KR20130014678A

KR20130014678A - 신규한 ｐａｎｃｄｋ 억제제의 종양 치료를 위한 용도

Info

Publication number: KR20130014678A
Application number: KR1020127025684A
Authority: KR
Inventors: 울리히 뤼킹; 게하드 지마이스터; 안트예 마그레트 벤그너
Original assignee: 바이엘 인텔렉쳐 프로퍼티 게엠베하
Priority date: 2010-04-01
Filing date: 2011-03-28
Publication date: 2013-02-08
Also published as: SG10201502566SA; BR112012024422A2; CA2794996A1; JP5816259B2; UA108494C2; JP2013523680A; CL2012002753A1; EP2552450A1; MA34098B1; ECSP12012198A; AU2011234654B2; MX2012011427A; DE102010014426A1; TN2012000469A1; CR20120502A; WO2011120922A1; MX337722B; DOP2012000260A; NZ602710A; US20130210846A1

Abstract

본 발명은, 하기 화학식 I의 선별된 술폭시민-치환 아닐리노피리미딘 유도체의 종양 치료를 위한 용도에 관한 것이다.
<화학식 I>

Description

신규한 ＰＡＮＣＤＫ 억제제의 종양 치료를 위한 용도 {USE OF NOVEL PAN-CDK INHIBITORS FOR TREATING TUMORS}

본 발명은 신규한 pan-CDK 억제제의 종양 치료를 위한 용도에 관한 것이다.

신규한 pan-CDK 억제제는 선별된 술폭시민-치환 아닐리노피리미딘 유도체이다.

신규한 pan-CDK 억제제 및 그의 제조 방법은 PCT 출원 PCT/EP2009/007247에 개시되어 있으며, 상기 출원의 개시내용은 본 출원에서 참조로 하며 본 출원에 참고로 포함된다.

시클린-의존성 키나제 (CDK)는 세포 주기의 조절에서 중요한 역할을 하는 효소군이므로, 이들은 소형 억제성 분자의 개발을 위한 특히 중요한 표적이 된다. CDK의 선택적 억제제는 암 또는 세포 증식의 교란에 의해 야기되는 기타 장애의 치료에 사용될 수 있다.

피리미딘 및 유사체들이 활성 화합물로서 이미 개시되었는데, 예를 들면 살진균제로서의 2-아닐리노-피리미딘 (DE 4029650), 또는 신경 장애 또는 신경변성 장애 치료용의 치환된 피리미딘 유도체 (WO 99/19305)가 있다. 매우 다양한 피리미딘 유도체, 예를 들면 2-아미노-4-치환된 피리미딘 (WO 01/14375), 퓨린 (WO 99/02162), 5-시아노-피리미딘 (WO 02/04429), 아닐리노피리미딘 (WO 00/12486) 및 2-히드록시-3-N,N-디메틸아미노프로폭시피리미딘 (WO 00/39101)이 CDK 억제제로서 개시되었다.

WO 02/096888 및 WO 03/076437에는 특히 CDK와 관련된 억제 작용을 하는 피리미딘 유도체가 개시되어 있다.

페닐술폰아미드 기를 함유하는 화합물은 인간 카르보안히드라제 (특히 카르보안히드라제-2)의 억제제로서 공지되어 있고, 특히 녹내장의 치료를 위한 이뇨제로서 사용되고 있다. 술폰아미드의 질소 원자 및 산소 원자는 수소 결합을 통해 카르보안히드라제-2의 활성 중심의 아연² ⁺ 이온 및 아미노산 Thr 199에 결합되며, 그에 따라 그의 효소 기능을 차단한다 (문헌 [A. Casini, F. Abbate, A. Scozzafava, C.T. Supuran, Bioorganic. Med. Chem. Lett. 2003, 1, 2759]). 페닐술폰아미드 기를 함유하는 CDK 억제제의 임상학적 사용은 카르보안히드라제의 가능한 억제 및 그에 따른 부작용 스펙트럼 때문에 제한될 수 있다.

활성 술폭시민 화합물의 예로는 살진균제로서의 술폰이미도일-개질 트리아졸 (문헌 [H. Kawanishi, H. Morimoto, T. Nakano, T. Watanabe, K. Oda, K. Tsujihara, Heterocycles 1998, 49, 181]), 또는 제초제 및 살충제로서의 아릴알킬술폭시민 (쉘 인터내셔날 리서치(Shell International Research)의 독일 특허 2 129 678)이 있다.

WO 2005/037800에 시클린-의존성 키나제의 억제제로서의 개환 술폭시민-치환 아닐리노피리미딘 유도체가 개시되어 있다. 제시되어 있는 예는 비치환이거나, 또는 피리미딘의 5-위치에서 할로겐, 특히 브로민에 의해 치환된 구조체이다. 구체적으로 개시되어 있는 구조체들 중 어느 것도 5-트리플루오로메틸 치환기를 갖지 않는다.

이와 같은 선행 기술을 토대로, 본 발명의 목적은 CDK를 강력하게 억제할 뿐만 아니라, 또한 종양 성장을 효과적으로 억제하는 화합물을 제공하는 것이다. 강력한 CDK 억제는 효과적인 종양 억제에 있어서 필요하기는 하나 불충분한 전제조건이다. 후자를 위해서는 구조체의 추가의 성질, 예를 들면 종양 세포로의 침투 능력을 필요로 한다.

본 발명에 이르러, 하기 화학식 I의 화합물, 및 그의 생리학상 허용되는 염, 부분입체이성질체 및 거울상이성질체가 CDK를 강력하게 억제할 뿐만 아니라, 또한 종양 성장을 특히 효과적으로 억제한다는 것이 밝혀졌다.

<화학식 I>

식 중,

X는 -O- 또는 -NH-를 나타내고,

R¹은 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필 기를 나타내고,

R² 및 R³은 서로 독립적으로 수소, 메틸 또는 에틸 기를 나타내고,

R⁴는 C₁-C₆-알킬 기 또는 C₃-C₇-시클로알킬 고리를 나타낸다.

X가 -O-를 나타내는 화합물은 하기 화학식 Ia로 개괄된다.

<화학식 Ia>

X가 -NH-를 나타내는 화합물은 하기 화학식 Ib로 개괄된다.

<화학식 Ib>

본 출원은 하기 정의에 따른다.

C₁-C₆-알킬

C₁-C₆-알킬 기는 각각의 경우에 직쇄 또는 분지형의 알킬 라디칼, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 이소펜틸 또는 헥실 라디칼로서 정의된다.

C₃-C₇-시클로알킬

C₃-C₇-시클로알킬 고리는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 또는 시클로헵틸 고리로서 정의된다.

화학식 I에서, X는 -O- 또는 -NH-를 나타낼 수 있다.

바람직하게는, X는 -O-를 나타낸다.

화학식 I에서, R¹은 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필 기를 나타낼 수 있다.

바람직하게는, R¹은 메틸 기를 나타낸다.

화학식 I에서, R² 및 R³은 서로 독립적으로 수소, 메틸 또는 에틸 기를 나타낼 수 있다.

바람직하게는, R² 및 R³은 서로 독립적으로 수소 또는 메틸 기를 나타낸다.

특히 바람직하게는, R²는 메틸 기를 나타내고 R³은 수소 또는 메틸 기를 나타낸다.

화학식 I에서, R⁴는 C₁-C₆-알킬 라디칼 또는 C₃-C₇-시클로알킬 고리를 나타낸다.

바람직하게는, R⁴는 메틸 또는 에틸 기를 나타내거나 시클로프로필 고리를 나타낸다.

화학식 I에 따른 화합물의 바람직한 하위군은

X가 -O- 또는 -NH-를 나타내고,

R¹이 메틸 기를 나타내고,

R²가 메틸 기를 나타내고,

R³이 수소 또는 메틸 기를 나타내고,

R⁴가 메틸 또는 에틸 기를 나타내거나 시클로프로필 고리를 나타내는 화합물, 및 그의 생리학상 허용되는 염, 부분입체이성질체 및 거울상이성질체이다.

하기 개개의 화합물의 본 발명에 따른 용도, 및 이들의 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 생리학상 허용되는 염이 가장 바람직하다.

- (RS)-S-시클로프로필-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]옥시}-5-(트리플루오로메틸)-피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드,

- (RS)-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]옥시}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]-아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드,

- (RS)-S-(4-{[4-{[(R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]옥시}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}-페닐)-S-메틸술폭시미드,

- (RS)-S-시클로프로필-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)-피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드,

- (RS)-S-시클로프로필-S-(4-{[4-{[(R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)-피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드,

- (RS)-S-에틸-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드,

- (RS)-S-에틸-S-(4-{[4-{[(R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드,

- (RS)-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]-아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드,

- (RS)-S-(4-{[4-{[(1R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]-아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드.

본 발명은 또한 상기 화합물의 생리학상 허용되는 염의 용도를 포괄한다.

본 발명에 따른 화합물의 생리학상 허용되는 염은 무기산, 카르복실산 및 술폰산의 산 부가염, 예를 들어 염산, 브로민화수소산, 황산, 인산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산, 벤젠술폰산, 나프탈렌디술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 락트산, 타르타르산, 말산, 시트르산, 푸마르산, 말레산 및 벤조산의 염을 포함한다.

본 발명에 따른 화합물의 생리학상 허용되는 염은 또한 통상의 염기의 염, 예컨대 바람직하게 예를 들면 알칼리 금속 염 (예를 들어, 나트륨 및 칼륨 염), 알칼리 토금속 염 (예를 들어, 칼슘 및 마그네슘 염) 및 1 내지 16개의 C 원자를 갖는 암모니아 또는 유기 아민, 예컨대 바람직하게 예를 들면 에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 에틸디이소프로필아민, 모노에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 디시클로헥실아민, 디메틸아미노에탄올, 프로카인, 디벤질아민, N-메틸모르폴린, 아르기닌, 리신, 에틸렌디아민 및 N-메틸피페리딘으로부터 유래된 암모늄 염을 포함한다.

본 발명은 추가로 특히 종양 장애의 치료 및/또는 예방을 위한, 1종 이상의 본 발명에 따른 화합물 및 1종 이상의 추가의 활성 화합물을 포함하는 의약을 제공한다.

본 발명에 따른 화합물은 전신 작용 및/또는 국부 작용할 수 있다. 이러한 목적을 위해, 본 발명에 따른 화합물은 적합한 방식으로, 예를 들어 경구로, 비경구로, 폐로, 비내로, 설하로, 설측으로, 구강으로, 직장으로, 피부로, 경피로, 결막으로, 귀를 통해 투여되거나 이식물 또는 스텐트(stent)로서 투여될 수 있다.

이러한 투여 경로를 위해, 본 발명에 따른 화합물은 적합한 투여 형태로 투여될 수 있다.

경구 투여에 적합한 것은 본 발명에 따른 화합물을 결정질 및/또는 무정형 및/또는 용해된 형태로 포함하고 본 발명에 따른 화합물을 신속히 방출하고/거나 변형된 형태로 방출하는, 선행기술에 따라 작용하는 투여 형태이며, 예를 들면 정제 (비코팅 또는 코팅 정제, 예를 들어 본 발명에 따른 화합물의 방출을 조절하는 서서히 용해되거나 불용성인 장용 코팅물로 코팅됨), 구강에서 신속히 분해되는 정제 또는 필름/웨이퍼(wafer), 필름/동결건조물, 캡슐 (예를 들어, 경질 젤라틴 캡슐 또는 연질 젤라틴 캡슐), 당-코팅 정제, 과립, 펠릿, 분말, 에멀젼, 현탁액, 에어로졸제 또는 용액이 있다.

비경구 투여는 흡수 단계가 생략 (예를 들어, 정맥내, 동맥내, 심장내, 척수내 또는 요추내)되거나 또는 흡수가 포함되어 (예를 들어, 근육내, 피하, 피부내, 경피 또는 복강내) 수행될 수 있다. 비경구 투여에 있어서, 적합한 투여 형태는 특히 용액, 현탁액, 에멀젼, 동결건조물 또는 멸균 분말 형태의 주사 및 주입 제제이다.

다른 투여 경로에 적합한 것으로는, 예를 들어 흡입 (특히, 분말 흡입기, 네불라이저(nebulizer))용 제약 형태, 점비제, 점비액제, 점비 분무액제; 설측으로, 설하로 또는 구강으로 적용되는 정제, 필름/웨이퍼 또는 캡슐, 좌제, 점이제 또는 점안제, 질좌제, 수성 현탁액 (로션, 쉐이크 로션(shake lotion)), 친유성 현탁액, 연고, 크림, 경피 치료 시스템 (예컨대, 패치), 유제, 페이스트, 포말, 살포제, 이식물 또는 스텐트가 있다.

본 발명에 따른 화합물은 언급된 투여 형태로 전환될 수 있다. 이러한 전환은 그 자체가 공지된 방법으로 불활성이고 비독성인 제약상 허용되는 보조제와 혼합함으로써 수행될 수 있다. 이러한 보조제에는 특히 담체 (예를 들어, 미세결정질 셀룰로스, 락토스, 만니톨), 용매 (예를 들어, 액체 폴리에틸렌 글리콜), 유화제 및 분산제 또는 습윤화제 (예를 들어, 나트륨 도데실술페이트, 폴리옥시소르비탄 올레에이트), 결합제 (예를 들어, 폴리비닐피롤리돈), 합성 및 천연 중합체 (예를 들어, 알부민), 안정화제 (예를 들어, 아스코르브산과 같은 항산화제), 착색제 (예를 들어, 산화철과 같은 무기 안료) 및 맛 교정제 및/또는 교취제가 포함된다.

본 발명은 추가로 1종 이상의 본 발명에 따른 화합물을, 통상적으로 1종 이상의 불활성이고 비독성인 제약상 적합한 보조제와 함께 포함하는 의약, 및 상기 언급된 목적을 위한 그의 용도를 제공한다.

제약 제품을 제공하기 위한 본 발명에 따른 화합물의 제제화는 그 자체가 공지된 방법으로 활성 화합물(들)을 제약 기술에서 통상적인 부형제에 의해 목적하는 투여 형태로 전환시킴으로써 수행된다.

이와 관련하여 사용될 수 있는 보조제에는, 예를 들어 담체 물질, 충전제, 붕해제, 결합제, 보습제, 윤활제, 흡수제 및 흡착제, 희석제, 용매, 공용매, 유화제, 가용화제, 향미 은폐제, 착색제, 보존제, 안정화제, 습윤화제, 삼투압을 변화시키기 위한 염 또는 완충제가 있다.

이와 관련하여서는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Science, 15th ed. Mack Publishing Company, East Pennsylvania (1980)]을 참조로 할 것이다.

제약 제제는

고체 형태, 예를 들어 정제, 코팅 정제, 환제, 좌제, 캡슐, 경피 시스템 또는

반고체 형태, 예를 들어 연고, 크림, 겔, 좌제, 에멀젼 또는

액체 형태, 예를 들어 용액, 팅크제, 현탁액 또는 에멀젼일 수 있다.

본 발명의 맥락에서 보조제는, 예를 들어 염, 사카라이드 (모노-, 디-, 트리-, 올리고- 및/또는 폴리사카라이드), 단백질, 아미노산, 펩티드, 지방, 왁스, 오일, 탄화수소 및 이들의 유도체일 있으며, 여기서 상기 보조제들은 천연 기원의 것일 수 있거나 합성 또는 부분 합성에 의해 수득되는 것일 수 있다.

특히 정제, 코팅 정제, 캡슐, 환제, 분말, 과립, 당의정, 현탁액, 에멀젼 또는 용액이 경구 또는 구강 투여에 적합하다.

특히 현탁액, 에멀젼, 또한 특별히 용액이 비경구 투여에 적합하다.

본 발명은 종양 장애의 예방 및 치료를 위한 화학식 I의 화합물의 용도에 관한 것이다.

화학식 I의 화합물은 특히 세포 증식 및/또는 세포 분열을 억제 또는 감소시키고/거나 아폽토시스(apoptosis)를 유도하기 위해 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물은 특히 과다증식성 장애, 예컨대

- 건선,

- 켈로이드 및 기타 피부 과형성증,

- 양성 전립선 비대증 (BPH),

- 고형 종양 및

- 혈액 종양

의 치료에 적합하다.

본 발명에 따라 치료가능한 고형 종양으로는, 예를 들어 유방, 기도, 뇌, 생식 기관, 위장관, 비뇨생식기, 눈, 간, 피부, 두경부, 갑상선, 부갑상선, 골 및 결합 조직의 종양 및 이들 종양의 전이가 있다.

본 발명에 따라 치료가능한 혈액 종양으로는, 예를 들어 다발성 골수종, 림프종 또는 백혈병이 있다.

치료가능한 유방 종양으로는, 예를 들어

- 양성 호르몬 수용체 상태의 유방 암종,

- 음성 호르몬 수용체 상태의 유방 암종,

- Her-2 양성 유방 암종,

- 호르몬 수용체 및 Her-2 음성 유방 암종,

- BRCA-관련 유방 암종,

- 염증성 유방 암종

이 있다.

치료가능한 기도 종양으로는, 예를 들어

- 비소세포성 기관지 암종 및

- 소세포성 기관지 암종

이 있다.

치료가능한 뇌 종양으로는, 예를 들어

- 신경교종,

- 교모세포종,

- 성상세포종,

- 수막종 및

- 수모세포종

이 있다.

치료가능한 남성 생식 기관 종양으로는, 예를 들어

- 전립선 암종,

- 악성 고환 종양 및

- 음경 암종

이 있다.

치료가능한 여성 생식 기관 종양으로는, 예를 들어

- 자궁내막 암종,

- 자궁경부 암종,

- 난소 암종,

- 질 암종,

- 외음부 암종

이 있다.

치료가능한 위장관 종양으로는, 예를 들어

- 결장직장 암종,

- 항문 암종,

- 위 암종,

- 췌장 암종,

- 식도 암종,

- 담낭 암종,

- 소장 암종,

- 타액선 암종,

- 신경내분비 종양,

- 위장관 기질 종양

이 있다.

치료가능한 비뇨생식기 종양으로는, 예를 들어

- 방광 암종,

- 신장 세포 암종,

- 신우 및 하부 요로 암종

이 있다.

치료가능한 눈 종양으로는, 예를 들어

- 망막모세포종,

- 안구 흑색종

이 있다.

치료가능한 간 종양으로는, 예를 들어

- 간세포성 암종,

- 담관세포성 암종

이 있다.

치료가능한 피부 종양으로는, 예를 들어

- 악성 흑색종,

- 기저세포종,

- 스피날리오마(spinalioma),

- 카포시(Kaposi) 육종,

- 메르켈(Merkel) 세포 암종

이 있다.

치료가능한 두경부 종양으로는, 예를 들어

- 후두 암종,

- 인두 및 구강 암종

이 있다.

치료가능한 육종으로는, 예를 들어

- 연부 조직 육종,

- 골육종

이 있다.

치료가능한 림프종으로는, 예를 들어

- 비호지킨 림프종,

- 호지킨 림프종,

- 피부 림프종,

- 외투 세포 림프종,

- 중추신경계 림프종,

- AIDS-관련 림프종

이 있다.

치료가능한 백혈병으로는, 예를 들어

- 급성 골수성 백혈병,

- 만성 골수성 백혈병,

- 급성 림프성 백혈병,

- 만성 림프성 백혈병,

- 모발상 세포 백혈병

이 있다.

유리하게는, 화학식 I의 화합물은 유방 암종, 특히 호르몬 수용체 음성, 호르몬 수용체 양성 또는 BRCA-관련 유방 암종, 및 췌장 암종, 신장 세포 암종, 악성 흑색종 및 기타 피부 종양, 소세포성 기관지 암종, 비소세포성 기관지 암종, 결장직장 암종, 난소 암종, 자궁경부 암종, 전립선 암종, 백혈병 또는 림프종의 치료에 사용될 수 있다.

특히 유리하게는, 화학식 I의 화합물은 유방 암종, 특히 에스트로겐 수용체-음성 유방 암종, 난소 암종, 예를 들어 특히 시스플라틴-내성 난소 암종, 결장직장 암종, 소세포성 기관지 암종 또는 자궁경부 암종, 예를 들어 특히 다중약물-내성 자궁경부 암종의 치료에 사용될 수 있다.

이들 장애는 인간에게서 잘 특징화되어 있을 뿐만 아니라, 기타 포유동물에서도 발견된다.

본 발명은 종양 치료용 의약으로서의 본 발명에 따른 화학식 I의 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명은 추가로 종양 치료용 의약의 제조를 위한 본 발명에 따른 화학식 I의 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명은 추가로 증식성 과정과 관련된 장애의 치료를 위한 본 발명에 따른 화합물의 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 화합물은 그 자체로, 또는 필요에 따라, 1종 이상의 다른 약리학상 활성 물질과의 조합이 원치않는 허용되지 않는 부작용을 유도하지 않는 한, 그와 같이 조합되어 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 추가로 특히 상기 언급된 질환의 치료 및/또는 예방을 위한, 1종 이상의 본 발명에 따른 화합물 및 1종 이상의 추가의 활성 화합물을 포함하는 의약을 제공한다.

예를 들어, 본 발명의 화합물은 암 장애의 치료를 위한 공지된 항과다증식, 세포증식억제 또는 세포독성 물질과 조합될 수 있다. 특히 본 발명에 따른 화합물의 암 요법에 통상적인 다른 물질 또는 방사선요법과의 조합이 지시된다.

그 예로 언급될 수 있는 조합에 적합한 활성 화합물로는 아브락산, 아피니토, 알데스류킨, 알렌드론산, 알파페론, 알리트레티노인, 알로퓨린올, 알로프림, 알록시, 알트레타민, 아미노글루테티미드, 아미포스틴, 암루비신, 암사크린, 아나스트로졸, 안즈메트, 아라네스프, 아르글라빈, 삼산화비소, 아로마신, 5-아자시티딘, 아자티오프린, BCG 또는 타이스-BCG, 베스타틴, 베타-메타손 아세테이트, 베타메타손 나트륨 포스페이트, 벡사로텐, 블레오마이신 술페이트, 브록수리딘, 보르테조밉, 부술판, 칼시토닌, 캄파쓰, 카페시타빈, 카르보플라틴, 카소덱스, 카페손, 셀모류킨, 세루비딘, 클로람부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 클로드론산, 시클로포스파미드, 시타라빈, 다카르바진, 닥티노마이신, 다우노솜, 데카드론, 데카드론 포스페이트, 델레스트로겐, 데니류킨 디프티톡스, 데포메드롤, 데스로렐린, 덱스라족산, 디에틸스틸베스트롤, 디플루칸, 도세탁셀, 독시플루리딘, 독소루비신, 드론아비놀, DW-166HC, 엘리가르드, 엘리텍, 엘렌스, 에멘드, 에피루비신, 에포에틴-알파, 에포겐, 엡타플라틴, 에르가미솔, 에스트레이스, 에스트라디올, 에스트라무스틴 나트륨 포스페이트, 에티닐에스트라디올, 에티올, 에티드론산, 에토포포스, 에토포시드, 파드로졸, 파르스톤, 필그라스팀, 피나스테리드, 플리그라스팀, 플록수리딘, 플루코나졸, 플루다라빈, 5-플루오로데옥시우리딘 모노포스페이트, 5-플루오르우라실 (5-FU), 플루옥시메스테론, 플루타미드, 포르메스탄, 포스테아빈, 포테무스틴, 풀베스트란트, 감마가르드, 젬시타빈, 젬투주맙, 글리벡, 글리아델, 고세렐린, 그라니세트론 히드로클로라이드, 히스트렐린, 히캄틴, 히드로코르톤, 에리트로-히드록시노닐아데닌, 히드록시우레아, 입리투모맙 티욱세탄, 이다루비신, 이포스파미드, 인터페론-알파, 인터페론-알파-2, 인터페론-알파-2α, 인터페론-알파-2β, 인터페론-알파-n1, 인터페론-알파-n3, 인터페론-베타, 인터페론-감마-1α, 인터류킨-2, 인트론　A, 이레싸, 이리노테칸, 키트릴, 라파티닙, 렌티난 술페이트, 레트로졸, 류코보린, 류프롤리드, 류프롤리드 아세테이트, 레바미솔, 레보폴산 칼슘염, 레보트로이드, 레복실, 로무스틴, 로니다민, 마리놀, 메클로르에타민, 메코발라민, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜파란, 메네스트, 6-머캅토퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 메트빅스, 밀테포신, 미노시클린, 미토마이신　C, 미토탄, 미톡산트론, 모드레날, 미오세트, 네다플라틴, 눌라스타, 누메가, 누포겐, 닐루타미드, 놀바덱스, NSC-631570, OCT-43, 옥트레오티드, 온단세트론 히드로클로라이드, 오라프레드, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 페디아프레드, 페가스파르가세, 페가시스, 펜토스타틴, 피시바닐, 필로카르핀 히드로클로라이드, 피라루비신, 플리카마이신, 포파이머 나트륨, 프레드니무스틴, 프레드니솔론, 프레드니손, 프레마린, 프로카르바진, 프로크릿, 랄티트렉세드, RDEA119, 레비프, 레늄-186 에티드로네이트, 리툭시맙, 로페론-A, 로무르티드, 살라겐, 산도스타틴, 사르그라모스팀, 세무스틴, 시조피란, 소부족산, 솔루-메드롤, 스트렙토조신, 스트론튬-89 클로라이드, 신트로이드, 타목시펜, 탐술로신, 타소네르민, 타스토락톤, 탁소테르, 테세류킨, 테모졸로미드, 테니포시드, 테스토스테론 프로피오네이트, 테스트레드, 티오구아닌, 티오테파, 타이로트로핀, 틸루드론산, 토포테칸, 토레미펜, 토시투모맙, 타스투주맙, 트레오술판, 트레티노인, 트렉살, 트리메틸멜라민, 트리메트렉세이트, 트리프토렐린 아세테이트, 트리프토렐린 파모에이트, UFT, 우리딘, 발루비신, 베스나리논, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈, 비룰리진, 지네카르드, 지노스타틴-스티말라머, 조프란; ABI-007, 아콜비펜, 악티뮨, 아피니탁, 아미노프테린, 아르족시펜, 아소프리스닐, 아타메스탄, 아트라센탄, BAY 43-9006 (소라페닙), 아바스틴, CCI-779, CDC-501, 셀레브렉스, 세툭시맙, 크리스나톨, 사이프로테론 아세테이트, 데시타빈, DN-101, 독소루비신-MTC, dSLIM, 두타스테리드, 에도테카린, 에플로르니틴, 엑사테칸, 펜레티니드, 히스타민 디히드로클로라이드, 히스트렐린 히드로겔 이식물, 홀뮴-166 DOTMP, 이반드론산, 인터페론-감마, 인트론-PEG, 익사베필론, 키홀 림펫 헤모시아닌, L-651582, 란레오티드, 라소폭시펜, 리브라, 로나파르닙, 미프록시펜, 미노드로네이트, MS-209, 리포솜 MTP-PE, MX-6, 나파렐린, 네모루비신, 네오바스타트, 놀라트렉세드, 오블리메르센, 온코-TCS, 오시뎀, 파클리탁셀 폴리글루타메이트, 파미드로네이트 이나트륨, PN-401, QS-21, 쿠아제팜, R-1549, 랄록시펜, 란피르나스, 13-시스-레티노산, 사트라플라틴, 세오칼시톨, T-138067, 타르세바, 탁소프렉신, 타이모신-알파-1, 티아조푸린, 티피파르닙, 티라-파자민, TLK-286, 토레미펜, 트랜스MID-107R, 발스포다르, 바프레오티드, 바탈라닙, 베르테포르핀, 빈플루닌, Z-100, 졸레드론산 및 이들의 조합물이 있다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 화합물은, 예를 들어 아브락산, 아미노글루테티미드, L-아스파라기나제, 아자티오프린, 5-아자시티딘, 블레오마이신, 부술판, 카르보플라틴, 카르무스틴, 클로람부실, 시스플라틴, 콜라스파제, 시클로포스파미드, 시타라빈, 데카르바진, 닥티노마이신, 다우노루비신, 디에틸스틸베스트롤, 2',2'-디플루오로데옥시시티딘, 도세탁셀, 독소루비신 (아드리아마이신), 에피루비신, 에포틸론 및 그의 유도체, 에리트로-히드록시노닐아데닌, 에티닐에스트라디올, 에토포시드, 플루다라빈 포스페이트, 5-플루오로데옥시우리딘, 5-플루오로데옥시우리딘 모노포스페이트, 5-플루오로우라실, 플루옥시메스테론, 플루타미드, 헥사메틸멜라민, 히드록시우레아, 히드록시-프로게스테론 카프로에이트, 이다루비신, 이포스파미드, 인터페론, 이리노테칸, 류코보린, 로무스틴, 메클로르에타민, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜파란, 6-머캅토퓨린, 메스나, 메토트렉세이트, 미토마이신 C, 미토탄, 미톡산트론, 파클리탁셀, 펜토스타틴, N-포스포노아세틸 L-아스파르테이트 (PALA), 플리카마이신, 프레드니솔론, 프레드니손, 프로카르바진, 랄록시펜, 세무스틴, 스트렙토조신, 타목시펜, 테니포시드, 테스토스테론 프로피오네이트, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸, 트리메틸멜라민, 우리딘, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신 및 비노렐빈일 수 있는 항과다증식제와 조합될 수 있으나, 상기 목록이 단정적인 것은 아니다.

본 발명에 따른 화합물은 또한 매우 유망한 방식으로 생물학적 치료제, 예컨대 항체 (예를 들어, 아바스틴, 리툭산, 에르비툭스, 헤르셉틴, 세툭시맙) 및 재조합 단백질과도 조합될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물은 또한 혈관신생에 대한 다른 치료제, 예컨대 아바스틴, 악시티닙, 레고라페닙, 레센틴, 소라페닙 또는 수니티닙과의 조합에서도 긍정적인 효과를 달성할 수 있다. 프로테아솜 및 mTOR의 억제제 및 항호르몬 및 스테로이드 대사 효소 억제제와의 조합은, 이들의 바람직한 부작용 프로파일 때문에 특히 적합하다.

일반적으로, 하기 목적은 본 발명의 화합물의 세포증식억제 또는 세포독성 작용을 하는 다른 작용제와의 조합에 의해 달성될 수 있다.

* 종양 성장의 지연, 종양 크기의 축소 또는 종양의 완전한 제거에 있어서, 개개의 활성 화합물을 사용한 치료와 비교하여 개선된 활성;

* 단일요법에서보다 적은 투여량으로 사용되는 화학요법제의 사용 가능성;

* 개개의 투여와 비교하여 부작용이 거의 없는 보다 관용성을 갖는 요법의 가능성;

* 보다 광범위한 스펙트럼의 종양 질환의 치료 가능성;

* 요법에 대하여 보다 높은 비율의 반응 달성;

* 현재의 표준 요법과 비교하여 보다 장기간의 환자 생존 시간.

본 발명에 따른 화합물은 또한 방사선요법 및/또는 외과적 요법과 조합되어 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 화합물의 제조

본 발명에 따른 화합물의 제조는 PCT/EP2009/007247에 포괄적으로 개시되어 있으며, 상기 출원의 개시내용은 본 출원에서 참조로 하며 본 출원에 참고로 포함된다.

제조 원리:

화학식 Ia의 화합물 (4-O 유도체)의 제조

본 발명에 따른 화합물은 하기 단계를 특징으로 하는 방법에 의해 제조될 수 있다.

a) 화학식 IVd의 화합물을 산화시켜 화학식 IVc의 술폭시드를 제공하는 단계

b₁) 화학식 IVc의 술폭시드를 직접적으로 이민화시켜 화학식 IVa의 보호된 술폭시민을 제공하는 단계

또는

b₂) 화학식 IVc의 술폭시드를 이민화시켜 화학식 IVb의 비보호된 술폭시민을 제공한 후에 보호기를 도입하여 화학식 IVa의 화합물을 제공하는 단계

c) 화학식 IVa의 화합물을 환원시켜 화학식 IV의 화합물을 제공하는 단계

d) 2,4-디클로로-5-아이오도피리미딘 (VII)의 4-위치에서 화학식 VI의 일보호된 (PG = 보호기) 디올과의 반응에 의한 관능화로 화학식 Va의 중간체를 형성하는 단계

e) 5-CF₃ 중간체 (V)를 제조하는 단계

f) 화학식 IV 및 V의 화합물의 커플링으로 화학식 III의 중간체를 제공하는 단계

g) 보호기 (PG)의 제거로 (II)를 형성하는 단계

h) 술폭시민 상의 보호기의 제거로 (Ia)를 형성하는 단계

상기 식에서, 치환기 R¹, R², R³ 및 R⁴는 화학식 I에서 주어진 의미를 갖는다.

화학식 Ib의 화합물 (4-N 유도체)의 제조

또는

d) 2,4-디클로로-5-트리플루오로메틸피리미딘 (VIIb)의 4-위치에서 화학식 VIa의 아민의 반응에 의한 관능화로 화학식 Vb의 중간체를 형성하는 단계

e) 화학식 Vb 및 IV의 화합물의 커플링으로 화학식 IIb의 중간체를 제공하는 단계

f) 술폭시민 상의 보호기의 제거로 (Ib)를 형성하는 단계

실시예 1

(RS)-S-시클로프로필-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]옥시}-5-(트리플루오로메틸)-피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드

실시예 1의 제법은 PCT/EP2009/007247의 실시예 1에 따라 수행하였다.

부분입체이성질체 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 순수한 입체이성질체로 분리하였다.

칼럼: 키랄팩(Chiralpak) IA 5 μ 250 x 30 mm

이동상: 헥산/에탄올 8:2

유량: 40.0 ml/분

검출기: UV 254 nm

온도: 실온

체류 시간: 10.8-13.4분; 입체이성질체 1 (= 실시예 1-SI-1)

13.6-18.5분; 입체이성질체 2 (= 실시예 1-SI-2)

실시예 2

(RS)-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]옥시}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]-아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드

실시예 2의 제법은 PCT/EP2009/007247의 실시예 2에 따라 수행하였다.

칼럼: 키랄팩 IC 5 μ 250 x 20 mm

이동상: 헥산/에탄올 8:2

완충제: 헥산/0.1% DEA

유량: 25.0 ml/분

검출기: UV 280 nm

온도: 실온

체류 시간: 9.5-12.1분; 입체이성질체 1 (= 실시예 2-SI-1)

13.1-16.0분; 입체이성질체 2 (= 실시예 2-SI-2)

실시예 3

(RS)-S-(4-{[4-{[(R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]옥시}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]-아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드

실시예 3의 제법은 PCT/EP2009/007247의 실시예 3에 따라 수행하였다.

잔류물을 HPLC에 의해 정제하였다. 이로써 생성물 31 mg (0.07 mmol; 수율: 14%)이 제공되었다.

실시예 4

(RS)-S-시클로프로필-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)-피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드

실시예 4의 제법은 PCT/EP2009/007247의 실시예 4에 따라 수행하였다.

칼럼: 키랄팩 IA 5 μ 250 x 20 mm

이동상: 헥산/2-프로판올 50:50

완충제: 헥산/0.1% DEA

유량: 15.0 ml/분

검출기: UV 254 nm

온도: 실온

체류 시간: 5.9-6.6분; 입체이성질체 1 (= 실시예 4-SI-1)

7.1-8.8분; 입체이성질체 2 (= 실시예 4-SI-2)

실시예 5

(RS)-S-시클로프로필-S-(4-{[4-{[(R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)-피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드

실시예 5의 제법은 PCT/EP2009/007247의 실시예 5에 따라 수행하였다.

칼럼: 키랄팩 AD-H 5 μ 250 x 20 mm

이동상: 헥산/2-프로판올 60:40

완충제: 헥산/0.1% DEA

유량: 20.0 ml/분

검출기: UV 280 nm

온도: 실온

체류 시간: 5.1-6.3분; 입체이성질체 1 (= 실시예 5-SI-1)

8.0-10.8분; 입체이성질체 2 (= 실시예 5-SI-2)

실시예 6

(RS)-S-에틸-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)-피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드

실시예 6의 제법은 PCT/EP2009/007247의 실시예 6에 따라 수행하였다.

칼럼: 키랄팩 AD-H 5 μ 250 x 20 mm

이동상: 헥산/2-프로판올 60:40

완충제: 헥산/0.1% DEA

유량: 20.0 ml/분

검출기: UV 280 nm

온도: 실온

체류 시간: 6.2-6.8분; 입체이성질체 1 (= 실시예 6-SI-1)

7.2-8.9분; 입체이성질체 2 (= 실시예 6-SI-2)

실시예 7

(RS)-S-에틸-S-(4-{[4-{[(R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드

실시예 7의 제법은 PCT/EP2009/007247의 실시예 7에 따라 수행하였다.

칼럼: 키랄팩 AD-H 5 μ 250 x 20 mm

이동상: A:헥산 B:2-프로판올

완충제: 헥산/0.1% DEA

구배: 20->40% B (20') + 40% B (5')

유량: 10.0 ml/분

검출기: UV 280 nm

온도: 실온

체류 시간: 17.5-19.8분; 입체이성질체 1 (= 실시예 7-SI-1)

20.1-22.0분; 입체이성질체 2 (= 실시예 7-SI-2)

실시예 8

(RS)-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]-아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드

실시예 8의 제법은 PCT/EP2009/007247의 실시예 8에 따라 수행하였다.

칼럼: 키랄팩 IC 5 μ 250 x 20 mm

이동상: 헥산/에탄올 50:50

완충제: 헥산/0.1% DEA

유량: 20.0 ml/분

검출기: UV 254 nm

온도: 실온

체류 시간: 5.1-5.8분; 입체이성질체 1 (= 실시예 8-SI-1)

6.1-6.7분; 입체이성질체 2 (= 실시예 8-SI-2)

실시예 9

(RS)-S-(4-{[4-{[(1R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드

실시예 9의 제법은 PCT/EP2009/007247의 실시예 9에 따라 수행하였다.

칼럼: 키랄팩 IC 5 μ 250 x 20 mm

이동상: 헥산/에탄올 80:20

유량: 30.0 ml/분

검출기: UV 254 nm

온도: 실온

체류 시간: 6.0-6.7분; 입체이성질체 1 (= 실시예 9-SI-1)

7.1-8.9분; 입체이성질체 2 (= 실시예 9-SI-2)

실시예 10

10.1 검정 1: CDK1/CycB 키나제 검정

바큘로바이러스-감염 곤충 세포 (Sf9)로부터 정제된, 재조합 CDK1 및 CycB-GST 융합 단백질을 독일 프라이부르크 소재의 프로퀴나제 게엠베하(ProQinase GmbH)로부터 구입하였다. 키나제 기질로서 사용된 히스톤 IIIS는 시그마(Sigma)로부터 상업적으로 입수가능하다.

CDK1/CycB (200 ng/측정시점)를 검정 완충제 [50 mM 트리스/HCl pH 8.0, 10 mM MgCl₂, 0.1 mM Na 오르토-바나데이트, 1.0 mM 디티오트레이톨, 0.5 μM 아데노신 트리포스페이트 (ATP), 10 ㎍/측정시점의 히스톤 IIIS, 0.2 μCi/측정시점의 ³³P-감마 ATP, 0.05% NP40, 1.25% 디메틸 술폭시드] 중에서 다양한 농도의 시험 물질 (0 μM, 및 0.01-100 μM 범위 이내)의 존재하에 22℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. EDTA 용액 (250 mM, pH 8.0, 15 ㎕/측정시점)을 첨가함으로써 반응을 중지시켰다.

각각의 반응 혼합물로부터, 15 ㎕를 P30 필터 스트립(strip) (월라크(Wallac)로부터)에 적용하고, 0.5% 인산 중에서 회당 10분 동안 필터 스트립을 3회 세척함으로써, 비혼입 ³³P-ATP를 제거하였다. 필터 스트립을 70℃에서 1시간 동안 건조시킨 후에, 씬틸레이터 스트립 (월라크로부터의 멜티렉스(MeltiLex)™ A)으로 필터 스트립을 덮고, 90℃에서 1시간 동안 가온하였다. 감마-방사선 측정 기기 (월라크)에서의 씬틸레이션 측정에 의해, 혼입된 ³³P (기질 인산화)의 양을 측정하였다. 측정된 데이터를 0% 억제 (억제제 없는 효소 반응) 및 100% 억제 (효소를 제외한 모든 검정 성분)에 대하여 표준화하였다. 회사 자체의 소프트웨어를 사용하여 4-파라미터 적합도(fit)에 의해 IC₅₀ 값을 측정하였다.

10.2 검정 2: CDK2/CycE 키나제 검정

바큘로바이러스-감염 곤충 세포 (Sf9)로부터 정제된, 재조합 CDK2 및 CycE-GST 융합 단백질을 독일 프라이부르크 소재의 프로퀴나제 게엠베하로부터 구입하였다. 키나제 기질로서 사용된 히스톤 IIIS는 시그마로부터 구입하였다.

CDK2/CycE (50 ng/측정시점)를 검정 완충제 [50 mM 트리스/HCl pH 8.0, 10 mM MgCl₂, 0.1 mM Na 오르토-바나데이트, 1.0 mM 디티오트레이톨, 0.5 μM 아데노신 트리포스페이트 (ATP), 10 ㎍/측정시점의 히스톤 IIIS, 0.2 μCi/측정시점의 ³³P-감마 ATP, 0.05% NP40, 1.25% 디메틸 술폭시드] 중에서 다양한 농도의 시험 물질 (0 μM, 및 0.01-100 μM 범위 이내)의 존재하에 22℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. EDTA 용액 (250 mM, pH 8.0, 15 ㎕/측정시점)을 첨가함으로써 반응을 중지시켰다.

각각의 반응 혼합물로부터, 15 ㎕를 P30 필터 스트립 (월라크로부터)에 적용하고, 0.5% 인산 중에서 회당 10분 동안 필터 스트립을 3회 세척함으로써, 비혼입 ³³P-ATP를 제거하였다. 필터 스트립을 70℃에서 1시간 동안 건조시킨 후에, 씬틸레이터 스트립 (월라크로부터의 멜티렉스™ A)으로 필터 스트립을 덮고, 90℃에서 1시간 동안 가온하였다. 감마-방사선 측정 기기 (월라크)에서의 씬틸레이션 측정에 의해, 혼입된 ³³P (기질 인산화)의 양을 측정하였다. 측정된 데이터를 0% 억제 (억제제 없는 효소 반응) 및 100% 억제 (효소를 제외한 모든 분석 성분)에 대하여 표준화하였다. 회사 자체의 소프트웨어를 사용하여 4-파라미터 적합도에 의해 IC₅₀ 값을 측정하였다.

10.3 검정 3: VEGF 수용체-2 키나제 검정

바큘로바이러스-감염 곤충 세포 (Sf9)로부터 GST 융합 단백질로서 재조합 VEGF 수용체 티로신 키나제-2를 정제하였다. 키나제 기질로서 사용된 폴리-(Glu4Tyr)은 시그마로부터 구입하였다.

VEGF 수용체 티로신 키나제 (90 ng/측정시점)를 30 ㎕의 검정 완충제 [40 mM 트리스/HCl pH 5.5, 10 mM MgCl₂, 1 mM MnCl₂, 3 μM Na 오르토-바나데이트, 1.0 mM 디티오트레이톨, 8 μM 아데노신 트리포스페이트 (ATP), 0.96 ㎍/측정시점의 폴리-(Glu4Tyr), 0.2 μCi/측정시점의 ³³P-감마 ATP, 1.4% 디메틸 술폭시드] 중에서 다양한 농도의 시험 물질 (0 μM, 및 0.001-30 μM 범위 이내)의 존재하에 22℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. EDTA 용액 (250 mM, pH 8.0, 15 ㎕/측정시점)을 첨가함으로써 반응을 중지시켰다.

10.4 검정 4: 증식 검정

실시예 1: 증식 검정

배양된 인간 종양 세포 (ATCC로부터 원래 입수됨, 독일 베를린 소재의 에포 게엠베하(Epo GmbH)로부터 원래 입수된 HeLa-MaTu 및 HeLa-MaTu-ADR)를 96-웰 다역가 플레이트 내 200 ㎕의 성장 배지 (DMEM/HAMS F12, 2 mM L-글루타민, 10% 소 태아 혈청)에 세포주의 성장 속도에 따라, 1000개 내지 5000개 세포/측정시점의 밀도로 도말하였다. 24시간 후에, 한 플레이트 (영점 플레이트)의 세포를 크리스탈 바이올렛으로 염색하는 한편 (하기 참조), 다른 플레이트들의 배지는 다양한 농도 (0 μM, 및 0.01-30 μM 범위; 용매 디메틸 술폭시드의 최종 농도는 0.5%이었음)로 시험 물질이 첨가되어 있는 새로운 배양 배지 (200 ㎕)로 교체하였다. 시험 물질의 존재하에 세포를 4일 동안 배양하였다. 크리스탈 바이올렛으로 세포를 염색함으로써 세포 증식을 측정하였는데: 세포는 실온에서 15분 동안 20 ㎕/측정시점의 11% 글루타르알데히드 용액을 첨가함으로써 고정되었다. 물을 사용하여 고정된 세포를 3회 세척한 후에, 플레이트를 실온에서 건조시켰다. 100 ㎕/측정시점의 0.1% 크리스탈 바이올렛 용액 (pH는 아세트산을 첨가함으로써 pH 3으로 조정)을 첨가함으로써 상기 세포를 염색하였다. 물을 사용하여 염색된 세포를 3회 세척한 후에, 플레이트를 실온에서 건조시켰다. 100 ㎕/측정시점의 10% 아세트산 용액을 첨가함으로써, 염료를 용해시켰다. 광도측정에 의해 595 nm 파장에서의 흡광도를 측정하였다. 영점 플레이트의 흡광도 값 (= 0%) 및 비처리 (0 μM) 세포의 흡광도 (= 100%)에 대한 측정 값의 표준화에 의해 세포 성장의 백분율 변화를 계산하였다. 측정된 데이터를 0% 억제 (억제제 없는 세포 증식) 및 100% 억제 (영점 플레이트)에 대하여 표준화하였다. 회사 자체의 소프트웨어를 사용하여 4-파라미터 적합도에 의해 IC₅₀ 값을 측정하였다.

물질을 예시적인 방식으로 지시된 바를 나타내는 하기 세포주에서 시험하였다.

지시된 종양	세포주
에스트로겐 수용체-음성 유방 암종	SK-BR-3 MDA-MB 231 MDA-MB 453
에스트로겐 수용체-양성 유방 암종	MCF7
난소 암종	OVCAR-8 NCI-ADR-Res A2780 A2780-Cis
결장/직장 암종	HT29 Caco-2 SW480 HCT116
전립선 암종	DU145 PC3
비소세포성 기관지 암종	NCI-H460 A549 H1975
소세포성 기관지 암종	NCI-H69
신장 암종	Caki2 786-O
췌장 암종	MIA PaCa-2
자궁경부 암종	HeLa HeLa-MaTu HeLa-MaTu-ADR
피부: 표피 피부: 흑색종	A431 A375
백혈병	MOLM-13

10.5 생체내-모델

세포 배양물에서 성장시킨 종양 세포를 암컷 또는 수컷 NMRI 누드 마우스의 옆구리에 피하 이식하였다. 종양이 대략 20 mm²의 크기로 성장하면 처리를 개시하였다. 군들 중 어느 하나에서 종양이 대략 150 mm²의 크기가 되면 연구를 종료하였다.

하기 시험군을 사용하였다.

비히클군: 가용화제 (40% PEG400/60% 물) 처리

처리군: 10.8 미만으로 특정됨

예시 화합물 2-SI-2로의 치료에 대한 인간 종양 모델의 초기 반응을 측정하도록 연구를 설계하였다. %로 나타낸 종양 성장 억제율 (TGI)을 연구가 종료될 때 100 x [1 - (처리군의 종양 중량/비히클군의 종양 중량)]의 공식을 사용하여 종양 중량 (TGI_TW)으로부터 계산하거나, 또는 비히클군이 종료되는 날에 100 x [1 - (측정일의 처리군의 종양 면적 - 처리 전의 처리군의 종양 면적)/(측정일의 비히클군의 종양 면적 - 처리 전의 비히클군의 종양 면적)]의 공식을 사용하여 종양 면적 (TGI_TA)으로부터 계산하였다. 종양 성장 억제율이 50%를 초과할 경우에, 치료가 효과적인 것으로 간주되었다.

예시 화합물 2-SI-2를 예시적인 방식으로 지시된 바를 나타내는 하기 생체내 종양 모델에서 시험하였다.

지시된 종양	생체내 종양 모델
에스트로겐 수용체-음성 유방 암종 난소 암종 결장/직장 암종	MDA-MB231 A2780Cis HCT116
소세포성 기관지 암종	NCI-H69 NCI-H146 NCI-H526 NCI-H82
자궁경부 암종	HeLa-MaTu HeLa-MaTu-ADR

10.6 효소 검정의 결과

10.7 증식 검정의 결과

증식 검정의 결과는 분명한 일관된 프로파일로써 다수의 상이한 인간 종양 세포에서의 예시 화합물의 효능을 보여준다. 이들 데이터는 다양한 조직학적 유형의 혈액 종양 장애 뿐만 아니라 고형 종양의 치료에 있어서 예시 화합물의 광범위한 적용성을 시사한다.

10.8 생체내-종양 모델의 결과

10.8.1 자궁경부 암종 모델

연구:

HeLa-MaTu 인간 자궁경부 암종 이종이식 모델에서의 효능

시험 시스템:

암컷 NMRI 누드 마우스에 이식된 HeLa-MaTu 인간 자궁경부 암종 세포

투여 형태:

경구 (위관)

제제화:

a) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.05 mg/ml, 0.10 mg/ml, 0.15 mg/ml, 0.2 mg/ml의 실시예 2-SI-2

b) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.15 mg/ml, 0.2 mg/ml, 0.25 mg/ml의 실시예 2-SI-2

투여량 및 처리 프로토콜:

a) 1일 0.5 내지 2.0　mg/kg (1.5 내지 6.0　mg/m²), 1x

b) 2일 연속으로 1일 1.5 내지 2.5 mg/kg (4.5 내지 7.5 mg/m²), 2x, 그 후에 5일의 비처리

유의한 결과:

a) TGI_TW: 2.0 mg/kg에서 97%

b) TGI_TW: 2.5 mg/kg에서 98%, 종양 퇴행의 징후

10.8.2 다중약물-내성 자궁경부 암종 모델

연구:

HeLa-MaTu-ADR Res. 이종이식 모델에서의 효능

시험 시스템:

암컷 NMRI 누드 마우스에 이식된 HeLa-MaTu-ADR 다중약물-내성 인간 자궁경부 암종 세포

투여 형태:

경구 (위관)

제제화:

a) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.15 mg/ml, 0.20 mg/ml의 실시예 2-SI-2

b) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.20 mg/ml, 0.25 mg/ml의 실시예 2-SI-2

투여량 및 처리 프로토콜:

a) 1일 1.5 및 2.0 mg/kg (4.5 및 6.0 mg/m²), 1x

b) 2일 연속으로 1일 2.0 및 2.5 mg/kg (6.0 및 7.5 mg/m²), 2x, 그 후에 5일의 비처리

유의한 결과:

a) TGI_TW: 2.0 mg/kg에서 97%

b) TGI_TW: 2.5 mg/kg에서 90%, 종양 퇴행의 징후

10.8.3 결장 암종 모델

연구:

HCT116 인간 결장직장 이종이식 모델에서의 효능

시험 시스템:

암컷 NMRI 누드 마우스에 이식된 HCT116 인간 결장직장 종양 세포

투여 형태:

경구 (위관)

제제화:

c) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.40 mg/ml, 0.50 mg/ml, 0.60 mg/ml의 실시예 2-SI-2

투여량 및 처리 프로토콜:

a) 1일 1.5 및 2.0 mg/kg (4.5 및 6.0 mg/m²), 1x

c) 2일 연속으로 1일 4.0 내지 6.0 mg/kg (12 내지 18 mg/m²), 1x, 그 후에 5일의 비처리

유의한 결과:

a) TGI_TW: 2.0 mg/kg에서 67%

b) TGI_TW: 2.5 mg/kg에서 57%, 종양 퇴행의 징후

c) TGI_TW: 5.0 mg/kg에서 83%

10.8.4 소세포성 폐 암종 모델

연구:

NCI-H69 인간 소세포성 폐 종양 모델에서의 효능

시험 시스템:

암컷 NMRI 누드 마우스에 이식된 NCI-H69 인간 소세포성 폐 종양 세포

투여 형태:

경구 (위관)

제제화:

a) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.20 mg/ml의 실시예 2-SI-2

b) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.25 mg/ml의 실시예 2-SI-2

투여량 및 처리 프로토콜:

a) 1일 2.0 mg/kg (6.0 mg/m²), 1x

b) 2일 연속으로 1일 2.5 mg/kg (7.5 mg/m²), 2x, 그 후에 5일의 비처리

유의한 결과:

a) TGI_TA (비히클군이 종료된 날에 측정함): 2.0 mg/kg에서 99%

b) TGI_TA: 2.5 mg/kg에서 110%

10.8.5 소세포성 폐 암종 모델

연구:

NCI-H146 인간 소세포성 폐 종양 모델에서의 효능

시험 시스템:

암컷 NMRI 누드 마우스에 이식된 NCI-H146 인간 소세포성 폐 종양 세포

투여 형태:

경구 (위관)

제제화:

a) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.20 mg/ml의 실시예 2-SI-2

b) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.20 mg/ml의 실시예 2-SI-2

투여량 및 처리 프로토콜:

a) 1일 2.0 mg/kg (6.0 mg/m²), 1x

b) 2일 연속으로 1일 2.0 mg/kg (6.0 mg/m²), 2x, 그 후에 5일의 비처리

유의한 결과:

a) TGI_TW: 2.0 mg/kg에서 95%

b) TGI_TW: 2.0 mg/kg에서 82%

10.8.6 소세포성 폐 암종 모델

연구:

NCI-H82 인간 소세포성 폐 종양 모델에서의 효능

시험 시스템:

암컷 NMRI 누드 마우스에 이식된 NCI-H82 인간 소세포성 폐 종양 세포

투여 형태:

경구 (위관)

제제화:

a) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.17 mg/ml의 실시예 2-SI-2

투여량 및 처리 프로토콜:

a) 3일 연속으로 1일 1.7 mg/kg (5.1 mg/m²), 2x, 그 후에 4일의 비처리

유의한 결과:

a) TGI_TW: 1.7 mg/kg에서 86%

10.8.7 소세포성 폐 암종 모델

연구:

NCI-H526 인간 소세포성 폐 종양 모델에서의 효능

시험 시스템:

암컷 NMRI 누드 마우스에 이식된 NCI-H526 인간 소세포성 폐 종양 세포

투여 형태:

경구 (위관)

제제화:

a) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.20 mg/ml의 실시예 2-SI-2

b) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.20 mg/ml의 실시예 2-SI-2

c) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.15 mg/ml의 실시예 2-SI-2

d) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.17 mg/ml의 실시예 2-SI-2

투여량 및 처리 프로토콜:

a) 1일 2.0 mg/kg (6.0 mg/m²), 1x

c) 3일 연속으로 1일 1.5 mg/kg (4.5 mg/m²), 2x, 그 후에 4일의 비처리

d) 3일 연속으로 1일 1.7 mg/kg (5.1 mg/m²), 2x, 그 후에 4일의 비처리

유의한 결과:

a) TGI_TW: 2.0 mg/kg에서 98%

b) TGI_TW: 2.0 mg/kg에서 72%

c) TGI_TW: 1.5 mg/kg에서 79%

d) TGI_TW: 1.7 mg/kg에서 88%

10.8.8 유방 암종 모델

연구:

MDA-MB231 인간 유방 종양 모델 MDA-MB231에서의 효능

시험 시스템:

암컷 NMRI 누드 마우스에 이식된 MDA-MB231 인간 유방 종양 세포

투여 형태:

경구 (위관)

제제화:

a) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.20 mg/ml의 실시예 2-SI-2

b) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.25 mg/ml의 실시예 2-SI-2

c) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.15 mg/ml의 실시예 2-SI-2

d) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.17 mg/ml의 실시예 2-SI-2

투여량 및 처리 프로토콜:

a) 1일 2.0 mg/kg (6.0 mg/m²), 1x

유의한 결과:

a) TGI_TA (비히클군이 종료된 날에 측정함): 2.0 mg/kg에서 92%

b) TGI_TA: 2.5 mg/kg에서 76%

c) TGI_TA: 1.5 mg/kg에서 70%

d) TGI_TA: 1.7 mg/kg에서 70%

10.8.9 난소 암종 모델

연구:

A2780-Cis 인간 난소 종양 모델에서의 효능

시험 시스템:

암컷 NMRI 누드 마우스에 이식된 A2780-Cis 인간 난소 종양 모델 A2780-Cis 시스플라틴-내성 인간 난소 종양 세포에서의 효능

투여 형태:

경구 (위관)

제제화:

a) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.20 mg/ml의 실시예 2-SI-2

b) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.15 mg/ml의 실시예 2-SI-2

c) 수중의 40% (v/v) PEG 400 중의 0.17 mg/ml의 실시예 2-SI-2

투여량 및 처리 프로토콜:

a) 1일 2.0 mg/kg (6.0 mg/m²), 1x

b) 3일 연속으로 1일 1.5 mg/kg (4.5 mg/m²), 2x, 그 후에 4일의 비처리

c) 3일 연속으로 1일 1.7 mg/kg (5.1 mg/m²), 2x, 그 후에 4일의 비처리

유의한 결과:

a) TGI_TW: 2.0 mg/kg에서 85%

b) TGI_TW: 1.5 mg/kg에서 88%

c) TGI_TW: 1.7 mg/kg에서 92%

단일요법으로 예시 화합물 2-SI-2를 사용한 치료 연구의 결과는 인간 자궁경부 종양, 소세포성 기관지 종양, 결장직장 종양, 유방 종양 및 난소 종양의 동물 모델에서 예시 화합물의 종양 성장 억제 활성을 확인해준다. 예시 화합물은 1일 1회 및 1일 수회의 투여를 포함하고, 또한 비처리 휴지 시간을 포함하거나 또는 비처리 휴지 시간 없이 처리하는 다양한 투여 프로토콜에서 그의 효능을 나타낸다. 놀랍게도, 상기 화합물은 임상적 사용이 승인된 세포증식억제 약물의 치료에 대하여, 반응하더라도 불량하게 반응하는 종양 모델에서도 효과적이다.

Claims

화학식 I의 화합물, 및 그의 생리학상 허용되는 염, 부분입체이성질체 및 거울상이성질체의 종양 치료를 위한 용도.
<화학식 I>

식 중,
X는 -O- 또는 -NH-를 나타내고,
R¹은 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필 기를 나타내고,
R² 및 R³은 서로 독립적으로 수소, 메틸 또는 에틸 기를 나타내고,
R⁴는 C₁-C₆-알킬 기 또는 C₃-C₇-시클로알킬 고리를 나타낸다.
제1항에 있어서,
X가 -O- 또는 -NH-를 나타내고,
R¹이 메틸 기를 나타내고,
R²가 메틸 기를 나타내고,
R³이 수소 또는 메틸 기를 나타내고,
R⁴가 메틸 또는 에틸 기를 나타내거나 시클로프로필 고리를 나타내는 것인
화학식 I의 화합물, 및 그의 생리학상 허용되는 염, 부분입체이성질체 및 거울상이성질체의 종양 치료를 위한 용도.
- (RS)-S-시클로프로필-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]옥시}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드,
- (RS)-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]옥시}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드,
- (RS)-S-(4-{[4-{[(R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]옥시}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드,
- (RS)-S-시클로프로필-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드,
- (RS)-S-시클로프로필-S-(4-{[4-{[(R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드,
- (RS)-S-에틸-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드,
- (RS)-S-에틸-S-(4-{[4-{[(R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)술폭시미드,
- (RS)-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드,
- (RS)-S-(4-{[4-{[(1R)-2-히드록시-1,2-디메틸프로필]아미노}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드
및 그의 생리학상 허용되는 염, 부분입체이성질체 및 거울상이성질체의, 종양 치료를 위한 용도.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 종양 치료용 의약의 제조를 위한 화합물의 용도.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 유방 암종, 췌장 암종, 신장 암종, 악성 흑색종 및 기타 피부 종양, 소세포성 기관지 암종, 비소세포성 기관지 암종, 결장직장 암종, 난소 암종, 자궁경부 암종, 전립선 암종, 백혈병 또는 림프종의 치료를 위한 용도.
제5항에 있어서, 유방 암종, 난소 암종, 결장직장 암종, 소세포성 기관지 암종 또는 자궁경부 암종의 치료를 위한 용도.
(RS)-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]옥시}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드 및 그의 생리학상 허용되는 염, 부분입체이성질체 및 거울상이성질체의, 다중약물-내성 자궁경부 암종, 결장직장 암종, 소세포성 기관지 암종, 유방 암종 및 시스플라틴-내성 난소 암종의 치료를 위한 용도.
종양 치료를 위한 화학식 I의 화합물, 및 그의 생리학상 허용되는 염, 부분입체이성질체 및 거울상이성질체.
<화학식 I>

식 중,
X는 -O- 또는 -NH-를 나타내고,
R¹은 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필 기를 나타내고,
R² 및 R³은 서로 독립적으로 수소, 메틸 또는 에틸 기를 나타내고,
R⁴는 C₁-C₆-알킬 기 또는 C₃-C₇-시클로알킬 고리를 나타낸다.
종양 치료를 위한 (RS)-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-히드록시-1-메틸프로필]옥시}-5-(트리플루오로메틸)피리미딘-2-일]아미노}페닐)-S-메틸술폭시미드 및 그의 생리학상 허용되는 염, 부분입체이성질체 및 거울상이성질체.