KR20120089525A - 삼나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백 및 주름개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 삼나물 추출물을 함유하는 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 갖는 조성물로서 인체에 대한 부작용이나 독성이 없으며, 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 나타내, 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 나타내는 화장료 조성물로 유용하게 이용할 수 있다.

Description

삼나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백 및 주름개선용 조성물 {Skin whitening and anti-wrinkle composition comprising a fermented plant extract in Ulleung island}

본 발명은 울릉도 특산 삼나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백 및 주름개선용 조성물에 관한 것이다.

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현대인들은 자외선, 스트레스 등의 여러 가지 내외적인 요인에 의해 각종 피부 트러블 유발로 기미, 주근깨, 피부 색소 침착 등의 피부 노화 현상을 촉진한다(1). 피부의 색소 침착은 멜라닌 색소의 생합성에서 tyrosinase 효소를 비롯하여 DHICA oxidase(TRP-1)등의 L-tyrosine을 DOPA(3,4-dihydroxyphenyla-lanine)으로 DOPA에서 DOPA quinone으로 초기반응을 조절하는 것으로 알려져 있다(2). 이를 바탕으로 티로시나제(tyrosinase) 효소의 활성을 저해하여 멜라닌 생합성의 억제에 영향을 미칠 수 있는 천연물 탐색에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 그 결과 어성초 추출물을 이용하여 티로시나제(tyrosinase) 유전자 발현 억제 효과(3) 등 천연물을 활용한 연구가 활발히 이뤄지고 있다. 그 외 현재 알려져 있는 항산화 및 미백원료는 아르부틴(Arbutin), 코지산(Kojic acid), 아스코르브산(Ascorbic acid) 등의 물질이 대표적이고 상백피, 닥나무, 감초 등의 식물 추출물이 널리 알려져 있다.

환경의 파괴로 인한 자외선 증가 및 각종 산화성 물질의 증가는 피부 손상과 단백질의 합성능 저하를 유발할 수 있다. 이러한 피부 세포의 손상이나 기능 저하는 피부 탄력의 감소, 피부 주름살의 증가, 기미와 주근깨 생성 등 피부 미용에 치명적인 현상들을 유발한다. 피부 탄력성은 진피조직의 콜라겐(collagen), 엘라스틴(elastin), 히알루론산(hyaluronic acid) 등에 의해 유지되며, 콜라겐(collagen)을 합성하는 섬유아세포(fibroblast)는 핵심적인 역할을 한다(1). 섬유아세포 기능은 각종 성장인자(growth factor) 뿐만 아니라 케라티노사이트(keratinocyte)나 멜라노사이트(melanocyte)와 같은 피부 세포들에서 분비되는 싸이토카인(cytokine)에 의해서도 조절된다(2-3). 정상적인 상태에서 유리되는 케라티노사이트의 TGF-β, TβRII, SGad3는 피부 섬유아세포(dermal fibroblast)로부터 프로콜라겐(procollagen), 피브릴린(fibrillin-1), 트로포엘라스틴(tropoelastin)의 발현을 증가시켜 콜라겐 생성을 증가시키며, MMPs의 발현을 억제하여 콜라겐 분해를 억제하는 것으로 보고되었다(4-5).

UV에 의해 케라티노사이트가 손상되면 TGF-β(transforming growth factor) 외에도 TNF-α(tumor necrosis factor), PGE₂ (prostaglandin E₂), α-MSH(melanocyte stimulating hormone), GSF(granulocyte stimulating factor), IL-1(interleukin-1), IL-6, IL-8, IL-10 등의 유리가 유발한다(6-7). 이중 α-MSH와 PGE₂는 멜라노사이트를 자극하여 멜라닌 생성을 촉진하여, 이 멜라닌은 피부 세포의 항산화 작용을 증강시켜 피부세포가 자외선으로 인해 손상되는 것을 방어하게 한다(8). IL-1, TNF-α(tumor necrosis factor) 등은 fibroblast에 작용하여 procollagen 발현을 억제하며, MMP-1 (martrix metalloproteinase-1), MMP-2, MMP-3, 히알루로니다아제(hyaluronidase)등의 활성을 증가시켜 콜라겐 분해를 촉진하게 된다(9-10).

또한, UV에 의해 직접적으로 섬유아세포 (fibroblast)가 상해를 받는 경우에도 콜라겐 관련 유전자는 억제되고 분해에 관련되는 MMPs류 발현은 촉진되어 주름살은 증가하게 된다. 따라서 진피 섬유아세포(dermal fibroblast)의 증식과 콜라겐 합성을 증가시키거나, MMPs을 억제하는 것은 주름살을 생성을 억제하는 수단이 될 수 있다.

천연항산화제로서의 기능이 잘 알려진 페놀성 물질은 식물계에 널리 분포 되어 있는 2차 대사산물의 하나로서 다양한 구조와 분자량을 가진다. 이들 페놀성 물질 대부분은 식물기원으로 나무, 수피, 줄기, 잎, 과일, 뿌리, 꽃, 씨앗 등의 식물 모든 부분에 존재한다(17-18). 페놀계 물질들은 식물체에 특수한 색을 부여하고 산화환원반응에서 로 작용하며，한 분자 내에 2개 이상의 phenolic hydroxyl(OH)기를 가진 방향족 화합물들을 가리키며 플라보노이드와 탄닌이 주성분으로 충치 예방, 고혈압 억제, 항에이즈, 항산화, 항암 등의 다양한 생리활성을 가진다(19).

눈개승마(Aruncus dioicus var. kamtschaticus HARA)는 울릉도에서 자생하는 장미과(Rosaceae)에 속하는 다년생 식물이다. 식물의 높이는 30~100cm 정도이며 근경은 목질화 되면서 굵어진다. 잎은 2~3회 우상복엽이며, 소엽은 좁은 난형 또는 난상원형이고 끝이 뾰족하거나 꼬리처럼 길며 가장자리에는 결가과 톱니가 있으며 길이는 3~10cm, 너비는 1~6cm 정도로 흔히 윤채(潤彩)가 있다. 또 열매는 긴타원형의 골돌과로 10월에 익으며 아래로 늘어진다. 꽃은 2가화로 6~8월에 피며 황백색이다. 꽃받침은 끝이 5개로 갈라지며 수꽃과 암꽃으로 나누어져 있다(20-21). 눈개승마의 영명은 goat's beard이며 별명으로 삼나물 또는 중국에서는 죽토자 등으로 불리어지고 있다. 눈개승마의 어린순이 20cm 정도 자랐거나 복토위로 싹이 보일 때 수확하며 년 중 2~3회 정도 수확하며 끓는 물로 데친 후 말린 다음 비벼서 비늘형 껍질과 작은 잎을 제거한 후 양건 하였다가 식용으로 유통한다(22).

울릉도에서는 예로부터 명절에 쇠고기 국을 끓일 때 눈개승마를 이용하며 해독 편도선염 지혈 및 정력보강에 효과가 있으며 말린 눈개승마는 수분 7.5%, 단백질 22.8%, 지질 2.2%, 당질 50.5%, 섬유소 10.8%, 회분 6.2%이 함유되어있다. 삼나물에 관한 연구는 삼나물 에탄올 추출물의 당뇨에 관한 연구가 보고 되었으나(23), 삼나물의 항산화, 항미백, 항노화에 관한 내용은 보고되거나 개시된 바는 없다.

이에 본 발명자들은 울릉도 특산 삼나물의 항산화, 항미백 및 항노화 효과 등과 같은 생리활성을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 울릉도 특산 삼나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공한다.

본원에서 정의되는 상기 추출물은 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매가용추출물을 포함한다.

상기 조추출물은 정제수를 포함한 물, 주정, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 아세톤, 클로로포름, 메틸렌클로리드, 헥산 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 및 아세톤 혼합용매, 보다 바람직하게는 물 및 아세톤 30 내지 90% 혼합용매에 가용한 추출물을 포함한다.

상기 비극성 용매 가용 추출물은 에틸아세테이트, 클로로포름, 헥산, 디클로로메탄과 같은 비극성 용매, 바람직하게는 에틸아세테이트에 가용한 추출물을 포함한다.

상기 극성 용매 가용 추출물은 물, 주정, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 부탄올에 가용한 추출물을 포함한다.

본 발명의 추출물을 분리하는 방법은 하기와 같다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 추출물은, 건조된 삼나물을 분쇄기로 분쇄한 후, 상기 분쇄물의 약 1배 내지 20배, 바람직하게는 약 1배 내지 15배의 물, 주정, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 아세톤, 클로로포름, 메틸렌클로리드, 헥산 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 및 아세톤 혼합용매, 보다 바람직하게는 물 및 아세톤 30 내지 90% 혼합용매를 가하여 12시간 내지 1주일, 바람직하게는 24시간 내지 72시간 동안, 10℃ 내지 50℃, 바람직하게는 실온에서 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 추출방법, 바람직하게는, 냉침추출법을 수행하여 추출물을 수득하는 제 1단계; 상기에서 얻은 추출물을 여과포로 여과하고 필터 여과하여 여과물을 얻는 제 2단계의 제조공정을 통하여 본 발명의 조추출물을 수득할 수 있다.

또한, 본 발명의 극성용매 또는 비극성용매 가용 추출물은 상기에서 얻은 조추출물에 물을 가한 후, n-헥산, 메틸렌 클로라이드, 에틸 아세테이트 및 부탄올을 이용한 통상적인 분획과정을 수행하여 n-헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트 등의 비극성 용매에 가용한 비극성 용매 가용 추출 분획물; 및 부탄올, 물 등의 극성용매에 가용한 극성용매 가용 추출 분획물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기 제조방법에서 얻어지는 울릉도 특산 삼나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 화장료 조성물은 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어 에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 또는 헤어스프레이의 제형을 포함한다.

상기 추출방법에 의해 얻어진 생약 추출물은 강력한 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 나타냈음을 확인할 수 있었다.

본 발명의 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 갖는 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 복합 생약 추출물을 0.00001 내지 50% 중량%(w/w), 바람직하게는, 0.0001 내지 20% 중량%(w/w), 보다 바람직하게는 0.1 내지 10% 중량%(w/w)으로 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 조성물은 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 갖는 화장품에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 헤어토닉, 헤어컨디셔너, 헤어에센스, 헤어로션, 헤어영양로션, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 헤어크림, 헤어영양크림, 헤어모이스처크림, 헤어맛사지크림, 헤어왁스, 헤어 에어로졸, 헤어팩, 헤어영양팩, 헤어비누, 헤어클렌징폼, 머릿기름, 모발건조제, 모발보존처리제, 모발염색제, 모발용 웨이브제, 모발탈색제, 헤어겔, 헤어글레이즈, 헤어드레싱어, 헤어래커, 헤어모이스처라이저, 헤어무스 또는 헤어스프레이 등과 같은 화장품류 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E(d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산 dl-알파 토코페롤, 니코틴산 dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE(폴리옥시에틸렌) 솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP(폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.01 내지 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 내지 3 % 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 복합 생약 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 삼나물 추출물을 함유하는 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 갖는 조성물은 인체에 대한 부작용이나 독성이 없으며, 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 나타내, 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 나타내는 화장료 조성물로 유용하게 이용할 수 있다.

도 1은 Aruncus dioicis 추출물 용매 분획물의 전자공여능을 나타낸 도이고,
도 2는 Aruncus dioicus 추출물 용매 분획물의 ABTS 양이온 radical 탈색을 나타낸 도이고,
도 3은 Aruncus dioicus 추출물 용매 분획물의 Superoxide 음이온 radical 저해능을 나타낸 도이고,
도 4는 Aruncus dioicus 추출물 용매 분획물의 Astringent 활성을 나타낸 도이며,
도 5는 버섯 tyrosinase에서 Aruncus dioicus 추출물 용매 분획물의 저해율 활성을 나타낸 도이고,
도 6은 elastase에서 Aruncus dioicus 추출물 용매 분획물의 저해율 활성을 나타낸 도이고,
도 7은 collagenase에서 Aruncus dioicus 추출물 용매 분획물의 저해율 활성을 나타낸 도이다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 삼나물 추출물의 제조

1-1. 70% 아세톤 추출물 제조

경북 울릉군 울릉읍에서 구입한 건조 삼나물(Aster glehni Fr. Schm.) 5kg을 시료아세톤 추출물의 경우 70% 아세톤을 시료 중량의 10배 양을 가하여 실온에서 24시간 침지하여 상징액과 침전물을 분리하여 동일한 방법으로 3회 반복 추출하였다. 각 추출물들은 원심분리 및 여과, 농축 후 동결 건조하여 삼나물 70% 아세톤 추출물(이하, ‘ADA’라 함)을 수득하여 냉장실에 보관하면서 하기 실험의 시료로 사용하였다.

1-2. 유기용매별 추출물 제조

경북 울릉군 울릉읍에서 구입한 건조 삼나물 5kg을 70% 아세톤을 가하여 상온에서 1주일간 3회 추출한 다음 filter paper(Whatman No. 2)로 여과하였고, 얻어진 여액은 감압농축하여 아세톤 추출물(1174g)을 얻었다.

상기 아세톤 추출물을 극성 차를 이용해 서로 다른 용매를 첨가하여 단계적으로 분획하였다. 즉, 70% 아세톤 추출물 1174g을 증류수에 현탁 시킨 후 용매 극성에 따라 n-hexane, EtOAc 및 n-BuOH을 이용하여 순차적으로 분획하여 n-hexane 분획물(15.82g; 이하, ‘ADH’라 함), EtOAc 분획물(129.67g; 이하, ‘ADE’라 함), n-BuOH 분획물(182.86g; 이하, ‘ADB’라 함)을 얻었으며, 나머지는 H₂O분획물(854.63g; 이하, ‘ADW’라 함)로 하였다.

참고예 1. 시약 및 기기

1-1. 항산화능 및 항염증 측정 시약

항산화능과 항염증 측정 실험에 사용된 시약인 1-1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl(DPPH), xanthine, xanthine oxidase, nitro blue tetrazolium (NBT), trichloroacetic acid(TCA), 2-thiobarbituric acid(TBA), fish oil, tween-20, hyaluronidase, hyaluronic acid, Aster glehni-dimethylaminobenzaldehyde 등은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, U.S.A.)에서 구입하여 사용하였다.

1-2. 미백 및 주름억제 효과 측정 시약

미백 및 주름억제 효과 측정에 사용된 시약인 mushroom tyrosinase, L-3,4-dihydroxyphenyl-alanine(L-DOPA), porcine pancreas elastase(PPE), Aster glehni-succinyl-(L-Ala)₃-Aster glehni-nitroanilide, collagenase 및 4-phenylazo benzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg, Folin-Ciocalteu phenol reagent등은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, U.S.A.)에서 구입하여 사용하였다.

1-3. 실험에 사용된 기기

생리활성 실험에 사용된 기기는 UV/VIS spectrophotometer(Hitachi, Japan), rotary vacuum evaporator(Tokyo, Rikakikai Co. Japan), centri- fuge(Hitachi, Japan), freeze drier(Ilsin, Korea), microscope(Olympus, Japan), CO₂ incubator(Hanbaek Scientific Co. Korea), pH meter(Metrohm, Switzerland), BOD incubator(Hanbaek Co. Korea), autoclave(Hanbaek Scientific Co. Korea), ELISA reader(Bio Rad, Japan)를 사용하였다.

실험예 1. 총 폴리페놀 함량 측정

상기 실시예에서 수득한 시료들의 총폴리페놀 함량을 측정하기 위하여 하기와 같이 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험을 실시하였다(Association of Analytical Chemists. Offical methods of analysis of the AOAC. 14th ed. Washington (DC): Aster glehni INC.: 1984.).

즉, 100배 희석한 시료용액 3mL에 Folin-Ciocalteu phenol reagent (Sigma co. MO, USA) 시약 1mL를 가하고, 1N HCl 0.2mL을 넣은 후, 포화용액 Na₂CO₃ 1mL를 가하여 혼합한 후 1시간 실온에서 방치하고, 640nm에서 흡광도를 측정한 후, 표준물질인 tannic acid로 미리 작성한 표준곡선의 흡광도 값과 비교하여 폴리페놀 함량을 산출하였다.

본 실험에서는 삼나물 추출물 및 용매별 분획물에 존재하는 총 폴리페놀 함량을 tannic acid를 기준물질로 하여 폴리페놀 함량을 측정한 결과 표 1과 같이 나타내었다. 삼나물 추출물은 158mg/100g 및 분획물의 헥산층은 45mg/100g, 에틸아세테이트층은 693mg/100g, 부탄올층은 211mg/100g, 물층은 65mg/100g으로 나타났다. 폴리페놀 함량을 비교했을 때 에틸아세테이트층의 폴리페놀 함량이 가장 높게 나타났으며, 에틸아세테이트층 > 부탄올층 > 아세톤 추출물 > 물층 > 헥산층의 순으로 폴리페놀 함량을 나타내었다.

삼나물로부터 분리된 분획 추출물의 총 폴리페놀 함량
시료	폴리페놀 함량( mg /100g)
ADA	158
ADH	45
ADE	693
ADB	211
ADW	65

실험예 2. 항산화 효과실험

상기 실시예에서 수득한 시료들의 항산화효과를 확인하기 위하여 하기와 같이 실험을 실시하였다.

2-1. DPPH 전자 공여능

상기 실시예에서 수득한 시료들의 항산화효과를 확인하기 위하여 하기와 같이 전자공여능(EDA: electron donating ability) 실험을 실시하였다(Blois MS. Antioxidant determination by the use of a stable free radical.Aster glehni . 1958;26:1199-1120.).

각 시료용액 2mL에 0.2mM의 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl(DPPH) 1mL 넣고 교반한 후 30분간 방치한 다음 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여능은 하기 수학식 1을 이용하여 시료용액의 첨가군과 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다.

삼나물 아세톤 추출물 및 용매 분획물을 전자공여능은 도 1과 같이 나타내었다. 1000μg/mL에서 아세톤 추출물의 경우 88.5%, 헥산 분획물이 63.43%, 에틸아세테이트 분획물 99.3%, 부탄올 분획물 87.8%, 물 분획물이 59.9%를 나타내었으며, 대조군인 Vit.C에서는 1000μg/mL에서 96.9%의 전자공여능을 나타내었다. 삼나물 분획물 중 에틸아세테이트 분획물이 가장 강한 활성을 나타내었으며, 에틸아세테이트 > 부탄 > 물 > 헥산 분획물의 순서로 전자공여능이 나타났다(도 1 참조).

2-2. ABTS assay 측정

상기 실시예에서 수득한 시료들의 ABTS assay 소거능에 대한효과를 확인하기 위하여 하기와 같이 실험을 실시하였다.

ABTS(2,2’-azinobis(3-ethylbenzothizoline-6-sulfonicacid)를 이용한 실험은 재현성이 좋고 실험과정이 간단하여 널리 쓰이는 방법이다(17). ABTS는 원래 무색으로 peroxidase와 H₂O₂에 의해 산화가 되면 특징적인 청록색을 띄는 ABTS+˙(ABTS radicalcation)가 형성되는데 이 청록색의 ABTS+˙는 항산화 능력을 가지고있는 물질과 만나 반응하면 그와 반응한 물질은 산화가 일어나고 ABTS+˙는 본래의 무색으로 환원되므로 734nm에서 흡광도의 감소를 확인하여 반응물질의 총 산화 능력을 쉽게 측정할 수 있다.

삼나물 아세톤 추출물 및 용매 분획물의 ABTS 전자공여능은 도 2과 같이 나타내었다. 1000μg/mL에서 아세톤 추출물은 90.9%, 헥산 분획물 41.43%, 에틸아세테이트 분획물이 94.0%, 부탄올 분획물이 89.8%, 물 분획물 81.9%를 각각 나타내었으며, 대조군인 Vit.C에서는 1000μg/mL에서 99.1%의 전자공여능을 나타내었다. 삼나물 분획물 중 에틸아세테이트 분획물이 가장 강한 활성을 나타내었으며, 에틸아세테이트 > 부탄 > 물 > 헥산 분획물의 순서로 전자공여능이 나타났다(도 2 참조).

2-3. Superoxide anion radical 소거능 측정

상기 실시예에서 수득한 시료들의 Superoxide anion radical 소거능에 대한효과를 확인하기 위하여 하기와 같이 nitroblue tetrazolium(NBT) 환원방법으로 실험을 실시하였다(Fridovich, I Quantitative aspects of the production of superoxide anion radical by milk xanthin oxidase. Aster glehni. 1970;245: 4053-4057.).

각 시료용액 0.1mL와 0.1M potassium phosphate buffer(pH 7.5) 0.6mL에 xanthine(0.4mM)과 NBT(0.24mM)을 녹인 기질액 1mL를 첨가하고 xanthine oxidase (0.049U/mL) 1mL를 가하여 37℃에서 20분간 반응시킨 후 1N HCl 1mL를 가하여 반응을 종료시킨 다음, 반응액 중에 생성된 superoxide anion radical의 양을 하기 수학식 2을 이용하여 560nm에서 흡광도를 측정하였다.

삼나물 아세톤 추출물 및 용매분획물의 superoxide anion radical 소거능은 도 3와 같이 나타내었다. 삼나물 추출물은 1000μg/mL의 농도에서 64.3%의 소거능을 보였으며 헥산 분획물의 경우 1000μg/mL에서 23.5%의 소거능을 보였고, 에틸아세테이트 분획물이 1000μg/mL에서 77.65%, 부탄올 분획물이 1000μg/mL에서 54.2%, 물 분획물이 1000μg/mL에서 50.8%를 나타내었으며, 대조군인 vitamin C에서는 1000μg/mL에서 82.1%의 소거능을 나타내었다. 위의 결과를 미루어보아 삼나물 에틸아세테이트, 부탄올 분획물이 대조군인 Vit.C과 유사한 superoxide anion radical 소거능이 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 각 분획물의 저해능은 에틸아세테이트 > 부탄 > 물 > 헥산 순으로 radical 소거능이 나타났다(도 3 참조).

실험예 3. 수렴 효과실험

상기 실시예에서 수득한 시료들의 수렴효과를 확인하기 위하여 하기와 같이 실험을 실시하였다(JT Lee, YS Jeong, BJ An. Physiological activity of Salicornia herbacea and its application for cosmetic materials.Aster glehni 2002;17(2):51-60.).

피부 단백질과 유사한 혈액 단백질(hemoglobin)을 사용하여, 원심분리관 용기에 각각의 시료용액과 헤모글로빈 용액을 1:1로 넣어서 진탕 혼합한 다음 1,500rpm에서 3분간 원심분리 후 576nm에서 흡광도를 측정하였다. Astringent 활성 측정은 하기 수학식 3을 이용하여 시료용액의 첨가군와 무첨가군의 흡광도 감소율로 나타내었다.

삼나물 추출물 및 분획물의 수렴 효과를 측정한 결과 도 4과 같이 나타내었다. 에틸아세테이트 분획물은 1000μg/mL에서 53%의 수렴 효과가 있는 반면, Tannic acid에서는 1000μg/mL에서 58%의 수렴 효과를 확인하여 tannic acid에 가까운 활성을 나타내었다(도 4 참조).

실험예 4. 미백효과 측정실험

상기 실시예에서 수득한 시료들의 Tyrosinase 저해활성에 대한효과를 확인하기 위하여 하기와 같이 문헌에 개시된 방법을 이용하여 하기와 같이 실험을 실시하였다(Yagi A, Kanbara T, Morinobu N. The effect of tyrosinase inhibition for aloe. Aster glehni 1986;3981:517-519.).

반응구는 0.175M sodium phosphate buffer(pH 6.8) 0.5mL에 10mM L-DOPA를 녹인 기질액 0.2mL 및 시료용액 0.1mL의 혼합액에 mushroom tyrosinase (110U/mL) 0.2mL을 첨가하여 25℃에서 2분간 반응시켜 반응액 중에 생성된 DOPA chrome을 475nm에서 측정하였다. Tyrosinase 저해활성은 하기 수학식 4을 이용하여 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.

피부 내에서 멜라닌 중합체 생합성을 효과적으로 저해할 수 있는 tyrosinase 저해활성을 측정하기 위하여 mushroom 유래의 tyrosinase 저해활성 측정 결과는 도 5과 같이 나타내었다. 본 실험에서는 삼나물 에틸아세테이트 분획물 이외의 분획물들은 미백효과가 거의 나타나지 않음을 확인할 수 있었다. 삼나물 아세톤 추추물과 분획물 역시 에틸아세테이트 분획물층이 1000μg/mL에서 59.2%의 저해능을 나타내어 가장 우수한 효능을 나타내었다. 삼나물 에틸아세테이트 분획물은 An 등(39)의 진달래꽃 추출물의 tyrosinase 저해활성을 측정한 결과 열수 및 에탄올 추출물 1,000μg/mL에서 각각 24.0%, 48.0%의 저해를 나타낸 결과와 비교하여 삼나물 에틸아세테이트 분획물의 활성이 더욱 우수함을 확인할 수 있었다(도 5 참조).

실험예 5. 주름개선 효과실험

상기 실시예에서 수득한 시료들의 주름개선 효과를 확인하기 위하여 하기와 같이 실험을 실시하였다.

5-1. Elastase 저해활성 측정

Elastase 저해활성 측정은 문헌에 개시된 방법에 따라 측정하였다(Cannell RJP, Kellan SJ, Owsianks AM, Walker JM. Results of a large scale screen of microalgae for the production of protease inhibitors. Aster glehni. 1988;54(1):10-14.).

기질로서 N-succinyl-(L-Ala)₃-Aster glehni-nitroanilide (Sigma co. MO, USA)를 사용하여 37℃에서 20분간 기질로부터 생성되는 Aster glehni -nitroanilide의 생성량을 405nm에서 측정하였다. 즉, 각 시험용액을 일정 농도가 되도록 조제하여 0.5mL씩 시험관에 취하고, 50mM tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 porcine pancreas elastase (2.5U/mL, Sigma co. MO, USA)용액 0.5mL을 가한 후 기질로 50mM tris-HCl buffer (pH 8.6)에 녹인 N-succinyl-(L-Ala)₃-Aster glehni -nitroanilide 0.5mg/mL (Sigma co. MO, USA)을 첨가하여 20분간 반응시켜 측정하였다. Elastase 저해활성은 하기 수학식 5을 이용하여 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.

주름 생성과 관련된 elastase 저해 활성을 측정한 결과 도 6과 같이 나타내었다. 삼나물 추출물 및 용매분획물의 경우 각각 1000μg/mL에서는 23.5%, 10.1%, 35.2%, 15.3%, 6.9%의 elastase 저해 효과가 나타났다. 대조군인 EGCG의 경우 1000μg/mL에서는 56%의 elastase 저해 효과를 나타냄으로 삼나물 에틸아세테이트 분획물의 경우 EGCG와 유사한 저해 효과를 나타냄으로 Elstase 저해능에 높은 효능을 나타냄을 확인할 수 있었다(도 6 참조).

5-2. Collagenase 저해활성 측정

Collagenase 저해활성 측정은 문헌에 개시된 방법에 따라 측정하였다(WE, Heindrich HG. Zur quantitativen bestimmung der collagenase. Aster glehni 1963;333:149-151).

즉 반응구는 0.1M tris-HCl buffer(pH 7.5)에 4mM CaCl₂를 첨가하여, 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg(0.3mg/mL, Sigma co. MO, USA)를 녹인 기질액 0.25mL 및 시료용액 0.1mL의 혼합액에 collagenase(0.2mg/mL, Sigma co. MO, USA) 0.15mL를 첨가하여 실온에서 20분간 방치한 후 6% citric acid 0.5mL을 넣어 반응을 정지시킨 후, ethyl acetate 1.5mL을 첨가하여 320nm에서 흡광도를 측정하였다. Collagenase 저해활성은 하기 수학식 6을 이용하여 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 나타내었다.

collagen은 collagenase에 의해 분해된다고 알려져 있어 삼나물 분획물의 collagenase 저해활성을 도 7과 같이 측정하였다. 삼나물 아세톤 추출물의 경우 1000μg/mL의 농도에서 87%, 각각의 용매 분획물의 경우 1000μg/mL에서 41%, 90%, 85%, 82%의 저해 효과가 나타났고, 대조군인 EGCG의 경우 1000μg/mL에서 98%의 저해능을 나타냄으로 삼나물 에틸아세테이트 분획물의 경우 대조군인 EGCG보다 높은 효능을 나타냄으로 항노화 소재로서의 개발이 가능할 것으로 생각되어졌다(도 7 참조).

이하, 본 발명의 제형예로서 크림, 맛사지크림, 로션, 스킨로션, 에센스, 팩, 클렌징폼의 제형을 예시하고 있으나, 본 발명의 화장품 조성물을 포함하는 제형은 이에 한정되는 것은 아니다.

제형예 1. 크림조성물

유상과 수상을 각각 75 ℃로 가열 혼합한 후 실온으로 냉각한다.

제형예 2. 맛사지크림 조성물

유상과 수상을 각각 75 ℃로 가열 용해 혼합한 후 실온으로 냉각한다.

제형예 3. 로션 조성물

유상과 수상을 각각 75 ℃로 가열 혼합 유화한 후 실온으로 냉각한다.

제형예 4. 스킨로션 조성물

수상과 에탄올상을 각각 제조 혼합한 후 여과한다.

제형예 5. 에센스 조성물

수상과 에탄올상을 각각 제조 혼합한 후 여과한다.

제형예 6. 팩 조성물

수상과 에탄올상을 각각 분산 용해하여 혼합시킨 후 실온으로 냉각한다.

제형예 7. 클렌징폼 조성물

수상과 오일상을 각각 분산 용해하여 혼합 검화한 후 실온으로 냉각한다.

Claims (6)

1. 울릉도 특산 삼나물 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염증, 미백 및 주름억제 효과를 갖는 화장료 조성물.
2. 제 1항에 있어서,
   상기 추출물은 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매가용추출물임을 특징으로 하는 조성물.
3. 제 2항에 있어서,
   상기 조추출물은 정제수를 포함한 물, 주정, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 아세톤, 클로로포름, 메틸렌클로리드, 헥산 또는 이들의 혼합용매에 가용한 추출물임을 특징으로 하는 조성물.
4. 제 2항에 있어서,
   상기 비극성 용매 가용 추출물은 에틸아세테이트, 클로로포름, 헥산, 디클로로메탄과 같은 비극성 용매에 가용한 추출물임을 특징으로 하는 조성물.
5. 제 2항에 있어서,
   상기 극성 용매 가용 추출물은 물, 주정, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜, 또는 이들의 혼합용매에 가용한 추출물임을 특징으로 하는 조성물.
6. 제 1항에 있어서
   상기 화장료 조성물은 화장수, 스킨, 로션, 영양로션, 영양크림, 마사지 크림, 에센스, 팩의 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   

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