KR20140044223A - 자외선을 처리한 벼 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

자외선을 처리한 벼 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20140044223A
KR20140044223A KR1020120110310A KR20120110310A KR20140044223A KR 20140044223 A KR20140044223 A KR 20140044223A KR 1020120110310 A KR1020120110310 A KR 1020120110310A KR 20120110310 A KR20120110310 A KR 20120110310A KR 20140044223 A KR20140044223 A KR 20140044223A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
rice
extract
colon cancer
fraction
treated
Prior art date
Application number
KR1020120110310A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101418164B1 (ko
Inventor
한태룡
조만호
박종화
Original Assignee
경희대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 경희대학교 산학협력단 filed Critical 경희대학교 산학협력단
Priority to KR1020120110310A priority Critical patent/KR101418164B1/ko
Publication of KR20140044223A publication Critical patent/KR20140044223A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101418164B1 publication Critical patent/KR101418164B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/88—Liliopsida (monocotyledons)
    • A61K36/899—Poaceae or Gramineae (Grass family), e.g. bamboo, corn or sugar cane
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2200/00—Function of food ingredients
    • A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
    • A23V2200/308—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on cancer prevention

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 자외선을 처리한 벼(Oryza sativa L. spp japonica cv. Dongjin)의 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명은 자외선을 처리한 벼의 추출물 또는 이의 분획물, 또는 이에서 분리된 N-벤조일트립타민(N-Benzoyltryptamine) 또는 사쿠라네틴(sakuranetin)을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 대장암 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다. 본 발명의 벼 추출물 또는 이의 분획물은 천연물에서 유래되어 부작용이 없으면서도, 상기 벼에 자외선을 처리하여 생성된 N-벤조일트립타민 또는 사쿠라네틴에 의해 대장암 세포의 성장을 억제할 수 있으므로, 대장암의 예방 또는 치료제의 개발에 널리 활용될 수 있을 것이다.

Description

자외선을 처리한 벼 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물{A pharmaceutical composition comprising extract of UV-induced rice for preventing or treating a colon cancer}
본 발명은 자외선을 처리한 벼(Oryza sativa L. spp japonica cv. Dongjin)의 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명은 자외선을 처리한 벼의 추출물 또는 이의 분획물, 또는 이에서 분리된 N-벤조일트립타민(N-Benzoyltryptamine) 또는 사쿠라네틴(sakuranetin)을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 대장암 예방 또는 개선용 건강기능식품에 관한 것이다.
대장암을 치료하는 방법으로서, 수술법이 널리 사용되고 있다. 그러나, 국소적으로 진행된 질병 또는 전이성 질병의 대장암 환자 사이에서, 예후는 높은 발병률과 사망률로 매우 불리하다.
한편, 대장암을 치료하는 방법으로서, 수술보다는 덜 유리한 결과를 나타내는 약물 요법이 시도되고 있다. 항종양 화합물인 5-FU(5-플루오로우라실)는 대장암의 치료에서 주요 선택 약물이고, 그의 사용은 단지 한계적으로만 효과적인 것으로 증명되었다. 5-FU는 대장암 크기를 일시적으로 감소시킬 수 있지만, 환자의 생존기간이 실질적으로 연장되었거나 "치유"된 것(5년의 경감기를 기준으로)을 나타내는 증거는 거의 없다. 5-FU를 사용한 화학 요법이 질병이 간으로 전이된 환자에서 사용되고 있지만, 그러한 케이스의 단지 25 % 또는 그 미만에서만 일시적인 개선이 관찰되며, 전체적으로 생존율은 유의한 영향을 받지 않는다(Harrison's Principles of Internal Medicine(10판), McGraw-Hill, New York, p.1764, 1983). 5-FU의 한계적인 효과에도 불구하고, 확실하게 더 효과적인 것으로 나타나는 다른 약물이나 복합 치료는 없었다(New Eng. J. Med., 312: 1465, 1985).
대장암에 대한 종래의 치료, 예를 들면, 외과적 절제술 또는 5-FU를 사용하는 화학 요법을 받고 있는 환자에 있어서의 매우 빈약한 5년 생존율(약 50 % 또는 그 미만)을 고려하면, 수술 이후, 진단을 확정하거나 암의 체적을 제거하는 것을 보조하는 것과 같이, 약물 또는 화합물을 사용하여 사람의 악성 대장암을 효과적으로 치료하는 새로운 방법을 발견하는 것은 매우 유용할 것이다. 수술법이 암 조직 모두를 제거할 수는 없으므로, 약물 치료는 또한 각종 기관으로 전이되거나 퍼진, 진행된 질병의 환자를 위해 매우 유용할 것이다.
현재 천연물을 중심으로 하는 항암제의 개발은 전통적으로 오랜 기간 민간요법 등으로 사용되어 오던 식물 등의 추출물들을 현대 세포생물학적 연구의 발달로 확립된 암 유전자, 암 억제 유전자, 시그날 전달인자, 약제 내성 감수성 인자 및 세포사멸과 관련된 인자 등 암 분자표적을 중심으로 스크리닝하여 활성물질을 분리, 정제하고 그 활성물질의 구조를 결정하는 항암제의 개발이라 할 수 있다. 특히, 천연소재 중 쌀은 아시아, 아프리카 및 라틴 아메리카 지역의 주식으로 이용되고 있는 중요한 곡물로서 우리나라에서도 연간 약 530만 톤 이상 생산되고 있다.
더구나, 쌀에 주된 기능성분인 피틴산, 오리자놀(Oryzanol), 가바(GABA) 등의 성분은 발암 억제, 혈중 콜레스테롤 저하 및 혈전 형성 억제효과, 지방간 억제 및 면역기능의 강화기능 외에도 다양한 생리 활성을 갖고 있다.
이러한 배경하에, 본 발명자들은 독성 및 부작용이 적은 대장암 치료제를 개발하기 위해 예의 노력한 결과, 벼의 추출물 및 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 조성물이, 벼 잎에 자외선을 처리하여 생성된 N-벤조일트립타민(N-Benzoyltryptamine) 또는 사쿠라네틴(sakuranetin)에 의해 대장암 세포의 성장을 억제하여 대장암 예방 및 치료에 사용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 자외선을 처리한 벼의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 대장암 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 N-벤조일트립타민(N-Benzoyltryptamine) 또는 사쿠라네틴(sakuranetin) 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는, 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 자외선을 처리한 벼의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 대장암 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 N-벤조일트립타민(N-Benzoyltryptamine) 또는 사쿠라네틴(sakuranetin), 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는, 대장암 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 자외선을 처리한 벼의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어 "벼((Oryza sativa L. spp japonica cv. Dongjin))"란 벼과(Gramineae)에 속하는 1년생 초본 식물로 아시아 전역에 널리 분포하고 있다. 높이는 1 m 정도이며 뿌리에 가까운 곳에서 가지를 쳐서 포기를 형성하여 자란다. 꽃이 필 때는 곧추 서지만 익을 때는 밑으로 처지며 많은 소수가 달리고 소수는 가지에 호생하며 짧은 대가 있고 1 개의 꽃으로 된다. 꽃은 7 ~ 8월경에 피며 자가수분에 의하여 결실한다.
벼에 대한 연구는 농업 재배적 측면에서 육종개발에 의한 생산성 향상과 병충해 질병에 대한 저항성 증대와 관련된 연구가 주로 이루어져 왔다. 쌀로부터 수종의 스테로이드(steroid), 테르페노이드(terpenoid)와 알카노이드(alkaloid)가 분리 보고되어 있으며, 그 중 에르고스테롤 피옥사이드(ergosterol peroxide)와 7-옥소-스티그마스테롤(7-oxo-stigmasterol)은 식물 독성효과를 가지고 있는 것으로 보고되어 있다.
식물에서 병원체의 공격이 피토알렉신이라 부르는 항생 화합물 생성을 유도한다는 것은 잘 알려져 왔다. 방어역할에 더하여, 피토알렉신은 건강을 증진시키는 속성을 보이는 것으로 보고되어 왔다. 벼는 도열병 감염과 같은 병원체 공격에 대응하여 디테르페노이드와 플라보노이드 피토알렉신을 생산한다. 또한, 벼에서 피토알렉신의 축적은 자외선 조사와 유출자 처리에 의해서도 유도된다. 하지만 자외선을 처리한 벼의 잎에서 얻은 추출물에 관한 성분 연구는 거의 이루어지지 않았으며, 자외선을 처리한 벼의 잎에서 얻어진 추출물의 대장암 예방 또는 치료에 효과가 있다는 것은 본 발명자들에 의해 최초로 규명된 것이다.
본 발명의 용어 "자외선(UV)"이란 가시광선의 보라색보다 더욱 짧은 파장 영역의 광선이다. UV는 UVA(200 ∼ 280nm), UVB(280 ∼ 320nm), UVC(320 ∼ 400nm)의 세가지가 있는데, UVC는 오존층에 의해 거의 흡수되고, UVA와 UVB만이 지표에 도달하게 된다.
본 발명에서 "자외선 조사(UV-irradiation)란" 자외선을 조사함으로써 미생물을 죽이는 방법으로서, 대표적인 예는 자외선 살균등에 의한 소독법이 있다. 자외선 살균등은 태양광선 내의 유효 자외선량의 약 50배 이상의 자외선량을 인공적으로 만들어 낼 수 있는 장치로서, 본 발명에서는 5개의 20W 살균등(상기 UVA 파장 가운데 254nm, 7.5W 출력)이 장착된 배양상자에서 상기 자외선을 벼의 잎에 조사하여 저분자량의 화합물 축적을 유도하였다.
본 발명의 용어 "벼 추출물"이란 벼를 추출하여 수득한 추출물을 의미하는데, 본 발명의 목적상, 벼 추출물은 벼 분쇄물을 탄소수 1 내지 4의 알콜 및 이들의 혼합 용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매, 바람직하게는 메탄올, 에탄올 또는 부탄올로 추출한 것을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명에 있어서, 상기 추출물에는, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나도 포함될 수 있다.
뵨 발명의 일 실시예에서는 수집된 벼의 잎을 액체질소에서 분쇄한 다음, 이 분쇄물을 70 %(v/v) 메탄올 수용액으로 추출하는 방법으로 벼 추출물을 수득하였다.
본 발명의 용어 "분획물"은 다양한 구성성분을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 그룹을 분리하는 분획방법에 의하여 얻어진 결과물을 의미한다. 본 발명에서는 바람직하게는 벼 추출물을 에탄올, n-헥산, 에틸아세테이트, 물의 용매를 이용한 용매분획방법으로 분획한 결과물일 수 있으며, 극성 용매 분획물과 비극성 용매 분획물을 모두 포함하며, 구체적으로는 에틸아세테이트 분획물 및 물 분획물 등이 모두 사용될 수 있다. 또한 컬럼 크로마토그래피에 의한 분획물일 수도 있다.
본 발명에서, 벼 추출물의 용매 분획물은 벼 추출물을 물로 현탁한 후 에틸아세테이트와 같은 비극성 용매를 사용하여 분획함으로써 극성 용매 분획물과 비극성 용매 분획물을 각각 수득할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는 벼의 추출물에서 액체상태의 메탄올 추출물을 분리하기 위하여, 50 %(v/v) 에틸아세테이트 수용액을 이용하는 방법으로 벼 추출물의 분획물을 수득하였다.
본 발명에서 "컬럼크로마토그래피 분획물"은 벼 추출물의 분획물을 컬럼크로마토그래피를 통해 수득한 분획물을 의미한다. 컬럼크로마토그래피는 벼로부터 대장암 예방 또는 치료효과가 있는 성분을 포함하는 분획물을 분리할 수 있는 공지의 컬럼을 제한없이 사용할 수 있다. 바람직하게는 벼추출물을 70 %(v/v) 메탄올 수용액으로 분획한 후 수득한 수가용성 분획물에 동량의 에틸아세테이트를 첨가하여 재분획한 후 수가용성 분획물과 에틸아세테이트 가용성 분획물을 수득하였고, 상기 에틸아세테이트 가용성 분획물을 감압농축하여 수득한 에틸아세테이트 가용성 추출물을 3 % 아세트산 수용액 및 25 ∼ 60 % 아세토니트릴(acetonitrile) 혼합용매를 사용하여 Sunfire C18 컬럼을 이용한 역상 HPLC 크로마토그래피(Revesed phase HPLC column chromatography)에 적용하여 4개의 분획물을 수득한 후 감압 농축하여 컬럼크로마토그래피 분획물을 수득할 수 있다.
본 발명에서 자외선을 처리한 벼 잎에서 분리된 에틸아세테이트 추출물로 부터 분리된 4개의 컬럼크로마토그래피 분획물은 HCT-116 세포에 각각 서로 다른 농도(10, 20, 40, 60, 80, 100 μg/mL)로 24시간 동안 처리하여 MTT 방법으로 세포 생존율을 확인한 결과, 분획물 3 및 분획 4는 투여량에 의존적으로 HCT-116 세포의 성장을 억제하였으며, 가장 현저한 성장억제는 분획물 4를 처리한 세포에서 관찰되었다(도 2의 B). 따라서 본 발명의 벼 추출물 및 이의 분획물이 대장암 세포의 성장을 억제할 수 있으므로, 대장암 예방 또는 치료에 적합함을 확인하였다.
본 발명에서 "대장암(colon cancer)"이란 대장에 생긴 암세포로 이루어진 악성 종양을 의미하며, 크게 유전적인 요인과 식이로 나눌 수 있다. 음식 그 자체가 직접적인 발암물질을 포함하고 있지 않더라도, 우리가 음식물을 섭취하고 몸에 흡수되는 과정에서 발암물질이 생겨날 수도 있는데, 이는 식이성분을 대사시키는 과정에서 장내세균이 생산하는 효소에 의해 섭취 음식물이 발암물질로 전환될 수 있기 때문이다.
본 발명의 목적상, 상기 대장암은 본 발명의 자외선을 처리한 벼 추출물 또는 이의 분획물에 의해 예방 또는 치료의 목적이 되는 질병으로서, 본 발명의 일 실시예에서는 대장암 세포주인 HCT-116 세포의 세포 독성 실험을 통하여, 그 효과를 확인하였다.
본 발명에서 용어 "예방"은 상기 조성물의 투여로 상기 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "치료"는 상기 조성물의 투여로 상기 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 상기 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 보다 효과적인 예방 또는 치료를 위하여, 본 발명의 상기 자외선을 처리한 벼 추출물 또는 이의 분획물은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 mg/kg으로 투여함이 바람직하고, 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한
경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구,직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 상기 자외선을 처리한 벼 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 또는 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 바람직하게 상기 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 경피흡수제, 겔제, 로션제, 연고제, 크림제, 첩부제, 카타플라스마제, 페이스트제, 스프레이, 피부 유화액, 피부 현탁액, 경피 전달성 패치, 약물 함유 붕대 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propyleneglycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61(tween 61), 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 N-벤조일트립타민(N-Benzoyltryptamine) 또는 사쿠라네틴(sakuranetin)을 유효성분으로 포함하는, 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 "N-벤조일트립타민(N-Benzoyltryptamine)"은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물로서, 플라보노이드의 일종으로 중추신경계의 우울증에 관여하는 물질이다. N-벤조일트립타민은 벼 도열병의 원인균인 사상균(Magnaporthe grisea)에 감염된 벼의 잎에서 확인된 피토알렉신으로 식물방어에 중요한 역할을 하며 다양한 병원균에 대한 항생작용을 한다.
[화학식 2]
Figure pat00001

본 발명에서 "사쿠라네틴(sakuranetin)"은 하기 화학식 3으로 표시되는 화합물로서, 플라보노이드의 일종이다. 플라보노이드류는 일반적으로 피토알렉신으로서 작용하며, 자외선 조사 등의 스트레스로부터 식물을 보호하는 기능을 가지고 있다.또한 사쿠라네틴은 알러지-예방효과 및 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori)에 대한 살균작용을 하며 지방세포 분화에 작용한다.
[화학식 3]
Figure pat00002

그러나, 상기 화학식 2로 표시되는 N-벤조일트립타민 및 화학식 3으로 표시되는 사쿠라네틴이 대장암의 예방 또는 치료에 효과적이라는 점은 아직까지 알려지지 않았다.
본 발명의 일 실시예에서는 상기 자외선을 처리한 벼의 추출물로부터 분리한 분획물 중에서 특이적인 피크를 가지는 3개의 화합물을 분리해내었으며, 그 중에서 화합물 1은 대장암에 대한 세포독성이 없으나, 상기 화학식 2 및 3의 화합물은 대장암에 대한 세포독성이 있음을 확인함으로써, 대장암 예방 및 치료에 효과를 나타낼 수 있는 유효성분이 상기 N-벤조일트립타민 및 사쿠라네틴임을 확인하였다.
따라서, 상기 N-벤조일트립타민 및 사쿠라네틴은 자외선을 처리한 벼에서 추출한 것일 수 있으며, 또한 상기에서 설명한 자외선을 처리한 벼의 추출물 또는 이의 분획물은 N-벤조일트립타민 또는 사쿠라네틴을 포함하는 것일 수 있다.
한편, 본 발명의 일 실시예에서는 자외선으로 처리된 벼의 잎에서 분리한 화합물의 MTT 측정법으로 N-벤조일트립타민 또는 사쿠라네틴이 HCT-116 세포에 세포독성이 있음을 확인하였다. 따라서, 상기 N-벤조일트립타민 또는 사쿠라네틴이 대장암에 대한 항암 효과가 있으며 자외선이 조사된 벼 잎이 치료물질을 위한 가치있는 공급원으로 적합함을 알 수 있었다.
본 발명에서 용어, "약학적으로 허용되는 염"이란, 양이온과 음이온이 정전기적 인력에 의해 결합하고 있는 물질인 염 중에서도 약제학적으로 사용될 수 있는 형태의 염을 의미하는데, 통상적으로 금속염, 유기 염기와의 염, 무기산과의 염, 유기산과의 염, 염기성 또는 산성 아미노산과의 염 등이 될 수 있다. 예를 들어, 금속염으로는 알칼리 금속염(나트륨염, 칼륨염 등), 알칼리 토금속염(칼슘염, 마그네슘염, 바륨염 등), 알루미늄염 등이 될 수 있고; 유기 염기와의 염으로는 트리에틸아민, 피리딘, 피콜린, 2,6-루티딘, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 시클로헥실아민, 디시클로헥실아민, N,N-디벤질에틸렌디아민 등과의 염이 될 수 있으며; 무기산과의 염으로는 염산, 브롬화수소산, 질산, 황산, 인산 등과의 염이 될 수 있고; 유기산과의 염으로는 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프탈산, 푸마르산, 옥살산, 타르타르산, 말레인산, 시트르산, 숙신산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 등과의 염이 될 수 있으며; 염기성 아미노산과의 염으로는 아르기닌, 라이신, 오르니틴 등과의 염이 될 수 있고; 산성 아미노산과의 염으로는 아스파르트산, 글루탐산 등과의 염이 될 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 자외선을 처리한 벼 잎의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 N-벤조일트립타민 또는 사쿠라네틴, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 개선용 건강기능 식품을 제공한다.
자외선을 처리한 벼 추출물, 분획물, N-벤조일트립타민 또는 사쿠라네틴 및 조성물 등은 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명에서 사용된 용어 "건강기능식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제 6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 말하며, 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다. 상기 건강기능식품은 기능성 식품 또는 건강식품과 동일한 의미로 사용될 수 있다.
본 발명에서 용어, "기능성 식품(functional food)"은 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미한다. 또한, 용어, "건강식품(health food)"은 일반식품에 비해 적극적인 건강유지나 증진 효과를 가지는 식품을 의미하고, "건강보조식품(health supplement food)"은 건강 보조 목적의 식품을 의미한다. 상기 식품은 간 기능 개선 및 회복에 유용한 효과를 얻기 위하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상, 환 등의 다양한 형태로 제조될 수 있다.
이러한 기능성 식품의 구체적인 예로, 상기 조성물을 이용하여 농산물, 축산물 또는 수산물의 특성을 살려 변형시키는 동시에 저장성을 좋게 한 가공식품을 제조할 수 있다. 상기 조성물을 포함하는 건강기능성 식품은 특별히 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 마아가린, 지방 지속성(fat continuous) 또는 물 지속성(water continuous) 또는 양쪽 지속성(bicontinuous) 스프레드, 지방 감소된 스프레드, 초콜렛, 초콜렛 코팅, 초콜렛 속(fillings) 또는 베이커리 속인 과자류, 아이스크림, 아이스크림 코팅, 아이스크림 함유물, 드레싱, 마요네즈, 치즈, 크림 대체물, 건조 스프, 드링크, 시리얼 바, 소스, 스낵바, 유제품, 임상 영양식품, 소아용 식품 등의 형태로 제조된 것을 사용할 수 있다.
또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 대장암 의심 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 대장암의 치료 방법을 제공한다.
상기 조성물, 대장암 및 치료에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.
상기 치료 방법은 구체적으로 상기 조성물을 약학적 유효량으로 대장암 의심 개체 내에 투여하는 것을 포함한다. 상기 개체는 개, 소, 말, 토끼, 마우스, 래트, 닭 또는 인간을 포함한 포유류 전체를 의미하나, 상기 예에 의해 본 발명의 포유류가 한정되는 것은 아니다. 상기 약학적 조성물은 비 경구, 피하, 복강 내, 폐 내, 및 비강 내로 투여될 수 있고, 국부적 면역억제 치료를 위해, 필요하다면 병변 내 투여를 포함하는 적합한 방법에 의해 투여된다. 비 경구 주입에는 근육 내, 정맥내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하투여가 포함된다. 바람직한 투여방식은 정맥 주사,피하주사, 피내주사제, 근육주사 및 점적 주사이다.
본 발명의 상기 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 본 발명의 자외선이 처리된 벼 잎의 추출물 또는 이의 분획물은 암세포에 대하여 높은 성장억제 효과를 나타내므로, 상기 자외선을 처리한 벼 잎의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 대장암 의심 개체에 투여하여, 대장암의 발생 또는 진행을 막아 대장암을 치료할 수 있다.
본 발명의 벼 추출물 또는 이의 분획물은 천연물에서 유래되어 부작용이 없으면서도, 상기 벼에 자외선을 처리하여 생성된 N-벤조일트립타민(N-Benzoyltryptamine) 또는 사쿠라네틴(sakuranetin)에 의해 대장암 세포의 성장을 억제할 수 있으므로, 대장암의 예방 또는 치료제의 개발에 널리 활용될 수 있을 것이다.
도 1은, 페놀 화합물 함량 및 쌀 추출물의 암세포에 대한 독성을 나타내는 그림이다. (A) 자외선을 처리하거나 처리하지 않은 벼의 잎에 모든 페놀류와 플라보노이드으 함량을 나타내는 그래프이다. 갈산 및 쿼세틴은 페놀류 및 플라보노이드 함량을 측정하는 표준물로 각각 사용하였다. DW; 건조 중량 (B)자외선을 처리하거나 처리하지 않은 벼의 잎에서 추출된 에틸아세테이트 추출물의 인간 결장암 세포 HCT-116에 대한 세포독성 효과를 나타낸 그래프이다. 세포 생존율은 대조군(DMSO : 에틸아세테이트 : 1 : 1)에 대해 자외선을 처리하거나 처리하지 않은 벼의 추출물 집단에서의 생존 가능한 세포의 백분율로 계산하였다. 데이터는 3회 독자적 실험을 실시하여 평균값 ± 표준편차로 나타내었다. 별표는 처리하지 않은 대조군과 자외선이 처리된 각 표본 사이의 유의차를 가리킨다(t-검정; *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001).
도 2는, 자외선 처리에 의한 조성 변화 및 자외선을 처리한 표본에서 얻어진 HPLC 분획물의 암세포에 미치는 세포독성을 나타내는 그림이다. (A) 자외선을 처리하지 않은 대조군과 자외선을 처리한 표본의 에틸아세테이트 추출물의 HPLC 분석. (B) HCT-116 세포에 자외선을 처리한 벼의 잎의 에틸아세테이트 추출물로부터의 HPLC 분획물의 세포독성 효과 (Fr. I ∼ IV). 데이터는 3회 독자적 실험을 실시하여 평균값 ± 표준편차로 나타내었다. 별표는 처리하지 않은 대조군과 자외선이 처리된 각 표본 사이의 유의차를 가리킨다(t-검정; *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001).
도 3은, 자외선이 처리된 벼의 잎에서 분리된 화합물의 화학적 구조를 나타내는 그림이다.
도 4는, 자외선이 처리된 벼의 잎에서 분리된 화합물의 HTC-116 세포에 대한 세포독성 효과를 나타내는 그림이다. (A) HTC-116 세포에 대한 분리된 화합물의 용량에 의존적인 세포독성 효과. 데이터는 3회 독자적 실험을 실시하여 평균값 ± 표준편차로 나타내었다. 별표는 처리하지 않은 대조군과 자외선이 처리된 각 표본 사이의 유의차를 가리킨다(t-검정; *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001). (B) 분리한 화합물의 ID50 값은 상측 패널(A)에서 제시한 실험으로부터 산출하였다.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
실시예 1: 자외선이 처리된 벼 잎 추출물 및 분획물의 제조
실시예 1-1. 자외선이 처리된 벼 잎 추출물의 제조
자외선 처리를 위해, 벼(Oryza sativa L. spp japonica cv. Dongjin)를 8주간 동안 낮에는 28 ℃에서, 밤에는 20 ℃가 유지되는 온실에서 배양했으며, 5개의 20 W 살균등 (최대방출 254 nm, 자외선 출력 7.5 W, Sankyo Denki Co. J)이 장치되어 있는 배양상자로 옮겨 2시간 동안 조사(irradiation)하였다.
상기 자외선을 조사한 벼는 온실로 옮기고 2일이 지난 후 벼의 잎을 수집하였다. 수집된 벼의 잎을 액체 질소에서 분쇄한 다음 70 %(v/v) 메탄올(MeOH)-수용액에서 1시간 동안 추출하였다.
상기 액체 상태의 메탄올 추출물에 모든 페놀 화합물의 함량을 갈산(gallic acid)을 기준물질로 하여 공지된 방법으로 측정하였다. 측정결과, 자외선을 처리한 군에서 상기 페놀 화합물(phenolic compounds)의 함량이 처리하지 않은 대조군과 비교하여 26.7 % 까지 두드러지게 증가하였다(도 1의 A).
실시예 1-2. 자외선이 처리된 벼 잎 분획물의 제조
상기 제조된 자외선이 처리된 벼 잎 추출물에서 액체상태의 메탄올 추출물을 분리하기 위하여, 50 %(v/v) 에틸아세테이트(EtOAc)-수용액을 이용하여 좀 더 분리하였고, 에틸아세테이트 분획물은 진공상태에서 건조시켰다. 상기 건조된 잔류물은 소량의 메탄올로 재현탁한 다음 플라보노이드 함량을 측정하기 위하여 플라보노이드 기준물질로 쿼세틴(quercetin)을 사용하여 공지된 열량측정 방법을 실시하였다.
자외선으로 처리된 벼의 잎에서 플라보노이드 함량은 처리되지 않은 대조군과 비교하여 82.4 % 까지 증가되었다 (도 1의 A). 이와 같은 실험결과에 따라, 플라보노이드를 포함한 페놀 화합물의 생산이 자외선이 처리된 벼의 잎에서 유도된다는 것을 확인할 수 있었다.
실시예 2: 자외선이 처리된 벼 잎 추출물의 분리 및 세포독성 효과
실시예 2-1. 세포 배양
한국 세포주 은행 (KCLB, Seoul, Korea)에서 획득한 HCT-116 세포는 열처리 불활성화한 10 % 태아 소 혈청 (FBS, Thermo Scientific Hyclone)과 1 % 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin)이 함유된 RPMI-1640 배지(Thermo Scientific Hyclone, Waltham, MA)에 37 ℃, 5 % CO2가 유지되는 가습 배양기에서 배양하였다.
실시예 2-2. 세포독성 시험
에틸아세테이트 추출물의 세포독성은 MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, Sigma, St. Louis, MO) 비색법 (colorimetric assay , Yoo et al., 2012)을 이용해 측정하였다(Yoo et al., 2012).
HCT-116 세포를 96-웰 플레이트에 웰 당 1 x 104 세포 수로 분주하여 10 % FBS를 첨가한 100 ul RPMI-1640 배지에서 배양하였다.
37 ℃에서 24시간 동안 배양한 후에, 자외선을 처리했거나 처리하지 않은 벼의 잎에서 추출한 에틸아세테이트 추출물(40, 60 ug/ml)을 세포에 처리하여 RPMI-1640 무혈청 배지에서 배양하였다.
상기 세포를 24시간 배양한 후에, 50 ul MTT (5 mg/mL in PBS)를 각각의 웰에 첨가하고, 37 ℃에서 2시간 동안 더 배양하였다.
배지를 제거하고 상기 세포에 5분 동안 100 ㎕ DMSO를 처리한 후, 마이크로 플래이트를 이용하여 550 nm에서 흡광도를 측정하였다(BIO-TEK, Winooski, VT).
세포 생존율은 자외선을 처리했거나 처리하지 않은 벼의 추출물 집단과 대조군 (DMSO와 EtOH의 1:1 혼합물)에 생존 가능한 세포의 백분율로써 산출하였다.
상기 세포 생존율은 하기 수학식을 이용하여 측정하였다:
[수학식 1]
세포 생존률(％) = [OD(화합물 처리 세포 수) ― OD(백지 세포 수) / OD(대조군 세포 수) ― OD(백지 세포 수)] × 100
자외선 처리에 반응하여 페놀화합물과 플라보노이드 함량이 증가한 것과 마찬가지로, MTT 측정의 결과는 자외선을 처리한 벼의 잎으로부터 추출된 에틸아세테이트 추출물이 처리하지 않은 대조군과 비교하여 HCT-116 세포에 더욱 더 강한 세포독성을 나타내었음을 확인하였다(도 1의 B). 이러한 결과는 자외선을 처리한 벼의 추출물이 대장암세포를 사멸시킴으로서 대장암 예방 및 치료에 효과적일 수 있음을 암시한다.
실시예 3: 자외선이 처리된 벼 잎 추출물로부터 HPLC 분획물의 분리 및 세포 독성 효과
실시예 3-1. HPLC 분획물의 분리
자외선 처리에 의한 화학적 구조 변화를 확인하기 위하여, 자외선을 처리하거나 처리하지 않은 벼의 잎에서 추출된 에틸아세테이트 추출물을 Sunfire C18 column(Waters, Milford, MA) 장치가 되어 있는 역상 HPLC를 이용하여 3 %(v/v) 아세트산-수용액에 25 ∼ 60 % 아세토니트릴의 선형 그래디언트에서 25분 동안 280 nm에서 감지하여 확인하였다.
자외선 처리에 대한 반응으로 주요한 화학적 구조 변화는 HPLC 크로마토그래피의 리텐션 타임 15 ∼ 25분 사이에서 관찰되었다(도 2의 A).
자외선을 처리한 벼 잎에서 추출한 에틸아세테이트 추출물은 4개의 분획물(Fr. I - IV)로 분리하여, 상기 HLPC 분획물 각각의 세포독성 효과를 확인하였다(도 2의 A).
실시예 3-2. 세포독성 효과 확인
HCT-116 세포에 각 HPLC 분획물의 서로 다른 농도(10, 20, 40, 60, 80 및 100 μg/mL)를 24시간 동안 처리하여 MTT 방법으로 세포 생존율을 확인하였다(도 2의 B).
분획물 1 및 분획물 2는 HCT-116 세포의 생존율에 영향을 미치지 않았고, 반면에 분획불 3 및 분획물 4는 투여량에 의존적으로 HCT-116 세포의 성장을 억제하였다. 가장 현저한 억제는 분획물 4를 처리한 세포에서 관찰되었다.
상기 실험결과를 통하여 HCT-116 세포에 세포독성을 보이는 화합물이 주로 분획물 3 및 분획물 4에 들어 있다는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 도 2의 A에서 나타난 바와 같이 상기 실험결과가 자외선을 처리한 벼 잎에서 추출된 에틸아세테이트 추출물의 주요한 화학적 구조 변화가 분획물 3 및 분획물 4에서 일어나는 것과 일치하는 결과이다.
실시예 4: 자외선이 처리된 벼 잎에서 얻은 화합물의 구조분석
자외선을 처리한 표본에서 세포독성 물질을 분리하고 확인하기 위하여, 자외선 처리의 반응으로 두드러지게 유도된 3개의 피크 화합물(1 ∼ 3)을 HPLC 컬럼으로부터 수집하였다. 분리된 화합물은 1H, 13C, 1H-1H 상관 분광학 (COSY) 및 이핵 다중 결합 상관 (HMBC) 분광학, 그리고 양성 ESI MS을 포함하는 1 및 2 차원 NMR 분광학을 이용하여 확인하였다.
실시예 4-1. N-트랜스-시나모일티라민(N-trans-cinnamoyltyramine)
먼저, 화합물 1의 1H 및 1H-1H COSY NMR 스펙트럼에서, 시나모일(cinnamoyl) 및 티라미(tyramy) 일부분의 전형적인 양성자 신호가 관찰되었다.
δ 7.51 (H-7’)과 6.56 (H-8’)에서의 두 올레핀 양성자 신호는 신나모일 일부분으로 확인되도록 이끄는 1-1기치환 벤젠 링과 관련되어 있고, δ 2.75 (H-7)와 3.47 (H-8)에서의 두 메틴 양성자 신호는 티라미 일부분을 위한 1,4-2기치환 벤젠 링과 관련되어 있다는 것이 1H-1H COSY 스펙트럼에서 관찰되었다.
Figure pat00003
표 1에 제시한 상기 화합물 1의 1H 및 13C NMR 자료는 공지된 N-트랜스-시나모일티라민(N-trans-cinnamoyltyramine)에 대한 것들과도 일치한다(Yang et al., 2011).
화합물 1의 HMBC 스펙트럼은 티라미 일부분의 δ 3.47(H-8)에서의 양성자 신호와 시나모일 일부분의 δ 168.8(C-9’)에서의 카보닐 탄소 신호 사이에 연결성을 보여주며, 이러한 일부분들이 아미노 결합을 거쳐서 연결되어 있다는 것을 확인할 수 있었다.
화합물 1의 분자량은 양성 ESI MS에서 m/z 268.3 [M+H]+으로 유사분자 이온 피크로부터 267.3으로 확인되었으며, 이러한 결과는 N-트랜스-시나모일티라민(N-trans-cinnamoyltyramine)과 일치한다.
이러한 결과를 토대로, 화합물 1은 N-트랜스-시나모일티라민인 것으로 확인하였으며 이는 벼로부터 처음 분리된 것이다 (화학식 1 및 도 3).
Figure pat00004
실시예 4-2. N-벤조일트립타민( N- Benzoyltryptamine)
1H와 1H-1H COSY NMR 스펙트럼은 1-1기치환 벤젠 링과 인돌 링이 화합물 2에있다는 것을 확인하였다. δ 3.06 (H-10)과 3.66 (H-11)에서의 두 개의 메틴 양성자 신호는 1H-1H COSY 스펙트럼에서 인돌 링과 관련이 있음을 확인하였다(도 3).
화합물 2의 1H와 13C NMR 데이터(표 1)는 공지된 N-벤조일트립타민에 대한 것들과도 일치한다(Hifnawy et al., 1977; Peng et al., 2002). 트립타민 일부분의 δ 3.66 (H-11)에서의 양성자 신호 및 벤조일 일부분의 δ 170.3 (C-9')에서의 카보닐 탄소 신호 사이에 연결성을 화합물 2의 HMBC 스펙트럼에서 발견함으로서, 이러한 일부분들이 아미노 결합을 거쳐서 연결되어 있다는 것을 확인하였다. 또한 상기 N-벤조일트립타민의 양성 ESI MS는 m/z 265.3에서의 [M+H]+ 이온을 보여주었고 이러한 결과는 N-벤조일트립타민과 일치한다. 이러한 결과를 토대로 화합물 2는 N-벤조일트립타민인 것으로 확인하였으며, 이는 미르토이디아(Myrtopsis myrtoidea)에서 최초로 분리된 것이다(Hifnawy et al., 1977)(화학식 2 및 도 3).
Figure pat00005
실시예 4-3. 사쿠라네틴(sakuranetin)
화합물 3은 HPLC 분석에서 플라보노이드 피토알렉신 사쿠라네틴 표준물질과 같은 리텐션 타임을 보였다. 상기 화합물의 분자량은 양성 ESI MS 분석에 의해 286.3으로 확인되었으며 1H NMR 데이터(표 1)는 공지된 사쿠라네틴에 대한 것들과도 일치한다(Ibrahim et al., 2003; Freitas et al., 2008). 그에 따라, 화합물 3은 사쿠라네틴으로 확인되었다 (화학식 3 및 도 3).
Figure pat00006
실시예 5: 자외선이 처리된 벼 잎에서 얻은 화합물의 세포독성 효과
화합물 1, 화합물 2 및 화합물 3이 HCT-116 세포에 미치는 세포 독성 효과를 MTT 방법으로 측정하여 확인하였다(도 4).
HCT-116 세포는 화합물 1, 화합물 2 및 화합물 3의 서로 다른 농도 (10, 20, 40, 60, 80, 100 μg/mL)로 24시간 동안 처리하여, 상기 처리된 세포의 생존율을 MTT 방법으로 측정하여 확인하였다. 화합물 2 및 화합물 3은 투여량에 의존적으로 HCT-116 세포의 생존율을 감소시켰지만, 화합물 1은 감소시키지 않았다 (도 4의 A). 화합물 2 및 화합물 3의 IC50(50 % 억제농도)값은 각각 89.2 ± 4.8 및 68.8 ± 5.2 μg/mL이었다 (도 4의 B).
이러한 결과를 통하여, 자외선이 처리된 벼 잎으로부터 분리된 화합물 1, 화합물 2 및 화합물 3 중에서 대장암에 대한 세포 독성을 가지는 유효성분은 화합물 2의 N-벤조일트립타민 및 화합물 3의 사쿠라네틴임을 확인할 수 있었으며, 그에 따라 상기 화학식 2 및 화학식 3의 화합물은 대장암 예방 및 치료에 효과적임을 확인 할 수 있었다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (9)

  1. 자외선을 처리한 벼의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 벼를 물, 탄소수 1 내지 4의 알콜 및 이들의 혼합용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매로 추출하여 수득한 것인 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 상기 알콜은 메탄올, 에탄올 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 분획물은 벼의 추출물을 에탄올, 헥산, 에틸아세테이트, 물 및 이들의 혼합용매로 구성되는 군으로부터 선택되는 용매로 분획하여 수득한 것인 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 추출물 또는 이의 분획물은 하기 화학식 2 또는 화학식 3으로 표시되는 화합물을 포함하는 것인 조성물.
    [화학식 2]
    Figure pat00007


    [화학식 3]
    Figure pat00008

  6. 하기 화학식 2 또는 화학식 3으로 표시되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는, 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
    [화학식 2]
    Figure pat00009


    [화학식 3]
    Figure pat00010

  7. 제6항에 있어서, 상기 화학식 2 또는 화학식 3으로 표시되는 화합물은 자외선을 처리한 벼에서 추출한 것인 조성물.
  8. 자외선을 처리한 벼의 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는, 대장암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
  9. 하기 화학식 2 또는 화학식 3으로 표시되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는, 대장암 예방 또는 개선용 건강기능식품.
KR1020120110310A 2012-10-04 2012-10-04 자외선을 처리한 벼 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 KR101418164B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120110310A KR101418164B1 (ko) 2012-10-04 2012-10-04 자외선을 처리한 벼 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120110310A KR101418164B1 (ko) 2012-10-04 2012-10-04 자외선을 처리한 벼 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140044223A true KR20140044223A (ko) 2014-04-14
KR101418164B1 KR101418164B1 (ko) 2014-07-09

Family

ID=50652338

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020120110310A KR101418164B1 (ko) 2012-10-04 2012-10-04 자외선을 처리한 벼 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101418164B1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160049910A (ko) * 2014-10-28 2016-05-10 경희대학교 산학협력단 자외선을 처리한 벼의 추출물을 포함하는 식물병 방제용 조성물 및 이의 용도
KR20160050161A (ko) * 2014-10-28 2016-05-11 경희대학교 산학협력단 N-트랜스-신나모일타이라민을 포함하는 식물병 방제용 조성물 및 이의 용도

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160049910A (ko) * 2014-10-28 2016-05-10 경희대학교 산학협력단 자외선을 처리한 벼의 추출물을 포함하는 식물병 방제용 조성물 및 이의 용도
KR20160050161A (ko) * 2014-10-28 2016-05-11 경희대학교 산학협력단 N-트랜스-신나모일타이라민을 포함하는 식물병 방제용 조성물 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
KR101418164B1 (ko) 2014-07-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101158856B1 (ko) 콩잎 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 비만, 고지혈증, 동맥경화, 지방간, 당뇨 또는 대사증후군의 예방 또는 치료용 조성물
KR20070080329A (ko) 어성초 추출물을 함유한 암 예방 및 치료용 조성물
KR100704299B1 (ko) 신규한 퀴놀린계 화합물, 및 지네 추출물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR20120053450A (ko) 테로카판계 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환 또는 이들의 합병증의 예방 또는 치료용, 또는 항산화용 조성물
KR101418164B1 (ko) 자외선을 처리한 벼 추출물을 유효성분으로 포함하는 대장암 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20210052377A (ko) 캠퍼롤 및 에티카테킨 갈레이드를 포함하는 홍경천 추출물을 포함하는 전립선 관련 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR102022279B1 (ko) 신선초 추출물을 함유하는 근육관련 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR101119220B1 (ko) 제주상사화 추출물을 함유하는 퇴행성 신경 질환의 예방 및/또는 치료용 조성물
KR101909885B1 (ko) 살리드로사이드 또는 베툴린을 이용한 뇌수막종 개선용 조성물
KR100965305B1 (ko) Ｈｓｐ 27의 과발현에 의해 매개되는 질병의 예방 또는치료용 조성물
KR102040119B1 (ko) 신선초 추출물로부터 분리된 화합물을 함유하는 근육관련 질환의 예방 및 치료용 조성물
KR100542323B1 (ko) 후박나무로부터 세포사멸 유도작용을 갖는 화합물을 분리하는 방법
EP3698805A1 (en) Fraction ofzanthoxylum piperitum
KR101470613B1 (ko) 라티폴린을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR102044232B1 (ko) 갈색거저리 성충으로부터 BACE-1 또는 AChE에 대한 저해활성을 갖는 화합물을 분리하는 방법
KR102044234B1 (ko) 갈색거저리 성충으로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 포함하는 알츠하이머의 예방 또는 치료용 조성물
KR100965304B1 (ko) Ｈｓｐ 27의 과발현에 의해 매개되는 질병의 예방 또는치료용 조성물
KR100413964B1 (ko) 강활추출물 또는 이로부터 분리한 화합물을 포함하는 암치료 및 예방을 위한 조성물 및 그의 분리 방법
KR20240072608A (ko) 워터코인 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101528198B1 (ko) 솔잎 추출물로부터 분리된 화합물들을 함유하는 인체 파필로마바이러스(hpv) 억제 및 암질환 예방과 치료용 조성물
KR20220115759A (ko) 클로렐라(Chlorella sp.)추출물 및 이의 페오피틴화 분획물 또는 이로부터 수득한 폴피린계 또는 카로테논계 화합물을 유효성분으로 포함하는 신종코로나 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 조성물
KR101317671B1 (ko) 2-데옥시글루코스와 테프로신을 함유하는 암 예방 또는 치료용 조성물
KR101609231B1 (ko) 솔잎 추출물로부터 분리된 신규 화합물을 함유하는 인체 파필로마바이러스(hpv) 억제 및 암질환 예방과 치료용 조성물
KR101440853B1 (ko) 솔잎 추출물로부터 분리된 공지 화합물을 함유하는 인체 파필로마바이러스（ｈｐｖ）로 기인한 자궁경부암, 또는 후두암 예방 및 치료용 조성물
JP2016069355A (ja) 骨代謝改善剤

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170627

Year of fee payment: 4