(tropic) 또는 전신 자극반응적 특징) 약학적으로 활성인 물질의 약동학 및 약력학이 의존하며, 각각의 특정 물질에 대해 개개로 선택될 수 있다.
투여된 팔라듐-구리 촉매의 양은 촉매 조성물에서 Pd 및 Cu의 질량 공유에 의해 결정되는데, 이는 각 금속에 대한 매일의 필요량 이하일 수 있다. 다르게는, 배위 화합물의 조성물로 투여된 d-금속의 양은 치료 결과를 달성하기 위한 필요에 따라 결정된다.
치료 결과는 환자 체중의 ㎏ 당 1·10-3 내지 1·10-8 g의 양으로 촉매를 투여함으로써 달성될 수 있는데, 이는 체중의 ㎏ 당 다이설파이드의 1×10-2 내지 1×10-5 몰의 조합량으로 다이설파이드의 양을 변환시킨다.
일반적으로, 본 발명에 따른 모든 생성물 및 방법은 본 명세서에 개시되거나 또는 선행 기술로부터 당업자에게 공지된 임의의 적합한 성분 및 단계를 대안적으로 포함하고, 이루어지거나 또는 본질적으로 이루어지고, 본 발명에 따른 이러한 생성물 또는 방법은 추가적으로 또는 대안적으로 선행기술로부터 공지된 생성물 또는 방법에서 사용되거나 또는 본 발명의 기술적 결과를 달성하는데 필수적이지 않은 임의의 주어진 성분 또는 단계 또는 대상을 제외할 수 있다.
실시예
본 발명은 구체적 실시예에 의해 이하에 설명할 것이다.
실시예 1. N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신(GSH)과 팔라듐의 암모니아화된 착물에 기반한 Pd-Cu 촉매의 생성
50㎎(237 mc㏖)의 시스-[Pd(NH3)2Cl2]를 75㎎(244 mc㏖)의 GSH를 함유하는 10㎖ 용액에 넣었고, 연한 황색 용액이 형성될 때까지 초음파욕 내에서 균질화시켰다. 얻은 시스템을 20㎎(117 mc㏖)의 CuCl2.2H2O를 함유하는 5㎖의 용액에 부었고, 얻어진 연한 녹색 용액의 pH를 수산화나트륨 용액(~ 0.01M)으로 5.0 내지 5.2로 보정하였다.
얻은 촉매 용액을 사용하여 수용성 티올(예를 들어, GSH 또는 아세틸시스테인)의 산화를 수행할 수 있다.
얻은 촉매 용액에서, 팔라듐 대 구리의 몰비는 2:1이다.
실시예 2. 글루타티온과 팔라듐(II)의 암모니아화된 착물에 기반한 Pd-Cu 촉매의 생성 및 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드(GSSG)의 합성을 위한 그것의 사용.
단계 1. 글라이실시스테이닐 글루타메이트와 팔라듐(II)의 암모니아화된 착물의 생성
10㎎(47.3 mc㏖)의 시스-[Pd(NH3)2Cl2]를 10 내지 15㎖의 증류수 중에서 분산 냉각시키고, 얻어진 현탁액에 145㎎(0.473 m㏖)의 GSH를 첨가하고, 균일의 연한 황색 용액이 얻어질 때까지 마그네틱 블렌드에서 혼합을 행한다.
단계 2. Pd-Cu 촉매의 생성
이전에 얻은 반응 혼합물을 8.06㎎(47.3 mc㏖)의 염화 구리(II) 2수화물을 함유하는 5㎖의 용액에 붓는다. 얻어진 연두색 촉매 용액의 pH를 0.01M 수산화나트륨 용액에 의해 5.5 내지 5.8로 만들었다.
단계 3. GSSG의 합성을 위한 Pd-Cu 촉매 시스템의 사용
유리에 29.09 g(0.946 m㏖)의 GSH를 칭량하고, 쏟아 부은 한편, 150 내지 200㎖의 증류수와 혼합하고, 10 내지 15℃로 냉각시켰다. 개별적으로, 50-60㎖의 증류수 중에서 3.78 g의 NaOH(0.946 m㏖)를 용해시키고, 얻어진 용액을 집중적인 혼합 하에 GSH의 현탁액에 부었고, 15 내지 20℃ 이상으로 반응물을 가열시키지 않으며, 투명한 균일 용액을 얻을 때까지 혼합한다. 반응 혼합물의 pH를 0.1M의 수산화나트륨 용액으로 5.5 내지 5.8로 보정한다. 얻어진 반응 시스템을 사전에 제조한 촉매 용액에 쏟아 붓고, 50㎖의 1M 갓 제조한 과산화수소 용액을 집중적인 혼합과 함께 적은 부분으로 부었으며, 반응 혼합물을 15℃ 이상으로 가열시키지 않는다. HELC에 의해 반응을 완료에 대해 모니터링한다.
반응의 완료 및 멸균 여과 후, 용액을 냉동시키고, 감압 승화(동결 건조) 건조를 실시한다.
얻은 제제에서 "N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드 - 팔라듐 - 구리의 나트륨 염"의 몰비는 1000 - 1 - 1이다.
실시예 3. N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신(GSH)과 팔라듐(II)의 암모니아화된 착물에 기반한 Pd-Cu 촉매의 생성 및 리보푸라노실하이포잔틴 2나트륨의 글라이실시스테이닐 글루타메이트(glycylcysteinyl glutamate of disodium ribofuranosylhypoxantin)를 얻기 위한 그것의 사용.
단계 1. GSH와 팔라듐(II)의 암모니아화된 착물의 생성
20㎎(94.6 mc㏖)의 시스-[Pd(NH3)2Cl2]을 20㎖의 증류수 중에서 분산 냉각시키고, 얻어진 현탁액에 30㎎(97.6 mc㏖)의 GSH를 첨가하고, 균일한 연한 황색 용액이 얻어질 때까지 혼합을 행한다.
단계 2. Pd-Cu 촉매의 생성
사전에 얻은 반응 혼합물을 14.52㎎(85.2 mc㏖)의 염화 구리(II) 2수화물을 함유하는 5㎖ 용액에 붓는다. 얻어진 연두색 촉매 용액의 pH를 0.01M 수산화나트륨 용액에 의해 5.5 내지 6.0으로 만들었다.
단계 3. 리보푸라노실하이폭산티 2나트륨의 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신을 얻기 위한 Pd-Cu 촉매 시스템의 사용
유리에 58.19 g(0.189 ㏖)의 GSH를 칭량하고, 쏟아 부은 한편, 200㎖의 증류수와 혼합하고, 10 내지 15℃로 냉각시켰다. 개별적으로, 50-60㎖의 증류수 중에서 7.57 g의 NaOH(0.189 m㏖)를 용해시키고, 얻어진 용액을 집중적인 혼합 하에 GSH의 현탁액에 부었고, 15 내지 20℃ 이상으로 반응물을 가열시키지 않으며, 투명한 균일 용액을 얻을 때까지 혼합한다. 반응 혼합물의 pH를 0.1M의 수산화나트륨 용액으로 5.5 내지 6.0으로 보정한다. 얻어진 반응 시스템을 사전에 제조한 촉매 용액에 쏟아 붓고, 유리를 빙욕(5 내지 10℃)에 옮기며, 100 내지 102㎖(~ 0.1 ㏖)의 1M로 갓 제조한 과산화수소 용액을 집중적인 혼합과 함께 45 내지 60분의 과정에 걸쳐 적은 부분으로 부었다. HELC 방법에 의해 반응을 완료에 대해 모니터링한다.
별개로, 150㎖의 뜨거운 증류수(60-70℃) 중에 25.38 g(0.095 ㏖)의 리보푸라노실하이포잔틴(이노신)을 용해시킨다. 용해의 완료 후, 용액을 실온으로 냉각시키고, 반응 혼합물에 붓는다. 멸균 여과 후, 용액을 냉동시키고, 감압 승화(동결 건조) 건조시킨다.
얻어진 제제에서 GSSG-이노신-팔라듐-구리의 몰비는 1000-1000-1-0.9이다.
실시예 4. N-아세틸-L-시스테인과 팔라듐(II)의 2핵 배위 화합물의 암모니아화된 유도체에 기반한 Pd-Cu 촉매의 생성.
120㎎(568 mc㏖)의 시스-[Pd(NH3)2Cl2]를 균일한 황색 용액이 형성될 때까지 N-아세틸-L-시스테인(648.5 ㎎, 3.97 m㏖)의 20㎖ 수용액 중에서 초음파 용에서 분산시킨다. 얻어진 시스템을 48.4㎎(284 mc㏖)의 CuCl2.2H2O를 함유하는 5㎖의 용액에 붓는다. 침전시킨 백색 침전물을 용해하는 한편, 반응 시스템을 0.1M 수산화나트륨 용액에 의해 pH 4.5 내지 5.0으로 알칼리성으로 만든다.
얻어진 연두색 촉매 용액을 사용하여 수용성 티올(예컨대 환원된 글루타티온 또는 아세틸시스테인)을 산화시킬 수 있거나 또는 사용 후 동결건조시킬 수 있다.
얻어진 촉매 용액 중의 팔라듐과 구리 양의 몰비는 2:1이다.
실시예 5. Pd(II)와 N-아세틸-L-시스테인의 2핵 배위 화합물의 암모니아화된 유도체에 기반한 Pd-Cu 촉매의 생성 및 N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 나트륨 염의 합성을 위한 그것의 사용
단계 1. N-아세틸-L-시스테인과 팔라듐(II)의 암모니아화된 착물의 생성
16㎎(75.7 mc㏖)의 시스-[Pd(NH3)2Cl2]를 균일한 황색 용액이 얻어질 때까지 N-아세틸-L-시스테인(123.5 ㎎, 757 mc㏖)의 20㎖ 수용액 중의 초음파 욕에서 분산시킨다.
단계 2. Pd-Cu 촉매의 생성
얻어진 용액을 6.5㎎(37.8 mc㏖)의 CuCl2.2H2O를 함유하는 5㎖ 용액 중에 붓는다. 얻어진 촉매 용액을 수산화리튬의 포화 용액에 의해 pH 4.5 내지 5.0으로 알칼리화한다.
단계 3. N-아세틸-L-시스테인의 나트륨 염을 얻기 위한 Pd-Cu 촉매 시스템의 사용
250㎖의 증류수에 24.7 g(0.151 ㏖)의 N-아세틸-L-시스테인을 용해시키며, 촉매 용액을 그것에 붓고, 6.35 g(0.151 ㏖)의 수산화나트륨과 집중적인 혼합 하에서 얻어진 용액에 첨가한다. H2O 중에서 NaOH를 완전하게 용해시킨 후, 용액의 pH를 수산화나트륨의 포화 용액에 의해 5.5 내지 6.0으로 보정하고, 10 내지 15℃로 냉각시킨다.
냉각 상태에서 소량으로 집중적인 혼합 하에 과산화수소(~80 ㎖)의 1M 용액을 얻어진 용액에 첨가하고, 반응 혼합물의 반응 온도를 15 내지 20℃ 이상으로 상승시키지 않는다. HELCB 방법에 의해 반응을 완료에 대해 모니터링한다.
반응의 완료 및 멸균여과 후, 용액을 냉동시키고, 감암 승화(동결 건조) 건조를 실시한다.
얻어진 제제 내 "N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드 - 팔라듐 - 구리의 나트륨 염"의 몰 비는 1000 - 1 - 0.5이다.
실시예 6. N-아세틸-L-시스테인과 Pd(II)의 2핵 배위 화합물의 암모니아화된 유도체에 기반한 Pd-Cu 촉매의 생성 및 N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 리튬 염의 합성을 위한 그것의 사용
단계 1. N-아세틸-L-시스테인과 팔라듐(II)의 암모니아화된 착물의 생성
16㎎(75.7 mc㏖)의 시스-[Pd(NH3)2Cl2]는 균일한 황색 용액이 얻어질 때까지 N-아세틸-L-시스테인(123.5 ㎎, 757 mc㏖)의 20㎖ 수용액 중의 초음파 욕에서 분산시킨다.
단계 2. Pd-Cu 촉매의 생성
얻어진 용액에 6.5㎎(37.8 mc㏖)의 CuCl2.2H2O를 함유하는 5㎖의 용액을 붓는다. 얻어진 촉매 용액을 수산화리튬의 포화 용액에 의해 pH 4.5 내지 5.0으로 알칼리화한다.
단계 3. N-아세틸-L-시스테인의 리튬 염을 얻기 위한 Pd-Cu 촉매 시스템의 사용
250㎖의 증류수에 24.7 g(0.151 ㏖)의 N-아세틸-L-시스테인을 용해시키며, 촉매 용액을 그것에 붓고, 집중적인 혼합 하에 6.35 g(0.151 ㏖)의 수산화리튬 1수화물을 얻어진 용액에 첨가한다. LiOH·H2O의 완전한 용해 후, 용액의 pH를 수산화리튬의 포화 용액에 의해 5.5 내지 6.0으로 보정하고, 10 내지 15℃로 냉각시킨다.
차가운 상태에서 얻어진 용액에 소량으로, 과산화수소(~80 ㎖) 1M 용액을 집중적인 혼합 하에 첨가하고, 반응 혼합물의 온도를 15 내지 20℃로 상승시키지 않는다. 반응을 HELCB 방법에 의해 완료에 대해 모니터링한다.
반응의 완료 및 멸균여과 후, 용액을 냉동시키고, 감암 승화(동결 건조) 건조를 실시한다.
얻어진 제제 내 "N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드 - 팔라듐-구리의 리튬 염"의 몰 비는 1000 - 1 - 0.5이다.
실시예 7. N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드 (GSH)와 Pd(II)의 2핵 배위 화합물의 암모니아화된 유도체에 기반한 Pd-Cu 촉매의 생성 및 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드의 리튬 염의 합성을 위한 그것의 사용
단계 1. GSH와 팔라듐(II)의 암모니아화된 착물의 생성
21.1㎎(100 mc㏖)의 시스-[Pd(NH3)2Cl2]를 균일한 황색 용액이 얻어질 때까지 GSH(307.5 ㎎, 1 m㏖)의 20㎖ 수용액 중의 초음파 욕에서 분산시킨다.
단계 2. Pd-Cu 촉매의 생성
얻어진 용액을 34.1㎎(200 mc㏖)의 CuCl2.2H2O를 함유하는 5㎖의 용액에 붓는다. 얻어진 촉매 용액을 수산화리튬의 포화 용액에 의해 pH 5.0 내지 5.5로 알칼리화한다.
단계 3. N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 다이설파이드의 리튬 염을 얻기 위한 Pd-Cu 촉매 시스템의 사용
400-500㎖의 증류수에 61.5 g(0.2 ㏖)의 GSH를 용해시키고, 촉매 용액을 붓고, 얻어진 용액에 8.39 g(0.2 ㏖)의 수산화리튬 1수화물을 집중적인 혼합 하에 첨가한다. LiOH·H2O의 완전한 용해 후, 용액의 pH를 수산화리튬의 포화 용액에 의해 5.5 내지 5.8로 보정하고, 10-15℃로 냉각시킨다.
차가운 상태로 얻어진 용액에 과산화수소(~110 ㎖)의 1M 용액을 소량으로 집중적인 혼합 하에 첨가하고, 반응 혼합물의 온도를 15℃ 이상으로 상승시키지 않는다. 반응을 HELCB 방법에 의해 완료에 대해 모니터링한다.
반응의 완료 및 멸균여과 후, 용액을 냉동시키고, 감압 승화(동결건조) 건조 시킨다.
얻어진 제제 내 "N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드 - 팔라듐 - 구리의 리튬 염"의 몰 비는 1000 - 1 - 2이다.
실시예 8. N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신(GSH)과 Pd의 2핵 배위 화합물의 암모니아화된 유도체에 기반한 촉매의 생성 및 글라이실시스테이닐 글루타메이트 1-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)옥솔란-2-일]-1H-1,2,4-트라이아졸로-3-카복시아마이드의 다이설파이드(GSSG - 리바비린)의 합성을 위한 그것의 사용
단계 1. GSH와 팔라듐(II)의 암모니아화된 착물의 생성
20㎎(94.6 mc㏖)의 시스-[Pd(NH3)2Cl2]를 균일한 황색 용액이 얻어질 때까지 GSH(291 ㎎, 947 mc㏖)의 20㎖ 수용액 중의 초음파 욕에서 분산시킨다.
단계 2. Pd-Cu 촉매의 생성
얻어진 용액을 24.2㎎ (142 mc㏖)의 CuCl2.2H2O를 함유하는 5㎖의 용액에 붓는다. 얻어진 촉매 용액을 수산화리튬의 0.01M 용액에 의해 pH 5.5 내지 8.0으로 알칼리화한다.
단계 3. GSSG - 리바비린을 얻기 위한 Pd-Cu 촉매 시스템의 사용
400-500㎖의 증류수에 87.3 g (0.284 ㏖)의 GSH를 용해시키고, 50㎖의 물 중에서 촉매 용액 및 11.35 g(0.284 ㏖)의 수산화나트륨 용액을 혼합하면서 붓는다. 용액의 pH를 수산화나트륨의 0.1M 용액에 의해 5.5 내지 5.8로 보정하고, 10-15℃로 냉각시킨다.
차가운 상태로 얻어진 용액에 과산화수소(~150 ㎖)의 1M 용액을 소량으로 집중적인 혼합 하에 첨가하고, 반응 혼합물의 온도를 15℃ 이상으로 상승시키지 않는다. 반응을 HELCB 방법에 의해 완료에 대해 모니터링한다.
별개로, 100 내지 150㎖의 뜨거운 증류수(60-70℃) 중에 34.65 g(0.142 ㏖) 의 리바비린을 용해시킨다. 용해의 완료 후, 용액을 실온으로 냉각시키고, 반응 혼합물에 붓는다.
반응의 완료 및 멸균여과 후, 용액을 냉동시키고, 감압 승화(동결건조) 건조 시킨다.
얻어진 제제 내 GSSG - 리바비린-팔라듐-구리의 몰 비는 1000 - 1000 - 1- 1.5이다.
실시예 9. 세포 성장에서 작용할 때 백금 화합물과 팔라듐-구리 촉매의 생물학적 활성 및 독성의 비교 평가
백금 화합물은, 면역계의 세포 효과기에 의한 사이토카인의 생성시 그것의 자극 작용의 중심부에 놓이는 펩타이드 특성의 분자의 설프하이드릴 기의 산화적 변형 반응에서 촉매 작용, 항생제에 대한 다재 약물 내성 반응의 선택적 억제 및 다수의 만성 및 사회적으로 중요한 질병 - 건선, 신경퇴행성 및 바이러스성 질병의 중심부에 놓여 있는 자가면역 반응의 발생을 억제하는 능력에 기인하여 약학적 활성을 가진다.
따라서, 백금 화합물은 약학적 용액에서 후에 추구되는 다수의 고유한 특성을 가지며, 펩타이드 특성 분자의 설프하이드릴 기의 산화적 변형 반응에서 촉매 기능에 의해 좌우된다. 그러나 백금 화합물은 높은 독성을 지니는데, 이것의 메커니즘은 촉매적 활성과 관련된다. 백금 화학 화합물의 독성은 급성일 수 있으며, 즉, 백금을 함유하는 물질은 일단 최대로 허용가능한 백금 농도가 초과되면, 신체 내로 투여되거나 또는 들어오는 것이 다소 빠른 것으로 나타났다. 백금이 최대로 허용가능한 농도 미만의 물질의 구성에 투여될 때, 다양한 기관의 조직에서 백금의 점진적 구성이 생길 수 있다. 이 경우에, 백금 화합물의 독성 작용은 이후에 나타나거나, 또는 특징적 중독 패턴과 함께 전혀 나타나지 않지만, 백금의 돌연변이 유발 작용은 악성종양을 발생시키는 원인으로서 작용할 수 있다.
지방족 티올(N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 - GSH, N-아세틸-L-시스테인) 및 d-금속 팔라듐 및 구리의 배위 화합물에 기반한 합성 촉매(실시예 1, 실시예 4)는 또한 백금의 배위 화합물에 특유한 약학적으로 바람직한 티올-함유 분자 및 펩타이드 특성 분자의 구성에서 티올의 화학적 산화 반응의 촉매적 활성을 특징으로 한다. 팔라듐 및 구리 화합물은 백금 화합물과 비교하여 독성이 아니며, 본래의 돌연변이유발 또는 기형발생 작용이 없다. 백금 화합물의 촉매적 활성이 약학적으로 바람직한 효과(백금 화합물의 독성 작용이 바람직한 암 질병의 화학치료를 포함)에 관해 부여되면, 지방족 티올 GSH, N-아세틸-L-시스테인 및 d-금속 팔라듐 및 구리 배위 화합물의 생물학적 효과와 백금 배위 화합물의 생물학적 활성을 비교하는 것이 필요하였다. A431 세포를 배위 화합물에 대한 노출 대상으로서 선택하였다. 지방족 티올과 백금 배위 화합물 작용의 생화학적 양태를 그것에서 철저하게 조사하였다. 세포 반응의 특성으로 GSH 및 d-금속 팔라듐 및 구리, N-아세틸-L-시스테인 및 d-금속 팔라듐 및 구리, 및 산화된 글루타티온 및 백금의 배위 화합물에 기반한 촉매의 세포 상에서 작용의 유사성 및/또는 차이점을 평가한다.
작업 목표. 세포 배양물의 성장에서 지방족 티올 GSH, N-아세틸-L-시스테인, 및 d-금속 팔라듐 및 구리의 배위 화합물, 및 산화된 글루타티온 및 백금의 배위 화합물에 기반한 촉매 영향의 연구.
화합물은 지방족 티올 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 및 d-금속 팔라듐 및 구리의 배위 화합물(화합물 1, 실시예 1, 실시예 2의 설명에 따라 합성)에 기반한 촉매, N-아세틸-L-시스테인 및 d-금속 팔라듐 및 구리의 배위 화합물(화합물 2, 실시예 4, 실시예 5의 설명에 따라 합성)에 기반한 촉매, 및 산화된 글루타티온 및 시스플라틴의 배위 화합물(화합물 3, 특허 제2153350호의 내용에 기재된 기법에 따라 합성)이었다.
조사를 위한 샘플의 제조.
연구한 화합물을 +4℃에서 유지하였고; 실험 시작 바로 전, 물질을 탈이온수(수퍼 큐(super Q))에서 용해시켰다. 초기 용액의 농도는 1000배 이상만큼, 실험에 사용한 농도를 초과한다. 제조한 농축 용액은 +4℃에서 5시간 이하로 유지한다.
투여 경로
화합물을 세포 배양물 배지에 첨가하여 최종 농도를 연구하였다.
투약 수
실험 시리즈 중 하나에서, 제제를 세포에 1회 첨가하였고, 48시간 동안 세포를 인큐베이션시켰다.
표시한 실험 시간 기간 동안 다른 시리즈에서, 제제를 세포에 24시간마다 1일 1회로 5회 첨가하였고, 세포를 120 시간 동안 인큐베이션시켰다. 대조군 시리즈에서, 대응되는 생리적 용액의 부피를 제공하였다.
농도
모든 화합물을 0.15 mc㏖/㎖의 최종 농도로 첨가하였다(농도는 과량의 지방족 티올 다이설파이드의 함량에 대해 계산하였다);
효과를 평가하기 위한 기준
24시간 및 48시간 후 배양물 내 살아있는 세포 및 사멸 세포의 양을 제1 시리즈의 실험에서 및 제2 시리즈의 실험에서 24, 48, 72, 96, 120 시간 후 결정하였다.
사용한 세포주.
세포 배양물의 전-러시아 수집기관(All-Russian Collection of Cell Cultures)(상트 페테르부르크에 소재한 Institute of Cytology, Russian Academy of Sciences)으로부터 얻은 계통 A431의 인간 표피암 세포.
세포 배양 조건.
세포를 +37℃에서 5%의 CO2 함량으로 CO2 인큐베이터(New Brunswick Scientific) 내에서 배양시켰다. 배양물의 단일층이 형성될 때까지 이들 조건 하에 세포를 성장시킨 다음, 그것들에 연구 화합물의 작용을 실시한다.
세포 배양물 배지.
세포 배양을 위해, 본 발명자들은 겐타마이신 K(80 ㎎/ℓ), L-글루타민(300 ㎎/ℓ) 및 태아 혈청(오스트리아에 소재한 PAA)의 첨가에 의해 10%의 최종 농도로 배지 DMEM(모스크바에 소재한 OOO "PanEko")를 사용하였다. 실험 시작 하루 전, 동일한 양의 세포(1000/2.5mcl-400×10-3/㎖)를 감소된 함량의 혈청 - 0.5%이 있는 배지에 옮긴다.
세포 성장 역학.
A431 세포를 10000/㎠의 농도로 페트리 접시(Nunc) 상에 시딩하였고, 하루 후 단일층의 10 내지 15%에 도달하면, 그것들에 연구하는 제제의 작용을 실시하였다.
염색을 위한 세포제조.
A431 세포의 배양 배지를 사멸 분리 세포의 전체 분석을 위해 시험관(팔콘(Falkon))에 수집한 한편, 페트리 접시 내 세포를 PBS로 세척하였고(수집한 배지와 합함), 세포가 분리될 때까지 실온에서 약 10분 동안 베르센(Versen)(파네코(Paneko) 중에서 0.25% 트립신 용액으로 처리하였다. 그 다음에 세포를 자동 피펫으로 피펫팅함으로써 현탁시키고, 사전에 수집한 배지와 합하였다. 샘플을 400 g 실온에서 5분 동안 원심분리시켰고, 상청액을 제거하였으며, 침전물을 인산염 완충 PBS pH 7.4 중에서 재현탁시켰다.
프로피디움 요오드화물에 의한 세포의 염색
유세포분석기 브루커(Bruker) ACR 1000에서 측정 5 내지 10분 전, 프로피디움 요오드화물을 50 mcg/㎖의 농도로 세포 현탁액에 첨가하였다. 이 염색은 손상된 세포막에 침투할 수 있고, 염색 세포를 사멸시킨다.
결과의 통계적 처리 방법.
애플리케이션 프로그램 패키지 "STATISTICA 6.0"의 도움으로 개인용 컴퓨터에서 얻은 결과물의 통계적 처리를 행한다.
세포의 증식적 활성 및 사멸에서 연구 화합물 영향의 결과
얻은 데이터에 따라, 세포 배양 배지에 한 번 투여될 때 모든 조사 화합물은 증식적 활성을 자극한다(표 1).
1회 노출 동안 A431 세포의 증식 활성에서 연구 화합물의 영향
연구 화합물 배양시간(h) 전체 세포
(×103/2.5mcl )		 사멸 세포(%)
대조군(연구 화합물의 첨가 없음) 0 1.0 -
24 8.7 22
48 15.1 29
화합물 1 0 1.0 -
24 11.7 11
48 21.4 11
화합물 2 0 1.0 -
24 12.3 9
48 22.1 12
화합물 3 0 1.0 -
24 10.8 14
48 19.1 19
세포 배양물 상에서 연구 화합물의 1회 작용에서 발견점은 대조군 시리즈와 비교하여 증식 활성의 자극이 있다는 것을 증명한다. 발견한 효과는 모든 연구 물질에 대해 비슷하다. 다수의 사멸 세포 기준에 의해, 대조군과 비교하여 화합물 1 및 화합물 2의 작용에 대해 2 이상만큼 그것의 수의 감소가 주목되며, 화합물 3의 작용은 다소 적다(50 내지 60%). 상이한 배위 화합물의 작용에 대한 세포 배양물의 반응에 대한 결과의 유사성은 그것에 대한 보통의 작용 메커니즘 및 세포 반응의 징후 중 하나이다. 투여한 금속의 1회량은 상대적으로 적다. 시스플라틴이 세포에 독성이라는 것을 고려한다면, 1회 투여는 지방족 티올 및 시스플라틴의 착물, 또는 시스플라틴 그 자체에 대한 효과를 주목하기에 명백하게 충분하지 않은데, 이는 배위 화합물의 파괴 시 유리될 수 있다. 이에 대해서, 실험은 24시간마다 1회 각각의 연구 화합물에 대한 세포의 5회 노출에 의해 세포의 120시간 인큐베이션으로 조직화된다. 결과를 표 2에 제시한다.
5회 노출에 대한 A431 세포의 증식 활성에서 연구 화합물의 영향
연구 화합물 배양 시간(h) 전체 세포
(×103/2.5mcl )		 사멸세포(%)
대조군(연구 화합물의 첨가 없음) 0 1.0 -
24 8.9 22
48 17.3 29
72 31.4 32
96 49.1 32
120 58.6 35
화합물 1 0 1.0 -
24 10.1 11
48 19.6 9
72 39.4 9
96 78.7 12
120 94.2 14
화합물 2 0 1.0 -
24 11.6 7
48 23.1 9
72 44.8 8
96 79.8 11
120 102.1 11
화합물 3 0 1.0 -
24 10.8 12
48 16.6 27
72 24.8 38
96 29.5 48
120 32.5 67
실험 결과는 대조군에서와 모든 연구 화합물에 노출 시, 1일 후 세포의 실행적으로 동일한 증식 활성을 나타낸다. 대조군과 비교하여 연구 화합물에 노출에 대해 1일 후 더 적은 세포사멸이 있다는 사전에 발견한 규칙을 유지한다. 그러나, 제2일 및 다음날에 시스플라틴과 글루타티온 다이설파이드의 배위 화합물의 세포 상에서의 작용은 대조군에서 유사한 지표 값의 거의 2배만큼의 배양물의 증식 활성의 하락 및 집중적인 세포 사멸을 야기하였다. 반면에, 화합물 1 및 화합물 2의 세포 배양물 상에서의 작용은 사실상 선형인 세포 수의 매일의 증가 및 상대적으로 일정한 수준의 세포의 사멸을 만들었다.
함께 취한 발견점은 한편으로는, 전체로서 연구 화합물의 활성에 의해 결정되고, 다른 한편으로는 배위 화합물을 형성하는 금속의 생물학적 대상에서 작용의 특이점을 반응하는 어떤 규칙을 나타낸다. 이러한 모든 연구 배위 화합물에 노출되었을 때 24시간 후 유사한 성장 역학 및 세포 사멸은 금속 및 지방족 티올에도 불구하고 그것의 작용 메커니즘의 유사성을 표시한다. 그러나, 배위 화합물은 배양 배지로부터 제거되지 않으며, 이는 모든 후속 투여가 그것의 농도를 증가시킨다는 것을 의미한다. 본 발명자들이 리간드가 적극적으로 대사가능한 구조라는 사실을 고려한다면, 금속 착물의 유리는 논리적으로 추정된다. 시스플라틴은 안정한 분자이다. 착화합물의 구성에서 비독성이라면, 시스플라틴은 리간드의 분해시 그것의 세포독성의 생물학적 작용을 나타낸다. 이에 대해서, 본 발명자들은 사멸 세포의 적극적 증가 및 낮은 증식적 활성을 관찰한다. 폐쇄 시스템에서, 시스플라틴뿐만 아니라 시스플라틴-변형된 뉴클레오타이드는 그것이 핵산의 합성 반응에 참여할 때 세포독성 작용을 가지는 것을 배제하지 않는다.
d-금속 팔라듐 및 구리의 생물학적 활성은 시스플라틴과 상이하다. 팔라듐 및 그것의 화합물은 생물학적으로 언급할 때 상대적으로 중성인 분자이다. 구리는 생체원소이며, 에너지 유리, 해독, 생체분자의 생리적으로 조절된 합성 및 파괴의 반응에 참여하는 다양한 효소의 조성물에서 세포에 의해 적극적으로 사용된다. 이에 대해서, d-금속 팔라듐 및 구리과 지방족 티올의 배위 화합물에 기반한 촉매의 생물학적으로 긍정적인 효과는 실험 조건에서 발견하였다.
결론. 따라서 지방족 티올 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 및 N-아세틸-L-시스테인과 d-금속 팔라듐 및 구리의 배위 화합물에 기반한 촉매는 산화된 글루타티온 및 시스플라틴의 배위 화합물에 특유한, 유사한 세포 작용 메커니즘을 특징으로 하지만, 그것들은 배위에 대해 본질적인 독성을 결여한다. 이에 관해서, 지방족 티올 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 및 N-아세틸-L-시스테인과 d-금속 팔라듐 및 구리의 배위 화합물의 지방족 티올의 착화합물에 기반한 촉매를 펩타이드 특성의 분자 조성물 내 다이설파이드를 형성하기 위하여 티올의 산화적 변형 반응에서 촉매적 활성을 필요로 하는 다양한 기간의 치료를 위한 약제와 함께 약학적 용액에서 사용할 수 있다.
실시예 10 이노신의 항바이러스 활성을 강력하게 하기 위한 산화된 글루타티온 및 시스플라틴의 배위 화합물의 능력 및 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신, 팔라듐 및 구리의 배위 화합물에 기반한 촉매의 능력의 비교 평가
특허 RU2153350 및 RU2153351은 바람직하게는 시스플라틴 및 산화된 글루타티온의 배위 화합물의 사용에 의해 이노신의 항바이러스 활성을 강력하게 하기 위한 약학적 용액을 논의한다. 강화 효과는 표적의 산화적 변형 반응의 착물화를 촉매하는 화합물 시스플라틴과 산화된 글루타티온의 능력에 의해 바람직하게 달성되는데, 이는 이노신의 작용에 대해 그것의 친화도를 향상시킨다. 이노신의 항바이러스 효과를 강화하는 메커니즘이 배위 화합물의 촉매적 활성과 관련된다면, 본 발명에 따른 작용제는 유사한 더 현저한 작용을 가져야 하는데, 그것들이 시스플라틴 및 산화된 글루타티온의 배위 화합물과 비교하여 더 큰 촉매 작용에 의해 구별되기 때문이다.
연구 목적: 산화된 글루타티온 및 시스플라틴의 배위 화합물 및 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신 팔라듐 및 구리의 배위 화합물에 기반한 촉매와 조합된 이노신의 항바이러스 활성의 비교 평가.
연구 화합물
약학적 조성물(Pharmacological composition: PC) 1 - 본 발명에 따른 작용제를 함유하는 리보푸라노실하이포잔틴 2나트륨의 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신(실시예 3에 제시한 합성)
약학적 조성물(PC) 2 - 시스플라틴 및 산화된 글루타티온의 배위 화합물을 함유하는 리보푸라노실하이포잔틴 2나트륨의 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신(특허 2153350, 2153351에 제시된 기법에 따른 합성)
실험 모델
- 베네수엘라 말뇌염(Venezuelan equine encephalitis: VEE)의 바이러스 - 병원균 균주 트리니다드. 실험 동물의 이후의 감염에 대해 바이러스-함유 물질의 축적을 9 내지 11일령 닭 배아 - 그 중 30 내지 50개를 사용하여 행하였다. 우선, 바이러스-함유 현탁액의 5 연속 10배 희석물을 제조하였다. 바이러스-함유 현탁액의 각 희석물에 대해, 0.2㎖를 발생 닭 배아의 요막액에 도입하였다. 바이러스-함유 현탁액의 주사 부위를 용융 파라핀으로 덮었다. 다음에, 발생 닭 배아를 18 시간 동안 (37±0.5)℃의 온도에서 서모스탯(thermostat) 내에 두고, 검이경에 의해 그것의 생존도를 주기적으로 확인한다. 인큐베이션 시간이 끝난 후, 발생 닭 배아의 생존도를 서모스탯 내에서 살아있는 배아의 "잔해(carcass)"로부터 평가하였고, 항체의 첨가에 의해 생리적 용액을 사용하여 바이러스-함유 물질의 10% 현탁액을 제조하였다(페니실린, 1㎖ 당 100 유닛을 계산, 1㎖ 당 스트렙토마이신 200 유닛). 얻은 현탁액을 1.5 내지 2.0 ×1000 rpm 및 +(3±0.5)℃의 온도에서 10분 동안 원심분리시켰다. 상청액을 1.0㎖ 부피로 바이알 내로 디캔팅하였고, 실험 동물인 마우스의 이후의 감염을 위해 사용하였다. 초기 바이러스 역가는 107-108 LD50/㎖이었다
- 리프트 밸리열(Rift valley fever : RVF) 바이러스 - 병원성 균주 8-87. 실험 동물 감염을 위한 바이러스-함유 물질의 축적을 3 내지 5일령 새끼 마우스로, 그것의 10 내지 15마리를 사용하여 행한다. 우선, 바이러스-함유 물질의 5 연속 10배 희석물을 제조하였다. 각 희석을 위해, 0.02㎖를 새끼 마우스의 뇌에 도입하였고, 에터를 사용하여 동물을 희생시킨 후 그것들을 24시간 내지 48시간 동안 관찰 하에 두었으며, 대뇌를 추출하고, 따로따로 3개의 표본을 -(20±0.5)℃의 온도로 냉동고에서 유지한 페니실린 바이알 내에 넣었다. 이후에, 바이러스-함유 물질로서 대뇌의 10% 현탁액을 사용하였다. 초기 바이러스 역가는 105-106 LD50/㎖이었다;
- 진드기 매개 뇌염(tick-borne encephalitis: TBE) 바이러스 - 병원성 균주 앱세타로브(Absetarov). 실험 동물의 감염을 위한 바이러스-함유 물질의 축적을 새끼 마우스에서 행하였다. 우선, 사전에 감염시킨 마우스 뇌의 10% 현탁액의 원심분리물 또는 동결건조 상태로부터 재수화된 바이러스-함유 물질을 사용하여 바이러스-함유 물질의 5 연속 10배 희석물을 제조하였다. 각 희석물에 대해, 0.02㎖을 새끼 마우스의 뇌에 도입하였고, 에터를 사용하여 동물을 희생시킨 후 24시간 내지 48시간 동안 그것들을 관찰하였으며, 대뇌를 추출하고, 따로따로 3개의 표본을 -(20±0.5)℃의 온도로 냉동고에서 유지한 페니실린 바이알 내에 넣었다. 이후에, 바이러스-함유 물질로서 대뇌의 10% 현탁액을 사용하였다. 초기 바이러스 역가는 102-103 LD50/㎖이었다;
약학적 조성물 1 및 2의 효능을 평가하는 연구를 체중이 16-18 g인 흰색 비근교계(non-inbred) 마우스(360마리 마우스)에서 행하였다.
연구는 NIIT(MBZ) FGU "러시아 국방부(Russian Ministry of Defense)의 GosNIII VM"의 실험적인 생물학 모델의 클리닉에서 4주 검역한 마우스를 사용하였다.
각 병원균에 대해, 본 발명자들은 흰색 비근교계 마우스에서 LD50을 결정하였고, I. P. Ashmarin 및 A. A. Vorob'yev 변형의 케르베(Kerver) 방법에 의해 이 기준을 계산하였다.
실험군(대응하는 제제를 투여한 것) 및 대조군에서 동물의 생존율을 비교함으로써 연구 제제의 효능을 결정하였다. 실험군 및 대조군에서 생존 동물의 백분율을 Genes V.S의 표로부터 결정하였다. 감염 동물의 관찰을 21일 동안 행하였고, 실험군 및 대조군에서 살아있는 동물과 사망한 동물의 수를 각각 기록하였다.
결과의 통계적 처리 방법
전통적인 통계적 방법을 수행하는 특수 프로그램을 사용하여 실험 결과의 통계적 처리를 개인용 컴퓨터에서 행하였다.
약학적 조성물 1 및 2의 항바이러스 활성의 연구로부터의 결과
OOVI의 모든 실험 모델에서, 약학적 조성물 1 및 2의 효능을 2개 반응식을 사용하여 평가하였다:
-감염 전 24 시간, 감염과 동시, 감염 후 24 시간, 48 시간 및 72 시간(계획 1 - 응급 예방);
- 감염과 동시, 감염 후 24 시간, 48 시간 및 72 시간(계획 2 -조기 병인반응적(etiotropic) 치료).
약학적 조성물 1 및 2를 체중의 30 ㎎/㎏의 1회 용량으로 0.5㎖의 부피로 피하에 투여하였다(10 mcg/마우스).
VEE에 의한 실험 감염에서 약학적 조성물 1 및 2의 효능.
조사 결과를 표 3에 제시한다.
실험 VEE 감염의 응급 예방 및 병인반응적 치료에 의한 약학 조성물 1 및 2의 항바이러스 효능의 비교 평가
제제 투여 계획, 번호 병원균의 감염 용량(qty LD50) 그룹 내 동물의 수 사망한 동물의 수, % 생존 동물의 수, %
PC 1 1 12 10 0 100*
12 10 0 100*
2 12 10 0 100*
12 10 0 100*
PC 2 1 12 10 60 40
12 10 40 60
2 12 10 50 50
12 10 40 60
감염 대조군 실시하지 않음 12 10 100 0
실시하지 않음 12 10 100 0
* - 대조군 변수로부터의 차이는 p<0.05로 신뢰가능하다.
표 3에 제시한 데이터는 평가 제제가 실험적 VEE에 대한 보호 작용을 발휘한다는 것을 증명한다. 주어진 조건에서 가장 효과적인 것은 PM 1인 것으로 판명되었다. 제제가 반응식 1에 의해 사용된다면(감염 전 24 시간, 감염과 동시, 감염 후 24시간, 48시간 및 72시간), VEE 바이러스의 감염 용량에도 불구하고, 대조군에서 100% 치사율에 비해 감염 바이러스의 생존율은 100%의 수준이었다. 그러나 제제가 계획 2로써 사용된다면(감염과 동시, 감염 후 24 시간, 48 시간 및 72 시간), 병원균의 감염 용량에 따른 이들 조건에서 보호 효과는 100% 수준(12회 LD50의 용량으로 병원균에 의해 감염될 때) 및 100%(2회 LD50의 용량으로 병원균에 의해 감염될 때)이었다. PC 2를 사용할 때, 병원균의 감염 용량에 따른 보호 지표는 PC 1을 사용할 때보다 40 내지 60% 더 낮았다.
따라서, 수행한 연구를 기준으로, 실험 VEE 감염에 대해 가장 효능있는 평가 제제는 PC 1이었는데, 이는 특허받은 작용제를 포함한다. 응급 예방 계획에서 사용한 PC 1은 대조군에서 100% 치사율에 비해, 감염 동물의 100% 보호를 제공하였다.
실험 RVF 바이러스 감염에서 약학적 조성물 1 및 2의 효능.
조사 결과를 표 4에 제시한다.
실험 RVF의 응급 예방 및 병인반응적 치료에 의한 약학 조성물 1 및 2의 항바이러스 효능의 비교 평가
제제 투여 계획, 번호 병원균의 감염 용량(qty LD50) 그룹 내 동물의 수 사망한 동물의 수, % 생존 동물의 수, %
PC 1 1 12 10 0 100*
12 10 0 100*
2 12 10 0 100*
12 10 0 100*
PC 2 1 12 10 40 60
12 10 40 60
2 12 10 70 30
감염 대조군 실시하지 않음 12 10 100 0
실시하지 않음 12 10 100 0
* - 대조군 변수로부터의 차이는 p<0.05로 신뢰가능하다.
표 4에 제시한 데이터는 RVF에 대한 최고의 보호 효과가 PC 1을 사용함으로써 얻어진다는 것을 증명한다. 사용한 계획에도 불구하고, 제제는 대조군에서 100% 치사율에 비해, 감염 마우스의 100% 보호를 제공하였다. 약학적 조성물 2는 주어진 조건에서 사실상 효과적이지 않았다.
실험 바이러스 감염에서 약학적 조성물 1 및 2의 효능- 실험적 진드기 매개 뇌염.
조사 결과를 표 5에 제시한다.
실험 감염, 실험적 진드기 매개 뇌염의 응급 예방 및 병인반응적 치료에 의한 약학 조성물 1 및 2의 항바이러스 효능의 비교 평가
제제 투여 계획, 번호 병원균의 감염 용량
(qty LD50)		 그룹 내 동물의 수 사망한 동물의 수, % 생존 동물의 수, %
PC 1 1 12 10 0 100*
12 10 0 100*
2 12 10 0 100*
12 10 0 100*
PC 2 1 12 10 20 80*
12 10 0 100*
2 12 10 20 80*
12 10 20 80*
감염 대조군 실시하지 않음 12 10 100 0
실시하지 않음 12 10 100 0
* - 대조군 변수로부터의 차이는 p<0.05로 신뢰가능하다.
제시한 데이터로부터, 2회 LD50의 용량의 병원균으로 감염시킨 동물에서 사용할 때, 모든 평가 제제는 사실상 동일한 보호 효능을 나타내었으며, 이는 대조군에서 100% 치사율에 비해, 감염 마우스의 80 내지 100% 보호를 보장하였다. 동시에, 제제가 12회 LD50의 용량으로 병원균으로 감염된 동물에서 사용된다면, 이들 조건에서 PC 1은 PC 2보다 더 효과적이 되는 것으로 증명되었다.
결론
함께 수행하고 취한 연구 결과는 본 발명자들이 약학적 조성물 1 및 2가 항바이러스 활성을 지닌다는 결론을 내리게 한다. 그러나 본 발명에 따른 작용제를 포함하는 PC 1은 산화된 글루타티온 및 시스플라틴의 배위 화합물을 포함하는 약학적 조성물 PC 2와 비교할 때 더 확연한 항바이러스 활성을 지닌다.
실시예 11. 리바비린의 항바이러스 활성을 강화시키는 본 발명에 따른 작용제의 능력 결정
리바비린은 특이적 항바이러스 생성물이다. 바이러스-감염 세포에서 그것의 작용은 이노신과 유사하다. 본 발명에 따른 작용제는 단백질의 산화적 변형 과정을 자극할 수 있으며, 이노신의 항바이러스 효과를 강화한다. 이노신 및 리바비린의 항바이러스 작용의 유사점은 본 발명자들이 본 발명에 따른 작용제에 의해 1-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)옥솔란-2-일]-1H-1,2,4-트라이아졸-3-카복사마이드(약전 제품 리바비린(등록상표)의 효과적 원리)의 항바이러스 효과를 강화하는 가능성을 상정하도록 한다.
연구 목표: 1-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)옥솔란]-1H-1,2,4-트라이아졸-3-카복사마이드의 항바이러스 활성을 강화하는 본 발명에 따른 작용제의 능력을 평가하는 것.
연구 화합물
본 발명에 따른 작용제와 결합된 약학적 조성물 1-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)옥솔란-2-일]-1H-1,2,4-트라이아졸-3-카복사마이드(실시예 8에서 제시된 합성) - 제제 1.
"카논파마 프로닥슨(Kanonfarma Prodakshn)"(러시아)에 의해 생산된 약전 항바이러스 제품 리바비린(등록상표)- 제제 2.
실험 모델
실시예 10에 기재한 실험 모델로 연구를 행하였다. 각 모델에서 병원균의 감염 용량은 10회 LD50에 대응되었다.
제제 1 및 2의 항바이러스 활성 연구로부터의 결과
OOVI의 모든 실험 모델에서, 제제 1 및 2의 효능을 2가지 계획으로 제제들을 사용함으로써 평가하였다:
-감염 전 24 시간, 감염과 동시, 감염 후 24 시간, 48 시간 및 72 시간(계획 1 - 응급 예방);
- 감염과 동시, 감염 후 24 시간, 48 시간 및 72 시간(계획 2 - 조기 병인반응성 치료).
제제 1 및 2를 0.5㎖의 부피로 피하로 투여하였다
30 ㎎/㎏ 체중의 1회 용량으로 제제 1(10 mcg/마우스).
30 ㎎/㎏ 체중의 1회 용량으로 제제 2(10 mcg/마우스)
실험 바이러스 감염에서 제제 1 및 2의 효능 - 베네수엘라 말뇌염(VEE).
조사 결과를 표 6에 제시한다.
실험 바이러스 감염에서 제제 1 및 2의 효능 - 베네수엘라 말뇌염(VEE)
제제 투여 계획, 번호 병원균의 감염 용량
(qty LD50)		 그룹 내 동물의 수 사망한 동물의 수, % 생존 동물의 수, %
제제 1 1 10 10 20 (2-56) 80 (49-84)*
2 10 10 20 (2-56) 80 (49-84)*
제제 1 1 10 10 50 (19-64) 50 (19-64)
2 10 10 50 (19-64) 50 (19-64)
감염 대조군 1 10 10 100 (86-100) 0 (0-31)
2 10 10 100 (86-100) 0 (0-31)
* - 대조군 변수로부터의 차이는 p<0.05로 신뢰가능하다.
표 6에 제시한 데이터는 VEE에 의한 실험적 감염에 대해 신체에 도입될 때 형성되는 보호 효과에 대해 평가 제제가 서로 차이가 있다는 것을 증명한다.
제제 1은 투여 계획 둘 다에 대해 대조군에서 100% 치사율에 비해(p<0.05), 80% 수준으로 감염 마우스의 생존율을 보장한 반면, 제제 2(리바비린)의 유사한 효과는 50%를 초과하지 않았다.
따라서, 수행한 연구를 기반으로, 본 발명자들은 본 발명에 따른 작용제와 결합된 약전 제품 리바비린(등록상표)의 유효 성분이 되는 제제 1이 1.5 내지 2.0배만큼 VEE에 의한 실험적 감염에 관한 보호적 및 예방적 효능에 대해 약전 제품 리바비린(등록상표)을 앞선다는 결론을 내릴 수 있다.
실험 바이러스 감염에서 제제 1 및 2의 효능 - 리프트 밸리열(RVF)
조사 결과를 표 7에 제시한다.
실험 바이러스 감염에서 제제 1 및 2의 효능 - 리프트 밸리열(RVF)
제제 투여 계획, 번호 병원균의 감염 용량
(qty LD50)		 그룹 내 동물의 수 사망한 동물의 수, % 생존 동물의 수, %
제제 1 1 10 10 30 (19-64) 70 (35-93)*
2 10 10 30 (19-64) 70 (35-93)*
제제 2 1 10 10 70 (35-93) 30 (19-64)
2 10 10 70 (35-93) 30 (19-64)
감염 대조군 실시하지 않음 10 10 100 (86-100) 0 (0-31)
실시하지 않음 10 10 100 (86-100) 0 (0-31)
* - 대조군 변수로부터의 차이는 p<0.05로 신뢰가능하다.
표 7에 제시한 데이터는 RVF에 의한 실험적 감염에 대해 제제 1의 보호적 및 치료적 효과가 제제 2의 효과보다 더 큰 정도로 나타났다는 것을 증명한다. 특히 제제 1의 보호 효과는 대조군에서 100% 치사율 및 제제 2에 대해 30% 효과에 비해 70%이었다.
따라서, 수행한 연구를 기반으로, 본 발명자들은 본 발명에 따른 작용제와 결합된 약전 제품 리바비린(등록상표)의 유효 성분이 되는 제제 1이 2배 이상만큼 실험 바이러스 감염에 대해 보호적 및 치료적 효능에 대해 약전 제품 리바비린(등록상표)의 작용을 억제한다는 결론을 내릴 수 있다.
실험 바이러스 감염에서 제제 1 및 2의 효능 - 진드기 매개 뇌염(TBE)
조사 결과를 표 8에 제시한다.
실험 바이러스 감염에서 제제 1 및 2의 효능 - 진드기 매개 뇌염(TBE)
제제 투여 계획, 번호 병원균의 감염 용량
(qty LD50)		 그룹 내 동물의 수 사망한 동물의 수, % 생존 동물의 수, %
제제 1 1 10 10 20 (2-56) 80 (44-98)*
2 10 10 30 (19-64) 70 (35-93)*
제제 2 1 10 10 50 (19-81) 50 (19-81)
2 10 10 50 (19-81) 50 (19-81)
감염 대조군 실시하지 않음 10 10 100 (86-100) 0 (0-31)
실시하지 않음 10 10 100 (86-100) 0 (0-31)
* - 대조군 변수로부터의 차이는 p<0.05로 신뢰가능하다.
제시한 데이터로부터 다음과 같이, 사용한 계획에도 불구하고, 10회 LD50의 병원균에 의해 감염된 동물에서 사용할 때, 제제 1은 사실상 동일한 보호 효능을 나타내었고, 대조군에서 100% 치사율에 비해 감염 마우스의 70 내지 80%의 생존율을 보장하였다. 동시에, 제제 2가 감염 동물에서 사용된다면, 입증된 효능은 덜 확연하였다. 투여를 위해 사용한 계획에도 불구하고, 제제는 50%의 보호 수준을 얻었고, 이는 제제 1의 수준보다 10 내지 30% 더 낮았다.
따라서, 수행한 연구를 기반으로, 본 발명자들은 본 발명에 따른 작용제와 결합된 약전 제품 리바비린(등록상표)의 유효 성분인 제제 1이 1.5 내지 1.8배만큼 실험 바이러스 감염에 대해 보호적 및 치료적 효능에 대해 약전 제품 리바비린(등록상표)의 작용을 능가한다는 것을 결론내릴 수 있다.
결론
함께 수행한 연구 결과는 본 발명에 따른 작용제가 약전 제품 리바비린(등록상표)의 유효 성분인 1-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-다이하이드록시-5-(하이드록시메틸)옥솔란-2-일]-1H-1,2,4-트라이아졸-3-카복사마이드의 항 바이러스 작용을 강화한다는 결론을 내리게 하였다. 이에 대해서, 본 발명에 따른 작용제의 사용은 인간 및 동물의 바이러스 질병의 치료 및 예방을 위한 새로운 약물을 만들기 위한 약학적 용액에서 촉망될 수 있다.
실시예 12. N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 리튬 염의 형성에서 부여된 리튬 이온의 혈액자극(hemostimulating) 활성에서 본 발명에 따른 작용제의 영향
현재까지, 장기간 저장에서 유지될 수 있는 효과적인 혈액자극 작용제는 없다. 의학적 실행에서, 농도 내 리튬의 혈액자극 활성은 공지되어 있는데, 이는 중추 신경계의 기능에서 리튬의 부정적인 영향과 관련된다.
조사 목적. 리튬 이온의 혈액자극 작용을 강화하기 위해 본 발명에 따른 작용제의 능력을 결정하는 것.
조사를 위한 연구 화합물 용액의 제조
결정질 물질을 4℃에서 유지하였고; 실험 시작 바로 전에, 물질을 생리적 용액에 용해시켰다. 용액을 멸균 층류(laminar flow) 상내 내 0.22 mcm 필터를 통해 통과시킴으로써 멸균시켰다.
조사 모델.
140-160 g 무게의 흰색 잡종(random-breed) 수컷 래트에서 조사를 수행하였고, 생리적 용액에서 피하로 120 ㎎/㎏의 사이클로포스판(CPh)의 1회 용량이 부여되었다.
4그룹의 실험 동물을 형성하였다.
1 - 연구 화합물 용액의 주사를 받은 무결함 동물(생리적 용액)(용매 대조군);
2 - CPh의 주사를 받고, 나중에 치료제로서 생리적 용액을 투여받은 동물(대조군);
실험군:
3 - 사이클로포스판의 주사를 받고, 나중에 리튬 이온, N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드 및 10 ㎎/㎏(배위 화합물 7.8×10-8M/㎏의 양)의 생리적 용액에서 본 발명에 따른 작용제를 함유하는 치료제(PC 1을 실시예 6의 기재에 따라 합성하였음)로서 약학적 조성물 1을 투여받은 동물;
4 - 사이클로포스판의 주사를 받고, 나중에 10 ㎎/㎏의 용량으로 생리적 용액 중의 치료제로서 C-Li(제제 2)을 투여받은 동물;
5 - 사이클로포스판의 주사를 받고, 나중에 3 ㎎/㎏(시스테인의 10㎎의 리튬 염의 리튬 이온(0.55)의 질량 분획을 기준으로 계산한 탄산리튬의 양, 유사한 양의 리튬이 3㎎의 탄산리튬 중에 함유됨)의 용량으로 생리적 용액 중의 치료제로서 탄산리튬(제제 3)을 투여받은 동물;
6 - 사이클로포스판의 주사를 받고, 나중에 9.5 ㎎/㎏의 용량으로 생리적 용액 중의 치료제로서 아세틸 시스테인 다이설파이드(제제 4)를 투여받은 동물;
사이클로포스판의 투여 후 3일에 연구 제제를 투여하였다.
조사 물질,
CPh의 투여 후 제3일, 제7일 및 제14일에 미정맥으로부터 혈액학적 연구를 위해 혈액을 취하였다. 각 시리즈(제3일, 제7일 및 제14일)의 마지막에, 실험 동물을 과량의 에터에 의해 마취시키고, 미정맥 및 대퇴골의 골수로부터 혈액을 취하였다.
분석 지표.
본 조사에서, 본 발명자들은 혈액이 부족한 동물에 연구 화합물의 7일 투여 동안 혈액 세포 패턴(적혈구, 혈소판, 백혈구, 림프구 및 호중구의 수, 및 또한 ESR) 및 골수를 평가하였다.
조사 결과
혈액 패턴의 조사 결과를 표 9 내지 11에 제시한다.
사이클로포스판(120 ㎎/㎏); 처리하지 않은 것(생리적 용액으로 부여됨), N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드(제제 4)로, 혈액자극제(Li2HCO3 - 제제 3)로, N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 리튬 염(제제 2)으로 및 본 발명에 따른 작용제와 커플링된 N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 리튬 염(PC 1, 실시예 6)으로 처리한 것의 투여 후 3일에 혈구감소증이 있는 수컷 래트 혈액의 일반적 분석
연구 지표 무결함(생리적 용액) 사이클로- 포스판 사이클로- 포스판 제제 4 사이클로- 포스판 제제 3 사이클로- 포스판 제제 2 사이클로- 포스판 제제 1
헤모글로빈(g/ℓ) 16.2+0.16 12.8+0.56 12.4+0.76 12.8+0.44 12.2+0.68 13.9+0.31
적혈구, 1012/ℓ 6.8+0.16 3.6+0.25 3.2+0.33 3.4+0.29 3.4+0.18 5.9+0.08**
혈소판, 103/ℓ 374+8.5 116+10.0** 114+11.0** 129+12.0** 174+10.0** 322+13.8*
망상 적혈구, % 1.8+0.2 1.0+0.1 0.9.0+0.2 1.1+0.1 1.2+0.2 1.63+0.2**
백혈구, 109/ℓ 9.2+.35 3.41+0.09* 3.47+0.08* 3.22+0.11* 4.8+0.18** 5.77+0.18**
분엽 호중구, % 17+2.5 33+1.9* 31+1.8 * 31+1.7 * 49.4+0.6 ** 64.3+1.6**
림프구, % 75.4+1.4 56.7+1.1* 52.5+1.3* 49.7+1.6* 21+0.9 * 62+0.9)*
* - p0.05 - 생물학적 대조군과 비교;
** - p0.05 -사이클로포스판 대조군과 비교
사이클로포스판(120 ㎎/㎏); 처리하지 않은 것(생리적 용액으로 부여됨), N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드(제제 4)로, 혈액자극제(Li2HCO3 - 제제 3)로, N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 리튬 염(제제 2)으로 및 본 발명에 따른 작용제와 커플링된 N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 리튬 염(PC 1, 실시예 6)으로 처리한 것의 투여 후 7일에 혈구감소증이 있는 수컷 래트 혈액의 일반적 분석
연구 지표 무결함(생리적 용액) 사이클로- 포스판 사이클로- 포스판 제제 4 사이클로- 포스판 제제 3 사이클로- 포스판 제제 2 사이클로- 포스판 제제 1
헤모글로빈(g/ℓ) 16.2+0.16 12.8+0.56 12.4+0.76 12.8+0.44 12.2+0.68 13.9+0.31
적혈구, 1012/ℓ 6.8+0.16 3.6+0.25 3.2+0.33 3.4+0.29 3.4+0.18 5.9+0.08**
혈소판, 103/ℓ 374+8.5 116+10.0** 114+11.0** 129+12.0** 174+10.0** 322+13.8*
망상 적혈구, % 1.8+0.2 1.0+0.1 0.9.0+0.2 1.1+0.1 1.2+0.2 1.63+0.2**
백혈구, 109/ℓ 9.2+.35 3.41+0.09* 3.47+0.08* 3.22+0.11* 4.8+0.18** 5.77+0.18**
분엽 호중구, % 17+2.5 33+1.9* 31+1.8* 31+1.7* 49.4+0.6** 64.3+1.6**
림프구, % 75.4+1.4 56.7+1.1* 52.5+1.3* 49.7+1.6* 21+0.9* 62+0.9)*
* - p0.05 - 생물학적 대조군과 비교;
** - p0.05 -사이클로포스판 대조군과 비교
사이클로포스판(120 ㎎/㎏); 처리하지 않은 것(생리적 용액으로 부여됨), N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드(제제 4)로, 혈액자극제(Li2HCO3 - 제제 3)로, N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 리튬 염(제제 2)으로 및 본 발명에 따른 작용제와 커플링된 N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 리튬 염(PC 1, 실시예 6)으로 처리한 것의 투여 후 14일에 혈구감소증이 있는 수컷 래트 혈액의 일반적 분석
연구 지표 무결함(생리적 용액) 사이클로- 포스판 사이클로- 포스판 제제 4 사이클로- 포스판 제제 3 사이클로- 포스판 제제 2 사이클로- 포스판 제제 1
헤모글로빈(g/ℓ) 16.2±0.16 11.3±.68 12.6±0.5 12.1±0.57 12.6±0.63 14.7±0.64
적혈구, 1012/ℓ 6.9±0.16 4.5±0.17 4.1±0.21 4.7±0.27 5.1±0.26 6.1±0.12**
혈소판, 103/ℓ 387±21.5 363±56.9 377±54.9 411±59.9 387±38.3 598±72.9**
망상 적혈구, % 1.9±0.2 1.1±0.2 1.2±0.4 1.3±0.3 1.2±0.3 2.0±0.2**
백혈구, 109/ℓ 9.4±0.35 4.4±0.19** 5.1±0.22** 5.2±0.26** 5.9±0.22** 10.1±0.19**
분엽 호중구, % 15±2.5** 14.6+1.6** 13.6±1.9** 15.0±2.6** 19.3±2.4** 24±2.2**
림프구, % 74.5±1.4 72.9+1.8 71.0±1.6* 70.3±0.9 71.3±1.4 72.9±1.1
* - p0.05 - 생물학적 대조군과 비교;
** - p0.05 -사이클로포스판 대조군과 비교
- 120 ㎎/㎏ 용량의 사이클로포스판은 제14일(1-3)에 최대 발현의 절대 및 상대적 림프구감소증이 있는 혈액의 모든 형태의 구성요소에서 다소 확연한 혈구감소증을 야기한다.
- 본 발명에 따른 작용제와 결합된 N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 리튬 염 형태로 부여된 리튬은 확연한 혈액자극 효과를 발휘하는데, 이는 혈액 패턴의 사실상 완전한 재저장으로 나타났다. N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드 및 N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 리튬 염 및 탄산리튬의 작용은, 약학적 조성물 1과 달리, 양성 경향의 형태로 나타내는데, 이는 전체에서 혈액자극 효과로서 평가될 수 있다(표 1 내지 3).
결론
함께 수행한 연구 결과는, 본 발명에 따른 작용제와 커플링된 N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 리튬 염인 약학적 조성물 1의 형태에서 리튬이 혈액자극 작용을 지니는 반면, 본 발명에 따른 작용제 없이 탄산염 또는 N-아세틸-L-시스테인 다이설파이드의 형태로 부여된 리튬은 혈액자극 작용을 제공하지 않았다.
따라서, 본 발명에 따른 작용제는 리튬 이온의 특이적 혈액자극 활성을 강화하는 능력을 특징으로 한다.

Claims (21)

  1. 하기 화학식 I을 갖는, 팔라듐(II)의 작용성 2핵 티올레이트-브릿지된 배위 화합물을 조합하고, 구리(I)의 티올레이트 착물을 변형시키는, 티올의 균일한 선택적 산화를 위한 팔라듐-구리 촉매:
    [화학식 I]
    [Pd2 II(μ-SR)2(NH3)4]·{CuI k(SR)m},
    상기 식에서
    SR은 글루타티온 및 아세틸시스테인의 잔기를 포함하는 군으로부터 선택된 티올레이트 리간드의 잔기이고,
    k = 2 내지 14이며,
    m ≥ 3k이다.
  2. 제1항에 있어서, 산화되어 촉매 기능을 부여하는 상기 티올은 N-아세틸-시스테인인 것인 촉매.
  3. 제1항에 있어서, 산화되어 촉매 기능을 부여하는 상기 티올은 N-글루타밀-L-시스테이닐-글라이신인 것인 촉매.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 산화는 티올 잔기들 간에 다이설파이드 결합을 형성하는 티올의 균일한 선택적 산화인 것인 촉매.
  5. 제1항에 있어서, 팔라듐(II)의 1핵 아미네이트 착물 및 대응하는 티올과 구리(II)의 염으로부터 형성된 착물 및 대응하는 티올의 반응에 의해 얻어지는 것인 촉매.
  6. 제1항에 있어서, 상기 Pd:Cu의 몰비는 1:0.1 내지 1:2의 범위에 있는 것인 촉매.
  7. 제6항에 있어서, 상기 Pd:Cu의 몰비는 1:0.2 내지 1:1의 범위에 있는 것인 촉매.
  8. 제1항에 있어서, 치료에 사용하기 위한 것인 촉매.
  9. 아세틸시스테인, 글루타티온, 그것의 용매화합물 및 염 중에서 선택된 티올과 제1항에 따른 촉매에 의해 형성된 촉매 조합물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 촉매는 상기 티올의 몰 당 1·10-2 내지 1·10-7의 양으로 존재하는 것인 촉매 조합물.
  11. 제9항에 있어서, 아세틸시스테인 다이설파이드 및/또는 글루타티온, 그것의 용매화합물 및 염, 및 제1항에 따른 촉매로 기본적으로 이루어진 것인 촉매 조합물.
  12. 제9항에 있어서, 치료에 사용하기 위한 것인 촉매 조합물.
  13. 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 조합물 및 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 조합물의 성분과 추가 반응을 시작할 수 있는 약학적으로 활성인 화합물로 이루어진 약학적 조합물.
  14. 제13항에 있어서, 상기 약학적으로 활성인 화합물의 치료적 활성을 증강시키는 것인 약학적 조합물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 약학적으로 활성인 화합물은 퓨린 또는 피리미딘 염기 또는 그것의 유도체로부터 선택된 의학적 또는 생물학적으로 활성인 분자인 것인 약학적 조합물.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 감염성 및 비감염성 질병에 대한 치료에 사용하기 위한 것인 약학적 조합물.
  17. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학적으로 활성인 화합물은 이노신인 것인 약학적 조합물.
  18. 제15항에 있어서, 상기 약학적으로 활성인 화합물은 리바비린인 것인 약학적 조합물.
  19. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 촉매 및 제9항 내지 제18항 중 어느 한 항에 따른 조합물 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 약학적으로 활성인 화합물의 치료적 활성을 증강시키는 것인 약제학적 조성물.
  21. 환자의 기관에서 약학적으로 활성인 화합물의 치료적 활성을 증강시키는 치료적 작용 방법으로서, 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 촉매, 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 조합물 또는 제13항 내지 제18항 중 어느 한 항의 조합물, 또는 제19항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 조성물이 부여되는 것인 치료적 작용 방법.
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