KR20120069702A

KR20120069702A - 표피 분화 마이크로ｒｎａ 표지 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20120069702A
Application number: KR20127008558A
Authority: KR
Inventors: 끌레르 마리오넷; 프랑쑤와즈 베르네르
Original assignee: 로레알
Priority date: 2009-09-02
Filing date: 2010-09-02
Publication date: 2012-06-28
Also published as: ES2620406T3; JP2013503613A; FR2953220B1; US9090937B2; KR101873440B1; EP2473627A1; FR2953220A1; WO2011026909A1; CN102625853B; JP5830465B2; US20120259000A1; CN102625853A; EP2473627B1

Abstract

본 발명은 인간 상피의 샘플에서 인간 케라티노사이트의 표피 분화 상태를 측정하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 상기 케라티노사이트 내에서 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA 발현 수준을 측정하는 단계, 및 미분화된 케라티노사이트에서, 또는 분화된 표피의 케라티노사이트에서, 바람직하게는 동일한 균주로부터 기원하거나 동일한 군으로부터 기원한 것에서 선택된 miRNA 또는 miRNAs의 평균 발현 수준과 선택된 miRNA 또는 miRNAs의 발현 수준을 비교하는 단계를 포함한다. 또한, 본 발명은 표피 분화 상태의 측정 방법의 다양한 사용들 뿐만 아니라 약학적 조성물 또는 화장품 조성물에 관한 것이다.

Description

표피 분화 마이크로ＲＮＡ 표지 및 이의 용도{EPIDERMAL DIFFERENTIATION MICRORNA SIGNATURE AND USES THEREOF}

본 발명은 화장품 분야에 관한 것이고 피부와 관련된다. 보다 일반적으로, 본 발명은 피부의 표피 분화의 상태 및 표피 분화와 연관된 질환, 질병 또는 병적이상의 치료를 특징으로 하는 발명에 관한 것이다.

표피(epidermis)는 그의 환경에 대해 보호장벽으로서 작용하고 그에 대해 대항하는 다층의 상피(epithelium)이다. 이는, 표피의 가장 깊은 층에서 증식한 후 그 깊이로부터 표피의 표면까지 이동하면서 분화하기 시작하는 케라티노사이트(keratinocyte)로 주로 구성된다. 표피의 표면에서, 대부분의 분화된 케라티노사이트는 각질세포(corneocyte)로서 알려져 있으며, 이는 매우 보호적인 각질층을 구성한다. 따라서, 표피는 기저층 내부에서 발생하는 세포성 증식의 자리인 동시에, 중간층 내에서 잘 분화된 보호 구조인 각질층의 형성을 야기하는 세포 분화의 자리이다. 완전한 사이클은 약 20일이 걸린다. 이 프로그램은 연속적으로 활성화된 후 순차적이고 협동적인 방식으로 억제되는 다수의 특이적 유전자들의 발현에 대응한다. 이 프로그램은 다수의 전사 인자들, 효소들, 지질들 및 구조 단백질들을 수반한다. 다수의 성장인자들, 칼슘, 비타민 A 및 D3 유도체들은 케라티노사이트 증식 및 분화의 중요한 조절자이다.

특정 생리학적 또는 병리학적 상태, 및 심지어 피부 표면에 대한 또는 혈액순환을 통한 특정 대항은 일시적이고 공간적으로 협조된 표피 분화의 상기 과정의 탈조절을 유발한다.

표피 분화 프로그램에 대한 변형과 연관된 피부 병적이상에서, 유전적일 수 있거나 그렇지 않을 수 있는 다수의 질환들이 관찰되며[14-15], 이는 예컨대 건선, 아토피성 피부염, 여드름, 어린선, 네데르톤 증후군(Netherton syndrome), 모공성홍색비강진, 모공성각화증, 다리에증(Darier's disease), 수장족저각화증 및 한공각화증이다.

표피 분화에 대한 변형과 연관된 더 많은 생리학적 상황들의 예는 다음과 같다: 말단 분화의 이상 및 차단 기능의 감소를 갖는 연령[17], 표피의 항상성의 변형(과증식, 이동, 재-상피화 및 말단 분화의 복구) 시기를 특징으로 하는 흉터, 및 연령관련 또는 겨울관련 건조증 (비늘모양의 축적 과정을 갖는 피부건조증)[18].

언급될 수 있는 표피 분화 과정의 장애를 야기하는 외부 인자들에 기인한 섭동의 예[19]는 다음과 같다: 태양의 UV 방사선, 열, 박피제, 박리제, 탈지제에 대한 노출, 또는 기계적 저항.

경미한 장애의 경우, 진정제 및 각질용해제가 권장된다. 이러한 치료는 증식/분화 균형에 대해 작용하지 않고, 병변이 환자에 대해 용인될 수 있도록 하며, 이는 통상적으로 단지 미결정된 효과를 갖는다.

더 중증의 장애의 경우, 케라티노사이트의 증식 및 분화를 조절할 수 있는 레티노산 및 이의 유도체, 비타민 D3가 수년 동안 사용되어 왔다. 일부의 경우, 메토트렉세이트 및 사이클로스포린이 또한 권장된다. 이러한 모든 치료들은 주요한 부작용들을 나타내며, 이는 환자에게 매우 부담이 된다.

"재건 피부(재건 skin)" 유형의 경작된(cultivated) 상피 또는 피부의 표피 분화 상태를 특징화하기 위하여, 그리고 표피 분화 과정을 조절할 수 있는 분자를 평가할 수 있기 위하여, 하기의 기술적 도구들이 현재 이용가능하다:

● 표피 분화 단계의 형태학적 분석 및 생화학적 마커(면역조직화학). 이러한 기법은, 매우 일반적으로(지형조직학) 또는 마커 대 마커로(면역조직화학), 분화에서 공지된 단백질 대상을 분석하는데만 사용될 수 있다. 이는 피부 상태의 표지를 생성할 수 없다. 이는 통제하기가 힘들며, 항상 그렇지는 않지만 조사용 마커에 대해 특이적인 항체와 같이 이용가능한 특정 도구들을 사용하는 것이 필요하다. 또한, 이는 용이하게 정량할 수 없는 기법이다.

● 전사체 분석: 이 방법은 건강하거나 병든 조직의 분자적 표지(molecular signature)를 얻기 위해 널리 사용된다. 이러한 기법은 샘플의 mRNA 전사물의 발현 분석에 기초한 것이다. 12000개 까지의 유전자들을 함유할 수 있는 DNA 칩을 사용하는 것이 매우 일반적일 수 있다. 그러나, 이는 몇몇 단점들을 갖고 있으며, 특히 비싼 장비(예컨대, Affymetrix^TM 시스템)가 요구되지만, 무엇보다도 취급하기가 종종 어렵고 고성능 생물정보학 서비스에 의해 처리되어야 하는 매우 많은 양의 데이터를 생성한다;

● 프로테옴 분석: 이는 조직 내 존재하는 모든 단백질들의 일반적 위치의 전반적인 그림을 제공한다. 이는 여전히 복수의 이차원적 전기영동 겔 기법을 사용하므로, 이는 수행시에 통제하기가 매우 힘들다. 또한, 단백질의 정확한 동정은 조작하는데 특정 기술과 전문지식을 요하는 매우 비싼 장비와 보충 단계들을 필요로 한다.

따라서, 피부 또는 경작된 상피의 표피 분화 상태를 신속하고 용이하게 특징화할 수 있는 방법이 요구된다.

본 발명자들은 완전히 예상치 못하게 표피 분화의 상태를 특징화하는데 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 상기 분화의 상태의 탈조절과 연관된 질환들의 다양한 치료를 고려하는데 사용될 수 있는, 표피 분화의 microRNA 표지(microRNA signature)의 존재를 발견하게 되었다.

1993년에 발견된 MicroRNAs(miRNAs)는 RNA에 의한 개입(interference)에 관여하는 짧은 내인성 RNAs이며, 이는 메신저 RNA(mRNA)를 표적으로 할 수 있고, 그의 분해를 발생시키거나 그의 번역을 방지할 수 있다. 이에 따라, 상기 microRNAs는 세포에서 매우 중요한 조절 역할을 한다. 또한, 이는 가장 풍분한 조절 분자들의 군 중 하나를 구성한다. 이는 기원이 내인성이며, 게놈에 의해 인코딩된 pri-miRNA로부터 유래된다. 지금까지, 대략 700개의 인간 microRNAs가 동정되었다. 이들의 기능 및 표적은 모두 설명되거나 입증되지 못하였다.

이는 다양한 세포 경로의 조절에서 주된 역할을 하며, 인간 병적이상에 관여할 수 있다. MicroRNAs는 발달, 분화, 증식 및 세포자멸의 조절에서 필수적인 역할을 한다([1] 및 [3] 참조). 일례로서, 사람에게서, miR-17-5p 및 miR-20은 증식에 대한 조절자(regulator)이며[4]; miR-223은 과립구형성에 관여한다[5].

miRNAs 발현의 탈조절은 인간 병적이상의 원인이 될 수 있다. 특정 miRNAs는 종양 억제인자로서 기능하며; 다른 것들은 종양유전자로서 기능한다.

피부, 특히 인간 피부에서 miRNAs에 대해 현재 매우 소수의 연구들만 존재한다.

동물 피부에서, 발현된 miRNAs는 초기에 마우스에서 클로닝되었다. 이는 표피의 형태형성 및 코팅에서 중요한 역할을 한다[8]. 보다 최근에, miRNAs는 염소 및 양에서 코팅 성장에 관여하는 것으로 입증되었다[10]. 매우 최근에, 마우스 피부에서 miRNA miR203은 세포증식능을 감소시킴으로써 표피 분화의 유도에서 중요한 역할을 하는 것으로 확인되었다[11].

인간에게서, miRNAs의 발현은 정상 피부에서 연구되었으며, 건선 피부와 습진 피부에 대해 비교되었다. miRNA miR203은 피부(다른 기관들에 비해)에서 단지 케라티노사이트에 의해 고도로 발현된다. 이는 건선 피부에서 과발현되는 miRNAs의 하나로서 동정되었다[12].

마지막으로, 이는 인간에게서 특정 miRNAs(miR-221 및 miR-222)가 흑색종 진행의 제어에 관여한다는 점이 입증되었다[13].

각각의 miRNA에 대해 수십개의 표적 유전자들이 존재한다고 가정한다면, 본 발명자들은 하기를 제안한다:

● 분화에 대한 마커로서 miRNA의 사용. 메신저 RNA에 비해 훨씬 더 작은 이들의 수는 통상의 일반적인 전사체 방법보다 더 간단하고 더 빠르고 더 값싼 방식으로 miRNA 프로파일이 위치에 대해 또는 조직에 대해 생성될 수 있다는 것을 의미한다;

● 표피 분화의 장애와 연관되는 양성 질병 또는 더 중증의 질병의 치료를 할 목적의 조절인자를 식별하기 위한, 표피 분화의 miRNA 분자 표지의 사용. "조절인자(modulator)"라는 용어는 천연 추출물로부터 유래된 화학물질 또는 화학물질들, 복합물 제형, siRNA, miRNA 억제제, 예컨대 안타고미르(antagomir) 뿐만 아니라, 광을 사용하는 기기 시스템, 피부에 대한 기계적 효과, 또는 주사를 의미한다;

● 표피 분화 또는 증식의 질병에서 화장품 또는 치료적 처치를 할 목적으로 miRNAs 또는 상기 miRNAs의 조절인자의 사용;

● 표피 분화에 대한 화장품 또는 치료적 처치의 효능을 평가하기 위한, 상기 miRNA 표지의 사용;

● 정상적 또는 병리학적 표피에 대해 진단을 수행하기 위한, 표피 분화의 miRNA 분자 표지의 사용.

이를 위해, 본 발명자들은 동정된 특정 miRNAs의 발현 분석의 사용을 제안한다.

표피의 케라티노사이트에서 miRNAs 발현의 체계적 분석에 의해, 본 발명자들은 놀랍게도 표피 분화 과정이 이용되고 각질층의 형성을 유발할 때, 공지된 표피 분화 마커를 발현하지 않고 각질세포를 형성하지 않는 증식성 미분화된 케라티노사이트에 비해 분화된 표피의 케라티노사이트에서 인간 miRNAs miR-141, miR-148a, miR-182, miR-224, miR-26a, miR-26b, miR-361-5p, miR-425, miR-455-3p, miR-92b가 과발현된다는 점을 보여주었다. 따라서, 상기 10개의 miRNAs는 케라티노사이트 분화의 분자 표지를 나타낸다.

반면, 고도로 분화되지 않은 증식성 케라티노사이트에서, 인간 miRNAs let-7i, miR-22, miR-221, miR-222, miR-29a, miR-29b, miR-663, miR-30a, miR-30c는 분화된 표피에 비해 미분화된 케라티노사이트에서 과발현된다. 상기 9개의 miRNAs는 강한 증식과 연관되는 표피의 미분화 상태를 대조적으로 나타낸다.

따라서, 본 발명은 표피 분화의 상기 miRNA 표지, 및 상기 표지의 다양한 용도, 특히 표피 분화의 상태를 평가하거나 정성화하는 용도, 생리학적 또는 병리학적 분화 장애에 대한 신규 진단 도구로서, 표피 분화의 결함을 바로잡는 표적으로서, 또는 표피 분화 조절인자를 시험하는 바이오마커 및 스크리닝 도구로서 용도에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 치료적 및 화장품 적용에 있어서, 특히 조성물의 형태로, 상기 표지의 miRNAs 또는 상기 miRNAs의 조절인자의 용도에 관한 것이다.

특히, 본 발명의 측면에서 하기의 용어들은 다음의 의미를 갖는다:

MicroRNA(또는 마이크로 RNA 또는 miRNA): microRNAs는 길이가 대략 20 내지 25개의 뉴클레오티드, 일반적으로 21 내지 24개의 뉴클레오티드인 단일가닥 RNA이다. miRNAs는 mRNA로 유전자의 전사 이후에 작용하는 억제인자(repressor)이며: 실제로, 메신저 RNA와 짝을 이룰 때 그의 분해를 유도하거나 또는 단백질로 그의 번역을 억제한다.

miRNAs의 생성은 전사 및 후-전사 조절의 타이트한 제어하에 놓여있다. miRNA의 유전자들은 "pri-miRNA"로서 알려진 길다란 일차 전사물 또는 전구체의 형태로 RNA 폴리머라제 II에 의해 전사된다. 전구체 miRNAs는 클래스 2 RNAase III(Drosha)에 의해 세포의 핵에서 효소적으로 분열되어, "pre-miRNA"를 형성한다. "pre-miRNA"는 길이가 대략 70개의 뉴클레오티드인 RNA이며, 이는 그의 서열의 첫번째 반과 두번째 반 사이에서 염기 쌍을 이룸으로써 불완전한 줄기-루프(stem-loop)로 폴딩된다. 그 후, pre-miRNAs는 세포질로 내보내지고, 여기서 이는 단백질 TRBP(전사촉진-반응성 RNA 결합 단백질) 및 Ago2(Argonaute 2)를 함유하는 RISC 복합물(RNA-induced silencing complex) 및 다른 뉴클레아제(Dicer)와 결합한다. 결합하게 되면, 단백질 Ago2는 miRNA 전구체의 3' 말단을 절단하며, 이에 따라 성숙 miRNA 이중체(duplex)가 생성된다. miRNA의 표적 mRNA의 특이적 가닥만 복합물 내에 보유되고(열역학적 반응); 다른 가닥은 제거되고 분해된다.

그 후, 표적 mRNA는 RISC 복합물에 로딩되고, 분해된다.

번역 억제가 동물 세포에서 가장 많이 관찰되는 침묵 경로(silencing pathway)일지라도, 최근의 연구들에서 miRNAs가 표적 mRNA의 양에 영향을 미칠 수 있다는 점이 또한 보여진다.

hsa-miRxx: 이는 인간에게서 동정된 miRNAs에 대한 명명이다(hsa는 호모사피엔스를 의미함). 공지된 miRNAs 모두에 대한 서열들이 miRBase 또는 microRNAdb와 같은 베이스에 기록되며, 여기서 이들은 특별한 접근번호(xx)에 의해 식별된다. 하기 목록에서, hsa-miRxx 번호가 성숙 miRNA 서열을 나타내기 위해 사용된다.

특히, 하기의 miRNAs는 다음의 서열을 갖는다:

hsa-miR-141: 성숙(mature) miRNA: UAACACUGUCUGGUAAAGAUGG(서열번호 1)

hsa-miR-148a: 성숙 miRNA: UCAGUGCACUACAGAACUUUGU(서열번호 2)

hsa-miR-182: 성숙 miRNA: UUUGGCAAUGGUAGAACUCACACU(서열번호 3)

hsa-miR-224: 성숙 miRNA: CAAGUCACUAGUGGUUCCGUU(서열번호 4)

hsa-miR-26a(hsa-miR-26a-1 및 hsa-miR-26a-2): 성숙 miRNA: UUCAAGUAAUCCAGGAUAGGCU(서열번호 5)

hsa-miR-26b: 성숙 miRNA: UUCAAGUAAUUCAGGAUAGGU(서열번호 6)

hsa-miR-361-5p: 성숙 miRNA: UUAUCAGAAUCUCCAGGGGUAC(서열번호 7)

hsa-miR-425: 성숙 miRNA: AAUGACACGAUCACUCCCGUUGA(서열번호 8)

hsa-miR-455-3p: 성숙 miRNA: GCAGUCCAUGGGCAUAUACAC(서열번호 9)

hsa-miR-92b: 성숙 miRNA: UAUUGCACUCGUCCCGGCCUCC(서열번호 10)

hsa-let-7i: 성숙 miRNA: UGAGGUAGUAGUUUGUGCUGUU(서열번호 11)

hsa-miR-22: 성숙 miRNA: AAGCUGCCAGUUGAAGAACUGU(서열번호 12)

hsa-miR-221: 성숙 miRNA: AGCUACAUUGUCUGCUGGGUUUC(서열번호 13)

hsa-miR-222: 성숙 miRNA: AGCUACAUCUGGCUACUGGGU(서열번호 14)

hsa-miR-29a: 성숙 miRNA: UAGCACCAUCUGAAAUCGGUUA(서열번호 15)

hsa-miR-29b: 성숙 miRNA: UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU(서열번호 16)

hsa-miR-663: 성숙 miRNA: AGGCGGGGCGCCGCGGGACCGC(서열번호 17)

hsa-miR-30a: 성숙 miRNA: UGUAAACAUCCUCGACUGGAAG(서열번호 18)

hsa-miR-30c: 성숙 miRNA: UGUAAACAUCCUACACUCUCAGC(서열번호 19).

접두어 "hsa"는 본 명세서에서 때때로 생략되었다. 그러나, 이는 전술한 것과 동일한 19개의 miRNAs를 나타낸다.

표피 분화(케라틴화 또는 각질화): 인간 피부의 지속적인 재생산(renewal)을 가능하게 하는 표피 내의 현상. 표피 분화는 표피 분화의 다양한 단계들을 통해 표피의 줄기세포가 무핵의 각막세포 또는 각질세포로 형질전환되는 것을 가능하게 하는 모든 분자적, 생화학적 및 형태학적 현상들을 포함한다.

상기 말단 분화는 유기체에게 환경에 대한 효과적인 장벽을 제공하는 각질층과 같은 전문화된 구조의 구성을 허용한다. 표피 분화하는 동안, 표피의 가장 깊은 층의 케라티노사이트는 분열되어 2개의 동일한 딸세포를 생성하며, 이 중 하나는 제자리에 잔류하는 반면, 두번째 것은 형태학적 및 생화학적 변형을 받으면서 상부층, 분화층을 향해 이동한다.

미분화된 케라티노사이트(또는 분화되지 않은 케라티노사이트), 또는 기저의(또는 기저층의) 케라티노사이트: 케라틴 K5 및 K14를 발현하고 유사분열 활성을 갖는 케라티노사이트.

분화된 케라티노사이트: 특히 케라틴 K1 및 K10의 유도에 의해, 더 이상 유사분열 활성을 갖지 않고 말단 분화를 시작하지 않는 케라티노사이트.

안타고미르(Antagomir): 이는 화학적으로 합성된 올리고뉴클레오티드의 새로운 군이다. 이는 내인성 miRNAs의 작용을 침묵시키는데 사용된다. 안타고미르는 Ago2에 의한 분열을 억제하는 하나 이상의 염기 변형을 갖는 표적 miRNA에 완전히 상보적인 짧은 합성 RNA 분자이다(또다른 변형들이 또한 자주 도입되며, 이에 따라 안타고미르는 분해에 더 저항성이 된다).

안타고미르는 특이적 miRNAs의 활성을 본질적으로 억제하기 위해 자주 사용된다. 다수의 안타고미르들이 공개되었다. 모든 miRNAs는 안타고미르에 의해 특이적으로 억제될 수 있다. 표적 miRNA의 활성을 억제할 수 있는 안타고미르를 생성하기 위해 필요한 유일한 정보는 상기 표적 miRNA의 서열이다.

다른 miRNA 억제제들의 예는 miRCURY LNA^TM microRNA Knockdown Probes(Exiqon) 또는 Qiagen의 miScript miRNA 억제제이다.

본 발명은 표피 분화의 miRNA 표지에 관한 것이며, 이에 따라 증식과 분화 사이의 균형을 나타내는 표지에 관한 것이다.

제1측면에서, 본 발명은 보다 구체적으로 인간 상피의 샘플에서 인간 케라티노사이트의 표피 분화 상태를 측정하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 바람직하게는 상기 케라티노사이트 내에서 하나 이상의 miRNA의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함한다.

본 발명에 따르면, 상기 miRNA는 본 발명자들에 의해 동정된 miRNAs, 즉 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된다. 이러한 19개의 miRNAs는 본 발명의 microRNAs 또는 miRNAs를 지칭한다.

상기 선택된 miRNA의 발현 수준은, 미분화된 케라티노사이트에서, 바람직하게는 배양중의 미분화된 케라티노사이트에서, 또는 분화된 표피의 케라티노사이트에서, 상기 miRNA의 평균 발현 수준과 비교된다.

miRNAs의 검출 및 정량화를 위한 다수의 방법들이 존재하며, 이는 당업자에게 잘 알려져 있다. 실시예 3에는 가장 널리 사용되는 기법들이 기재되어 있다.

바람직하게는, 상기 방법은 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 둘 이상의 별개의 miRNAs의 수준을 측정하는 단계, 및 미분화된 케라티노사이트에서, 특히 배양중의 미분화된 케라티노사이트에서, 또는 분화된 표피의 케라티노사이트에서, 상기 2개의 수준과 상기 선택된 2개의 miRNAs의 대응하는 평균 수준을 비교하는 단계를 포함한다.

선택적으로, 상기 방법은 본 발명의 19개의 miRNAs 중에서 수개의 miRNAs, 예를 들어 적어도 3개 또는 5개, 또는 8개, 10개, 15개의 발현 주순을 측정하는 단계, 또는 본 발명의 19개의 miRNAs의 발현 수준을 측정하는 단계 및 미분화된 케라티노사이트에서, 예를 들어 배양중의 미분화된 케라티노사이트에서, 또는 분화된 케라티노사이트에서 대응하는 miRNAs의 평균 발현 정도와 상기에서 측정된 수준을 비교하는 단계를 포함할 수 있다.

"미분화된 케라티노사이트에서, 특히 배양중의 미분화된 케라티노사이트에서, 또는 분화된 표피의 케라티노사이트에서, miRNA의 평균 발현 수준"은 상기 세포 유형에서 일반적으로 관찰되는 발현 수준을 의미하며, 이는 바람직하게는 배양중의 미분화된 케라티노사이트의 군을 대표하거나 또는 분화된 표피의 케라티노사이트의 군을 대표하는 5개 이상의 다른 케라티노사이트에서 측정된 평균 발현 수준에 대응한다. 바람직하게는, 이는 적어도 10회 측정, 또는 20회 또는 100회의 다른 측정들의 평균이다.

바람직하게는, 상기 논의되는 배양중의 미분화된 케라티노사이트 또는 분화된 표피의 케라티노사이트는, 시험중인 케라티노사이트와 동일한 균주 또는 동일한 군으로부터 유래한 케라티노사이트이다.

전술한 방법을 수행하는 측면에서, 만일 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 하나 이상의 miRNAs의 발현 수준이 미분화된 케라티노사이트, 예를 들어 배양중의 미분화된 케라티노사이트에서 상기 miRNA의 평균 발현 수준보다 통계적으로 더 크다면, 시험중인 케라티노사이트는 분화된 것이거나 또는 분화가 되고 있는 것으로 고려된다.

"통계적으로 더 크다"는 관찰되는 차이가 통계점(statistical point)에 대해 유의적이라는 것, 특히 표준편차보다 더 크다라는 것을 의미한다. 만일 2개의 값 사이의 차이가 측정시에 존재하는 불확실성보다 더 크다면, 값이 다른 것보다 통계적으로 더 크다고 언급된다.

바람직하게는, 상위 값은 평균 수준보다 적어도 20% 더 크며, 바람직하게는 적어도 50% 정도가 더 크다. 특히 바람직한 구현예에 따르면, 선택된 miRNA 또는 miRNAs의 발현 수준은 상기 miRNA 또는 miRNAs에 대한 평균 수준의 적어도 1.5배와 동일하며, 바람직하게는 선택된 miRNA 또는 miRNAs에 대한 평균 수준의 2배 또는 그 이상이다.

바람직하게는, hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 하나 이상의 miRNAs의 발현은, 상기 miRNA의 평균 발현 수준을 생성하기 위해 사용된 배양중의 모든 미분화된 케라티노사이트에서 상기 miRNA의 모든 발현 정도보다 통계적으로 더 크다.

본 발명의 방법의 바람직한 구현예에 따르면, hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 둘 이상의 miRNAs의 평균 수준은, 미분화된 케라티노사이트에서 상기 miRNAs의 평균 발현 수준보다 더 크다. 바람직하게는, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-455-3p 및 hsa-miR-92b로 이루어진 목록에서 적어도 3개, 또는 5개 또는 8개, 또는 심지어 모든 miRNAs에 대해 적용된다.

선택적으로, 만일 hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNAs의 발현 수준이 분화된 표피의 케라티노사이트에서 상기 miRNA의 발현 수준과 실질적으로 동일하다면, 시험중의 케라티노사이트가 분화된 것이거나 또는 분화가 되고 있는 것으로 결론을 내릴 수 있다. 바람직하게는, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c으로부터 선택된 적어도 2개, 또는 3개, 5개, 8개, 또는 모든 miRNAs에 대해 적용된다.

"실질적으로 동일한 수준"은 관찰되는 수준의 차이가 통계적으로 유의적이지 않다는 것, 예를 들어 상기 miRNA의 발현 수준의 측정시 불확실성보다 더 작다는 것을 의미한다.

반면, 본 발명의 방법을 수행하는 측면에서, 만일 hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNAs의 발현 수준이 분화된 표피의 케라티노사이트에서 상기 miRNA의 평균 발현 수준보다 통계적으로 더 크다면, 시험중인 케라티노사이트가 미분화된 또는 약간 분화된 상태의 케라티노사이트인 것으로 고려된다.

바람직한 구현예에서, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 둘 이상의 miRNAs의 평균 수준은, 분화된 표피의 케라티노사이트에서 상기 miRNAs의 평균 발현 수준보다 더 크다. 바람직하게는, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c으로 이루어진 목록에서 적어도 3개, 또는 5개 또는 8개, 또는 심지어 모든 miRNAs에 대해 적용된다.

선택적으로, 만일 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 하나 이상의 miRNAs의 발현 수준이 미분화된 표피의 케라티노사이트에서 상기 miRNA의 발현 수준과 실질적으로 동일하다면, 시험중인 케라티노사이트가 미분화된 상태(이는 분화되지 않은 상태라고도 지칭됨)또는 약간 분화된 상태에 있는 것으로 결론을 내릴 수 있다. 바람직하게는, hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 적어도 2개, 또는 3개, 5개, 8개, 또는 모든 miRNAs에 대해 적용된다.

또한, 본 발명은 인간 상피의 샘플에 존재하는 표피 분화의 차이를 평가하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법을 사용하여, 상기 샘플의 분화 상태를 특징화하는 것이 가능하며, 이에 따라 예를 들어 건강한 인간 상피에 대해 정상적인 분화 상태에 있는지 또는 병적측면을 특징으로 갖는지 여부를 결정하는 것이 가능하다.

본 발명의 상기 방법에 따라, 상기 상피의 케라티노사이트의 2개의 층 사이에 존재하는 표피 분화의 차이, 즉 표피 분화 측면에서 상기 2개의 층 사이에 존재하는 차등을 측정하는 것이 가능하며, 이에 따라 특정 층이 상기 상피의 다른 층보다 더 분화된 상태에 있는지 여부 또는 그 반대로 더 증식적인 상태에 있는지 여부를 규정하는 것이 가능하다.

표피 분화의 차이를 평가하는 본 발명의 방법은, 상기 상피 내 케라티노사이트의 2개의 층 사이에서 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 수준을 비교하는 단계를 포함한다.

실제로, 전술한 바와 같이 본 발명자들은 고도로 분화된 케라티노사이트 내에서, 그리고 미분화된 케라티노사이트 내에서, 본 발명의 miRNAs로 언급되는 상기 19개의 miRNAs에 존재하는 발현 수준의 주된 차이들을 규명하게 되었다. 이에 따라, 상기 miRNAs의 발현 수준의 차이를 시험하는 것은 시험중인 상피의 케라티노사이트의 다른 층과 비교되는 층의 표피 분화 수준 사이의 차이의 존재를 의미하는 것이라고 결론내릴 수 있다.

2개의 층 사이에서 수개의 miRNAs의 발현 수준의 차이를 수립하는 것이 가능하더라도, 표피 분화의 차이는 본 발명의 하나 이상의 miRNAs에 대해 다른 층에 비해 하나의 층에서 유의적으로 다른 발현 수준이 존재하는 즉시 규명되어진다.

상기 방법에 따라, 2개의 층 사이에서 표피 분화의 차이는 특히 다른 층과 비교되는 하나의 층에서 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 하나 이상의 miRNAs의 더 큰 발현을 특징으로 갖는다. 상기 선택된 miRNA의 발현 차이는 이러한 차이가 통계적 관점으로부터 유의적인 자릿수여야 한다.

바람직하게는, 선택된 miRNA의 발현 수준의 차이는 1.3배 이상, 바람직하게는 1.5배 이상, 또는 2배 또는 그 이상이다.

본 발명의 바람직한 구현예에서, 상피의 2개의 층 사이의 표피 분화의 차이는 다른 층에 비해 하나의 층에서 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로 이루어진 목록으로부터 선택된 적어도 2개의 다른 miRNAs, 바람직하게는 적어도 3개, 또는 적어도 5개 또는 8개의 miRNAs의 더 큰 발현, 또는 상기 목록으로부터 10개의 miRNAs의 훨씬 더 큰 발현을 특징으로 갖는다. 다른 층에 비해 하나의 층에서 miRNAs의 발현 수준의 차이는 반드시 상기 목록의 모든 miRNAs에 대해 동일한 인자에 의한 것은 아니다.

상기 방법에 따르면, 2개의 층 사이의 표피 분화의 차이는 또한 다른 층에 비해 하나의 층에서 hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 더 큰 발현을 특징으로 할 수 있다. 또한, 언급되는 발현 수준의 차이는 통계적 관점으로부터 유의적인 차이를 의미한다.

본 발명의 바람직한 구현예에서, 상피의 2개의 층 사이의 표피 분화의 차이는 다른 층에 비해 하나의 층에서 hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로 이루어진 목록으로부터 선택된 적어도 2개의 다른 miRNAs, 바람직하게는 적어도 3개, 또는 적어도 5개 또는 8개의 miRNAs의 더 큰 발현, 또는 상기 목록으로부터 9개의 miRNAs의 발현을 특징으로 갖는다. 다른 층에 비해 하나의 층에서 miRNAs의 발현 수준의 차이는 반드시 상기 목록의 모든 miRNAs에 대해 동일한 인자에 의한 것은 아니다.

본 발명의 측면에서, 논의되는 피부 또는 표피의 상피 샘플은 다른 원으로부터 수득된 것일 수 있으며; 이는 배양중인 상피, 예를 들어 "재건 피부" 유형의 재구성 상피에서 유래된 것이거나, 또는 개체로부터, 예를 들어 생체검사로부터 수득된 샘플에서 유래된 것일 수 있다. 상기 샘플은 이에 따라 인간 피부로부터 유래된 것일 수 있다.

본 발명의 하나 이상의 miRNAs의 발현 수준의 비교는 시험중인 상피 샘플의 임의의 2개 층 사이에서 수행될 수 있다. 만일 인간 피부의 샘플이라면, 상기 비교는 바람직하게는 케라티노사이트의 2개의 반대되는 층 사이에서 수행되며, 예를 들어 상피의 각질층의 케라티노사이트와 기저층의 케라티노사이트 사이에서 수행된다. 이와 관련하여, 최근의 연구들에서 각질세포가 miRNAs를 생성하거나 함유하고 있다는 점이 보여지고 있다는 점에 주목하여야 한다.

발현 수준의 비교는 또한 예를 들어 분화의 다양한 단계들을 강조하기 위하여 상당히 가까이 근접해 있는 샘플의 2개의 층 사이에서 수행될 수 있다. 또한, 본 발명은 전술한 특징화 방법의 다양한 적용들, 및 이에 따라 본 발명자들에 의해 강조된 miRNA 표지의 다양한 용도들, 특히 생리학적 또는 병리학적 분화 장애의 진단 도구로서 용도, 표피 분화에서 결함을 보정하는 표적으로서 용도, 또는 표피 분화 조절인자를 시험하는 바이오마커 및 스크리닝 도구로서 용도에 관한 것이다.

제2측면에서, 본 발명은 이에 따라 상피에 대해 수행되는 처치의 효능을 측정하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 처치 전후에 상피의 표피 분화의 miRNA 표지를 비교하는 단계를 포함한다. 따라서, 상기 방법은 처치 전후에 상기 상피의 케라티노사이트 내에서 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 수준을 비교하는 단계를 포함한다.

본 발명자들은 실제로 표피에서 발생하는 표피 분화 과정 동안 상기 19개의 miRNAs 발현 수준의 변화를 발견하였다. 하나 이상의 상기 miRNAs의 발현 수준의 변형은 이에 따라 시험 처치에 대응한 분화 상태의 변형을 나타낸다. 또한, 발현 수준에 대한 변형은, 통계적 관점으로부터 유의적이고 이에 따라 시험중인 상피의 상당수의 대표적인 케라티노사이트에 대해 관찰될 수 있는 충분하고 재현가능한 강도의 변형을 의미한다.

선택적으로, 본 발명에서 상피에 적용되는 처치의 효능의 측정 방법은 또한 시험 처치(test treatment) 전후에 상기 상피의 표피 분화의 차이를 비교하는 단계를 포함할 수 있다. 따라서, 처치 전에 상기 방법의 이러한 변화에 따라, 상피의 2개의 층 사이에 존재하는 표피 분화의 차이가 측정되고, 이에 따라 수득된 결과는 처치 후에 상기 동일한 2개의 층 사이에 존재하는 표피 분화의 차이와 비교된다. 따라서, 상기 시험 처치가 2개의 층 사이에 존재하는 차이를 변경하였는지 또는 변경하지 않았는지 여부에 관하여 측정이 이루어지며, 이는 예를 들어 2개의 층 사이의 분화 상태의 차이를 감소시킴으로서, 즉 2개의 층 사이에서 본 발명의 miRNAs 발현 정도의 차이를 감소시킴으로써, 또는 표피 분화의 차이를 증가시킴으로써 수행된다.

상기 방법에 의해 시험된 처치는 임의의 치료를 구성할 수 있다. 바람직하게는, 이는 분자의 국소 적용, 바람직하게는 피하에 적용 또는 주사에 의한 적용에 관련된 것이다. 상기 적용된 분자는 단순 화학물질 또는 다른 화학물질들의 조합물 또는 연합물일 수 있으며, 이는 활성 성분, 천연 분자, 단백질, RNA, DNA, 정유, 천연추출물의 화학물질, 복합물 제형, DNA 분자, miRNA, siRNA, miRNA 억제제, 특히 안타고미르 등에 관련된 것일 수 있다.

본 발명의 시험 처치 측면에서 특히 바람직한 특정 분자는 RNA, 특히 miRNA, 또는 천연 miRNA의 발현을 변형시키는 분자, 예컨대 miRNA 억제제, 특히 안타고미르이다.

이는 또한 파장과 무관하게 전자기 방사선의 적용에 관련된 것일 수 있으며, 예를 들어 가시광선, UV, IR 또는 X 선이 포함된다. 또한, 본 발명의 처치에는 다양한 기계적 효과들의 적용이 포함된다.

만일 본 발명의 방법이 시험중인 상피에서 본 발명의 하나 이상의 miRNAs의 발현 수준에 대해 변형을 야기한다면, 이는 효과적인 것으로 고려된다. 바람직하게는, 상기 처치가 상피에서 2 이상 또는 5 이상의 상기 miRNAs의 발현 수준에 대해 변형을 야기한다면, 이는 효과적인 것으로 고려된다. 상기 처치는 본 발명의 miRNAs의 적어도 10개, 15개 또는 19개의 발현 수준에 대해 변형을 야기할 수 있다. 본 발명의 miRNAs의 발현 수준에서 야기되는 변형은 모든 miRNAs에 대해 반드시 동일한 정도의 것은 아니다.

바람직하게는, 본 발명의 측면에서 만일 시험 처치가 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 수준에 대한 변형에 수반하여, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 상기 miRNA의 반대 방향으로 발현 수준에 대해 변형을 야기한다면, 이는 효과적인 것으로 고려될 것이다. 따라서, 본 발명의 측면에서 효과적인 처치는 예를 들어 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 수준의 증가를 야기하고, 이와 동시에 hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 수준의 감소를 야기할 것이다.

본 출원의 처치 효능을 측정하는 방법을 사용함으로써, 제제, 특히 화장품, 예를 들어 화장품 조성물의 이로운 작용을 피부의 표피 분화 상태에 대한 그의 작용과 관련하여 정량화하는 것이 또한 가능하다. 전술한 시험관내 측정 방법은 실제로 피부의 케라티노사이트의 증식 또는 분화 상태에 대해 영향을 미치는 제제로서 자격이 부여될 수 있는 제제를 결정하기 위한 시험 프로토콜에서 사용될 수 있다.

또한, 이러한 시험을 사용함으로써, 본 발명에 개시된 측정 방법을 사용하여 상기 제제에 의해 수득된 결과들을 내세움으로써 소비자들에게 상기 제제를 홍보하는 것이 가능하다. 표피 분화의 상태에 대한 효과의 평가는 본 발명의 miRNAs 발현의 연구에 기반할 것이다. 따라서, 본 발명은 전술한 바와 같은 측정 방법으로 구성된 시험 프로토콜에서 그의 효과를 나타냄으로써 제제를 추천하는데 사용될 수 있는 방법을 또한 제공한다. 따라서, 본 발명은 또한 화장품을 홍보하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 전술한 바와 같이 수행되는 하나 이상의 시험에 의해 입증되는 상기 제품의 효능, 작용 또는 성질을 측정하는 단계로 구성된다.

이러한 제품은 임의의 통신 채널을 사용하여 홍보될 수 있다. 이는 특히 판매 보조원에 의해 판매지점에서 직접적으로 수행될 수 있거나, 또는 라디오 및 텔레비전에 의해 특히 광고적 측면에서 수행될 수 있다. 이는 또한 인쇄된 출판물을 통해 이루어질 수 있거나, 또는 임의의 다른 문헌들을 사용하여 특히 퍼블리시티의 목적(사업설명서)으로 이루어질 수 있다. 이는 또한 인터넷을 통해 홍보되거나, 또는 임의의 다른 적절한 컴퓨터 네트워크를 통해 홍보될 수 있다. 이는 또한 제품상에서 직접적으로 이루어지며, 특히 제품의 포장 또는 제품과 조합될 수 있는 임의의 다른 설명문구상에서 이루어질 수 있다.

제3측면에서, 본 발명은 또한 표피 분화 과정에 대한 분자의 작용과 관련하여 분자를 스크리닝하는 다양한 방법들에 관한 것이다.

특히, 본 발명은 상피 내 표피 분화 과정의 조절인자(modulator)를 스크리닝하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 스크리닝 대상인 조절인자의 적용 전 및 후에 상기 표피 내 케라티노사이트의 표피 분화 상태를 평가하는 단계를 포함한다.

이러한 스크리닝 과정은 생체내, 또는 생체외, 또는 시험관내에서 수행될 수 있으며, 예를 들어 배양중인 상피에 대해 또는 상피의 샘플에 대해 수행될 수 있다.

상기 상피 내 케라티노사이트의 표피 분화 상태의 평가는 본 발명의 제1측면에 따른 방법들 중 하나를 사용하여 수행된다.

전술한 바와 같이, 여기서 언급되는 상피는 배양중인 상피, 예를 들어 "재건 피부(reconstructed skin)" 유형의 재구성(reconstituted) 상피이거나, 또는 인간으로부터 예를 들어 생체검사 동안 수득된 샘플일 수 있다.

선택적으로, 본 발명은 또한 상피 내 표피 분화 과정의 조절인자를 스크리닝하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 스크리닝 대상인 조절인자의 적용 전 및 후에 상기 상피의 표피 분화의 차이를 평가하는 단계를 포함한다.

상기 상피 내 케라티노사이트의 표피 분화 차이의 평가는 본 발명의 제1측면에 따른 방법들 중 하나를 사용하여 수행된다.

상기 논의되는 조절인자는 임의의 화학물질, 예를 들어 천연추출물로부터 유래된 것 또는 합성된 것일 수 있으며, 이는 예를 들어 복합물 제형, DNA 분자, miRNA, siRNA 또는 miRNA 억제제, 예컨대 안타고미르일 수 있다. 이러한 목록이 완전하지 않다는 것은 명백하다.

선택적으로, 상기 조절인자는 전자기 방사선, 바람직하게는 가시광선, UV, IR 또는 X 선을 사용하는 기기 시스템(instrumental system)이거나, 또는 기계적 효과들을 이용하는 시스템일 수 있다.

제4측면에서, 본 발명은 또한 본 발명자들에 의해 발견된 miRNA 표지를 사용함으로써 표피의 상태를 진단하는 방법에 관한 것이다. 이러한 진단 방법은 기저층과 각질층 사이에서 상기 표피 내 존재하는 표피 분화의 차이를 측정하는 단계, 및 기저층과 각질층 사이에서 동일한 유형의 정상 표피 내 존재하는 표피 분화의 평균 차이를 비교하는 단계를 포함한다.

표피 분화 차이의 측정은 바람직하게는 본 발명의 제1측면에 따른 다양한 방법들을 사용하여 수행된다. 이는 바람직하게는 진단 대상인 피부 표피의 샘플에 대해 수행된다.

동일한 유형의 정상 표피 내 존재하는 기저층과 각질층 사이에서 표피 분화의 평균 차이는, 진단 대상인 표피와 동일한 유형의 건강한 피부를 갖는 대상체의 수개의 표피 샘플에 대해 수행되는 수개의 측정들의 평균값에 대응한다. "동일한 유형"이라는 용어는 비슷한 연령, 인종 및 동일한 색을 의미한다. 이는 표피의 임의의 병적측면 또는 병변이 없는 "정상(normal)" 또는 "건강한(healthy)" 상태에 대응하는 평균값이다.

진단 대상인 피부의 miRNA 프로파일을 수립하고 비교에 의한 상기 진단 방법을 사용함으로써, 태양복사에 의해 야기되는 조로, 광노화 또는 손상, 스트레스에 의해 야기되는 노화 또는 손상, 여드름 또는 임의의 다른 생리학적 또는 병리학적 질환을 갖고 있는 것으로 진단될 수 있다.

또다른 측면에 따르면, 본 출원은 또한 케라티노사이트의 표피 분화 상태를 측정하기 위하여 인간 상피의 샘플 내 케라티노사이트에서 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 분석(assay)의 사용에 관한 것이다.

본 발명자들은 실제로 상기 분석이 표피 분화의 miRNA 표지에 대한 접근을 제공한다는 점을 보여주었다.

특히 바람직한 사용에 있어서, 본 발명의 19개 miRNAs 중 적어도 2개의 별개의 miRNAs가 분석되며, 바람직하게는 적어도 5개, 8개, 10개, 12개 또는 15개가 분석된다. 일례로서, 본 발명의 19개 miRNAs의 분석은 시험 대상인 케라티노사이트의 표피 분화 상태를 측정하는데 사용될 수 있다.

또다른 측면에서, 본 출원은 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA, 및/또는 상기 miRNAs 발현의 하나 이상의 조절인자, 특히 안타고미르와 같은 miRNA의 억제제의 다양한 용도들, 화장품 및 치료적 용도에 관한 것이다.

실제로, 피부 내 표피 분화 과정에서 상기 miRNAs의 중요성 때문에, 케라티노사이트에서 그의 수준의 조절은 각질층 재생 과정의 속도를 증가시키거나 감소시키기 위하여 예를 들어 표피 분화의 속도를 증가시키거나 그 반대로 감소시키는 것과 같이 표피 분화에 영향을 미칠 수 있다. 케라티노사이트 내에서 본 발명의 miRNAs의 수준 조절은 더 바람직하게는 본 발명의 miRNAs 중 하나 또는 다른 것을 도입함으로써, 특히 miRNAs의 내인성 조절장애를 바로잡는 miRNAs를 사용하여 케라티노사이트 내 그의 양을 증가시킴으로써 수행된다.

또한, 상기 조절은 상기 miRNAs에 대한 조절인자를 도입함으로써, 바람직하게는 본 발명의 miRNAs 중 하나를 표적으로 하고 그에 따라 케라티노사이트 내 그의 수준을 감소시키는 하나 이상의 miRNA 억제제, 예를 들어 안타고미르를 도입함으로써 수행될 수 있다. 특히 본 발명의 측면에서 고려될 수 있는 다른 miRNA 억제제들은 miRCURY LNA^TM microRNA Knockdown Probes(Exiqon) 및 Qiagen의 miScript miRNA 억제제이다.

바람직한 구현예에서, 본 발명은 표피 분화 프로그램과 연관된 피부의 병적이상을 처치하기 위한 치료적 용도의, 본 발명의 19개 miRNAs로부터 선택된 miRNA, 또는 상기 miRNA에 대한 조절인자, 특히 miRNA 억제제, 예컨대 상기 miRNA를 표적으로 하는 안타고미르에 관한 것이다. 상기 관련된 병적이상은 바람직하게는 표피 분화 내 기능장애를 발생시키는 병적이상이다.

특히, 본 발명에서 고려되는 병적이상은 건선, 아토피성 피부염, 여드름, 어린선, 네데르톤 증후군, 모공성홍색비강진, 모공성각화증, 다리에증, 수장족저각화증 및 한공각화증이다.

바람직하게는, 본 발명은 적어도 2개, 또는 3개, 바람직하게는 적어도 5개, 10개, 15개 또는 19개의 본 발명의 miRNAs, 또는 miRNA의 억제제, 특히 상기 miRNAs의 적어도 일부의 안타고미르를 포함하는, 전술한 치료적 적용을 위한 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 치료적 적용과 관련하여, 만일 원하는 치료적 효과가 치료 대상인 피부의 표피 분화 상태를 증가시키는 것으로 이루어진다면, 바람직한 구현예에서 본 발명은 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 하나 이상의 miRNA를 포함하는, 치료용 조성물, 바람직하게는 표피 분화 프로그램과 연관된 피부의 병적이상의 치료용 조성물, 특히 건선, 아토피성 피부염, 여드름, 어린선, 네데르톤 증후군, 모공성홍색비강진, 모공성각화증, 다리에증, 수장족저각화증 및 한공각화증의 치료용 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 전술한 miRNA 또는 miRNAs 외에 또는 전술한 miRNA 또는 miRNAs를 대신하여, miRNA의 하나 이상의 억제제, 예컨대 안타고미르, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 miRNA를 표적으로 하는 제제를 포함하는, 상기 병적이상의 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 측면에서 특히 고려되는 miRNA의 다른 억제제들은 miRCURY LNA^TM microRNA Knockdown Probes(Exiqon) 및 Qiagen의 miScript miRNA 억제제이다.

hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로 이루어진 목록으로부터 적어도 2개의 miRNAs, 바람직하게는 적어도 5개, 8개 또는 동등하게 10개의 miRNAs가 선택될 수 있다.

말단 분화의 자극을 필요로 하는 상황을 위해, 전술한 치료적 적용을 위한 조성물 또는 제품은 이에 따라 하기를 포함한다:

- miRNAs hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 3개, 5개 또는 전부, 또는 발현의 증가를 야기하는 상기 miRNAs의 조절인자; 및/또는 선택적으로

- miRNAs hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c 중 하나를 표적으로 하는 miRNA의 억제제, 예컨대 안타고미르, 또는 발현의 억제를 야기하는 상기 miRNAs의 조절인자.

본 발명의 측면에서 고려되는 특정 miRNA의 억제제들은 안타고미르, miRCURY LNA^TM microRNA Knockdown Probes(Exiqon) 및 Qiagen의 miScript miRNA 억제제이다.

반면, 만일 원하는 치료적 효과가 예를 들어 표피 분화의 속도를 감소시키는 것이거나 또는 치료된 피부의 케라티노사이트의 증식력을 촉진하는 것이라면, 다른 구현예에서 본 발명은 hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA를 포함하는, 치료용 조성물, 바람직하게는 표피 분화 프로그램과 연관된 피부의 병적이상의 치료용 조성물, 특히 건선, 아토피성 피부염, 여드름, 어린선, 네데르톤 증후군, 모공성홍색비강진, 모공성각화증, 다리에증, 수장족저각화증 및 한공각화증의 치료용 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 전술한 miRNA 또는 miRNAs 외에 또는 전술한 miRNA 또는 miRNAs를 대신하여, miRNA의 하나 이상의 억제제, 예컨대 안타고미르, hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 miRNA를 표적으로 하는 제제를 포함하는, 상기 병적이상의 치료용 조성물에 관한 것이다.

hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로 이루어진 목록으로부터 적어도 2개의 miRNAs, 바람직하게는 적어도 4개, 7개 또는 동등하게 9개의 miRNAs가 선택될 수 있다.

말단 분화의 감소를 필요로 하는 상황을 위해, 전술한 치료적 적용을 위한 조성물 또는 제품은 이에 따라 하기를 포함한다:

- miRNAs hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 3개, 5개 또는 전부, 또는 발현의 증가를 야기하는 상기 miRNAs의 조절인자; 및/또는 선택적으로

- miRNAs hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b 중 하나를 표적으로 하는 miRNA의 억제제, 예컨대 안타고미르, 또는 발현의 억제를 야기하는 상기 miRNAs의 조절인자.

본 발명의 측면에서 특히 고려되는 miRNA의 억제제들은 안타고미르, miRCURY LNA^TM microRNA Knockdown Probes(Exiqon) 및 Qiagen의 miScript miRNA 억제제이다.

바람직하게는, 치료적 사용을 위한 본 발명에 따른 조성물은 국소적 적용 또는 주사를 위해 약학적으로 허용가능한 부형제들에 의해 제형화된다.

또한, 본 발명은 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 miRNA, 또는 상기 miRNAs의 조절인자, 바람직하게는 miRNA의 억제제, 예컨대 안타고미르, 상기 miRNAs 중 하나의 표적화제의 비병원성 인간 피부에 대한 화장품 적용 용도를 포함한다.

치료적 또는 화장품 용도를 위해 언급되는 다양한 용도들에는 바람직하게는 miRNAs, 또는 상기 miRNAs, 또는 상기 miRNAs의 억제제, 예를 들어 안타고미르를 포함하는 조성물의 부분 국소적 적용이 포함된다. miRNAs 및 이의 억제제들은 작은 크기 때문에 케라티노사이트의 막을 통과할 수 있으며, 처치되는 케라티노사이트에서 상기 miRNAs의 양을 조절할 수 있다. 또한, miRNAs 및 이의 억제제들은 그의 물리화학적 성질 때문에 피부의 심층에 도달하게 되고, 이에 따라 그의 작용이 표피에 한정되는 것으로 여겨지지 않는다.

miRNAs 및 이의 억제제, 특히 안타고미르의 안정성은 그의 작용이 일시적이라는 점을 나타내며, 이에 따라 본 발명은 처치대상인 피부에 대해 재생 적용을 포함하는 치료 또는 화장품에서의 용도를 포함한다.

이러한 이유 때문에, 본 발명은 특히 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 miRNA, 및/또는 상기 miRNAs 중 하나의 발현 조절인자, 바람직하게는 miRNA의 억제제, 예컨대 상기 miRNAs 중 하나를 표적으로 하는 안타고미르를 개개인의 피부에 국소 적용하는 단계를 포함하는, 생리학적, 비병원성 화장품의 경우에 표피 분화와 연관된 질환을 치료하는 방법을 포함한다.

상기 방법의 바람직한 구현예에 따르면, 처치되는 피부의 케라티노사이트의 표피 분화 상태를 증가시키기 위하여 miRNA는 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된다.

hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-923 및 hsa-miR-92b로 이루어진 목록으로부터 적어도 2개의 miRNAs, 바람직하게는 적어도 5개, 8개 또는 동등하게 10개의 miRNAs가 선택될 수 있다.

선택적으로 또는 또한, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNAs를 표적으로 하는 miRNA의 억제제의 하나 이상 또는 수개가 선택될 수 있다. 본 발명의 측면에서 특히 고려되는 miRNA의 억제제들은 안타고미르, miRCURY LNA^TM microRNA Knockdown Probes(Exiqon) 및 Qiagen의 miScript miRNA 억제제이다.

반면, 만일 원하는 효과가 예를 들어 표피 분화의 속도를 감소시키는 것이거나 또는 처치된 피부의 케라티노사이트의 증식력을 촉진하는 것이라면, 다른 구현예에 따라 본 발명은 상기 miRNA가 hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택되는 처치 방법에 관한 것이다.

선택적으로 또는 또한, hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-923 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 하나 이상의 miRNAs를 표적으로 하는 miRNA의 억제제의 하나 이상 또는 수개가 선택될 수 있다. 본 발명의 측면에서 특히 고려되는 miRNA의 억제제들은 안타고미르, miRCURY LNA^TM microRNA Knockdown Probes(Exiqon) 및 Qiagen의 miScript miRNA 억제제이다.

화장품의 경우 특정 표피 분화 질환은 연령, 일사성 피부염(dermatoheliosis), 흉터, 피부건조 또는 건조증, 또는 화학적 저항, 특히 박피제, 박리제, 탈지제로부터의 화학적 저항, 또는 기계적 저항과 연관된다. 이러한 질환들은 비병원성이며, 이의 처치는 치료적 처치인 것으로 고려되는 것이 아니라 단지 화장품 부문에 대한 처치인 것으로 고려되며, 상기 질환들의 치료는 본질적으로 피부의 외관과 개인의 편의성을 개선하는 것을 목적으로 한다.

보다 구체적으로, 연령과 연관되는 질환은 생활연령과 연관되는 표피 분화에 대한 변형으로 이루어진다. 실제로, 노화 과정 동안 표피는 표피 분화 과정과 기능적 각질층의 형성에 영향을 미치는 다수의 변형들을 받게 된다. 특정 관찰예는 상부기저층의 더 제한된 수와 함께 표피의 박화, 및 클론원성 세포수의 감소와 함께 증식의 감소 및 이에 따른 표피 전환의 감소이다. 케라틴 발현 프로파일과 같은 통상적인 분화에 대한 마커는 젊고 건강한 피부에서 관찰되지 않는 케라틴 16 및 17의 발현과 함께 변형된다. 케라틴 K1 및 K15의 양 뿐만 아니라 입상 층의 주성분인 필라그린의 양도 감소된다. 또한, 트랜스글루타미나제 1의 양은 연령에 따라 감소된다. 장벽 기능은 투과성이 증가하면서 변화된다.

일사성 피부염과 연관된 질환 또는 "광노화"는 태양광에 대한 만성 노출에 따른 표피 분화의 변형으로 연장된다. "광노화된" 피부는 특히 무두질한 가죽을 닮은 외양과 더 현저해진 주름의 존재를 특징으로 하며; 이러한 피부는 또한 케라틴 K6, K16, K17의 과발현과 필라그린 및 트랜스글루타미나제의 감소와 함께 표피 수준에서 변형된다. 이러한 변화들은 주름의 형성과 연관되었다. 각질층의 형성에 관여하는 SPRR 단백질은 또한 UV에 의해 변형된다. 태양에 대한 급성 노출은 장벽 기능과 표피의 항상성에 영향을 미치는 표피의 변형을 야기한다는 점이 또한 알려져 있다.

흉터와 연관되는 질환은 흉터 및 수복의 과정에서 표피 분화의 변형으로 연장된다. 손상 이후에 발생하는 재-상피화 과정 동안, 표피의 단백질에 대한 전체 발현 패턴이 변형된다. 완전 수복이 3개의 단계, 즉 초기 이동 단계, 그 후 증식 단계, 및 마지막으로 분화 단계에서 발생한다. 상기 증식 단계는 상처를 커버하며, 이에 따라 케라티노사이트 계층화에 참여자들을 포함시키는 표피의 신-형태형성 과정, 및 건강한 경우에 기능적 각질층을 재형성하는데 사용될 수 있는 분화 과정이 이어질 수 있다.

건조 또는 건조증과 연관된 질환은 건조한 피부가 본질적으로 표피의 지질 성분의 감소 및 각질층의 변화를 특징으로 한다는 사실에 주로 기인한다. 케라틴 1 및 10이 감소되고, 케라티노사이트 K6 및 K14는 증가된다. 필라그린의 발현 수준은 인보루크린의 경우와 같이 섭동된다.

화학적 저항, 특히 박피제, 박리제 또는 탈지제에 의한 화학적 저항, 및 기계적 저항은 표피의 항상성에 대한 변형의 원인이 되며, 각질층에 의해 제공되는 장벽 기능의 변화를 유도한다. 정상 표피 분화의 과정은 표피의 항상성 및 정상적 장벽 기능을 재수립할 수 있다.

본 발명의 하나 이상, 바람직하게는 둘 이상의 miRNAs, 또는 상기 miRNAs의 특이적 억제제를 적용시에, 바람직하게는 국소적으로 적용시에, 화장품 적용을 위해 전술한 다양한 비병원성 질환들을 치료하는 것이 가능하다.

따라서, 본 발명은 또한 하나 이상의 본 발명의 miRNAs를 포함하거나 또는 실제로 본 발명의 miRNAs 중 하나의 발현에 대한 하나 이상의 조절인자를 포함하는, 피부의 외양, 이의 입자, 이의 빛, 이의 결함 또는 이의 미세기복을 바로잡거나 개선하기 위한 화장품 조성물 또는 화장품에 관한 것이다. 본 발명의 miRNAs 중 하나의 발현의 조절인자는 상기 miRNAs 중 하나의 발현의 증가 또는 억제를 야기하는 활성성분이다. miRNAs 중 하나의 발현을 조절하는 상기 활성성분은 예를 들어 전술한 스크리닝 방법에 의해 동정되거나, 또는 이는 본 발명의 miRNA의 안타고미르이다.

상기 논의되는 화장품 또는 화장품 조성물은 임의의 생약 형태이며, 예를 들어 국소 투여를 위해 밀크, 크림, 겔, 스프레이 또는 비누로 제형화된 형태이거나, 경구로 섭취할 수 있는 형태로 제형화된 형태이다. 특히, 이는 다양한 활성성분들의 조합일 수 있으며, 예를 들어 본 발명의 2 이상의 miRNAs의 조합, 또는 본 발명의 miRNA와 본 발명의 miRNA의 조절인자의 조합, 또는 본 발명의 2개의 miRNA 조절인자의 조합이다. 이는 또한 활성성분과 기기, 특히 기계적, 광, 또는 전기적 또는 전자기적 처리 유형의 기기의 조합일 수 있다.

본 발명은 특히 노화된 피부의 가죽같은 외양 및 분화의 장애와 연관된 표면 결함을 감소시키는 "항노화" 제품으로써 알려진 화장품을 포함한다. 태양에 노출되는 노화 피부용 특정 화장품이 또한 고려되며, 이는 본 발명의 miRNAs 또는 상기 miRNAs의 조절인자에 의해 증식과 표피 분화 사이의 균형을 변경함으로써 일부 질(quality)을 회복시키기 위한 것이다.

또한, 본 발명은 태양에 대한 급성 노출에 의한 분화 유도의 변형을 상쇄시키는 애프터선 화장품에 관한 것이다. 또한, 표피 분화 및 케라티노사이트 박리를 자극함으로써 색소침착 장애(pigmenting disorder)를 제어할 수 있는 제품이 색소침착 장애의 원인이 되는 과도한 멜라닌을 더 신속하게 제거하기 위하여 고려된다.

또한, 다른 화장품들은 건조한 피부에 대해 특이적으로 생성된 제품이며, 이는 수분제공 효과를 가지며 또한 표피 분화에서 말단 단계를 조절한다. 또한, 흉터 동안 피부의 수복 과정을 개선하기 위한 수복 제품이 본 발명의 측면에서 고려된다. 또한, 특이적 과정의 측면에서(박리후, 레이저후 제품 등) 또는 매일의 상황에서, 예컨대 공해, 가정용품 등에서 저항을 받은 피부용 제품을 제형화하는 것이 가능하다.

말단 분화의 자극을 필요로 하는 경우에, 장벽 기능 및 각질층을 증가시키기 위하여, 본 발명에 따른 화장품 조성물 또는 화장품은 하기를 포함한다:

● miRNAs hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 3개, 5개 또는 전부, 또는 이의 발현의 증가를 야기하는 상기 miRNAs의 조절인자; 및/또는 선택적으로

● miRNAs hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c의 억제제, 또는 이의 발현의 억제를 야기하는 상기 miRNAs의 조절인자. 본 발명의 측면에서 특히 고려되는 miRNA의 억제제들은 안타고미르, miRCURY LNA^TM microRNA Knockdown Probes(Exiqon) 및 Qiagen의 miScript miRNA 억제제이다.

말단 분화의 감소와 각질층 형성의 감소를 필요로 하는 경우에, 본 발명에 따른 화장품 조성물 또는 화장품은 하기를 포함한다:

- miRNAs hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c 중 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개, 3개, 5개 또는 전부, 또는 이의 발현의 증가를 야기하는 상기 miRNAs의 조절인자; 및/또는 선택적으로

- miRNAs hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b의 억제제, 또는 이의 발현의 억제를 야기하는 상기 miRNAs의 조절인자. 본 발명의 측면에서 특히 고려되는 miRNA의 억제제들은 안타고미르, miRCURY LNA^TM microRNA Knockdown Probes(Exiqon) 및 Qiagen의 miScript miRNA 억제제이다.

또한, 본 발명은 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현을 검정하기 위한 수단 및 상기 miRNA 또는 miRNAs의 발현에 대한 기준을 제공하는 정보를 포함하는, 인간 케라티노사이트의 분화 상태 측정용 키트에 관한 것이다.

본 발명에서 특히 바람직한 키트는, 상기 기준이 배양시 미분화된 케라티노사이트에서 상기 miRNA 또는 miRNAs의 평균 발현 수준인 키트이다.

선택적으로, 본 발명에 따른 키트는 분화된 표피의 케라티노사이트에서 상기 miRNA 또는 miRNAs의 평균 발현 수준에 대응하는 기준과 함께 사용될 수 있다.

본 발명의 일측면 또는 다른 측면에 대해 보다 구체적으로 기재된 다양한 바람직한 구현예들은 또한 본 발명의 다른 측면들에 대해 적용가능하다. 특히, 본 발명의 방법, 과정, 키트, 조성물 및 사용에 의해 나타난 바와 같이, 본 발명의 19개의 miRNAs 목록으로부터 선택된 적어도 2개의 miRNAs, 바람직하게는 적어도 3개, 5개, 9개, 10개, 15개 또는 심지어 19개의 본 발명의 miRNAs, 즉 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c의 발현 수준을 측정하는 것이 항상 바람직할 수 있다.

재료 및 방법

인간 케라티노사이트의 단층 배양

정상적 인간 표피의 케라티노사이트는 유방성형수술에서 기원하였으며, 이는 미토마이신으로 처리된 Swiss 3T3 섬유아세포의 영양층 상에서 레인왈트 및 그린(Rheinwald and Green) 방법을 사용하여 관습적으로 배양되었다.

재건 피부

각질층 및 살아있는 동등한 피부를 갖는 계층화되고 분화된 표피를 포함하는 시험관내 피부 재건이 정상적 인간 케라티노사이트 및 정상적 인간 피부의 섬유아세포에 의해 생성되었다.

요약하면, 동등한 피부가 소의 콜라겐 I과 백만 개의 인간 피부 섬유아세포에 의해 생성되었다. 정상적 케라티노사이트가 500000개 양의 케라티노사이트에서 격자의 수축 후에 파종되고, 7일 동안 통상적인 배지에서 배양되었다. 그 후, 배양물은 출현 단계(emersion phase) 동안 스크린상에 적층되었다(공기-액체 접점, 7일).

이 기간의 말기에, 피부의 모폴로지는 정상적 인간 피부에 매우 가까웠다. 그 후, 이는 다양한 실험들을 위해 사용될 수 있으며, 모세관 오름에 의해 영양분이 공급되는 피부 아래 배양배지를 유지한다.

케라티노사이트로부터 전체 RNA의 추출

세포 용해:

단층 배양의 케라티노사이트는 TriReagent 완충액 중 배양 접시에서 용해되었다.

재건 피부로부터 재건 표피가 핀셋을 사용하여 동등한 피부로부터 분리되었다. 상기 표피는 TriReagent 용해 완충액 중 유리 균질기 내에서 수동으로 분쇄되었다.

전체 RNA의 추출

전체 RNA는 구아니듐 이소티오시아네이트 용액에서 통상적인 용해 기법을 사용한 후 페놀/클로로포름 혼합물을 사용하여 추출되었다.

μParaflo ^TM “MiRHuman 10.0” 칩에서의 miRNA 혼성화

짧은 RNA가 전체 RNA로부터 추출되었으며(Microcon filter, Millipore), polyA 꼬리에 의해 3' 말단에서 연장되었다. 형광 표지된 올리고뉴클레오티드는 polyA 꼬리에 리게이션되었다. 그 후, 짧은 표지된 RNA는 μParaflo^TM “MiRHuman 10.0” 칩(Atactic Technologies, LC Sciences) 상에서 혼성화되었다. 여기에는 miRBase 10.0에서 기록된 모든 인간 miRNAs의 상보적 서열들이 포함되었다(711개의 성숙 miRNAs). 상기 서열들은 상기 칩상에 5회 증착되었다. 형광이 정량화되었으며, 신호가 정상화(normalize)되었다. 형광의 양은 샘플 내 각각의 miRNA의 발현 수준을 반영하였다.

통계적 분석

스튜던트 티(Student t) 시험을 사용하여 "배양된 케라티노사이트" 샘플과 "재건된 표피의 케라티노사이트" 샘플 사이에서 각각의 miRNA의 발현이 통계적으로 비교되었다(p<0.05).

실시예 1: 미분화된 단층-배양된 케라티노사이트에 비해 분화된 재건 표피의 케라티노사이트 내에서 과발현된 10개의 miRNA의 목록

유방성형수술로부터 획득된 주요(primary) 정상적 인간 케라티노사이트의 3개의 균주(strain)가 본 시험에서 사용되었다(PH202, PH64 및 PH63). 공지된 인간 miRNAs 모두의 발현이 단층 배양된 케라티노사이트, 즉 미분화된 케라티노사이트(2D)에서 정량화되었으며, 동시에 상기 동일한 케라티노사이트를 갖는 재건된 표피의 샘플(3D)에서 정량화되었다.

확률 p가 제공되는 스튜던트 티 시험을 사용하여 "배양중의 케라티노사이트(keratinocytes under culture)" 샘플과 "재건된(reconstructed) 표피의 케라티노사이트" 샘플 사이에서 각각의 miRNA의 발현이 통계적으로 비교되었다. 표 1에 기재된 각각의 miRNA는 시험된 각각의 세포 균주에 대해, 미분화된 케라티노사이트에 비해 표피에서 통계적으로 더 큰 수준을 가졌다(p < 0.05). 발현비 3D/2D는 각각의 균주에 대해 제공된다. 일례로서, miR-141은 단층 배양된 케라티노사이트에서보다 재건된 표피의 케라티노사이트에서 평균 2.3배 더 풍부하다.

단층 배양(2D)의, 즉 미분화된 케라티노사이트에 비해 재건된 표피(3D)의, 즉 분화된 케라티노사이트에서 과발현된 miRNAs

케라티노사이트		2D		3D
miRNA의 명칭		평균 신호	표준편차	평균 신호	표준편차	p_값	3D/2D 비	3D/2D 평균비
hsa-miR-141	PH202	1047	127	1930	491	0.004	1.8	2.3
	PH64	526	68	1405	86	0.00002	2.7
	PH63	916	111	2079	387	0.0002	2.3
hsa-miR-148a	PH202	214	39	619	50	0.00008	2.9	4.1
	PH64	127	37	703	53	0.0002	5.5
	PH63	117	21	466	49	0.000004	4.0
hsa-miR-182	PH202	538	80	922	94	0.0002	1.7	1.6
	PH64	519	63	873	116	0.0003	1.7
	PH63	530	38	724	58	0.0003	1.4
hsa-miR-224	PH202	513	108	805	245	0.02	1.6	1.8
	PH64	574	164	1085	278	0.005	1.9
	PH63	393	90	723	138	0.002	1.8
hsa-miR-26a	PH202	4673	495	7757	610	0.00007	1.7	1.6
	PH64	4370	704	7025	681	0.001	1.6
	PH63	4616	589	6707	346	0.002	1.5
hsa-miR-26b	PH202	820	106	1110	82	0.004	1.4	2.0
	PH64	654	175	1390	154	0.002	2.1
	PH63	297	67	750	80	0.0005	2.5
hsa-miR-361-5p	PH202	337	46	723	37	0.0001	2.1	2.3
	PH64	505	88	1269	99	0.0001	2.5
	PH63	369	58	853	36	0.0003	2.3
hsa-miR-425	PH202	339	16	559	41	0.00002	1.6	1.4
	PH64	416	71	551	67	0.02	1.3
	PH63	502	44	581	22	0.02	1.2
hsa-miR-455-3p	PH202	299	38	1053	96	0.0000005	3.5	3.7
	PH64	284	64	1265	187	0.00003	4.5
	PH63	325	50	1012	83	0.00001	3.1
hsa-miR-92b	PH202	1104	107	1632	112	0.0002	1.5	1.5
	PH64	1487	252	2400	150	0.001	1.6
	PH63	1482	129	1906	135	0.002	1.3

실시예 2: 분화된 재건 표피의 케라티노사이트에 비해 단층 배양된 미분화된 케라티노사이트 내에서 과발현된 9개의 miRNA의 목록

유방성형수술로부터 획득된 주요 정상적 인간 케라티노사이트의 3개의 균주가 본 시험에서 사용되었다(PH202, PH64 및 PH63). 공지된 인간 miRNAs 모두의 발현이 단층 배양된 케라티노사이트, 즉 미분화된 케라티노사이트에서 정량화되었으며, 동시에 상기 동일한 케라티노사이트를 갖는 재건된 표피에서 정량화되었다. 확률 p가 도출되는 스튜던트 티 시험을 사용하여 "배양된 케라티노사이트" 샘플과 "재건된 표피의 케라티노사이트" 샘플 사이에서 각각의 miRNA의 발현이 통계적으로 비교되었다. 표 2에 기재된 각각의 miRNA는 시험된 각각의 세포 균주에 대해, 재건된 표피의 케라티노사이트에 비해 미분화된 케라티노사이트에서 통계적으로 더 큰 수준을 가졌다(p < 0.05). 발현비 2D/3D는 각각의 균주에 대해 제공된다. 일례로서, miR-29b는 재건된 표피의 케라티노사이트에서보다 단층 배양된 케라티노사이트에서 평균 6.7배 더 풍부하였다.

재건된 표피(3D)의, 즉 분화된 케라티노사이트에 비해 단층 배양(2D)의, 즉 미분화된 케라티노사이트에서 과발현된 miRNAs

케라티노사이트		2D		3D
miRNA의 명칭		평균 신호	표준편차	평균 신호	표준편차	p_값	2D/3D 비	2D/3D 평균비
hsa-let-7i	PH202	2947	77	1211	111	0.00003	2.4	2.4
	PH64	2573	297	1208	157	0.00002	2.1
	PH63	3125	179	1178	90	0.0000001	2.7
hsa-miR-22	PH202	2668	241	2316	96	0.03	1.2	1.4
	PH64	2497	436	1645	155	0.004	1.5
	PH63	3661	361	2386	155	0.0002	1.5
hsa-miR-221	PH202	5556	792	3184	175	0.0005	1.7	2.0
	PH64	3213	774	1844	117	0.01	1.7
	PH63	5558	360	2321	75	0.000001	2.4
hsa-miR-222	PH202	6069	637	3022	195	0.00002	2.0	2.4
	PH64	3901	303	1867	106	0.000001	2.1
	PH63	7763	505	2580	170	0.00000003	3.0
hsa-miR-29a	PH202	7593	1191	3826	357	0.00023	2.0	3.0
	PH64	9569	1407	2624	550	0.00001	3.6
	PH63	11055	291	3258	272	0.00001	3.4
hsa-miR-29b	PH202	1070	116	192	13	0.0000001	5.6	6.7
	PH64	734	136	96	40	0.0002	7.7
	PH63	947	60	135	18	0.0000007	7.0
hsa-miR-663	PH202	1537	157	564	31	0.000002	2.7	2.0
	PH64	1090	199	691	129	0.008	1.6
	PH63	2053	241	1233	110	0.0001	1.7
hsa-miR-30a	PH202	707	46	404	28	0.000004	1.7	1.9
	PH64	787	104	504	147	0.02	1.6
	PH63	901	89	374	38	0.000003	2.4
hsa-miR-30c	PH202	1667	111	990	77	0.00001	1.7	1.6
	PH64	2260	325	1315	115	0.0004	1.7
	PH63	1619	216	1215	109	0.009	1.3

실시예 3: miRNAs의 검출 방법

노던 블롯팅:

이 통상적 기법은 정성적이고 정량적이다. 이는 하나의 실험 동안 수개의 miRNAs를 분석할 수 있다. 이 방법은 5 내지 50 μg의 총 RNA의 사용을 필요로 한다.

RT Q-PCR

이 방법은 miRNAs의 전구체를 시험할 수 있으며, 성숙 miRNAs를 시험하기 위해 적용되었다. 이는 상업적 방법(Applied Biosystems TaqMan MicroRNA Assays)이며, 수개의 문헌들에 개시되어 있다[23].

miRNA 마이크로어레이(microarray)

통상적인 mRNA에 대한 마이크로어레이와 유사한 이 방법은 샘플의 miRNAs의 상보적 cDNA의 형광 표지법, 및 공지된 miRNA 서열들이 증착된 슬라이드상에 상기 표지된 cDNA의 혼성화에 기초한다[25].

일부 저자들에 따를 때 만일 miRBase로부터 유래된 miRNAs의 신규한 서열들을 규칙적으로 통합시킨다면, 상기 miRNA 마이크로어레이 기법은 miRNAs의 프로파일 전체 발현 프로파일의 분석에 대한 선택 방법이어야 한다.

또한, 본 발명에서와 같은 일부 경우에, miRNAs의 발현 프로파일은 메신저 RNA의 발현 프로파일보다 더 유용한 정보를 준다.

miRNAs의 제자리(in situ) 혼성화

통상적인 결합 방법을 사용할 때 짧은 RNAs는 긴 RNAs보다 더 많이 분산되고 혼성화 및 세척 단계 동안 소실되기 때문에, 이러한 기법은 mRNA의 통상적인 제자리 혼성화보다 더 어렵다. 이러한 문제점을 극복하기 위한 기법들이 개발되었으며; 또한 miRNA 프로브들은 상업적으로 이용가능하다(Exiqon, Denmark)[27].

miRNA 리포터 이식유전자

이 기법에서, GFP 또는 LacZ 리포터 유전자는 miRNA의 상보적 3'UTR 부분을 포함하는 프로모터의 제어를 받았다.

참고문헌

SEQUENCE LISTING <110> L'OREAL <120> EPIDERMAL DIFFERENTIATION MICRORNA SIGNATURE AND USES THEREOF <130> IP20121946FR <150> US 61/239154 <151> 2009-09-02 <150> FR 09/05789 <151> 2009-12-01 <160> 19 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 22 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 1 uaacacuguc ugguaaagau gg 22 <210> 2 <211> 22 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 2 ucagugcacu acagaacuuu gu 22 <210> 3 <211> 24 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 3 uuuggcaaug guagaacuca cacu 24 <210> 4 <211> 21 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 4 caagucacua gugguuccgu u 21 <210> 5 <211> 22 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 5 uucaaguaau ccaggauagg cu 22 <210> 6 <211> 21 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 6 uucaaguaau ucaggauagg u 21 <210> 7 <211> 22 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 7 uuaucagaau cuccaggggu ac 22 <210> 8 <211> 23 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 8 aaugacacga ucacucccgu uga 23 <210> 9 <211> 21 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 9 gcaguccaug ggcauauaca c 21 <210> 10 <211> 22 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 10 uauugcacuc gucccggccu cc 22 <210> 11 <211> 22 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 11 ugagguagua guuugugcug uu 22 <210> 12 <211> 22 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 12 aagcugccag uugaagaacu gu 22 <210> 13 <211> 23 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 13 agcuacauug ucugcugggu uuc 23 <210> 14 <211> 21 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 14 agcuacaucu ggcuacuggg u 21 <210> 15 <211> 22 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 15 uagcaccauc ugaaaucggu ua 22 <210> 16 <211> 23 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 16 uagcaccauu ugaaaucagu guu 23 <210> 17 <211> 22 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 17 aggcggggcg ccgcgggacc gc 22 <210> 18 <211> 22 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 18 uguaaacauc cucgacugga ag 22 <210> 19 <211> 23 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 19 uguaaacauc cuacacucuc agc 23

Claims

하기 단계를 포함하는, 인간 상피의 샘플에서 인간 케라티노사이트의 표피 분화 상태를 측정하는 방법:
- 상기 케라티노사이트 내에서 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 수준을 측정하는 단계, 및
- 상기 선택된 miRNA 또는 miRNAs의 발현 수준을, 배양중의 미분화된 케라티노사이트에서, 또는 분화된 표피의 케라티노사이트에서, 바람직하게는 동일한 균주로부터 기원하거나 동일한 군으로부터 기원한 것에서, 상기 선택된 miRNA 또는 miRNAs의 평균 발현 수준과 비교하는 단계.
제1항에 있어서,
hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 수준이 배양중의 미분화된 케라티노사이트에서 상기 miRNA의 평균 발현 수준보다 통계적으로 더 크다면, 상기 케라티노사이트는 분화된 것으로 여겨지는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서,
hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 수준이 분화된 표피의 케라티노사이트에서 상기 miRNA의 평균 발현 수준보다 통계적으로 더 크다면, 상기 케라티노사이트는 미분화된 것으로 여겨지는 것을 특징으로 하는 방법.
인간 상피의 샘플에 존재하는 표피 분화의 차이를 평가하는 방법으로서, 상기 상피의 케라티노사이트의 2개 층 사이에서 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 수준을 비교하는 단계를 포함하는 방법.
제4항에 있어서,
2개 층 사이의 표피 분화의 차이가, 다른 층에 비해 하나의 층에서 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425 및 hsa-miR-92b로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 1.3배 이상, 바람직하게는 1.5배 이상의 더 큰 발현인 것을 특징으로 하는 방법.
제4항에 있어서,
2개 층 사이의 표피 분화의 차이가, 다른 층에 비해 하나의 층에서 hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 1.3배 이상, 바람직하게는 1.5배 이상의 더 큰 발현인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 샘플이 인간 피부 또는 "재건 피부(reconstructed skin)" 유형의 배양된 상피에서 기원한 것을 특징으로 하는 방법.
상피의 처치 효능을 측정하는 방법으로서, 처치 전과 처치 후에 상기 상피의 케라티노사이트 내에서 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 수준을 비교하는 단계를 포함하는 방법.
제8항에 있어서,
상기 처치가 방사선의 적용 또는 기계적 효과의 적용에 의한 분자의 국소 적용 또는 주사로 이루어진 것을 특징으로 하는 방법.
제8항 또는 제9항에 있어서,
상기 처치가 상피 내에서 적어도 1개, 바람직하게는 적어도 2개 또는 5개의 상기 miRNAs의 발현 수준의 변형을 야기한다면, 상기 처치가 효과적인 것으로 여겨지는 것을 특징으로 하는 방법.
상피 내 표피 분화 과정의 조절인자를 스크리닝하는 방법으로서, 스크리닝 대상인 조절인자의 적용 전 및 적용 후에 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 방법을 사용하여 상기 상피 내 케라티노사이트의 표피 분화 상태를 평가하는 단계를 포함하는 방법.
제11항에 있어서,
상기 조절인자가 천연추출물에서 기원하는 화학물질, 복합물 제형, DNA 분자, miRNA, siRNA, miRNA 억제제, 안타고미르, 또는 방사선, 바람직하게는 가시광선, UV, IR 또는 X 선을 사용하는 기기 시스템인 것을 특징으로 하는 방법.
제11항 또는 제12항에 있어서,
조절인자가 상피 내에서 적어도 2개, 바람직하게는 적어도 5개의 상기 miRNAs의 발현 수준의 변형을 야기한다면, 상기 조절인자가 식별되는 것을 특징으로 하는 방법.
하기 단계를 포함하는, 표피의 상태를 진단하는 방법:
- 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 방법을 사용하여, 기저층과 각질층 사이에서 상기 표피 내에 존재하는 표피 분화의 차이를 측정하는 단계; 및
- 상기 측정된 차이를 기저층과 각질층 사이에서 동일한 유형의 정상적 표피에 존재하는 표피 분화의 평균 차이와 비교하는 단계.
상기 케라티노사이트의 표피 분화 상태를 측정하기 위하여, 인간 상피의 샘플의 케라티노사이트에서 hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현 분석을 사용하는 방법.
건선, 아토피성 피부염, 여드름, 어린선, 네데르톤 증후군, 모공성홍색비강진, 모공성각화증, 다리에증, 수장족저각화증 및 한공각화증과 같은 표피 분화 프로그램과 연관된 피부의 병적이상을 처치하기 위한 치료적 용도의, hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 miRNA, 또는 상기 miRNAs 중 하나의 억제제, 바람직하게는 안타고미르.
비병원성 인간 피부에 대한 화장품 적용을 위하여, hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 miRNA, 또는 상기 miRNAs 중 하나의 miRNA 억제제, 바람직하게는 안타고미르를 사용하는 방법.
비병원성 화장품에서 표피 분화와 연관되는 질환을 치료하는 방법으로서, hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c으로부터 선택된 miRNA, 또는 상기 miRNAs 중 하나의 miRNA 억제제, 바람직하게는 상기 miRNAs 중 하나의 안타고미르를 개인의 피부에 국소 적용하는 단계를 포함하는 방법.
제18항에 있어서,
화장품에서 표피 분화의 상기 질환이 연령, 일사성 피부염, 흉터, 피부건조 또는 건조증, 또는 화학적 저항, 특히 박피제, 박리제 또는 탈지제에 의한 화학적 저항, 또는 기계적 저항을 포함하는 생리학적 상태와 연관되는 것을 특징으로 하는 방법.
hsa-miR-455-3p, hsa-miR-141, hsa-miR-148a, hsa-miR-182, hsa-miR-224, hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-361-5p, hsa-miR-425, hsa-miR-92b, hsa-let-7i, hsa-miR-22, hsa-miR-221, hsa-miR-222, hsa-miR-29a, hsa-miR-29b, hsa-miR-663, hsa-miR-30a 및 hsa-miR-30c로부터 선택된 하나 이상의 miRNA의 발현을 분석하는 수단 및 상기 miRNA 또는 miRNAs의 발현 기준을 제공하는 지시서를 포함하는, 인간 케라티노사이트의 분화 상태 측정용 키트.