KR20130132880A

KR20130132880A - 간암의 치료에 사용하기 위한 ｒｏｂｏ１－ｆｃ 융합 단백질

Info

Publication number: KR20130132880A
Application number: KR1020137016599A
Authority: KR
Inventors: 프레데리크 돌-글리제스; 즈느비에브 귀군-도르브
Original assignee: 사노피
Priority date: 2010-12-23
Filing date: 2011-12-22
Publication date: 2013-12-05
Also published as: AU2011347250B2; EP2655408B1; JP2014507395A; ZA201305266B; US20130273049A1; SG191060A1; CO6741197A2; EA201390955A1; UY33833A; CL2013001861A1; CA2820781A1; EP2655408A1; CN103703021A; AU2011347250A1; MA34827B1; AR084541A1; MX2013007421A; WO2012085178A1

Abstract

본 발명은 암, 특히 간암의 치료에서의 Robo1-Fc 재조합 단백질의 용도에 관한 것이다.

Description

간암의 치료에 사용하기 위한 ＲＯＢＯ１－ＦＣ 융합 단백질{ROBO1-FC FUSION PROTEIN FOR USE IN THE TREATMENT OF HEPATOCARCINOMA}

본 발명은 재조합 단백질 Robo1-Fc, 및 Slit 단백질이 과발현되는 질환의 치료에서의 그의 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 암, 특히 간암의 치료에서의 Robo-Fc 단백질의 용도에 관한 것이다. 또한, 이러한 재조합 단백질을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 또다른 측면은 환자에서 Slit 패밀리의 분자의 과발현을 검출하기 위한 진단 도구로서의 Robo1-Fc 분자의 용도로 이루어진다.

Slit 리간드는 처음에는 뉴런 발달에서 축삭 성장을 저해하는 역할을 갖는 것으로 기재되었다. 그 후, Robo/Slit 조절 경로는 또한 종양 혈관생성에서 기재된 적이 있었다. 구체적으로, Robo4/Slit2 경로는 VEGF에 대한 내피 세포의 반응을 억제하는 것으로 기재된 적이 있었다 (문헌 [Jones C.A. et al., Nat. Med 14, 448-453 (2008)]). Robo/Slit 경로에 의한 조절은 내피 비-성숙 신생혈관 또는 혈관눈의 과도한 증식 (비생산적인 혈관생성)으로 이어져서, 이들 혈관의 성숙을 가능하게 한다. 전사 수준에서 Slit2의 발현은 몇몇 인간 암 세포주, 특히 결장 암종으로부터 유래된 HCT116, 난소 암종으로부터 유래된 Skov-3, 자궁경부암으로부터 유래된 HeLa, 흑색종으로부터 유래된 MDA-MB-435, 자궁암으로부터 유래된 Hec-1A, 및 최종적으로 신장 암종으로부터 유래된 769-P에서 입증되었다 (문헌 [Stella MC et al., Mol Biol Cell. 2009 Vol. 20, Issue 2, 642-657]). Slit2 단백질의 과발현은 또한 암종: 구강 암종 (문헌 [Wang et al., 2008, Cancer Sci. 2008 Mar; 99(3): 510-7]), 전립선 암종 (문헌 [Latil et al., 2003 Int J Cancer. 2003 Jan 20; 103(3): 306-15]), 결장 암종 (문헌 [Wang et al ., 2003, Cancer Cell, Volume 4, Issue 1, July 2003, Pages 19-29]), 및 간 암종 (문헌 [Avci et al ., 2008, BMC Cancer, 8: 392])으로부터 유래된 인간 조직에 대해서 입증된 적이 있다. 더욱 최근에는, Slit2 단백질의 과발현이 자궁내막증의 샘플에 대해 확인되었다 (문헌 [Shen et al ., 2009, AJP 175 (2): 479]).

Robo1 단백질은 2가지 이소형 a 및 b로 존재한다. Robo1 단백질 이소형 b의 세포외 도메인 (NP_598334)은 5가지 이뮤노글로불린 도메인: Ig1, Ig2, Ig3, Ig4 및 Ig5를 포함한다. Robo 단백질은 Ig1 및 Ig2 도메인의 수준에서 Slit 리간드와 상호작용한다. 문헌 [Liu et al ., 2004, Mol. Cell Neurosci, 26: 232-240]에서는 Slit과의 상호작용에서 및 Robo의 활성에서 Ig2 도메인의 중요성이 입증되었다 (화학반발).

Robo1 및 Slit2 단백질에 대해 특이적인 항체의 사용이 출원 WO2003/075860에 기재된 적이 있었다. 이들 항체는 종양 혈관생성을 억제할 수 있다.

그러나, 암 치료를 위한 대안적인 접근법, 특히 Slit2 신호전달 경로를 억제할 수 있는 분자를 제시하는 것이 유리할 것이다.

본 발명자들은 Slit 리간드에 결합할 수 있는, 결과적으로 Robo/Slit 경로의 세포내 신호전달을 억제할 수 있는 가용성 키메라 Robo1 수용체의 전략을 개발하였다. 놀랍게도, 본 발명에 따른 Robo1-Fc 분자는 내피 세포의 증식을 억제함으로써가 아니라 성숙한 혈관의 형성을 예방함으로써 항-혈관생성 효과를 갖는다.

본 발명자들은 Robo1-Fc 분자가 폐암 및 간암에서도 항종양 효과를 갖는다는 것을 확인하였다.

<발명의 상세한 설명>

본 발명의 대상은 Robo1 단백질, 이소형 b의 세포외 도메인 또는 상기 도메인의 일부분, 접합 영역 (링커) 및 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 Robo-Fc 재조합 단백질이다.

한 특별한 실시양태에서, Robo1 단백질, 이소형 b의 세포외 도메인은 Ig1 및 Ig2 도메인으로 이루어진다. 이들 도메인은 뉴클레오티드 서열 1에 코딩된 서열 2의 펩티드, 또는 서열 2와 80％, 85％, 90％, 95％ 또는 99％ 이상의 동일성을 갖는 서열에 상응한다.

융합 단백질은 또한 "링커"로도 불리는 접합 영역을 포함한다. 본 발명의 문맥에서, 상기 링커는 특히 생체내 절단을 제한함으로써 재조합 단백질 안정성을 제공할 수 있게 한다. Robo1-Fc 분자에 사용될 수 있는 링커는 예를 들어 GluArgProSerPheVal 및 GlyGlyGlyGlySer이다. 당업자는 이러한 용도에 적합한 링커를 선택하는데 충분한 지식을 갖고 있다.

본 발명에 따른 Robo1-Fc 재조합 분자의 Fc 도메인은 이뮤노글로불린의 결정화가능한 단편에 상응한다. 이 Fc 단편은 다양한 이뮤노글로불린 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4로부터의 것일 수 있다. 이는 면역 반응의 이펙터 기능을 담당한다 (WO2008/065543).

본 발명에 따른 한 실시양태에서, Fc 도메인은 IgG4 이뮤노글로불린으로부터의 것이다. 한 특별한 실시양태에서, 특히 2개의 Fc 도메인의 힌지 영역을 안정화시킴으로써 분자의 안정성을 증가시키기 위해 (문헌 [Angla et al., 1993, Mol . Immunol., 30: 105-108]), IgG4-Fc의 잔기 활성, 특히 이펙터 활성을 감소시키거나 제거하기 위해 (WO 97/09351), 재조합 단백질의 생성 동안 동질성을 증가시키기 위해, 1점 이상의 돌연변이 또는 결실이 IgG4 Fc 도메인에 도입되었다. 특히, 2점 이상의 돌연변이, 바람직하게는 3점 돌연변이가 IgG4 Fc 도메인에 도입되었다. 본 발명에 따른 Robo1-Fc L1, Robo1-Fc L2 및 Robo1-Fc L3 분자에서, 바람직한 돌연변이는 다음과 같다:

- S241P (카바트(Kabat) 넘버링), Fc 힌지 영역에서 디술피드-브릿지 결합을 안정화시키기 위해;

- L248E (카바트 넘버링), IgG4-Fc 도메인의 잔기 이펙터 활성을 제거하기 위해;

- C-말단 리신의 부재, 상기 단백질의 이질성을 감소시키기 위해.

Robo1 이소형 b의 Ig1 및 Ig2 도메인, 링커 및 상기 기재된 바와 같이 돌연변이된 IgG4 도메인을 포함하는 본 발명에 따른 Robo1-Fc 분자는 Robo1-Fc L1, Robo1-Fc L2 및 Robo1-Fc L3이다.

Robo1-Fc L1은 뉴클레오티드 서열 3에 의해 코딩되는 서열 4의 단백질에 상응한다.

Robo1-Fc L2는 뉴클레오티드 서열 5에 의해 코딩되는 서열 6의 단백질에 상응한다.

Robo1-Fc L1 및 Robo1-Fc L2는 링커의 성질의 측면에서 상이하다.

Robo1-Fc L3은 뉴클레오티드 서열 23에 의해 코딩되는 서열 24의 단백질에 상응한다.

본 발명의 한 특별한 실시양태에서, 1점 이상의 돌연변이 또는 결실은 생성 동안에 동질성을 증가시키기 위해 도입되었다. 특히, 1개의 아미노산, 바람직하게는 2개의 아미노산이 N-말단 위치에서 말단절단되었다. 본 발명에 따른 이러한 Robo-1-Fc 분자는 Robo1-Fc L3 분자이며, 이는 2개의 아미노산 (Ser20 및 Arg21)이 말단절단되었고, 아미노산 Leu 22가 인터루킨 2의 단일 펩티드에 융합되었다.

본 발명에 따른 Robo1-Fc 분자의 동질성은 또한 이미 기재된 바와 같이 C-말단 Lys을 절단함으로써 증가된다.

본 발명의 대상은 또한 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 24에 상응하는 단백질 서열을 갖거나, 또는 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 24와 80％, 85％, 90％, 95％ 또는 99％ 이상의 동일성을 갖는 단백질이다. 이들 단백질 변이체는 서열 2, 서열 4, 서열 6 또는 서열 24를 갖는 단백질과 동일한 생물학적 활성, 특히 Slit 패밀리의 단백질과 상호작용하는 그들의 능력을 갖는다.

본 발명에 따른 Robo1-Fc 단백질은, 이들 단백질을 코딩하는 발현 플라스미드를 진핵세포 재조합 단백질의 발현에 적합한 임의의 세포 유형: HEK293, CHO 등에 트랜스펙션시킨 다음, 배양 상청액 중에서 회수하여, 통상적인 방법에 따라 정제함으로써 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 Robo1-Fc L1, Robo1-Fc L2 및 Robo1-Fc L3 단백질의 특징분석은, 이들이 생물학적 치료제로서 그들의 투여에 필요한 양을 갖는다는 것을 확인할 수 있게 한다.

본 발명에 따른 Robo1-Fc 단백질은 Slit 패밀리의 단백질과 상호작용하는 능력을 갖는다.

본 발명에 따른 Robo1-Fc 단백질은 특히 그들의 D2 도메인과 상호작용함으로써 인간 Slit1, Slit2 및 Slit3 단백질, 및 뮤린 Slit2 단백질을 특이적으로 인식한다. 그들의 친화도는 Slit 패밀리의 3가지 일원과 유사하다.

본 발명의 또다른 대상은 본 발명에 따른 단백질을 코딩하는 핵산 분자에 상응한다.

따라서, 서열 1, 서열 3, 서열 5 또는 서열 23에 상응하거나, 또는 서열 1, 서열 3, 서열 5 또는 서열 23을 갖는 분자와 80％, 85％, 90％, 95％ 또는 99％ 이상의 동일성을 갖는 핵산 분자는 본 발명의 일부이다.

본 발명의 또다른 대상은 Slit 패밀리의 단백질이 과발현되는 질환의 치료에서의 본 발명에 따른 Robo1-Fc 단백질의 용도로 이루어진다.

본 발명에 따른 Robo1-Fc에 의해 표적화될 수 있는 Slit 패밀리의 단백질은 Slit1, Slit2 또는 Slit3이다.

Robo1이 Slit 패밀리의 다양한 일원과 상호작용할 수 있음이 밝혀졌다. 결론적으로, 본 발명에 따른 Robo1-Fc 단백질은 Slit1, Slit2 및 Slit3에 의해 매개되는 신호전달 경로를 동시에 억제할 수 있으며, 이는 이들 경로 중 하나에만 특이적인 항체와 비교해서 치료 범위를 확장시키는 것을 가능하게 한다는 점을 주목하는 것이 유리하다.

또다른 실시양태에서, Robo1-Fc 단백질은 내피 세포 증식을 억제하지 않고 혈관생성을 억제함으로써 Slit 패밀리의 단백질이 과발현되는 질환을 치료하는데 사용된다. 혈관 성숙 결함과 연관된 이 항-혈관생성 활성은 "비생산적인 혈관생성"으로도 불린다.

구체적으로, 실험적 연구에 의해, 본 발명에 따른 Robo1-Fc 분자가 내피 세포 증식은 억제하지 않고 세관의 형성을 억제할 수 있음이 밝혀졌다. 이들은 폐암의 뮤린 모델에서 종양 부피를 상당히 감소시키는 것을 가능하게 한다.

한 바람직한 실시양태에서, Slit 단백질이 과발현되는 질환의 치료에 사용될 수 있는 Robo1-Fc 단백질은 Robo1-Fc L1, Robo1-Fc L2 및 Robo1-Fc L3이며, 그로부터 유래되는 분자에는 특히 이들 분자의 생물학적 특성을 유의하게 변경시키지 않으면서 생산되는 동안에 동질성을 증가시키는 것을 목적으로 하는 점 돌연변이 또는 결실이 포함된다.

일반적으로, 본 발명에 따른 Robo-1-Fc 단백질에 의해 치료될 수 있는 질환은 Slit 경로의 억제가 치료 효과를 가질 수 있는 모든 질환, 특히 Slit 패밀리의 단백질이 과발현되는 질환, 특히 Slit2가 과발현되는 질환이다.

본 발명에 따른 Robo1-Fc 분자가 Slit2 분자와 특이적으로 결합하기 때문에, 상기 분자가 Slit2가 연관된 2가지 경로, 즉 Robo1/Slit2 및 Robo4/Slit2 경로를 동시에 억제할 수 있음을 주목하는 것은 흥미로운 것이다.

본 발명의 구체적인 실시양태에서, 본 발명에 따른 Robo1-Fc 단백질은 암, 특히 췌장암, 결장암, 림프계 전이가 있거나 없는 결장직장암, 유방암, 폐암 및 폐 전이, 난소암, 자궁경부암, 흑색종, 신장암, 구강암, 전립선암, 간암 등의 치료에 사용된다. 구체적인 실시양태에서, 상기 암은 Slit2가 과발현되는 암이다.

한 특별한 실시양태에서, Robo-Fc 단백질은 폐암의 치료에 사용된다.

또다른 특별한 실시양태에서, Robo-Fc 단백질은 간의 암, 예를 들어 간암, 간세포 암종 (HCC), 섬유층판 암종 (간세포 암종의 병리학적 변형), 담관암종, 간아세포종, 또는 간의 혈관육종의 치료에 사용된다.

본 발명에 따른 Robo1-Fc 분자는 또한 현행 요법에 대한 대안으로서 또는 보완으로서 항암 의약으로서 사용될 수 있다.

특히, 이들 분자는 항암 화합물과 조합되어 (임의로 동시에) 투여될 수 있다.

본 발명의 또다른 대상은 상기 정의된 바와 같은 Robo1-Fc 단백질 및 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 Robo1-Fc 단백질은 국부, 경구, 비경구, 비내, 정맥내, 근육내, 피하, 안내 등의 투여의 측면에서 제약 조성물로 제제화될 수 있다. 바람직하게는, 제약 조성물은 주가가능한 제형을 위한 제약상 허용되는 비히클을 함유한다. 이들은 특히 등장성 멸균 염수 용액 (인산일나트륨 또는 인산이나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘 또는 염화마그네슘 등, 또는 이러한 염의 혼합물), 또는 경우에 따라 멸균수 또는 생리 염수의 첨가에 의해 주사가능한 용질의 제형화를 가능하게 하는 건조, 특히 동결-건조 조성물일 수 있다.

본 발명의 또다른 측면은 환자에서 Slit 패밀리의 분자의 과발현의 검출을 위한 진단 도구로서의 Robo1-Fc 분자의 용도로 이루어진다. 이는 Slit 경로가 여러 암과 연관되어 있음이 밝혀졌기 때문이다. Slit 신호전달 경로의 저해를 평가하기 위한 시험 대책은 Robo1-Fc 분자의 투여를 기반으로 하는 치료에 반응할 수 있는 환자를 선별하기 위한 목적에 매우 유용하다.

이 진단 도구는, Slit 분자의 과발현을 나타내기 쉬운 환자로부터의 생물학적 샘플 (혈액, 뇨, 종양 생검)과 접촉하기에 적합한 형태로 Robo1-Fc 분자를 포함하는 즉시 사용가능한 키트의 형태일 수 있다. Robo-Fc 분자는 임의로 사전 표지화될 수 있으며, Robo-Fc 및 Slit의 조합물이 검출되면, 대조군 샘플과 비교해서 생물학적 샘플에서의 Slit 단백질의 발현이 증가된 것으로 평가된다. 이 키트는 예를 들어 ELISA 키트의 형태일 수 있다.

<도면의 설명>

도 1: Robo1-Fc L1, Robo1-Fc L2 및 Robo1-Fc L3 단백질에 대한 발현 플라스미드.

도 2: ELISA에 의해 Robo1-Fc 융합 단백질 변이체와 Slit2 단백질의 상호작용의 평가.

도 3: FACS에 의해 측정되는, Slit2를 발현하지 않는 HEK293 세포에 대한 Robo1-Fc의 친화도.

도 4: FACS에 의해 측정되는, Slit2를 발현하는 HEK293 세포에 대한 Robo1-Fc의 친화도.

도 5: 마우스에서 iv 주사후 Robo1-Fc 단백질의 약동학적 프로필. A. Robo1-Fc L1의 투여, B. Robo1-Fc L2의 투여.

도 6: 내피 세포 및 간엽 세포를 이용한 공배양 시험에서 Robo1-Fc L1 분자의 효과. A. Robo1-Fc L1은 배양물에서 세관 형성을 억제한다. B. Robo1-Fc L1은 VEGF-유도된 유사세관 형성을 유의하게 억제한다.

도 7: 마우스에서 생체외 대동맥 고리 모델에 대한 Robo1-Fc L1 분자의 효과의 평가. A: 대동맥 고리의 제조 및 세관 측정에 대한 프로토콜의 기재. B: a. 대조군; b. Robo1-Fc Slit2-마이너스 500 ㎍/mL + VEGF 10 ng/mL; c. Robo1-Fc L1 500 ㎍/mL + VEGF 10 ng/mL.

도 8: 대조군에서 및 25 mg/kg의 Robo1-Fc를 4회 주사한 군에서, 세포 주입 28일 후의 평균 종양 중량 (SCID 마우스의 간의 좌엽에서 HepG2 세포).

도 9: 대조군에서 및 5 mg/kg의 Robo1-Fc를 주2회 주사한 군에서, 세포 주입 28일 후의 평균 종양 중량 (SCID 마우스의 간의 한쪽 엽에서 Hep3B 세포).

도 10: 대조군에서 및 5 mg/kg의 Robo1-Fc를 주2회 주사한 군에서 혈장 AFP 농도.

<실시예>

실시예 1: Robo1 - Fc 단백질의 제조

a. 생물학적 치료제로서 사용되는 Robo1-Fc 재조합 단백질을 발현시키는 제조물.

Robo1-Fc 재조합 단백질은 인간 Robo1 단백질, 이소형 b의 처음 두개의 이뮤노글로불린 도메인 (Ig1-Ig2) (NP_598334) 및 인간 이뮤노글로불린 G4의 Fc 도메인 (hIgG4-Fc, SwissProt IGHG4_HUMAN)의 융합으로 이루어진다.

Robo1-Fc L1 제조물을 수득하기 위해, 이 단백질 (서열 2)의 이뮤노글로불린 (Ig) 도메인 Ig1 및 Ig2에 상응하는 cDNA (서열 1)의 단편에 이어서, GluArgProSerPheVal 링커를 인간 태아 심장 cDNA 라이브러리 (ref. HL5042T, 클론텍(Clontech))를 이용하여 PCR에 의해 증폭시켰다. 이어서, 이 증폭된 단편을 진핵세포 발현 벡터 pXL4904 (도 1에 기재됨)로 클로닝하여, Robo1의 2개의 Ig 도메인이 C-말단 위치에서 인간 IgG4의 Fc 도메인과의 융합으로서 발현되도록 하였다. 하기 특징을 수득하기 위해 3점 돌연변이를 IgG4-Fc 도메인에 도입하였다: S241P (카바트 넘버링), Fc 힌지 영역에서 디술피드-브릿지 결합을 안정화시키기 위해; L248E (카바트 넘버링), IgG4-Fc 도메인의 잔기 이펙터 활성을 제거하기 위해; C-말단 리신의 부재, 상기 단백질의 이질성을 감소시키기 위해. 이 재조합 단백질을 발현시키는데 사용된 cDNA 서열은 서열 3에 상응한다. 수득된 재조합 단백질은 Robo1-Fc L1로 불리며, 단백질 서열 4에 상응한다.

Robo1-Fc L2 제조물을 수득하기 위해, 언급된 링커가 없는 것을 제외하고는 Ig1-Ig2 도메인에 상응하는 동일한 cDNA를 진핵세포 발현 벡터 pXL4909 (도 1에 기재됨)에 클로닝하였고, 이는 Robo1-Fc L1의 제조에서 기재된 3점 돌연변이를 함유하지만, 이번에는 Fc 도메인의 상류에 GlyGlyGlyGlySer 링커를 도입한, IgG4의 동일한 Fc 도메인과의 융합으로서 이들 Ig 도메인의 발현을 가능하게 한다. 이 재조합 단백질을 발현시키는데 사용된 cDNA 서열은 서열 5에 상응한다. 수득된 재조합 단백질은 Robo1-Fc L2로 불리며, 단백질 서열 6에 상응한다.

b. 대조군으로서 사용되는 Robo1-Fc 단백질의 제조

Robo1-Fc Slit2-마이너스 제조물을 수득하기 위해, pXL4904 플라스미드에 이미 클로닝된 cDNA를, 위치 38에서 류신을 글루타민으로 및 위치 89에서 페닐알라닌을 티로신으로 치환시키는 점 돌연변이가 도입되도록 PCR에 의해 변형시켰다. 이 재조합 단백질을 발현시키는데 사용된 cDNA 서열은 서열 7에 상응한다. 수득된 재조합 단백질은 Robo1-Fc Slit2-마이너스로 불리며, 단백질 서열 8에 상응한다.

Robo1-Fc 헤파린-마이너스 제조물을 수득하기 위해, pXL4904 플라스미드에 클로닝된 cDNA를, 위치 97에서 아르기닌을 아닐린으로 및 위치 98에서 리신을 알라닌으로 치환시키는 점 돌연변이가 도입되도록 PCR에 의해 변형시켰다. 이 재조합 단백질을 발현시키는데 사용된 cDNA 서열은 서열 9에 상응한다. 수득된 재조합 단백질은 Robo1-Fc 헤파린-마이너스로 불리며, 단백질 서열 10에 상응한다.

c. 다양한 Robo1-Fc 단백질의 제조

2가지 단백질 Robo1-Fc L1 및 Robo1-Fc L2는, 출원 WO2008/065543에 기재된 바와 같이, 각각 pXL4904 및 pXL4909 플라스미드, 및 2가지 N-글리칸 글리코실화 효소, 즉 α-2,3-시알릴트랜스퍼라제 및 β-1,4-갈락토실트랜스퍼라제를 발현시키는 헬퍼 플라스미드 pXL4544 및 pXL4551을 사용하여 HEK293 세포주 (프리스타일(FreeStyle) 293-F 세포 ref 51-0029, 인비트로젠(Invitrogen), 공급자의 추천에 따라)에서 일시적으로 트랜스펙션시킴으로써 제조하였다. 이들 단백질은 또한 각각 pXL4904 및 pXL4909 플라스미드를 사용하여 CHO 세포주 (CHO-S 세포, ref 11619-012, 인비트로젠, 공급자의 추천에 따라)에서 트랜스펙션시킴으로써 제조하였다.

HEK293 세포의 배양 부유물에서 발현된 Robo1-Fc L1 및 Robo1-Fc L2 단백질을, 단백질 A 친화도 칼럼 (맵셀렉트(MabSelect) ref. 17-5199-02, 아머샴 바이오사이언시즈(Amersham Biosciences)) 상에서 20 mM NaCl / 100 mM 아세트산 완충액으로 용리시켜 크로마토그래피에 의해 정제한 다음, PBS 완충액 (ref. 14190-094, 인비트로젠) 중에서 제제화하였다.

Robo1-Fc Slit2-마이너스 및 Robo1-Fc 헤파린-마이너스 재조합 단백질을 동일한 방식으로 제조하고 정제하였다.

d. Robo1-Fc 재조합 단백질의 물리화학적 특성분석

SDS-PAGE 및 겔 투과 분석에 의해, 상기 단백질이 이합체이고 96％ 초과의 순도를 갖는다는 것을 확인할 수 있었다. 질량 분광 분석에 의해, 이들 단백질의 동일성을 입증할 수 있었고, 탈글리코실화된 단백질의 측정된 중량은 인실리코 계산된 중량과 완벽하게 일치하였다. 문헌 [Saddic et al ., 2002. (Methods Mol. Biol. 194: 23-36] 및 [Anumula et al., 1998. Glycobiology 8: 685-694)]에 기재된 바와 같이 단당류 조성의 분석 및 N-글리칸 시알산의 정량화에 의해, 상기 단백질이 매우 많은 정도로 시알릴화되었음이 입증될 수 있었다. 이 결과는 표 1에 제시된다. Robo1-Fc L1 및 Robo1-Fc L2 분자의 N-말단 분석에 의해, 이들 정제된 단백질은 처음 2개의 잔기 (Ser20 및 Arg21)가 말단절단된 형태를 다양한 비율 (0 내지 40％)로 함유하였음이 확인되었다는 것을 주목해야 할 것이다.

<표 1>

실시예 2: 리간드로서 사용되는 Slit 단백질의 제조

인간 Slit2 단백질을 코딩하는 cDNA는 참고 단백질 NP_004778에 상응한다. 이 cDNA의 단편을 인간 뇌 cDNA 라이브러리 (ref. 639300, 클론텍(Clontech))를 사용하여 PCR에 의해 증폭시켰다.

D2 도메인에 상응하는 cDNA를 진핵세포 발현 벡터 pXL4911에 클로닝하여, C-말단 위치에서 His 태그를 함유하는 이 도메인을 발현시켰다. 이 재조합 단백질을 발현시키는데 사용된 cDNA 서열은 서열 11에 상응한다. 수득된 재조합 단백질은 Slit2-D2로 불리며, 단백질 서열 12에 상응한다.

D1-D2 도메인에 상응하는 cDNA를 진핵세포 발현 벡터 pXL4912로 클로닝하여, C-말단 위치에서 His 태그를 함유하는 이들 두 도메인을 발현시켰다. 이 재조합 단백질을 발현시키기 위해 사용된 cDNA 서열은 서열 13에 상응한다. 수득된 재조합 단백질은 Slit2-D1D2로 불리며, 단백질 서열 14에 상응한다.

Slit2 단백질의 세포외 부분 (Nt)에 상응하는 cDNA를 진핵세포 발현 벡터 pXL5033으로 클로닝하여, C-말단 위치에서 His 태그를 갖는 이 단백질을 발현시켰다. 이 재조합 단백질을 발현시키는데 사용된 cDNA 서열은 서열 15에 상응한다. 수득된 재조합 단백질은 Slit2-N으로 불리며, 단백질 서열 16에 상응한다.

뮤린 Slit2 단백질의 D2 도메인을 코딩하며 상기 기재된 참고 단백질 NP_848919의 D2 도메인에 상응하는 cDNA를 pXL4911 플라스미드에 클로닝된 cDNA로부터 수득하였다. 5점 돌연변이를 생성할 수 있게 하는 4개의 단편을 주형으로서 pXL4911을 사용하여 PCR에 의해 생성한 다음, 이들 단편을 주형으로서 사용하여 순차적 PCR에 의해 완전 D2 도메인을 코딩하는 cDNA를 증폭시켰다. 상기 단백질은 Thr311Ser, Lys313Arg, Ile329Leu, Ile411Val 및 Pro418Ala 돌연변이를 보유하며, 이는 뮤린 Slit2 단백질의 D2 도메인과 동일할 수 있게 한다. 이 플라스미드는 C-말단 위치에서 His 태그를 갖는 뮤린 Slit2 단백질의 D2 도메인을 발현시키는 것을 가능하게 한다. 이 재조합 단백질을 발현시키는데 사용된 cDNA 서열은 서열 17에 상응한다. 수득된 재조합 단백질은 mSlit2-D2로 불리며, 단백질 서열 18에 상응한다.

인간 Slit1 단백질을 코딩하는 cDNA는 상기 기재된 참고 단백질 NP_003052에 상응한다. 이 cDNA의 단편은 인간 뇌 cDNA 라이브러리 (ref. 639300, 클론텍)를 사용하여 PCR에 의해 증폭시켰다. D2 도메인에 상응하는 cDNA를 진핵세포 발현 벡터 pXL5020에 클로닝하여, C-말단 위치에서 His 태그를 함유하는 이 도메인을 발현시켰다. 이 재조합 단백질을 발현시키는데 사용된 cDNA 서열은 서열 19에 상응한다. 수득된 재조합 단백질은 Slit1-D2로 불리며, 단백질 서열 20에 상응한다.

인간 Slit3 단백질을 코딩하는 cDNA는 상기 기재된 참고 단백질 NP_003053에 상응한다. 이 cDNA의 단편은 인간 뇌 cDNA 라이브러리 (ref. 639300, 클론텍)를 사용하여 PCR에 의해 증폭시켰다. D2 도메인에 상응하는 cDNA를 진핵세포 발현 벡터 pXL5021에 클로닝하여, C-말단 위치에서 His 태그를 함유하는 이 도메인을 발현시켰다. 이 재조합 단백질을 발현시키는데 사용된 cDNA 서열은 서열 21에 상응한다. 수득된 재조합 단백질은 Slit3-D2로 불리며, 단백질 서열 22에 상응한다.

Slit2-D2, Slit2-D1D2 및 Slit2-N으로 불리는 3가지 단백질을, pXL4911 플라스미드 (각각, pXL4912 또는 pXL5033)를 사용하여 HEK293 세포주 (공급자의 추천에 따른 프리스타일 293-F 세포, 인비트로젠)에서 일시적으로 트랜스펙션시킴으로써 제조하였다.

HEK293 세포의 배양 상청액에서 발현된 Slit2-D2 및 Slit2-D1D2 단백질을 Ni-킬레이팅 세파로스 칼럼 (ref. 17-0409-03, 아머샴 바이오사이언시즈) 상에서 이미다졸 완충액으로 용리시키는 크로마토그래피에 의해 정제한 다음, 1M NaCl로 조정된 PBS 완충액 (ref. 14190-094, 인비트로젠) 중에서 제제화하였다. 질량 분광 분석 (LC/MS)은 이들 단백질의 동일성을 입증하는 것을 가능하게 하였다.

mSlit2-D2, Slit1-D2 및 Slit3-D2로 불리는 3가지 단백질을 유사한 방식으로 제조하고 정제하고 특성분석하였다.

실시예 3: 3가지 방법: ELISA , SPR 및 FACS 에 의해 Slit 단백질에 대한 및 헤파린에 대한 Robo1 - Fc 재조합 단백질의 친화도의 연구

a. 헤파린에 대한 Robo1-Fc 단백질의 친화도

헤파린에 대한 Robo1-Fc 제조물의 친화도를 측정하기 위해, 정제되고 10 mM 인산염, pH 7.0 중에서 제제화된 2 mg의 Robo1-Fc 단백질을 헤파린 칼럼 (1 mL HiTrap 헤파린-세파로스 HP, 지이 헬쓰케어(GE Heathcare)) 상에서 NaCl의 0 -> 1.5 M 선형 구배로 용리시켜 크로마토그래피하였다.

표 2는 문헌 [Fukuhara, N. et al., 2008 J. Biol. Chem. 283 p16226-16234]에 기재된 바와 같이 Robo1-Fc L1 단백질을 용리시키는데 필요한 448 mM의 NaCl 농도를 나타낸다.

<표 2>

이들 결과는, Robo1-Fc 헤파린-마이너스 단백질이 상기 칼럼에 보유되지 않으며, 따라서 헤파린에 대해 어떠한 친화도도 더이상 갖지 않음을 보여준다. 따라서, 이 단백질은 헤파린-음성 돌연변이체이다.

b. Robo1-Fc 단백질 변이체와 인간 Slit2 단백질의 D2 도메인과의 상호작용의 평가

이 실시예는 ELISA 검정에 의해 Robo1-Fc L1 및 Robo1-Fc L2로 불리는 2가지 변이체와 그들의 천연 리간드 (이들 실험에서는 인간 Slit2의 D2 도메인)와의 상호작용을 기재한다.

인간 Slit2-D2 단백질을 이뮬론-4 효소-연결된 플레이트 (브이더블유알 사이언티픽 인크.(VWR Scientific Inc.) 뉴저지주 스웨데스보로)에 결합시켰다. 소정 농도 범위 (20 ㎍/mL 내지 0.02 ㎍/mL)의 Robo1-Fc L1 및 Robo1-Fc L2 변이체를 첨가한 다음, 퍼옥시다제-접합된 염소 항-인간 IgG 항체 (시그마(Sigma); ref. A0170, 1:50000으로 희석함)를 이용하여 검출하였다. TMB-H₂O₂ 기질 (인터킴(Interchim); ref UP664780)을 이용하여 가시화를 수행하고, 450 nm에서 플레이트 판독기를 이용하여 측정을 수행하였다. 결과를 도 2에 기록하였다. 이는 두 변이체 Robo1-Fc L1 및 L2가 인간 Slit2 단백질 (특히 D2 도메인)과 특이적으로 상호작용한다는 것을 보여준다.

c. Robo1-Fc 단백질과 Slit 패밀리, 즉 Slit1 및 Slit3의 인간 변이체의 상호작용의 평가

이 실시예는 ELISA 검정에 의해 Robo1-Fc L1 융합 단백질과 Slit1-D2, Slit2-D2 및 Slit3-D2 변이체와의 상호작용을 기재한다.

인간 Slit 변이체의 D2 도메인을 이뮬론-4 효소-연결된 플레이트 (브이더블유알 사이언티픽 인크., 뉴저지주 스웨데스보로)에 결합시켰다. 소정 농도 범위 (1 ㎍/mL 내지 0.001 ㎍/mL)의 Robo1-Fc L1 융합 단백질을 첨가한 다음, 퍼옥시다제-접합된 염소 항-인간 IgG 항체 (시그마; ref. A0170, 1:50000으로 희석함)를 이용하여 검출하였다. TMB-H₂O₂ 기질 (인터킴; ref UP664780)을 이용하여 가시화를 수행하고, 450 nm에서 플레이트 판독기를 이용하여 측정을 수행하였다. 유사하게, Slit2-결합 부위의 수준에서 돌연변이된 Robo1-Fc Slit2-마이너스 변이체를 상기 기재된 것과 동일한 조건 하에서 ELISA 검정에 의해 소정 농도 범위 (20 ㎍/mL 내지 0.02 ㎍/mL)에 따라 평가하였다. 결과는 하기 표 3에 기록하였다.

<표 3>

이들 결과는, Robo1-Fc 단백질이 패밀리 Slit1, Slit2 및 Slit3의 3가지 단백질 (특히 그들의 D2 도메인)과 특이적으로 상호작용한다는 것을 보여준다.

또한, Robo1-Fc Slit2-마이너스 단백질은 헤파린에 대해 더이상 친화도를 갖지 않으며, 따라서 이는 헤파린-음성 돌연변이체이다.

d. Robo1-Fc 단백질과 뮤린 Slit2 단백질과의 상호작용의 평가

이 실시예는 ELISA 검정에 의해 Robo1-Fc L1 융합 단백질과 뮤린 단백질 mSlit2-D2와의 상호작용을 기재한다.

뮤린 단백질 mSlit2-D2를 이뮬론-4 효소-연결된 플레이트 (브이더블유알 사이언티픽 인크., 뉴저지주 스웨데스보로)에 결합시켰다. 소정 농도 범위 (2 ㎍/mL 내지 0.002 ㎍/mL)의 Robo1-Fc L1 융합 단백질을 첨가한 다음, 퍼옥시다제-접합된 염소 항-인간 IgG 항체 (시그마; ref. A0170, 1:50000으로 희석함)를 이용하여 검출하였다. TMB-H₂O₂ 기질 (인터킴; ref UP664780)을 이용하여 가시화를 수행하고, 450 nm에서 플레이트 판독기를 이용하여 측정을 수행하였다. 결과는 하기 표 4에 기록하였다.

<표 4>

이들 결과는, Robo1-Fc 단백질이 뮤린 Slit2 단백질과 특이적으로 상호작용한다는 것을 보여준다.

e. SPR에 의해 측정되는 Slit 단백질에 대한 Robo1-Fc의 친화도

이 실시예는 SPR (표면 플라즈몬 공명; 비아코어(BIAcore) 2000)에 의해 Robo1-Fc L1 융합 단백질과 인간 Slit2 단백질 (이 실험에서는, Slit2-D2)의 친화도 상수의 측정을 기재한다. Robo1-Fc 융합 단백질을 CM5 칩에 결합시킨 후, Robo1-Fc 단백질과 인간 Slit2 단백질 사이의 상호작용을 분석하였다. 동적 측정은 문헌 [Canziani et al., (2004. Anal. Biochem. 325: 301-307)]의 프로토콜에 따라 수행하였다.

<표 5>

Slit2-D2 단백질을 CM5 칩에 결합시킨 후, Robo1-Fc L1 융합 단백질과 인간 Slit2 단백질 사이의 친화도 상수를 측정하는 것으로 이루어지는 두번째 방법을 분석하였다. 동적 측정은 문헌 [Canziani et al., (2004. Anal. Biochem. 325: 301-307)]에 따라 2개의 비-등가 결합 부위를 갖는 모델에서 스캐차드(Scatchard) 방법을 이용하여 수행하였다.

<표 6>

f. FACS에 의해 측정되는 Slit에 대한 Robo1-Fc의 친화도

이 실시예는 Slit2를 발현하는 HEK293 포유류 세포에 대한 Robo1-Fc 단백질의 친화도를 기재한다.

실시예 1에 기재되고 사용된 HEK293 세포를, 포유류 세포에서 코딩되는 cDNA를 갖지 않는 밸러스트 플라스미드, 또는 Slit2-D2 단백질을 코딩하는 pXL4911 플라스미드, 또는 Slit2-D1D2 단백질을 코딩하는 pXL4912 플라스미드, 또는 실시예 2에 기재된 Slit2-N 단백질을 코딩하는 pXL5033으로 트랜스펙션시켰다. 트랜스펙션 48 시간 후에 세포를 96-웰 플레이트에 분배하고, Robo1-Fc 단백질을 4℃에서 30 분 동안 0.01 내지 3 mg/L의 농도 범위로 첨가하였다. Robo1-Fc 단백질은 Robo1-Fc L1 생물학적 치료제, 또는 Robo1-Fc Slit2-마이너스 돌연변이체, 또는 Robo1-Fc 헤파린-마이너스 돌연변이체이다. 세포를 세척하고, 알렉사(Alexa) 488 (ref: A-11013, 인비트로젠)로 표지된 항-인간 Fc 항체를 4℃에서 30 분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 표지된 HEK293 세포를 FACS (지오민(Geomean))에 의해 정량화하였다.

도 3은 Slit2 발현의 부재 하에서 FACS에 의해 측정되는 형광을 통해 HEK293 세포가 Robo1-Fc 단백질에 결합하는 것을 기재한다. Robo1-Fc 단백질 및 또한 Robo1-Fc Slit2-마이너스 돌연변이체는 HEK293 세포에 결합하는 반면에, Robo1-Fc 헤파린-마이너스 돌연변이체는 결합하지 않았다. 따라서, Robo1-Fc는 0.3 내지 0.03 mg/L의 낮은 Robo1-Fc 농도에서 헤파린 결합을 통해 HEK293 세포에 부분적으로 결합한다.

도 4는 Slit2-N이 일시적인 트랜스펙션에 의해 발현될 때, FACS에 의해 측정되는 형광을 통해 HEK293 세포가 Robo1-Fc 단백질에 결합하는 것을 기재한다. Robo1-Fc 단백질만이 Slit2-N를 발현하는 HEK293 세포에 결합하였다. Robo1-Fc Slit2-마이너스 및 Robo1-Fc 헤파린-마이너스 돌연변이체는 생물학적 치료용 Robo1-Fc L1 단백질과 비교할 때, 3.0 내지 0.3 mg/L의 Robo1-Fc 농도 범위에서 결합하지 않는다 (또는 거의 결합하지 않는다).

표 7은 Slit2-N, Slit2-D1D2 또는 Slit2-D2 단백질이 HEK293 세포주에서 발현될 때 Robo1-Fc 단백질에 대해 FACS에 의해 측정된 친화도 상수를 기재한다.

<표 7>

이전 실시예에서와 같이, Slit2-음성인 것으로 입증된 Robo1-Fc Slit2-마이너스 돌연변이체 및 Robo1-Fc 헤파린-마이너스 돌연변이체는 생물학적 치료용 단백질에 비해 Slit2에 대해 더 약한 친화도를 갖는다.

Robo1-Fc는 Slit2-D2에 대한 친화도보다 양호한 유사한 친화도로 HEK293 세포에 의해 발현되는 Slit2-N 및 Slit2-D1D2에 결합한다.

실시예 4: Robo1 - Fc L1 및 Robo1 - Fc L2 단백질의 약동학적 특성

이 실시예는 마우스에서 정맥내 (iv)로 1회 주사된 Robo1-Fc 단백질의 약동학적 프로필 및 혈장 농도를 기재한다.

3마리의 Balb/C 마우스 (매회)를 각각의 Robo1-Fc 단백질 2.5 mg/mL를 100 ㎕/10 g (대략 25 mg/kg)의 비율로 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 예정된 시간에 (투여 0.5, 1, 6, 24, 48 및 72 시간 후에), 마우스를 마취하고, 혈액을 샘플링하여, 10 ㎕의 시트레이트 (CPD-A, C-4431 시그마) 및 2 ㎕의 프로테아제 억제제 (완전 프로테아제 억제제 믹스, 로쉐 몰레큘라 바이오케미컬(Roche Molecular Biochemical))를 함유하는 튜브에서 수집하였다. 상기 튜브를 원심분리하고, 혈장 샘플을 수집하여, -20℃에서 동결시켰다.

96-웰 플레이트의 웰을 Slit2 단백질 (Slit2-D2)로 코팅하고, 1/5000 및 1/20000으로 희석된 혈장 샘플을 37℃에서 1 시간 동안 접촉시켰다. 퍼옥시다제-접합된 항-인간 Fc 항체 (ref. 31413, 피어스(Pierce))를 피하 주사한 다음, TMB-H₂O₂ (ref UP664780, 인터킴)에 의해 가시화하고, 흡광도를 450 nm에서 판독하였다. 보정 범위를 각각의 정제된 Robo1-Fc 단백질에 대해 준비하였다.

Robo1-Fc L1 및 Robo1-Fc L2 단백질의 혈장 농도를 도 5에 나타내었다. 약동학적 변수를 하기 표 8에 기재하였고, 이는 상기 단백질이 마우스에서 주사 후에 안정하다는 것을 보여준다.

<표 8>

실시예 5: N-말단 위치에서 그의 동질성과 관련하여 개선된 Robo1 - Fc 생물학적 치료용 단백질의 기재

이 실시예는 처음 2개의 잔기 Ser20 및 Arg21의 부재의 측면에서 Robo1-Fc L1 단백질과 상이한 또다른 Robo1-Fc 단백질 (Robo1-Fc L3으로 불림)의 발현 플라스미드, 제조 및 물리화학적 특성분석을 기재한다.

pXL4904 플라스미드에 클로닝된 cDNA를 PCR에 의해 변형시켜, Ser20 및 Arg21 코돈을 제거하고, 그 다음 코돈 (Leu22)을 인터루킨 2의 펩티드 신호의 코딩 서열에 융합시켰다. 이어서, pXL5004 발현 플라스미드를 생성하였다 (도 1 참조). 이 재조합 단백질을 발현시키는데 사용된 cDNA 서열은 서열 23에 상응한다.

Robo1-Fc L3 단백질을 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조하고, 정제하고, 특성분석하였다. N-말단 분석은, 이 정제된 단백질이 완벽하게 동질성임을 보여주었다. 수득된 재조합 단백질은 Robo1-Fc L3으로 불리며, 단백질 서열 24에 상응한다.

실시예 6: Robo1 - Fc L3 단백질과 인간 Slit2 단백질과의 상호작용의 평가

이 실시예는 ELISA 검정에 의해 Robo1-Fc L3 융합 단백질과 인간 Slit2 단백질 (Slit2-D2)과의 상호작용을 기재한다.

인간 Slit2-D2 단백질을 이뮬론-4 효소-연결된 플레이트 (브이더블유알 사이언티픽 인크., 뉴저지주 스웨데스보로)에 결합시켰다. 소정 농도 범위 (1 ㎍/mL 내지 0.001 ㎍/mL)의 Robo1-Fc L3 융합 단백질을 첨가한 다음, 퍼옥시다제-접합된 염소 항-인간 IgG 항체 (시그마; ref. A0170, 1:50000으로 희석함)를 이용하여 검출하였다. TMB-H₂O₂ 기질 (인터킴; ref UP664780)에 의해 가시화를 수행하고, 450 nm에서 플레이트 판독기를 이용하여 측정을 수행하였다. 수득된 결과는 하기 표 9에 기록하였다.

<표 9>

이들 결과는, Slit2-D2 단백질에 대한 2가지 변이체 Robo1-Fc L1 및 Robo1-Fc L3의 친화도가 유사하다는 것을 보여준다.

실시예 7: 신혈관형성에 대한 Robo - Fc 단백질의 활성의 평가

a. 시험관내 내피 세포 및 섬유아세포 공배양 모델: Robo1-Fc L1 분자의 특이적 활성

시험관내 혈관생성 모델은 인간 피부 섬유아세포의 단층 상에서 인간 정맥 내피 세포의 재배열에 상응한다. 간략히, 섬유아세포 (론자(Lonza))를 24-웰 플레이트 (벡톤 디킨슨(Becton Dickinson))에서 1 ml의 배지 중 40000 세포/웰로 시딩하였다. 증식 3일 후 (D3), 인간 정맥 내피 세포 (HUVEC-론자)를 500 ㎕의 EGM^® 배지 (내피 기저 배지, 론자) + 2％ FCS (태아 소 혈청 - 론자) + 10 ㎍/mL hEGF (재조합 인간 상피 성장 인자 - 론자) 중 10000 세포/웰로 섬유아세포 단층 상에 시딩하였다. 세포를 500 ㎍/mL의 농도에서 30 ng/mL의 VEGF (알앤디 시스템즈(R&D Systems)), Robo1-Fc L1 분자, 또는 Robo1-Fc Slit2-마이너스 음성 대조군으로 자극시켰다 (D3 내지 D9). 3일 후, 배지를 교체하고, 웰을 실험 조건에 따라 자극시켰다.

2일 후, 세포를 에탄올로 고정하고, HUVEC에 특이적인 항-CD31 항체에 이어 항-알칼리성 포스파타제 항체로 표지화한 다음, 알칼리성 포스파타제 기질로 가시화하였다 (D11). 항-CD31 항체로 표지된 세관의 정량화를 현미경 (×4배율) 하에서 영상을 획득함으로써 수행하였고, 유사세관의 길이를 영상 분석 소프트웨어 (바이오콤 비지오랩(Biocom Visiolab) 2000 소프트웨어)를 이용하여 분석하였다 (도 6).

이 시험관내 혈관생성 검정에서, Robo1-Fc L1 (500 ㎍/mL)은 HUVEC에 의해 형성된 세관의 형성에 대해 억제 활성을 나타낸다. 이러한 억제는 82％에 달하며, Robo1-Fc Slit2-마이너스 분자 (음성 대조군)에서 수득된 효과에 비해 통계적으로 유의하다.

b. 생체외 마우스 대동맥 고리 모델: Robo1-Fc L1 분자의 특이적 활성

Robo1-Fc L1 분자를 마우스 대동맥 고리 모델에서 평가하였다. 간략히, 마우스 대동맥을 제거하고, 깨끗이 하고, 1 mm의 절편으로 절단하였다 (D0). 이들 고리를 10 ng/ml의 VEGF, 500 ㎍/mL 농도의 Robo1-Fc L1 분자 또는 500 ㎍/mL 농도의 Robo1-Fc Slit2-마이너스 음성 대조군의 존재 하에서 래트 콜라겐에 포매시켰다. 세관이 고리로부터 형성될 것이며, 따라서 신생혈관의 형성이 시험관 내에서 모방될 것이다. 6일 후, 표지된 세관의 정량화를 현미경 (×3배율) 하에서 영상을 획득함으로써 수행하였고 (도 7A), 유사세관의 길이를 영상 분석 소프트웨어 (바이오콤 비지오랩 소프트웨어 2000)를 이용하여 분석하였다 (도 7).

이들 실험 조건 하에서, Robo1-Fc L1 (500 ㎍/mL)은 음성 대조군으로서 사용된 Robo1-Fc Slit2-마이너스 분자와 비교할 때 형성된 세관의 형성에 대해 강력한 억제 활성을 나타낸다.

이들 결과는, Robo1-Fc L1이 내피 세포 증식을 억제하지 않고도 신생혈관의 형성을 억제할 수 있음을 시사한다. 혈관 성숙 결함과 연관된 이 항-혈관생성 활성은 "비생산적인 혈관생성"으로도 불린다.

실시예 8: 마우스의 폐 종양 모델에서 Robo1 - Fc L1 단백질의 평가

Robo1-Fc L1 분자를 C57/Bl6 마우스에서 폐암 종양 모델에서 평가하였다.

a. 뮤린 폐 종양 모델

뮤린 폐 종양 모델을 수립하기 위해, 8주령의 암컷 C57/Bl6 마우스를 마취시켰다. 마우스의 좌측 견갑골 높이에 있는 영역을 제모하고 소독하였다. 견갑골 위로 1 cm를 절개하였다.

주사될 세포는 루이스(Lewis) 폐암종 종양 세포주 (ATCC, CRL-1642)로부터 유래되었다. 1 vol의 마트리겔 대 4 vol의 세포의 비율로 마트리겔(Matrigel^®)과 상기 세포를 혼합하였다. 세포 농도는 62500 세포/ml이었다. 세포를 마우스당 20 ㎕의 비율로 폐에 주사한 다음, 창상을 봉합하였다.

23일 후, 마우스를 안락사시켰다. 흉곽을 개방하고, 좌측 폐 및 종격 림프절을 제거하였다. 좌측 폐에 존재하는 종양을 전자 캘리퍼스 자를 이용하여 측정하여, 식: l2×L×0.52에 따라 종양 부피를 측정하였다. 종격 림프절을 칭량하였다. 결과를 평균 값 ± 평균으로부터의 표준 편차로 표현하였다. 통계적 분석은 모수 스튜던트(Student) 시험에 의해 수행하였다.

b. 폐 종양을 보유한 마우스를 Robo1-Fc 재조합 단백질로 처리

Robo1-Fc 단백질을 이용하는 처리를 다음과 같이 수행하였다: 종양 세포 주사후 D10, D14, D17 및 D21에, Robo1-Fc 단백질을 함유하는 제조물을 25 mg/kg/일의 용량으로 정맥내로 주사하였다. 대조군은 PBS 완충액 (10 ml/kg)으로 주사하였다.

c. 결과

D23에, Robo1-Fc 재조합 단백질로 처리한 군에서 수득된 종양의 평균 부피는 21.45 ± 2.16 ㎣이고, 대조군에서 수득된 종양의 평균 부피는 39.93 ± 8.41 ㎣이다. Robo1-Fc 단백질로 처리한 동물에서 종양 부피의 감소율은 46％이다. 이 차이는 통계적으로 유의하다 (p<0.05). Robo1-Fc 단백질로 처리한 군에서 수득된 종격 림프절 (전이성 림프절)의 평균 중량은 12.50 ± 1.26 mg이다. 대조군에서 수득된 종격 림프절의 평균 중량은 30.67 ± 7.69 mg이다. Robo1-Fc 단백질로 처리한 군에서 종격 림프절의 중량 감소율은 유의성 한계에서 59％이다 (p=0.07).

실시예 9: 인간 간암의 2가지 모델에서 Robo1 - Fc L1 단백질의 평가

Robo1-Fc L1 분자를 SCID 마우스의 인간 간암의 2가지 모델에서 평가하였다.

A. HepG2 세포주를 이용하는 SCID 마우스에서 인간 간암의 동소 모델

a. 모델의 기재

암컷 SCID 마우스를 (케타민/크실라진의 혼합물로) 마취시키고, 절개 영역을 제모하였다. 피부를 깨끗이 하고, 소독한 후, 피부 및 근육 벽에서 늑골 밑 1 cm를 절개하였다. 세포를 주사하기 위해 간엽의 일부를 조심해서 복막으로부터 추출하였다. 50 ㎕ 부피의 세포 현탁액 (ATCC로부터 기원하는 HepG2, 마트리겔®과 40×10⁶ 세포/ml로 혼합된 인간 간아세포종 세포)을 좌엽에 주사하였다. 상기 좌엽을 복강 내로 다시 넣었다. 복막을 외과용 접착제로 밀폐시킨 다음, 피부를 스테이플로 봉합하였다. 마우스를 PBS 중에 25 mg/kg로 용해된 Robo1-Fc로 주2회 i.p. 주사로 처리하였다. 처리는 세포 이식 2주 후에 시작하였다. 세포 접종 4주 후에, 부검을 위해 동물을 희생시켰다.

b. 인간 간암을 보유한 마우스를 Robo1-Fc 재조합 단백질로 처리

이 모델에서 Robo1-Fc를 25 mg/kg의 용량으로 주2회 처리하여 평가하였다. 마우스의 체중을 프로토콜의 첫째 날 및 마지막 날에 측정하였다. 동물을 희생시킨 후, 종양의 중량을 세포 주사 28일 후에 측정하였다.

c. 결과

프로토콜 동안에 종양 성장은 대조군 동물의 체중의 상당한 손실을 초래한 반면에, Robo1-Fc로 처리한 동물은 실험 말기에 동일한 체중을 갖는다 (표 10). 실험 말기에, Robo1-Fc를 4회 i.p. 주사한 후, Robo-1-Fc-처리군의 평균 종양 중량은 용매를 주사한 대조군에 비해 30％만큼 유의하게 감소하였다 (p < 0.05) (도 8).

<표 10>

B. Hep3B 세포주를 이용하는 SCID 마우스에서 인간 간암의 동소 모델

a. 모델의 기재

이 HCC 모델에서는, Hep3B 세포주를 사용하였다. 이 종양 세포주는 어린 환자의 간아세포종으로부터 유래된 시판되는 세포주 (ATCC로부터)이다. 실시예 9 A a)에 이미 기재된 것과 동일한 프로토콜의 세포 주사를 이용하였다. 세포의 초기 농도는 50 ㎕의 주사된 부피 중 2.10⁶이다.

b. Hep3B 종양을 보유한 마우스를 Robo1-Fc로 처리

이 모델에서 Robo1-Fc를 5 mg/kg의 주2회 처리에 의해 평가하였다. 마우스를 처리하기 전에 및 다음 처리 전에 매번 칭량하여, 투여량을 주사된 부피로 조정하였다. 또한, 마우스를 희생시키기 전에 프로토콜의 마지막 날에 칭량하였다. 프로토콜의 마지막 날에 희생시킨 후, 종양이 있는 간엽을 측정하였다. 추가로, 희생시키기 전에, α페토단백질 (AFP) 측정을 위해 마우스의 혈액을 빼내어, 혈청을 폐기하였고; AFP는 암이 있는 간 세포에 의해 분비되고, 현재 인간에서 HCC 발달의 바이오마커로서 허용된다 (문헌 [Fimus et al., 2004, Mol Diagn8(4):207-12. Review]).

c. 결과

마우스는 35일간의 종양 발달 동안에 체중이 중가하지 않았다. 5 mg/kg의 Robo1-Fc의 처리는 마우스 체중에 대해 어떠한 효과도 나타내지 않았다 (표 11). 실험 말기에, 대조군의 평균 종양 중량은 895 ± 156 mg이었다. Robo1-Fc 처리군의 평균 종양 중량은 483 ± 55 mg이었다 (도 9). Robo1-Fc로의 처리는 46％의 종양 무게의 유의한 감소를 유도하였다.

추가로, 혈장 AFP 농도는 대조군 종양 보유 마우스에서 316 ± 73 ㎍/mL이고, Robo1-Fc 처리된 마우스에서 139 ± 28 ㎍/mL이며, 이는 처리된 동물에서 혈장 AFP의 56％ 억제를 나타낸다 (도 10). 혈장 AFP의 이러한 억제는 Robo1-Fc의 항-종양 활성과 상호관련이 있었다.

<표 11>

SEQUENCE LISTING <110> SANOFI <120> Robo1-Fc fusion protein for use in the treatment of hepatocarcinoma <130> FR2010-090 PCT <160> 24 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 660 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(660) <400> 1 atg att gcg gag ccc gct cac ttt tac ctg ttt gga tta ata tgt ctc 48 Met Ile Ala Glu Pro Ala His Phe Tyr Leu Phe Gly Leu Ile Cys Leu 1 5 10 15 tgt tca ggc tcc cgt ctt cgt cag gaa gat ttt cca cct cgc att gtt 96 Cys Ser Gly Ser Arg Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val 20 25 30 gaa cac cct tca gac ctg att gtc tca aaa gga gaa cct gca act ttg 144 Glu His Pro Ser Asp Leu Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu 35 40 45 aac tgc aaa gct gaa ggc cgc ccc aca ccc act att gaa tgg tac aaa 192 Asn Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys 50 55 60 ggg gga gag aga gtg gag aca gac aaa gat gac cct cgc tca cac cga 240 Gly Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg 65 70 75 80 atg ttg ctg ccg agt gga tct tta ttt ttc tta cgt ata gta cat gga 288 Met Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Phe Phe Leu Arg Ile Val His Gly 85 90 95 cgg aaa agt aga cct gat gaa gga gtc tat gtc tgt gta gca agg aat 336 Arg Lys Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn 100 105 110 tac ctt gga gag gct gtg agc cac aat gca tcg ctg gaa gta gcc ata 384 Tyr Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile 115 120 125 ctt cgg gat gac ttc aga caa aac cct tcg gat gtc atg gtt gca gta 432 Leu Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val 130 135 140 gga gag cct gca gta atg gaa tgc caa cct cca cga ggc cat cct gag 480 Gly Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu 145 150 155 160 ccc acc att tca tgg aag aaa gat ggc tct cca ctg gat gat aaa gat 528 Pro Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp 165 170 175 gaa aga ata act ata cga gga gga aag ctc atg atc act tac acc cgt 576 Glu Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg 180 185 190 aaa agt gac gct ggc aaa tat gtt tgt gtt ggt acc aat atg gtt ggg 624 Lys Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly 195 200 205 gaa cgt gag agt gaa gta gcc gag ctg act gtc tta 660 Glu Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu 210 215 220 <210> 2 <211> 220 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ile Ala Glu Pro Ala His Phe Tyr Leu Phe Gly Leu Ile Cys Leu 1 5 10 15 Cys Ser Gly Ser Arg Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val 20 25 30 Glu His Pro Ser Asp Leu Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu 35 40 45 Asn Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys 50 55 60 Gly Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg 65 70 75 80 Met Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Phe Phe Leu Arg Ile Val His Gly 85 90 95 Arg Lys Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn 100 105 110 Tyr Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile 115 120 125 Leu Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val 130 135 140 Gly Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu 145 150 155 160 Pro Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp 165 170 175 Glu Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg 180 185 190 Lys Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly 195 200 205 Glu Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu 210 215 220 <210> 3 <211> 1365 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1365) <400> 3 atg att gcg gag ccc gct cac ttt tac ctg ttt gga tta ata tgt ctc 48 Met Ile Ala Glu Pro Ala His Phe Tyr Leu Phe Gly Leu Ile Cys Leu 1 5 10 15 tgt tca ggc tcc cgt ctt cgt cag gaa gat ttt cca cct cgc att gtt 96 Cys Ser Gly Ser Arg Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val 20 25 30 gaa cac cct tca gac ctg att gtc tca aaa gga gaa cct gca act ttg 144 Glu His Pro Ser Asp Leu Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu 35 40 45 aac tgc aaa gct gaa ggc cgc ccc aca ccc act att gaa tgg tac aaa 192 Asn Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys 50 55 60 ggg gga gag aga gtg gag aca gac aaa gat gac cct cgc tca cac cga 240 Gly Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg 65 70 75 80 atg ttg ctg ccg agt gga tct tta ttt ttc tta cgt ata gta cat gga 288 Met Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Phe Phe Leu Arg Ile Val His Gly 85 90 95 cgg aaa agt aga cct gat gaa gga gtc tat gtc tgt gta gca agg aat 336 Arg Lys Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn 100 105 110 tac ctt gga gag gct gtg agc cac aat gca tcg ctg gaa gta gcc ata 384 Tyr Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile 115 120 125 ctt cgg gat gac ttc aga caa aac cct tcg gat gtc atg gtt gca gta 432 Leu Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val 130 135 140 gga gag cct gca gta atg gaa tgc caa cct cca cga ggc cat cct gag 480 Gly Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu 145 150 155 160 ccc acc att tca tgg aag aaa gat ggc tct cca ctg gat gat aaa gat 528 Pro Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp 165 170 175 gaa aga ata act ata cga gga gga aag ctc atg atc act tac acc cgt 576 Glu Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg 180 185 190 aaa agt gac gct ggc aaa tat gtt tgt gtt ggt acc aat atg gtt ggg 624 Lys Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly 195 200 205 gaa cgt gag agt gaa gta gcc gag ctg act gtc tta gag aga cca tca 672 Glu Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu Glu Arg Pro Ser 210 215 220 ttt gtg gag tcc aag tac ggc cct cct tgc cct ccc tgc cct gcc cct 720 Phe Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 gag ttc gag ggc gga cct agc gtg ttc ctg ttc cct cct aag cct aag 768 Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 gac acc ctg atg atc tcc cgg acc cct gag gtg acc tgt gtg gtg gtg 816 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 gac gtg tcc cag gag gac cct gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac 864 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 ggc gtg gag gtg cac aac gcc aag acc aag cct cgg gag gag cag ttc 912 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 290 295 300 aat tcc acc tac cgg gtg gtg tct gtg ctg acc gtg ctg cac cag gac 960 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 tgg ctg aac ggc aaa gaa tac aag tgt aag gtc tcc aac aag ggc ctg 1008 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 325 330 335 ccc tcc tcc atc gag aaa acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg 1056 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 gag cct cag gtg tac acc ctg cct cct agc cag gaa gag atg acc aag 1104 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 355 360 365 aac cag gtg tcc ctg acc tgt ctg gtg aag ggc ttc tac cct tcc gac 1152 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 atc gcc gtg gag tgg gag tcc aac ggc cag cct gag aac aac tac aag 1200 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 acc acc cct cct gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctg tac tcc 1248 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 agg ctg acc gtg gac aag tcc cgg tgg cag gag ggc aac gtc ttt tcc 1296 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 tgc tcc gtg atg cac gag gcc ctg cac aac cac tac acc cag aag tcc 1344 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 ctg tcc ctg tct ctg ggc tga 1365 Leu Ser Leu Ser Leu Gly 450 <210> 4 <211> 454 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Ile Ala Glu Pro Ala His Phe Tyr Leu Phe Gly Leu Ile Cys Leu 1 5 10 15 Cys Ser Gly Ser Arg Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val 20 25 30 Glu His Pro Ser Asp Leu Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu 35 40 45 Asn Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys 50 55 60 Gly Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg 65 70 75 80 Met Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Phe Phe Leu Arg Ile Val His Gly 85 90 95 Arg Lys Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn 100 105 110 Tyr Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile 115 120 125 Leu Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val 130 135 140 Gly Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu 145 150 155 160 Pro Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp 165 170 175 Glu Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg 180 185 190 Lys Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly 195 200 205 Glu Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu Glu Arg Pro Ser 210 215 220 Phe Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 325 330 335 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Leu Gly 450 <210> 5 <211> 1362 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1362) <400> 5 atg att gcg gag ccc gct cac ttt tac ctg ttt gga tta ata tgt ctc 48 Met Ile Ala Glu Pro Ala His Phe Tyr Leu Phe Gly Leu Ile Cys Leu 1 5 10 15 tgt tca ggc tcc cgt ctt cgt cag gaa gat ttt cca cct cgc att gtt 96 Cys Ser Gly Ser Arg Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val 20 25 30 gaa cac cct tca gac ctg att gtc tca aaa gga gaa cct gca act ttg 144 Glu His Pro Ser Asp Leu Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu 35 40 45 aac tgc aaa gct gaa ggc cgc ccc aca ccc act att gaa tgg tac aaa 192 Asn Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys 50 55 60 ggg gga gag aga gtg gag aca gac aaa gat gac cct cgc tca cac cga 240 Gly Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg 65 70 75 80 atg ttg ctg ccg agt gga tct tta ttt ttc tta cgt ata gta cat gga 288 Met Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Phe Phe Leu Arg Ile Val His Gly 85 90 95 cgg aaa agt aga cct gat gaa gga gtc tat gtc tgt gta gca agg aat 336 Arg Lys Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn 100 105 110 tac ctt gga gag gct gtg agc cac aat gca tcg ctg gaa gta gcc ata 384 Tyr Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile 115 120 125 ctt cgg gat gac ttc aga caa aac cct tcg gat gtc atg gtt gca gta 432 Leu Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val 130 135 140 gga gag cct gca gta atg gaa tgc caa cct cca cga ggc cat cct gag 480 Gly Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu 145 150 155 160 ccc acc att tca tgg aag aaa gat ggc tct cca ctg gat gat aaa gat 528 Pro Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp 165 170 175 gaa aga ata act ata cga gga gga aag ctc atg atc act tac acc cgt 576 Glu Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg 180 185 190 aaa agt gac gct ggc aaa tat gtt tgt gtt ggt acc aat atg gtt ggg 624 Lys Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly 195 200 205 gaa cgt gag agt gaa gta gcc gag ctg act gtc tta gga ggc gga gga 672 Glu Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly 210 215 220 tcc gag tcc aag tac ggc cct cct tgc cct ccc tgc cct gcc cct gag 720 Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 ttc gag ggc gga cct agc gtg ttc ctg ttc cct cct aag cct aag gac 768 Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 acc ctg atg atc tcc cgg acc cct gag gtg acc tgt gtg gtg gtg gac 816 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 gtg tcc cag gag gac cct gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac ggc 864 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 gtg gag gtg cac aac gcc aag acc aag cct cgg gag gag cag ttc aat 912 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 290 295 300 tcc acc tac cgg gtg gtg tct gtg ctg acc gtg ctg cac cag gac tgg 960 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 ctg aac ggc aaa gaa tac aag tgt aag gtc tcc aac aag ggc ctg ccc 1008 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 325 330 335 tcc tcc atc gag aaa acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg gag 1056 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 cct cag gtg tac acc ctg cct cct agc cag gaa gag atg acc aag aac 1104 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 cag gtg tcc ctg acc tgt ctg gtg aag ggc ttc tac cct tcc gac atc 1152 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 gcc gtg gag tgg gag tcc aac ggc cag cct gag aac aac tac aag acc 1200 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 acc cct cct gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctg tac tcc agg 1248 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 405 410 415 ctg acc gtg gac aag tcc cgg tgg cag gag ggc aac gtc ttt tcc tgc 1296 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 tcc gtg atg cac gag gcc ctg cac aac cac tac acc cag aag tcc ctg 1344 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 tcc ctg tct ctg ggc tga 1362 Ser Leu Ser Leu Gly 450 <210> 6 <211> 453 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Ile Ala Glu Pro Ala His Phe Tyr Leu Phe Gly Leu Ile Cys Leu 1 5 10 15 Cys Ser Gly Ser Arg Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val 20 25 30 Glu His Pro Ser Asp Leu Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu 35 40 45 Asn Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys 50 55 60 Gly Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg 65 70 75 80 Met Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Phe Phe Leu Arg Ile Val His Gly 85 90 95 Arg Lys Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn 100 105 110 Tyr Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile 115 120 125 Leu Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val 130 135 140 Gly Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu 145 150 155 160 Pro Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp 165 170 175 Glu Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg 180 185 190 Lys Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly 195 200 205 Glu Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly 210 215 220 Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 325 330 335 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Leu Gly 450 <210> 7 <211> 1365 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1365) <400> 7 atg att gcg gag ccc gct cac ttt tac ctg ttt gga tta ata tgt ctc 48 Met Ile Ala Glu Pro Ala His Phe Tyr Leu Phe Gly Leu Ile Cys Leu 1 5 10 15 tgt tca ggc tcc cgt ctt cgt cag gaa gat ttt cca cct cgc att gtt 96 Cys Ser Gly Ser Arg Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val 20 25 30 gaa cac cct tca gac cag att gtc tca aaa gga gaa cct gca act ttg 144 Glu His Pro Ser Asp Gln Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu 35 40 45 aac tgc aaa gct gaa ggc cgc ccc aca ccc act att gaa tgg tac aaa 192 Asn Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys 50 55 60 ggg gga gag aga gtg gag aca gac aaa gat gac cct cgc tca cac cga 240 Gly Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg 65 70 75 80 atg ttg ctg ccg agt gga tct tta tat ttc tta cgt ata gta cat gga 288 Met Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Tyr Phe Leu Arg Ile Val His Gly 85 90 95 cgg aaa agt aga cct gat gaa gga gtc tat gtc tgt gta gca agg aat 336 Arg Lys Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn 100 105 110 tac ctt gga gag gct gtg agc cac aat gca tcg ctg gaa gta gcc ata 384 Tyr Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile 115 120 125 ctt cgg gat gac ttc aga caa aac cct tcg gat gtc atg gtt gca gta 432 Leu Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val 130 135 140 gga gag cct gca gta atg gaa tgc caa cct cca cga ggc cat cct gag 480 Gly Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu 145 150 155 160 ccc acc att tca tgg aag aaa gat ggc tct cca ctg gat gat aaa gat 528 Pro Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp 165 170 175 gaa aga ata act ata cga gga gga aag ctc atg atc act tac acc cgt 576 Glu Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg 180 185 190 aaa agt gac gct ggc aaa tat gtt tgt gtt ggt acc aat atg gtt ggg 624 Lys Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly 195 200 205 gaa cgt gag agt gaa gta gcc gag ctg act gtc tta gag aga cca tca 672 Glu Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu Glu Arg Pro Ser 210 215 220 ttt gtg gag tcc aag tac ggc cct cct tgc cct ccc tgc cct gcc cct 720 Phe Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 gag ttc gag ggc gga cct agc gtg ttc ctg ttc cct cct aag cct aag 768 Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 gac acc ctg atg atc tcc cgg acc cct gag gtg acc tgt gtg gtg gtg 816 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 gac gtg tcc cag gag gac cct gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac 864 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 ggc gtg gag gtg cac aac gcc aag acc aag cct cgg gag gag cag ttc 912 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 290 295 300 aat tcc acc tac cgg gtg gtg tct gtg ctg acc gtg ctg cac cag gac 960 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 tgg ctg aac ggc aaa gaa tac aag tgt aag gtc tcc aac aag ggc ctg 1008 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 325 330 335 ccc tcc tcc atc gag aaa acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg 1056 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 gag cct cag gtg tac acc ctg cct cct agc cag gaa gag atg acc aag 1104 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 355 360 365 aac cag gtg tcc ctg acc tgt ctg gtg aag ggc ttc tac cct tcc gac 1152 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 atc gcc gtg gag tgg gag tcc aac ggc cag cct gag aac aac tac aag 1200 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 acc acc cct cct gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctg tac tcc 1248 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 agg ctg acc gtg gac aag tcc cgg tgg cag gag ggc aac gtc ttt tcc 1296 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 tgc tcc gtg atg cac gag gcc ctg cac aac cac tac acc cag aag tcc 1344 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 ctg tcc ctg tct ctg ggc tga 1365 Leu Ser Leu Ser Leu Gly 450 <210> 8 <211> 454 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Met Ile Ala Glu Pro Ala His Phe Tyr Leu Phe Gly Leu Ile Cys Leu 1 5 10 15 Cys Ser Gly Ser Arg Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val 20 25 30 Glu His Pro Ser Asp Gln Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu 35 40 45 Asn Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys 50 55 60 Gly Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg 65 70 75 80 Met Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Tyr Phe Leu Arg Ile Val His Gly 85 90 95 Arg Lys Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn 100 105 110 Tyr Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile 115 120 125 Leu Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val 130 135 140 Gly Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu 145 150 155 160 Pro Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp 165 170 175 Glu Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg 180 185 190 Lys Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly 195 200 205 Glu Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu Glu Arg Pro Ser 210 215 220 Phe Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 325 330 335 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Leu Gly 450 <210> 9 <211> 1365 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1365) <400> 9 atg att gcg gag ccc gct cac ttt tac ctg ttt gga tta ata tgt ctc 48 Met Ile Ala Glu Pro Ala His Phe Tyr Leu Phe Gly Leu Ile Cys Leu 1 5 10 15 tgt tca ggc tcc cgt ctt cgt cag gaa gat ttt cca cct cgc att gtt 96 Cys Ser Gly Ser Arg Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val 20 25 30 gaa cac cct tca gac ctg att gtc tca aaa gga gaa cct gca act ttg 144 Glu His Pro Ser Asp Leu Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu 35 40 45 aac tgc aaa gct gaa ggc cgc ccc aca ccc act att gaa tgg tac aaa 192 Asn Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys 50 55 60 ggg gga gag aga gtg gag aca gac aaa gat gac cct cgc tca cac cga 240 Gly Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg 65 70 75 80 atg ttg ctg ccg agt gga tct tta ttt ttc tta cgt ata gta cat gga 288 Met Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Phe Phe Leu Arg Ile Val His Gly 85 90 95 gcc gcc agt aga cct gat gaa gga gtc tat gtc tgt gta gca agg aat 336 Ala Ala Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn 100 105 110 tac ctt gga gag gct gtg agc cac aat gca tcg ctg gaa gta gcc ata 384 Tyr Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile 115 120 125 ctt cgg gat gac ttc aga caa aac cct tcg gat gtc atg gtt gca gta 432 Leu Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val 130 135 140 gga gag cct gca gta atg gaa tgc caa cct cca cga ggc cat cct gag 480 Gly Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu 145 150 155 160 ccc acc att tca tgg aag aaa gat ggc tct cca ctg gat gat aaa gat 528 Pro Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp 165 170 175 gaa aga ata act ata cga gga gga aag ctc atg atc act tac acc cgt 576 Glu Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg 180 185 190 aaa agt gac gct ggc aaa tat gtt tgt gtt ggt acc aat atg gtt ggg 624 Lys Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly 195 200 205 gaa cgt gag agt gaa gta gcc gag ctg act gtc tta gag aga cca tca 672 Glu Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu Glu Arg Pro Ser 210 215 220 ttt gtg gag tcc aag tac ggc cct cct tgc cct ccc tgc cct gcc cct 720 Phe Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 gag ttc gag ggc gga cct agc gtg ttc ctg ttc cct cct aag cct aag 768 Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 gac acc ctg atg atc tcc cgg acc cct gag gtg acc tgt gtg gtg gtg 816 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 gac gtg tcc cag gag gac cct gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac 864 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 ggc gtg gag gtg cac aac gcc aag acc aag cct cgg gag gag cag ttc 912 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 290 295 300 aat tcc acc tac cgg gtg gtg tct gtg ctg acc gtg ctg cac cag gac 960 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 tgg ctg aac ggc aaa gaa tac aag tgt aag gtc tcc aac aag ggc ctg 1008 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 325 330 335 ccc tcc tcc atc gag aaa acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg 1056 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 gag cct cag gtg tac acc ctg cct cct agc cag gaa gag atg acc aag 1104 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 355 360 365 aac cag gtg tcc ctg acc tgt ctg gtg aag ggc ttc tac cct tcc gac 1152 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 atc gcc gtg gag tgg gag tcc aac ggc cag cct gag aac aac tac aag 1200 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 acc acc cct cct gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctg tac tcc 1248 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 agg ctg acc gtg gac aag tcc cgg tgg cag gag ggc aac gtc ttt tcc 1296 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 tgc tcc gtg atg cac gag gcc ctg cac aac cac tac acc cag aag tcc 1344 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 ctg tcc ctg tct ctg ggc tga 1365 Leu Ser Leu Ser Leu Gly 450 <210> 10 <211> 454 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Met Ile Ala Glu Pro Ala His Phe Tyr Leu Phe Gly Leu Ile Cys Leu 1 5 10 15 Cys Ser Gly Ser Arg Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val 20 25 30 Glu His Pro Ser Asp Leu Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu 35 40 45 Asn Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys 50 55 60 Gly Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg 65 70 75 80 Met Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Phe Phe Leu Arg Ile Val His Gly 85 90 95 Ala Ala Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn 100 105 110 Tyr Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile 115 120 125 Leu Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val 130 135 140 Gly Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu 145 150 155 160 Pro Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp 165 170 175 Glu Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg 180 185 190 Lys Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly 195 200 205 Glu Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu Glu Arg Pro Ser 210 215 220 Phe Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 225 230 235 240 Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 245 250 255 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 260 265 270 Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 275 280 285 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 290 295 300 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 305 310 315 320 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 325 330 335 Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 340 345 350 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 355 360 365 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 370 375 380 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 385 390 395 400 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 405 410 415 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 420 425 430 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 435 440 445 Leu Ser Leu Ser Leu Gly 450 <210> 11 <211> 717 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(717) <400> 11 atg tac agg atg caa ctc ctg tct tgc att gca cta agt ctt gca ctt 48 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 gtc acg aat tca ttg cac tgc cct gcc gcc tgt acc tgt agc aac aat 96 Val Thr Asn Ser Leu His Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn 20 25 30 atc gta gac tgt cgt ggg aaa ggt ctc act gag atc ccc aca aat ctt 144 Ile Val Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu 35 40 45 cca gag acc atc aca gaa ata cgt ttg gaa cag aac aca atc aaa gtc 192 Pro Glu Thr Ile Thr Glu Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val 50 55 60 atc cct cct gga gct ttc tca cca tat aaa aag ctt aga cga att gac 240 Ile Pro Pro Gly Ala Phe Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp 65 70 75 80 ctg agc aat aat cag atc tct gaa ctt gca cca gat gct ttc caa gga 288 Leu Ser Asn Asn Gln Ile Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly 85 90 95 cta cgc tct ctg aat tca ctt gtc ctc tat gga aat aaa atc aca gaa 336 Leu Arg Ser Leu Asn Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu 100 105 110 ctc ccc aaa agt tta ttt gaa gga ctg ttt tcc tta cag ctc cta tta 384 Leu Pro Lys Ser Leu Phe Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu 115 120 125 ttg aat gcc aac aag ata aac tgc ctt cgg gta gat gct ttt cag gat 432 Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp 130 135 140 ctc cac aac ttg aac ctt ctc tcc cta tat gac aac aag ctt cag acc 480 Leu His Asn Leu Asn Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys Leu Gln Thr 145 150 155 160 atc gcc aag ggg acc ttt tca cct ctt cgg gcc att caa act atg cat 528 Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Thr Met His 165 170 175 ttg gcc cag aac ccc ttt att tgt gac tgc cat ctc aag tgg cta gcg 576 Leu Ala Gln Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala 180 185 190 gat tat ctc cat acc aac ccg att gag acc agt ggt gcc cgt tgc acc 624 Asp Tyr Leu His Thr Asn Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala Arg Cys Thr 195 200 205 agc ccc cgc cgc ctg gca aac aaa aga att gga cag atc aaa agc aag 672 Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys 210 215 220 aaa ttc cgt tgt tca ggt agc gct cat cac cat cat cat cac tga 717 Lys Phe Arg Cys Ser Gly Ser Ala His His His His His His 225 230 235 <210> 12 <211> 238 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Val Thr Asn Ser Leu His Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn 20 25 30 Ile Val Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu 35 40 45 Pro Glu Thr Ile Thr Glu Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val 50 55 60 Ile Pro Pro Gly Ala Phe Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp 65 70 75 80 Leu Ser Asn Asn Gln Ile Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly 85 90 95 Leu Arg Ser Leu Asn Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu 100 105 110 Leu Pro Lys Ser Leu Phe Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu 115 120 125 Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp 130 135 140 Leu His Asn Leu Asn Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys Leu Gln Thr 145 150 155 160 Ile Ala Lys Gly Thr Phe Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Thr Met His 165 170 175 Leu Ala Gln Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala 180 185 190 Asp Tyr Leu His Thr Asn Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala Arg Cys Thr 195 200 205 Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys 210 215 220 Lys Phe Arg Cys Ser Gly Ser Ala His His His His His His 225 230 235 <210> 13 <211> 1467 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1467) <400> 13 atg cgc ggc gtt ggc tgg cag atg ctg tcc ctg tcg ctg ggg tta gtg 48 Met Arg Gly Val Gly Trp Gln Met Leu Ser Leu Ser Leu Gly Leu Val 1 5 10 15 ctg gcg atc ctg aac aag gtg gca ccg cag gcg tgc ccg gcg cag tgc 96 Leu Ala Ile Leu Asn Lys Val Ala Pro Gln Ala Cys Pro Ala Gln Cys 20 25 30 tct tgc tcg ggc agc aca gtg gac tgt cac ggg ctg gcg ctg cgc agc 144 Ser Cys Ser Gly Ser Thr Val Asp Cys His Gly Leu Ala Leu Arg Ser 35 40 45 gtg ccc agg aat atc ccc cgc aac acc gag aga ctg gat tta aat gga 192 Val Pro Arg Asn Ile Pro Arg Asn Thr Glu Arg Leu Asp Leu Asn Gly 50 55 60 aat aac atc aca aga att acg aag aca gat ttt gct ggt ctt aga cat 240 Asn Asn Ile Thr Arg Ile Thr Lys Thr Asp Phe Ala Gly Leu Arg His 65 70 75 80 cta aga gtt ctt cag ctt atg gag aat aag att agc acc att gaa aga 288 Leu Arg Val Leu Gln Leu Met Glu Asn Lys Ile Ser Thr Ile Glu Arg 85 90 95 gga gca ttc cag gat ctt aaa gaa cta gag aga ctg cgt tta aac aga 336 Gly Ala Phe Gln Asp Leu Lys Glu Leu Glu Arg Leu Arg Leu Asn Arg 100 105 110 aat cac ctt cag ctg ttt cct gag ttg ctg ttt ctt ggg act gcg aag 384 Asn His Leu Gln Leu Phe Pro Glu Leu Leu Phe Leu Gly Thr Ala Lys 115 120 125 cta tac agg ctt gat ctc agt gaa aac caa att cag gca atc cca agg 432 Leu Tyr Arg Leu Asp Leu Ser Glu Asn Gln Ile Gln Ala Ile Pro Arg 130 135 140 aaa gct ttc cgt ggg gca gtt gac ata aaa aat ttg caa ctg gat tac 480 Lys Ala Phe Arg Gly Ala Val Asp Ile Lys Asn Leu Gln Leu Asp Tyr 145 150 155 160 aac cag atc agc tgt att gaa gat ggg gca ttc agg gct ctc cgg gac 528 Asn Gln Ile Ser Cys Ile Glu Asp Gly Ala Phe Arg Ala Leu Arg Asp 165 170 175 ctg gaa gtg ctc act ctc aac aat aac aac att act aga ctt tct gtg 576 Leu Glu Val Leu Thr Leu Asn Asn Asn Asn Ile Thr Arg Leu Ser Val 180 185 190 gca agt ttc aac cat atg cct aaa ctt agg act ttt cga ctg cat tca 624 Ala Ser Phe Asn His Met Pro Lys Leu Arg Thr Phe Arg Leu His Ser 195 200 205 aac aac ctg tat tgt gac tgc cac ctg gcc tgg ctc tcc gac tgg ctt 672 Asn Asn Leu Tyr Cys Asp Cys His Leu Ala Trp Leu Ser Asp Trp Leu 210 215 220 cgc caa agg cct cgg gtt ggt ctg tac act cag tgt atg ggc ccc tcc 720 Arg Gln Arg Pro Arg Val Gly Leu Tyr Thr Gln Cys Met Gly Pro Ser 225 230 235 240 cac ctg aga ggc cat aat gta gcc gag gtt caa aaa cga gaa ttt gtc 768 His Leu Arg Gly His Asn Val Ala Glu Val Gln Lys Arg Glu Phe Val 245 250 255 tgc agt ggt cac cag tca ttt atg gct cct tct tgt agt gtt ttg cac 816 Cys Ser Gly His Gln Ser Phe Met Ala Pro Ser Cys Ser Val Leu His 260 265 270 tgc cct gcc gcc tgt acc tgt agc aac aat atc gta gac tgt cgt ggg 864 Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly 275 280 285 aaa ggt ctc act gag atc ccc aca aat ctt cca gag acc atc aca gaa 912 Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu 290 295 300 ata cgt ttg gaa cag aac aca atc aaa gtc atc cct cct gga gct ttc 960 Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe 305 310 315 320 tca cca tat aaa aag ctt aga cga att gac ctg agc aat aat cag atc 1008 Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile 325 330 335 tct gaa ctt gca cca gat gct ttc caa gga cta cgc tct ctg aat tca 1056 Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Ser 340 345 350 ctt gtc ctc tat gga aat aaa atc aca gaa ctc ccc aaa agt tta ttt 1104 Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe 355 360 365 gaa gga ctg ttt tcc tta cag ctc cta tta ttg aat gcc aac aag ata 1152 Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile 370 375 380 aac tgc ctt cgg gta gat gct ttt cag gat ctc cac aac ttg aac ctt 1200 Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Leu 385 390 395 400 ctc tcc cta tat gac aac aag ctt cag acc atc gcc aag ggg acc ttt 1248 Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe 405 410 415 tca cct ctt cgg gcc att caa act atg cat ttg gcc cag aac ccc ttt 1296 Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Thr Met His Leu Ala Gln Asn Pro Phe 420 425 430 att tgt gac tgc cat ctc aag tgg cta gcg gat tat ctc cat acc aac 1344 Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His Thr Asn 435 440 445 ccg att gag acc agt ggt gcc cgt tgc acc agc ccc cgc cgc ctg gca 1392 Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala Arg Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala 450 455 460 aac aaa aga att gga cag atc aaa agc aag aaa ttc cgt tgt tca ggt 1440 Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Gly 465 470 475 480 agc gct cat cac cat cat cat cac tga 1467 Ser Ala His His His His His His 485 <210> 14 <211> 488 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Met Arg Gly Val Gly Trp Gln Met Leu Ser Leu Ser Leu Gly Leu Val 1 5 10 15 Leu Ala Ile Leu Asn Lys Val Ala Pro Gln Ala Cys Pro Ala Gln Cys 20 25 30 Ser Cys Ser Gly Ser Thr Val Asp Cys His Gly Leu Ala Leu Arg Ser 35 40 45 Val Pro Arg Asn Ile Pro Arg Asn Thr Glu Arg Leu Asp Leu Asn Gly 50 55 60 Asn Asn Ile Thr Arg Ile Thr Lys Thr Asp Phe Ala Gly Leu Arg His 65 70 75 80 Leu Arg Val Leu Gln Leu Met Glu Asn Lys Ile Ser Thr Ile Glu Arg 85 90 95 Gly Ala Phe Gln Asp Leu Lys Glu Leu Glu Arg Leu Arg Leu Asn Arg 100 105 110 Asn His Leu Gln Leu Phe Pro Glu Leu Leu Phe Leu Gly Thr Ala Lys 115 120 125 Leu Tyr Arg Leu Asp Leu Ser Glu Asn Gln Ile Gln Ala Ile Pro Arg 130 135 140 Lys Ala Phe Arg Gly Ala Val Asp Ile Lys Asn Leu Gln Leu Asp Tyr 145 150 155 160 Asn Gln Ile Ser Cys Ile Glu Asp Gly Ala Phe Arg Ala Leu Arg Asp 165 170 175 Leu Glu Val Leu Thr Leu Asn Asn Asn Asn Ile Thr Arg Leu Ser Val 180 185 190 Ala Ser Phe Asn His Met Pro Lys Leu Arg Thr Phe Arg Leu His Ser 195 200 205 Asn Asn Leu Tyr Cys Asp Cys His Leu Ala Trp Leu Ser Asp Trp Leu 210 215 220 Arg Gln Arg Pro Arg Val Gly Leu Tyr Thr Gln Cys Met Gly Pro Ser 225 230 235 240 His Leu Arg Gly His Asn Val Ala Glu Val Gln Lys Arg Glu Phe Val 245 250 255 Cys Ser Gly His Gln Ser Phe Met Ala Pro Ser Cys Ser Val Leu His 260 265 270 Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly 275 280 285 Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu 290 295 300 Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe 305 310 315 320 Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile 325 330 335 Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Ser 340 345 350 Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe 355 360 365 Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile 370 375 380 Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Leu 385 390 395 400 Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe 405 410 415 Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Thr Met His Leu Ala Gln Asn Pro Phe 420 425 430 Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His Thr Asn 435 440 445 Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala Arg Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala 450 455 460 Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Gly 465 470 475 480 Ser Ala His His His His His His 485 <210> 15 <211> 3390 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(3390) <400> 15 atg cgc ggc gtt ggc tgg cag atg ctg tcc ctg tcg ctg ggg tta gtg 48 Met Arg Gly Val Gly Trp Gln Met Leu Ser Leu Ser Leu Gly Leu Val 1 5 10 15 ctg gcg atc ctg aac aag gtg gca ccg cag gcg tgc ccg gcg cag tgc 96 Leu Ala Ile Leu Asn Lys Val Ala Pro Gln Ala Cys Pro Ala Gln Cys 20 25 30 tct tgc tcg ggc agc aca gtg gac tgt cac ggg ctg gcg ctg cgc agc 144 Ser Cys Ser Gly Ser Thr Val Asp Cys His Gly Leu Ala Leu Arg Ser 35 40 45 gtg ccc agg aat atc ccc cgc aac acc gag aga ctg gat tta aat gga 192 Val Pro Arg Asn Ile Pro Arg Asn Thr Glu Arg Leu Asp Leu Asn Gly 50 55 60 aat aac atc aca aga att acg aag aca gat ttt gct ggt ctt aga cat 240 Asn Asn Ile Thr Arg Ile Thr Lys Thr Asp Phe Ala Gly Leu Arg His 65 70 75 80 cta aga gtt ctt cag ctt atg gag aat aag att agc acc att gaa aga 288 Leu Arg Val Leu Gln Leu Met Glu Asn Lys Ile Ser Thr Ile Glu Arg 85 90 95 gga gca ttc cag gat ctt aaa gaa cta gag aga ctg cgt tta aac aga 336 Gly Ala Phe Gln Asp Leu Lys Glu Leu Glu Arg Leu Arg Leu Asn Arg 100 105 110 aat cac ctt cag ctg ttt cct gag ttg ctg ttt ctt ggg act gcg aag 384 Asn His Leu Gln Leu Phe Pro Glu Leu Leu Phe Leu Gly Thr Ala Lys 115 120 125 cta tac agg ctt gat ctc agt gaa aac caa att cag gca atc cca agg 432 Leu Tyr Arg Leu Asp Leu Ser Glu Asn Gln Ile Gln Ala Ile Pro Arg 130 135 140 aaa gct ttc cgt ggg gca gtt gac ata aaa aat ttg caa ctg gat tac 480 Lys Ala Phe Arg Gly Ala Val Asp Ile Lys Asn Leu Gln Leu Asp Tyr 145 150 155 160 aac cag atc agc tgt att gaa gat ggg gca ttc agg gct ctc cgg gac 528 Asn Gln Ile Ser Cys Ile Glu Asp Gly Ala Phe Arg Ala Leu Arg Asp 165 170 175 ctg gaa gtg ctc act ctc aac aat aac aac att act aga ctt tct gtg 576 Leu Glu Val Leu Thr Leu Asn Asn Asn Asn Ile Thr Arg Leu Ser Val 180 185 190 gca agt ttc aac cat atg cct aaa ctt agg act ttt cga ctg cat tca 624 Ala Ser Phe Asn His Met Pro Lys Leu Arg Thr Phe Arg Leu His Ser 195 200 205 aac aac ctg tat tgt gac tgc cac ctg gcc tgg ctc tcc gac tgg ctt 672 Asn Asn Leu Tyr Cys Asp Cys His Leu Ala Trp Leu Ser Asp Trp Leu 210 215 220 cgc caa agg cct cgg gtt ggt ctg tac act cag tgt atg ggc ccc tcc 720 Arg Gln Arg Pro Arg Val Gly Leu Tyr Thr Gln Cys Met Gly Pro Ser 225 230 235 240 cac ctg aga ggc cat aat gta gcc gag gtt caa aaa cga gaa ttt gtc 768 His Leu Arg Gly His Asn Val Ala Glu Val Gln Lys Arg Glu Phe Val 245 250 255 tgc agt ggt cac cag tca ttt atg gct cct tct tgt agt gtt ttg cac 816 Cys Ser Gly His Gln Ser Phe Met Ala Pro Ser Cys Ser Val Leu His 260 265 270 tgc cct gcc gcc tgt acc tgt agc aac aat atc gta gac tgt cgt ggg 864 Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly 275 280 285 aaa ggt ctc act gag atc ccc aca aat ctt cca gag acc atc aca gaa 912 Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu 290 295 300 ata cgt ttg gaa cag aac aca atc aaa gtc atc cct cct gga gct ttc 960 Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe 305 310 315 320 tca cca tat aaa aag ctt aga cga att gac ctg agc aat aat cag atc 1008 Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile 325 330 335 tct gaa ctt gca cca gat gct ttc caa gga cta cgc tct ctg aat tca 1056 Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Ser 340 345 350 ctt gtc ctc tat gga aat aaa atc aca gaa ctc ccc aaa agt tta ttt 1104 Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe 355 360 365 gaa gga ctg ttt tcc tta cag ctc cta tta ttg aat gcc aac aag ata 1152 Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile 370 375 380 aac tgc ctt cgg gta gat gct ttt cag gat ctc cac aac ttg aac ctt 1200 Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Leu 385 390 395 400 ctc tcc cta tat gac aac aag ctt cag acc atc gcc aag ggg acc ttt 1248 Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe 405 410 415 tca cct ctt cgg gcc att caa act atg cat ttg gcc cag aac ccc ttt 1296 Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Thr Met His Leu Ala Gln Asn Pro Phe 420 425 430 att tgt gac tgc cat ctc aag tgg cta gcg gat tat ctc cat acc aac 1344 Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His Thr Asn 435 440 445 ccg att gag acc agt ggt gcc cgt tgc acc agc ccc cgc cgc ctg gca 1392 Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala Arg Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala 450 455 460 aac aaa aga att gga cag atc aaa agc aag aaa ttc cgt tgt tca gct 1440 Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Ala 465 470 475 480 aaa gaa cag tat ttc att cca ggt aca gaa gat tat cga tca aaa tta 1488 Lys Glu Gln Tyr Phe Ile Pro Gly Thr Glu Asp Tyr Arg Ser Lys Leu 485 490 495 agt gga gac tgc ttt gcg gat ctg gct tgc cct gaa aag tgt cgc tgt 1536 Ser Gly Asp Cys Phe Ala Asp Leu Ala Cys Pro Glu Lys Cys Arg Cys 500 505 510 gaa gga acc aca gta gat tgc tct aat caa aag ctc aac aaa atc ccg 1584 Glu Gly Thr Thr Val Asp Cys Ser Asn Gln Lys Leu Asn Lys Ile Pro 515 520 525 gag cac att ccc cag tac act gca gag ttg cgt ctc aat aat aat gaa 1632 Glu His Ile Pro Gln Tyr Thr Ala Glu Leu Arg Leu Asn Asn Asn Glu 530 535 540 ttt acc gtg ttg gaa gcc aca gga atc ttt aag aaa ctt cct caa tta 1680 Phe Thr Val Leu Glu Ala Thr Gly Ile Phe Lys Lys Leu Pro Gln Leu 545 550 555 560 cgt aaa ata aac ttt agc aac aat aag atc aca gat att gag gag gga 1728 Arg Lys Ile Asn Phe Ser Asn Asn Lys Ile Thr Asp Ile Glu Glu Gly 565 570 575 gca ttt gaa gga gca tct ggt gta aat gaa ata ctt ctt acg agt aat 1776 Ala Phe Glu Gly Ala Ser Gly Val Asn Glu Ile Leu Leu Thr Ser Asn 580 585 590 cgt ttg gaa aat gtg cag cat aag atg ttc aag gga ttg gaa agc ctc 1824 Arg Leu Glu Asn Val Gln His Lys Met Phe Lys Gly Leu Glu Ser Leu 595 600 605 aaa act ttg atg ttg aga agc aat cga ata acc tgt gtg ggg aat gac 1872 Lys Thr Leu Met Leu Arg Ser Asn Arg Ile Thr Cys Val Gly Asn Asp 610 615 620 agt ttc ata gga ctc agt tct gtg cgt ttg ctt tct ttg tat gat aat 1920 Ser Phe Ile Gly Leu Ser Ser Val Arg Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn 625 630 635 640 caa att act aca gtt gca cca ggg gca ttt gat act ctc cat tct tta 1968 Gln Ile Thr Thr Val Ala Pro Gly Ala Phe Asp Thr Leu His Ser Leu 645 650 655 tct act cta aac ctc ttg gcc aat cct ttt aac tgt aac tgc tac ctg 2016 Ser Thr Leu Asn Leu Leu Ala Asn Pro Phe Asn Cys Asn Cys Tyr Leu 660 665 670 gct tgg ttg gga gag tgg ctg aga aag aag aga att gtc acg gga aat 2064 Ala Trp Leu Gly Glu Trp Leu Arg Lys Lys Arg Ile Val Thr Gly Asn 675 680 685 cct aga tgt caa aaa cca tac ttc ctg aaa gaa ata ccc atc cag gat 2112 Pro Arg Cys Gln Lys Pro Tyr Phe Leu Lys Glu Ile Pro Ile Gln Asp 690 695 700 gtg gcc att cag gac ttc act tgt gat gac gga aat gat gac aat agt 2160 Val Ala Ile Gln Asp Phe Thr Cys Asp Asp Gly Asn Asp Asp Asn Ser 705 710 715 720 tgc tcc cca ctt tct cgc tgt cct act gaa tgt act tgc ttg gat aca 2208 Cys Ser Pro Leu Ser Arg Cys Pro Thr Glu Cys Thr Cys Leu Asp Thr 725 730 735 gtc gtc cga tgt agc aac aag ggt ttg aag gtc ttg ccg aaa ggt att 2256 Val Val Arg Cys Ser Asn Lys Gly Leu Lys Val Leu Pro Lys Gly Ile 740 745 750 cca aga gat gtc aca gag ttg tat ctg gat gga aac caa ttt aca ctg 2304 Pro Arg Asp Val Thr Glu Leu Tyr Leu Asp Gly Asn Gln Phe Thr Leu 755 760 765 gtt ccc aag gaa ctc tcc aac tac aaa cat tta aca ctt ata gac tta 2352 Val Pro Lys Glu Leu Ser Asn Tyr Lys His Leu Thr Leu Ile Asp Leu 770 775 780 agt aac aac aga ata agc acg ctt tct aat cag agc ttc agc aac atg 2400 Ser Asn Asn Arg Ile Ser Thr Leu Ser Asn Gln Ser Phe Ser Asn Met 785 790 795 800 acc cag ctc ctc acc tta att ctt agt tac aac cgt ctg aga tgt att 2448 Thr Gln Leu Leu Thr Leu Ile Leu Ser Tyr Asn Arg Leu Arg Cys Ile 805 810 815 cct cct cgc acc ttt gat gga tta aag tct ctt cga tta ctt tct cta 2496 Pro Pro Arg Thr Phe Asp Gly Leu Lys Ser Leu Arg Leu Leu Ser Leu 820 825 830 cat gga aat gac att tct gtt gtg cct gaa ggt gct ttc aat gat ctt 2544 His Gly Asn Asp Ile Ser Val Val Pro Glu Gly Ala Phe Asn Asp Leu 835 840 845 tct gca tta tca cat cta gca att gga gcc aac cct ctt tac tgt gat 2592 Ser Ala Leu Ser His Leu Ala Ile Gly Ala Asn Pro Leu Tyr Cys Asp 850 855 860 tgt aac atg cag tgg tta tcc gac tgg gtg aag tcg gaa tat aag gag 2640 Cys Asn Met Gln Trp Leu Ser Asp Trp Val Lys Ser Glu Tyr Lys Glu 865 870 875 880 cct gga att gct cgt tgt gct ggt cct gga gaa atg gca gat aaa ctt 2688 Pro Gly Ile Ala Arg Cys Ala Gly Pro Gly Glu Met Ala Asp Lys Leu 885 890 895 tta ctc aca act ccc tcc aaa aaa ttt acc tgt caa ggt cct gtg gat 2736 Leu Leu Thr Thr Pro Ser Lys Lys Phe Thr Cys Gln Gly Pro Val Asp 900 905 910 gtc aat att cta gct aag tgt aac ccc tgc cta tca aat ccg tgt aaa 2784 Val Asn Ile Leu Ala Lys Cys Asn Pro Cys Leu Ser Asn Pro Cys Lys 915 920 925 aat gat ggc aca tgt aat agt gat cca gtt gac ttt tac cga tgc acc 2832 Asn Asp Gly Thr Cys Asn Ser Asp Pro Val Asp Phe Tyr Arg Cys Thr 930 935 940 tgt cca tat ggt ttc aag ggg cag gac tgt gat gtc cca att cat gcc 2880 Cys Pro Tyr Gly Phe Lys Gly Gln Asp Cys Asp Val Pro Ile His Ala 945 950 955 960 tgc atc agt aac cca tgt aaa cat gga gga act tgc cac tta aag gaa 2928 Cys Ile Ser Asn Pro Cys Lys His Gly Gly Thr Cys His Leu Lys Glu 965 970 975 gga gaa gaa gat gga ttc tgg tgt att tgt gct gat gga ttt gaa gga 2976 Gly Glu Glu Asp Gly Phe Trp Cys Ile Cys Ala Asp Gly Phe Glu Gly 980 985 990 gaa aat tgt gaa gtc aac gtt gat gat tgt gaa gat aat gac tgt gaa 3024 Glu Asn Cys Glu Val Asn Val Asp Asp Cys Glu Asp Asn Asp Cys Glu 995 1000 1005 aat aat tct aca tgt gtc gat ggc att aat aac tac aca tgc ctt 3069 Asn Asn Ser Thr Cys Val Asp Gly Ile Asn Asn Tyr Thr Cys Leu 1010 1015 1020 tgc cca cct gag tat aca ggt gag ttg tgt gag gag aag ctg gac 3114 Cys Pro Pro Glu Tyr Thr Gly Glu Leu Cys Glu Glu Lys Leu Asp 1025 1030 1035 ttc tgt gcc cag gac ctg aac ccc tgc cag cac gat tca aag tgc 3159 Phe Cys Ala Gln Asp Leu Asn Pro Cys Gln His Asp Ser Lys Cys 1040 1045 1050 atc cta act cca aag gga ttc aaa tgt gac tgc aca cca ggg tac 3204 Ile Leu Thr Pro Lys Gly Phe Lys Cys Asp Cys Thr Pro Gly Tyr 1055 1060 1065 gta ggt gaa cac tgc gac atc gat ttt gac gac tgc caa gac aac 3249 Val Gly Glu His Cys Asp Ile Asp Phe Asp Asp Cys Gln Asp Asn 1070 1075 1080 aag tgt aaa aac gga gcc cac tgc aca gat gca gtg aac ggc tat 3294 Lys Cys Lys Asn Gly Ala His Cys Thr Asp Ala Val Asn Gly Tyr 1085 1090 1095 acg tgc ata tgc ccc gaa ggt tac agt ggc ttg ttc tgt gag ttt 3339 Thr Cys Ile Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Leu Phe Cys Glu Phe 1100 1105 1110 tct cca ccc atg gtc ctc cct cgt agc gct cat cac cat cat cat 3384 Ser Pro Pro Met Val Leu Pro Arg Ser Ala His His His His His 1115 1120 1125 cac tga 3390 His <210> 16 <211> 1129 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Met Arg Gly Val Gly Trp Gln Met Leu Ser Leu Ser Leu Gly Leu Val 1 5 10 15 Leu Ala Ile Leu Asn Lys Val Ala Pro Gln Ala Cys Pro Ala Gln Cys 20 25 30 Ser Cys Ser Gly Ser Thr Val Asp Cys His Gly Leu Ala Leu Arg Ser 35 40 45 Val Pro Arg Asn Ile Pro Arg Asn Thr Glu Arg Leu Asp Leu Asn Gly 50 55 60 Asn Asn Ile Thr Arg Ile Thr Lys Thr Asp Phe Ala Gly Leu Arg His 65 70 75 80 Leu Arg Val Leu Gln Leu Met Glu Asn Lys Ile Ser Thr Ile Glu Arg 85 90 95 Gly Ala Phe Gln Asp Leu Lys Glu Leu Glu Arg Leu Arg Leu Asn Arg 100 105 110 Asn His Leu Gln Leu Phe Pro Glu Leu Leu Phe Leu Gly Thr Ala Lys 115 120 125 Leu Tyr Arg Leu Asp Leu Ser Glu Asn Gln Ile Gln Ala Ile Pro Arg 130 135 140 Lys Ala Phe Arg Gly Ala Val Asp Ile Lys Asn Leu Gln Leu Asp Tyr 145 150 155 160 Asn Gln Ile Ser Cys Ile Glu Asp Gly Ala Phe Arg Ala Leu Arg Asp 165 170 175 Leu Glu Val Leu Thr Leu Asn Asn Asn Asn Ile Thr Arg Leu Ser Val 180 185 190 Ala Ser Phe Asn His Met Pro Lys Leu Arg Thr Phe Arg Leu His Ser 195 200 205 Asn Asn Leu Tyr Cys Asp Cys His Leu Ala Trp Leu Ser Asp Trp Leu 210 215 220 Arg Gln Arg Pro Arg Val Gly Leu Tyr Thr Gln Cys Met Gly Pro Ser 225 230 235 240 His Leu Arg Gly His Asn Val Ala Glu Val Gln Lys Arg Glu Phe Val 245 250 255 Cys Ser Gly His Gln Ser Phe Met Ala Pro Ser Cys Ser Val Leu His 260 265 270 Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly 275 280 285 Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu Pro Glu Thr Ile Thr Glu 290 295 300 Ile Arg Leu Glu Gln Asn Thr Ile Lys Val Ile Pro Pro Gly Ala Phe 305 310 315 320 Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile 325 330 335 Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Ser 340 345 350 Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu Leu Pro Lys Ser Leu Phe 355 360 365 Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile 370 375 380 Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp Leu His Asn Leu Asn Leu 385 390 395 400 Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys Leu Gln Thr Ile Ala Lys Gly Thr Phe 405 410 415 Ser Pro Leu Arg Ala Ile Gln Thr Met His Leu Ala Gln Asn Pro Phe 420 425 430 Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala Asp Tyr Leu His Thr Asn 435 440 445 Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala Arg Cys Thr Ser Pro Arg Arg Leu Ala 450 455 460 Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Ala 465 470 475 480 Lys Glu Gln Tyr Phe Ile Pro Gly Thr Glu Asp Tyr Arg Ser Lys Leu 485 490 495 Ser Gly Asp Cys Phe Ala Asp Leu Ala Cys Pro Glu Lys Cys Arg Cys 500 505 510 Glu Gly Thr Thr Val Asp Cys Ser Asn Gln Lys Leu Asn Lys Ile Pro 515 520 525 Glu His Ile Pro Gln Tyr Thr Ala Glu Leu Arg Leu Asn Asn Asn Glu 530 535 540 Phe Thr Val Leu Glu Ala Thr Gly Ile Phe Lys Lys Leu Pro Gln Leu 545 550 555 560 Arg Lys Ile Asn Phe Ser Asn Asn Lys Ile Thr Asp Ile Glu Glu Gly 565 570 575 Ala Phe Glu Gly Ala Ser Gly Val Asn Glu Ile Leu Leu Thr Ser Asn 580 585 590 Arg Leu Glu Asn Val Gln His Lys Met Phe Lys Gly Leu Glu Ser Leu 595 600 605 Lys Thr Leu Met Leu Arg Ser Asn Arg Ile Thr Cys Val Gly Asn Asp 610 615 620 Ser Phe Ile Gly Leu Ser Ser Val Arg Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn 625 630 635 640 Gln Ile Thr Thr Val Ala Pro Gly Ala Phe Asp Thr Leu His Ser Leu 645 650 655 Ser Thr Leu Asn Leu Leu Ala Asn Pro Phe Asn Cys Asn Cys Tyr Leu 660 665 670 Ala Trp Leu Gly Glu Trp Leu Arg Lys Lys Arg Ile Val Thr Gly Asn 675 680 685 Pro Arg Cys Gln Lys Pro Tyr Phe Leu Lys Glu Ile Pro Ile Gln Asp 690 695 700 Val Ala Ile Gln Asp Phe Thr Cys Asp Asp Gly Asn Asp Asp Asn Ser 705 710 715 720 Cys Ser Pro Leu Ser Arg Cys Pro Thr Glu Cys Thr Cys Leu Asp Thr 725 730 735 Val Val Arg Cys Ser Asn Lys Gly Leu Lys Val Leu Pro Lys Gly Ile 740 745 750 Pro Arg Asp Val Thr Glu Leu Tyr Leu Asp Gly Asn Gln Phe Thr Leu 755 760 765 Val Pro Lys Glu Leu Ser Asn Tyr Lys His Leu Thr Leu Ile Asp Leu 770 775 780 Ser Asn Asn Arg Ile Ser Thr Leu Ser Asn Gln Ser Phe Ser Asn Met 785 790 795 800 Thr Gln Leu Leu Thr Leu Ile Leu Ser Tyr Asn Arg Leu Arg Cys Ile 805 810 815 Pro Pro Arg Thr Phe Asp Gly Leu Lys Ser Leu Arg Leu Leu Ser Leu 820 825 830 His Gly Asn Asp Ile Ser Val Val Pro Glu Gly Ala Phe Asn Asp Leu 835 840 845 Ser Ala Leu Ser His Leu Ala Ile Gly Ala Asn Pro Leu Tyr Cys Asp 850 855 860 Cys Asn Met Gln Trp Leu Ser Asp Trp Val Lys Ser Glu Tyr Lys Glu 865 870 875 880 Pro Gly Ile Ala Arg Cys Ala Gly Pro Gly Glu Met Ala Asp Lys Leu 885 890 895 Leu Leu Thr Thr Pro Ser Lys Lys Phe Thr Cys Gln Gly Pro Val Asp 900 905 910 Val Asn Ile Leu Ala Lys Cys Asn Pro Cys Leu Ser Asn Pro Cys Lys 915 920 925 Asn Asp Gly Thr Cys Asn Ser Asp Pro Val Asp Phe Tyr Arg Cys Thr 930 935 940 Cys Pro Tyr Gly Phe Lys Gly Gln Asp Cys Asp Val Pro Ile His Ala 945 950 955 960 Cys Ile Ser Asn Pro Cys Lys His Gly Gly Thr Cys His Leu Lys Glu 965 970 975 Gly Glu Glu Asp Gly Phe Trp Cys Ile Cys Ala Asp Gly Phe Glu Gly 980 985 990 Glu Asn Cys Glu Val Asn Val Asp Asp Cys Glu Asp Asn Asp Cys Glu 995 1000 1005 Asn Asn Ser Thr Cys Val Asp Gly Ile Asn Asn Tyr Thr Cys Leu 1010 1015 1020 Cys Pro Pro Glu Tyr Thr Gly Glu Leu Cys Glu Glu Lys Leu Asp 1025 1030 1035 Phe Cys Ala Gln Asp Leu Asn Pro Cys Gln His Asp Ser Lys Cys 1040 1045 1050 Ile Leu Thr Pro Lys Gly Phe Lys Cys Asp Cys Thr Pro Gly Tyr 1055 1060 1065 Val Gly Glu His Cys Asp Ile Asp Phe Asp Asp Cys Gln Asp Asn 1070 1075 1080 Lys Cys Lys Asn Gly Ala His Cys Thr Asp Ala Val Asn Gly Tyr 1085 1090 1095 Thr Cys Ile Cys Pro Glu Gly Tyr Ser Gly Leu Phe Cys Glu Phe 1100 1105 1110 Ser Pro Pro Met Val Leu Pro Arg Ser Ala His His His His His 1115 1120 1125 His <210> 17 <211> 717 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (1)..(717) <400> 17 atg tac agg atg caa ctc ctg tct tgc att gca cta agt ctt gca ctt 48 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 gtc acg aat tca ttg cac tgc cct gcc gcc tgt acc tgt agc aac aat 96 Val Thr Asn Ser Leu His Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn 20 25 30 atc gta gac tgt cgt ggg aaa ggt ctc act gag atc ccc aca aat ctt 144 Ile Val Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu 35 40 45 cca gag acc atc aca gaa ata cgt ttg gaa cag aac agc atc aga gtc 192 Pro Glu Thr Ile Thr Glu Ile Arg Leu Glu Gln Asn Ser Ile Arg Val 50 55 60 atc cct cct gga gct ttc tca cca tat aaa aag ctt aga cga ctg gac 240 Ile Pro Pro Gly Ala Phe Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Leu Asp 65 70 75 80 ctg agc aat aat cag atc tct gaa ctt gca cca gat gct ttc caa gga 288 Leu Ser Asn Asn Gln Ile Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly 85 90 95 cta cgc tct ctg aat tca ctt gtc ctc tat gga aat aaa atc aca gaa 336 Leu Arg Ser Leu Asn Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu 100 105 110 ctc ccc aaa agt tta ttt gaa gga ctg ttt tcc tta cag ctc cta tta 384 Leu Pro Lys Ser Leu Phe Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu 115 120 125 ttg aat gcc aac aag ata aac tgc ctt cgg gta gat gct ttt cag gat 432 Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp 130 135 140 ctc cac aac ttg aac ctt ctc tcc cta tat gac aac aag ctt cag acc 480 Leu His Asn Leu Asn Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys Leu Gln Thr 145 150 155 160 gtc gcc aag ggg acc ttt tca gct ctt cgg gcc att caa act atg cat 528 Val Ala Lys Gly Thr Phe Ser Ala Leu Arg Ala Ile Gln Thr Met His 165 170 175 ttg gcc cag aac ccc ttt att tgt gac tgc cat ctc aag tgg cta gcg 576 Leu Ala Gln Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala 180 185 190 gat tat ctc cat acc aac ccg att gag acc agt ggt gcc cgt tgc acc 624 Asp Tyr Leu His Thr Asn Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala Arg Cys Thr 195 200 205 agc ccc cgc cgc ctg gca aac aaa aga att gga cag atc aaa agc aag 672 Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys 210 215 220 aaa ttc cgt tgt tca ggt agc gct cat cac cat cat cat cac tga 717 Lys Phe Arg Cys Ser Gly Ser Ala His His His His His His 225 230 235 <210> 18 <211> 238 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 18 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Val Thr Asn Ser Leu His Cys Pro Ala Ala Cys Thr Cys Ser Asn Asn 20 25 30 Ile Val Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu Thr Glu Ile Pro Thr Asn Leu 35 40 45 Pro Glu Thr Ile Thr Glu Ile Arg Leu Glu Gln Asn Ser Ile Arg Val 50 55 60 Ile Pro Pro Gly Ala Phe Ser Pro Tyr Lys Lys Leu Arg Arg Leu Asp 65 70 75 80 Leu Ser Asn Asn Gln Ile Ser Glu Leu Ala Pro Asp Ala Phe Gln Gly 85 90 95 Leu Arg Ser Leu Asn Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys Ile Thr Glu 100 105 110 Leu Pro Lys Ser Leu Phe Glu Gly Leu Phe Ser Leu Gln Leu Leu Leu 115 120 125 Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asp Ala Phe Gln Asp 130 135 140 Leu His Asn Leu Asn Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys Leu Gln Thr 145 150 155 160 Val Ala Lys Gly Thr Phe Ser Ala Leu Arg Ala Ile Gln Thr Met His 165 170 175 Leu Ala Gln Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys His Leu Lys Trp Leu Ala 180 185 190 Asp Tyr Leu His Thr Asn Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala Arg Cys Thr 195 200 205 Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile Lys Ser Lys 210 215 220 Lys Phe Arg Cys Ser Gly Ser Ala His His His His His His 225 230 235 <210> 19 <211> 726 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(726) <400> 19 atg tac agg atg caa ctc ctg tct tgc att gca cta agt ctt gca ctt 48 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 gtc acg aat tca ctg tcc tcc ggc tcc tgc ccg gcc atg tgc acc tgc 96 Val Thr Asn Ser Leu Ser Ser Gly Ser Cys Pro Ala Met Cys Thr Cys 20 25 30 agc aat ggc atc gtg gac tgt cgt gga aaa ggc ctc act gcc atc ccg 144 Ser Asn Gly Ile Val Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu Thr Ala Ile Pro 35 40 45 gcc aac ctg ccc gag acc atg acg gag ata cgc ctg gag ctg aac ggc 192 Ala Asn Leu Pro Glu Thr Met Thr Glu Ile Arg Leu Glu Leu Asn Gly 50 55 60 atc aag tcc atc cct cct gga gcc ttc tca ccc tac aga aag cta cgg 240 Ile Lys Ser Ile Pro Pro Gly Ala Phe Ser Pro Tyr Arg Lys Leu Arg 65 70 75 80 agg ata gac ctg agc aac aat cag atc gct gag att gca ccc gac gcc 288 Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile Ala Glu Ile Ala Pro Asp Ala 85 90 95 ttc cag ggc ctc cgc tcc ctg aac tcg ctg gtc ctc tat gga aac aag 336 Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys 100 105 110 atc aca gac ctc ccc cgt ggt gtg ttt gga ggc cta tac acc cta cag 384 Ile Thr Asp Leu Pro Arg Gly Val Phe Gly Gly Leu Tyr Thr Leu Gln 115 120 125 ctc ctg ctc ctg aat gcc aac aag atc aac tgc atc cgg ccc gat gcc 432 Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Ile Arg Pro Asp Ala 130 135 140 ttc cag gac ctg cag aac ctc tca ctg ctc tcc ctg tat gac aac aag 480 Phe Gln Asp Leu Gln Asn Leu Ser Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys 145 150 155 160 atc cag agc ctc gcc aag ggc act ttc acc tcc ctg cgg gcc atc cag 528 Ile Gln Ser Leu Ala Lys Gly Thr Phe Thr Ser Leu Arg Ala Ile Gln 165 170 175 act ctg cac ctg gcc cag aac cct ttc att tgc gac tgt aac ctc aag 576 Thr Leu His Leu Ala Gln Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys Asn Leu Lys 180 185 190 tgg ctg gca gac ttc ctg cgc acc aat ccc atc gag acg agt ggt gcc 624 Trp Leu Ala Asp Phe Leu Arg Thr Asn Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala 195 200 205 cgc tgt gcc agt ccc cgg cgc ctc gcc aac aag cgc atc ggg cag atc 672 Arg Cys Ala Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile 210 215 220 aag agc aag aag ttc cgg tgc tca ggt agc gct cat cac cat cat cat 720 Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Gly Ser Ala His His His His His 225 230 235 240 cac tga 726 His <210> 20 <211> 241 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Val Thr Asn Ser Leu Ser Ser Gly Ser Cys Pro Ala Met Cys Thr Cys 20 25 30 Ser Asn Gly Ile Val Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu Thr Ala Ile Pro 35 40 45 Ala Asn Leu Pro Glu Thr Met Thr Glu Ile Arg Leu Glu Leu Asn Gly 50 55 60 Ile Lys Ser Ile Pro Pro Gly Ala Phe Ser Pro Tyr Arg Lys Leu Arg 65 70 75 80 Arg Ile Asp Leu Ser Asn Asn Gln Ile Ala Glu Ile Ala Pro Asp Ala 85 90 95 Phe Gln Gly Leu Arg Ser Leu Asn Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys 100 105 110 Ile Thr Asp Leu Pro Arg Gly Val Phe Gly Gly Leu Tyr Thr Leu Gln 115 120 125 Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Ile Arg Pro Asp Ala 130 135 140 Phe Gln Asp Leu Gln Asn Leu Ser Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys 145 150 155 160 Ile Gln Ser Leu Ala Lys Gly Thr Phe Thr Ser Leu Arg Ala Ile Gln 165 170 175 Thr Leu His Leu Ala Gln Asn Pro Phe Ile Cys Asp Cys Asn Leu Lys 180 185 190 Trp Leu Ala Asp Phe Leu Arg Thr Asn Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala 195 200 205 Arg Cys Ala Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Gly Gln Ile 210 215 220 Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Gly Ser Ala His His His His His 225 230 235 240 His <210> 21 <211> 726 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(726) <400> 21 atg tac agg atg caa ctc ctg tct tgc att gca cta agt ctt gca ctt 48 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 gtc acg aat tca gcc aac tcc atc tcc tgc cct tcg ccc tgc acg tgc 96 Val Thr Asn Ser Ala Asn Ser Ile Ser Cys Pro Ser Pro Cys Thr Cys 20 25 30 agc aat aac atc gtg gac tgt cga gga aag ggc ttg atg gag att cct 144 Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu Met Glu Ile Pro 35 40 45 gcc aac ttg ccg gag ggc atc gtc gaa ata cgc cta gaa cag aac tcc 192 Ala Asn Leu Pro Glu Gly Ile Val Glu Ile Arg Leu Glu Gln Asn Ser 50 55 60 atc aaa gcc atc cct gca gga gcc ttc acc cag tac aag aaa ctg aag 240 Ile Lys Ala Ile Pro Ala Gly Ala Phe Thr Gln Tyr Lys Lys Leu Lys 65 70 75 80 cga ata gac atc agc aag aat cag ata tcg gat att gct cca gat gcc 288 Arg Ile Asp Ile Ser Lys Asn Gln Ile Ser Asp Ile Ala Pro Asp Ala 85 90 95 ttc cag ggc ctg aaa tca ctc aca tcg ctg gtc ctg tat ggg aac aag 336 Phe Gln Gly Leu Lys Ser Leu Thr Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys 100 105 110 atc acc gag att gcc aag gga ctg ttt gat ggg ctg gtg tcc cta cag 384 Ile Thr Glu Ile Ala Lys Gly Leu Phe Asp Gly Leu Val Ser Leu Gln 115 120 125 ctg ctc ctc ctc aat gcc aac aag atc aac tgc ctg cgg gtg aac acg 432 Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asn Thr 130 135 140 ttt cag gac ctg cag aac ctc aac ttg ctc tcc ctg tat gac aac aag 480 Phe Gln Asp Leu Gln Asn Leu Asn Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys 145 150 155 160 ctg cag acc atc agc aag ggg ctc ttc gcc cct ctg cag tcc atc cag 528 Leu Gln Thr Ile Ser Lys Gly Leu Phe Ala Pro Leu Gln Ser Ile Gln 165 170 175 aca ctc cac tta gcc caa aac cca ttt gtg tgc gac tgc cac ttg aag 576 Thr Leu His Leu Ala Gln Asn Pro Phe Val Cys Asp Cys His Leu Lys 180 185 190 tgg ctg gcc gac tac ctc cag gac aac ccc atc gag aca agc ggg gcc 624 Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Gln Asp Asn Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala 195 200 205 cgc tgc agc agc ccg cgc cga ctc gcc aac aag cgc atc agc cag atc 672 Arg Cys Ser Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Ser Gln Ile 210 215 220 aag agc aag aag ttc cgg tgc tca ggt agc gct cat cac cat cat cat 720 Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Gly Ser Ala His His His His His 225 230 235 240 cac tga 726 His <210> 22 <211> 241 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Val Thr Asn Ser Ala Asn Ser Ile Ser Cys Pro Ser Pro Cys Thr Cys 20 25 30 Ser Asn Asn Ile Val Asp Cys Arg Gly Lys Gly Leu Met Glu Ile Pro 35 40 45 Ala Asn Leu Pro Glu Gly Ile Val Glu Ile Arg Leu Glu Gln Asn Ser 50 55 60 Ile Lys Ala Ile Pro Ala Gly Ala Phe Thr Gln Tyr Lys Lys Leu Lys 65 70 75 80 Arg Ile Asp Ile Ser Lys Asn Gln Ile Ser Asp Ile Ala Pro Asp Ala 85 90 95 Phe Gln Gly Leu Lys Ser Leu Thr Ser Leu Val Leu Tyr Gly Asn Lys 100 105 110 Ile Thr Glu Ile Ala Lys Gly Leu Phe Asp Gly Leu Val Ser Leu Gln 115 120 125 Leu Leu Leu Leu Asn Ala Asn Lys Ile Asn Cys Leu Arg Val Asn Thr 130 135 140 Phe Gln Asp Leu Gln Asn Leu Asn Leu Leu Ser Leu Tyr Asp Asn Lys 145 150 155 160 Leu Gln Thr Ile Ser Lys Gly Leu Phe Ala Pro Leu Gln Ser Ile Gln 165 170 175 Thr Leu His Leu Ala Gln Asn Pro Phe Val Cys Asp Cys His Leu Lys 180 185 190 Trp Leu Ala Asp Tyr Leu Gln Asp Asn Pro Ile Glu Thr Ser Gly Ala 195 200 205 Arg Cys Ser Ser Pro Arg Arg Leu Ala Asn Lys Arg Ile Ser Gln Ile 210 215 220 Lys Ser Lys Lys Phe Arg Cys Ser Gly Ser Ala His His His His His 225 230 235 240 His <210> 23 <211> 1362 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1362) <400> 23 atg tac agg atg caa ctc ctg tct tgc att gca cta agt ctt gca ctt 48 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 gtc acg aat tca ctt cgt cag gaa gat ttt cca cct cgc att gtt gaa 96 Val Thr Asn Ser Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val Glu 20 25 30 cac cct tca gac ctg att gtc tca aaa gga gaa cct gca act ttg aac 144 His Pro Ser Asp Leu Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu Asn 35 40 45 tgc aaa gct gaa ggc cgc ccc aca ccc act att gaa tgg tac aaa ggg 192 Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys Gly 50 55 60 gga gag aga gtg gag aca gac aaa gat gac cct cgc tca cac cga atg 240 Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg Met 65 70 75 80 ttg ctg ccg agt gga tct tta ttt ttc tta cgt ata gta cat gga cgg 288 Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Phe Phe Leu Arg Ile Val His Gly Arg 85 90 95 aaa agt aga cct gat gaa gga gtc tat gtc tgt gta gca agg aat tac 336 Lys Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn Tyr 100 105 110 ctt gga gag gct gtg agc cac aat gca tcg ctg gaa gta gcc ata ctt 384 Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile Leu 115 120 125 cgg gat gac ttc aga caa aac cct tcg gat gtc atg gtt gca gta gga 432 Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val Gly 130 135 140 gag cct gca gta atg gaa tgc caa cct cca cga ggc cat cct gag ccc 480 Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu Pro 145 150 155 160 acc att tca tgg aag aaa gat ggc tct cca ctg gat gat aaa gat gaa 528 Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp Glu 165 170 175 aga ata act ata cga gga gga aag ctc atg atc act tac acc cgt aaa 576 Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg Lys 180 185 190 agt gac gct ggc aaa tat gtt tgt gtt ggt acc aat atg gtt ggg gaa 624 Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly Glu 195 200 205 cgt gag agt gaa gta gcc gag ctg act gtc tta gag aga cca tca ttt 672 Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu Glu Arg Pro Ser Phe 210 215 220 gtg gag tcc aag tac ggc cct cct tgc cct ccc tgc cct gcc cct gag 720 Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 ttc gag ggc gga cct agc gtg ttc ctg ttc cct cct aag cct aag gac 768 Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 acc ctg atg atc tcc cgg acc cct gag gtg acc tgt gtg gtg gtg gac 816 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 gtg tcc cag gag gac cct gag gtc cag ttc aac tgg tac gtg gac ggc 864 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 gtg gag gtg cac aac gcc aag acc aag cct cgg gag gag cag ttc aat 912 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 290 295 300 tcc acc tac cgg gtg gtg tct gtg ctg acc gtg ctg cac cag gac tgg 960 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 ctg aac ggc aaa gaa tac aag tgt aag gtc tcc aac aag ggc ctg ccc 1008 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 325 330 335 tcc tcc atc gag aaa acc atc tcc aag gcc aag ggc cag cct agg gag 1056 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 cct cag gtg tac acc ctg cct cct agc cag gaa gag atg acc aag aac 1104 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 cag gtg tcc ctg acc tgt ctg gtg aag ggc ttc tac cct tcc gac atc 1152 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 gcc gtg gag tgg gag tcc aac ggc cag cct gag aac aac tac aag acc 1200 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 acc cct cct gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctg tac tcc agg 1248 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 405 410 415 ctg acc gtg gac aag tcc cgg tgg cag gag ggc aac gtc ttt tcc tgc 1296 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 tcc gtg atg cac gag gcc ctg cac aac cac tac acc cag aag tcc ctg 1344 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 tcc ctg tct ctg ggc tga 1362 Ser Leu Ser Leu Gly 450 <210> 24 <211> 453 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Val Thr Asn Ser Leu Arg Gln Glu Asp Phe Pro Pro Arg Ile Val Glu 20 25 30 His Pro Ser Asp Leu Ile Val Ser Lys Gly Glu Pro Ala Thr Leu Asn 35 40 45 Cys Lys Ala Glu Gly Arg Pro Thr Pro Thr Ile Glu Trp Tyr Lys Gly 50 55 60 Gly Glu Arg Val Glu Thr Asp Lys Asp Asp Pro Arg Ser His Arg Met 65 70 75 80 Leu Leu Pro Ser Gly Ser Leu Phe Phe Leu Arg Ile Val His Gly Arg 85 90 95 Lys Ser Arg Pro Asp Glu Gly Val Tyr Val Cys Val Ala Arg Asn Tyr 100 105 110 Leu Gly Glu Ala Val Ser His Asn Ala Ser Leu Glu Val Ala Ile Leu 115 120 125 Arg Asp Asp Phe Arg Gln Asn Pro Ser Asp Val Met Val Ala Val Gly 130 135 140 Glu Pro Ala Val Met Glu Cys Gln Pro Pro Arg Gly His Pro Glu Pro 145 150 155 160 Thr Ile Ser Trp Lys Lys Asp Gly Ser Pro Leu Asp Asp Lys Asp Glu 165 170 175 Arg Ile Thr Ile Arg Gly Gly Lys Leu Met Ile Thr Tyr Thr Arg Lys 180 185 190 Ser Asp Ala Gly Lys Tyr Val Cys Val Gly Thr Asn Met Val Gly Glu 195 200 205 Arg Glu Ser Glu Val Ala Glu Leu Thr Val Leu Glu Arg Pro Ser Phe 210 215 220 Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 325 330 335 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Leu Gly 450

Claims

Robo1 단백질로부터 유래된 세포외 도메인 또는 상기 도메인의 일부분을 포함하는, 암의 치료에 사용하기 위한 재조합 단백질.
제1항에 있어서, 상기 암이 간암인 재조합 단백질.
제1항 또는 제2항에 있어서, 내피 세포 증식을 억제하지 않는 재조합 단백질.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포외 도메인이 Robo1 단백질의 이소형 b로부터 유래된 세포외 도메인인 재조합 단백질.
제4항에 있어서, Robo1의 세포외 도메인 또는 그의 일부분이 상기 세포외 도메인의 Ig1 및 Ig2 이뮤노글로불린 도메인으로 이루어진 것인 재조합 단백질.
제5항에 있어서, Robo1의 세포외 도메인이 서열 2와 80％ 이상의 동일성을 갖는 것인 재조합 단백질.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질이 추가로 링커 및 이뮤노글로불린 Fc 도메인을 포함하는 것인 재조합 단백질.
제7항에 있어서, Fc 도메인이 인간 이뮤노글로불린 G4로부터의 것인 재조합 단백질.
제8항에 있어서, Fc 도메인이 S241P 및 L248E 돌연변이를 함유하고, C-말단 위치에 위치한 리신이 부재하는 것인 재조합 단백질.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 서열이 서열 4, 서열 6 또는 서열 24와 80％ 이상의 동일성을 갖는 것인 재조합 단백질.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 서열이 서열 4, 서열 6 또는 서열 24인 재조합 단백질.