JP7083818B2 - プラセンタ抽出物 - Google Patents
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Description
また、プラセンタ由来のエクソソーム、及び該エクソソームに含まれているmiRNAと同様の塩基配列をもつ合成miRNAをヒト線維芽細胞に添加したところ、細胞増殖が促進されたこと、細胞面積が減少したことを確認した。
(i)配列番号1~162のいずれかで示される塩基配列を有するRNA、
(ii)配列番号1~162のいずれかで示される塩基配列と90%以上、好ましくは95%以上の同一性を有するRNA、または
(iii)配列番号1~162のいずれかで示される塩基配列において、1個または2個の塩基の欠失、付加および/または置換を有する塩基配列を有するRNA。ただし、表1~3の各配列で示されるT(チミン)はU(ウラシル)である。なお、一般的に、成熟miRNAの5’末端から2~7番目の塩基から始まる7塩基は、シード配列と呼ばれている。この配列は、ターゲットとなるmRNAの配列と完全に相補的でなければならないが、その他の塩基は必ずしも完全一致しなくともよいことが知られている。したがって、本発明のmiRNAにおいて、配列番号1~162に示す各配列のコアとなる配列が完全に一致すればよく、その5’側または3’側の配列が1または数個の塩基の欠失、付加および/または置換を有してもよい。数個とは、1~10個が含まれ、好ましくは5個以下であり、より好ましくは1~3個である。コアとなる配列(シード配列)はターゲットとなるmRNAを解析することにより特定することができる。
例えば、ヌクレオチド配列における同一性は、相同性計算アルゴリズムNCBI(National Center for Biotechnology Information)のBLAST-2を用い、以下の条件(ギャップオープン=5ペナルティ;ギャップエクステンション=2ペナルティ;x_ドロップオフ=50;期待値=10;フィルタリング=ON)にて2つのヌクレオチド配列をアラインすることにより、計算することができる。
冷凍豚胎盤1kgを、50℃の水8kgを加え、さらにプロテアーゼM(天野エンザイム社製)を加え2時間攪拌を行った後、90℃で1時間加熱してプロテアーゼを失活させた。30℃まで冷却後、ろ過し、豚プラセンタ抽出物を2kg得た。
製造例1で得た豚プラセンタ抽出物2kgを乾燥し、パウダー状の豚プラセンタ抽出物を400g得た。その内、1gの抽出物を64mLの水で溶解し、0.22μmのフィルターで濾過した。濾過液を、2000×gで20分間遠心後、上清を回収した。この上清を、さらに、110,000×gで70分間遠心し、46μgのエクソソームを回収した。さらにエクソソーム10μgをリン酸緩衝液で100倍希釈しナノ粒子/マイクロ粒子マルチアナライザー(qNano、メイワフォーシス社製)を用い、エクソソーム数の確認を行ったところ1.07×1012個/mLであった。
プラセンタ抽出物1gを水1mLで溶解後、0.22μmのフィルターで濾過し、試験サンプルとした。室温にて、カーボン指示膜付銅グリッドメッシュ上に10倍希釈した試料サンプルを滴下し、10秒静置することで、試料を分散した。蒸留水液滴上にカーボン指示膜付銅グリッドメッシュを移動し、更に、室温で30秒静置し、洗浄処理を行った。2%酢酸ウラニル水溶液液滴上にカーボン指示膜付銅グリッドメッシュを移動し、室温で10秒静置することでネガティブ染色を行った。グリッドを乾燥後、透過型電子顕微鏡HITACHI H-7600にて加速電圧100kVにて撮影した。
図1に示した通り、約40nmと約300nm粒径の球状組成物が観察された。
プラセンタ抽出物10mgを水1mLで溶解後、0.22μmのフィルターで濾過し、試験サンプルとした。この試験サンプルを更に100倍希釈し、動的光散乱光度計(ZETASIZER NANO-ZS, Malvern者製)で、粒子の大きさを測定した。
図2に示した通り、粒径が41.14nmと268.2nmのものが多いことを確認した。
製造例2のエクソソームを用い、内包されるmiRNAをexoRNeasy(Qiagen社製)で抽出した。そのmiRNAの配列を次世代シークエンサー(Ion PGMシーケンサ、Thermo Fisher Scientific社製)で解析した。
得られたシークエンスデータをヒトmiRNAデータベースと照合した結果、表1~3に示したmiRNAが含まれていることを確認した。
細胞はTIG-3(ヒト由来繊維芽細胞)(老人研バンクから購入)を用いた。若い細胞として39継代目(以下39PDLと記載)のTIG-3と老化細胞として80継代(以下80PDLと記載)のTIG-3よりmiRNeasy(Qiagen社製)を用い、miRNAを抽出した。それぞれのmiRNAを3D-Gene(TORAY社製)のDNAマイクロアレイ(human miRNA ver12.1)を用いて比較解析を行った。
表1~3に示したエクソソームに含まれているmiRNAの内、若い細胞と比較して、老化細胞において減少しているmiRNAを老化細胞で減少*として示した。80PDLの老化細胞において、27種類のmiRNAの減少が確認できた。細胞が老化すると、これらの27種類(配列番号3、8、10、18、22、29、33、34、37、39、41、51、60、61、66、71、72、75、76、77、105、108、109、138、148、157、159)を含むmiRNA群が減少し、若い細胞の機能に関わる遺伝子の発現制御の能力が低下すると考えられる。
細胞は74継代のTIG-3を用いた。プラセンタ抽出物由来miRNAの内の、表4に示す量が含まれる3つのmiRNAに対応する以下の合成miRNA(いづれもQIAGEN社製)を、それぞれ10nMに希釈し、lipofectamin RNAmaxを用い、細胞にトランスフェクションした。
hsa-miR-125a-5p:5'-UCCCUGAGACCCUUUAACCUGUGA-3'(配列番号163)
hsa-miR-30c-5p:5'-UGUAAACAUCCUACACUCUCAGC-3'(配列番号164)
hsa-miR-26a-5p:5'-UUCAAGUAAUCCAGGAUAGGCU-3'(配列番号165)
細胞数、細胞サイズの比較を表4に示した。hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-30c-5pおよびhsa-miR-26a-5pの添加による細胞数の増加、細胞サイズの低下が確認できた。細胞が老化すると細胞増殖が停止し、細胞の形が扁平肥大化することが知られていることから、これらのmiRNAは抗老化活性を有するものと考えられる。
細胞はTIG3(ヒト由来繊維芽細胞)(老人研バンクから購入)を用いた。TIG3を96穴プレートに播種しDMEM培地で培養し、66継代(以下66PDLと記載)、83継代(以下83PDLと記載)し、66PDL、83PDLの細胞に対し、製造例2で得たエクソソームをPBSで5.15×103 perticle/mL濃度に希釈したエクソソーム溶液を66PDL線維芽細胞に、5.15×104 perticle/mL濃度に希釈したエクソソーム溶液を83PDL線維芽細胞にそれぞれ添加した。
添加は24時間毎に2回行い、添加して48時間後に細胞を固定、Alexa Fluor488 Phalloidin(サーモフィッシャー社製)を用いてアクチン・細胞核を蛍光染色し、染色した細胞の細胞核数と細胞サイズを解析した。
66PDLの蛍光染色後の写真を図3、細胞数を図4、細胞サイズを図5に示し、83PDLの蛍光染色後の写真を図6、細胞数を図7、細胞サイズを図8に示した。図3~図8より、66PDL、83PDL共にエクソソーム添加による細胞数の増加、細胞サイズの低下が確認できた。細胞が老化すると細胞増殖が停止し、細胞の形が扁平肥大化することが知られていることから、エクソソームは抗老化活性を有するものと考えられる。
以下に本発明によって得られたエクソソームおよび豚プラセンタ抽出物の処方例を示すが、本発明はこれらに限定されるわけではない。
1.製造例1で得たプラセンタ抽出物 3.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.003)
2.乳糖 30.0
3.コーンスターチ 58.0
4.結晶セルロース 7.0
5.ポリビニールピロリドン 3.0
1.製造例1で得たプラセンタ抽出物 10.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.01)
2.ヘスペリジン 80.0
3.澱粉 10.0
4.香料 適量
1.還元水飴 40.0
2.グラニュー糖 20.0
3.ブドウ糖 18.0
4.製造例1で得たプラセンタ抽出物 2.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.002)
5.水 10.0
6.ゼラチン 9.0
7.クエン酸 0.9
8.色素 0.1
9.香料 適量
1.ガムベース 20.0
2.砂糖 15.0
3.イソマルトース 20.0
4.パラチノース 10.0
5.キシリトール 10.0
6.コーンシロップ 13.0
7.製造例1で得たプラセンタ抽出物 2.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.002)
8.水飴 10.0
9.香料 適量
1.果糖ブドウ糖液糖 40.0
2.グレープフルーツ果汁 40.0
3.製造例1で得たプラセンタ抽出物 2.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.002)
4.イヨカン果汁 2.0
5.アスコルビン酸ナトリウム 1.0
6.香料 適量
7.精製水 100とする残余
1.市販の野菜ジュース 99.0
2.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
1.コーンスターチ 30.0
2.カルボキシメチルセルロースカルシウム 20.0
3.微結晶セルロース 38.0
4.製造例1で得たプラセンタ抽出物 2.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.002)
5.ポリビニルピロリドン 6.0
6.タルク 3.0
7.アスコルビン酸ナトリウム 1.0
8.香料 適量
1.粉糖 88.0
2.乳糖 2.0
3.クエン酸 2.0
4.ゼラチン1%水溶液 4.0
5.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
6.アスコルビン酸ナトリウム 2.0
7.ショ糖脂肪酸エステル 1.0
8.香料 適量
1.スクワラン 5.0
2.オリーブ油 5.0
3.ホホバ油 5.0
4.セチルアルコール 1.5
5.グリセリンモノステアレート 2.0
6.ポリオキシエチレン(20)セチルエーテル 3.0
7.ポリオキシエチレン(20)ソオルビタンモノオレート 2.0
8.1,3-ブチレングリコール 1.0
9.グリセリン 2.0
10.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
11.防腐剤(パラオキシ安息香酸エステル) 適量
12.香料 適量
13.精製水 100とする残余
1.流動パラフィン 30.0
2.スクワラン 20.0
3.オリーブ油 20.0
4.パルミチン酸イソプロピル 10.0
5.ハマスゲ全草熱水抽出液 3.0
6.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
7.丁字蕾熱水抽出液 1.0
8.グレープフルーツ果実又は葉熱水抽出液 3.0
9.杜仲葉熱水抽出液 3.0
10.オリーブ油 1.0
11.シア脂 1.0
12.ブチルヒドロキシアニソール 0.1
13.ビタミンE誘導体 0.1
14.防腐剤(塩化ベンザルコニウム) 適量
15.香料(バラ水) 適量
16.精製水 100とする残余
1.グリセリン 5.0
2.1,3-ブチレングリコール 5.0
3.モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O)1.0
4.エタノール 15.0
5.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
6.ボダイジュ花又は果実50%1,3-ブチレングリコール抽出液 5.0
7.ユズ果実30%エタノール抽出液 1.0
8.ハコベ全草30%エタノール抽出液 1.0
9.葡萄茎又は葉30%エタノール抽出液 1.0
10.キウイ果実50%エタノール抽出液 1.0
11.白樺樹液 1.0
12.抗菌(ラクトフェリン溶液) 適量
13.防腐剤(パラオキシ安息香酸エステル) 適量
14.香料(西洋薄荷水) 適量
15.精製水 100とする残余
1.ポリビニルアルコール 15.0
2.カルボキシメチルセルロースナトリウム 5.0
3.プロピレングリコール 3.0
4.エタノール 10.0
5.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
6.キイチゴ果実50%ジグリセリン抽出液 1.0
7.丁字蕾50%ジグリセリン抽出液 1.0
8.温州蜜柑果皮50%1,3-ブチレングリコール抽出液 1.0
9.緑茶葉熱水抽出液 1.0
10.桃葉熱水抽出液 2.0
11.豚プラセンタ熱水抽出エキス 1.0
12.防腐剤(パラオキシ安息香酸エステル) 適量
13.香料(バラ水) 適量
14.精製水 100とする残余
1.ポリビニルアルコール 15.0
2.キサンタンガム 0.4
3.ヒドロキシエチルセルロース 0.2
4.カルポキシビニルポリマー 0.2
5.水酸化カリウム 0.025
6.1,3-ブチレングリコール 5.0
7.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
8.ボタン根茎又は根皮60%エタノール抽出液 1.0
9.グリチルリチン酸ジカリウム 0.2
10.防腐剤(パラオキシ安息香酸メチル) 適量
11.香料(バラ水) 適量
12.精製水 100とする残余
1.ミリスチン酸 25.0
2.ステアリン酸 5.0
3.牛脂脂肪酸 5.0
4.プロピレングリコール 10.0
5.水酸化カリウム 6.0
6.ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド 6.0
7.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
8.林檎果実20%1,3-ブチレングリコール抽出液 2.0
9.カワラヨモギ葉20%1,3-ブチレングリコール抽出液 2.0
10.ローズヒップ果実30%エタノール抽出液 1.0
11.葛根熱水抽出液 2.0
12.グリチルリチン酸 1.0
13.杏子核粒 0.1
14.防腐剤(サルチル酸) 0.1
15.香料(当帰水) 適量
16.精製水 100とする残余
1.ラウリン酸カリウム 15.0
2.ミリスチン酸カリウム 5.0
3.プロピレングリコール 5.0
4.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
5.烏龍茶葉70%1,3-ブチレングリコール抽出液 1.0
6.当帰根茎70%2,3-ブチレングリコール抽出液 0.5
7.ワカメ70%1,3-ブチレングリコール抽出液 0.5
8.メリロート花又は葉70%1,3-ブチレングリコール抽出液0.5
9.アロエ果肉70%エタノール抽出液 2.0
10.グリチルリチン酸モノアンモニウム 0.1
11.防腐剤(ウンデシレン酸、フェノール) 適量
12.香料(ラベンダー水) 適量
13.精製水 100とする残余
1.オキシベンゾン 2.0
2.パラメトキシケイ皮酸オクチル 5.0
3.ジヒドロキシメトキシベンゾフェノン 0.2
4.スクワラン 10.0
5.ワセリン 5.0
6.ステアリルアルコール 3.0
7.ステアリン酸 3.0
8.グリセリルモノステアレート 2.0
9.ポリアクリル酸エチル 1.0
10.1,3-ブチレングリコール 6.0
11.エデト酸二ナトリウム 0.1
12.トリエタノールアミン 1.0
13.二酸化チタン 5.0
14.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
15.白樺樹皮70%ジプロピレングリコール抽出液 0.5
16.ヤグルマギク葉50%プロピレングリコール抽出液 0.5
17.葛根50%プロピレングリコール抽出液 0.5
18.柚子果実50%ジプロピレングリコール抽出液 0.5
19.防腐剤(パラオキシ安息香酸ベンジル) 適量
20.香料(ジャスミン水) 適量
21.精製水 100とする残余
1.流動パラフィン 70.0
2.テトラヒドロキシベンゾフェノン 1.0
3.セチルオクタノエート 23.8
4.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
5.ローマカミツレ花10%1,3-ブチレングリコール抽出液 1.0
6.ゴボウ根熱水抽出液 0.5
7.セイヨウトチノキ全草30%1,3-ブチレングリコール抽出液0.5
8.ゼニアオイ花又は葉50%プロピルアルコール抽出液 0.5
9.ハトムギ全草50%1,3-ブチレングリコール抽出液 0.5
10.茴香果実30%ブタノール抽出液 0.5
11.芍薬根又は葉熱水抽出液 0.5
12.パラアミノ安息香酸エチル 0.2
13.酸化防止剤(ブチルヒドロキシトルエン) 適量
14.香料(ヤグルマギク水) 適量
1.エタノール 29.0
2.ポリオキシプロピレンブチルエーテルリン酸 10.0
3.ポリオキシプロピレンモノブチルエーテル 5.0
4.トリエタノールアミン 1.0
5.トリメチレングリコール 5.0
6.製造例1で得たプラセンタ抽出物 1.0
(又は製造例2で得たエクソソーム 0.001)
7.センブリ葉又は茎50%1,2-ブチレングリコール抽出液1.0
8.オタネニンジン根熱水抽出液 1.0
9.レモン果実50%1,3-ブチレングリコール抽出液 0.5
10.リンゴ果実30%エタノール抽出液 1.0
11.白樺樹液 1.0
12.アズレン 1.0
13.抗菌・防腐剤(パラベン、塩化ベンザルコニウム) 適量
14.香料(オレンジ水) 適量
15.精製水 100とする残余
RAW264.7マウスマクロファージ様細胞を用いたトランスウェル移行アッセイにより製造例2で調製したエクソソームの作用を調べた。24ウェルプレートの各ウェルに750μLずつ血清含有培地を添加し、インサートを置いた。RAW264.7細胞を2×106個/mlとなるように無血清培地に懸濁し、これを100μLずつ、上記各ウェルのインサートに播種した。この細胞に各サンプルを添加し、37℃、5%CO2存在下で培養した。24時間後に各サンプルを再度添加し、さらに37℃、5%CO2存在下で培養した。最初のサンプルを添加してから48時間経過後に、細胞をギムザ染色し、インサートの下に遊走した細胞数を測定・解析した。細胞数の解析は、1枚のインサートにつき5視野の写真を撮影し、その合計数を遊走細胞数とした。サンプルは二重測定(n=2)した。
創傷治癒アッセイにより製造例2で調製したエクソソームのマクロファージの遊走能を調べた。6ウェルプレートの各ウェルに、翌日にはコンフルエントになるようにRAW264.7マウスマクロファージ様細胞を播種した。37℃、5%CO2存在下で24時間培養した後、100%コンフルエントになった細胞表面にイエローチップを用いてスクラッチ(引っ掻き傷)を引き、PBSで洗浄後、各サンプルを含む新しい培養液に交換した。37℃、5%CO2環境下で培養し、0および24時間後の写真を撮影してスクラッチ部分の幅を測定・解析した。撮影した写真からスクラッチした傷の幅を測定し、24時間でどの程度修復されたかの割合を算出した。以下の式に基づき、4回の実験における平均値と標準偏差を算出した。修復割合(%)=100-[(24時間後の傷の幅;μm)/(0時間の傷の幅;μm)×100]
Claims (1)
- エクソソームを含む、細胞の老化を抑制するための組成物であって、
当該エクソソームは、
(i)配列番号163~165のいずれかで示される塩基配列の核酸分子、
(ii)(i)の塩基配列と90%以上の同一性を有する核酸分子、または
(iii)(i)の塩基配列において、1個または2個の塩基の欠失、付加および/または置換を有する塩基配列の核酸分子、からなる群より選択される少なくとも1種の核酸分子を含有し、哺乳類のプラセンタからの抽出物であるエクソソームである、
当該組成物。
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002212046A (ja) | 2001-01-17 | 2002-07-31 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | 化粧料組成物 |
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---|---|---|---|---|
JP2001039879A (ja) * | 1999-07-30 | 2001-02-13 | Koji Murata | 胎盤エキスの精製により成る抗アレルギー剤及びその製造方法 |
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---|---|---|---|---|
JP2002212046A (ja) | 2001-01-17 | 2002-07-31 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | 化粧料組成物 |
JP2013188212A (ja) | 2007-07-25 | 2013-09-26 | Univ Of Louisville Research Foundation Inc | 診断マーカーとしてのエキソソーム関連マイクロrna |
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