KR20130114094A - Sdf-1 결합 핵산 및 암 치료를 위한 이의 용도 - Google Patents

Sdf-1 결합 핵산 및 암 치료를 위한 이의 용도 Download PDF

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니콜 딘세
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Abstract

본 발명은 SDF-1와 결합 가능한 핵산 분자, 바람직하게는 SDF-1를 저해 가능한 핵산 분자 (여기에서 상기 핵산 분자들은 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법에서의 사용; 부수적 치료법으로서 질병 또는 장애를 앓고 있거나 또는 질병 또는 장애로 진행될 위험이 있는 객체의 치료를 위한 방법에서의 사용, 또는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 약제로서의 사용을 위한 것이며 상기 질병 또는 장애는 암임)에 관한 것이다.

Description

SDF-1 결합 핵산 및 암 치료를 위한 이의 용도 {SDF-1 binding nucleic acids and the use thereof in cancer treatment}
본 발명은 CXC 케모카인(chemokine) 기질 세포-유래 인자(SDF-1; stromal cell-derived factor-1)에 결합하는 핵산 분자, 암 치료 방법, 및 약제 제조를 위한 이의 용도 (use)에 관한 것이다.
기질 세포-유래 인자(약어: SDF-1; 동의어, CXCL12; PBSF[전구 B-세포 성장-자극 인자: pre-B-cell growth-stimulating factor]; TPAR[TPA 억제 유전자: TPA repressed gene 1]; SCYB12; TLSF[흉선 임프종 세포 자극 인자: thymic lymphoma cell stimulating factor]; hIRH [간암세포상 감소된 인간 인터크린; human intercrine reduced in hepatomas])은 IL-8-유사 케모카인(like chemokines)의 ELR 모티프 특성(motif typical)을 포함하지 않으나 G- 단백질 결합 수용체 (G-protein coupled receptor) CXCR4과 결합하여 활성화시키는, 혈관생성성(angiogenic) CXC 케모카인(chemokine)이다 (Salcedo, Wasserman et al. 1999; Salcedo and Oppenheim 2003). 호환적인 스플라이싱 (alternative splicing)으로, SDF-1 α와 비교시 C-말단(terminus)에서 5개의 추가 아미노산을 운반하는 SDF-1의 2가지 형태인, SDF-1α (68 아미노산, 서열번호(SEQ ID NO): 1) 및 SDF-1β (서열 번호: 2)이 존재한다 (Shirozu, Nakano et al. 1995).
서로 상이한 종의 SDF-1간의 아미노산 서열 보존 영역(amino acid sequence conservation) 은 주목할 만하다: 인간(human) SDF-1α(서열 번호 1) 및 쥐 (murine) SDF-1α (서열 번호: 3) 들은 사실상 동일하다. 18 위치의 하나의 보존 영역부분이 V에서 I로 변화된 것만 차이가 있다 (Shirozu, Nakano et al. 1995).
SDF-1 수용체(receptor) CXCR4는 백혈구(leukocytes), 성숙 수지상세포 (mature dendritic cells), 내피세포 (endothelial cells), 뇌세포 (brain cells), 및 거핵세포 (megakaryocytes)상에서 주로 발현되므로, SDF-1 활성은 다면 발형성 (pleiotropic)이다. 이 케모카인은 지금까지 동정된 기타 케모카인들과는 달리, 가장 폭넓은 범위의 생물학적 기능을 발휘한다.
SDF-1의 가장 유의적인 기능적 효과들은 하기와 같다:
(1) 망막(retina)의 맥락막(choroid) 부위에서 내피세포 (epithelial cells)로부터 신생혈관성 (neovascular) 부위로의 귀소(homing) 및 부착(attachment);
(2) SDF-1는 예를 들어, 성인 골수에서의 조혈 전구 (hematopoietic progenitor; 통상 CD34+) 세포와 같은 줄기 세포 (stem cells) 및 전구 세포 (progenitor cell)을 유지하는데 필요하다;
(3) SDF 는 전구 B 세포 (pre-B cells)의 증식을 지지하고 골수 B 세포 전구체 (bone marrow B cell progenitors) 성장을 증가시키고 성숙 B 세포 (mature B cells)에 대한 유의적인 화학주성체 (chemoattractant)로서 작용하지는 않으나, 전구 (pre)- 및 프로 (pro)-B 세포(cells)의 특이적인 이주 (migration)를 유도한다;
(4) SDF-1는 가장 효과적인 T 세포(cell) 화학주성체중 하나이며;
(5) SDF-1 및 이의 수용체인 CXCR4 는 배아 발달 (embryonic development)에 필수적이다.
SDF-1 또는 이의 수용체 CXCR4의 전환된 발현 수준 또는 이러한 분자들에 대한 전환된 반응들은 망막증 (retinopathy, Brooks, Caballero et al. 2004; Butler, Guthrie et al. 2005; Meleth, Agron et al. 2005), 유방암 (cancer of breast, Muller, Homey et al. 2001; Cabioglu, Sahin et al. 2005), 난소암 (ovaries, Scotton, Wilson et al. 2002), 췌장암 (pancreas, Koshiba, Hosotani et al. 2000), 갑상선암 (thyroid, Hwang, Chung et al. 2003), 비인두암 (nasopharynx, Wang, Wu et al. 2005), 신경교종 (glioma, Zhou, Larsen et al. 2002), 신경아세포종 (neuroblastoma, Geminder, Sagi-Assif et al. 2001), B 세포 만성 림프성 백혈병 (B cell chronic lymphocytic leukemia, Burger, Tsukada et al. 2000), WHIM 증후군(syndrome) (WHIM 은 사마귀(Warts), 저감마글로부민혈증 (Hypogammaglobulinemia), 감염증(Infections), 미에로카텍시스 증후군(Myelokathexis syndrome)의 약어임, Gulino, Moratto et al. 2004; Balabanian, Lagane et al. 2005b Kawai, Choi et al. 2005), 면역결핍증후군 (immunologic deficiency syndromes, Arya, Ginsberg et al. 1999; Marechal, Arenzana-Seisdedos et al. 1999; Soriano, Martinez et al. 2002), 병적 신혈관형성증(pathologic neovascularization, Salvucci, Yao et al. 2002; Yamaguchi, Kusano et al. 2003; Grunewald, Avraham et al. 2006), 염증 (inflammation, Murdoch 2000; Fedyk, Jones et al. 2001; Wang, Guan et al. 2001), 다발성 경화증(multiple sclerosis, Krumbholz, Theil et al. 2006), 류마티스성 관절염(rheumatoid arthritis) / 골관절염(osteoarthritis) (Buckley, Amft et al. 2000; Kanbe, Takagishi et al. 2002; Grassi, Cristino et al. 2004)과 같은 다수의 인체 질환을 수반하는 것으로 알려져 있다 .
종양 (Tumors) {고형(solid) 및 혈액성 신조직형성증(hematological neoplasias) 및 악성종양 (malignancies)을 포함}은 암세포 (cancer cell)의 단순한 덩어리(masses)가 아니다: 면역세포로의 종양 침입 (infiltration)은 암의 특징이다. 다수의 인체 암들은 이들의 침습의 정도 및 표현형 뿐만 아니라 종양 성장, 생존, 이주 및 신생혈관형성증에 영향을 미치는 복잡한 케모카인 네트워크(chemokine network)를 갖는다. 대부분의 고형 종양은 다수의 비-악성 기질 세포 (non-malignant stromal cells)를 포함한다. 사실상, 기질 세포는 가끔 암세포보다 많다. 암에서 발견되는 우세한 기질 세포들은 대식세포 (macrophages), 임파구(lymphocytes), 내피세포(endothelial cells) 및 섬유아세포(fibroblasts)이다.
서로 상이한 암 형태로부터 얻은 세포들은 서로 상이한 케모카인-수용체 발현(chemokine-receptor expression) 양상을 나타내나, SDF-1 수용체 CXCR4 는 마우스(mouse) 및 인간의 종양 세포에서 가장 공통적으로 발견된다: 내피성 (epithelial), 간엽성 (mesenchymal), 및 조혈성 (haematopoietic) 기원 (origin)의 23개의 서로 상이한 인체 암으로부터 분리된 종양 세포들은 CXCR4에 대한 유일한 알려진 리간드(ligand)인 SDF-1와 같이 CXCR4을 발현한다 (Balkwill 2004). 구조적으로 발현되는 골수(bone marrow) 및 2차 림프 조직(secondary lymphoid tissue)과는 별도로, SDF-1는 신경성(neuronal) 및 성상세포 계열(astrocytic lineage) 모두의 신경림프종(lymphoma) 및 뇌 종양(brain tumor)의 주 종양 부위에서 발견된다 (Corcione, Ottonello et al. 2000). 게다가, 난소암(ovarian) (Scotton, Wilson et al. 2002) 및 췌장암 (pancreatic cancer) (Koshiba, Hosotani et al. 2000)뿐만 아니라 유방암 (breast) 전이(metastasis) 부위 (Hwang, Chung et al. 2003) 및 갑상성 암(thyroid cancer) (Muller, Homey et al. 2001) 및 신경아세포종(neuroblastoma) 및 혈액성 악성종양 (haematological malignancies) (Geminder, Sagi-Assif et al. 2001)에서 높은 수준으로 존재한다.
CXCR4외에도 또 다른 SDF-1 수용체가 동정되었다: RDC1/CXCR7 (Balabanian, Lagane et al. 2005a, Burns, Summers et al. 2006). 전립선 암 세포주를 이용한 시험관내(In vitro) 및 생체 내(in vivo) 연구에서는 CXCR7/RDC1 발현상의 전환은 생존 혜택(survival advantage)에 더하여 고착성이며 침습(invasive)성을 증가시킴을 제시한다. 시험관내 (In vitro) 및 생체 내(in vivo) 연구에서는 SDF-1, 즉 CXCR4 및 CXCR7에 대한 모든 수용체들이 종양 성장, 전이능 및 예를 들어, 유방 암(breast cancer), 교모세포종 (glioblastomas), 난소암(ovarian cancer), 신경아세포종(neuroblastoma), 폐암 (lung cancer), 대장암(colorectal) 및 전립선암 (prostate cancer)과 같은 여러 종양에서 (화학요법제 유도) 세포사멸(apoptosis)에 대한 내성을 촉진한다 (Burns et al, 2006; Li et al, 2008; Scotton et al, 2002; Yang et al, 2008; Zagzag et al, 2008).
따라서 CXCR4 및 CXCR7 발현은 여러 종양들의 일반적인 특성으로 간주된다.
본 발명의 근본적인 해결 과제는 SDF-1와 특이적으로 상호작용하는 수단(means)을 제공하는 것이다(상기 수단은 암(cancer)의 예방 및/또는 치료하기에 적합한 것임).
본 발명의 또 다른 근본적인 해결 과제는 암 치료를 지지(support)하는 수단(means)을 제공하는 것이다 (상기 암 치료는 전형적으로 화학요법(chemotherapy) 및/또는 방사선요법(radiation)을 이용하는 것임).
본 발명의 또 다른 근본적인 해결 과제는 암 치료의 부수적 치료법(adjunct therapy)의 사용에 적합한 수단(means)을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 근본적인 해결 과제는 암(cancer) 및/또는 화학요법 민감성증진 세포 (chemosensitizing cells) 형성 또는 암세포의 일부로 고통받는 화학요법 민감성 증진(chemosensitizing) 환자를 가능하게 하는 수단(means)을 제공하는 것이다.
본 발명의 근본적인 해결 과제는 SDF-1와 특이적으로 상호작용하는 수단(means)을 제공하는 것이다(상기 수단은 암(cancer)의 예방 및/또는 치료하기에 적합한 것임).
본 발명의 또 다른 근본적인 해결 과제는 암 치료를 지지(support)하는 수단(means)을 제공하는 것이다(상기 암 치료는 전형적으로 화학요법(chemotherapy) 및/또는 방사선요법(radiation)을 이용하는 것임).
본 발명의 또 다른 근본적인 해결 과제는 암 치료의 부수적 치료법(adjunct therapy)의 사용에 적합한 수단(means)을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 근본적인 해결 과제는 암(cancer) 및/또는 화학요법 민감성증진 세포 (chemosensitizing cells) 형성 또는 암세포의 일부로 고통받는 화학요법 민감성 증진(chemosensitizing) 환자를 가능하게 하는 수단(means)을 제공하는 것이다.
본원에서 열거되는 상기 또는 기타 해결과제들은 첨부된 독립 항들의 주제에 의해 해결된다. 바람직한 구현예는 종속항들로부터 획득가능하다.
본 발명의 해결과제는 독립 항들의 주제에 의해 해결된다. 바람직한 구현예들은 종속항들의 영향을 받는다.
보다 상세하게는, 본 발명의 또 다른 근본적인 해결 과제는 본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차 구현예이기도 한, 첫 번째 측면인, SDF-1와 결합 가능한, 바람직하게는 SDF-1를 저해 가능한 핵산 분자(nucleic acid molecule)로 해결되고, 여기에서 상기 핵산 분자들은 질병 (disease) 또는 장애 (disorder)의 치료 (treatment) 및/또는 예방 (prevention)을 위한 방법(method)에서의 사용(use); 부수적 치료법(adjunct therapy)으로서 질병 또는 장애를 앓고 있거나 또는 질병 또는 장애로 진행될 위험이 있는 객체의 치료를 위한 방법에서의 사용, 또는 질병 (disease) 또는 장애 (disorder)의 치료 (treatment) 및/또는 예방 (prevention)을 위한 약제 (medicament)로서의 사용을 위한 것이다(상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)는 암(cancer)임).
본 발명의 첫 번째 측면의 하나의 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 2차 구현예로서, 상기 암은 혈액(hematological) 암의 그룹(group)으로부터 선택된 암, 바람직하게는, 상기 혈액암은 백혈병 (leukemia) 및 골수종(myeloma)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 2차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 3차 구현예로서, 상기 백혈병 (leukemia)은 만성 림프구 백혈병 (chronic lymphoid leukemia) 및 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid leukemia)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 2차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 4차 구현예로서, 상기 골수종(myeloma)은 다발성 골수종(multiple myeloma)인 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 5차 구현예로서, 상기 암(cancer)는 고형 암(solid tumors)들로부터 선택되고, 여기에서 상기 고형암은 교모세포종 (glioblastomas), 대장암(colorectal cancer), 유방 암 (breast cancer), 림프종 (lymphoma), 전립선암 (prostate cancer), 췌장암 (pancreatic cancer), 신장암 (renal cancer), 난소암 (ovarian cancer), 및 폐암 (lung cancer)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 및 제 5차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 6차 구현예로서, 상기 부수적 치료법(adjunct therapy)은 상기 객체(subject)를 민감성 증진화시키고(여기에서 상기 민감성 증진화된 객체(sensitized subject)는 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 치료법(therapy)에 보다 즉시 반응성(responsive)인 것임),
본 발명의 첫 번째 측면의 제 6차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 7차 구현예로서, 상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 치료법(therapy)은 추가적 약학적 활성화제 (further pharmaceutically active agent)의 투여 및/또는 객체의 방사선 조사 (irradiating) 및/또는 세포 치료법(cellular therapy)을 수행함을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 7차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 8차 구현예로서, 상기 추가적 약학적 활성화제 (further pharmaceutically active agent)는 항체(antibody), 알킬화제 (alkylating agent), 대사길항물질 (anti-metabolite), 식물 알칼로이드(plant alkaloid), 식물 테르페노이드 (plant terpenoid), 토포이소머라제 저해제 (topoisomerase inhibitor), 류코보린 (Leucovorin), 메토트렉세이트 (Methotrexate), 타목시펜 (Tamoxifen), 소라페니브 (Sorafenib), 레날리도미드 (Lenalidomide), 보르테조밉 (Bortezomib), 덱사메타손 (Dexamethasone), 플루오로우라실 (Flurouracil), 및 프레드니손 (Prednisone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 8차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 9차 구현예로서, 상기 항체 (antibody)는 리툭시맙 (Rituximab), 오파투무맙 (Ofatumumab), 세툭시맙 (Cetuximab), 이브리투모맙 (Ibritumomab)-티욱세탄 (Tiuxetan), 토시투모맙 (Tositumomab), 트라스투주맙 (Trastuzumab), 베바시주맙 (Bevacizumab), 및 알렘투주맙 (Alemtuzumab)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 8차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 10차 구현예로서, 상기 알킬화제 (alkylating agent)는 시스플라틴 (cisplatin), 카르보플라틴 (carboplatin), 옥살리플라틴 (oxaliplatin), 메클로레타민(mechlorethamine), 시클로포스파미드 (cyclophosphamide), 클로람부실 (chlorambucil), 독소루비신 (doxorubicin), 리포조말 독소루비신 (liposomal doxorubicin), 벤다무스틴 (bendamustine), 테모졸로미드 (temozolomide) 및 멜팔란 (Melphalan)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 8차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 11차 구현예로서, 상기 대사길항물질 (anti-metabolite)는 퓨린아자티오프린 (purineazathioprine), 머캅토퓨린 (mercaptopurine), 플루다라빈 (fludarabine), 펜토스타틴 (pentostatin), 및 클라드리빈 (cladribine)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 8차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 12차 구현예로서, 상기 식물 테르페노이드 (plant terpenoid)는 탁산 류 (taxane) 화합물들로부터 선택된 화합물, 보다 바람직하게는, 도세탁셀 (Docetaxel), 파클리탁셀 (Paclitaxel), 포도필로톡신 (podophyllotoxin) 및 에포틸론 (epothilone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 8차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 13차 구현예로서, 상기 토포이소머라제 저해제 (topoisomerase inhibitor)는 캠프토테신 (camptothecin), 이리노테칸 (irinotecan), 및 미톡산트론 (mitoxantrone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차 및 제 13차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 14차 구현예로서, 상기 핵산 분자 (nucleic acid molecule)는 SDF-1 및 SDF-1 수용체 (receptor) 간의 상호작용을 차단가능한 것이며, 여기에서, 상기 SDF-1 수용체는 CXCR4 및 CXCR7을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차, 제 13차 및 제 14차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 15차 구현예로서, 상기 질병 (disease) 또는 장애 (disorder)의 치료 (treatment) 또는 예방 (prevention)은 SDF-1 및 SDF-1 수용체 (receptor) 간의 상호작용을 저해하는 핵산 분자 (nucleic acid molecule)에 기인한 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차, 제 13차, 제 14차 및 제 15차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 16차 구현예로서, 상기 핵산 분자 (nucleic acid molecule)는 B 형 (B type)의 SDF-1 결합 핵산 분자, C 형 (C type)의 SDF-1 결합 핵산 분자, A 형 (A type)의 SDF-1 결합 핵산 분자 및 D 형 (D type)의 SDF-1 결합 핵산 분자를 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 16차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 17차 구현예로서, 상기 B 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 뉴클레오티드 (nucleotides)의 중간 스트레치 (central stretch)를 포함하며, 여기에서 상기 뉴클레오티드 (nucleotides)의 중간 스트레치 (central stretch)는 하기 뉴클레오티드 서열 (nucleotide sequence)을 포함하는 것이다:
5’ GUGUGAUCUAGAUGUADWGGCUGWUCCUAGUYAGG 3’ (서열 번호: 52).
본 발명의 첫 번째 측면의 제 17차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 18차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드 (nucleotides)의 중간 스트레치 (central stretch)는 하기 뉴클레오티드 서열 (nucleotide sequence)을 포함하는 것이다:
5’ GUGUGAUCUAGAUGUADUGGCUGAUCCUAGUCAGG 3’ (서열 번호: 53).
본 발명의 첫 번째 측면의 제 17차 및 제 18차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 19차 구현예로서, 상기 B 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch), 뉴클레오티드 (nucleotides)의 중간 스트레치 (central stretch) 및 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 17차 및 제 18차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 20차 구현예로서, 상기 B 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch), 뉴클레오티드 (nucleotides)의 중간 스트레치 (central stretch) 및 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 19차 및 제 20차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 21차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch)는 5’X1X2SVNS 3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치(secondterminal stretch)는 5’BVBSX3X43’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이고, 여기에서:
X1 는 존재하지 않거나(absent) 또는 A이며, X2 는 G이며, X3 는 C 이며 X4 는 존재하지 않거나(absent) 또는 U이며; 또는
X1 는 존재하지 않고(absent), X2 존재하지 않거나 또는 G이며, X3 존재하지 않거나 또는 C 이고 X4 는 존재하지 않는다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 19차, 제 20차, 및 제 21차, 바람직하게는, 21차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 22차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)는 5’X1X2CRWG3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’KRYSX3X43’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이며;
여기에서,
X1은 존재하지 않거나 (absent) 또는 A이고, X2 는 G이며, X3 는 C이며 X4 는 존재하지 않거나 (absent) 또는 U이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 19차, 제 20차, 제 21차, 및 제 22차, 바람직하게는, 제 21차 또는 제 22차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 23차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch)는 5’X1X2CGUG3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch)는 5’UACGX3X43’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이며;
여기에서,
X1은 존재하지 않거나(absent) 또는 A이고, X2 는 G이며, X3 는 C이며 X4 는 존재하지 않거나 또는 U이며,
바람직하게는, 상기 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)는 5’AGCGUG3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’UACGCU3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 19차, 제 20차, 제 21차, 바람직하게는, 제 21차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 24차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)는 5’X1X2SSBS3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’BVSSX3X43’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이며;
여기에서,
X1은 존재하지 않고, X2 는 존재하지 않거나(absent) 또는 G이며, X3 는 존재하지 않거나(absent) 또는 C이며, X4 는 존재하지 않고,
바람직하게는, 상기 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)는 5’GCGUG3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’UACGC3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 16차, 제 17차, 제 18차, 제 19차, 제 20차, 제 21차, 제 21차, 제 22차, 제 23차 및 제 24차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 25차 구현예로서, 상기 B 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 서열번호 (SEQ ID NO): 5 내지 서열번호: 20 및 서열번호: 22 내지 서열번호: 28중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드(nucleotide) 서열, 바람직하게는, 서열번호: 5 내지 서열번호: 7, 서열번호: 16, 서열번호: 22 및 서열번호: 28중 어느 하나, 보다 바람직하게는, 서열번호: 22 및 서열번호: 28중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 16차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 26차 구현예로서, 상기 C 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 뉴클레오티드 (nucleotides)의 중간 스트레치 (central stretch)를 포함하며, 상기 뉴클레오티드 (nucleotides)의 중간 스트레치 (central stretch)는 GGUYAGGGCUHRXAAGUCGG (서열번호: 108)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이고,
여기에서 XA 는 존재하지 않거나 또는 A이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 26차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 27차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드(nucleotides)의 중간 스트레치(central stretch)는 5’ GGUYAGGGCUHRAAGUCGG 3’ (서열번호: 109), 5’GGUYAGGGCUHRAGUCGG 3’ (서열번호: 110) 또는 5’ GGUUAGGGCUHGAAGUCGG 3’ (서열번호: 111), 바람직하게는, 5’GGUUAGGGCUHGAAGUCGG 3’ (서열번호: 111)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 26차 및 제 27차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 28차 구현예로서, 상기 C 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로, 뉴클레오티드(nucleotides)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch), 뉴클레오티드 (nucleotides)의 중간 스트레치 (central stretch) 및 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)를 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 26차 및 제 27차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 29차 구현예로서, 상기 C 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로, 뉴클레오티드 (nucleotides)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)의 뉴클레오티드 서열, 뉴클레오티드(nucleotides)의 중간 스트레치 (central stretch) 및 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch)을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 28차 및 제 29차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 30차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)는 5’RKSBUSNVGR3’ (서열번호: 138) 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’YYNRCASSMY3’(서열번호: 139)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이며,
여기에서, 상기 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)는 5’RKSBUGSVGR3’ (서열번호: 140) 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’YCNRCASSMY’(서열번호: 141)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 28차 및 제 29차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 31차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)는 5’XSSSSV3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’BSSSXS3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이며, 여기에서 Xs 는 존재하지 않거나 또는 S이며,
바람직하게는, 상기 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch)는 5’SGGSR3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’YSCCS3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 28차 및 제 29차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 32차 구현예로서,
(a) 상기 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch)는 5’GCCGG 3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’CCGGC 3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나; 또는
(b) 상기 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)는 5’ CGUGCGCUUGAGAUAGG 3 ’(서열번호: 220)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’CUGAUUCUCACG3’ (서열번호: 221)의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나; 또는
(c) 상기 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)는 5’UGAGAUAGG 3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’ CUGAUUCUCA3’ (서열번호: 222)의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나; 또는
(d) 상기 뉴클레오티드 (nucleotide)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)는 5’GAGAUAGG 3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’CUGAUUCUC3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 26차, 제 27차, 제 28차, 제 29차, 제 30차, 제 31차 및 제 32차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 33차 구현예로서, 상기 C 형의 SDF-1 결합 핵산 분자는 서열번호(SEQ ID NO): 95 내지 서열번호: 107, 서열번호: 112 내지 서열번호: 137, 서열번호: 223 및 서열번호: 224중 어느 하나, 바람직하게는, 서열번호: 120, 서열번호: 128, 서열번호: 129, 서열번호:134, 서열번호: 135, 서열번호: 223 및 서열번호: 224중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드(nucleotide) 서열중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드(nucleotide) 서열, 바람직하게는, 서열번호: 120, 서열번호: 128, 서열번호: 129, 서열번호:134, 서열번호: 135, 서열번호: 223 및 서열번호: 224중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 16차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 34차 구현예로서, 상기 A 형의 SDF-1 결합 핵산 분자는 뉴클레오티드(nucleotides)의 중간 스트레치(central stretch)를 포함하며, 여기에서 상기 뉴클레오티드(nucleotides)의 중간 스트레치는 5’ AAAGYRACAHGUMAAXAUGAAAGGUARC 3’ (서열번호: 74)의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하며,
여기에서, XA 는 존재하지 않거나 또는 A이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 34차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 35차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드 (nucleotides)의 중간 스트레치는 5’AAAGYRACAHGUMAAUGAAAGGUARC 3’ (서열번호: 75), 또는 5’ AAAGYRACAHGUMAAAUGAAAGGUARC 3’ (서열번호: 76), 또는 5’ AAAGYAACAHGUCAAUGAAAGGUARC 3’(서열번호: 77), 바람직하게는, 상기 뉴클레오티드(nucleotides)의 중간 스트레치는 5’AAAGYAACAHGUCAAUGAAAGGUARC 3’ (서열번호: 77)의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 34차 및 제 35차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 36차 구현예로서, 상기 A 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로, 뉴클레오티드(nucleotides)의 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch), 뉴클레오티드(nucleotides)의 중간 스트레치(central stretch) 및 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch)를 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 34차 및 제 35차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 37차 구현예로서, 상기 A 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로, 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch), 뉴클레오티드(nucleotides)의 중간 스트레치(central stretch) 및 뉴클레오티드(nucleotides)의 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch)를 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 36차 및 제 37차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 38차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드(nucleotides)의 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch)는 5’X1X2NNBV3’의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch)는 5’BNBNX3X43’의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하며,
여기에서,
X1 는 존재하지 않거나 또는 R이며, X2 는 S이며, X3 는 S이고 X4 는 존재하지 않거나 또는 Y이거나;또는
X1 존재하지 않고, X2는 존재하지 않거나 또는 S이며, X3 는 존재하지 않거나 또는 S 이고 X4 는 존재하지 않는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 36차, 제 37차 및 제 38차 구현예, 바람직하게는, 제 38차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 39차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드(nucleotides)의 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch)는 5’RSHRYR3’의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch)는 5’YRYDSY3’의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하며,
바람직하게는, 상기 뉴클레오티드(nucleotides)의 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch)는 5’ GCUGUG 3’의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch)는 5’ CGCAGC 3’의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 제 36차, 제 37차 및 제 38차 구현예, 바람직하게는, 제 38차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 40차 구현예로서, 상기 뉴클레오티드(nucleotides)의 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch)는 5’X2BBBS3’의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch)는 5’SBBVX33’의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하며,
여기에서, X2는 존재하지 않거나 또는 S이며 X3 는 존재하지 않거나 또는 S이며;
바람직하게는, 상기 뉴클레오티드(nucleotides)의 제 1차 말단 스트레치(first terminal stretch)는 5’CUGUG3’의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’CGCAG3’의 뉴클레오티드 (nucleotide) 서열을 포함하거나,
또는 상기 뉴클레오티드 (nucleotides)의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch)는 5’GCGUG3’의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치 (second terminal stretch)는 5’CGCGC3’의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 34차, 제 35차, 제 36차, 제 37차, 제 38차, 제 39차 및 제 40차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 41차 구현예로서, 상기 A 형의 SDF-1 결합 핵산 분자는 서열번호(SEQ ID NO): 60 내지 서열번호: 73, 서열번호: 78 내지 서열번호: 82, 서열번호: 84 내지 서열번호: 87, 서열번호: 89 내지 서열번호: 94, 및 서열번호: 145중 어느 하나, 바람직하게는, 서열번호: 60, 서열번호: 63, 서열번호: 66, 서열번호: 78, 서열번호: 84, 및 서열번호: 146중 어느 하나, 보다 바람직하게는, 서열번호 : 84 및 서열번호: 146중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 16차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 42차 구현예로서, 상기 D 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 서열번호 : 142 내지 서열번호: 144중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차, 제 13차, 제 14차, 제 15차, 제 16차, 제 17차, 제 18차, 제 19차, 제 20차, 제 21차, 제 22차, 제 23차, 제 24차, 제 25차, 제 26차, 제 27차, 제 28차, 제 29차, 제 30차, 제 31차, 제 32차, 제 33차, 제 34차, 제 35차, 제 36차, 제 37차, 제 38차, 제 39차, 제 40차, 제 41차 및 제 42차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 43차 구현예로서, 상기 SDF-1 는 인간(human) SDF-1이며, 여기에서 바람직하게는, 상기 인간 SDF-1 는 인간 SDF-1 알파(alpha) 또는 인간 SDF-1 베타(beta), 보다 바람직하게는, 상기 인간 SDF-1 는 인간 SDF-1 알파인 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차, 제 13차, 제 14차, 제 15차, 제 16차, 제 17차, 제 18차, 제 19차, 제 20차, 제 21차, 제 22차, 제 23차, 제 24차, 제 25차, 제 26차, 제 27차, 제 28차, 제 29차, 제 30차, 제 31차, 제 32차, 제 33차, 제 34차, 제 35차, 제 36차, 제 37차, 제 38차, 제 39차, 제 40차, 제 41차, 제 42차 및 제 43차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 44차 구현예로서, 상기 핵산 분자는 변형체 (modification)를 포함하며, 여기에서, 상기 변형체는 바람직하게는, 높은 분자량 기 및/또는 상기 변형체는 동물 신체 또는 인체, 바람직하게는 인체 내에서 체류 시간을 통한 핵산 특성을 변형시키도록 하는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 44차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 45차 구현예로서, 상기 변형체는 HES 기(moiety), PEG 기(moiety), 생분해성 변형체 (biodegradable modifications) 및 이의 조합을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 45차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 46차 구현예로서, 상기 변형체는 직쇄형 (straight) 또는 쇄상(branched) PEG으로 구성된 PEG 기(moiety)이며, 여기에서, 바람직하게는, 상기 직쇄형 (straight) 또는 쇄상(branched) PEG의 분자량은 약 20,000 내지 120,000 Da 범위, 보다 바람직하게는, 약 30,000 내지 80,000 Da 범위, 가장 바람직하게는 약 40,000 Da인 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 45차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 47차 구현예로서, 상기 변형체는 HES 기(moiety)이며, 여기에서, 바람직하게는, 상기 HES 기(moiety)의 분자량은 약 10,000 내지 200,000 Da 범위, 보다 바람직하게는, 약 30,000 내지 170.000 Da 범위, 가장 바람직하게는, 약 150,000 Da인 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 44차, 제 45차, 제 46차, 및 제 47차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 48차 구현예로서, 상기 변형체는 링커(linker)를 통하여 상기 핵산 분자에 부착되며, 여기에서 바람직하게는, 상기 링커는 생체 안정성(biostable) 또는 생분해성(biodegradable) 링커인 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 44차, 제 45차, 제 46차, 제 47차 및 제 48차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 49차 구현예로서, 상기 변형체는 핵산 분자의 5’-말단 뉴클레오티드(terminal nucleotide) 및/또는 3’-말단 뉴클레오티드에 부착 및/또는 핵산 분자의 5’-말단 뉴클레오티드(terminal nucleotide) 및 3’-말단 뉴클레오티드 사이의 뉴클레오티드에 부착된 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차, 제 13차, 제 14차, 제 15차, 제 16차, 제 17차, 제 18차, 제 19차, 제 20차, 제 21차, 제 22차, 제 23차, 제 24차, 제 25차, 제 26차, 제 27차, 제 28차, 제 29차, 제 30차, 제 31차, 제 32차, 제 33차, 제 34차, 제 35차, 제 36차, 제 37차, 제 38차, 제 39차, 제 40차, 제 41차, 제 42차, 제 43차, 제 44차, 제 45차, 제 46차, 제 47차, 제 48차, 및 제 49차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 50차 구현예로서, 상기 핵산분자의 뉴클레오티드 또는 핵산 분자를 형성하는 뉴클레오티드는 L-뉴클레오티드(nucleotides)인 것이다.
본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차, 제 13차, 제 14차, 제 15차, 제 16차, 제 17차, 제 18차, 제 19차, 제 20차, 제 21차, 제 22차, 제 23차, 제 24차, 제 25차, 제 26차, 제 27차, 제 28차, 제 29차, 제 30차, 제 31차, 제 32차, 제 33차, 제 34차, 제 35차, 제 36차, 제 37차, 제 38차, 제 39차, 제 40차, 제 41차, 제 42차, 제 43차, 제 44차, 제 45차, 제 46차, 제 47차, 제 48차, 제 49차 및 제 50차 구현예이기도 한, 본 발명의 첫 번째 측면의 제 51차 구현예로서, 상기 핵산분자는 L-핵산 분자(nucleic acid molecule)인 것이다.
본 발명의 근본적인 해결 과제는 본 발명의 두 번째 측면의 제 1차 구현예이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면으로서, 제 1차 약학적 활성화제로서 본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차, 제 13차, 제 14차, 제 15차, 제 16차, 제 17차, 제 18차, 제 19차, 제 20차, 제 21차, 제 22차, 제 23차, 제 24차, 제 25차, 제 26차, 제 27차, 제 28차, 제 29차, 제 30차, 제 31차, 제 32차, 제 33차, 제 34차, 제 35차, 제 36차, 제 37차, 제 38차, 제 39차, 제 40차, 제 41차, 제 42차, 제 43차, 제 44차, 제 45차, 제 46차, 제 47차, 제 48차, 제 49차, 제 50차 및 제 51차 구현예중 어느 하나에 따른 핵산 분자 및 임의적으로, 추가적인 구성요소(constituent)을 함유하는 약학조성물로 해결가능하며, 여기에서 상기 추가적인 구성요소는 약학적으로 허용가능한 부형제 (pharmaceutically acceptable excipient), 약학적으로 허용가능한 담체(pharmaceutically acceptable carrier) 및 추가적 약학적 활성화제(further pharmaceutically active agent)을 포함하는 군으로부터 선택되며, 상기 약학 조성물은 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 방법(method)에서의 사용 또는 부수적 치료법(adjunct therapy)으로서 질병 또는 장애를 앓고 있거나 또는 질병 또는 장애로 진행될 위험이 있는 객체의 치료를 위한 방법에서의 사용, 또는 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 사용을 위한 것이다(상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)는 암(cancer)임).
본 발명의 두 번째 측면의 제 1차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 2차 구현예로서, 상기 부수적 치료법(adjunct therapy)은 상기 객체(subject)를 민감성 증진화시키고{여기에서 상기 민감성 증진화된 객체(sensitized subject)는 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 치료법(therapy)에 보다 즉시 반응성(responsive)인 것임},
본 발명의 두 번째 측면의 제 2차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 3차 구현예로서, 상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 치료법(therapy)은 추가적 약학적 활성화제(further pharmaceutically active agent)의 투여 및/또는 객체의 방사선 조사(irradiating) 및/또는 세포 치료법(cellular therapy)을 수행함을 포함하는 것이다.
본 발명의 두 번째 측면의 제 1차, 제 2차 및 제 3차 구현예이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 4차 구현예로서, 상기 추가적 약학적 활성화제(further pharmaceutically active agent)은 항체(antibody), 알킬화제(alkylating agent), 대사길항물질(anti-metabolite), 식물 알칼로이드{plant alkaloid, 바람직하게는 빈크리스틴(vincristine)}, 식물 테르페노이드(plant terpenoid), 토포이소머라제 저해제(topoisomerase inhibitor), 류코보린(Leucovorin), 메토트렉세이트 (Methotrexate), 타목시펜(Tamoxifen), 소라페니브(Sorafenib), 레날리도미드 (Lenalidomide), 보르테조밉(Bortezomib), 덱사메타손(Dexamethasone), 플루오로우라실(Flurouracil), 및 프레드니손(Prednisone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 두 번째 측면의 제 4차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 5차 구현예로서, 상기 항체(antibody)는 리툭시맙 (Rituximab), 오파투무맙 (Ofatumumab), 세툭시맙 (Cetuximab), 이브리투모맙(Ibritumomab)-티욱세탄(Tiuxetan), 토시투모맙(Tositumomab), 트라스투주맙(Trastuzumab), 베바시주맙(Bevacizumab), 및 알렘투주맙(Alemtuzumab)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 두 번째 측면의 제 4차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 6차 구현예로서, 상기 알킬화제(alkylating agent)는 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 메클로레타민(mechlorethamine), 시클로포스파미드(cyclophosphamide), 클로람부실(chlorambucil), 독소루비신(doxorubicin), 리포조멀 독소루비신(liposomal doxorubicin), 벤다무스틴(bendamustine), 테모졸로미드(temozolomide) 및 메팔란(Melphalan)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 두 번째 측면의 제 4차 구현예이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 7차 구현예로서, 상기 대사길항물질(anti-metabolite)는 퓨린아자티오프린(purineazathioprine), 머캅토퓨린(mercaptopurine), 플루다라빈(fludarabine), 펜토스타틴(pentostatin), 및 클라드리빈(cladribine)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 두 번째 측면의 제 4차 구현예이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 8차 구현예로서, 상기 식물 테르페노이드(plant terpenoid)는 탁산 류 (taxane) 화합물들로부터 선택된 화합물, 보다 바람직하게는, 도세탁셀 (Docetaxel), 파클리탁셀(Paclitaxel), 포도필로톡신(podophyllotoxin) 및 에포틸론(epothilone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 두 번째 측면의 제 4차 구현예이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 9차 구현예로서, 상기 토포이소머라제 저해제 (topoisomerase inhibitor)는 캠프토테신(camptothecin), 이리노테칸(irinotecan), 및 미톡산트론 (mitoxantrone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 두 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 및 제 9차 구현예중 하나의 구현예이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 10차 구현예로서, 상기 암은 혈액(hematological) 암의 그룹(group)으로부터 선택된 암, 바람직하게는, 상기 혈액암은 백혈병 (leukemia) 및 골수종(myeloma)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 두 번째 측면의 제 10차 구현예이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 11차 구현예로서, 상기 백혈병(leukemia)은 만성 림프구 백혈병(chronic lymphoid leukemia) 및 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 두 번째 측면의 제 10차 구현예의 하나의 구현예이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 12차 구현예로서, 상기 골수종(myeloma)은 다발성 골수종(multiple myeloma)인 것이다.
본 발명의 두 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 및 제 9차 구현예중 하나의 구현예이기도 한, 본 발명의 두 번째 측면의 제 13차 구현예로서, 상기 암(cancer)는 고형 암(solid tumors)들로부터 선택되고, 여기에서 상기 고형암은 교모세포종 (glioblastomas), 대장암(colorectal cancer), 유방 암(breast cancer), 림프종(lymphoma), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 신장암(renal cancer), 난소암(ovarian cancer), 및 폐암 (lung cancer)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 근본적인 해결 과제는 본 발명의 세 번째 측면의 제 1차 구현예이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면으로서, 최소한 하나 또는 몇 개의 투여단위(dosage units)의 제 1차 약학적 활성화제를 포함하는 약제(medicament)로 해결되고, 여기에서 제 1차 약학적 활성화제는 본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차, 제 13차, 제 14차, 제 15차, 제 16차, 제 17차, 제 18차, 제 19차, 제 20차, 제 21차, 제 22차, 제 23차, 제 24차, 제 25차, 제 26차, 제 27차, 제 28차, 제 29차, 제 30차, 제 31차, 제 32차, 제 33차, 제 34차, 제 35차, 제 36차, 제 37차, 제 38차, 제 39차, 제 40차, 제 41차, 제 42차, 제 43차, 제 44차, 제 45차, 제 46차, 제 47차, 제 48차, 제 49차, 제 50차 및 제 51차 구현예중 어느 하나에 정의한 바와 같은 SDF-1에 결합가능한 핵산 분자이며 상기 약제는 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 방법(method)에서의 사용, 또는 부수적 치료법(adjunct therapy)으로서 질병 또는 장애를 앓고 있거나 또는 질병 또는 장애로 진행될 위험이 있는 객체의 치료를 위한 방법에서의 사용, 또는 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 사용을 위한 것이다 (상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)는 암(cancer)임).
본 발명의 세 번째 측면의 제 1차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 2차 구현예로서, 상기 부수적 치료법(adjunct therapy)은 상기 객체(subject)를 민감성 증진화시키고, (여기에서 상기 민감성 증진화된 객체(sensitized subject)는 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 치료법(therapy)에 보다 즉시 반응성(responsive)인 것임).
본 발명의 세 번째 측면의 제 2차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 세번째 측면의 제 3차 구현예로서, 상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 치료법(therapy)은 추가적 약학적 활성화제(further pharmaceutically active agent)의 투여 및/또는 객체의 방사선 조사(irradiating) 및/또는 세포 치료법(cellular therapy)을 수행함을 포함하는 것이다.
본 발명의 세 번째 측면의 제 1차, 제 2차 및 제 3차 구현예, 바람직하게는 제 1차 구현예이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 4차 구현예로서, 상기약제(medicament)는 추가적 약학적 활성화제(further pharmaceutically active agent), 바람직하게는, 최소한 하나 또는 몇 개의 투여단위(dosage units)의 추가적 약학적 활성화제를 포함하고, 여기에서, 상기 추가적 약학적 활성화제(pharmaceutically active agent)는 항체(antibody), 알킬화제(alkylating agent), 대사길항물질 (anti-metabolite), 식물 알칼로이드 {plant alkaloid, 바람직하게는 빈크리스틴(vincristine)}, 식물 테르페노이드(plant terpenoid), 토포이소머라제 저해제(topoisomerase inhibitor), 류코보린 (Leucovorin), 메토트렉세이트 (Methotrexate), 타목시펜 (Tamoxifen), 소라페니브(Sorafenib), 레날리도미드 (Lenalidomide), 보르테조밉 (Bortezomib), 덱사메타손 (Dexamethasone), 및 플루오로우라실 (Flurouracil)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 세 번째 측면의 제 3차 구현예이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 5차 구현예로서, 상기 약제(medicament)는 추가적 약학적 활성화제(further pharmaceutically active agent), 바람직하게는, 최소한 하나 또는 몇 개의 투여단위(dosage units)의 추가적 약학적 활성화제를 포함하고, 여기에서, 상기 추가적 약학적 활성화제(pharmaceutically active agent)는 항체(antibody), 알킬화제(alkylating agent), 대사길항물질 (anti-metabolite), 식물 알칼로이드 {plant alkaloid, 바람직하게는 빈크리스틴(vincristine)}, 식물 테르페노이드(plant terpenoid), 토포이소머라제 저해제(topoisomerase inhibitor), 류코보린 (Leucovorin), 메토트렉세이트 (Methotrexate), 타목시펜 (Tamoxifen), 소라페니브(Sorafenib), 레날리도미드 (Lenalidomide), 보르테조밉 (Bortezomib), 덱사메타손 (Dexamethasone), 및 플루오로우라실 (Flurouracil) 및 프레드니손(prednisone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 세 번째 측면의 제 4차 및 제 5차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 6차 구현예로서, 상기 항체(antibody)는 리툭시맙(Rituximab), 오파투무맙(Ofatumumab), 세툭시맙(Cetuximab), 이브리투모맙(Ibritumomab)-티욱세탄(Tiuxetan), 토시투모맙(Tositumomab), 트라스투주맙(Trastuzumab), 베바시주맙(Bevacizumab), 및 알렘투주맙(Alemtuzumab)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 세 번째 측면의 제 4차 및 제 5차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 7차 구현예로서, 상기 알킬화제(alkylating agent)는 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 메클로레타민(mechlorethamine), 시클로포스파미드 (cyclophosphamide), 클로람부실(chlorambucil), 독소루비신(doxorubicin), 리포조멀 독소루비신(liposomal doxorubicin), 벤다무스틴(bendamustine), 테모졸로미드 (temozolomide) 및 메팔란(Melphalan)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 세 번째 측면의 제 4차 및 제 5차 구현예이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 8차 구현예로서, 상기 대사길항물질 (anti-metabolite)는 퓨린아자티오프린(purineazathioprine), 머캅토퓨린(mercaptopurine), 플루다라빈(fludarabine), 펜토스타틴(pentostatin), 및 클라드리빈(cladribine)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 세 번째 측면의 제 4차 및 제 5차 구현예이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 9차 구현예로서, 상기 식물 테르페노이드(plant terpenoid)는 탁산 류 (taxane) 화합물들로부터 선택된 화합물, 보다 바람직하게는, 도세탁셀 (Docetaxel), 파클리탁셀 (Paclitaxel), 포도필로톡신(podophyllotoxin) 및 에포틸론(epothilone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 세 번째 측면의 제 4차 및 제 5차 구현예이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 10차 구현예로서, 상기 토포이소머라제 저해제 (topoisomerase inhibitor)는 캠프토테신(camptothecin), 이리노테칸(irinotecan), 및 미톡산트론 (mitoxantrone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 세 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차 및 제 10차 구현예중 하나의 구현예이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 11차 구현예로서, 상기 암은 혈액(hematological) 암의 그룹(group)으로부터 선택된 암, 바람직하게는, 상기 혈액암은 백혈병 (leukemia) 및 골수종(myeloma)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 세 번째 측면의 제 11차 구현예이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 12차 구현예로서, 상기 백혈병 (leukemia)은 만성 림프구 백혈병 (chronic lymphoid leukemia) 및 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid leukemia)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 세 번째 측면의 제 11차 구현예의 하나의 구현예이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 13차 구현예로서, 상기 골수종(myeloma)은 다발성 골수종(multiple myeloma)인 것이다.
본 발명의 세 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차 및 제 10차 구현예중 하나의 구현예이기도 한, 본 발명의 세 번째 측면의 제 14차 구현예로서, 상기 암(cancer)는 고형 암(solid tumors)들로부터 선택되고, 여기에서 상기 고형암은 교모세포종 (glioblastomas), 대장암(colorectal cancer), 유방 암(breast cancer), 림프종(lymphoma), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 신장암(renal cancer), 난소암(ovarian cancer), 및 폐암 (lung cancer)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 근본적인 해결 과제는 본 발명의 네 번째 측면의 제 1차 구현예이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면으로서, 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 약제(medicament)의 제조 또는 부수적 치료법(adjunct therapy)으로서 질병 또는 장애를 앓고 있거나 또는 질병 또는 장애로 진행될 위험이 있는 객체의 치료를 위한 방법에서의 사용을 위한 본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차, 제 13차, 제 14차, 제 15차, 제 16차, 제 17차, 제 18차, 제 19차, 제 20차, 제 21차, 제 22차, 제 23차, 제 24차, 제 25차, 제 26차, 제 27차, 제 28차, 제 29차, 제 30차, 제 31차, 제 32차, 제 33차, 제 34차, 제 35차, 제 36차, 제 37차, 제 38차, 제 39차, 제 40차, 제 41차, 제 42차, 제 43차, 제 44차, 제 45차, 제 46차, 제 47차, 제 48차, 제 49차, 제 50차 및 제 51차 구현예중 어느 하나에 정의한 바와 같은 핵산 분자의 용도(use)에 의하여 해결된다 (상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)는 암(cancer)임).
본 발명의 네 번째 측면의 제 1차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 2차 구현예로서, 상기 부수적 치료법(adjunct therapy)은 상기 객체(subject)를 민감성 증진화시키고, (여기에서 상기 민감성 증진화된 객체(sensitized subject)는 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 치료법(therapy)에 보다 즉시 반응성(responsive)인 것임).
본 발명의 네 번째 측면의 제 2차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 3차 구현예로서, 상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 치료법(therapy)은 추가적 약학적 활성화제(further pharmaceutically active agent)의 투여 및/또는 객체의 방사선 조사(irradiating) 및/또는 세포 치료법(cellular therapy)을 수행함을 포함하는 것이다.
본 발명의 네 번째 측면의 제 1차, 제 2차 및 제 3차 구현예, 바람직하게는 제 1차 구현예이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 4차 구현예로서, 상기 약제(medicament)는 추가적 약학적 활성화제(further pharmaceutically active agent)와 조합(combination)하여 사용되는 것이며, 여기에서, 상기 추가적 약학적 활성화제(pharmaceutically active agent)는 항체(antibody), 알킬화제(alkylating agent), 대사길항물질 (anti-metabolite), 식물 알칼로이드 {plant alkaloid, 바람직하게는 빈크리스틴(vincristine)}, 식물 테르페노이드(plant terpenoid), 토포이소머라제 저해제(topoisomerase inhibitor), 류코보린 (Leucovorin), 메토트렉세이트 (Methotrexate), 타목시펜 (Tamoxifen), 소라페니브(Sorafenib), 레날리도미드 (Lenalidomide), 보르테조밉 (Bortezomib), 덱사메타손 (Dexamethasone), 플루오로우라실 (Flurouracil) 및 프레드니손(prednisone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 네 번째 측면의 제 3차 구현예이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 5차 구현예로서, 상기 추가적 약학적 활성화제(further pharmaceutically active agent)는 항체(antibody), 알킬화제(alkylating agent), 대사길항물질 (anti-metabolite), 식물 알칼로이드 {plant alkaloid, 바람직하게는 빈크리스틴(vincristine)}, 식물 테르페노이드(plant terpenoid), 토포이소머라제 저해제(topoisomerase inhibitor), 류코보린 (Leucovorin), 메토트렉세이트 (Methotrexate), 타목시펜 (Tamoxifen), 소라페니브(Sorafenib), 레날리도미드 (Lenalidomide), 보르테조밉 (Bortezomib), 덱사메타손 (Dexamethasone), 플루오로우라실 (Flurouracil) 및 프레드니손(prednisone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 네 번째 측면의 제 4차 및 제 5차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 6차 구현예로서, 상기 항체(antibody)는 리툭시맙(Rituximab), 세툭시맙(Cetuximab), 이브리투모맙(Ibritumomab)-티욱세탄(Tiuxetan), 토시투모맙(Tositumomab), 트라스투주맙(Trastuzumab), 베바시주맙(Bevacizumab), 및 알렘투주맙(Alemtuzumab)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 네 번째 측면의 제 4차 및 제 5차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 7차 구현예로서, 상기 알킬화제(alkylating agent)는 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 메클로레타민(mechlorethamine), 시클로포스파미드 (cyclophosphamide), 클로람부실(chlorambucil), 독소루비신(doxorubicin), 리포조멀 독소루비신(liposomal doxorubicin), 벤다무스틴(bendamustine), 테모졸로미드 (temozolomide) 및 메팔란(Melphalan)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 네 번째 측면의 제 4차 및 제 5차 구현예이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 8차 구현예로서, 상기 대사길항물질 (anti-metabolite)는 퓨린아자티오프린(purineazathioprine), 머캅토퓨린(mercaptopurine), 플루다라빈(fludarabine), 펜토스타틴(pentostatin), 및 클라드리빈(cladribine)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 네 번째 측면의 제 4차 및 제 5차 구현예이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 9차 구현예로서, 상기 식물 테르페노이드(plant terpenoid)는 탁산 류 (taxane) 화합물들로부터 선택된 화합물, 보다 바람직하게는, 도세탁셀 (Docetaxel), 파클리탁셀 (Paclitaxel), 포도필로톡신(podophyllotoxin) 및 에포틸론(epothilone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 네 번째 측면의 제 4차 및 제 5차 구현예이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 10차 구현예로서, 상기 토포이소머라제 저해제 (topoisomerase inhibitor)는 캠프토테신(camptothecin), 이리노테칸(irinotecan), 및 미톡산트론 (mitoxantrone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 네 번째 측면의 제 4차, 및 제 5차 구현예중 하나의 구현예이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 11차 구현예로서, 상기 암은 혈액(hematological) 암의 그룹(group)으로부터 선택된 암, 바람직하게는, 상기 혈액암은 백혈병 (leukemia) 및 골수종(myeloma)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 네 번째 측면의 제 11차 구현예이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 12차 구현예로서, 상기 백혈병 (leukemia)은 만성 림프구 백혈병 (chronic lymphoid leukemia) 및 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid leukemia)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 네 번째 측면의 제 11차 구현예의 하나의 구현예이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 13차 구현예로서, 상기 골수종(myeloma)은 다발성 골수종(multiple myeloma)인 것이다.
본 발명의 네 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차 및 제 10차 구현예중 하나의 구현예이기도 한, 본 발명의 네 번째 측면의 제 14차 구현예로서, 상기 암(cancer)는 고형 암(solid tumors)들로부터 선택되고, 여기에서 상기 고형암은 교모세포종 (glioblastomas), 대장암(colorectal cancer), 유방 암(breast cancer), 림프종(lymphoma), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 신장암(renal cancer), 난소암(ovarian cancer), 및 폐암 (lung cancer)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 근본적인 해결 과제는 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 1차 구현예이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면으로서, 암(cancer)을 앓고 있거나 또는 암으로 진행될 위험이 있는 객체를 치료하기 위한 방법(method)로 해결가능하고,
여기에서 상기 방법은
(a) 약학적으로 허용가능한 양의 본 발명의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차, 제 13차, 제 14차, 제 15차, 제 16차, 제 17차, 제 18차, 제 19차, 제 20차, 제 21차, 제 22차, 제 23차, 제 24차, 제 25차, 제 26차, 제 27차, 제 28차, 제 29차, 제 30차, 제 31차, 제 32차, 제 33차, 제 34차, 제 35차, 제 36차, 제 37차, 제 38차, 제 39차, 제 40차, 제 41차, 제 42차, 제 43차, 제 44차, 제 45차, 제 46차, 제 47차, 제 48차, 제 49차, 제 50차 및 제 51차 구현예중 어느 하나에 정의한 바와 같은 SDF-1과 결합가능한 핵산 분자를 투여하는 단계를 포함하는 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 1차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 2차 구현예로서, 상기 방법은
(b) 객체에게 방사선 조사(irradiating) 및/또는 수술(surgery) 및/또는 세포 치료법(cellular therapy)을 수행 및/또는 약학적으로 허용가능한 양의 추가적 약학적 활성화제(further pharmaceutically active agent)의 투여하는 단계를 포함하는 것이며, 여기에서 상기 상기 추가적 약학적 활성화제(pharmaceutically active agent)는 항체(antibody), 알킬화제(alkylating agent), 대사길항물질 (anti-metabolite), 식물 알칼로이드 {plant alkaloid, 바람직하게는 빈크리스틴(vincristine)}, 식물 테르페노이드(plant terpenoid), 토포이소머라제 저해제(topoisomerase inhibitor), 류코보린 (Leucovorin), 메토트렉세이트 (Methotrexate), 타목시펜 (Tamoxifen), 소라페니브(Sorafenib), 레날리도미드 (Lenalidomide), 보르테조밉 (Bortezomib), 덱사메타손 (Dexamethasone), 플루오로우라실 (Flurouracil) 및 프레드니손(prednisone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 2차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 3차 구현예로서, 본 발명의 약학적으로 허용가능한 양의 첫 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차, 제 10차, 제 11차, 제 12차, 제 13차, 제 14차, 제 15차, 제 16차, 제 17차, 제 18차, 제 19차, 제 20차, 제 21차, 제 22차, 제 23차, 제 24차, 제 25차, 제 26차, 제 27차, 제 28차, 제 29차, 제 30차, 제 31차, 제 32차, 제 33차, 제 34차, 제 35차, 제 36차, 제 37차, 제 38차, 제 39차, 제 40차, 제 41차, 제 42차, 제 43차, 제 44차, 제 45차, 제 46차, 제 47차, 제 48차, 제 49차, 제 50차 및 제 51차 구현예중 어느 하나에 정의한 바와 같은 SDF-1과 결합가능한 핵산 분자를 부수적 치료법(adjunct therapy) 또는 부수적 치료법(adjunct therapy)의 부분으로서 투여하는 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 3차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 4차 구현예로서, 상기 부수적 치료법(adjunct therapy)은 상기 객체(subject)를 민감성 증진화시키고, (여기에서 상기 민감성 증진화된 객체(sensitized subject)는 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 치료법(therapy)에 보다 즉시 반응성(responsive)인 것임).
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 4차 구현예의 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 5차 구현예로서, 상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료(treatment) 및/또는 예방(prevention)을 위한 치료법(therapy)은 상기 (b) 단계에서 수행된 바와 같은, 추가적 약학적 활성화제(further pharmaceutically active agent)의 투여 및/또는 객체의 방사선 조사(irradiating) 및/또는 세포 치료법(cellular therapy)을 수행함을 포함하는 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차 및 제 5차 구현예중 어느 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 6차 구현예로서, 상기 항체(antibody)는 리툭시맙(Rituximab), 세툭시맙(Cetuximab), 이브리투모맙(Ibritumomab)-티욱세탄(Tiuxetan), 토시투모맙(Tositumomab), 트라스투주맙(Trastuzumab), 베바시주맙(Bevacizumab), 및 알렘투주맙(Alemtuzumab)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 2차, 제 3차, 제 4차 및 제 5차 구현예중 어느 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 7차 구현예로서, 상기 알킬화제(alkylating agent)는 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 메클로레타민(mechlorethamine), 시클로포스파미드 (cyclophosphamide), 클로람부실(chlorambucil), 독소루비신(doxorubicin), 리포조멀 독소루비신(liposomal doxorubicin), 벤다무스틴(bendamustine), 테모졸로미드 (temozolomide) 및 메팔란(Melphalan)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 2차, 제 3차, 제 4차 및 제 5차 구현예중 어느 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 8차 구현예로서, 상기 대사길항물질 (anti-metabolite)는 퓨린아자티오프린(purineazathioprine), 머캅토퓨린(mercaptopurine), 플루다라빈(fludarabine), 펜토스타틴(pentostatin), 및 클라드리빈(cladribine)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 2차, 제 3차, 제 4차 및 제 5차 구현예중 어느 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 9차 구현예로서, 상기 식물 테르페노이드(plant terpenoid)는 탁산 류 (taxane) 화합물들로부터 선택된 화합물, 보다 바람직하게는, 도세탁셀 (Docetaxel), 파클리탁셀 (Paclitaxel), 포도필로톡신(podophyllotoxin) 및 에포틸론(epothilone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 2차, 제 3차, 제 4차 및 제 5차 구현예중 어느 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 10차 구현예로서, 상기 토포이소머라제 저해제 (topoisomerase inhibitor)는 캠프토테신(camptothecin), 이리노테칸(irinotecan), 및 미톡산트론 (mitoxantrone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차 및 제 10차 구현예중 어느 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 11차 구현예로서, 상기 암은 혈액(hematological) 암의 그룹(group)으로부터 선택된 암, 바람직하게는, 상기 혈액암은 백혈병(leukemia) 및 골수종(myeloma)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 11차 구현예중 어느 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 12차 구현예로서, 상기 백혈병(leukemia)은 만성 림프구 백혈병(chronic lymphoid leukemia) 및 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 11차 및 제 12차 구현예중 어느 하나이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 13차 구현예로서, 상기 골수종(myeloma)은 다발성 골수종(multiple myeloma)인 것이다.
본 발명의 다섯 번째 측면의 제 1차, 제 2차, 제 3차, 제 4차, 제 5차, 제 6차, 제 7차, 제 8차, 제 9차 및 제 10차 구현예중 하나의 구현예이기도 한, 본 발명의 다섯 번째 측면의 제 14차 구현예로서, 상기 암(cancer)는 고형 암(solid tumors)들로부터 선택되고, 여기에서 상기 고형암은 교모세포종 (glioblastomas), 대장암(colorectal cancer), 유방 암(breast cancer), 림프종(lymphoma), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 신장암(renal cancer), 난소암(ovarian cancer), 및 폐암 (lung cancer)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 이론에 얽매이지 않는 범위 내에서, 본 발명자는 본 발명에 따른 핵산 분자들이 SDF-1가 이의 SDF-1 수용체와의 결합을 저해함을 발견하였고 따라서, 간접 또는 직접적으로 암 치료에 사용됨을 확인하였다. 게다가 본 발명자들은 본 발명의 핵산 분자들이 SDF-1의 SDF-1 수용체인 CXCR4 및 CXCR7 각각에 대한 상호작용을 차단하기에 적합함을 확인하였다. 현재까지, 본 발명의 상기 SDF-1 결합 핵산 분자는 각각 CXCR4 및 CXCR7 길항제로서 간주되었다.
본 발명에 따른 핵산 분자 또는 이를 함유한 조성물, 바람직하게는 약학 조성물을 이용하여 치료 또는 예방가능한 다양한 질병(disease), 증상(condition) 및 장애(disorder)에 관하여, 상기 질병(disease), 증상(condition) 및 장애(disorder)는 본원에 개시된, 특히 본원의 일부 도입부에서 언급된 것이다. 개개의 구절은 상기 질병(disease), 증상(condition) 및 장애(disorder) 각각의 예방 및 치료를 위한 핵산 분자의 적용가능성을 교시하는 본원 기술 내용의 내부 부분을 형성한다.
본원에서 사용되는 바와 같은 “SDF-1”는 이에 제한되지는 않으나, 포유동물 SDF-1을 포함한 임의의 SDF-1인 것이다. 바람직하게는, 상기 포유동물 SDF-1는 마우스(mice), 래트(rat), 토끼(rabbit), 햄스터(hamster), 원숭이(monkey) 및 인간(human) SDF-1을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다. 보다 바람직하게는 상기 SDF-1는 SDF-1 (서열번호: 1) 및/또는 인간 SDF-1β (서열번호: 2)으로도 지칭되는 인간 SDF-1, 가장 바람직하게는, SDF-1 (서열번호: 1)으로도 지칭되는 인간 SDF-1이다.
SDF-1 는 2개의 상이한 수용체, 즉, 수용체(receptors) CXCR4 및 RDC1/CXCR7을 통하여 작용한다 (Balabanian, Lagane et al. 2005a, Burns, Summers et al. 2006) (본원 발명 도입부 참조). CXCR4 및 CXCR7의 상승된 발현이 본원에서 개시된 바와 같이 몇몇 암 형태에서 나타났다.
SDF-1는 2개의 상이한 수용체를 통하여 작용하기에, 2개의 SDF-1 수용체들, 즉 CXCR4 및 CXCR7중 하나에 특이적인 화합물에 의한 SDF-1 관련 질환 또는 장애의 치료는:
(a) 세포(cells), 바람직하게는, 암 세포(cancer cells) 상에서 발현된 2개의 상이한 SDF-1 수용체에 기인하여 보다 덜 효과적이어야 하며;
(b) 세포 상에서 발현된 개개 SDF-1 수용체에 기인하여, 세포(cells)의 구분된 개체군, 바람직하게는, 암 세포(cancer cells)의 구분된 개체군으로 제한되어야 한다.
암은 세포가 조절되지 않는 성장, 침입 및 종종 전이(metastasizes)되는 크고 이질적인 질병 군인 악성 신생물 (malignant neoplasms)로 정의되고, 여기에서 상기 암 세포는 신체의 다른 영역, 지역성 림프절 (lymph nodes) 또는 뇌(brain), 뼈(bone), 간(liver), 또는 기타 기관(organs)과 같은 먼 신체 부위로 확산된다. 암의 이러한 악성적 특성은 양성 종양(benign tumors)으로부터 악성종양(malignant tumor)은 분화되고, 본원에서 사용되는 바와 같이, 여기에서 용어 암(cancer)은 본원에서 또한 종양(tumor)으로도 정의되는 바와 같은 악성 종양(malignant tumors)을 포함한다. 악성 종양(Malignant tumors)는 이들의 기원을 바탕으로 2개로 분류된다: 혈액성 (Hematological) 및 고형(solid) 종양(tumors). 혈액성 종양(Hematological tumors)은 혈액(blood), 골수(bone marrow), 및 림프절(lymph nodes)에 영향을 미치는 암 형태이다. 고형 종양은 혈액(blood), 골수(bone marrow), 및 림프절(lymph nodes) 이외의 신체 조직 세포의 비정상적 성장에 의하여 형성된다.
암의 바람직한 형태로는 하기를 들 수 있다:
부신피질암 (Adrenocortical Carcinoma), 카포시 육종(Kaposi Sarcoma) 및 림프종(Lymphoma)과 같은 AIDS-관련 암, 항문 암(Anal Cancer), 충수 암 (Appendix Cancer), 비정형 기형/횡문근양 종양(Atypical Teratoid/Rhabdoid Tumor), 기저 세포 암 (Basal Cell Carcinoma), 담관암(Bile Duct Cancer), 간외담관암 (Extrahepatic), 방광암(Bladder Cancer), 골격암(Bone Cancer), 골육종 (Osteosarcoma), 악성 섬유성 조직구종 (Malignant Fibrous Histiocytoma), 신경교종 (Brain Stem Glioma), 성상 세포종 (Astrocytomas), 뇌 및 척수 종양(Brain and Spinal Cord Tumors), 신경교종 (Brain Stem Glioma), 소아기(Childhood), 중추신경계 비정형 기형/횡문근양 종양 (Central Nervous System Atypical Teratoid/Rhabdoid Tumor), 중추신경계 태생 종양 (Central Nervous System Embryonal Tumors), 두개인두종 (Craniopharyngioma), 상의모세포종 (Ependymoblastoma), 상의세포종 (Ependymoma), 수모세포종 (Medulloblastoma), 수질상피종 (Medulloepithelioma), 중간 분화상 송과체 종양 (Pineal Parenchymal Tumors of Intermediate Differentiation), 천막상 원시성 신경외배엽성 종양(Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumors) 및 송과체아세포종 (Pineoblastoma)과 같은 뇌 종양 (Brain Tumor), 유방 암 (Breast Cancer), 기관지암 (Bronchial Tumors), 유암종 (Carcinoid Tumor), 원발부위 미상암 (Carcinoma of Unknown Primary), 비정형 기형/횡문근양 종양 (Atypical Teratoid/Rhabdoid Tumor) 및 림프종(Lymphoma)과 같은 중추신경계 암 (Cancer of Central Nervous System), 자궁경부암 (Cervical Cancer), 소아 암 (Childhood Cancers), 척색종 (Chordoma), 만성 골수증식성질환 (Chronic Myeloproliferative Disorders), 결장암 (Colon Cancer), 대장암 (Colorectal Cancer), 두개인두종 (Craniopharyngioma), 피부 T세포 림프종 (Cutaneous T-Cell Lymphoma), 태생 종양 (Embryonal Tumors), 자궁내막암 (Endometrial Cancer), 상의모세포종 (Ependymoblastoma), 상의세포종 (Ependymoma), 식도암 (Esophageal Cancer), 후신경모세포종 (Esthesioneuroblastoma), 유잉 육종류 종양 (Ewing Sarcoma Family of Tumors), 두개외 배아세포 종양 (Extracranial Germ Cell Tumor), 고환외 배아세포종양 (Extragonadal Germ Cell Tumor), 간외 담관 암 (Extrahepatic Bile Duct Cancer), 안구내 흑색종 (Intraocular Melanoma) 및 망막아세포종 (Retinoblastoma)과 같은 안구 암 (Eye Cancer), 골수 섬유성조직구종 (Fibrous Histiocytoma of Bone), 골육종 (Osteosarcoma), 담낭암 (Gallbladder Cancer), 위암 (Gastric (Stomach) Cancer), 위장관 유암종 (Gastrointestinal Carcinoid Tumor), 위장관 기질종양 (Gastrointestinal Stromal Tumors, GIST), 배아세포종 (Germ Cell Tumor) (두개외: extracranial, 성선외: extragonadal 또는 난소: ovarian), 임신성 융모성 종양 (Gestational Trophoblastic Tumor), 신경교종 (Glioma), 모발성세포백혈병 (Hairy Cell Leukemia), 두경부암 (Head and Neck Cancer), 심장암 (Heart Cancer), 간세포 암 (Hepatocellular (Liver) Cancer), 조직구증 (Histiocytosis), 하인두암 (Hypopharyngeal Cancer), 안구내 흑색종 (Intraocular Melanoma), 섬세포 종양 (Islet Cell Tumors) (내분비 췌장: Endocrine Pancreas), 카포시 육종 (Kaposi Sarcoma), 신장 암 (Kidney Cancer), 랑거한스 세포 조직구증 (Langerhans Cell Histiocytosis), 후두암 (Laryngeal Cancer), 급성 림프구성 백혈병 (Acute Lymphoblastic Leukemia, 약어 ALL), 급성 골수성 백혈병 (Acute Myeloid Leukemia, 약어 AML), 만성 림프구성 백혈병 (Chronic Lymphocytic Leukemia, 약어 CLL), 만성 골수성 백혈병 (Chronic Myelogenous Leukemia, 약어 CML) 및 모발성 세포 백혈병 (Hairy Cell Leukemia)과 같은 백혈병 (Leukemia), 구순암 및 구강암 (Lip and Oral Cavity Cancer), 간 암(Liver Cancer) (원발성: Primary), 상피내 소엽성 암종 (Lobular Carcinoma In Situ, LCIS), 폐 암 (Lung Cancer), AIDS-관련 림프종 (Related Lymphoma), 버킷 림프종 (Burkitt), 균상식육종 (Mycosis Fungoides) 및 쎄자리 증루군 (SSyndrome), 호지킨림프종 (Hodgkin), 비호지킨성 림프종 (Non-Hodgkin) 및 원발성 중추신경계 백혈병(leukemia of Primary Central Nervous System, 약어 CNS)과 같은 림프종 (Lymphoma), 마크로글로불린혈증 (Macroglobulinemia), 골수 및 골육종의 악성 섬유성 조직구증 (Malignant Fibrous Histiocytoma of Bone and Osteosarcoma), 수모세포종 (Medulloblastoma), 수질상피종 (Medulloepithelioma), 흑색종 (Melanoma), 메켈세포암 (Merkel Cell Carcinoma), 중피종 (Mesothelioma), 잠복 원발성 전이성 편평 경부암(Metastatic Squamous Neck Cancer with Occult Primary), NUT 유전자(Gene) 관련 정중선 암종 (Midline Tract Carcinoma)e, 구강암(Mouth Cancer), 다발성 내분비계 종양 증후군 (Multiple Endocrine Neoplasia Syndromes), 다발성골수종 (Multiple Myeloma), 균상식육종 (Mycosis Fungoides), 골수이형성증후군 (Myelodysplastic Syndromes), 골수이형성/골수증식성 신생증 (Myelodysplastic/Myeloproliferative Neoplasms), 골수증식성 장애 (Myeloproliferative Disorders), 비강암 및 부비동암 (Nasal Cavity and Paranasal Sinus Cancer), 비인두암 (Nasopharyngeal Cancer), 신경모세포종 (Neuroblastoma), 비소세포 폐암 (Non-Small Cell Lung Cancer), 구강암 (Oral Cancer), 구강종양 (Oral Cavity Cancer), 구인두암 (Oropharyngeal Cancer), 골육종 (Osteosarcoma) 및 골수 악성 섬유성 조직구증 (Malignant Fibrous Histiocytoma of Bone), 난소암 (Ovarian Cancer), 췌장암 (Pancreatic Cancer), 유두종증 (Papillomatosis), 부신경절종 (Paraganglioma), 부비동암 (Paranasal Sinus) 및 비강암 (Nasal Cavity Cancer), 부갑상선 암 (Parathyroid Cancer), 음경암 (Penile Cancer), 인두암 (Pharyngeal Cancer), 크롬 친화성 세포종 (Pheochromocytoma), 중간 분화상 송과체 종양 (Pineal Parenchymal Tumors of Intermediate Differentiation), 송과체아세포종 (Pineoblastoma) 및 천막상 원시성 신경외배엽성 종양 (Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumors), 뇌하수체종양 (Pituitary Tumor), 형질세포 신생증(Plasma Cell Neoplasm)/다발성 골수종 (Multiple Myeloma), 소아 흉막폐아세포종 (Pleuropulmonary Blastoma, Childhood), 원발성 중추신경계 (Primary Central Nervous System, 약어 CNS) 림프종 (Lymphoma), 전립선 암 (Prostate Cancer), 직장암 (Rectal Cancer), 신장암 (Renal Cell (Kidney) Cancer), 신우(Renal Pelvis) 및 뇨관 (Ureter), 이행세포 암종 (Transitional Cell Cancer), 망막아세포종 (Retinoblastoma), 횡문근육종 (Rhabdomyosarcoma), 침샘암 (Salivary Gland Cancer), 유잉 육종류 종양 (Ewing Sarcoma Family of Tumors), 카포시 육종 (Kaposi Sarcoma), 연조직 육종 (Soft Tissue Sarcoma), 자궁육종 (Uterine Sarcoma)와 같은 육종 (Sarcoma), 흑색종 (Melanoma), 메켈세포암 (Merkel Cell Carcinoma) 및 비흑생종암 (Nonmelanoma)과 같은 피부 암(Skin Cancer), 소세포 폐암 (Small Cell Lung Cancer), 소장암 (Small Intestine Cancer), 연조직 육종 (Soft Tissue Sarcoma), 편평상피암종 (Squamous Cell Carcinoma), 편평 경부 암 (Squamous Neck Cancer), 위암 (Stomach (Gastric) Cancer), 천막상 원시성 신경외배엽성 종양 (Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumors), T-세포 림프종 (Cell Lymphoma), 고환암 (Testicular Cancer), 식도암 (Throat Cancer), 가슴샘종 (Thymoma) 및 가슴샘 암종 (Thymic Carcinoma), 갑상선암 (Thyroid Cancer), 신우 (Renal Pelvis) 및 뇨관 (Ureter)의 이행성 세포 암 (Transitional Cell Cancer), 영양막 종양 (Trophoblastic Tumor), 임신성(Gestational), 뇨관 (Ureter) 및 신우 (Renal Pelvis) 이행성 세포 암 (Ureter and Renal Pelvis, Transitional Cell Cancer), 요도암 (Urethral Cancer), 자궁체부암(uterine cancer) 혹은 자궁내막암(endometrial cancer), 자궁육종 (Uterine Sarcoma), 질암 (Vaginal Cancer), 외음부암 (Vulvar Cancer), 발덴스트룀 거대글로불린혈증 (WaldenstrMacroglobulinemia), 빌름스 종양 (Wilms Tumor)
SDF-1 - CXCR4 축(axis)은 암 줄기 세포 (cancer stem cells), 맥관형성증 (vasculogenesis), 종양 성장(tumor growth) 및 전이 (metastasis)을 포함한 줄기 세포 동원(stem cell mobilization)에 역할을 수행하는 것으로 알려 졌다. 상기 SDF-1 수용체 CXCR4 는 CXCR7과 같이 생체외시험(in vivo)에서 다수의 암 및 혈액 악성종양에서 발현되었다 (Maksym, Tarnowski et al., 2009; Wang, Shiosawa et al., 2008 Miao, Lucker et al., 2007). 특히, SDF-1에 대한 수용체를 세포가 발현한다면, 종양 세포에 대한 성장 및 침입 신호는 SDF-1이다 (Batchelor et al., 2007; Zhu et al., 2009; Xu et al., 2009; Kozin et al., 2010).
SDF-1뿐만 아니라 CXCR4도 저산소증 (hypoxia)에 의하여 유도된다 (Ceradini et al. 2004). VEGF와 같이, 이들은 혈관신생(angiogenic)/혈관성 (vascologenic) 경로(pathways)를 촉발하고 유지하는 강력한 상승적 축을 나타낸다 (Kryczek et al. 2005). 맥관형성증(vasculogenesis)에서의 역할은 SDF-1 가 상기 순환중에 CXCR4가 내피세포 전구세포 (endothelial progenitor cells)를 발현함을 입증하였다 (Sengupta et al. 2005). 혈관신생증(vascularization)을 지지하는 골수 유래세포의 SDF-1 - CXCR4 매개 순항 (mediated recruitment)도 방사선 치료법 이후에 교모세포종 (glioblastoma) 재발의 원이일 수도 있다 (Kioi et al., 2010). 문헌 (Kioi et al)으로 입증되는 바와 같이, 두 개강내 다형성 교모세포종 (intracranial glioblastoma multiforme, 약어 GBM) 마우스 이종이식(mouse xenograft) 모델에서 고 용량의 방사선치료를 받은 GBM 환자 치료는 골수유래세포(bone-marrow derived cells, 약어 BMDCs)의 방사선 유도 순항으로 인하여 덜 효과적이다. CXCR4 길항제인 AMD3100에 의한 SDF-1 및 이의 수용체인 CXCR4과의 상호작용 차단은 방사선 조사된 종양에서 BMDCs 의 유입을 저해하였다 (Kioi et al., 2010). 2010년에 cpd 등(Tseng et al)은 인간 GBM를 근접하게 모방한 모델인 ENU 유도 교모세포종 래트 모델실험에서 CXCR4외에도 CXCR7도 BMDCs의 방사선 유도 순항과 관련된다는 데이터를 제시하였다. 이 실험에서, CXCR7 길항제(antagonist)인 CCX2206는 방사선 조사된 종양에서 BMDCs 유입을 저해하였다 (Tseng et al., 2010). 상기 내용 및 본 발명에 따른 핵산 분자가 SDF-1 및 CXCR4 사이 및 SDF-1 및 CXCR7 사이의 상호작용을 차단가능하고 방사선 치료 후의 생존율에 대한 효과는 CXCR4 및 CXCR7 길항제중 하나 단독만 사용하는 것보다 효과가 탁월함이 예상되었다.
추가로, VEGF 가 CXCR4 발현을 증가시키는 데 반하여 SDF-1는 VEGF 분비 및 신생혈관생성증(angiogenesis) 신호를 유도한다 (Salcedo et al. 1999). 따라서 SDF-1 CXCR4 축의 저해는 단독치료법(monotherapy) 또는 특히 VEGF 저해제(inhibitors)과 같은 다른 항혈관제 (antivascular agents)와의 조합치료에 의한 신생혈관생성증/맥관형성증의 저해를 통하여 종양 성장을 감소 및 저해할 수도 있다..
게다가, CXCR4 발현 암 세포의 SDF-1-발현 기관으로의 귀소(‘homing’)는 directs 전이성 세포(metastatic cells), 선호적으로, 간, 골수, 폐 및 림프절을 지향하는 것으로 알려 졌고 (Alsayed et al. 2007; Burger & Peled 2009) 결국은 SDF-1 CXCR4 축(axis)이 전이(metastasis)에 역할을 수행함을 제시한다.
따라서, 본 발명에 따른 SDF-1 결합 핵산 분자와 같은 단지 1개 화합물에 의한 SDF-1 CXCR4 축 및 SDF-1 - CXCR7 축에 대한 저해는 단독 치료법(monotherapy) 또는 이에 제한되지는 않으나, 약물 투여 치료법(drug therapy), 세포 치료법(cellular therapy), 방사선 치료법(irradiation) 및 수술법(surgery) 등과 같은 기타 치료법과의 조합(combination)으로서 암(cancer) 및/또는 종양(tumors), 특히, 다양한 범위의 혈액 암 및 고형암 치료에 효과적이어야 한다. 게다가, 2개의 SDF-1 수용체인 CXCR4 및 CXCR7 중 하나와 결합하여 저해하는 화합물과 비교시에, 본 발명에 따른 SDF-1 결합 핵산 분자와 같은 단지 1개 화합물에 의한 SDF-1 CXCR4 축 및 SDF-1 - CXCR7 축에 대한 저해는 약물 치료법(drug therapy), 세포 치료법(cellular therapy), 방사선 치료법(irradiation) 및 수술법(surgery) 등과 같은 기타 치료법과의 조합(combination)으로서 암(cancer) 및/또는 종양(tumors), 특히, 다양한 범위의 혈액 암 및 고형암 치료에 보다 효과적이어야 한다.
본원의 약물 치료법(drug therapy)은 약물 (drug), 바람직하게는, 약학적 활성화제(pharmaceutically active agent), 보다 바람직하게는, 본원에서 정의된 바와 같은 약학적 활성화제(pharmaceutically active agent)에 의하여 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료 및/또는 예방함을 포함하는 것도 본 발명의 범위 내이다.
본원에서 바람직하게 사용되는 바와 같이, 양 (sheep) 또는 소(cows) 등과 같은 동물의 기관(organs), 배아(embryos), 또는 태아(fetuses)로부터 분리된 조직을 이용한, 세포 치료법(cellular therapy)으로 지칭되는 바와 같은 세포치료법(cell therapy)는 질병(disease) 또는 장애(disorder)를 앓거나 발전할 가능성이 있는 객체에게 투여되는 것이며, 바람직하게는, 상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)는 암이며, 상기 세포 치료법은 암치료법이다.
이론상, 비혈액성 암(non-hematological cancers)은 수술법(surgery)에 의하여 모두 제거되면 완치가능하다. 만일 암이 수술전에 신체 내의 다른 부위로 전이되는 경우는 대개 완전한 수술적 제거법이 불가능하다. 암에 대한 수술 과정 또는 수술법의 예로는 유방암에 대해서는 유방절제술(mastectomy), 전립선암에 대해서는 전립선 절제술(prostatectomy), 및 전립선암에 대해서는 전립선 절제술, 비소세포 폐암 (non-small cell lung cancer)에 대해서는 폐암 수술법(lung cancer surgery)을 포함한다. 수술법의 목적은 종양만의 제거 또는 전체 기관의 제거일 수 있다. 수술은 가끔 기타 다른 암 치료법(cancer treatments) 또는 화학요법제(chemotherapy) 및 방서선 요법(radiation)과 같은 처치(therapies)와 같이 시행할 수 있다. 암 수술법(Cancer surgery)은 하나 이상의 목표를 달성하는데 사용가능하다. 이러한 목표는 이에 제한되지는 않으나, 암 예방(cancer prevention), 암 진단(diagnosis), 암의 전이 진단(staging), 1차 치료 (primary treatment), 암 감축술(debulking) 및 암 증상 또는 부작용 완화(relieving symtoms) 등을 포함한다.
방사선 치료법(Radiotherapy) (본원에서는 X-선 치료법(ray therapy) 또는 조사법(irradiation)이라고도 지칭함)은 암 세포를 죽이기 위하여 이온화 방사선 조사(ionizing radiation)를 사용하는 것이다. 방사선 치료법은 거의 대부분 모든 형태의 고형암을 치료하는데 의료계에서 사용된다. 조사법(irradiation)는 백혈병(leukemia) 및 림프종 (lymphoma)을 치료하는데도 사용한다. 방사선 치료법은 유전 물질(genetic material)을 파괴함으로서 치료할 부위의 세포를 손상시키거나 파괴하고, 이는 이러한 세포들이 성장 및 분할을 지속하는 것을 불가능하게 한다. 방사선 치료법의 이러한 효과는 치료할 부위에 국한되고 제한적이다. 개개 부위에 대한 방사선 조사양(Radiation dose)은 개개 암 형태의 방사선 감수성(radiosensitivity)을 포함한, 및 방사선 조사로 손상될 수 있는 주변 조직 및 기관의 존재여부 등의 다수의 인자들에 좌우된다. 방사선 치료법의 목표는 건강한 주변 조직에 제한된 해를 끼치면서도 가능한한 다수의 암세포를 파괴시키는 것이다.
추가적으로, 본 발명에 따른 SDF-1 결합 핵산은 SDF-1 CXCR4 축 및/또는 SDF-1 - CXCR7 축의 생리학적 효과가 SDF-1의 보다 높은 혈장 수준과 관련되는 경우에 바람직하다. 예를 들어, 파클리탁셀(paclitaxel) 및 베바시주맙(bevacizumab)과 같은 특정한 치료제들은 골수 기원 내피 전구세포 (bone marrow derived endothelial progenitor cells)를 보다 많이 분비시키거나 또는 성장(growth), 침입(invasiveness) 또는 전이(metastasis)를 자극함으로서 종양 치료에 대하여 부정적 영향을 갖을 수 있는 상승된 혈장 SDF-1 수준을 나타낸다 (Shaked, Henke et al., 2008; Xu, Duda et al., 2009). 이러한 경우에, SDF-1 결합 핵산의 공동-적용(co-application)이 상승된 혈장 SDF-1 수준에 대한 효과를 경감시킬 것이다.
더군다나, 본 발명에 따른 SDF-1 결합 핵산에 의한 SDF-1 CXCR4 축(axis) 및/또는 SDF-1 - CXCR7 축의 저해는 생존(survival) 및 이러한 치료법에 대한 약물 내약성 (drug resistance)을 나타내는 백혈병 및 기타 암세포와의 부착성 스트로마 작용 (adhesive stromal interactions)을 파괴함으로서 기타 다른 치료제와의 항-종양 효과를 상승시킬 것이다 (Jin et al. 2008; Nervi et al. 2009). SDF-1 결합 핵산의 이러한 사용은 화학요법 민감성증진(chemosensitization)이라고 알려진 바가 있다.
화학요법(chemotherapy) 또는 방사선 치료법(radiotherapy)에 대한 종양 세포의 민감성 증진화(sensitization)를 ’화학요법 민감성증진(chemosensitization)’ 또는 ’방사선요법 민감성증진’이라고 각각 알려져 있다. 이러한 “화학요법 민감성증진(chemosensitization)’ 또는 ’방사선요법 민감성증진’, 바람직하게는 본 발명에 따른 핵산 분자에 의한 “화학요법 민감성증진(chemosensitization)’ 또는 ’방사선요법 민감성증진’은 질병(disease) 또는 장애(disorder)로 고통받는 객체를 민감화시키고, 여기에서 상기 민감성 증진화된 객체(sensitized subject)는 상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)의 치료 및/또는 예방에 대한 치료법에 보다 반응성이 크고, 바람직하게는, 여기에서, 상기 질병(disease) 또는 장애(disorder)은 암이다. 1차 치료법(primary treatment)과 같이 사용되는 상기 치료법, 바람직하게는 암 치료법은 본 발명에 따른 부수적 치료법 (adjunct therapy)이며 부수적인 치료법(adjunctive therapy)이라고도 지칭한다. 상기 부수적 치료법 (adjunct therapy)의 목적은 1차 치료법(primary treatment), 바람직하게는 1차 암 치료법(primary cancer treatment)을 돕는 것이다. 따라서, SDF-1 CXCR4 축(axis) 및/또는 SDF-1 - CXCR7 축의 저해는 특히, 단독치료법(monotherapy) 또는 이에 제한되는 않으나, 약물 투여 치료법(drug therapy), 세포 치료법(cellular therapy), 방사선 치료법(irradiation) 및 수술법(surgery) 등과 같은 기타 치료법과의 조합(combination)으로서 넓은 범위의 혈액암 및 고형암 모두를 치료하는데 효과적일 것이다.
SDF-1 및 SDF-1 수용체 (CXCR4 및 CXCR7과 같은)와의 상술한 의미 및 관련성을 고려하여, 본 발명에 따른 핵산 분자를 저해하는, SDF-1 및 SDF-1 수용체 사이의 SDF-1 결합 및 상호작용은 상기 질병을 경감시킬 수 있으며, 여기에서, 본 발명에 따른 SDF-1 결합 핵산에 의한 SDF-1 저해는 화학요법제에 의하여 치료될 악성종양 세포의 화학요법 민감성증진(chemosensitization), 성장 및 침입의 감소 또는 저해, 신생혈관생성증/맥관형성증의 저해, 전이 저해 및/또는 화학요법제에 대한 숙주의 반응으로부터 유래된 상승된 혈장 SDF-1 수준의 저해를 이끈다.
게다가, 본 발명은 SDF-1에 대하여 특이적으로 결합하고 높은 친화성을 갖으며, SDF-1 효과, 특히 CXCR4 및 CXCR7과 같은 이들의 수용체에 대한 SDF-1의 효과를 저해 및 길항하는 핵산 분자를 발생시킴이 가능하다는 놀라운 사실에 바탕을 둔 것이다.
SDF-1 에 대한 길항제들은 본 발명에 따른 SDF-1 결합 핵산과 같은 SDF-1에 결합하고 SDF-1의 기능, 바람직하게는, 실시예에서 개시되는 바와 같은 시험관내 실험 또는 생체 내 실험에서 개시된 바와 같은 SDF-1의 기능을 저해하는 분자들이다.
본 발명에 따른 핵산은 핵산 분자임이 본 발명의 범위 내이다. 역으로 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어인 핵산 (nucleic acid) 및 핵산 분자(nucleic acid molecule)은 동의어로 사용된다. 이러한 핵산(nucleic acids)은 바람직하게는, 본원에서 또한 본 발명에 따른 핵산 분자(nucleic acid molecules according to the present invention), 본 발명에 따른 핵산(the nucleic acids according to the present invention) 또는 발명적 핵산(the inventive nucleic acids) 또는 발명적 핵산 분자(inventive nucleic acid molecules)로 지칭되는 것이다.
본원에 개시된 바와 같은 본 발명에 의한 핵산의 특징은 상기 핵산이 단독 또는 임의의 조합으로 사용되는 본 발명의 어떠한 측면으로 실현될 수 있다.
본원에서 보다 상술하는 바와 같이, 본 발명자들은 다수의 서로 상이한 SDF-1 결합 핵산 분자들을 동정하였으며, 여기에서 상기 핵산 분자들은 본원에서 박스(Boxes)라고도 지칭되는 뉴클레오티드의 스트레치(stretches)라도 특정될 수 있다(실시예 1 참조). 실시예 5 내지 11에서 실험적으로 입증되는 바와 같이, 본 발명자들은 SDF-1 결합 핵산 분자들이 암 치료에 적용가능하고 암을 실제적으로 치료가능하다는 것을 몇몇 실험 시스템하에서 입증하였다.
서로 상이한 형태의 SDF-1 결합 핵산 분자들은 서로 상이한 3개의 뉴클레오티드 스트레치 (stretches of nucleotides): 즉, 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch of nucleotides), 뉴클레오티드의 중간 스트레치 (the central stretch of nucleotides) 및 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch of nucleotides)를 포함한다. 일반적으로, 본 발명의 SDF-1 결합 핵산 분자들은 omprise at their 5’-말단(end) 및 3’-말단(end)에서 뉴클레오티드의 말단 스트레치 (the terminal stretches of nucleotides)들: (1) 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치 및 (2) 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치 (뉴클레오티드의 5’-말단 스트레치(terminal stretch of nucleotides) 및 3’-말단 스트레치이라고도 지칭됨). (1) 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치 및 (2) 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 원칙상 이들의 염기 상보성(base complementarity)으로 인하여, 서로 혼성화(hybridize)되어, 혼성화시에 이중결합 (double-stranded structure)을 형성한다. 그러나, 이러한 혼성화(hybridization)가 생리학적 및/또는 비-생리학적 조건하에서 분자 중에서 반드시 실현되지는 않는다. SDF-1 결합 핵산 분자들의 3개의 뉴클레오티드 스트레치 (stretches of nucleotides): 즉, 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch of nucleotides), 뉴클레오티드의 중간 스트레치 (the central stretch of nucleotides) 및 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch of nucleotides)들은 5’→ 3’-방향으로 서로 배열된다 : 즉, 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch of nucleotides)-뉴클레오티드의 중간 스트레치 (the central stretch of nucleotides)- 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch of nucleotides). 그러나, 호환적으로, 서로 5’→ 3’ 방향으로 역으로도 서로 배열된다 : 즉, 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch of nucleotides)-뉴클레오티드의 중간 스트레치 (the central stretch of nucleotides)- 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch of nucleotides).
서로 상이한 SDF-1 결합 핵산 분자들간의 정의된 박스(defined boxes) 또는 스트레치들(stretches)의 서열상의 상이성은 SDF-1에 대한 결합 친화성(affinity)에 영향을 미친다. 본 발명의 서로 상이한 SDF-1 결합 핵산 분자들의 결합력 분석을 기초로 할 때, 상기 중간 스트레치(central stretch) 및 이를 형성하는 뉴클레오티드들은 개별적이고, 보다 바람직하게는, 인간 SDF-1에 대한 결합에 전체로서 필수적인 것이다.
용어 ‘스트레치(stretch)’ 및 ‘뉴클레오티드의 스트레치 (stretch of nucleotide)’들은 역으로 지시하지 않는 한은 유의어로 사용된다.
본 발명의 바람직한 구현예로서, 본 발명에 따른 핵산은 단일 핵산 분자 (single nucleic acid molecule)이다. 본 발명의 추가적인 구현예로서, 상기 단일 핵산 분자는 다수의 단일 핵산 분자(multitude of the single nucleic acid molecule) 또는 다수의 단일 핵산 종 (multitude of the single nucleic acid molecule species)으로서 존재한다.
본 발명에 따른 핵산은 바람직하게는, 서로 상호가 공유적으로, 보다 바람직하게는 포스포디에테르 결합(phosphodiester link) 또는 결합(linkage)을 통해 결합되는 뉴클레오티드로 구성된 것으로 당업계에서 인지되어야 할 것이다.
원칙상 본 발명의 핵산들은 2개 이상의 스트레치(stretches) 또는 일부(parts)를 포함하고 이들은 상호 혼성화될 수 있음도 본 발명의 범위 내이다. 이러한 혼성화가 발생시에, 이중 가닥형(double-stranded) 구조가 생성된다. 이러한 혼성화가 특히, 시험관 내(in vitro) 및/또는 생체 내(in vivo) 조건하에서 발생되거나 발생되지 않을 수 있음도 당업계에 인지가능할 것이다. 또한 이러한 혼성화시에, 적어도 염기쌍에 대한 규칙에 기초하여, 이러한 혼성화 및 이중 가닥 구조가 형성될 수 있은 경우에 2개의 스트레치의 전장 길이 전체에 걸쳐 반드시 발생하지는 않는다. 본원에서 바람직하게는 개시한 바대로, 이중-가닥 구조는 하나 이상, 바람직하게는 2개 또는 그 이상의 염기쌍이 염기 쌍, 바람직하게는 와트슨-크리크(Watson-Crick) 염기 쌍 규칙에 따른 염기 쌍을 이루어지는, 분자 일부 또는 2개 이상의 분리된 가닥(seperated strands)에 의하여 생성된 구조인 것이다. 후그스텐(Hoogsten) 염기 쌍과 같은 기타 염기 쌍은 이러한 이중-가닥 구조로 또는 이 구조를 형성할 수 있음도 당업계에 인지 가능할 것이다. 또한, 2개의 스트레치는 바람직하게는, 혼성화되고 상기 혼성화는 2개의 스트레치의 염기 상보성에 기인하여 발생됨을 의미함도 인식되어 할 것이다.
본 발명의 바람직한 구현예로서, 본원에서 사용되는 용어, 배열(arrangement)은 본원에서 개시된 핵산과 연계되어 개시된 구조적 (structural) 또는 기능적(functional) 특징(features) 또는 요소(elements)의 순서(order) 또는 서열(sequence)을 의미한다.
본 발명에 따른 핵산은 SDF-1에 결합 가능함은 당업자에게 인지되는 것이다. 어떠한 이론에 제한되지 않고자 하는 바램으로서, 본 발명자들은 SDF-1 결합이 청구된 핵산 분자의 3차원 구조 형질 (traits) 또는 요소 (elements)의 조합으로부터 유래하고, 이는 상기 형질 또는 요소를 형성하는 뉴클레오티드의 1차 서열의 배향(orientation) 및 접힘(folding) 형태에 의하여 유래되고 바람직하게는 상기 형질 또는 요소는 SDF-1 결합 핵산 분자의 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치 (first terminal stretch of nucleotides), 뉴클레오티드의 중간 스트레치 (the central stretch of nucleotides) 및 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치(second terminal stretch of nucleotides)들이라고 예측하였다. 상기 개개 형질 또는 요소는 다양한 서로 상이한 개별 서열에 의하여 형성가능하고, 이러한 변이(variation) 정도는 상기 형질 또는 요소가 형성할 3차원 구조에 의하여 좌우될 수 있음이 명백하다. 청구된 발명의 전체적인 결합특성은 다양한 요소 및 형질들의 상호작용(interplay)으로부터 유래되고, 이는 종국에는 이의 목표인 SDF-1과 청구된 핵산과의 상호작용을 초래한다. 다시 어떠한 이론에 제한되지 않고자 하는 바램으로서, SDF-1 결합 핵산에 대하여 특징적인 뉴클레오티드의 중간 스트레치 (the central stretch of nucleotides)는 청구된 핵산 분자와 SDF-1와의 결합을 매개하는데 중요한 것으로 판단된다. 결론적으로, 본 발명에 따른 핵산은 SDF-1와의 상호작용에 적합하다. 또한, 당업자라면 본 발명에 따른 핵산이 SDF-1에 길항제임도 인식가능할 것이다. 본 발명에 따른 이러한 핵산이 SDF-1에 의하여 수반되거나 유래되는 임의 질병 또는 증상의 치료 및 예방에 적합하다. 이러한 질병 및 증상은 SDF-1이 상기 질병 및 증상과 관련되거나 수반됨을 입증한 선행기술로부터 추론가능하며, 상기 선행기술들은 본 발명에 따른 핵산의 치료학적 용도에 대한 과학적 논리를 제공하며 본원에서 참고로만 인용된다.
본 발명에 따른 핵산들은 또한 본원에 개시된 특정 서열들과 필수적으로 상동성(homologous)을 갖는 핵산들도 포함할 것이다. 본원에서 정의되는 용어 실질적으로 상동성(substantially homologous)은 최소한 75%, 바람직하게는 85%, 보다 바람직하게는 90% 및 가장 바람직하게는 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 상동성을 갖는 것으로 해석되어야 한다.
본 발명에 따른 핵산에 존재하는 상동성을 갖는 뉴클레오티드의 실제적인 백분율은 핵산에 존재하는 뉴클레오티드의 전체 개수에 의존할 것이다. 상기 백분율 변형체(percent modification)는 핵산에 존재하는 뉴클레오티드 상기 2개의 핵산 분자들간의 상동성은 당업자에게 널리 알려진 측정법으로 결정될 수 있다. 보다 상세하게는, 서열 비교 알고리즘(sequence comparison algorithm)은 비교용 서열(reference sequence)과 관련된 시험용 서열(test sequence)에 대한 백분율 서열 동일성(percent sequence identity)을 계산하는 것이다. 상기 시험용 서열은 바람직하게는, 또 다른 핵산 분자에 대하여 상동성인지, 만약 그렇다면, 어느 정도까지 인지 여부를 시험되거나 시험될 서열 또는 핵산 분자이며, 상기 또 다른 핵산 분자는 또한 비교용 서열(reference sequence)이라고도 지칭된다. 하나의 구현예로서, 상기 비교용 서열은 본원에 개시된 바와 같은 핵산 분자, 보다 바람직하게는 서열번호 5 내지 224 중의 어느 하나, 보다 바람직하게는, 서열번호 : 22, 서열번호: 28, 서열번호: 120, 서열번호: 128, 서열번호: 129, 서열번호: 134, 서열번호: 135, 서열번호: 223, 서열번호: 224, 서열번호: 84, 서열번호: 146, 서열번호: 142, 서열번호: 143, 및 서열번호: 144. 중의 어느 하나에 따른 서열을 갖는 핵산 분자이다. 비교를 위한 서열의 최적의 정렬은 예를 들어, 스미스 및 워터맨 (Smith 및 Waterman, 1981)의 국부적 상동성 알고리즘법(local homology algorithm)에 의해, 니들맨 및 운츠 (Needleman 및 Wunsch, 1970)의 상동성 정렬 알고리즘법(homology alignment algorithm)에 의해, 피어슨 및 립맨 (Pearson 및 Lipman, 1988)의 유사 방법을 위한 조사에 의해, 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 실행법 (computerized implementations)(위스콘 제네틱 소프트웨어 패키지의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.) 또는 시각적 조사(visual inspection)에 의해서 수행될 수 있다.
백분율 서열 동일성(percent sequence identity)을 결정하기에 적합한 알고리즘의 하나의 예로서는 기본 국소 정렬 조사 도구 분석법(basic local alignment search tool; 이하 BLAST"이라 명명함)에 사용되는 알고리즘, 예를 들어, 알쯔슐 등의 문헌(Altschul et al. 1990 및 Altschul et al, 1997)에 개시된 알고리즘이다. BLAST 분석법을 수행하기 위한 소프트웨어는 내셔널 센터 포 바이오테크놀러지 인포메이션(National Center for biotechnology Information; 이하 NCBI이라 명명함)을 통하여 공중에서 입수 가능하다. NCBI에서 입수가능한 스포트웨어, 예들 들어, BLASTN(뉴클레오티드 서열용) 및 BLASTP(아미노산 서열용)를 이용하여 서열 동일성(sequence identity)을 결정하는데 사용되는 디폴트 함수(default parameters)는 맥기니스 등의 문헌(McGinnis et al, 2004)에 개시되어 있다.
또한 본 발명에 따른 핵산은 본원에서 개시되고 이의 뉴클레오티드 서열에 의하여 한정된 핵산과 관련하여 특정한 정도의 동일성(identity)을 갖는 한 핵산분자도 포함되어야 한다. 보다 구체적으로, 본 발명은 본원에서 개시되고 이의 뉴클레오티드 서열에 의하여 한정된 핵산과 관련하여 최소한 75%, 바람직하게는 85%, 보다 바람직하게는 90% 및 가장 바람직하게는 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 것도 포함하는 것이다.
본원에 기재된 용어 발명적 핵산(inventive nucleic acid) 또는 본 발명에 따른 핵산(nucleic acid according to the present invention)은 본원에 개시된 핵산 또는 이들의 일부를 포함하는 핵산들, 바람직하게는 상기 핵산 또는 상기 핵산의 일부들이 SDF-1의 결합과 관련되는 정도까지를 또한 포함하는 것이다. 상기 핵산은 예를 들어, 절단(truncation)과 같은 본원에서 개시된 것으로부터 유래될 수 있다. 절단은 본원에서 개시된 상기 핵산의 어느 한쪽 또는 양쪽 말단과 연관될 수 있다. 또한, 절단은 핵산의 뉴클레오티드 내 서열(inner sequence)과 관련될 수 있다, 즉, 5 및 3 말단 뉴클레오티드 사이의 뉴클레오티드(들)와 각각 관련될 수 있다. 게다가, 절단은 본원에서 개시된 핵산 서열로부터 최소한 하나의 뉴클레오티드의 결실(deletion)을 포함할 것이다. 절단은 발명적 핵산(들)의 하나 이상의 스트레치와 관련될 수 있으며, 여기에서 상기 스트레치는 최소한 하나의 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 본 발명에 따르는 핵산의 결합은 당업자들에게 통상적인 실험법, 또는 본원에 개시된, 바람직하게는 실시예 부분에 개시된 방법을 사용 또는 적용함으로서 측정될 수 있다.
본 발명에 따른 핵산은 D-핵산 또는 L-핵산일 수 있다. 바람직하게는, 상기 발명적 핵산은 L-핵산이다. 추가적으로, 상기 핵산의 하나 내지 여러 부분은 D-핵산형으로 존재 가능하며, 또는 상기 핵산의 하나 이상 내지 여러 부분은 L-핵산형이다. 상기 핵산의 일부(part)라는 용어는 최소한 1개 이상의 뉴클레오티드를 의미하는 것일 것이다. 이러한 핵산들은 일반적으로, 각각 D- 및 L-핵산으로 지칭된다. 따라서, 특히 바람직한 구현예로서, 본 발명에 따른 핵산들은 L-뉴클레오티드로 구성되고 최소 하나 이상의 D-뉴클레오티드를 포함한다. 이러한 D-뉴클레오티드는 바람직하게는 본 발명에 따른 핵산, 바람직하게는 이들의 일부를 한정하는 스트레치와는 별개의 다른 부분에 부착되는 것이며, 이 일부들은 핵산의 다른 부분과의 상호작용이 연관된 접촉의 부분을 의미한다. 바람직하게는, 이러한 D-뉴클레오티드는 각각 본 발명의 임의의 핵산 및 임의의 스트레치의 말단에 부착되는 것이다. 보다 바람직한 구현예로서, 상기의 D뉴클레오티드는 스페이서(spacer) 또는 링커(linker)로 작용될 수 있으며, 바람직하게는 본 발명에 따른 핵산에 PEG 또는 HES와 같은 변형체(modifications)를 부착할 수도 있다.
본원에서 그들의 핵산 서열로 온전히 그대로 개시된 개개 및 임의의 핵산(들)은 특정 뉴클레오티드 서열(들)에 한정되는 것도 또한 본 발명의 범위내이다. 환원하면, 용어 포함하는(comprising) 또는 포함하다 (comprise(s))는 이러한 구현예에서 함유하는(containing) 또는 구성하는 (consisting of)의 의미로서 해석되어야 할 것이다.
또한, 본 발명에 따른 핵산은 비교적 긴 핵산(longer nucleic acid)의 일부분이며, 상기 비교적 긴 핵산은 최소한 본 발명의 한 부분이 본 발명에 따른 핵산 또는 그 일부분인 여러 부분을 포함한다는 것도 본 발명의 범위 내이다. 이러한 비교적 긴 핵산의 다른 일부분은 D-핵산 또는 L-핵산 중 어느 것일 수 있다. 본 발명에서는 이들의 임의 조합이 사용될 수 있을 것이다. 이러한 비교적 긴 핵산의 다른 일부분은 단독 또는 상호 조합으로 전체로서 또는 특별한 조합으로서, 결합(binding), 바람직하게는 SDF-1과의 결합과는 다른 기능을 나타낼 수 있다. 하나의 가능한 기능은 다른 분자와의 상호작용(interaction), 예를 들어, 고정화(immobilization), 가교결합(cross-linking), 검출(detection) 또는 증폭(amplification)등과 같은 작용을 허용하는 것이고, 여기에서 상기 다른 분자들은 바람직하게는 SDF-1와 상이한 것이다. 본 발명의 추가의 구현예로서, 본 발명에 따른 핵산은 몇 개의 본 발명의 핵산을, 독립적 또는 조합된 부위로서 포함한다. 이와 같은 본 발명의 여러 가지 핵산을 포함하는 핵산은 비교적 긴 핵산의 용어로서 또한 포함한다.
본원에서 사용되는 L-핵산들은 L-뉴클레오티드, 바람직하게는 오로지 L-뉴클레오티드로만 구성된 핵산들이다.
본원에서 사용되는 D-핵산들은 D-뉴클레오티드, 바람직하게는 오로지 D-뉴클레오티드로만 구성된 핵산들이다.
본원에서 사용되는 용어 핵산(nucleic acid) 및 핵산 분자(nucleic acid molecule)는 역으로 명백하게 지시되지 않은 한, 호환가능한 방식으로 사용된다.
또한, 역으로 명백하게 지시되지 않은 한, 본원에서 기술된 임의의 뉴클레오티드 서열은 5 → 3 방향이다.
본원에서 바람직하게 사용되는 바와 같이, 뉴클레오티드의 임의의 위치는 서열(sequence), 스트레치(stretch) 또는 아스트레치(substretch)의 5’ 말단과 관련되어 결정되거나 참고화되는 것이다. 결론적으로, 제 2차 뉴클레오티드( second nucleotide)는 서열(sequence), 스트레치(stretch) 또는 아스트레치(substretch)의 5’ 말단으로부터 계산시에 각각 2번째 뉴클레오티드인 것이다. 또한, 이와 관련하여, 끝에서 두 번째의 뉴클레오티드(penultimate nucleotide)는 서열(sequence), 스트레치(stretch) 또는 아스트레치(substretch)의 3’ 말단으로부터 계산시에 각각 2번째 뉴클레오티드인 것이다.
본 발명의 발명적 핵산이 D-뉴클레오티드, L-뉴클레오티드 또는 상기 두 형태 뉴클레오티드의 조합, 예를 들어 하나 이상의 L-뉴클레오티드 및 하나 이상의 D-뉴클레오티드로 구성되는 무작위 조합(random combination) 또는 하나 이상의 L-뉴클레오티드 및 하나 이상의 D-뉴클레오티드로 구성되는 스트레치의 한정된 서열을 포함하는가 여부에 상관없이, 상기 핵산은 데스옥시리보뉴클레오티드(desoxy ribonucleotide(s)), 리보뉴클레오티드(ribonucleotide(s)) 또는 이들의 조합으로 구성될 수 있다.
L-핵산과 같은 본 발명의 발명적 핵산을 고안하는 것은 여러 가지 장점을 갖는다. L-핵산은 자연 발생적 핵산들의 거울상 이성질체이다. 그러나 D-핵산은 수용액상, 및 특히 핵산 분해 효소(nucleases)의 광범위한 분포에 기인하는 생체 조직(biological systems) 또는 생체 표본(biological samples)에서 매우 불안정하다. 자연 발생적 핵산 분해효소, 특히 동물 세포 유래 핵산 분해 효소는 L-핵산에 대한 분해 능력이 없다. 이와 같은 이유로 L-핵산의 생물학적 반감기(biological halflife)는 동물체 및 인체를 포함한 상기 조직에서 두드러지게 증가한다. L-핵산의 분해능 결핍으로 인해, 핵산 분해 효소의 분해산물이 발생되지 않으며, 상기 결과로 어떠한 부작용도 일어나지 않음을 관찰할 수 있다. 이러한 측면은 SDF-1 존재와 관련한 질환 및/또는 장애의 치료를 위해 사용되고 있는 사실상 모든 기타 화합물의 L-핵산으로 한정되지 않는 것이다. 특이적으로 왓슨와 크릭의 염기 결합과는 다른 기전을 통한 목표 분자와 결합을 하는 L-핵산 또는 L-뉴클레오티드로 일부 또는 온전히 구성되는 압타머(aptamer), 특히 상기 목표물질(target molecule)과 압타머와의 결합과 관련되는 압타머의 일부분을 갖는 압타머를 또한 스피에겔머(spiegelmer)이라고 지칭된다. 상기 압타머(aptamer) 및 스피에겔머(spiegelmer)는 당업자들에게 공지되어 있으며, 문헌에 개시된 내용이다(‘The Aptamer Handbook’, eds. Klussmann, 2006).
또한, 본 발명에 따른 핵산으로 또한 지칭되는 발명적 핵산은 그 핵산이 D-핵산, L-핵산 또는 D-, L-핵산으로 존재하는가 여부 또는 DNA 또는 RNA인가 여부와 상관없이 단일 가닥(single strand) 또는 이중 가닥(double strand) 핵산으로 존재할 수도 있는 것도 본 발명의 범주 내이다. 전형적으로, 본 발명의 발명적 핵산은 일차원 구조에 기인한 한정된 이차원 구조(defined secondary structure)를 나타내는 단일 가닥 핵산으로서, 삼차 구조(tertiary structure)를 또한 형성할 수도 있다. 그러나 본 발명의 발명적 핵산은 서로 상보적인 또는 서로 일부가 상보적인 이중 가닥이 서로 혼성화된다는 의미에서 이중 가닥도 또한 포함될 수도 있다.
본 발명의 발명적 핵산은 변형가능하다. 이러한 변형은 상기 핵산의 단일 뉴클레오티드와 관련될 수 있으며, 당업계에 잘 알려져 있다. 상기 변형의 예는 그 중에서도, 하기 문헌들, 즉, 벤카테산 외(Venkatesan, Kim et al, 2003) 및 커서(Kusser 2000)에 의해 서술되어 있다. 이러한 변형은 핵산을 구성하는 개별적인 뉴클레오티드의 2번 위치에서의 수소 원자, 불소 원자 혹은 O-CH3 그룹 또는 NH2 그룹이 될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 핵산은 하나 이상의 LNA 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 본 발명의 하나의 구현예로서, 본 발명에 따른 핵산은 LNA 뉴클레오티드로 구성된 것이다.
본 발명의 하나의 구현예로서, 본 발명에 따른 핵산은 다중 분할된 핵산(multipartite nucleic acid)일 수 있다. 본원에서 사용되는 다중 분할된 핵산(multipartite nucleic acid)은 두 개 이상의 핵산 가닥으로 구성된 핵산이다. 상기 두 개 이상의 핵산 가닥은 목표 분자에 대한 리간드 (ligand)로 작용하는 기능적 부위(functional unit)를 형성한다. 이 두 개 이상의 핵산 가닥은 본 발명의 임의의 핵산으로부터 핵산을 두 개의 가닥으로 분할시키는 방법 또는 본 발명 핵산의 첫 번째 부분에 상응하는 한 개의 핵산 합성, 즉 전체 핵산(overall nucleic acid) 및 전체 핵산의 두 번째 부분에 상응하는 다른 한 개의 핵산을 합성하는 합성 방법으로 유래될 수 있다. 상기 분할(cleavage) 및 합성(synthesis) 방법 모두는 상기에서 예시한 바로 2개 이상의 가닥을 갖는 다중 분할된 핵산을 제조함에도 적용될 수 있음도 알아야 한다. 환원하면, 2개 이상의 핵산 가닥은 비록 다양한 핵산의 일부분 사이에 어느 정도의 상보적 구역(complementarity)이 존재한다 할지라도 서로 상보성 및 혼성화를 갖는 이중 가닥과는 전형적으로 구별된다는 것이다.
마지막으로, 본 발명의 구현예에서, 온전히 닫힌, 예를 들어서 본 발명에 따른 핵산을 위한 원형 구조가 보여 진다, 예를 들어서 본 발명에 따른 핵산이 닫혀있으며, 바람직하게는 공유결합을 통해 닫혀있으며, 보다 더 바람직하게는 그와 같은 공유결합은 본원에 기재된 바와 같이 핵산 서열을 5 말단 및 3 말단 사이에 만들어진다는 점도 본 발명의 범위 내이다.
본 발명에 따른 핵산 분자의 결합상수(binding constants)를 결정할 가능성은 본 발명의 핵산이 유익한 KD 수치 범위를 발휘함을 확인한 하기 실시예 3 및 4에서 개시된 방법을 사용하는 것이다. 개별 핵산 분자 및 본 발명인 경우는 SDF-1인 목표 간의 결합 강도(intensity of the binding)를 표현하기 위한 적절한 방법은 당업계에 잘 알려진 측정 방법과 같은 소위 Kd치(Kd value)이다.
본 발명에 따른 핵산은 특정한 Kd치에 의해 특징화 될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 핵산의 Kd치는 1μM 이하이다. 약 1μM 정도의 Kd치는 목표 분자에 대한 핵산의 비특이적 결합(nonspecific binding)으로 특정된다고 간주 된다. 당업자에게 인지된 것인 바와 같이, 본 발명에 따른 핵산과 같은 화합물군의 Kd치가 일정 범위 내에 존재함은 인지될 것이다. 상기한 약 1 μM 정도의 Kd치는 Kd치의 바람직한 상한치에 해당한다. 바람직한 목표 물질 결합 핵산의 Kd치 하한선은 약 10 pM(picomolar) 또는 그 이상일 수 있다. 본 발명에서 SDF-1과 결합하는 개별적인 핵산의 Kd치는 바람직하게 이 범위 내에 속함도 본 발명의 범주 내이다. 바람직하게는 이 범주 내의 임의의 첫 번째 숫자로 및 이 범주 내의 임의의 두 번째 숫자를 선택함으로서 바람직한 범위가 정의될 수 있다. 바람직한 상위 값은 250 nM 및 100 nM이며, 바람직한 하위 값은 50 nM, 10 nM, 1 nM, 100 pM 및 10 pM이며, 보다 바람직한 Kd치 상한선 2.5 nM이며, 보다 더 바람직한 Kd치 하한선 100pM이다.
본 발명에 따른 핵산 분자의 결합특성에 추가하여, 본 발명에 따른 핵산 분자는 본원에서는 SDF-1인 개개 목표 분자(target molecule)의 기능을 저해한다. SDF-1의 기능 저해(예를 들어, 상술한 바와 같은 개개 수용체들의 자극)는 본 발명에 따른 핵산 분자의 SDF-1에 대한 결합 및 본 발명에 따른 핵산 분자의 복합체(complex) 형성 및 MCP-1 및 SDF-1 형성으로 달성된다. 상기한 핵산 분자 및 SDF-1와의 복합체는 통상적으로는 SDF-1에 의하여 자극되는 수용체를 자극할 수 없다. 결국, 본 발명에 따른 핵산 분자에 의한 수용체 기능의 저해는 SDF-1에 의해서는 자극되나 본 발명에 따른 핵산 분자에 의한 MCP-1 및 SDF-1에 의하여 수용체 자극을 차단함으로서 자극하는 개개 수용체와는 독립적이다.
본 발명에 따른 핵산 분자의 저해상수(inhibitory constants)를 결정할 가능성은 본 발명의 핵산이 치료적 치료 스킴(therapeutic treatment scheme)상에서 상기 핵산의 용도를 허용하는 유익한 저해상수를 발휘함을 확인한 하기 실시예 5 및 6 (각각 CXCR4 및 CXCR7에 대하여)에서 개시된 방법을 사용하는 것이다. 개별 핵산 분자의 본 발명인 경우는 SDF-1인 목표 에 대한 저해효과의 강도를 표현하기 위한 적절한 방법은 당업계에 잘 알려진 측정 방법과 같은 소위 반 최대치 저해 농도(IC50)이다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 핵산의 IC50 수치는 1 μM 이하이다. 약 1 μM 정도의 IC50 수치는 목표 분자에 대한 핵산의 비특이적 저해(nonspecific inhibition)으로 특정된다고 간주 된다. 당업자에게 인지된 것인 바와 같이, 본 발명에 따른 핵산과 같은 화합물군의 IC50 수치가 일정 범위 내에 존재함은 인지될 것이다. 상기한 약 1 μM 정도의 IC50 수치는 IC50 수치의 바람직한 상한치에 해당한다. 바람직한 목표 물질 결합 핵산의 IC50 수치 하한선은 약 10 pM(picomolar) 또는 그 이상일 수 있다. 본 발명에서 SDF-1과 결합하는 개별적인 핵산의 IC50 수치는 바람직하게 이 범위 내에 속함도 본 발명의 범주 내이다. 바람직하게는 이 범주 내의 임의의 첫 번째 숫자로 및 이 범주 내의 임의의 두 번째 숫자를 선택함으로서 바람직한 범위가 정의될 수 있다. 바람직한 IC50 수치의 상위 값은 250 nM 및 100 nM이며, 바람직한 하위 값은 50 nM, 10 nM, 1 nM, 100 pM 및 10 pM이며, 보다 바람직한 IC50 수치의 상한선 2.5 nM이며, 보다 더 바람직한 IC50 수치 하한선 100pM이다.
본 발명에 따른 핵산 분자는 목표 분자에 여전히 결합할 수 있는 어떠한 제공된 길이를 가질 수 있다. 본 발명에 따르는 핵산의 바람직한 길이가 있다는 것은 당업계에 자명한 사실이다. 일반적으로, 길이는 15 내지 120 뉴클레오티드 사이이다. 본 발명에 따르는 핵산을 위한 길이가 15 내지 120 사이의 어떠한 정수가 가능하다는 것은 당업자에게 자명한 사실이다. 본 발명에 따르는 핵산의 길이를 위한 보다 더 바람직한 범위는 약 20 내지 100 뉴클레오티드, 약 20 내지 80 뉴클레오티드, 약 20 내지 60 뉴클레오티드, 약 20 내지 50 뉴클레오티드 및 약 20 내지 40 뉴클레오티드이다.
본원에서 개시된 본 발명의 핵산은 바람직하게는 높은 분자량 기 및/또는 동물 신체, 바람직하게는 인체 내에서 그들 중에 체류 시간을 통한 핵산 특성을 변형시키는 기를 포함함도 본 발명의 범주 내이다. 상기 변형의 특정 바람직한 구현예는 본 발명에 따른 PEG화 반응(PEGylation) 및 HES화 반응(HESylation)이다. 본원에서 사용되는 PEG는 폴리(에틸렌 글라이콜)(poly(ethylene glycol))의 약어이고, HES는 히드록시에틸 전분(hydroxyethyl starch)의 약자로 사용된다. 본원에서 바람직하게 사용되는 PEG화 반응은 본 발명에 따른 핵산에 부착되어 있는 PEG기로 구성되는 변형과 같은 핵산의 변형이다. 본원에서 바람직하게 사용되는 HES화 반응은 본 발명에 따른 핵산에 부착되어 있는 HES기로 구성되는 변형과 같은 핵산의 변형이다. 상기 변형체뿐만 아니라 상기 변형법을 이용하여 핵산을 변형하는 제조방법은 유럽특허출원 EP 1 306 382호에 개시되어 있으며, 이 문헌의 개시내용은 본원에서 참고로서 그 전체를 인용하는 것이다.
바람직하게는, 높은 분자량 부위를 함유하거나 구성하고 있는 상기 변형체의 분자량은 구체적으로 매우 높은 분자량 부위인 PEG의 경우에는, 약 2,000 내지 120,000 Da이며, 바람직하게는 약 30,000 내지 80,000 Da이며,가장 바람직하게는 약 40,000 Da인 것이다. 구체적으로 매우 높은 분자량 기인 HES의 경우에는 바람직하게는 약 50 내지 1000 kDa, 보다 더 바람직하게는 100 내지 700 kDa이며, 가장 바람직하게는, 200 내지 500 kDa인 것이다. HES는 0.1 내지 1.5 범위, 바람직하게는 1 내지 1.5 범위의 몰 치환율(molar substitution)을 나타내고, 약 0.1 내지 15 범위, 바람직하게는 3 내지 10 범위의 C2/C6 비(ratio)로 표현되는 치환 시료(substitution sample)를 나타내는 것이다. 이러한 HES 변형의 제조방법은 독일특허출원 제 DE 1 2004 006 249.8호에 개시되어 있으며, 이 문헌의 개시내용은 본원에서 참고로서 그 전체를 인용하는 것이다.
원칙적으로, 본 발명의 핵산 분자의 어떠한 위치에서 만들어질 수 있다. 바람직하게, 그와 같은 변형은 5'-말단 뉴클레오티드, 3'-말단 뉴클레오티드 및/또는 핵산 분자의 5'-뉴클레오티드와 3'-뉴클레오티드 사이의 어떠한 뉴클레오티드 중 어느 하나에 만들어진다.
상기 변형 및 바람직하게는, 상기 PEG 및/또는 HES기는 본 발명의 핵산 분자와 직접 또는 간접적으로, 바람직하게는 링커(linker)를 통하여 부착되는 것이다. 또한 본 발명에 따르는 핵산 분자가 하나 또는 그 이상의 변형체, 바람직하게는 하나 또는 그 이상의 PEG 및/또는 HES기를 포함함은 본 발명의 범주 내이다. 본 발명의 구현예로서, 상기 독립적인 링커 분자(linker molecule)는 본 발명에 따르는 핵산에 하나 이상의 PEG기 또는 HES기를 부착한다. 본 발명과 관련되어 사용된 링커는 그 자체로 쇄상 또는 가지상이 될 수 있다. 이와 같은 링커는 당업자에게 널리 알려져 있으며, 더 나아가 특허출원 WO2005/074993 및 WO2003/035665에 서술되어 있다.
본 발명의 바람직한 구현예로서, 상기 링커는 생분해성 링커(biodegradable linker)이다. 상기 생분해성 링커는 본 발명의 핵산 특성을 다른 특성 중에 동물 신체, 바람직하게는 인간 신체에서 본 발명의 핵산으로부터 상기 변형체가 유리되도록 함으로서, 체류 시간에 관한 특성이 변형하도록 한다. 생분해성 링커의 사용은 본 발명의 핵산의 체류 시간의 보다 나은 조절을 가능하게 할 수 있을 것이다. 이러한 바람직한 상기 생분해성 링커로는 이에 제한되지는 않으나, 국제특허 출원 WO2006/052790, WO2008/034122, WO2004/092191, WO2005/099768, WO2004/092191 및 WO2005/099768 들에 개시된 바와 같은 생분해성 링커들이다.
상기 변형체는 생분해성 변형체이고, 여기에서 상기 생분해성 변형체는 본 발명의 핵산에 링커와 직접 또는 이를 통하여 부착가능함도 본 발명의 범위 내이다. 상기 생분해성 변형체는 본 발명의 핵산 특성을 다른 특성 중에 동물 신체, 바람직하게는 인간 신체에서 본 발명의 핵산으로부터 상기 변형체가 유리되도록 함으로서, 체류 시간에 관한 특성이 변형하도록 한다. 생분해성 변형체의 사용은 본 발명의 핵산의 체류 시간의 보다 나은 조절을 가능하게 할 수 있을 것이다. 이러한 바람직한 상기 생분해성 변형체의 바람직한 구현예로는 이에 제한되지는 않으나, 국제특허 출원 WO2002/065963, WO2003/070823, WO2004/113394 및 WO2000/41647, 바람직하게는 WO2000/41647 18 페이지, 4 내지 24줄들에 개시된 바와 같은 생분해성 변형체들이다.
상술한 바와 같은 변형체이외에도, 본 발명의 핵산의 특성을 변형하는데 다른 변형체도 사용가능하다. 여기에서 상기 다른 변형체는 단백질(proteins), 콜레스테롤(cholesterol)과 같은 지질(lipid) 아밀라제(Amylase), 덱스트란(dextran) 등과 같은 당사슬(sugar chains)로부터 선택가능하다.
어떠한 이론에 국한되지 않은 범위 내에서, 중합체(polymer)와 같은 고분자량 기, 더욱 상세하게는, 본원에 개시된, 바람직하게는 생리학적으로 수용이 가능한 중합체를 갖는 본 발명에 따른 핵산을 변형시킴에 따라 배출 역학(excretion kinetic)은 변화될 것이다. 더욱 상세하게는, 이러한 변형된 발명적 핵산의 증가된 분자량 및 핵산, 특히 L형인 경우에 대사과정의 대상이 되지 않는 핵산으로 기인하는 경우에 동물세포, 바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간으로부터의 배출은 감소 된다. 상기 배출은 신장을 통해 전형적으로 일어나므로, 본원 발명자들은 상기 변형된 핵산의 사구체의 여과속도가 이와 같은 높은 분자량의 변형을 거치지 않아 결과적으로 생체 내의 체류시간이 증가 되는 이러한 고분자량의 변형체를 갖지 않은 핵산과 비교시에 현저하게 감소 된다. 이와 연관지어, 본 발명에 따른 핵산의 특성이 상기와 같은 높은 분자량 변형에도 불구하고 불리한 영향을 받지 않음은 매우 두드러진 사실이다. 지금까지, 본 발명에 따른 핵산은 정상인 경우는 약학 활성 성분으로부터 기대할 수 없는 예를 들어 지체된 방출을 제공하기 위해 지체된 방출속도(sustained release)를 제공하는 약학적 제형이 필수적이지는 않다는 것과 같은 놀라운 특성을 갖는다. 오히려 높은 분자량 부위를 함유하고 있는 변형된 본 발명에 따른 핵산은 서방형(sustained release formulation)으로서 즉시 사용가능하다. 지금까지, 본원에 기재된 핵산의 변형체(들) 및 이리하여 변형된 핵산 분자 및 이를 포함하는 어떠한 조성물은 명확한, 바람직하게는 조절된 약물동력(pharmacokinetics) 및 그들의 생물분소(biodistribution). 이는 또한 조직으로의 순환(circulation) 및 분산(distribution)의 잔류시간(residence time)을 포함한다. 이와 같은 변형체는 특허출원 WO2003/035665에 서술되어 있다.
상기 구현예는 특히 본원에서 개시된 핵산이 신체상의 임의 기관 또는 조직에 선호적인 분산(preferential distribution)을 나타내거나 또는 본원에서 개시된 핵산이 투여후에 신속하게 배출되는 것이 바람직하다. 신체상의 임의 기관 또는 조직에 선호적인 분산양상을 나타내는 본원에서 개시된 핵산은 핵산 분자의 전신적 농도를 낮게 유지하면서 목표 조직에서 국소적으로 효과적인 농도를 나타내는 것이다, 이는 경제적인 관점에서 뿐만 아니라, 핵산 분자 치료제에 대한 다른 조직의 불필요한 노출을 감소시킴으로서, 부작용 위험성을 경감시키는 낮은 농도를 가능하게 할 것이다. 본원에서 개시된 핵산의 투여후에 신속한 배출은 이와 같은 빠른 제거율은 본 발명의 따른 핵산 또는 이를 포함하는 약제를 사용하는 생체 내 실험 이미징(imaging) 또는 특이적 치료적 투약 요건(specific therapeutic dosing requirements)의 경우에서 바람직하다.
본 발명에 따른 핵산 및/또는 본 발명에 따른 길항제(antagonists)는 약제(medicament)의 생성 또는 제조에 사용가능하다.
상기 약제는 SDF-1 결합 핵산 그룹으로부터 선택된 적어도 하나 이상의 발명적 핵산, 임의적으로 추가의 약학적 활성 화합물을 포함할 수 있으며, 여기에서 상기 본 발명에 따른 핵산은 바람직하게는 핵산 그 자체가 약학적 활성 화합물로서 작용하는 것이다. 바람직한 구현예로서, 본 발명에 따른 상기 약제 및 약학 조성물(pharmaceutical composition)은 적어도 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체(carrier)를 포함할 수 있다. 상기 담체로는 예를 들어, 물, 완충액, PBS, 글루코스 수용액, 바람직하게는 5% 포도당 염 조절 수용액, 전분, 당, 젤라틴 또는 기타 임의의 허용되는 담체 물질 등을 들 수 있다. 상기 담체들은 일반적으로 당업계에 널리 알려져 있다. 당업자에게 있어, 본 발명의 임의의 구현예, 사용 및 측면들 또는 약제는 또한 본 발명의 약학 조성물에게도 적용가능하고 그 반대(vice versa)도 인지 가능할 것이다.
치료 및/또는 예방을 위한 적응증(indication), 질환(disease) 및 장애(disorders)의 본 발명과 관련되거나 또는 관련되어 제조된 핵산, 약학조성물 및 약제는 직접적 또는 간접적 중 하나와 각개의 병원성 기전과 관련된 SDF-1로부터 발생한다.
물론, 상기 본 발명에 따른 SDF-1 결합 핵산은 인간 또는 설치류 SDF-1과 상호작용을 하므로, 당업자는 본 발명에 따른 SDF-1 결합 핵산은 인간 및 동물의 본원에서 개시된 바와 같은 임의의 질환의 치료, 예방 및/또는 진단을 위하여 용이하게 사용가능하다. 이와 관련하여, 본 발명에 따른 핵산은 상기 질병, 장애 및 증상의 병리기전과 무관하게 본원에서 개시된 바와 같은 임의의 질병, 장애 또는 증상의 치료, 및 예방에 사용가능하다.
하기에 다양한 질환, 장애 및 상태와 관련하여 본 발명에 따른 핵산 분자의 사용을 위한 방향을 제공하므로, 타당한 본 발명에 따른 핵산 분자의 청구된 치료학적 (therapeutic), 예방적인 (preventive) 및 진단적인 (diagnostic) 적용가능성을 제공한다. 임의의 불필요한 반복을 회피하기 위하여 관련된 방법과 같은 SDF-1 SDF-1 수용체 축 (receptor axis)의 관련성에 기인하여, 상기 축(axis)은 청구된 치료학적 (therapeutic), 예방적인 (preventive) 및 진단적인 (diagnostic) 효과가 달성되도록 본 발명에 따른 핵산 분자에 의하여 위치지정이 될 수 있음도 인지되어야 할 것이다. 게다가, 환자들의 질환(diseases), 장애(disorders) 및 상태(conditions)의 자세한 사항, 및 이와 관련되어 개시된 치료 처방방법의 모든 구체적인 사항은 본원의 바람직한 구현예들로 구현될 수 있을 것이다.
특히 혈액성 악성 종양 (haematological malignancies)의 경우에, 백혈병 세포 (leukemia cells)가 니취 (niches)라고도 지칭되는 특정한 조직 미세환경 (microenvironments) 내에서 고전적 치료법{특정 항체 또는 키나제 저해제(kinase inhibitors)와 같은 다양한 목표화 약물(targeted agents)과 조합한 화학요법제}으로 보호가능하다는 상당한 근거가 있다. 이러한 니취는 종양 세포를 품을 수 있어 초기 치료법 후에 확산 및 재발시킬 수 있는 골수에서 특히 발견된다. (Burger and Kipps, 2002; Burger and Burkle, 2007; Meads et al., 2008; Burger, Ghia et al., 2009). 화학요법중 이러한 악성 종양 세포는 악성 세포(malignant cells) 및 기질세포 (stromal cells) 사이의 직접적 접촉에 기인한 것으로 사료된다 (Lagneaux, Delforge et al. 1998; Kurtova, Balakrishnan et al., 2009; Damiano, Cress et al., 1999). 그러나, 이러한 미세환경의 복잡성에서, 악성 종양 세포가 화학요법제에 대하여 내성(resistance)을 초래할 수 있는 다중의 세포적(cellular) 및 분자적(molecular) 신호가 있다. 이러한 복잡성에도 불구하고, 기질세포가 케모카인(chemokine) SDF-1 을 생산하고 CXCR4를 발현하는 정상 및 악성 세포 모두가 이러한 니취로 이동하고 니취에 보관된다는 것이 명백하다. 이러한 분자적 경로가 이러한 상호작용에 대하여 중요한 열쇠라는 것은 이러한 상호작용의 특이적 저해가 정상 및 악성 세포 모두가 니취로부터 분비되기에 충분하다는 증거에 의하여 입증되었다. (Broxmeyer, Orschell et al., 2005; Devine, Flomenberg et al., 2004; Azab, Runnels et al., 2009). 상기 니취와의 상호작용의 감소화에 더하여, SDF-1 CXCR4 축의 파괴가 ‘화학요법제 민감성 증진화(chemosensitization)’라고도 지칭되는 기타 치료법에 대하여 상기 세포의 감수성을 증대시키는 결과를 초래함이 다수의 혈액성 종양에서 확인되었다. 이러한 화학요법제 민감성 증진화가 다발성골수종 (multiple myeloma) (Azab, Runnels et al., 2009) 및 다양한 급성 및 만성 백혈병(Dillmann, Veldwijk et al., 2009; Lagneaux, Delforge et al. 1998)에 대해서도 개시된 바가 있다.
따라서, 악성세포들간의 교차 교통(cross talk)을 차단시키는 본 발명의 SDF-1 결합 핵산의 사용 및 다른 치료법에 대하여 민감성 증진화시키는 이들의 환경조성은 혈액성 종양 치료에 대한 매력적인 전략일 수 있다. 본 발명의 SDF-1 결합 핵산과의 조합으로 증강될 수 있는 치료법의 예로는 이네 제한되지는 않으나, 플루다라빈(Fludarabine), 시클로포스파미드(Cyclophosphamide), 리툭산(Rituxan), 클로람부실(Chlorambucil), 레날리도미드 (Lenalidomide), 보르테조밉(Bortezomib), 덱사메타손(Dexamethasone), 멜팔란(Melphalan), 이마티닙(Imatinib) 또는 닐로티닙(Nilotinib)을 포함한다.
상술한 내용에서 혈액암에 대한 화학요법제 또는 기타 목표화 치료법의 항암 효과에 대한 악성종양세포의 보호 면에서, 골수 기질세포 (bone marrow stromal cells) 및 골수 니취 (bone marrow niches)의 역할을 강조하였다. 그러나, 고형암에서 큰 비율을 차지하는 고형암 내에서 발생하는 유사한 상호작용이 암세포가 아니라, 종양세포와 직접적으로 상호작용하는 숙주로부터 유래된 기질(stromal), 면역(immune) 또는 혈관세포(vascular cells)임이 입증되었다. 다수의 상이한 고형암들이 본질적 또는 저산소증(hypoxia) 또는 다양한 치료법에 대한 반응으로서 CXCR4 수용체 (Engl, Relja et al., 2006; M, Homey et al., 2001; Koshiba, Hosotani et al., 2000, Ehtesham, Stevenson, et al., 2008; Zeelenberg, Ruuls-Van Stalle et al., 2003; Sauer, Seidler et al., 2005; Su, Zhang et al., 2005) 및/또는 CXCR7 (Burns, Summers et al. 2006; Miao et al., 2007; Wang et al., 2008; Zheng, Li et al., 2010) 수용체를 발현한다. 악성 세포는 Akt 및 Erk 활성화에 의하여 생존 및 이주를 위한 이러한 신호 경로를 사용할 수 있다. SDF-1 는 종양 내에서 악성 세포 자체 또는 기질 세포에 의하여 생간 가능하다. 이러한 복잡한 환경에서 다시 한번, 종양 세포가 성장하고 화학요법제 또는 기타 치료학적 접근법으로부터 회피하는 종양세포의 정확한 기전은 아직 명확하게 밝혀지지 않았다. 그러나, SDF-1 CXCR4 축 및 SDF-1 CXCR7 축이 중요한 역할을 수행함은 명백하다. 예를 들어, CXCR4 저해는 시험관내 화학요법제(in vitro chemotherapy)에 대하여 신경교종 세포주를 민감성 증진화시키고 (Redjal et al., 2006) CXCR4 의 높은 발현은 유방암 (Holm, Abreo et al., 2008; Mizell, Smith et al., 2009) 및 위장관 암(gastro-intestinal cancers)(Schimanski et al., 2008)에서 낮은 보호효과를 나타낸다. 따라서, 다양한 고형암에서 CXCR4 또는 CXCR7 수용체에 대한 SDF-1 작용을 저해하기 위한 본 발명에 따른 SDF-1 결합 핵산의 사용은 상기 세포들을 종양세포에서 직접적 작용 또는 다른 세포들과의 상호작용의 봉쇄를 통하여 치료법에 대하여 보다 취약하게 함으로서 치료효과를 증가시킬 것이다.
상기한 측면에 추가하여, CXCR4도 혈관신생 유발성 (pro-angiogenic) 및 면역억제성(immunosuppressive) 골수 유래 세포(bone marrow-derived cells, BMDCs)의 순항 및 보유에 결정적인 것으로 여겨지는 신호를 전달한다. 따라서, 이러한 경로도 VEGF-의존성(independent) 신생혈관형성증(angiogenesis)에 사용된다. 결론적으로, 항-VEGF 치료법 또는 방사선 요법에 대하여 종양세포를 민감성 증진화하기 위한 SDF1-CXCR4 축의 차단은 고형암 치료법에 대한 매력적인 전략으로 대두되고 있다.
그러나, CXCR4 차단이 SDF-1의 효과를 차단하는데 적절하지 못하여, CXCR7가 암 또는 기질세포에 결합할 수도 있는 과제도 있다. 예를 들어, CXCR7 은 뇌 종양세포에서 발현되어 항-세포사멸 효과(anti-apoptotic effects)를 매개하고 , 인간 간세포암종 (hepatocellular carcinomas)의 침입, 신생혈관형성증(angiogenesis) 및 종양 성장을 조절하는 것으로 보고되었다. 이러한 경우에, 단일 약물로 CXCR7 및 CXCR4 수용체 모두에 대하여 SDF-1의 작용을 차단하기 위한 SDF-1 결합 핵산의 작용은 특정한 수용체 차단제(receptor blocker)와 비교시에 특정한 효력을 제공할 것이다.
본 발명에 따른 약제는 추가적 약제(further medicament) 또는 추가적 약학 활성화제(further pharmaceutically active agent)와 조합하여 사용가능하며, 여기에서 상기 추가적 약제 또는 추가적 약학 활성화제는 암세포를 손상시키고, 파괴하고/하거나 표지화한다(label). 만일 본 발명의 핵산 분자가 추가적 약제 또는 추가적 약학 활성화제와 사용시에, 상기 핵산 분자에 기초한 상기 치료법은 바람직하게는, 상기 추가적 약제 또는 추가적 약학 활성화제를 이용 또는 기초로 한 치료법에 대한 부수적 치료법인 것이다. 상기 추가적 약제 또는 추가적 약학 활성화제는 바람직하게는, 이에 제한되는 않으나, 하기를 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다:
(a) 리툭시맙(Rituximab, 목표: CD20), 세툭시맙(Cetuximab, 목표: 내피 성장인자 수용체 epidermal growth factor receptor), 이브리투모맙-티욱세탄(Ibritumomab-Tiuxetan, 목표: CD20), 토시투모맙 (Tositumomab, 목표: CD20), 트라투주맙 (Trastuzumab, 목표: HER2/neu), 베바시주맙(Bevacizumab, 목표: VEGF), 알렘투주맙(Alemtuzumab, 목표: CD52)과 같은 항체(antibodies);
(b) 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 메클로레타민(mechlorethamine), 시클로포스파미드(cyclophosphamide), 클로람부실(chlorambucil), 독소루비신(Doxorubicin), 리포좀 독소루비신(liposomal Doxorubicin), 벤다무스틴 (bendamustine), 멜팔란(Melphalan);, 테모졸로미드(temozolomide)과 같은 알킬화제(alkylating agents);
(c) 퓨린아자티오프린(purineazathioprine), 머캅토퓨린(mercaptopurine), 플루다라빈(fludarabine), 펜토스타틴(pentostatin), 클라드리빈(cladribine)과 같은 항-대사체(anti-metabolites);
(d) 빈카 알칼로이드(vinca alkaloids)와 같은 식물 알칼로이드 (plant alkaloids), 탁산류(taxanes)와 같은 식물 테르페노이드(plant terpenoids), 바람직하게는 도세탁셀(Docetaxel), 파클리탁셀(Paclitaxel), 포도필로톡신(podophyllotoxin), 에포틸론(epothilone);
(e) 캠프토테신(camptothecins), 이리노테칸(irinitecan), 미토잔트론(mitoxantrone)과 같은 토포이소머라제 저해제(topoisomerase inhibitors);
(f) 및 류코보린(Leucovorin), 메토트렉세이트(Methotrexate), 타목시펜(Tamoxifen), 소라페닙(Sorafenib), 레날리도미드(Lenalidomide), 보르테조밉(Bortezomib), 덱사메타존(Dexamethasone), 플루오로우라실(Flurouracil) 및 프레드니손(Prendnisone)과 같은 기타 약물.
암치료에서 추가적 약학 활성화제로 사용가능한 기타 약물은 당업계에 잘 알려져 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 면역억제제 약물(immunsuppressive drugs), 시토킨(cytokines) 및 세포 억제제(cytostatic drugs; 참고: "Allgemeine und Spezielle Pharmakologie und Toxikologie 2011", editor: Thomas Karow Pulheim, Germany)을 포함한다. 이러한 당업계에 잘 알려진 약물들은 특정 암 환자에 대한 현행 치료 기준에 따른 암치료법으로서 사용되고 있다.
상기 특정한 추가적 약학 활성화제는 이러한 추가적 약학 활성화제를 이용한 본 발명의 임의의 측면과 관련하여 사용가능함도 인식되어야 할 것이다.
상기 추가적 약제 또는 약학 활성화제는 화학요법제의 기능을 갖거나 제공할 수 있다. 화학요법제, 방사성 치료법에 호환적으로 또는 추가적으로 사용가능하다.
본 발명에 따른 약제는 상기 추가적 약제 또는 약학 활성화제와의 조합, 방사성 치료법과의 조합 또는 단독으로 암, 바람직하게는 하기 질환의 치료 및/또는 예방에 사용가능하다:
(a) 혈액암, 보다 바람직하게는, 상기 혈액암은 백혈병(leukemia) 및 골수종(myeloma)으로 구성된 군으로부터 선택되며;
(b) 고형암, 보다 바람직하게는, 상기 고형암은 교모세포종 (glioblastomas), 대장암(colorectal cancer), 유방 암(breast cancer), 림프종(lymphoma), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer), 폐암 (lung cancer), 신장암(renal cancer), 및 난소암(ovarian cancer)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 상기 유방암은 후기(advanced) HER2-음성(negative) 유방암으로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 상기 백혈병은 급성 림프구 백혈병(chronic lymphoid leukemia) 및 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 상기 골수종은 다발성 골수종(multiple myeloma)으로 구성된 군으로부터 선택된다.
교모세포종 (glioblastomas) 치료를 위한 바람직한 추가적 약제 또는 추가적 약학 활성화제는 방사선 치료법(radiotherapy) 또는 테모졸로미드(temozolomide) 또는 베바시주맙(bevacizumab)와 조합한 화합요법제(chemotherapy)이다. 대장암(colorectal cancer) 치료를 위한 바람직한 추가적 약제 또는 추가적 약학 활성화제는 플루오로우라실(fluorouracil), 류코보린(Leucovorin), 옥살리플라틴(Oxaliplatin), 이리노테칸(Irinotecan) 및 베바시주맙(bevacizumab)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
후기(advanced) HER2-음성(negative) 유방암 치료를 위한 바람직한 추가적 약제 또는 추가적 약학 활성화제는 독소루비신(Doxorubicin), 파클리탁셀(Paclitaxel), 도세탁셀(Docetaxel), 메토트렉세이트(Methotrexate), 플루오로우라실(Fluorouracil), 베바시주맙(Bevacizumab), 타목시펜(Tamoxifen), 및 아로마타제 저해제(aromatase inhibitors)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
만성 림프구 백혈병(chronic lymphoid leukemia) 치료를 위한 바람직한 추가적 약제 또는 추가적 약학 활성화제는 플루다라빈(fludarabine), 시클로포스파미드(cyclophosphamide), 리툭시맙(rituximab), 클로람부실(Chlorambucil), 알렘투주맙(alemtuzumab), 빈크리스틴(vincristine), 펜토스타틴(pentostatin), 미토잔트론(mitoxantrone), 독소루비신(doxorubicin), 클라드리빈(cladribine), 및 벤다무스틴(bendamustine)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
다발성 골수종(multiple myeloma) 치료를 위한 바람직한 추가적 약제 또는 추가적 약학 활성화제는 레날리도미드(Lenalidomide), 보르테조밉(Bortezomib), 덱사메타존(Dexamethasone), 멜팔란(Melphalan), 시클로포스파미드(Cyclophosphamide), 리포조멀 독소루비신(liposomal doxorubicin), 및 프레드니손(prednisone)을 포함하는 군으로부터 선택되는 것이다.
본 발명의 약제의 하나의 구현예로서, 상기 약제는 본원에서 개시된 임의의 질병, 특히, 상기 약제가 사용되어야 할 질병에 대한 다른 치료법에 사용되는 것이다.
조합 치료법(combination therapy)(또는 공동-치료법 (co-therapy))은 본 발명의 약제 투여 및 이러한 치료제를 공동-작용 (co-action)함으로서 유리한 효과를 제공하기 위한 특정 치료 처방 (specific treatment regimen)의 부분으로서 최소한 2차 작용제를 포함, 즉, 본 발명의 약제 및 상기 2차 작용제와의 조합 투여를 포함한다. 상기 조합의 유리한 효과는, 이에 제한되지는 않으나, 치료제들의 조합으로 초래되는 약물동력학적(pharmacokinetic) 또는 약물역학적(pharma codynamic) 공동-작용을 포함한다. 이러한 치료제들의 조합 투여는 전형적으로 한정된 일정 기간(선택된 조합에 따라 보통 분, 시간, 일 또는 주 단위)이상 수행된다.
일반적이지는 않으나, 조합 치료(combination therapy)는 본 발명의 조합을 우발적 및 자발적으로 초래하는 분리된 단독요법 처방의 일부분으로서 2개 이상의 이러한 치료제 조합 투여를 포함하는 의도일 수 있다.
조합 치료는 상기 치료제 투여를 연속적인 순서, 즉 상기 이러한 치료제들의 투여뿐만 아니라 개개 치료제를 상이한 시각에 투여하거나 또는 2개 이상의 치료제들을 실질적 동시 투여방법(substantially simultaneously manner)을 포함할 의도이다. 이러한 실질적 동시 투여 방법은 예를 들어, 고정된 비를 갖는 개개 치료제를 함유한 단일 캡슐 또는 개개 치료제의 다중, 단일 캡슐을 투여객체에 투여함으로써 달성가능하다.
각 치료제의 연속적 또는 실질적 동시 투여방법은 이에 제한되지는 않으나, 국소투여 경로(topocal routes), 경구투여 경로(oral routes), 정맥내투여경로 (intraveneous routes), 근육내 투여 경로(intramuscular routes) 및 점막 조직을 통한 직접 흡수(direct absorption) 경로를 포함하는, 임의의 모든 적절한 경로로 영향을 미칠 수 있다. 상기 치료제들은 동일한 경로 또는 서로 상이한 경로로 투여될 수 있다. 예를 들어, 선택된 조합의 첫 번째 치료제는 주사를 통해 투여되면서, 조합의 또 다른 치료 작용제는 국소적으로 투여될 수도 있다.
호환적으로, 예를 들어, 모든 치료제들은 국소적으로 투여될 수도 있거나 또는 모든 치료제들을 주사로 투여할 수도 있다. 투여되는 치료제의 순서는 별도로 지적하지 않은 한은 엄밀하게 중요하지 않다. 또한 조합 치료는 다른 생물학적 활성 성분들과 추가적인 상기한 치료제와의 조합 투여를 포함할 수도 있다. 상기 조합 치료가 추가적으로 비-약물 치료법(non-drug treatment)을 포함하는 경우는 상기 비-약물 치료법은 상기 치료제 비-약물 치료법의 조합상의 공동-작용이 유리한 효과를 유지할 수 있는 한 임의의 적절한 시간동안에도 수행될 수 있다. 예를 들어, 적절한 사례에서, 상기 비-약물 치료법이 치료제의 투여로부터 일시적, 아마도 수일 또는 수주일 동안 제거될 때에도 상기 유리한 효과는 달성될 수 있다.
상기와 같이 일반적인 정의로 실시된 바와 같이, 본 발명에 따른 약제는 원칙적으로 당업자에게 알려진 임의의 형태로 투여될 수 있다. 바람직한 투여경로는 전신 투여법이며, 보다 바람직하게는 비경구적 투여법, 가장 바람직하게는 주사법이다. 호환적으로, 상기 약제는 국소 투여가 가능하다. 기타 투여 경로로는 근육 투여법, 복강 투여법, 피하 투여법, 경구 투여 또는 바람직하게는 효능을 유지하면서도 최소한 침투성을 갖는 투여 경로가 주어지는 선호도를 갖는 비강 투여법(intranasal), 기관내 투여(intratracheal) 또는 경폐 투여법(pulmonary)들이다.
비경구 투여는 일반적으로 피하, 근육 내 또는 정맥내 주사 또는 주입으로 사용된다. 추가적으로, 비경구 투여를 위한 하나의 접근법으로 당업계에 종사하는 자에게 잘 알려진, 일정한 투여용량을 유지하게 보장하는 지연성 방출 시스템 또는 서방성 방출 시스템의 적용 방법도 포함한다.
더 나아가, 본 발명의 바람직한 약제는 당업계에 종사하는 자에게 잘 알려진, 적절한 비강 매개물, 흡입기의 국소적 사용을 통해 경비 투여 형태, 또는 경피 투여 피부용 패취(transdermal skin patches) 형태와 같은 형태를 이용한 경피 경로(transdermanl route)를 통해 투여될 수 있다. 경피 전달 시스템(transdermal delivery system)의 형태로 투여되기 위해서는, 상기 용량 투여(dosage administration)는 물론, 용량 처방(dosage regimen) 내내 간헐적 보다는 연속적 투여용량일 것이다. 기타 바람직한 국소 제제로는 전형적으로 활성 성분 농도가 0.01% 내지 15%(w/w 또는 w/v)인, 크림제(creams), 연고제(ointments), 로션제(lotions), 분무제(sprays) 및 겔제(gels)를 포함한다.
본 발명의 방법에 이롭게 반응하는 객체(Subjects)는 의학적 및 수의학적 객체, 일반적으로 인간 및 인간 환자를 포함한다. 본 발명의 방법 및 수단이 유용한 기타 다른 객체로는 고양이, 개, 대동물, 닭 및 그 유사동물과 같은 조류를 포함한다.
본 발명의 약제는 일반적으로, 이에 한정되지는 않으나, 약학적으로 허용된 매질에 용해 또는 분산된 본 발명의 핵산을 포함하는, 치료학적으로 유효량의 활성 작용제를 포함할 것이다. 약학적으로 허용가능한 매질 또는 담체로는 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균성 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 저해제 및 그 유사체를 포함한다. 이러한 약학적 활성 물질을 위한 이와 같은 매질 및 작용제의 사용은 이미 당업계에 잘 알려져 있다. 보조 활성 성분(supplementary active ingredient)도 또한 본 발명의 약제 내에 혼입될 수도 있다.
본 발명의 추가적인 측면은 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 약학 조성물은 본 발명에 따른 하나 이상의 핵산, 및 바람직하게는 약학적으로 허용된 담체(vehicle)를 함유한다. 상기 담체는 당업계에 공지 및/또는 사용되는 임의의 담체 또는 임의의 결합제(binder)일 수 있다. 더욱 상세하게는, 상기 결합제 또는 담체는 본원에 개시된 약제의 제조와 관련되어 실시한 임의의 결합제 또는 담체이다. 추가적인 구현예로서, 상기 약학 조성물은 추가적인 약학 활성 성분을 포함하는 것이다.
약제 및 약학 조성물의 제조는 본원 개시 내용으로 보아 당업계에 종사하는 자에게 널리 알려진 것일 것이다. 전형적으로, 상기 조성물은 액제 또는 현탁제와 같은 주사가능 형태; 주사 전에 현탁제 또는 액제 내의 용액을 위해 적절한 고형 형태; 경구투여를 위한 정제 또는 기타 고형물; 시간 방출형 캡슐제; 또는 안약, 크림, 로션, 연고, 흡입제 등을 포함하는 현재 통상적으로 사용되는 형태로 제조될 수 있다. 외과의사, 내과의사 또는 보건직이 수술분야에서 특정 부위를 치료하기 위해 사용하는, 예를 들어 염수-기초 세척제(saline-based washes)와 같은 멸균된 제형의 사용도 특히 유용할 수 있다. 조성물은 또한 마이크로장치(microdevice), 미세입자 (microparticle) 또는 스폰지(sponge)를 통해 운반될 수도 있다.
제형에 있어서, 약제는 용량 제형과 양립될 수 있는 방법으로 투여될 수 있으며, 상기 함량은 약학적으로 효과적인 것이다. 상기 제형은 상술한 주사제 형태와 같은, 다양한 투여용량 형태로 용이하게 투여될 수 있으나 약물 방출형 캡슐 및 그 유사체도 또한 사용될 수 있다.
본 발명의 약제는 이와 같은 지효성 및 서방성 정제 또는 캡슐, 환약, 분말, 과립제, 엘렉시르(elixirs), 팅크제(tinctures), 현탁제, 시럽제 및 유화 액제(emulsion)와 같은 경구 투여 형태로 투여될 수도 있다. 좌약(suppositories)은 지방성 유화액제 또는 현탁액제에서 유리하게 제조된다.
상기 약학조성물 또는 약제는 살균될 수 있거나 또는 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제와 같은 보조제, 용액 촉진제, 삼투압 조절용 염 및/또는 완충액을 함유할 수 있다. 추가적으로, 그들은 또한 기타 치료적으로 유용한 성분들을 함유할 수 있다. 상기 조성물은 통상적 혼합법, 과립화법, 또는 코팅법에 따라 전형적으로 활성 성분의 약 0.1% 내지 75%, 바람직하게는 1% 내지 50%을 함유하여 제조된다.
액제, 특히 주사용 조성물은, 예를 들어, 용해, 분산 등에 의해 제조될 수 있다. 상기 활성 화합물은 약학적으로 순수한 용매, 예를 들어, 물, 식염수, 수용성 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등에 용해되거나 혼합될 수 있으며, 이로써 주사용 용액 또는 현탁액을 생성한다. 추가적으로, 주사 전 액체 용해에 적절한 고형 형태는 제조될 수 있다.
본 발명의 약제 및 핵산 분자는, 각각 예를 들어 소형 단층 소포 (small unilamellar vesicles), 대형 단층 소포(large unilamellar vesicles) 및 다층 소포(multilamellar vesicles)과 같은 리포좀 전달 시스템(liposome delivery system)의 형태로 투여될 수 있다. 리포좀(liposome)은 콜레스테롤, 스테아릴아민(stearylamine) 또는 포스페티딜콜린 (phosphatidylcholines)을 포함하는 다양한 인지질(phospholipids)로부터 형성될 수 있다. 몇몇 구현예로서, 당업계에 널리 알려진 바와 같이, 지질 성분의 필름이 약물의 수용액으로 수화되어 약물을 캡슐화한 지질층을 제조할 수 있다. 예를 들면, 본원에서 상술하고 있는 핵산 분자는 당업계에 널리 알려진 제조방법을 이용하여 구성되는, 친유성 화합물 또는 비-면역성(non-immuogenic), 고분자량 화합물로 복합체(complex) 형태로 제공될 수 있다. 추가적으로, 리포좀은 세포 독성을 내부적으로 매개하는 세포 독성제(cytotoxic agent)를 목표 또는 운반하기 위하여 그 표면상에 상기 핵산 분자를 함유할 수 있다. 핵산 수반 복합체의 예는 미국 특허번호 제 6,011,020호에서 제공된다.
본 발명의 약제 및 핵산 분자는, 각각 표적 가능한 약물 운반체로서 가용성 중합체와 결합될 수 있다. 상기 중합체로는 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrro lidone), 피란 공중합체(pyran copolymer), 폴리히드록시프로필-메트아크릴아미드-페놀(polyhydroxypropyl-methacrylamide-phenol), 폴리히드록시에틸아스판아미드페놀(polyhydroxyethylaspanamidephenol), 또는 팔미토일기(palmitoyl residue)로 치환된 폴리에틸렌옥시드폴리리신 (polyethylene oxide polylysine)을 포함할 수 있다. 게다가, 본 발명의 약제 및 핵산 분자는, 각각 약물 방물 조절에 유용한 생분해성 중합체 (biodegradable polymer)류, 예를 들어, 폴리락트산(polylactic acid), 폴리엡실론 카프로 락톤(polyepsilon capro lactone), 폴리히드록시 부티르산 (polyhydroxy butyric acid), 폴리오로토에스테르(polyorthoesters), 폴리아세탈(polyacetals), 폴리히드로피란(polydihydropyrans), 폴리시아노아크릴레이트 (polycyanoacrylates) 및 가교화 또는 양친매성 하이드로젤 블록 공중합체(block copolymer)와 결합될 수 있다.
요구된다면, 상기 투여될 약학조성물 및 약제는, 각각 습윤제 또는 유화제, pH 완충제와 같은 미량의 비독성 보조 물질(non-toxic auxiliary substance) 및 나트륨 아세테이트(sodium acetate) 및 트리에탄올아민 올레이트(triethanolamine oleate)와 같은 기타 물질을 미량 포함할 수 있다.
본 발명의 핵산 분자 및 약제, 각각을 이용하는 용량 처방(dosage regimen)은 환자의 유형, 종, 나이, 무게, 성 및 건강 상태; 치료될 상태 정도; 투여 경로; 환자의 신장 및 간 기능; 및 적용되는 특정 압타머 및 이들의 염을 포함한 다양한 요인에 따라 선정된다. 당업계에 숙련된 의사 또는 수의사는 병적 상태의 진행을 저해, 대항(counter) 또는 저지(arrest)하기 위해 요구되는 약물의 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다.
본 발명에 따른 핵산의 효과적인 혈장 수준은 본원에 개시된 모든 질병의 치료에 있어서 바람직하게는 500 fM 내지 200 , 바람직하게는, 1 nM 내지 20 , 보다 바람직하게는 5 nM 내지 20 , 가장 바람직하게는 50 nM 내지 20 의 범위이다.
본 발명의 핵산 분자 및 약제, 각각은 바람직하게는 매일, 매 둘째 또는 셋째 날, 매주, 매 둘째 주당 단회 투여용법, 또는 매달 또는 매 셋째 달 당일 투여용법으로 투여될 수 있다.
본원에서 개시된 약제가 본원에 개시된 약학조성물을 구성한다는 것도 본 발명의 범위 내이다.
본 발명의 추가적인 측면으로서, 본 발명은 본 발명에 따른 약학적 유효량의 하나 이상의 핵산을 치료가 요구되는 객체에 투여함을 포함하는, 치료 방법에 관한 것이다. 하나의 구현예로서, 상기 객체는 질병으로부터 고통받거나 이와 같은 질병으로 진행될 위험성이 있으며, 여기에서 상기 질병은 본원에서 개시된 임의의 질병, 특히 약제 제조를 위한 본 발명에 따른 임의의 핵산의 사용과 연관된 임의의 질병이다.
본원에 바람직하게 사용된 바와 같이, 정의되는 치료는 추가적 또는 선택적 예방 및/또는 추적치료 (follow-up)을 포함한다.
본원에 바람직하게 사용된 바와 같이, 역으로 지시되지 않는 한, 정의되는 용어 질환 및 장애는 교환가능한 방법으로 사용될 것이다.
본원에서 사용된 바와 같이, 정의되는 용어 포함하다(comprise)는 바람직하게는 이와 같은 정의에 의해 따르거나 서술되는 주제를 한정하고자 함이 아니다. 그러나, 호환적인 구현예로서, 정의되는 용어 포함하다(comprises)는 함유하다 (containing)는 의미로 이해될 것이며, 그러므로 그와 같은 정의로 따르거나 서술되는 주제를 한정되어야 할 것이다.
본 발명에 따른 상기 핵산 분자 및 본원에서 사용된 바와 같은 목표 분자 (target molecules; SDF-1)의 다양한 서열번호(SEQ.ID.Nos.), 화학적 본질, 이의 실질적인 서열 및 내부 참고번호(internal reference number)는 하기 표에 요약된다.
상기 핵산들은 압타머, 즉, 비오틴화된 (biotinylated) 인간 D-SDF-1(서열번호 4)로 표지된 D-핵산 수준(D-RNA), 또는 스피에겔머, 즉, SDF-1의 자연형 배위를 갖는 L-핵산(L-RNA)인 L-SDF-1(인간 SDF-1알파, 서열번호 1)의 수준으로 특정됨을 주목하여야 할 것이다. 상기 상이한 핵산들은 1개의 내부 참고 명칭을 공유하나 D-RNA(압타머) 분자 및 L-RNA (스피에겔머)에는 각각 1개의 서열번호만이 공유된다.
SEQ ID NO: RNA/
Peptide		 Sequence Internal Reference
1 Lpeptide KPVSLSYRCPCRFFESHVARANVKHLKILNTPNCALQIVARLKNNNRQVCIDPKLKWIQEYLEKALNK human/monkey/cat SDF1α
human/monkey/cat SDF1
2 Lpeptide KPVSLSYRCPCRFFESHVARANVKHLKILNTPNCALQIVARLKNNNRQVCIDPKLKWIQEYLEKALNKRFKM human/monkey/cat SDF1β
3 Lpeptide KPVSLSYRCPCRFFESHIARANVKHLKILNTPNCALQIVARLKNNNRQVCIDPKLKWIQEYLEKALNK murine SDF1α
murine SDF1
4 Dpeptide KPVSLSYRCPCRFFESHVARANVKHLKILNTPNCALQIVARLKNNNRQVCIDPKLKWIQEYLEKALNKRFKBiotin biotinylated hu DSDF1
5 LRNA AGCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGCU 193C2001
6 LRNA AGCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGCU 193G2001
7 LRNA AGCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAAUGGCUGAUCCUAGUCAGGUGCGCU 193F2001
8 LRNA GCGAGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUGCGC 193G1002
9 LRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUGCGC 193D2002
10 LRNA GCAUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUGCCC 193A1002
11 LRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAAUGGCUGAUCCUAGUCAGGGACGC 193D3002
12 LRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGAGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGC 193B3002
13 LRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAAAGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGC 193H3002
14 LRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGUUCCUAGUCAGGUAUGC 193E3002
15 LRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUUAGGUACGC 193D1002
16 LRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGC 193C2002
17 LRNA CGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUACG 193C2003
18 LRNA GUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUAC 193C2004
19 LRNA UGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUA 193C2005
20 LRNA GGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGU 193C2006
21 LRNA GUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGG 193C2007
22 LRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGC 193G2012
23 LRNA GCGCGGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGCGCGC 193G2013
24 LRNA GCGCGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGGCGC 193G2014
25 LRNA GGGCGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGGCCC 193G2015
26 LRNA GGCCGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGGGCC 193G2016
27 LRNA GCCCGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGGGGC 193G2017
28 LRNA 5’40PEGGCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGC 193G20125’PEG, NOXA12
29 DRNA AGCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGCU 193C2001
30 DRNA AGCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGCU 193G2001
31 DRNA AGCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAAUGGCUGAUCCUAGUCAGGUGCGCU 193F2001
32 DRNA GCGAGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUGCGC 193G1002
33 DRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUGCGC 193D2002
34 dRNA GCAUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUGCCC 193A1002
35 dRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAAUGGCUGAUCCUAGUCAGGGACGC 193D3002
36 dRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGAGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGC 193B3002
37 dRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAAAGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGC 193H3002
38 dRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGUUCCUAGUCAGGUAUGC 193E3002
39 dRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUUAGGUACGC 193D1002
40 dRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGC 193C2002
41 dRNA CGUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUACG 193C2003
42 dRNA GUGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUAC 193C2004
43 dRNA UGGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGUA 193C2005
44 dRNA GGUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGGU 193C2006
45 dRNA GUGUGAUCUAGAUGUAGUGGCUGAUCCUAGUCAGG 193C2007
46 dRNA GCGUGGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGUACGC 193G2012
47 dRNA GCGCGGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGCGCGC 193G2013
48 dRNA GCGCGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGGCGC 193G2014
49 dRNA GGGCGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGGCCC 193G2015
50 dRNA GGCCGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGGGCC 193G2016
51 dRNA GCCCGUGUGAUCUAGAUGUAUUGGCUGAUCCUAGUCAGGGGGC 193G2017
52 lRNA GUGUGAUCUAGAUGUADWGGCUGWUCCUAGUYAGG Type B Formula1
53 lRNA GUGUGAUCUAGAUGUADUGGCUGAUCCUAGUCAGG Type B Formula2
54 LRNA AAAGUAACACGUAAAAUGAAAGGUAAC
55 LRNA AAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGC
56 LRNA GGUUAGGGCUAAAGUCGG
57 LRNA GGUUAGGGCUAGAAGUCGG
58 LRNA GGUUAGGGCUCGAAGUCGG
59 LRNA GGUUAGGGCUUGAAGUCGG
60 lRNA GCUGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCAGC 192A10001
61 lRNA GCUGUGAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAACCACAGC 192G10
62 lRNA GCUGUGAAAGUAACACGUCAAUGAAAGGUAACCGCAGC 192F10
63 lRNA GCUGUGAAAGUAACACGUCAAUGAAAGGUAACCACAGC 192B11
64 lRNA GCUGUAAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAACUACAGC 192C9
65 lRNA GCUGUAAAAGUAACAAGUCAAUGAAAGGUAACUACAGC 192E10
66 lRNA GCUGUGAAAGUAACAAGUCAAUGAAAGGUAACCACAGC 192C10
67 lRNA GCAGUGAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAACCACAGC 192D11
68 lRNA GCUGUGAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAACCACUGC 192G11
69 lRNA GCUAUGAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAACCAUAGC 192H11
70 lRNA GCUGCGAAAGCGACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCAGC 192D10
71 lRNA GCUGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCACAGC 192E9
72 lRNA GCUGUGAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCAGC 192H9
73 lRNA AGCGUGAAAGUAACACGUAAAAUGAAAGGUAACCACGCU 191A6
74 lRNA AAAGYRACAHGUMAAXAUGAAAGGUARC; XA = A or absent Type A Formula1
75 lRNA AAAGYRACAHGUMAAUGAAAGGUARC Type A Formula2
76 lRNA AAAGYRACAHGUMAAAUGAAAGGUARC Type A Formula3
77 lRNA AAAGYAACAHGUCAAUGAAAGGUARC Type A Formula4
78 lRNA CUGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCAG 192A10002
79 lRNA UGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCA 192A10003
80 lRNA GUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGC 192A10004
81 lRNA UGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCG 192A10005
82 lRNA GAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCC 192A10006
83 lRNA AAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGC 192A10007
84 lRNA GCGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCGC 192A10008
85 lRNA GCGCGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCGC 192A10015
86 lRNA GCGGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCCGC 192A10014
87 lRNA CGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCG 192A10016
88 lRNA GCGCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGUGC 192A10017
89 lRNA GUGCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGCGC 192A10018
90 lRNA CGCGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGUG 192A10019
91 lRNA GGGCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGCCC 192A10020
92 lRNA GGCCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGGCC 192A10021
93 lRNA GCCCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGGGC 192A10022
94 lRNA CCCCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGGGG 192A10023
95 lRNA GUGCUGCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCAGCAC 197B2
96 lRNA AGCGUGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGACACGCU 191D5001
97 lRNA GUGUUGCGGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCAGCAGCAC 197H1
98 lRNA CGUGCGGCCUAAGAGGUUAGGGCUUAAAGUCGGUCUUUGGCCAACACG 190D3
99 lRNA CGUGCGCUUGAGAUAGGGGUUAGGGCUUAAAGUCGGCUGAUUCUCACG 190A3001
100 lRNA CGUGAUUGGUGAGGGGUUAGGGCUUGAAGUCGGCCUUGUCCAGUCACG 190A2
101 lRNA AGCGUGAAGGGGUUAGGGCUCGAAGUCGGCUGACACGCU 191A5
102 lRNA GUGCUGCGGGGGUUAGGGCUCGAAGUCGGCCCGCAGCAC 197H3
103 lRNA GUGUUCCCGGGGUUAGGGCUUGAAGUCGGCCGGCAGCAC 197B1
104 lRNA GUGUUGCAGGGGUUAGGGCUUGAAGUCGGCCUGCAGCAC 197E3
105 lRNA GUGCUGCGGGGGUUAGGGCUCAAAGUCGGCCUGCAGCAC 197H2
106 lRNA GUGCUGCCGGGGUUAGGGCUAAAGUCGGCCGACAGCAC 197D1
107 lRNA GUGCUGUGGGGGUCAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCAGCAC 197D2
108 lRNA GGUYAGGGCUHRXAAGUCGG; XA = A or absent Type C Formula1
109 lRNA GGUYAGGGCUHRAAGUCGG Type C Formula2
110 lRNA GGUYAGGGCUHRAGUCGG Type C Formula3
111 lRNA GGUUAGGGCUHGAAGUCGG Type C Formula4
112 lRNA UGAGAUAGGGGUUAGGGCUUAAAGUCGGCUGAUUCUCA 190A3003
113 lRNA GAGAUAGGGGUUAGGGCUUAAAGUCGGCUGAUUCUC 190A3004
114 lRNA GGGGUUAGGGCUUAAAGUCGGCUGAUUCU 190A3007
115 lRNA GCGUGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGACACGC 191D5002
116 lRNA CGUGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGACACG 191D5003
117 lRNA CGGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGACCG 191D5004
118 lRNA CGGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGCCCG 191D5005
119 lRNA CGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGCCG 191D5006
120 lRNA CGGGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCCCG 191D5007
121 lRNA GGGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCCC 191D5010
122 lRNA CCGCGGUUAGGGCUAGAAGUCGGGCGG 191D5017
123 lRNA CCCGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCGGG 191D5029
124 lRNA GGCGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCGCC 191D5024
125 lRNA CCCGCGGUUAGGGCUAGAAGUCGGGCGGG 191D501729a
126 lRNA GCCGCGGUUAGGGCUAGAAGUCGGGCGGC 191D501729b
127 lRNA CCCCGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCGGGG 191D501929a
128 lRNA CGGCGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCGCCG 191D502429a
129 lRNA GGGCGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCGCCC 191D502429b
130 lRNA UGCUGCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCAGCA 197B2001
131 lRNA GCUGCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCAGC 197B2002
132 lRNA CUGCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCAG 197B2003
133 lRNA UGCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCA 197B2004
134 lRNA GCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGC 197B2005
135 lRNA GCCGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCGGC 197B2006
136 lRNA GGCCGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCGGCC 197B200631a
137 lRNA CGCCGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCGGCG 197B200631b
138 lRNA RKSBUSNVGR Type C Formula55’
139 lRNA YYNRCASSMY Type C Formula53’
140 lRNA RKSBUGSVGR Type C Formula65’
141 lRNA YCNRCASSMY Type C Formula63’
142 lRNA CGUGGUCCGUUGUGUCAGGUCUAUUCGCCCCGGUGCAGGGCAUCCGCG 194A2001
143 lRNA GCAGUGUGACGCGGACGUGAUAGGACAGAGCUGAUCCCGCUCAGGUGAG 196B12003
144 lRNA CAACAGCAGUGUGACGCGGACGUGAUAGGACAGAGCUGAUCCCGCUCAG 196B12004
145 lRNA 5’40PEGGCGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCGC 192A100085’PEG
146 dRNA GCUGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCAGC 192A10001
147 dRNA GCUGUGAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAACCACAGC 192G10
148 dRNA GCUGUGAAAGUAACACGUCAAUGAAAGGUAACCGCAGC 192F10
149 dRNA GCUGUGAAAGUAACACGUCAAUGAAAGGUAACCACAGC 192B11
150 dRNA GCUGUAAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAACUACAGC 192C9
151 dRNA GCUGUAAAAGUAACAAGUCAAUGAAAGGUAACUACAGC 192E10
152 dRNA GCUGUGAAAGUAACAAGUCAAUGAAAGGUAACCACAGC 192C10
153 dRNA GCAGUGAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAACCACAGC 192D11
154 dRNA GCUGUGAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAACCACUGC 192G11
155 dRNA GCUAUGAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAACCAUAGC 192H11
156 dRNA GCUGCGAAAGCGACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCAGC 192D10
157 dRNA GCUGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCACAGC 192E9
158 dRNA GCUGUGAAAGUAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCAGC 192H9
159 dRNA AGCGUGAAAGUAACACGUAAAAUGAAAGGUAACCACGCU 191A6
160 dRNA CUGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCAG 192A10002
161 dRNA UGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCA 192A10003
162 dRNA GUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGC 192A10004
163 dRNA UGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCG 192A10005
164 dRNA GAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCC 192A10006
165 dRNA AAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGC 192A10007
166 dRNA GCGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCGC 192A10008
167 dRNA GCGCGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCGC 192A10015
168 dRNA GCGGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCCGC 192A10014
169 dRNA CGUGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGCG 192A10016
170 dRNA GCGCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGUGC 192A10017
171 dRNA GUGCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGCGC 192A10018
172 dRNA CGCGAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCCGUG 192A10019
173 dRNA GGGCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGCCC 192A10020
174 dRNA GGCCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGGCC 192A10021
175 dRNA GCCCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGGGC 192A10022
176 dRNA CCCCAAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGCGGGG 192A10023
177 dRNA GUGCUGCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCAGCAC 197B2
178 dRNA AGCGUGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGACACGCU 191D5001
179 dRNA GUGUUGCGGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCAGCAGCAC 197H1
180 dRNA CGUGCGGCCUAAGAGGUUAGGGCUUAAAGUCGGUCUUUGGCCAACACG 190D3
181 dRNA CGUGCGCUUGAGAUAGGGGUUAGGGCUUAAAGUCGGCUGAUUCUCACG 190A3001
182 dRNA CGUGAUUGGUGAGGGGUUAGGGCUUGAAGUCGGCCUUGUCCAGUCACG 190A2
183 dRNA AGCGUGAAGGGGUUAGGGCUCGAAGUCGGCUGACACGCU 191A5
184 dRNA GUGCUGCGGGGGUUAGGGCUCGAAGUCGGCCCGCAGCAC 197H3
185 dRNA GUGUUCCCGGGGUUAGGGCUUGAAGUCGGCCGGCAGCAC 197B1
186 dRNA GUGUUGCAGGGGUUAGGGCUUGAAGUCGGCCUGCAGCAC 197E3
187 dRNA GUGCUGCGGGGGUUAGGGCUCAAAGUCGGCCUGCAGCAC 197H2
188 dRNA GUGCUGCCGGGGUUAGGGCUAAAGUCGGCCGACAGCAC 197D1
189 dRNA GUGCUGUGGGGGUCAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCAGCAC 197D2
190 dRNA UGAGAUAGGGGUUAGGGCUUAAAGUCGGCUGAUUCUCA 190A3003
191 dRNA GAGAUAGGGGUUAGGGCUUAAAGUCGGCUGAUUCUC 190A3004
192 dRNA GGGGUUAGGGCUUAAAGUCGGCUGAUUCU 190A3007
193 dRNA GCGUGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGACACGC 191D5002
194 dRNA CGUGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGACACG 191D5003
195 dRNA CGGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGACCG 191D5004
196 dRNA CGGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGCCCG 191D5005
197 dRNA CGGCGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCGCCG 191D5006
198 dRNA CGGGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCCCG 191D5007
199 dRNA GGGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCCC 191D5010
200 dRNA CCGCGGUUAGGGCUAGAAGUCGGGCGG 191D5017
201 dRNA CCCGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCGGG 191D5029
202 dRNA GGCGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCGCC 191D5024
203 dRNA CCCGCGGUUAGGGCUAGAAGUCGGGCGGG 191D501729a
204 dRNA GCCGCGGUUAGGGCUAGAAGUCGGGCGGC 191D501729b
205 dRNA CCCCGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCGGGG 191D501929a
206 dRNA CGGCGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCGCCG 191D502429a
207 dRNA GGGCGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCGCCC 191D502429b
208 dRNA UGCUGCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCAGCA 197B2001
209 dRNA GCUGCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCAGC 197B2002
210 dRNA CUGCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCAG 197B2003
211 dRNA UGCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGCA 197B2004
212 dRNA GCGGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCUGC 197B2005
213 dRNA GCCGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCGGC 197B2006
214 dRNA GGCCGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCGGCC 197B200631a
215 dRNA CGCCGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCGGCG 197B200631b
216 dRNA CGUGGUCCGUUGUGUCAGGUCUAUUCGCCCCGGUGCAGGGCAUCCGCG 194A2001
217 dRNA GCAGUGUGACGCGGACGUGAUAGGACAGAGCUGAUCCCGCUCAGGUGAG 196B12003
218 dRNA CAACAGCAGUGUGACGCGGACGUGAUAGGACAGAGCUGAUCCCGCUCAG 196B12004
219 LRNA 5’40PEGUAAGGAAACUCGGUCUGAUGCGGUAGCGCUGUGCAGAGCU Control Spiegelmer
220 LRNA CGUGCGCUUGAGAUAGG
221 LRNA CUGAUUCUCACG
222 LRNA CUGAUUCUCA
223 LRNA 5’40PEGGCCGGGGUUAGGGCUAGAAGUCGGCCGGC 197B20065’PEG
224 LRNA 5’40PEGCGGGAGGUUAGGGCUAGAAGUCGGUCCCG 191D50075‘PEG
225 LRNA 5’40PEGCGCAUGGACUGAUCCUAGUCGGUUAUGUAGAUCUAGUGUGGUGCG revNOXA12
본 발명은 나아가 구현예 및 장점들이 적용됨을 나타내는 도면, 실시예 및 서열목록에 의해 기술된다.
SDF-1를 저해 가능한 핵산 분자 (여기에서 상기 핵산 분자들은 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법에서의 사용; 부수적 치료법으로서 질병 또는 장애를 앓고 있거나 또는 질병 또는 장애로 진행될 위험이 있는 객체의 치료를 위한 방법에서의 사용, 또는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 약제로서의 사용을 위한 것이다.
도 1은 "A 형(Type A)" SDF-1 결합 핵산 분자의 서열 배열을 표시한 것이며;
도 2A 및 B는 SDF-1 결합핵산 분자 유도체 192-A10-001를 나타낸 도이며 ("A 형(Type A)" SDF-1 결합 핵산);
도 3은 "B 형(Type B)" SDF-1 결합 핵산 분자의 서열 배열을 표시한 것이며;
도 4A 및 B는 SDF-1 결합핵산 분자 유도체 193-C2-001 및 193-G2-001를 나타낸 도이며 ("B 형(Type B)" SDF-1 결합 핵산);
도 5은 "C 형(Type C)" SDF-1 결합 핵산 분자의 서열 배열을 표시한 것이며;
도 6은 SDF-1 결합핵산 분자 유도체 190-A3-001를 나타낸 도이며 ("C형(Type C)" SDF-1 결합 핵산);
도 7A, 및 B은 SDF-1 결합핵산 분자 유도체 190-D5-001 를 나타낸 도이며 ("C 형(Type C)" SDF-1 결합 핵산);
도 8은 SDF-1 결합핵산 분자 유도체 197-B2 를 나타낸 도이며 ("C 형(Type C)" SDF-1 결합 핵산);
도 9은 "D 형(Type D)" SDF-1 결합 핵산 분자이라고도 지칭되는 다른 SDF-1 결합 핵산에 추가하여 추가적인 SDF-1 결합 핵산 분자를 표시한 것이며;
도 10은 인간 T 세포 백혈병 세포주 Jurkat을 이용한 화학주성 어세이법에서 다양한 용량의 SDF-1 결합 스피에겔머(binding Spiegelmers) 193-G2-012-5’-PEG (NOX-A12이라고도 지칭), 197-B2-006-5’-PEG, 191-D5-007-5’-PEG 및 191-A10-008-5’-PEG 들의 효력을 나타낸 도이며(여기에서 상기 세포들은 37°C에서 대조군 대비 스피에겔머들 193-G2-012-5’-PEG, 197-B2-006-5’-PEG, 191-D5-007-5’-PEG 및 191-A10-008-5’-PEG 농도들의 백분율로 표기된 다양한 용량의 SDF-1 결합 스피에겔머들인193-G2-012-5’-PEG, 197-B2-006-5’-PEG, 191-D5-007-5’-PEG 및 191-A10-008-5’-PEG과 전배양한 0.3 nM 인간 SDF-1에 이동하도록 함);
도 11A은 인간 전구(pre)-B ALL 세포주 Nalm-6 을 이용한 화학주성 어세이법에서 SDF-1 결합 스피에겔머(binding Spiegelmers) NOX-A12의 효력을 나타낸 도이며(여기에서 상기 세포들은 37°C에서 대조군 대비 스피에겔머인 NOX-A12 농도들의 백분율로 표기된 다양한 용량의 SDF-1 결합 스피에겔머인 NOX-A12과 전배양한 0.3 nM 인간 SDF-1에 이동하도록 함);
도 11B은 인간 백혈병 단핵구 림프종 세포주(leukemic monocyte lymphoma cell line) U937 을 이용한 화학주성 어세이법에서 SDF-1 결합 스피에겔머(binding Spiegelmers) NOX-A12의 효력을 나타낸 도이며(여기에서 상기 세포들은 37°C에서 대조군 대비 스피에겔머인 NOX-A12 농도들의 백분율로 표기된 다양한 용량의 SDF-1 결합 스피에겔머인 NOX-A12과 전배양한 3 nM 인간 SDF-1에 이동하도록 함);
도 12은 인간 전구-B 세포 백혈병 세포주(human pre-B cell leukemia cell line) BV-173을 이용한 화학주성 어세이법에서 SDF-1 결합 스피에겔머(binding Spiegelmers) NOX-A12의 효력을 나타낸 도이며(여기에서 상기 세포들은 37°C에서 대조군 대비 스피에겔머인 NOX-A12 농도들의 백분율로 표기된 다양한 용량의 SDF-1 결합 스피에겔머인 NOX-A12과 전배양한 3 nM 인간 SDF-1에 이동하도록 함);
도 13은 β-갈락토시다제(galactosidase) 단편에 모두 융합된 CXCR7 및 β-어레스틴(arrestin) 발현 CHO 세포(cells)를 이용한 상보 어세이법(complementation assay)에서 SDF-1 결합 스피에겔머(binding Spiegelmers) NOX-A12의 효력을 나타낸 도이며(여기에서 상기 세포의 CXCR7은 37°C에서 대조군 대비 스피에겔머인 NOX-A12 농도들의 백분율로 표기된 다양한 용량의 SDF-1 결합 스피에겔머인 NOX-A12과 전배양한 10 nM 인간 SDF-1에 활성화 됨);
도 14은 환상 대동맥 발생 분석법 (aortic ring sprouting assay)에서 인간 SDF-1 결합 스피에겔머인 193-G2-012-5’-PEG ( NOX-A12이라고도 지칭) 및 PEG화(PEGylated) 대조용 스피에겔머 (Control Spiegelmer)에 의하여, SDF-1로 유도된 발생의 억제효과를 나타낸 도이며(여기에서 상기 분리된 환상(ring)은 콜라겐 세포간질(collagen matrix)에 묻힌 후 SDF-1와 스피에겔머를 포함 및 비포함하여 6일 동안 배양하한 것이며, a: 대조군(control); b: 10 nM SDF-1; c: 10 nM SDF-1 + 1 인간 SDF-1 결합 스피에겔머 193-G2-012-5’-PEG; d: 10 nM SDF-1 + 1 PEG화 대조용 스피에겔머(PEGylated Control Spiegelmer)임);
도 15은 환상 대동맥 발생 분석법 (aortic ring sprouting assay)에서 인간 SDF-1 결합 스피에겔머인 193-G2-012-5’-PEG (NOX-A12이라고도 지칭) 및 PEG화(PEGylated) 대조용 스피에겔머 (Control Spiegelmer)에 의하여, SDF-1로 유도된 발생의 억제효과를 나타낸 도이며(여기에서 상기 발생수치(sprouting indices)가 각 조건당 5 환상(ring)에 대한 평균± 표준편차 (mean± SD) 값으로 나타나며, *: 대조군에 비해 SDF-1의 값은 유의적 차이있음 (Mann-Whitney-test; p=0.009); **: SDF의 값에 비해 SDF-1+인간 SDF-1 결합하는 스피에겔머 193-G2-012-5'-PEG의 값은 유의적 차이있음 (Mann-Whitney-test; p=0.028임);
도 16은 RPMI-8226 MM 세포를 F-ara-A (Fludarabine)에 민감성 증진화시키기 위한 인간 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 의 효력을 나타낸 도이며(여기에서 상기 충밀한 설치류(confluent murine) BM 기질(stromal) MS-5 세포 분비 SDF-1을 인간 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 또는 비기능성(non-functional) revNOX-A12로 배양한 후에, 연이어 RPMI-8226 MM 세포로 동시배양하고; 세포를 40시간동안 1 F-ara-A로 처치하고 세포 생존율(cell viability)은 시약 (ViaCount Reagent)을 이용한 유동 세포 분석법(Flow Cytometry)으로 측정하고; 오차 막대(Error bars)는 SD, N=5, * p = 0.0134, *** p = 0.0003 (two-tailed, unpaired t-test)을 의미함);
도 17은 기질(stromal) MS-5 세포와 동시 배양한 Jurkat 세포 증식을 저해하기 위한 인간 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 의 효력을 나타낸 도이며(여기에서 상기 설치류(murine) 기질(stromal) MS-5 세포 분비 SDF-1을 인간 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12의 농도를 증가시키면서 배양한 후에, Jurkat 세포를 충밀한 (confluent) MS-5 세포 층 (cell layer)에 첨가하고; 세포수 측정(cell count)는 40시간동안 시약 (ViaCount Reagent)을 이용한 유동 세포 분석법(Flow Cytometry)으로 측정하고; 오차 막대(Error bars)는 SD, N=4, *** p = 0.0008 (two-tailed, unpaired t-test)을 의미함);
도 18A 및 B은 피브로넥틴(fibronectin)에 대한 Jurkat 세포의 SDF-1 용량-의존적 부착(dose-dependent adhesion)을 전환(reverse)시키기 위한 인간 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 의 효력을 나타낸 도이다 (여기에서 상기 Jurkat 세포를 SDF-1와 SDF-1 단독(alone) (A), 증가되는 농도의 인간 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 또는 SDF-1과 함께 처치하고 증가되는 농도의 대조용 스피에겔머(control Spiegelmer) revNOX-A12 (B)으로 30분간 배양하고 15 분간 피브로넥틴 피복된 플레이트상에 접종하고; 세포들을 연이어 배지로 세척하고 부착된 세포(attached cells)를 시약(Cell Titer Glo Reagent)을 이용하여 정량화함; 오차 막대는 SD을 의미함).
하기의 예들은 단지 본 발명의 설명의 목적을 설명하고자 하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 본 발명의 보호범위를 제한하고자 함이 아니다.
실시예 1. 인간 SDF-1과 결합하는 핵산
하기에서, 역으로 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어인 핵산 (nucleic acid) 및 핵산 분자(nucleic acid molecule)은 동의어로 사용된다. 게다가, 용어 ‘스트레치(stretch)’ 및 ‘뉴클레오티드의 스트레치 (stretch of nucleotide)’들은 역으로 지시하지 않는 한은 유의어로 사용된다.
인간 SDF-1과 결합하는 몇가지 L-핵산 및 개개 뉴클레오티드 서열은 도 1 내지 도 9에 도시하였다. 상기 핵산은 압타머(aptamer), 즉, 비오틴화 인간 d-SDF-1로 수행되는 경쟁적 또는 직접 풀-다운(pull down) 어세이법을 이용하여 d-핵산 수준(nucleic acid level)의 압타머 상에서 특징화되었다. (프로토콜은 실시예 3 참조)
상기 스피에겔머들은 SDF-1(l-SDF-1)의 자연 배위를 이용하여 Biacore 2000 기기(instrument)를 이용한 표면 플라즈몬 공명기기(surface plasmon resonance measurement)(프로토콜은 실시예 5 참조) 및 시험관내(in vitro) 세포배양 화학주성 에세이법(프로토콜은 실시예 4 참조)으로 측정되었다.
SDF-1 결합 핵산 분자는 서로 상이한 서열 모티프(sequence motiff)를 나타내며, 주요 3개 형(types)은 도 1, 2A, 및 2B (A형), 도 2, 4A 및 4B (B형), 도 5, 6, 7A 및 7B (C형)에서 정의되었다. 상기 핵산 분자들은 서로 상이한 서열 모티프(sequence motiff)를 나타낸다. 핵산 서열 모티프를 정의하기 위하여, 모호한 핵산을 IUPAC 생략표기법을 이용하여 하기와 같이 이용하였다:
S- 강(strong)- G 또는 C;
W- 약(weak)- A 또는 U;
R- 퓨린(purine)- G 또는 A;
Y- 피리미딘(pyrimidine)- C 또는 U;
K- 케토(keto)- G 또는 U;
M- 이미노 (imino)- A 또는 C;
B- A가 아닌(not A)- C 또는 U 또는 G;
D- C가 아닌(not C)- A 또는 G 또는 U;
H- G가 아닌(not G)- A 또는 C 또는 U;
V- U가 아닌(not U)- A 또는 C 또는 G;
N- 모두(all)- A 또는 G 또는 C 또는 U.
역으로 지시되지 않는다면, 임의의 핵산 서열 또는 스트레치(streches) 및 박스(boxes)의 서열은 각각 5→3 방향으로 정의된다.
1-1. A 형 SDF -1 결합 핵산 분자 ( SDF -1 binding nucleic acid molecules of type A )
도 1에 도시된 바와 같이, A 형 SDF-1 결합 핵산분자들의 모든 시퀀스들은 서로 혼성화(hybridize)할 수 있는 5- 및 3-말단 스트레치(terminal stretches; 여기에서는 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치 및 제 2차 말단 스트레치로도 지칭됨)에 의해 플랭크된(flanked) 하나의 중간(center) 뉴클레오티드 서열을 포함하고 있다. 그러나 상기 혼성화가 분자에서 필수적이지는 않다. 하기에서, 역으로 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어인 A형의 SDF-1 결합 핵산 분자 (SDF-1 binding nucleic acid molecules of type A) 및 A형 SDF-1 결합 핵산(Type A SDF-1 binding nucleic acids) 또는 A형 SDF-1 결합 핵산 분자 (Type A SDF-1 binding nucleic acids molecules)은 동의어로 사용된다.
본원에서 뉴클레오티드의 정의된 박스(box; 본원에서 진한 이태리체 및 밑줄로 표시함) 또는 스트레치(stretches)의 서열은 SDF-1에 대한 결합 친화성에 영향을 미치는 A형의 SDF-1 결합 핵산 분자들 사이에 상이할 수도 있다. A형 SDF-1 결합 핵산으로 요약된 서로 상이한 SDF-1 결합 핵산의 결합력 분석에 기초하여, 상기 핵심 뉴클레오티드 서열 및 하기에 개시되는 이들의 뉴클레오티드 서열들은 개별적이고, 보다 바람직하게는 SDF-1에 결합하기에 그 전체로서 필수적이다:
A형 SDF-1 결합 핵산의 모든 동정된 서열들의 중간 뉴클레오티드 서열은 서열 AAAGYRACAHGUMAAX A UGAAAGGUARC (A형 공식 1; Type A Formula-1, 서열번호: 74)을 공유하며, 상기 XA은 존재하지 않거나 또는 A일 수 있다. 만일 A가 존재하지 않으면, 상기 중간 뉴클레오티드 서열은 A형 공식 2(Type A Formula-2)인 AAAGYRACAHGUMAA-UGAAAGGUARC , (서열번호: 75)으로 요약될 수 있다. 중간 뉴클레오티드 서열 내에서 추가적인 뉴클레오티드A를 운반하면서 여전히 SDF-1에 결합하는 A형 SDF-1 결합 핵산 191-A6 (중간 뉴클레오티드 서열: AAAGUAACACGUAAAAUGAAAGGUAAC , 서열번호: 54)은 호환적인 중간 뉴클레오티드 서열 ( AAAGYRACAHGUMAAAUGAAAGGUARC , A형 공식 3, 서열번호: 76)로 결론지어진다.
A형 SDF-1 결합 핵산의 모든 기타 핵산들을 위한 구현예로서, A형 SDF-1 결합 핵산인 192-A10-001은 인간 SDF-1에 대한 결합 친화력으로 특징화된다. 평형 결합 상수 KD 치는 풀-다운 결합 어세이법 (KD=1.5 nM) 및 표면 플라즈몬 공명 기기 (KD=1.0 nM)을 이용하여 규명되었다. 192-A10-001에 대한 0.12 nM의 IC50 값(50% 저해 농도)은 시험관내 세포배양 화학주성 어세이법을 이용하여 측정되었다. 결론적으로, 도 1에 개시된 모든 A형 SDF-1 결합 핵산은 192-A10-001 에 대한 경쟁적 풀-다운 결합 어세이법 상에서 분석되었다. A형 SDF-1 결합 핵산 192-B11 및 192-C10은 상기 경쟁적 실험상에서 192-A10-001와 동일한 결합 친화력을 나타내었다. A형 SDF-1 결합 핵산 192-G10, 192-F10, 192-C9, 192-E10, 192-D11, 192-G11, 192-H11 및 191-A6에서는 더 약한 결합 친화력이 측정되었다. A형 SDF-1 결합 핵산 192-D10, 192-E9 및 192-H9는 192-A10-001보다 더 약한 결합 친화력을 갖는 것으로 나타났다.
상기에 기재된 바와 같이, A형 SDF-1 결합 핵산 192-B11 및 192-C10은 192-A10-001와 SDF-1에 대한 동일한 결합 친화력을 나타낸다. 그러나, 중간 뉴클레오티드 서열의 뉴클레오티드 서열상에서 일부 상이성을 나타낸다. 그러므로 거의 동일한 높은 친화력을 갖고 SDF-1에 결합하는 세 분자의 공통 서열(consensus sequence)은 뉴클레오티드 서열 AAAGYAACAHGUCAAUGAAAGGUARC (A형 공식 4, 서열번호: 77)으로 요약될 수 있으며, 상기 192-A10-001(뉴클레오티드 서열: AAAGCAACAUGUCAAUGAAAGGUAGC , 서열번호: 84)의 중간 뉴클레오티드 서열의 뉴클레오티드 서열은 A형 SDF-1 결합 핵산의 최적 결합 친화력을 갖는 뉴클레오티드 서열을 나타낸다.
A형 SDF-1 결합 핵산의 5-말단 스트레치(제 1차 말단 스트레치라고도 지칭)의 여섯 뉴클레오티드 중 다섯 또는 여섯 개는 A형 SDF-1 결합 핵산의 3-말단 스트레치(제 2차 말단 스트레치라고도 지칭)의 여섯 뉴클레오티드 중 각각 다섯 또는 여섯 뉴클레오티드와 혼성화(hybridize)되어 말단 나선형(terminal helix)을 형성할 수 있다.상기 뉴클레오티드들은 일부 위치에서 가변성이 있음에도 불구하고, 상이한 뉴클레오티드는 각 5- 및 3-말단 스트레치의 여섯 뉴클레오티드 중 다섯 또는 여섯 개의 뉴클레오티드로 혼성화를 허용한다. 도 1에 도시된 바와 같이, A형 SDF-1 결합 핵산의 상기 5-말단 및 3-말단 스트레치는 5-말단 스트레치(RSHRYR, A형 공식 5-5) 및 3-말단 스트레치(YRYDSY, A형 공식 5-3)의 일반식(generic formula)으로 요약될 수 있다. A형 SDF-1 결합 핵산의 절단형 유도체(truncated derivatives)는 본래의 분자 192-A10-001 및 192-A10-008에 대한 경쟁적 풀-다운 결합 어세이법 상에서 분석되었다(도 2A 및 2B). 상기 실험들은 192-A10-001의 여섯 말단 뉴클레오티드(5말단: GCUGUG; 3말단: CGCAGC)가 유도체 192-A10-002의 다섯 뉴클레오티드(5말단: CUGUG; 3말단: CGCAG)로의 감축이 결합 친화력의 감소 없이도 수행될 수 있음을 나타낸다. 반면에, 넷 말단 뉴클레오티드(5말단: UGUG; 3말단: CGCA; 192-A10-003) 또는 그 이하(192-A10-004/-005/-006/-007)의 절단은 SDF-1에 대한 감소된 결합 친화력을 나타내었다(도 2A). 도 2A 및 2B에 도시된 바와 같이, A형 SDF-1 결합 핵산 192-A10-001의 상기 유도체의 다섯 및 넷 뉴클레오티드의 길이를 갖는 규명된 5-말단 및 3-말단 스트레치들은 상기 5-말단 스트레치 (X2BBBS, A형 공식 6-5) 및 3-말단 스트레치(SBBVX3, A형 공식 6-3)의 일반식(generic formula)으로 서술될 수 있으며, 상기 X2은 존재하지 않거나 S 이고, X3은 존재하지 않거나S일 수 있다.
상기 5- 및 3-말단 스트레치의 뉴클레오티드 서열은 A형 SDF-1 결합 핵산의 결합 친화력에 영향을 미친다. 이는 핵산 192-F10 및 192-E10 뿐만 아니라, 192-A10-001의 유도체에 의해서도 나타난다(도 2B). 192-F10 및 192-E10의 중간 뉴클레오티드 서열은 192-B11 및 192-C10와 동일하나, 5-말단 스트레치의 3-말단 및 3-말단 스트레치의 5-말단 상에서 일부 상이함을 포함하고 이로써 감소된 결합 친화력을 나타낸다.
A형 SDF-1 결합 핵산인 192-A10-002의 5- 및 3-말단 뉴클레오티드 CUGUG 및 CGCAG의 GCGCG 및 CGCGC (192-A10-015)으로의 치환은 감소된 결합 친화력을 초래하는 반면에, GCGUG 및 CGCGC(192-A10-008)로의 치환은 192-A10-002와 동일한 결합 친화력을 초래하였다(도 2B). 추가적으로, 네 개의 5- 및 3-말단 뉴클레오티드를 함유한 A형 SDF-1 결합 핵산 192-A10-001의 아홉 개의 유도체들(192-A10-014/-015/-016/-017/-018/-019/-020/-021/-022/-023)은 각각 192-A10-001 또는 그의 유도체 192-A10-008 (둘은 SDF-1에 대해 동일한 결합 친화력을 가짐.)에 대한 결합 친화력을 압타머로서 실험하였다. 모든 분자들은 각각 192-A10-001(말단 나선형을 형성하는 여섯 뉴클레오티드) 또는 다섯 말단 뉴클레오티드 갖는 192-A10-008에 비하여 SDF-1에 대하여 약하거나, 보다 약하거나 또는 보다 더 약한 결합 친화력을 나타냈다(도 2B). 결론적으로, 5- 및 3-말단 스트레치의 뉴클레오티드 숫자 및 서열은 SDF-1에 대한 효과적인 결합을 위해 필수적이다. A형 SDF-1 결합 핵산들인 192-A10-002 및 192-A10-008 에 나타난 바와 같이, 상기 5- 및 3-말단 스트레치의 바람직한 조합은 CUGUG 및 CGCAG(A형 SDF-1 결합 핵산인 192-A10-002의 5- 및 3-말단 스트레치) 및 GCGUG 및 CGCGC(A형 SDF-1 결합 핵산인 192-A10-008의 5- 및 3-말단 스트레치) 이다.
그러나, 실험된 모든 A형 SDF-1 결합 핵산의 5- 및 3-말단 스트레치를 조합함으로써, A형 SDF-1 결합 핵산의 5-말단 스트레치의 일반식은 X1X2NNBV(A형 공식 7-5)이고 A형 SDF-1 결합 핵산의 3-말단 스트레치의 일반식은 BNBNX3X4(A형 공식 7-3)이며,
상기 X1은 R 또는 존재하지 않거나, X2은 S, X3은 S이고, X4은 Y 또는 존재하지 않거나; 또는 X1은 존재하지 않거나, X2은 S 또는 존재하지 않거나, X3은 S또는 존재하지 않고, X4은 존재하지 않는다.
생체 내(in vivo)에서 스피에겔머의 혈장 체류 시간(plasma residence time)을 연장시키기 위하여, 제 2장(chapter 2)에 개시된 바와 같이 스피에겔머들인 192-A10-008을 5-말단에서 40 kDa 폴리에틸렌글리콜(PEG) 기와 공유 결합시켰다. 상기 PEG-기는 SDF-1 유도 화학주성을 저해하는 스피에겔머의 효력에 영향을 미치지 않았다.
1-2. B형 SDF -1 결합 핵산
도 3에 도시된 바와 같이, B형의 SDF-1 결합 핵산의 모든 서열은 서로 혼성화될 수 있는 5- 및 3-말단 스트레치(뉴클리오티드의 제 1차 및 제 2차 말단 스트레치로도 지칭함)에 의해 플랭크된(flanked) 하나의 중간(central) 뉴클레오티드 서열을 포함하고 있다. 그러나, 이와 같은 혼성화는 상기 분자 내에 반드시 필수적으로 주어지지 않는다.
하기에서, 역으로 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어인 B형의 SDF-1 결합 핵산 분자 (‘SDF-1 binding nucleic acid molecules of type B’) 및 B형 SDF-1 결합 핵산 (‘Type B SDF-1 binding nucleic acids’) 또는 B형 SDF-1 결합 핵산 분자 (Type B SDF-1 binding nucleic acid molecules’)은 동의어로 사용된다.
서로 상이한 SDF-1 결합 핵산의 결합력 분석에 기초하여, 상기 중간 뉴클레오티드 서열 및 하기에 개시되는 이들의 뉴클레오티드 서열들은 개별적이고, 보다 바람직하게는 SDF-1에 결합하기에 그 전체로서 필수적이다:
SDF-1 결합 핵산들인 193-C2-001, 193-G2-001, 193-F2-001, 193-G1-002, 193-D2-002, 193-A1-002, 193-D3-002, 193-B3-002, 193-H3-002, 193-E3-002 및 193-D1-002 의 모든 동정된 서열들의 뉴클레오티드 중간 스트레치는 서열인 GUGUGAUCUAGAUGUADWGGCUGWUCCUAGUYAGG (B형 공식 1, 서열번호: 52)을 공유한다. 뉴클레오티드의 중간 스트레치 서열의 한 위치가(뉴클레오티드의 중간 스트레치의 일치 서열: GUGUGAUCUAGAUGUADUGGCUGAUCCUAGUCAGG, Type B형 공식-2, 서열번호: 53) 상이한 SDF-1 결합 핵산들인 193-G2-001, 193-C2-001 및 193-F2-001을 SDF-1 결합 핵산 192-A10-001(풀-다운 결합 어세이법에서 규명된 1.5 nM의 KD치, 0.12 nM의 IC50 값)에 대한 경쟁적 풀-다운 결합 어세이법 상에서 분석되었다. 시험된 각 세 개의 SDF-1 결합 핵산인 193-G2-001, 193-C2-001 및 193-F2A형은 각각은 SDF-1 결합 핵산 192-A10-001와 비교하였을때, 인간 SDF-1에 대해 보다 우세한 결합력을 나타냈으며, 193-G2-001의 결합 친화력은 193-C2-001 및 193-F2-001만큼 좋다(도 3). SDF-1 결합 핵산들인 193-G1-002, 193-D2-002, 193-A1-002, 193-D3-002, 193-B3-002, 193-H3-002, 193-E3-002 및 193-D1-002은 SDF-1 결합 핵산인 193-G2-001와 비교시 인간 SDF-1에 대하여 감소된 결합력을 나타냈다. SDF-1 결합 핵산인 193-G2-001 인간 SDF-1에 대한 결합 친화력으로 특징화된다. 평형 결합 상수 KD 치는 풀-다운 결합 어세이법(KD=0.3 nM) 를 이용하여 규명되었다. 193-G2-001에 대한 0.08 nM의 IC50 값(50% 저해 농도)은 시험관 내 세포배양 화학주성 어세이법을 이용하여 측정되었다.
SDF-1 결합 핵산의 5-말단 스트레치의 여섯 뉴클레오티드 중 다섯 또는 여섯 개는 SDF-1 결합 핵산의 3-말단 스트레치의 여섯 뉴클레오티드 중 각각 넷, 다섯 또는 여섯 뉴클레오티드와 혼성화(hybridize)되어 말단 나선형(terminal helix)을 형성할 수 있다. 상기 뉴클레오티드들은 일부 위치에서 가변성이 있음에도 불구하고, 상이한 뉴클레오티드는 각 5- 및 3-말단 스트레치의 여섯 뉴클레오티드 중 넷, 다섯 또는 여섯 개의 뉴클레오티드로 혼성화를 허용한다. 도 3에 도시된 바와 같이, SDF-1 결합 핵산의 상기 5-말단 및 3-말단 스트레치는 5-말단 스트레치(‘X1X2GCRWG’ 여기에서 X1 는 ‘A’ 또는 존재하지 않고, X2 는 ‘G’임) 및 3-말단 스트레치(‘KRYSCX3X4‘ 여기에서 X3 는 ‘G’, X4 는 ‘U’ 또는 존재하지 않음)의 일반식(generic formula)으로 요약될 수 있다. SDF-1 결합 핵산들인 193-G1-002, 193-D2-002, 193-A1-002 및 193-D3-002은 193-C2-001, 193-G2-001 및 193-F2-001와 동일한 중간 뉴클레오티드 서열을 공유함에도 불구하고 SDF-1에 대한 약한 결합 친화력을 갖고 있다(도 3). SDF-1 결합 핵산들인 193-G1-002, 193-D2-002, 193-A1-002 및 193-D3-002의 불리한 결합력은 5- 및 3-말단 스트레치의 뉴클레오티드의 개수 및 서열에 기인할 수 있다. SDF-1 결합 핵산의 절단형 유도체(truncated derivatives)인 193-G2-001 및 193-C2-001는 본래의 분자 193-G2-001 및 193-G2-012에 대한 경쟁적 풀-다운 결합 어세이법 상에서 분석되었다(도 4A 및 4B). 상기 실험들은 SDF-1 결합 핵산인 193-G2-001 및 193-C2-001의 여섯 말단 뉴클레오티드(5말단: AGCGUG; 3말단: UACGCU)의 다섯 뉴클레오티드(5말단: GCGUG; 3말단: UACGC)로의 감축이 유사한 결합 친화력을 나타냄을 확인하였다(193-C2-002 및 193-G2-012). 평형 해리 상수(equilibrium dissociation constant) KD 치는 풀-다운 결합 어세이법(KD=0.3 nM) 를 이용하여 규명되었다. 넷 뉴클레오티드(5말단: CGUG; 3말단: UACG ; 193- C2 -003) 또는 그 이하 수의 뉴클레오티드(193-C2-004, 193-C2-005, 193-C2-006, 193-C2-007)로의 감축이 SDF-1에 대하여 감소된 결합 친화력을 경쟁적 풀-다운 결합 어세이법를 이용하여 확인하였다 (도 4A). 5말단 및 3말단에서 5개 말단 뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열은 SDF-1 결합 핵산의 결합 친화력에 영향을 미친다.
5’- 및 3’-말단 뉴클레오티드인 ‘GCGUG’ 및 ‘UACGC’ (193-C2-002, 193-G2-12)의 ‘GCGCG’ 및 ‘CGCGC’(193-G2-013)으로의 치환은 감소된 결합 친화력을 초래한다. 추가적으로, 4개 염기쌍 뉴클레오티드(base-pairing nucleotides) (193-G2-014/ -015/ -016/ -017) 길이의 말단 헬릭스(terminal helix)를 갖는 SDF-1 결합 핵산의 193-G2-001 4개의 상이한 유도체들에 대하여 시험하였다. 이들 모두는 SDF-1에 대하여 감소된 결합 친화력을 나타냈다 (도 4B).
따라서, 뉴클레오티드의 5’- 및 3’-말단의 서열 및 길이는 SDF-1에 대한 효과적인 결합에 필수적이다. 도 3A 및 4B에 도시된 SDF-1 결합 결합 핵산 유도체들인 193-C2-003 및 193-G2-012 의 다섯 및 네 개 뉴클레오티드 길이를 갖는 5‘-말단 및 3’-말단 스트레치는 5’-말단 스트레치(terminal stretch, ‘X1X2SSBS’)의 일반식으로 표기되고, 여기에서, X1 은 존재하지 않고, X2 I는 존재하지 않거나 또는 ‘G’이고, 및 3’-말단 스트레치(terminal stretch, ‘BVSSX3X4’)의 일반식으로 표기되고, 여기에서 X3는 존재하지 않거나 또는 ‘C’ 이고 X4 존재하지 않는 것이다. SDF-1 결합 핵산들 193-G2-001 및 193-C2-01 및 이들의 유도체들 193-G2-012 및 193-C2-002에서 나타난 바와 같이, 5’- 및 3’-말단 스트레치의 바람직한 조합은 상기 말단 스트레치가 ‘X1X2GCGUG’ (5’-말단 스트레치) 및 ‘UACGCX3X4’ (3’-말단 스트레치)이고, 여기에서 X1 는 ‘A’ 또는 존재하지 않고, X2 는 ‘G’ 이고 X3 는 ‘C’ 이고 ’X4 는 ‘U’ 또는 존재하지 않다.
모든 시험된 SDF-1 결합 핵산의 5’- 및 3’-말단 스트레치를 조합시, SDF-1 결합 핵산의 5’-말단 스트레치에 대한 일반식은 ‘X1X2SVNS’ 이며 SDF-1 결합 핵산의 3’-말단 스트레치에 대한 일반식은 ’BVBSX3X4’ 이며,
여기에서,
X1 는 ‘A’ 또는 존재하지 않고, X2 는 ‘G’이고, X3 는 ‘C’이고 X4 는 ‘U’ 또는 존재하지 않으며;
또는 X1 는 존재하지 않고, X2 는 ‘G’ 또는 존재하지 않으며, X3 는 ‘C’ 이거나 또는 존재하지 않으며 X4 는 존재하지 않다.
생체 내(in vivo)에서 스피에겔머의 혈장 체류 시간(plasma residence time)을 연장시키기 위하여, 제 2장(chapter 2)에 개시된 바와 같이 스피에겔머들인 193-G2-012을 5-말단에서 40 kDa 폴리에틸렌글리콜(PEG) 기와 공유 결합시켰다(PEG화 핵산 분자: 193-G2-012-5’-PEG 는 NOX-A12이라고도 지칭됨). 상기 PEG-기는 SDF-1 유도 화학주성을 저해하는 스피에겔머의 효력에 영향을 미치지 않았다. 상기 PEG화(PEGylated) 스피에겔머 NOX-A12를 시험관내 (in vitro) 화학주성-어세이법(chemotaxis-assay)으로 세포 배양물에서 분석하였고 SDF-1 유도 화학주성의 저해율이 측정되었다 (IC50 : 0.2 nM). 상기 PEG화 스피에겔머 NOX-A12를 비아코아 측정법(Biacore measurement)에서 분석하고 결합 상수(binding constant; KD, 0.2 nM)로 측정되었다.
1-3. C형 SDF -1 결합 핵산
도 12에 도시된 바와 같이, C형의 SDF-1 결합 핵산의 모든 서열은 서로 혼성화될 수 있는 5- 및 3-말단 스트레치(뉴클리오티드의 제 1차 및 제 2차 말단 스트레치로도 지칭함)에 의해 플랭크된(flanked) 하나의 중간(central) 뉴클레오티드 서열을 포함하고 있다. 그러나, 이와 같은 혼성화는 상기 분자 내에 반드시 필수적으로 주어지지 않는다.
하기에서, 역으로 지시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어인 C형의 SDF-1 결합 핵산 분자 (‘SDF-1 binding nucleic acid molecules of type C’) 및 C형 SDF-1 결합 핵산 (‘Type C SDF-1 binding nucleic acids’) 또는 C형 SDF-1 결합 핵산 분자 (Type C SDF-1 binding nucleic acid molecules’)은 동의어로 사용된다.
정의된 박스들 또는 스트레치들의 서열들은 SDF-1에 대한 결합 친화력에 영향을 미치는 C형의 SDF-1 결합 핵산들 간에 상이할 수 있다. C형 SDF-1 결합 핵산으로 요약된 서로 상이한 SDF-1 결합 핵산의 결합력 분석에 기초하여, 상기 핵심 뉴클레오티드 서열 및 하기에 개시되는 이들의 뉴클레오티드 서열들은 개별적이고, 보다 바람직하게는 SDF-1에 결합하기에 그 전체로서 필수적인 것이다:
C형 SDF-1 결합 핵산의 모든 동정된 서열들의 중간 뉴클레오티드 서열은 서열 GGUYAGGGCUHRX A AGUCGG (C형 공식 1; Type C Formulae-1; 서열번호: 108)을 공유하며, 상기 XA은 존재하지 않거나 또는 A일 수 있다. C형 SDF-1 결합 핵산인 197-D1을 제외하고는, C형 SDF-1 결합 핵산의 동정된 모든 서열들의 중간 뉴클레오티드 서열은 뉴클레오티드 서열 GGUYAGGGCUHRAAGUCGG (C형 공식 2, 서열번호: 109)을 공유한다. 뉴클레오티드의 중간 스트레치 서열 내에서 한 개의 뉴클레오티드A를 소실하고 있으면서 SDF-1에 결합하고 있는 C형 SDF-1 결합 핵산 197-D1 (뉴클레오티드의 중간 스트레치 서열: GGUUAGGGCUAA, 서열번호: 110)은 호환적인 뉴클레오티드의 중간 스트레치 서열 ( GGUYAGGGCUHR , C형 공식 3, 서열번호: 110)로 종결되게 한다. 당초에, 도 5에 도시된 바와 같은, 모든 C형 SDF-1 결합 핵산은, A형 SDF-1 결합 핵산 192-A10-001에 대해 경쟁적 풀-다운 결합 어세이법 상에서 분석되었다 (풀-다운 어세이법 및 표면 플라즈몬 공명 기기에 의해 규명된 KD=1.5 nM; IC50=0.12 nM). C형 SDF-1 결합 핵산인 191-D5-001, 197-B2, 190-A3-001, 197-H1, 197-H3 및 197-E3은 경쟁적 실험상에서 192-A10-001보다 약한 결합 친화력을 나타내었다. 191-A5, 197-B1, 197-D1, 197-H2 및 197-D2은 보다 약한 결합 친화력을 나타내었다(도 5). 이들 분자 또는 그 유도체들은 추가적인 경쟁적 풀-다운 결합 어세이법, 플라즈몬 공명 기기 및 시험관 내 화학주성 어세이법에 의해 추가적으로 특정되었다. 인간 SDF-1에 대한 결합 친화력으로 C형 SDF-1 결합 핵산인 191-D5-001을 특징화된 반면에, 평형 결합 상수 KD치는 표면 플라즈몬 공명 기기(KD=0.8 nM)에 의해 규명되었다. 191-D5-001을 위한 0.2 nM의 IC50 값(50% 저해 농도)은 시험관내 세포배양 화학주성 어세이법을 이용하여 측정되었다. 인간 SDF-1에 대한 C형 SDF-1 결합 핵산인 197-B2의 결합 친화력은 표면 플라즈몬 공명 기기(KD=0.9 nM)에 의해 규명되었으며, 0.2 nM의 IC50 값(50% 저해 농도)은 시험관내 세포배양 화학주성 어세이법을 이용하여 측정되었다. 이러한 데이터는 C형 SDF-1 결합 핵산인 191-D5-001 및 197-B2이 SDF-1에 대해 유사한 결합 친화력을 갖고 있음을 나타낸다(도 5 및 8). C형 SDF-1 결합 핵산인 190-A3-001은 17개 뉴클레오티드의 5-말단 스트레치(‘CGUGCGCUUGAGAUAGG‘, 서열번호: 220) 및 12개 뉴클레오티드의 3-말단 스트레치 (‘CUGAUUCUCACG’, 서열번호: 221) 를 포함하고 있으며, 여기에서 한편으로는 5-말단 스트레치의 5-종단(end)에 있는 4개 뉴클레오티드 및 3-말단 스트레치의 3-종단(end)에 있는 4개 뉴클레오티드는 서로 혼성화(hybridize)하여 말단 나선형을 형성할 수 있다. 추가적으로, 5-말단 스트레치 상의 뉴클레오티드 UGAGA는 3-말단 스트레치 상의 뉴클레오티드 UCUCA에 혼성화되어 말단 나선형을 형성할 수 있다. 190-A3-001 분자의 5-말단 스트레치의 9개 뉴클레오티드(‘ UGAGAUAGG ’) 및 3-말단 스트레치(‘CUGAUUCUC’) 의 10개 뉴클레오티드(‘CUGAUUCUCA’, 서열번호: 222) 로의 감축은 SDF-1에 대한 결합 친화력에 아무런 영향도 미치지 못한다 (190-A3-003; 도 13). 190-A3-001 분자의 5-말단 스트레치의 8개 뉴클레오티드(‘GAGAUAGG’) 및 3-말단 스트레치의 10개 뉴클레오티드(‘CUGAUUCUC’)로의 감축은 SDF-1에 대한 결합 친화력에 아무런 영향도 미치지 못한다 (190-A3-004; 도 6). 190-A3-004의 평형 결합 상수(equilibrium binding constant) KD치는 풀-다운 어세이법(KD=4.6 nM) 및 표면 플라즈몬 공명 기기(KD=4.7 nM)을 이용하여 규명되었다. 190-A3-004에 대한 0.1 nM의 IC50 값(50% 저해 농도)은 시험관내 세포배양 화학주성 어세이법을 이용하여 측정되었다. 그러나 5-말단 스트레치 상에서 두 뉴클레오티드로의 절단은 매우 강한 결합 친화력의 감소를 유발한다(190-A3-007; 도 6). C형 SDF-1 결합 핵산 191-D5-001, 197-B2 및 197-H1 (뉴클레오티드의 중간 스트레치 서열: GGUUAGGGCUAGAAGUCGG , 서열번호: 57), 197-H3/191-A5 (뉴클레오티드의 중간 스트레치 서열: GGUUAGGGCUCGAAGUCGG , 서열번호: 58) 및 197-E3/197-B1 (뉴클레오티드의 중간 스트레치 서열: GGUUAGGGCUUGAAGUCGG , 서열번호: 59)는 거의 동일한 뉴클레오티드의 중간 스트레치 서열(C형 공식 뉴클레오티드 서열: GGUUAGGGCUHGAAGUCGG , 서열번호: 111)을 공유한다. 191-D5-001, 197-B2 및 197-H1은 유사한 5- 및 3-말단 스트레치를 공유하지 않는다(197-H3및 197-E3는 197-B2와 동일한 5- 및 3-말단 스트레치를 갖고 있음). 그러나, 5-말단 스트레치의 열 개중 열 개(197-B2, 197-E3, 197-H3) 또는 열 개중 아홉 개(191-D5-001, 197-H1)의 뉴클레오티드는 3-말단 스트레치의 열 개 뉴클레오티드 중 각각의 열(197-B2, 197-E3, 197-H3) 또는 열 개중 아홉 개(191-D5-001, 197-H1)와 혼성화될 수 있다(도 5). 그러므로, 상기에 기재된 C형 SDF-1 결합 핵산들인 197-B2, 191-D5-001, 197-H1, 197-E3 및 197-H3, 또한 197-H3뿐만 아니라 191-A5, 197-B1, 197-H2, 197-D1 및 197-D2의 5-말단 스트레치는 공통적인 일반적 뉴클레오티드 서열 RKSBUSNVGR(C형 공식 5-5, 서열번호: 138)을 포함한다. 상기에 기재된 C형 SDF-1 결합 핵산들인 197-B2, 191-D5-001, 197-H1, 197-E3 및 197-H3, 또한 191-A5, 197-B1, 197-H2, 197-D1 및 197-D2의 3-말단 스트레치는 공통적으로 일반적 뉴클레오티드 서열 YYNRCASSMY(C형 공식 5-3, 서열번호: 139)을 포함하며, 여기에서 상기 C형 SDF-1 결합 핵산들인 197-B2, 191-D5-001, 197-H1, 197-E3 및 197-H3의 5및 3-말단 스트레치가 바람직하다. 상기 C형 SDF-1 결합 핵산들인 197-B2, 191-D5-001, 197-H1, 197-E3 및 197-H3의 바람직한 5- 및 3-말단 스트레치는 일반식 RKSBUGSVGR(C형 공식 6-5; 5-말단 스트레치, 서열번호: 140) 및 YCNRCASSMY(C형 공식 6-3; 3-말단 스트레치, 서열번호: 141)으로 요약될 수 있다. C형 SDF-1 결합 핵산인 191-D5-001의 절단형 유도체(truncated derivatives)은 합성되고 원래 분자인 191-D5-001에 대한 경쟁적 풀-다운 결합 어세이법 상에서 분석되었다(도 7A, 도 7B). 처음에는 도 14A에 도시된 바와 같이, 5- 및 3-말단 스트레치의 열 뉴클레오티드(191-D5-001)의 길이는 각각 일곱 뉴클레오티드(191-D5-004)로 축소되었으며, 상기 5-말단 스트레치 및 3-말단 스트레치의 각각 열 개중 아홉 개 뉴클레오티드(191-D5-001) 또는 일곱 개중 여섯 개 뉴클레오티드(191-D5-004)는 각각 서로 간에 혼성화 될 수 있다. 상기 5- 및 3-말단 스트레치의 일곱 개 뉴클레오티드로의 감축(여기에서, 일곱 뉴클레오티드 중의 여섯은 서로 간에 혼성화될 수 있음)는 각각 SDF-1에 대한 감소된 결합 친화력을 초래하였다(191-D5-004). C형 SDF-1 결합 핵산인 191-D5-004의 말단 스트레치는 변형되었으며, 상기 191-D5-004의 3-말단 스트레치 내의 짝지워지지 않는 뉴클레오티드 A를 C로 치환하였다(191-D5-005). 상기 변형(modification)은 결합력의 향상을 유발하였다. 상기 유도체, C형 SDF-1 결합 핵산인 191-D5-005는 SDF-1에 대하여 191-D5-001와 유사한 결합력을 나타냈다. 더 나아가, 5- 및 3-말단 스트레치의 각각 다섯 개 뉴클레오티드로의 절단은 전체 스물아홉 개 뉴클레오티드의 길이를 갖는 분자로 이끌었다(191-D5-007). 191-D5-001와 C형 SDF-1 결합 핵산들인 197-B2, 191-D5-001, 197-H1, 191-A5, 197-H3, 197-B1, 197-E3, 197-D1, 197-H2 및 197-D2 간의 유사성에 기인하거나 191-D5-007의 데이터에 기인하여, 5-말단 스트레치에 대한 뉴클레오티드 서열 CGGGA 와 3-말단 스트레치에 대한 뉴클레오티드 서열 UCCCG이 성공적으로 실험 수행되었던, 상기 5- 및 3-말단 스트레치는 원칙적으로 다섯 뉴클레오티드로 절단될 수 있음을 짐작할 수 있다(C형 SDF-1 결합 핵산인 191-D5-007). C형 SDF-1 결합 핵산인 191-D5-007은 놀랍게도 SDF-1에 대해 191-D5-001 보다 더 우세하게 결합한다(경쟁적 결합 어세이법을 이용하여 압타머 수준 상에서 규명됨). 191-D5-007의 평형 결합 상수 KD치는 풀-다운 결합 어세이법(KD=2.2 nM) 및 표면 플라즈몬 공명 기기(KD=0.8 nM)를 이용하여 규명되었다. 191-D5-007에 대한 0.1 nM의 IC50 값(50% 저해 농도)은 시험관내 세포배양 화학주성 어세이법을 이용하여 측정되었다. 더 나아가, 양방향의 말단 스트레치도 네 뉴클레오티드로 절단되었다(191-D5-010, 도 7A).
4개의 뉴클레오티드들의 5-말단 및 3-말단 스트레치를 갖는 C형 SDF-1 결합 핵산들의 추가적인 유도체들인 191-D5-001 (191-D5-017/-024/-029)은 191-D5-007에 대하여 경쟁적 결합 어세이법 상에서 SDF-1에 대한 감소된 결합 친화성을 또한 나타냈다 (도 7B). 각각 5개의 뉴클레오티드 길이를 갖는 호환적인 5-말단 및 3-말단 스트레치들도 추가적으로 시험하였다(191-D5-017-29a, 191-D5-017-29b, 191-D5-019-29a, 191-D5-024-29a, 191-D5-024-29b). 상기 유도체의 5-말단 스트레치의 일반식은 XSSSSV(C형 공식 7-5) 및 3-말단 스트레치의 일반식은 BSSSXS(C형 공식 7-3)이며, 상기 XS은 존재하지 않거나 또는 S이다. 시험된 다섯 변형체(variants) 중 두 개는 191-D5-007와 SDF-1에 대한 동일한 결합 친화력을 나타내었다(191-D5-024-29a, 191-D5-024-29b; 도 7B). SDF-1에 대한 최적의 결합 친화력을 나타내며, 다섯 뉴클레오티드(191-D5-007, 191-D5-024-29a, 191-D5-024-29b)의 각각 5-말단 및 3-말단 스트레치에 포함하는 191-D5-001-유도체들의 5-말단 및 3-말단 스트레치의 서열은 일반식으로 요약될 수 있다(5-말단 스트레치: SGGSR, C형 공식 8-5; 3-말단 스트레치: YSCCS, C형 공식 8-3).
C형 SDF-1 결합 핵산인 197-B2의 절단 유도체들은 원래 분자인 197-B2 및 191-D5-007에 대해 경쟁적 풀-다운 결합 어세이법 상에서 분석되었다(도 7). 191-D5-007에 대해 경쟁적 풀-다운 결합 어세이법을 이용함으로써, 197-B2는 191-D5-007와 SDF-1에 대한 동일한 결합 친화력을 나타냄을 확인하였다. 상기 5- 말단 및 3-말단 스트레치들은 열 개 뉴클레오티드 (197-B2)를 5개 뉴클레오티드(197-B2-005)로 감소시켜도 결합 친화도상의 손실이 없으며 여기에서 5-말단 스트레치 및 3-말단 스트레치의 뉴클레오티드들은 상호 혼성화가 가능하다. 197-B2-005의 5-말단(GCGGG) 및 3-말단(CCUGC) 스트레치가 197-B2-006의 GCCGG(5-말단 스트레치) 및 CCGGC(3-말단 스트레치)으로 대체되면, SDF-1에 대한 결합 친화력은 온전히 지속된다. 197-B2 및 191-D5-001 (및 그들의 유도체들)은 동일한 핵심 뉴클레오티드 서열을 공유하므로, 각각 네 개의 뉴클레오티드의 길이를 갖는 5- 및 3-말단 스트레치를 갖는 191-D5의 다양한 유도체들이 실험 수행함으로써, 5- 및 3-말단 스트레치의 추가적인 절단은 생략되었다. 더 나아간 두 유도체들은 각각 5- 및 3-말단(5- 및 3-말단 스트레치)에 여섯 개의 뉴클레오티드를 포함하도록 설계되었다. 양 분자(197-B2-006-31a 및 197-B2-006-31b)의 SDF-1에 대한 결합 친화력은 191-D5-007 및 197-B2-006에 나타난 바와 같이 동일하다(도 15). SDF-1에 대해 최적의 결합 친화력을 나타내며 각각 다섯 개의 뉴클레오티드를 갖는 5-말단 및 3-말단 스트레치를 포함하는 197-B2 유도체들의 5-말단 및 3-말단 스트레치의 서열은 일반식(5-말단 스트레치: GCSGG, C형 공식 9-5; 3-말단 스트레치: CCKGC, C형 공식 9-3)으로 요약될 수 있다. C형 SDF-1 결합 핵산인 191-D5-001(5-말단 스트레치: SGGSR, C형 공식 8-5; 3-말단 스트레치: YSCCS, C형 공식 8-3) 및 197-B2(5-말단 스트레치: GCSGG, C형 공식 9-5; 3-말단 스트레치: CCKGC, C형 공식 9-3)의 절단 유도체들의 바람직한 5- 및 3-스트레치들을 조합함으로써, 상기 5-말단 및 3-말단 스트레치의 공통된 바람직한 일반식은 SSSSR(5-말단 스트레치, C형 공식 10-5) 및 YSBSS'(3-말단 스트레치: C형 공식 10-3)임을 확인하였다.
PEG화 스피에겔머 197-B2-006 및 191-D5-007를 시험관내 화학주성 시험법상에서 세포배양물로부터 분석하였다. PEG-기는 SDF-1 유도 화학주성을 저해하는 스피에겔머의 효력에 영향을 미치지 않았다.
생체 내(in vivo)에서 스피에겔머의 혈장 체류 시간(plasma residence time)을 연장시키기 위하여, 제 2장(chapter 2)에 개시된 바와 같이 스피에겔머들인 197-B2-006을 5-종단에서 40 kDa 폴리에틸렌글리콜(PEG) 기와 공유 결합시켰다. 상기 PEG화(PEGylated) 스피에겔머 197-B2-006 및 191-D5-007를 시험관내 (in vitro) 화학주성-어세이법(chemotaxis-assay)으로 세포 배양물에서 분석하였다. 상기 PEG-기는 SDF-1 유도 화학주성을 저해하는 스피에겔머의 효력에 영향을 미치지 않았다.
1-4. D형 SDF -1 결합 핵산
추가적으로, A형, B형, 및 C형의 SDF-1 결합 모티프(motif)을 공유하지 않은 더 나아간 세 개의 SDF-1 결합 핵산이 동정되었고 이를 본원에서는 D형(type D):이라 지칭한다. 이들은 풀-다운 결합 에세이법을 이용하여 압타머로서 분석되었다(도 9).
도 1 내지 9에 나타난 임의의 서열들은 이들의 절단된 형태 및 연장된 형태를 포함하여 본 발명에 따른 핵산들이나, 비록 각각 절단되고 신장된 핵산 분자 형태라도 상기 학산 분자들이 목표에 결합할 수 있는 능력을 갖는다는 전제하에 이들도 포함한다는 것으로 이해되어야 할 것이다.
실시예 2. 압타머 및 스피에겔머의 합성 및 유도체화
2-1. 소규모 합성법
압타머 및 스피에겔머들은 2TBDMS RNA 포스포라미다이트(phosphoramidite) 화학법(Damha 및 Ogilvie, 1993)을 이용한 ABI 394 합성기로 고체-상 합성법(solid-phase synthesis)으로 생산하였다. D- 및 L- 입체 배위를 갖는 rA(N-Bz)-, rC(Ac)-, rG(N-ibu)-, 및 rU-포스포라미다이트들은 회사(ChemGenes, Wilmington, MA)에서 구입하였다. 압타머 및 스피에겔머들은 겔 전기영동법(Gel electrophoresis)로 정제하였다.
2-2. 대규모 합성법 및 변형
상기 스피에겔머들은 2TBDMS RNA 포스포라미다이트(phosphoramidite) 화학법(Damha 및 Ogilvie, 1993)을 이용한 합성기(synthesizer, Amersham Biosciences; General Electric Healthcare, Freiburg)로 고체-상 합성법(solid-phase synthesis)으로 생산하였다. L-rA(N-Bz)-, L-rC(Ac)-, L-rG(N-ibu)-, 및 L-rU- 포스포라미다이트들은 회사(ChemGenes, Wilmington, MA)에서 구입하였다. 5-아미노-변형기 (amino-modifier)는 회사(American International Chemicals Inc. Framingham, MA, USA)에서 구입하였다. 상기 스피에겔머의 합성은 L-riboG, L-riboC, L-riboA, L-riboU 각각 변형된 CPG 공극 크기 1000 Å (Link Technology, Glasgow, UK)로 출발하였다. 결합 공정을 위하여 (사이클 당 15 분), 0.3 M 아세토니트릴 중 벤질티오테트라졸 (benzylthiotetrazolem American International Chemicals Inc., Framingham, MA, USA) 및 3.5 당량의 개개 아세토니트릴 중 0.2 M 포스포라미다이트 용액을 사용하였다. 산화-캡핑 사이클 (oxidation-capping cycle)이 사용되었다. 올리고뉴클레오티드 합성을 위한 추가적인 표준 용매 및 시약들은 회사(Biosolve, Valkenswaard, NL)에서 구입하였다. 스피에겔머는 DMT-ON 합성되고; 탈보호화한 후에, Source 15RPC 배양액(Amersham)을 이용한 예비(preparative) RP-HPLC(Wincott F. 등. 1995)을 통해 정제되었다. 5DMT-그룹은 80% 초산으로 제거되었다(실온에서 90분). 연속적으로, 수용성 2 M NaOAc 용액을 가하고 상기 스피에겔머는 5 K 재생 셀룰로오스 막(Millipore, Bedford, MA)을 이용한 탄젠셜-유동 여과법(tangential-flow filtration)으로 탈염되었다.
2-3. PEG 화 반응( PEGylation )
생체 내 실험(in vivo)에서 스피에겔머의 혈장 체류 시간(plasma residence time)을 연장시키기 위하여, 상기 스피에겔머를 40 kDa 폴리에틸렌글리콜 (PEG)기의 5-말단에 공유 결합시켰다.
PEG화 반응을 위하여(PEG화 반응 방법의 구체적인 기술은 유럽특허 출원 제 1 306 382호를 참고), 상기 정제한 5-아미노 변형된 스피에겔머(5-amino modified Spiegelmer)는 물(2.5 ml), DMF(5 ml) 및 완충액 A(5 ml; 구연산ㆍ1 수화물 [7 g], 붕산 [3.54 g], 인산 [2.26 ml] 및 1M NaOH [343 ml]를 혼합하고 물을 가하여 1 L의 최종 용량을 만들고; 1 M 염산으로 pH=8.4로 적정하였다)의 혼합물에 용해시켰다.
상기 스피에겔머 용액의 pH는 1 M NaOH으로 8.4로 적정하였다. 그리고, 40 kDa PEG-NHS 에스테르(JenKem Technology USA Inc., Allen, TX)를 최대 수율이 75-85%에 도달하도록 0.25 당량의 6 부분(portions)으로 매 30분씩 37℃에서 첨가하였다. 상기 반응 혼합물의 pH는 PEG-NHS 에스테르 첨가 중에 1 M NaOH로 8-8.5를 유지토록 하였다.
상기 반응 혼합물을 4 ml 우레아(urea) 용액(8 M), 4 ml 완충액 B(수중 0.1 M 트리에틸암모니움 아세테이트)와 혼합하고, 15분간 95℃로 가열하였다. 그리고 상기 PEG화된 스피에겔머를 아세토니트릴 경사법(완충액 B; 완충액 C: 아세토니트릴 중 0.1 M 트리에틸암모늄 아세테이트)을 이용하여 Source 15RPC 배양액(Amersham)으로 RP-HPLC로 정제하였다. 과잉의 PEG를 5% 완충액 C로, PEG화 스피에겔머는 10-15% 완충액 C로 용출시켰다. 95% 이상의 순도(HPLC로 측정)를 갖는 목적 분획물은 회수시켜 3 M NaOAC 40 ml와 혼합하였다. 상기 PEG화된 스피에겔머는 탄젠셜-유동 여과법 (tangential-flow filtration; 5 K 재생 셀룰로오스 막 (Millipore,Bedford, MA)을 이용)으로 탈염하였다.
2-4. HES 화 ( HESylation )
생체 내 실험(in vivo)에서 스피에겔머의 혈장 체류 시간(plasma residence time)을 연장시키기 위하여, 상기 스피에겔머를 130 kDa 이상의 다양한 분자량 및 0.5 이상의 치환 정도(substitution degree)를 갖는 하이드록시 에틸 전분(HES)에 공유 결합시켰다. 접합의 바람직한 부위는 스피에겔머의 5-말단이다.
HES화 반응을 위하여(핵산의 HES화 반응 방법의 구체적인 기술은 독일특허 출원 제 101 12 825 A1, 및 D/L-핵산에 대해서는 PCT WO 02/080979A2를 참고), 정제한 5-아미노 변형된 스피에겔머(5-amino modified Spiegelmer)는 소듐 비카르보네이트(0.3 M, 1 ml)에 용해되었으며, pH는 8.5로 적정하였다.
실시예 3. 결합 상수의 측정(풀-다운 결합 어세이법 )
3-1. 직접 풀-다운 결합 어세이법( Direct pull - down binding assay )
비오틴화된 인간 D-SDF-1에 대한 압타머의 친화도는 풀-다운 어세이 포메트(pull-down assay format)을 이용하여 37℃에서 측정하였다. 압타머들은 [γ-32P]-표지 ATP(Hartmann Analytic, Braunschweig, 독일)을 이용하여 T4 폴리뉴클레오티드 키나제(polynucleotide kinase; Invitrogen, Karlsruhe, 독일)에 의해 5포스페이트 표지화되었다. 표지 압타머의 특이적 방사능은 200,000800,000 cpm/pmol이었다. 압타머들은 선택용 완충액 (20 mM Tris-HCl pH 7.4; 137 mM NaCl; 5 mM KCl; 1 mM MgCl2; 1 mM CaCl2; 0.1% [w/vol] Tween-20) 중에서 다양한 농도의 비오틴화 인간 D-SDF-1과 저농도에서 평형에 도달하도록 4-12시간동안 37℃에서 10, 20, 30 또는 40 pM 농도에서 변성(denaturation) 및 재생(renaturation)후에 배양되었다. 선택용 완충액은 사용된 플라스틱 용기 또는 고정화 매트릭스(matrix) 표면으로의 결합 파트너들의 흡수를 억제하기 위하여 10 ㎍/ml 인간 혈청 알부민(human serum albumin; Sigma-Aldrich, Steinheim, 독일) 및 10 ㎍/ml 효모 RNA (Ambion, Austin, 미국)를 첨가하였다. 비오틴화 인간 D-SDF-1의 농도 범위는 8 pM 내지 100 nM으로 조정하고; 총 반응 부피는 1 ml였다. 펩타이드 및 펩타이드-압타머 복합체는 6㎕ 총 부피에서 선택용 완충액으로 예비-평형화(pre-equilibrated) 및 재현탁된 1.5㎕ 스트렙타비딘 울트라링크 플러스 입자(Streptavidin Ultralink Plus particles; Pierce Biotechnology, Rockford, 미국)상에 고정화시켰다. 상기 입자들을 열 혼합기(thermomixer)에서 각각의 온도로 30분간 현탁 상태로 유지하였다. 고정화된 방사능은 상등액을 분리하고 적절한 세척을 마친 후에 신틸레이션 계수기(scintillation counter)로 정량화하였다. 고정화된 방사능은 상등액을 떼어 내고 적절한 세촉 후에 판독기(scintillation counter)로 정량화하였다. 상기 결합의 백분율은 비오틴화 인간 D-SDF-1 농도에 따라 구도되었고 해리상수(dissociation constants)는 1:1 화학양론으로 추정되는 소프트웨어 알고리즘(software algorithms)을 이용하여 계산되었다(GRAFIT; Erithacus Software; Surrey 영국).
3-2. 경쟁적 풀-다운 결합 어세이법( Competitive pull - down binding assay )
서로 상이한 D-SDF-1 결합 압타머들을 서로 비교하기 위하여, 경쟁적 서열화 어세이법(competitive ranking assay)이 수행되었다. 상기 목적을 위하여 입수가능한 가장 근접한 압타머를 방사선으로 표지하고(상기 참조) 표준물질로 제공하였다. 변성 및 재생과정 후에, 경쟁 없이 고정화 후에 펩티드에 5-10% 결합하고 뉴트라비딘 아가로스(NeutrAvidin agarose; Pierce사) 또는 스트렙타비딘 울트라링크 플러스(Streptavidin Ultralink Plus; Pierce사)로 세척하는 조건하에서 1 ml 선택용 완충액으로 37℃에서 배양하였다. 과량의 변성 및 재생된 비-표지된(non-labeled) D-RNA 압타머 변이체(aptamer variants)들을 표지된 표준 물질 압타머와 함께 평형 결합반응(parallel binding reactions)을 수행하도록 여러 농도(예를 들어 2, 10, 및 50 nM)로 첨가하였다. 시험될 상기 압타머들은 목표 결합을 위해 상기 표준 물질 압타머들과 경쟁하였고, 결국, 이들의 결합 특성에 따라서 상기 결합 신호를 감소시켰다. 본 어세이법에서 가장 활성이 강한 압타머는 추후의 압타머 변이체의 비교분석시험을 위해 새로운 표준물질로 제공될 수 있을 것이다.
실시예 4. 표면 플라즈몬 공명 기기에 의한 결합 분석
비아코아 2000 기기(Biacore AB, Uppsala, 스웨덴)는 인간 SDF-1α에 대한 스피에겔머의 결합력을 분석하는데 사용하였다. 아민기에 의하여 SDF-1α의 결합반응이 완성될 때에, 상기 단백질을 간섭하는 아민기들을 제거하기 위하여 1-2시간동안 물에서 투석을 수행하였다(Millipore VSWP 혼합 셀룰로오스 에스테르; 공극 크기, 0.025 ). CM4 센서 칩(sensor chips; Biacore AB, Uppsala, 스웨덴)을 5 ㎕/분 유속으로 0.4 M NHS 및 0.1 M EDC의 1:1 희석액을 35-㎕ 주사함으로서 단백질 결합반응 전에 활성화시킨다. 그런 후, 인간 MCP-1 또는 인간 SDF-1a 을 기기 반응이 1000 내지 2000 RU (상대적 단위) 범위 내에 도달시까지 2 ㎕/분 유속으로 0.1-1.5 ㎍/ml의 농도로 주사하였다. 미반응된 NHS 에스테르는 5 ㎕/분 유속으로 35 ㎕ 의 에탄올아민 염산 용액(pH 8.5) 주사함으로서 비활성화시켰다. 상기 센서 칩을 결합 완충액(binding buffer)으로 2배로 채우고 기저선이 안정될 때까지 약 1 내지 2시간동안 10 ㎕/분으로 평형화시켰다. 모든 단백질을 위하여, 역학적 파라미터(kinetic parameters) 및 해리 상수(dissociation constants)를 선택용 완충액(Tris-HCl, 20 mM; NaCl, 137 mM; KCl, 5 mM; CaCl2,1 mM; MgCl2,1 mM; Tween20, 0.1%[w/v]; pH7.4) 중 다양한 농도 즉, 1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25 및 0 nM 농도로 연속적으로 스피에겔머를 주사함으로서 측정하였다. 모든 실험에서, 상기 분석법은 37℃에서 10 ㎕/분 유속으로, 180초의 결합 시간 및 360초의 해리 시간으로 한정하는 킨젝트 코멘드(Kinject command)를 이용하여 수행되었다. 해리 상수(KD)의 데이터 분석 및 계산은 Langmuir 1:1 화학양론적 적정 알고리즘(stochiometric fitting algorithm)을 이용한 소프트웨어(BIAevaluation 3.0 software; BIACOREAB, Uppsala, 스웨덴)으로 수행하였다.
실시예 5. SDF -1 결합 스피에겔머에 의해 SDF -1 유도된 화학주성 저해의 분석
Jurkat 인간 T 세포 백혈구 세포, 인간 백혈병 단핵구 림프종 세포주(leukemic monocyte lymphoma cell line) U937, 인간 전구-B 세포 백혈병 세포주 (human pre-B cell leukemia cell line) BV-173, 및 인간 전구-B ALL 세포주 (pre-B ALL cell line)Nalm-6은 CXCR4을 발현한다. Jurkat 세포가 CXCR7을 발현하지는 않지만, 백혈병 세포주 BV-173 및 U-937은 CXCR7 발현에 양성으로 나타났다. 사용된 모든 세포들은 DSMZ (Braunschweig)로부터 구입하였다.
모든 세포주를 37℃ 및 5% CO2에서 10% 우 혈청 알부민, 100 unit/ml 페니실린 및 100 ㎍/ml 스트렙토마이신(Invitrogen, Karlsruhe, Germany)을 함유한 글루타막스(Glutamix; Invitrogen, Karlsruhe, Germany)와 RPMI 1640 배양액에 배양하였다. 실험 하루 전 날, 세포는 일반 배지에서 0.3x106/ml (Jurkat, U937, BV-173) 또는 0.75 x 106/ml (Nalm6)의 농도로 새로운 T175 플라스크에 각각 배양하였다.
실험을 수행하기 위하여, 세포들은 원심분리(300 g, 5 분), 재현탁, 카운팅 및 15 ml HBH(1 mg/ml 우 혈청 알부민 및 20 mM HEPES을 함유한 Hanks balanced salt solution; Invitrogen, Karlsruhe, Germany)으로 1회 세척되었다. 그런 후, 상기 세포들은 사용된 필터 플레이트(filter plate)의 유형에 따라 1.33 x 106/ml(Jurkat, U937, BV-173) 또는 2.67 x 106/ml (Nalm-6) 에 재현탁 되었다. 세포들은 필터 플레이트의 다공성 멤브레인(porous membrane)을 통해 SDF-1 및 다양한 양의 스피에겔머를 함유한 용액을 향해 여러 시간동안 이동하도록 허용하였다. 자극용 용액(stimulation solutions; SDF-1 + 다양한 농도의 스피에겔머)을 0.2 ml 낮은 프로파일(profile) 96-튜브 플레이트에서 희석(10X) 용액으로 제조하였다. 212 HBH 을 이동 플레이트(transport plate)의 더 낮은 분획(compartments)에 피펫팅(pipetted)하고 23,5 자극용 용액을 첨가하였다. 모든 조건을 세 배수(triplets)로 수행하였다. 20 내지 30 분 후에, 필터 플레이트(filter plate)를 자극용 용액을 함유하는 플레이트에 삽입하고 각각 1.33 x 106 /ml 또는 2.67 x 106/ml을 넣은 75 세포 현탁액을 필터 플레이트 (1 x 105 또는 2 x 105 세포/웰)의 벽(wall)에 첨가하였다. 그리고 상기 세포를 37°C에서 3시간동안 이주토록 하였다. 정량을 위하여, 0, 10 및 30 세포 현택액을 분리된 96-웰 플레이트 벽의 235, 225 및 205 HBH에 첨가하였다. 3 시간 배양 후에, 상기 삽입 플레이트를 제거하고 30 레자쥬린 작용 용액 (resazurin working solution; PBS 중 440 )을 낮은 웰(well) 및 교정 플레이트(calibration plate) 웰(well)에 첨가하였다. 그리고 플레이트를 37°C 에서 2.5시간 동안 배양하였다. 배양 후, 100의 개개 웰(well) 을 흑색 96 웰 플레이트로 옮겼다. 정량을 위하여, 형광 수치를 배경 형광도(background fluorescence; 웰에 세포무)를 교정하였다. 그리고 SDF-1 유무에 따른 실험 조건 사이의 차이를 계산하였다. 스피에겔머 (SDF-1 만)이 없는 시료에 대한 수치를 100%으로 잡고 스피에겔머 이 있는 시료에 대한 수치를 이에 대한 백분율로서 측정하였다. 용량 의존건 곡선(dose-response curve)을 위하여, 백분율-수치(percent-values)를 스피에겔머 농도를 구도하였고 IC50-수치를 (스피에겔머가 없는 50% 활성을 갖는 스피에겔머의 농도) 얻어진 곡선으로부터 도표로 규명되었다.
결과
인간 SDF-1은 약 0.3 nM의 농도에서 절반-최대 자극(half-maximal stimulation)을 갖고 농도 의존적으로 Jurkat 세포의 이동을 자극하였다.
인간 SDF-1는 약 0.3 nM의 절반-최대 자극도 (half-maximal stimulation)을 갖고, 용량의존적으로 Jurkat 세포의 이주를 자극하는 것으로 밝혀졌다.
인간 SDF-1는 약 3 nM의 절반-최대 자극도 (half-maximal stimulation)을 갖고, 용량의존적으로 인간 백혈병 단핵구 림프종 세포주 U937의 이주를 자극하는 것으로 밝혀졌다.
인간 SDF-1는 약 3 nM의 절반-최대 자극도 (half-maximal stimulation)을 갖고, 용량의존적으로 인간 전구-B 세포 백혈병 세포주 BV-173의 이주를 자극하는 것으로 밝혀졌다.
인간 SDF-1는 약 0.3 nM의 절반-최대 자극도 (half-maximal stimulation)을 갖고, 용량의존적으로 인간 전구-B ALL 세포주 Nalm-6의 이주를 자극하는 것으로 밝혀졌다.
세포주가 인간 SDF-1 및 증가 농도의 SDF-1 결합 스피에겔머를 함유한 용액으로 이주토록 하였을 때에, 용량의존적 저해효과가 관찰되었다. 실시예 1에서 시험된 스피에겔머들의 개개 IC50를 인간 T 세포 백혈병 세포주 Jurkat 세포에서 측정되었다. 예를 들어, SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 (193-G2-012-5’-PEG으로도 지칭)은 0.2 nM의 IC50을 나타냈다 (도 10). SDF-1 결합 스피에겔머 대신에 특정하지 않는 대조용 스피에겔머 (unspecific Control Spiegelmer)을 사용시에 1까지 저해효과가 관찰되지 않았다.
SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12에 의한 SDF-1 유도 화학주성의 저해가 다른 3가지 상이한 백혈병 세포형: 인간 백혈병 단핵구 림프종 세포주 U937 (도 11B), 인간 전구-B 세포 백혈별 세포주 BV-173 (도 12) 및 인간 전구-BALL 세포주 Nalm-6 (도 11A)에서도 관찰되었다. 게다가, 본 발명자들은 1차 만성 림프성 백혈병 세포 (primary chronic lymphocytic leukemia cells) SDF-1으로 이주하고 SDF-1 의존성 화학주성이 효과적으로 NOX에 의하여 봉쇄되었음을 입증하였다.
백혈병 세포주 BV-173 및 U-937은 CXCR7 발현에도 양성으로 시험되었다. SDF-1 및 CXCR7 의 상호작용을 차단하기 위한 SDF-결합 스피에겔머 NOX-A12의 효력은 실시예 6에 나타난 바와 같이 측정되었다.
실시예 6. SDF -1 결합 스피에겔머 NOX -A12 에 의한 CXCR7 저해
CXCR4이외에, SDF-1도 케모카인 수용체(chemokine receptor) CXCR7과 결합한다. SDF-1-결합 스피에겔머인 NOX-A12 의 CXCR7로의 저해 효력을 β-갈락토시다제(galactosidase) 단편에 모두 융합된 CXCR7 및 β-어레스틴(arrestin)을 안정적으로 발현하는 CHO 세포(cells)를 이용한 상보 어세이법(complementation assay)에서 측정하였다 (PathHunterTM - β-어레스틴 어세이법 (arrestin assay), DiscoveRX, CA, USA). SDF-1 결합 β-어레스틴이 CXCR7와 복합체를 형성시에 화학발광 기질(chemiluminescence substrate)돠 같이 측정되는 β-갈락토시다제와 상보관계(complementation) 및 활성화(activation)가 초래된다.
방 법
PathHunte 발현 CHO-K1 인간 CXCR7 β-어레스틴 세포를 OCC2 배지에서 48시간 플레이팅(plate)하고 10 nM SDF-1 및 다양한 농도의 SDF-1-결합 스피에겔머 NOX-A12와 같이 90분간 자극시켰다. 자극후, 신호를 키트(PathHUnter Detection Kit) 및 제조자 권장 프로토콜(DiscoveRX, CA, USA)을 이용하여 탐지하였다.
결 과
β-갈로톡시다제 자극 및 10 nM 인간 SDF-1에 의한 CXCR7 활성화는 SDF-1-결합 스피에겔머인 NOX-A12에 의하여 5.4 nM의 IC50로 효과적으로 차단되었다 (도 13).
실시예 7. 환상 대동맥 발생 분석법( aortic ring sprouting assay ) 상에서 인간 SDF -1 결합 스피에겔머 193-G2-012-5'-PEG의 기능적 분석
인간 SDF-1 결합 스피에겔머 193-G2-012-5'-PEG이 표준 신생혈관형성증 기관 배양 어세이법(standard angiogenesis organ culture assay) 상에서도 가능하는지 실험하기 위하여, 환상 대동맥 발생 분석법을 수행하였다.
외식편(explant)으로부터 분리된 혈관 유사 연장물(vessel-like extensions)의 길이 및 풍부도를 측정하는 상기 어세이법은 혈관신생을 위해 가장 널리 사용된 기관 배양 모델이 되었다(Auerbach et al. 2003). 상기 어세이법의 유형에서 SDF-1 발생이 유도되는 것이 입증되었다(Salcedo et al. 1999). 랫트(rat)의 대동맥을 환상 모양으로 자른 후 콜라겐 매트릭스(collagen matrix)에 파묻어, SDF-1, 및 SDF-1와 인간 SDF-1 결합 스피에겔머 193-G2-012-5'-PEG 또는 SDF-1와 SDF-1에 결합하지 않은 비-기능적 PEG화된 대조군 스피에겔머와 함께 반응시켰다. 6 내지 7일 후, 찍힌 사진을 통해 발생(i.e. 내피세포의 성장)을 분석하였으며, 발생 지수 (sprouting index)를 결정하였다.
방 법
수컷 랫트의 대동맥을 회사(Bagheri Life Sciences; Berlin, 독일)로부터 수득하였다. 상기 대동맥은 신선하게 준비하여 얼음 상에서 50 unit/ml 페니실린, 50 μg/ml 스트렙토마이신 (둘다 Invitrogen, Karlsruhe, 독일) 및 2.5 μg/ml 펀지존(fungizone; Cambrex, 미국)을 함유하는 MCDB 131-배양배지(Invitrogen, Karlsruhe, 독일)로 옮겼다.
실험을 위해 단일 대동맥은 배양 배지와 함께 세포 배양 디쉬로 옮겼으며, 잔재 연결 조직(residual connective tissue)은 제거되었다. 그런 후, 상기 대동맥은 메스(scalpel)를 이용하여 약 1 내지 2 mm 길이를 갖는 환상 모양으로 잘랐다. 상기 환상은 배양 배지 199(Invitrogen, Karlsruhe, 독일)으로 격렬하게(최소한 5번 이상) 세척되었으며, 웰 당 450 μl 콜라겐 용액(collagen solution)을 함유하는 24 웰 플레이트의 웰 내로 주입하였다. 상기 콜라겐 용액은 9 ml 랫트 꼬리 콜라겐(0.1% 아세트산 내 3 mg/ml; Sigma, Deisenhofen, 독일), 1.12 ml 10X 배양배지 199(Invitrogen, Karlsruhe, 독일), 1.12 ml 10X 콜라겐-완충용액(0.05 N NaOH, 200 mM HEPES, 260 mM NaHCO3) 및 0.6 ml 200 mM 글루타민을 혼합함으로서 준비되었다. 상기 환상은 상기 웰의 바닥에 수직(perpendicular)으로 모서리를 다듬어지도록 하였다. 상기 콜라겐은 37℃에서 최소한 한 시간 동안 플레이트를 반응함으로서 고체화시켰다. 그런 후, SDF-1 및 스피에겔머를 함유하는 1 ml MCDB131-배양배지를 웰당 첨가하였다. 상기 환상은 6 내지 7일 동안 37℃에서 배양되었다. 발생(sprouting)의 대조군으로서 VEGF(Vascular endothelial growth factor)을 이용하였다.
발생(sprouting)은 디지털 카메라를 이용하여 사진을 찍음으로서 기록되었다. 일부의 경우에서는 환상을 1 ml 10% 파라포름알데히드(paraformaldehyde)를 첨가함으로서 고정화시켰고, 2-8℃상에서 추가 실험 기록을 위해 보관되었다. 상기 사진들은 소프트웨어(Scion Image image processing software)를 이용하여 분석되었다. 스테이지 마이크로미터(stage micrometer)로부터 찍힌 사진으로부터 측정된 후, 환상의 한쪽 끝으로부터 0.33 mm의 거리에서 줄을 그었다. 상기 그은 줄로부터 표시된 히스토그램(histogram)은 소프트웨어를 이용하여 생성되었으며, 히스토그램은 인쇄되고 피크(peak; 선을 교차하는 발생을 의미)의 수를 세었다. 상기 숫자는 발생 지수(sprouting index)를 의미한다. 각 조건별 4 내지 5 환상(rings)을 평가하였다. 엑셀 상의 WinSTAT으로 통계 분석을 수행하였다.
결과
상기 결과로부터 SDF-1가 발생을 유도하고 이들의 효과가 인간 SDF-1 결합 스피에겔머 193-G2-012-5-PEG으로 저해될 수 있음을 확인할 수 있었다. SDF-1 유도된 발생의 저해는 비-기능적(non-functional) PEG화된 대조군 스피에겔머에 의해서는 관찰되지 않았다(도 14 및 15).
실시예 8. 백혈병 세포의 민감성 증진화 에 대한 인간 SDF -1 결합 스피에겔머 NOX -A12의 효과
백혈병 세포가 골수 (약어 BM) 니취(niche)와 같은 특정 조직 미세환경 내에서 기질세포에 의해 분비되는 SDF-1과 CXCR4 수용체간의 상호작용에 의한 도전적 화학요법제로부터 보호가능하다. 따라서, 결합 스피에겔머인 NOX-A12 을 이용한 CXCR4-SDF-1 축을 목표화하는 것은 SDF-1-분비 기질 세포의 보호효과를 파괴하고 일련의 화학요법제에 대한 백혈병 세포를 민감성 증진화시키는 매력적인 접근법이다.
백혈병 세포에 의한 BM 미세환경(microenvironment)의 생체내 상호작용을 모방하기 위하여, 쥐(murine) BM 기질(stromal) MS-5 세포 및 다발성 골수종(multiple myeloma; 약어 MM) 세포주 RPMI 8226로 시험관내 동시-배양 시스템(in vitro coculture system)을 구축하였다. 본 실험의 목표는 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 가 화학요법제에 대한 효과에 대하여 기질 세포로 동시배양한 MM 세포를 민감성 증진화시키는가 여부를 확인하는 것이다. SDF 1를 분비하는 쥐(murine) 기질(Stromal) MS-5 세포를 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 또는 비기능적(non-functional) revNOX-A12와 같이 배양하였다. MM 세포주 RPMI-8226를 충밀한 기질 세포 층에 첨가하였다. 그리고 세포를 40시간동안 화학요법제 F ara A (플루다라빈:Fludarabine)과 배양하였다. 세포 생존율을 측정하였다.
방 법
쥐 기질 세포주 (murine stromal cell line) MS-5 (ACC 441) 를 회사 (DSMZ)에서, 다발성 골수종 세포주 (Multiple Myeloma cell line) RPMI8226 (CCL-155)을 회사(ATCC)에서 각각 구입하였다. 다발성 골수종 세포주 RPMI8226을 10% FBS (Biochrom) 및 페니실린-스트렙토마이신을 첨가한 RPMI 배지 1640 GlutaMAX (Invitrogen)에서 유지시키고, MS-5 세포를 10% FBS 및 페니실린-스트렙토마이신을 첨가한 MEM alpha GlutaMAX (Invitrogen)에서 배양하였다. 화학민감성 증진화 동시배양 실험을 위하여, 기질(stromal) MS-5 세포를 전날에 24-웰 플레이트 (내부 8개 웰)에 MEM alpha GlutaMAX 배지 (+ 10% FBS) 중 8 x 104/ mL / 웰(well) 농도로 접종하고 5% CO2조건 하에서 37 °C에서 배양하였다. 상기 충밀한 기질 세포층을 세척하고 0.5 mL RPMI 배지 1640 (+1% FBS)을 웰에 첨가하였다. 이어서, SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 또는 revNOX-A12을 100 nM의 최종 농도로 웰에 첨가하였고 4시간 배양하였다. RPMI 배지 1640 (+1% FBS)중 3.5 x 105 RPMI8226 세포를 기질 세포 층에 첨가하였다. 4시간 후에, 1 F-ara-A (Sigma Aldrich) 를 정한 시간에 세포에 첨가하였다. 배양 40시간 후에, 세포를 15 mL 튜브에 모으고, 먼저 상등액을 수집하고 부착된 세포를 MS-5 세포를 포함하여 트립신처리(trypsinized) 하였다. 상기 수확된 세포들을 PBS (+1% BSA) 로 2회 세척하고 2 mL PBS (+1%BSA)에서 재현탁하였다. 150 세포 현탁액을 u-형태(shape) 96-웰 플레이트로 옮기고 50 of 시약 (ViaCount Reagent, Millipore)으로 15분간 상온에서 배양하였다. 세포 생존율 및 세포수를 Guava EasyCyte 6HT/2L (Millipore)을 이용한 유세포 분석기(Flow Cytometry)로 측정하였다 .
결 론
기질 MS-5 세포와 같이 동시배양한 RPMI-8226 세포의 세포 생존율은 SDF-1 결합 스페에겔머 NOX A12에 의하여 약간 영향을 받았을 뿐이다. 1 F-ara-A 는 RPMI-8226 세포의 생존율에 대하여 유의적인 효과를 나타내지 않았다. 그러나, NOX-A12 및 F-ara-A를 조합하면, 세포 생존율의 상승적(synergistic) 감소가 관찰되었다 (도 16). 따라서, SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12는 BM 기질 세포주 MS 5와 동시배양시 화학요법제 F-ara-A로 처치하는데 MM 세포주 RPMI-8226를 민감성 증진화시키는 것으로 나타났다. 기질 MS-5 세포의 생존율은 F-ara-A 나 NOX-A12 모두에 영향 받지 않았다 (데이타 표시무). 이러한 결과는 BM 기질에 의해 분비되는 SDF-1의 보호효과를 파괴하는데 NOX A12의 효력을 입증하는 것이다.
실시예 9. 백혈병 세포의 증식에 대한 SDF -1 결합 스피에겔머 NOX -A12의 효과
본 실험의 목표는 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 가 골수(약어 BM) 기질세포와 같이 동시배양한 백혈병 세포의 증식에 미치는 영향 여부를 확인하는 것이다. SDF 1를 분비하는 쥐(murine) 기질(Stromal) MS-5 세포를 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 또는 비기능적(non-functional) revNOX-A12와 같이 배양하였다. 백혈병 T-세포 주 Jurkat를 충밀한 기질 세포 층(confluent stromal cell layer)을 첨가하고 37 °C 및 5% CO2 조건하에서 40시간 동안 배양하였다. 세포수를 Guava EasyCyte 및 ViaCount Reagent을 이용한 유세포 분석기(Flow Cytometry)로 정량하였다.
방 법
쥐 기질 세포주 MS-5 (ACC 441)을 DSMZ에서 구입하고 10% FBS 및 페니실린-스트렙토마이신을 첨가한 MEM alpha GlutaMAX (Invitrogen)에서 배양하였다. 증식 동시배양 실험(proliferation coculture experiments)을 위하여, 기질 MS-5 세포를 하루 전에 MEM alpha GlutaMAX 배지 (+ 10% FBS)에서 8 x 104/mL /웰(well) 농도로 24-웰 플레이트 (내부 8개 웰)에 접종하고 37 °C 및 5% CO2에서 배양하였다. 충밀한 기질 세포 층(confluent stromal cell layer)을 세척하고 0.5 mL RPMI 배지 1640 (+1% FBS) 를 각 웰에 첨가하였다. 이어서 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 또는 스피에겔머 revNOX A12 를 100 nM의 최종농도로 각 웰에 첨가하고 5시간 동안 배양하였다. RPMI 베지 1640 (+1% FBS) 중 2 x 105 Jurkat 세포 (~대수성장기(logarithmic growth phase); 1회 세척)을 충밀한 기질 세포 층에 첨가하고 37°C 및 5% CO2에서 48시간 동안 배양하였다. 그리고 세포를 15 mL 튜브에 모으고, 부착된 세포를 MS-5 세포를 포함한 트립신 처리를 하였다. 수확된 세포를 PBS (+1% BSA)으로 2회 세척하였다. 150 세포 현탁액을 u-형태(shape) 96-웰 플레이트로 옮기고 50 시약 (ViaCount Reagent, Millipore)으로 15분간 상온에서 배양하였다. 세포 생존율 및 세포수를 Guava EasyCyte 6HT/2L (Millipore)을 이용한 유세포 분석기(Flow Cytometry)로 측정하였다 .
결 과
1 nM SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12가 배양 40시간 후에 Jurkat 세포수에 영향을 미치지 않으나, 세포 수는 기질 MS-5 세포를 10 또는 100 nM SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12과 같이 전배양할 시에 20%까지 감소하였다 (도 17). 따라서, 기질 세포에 의하여 분비된 SDF-1은 명백하게 Jurkat 세포 증식을 자극하였다. 증식의 SDF-1 의존성 유도를 보다 낮은 양의 백혈병 세포가 탐지되는 결과를 초래하는 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12에 의하여 차단가능하다.
실시예 10. 백혈병 세포의 부착 특성에 대한 SDF -1 결합 스피에겔머 NOX -A12의 효과
세포외 매트릭스(extracellular matrix; 약어 ECM) 단백질과 백혈병 세포와의 상호작용은 백혈병 병리기전에 중요한 역할을 수행한다. 따라서, 본 발명자들은 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12 ECM 단백질(protein) 피브로넥틴(fibronectin)에 대한 백혈병 세포의 부착에 대한 영향을 시험하였다. SDF-1에 의한 Jurkat 백혈병 T-세포 주의 자극은 피브로넥틴 (fibronectin)에 대한 용량 의존적 조절(modulation)을 유도한다.
방 법
T 세포 백혈병 Jurkat (ACC 282) 세포를 DSMZ에서 구입히고 10% FBS (Biochrom) 및 페니실린-스트렙토마이신을 첨가한 RPMI 배지 1640 GlutaMAX (Invitrogen)에서 유지하였다. 부착 실험에서, 96-웰 배양 플레이트를 37 °C에서 2시간 동안 PBS에서 10 /mL 인간 피브로넥틴 (R&D systems)로 배양하였다. 상기 플레이트를 100 PBS로 2회 세척하고 37°C에서 시간 동안 PBS-BSA (0.1 %)로 연이서 차단하였다. 그리고 웰들을 RPMI 배지로 세척하였다. 대수성장기에서 얻은 Jurkat 세포를 RPMI 배지 (+ 0.1% BSA)로 세척하고 37°C에서 15분간 다양한 농도의 인간 SDF-1 (R&D systems) 및 NOX-A12와 배양하였다. NOX-A12 및 SDF-1을 30 분간 전배양하였다. 1x 105 자극된 Jurkat 세포를 피브로넥틴(Fibronectin)-피복(coated) 96-웰 플레이트에 접종하고 30분간 배양하였다. 그리고 플레이트를 RPMI 배지로 5회 세척하였다. 부착된 세포를 시약(Cell Titer Glo Reagent, Promega)을 이용하여 정량하였다. 그리고, 50 RPMI 배지를 개개 세포에 넣고 50 시약(Cell Titer Glo Reagent, Promega)을 첨가하였다. 플레이트를 2분간 혼합하고 10분간 상온에서 배양하였다. 세포 수를 상대적 발광신호(relative luminescence signal)로 정량하였다.
결 과
SDF-1 (1 - 10 nM)의 배지농도를 감소시키면 피브로넥틴에 대한 Jurkat 세포에 대한 부착이 감소하는데 반하여, 배지농도를 증가시키면 (30 - 300 nM) Jurkat 세포에 대한 부착능이 증가한다 (도 18A). SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12는 이러한 효과를 전환시키고, 대조용 스피에겔머(control Spiegelmer)인 revNOX-A12은 전환시키지 못한다 (도 18B). 따라서, SDF-1 결합 스피에겔머인 NOX-A12는 보호적 ECM 환경과 백혈병 세포 간의 상호작용을 파괴하는데 영향을 미치는 것 같다. 게다가, 이러한 예는 SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12가 골수 니취로부터 유래된 조혈모세포 (hematopoetic cells)에 대한 의존적 탈착(dependent detachment) 및 동원(mobilization)을 설명할 것이다.
실시예 11. 생체내에서 골수 환경의 다발성 골수종 세포의 상호작용 및 이에 따른 다발성 골수종 세포의 감작성 증강효과의 파괴 효과
SDF-1/CXCR4 축은 골수 (약어 BM)에 대한 다발성 골수종(약어 MM) 세포의 귀소(homing) 및 운송(trafficking)에 대하여 주요한 역할을 수행한다. 따라서, SDF-1 저해를 통한 주변 BM 환경으로부터 MM 세포의 재-부착 (de-adhesion)은 치료제에 대한 MM 감작성 (sensitivity)을 증가시킨다. 아잡 등(Azab et al)은 CXCR4 저해제인 AMD3100 의 MM 세포의 국소화 (localization)에 영향 (결국 화학요법제에 대한 MM 세포의 감작성을 증가시킴)을 미치는 생체내에서의 BM 환경과 MM 세포의 상호작용을 파괴하는 효력을 시험하는 프로토콜(protocol)을 발표하였다. 이들은 CXCR4 특이적 길항제에 의한 SDF-1 수용체인 CXCR4의 차단이 생체내에서의 BM 환경과 MM 세포의 상호작용 파괴하고, 치료에 대한 MM 세포의 증가된 감작성(sensitivity)을 초래하고 결국, 보르테조밉(bortezomib)에 유도된 종양 감소를 증가시킨다고 보고하였다 (Azab et al. 2009). 이러한 프로토콜에 기초하여 (Azab et al. 2009), SDF-1 결합 스피에겔머 NOX-A12의 생체내에서의 BM 환경과 MM 세포의 상호작용 파괴하고, 치료에 대한 MM 세포의 증가된 감작성(sensitivity)을 증가하는 효과를 시험하였다.
MM 동물 모델을 위하여, 중증 조합 면역결핍증 (severe combined immunodeficient; SCID) 유도 마우스를 사용하고 상기 SCID 마우스의 꼬리 정맥에 Luc+/GFP+ MM.1S 세포 (2 X 106/mouse) 을 주사하였다. 3 내지 4 주후, 충분한 종양 진행(tumor progression)을 이미지법(bioluminescence imaging; 프로토콜은 Azab et al. 2009 참조)으로 탐지하였다. 마우스를 4개 그룹(group)으로 구분하였다: 그룹(group) 1, 대조용 마우스(control mice ; 담체 투여: 5% glucose); 그룹 2, 마우스에 20 mg/kg NOX-A12 피하 주사로 하루 걸러 처치함; 그룹 3, 마우스에 0.5 mg/kg 양으로 보르테조밉을 복강내 주사로 주당 2회 주사; 그룹 4, 마우스에 0.5 mg/kg 양으로 보르테조밉을 복강내 주사로 주당 2회 주사하고 20 mg/kg NOX-A12 피하 주사로 하루 걸러 주사함).
골수에서 MM 종양 세포의 국소화를 형광 표지(fluorescence labelled) 항(anti)-SDF 항체 (프로토콜은 Azab et al. 2009 참조)를 이용하여 생체내에서 공초점 현미경(confocal microscopy)으로 측정하고, 여기에서 NOX-A12 투여는 MM 세포의 골수로부터 혈액으로의 세포 이동을 초래하고 (생체외 유세포 분석법에 의한 측정, 프로토콜은 Azab et al. 2009 참조) 보르테조밉(bortezomib)과 같이 투여시 종양성장의 감소를 초래한다 (생체내 생물발광(in vivo bioluminescence)법으로 탐지; 프로토콜은 Mitsiades et al., 2003; Mitsiades et al. 2004을 참조). 보르테조밉 단독투여와 비교시 보르테조밉 및 NOX-A12의 조합 투여시의 종양성장에 대한 보다 강력한 효과는 MM 세포 화학요법제 민감성 증진화에 대한 NOX-12의 양성적 효과를 나타내는 실시예 8의 데이터가 입증한다.
본원 명세서, 청구항 및/또는 도면에 개시된 본 발명의 특징은 모두 각각 개별적으로 및 조합되어 다양한 형태로 본 발명을 실현하기 위한 재료가 될 수 있을 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> NOXXON Pharma AG <120> SDF-1 binding nucleic acids and the use thereof in cancer treatment <130> N 10087 PCT <150> EP 10 009 397.0 <151> 2010-09-09 <160> 225 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 68 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> L-peptide <400> 1 Lys Pro Val Ser Leu Ser Tyr Arg Cys Pro Cys Arg Phe Phe Glu Ser 1 5 10 15 His Val Ala Arg Ala Asn Val Lys His Leu Lys Ile Leu Asn Thr Pro 20 25 30 Asn Cys Ala Leu Gln Ile Val Ala Arg Leu Lys Asn Asn Asn Arg Gln 35 40 45 Val Cys Ile Asp Pro Lys Leu Lys Trp Ile Gln Glu Tyr Leu Glu Lys 50 55 60 Ala Leu Asn Lys 65 <210> 2 <211> 72 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <223> L-peptide <400> 2 Lys Pro Val Ser Leu Ser Tyr Arg Cys Pro Cys Arg Phe Phe Glu Ser 1 5 10 15 His Val Ala Arg Ala Asn Val Lys His Leu Lys Ile Leu Asn Thr Pro 20 25 30 Asn Cys Ala Leu Gln Ile Val Ala Arg Leu Lys Asn Asn Asn Arg Gln 35 40 45 Val Cys Ile Asp Pro Lys Leu Lys Trp Ile Gln Glu Tyr Leu Glu Lys 50 55 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<400> 192 gggguuaggg cuuaaagucg gcugauucu 29 <210> 193 <211> 37 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 193 gcguggcgag guuagggcua gaagucgguc gacacgc 37 <210> 194 <211> 35 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 194 cguggcgagg uuagggcuag aagucggucg acacg 35 <210> 195 <211> 33 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 195 cgggcgaggu uagggcuaga agucggucga ccg 33 <210> 196 <211> 33 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 196 cgggcgaggu uagggcuaga agucggucgc ccg 33 <210> 197 <211> 31 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 197 cggcgagguu agggcuagaa gucggucgcc g 31 <210> 198 <211> 29 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 198 cgggagguua gggcuagaag ucggucccg 29 <210> 199 <211> 27 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 199 gggagguuag ggcuagaagu cgguccc 27 <210> 200 <211> 27 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 200 ccgcgguuag ggcuagaagu cgggcgg 27 <210> 201 <211> 27 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 201 cccggguuag ggcuagaagu cggcggg 27 <210> 202 <211> 27 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 202 ggcggguuag ggcuagaagu cggcgcc 27 <210> 203 <211> 29 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 203 cccgcgguua gggcuagaag ucgggcggg 29 <210> 204 <211> 29 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 204 gccgcgguua gggcuagaag ucgggcggc 29 <210> 205 <211> 29 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 205 ccccggguua gggcuagaag ucggcgggg 29 <210> 206 <211> 29 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 206 cggcggguua gggcuagaag ucggcgccg 29 <210> 207 <211> 29 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 207 gggcggguua gggcuagaag ucggcgccc 29 <210> 208 <211> 37 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 208 ugcugcgggg guuagggcua gaagucggcc ugcagca 37 <210> 209 <211> 35 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 209 gcugcggggg uuagggcuag aagucggccu gcagc 35 <210> 210 <211> 33 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 210 cugcgggggu uagggcuaga agucggccug cag 33 <210> 211 <211> 31 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 211 ugcggggguu agggcuagaa gucggccugc a 31 <210> 212 <211> 29 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 212 gcggggguua gggcuagaag ucggccugc 29 <210> 213 <211> 29 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 213 gccgggguua gggcuagaag ucggccggc 29 <210> 214 <211> 31 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 214 ggccgggguu agggcuagaa gucggccggc c 31 <210> 215 <211> 31 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 215 cgccgggguu agggcuagaa gucggccggc g 31 <210> 216 <211> 48 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 216 cgugguccgu ugugucaggu cuauucgccc cggugcaggg cauccgcg 48 <210> 217 <211> 49 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 217 gcagugugac gcggacguga uaggacagag cugaucccgc ucaggugag 49 <210> 218 <211> 49 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> D-RNA <400> 218 caacagcagu gugacgcgga cgugauagga cagagcugau cccgcucag 49 <210> 219 <211> 40 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> L-RNA <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> 40 kDa-PEG-moiety attached to 5'-end <400> 219 uaaggaaacu cggucugaug cgguagcgcu gugcagagcu 40 <210> 220 <211> 17 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> L-RNA <400> 220 cgugcgcuug agauagg 17 <210> 221 <211> 12 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> L-RNA <400> 221 cugauucuca cg 12 <210> 222 <211> 10 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> L-RNA <400> 222 cugauucuca 10 <210> 223 <211> 29 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> L-RNA <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> 40 kDa-PEG-moiety attached to 5'-end <400> 223 gccgggguua gggcuagaag ucggccggc 29 <210> 224 <211> 29 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> L-RNA <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> 40 kDa-PEG-moiety attached to 5'-end <400> 224 cgggagguua gggcuagaag ucggucccg 29 <210> 225 <211> 45 <212> DNA <213> artificial <220> <223> synthetic <220> <221> misc_feature <223> L-RNA <220> <221> misc_feature <222> (1)..(1) <223> 40 kDa-PEG-moiety attached to 5'-end <400> 225 cgcauggacu gauccuaguc gguuauguag aucuagugug gugcg 45

Claims (106)

  1. SDF-1와 결합 가능한 핵산 분자, 바람직하게는 SDF-1를 저해 가능한 핵산 분자 (여기에서 상기 핵산 분자들은 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법에서의 사용; 부수적 치료법으로서 질병 또는 장애를 앓고 있거나 또는 질병 또는 장애로 진행될 위험이 있는 객체의 치료를 위한 방법에서의 사용, 또는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 약제로서의 사용을 위한 것이며 상기 질병 또는 장애는 암임).
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 암은 혈액 암의 그룹으로부터 선택된 암, 바람직하게는, 상기 혈액암은 백혈병 및 골수종(myeloma)을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 백혈병은 만성 림프구 백혈병 및 급성 골수성 백혈병을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  4. 제 2항에 있어서,
    상기 골수종은 다발성 골수종인 것인 핵산 분자.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 암는 고형 암들로부터 선택되고, 바람직하게는, 상기 고형암은 교모세포종 , 대장암, 유방 암, 림프종, 전립선암, 췌장암, 신장암, 난소암, 및 폐암 을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  6. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 부수적 치료법은 상기 객체를 민감성 증진화시키고, 여기에서 상기 민감성 증진화된 객체는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 치료법에 보다 즉시 반응성인 것인 핵산 분자.
  7. 제 6항에 있어서,
    상기 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 치료법은 추가적 약학적 활성화제의 투여 및/또는 객체의 방사선 조사 및/또는 세포 치료법을 수행함을 포함하는 것인 핵산 분자.
  8. 제 7항에 있어서,
    상기 추가적 약학적 활성화제는 항체, 알킬화제, 대사길항물질 , 식물 알칼로이드, 식물 테르페노이드, 토포이소머라제 저해제, 류코보린, 메토트렉세이트, 타목시펜, 소라페니브, 레날리도미드, 보르테조밉, 덱사메타손 , 플루오로우라실, 및 프레드니손을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  9. 제 8항에 있어서,
    상기 항체는 리툭시맙, 오파투무맙, 세툭시맙, 이브리투모맙-티욱세탄, 토시투모맙, 트라스투주맙, 베바시주맙, 및 알렘투주맙을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  10. 제 8항에 있어서,
    상기 알킬화제는 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 메클로레타민, 시클로포스파미드, 클로람부실, 독소루비신, 리포조말 독소루비신, 벤다무스틴, 테모졸로미드 및 멜팔란을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  11. 제 8항에 있어서,
    상기 대사길항물질은 퓨린아자티오프린, 머캅토퓨린, 플루다라빈, 펜토스타틴, 및 클라드리빈을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  12. 제 8항에 있어서,
    상기 식물 테르페노이드는 탁산 류 화합물들로부터 선택된 화합물, 보다 바람직하게는, 도세탁셀, 파클리탁셀, 포도필로톡신 및 에포틸론을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  13. 제 8항에 있어서,
    상기 토포이소머라제 저해제는 캠프토테신, 이리노테칸, 및 미톡산트론 을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  14. 제 1항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 분자는 SDF-1 및 SDF-1 수용체간의 상호작용을 차단가능한 것이며, 여기에서, 상기 SDF-1 수용체는 CXCR4 및 CXCR7을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  15. 제 1항 내지 제 14항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 질병 또는 장애의 치료 또는 예방은 SDF-1 및 SDF-1 수용체간의 상호작용을 저해하는 핵산 분자에 기인한 것인 핵산 분자.
  16. 제 1항 내지 제 15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 분자는 B 형의 SDF-1 결합 핵산 분자, C 형의 SDF-1 결합 핵산 분자, A 형의 SDF-1 결합 핵산 분자 및 D 형의 SDF-1 결합 핵산 분자를 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  17. 제 16항에 있어서,
    상기 B 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 뉴클레오티드의 중간 스트레치를 포함하며, 여기에서 상기 뉴클레오티드의 중간 스트레치는 하기 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자:
    5’ GUGUGAUCUAGAUGUADWGGCUGWUCCUAGUYAGG 3’ (서열 번호: 52).
  18. 제 17항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 중간 스트레치는 하기 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자:
    5’ GUGUGAUCUAGAUGUADUGGCUGAUCCUAGUCAGG 3’ (서열 번호: 53).
  19. 제 17항 또는 제 18항에 있어서,
    상기 B 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치, 뉴클레오티드의 중간 스트레치 및 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치를 포함하는 것인 핵산 분자.
  20. 제 17항 또는 제 18항에 있어서,
    상기 B 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치, 뉴클레오티드의 중간 스트레치 및 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치를 포함하는 것인 핵산 분자.
  21. 제 19항 또는 제 20항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’X1X2SVNS 3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 5’BVBSX3X43’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이고, 여기에서:
    X1 는 존재하지 않거나 또는 A이며, X2 는 G이며, X3 는 C 이며 X4 는 존재하지 않거나 또는 U이며;
    또는
    X1 는 존재하지 않고, X2 존재하지 않거나 또는 G이며, X3 존재하지 않거나 또는 C 이고 X4 는 존재하지 않는 것인 핵산 분자.
  22. 제 19항 내지 제 21항 중 어느 한 항, 바람직하게는 제 21항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’X1X2CRWG3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 5’KRYSX3X43’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이며;
    여기에서,
    X1은 존재하지 않거나 또는 A이고, X2 는 G이며, X3 는 C이며 X4 는 존재하지 않거나 또는 U인 핵산 분자.
  23. 제 19항 내지 제 22항 중 어느 한 항, 바람직하게는 제 21항 또는 제 22항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’X1X2CGUG3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 5’UACGX3X43’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이며;
    여기에서,
    X1은 존재하지 않거나 또는 A이고, X2 는 G이며, X3 는 C이며 X4 는 존재하지 않거나 또는 U이며,
    바람직하게는, 상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’AGCGUG3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 5’UACGCU3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  24. 제 19항 내지 제 21항 중 어느 한 항, 바람직하게는 제 21항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’X1X2SSBS3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치는 5’BVSSX3X43’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이며;
    여기에서,
    X1은 존재하지 않고, X2 는 존재하지 않거나(absent) 또는 G이며, X3 는 존재하지 않거나 또는 C이며, X4 는 존재하지 않고,
    바람직하게는, 상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’GCGUG3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 5’UACGC3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  25. 제 16항 내지 제 24항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 B 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 서열번호: 5 내지 서열번호: 20 및 서열번호: 22 내지 서열번호: 28중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드서열, 바람직하게는, 서열번호: 5 내지 서열번호: 7, 서열번호: 16, 서열번호: 22 및 서열번호: 28중 어느 하나, 보다 바람직하게는, 서열번호: 22 및 서열번호: 28중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  26. 제 16항에 있어서,
    상기 C 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 뉴클레오티드의 중간 스트레치를 포함하며, 상기 뉴클레오티드의 중간 스트레치는 GGUYAGGGCUHRXAAGUCGG (서열번호: 108)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이고,
    여기에서 XA 는 존재하지 않거나 또는 A인 핵산 분자.
  27. 제 26항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 중간 스트레치는 5’ GGUYAGGGCUHRAAGUCGG 3’ (서열번호: 109), 5’GGUYAGGGCUHRAGUCGG 3’ (서열번호: 110) 또는 5’ GGUUAGGGCUHGAAGUCGG 3’ (서열번호: 111), 바람직하게는, 5’GGUUAGGGCUHGAAGUCGG 3’ (서열번호: 111)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  28. 제 26항 또는 제 27항에 있어서,
    상기 C 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로, 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치, 뉴클레오티드의 중간 스트레치 및 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치를 포함하는 것인 핵산 분자.
  29. 제 26항 또는 제 27항에 있어서,
    상기 C 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로, 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치의 뉴클레오티드 서열, 뉴클레오티드의 중간 스트레치 및 제 1차 말단 스트레치을 포함하는 것인 핵산 분자.
  30. 제 28항 또는 제 29항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’RKSBUSNVGR3’ (서열번호: 138) 의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치는 5’YYNRCASSMY3’ (서열번호: 139)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이며,
    여기에서, 바람직하게는, 상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’RKSBUGSVGR3’(서열번호: 140)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 5’YCNRCASSMY’ (서열번호: 141)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  31. 제 28항 또는 제 29항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’XSSSSV3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 5’BSSSXS3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것이며, 여기에서 Xs 는 존재하지 않거나 또는 S이며,
    바람직하게는, 상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’SGGSR3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 5’YSCCS3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  32. 제 28항 또는 제 29항에 있어서,
    (a) 상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’ GCCGG 3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 5’CCGGC 3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나; 또는
    (b) 상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’ CGUGCGCUUGAGAUAGG 3 ’(서열번호: 220)의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 5’CUGAUUCUCACG3’ (서열번호: 221)의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나; 또는
    (c) 상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’UGAGAUAGG 3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드(nucleotide)의 제 2차 말단 스트레치는 5’ CUGAUUCUCA3’ (서열번호: 222)의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나; 또는
    (d) 상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’GAGAUAGG 3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하고 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치는 5’CUGAUUCUC3’ 의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  33. 제 26항 내지 제 32항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 C 형의 SDF-1 결합 핵산 분자는 서열번호(SEQ ID NO): 95 내지 서열번호: 107, 서열번호: 112 내지 서열번호: 137, 서열번호: 223 및 서열번호: 224중 어느 하나, 바람직하게는, 서열번호: 120, 서열번호: 128, 서열번호: 129, 서열번호:134, 서열번호: 135, 서열번호: 223 및 서열번호: 224중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  34. 제 16항에 있어서,
    상기 A 형의 SDF-1 결합 핵산 분자는 뉴클레오티드의 중간 스트레치를 포함하며, 여기에서 상기 뉴클레오티드의 중간 스트레치는 5’ AAAGYRACAHGUMAAXAUGAAAGGUARC 3’ (서열번호: 74)의 뉴클레오티드(nucleotide) 서열을 포함하며,
    여기에서, XA 는 존재하지 않거나 또는 A인 핵산 분자.
  35. 제 34항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 중간 스트레치는 5’AAAGYRACAHGUMAAUGAAAGGUARC 3’ (서열번호: 75), 또는
    5’ AAAGYRACAHGUMAAAUGAAAGGUARC 3’ (서열번호: 76), 또는
    5’ AAAGYAACAHGUCAAUGAAAGGUARC 3’(서열번호: 77), 바람직하게는, 상기 뉴클레오티드의 중간 스트레치는 5’ AAAGYAACAHGUCAAUGAAAGGUARC 3’ (서열번호: 77)의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  36. 제 34항 또는 제 35항에 있어서,
    상기 A 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로, 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치, 뉴클레오티드의 중간 스트레치 및 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치를 포함하는 것인 핵산 분자.
  37. 제 34항 또는 제 35항에 있어서,
    상기 A 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 5’->3’ 방향으로, 뉴클레오티드의 제 2차 말단 스트레치, 뉴클레오티드의 중간 스트레치 및 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치를 포함하는 것인 핵산 분자.
  38. 제 36항 또는 제 37항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’X1X2NNBV3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치는 5’BNBNX3X43’의 뉴클레오티드 서열을 포함하며,
    여기에서,
    X1 는 존재하지 않거나 또는 R이며, X2 는 S이며, X3 는 S이고 X4 는 존재하지 않거나 또는 Y이거나;
    또는
    X1 는 존재하지 않고, X2는 존재하지 않거나 또는 S이며, X3 는 존재하지 않거나 또는 S 이고 X4 는 존재하지 않는 것인 핵산 분자.
  39. 제 36항 내지 제 38항중 어느 한 항, 바람직하게는 제 38항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’RSHRYR3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치는 5’YRYDSY3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하며,
    바람직하게는, 상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’ GCUGUG 3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치는 5’ CGCAGC 3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  40. 제 36항 내지 제 38항중 어느 한 항, 바람직하게는 제 38항에 있어서,
    상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’X2BBBS3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치는 5’SBBVX33’의 뉴클레오티드 서열을 포함하며, 여기에서, X2는 존재하지 않거나 또는 S이며 X3 는 존재하지 않거나 또는 S이고;
    바람직하게는, 상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’CUGUG3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치는 5’CGCAG3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나,
    또는 상기 뉴클레오티드의 제 1차 말단 스트레치는 5’GCGUG3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하며 제 2차 말단 스트레치는 5’CGCGC3’의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  41. 제 34항 내지 제 40항중 어느 한 항에 있어서,
    상기 A 형의 SDF-1 결합 핵산 분자는 서열번호: 60 내지 서열번호: 73, 서열번호: 78 내지 서열번호: 82, 서열번호: 84 내지 서열번호: 87, 서열번호: 89 내지 서열번호: 94, 및 서열번호: 145중 어느 하나, 바람직하게는, 서열번호: 60, 서열번호: 63, 서열번호: 66, 서열번호: 78, 서열번호: 84, 및 서열번호: 146중 어느 하나, 보다 바람직하게는, 서열번호 : 84 및 서열번호: 146중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  42. 제 16항에 있어서,
    상기 D 형의 핵산 SDF-1 결합 핵산 분자는 서열번호 : 142 내지 서열번호: 144중 어느 하나에 따른 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 핵산 분자.
  43. 제 1항 내지 제 42항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 SDF-1 는 인간 SDF-1이며, 여기에서 바람직하게는, 상기 인간 SDF-1 는 인간 SDF-1 알파 또는 인간 SDF-1 베타, 보다 바람직하게는, 상기 인간 SDF-1 는 인간 SDF-1 알파인 것인 핵산 분자.
  44. 제 1항 내지 제 43항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산 분자는 변형체를 포함하며, 여기에서, 상기 변형체는 바람직하게는, 높은 분자량 기 및/또는 상기 변형체는 동물 신체 또는 인체, 바람직하게는 인체 내에서 체류 시간을 통한 핵산 특성을 변형시키도록 하는 것인 핵산 분자.
  45. 제 44항에 있어서,
    상기 변형체는 HES 기, PEG 기, 생분해성 변형체 및 이의 조합을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 핵산 분자.
  46. 제 45항에 있어서,
    상기 변형체는 직쇄형 또는 쇄상 PEG으로 구성된 PEG 기이며, 여기에서, 바람직하게는, 상기 직쇄형 또는 쇄상 PEG의 분자량은 약 20,000 내지 120,000 Da 범위, 보다 바람직하게는, 약 30,000 내지 80,000 Da 범위, 가장 바람직하게는 약 40,000 Da인 것인 핵산 분자.
  47. 제 45항에 있어서,
    상기 변형체는 HES 기이며, 여기에서, 바람직하게는, 상기 HES 기의 분자량은 약 10,000 내지 200,000 Da 범위, 보다 바람직하게는, 약 30,000 내지 170.000 Da 범위, 가장 바람직하게는, 약 150,000 Da인 것인 핵산 분자.
  48. 제 44항 내지 제 47항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 변형체는 링커를 통하여 상기 핵산 분자에 부착되며, 여기에서 바람직하게는, 상기 링커는 생체 안정성 또는 생분해성 링커인 것인 핵산 분자.
  49. 제 44항 내지 제 48항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 변형체는 핵산 분자의 5’-말단 뉴클레오티드및/또는 3’-말단 뉴클레오티드에 부착 및/또는 핵산 분자의 5’-말단 뉴클레오티드 및 3’-말단 뉴클레오티드 사이의 뉴클레오티드에 부착된 것인 핵산 분자.
  50. 제 1항 내지 제 49항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산분자의 뉴클레오티드 또는 핵산 분자를 형성하는 뉴클레오티드는 L-뉴클레오티드(nucleotides)인 것인 핵산 분자.
  51. 제 1항 내지 제 50항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 핵산분자는 L-핵산 분자인 것인 핵산 분자.
  52. 제 1차 약학적 활성화제로서 제 1항 내지 제 51항 중 어느 한 항에 따른 핵산 분자 및 임의적으로, 추가적인 구성요소를 함유하는 약학조성물 (여기에서 상기 추가적인 구성요소는 약학적으로 허용가능한 부형제, 약학적으로 허용가능한 담체 및 추가적 약학적 활성화제를 포함하는 군으로부터 선택되며, 상기 약학 조성물은 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법에서의 사용 또는 부수적 치료법으로서 질병 또는 장애를 앓고 있거나 또는 질병 또는 장애로 진행될 위험이 있는 객체의 치료를 위한 방법에서의 사용, 또는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 사용을 위한 것이며, 상기 질병 또는 장애는 암임).
  53. 제 52 항에 있어서,
    상기 부수적 치료법은 상기 객체를 민감성 증진화시키고, 여기에서 상기 민감성 증진화된 객체는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 치료법에 보다 즉시 반응성인 것인 약학조성물.
  54. 제 53 항에 있어서,
    상기 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 치료법은 추가적 약학적 활성화제의 투여 및/또는 객체의 방사선 조사 및/또는 세포 치료법을 수행함을 포함하는 것인 약학조성물.
  55. 제 52 항 내지 제 54항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 추가적 약학적 활성화제는 항체, 알킬화제, 대사길항물질 , 식물 알칼로이드 (바람직하게는 빈크리스틴), 식물 테르페노이드, 토포이소머라제 저해제, 류코보린, 메토트렉세이트, 타목시펜, 소라페니브, 레날리도미드 , 보르테조밉, 덱사메타손, 플루오로우라실, 및 프레드니손을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약학조성물.
  56. 제 55항에 있어서,
    상기 항체는 리툭시맙, 오파투무맙, 세툭시맙, 이브리투모맙-티욱세탄, 토시투모맙, 트라스투주맙, 베바시주맙, 및 알렘투주맙을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약학조성물.
  57. 제 55항에 있어서,
    상기 알킬화제는 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 메클로레타민, 시클로포스파미드, 클로람부실, 독소루비신, 리포조멀 독소루비신, 벤다무스틴, 테모졸로미드 및 메팔란을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약학조성물.
  58. 제 55항에 있어서,
    상기 대사길항물질은 퓨린아자티오프린, 머캅토퓨린, 플루다라빈, 펜토스타틴, 및 클라드리빈을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약학조성물.
  59. 제 55항에 있어서,
    상기 식물 테르페노이드는 탁산 류 화합물들로부터 선택된 화합물, 보다 바람직하게는, 도세탁셀, 파클리탁셀, 포도필로톡신 및 에포틸론을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약학조성물.
  60. 제 55항에 있어서,
    상기 토포이소머라제 저해제는 캠프토테신, 이리노테칸, 및 미톡산트론 을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약학조성물.
  61. 제 52항 내지 제 60항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암은 혈액 암의 그룹으로부터 선택된 암, 바람직하게는, 상기 혈액암은 백혈병 및 골수종을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 약학조성물.
  62. 제 61항에 있어서,
    상기 백혈병은 만성 림프구 백혈병 및 급성 골수성 백혈병을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 약학조성물.
  63. 제 61항에 있어서,
    상기 골수종은 다발성 골수종인 것인 약학조성물.
  64. 제 52항 내지 제 60항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암는 고형 암들로부터 선택되고, 여기에서 상기 고형암은 교모세포종, 대장암), 유방 암, 림프종, 전립선암, 췌장암, 신장암, 난소암, 및 폐암을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 약학조성물.
  65. 최소한 하나 또는 몇 개의 투여단위의 제 1차 약학적 활성화제를 포함하는 약제 (여기에서 제 1차 약학적 활성화제는 제 52항 내지 제 60항 중 어느 한 항에 정의한 바와 같은 SDF-1에 결합가능한 핵산 분자이며 상기 약제는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 방법에서의 사용, 또는 부수적 치료법으로서 질병 또는 장애를 앓고 있거나 또는 질병 또는 장애로 진행될 위험이 있는 객체의 치료를 위한 방법에서의 사용, 또는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 사용을 위한 것이고 상기 질병 또는 장애는 암임).
  66. 제 65항에 있어서,
    상기 부수적 치료법은 상기 객체를 민감성 증진화시키고, 여기에서 상기 민감성 증진화된 객체는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 치료법에 보다 즉시 반응성인 것인 약제.
  67. 제 66항에 있어서,
    상기 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 치료법은 추가적 약학적 활성화제의 투여 및/또는 객체의 방사선 조사 및/또는 세포 치료법을 수행함을 포함하는 것인 약제.
  68. 제 65 항 내지 제 67항 중 어느 한 항, 바람직하게는, 제 65항에 있어서,
    상기 약제는 추가적 약학적 활성화제, 바람직하게는, 최소한 하나 또는 몇 개의 투여단위의 추가적 약학적 활성화제를 포함하고, 여기에서, 상기 추가적 약학적 활성화제는 항체, 알킬화제, 대사길항물질 , 식물 알칼로이드 (바람직하게는 빈크리스틴), 식물 테르페노이드), 토포이소머라제 저해제, 류코보린, 메토트렉세이트, 타목시펜, 소라페니브, 레날리도미드, 보르테조밉, 덱사메타손, 및 플루오로우라실을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약제.
  69. 제 67항에 있어서,
    상기 약제는 추가적 약학적 활성화제, 바람직하게는, 최소한 하나 또는 몇 개의 투여단위의 추가적 약학적 활성화제를 포함하고, 여기에서, 상기 추가적 약학적 활성화제는 항체, 알킬화제, 대사길항물질, 식물 알칼로이드 (바람직하게는 빈크리스틴), 식물 테르페노이드, 토포이소머라제 저해제, 류코보린, 메토트렉세이트, 타목시펜, 소라페니브, 레날리도미드, 보르테조밉, 덱사메타손, 플루오로우라실 및 프레드니손을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약제.
  70. 제 68 항 또는 제 69항에 있어서,
    상기 항체는 리툭시맙, 오파투무맙, 세툭시맙, 이브리투모맙-티욱세탄, 토시투모맙, 트라스투주맙, 베바시주맙, 및 알렘투주맙을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약제.
  71. 제 68 항 또는 제 69항에 있어서,
    상기 알킬화제는 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 메클로레타민, 시클로포스파미드, 클로람부실, 독소루비신, 리포조멀 독소루비신, 벤다무스틴, 테모졸로미드 및 메팔란을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약제.
  72. 제 68 항 또는 제 69항에 있어서,
    상기 대사길항물질는 퓨린아자티오프린, 머캅토퓨린, 플루다라빈, 펜토스타틴, 및 클라드리빈을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약제.
  73. 제 68 항 또는 제 69항에 있어서,
    상기 식물 테르페노이드는 탁산 류 화합물들로부터 선택된 화합물, 보다 바람직하게는, 도세탁셀, 파클리탁셀, 포도필로톡신 및 에포틸론을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약제.
  74. 제 68 항 또는 제 69항에 있어서,
    상기 토포이소머라제 저해제는 캠프토테신, 이리노테칸, 및 미톡산트론을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 약제.
  75. 제 65 항 내지 제 74항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암은 혈액 암의 그룹으로부터 선택된 암, 바람직하게는, 상기 혈액암은 백혈병 및 골수종을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 약제.
  76. 제 75항에 있어서,
    상기 백혈병은 만성 림프구 백혈병 및 급성 골수성 백혈병을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 약제.
  77. 제 75항에 있어서,
    상기 골수종은 다발성 골수종인 것인 약제.
  78. 제 65 항 내지 제 74항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암는 고형 암들로부터 선택되고, 여기에서 상기 고형암은 교모세포종, 대장암, 유방 암, 림프종, 전립선암, 췌장암, 신장암, 난소암, 및 폐암을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 약제.
  79. 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조 또는 부수적 치료법)으로서 질병 또는 장애를 앓고 있거나 또는 질병 또는 장애로 진행될 위험이 있는 객체의 치료를 위한 방법에서의 사용을 위한 (상기 질병 또는 장애는 암임), 제 1 항 내지 제 51항 중 어느 한 항에 정의한 바와 같은 핵산 분자의 용도.
  80. 제 79항에 있어서,
    상기 부수적 치료법은 상기 객체를 민감성 증진화시키고, 여기에서 상기 민감성 증진화된 객체는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 치료법에 보다 즉시 반응성인 것인 용도.
  81. 제 80항에 있어서,
    상기 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 치료법은 추가적 약학적 활성화제의 투여 및/또는 객체의 방사선 조사 및/또는 세포 치료법을 수행함을 포함하는 것인 용도.
  82. 제 79항 내지 제 81항 중 어느 한 항, 바람직하게는 제 79항에 있어서,
    상기 약제는 추가적 약학적 활성화제와 조합하여 사용되는 것이며, 여기에서, 상기 추가적 약학적 활성화제는 항체, 알킬화제, 대사길항물질, 식물 알칼로이드 (바람직하게는 빈크리스틴), 식물 테르페노이드), 토포이소머라제 저해제, 류코보린, 메토트렉세이트, 타목시펜, 소라페니브, 레날리도미드, 보르테조밉, 덱사메타손, 플루오로우라실 및 프레드니손을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  83. 제 81항에 있어서,
    상기 추가적 약학적 활성화제는 항체, 알킬화제, 대사길항물질, 식물 알칼로이드 (바람직하게는 빈크리스틴), 식물 테르페노이드, 토포이소머라제 저해제, 류코보린, 메토트렉세이트, 타목시펜, 소라페니브, 레날리도미드, 보르테조밉, 덱사메타손, 플루오로우라실 및 프레드니손을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  84. 제 82항 또는 제 83항에 있어서,
    상기 항체는 리툭시맙, 세툭시맙, 이브리투모맙-티욱세탄, 토시투모맙, 트라스투주맙, 베바시주맙 및 알렘투주맙을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  85. 제 82항 또는 제 83항에 있어서,
    상기 알킬화제는 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 메클로레타민, 시클로포스파미드, 클로람부실, 독소루비신, 리포조멀 독소루비신, 벤다무스틴, 테모졸로미드 및 메팔란을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  86. 제 82항 또는 제 83항에 있어서,
    상기 대사길항물질는 퓨린아자티오프린, 머캅토퓨린, 플루다라빈, 펜토스타틴 및 클라드리빈을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  87. 제 82항 또는 제 83항에 있어서,
    상기 식물 테르페노이드는 탁산 류화합물들로부터 선택된 화합물, 보다 바람직하게는, 도세탁셀, 파클리탁셀, 포도필로톡신 및 에포틸론을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  88. 제 82항 또는 제 83항에 있어서,
    상기 토포이소머라제 저해제는 캠프토테신, 이리노테칸, 및 미톡산트론을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 용도.
  89. 제 82항 또는 제 83항에 있어서,
    상기 암은 혈액 암의 그룹으로부터 선택된 암, 바람직하게는, 상기 혈액암은 백혈병 및 골수종을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 용도.
  90. 제 89항에 있어서,
    상기 백혈병은 만성 림프구 백혈병 및 급성 골수성 백혈병을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 용도.
  91. 제 89항에 있어서,
    상기 골수종은 다발성 골수종인 것인 용도.
  92. 제 79항 내지 88항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암는 고형 암들로부터 선택되고, 여기에서 상기 고형암은 교모세포종, 대장암, 유방 암, 림프종, 전립선암, 췌장암, 신장암, 난소암, 및 폐암을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 용도.
  93. (a) 약학적으로 허용가능한 양의 제 1항 내지 51항 중 어느 한 항에 정의한 바와 같은 SDF-1과 결합가능한 핵산 분자를 투여하는 단계를 포함하는, 암을 앓고 있거나 또는 암으로 진행될 위험이 있는 객체를 치료하기 위한 방법.
  94. 제 93항에 있어서,
    상기 방법은 (b) 객체에게 방사선 조사 및/또는 수술 및/또는 세포 치료법을 수행 및/또는 약학적으로 허용가능한 양의 추가적 약학적 활성화제의 투여하는 단계를 포함하는 것이며, 여기에서 상기 추가적 약학적 활성화제는 항체, 알킬화제, 대사길항물질, 식물 알칼로이드 (바람직하게는 빈크리스틴), 식물 테르페노이드, 토포이소머라제 저해제, 류코보린, 메토트렉세이트, 타목시펜, 소라페니브, 레날리도미드, 보르테조밉, 덱사메타손, 플루오로우라실 및 프레드니손을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  95. 제 94항에 있어서,
    상기 약학적으로 허용가능한 양의 제 1항 내지 51항 중 어느 한 항에 정의한 바와 같은 SDF-1과 결합가능한 핵산 분자를 부수적 치료법 또는 부수적 치료법의 부분으로서 투여하는 것인 방법.
  96. 제 95항에 있어서,
    상기 부수적 치료법은 상기 객체를 민감성 증진화시키고, 여기에서 상기 민감성 증진화된 객체는 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 치료법에 보다 즉시 반응성인 것인 방법.
  97. 제 96항에 있어서,
    상기 질병 또는 장애의 치료 및/또는 예방을 위한 치료법은 상기 (b) 단계에서 수행된 바와 같은, 추가적 약학적 활성화제의 투여 및/또는 객체의 방사선 조사 및/또는 세포 치료법을 수행함을 포함하는 것인 방법.
  98. 제 94 항 내지 제 97항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 리툭시맙, 세툭시맙, 이브리투모맙-티욱세탄, 토시투모맙, 트라스투주맙, 베바시주맙 및 알렘투주맙을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  99. 제 94 항 내지 제 97항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 알킬화제는 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 메클로레타민, 시클로포스파미드, 클로람부실, 독소루비신, 리포조멀 독소루비신, 벤다무스틴, 테모졸로미드 및 메팔란을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  100. 제 94 항 내지 제 97항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대사길항물질는 퓨린아자티오프린, 머캅토퓨린, 플루다라빈, 펜토스타틴 및 클라드리빈을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  101. 제 94 항 내지 제 97항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식물 테르페노이드는 탁산 류 화합물들로부터 선택된 화합물, 보다 바람직하게는, 도세탁셀, 파클리탁셀, 포도필로톡신 및 에포틸론을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  102. 제 94 항 내지 제 97항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 토포이소머라제 저해제는 캠프토테신, 이리노테칸, 및 미톡산트론을 포함하는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  103. 제 93 항 내지 제 102항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암은 혈액 암의 그룹으로부터 선택된 암, 바람직하게는, 상기 혈액암은 백혈병 및 골수종을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 방법.
  104. 제 103 항에 있어서,
    상기 백혈병은 만성 림프구 백혈병 및 급성 골수성 백혈병을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 방법.
  105. 제 103 항에 있어서,
    상기 골수종은 다발성 골수종인 것인 방법.
  106. 제 93 항 내지 제 102항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암는 고형 암들로부터 선택되고, 여기에서 상기 고형암은 교모세포종, 대장암, 유방 암, 림프종, 전립선암, 췌장암, 신장암, 난소암, 및 폐암을 포함하는 그룹으로부터 선택되는 것인 방법.
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