KR20120038333A - 양극성 장애 진단용 ｅｇｒ2 유전자 ｓｎｐ, 그를 포함하는 마이크로어레이 및 키트 - Google Patents

Abstract

본 발명은 SNP를 포함하는 양극성 장애 진단용 폴리뉴클레오타이드와 이를 이용한 마이크로어레이 및 키트에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 SNP를 이용한 양극성 장애 진단방법에 관한 것이다. 본 발명의 SNP를 이용한 진단방법은 양극성 장애의 발병 및 그 확률을 조기에 진단하여 양극성 장애 치료에 필요한 최적의 치료를 제공할 수 있으며, 유전자 지문 분석과 같은 양극성 장애와 관련된 용도로 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 양극성 장애와 관련된 SNP를 분석하면 양극성 장애의 위험도에 대한 기초적 정보를 제공할 수 있다.

Description

양극성 장애 진단용 ＥＧＲ2 유전자 ＳＮＰ, 그를 포함하는 마이크로어레이 및 키트{Novel EGR2 SNPs Related to Bipolar Disorder, Microarrays and Kits Comprising them for Diagnosing Bipolar Disorder}

본 발명은 양극성 장애 진단용 SNP와 이를 포함하는 마이크로어레이 및 키트에 관한 것이다.

양극성 장애 (Bipolar disorder)는 평생 유병률이 2~5%에 달하며, 흔히 사춘기 후반이나 성인기 초기에 발병해 일생에 걸쳐 영향을 미치는 주요정신질환이다. 기분의 상승과 하강을 반복적으로 보이는 대표적 기분장애로 조증 삽화, 우울증 삽화, 혼재성 삽화 등의 반복적 재발과 만성화가 특징적이다.

양극성 장애 환자의 가계연구에서 일반인구집단과 비교시 양극성 장애는 4배, 우울증은 2배의 유병률을 가진다고 알려져 있다. 양극성 장애의 쌍생아 연구에서는 일란성 쌍둥이에서 65-100% 진단이 일치하고 이란성 쌍둥이에서는 10-30%가 일치하였다. 여러 역학연구를 종합해 양극성 장애는 60-80%의 유전율(heritability)을 가지는, 유전율 높은 질환으로 알려져 있다. 양극성 장애를 대상으로 많은 유전연구가 이뤄져 왔으나 다양한 염색체 부위에서 의미 있는 연관을 보였고 제시된 여러 후보 유전자 역시 일관되지 않은 결과를 보였다.

EGR2(Early Growth Response 2) 유전자는 EGR 1 ,2, 3, 4로 구성되는 EGR 유전자 군의 하나로써, EGR 유전자가 코딩하는 EGR 단백질은 조기 발현 유전자 (immediate early gene)군의 하나이다. EGR 전사 인자는 뇌내 전두엽, 해마, 선조체 등을 포함한 광범위한 영역에서 높은 수준으로 발현되며, 스트레스, 새로운 환경, 항정신병약물 및 전기경련충격을 포함한 다양한 신경정신계통 자극 처치에 의해서 빠르게 발현이 유도되어 장기적 뇌내 신경계 변화 유발의 기초 변화의 하나로써 시사된다. 특히 EGR 전사인자는 다양한 전사인자, 세포골격 단백질, 인산화-탈인산화 효소, 유비퀴틴 관련 단백질 붕괴 프로테아좀 관련 단백질들의 전사에 직접 관여하여 신경계 활성 및 구조 조절에 있어서 주요한 역할을 한다.

EGR2는 특히 말초신경의 수초화 및 후뇌의 발달에 중요 역할을 한다. 신경세포의 수초화는 신경세포를 통한 정보 전달의 필수적 과정인 동시에, 양극성장애 뇌 연구를 통해 신경세포의 수초화 이상의 가능성이 시사되었다. EGR 유전자에 의해 전사/번역되는 EGR 단백질은 구조적으로 유사한 DNA 내 결합 지점을 지니지만, 그 기능에 있어서는 차별적인 양상을 보인다. 예를 들어, EGR3 유전자를 제거한 마우스는 장단기기억 형성의 이상, 공격적 행동의 증가 등을 보이며, 정신분열병 유사 행동 변화를 보이는 것으로 보고되었다. 그에 반하여 EGR2를 뇌내에서 제거한 마우스의 경우는 공간 학습, 기억 형성 등의 인지기능이 오히려 향상 되는 양상을 보였다. 즉, EGR3와 EGR2는 뇌내 기능에 있어서 상반되는 역할을 하는 것으로 시사되었다. 최근 일본 연구진에 의해서 EGR3와 정신분열병의 유전적 연합이 보고되었으며, 본 연구진 역시 한국 정신분열병 환자에서 EGR3와의 유전적 연합을 확인하여 보고하였다. 그러나 정신분열병에서 EGR2 유전자는 유전적 연합을 보이지 않았다.

EGR2 유전자는 사람 염색체 상에서 10q21.3에 위치한다. 본 염색체 위치는 다양한 이전 연구들을 통해 양극성 장애 관련 염색체 위치로써 알려져 왔다. 최근 본 염색체좌에 위치한 ANK3 유전자와 양극성장애의 관련성에 대해서 알려졌으나, 본 위치에서의 다른 유전자와의 관련성 연구는 부족한 현실이다. EGR2의 염색체 위치와 전술된 신경생물학적 기능은 양극성장애와의 관련 가능성을 시사하는 바이다. 그러나 아직 EGR2와 양극성장애의 유전적 연합에 대해서 연구된 바는 전무하다.

본 발명자들은 양극성 장애의 발병 및 그 확률을 유전자 차원에서 검출할 수 있는 방법을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 양극성 장애를 수반하는 피검체에서 특이적으로 높은 빈도로 나타나는 SNP들을 발굴하였고, 이들 SNP들이 양극성 장애의 존재 또는 위험의 유무를 매우 높은 정확도로 판별할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 SNP를 포함하는 양극성 장애 진단용 폴리뉴클레오타이드와 이를 이용한 마이크로어레이 및 키트를 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 SNP를 이용한 양극성 장애 진단방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 EGR2 유전자의 일부를 구성하는 서열목록 제 1 서열, 제 2 서열, 제 3 서열 또는 제 4 서열의 폴리뉴클레오타이드에 있어서, 각 11번째 위치하는 단일뉴클레오타이드 다형성(single nucleotide polymorphism: SNP)을 포함하는 10개 이상의 연속 염기로 구성되는 양극성 장애 진단용 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 EGR2 유전자의 일부를 구성하는 서열목록 제 1 서열, 제 2 서열, 제 3 서열 및 제 4 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 둘 이상의 폴리뉴클레오타이드에 있어서, 각 11번째 위치하는 SNP를 포함하는 10개 이상의 연속 염기 세트로 구성되는 양극성 장애 진단용 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.

본 발명자들은 EGR2 유전자의 신경계 발달 과정, 신경세포의 수초화 등에서의 주요 역할, 다양한 정신 계통 치료제에 의한 발현 변화, 다른 EGR 유전자 군과는 차별되는 특이적 인지기능에 대한 영향, EGR2 유전자의 염색체 내 위치 등에 기반하여 EGR2와 양극성장애의 유전 연합 연구를 수행하였다. 그 결과, 양극성 장애를 수반하는 피검체에서 특이적으로 높은 빈도로 나타나는 SNP들을 발굴하였고, 이들 SNP들이 양극성 장애의 존재 또는 위험의 유무를 매우 높은 정확도로 판별할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 SNP를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드를 이용할 경우 손쉬운 검사를 통하여 상기의 양극성 장애 및 관련 질환의 발병 여부 또는 발병 가능성을 용이하게 진단 또는 예측할 수 있으며, 이에 필요한 최적의 치료를 제공할 수 있다.

본 명세서에서 용어 “핵산”은 DNA(gDNA 및 cDNA) 그리고 RNA 분자를 포괄적으로 포함하는 의미를 갖으며, 핵산 분자에서 기본 구성 단위인 뉴클레오타이드는 자연의 뉴클레오타이드뿐만 아니라, 당 또는 염기 부위가 변형된 유사체(analogue)도 포함한다(Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York(1980); Uhlman 및 Peyman, Chemical Reviews, 90:543-584(1990)).

상기 SNP들은 EGR2 유전자 내에 위치하는 것으로, 본 발명자들은 상기 SNP들이 양극성 장애와 연관성이 높은 것을 입증하였다.

본 발명은 양극성 장애에 관련된 EGR2 유전자(서열목록 제 5 서열) 내의 SNP에 관한 것으로, SNP rs2297489(서열목록 제 1 서열) 및 rs2297488(서열목록 제 2 서열)은 EGR2 유전자의 인트론에 위치하며, SNP rs61865882(서열목록 제 3 서열)는 EGR2 유전자의 3' UTR(untranslated region)에 위치하며, SNP rs2295814(서열목록 제 4 서열)는 EGR2 유전자의 3' UTR(untranslated region) 주변부에 위치한다.

상기 SNP의 명명은 NCBI(the National Center for Biotechnology Information)에 의해 각각의 고유한 SNP에 부여된 공식적인 참조 SNP(Reference SNP; rs) ID 식별번호를 의미한다. 당업자라면 상기 식별번호를 이용하여 SNP의 위치 및 서열을 용이하게 확인할 수 있을 것이다. NCBI에 등록되어 있는 SNP의 rs번호에 해당하는 구체적인 서열은 시간이 지남에 따라 약간 변경될 수 있으며, 본 발명의 범위가 상기 변경된 서열에도 미치는 것은 당업자에게 자명하다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명은 EGR2 유전자의 일부를 구성하는 서열목록 제 1 서열의 rs2297489 폴리뉴클레오타이드에 있어서, 11번째 위치하는 SNP(서열목록 제 5 서열의 EGR2 전체 유전자에서 8568번째 염기)를 포함하는 10개 이상의 연속 염기로 구성되는 양극성 장애 진단용 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드, EGR2 유전자의 일부를 구성하는 서열목록 제 2 서열의 rs2297488 폴리뉴클레오티드에 있어서, 11번째 위치하는 SNP(서열목록 제 5 서열의 EGR2 전체 유전자에서 8683번째 염기)를 포함하는 10개 이상의 연속 염기로 구성되는 양극성 장애 진단용 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드, EGR2 유전자의 일부를 구성하는 서열목록 제 3서열의 rs61865882 폴리뉴클레오티드에 있어서, 11번째 위치하는 SNP(서열목록 제 5 서열의 EGR2 전체 유전자에서 11835번째 염기)를 포함하는 10개 이상의 연속 염기로 구성되는 양극성 장애 진단용 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드, 또는 EGR2 유전자의 일부를 구성하는 서열목록 제 4 서열의 rs2295814 폴리뉴클레오티드에 있어서, 11번째 위치하는 SNP(서열목록 제 5 서열의 EGR2 전체 유전자에서 12651번째 염기)를 포함하는 10개 이상의 연속 염기로 구성되는 양극성 장애 진단용 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 SNP는 유전체의 한 염기서열이 집단 내에서 일정한 비율로 다양성을 나타내는 것을 말한다. 상기 서열목록 제 1 서열, 제 2 서열, 제 3 서열 및 제 4 서열은 각 SNP 부위의 염기서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드이며, 다형성 서열이다. 다형성 서열(polymorphic sequence)이란 폴리뉴클레오타이드 서열 중에 SNP를 나타내는 다형성 부위(polymorphic site)를 포함하는 서열을 말한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 서열목록 제 1 서열의 SNP는 C 또는 G, 제 2 서열의 SNP는 A 또는 G, 제 3 서열의 SNP는 C 또는 T, 및 제 4 서열의 SNP는 A 또는 G이다.

상기 SNP의 대립유전자는 정상대조군과 비교 시 양극성 장애 환자와 유의한 연관성을 보이며, 양극성 장애의 위험대립인자로 작용한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 서열목록 제 1 서열의 SNP는 G, 제 2 서열의 SNP는 A, 제 3 서열의 SNP는 C, 및 제 4 서열의 SNP는 A이다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 서열목록 제 1 서열의 SNP는 C, 제 2 서열의 SNP는 G, 제 3 서열의 SNP는 T, 및 제 4 서열의 SNP는 G이다.

본 발명은 상기 서열목록 제 1 서열 내지 제 4 서열에서 각 SNP 위치의 염기 변이체에 관한 것이나, 이러한 SNP 염기 변이가 이중가닥의 gDNA에서 발견되는 경우, 상기한 뉴클레오타이드 서열에 대하여 상보적인 폴리뉴클레오타이드 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 따라서 상보적인 폴리뉴클레오타이드 서열에서 SNP 위치의 염기도 상보적인 염기가 된다.

본 발명에 있어서, 상기 핵산은 피검체(예를 들어, 인간)의 다양한 소스로부터 얻을 수 있으며, 예컨대, 근육, 표피, 혈액, 뼈, 장기로부터 얻을 수 있고, 가장 바람직하게는 근육 또는 혈액으로부터 얻는다.

본 발명에서 출발물질이 gDNA인 경우, gDNA의 분리는 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라 실시될 수 있으며, 혈액의 경우, 예를 들어, G-DEX™ IIb Genomic DNA Extraction Kit 또는 QIAamp DNA Blood Maxi Kit를 이용하여 gDNA를 분리할 수 있다. 출발물질이 mRNA인 경우에는, 당업계에 공지된 통상의 방법에 총 RNA를 분리하여 실시된다(참조: Sambrook, J. et al., Molecular Cloning. A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Press(2001); Ausubel, F.M. et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Willey & Sons(1987); 및 Chomczynski, P. et al., Anal. Biochem. 162:156(1987)). 분리된 총 RNA는 역전사효소를 이용하여 cDNA로 합성된다. 상기 총 RNA는 진핵생물부터 분리된 것이기 때문에, mRNA의 말단에는 폴리-A 테일을 갖고 있으며, 이러한 서열 특성을 이용한 올리고 dT 프라이머 및 역전사 효소를 이용하여 cDNA을 용이하게 합성할 수 있다(참조: PNAS USA, 85:8998(1988); Libert F, et al., Science, 244:569(1989); 및 Sambrook, J. et al., Molecular Cloning. A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Press(2001)).

본 발명에 있어서, 단일뉴클레오타이드다형성(SNP)의 지노타이핑(genotyping) 방법은 매우 다양하며 당업계에 공지된 다양한 방법을 응용하여 실시될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 응용될 수 있는 기술은, TaqMan 법, 아피메트릭스 SNP 칩(Affymetrix SNP chip)을 이용한 방법, PCR-RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)법, PCR-SSCP(Single Strand Conformation Polymorphism)법, PCR-SSO(Specification Sequence Oligonucleotide)법, 도트혼성화법, PCR-SSO와 도트혼성화법을 조합한 ASO(Allele Specific Oligonucleotide) 혼성화법, 파이로시퀀싱(Pyrosequencing)법, Invader 법, SNaPShot 법, MassArray 법, 동적 대립유전자 특이성 혼성화(Dynamic Allele-Specific Hybridization, DASH) 법, 마이크로플레이트 어레이 대각 겔 전기영동(Microplate Array Diagonal Gel Electrophoresis, MADG) 법, GoldenGate 분석법, SNPlex 법 및 BeadArray 법을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

TaqMan 방법은 Tap 폴리머라아제의 5'-뉴클레아제 성질을 이용하는 방법으로, 반응에는 한 쌍의 TaqMan 프로브와 한 쌍의 PCR 프리이머가 사용된다. 5'-말단에는 리포터 염료(reporter dye)가, 3'-말단에는 흡광 염료(quencher dye)가 공유결합 되어있는 TaqMan 프로브를 이용하며, 다형성 부위(polymorphic site)와 TaqMan 프로브간의 매치(match) 및 미스매치(mismatch)의 차이를 형광물질을 이용하여 감별하는 방법이다. TaqMan 프로브에 리포터 염료 및 흡광 염료가 모두 결합되어 있을 때는 리포터 염료가 흡광 염료에 의해 빛을 발하지 못한다. 그러나 SNP이 위치한 부위와 상보적으로 완전히 일치하는 TaqMan 프로브는 PCR의 어닐링(annealing) 단계에서 결합되고, 신장(extension) 단계에서 Taq 중합효소의 5'-뉴클레아제 활성도에 의하여 5'-말단부의 리포터 염료(FAM 또는 VIC)가 흡광 염료로부터 분리되어 고유한 형광을 나타낸다. 프로브가 표적(target) SNP와 미스매치되면 프로브가 주형으로부터 떨어져 나가기 때문에 더 이상의 반응이 진행되지 않는다. 이 방법은 SNP 이외에도 아주 작은 염기서열의 삽입(insertion)이나 결실 (deletion)도 분석할 수 있다.

미국 Illumina사의 GoldenGate 지노타이핑 분석법은 genomic DNA를 주형으로 사용하여 프라이머 신장과 증폭 단계를 통하여 많은 수의 멀티플렉싱(multiplexing, 1,536-plex)이 가능한 SNP 지노타이핑 방법이다. SNP 지노타이핑을 위해 주형 DNA는 비오틴(biotin)으로 표지하여 잉여의 혼성화 용액(hybridization solution)과 SP-PMPs(streptavidin conjugated paramagnetic particles)로부터 정제된다. 정제된 DNA 주형에 세 가지의 올리고뉴클레오타이드 (oligos)가 첨가되는데 두 가지의 oligo는 SNP 부위의 각각의 대립유전자형에 특이적인 ASOs(Allele-Specific oligos)이고 다른 하나의 oligo는 SNP 부위의 몇 base pair downstream에 혼성화되는 LSO(Locus-Specific Oligo)이다. oligo 혼성화 후에 혼성화 되지 않은 oligos는 제거되며, 대립유전자-특이 신장(allele-specific extension) 후 라이게이션 반응이 수행된다. 라이게이션된 산물을 형광물질로 표지된 universal PCR 프라이머 P1(Cy3), P2(Cy5)와 P3로 PCR 증폭시킨 후에 단일가닥(single-strand)으로 만든다. 단일가닥의 염색 표지된 DNA는 unique address 시퀀스를 통해 상보적인 베드타입(bead type, Array Matrix 또는 BeadChip)에 혼성화되고 형광물질의 시그널을 읽어 자동으로 지노타입을 결정하게 된다. GoldenGate 분석은 1,500여개까지의 SNP을 동시에 지노타이핑할 수 있는 멀티플렉싱 분석이 가능하고 정확하게 타이핑은 가능하지만, 모든 SNP 부위에 대하여 분석이 가능한 것은 아니다.

Affymetrix GeneChip 분석법은 수십만 개의 SNP을 칩-기반으로 하여 동시에 지노타이핑할 수 있는 방법으로 최근 Affimetrix사에서 개발한 것이다. 이 분석방법의 구체적인 일 실시예에 따르면, genomic DNA는 제한효소(StyI 및 NspI)로 우선 절단되고 생성된 모든 단편은 크기에 관계없이 4 bp 돌출부(overhang)를 인지하는 어댑터(adaptor)에 결합하게 된다. 어댑터가 붙여진 DNA 단편을 어댑터의 염기서열을 인지하는 프라이머로 증폭되며, PCR 증폭조건은 200-2,000 bp 크기의 단편을 선택적으로 증폭시키기 위해 최적화되어 있다. 증폭된 DNA는 이후에 조각(fragmentation)으로 잘려진 후에 표지(labeling)되어 GeneChip 어레이에 혼성화된다. 어레이에는 A 대립유전자 염기서열과 B 대립유전자 염기서열에 완전 매치(perfect match)로 대응되는 25-mer 프로브가 합성되어 있으며 결합의 특이성을 결정하기 위하여 각각의 25-mer 중앙에 위치하는 단일 염기쌍 미스매치(single base pair mismatch)도 포함되어 있어 지노타이핑의 정확성을 점검하는데 사용되고 있다. 최근에는 복합형질 질환의 연관성 연구에 Affymetrix사의 500K SNP 칩(약 50만 개 이상의 SNP 분석 가능)을 이용하여 광범위 유전자 SNP 지노타이핑(genome-wide SNP genotyping)을 수행하여 두 군 간의 유전체 상의 유전적 변이 양상을 찾아낼 수 있다. Affymetrix GeneChip 분석은 자동화되어 수행하기 간편하고 대량의 멀티플렉싱 능력을 보유하고 있기 때문에 광범위 유전자 SNP 지노타이핑이 가능한 장점이 있으나 SNP 칩에 올려진 SNP 부위가 제한효소에 의해 특정 부위의 SNP 부위만이 선별되어 있고 연구자가 개별적인 필요성에 의해 자체 제작하기는 매우 어려운 단점을 가지고 있다. 최근에는 광범위 유전자 SNP 지노타이핑 칩을 이용하여 유전체의 증폭(amplification) 또는 결실(deletion)에 의한 유전자의 복제수 변이(copy number variation) 및 이형접합체의 분포 상황(예; LOH) 등을 조사할 수 있게 되었다. 이러한 추가적인 분석기능은 특히 유전체 상에서 많은 변화를 유발하는 암 세포의 유전적 변화에 대한 특성규명에 유용하게 활용되고 있다.

지노타이핑이 끝나면, 연관 분석(association analysis)을 수행한다. 본 발명에 있어서, SNP를 연관 분석하는 방법은 매우 다양하며 당업계에 공지된 다양한 방법을 응용하여 실시될 수 있다. 예를 들어, SNP 칩을 이용하여 인간유전체에 널리 퍼져 있는 대량의 SNP을 조사하는 이른바 광범위-유전자 연관 분석(genome-wide association study, GWAS) 방법을 이용할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 방법의 경우 발생될 수 있는 임의적인 오류(random error)를 방지하게 위하여 "다단계 접근방법(multi-stage approach method)"을 활용할 수 있다.

예를 들어, 광범위 유전자 연관분석(GWAS)을 이용하여 본 발명의 SNP들을 선별하는 경우, 양극성 장애와 연관된 유의한 SNP들을 선별 및 복제하고, 다단계 접근방법에 의하여 더욱 유의한 SNP를 선별할 수 있다.

본 명세서에서, 용어 "프로브"는 특정 뉴클레오타이드 서열에 혼성화될 수 있는 디옥시리보뉴클레오타이드 및 리보뉴클레오타이드를 포함하는 자연 또는 변형되는 모노머 또는 결합을 갖는 선형의 올리고머를 의미한다. 바람직하게는, 프로브는 혼성화에서의 최대 효율을 위하여 단일가닥이다. 프로브는 바람직하게는 디옥시리보뉴클레오타이드이다.

본 발명에 이용되는 프로브로서, 상기 SNP를 포함하는 서열에 완전하게(perfectly) 상보적인 서열이 이용될 수 있으나, 특이적 혼성화를 방해하지 않는 범위 내에서 실질적으로(substantially) 상보적인 서열이 이용될 수도 있다. 바람직하게는, 본 발명에 이용되는 프로브는 서열목록 제 1 서열 내지 제 4 서열의 SNP를 포함하는 10 개 이상의 연속 뉴클레오타이드를 포함하는 서열에 혼성화될 수 있는 서열을 포함한다. 보다 바람직하게는, 상기 프로브의 3'-말단 또는 5'-말단은 상기 SNP 염기에 상보적인 염기를 갖는다. 일반적으로, 혼성화에 의해 형성되는 듀플렉스(duplex)의 안정성은 말단의 서열의 일치에 의해 결정되는 경향이 있기 때문에, 3'-말단 또는 5'-말단에 SNP 염기에 상보적인 염기를 갖는 프로브에서 말단 부분이 혼성화되지 않으면, 이러한 듀플렉스는 엄격한 조건에서 해체될 수 있다. 혼성화에 적합한 조건은 Joseph Sambrook, et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(2001) 및 Haymes, B. D., et al., Nucleic Acid Hybridization, A Practical Approach , IRL Press, Washington, D.C. (1985)에 개시된 사항을 참조하여 결정할 수 있다. 혼성화에 이용되는 엄격한 조건(stringent condition)은 온도, 이온세기(완충액 농도) 및 유기 용매와 같은 화합물의 존재 등을 조절하여 결정될 수 있다. 이러한 엄격한 조건은 혼성화되는 서열에 의존하여 다르게 결정될 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 이러한 유전자 증폭은 서열목록 제 1 서열 내지 제 4 서열의 SNP를 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 증폭할 수 있도록 제작된 프라이머쌍(primer pair)을 기본적으로 이용한다.

본 발명의 명세서에서 “프라이머(primer)”는 단일가닥의 올리고뉴클레오타이드로서, 적합한 조건(4 가지의 상이한 뉴클레오사이드 트리포스페이트 및 DNA 또는 RNA 폴리머라아제와 같은 중합효소의 존재), 적합한 온도 및 적합한 버퍼하에서 주형-지시적 DNA 합성을 개시할 수 있는 개시점으로서 작용하는 것을 의미한다.

프라이머의 적합한 길이는 사용하고자하는 프라이머의 특성에 의해 결정하지만, 통상적으로 15 내지 30 bp의 길이로서 사용한다. 프라이머는 주형의 서열과 정확하게 상보적일 필요는 없지만 주형과 혼성복합체(hybrid-complex)를 형성할 수 있을 정도로 상보적이어야만 한다.

본 발명의 방법에 이용될 수 있는 증폭 기술은 PCR 증폭(참조: Miller, H. I. (WO 89/06700) 및 Davey, C. et al.(EP 329,822)), 리가아제 체인 반응(LCR, Wu, D.Y. et al., Genomics 4:560 (1989)), 중합효소 리가아제 체인 반응(Barany, PCR Methods and Applic., 1:5-16(1991)), Gap-LCR (WO 90/01069), 리페어 체인 반응(EP 439,182), 3SR(Kwoh et al., PNAS, USA, 86:1173(1989)) 및 NASBA(U.S. Pat. No. 5,130,238)을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 가장 바람직하게는 PCR 증폭 단계에 따라 증폭한다.

증폭기술이 적용되는 경우에, 본 발명의 SNP 염기를 확인하기 위해 적합한 프라이머를 디자인하는 것이 중요하다.

PCR에 의한 증폭 반응의 조건 및 사용되는 시약과 효소는 당업계에서 통상적으로 공지된 것을 사용할 수 있다.

본 발명의 SNP를 포함하는 폴리뉴클레오타이드는, 바람직하게는 10개 이상의 연속 염기로 구성되는 것이며, 보다 바람직하게는 10 내지 100개의 연속 염기, 보다 더 바람직하게는 20 내지 70개의 연속 염기, 가장 바람직하게는 서열목록 제 1 서열 내지 제 4 서열로 구성되는 것이다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드는 서열목록 제 1 서열 내지 제 4 서열로 이루어진 군에서 선택되는 일배체형(haplotype)을 포함한다.

본 명세서에서 용어, “일배체형(haplotype)”은 생식세포의 감수분열시 하나의 염색체에 위치하는 일련의 SNP들은 함께 유전되는 연관성에 따라 여러 묶음으로 나눌 수 있는데, 이 때 각각의 묶음을 일배체형이라 하며, 이러한 일배체형은 동일 염색체상에 존재하는 여러 SNP의 조합으로서 일정한 SNP의 패턴을 보이게 된다.

본 발명의 일배체형은 각각의 11번째 위치에 SNP를 포함하는 서열목록 제 1 서열 내지 제 4 서열로 이루어진 폴리뉴클레오타이드 군에서 선택되는 둘 이상의 폴리뉴클레오타이드의 SNP들의 조합으로 구성되며, 바람직하게는 서열목록 제 1 서열 내지 제 4 서열을 모두 포함한다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 일배체형은 서열목록 제 1 서열(rs2297489), 제 2 서열(rs2297488), 제 3 서열(rs61865882) 및 제 4 서열(rs2295814)의 SNP들로 구성되며, 상기 SNP들이 G-A-C-A 염기로 구성된 일배체형의 경우 양극성 장애 환자에서 유의하게 증가하며, 이에 상보적인 일배체형인 C-G-T-G의 경우 양극성 환자에서 유의하게 감소하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 SNP를 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 그에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드 또는 그의 cDNA를 포함하는 양극성 장애 진단용 마이크로어레이를 제공한다.

본 발명에 따른 마이크로어레이는 본 발명에 따른 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드를 프로브 또는 그들과 혼성화하는 폴리뉴클레오티드, 그에 의해 인코딩되는 폴리펩티드 또는 그의 cDNA를 이용하여 당업계에 알려져 있는 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다. 예컨대, 상기 폴리뉴클레오타이드는 아미노-실란(amino-silane), 폴리-L-라이신(poly-L-lysine) 및 알데히드(aldehyde)로 이루어진 군에서 선택되는 활성기가 코팅된 기판상에 고정될 수 있다. 또한, 상기 기판은 실리콘 웨이퍼, 유리, 석영, 금속 및 플라스틱으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 상기 폴리뉴클레오타이드를 기판에 고정화시키는 방법으로는 파이조 일렉트릭(piezoelectric) 방식을 이용한 마이크로피펫팅(micropipetting) 법, 핀(pin) 형태의 스폿터(spotter)를 이용한 방법 등을 사용할 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 마이크로어레이를 포함하는 양극성 장애 진단용 키트를 제공한다.

본 발명의 키트는 본 발명의 마이크로어레이 이외에 피검체로부터 해당 SNP를 포함하는 DNA를 분리 및 증폭하는데 사용되는 프라이머 세트를 추가로 포함할 수 있다. 상기 프라이머 세트는 당업자라면 본 발명의 서열을 참조하여 용이하게 설계할 수 있다. 또한, 본 발명의 키트는 중합반응에 필요한 시약, 예컨대 dNTP, 각종의 중합효소, 발색제 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 양극성 장애의 진단방법을 제공한다:

(a) 피검체로부터 EGR2 유전자의 일부를 포함하는 핵산 시료를 분리하는 단계; 및

(b) 상기 핵산 시료로부터 서열목록 제 1 서열, 제 2 서열, 제 3 서열 및 제 4 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드의 각 11번째 염기인 SNP 서열을 결정하는 단계.

본 발명의 방법은 상기 SNP를 포함하기 때문에, 이 둘 사이에 공통된 내용은 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.

본 발명에 따른 진단 방법은 서열목록 제 1 서열의 SNP는 G, 제 2 서열의 SNP는 A, 제 3 서열의 SNP는 C, 및 제 4 서열의 SNP는 A인 경우가 정상 상태보다 증가된 경우 양극성 장애로 진단하는 단계; 또는 서열목록 제 1 서열의 SNP는 C, 제 2 서열의 SNP는G, 제 3 서열의 SNP는 T, 및 제 4 서열의 SNP는 G인 경우가 정상 상태보다 감소된 경우 양극성 장애로 진단하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(ⅰ) 본 발명은 SNP를 포함하는 양극성 장애 진단용 폴리뉴클레오타이드 및 이를 이용한 키트를 제공한다.

(ⅱ) 또한, 본 발명은 SNP를 이용한 양극성 장애 진단방법을 제공한다.

(ⅲ) 본 발명의 SNP를 이용한 진단방법은 양극성 장애의 발병 및 그 확률을 조기에 진단하여 양극성 장애 치료에 필요한 최적의 치료를 제공할 수 있으며, 유전자 지문 분석과 같은 양극성 장애와 관련된 용도로 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 양극성 장애와 관련된 SNP를 분석하면 양극성 장애의 위험도에 대한 기초적 정보를 제공할 수 있다.

도 1은 EGR 2 유전자와 양극성 장애의 상관관계를 보여주는 도면이다. 정신분열병과 비교하여 양극성 장애에서 유의성 있는 결과를 나타낸다.
도 2는 EGR 2 유전자 일배체형 분석 결과를 나타낸 도면이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

실시예 1. 본 발명에 따른 SNPs의 양극성 장애와의 관련성

(1) 실험대상

한국인 중 양극성 장애 또는 정신분열증 환자로 판명되어 치료 중인 환자군과 양극성 장애 및 정신분열증 증상이 없는 정상인의 혈액으로부터 DNA를 분리하고, 특정 SNP의 출현 빈도를 분석하였다.

350명의 양극성 장애 환자, 244명의 정신분열증 환자 및 350명의 건강한 대조군을 대상으로 실험을 수행하였다. 모든 사람들은 서로 관련이 없는 한국인들이며, 모든 환자들은 양극성 장애 또는 정신분열증에 대한 DSM-IV 기준을 충족하였다. 모든 환자들에 대해 유전연구를 위한 진단 인터뷰(Diagnostic Interview for Genetic Studies)를 실시하였고, 진단은 3명 이상의 전문의의 협의에 의해서 이루어졌으며, 서울대학교 윤리위원회의 승인을 받기 전에 사전 동의를 얻었다.

(2) DNA 시료의 준비 및 증폭

본 실시 예에 선택된 SNP는 공개된 데이터베이스(NCBI dbSNP: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/)로부터 선택하였으며, 선택된 SNP 주변의 서열을 이용한 프라이머를 이용하여 시료 중의 SNP 서열을 분석하였다. 분석된 서열은 표 1과 같다.

서열목록	SNP	염색체 위치	서열목록 제 5 서열의 EGR2 유전자 내 염기순서	염기서열(20bp)
제1서열	rs2297489	64245366	8568	CTCTTCCACC[C/G]CCATCCCTG
제2서열	rs2297488	64245251	8683	AGCTCTCCCC[A/G]AGAGCCCCG
제3서열	rs61865882	64242099	11835	TAACATTGTC[C/T]ACATCACAC
제4서열	rs2295814	64241282	12651	AAAGTTTTCT[A/G]TGGTCATGA

1) DNA 시료의 준비

상기 환자군 및 정상인군의 혈액으로부터 DNA를 추출하였다. 염색체 DNA 추출은 인트론바이오(Intronbio) 제품으로 G-DEX™ IIb Genomic DNA Extraction Kit(Cat. No. 17241)를 사용하였다. 이렇게 하여 추출한 DNA는 분광광도계(Spectrophotometer)를 사용하여 260 ㎚/280 ㎚ 비율이 1.8-1.9정도인 것으로 얻어진다. 사용의 편의를 위해 50 ng/㎕로 희석하여 사용하였다.

2) 표적 DNA의 증폭 및 분석

택맨 어세이(Taqman assay)를 이용하였다. DNA(50 ng/㎕) 1 ㎕, 2 X PCR 택맨 마스터믹스(Taqman mastermix) 2.5 ㎕, 센스 프라이머(20 pmols/㎕) 0.15 ㎕, 안티센스 프라이머(20 pmols/㎕) 0.15 ㎕, 프로브(FAM-TAMRA, 5 pmols/㎕) 0.1 ㎕, 프로브(TET-TAMRA, 5 pmols/㎕) 0.1 ㎕, DW 1 ㎕을 혼합하여 전체 5 ㎕로 반응시킨다. PCR 기기는 ABI 9700을 사용하였으며, 온도조건은 50℃ 2분, 95℃ 10분을 하고, 95℃ 15초, 60℃ 1분, 이 2 단계를 40 사이클 반복한 후 실험을 마쳤다. 분석에 사용된 프라이머 및 프로브의 염기서열은 표 2와 같다. PCR이 완료되면 ABI 7900HT기기를 통해 판독하여 대립유전자변별기법(allelic discrimination)을 수행하였다.

유전자	SNPrs번호	프라이머서열
		전방향	역방향
EGR2	rs2297489	GCCTACGCAAGCCTCGAA (서열목록 제 6 서열)	AGGTCGCCAGCAAACAGG (서열목록 제 7 서열)
	rs2297488	GAGCTACCGACGCTTTCCC (서열목록 제 8 서열)	GGGCAGGGGCAAAGTGA (서열목록 제 9 서열)
	rs61865882	TTTCTCCATAATAAGGCAACCCAT (서열목록 제 10 서열)	TGAAACTAGGATGCATGCAATTG (서열목록 제 11 서열)
	rs2295814	TCTGGGGGCATTTTCGATC (서열목록 제 12 서열)	GGCGTGGTCAAGCTGGAA (서열목록 제 13 서열)
유전자	SNPrs번호	프로브서열
		FAM-TAMRA	TET-TAMRA
EGR2	rs2297489	CGCCTCTTCCACCCCCATCC (서열목록 제 14 서열)	CCTCTTCCACCGCCATCCCTG (서열목록 제 15 서열)
	rs2297488	CTCTCCCCAAGAGCCCCGAACTT (서열목록 제 16 서열)	CTCTCCCCGAGAGCCCCGAA (서열목록 제 17 서열)
	rs61865882	TTGTAACATTGTCCACATCACACAAGGC (서열목록 제 18 서열)	TGTAACATTGTCTACATCACACAAGGCACC (서열목록 제 19 서열)
	rs2295814	TGCTTTTCAAAAAGTTTTCTATGGTCATGAGAC (서열목록 제 20 서열)	TGCTTTTCAAAAAGTTTTCTGTGGTCATGA (서열목록 제 21 서열)

(3) SNP 유전자형의 대립유전자 빈도 분석 결과

도 1은 SNP의 대립 유전자 빈도에 대한 카이제곱 검정 결과를 나타낸다.

dbSNP 칼럼에는 각 SNP의 rs 넘버를 표기하였다. 칼럼 ‘P value’는 각 SNP의 대립유전자 빈도의 2-by-2 분할표에 대한 카이제곱 검정의 결과인 확률수준을 의미한다. 상기 P value가 0.05보다 작은 경우 표본집단은 정신분열병 혹은 양극성 장애 유무에 따른 각 SNP의 대립유전자의 빈도가 통계적으로 95% 이상의 신뢰수준에서 유의성이 있음을 의미한다. rs2297489, rs2297488, rs61865882, rs2295814 네 개 SNP의 경우 정상 대조군과 비교 시 양극성 장애 환자와 유의한 연관성을 보였다. 그러나 정신분열병과는 유의한 연관성을 보이지 않았다.

‘OR(odds ratio)’은 해당 SNP의 특정 대립유전자를 기준으로 정상인구 중에서 해당 SNP의 특정 대립유전자를 가질 확률에 대한 환자군 중에서 해당 SNP의 특정 대립유전자를 가질 확률인 오즈비(odds ratio)를 나타낸다. 상기 오즈비가 1 보다 큰 경우에는 오즈비 그 자체가, 1보다 작은 경우에는 오즈비의 역수로서 해당 SNP과 질병 발병과 연관성의 크기를 의미한다. 상기 오즈비가 클수록 상기 연관성도 증가한다. ‘CI(95%)’는 해당 오즈비가 어떤 구간에 존재할 확률이 95%인 95% 신뢰구간의 하한 및 상한을 의미한다. 상기 오즈비의 95% 신뢰구간이 1을 포함하지 않는 경우 해당 SNP의 질병과의 연관성을 통계적으로 유의하다고 판단할 수 있다. 또한 해당 SNP의 특정 대립유전자를 기준으로 환자군에서의 상기 특정 대립 유전자의 빈도가 정상인군에서의 상기 특정 대립 유전자의 빈도 보다 큰 경우, 즉 오즈비가 1보다 큰 경우에는 상기 특정 대립 유전자는 위험 대립인자로 작용함을 의미한다. 그 반대의 경우에는 상기 특정 대립유전자 이외의 대립 유전자가 위험 대립인자가 된다.

양극성 환자군과 유의한 연관성을 보인 네 개의 EGR2 유전자다형성, 즉rs2297489, rs2297488, rs61865882, 및 rs2295814은 각각 OR = 1.707(CI: 1.233-2.361), 1.527(CI: 1.101-2.118), 1.815(CI: 1.275-2.584), 1.748(CI: 1.209-2.527)로 각 SNP의 소수대립유전자가 양극성 장애의 위험대립인자로 작용함을 의미한다.

(4) 일배체형 (haplotype) 분석

EGR2 유전자다형성의 일배체형 분석에서는 네 개의 연관성을 보인 마커로 구성된 rs2297489-rs2297488-rs61865882-rs2295814에 대해 분석하였다(도 2). 분석 결과, G-A-C-A 염기로 구성된 일배체형의 경우 양극성 장애 환자에서 유의하게 증가되어 있었으며(OR = 1.286, χ ² = 5.969, P = 0.0146), 반대로 이에 대한 상보적 일배체형인 C-G-T-G의 경우는 양극성 장애 환자에서 유의하게 감소되어 있음을 발견하였다 (OR = 0.014, χ ² = 13.670, P = 0.0002).

실시예 2. 본 발명에 따른 마이크로어레이를 이용한 양극성 장애의 진단

(1) 본 발명에 따른 SNP가 고정된 마이크로어레이의 제작

상기 실시 예1에서 선별된 SNP를 기판상에 고정하여 마이크로어레이를 제작하였다. 즉, 서열번호 1, 2, 3, 및 4에 나타낸 각 서열번호로 구성된 폴리뉴클레오티드에서 각 SNP 위치[서열번호 1(rs2297489): +3568, 서열번호 2(rs2297488): +3683, 서열번호 3(rs61865882): +6835, 서열번호 4(rs2295814): +7651] 염기를 포함하는 20개의 연속 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드들(각 SNP는 연속 염기 20개 중 11번째에 위치함: 서열번호 1 - CTCTTCCACC[C/G]CCATCCCTG, 서열번호 2 - AGCTCTCCCC[A/G]AGAGCCCCG, 서열번호 3 - TAACATTGTC[C/T]ACATCACAC, 서열번호 4 - AAAGTTTTCT[A/G]TGGTCATGA)을 기판상에 고정하였다. 각 SNP 위치에 두 개의 대립형질이 존재하므로 각 서열마다 2개씩의 폴리뉴클레오티드가 기판상에 고정화된다. 먼저, 상기 각 폴리뉴클레오티드의 N-말단을 아민기로 치환한 다음 실릴화 슬라이드(Telechem 사)에 스팟팅하였으며, 이 때 상기 스팟팅 버퍼는 2×SSC(pH 7.0)를 사용하였다. 스팟팅 후 건조기에 두어 결합을 유도한 후 0.2% SDS로 2분간, 3차 증류수로 2분간 세척하여 결합되지 않는 올리고를 제거하였다. 상기 슬라이드를 95℃에서 2분간 처리하여 변성을 유도한 후, 블로킹 용액(1.0g NaBH4, PBS(pH 7.4) 300 mL, EtOH 100 mL)으로 15분간, 0.2% SDS 용액으로 1분간, 3차 증류수로 2분간 각각 세척하고 상온에서 건조시켜 마이크로어레이를 제작하였다.

(2) 본 발명에 따른 마이크로어레이를 이용한 양극성 장애의 진단

상기 실시예 1의 (2) 단계에 설명되어 있는 방법을 이용하여 양극성 장애 발병 또는 발병 가능성을 진단하고자 하는 대상의 혈액으로부터 표적 DNA를 분리하고, 형광 표지 시켰다. UniHyb 혼성화 용액(TeleChem 사) 하에서 상기 실시 예 2.(1)에서 제조된 마이크로어레이와 형광 표지된 표적 DNA의 혼성화를 42℃에서 4시간 동안 사행하였다. 2×SSC로 실온에서 5분간 두 번 세척한 후 공기 중에서 건조시켰다. 건조 후 슬라이드를 스캔어레이 5000(ScanArray 5000; GSI Lumonics 사)으로 스캔하고 스캔 결과를 퀀트어레이(QuantArray; GSI Lumonics 사)와 ImaGene 소프트웨어(BioDiscover 사)로 분석하여 상기 대상이 본 발명에 따른 다중 SNP 전부 또는 일부를 갖고 있는지를 확인함으로써, 양극성 장애의 발병 가능성 및 양극성 장애 발병에 대한 감수성을 측정하였다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

<110> SNU R&DB Foundation <120> Novel EGR2 SNPs Related to Bipolar Disorder, Microarrays and Kits Comprising Them for Diagnosing Bipolar Disorder <160> 21 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 ctcttccacc sccatccctg 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 agctctcccc ragagccccg 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 taacattgtc yacatcacac 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 aaagttttct rtggtcatga 20 <210> 5 <211> 14171 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 5 agagatggag aaacaccgta ctccaattct tcgtagtgac ctatgtccct ttcttttcgg 60 atagagggtt ccgacagtga tttccaaact cactacactg acgtcgttcg tgtccaccac 120 ggaagatcgt agttggtgga tggggtttat cgtggtagtc ggtaacagtc tccgtcttga 180 ctttgagaca cggaactcag gaaaggtaag gggtccgatg gacctaacgg gacgtagacc 240 ctgatcatca tccaccctct cctcagtcct tcctctcccc taccgagtga cgaccgacga 300 tggtacagtc atcgtgagtg ataggacttc tgtctctcac cggggagtct ggaattacta 360 aatttggaga cgttttcccc 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ttgtgtttat acttgtttaa taaacactgt 3780 agggagaacc gactaccact aggacagtgg tgtgacattt actcttaaag tttagaccca 3840 attttttttt ttggactttt agtgagtcct ctgagacccc aggtcgatcc tgggagtcca 3900 acggtgggga cgaacagtgg gatttgtgag agggcgttgg ggtcctcgtt cggatgattt 3960 cccaaagaga cgtagcaaca ataaaatgaa agaccgagac cttagacctg tttcgtttaa 4020 ccttagaccg tactcaaacg atgagaaaat tatcgggact atgtagaacc tcacggggta 4080 aatcagcccg taaaaatgtc cagataaaat ttctttcaac aaagaaacaa cctaaaaatt 4140 agttttgttt tttcaagttt acgaattatc atccctggta ccatgtacaa acataagttg 4200 agagtgtaag aggtaggggt gtggggaggt ggaggtcgtg tcatagaacg agtcatttgg 4260 gaaacctcaa aaatgaacag gcgtgaagaa agaaaagagt ggagaagaac agaggtcctt 4320 cctatgacac cccgatcgaa gagaatactg tcgcggataa tcatacgacc gaaacacggt 4380 cggaccgata aggtaggtgt cagatccaga cctctcgggt tcttgagttt aagagggaaa 4440 tgtcacccgt cccccgcaca ggtactgtca gggaaggagg aacggacatc tttcgggact 4500 ggagtcgaaa cgagaggagt ctttaccgtt tctttcctct actttaaccg cctccgccgg 4560 actaagaagg gatcacccga ctcagtccga gggttaggag tttcttcaca agtgaaaagt 4620 ctggacccaa aaggactccc gtgctacatc gctggtgaca cgcgacatga acctaagtct 4680 tctgggtcga cgttcaaacc tgtgctggtg aatggtcgat gcactgaaat ccgttcggtg 4740 aaatcgaaag actcgaatag gtgtcccacc gaccgaactt tcccacgcgg aactaagaca 4800 aggtaataga cgtgatgggt ataaattccc aaccatgaag ttctctgtga gtttttttgt 4860 ttccaatgct ctcaatagat gactgaacaa agtcgcctcc aagttatttc cggagggtcc 4920 tgaccggggt ccgtaaggga ccggaggggc gtcgacggcg ggcaggggcg ggggtgaggt 4980 aagggacgcg tggggtccga ctacgtcgca tcgagaatcc ccctccacac tcaggaacct 5040 ttcgagtgtt cttaaagtct cccagtcagt gagagtaaat gagattacac gaaagttctg 5100 aggaactacc ccgggggagg aggtgggcgg aagatgaccg taggaggagg ccctttccac 5160 cgtcggcttc tggagcgcca aaagggagcg agtccgtggg gcggggcggg ggtcggggcc 5220 aggacgggag gcgcgggacg accggcccgt gagcccgcag gtcctcgagg gggagcccca 5280 ccgcgcgccg ctggcggccg cccaaaccgt cgtcgcggtc agcgccccgc cgggcccgtt 5340 gagcgggcgg acggccaggc gggtgcacgc gtctctcctc gcttcgcgct cgtcagcgga 5400 gcgggcgcga acgacggcca cccacggagt ggattccccg gccgcccccg gcattgggct 5460 cggggtagcg tccctaggcg taaacgtatt aagccgaaag ggggcaagaa agcctgagtc 5520 ccgggctcta cgctcagcct gagggaaggc tccgcagcag aacgggtacc agtcgcgccc 5580 ccggcgccct gggcggtctc gcgtccgcct cacccgaccg cgtgcaccat tcttgcgtcg 5640 atagaaaaga acgaaaagaa aagaaagaaa gaaagaactc tttatcctga aacgtgtaaa 5700 aacgacccca ccccatagat gatcccacga ttggaacgac gctaaagaaa ggtacaggaa 5760 aagtaggggt taaccttttt tcgcgtgtcg cgctcgctct ttgaaagggt ttacacgaga 5820 cccactgaat tcagtctctc taccggccgg cgacctatgg ccgacaaaac ctccctcccc 5880 ctcttcgtcg cgaagtcacc ttctcgtctc cctctctggc gagggccgtc ggagtcccgg 5940 gactggcgcc acgcgacccg ggccgctctc gaccgcgtgc cgacgtcgcc agctccgtcc 6000 actcgccgac ttctgggcgg acgtcgcggc gcgaaggagg tgccgcaccg cggcaccgag 6060 ggcgggcggg gccgggtgtg attcgatccc ggcgaggccc gggccccact ttttccctgt 6120 cctgtccgga cgctccgact gggacgcgca atagggaccg gaggcgccga aacctcgccc 6180 tttcccgaga ccccgtcaag cgttggacgt gtttgctggt acttactcag tacgtccgcc 6240 gccacgcgac ctgaacccgt gggccctggt cggaggacac cccggggcct gtccgggccg 6300 ataggtaacg cccgaccccg cgtgaccctc catcttcgaa acgcgggtcg ttcggtcttg 6360 gacgacgata aacctgaaac cttttcaaaa atttttaacg aaacccttgc tttgtcttcc 6420 caaagatggc cccagagcgt ttcattttgc tcacccaacc ccctacccct accgcagaac 6480 tttcactaat ctctacgaaa gccggcagtg actcctggcg cgacccgagt ggctccacaa 6540 aaaacccctc cctctctttt ataaataaga tcatgcacat aagaccgagc ccacgcccgt 6600 cccgcgccag gacctaggac ccgatacccc cagtccccct aagacaccga cgtccctggc 6660 catcacttcc aatccggtca cagaagtatc ttggaggaca ggtcgctcgg gcctcgggcg 6720 agacggcggc cctgtgacga ccgttgctgc cgcgcgcctg cgtcagttgt ccctccacac 6780 atcacattcc acacactcgc ccacacactt ctcccgtcgc ccccgccctc acacatcgcc 6840 ttcacctcgc tcacactcac acacacatac acacagacct ccccgtccca ctcacaggtt 6900 cgaaggtaga cctgcggggg tgcgtcggct ggcgggtctg cgcggccctt cccgcgggcg 6960 aggcgcgtcg tcgacttccc cccgcccctc gcgcgcccgt ctccttcctc ccacagaggc 7020 cgactcctaa agagagcttc gaggggtgtc attaagacga ggaggatccc aaatgggagg 7080 gtcagggttc cacgggtttt atgaatttgt ttgtttgttg ggtttggaca aggcaaaagc 7140 gaggacatat ttatcttgtc tgaaaggttt tttcgttatg cgtaagtgag aatagtggtc 7200 ggtgaagaaa ggtggttcat taagtctttt ttcgtcagtc gaaggcactt acgtacatcg 7260 aaaaaaaaag aagcgacgga ggaaaacgaa cgccaaaact cgacggttct ttcactcatc 7320 cccaaactga catcacagag ccgaggcgag ccaaagaaag gcttcaaatt aaaaggcctt 7380 accgagggtt tgttcccgat ccctccgcct cggcggccgt ggcctagaag cggaaaaaac 7440 ctttcagggt ctcttggcct taaggagggg cggggccctc cgactcggcg tcggacctcg 7500 tcgagcgaga ggacgacacc gacactgacc caggtaccgc gcgggagagg gggcgctagg 7560 gacgcggggc ctgggtccga cgtcgatccc ggcgcgcggg ccctggggtc gctaggggcg 7620 gcggacgctc gaccttcagc gctcgggccg cctcaggcgc gccggctcgg gcacatacgt 7680 ttagtcggta cactgccgtt ttcggcggac cgggtcggga caaggagtca ggtatatacc 7740 cgtcgctgca gtgcccataa cttctggacg ggtatttatg aatctcgttg tgaaaggcag 7800 attgactcgc tcctcgttaa ctaattatcg agccgctccc ctgagtgact gacaatatta 7860 ttgtgatgtg gtcgttgagg accgaagggt cgtcggcctt gtgtctgtcc tctctcagtc 7920 accgtttatc tgtaaaaaga ataaagaatt ttttgtcgtt gaacaaacga tgaaaataaa 7980 gacaactaaa aaaaaagaac cacacacacc accaacaaaa attcacacct cccgttttcc 8040 tctatggtag ggtccgagtc aggttgggga gaggttttgc cgaaaagact gtgaggtcca 8100 tcgctccctc aacccagagg tccaacacgc tcctcgttta ctactggcgg ttccggcatc 8160 tgttttaggg tcattgagag tcaccaaaac acgtggtcga cagactgttg tagatgggcc 8220 acctcctgga gcggcggtgc agccactggt agaaagggtt acggcttgac cctccgggga 8280 aactggtcta cttgcctcac cggcctccat tcggcgcaca gaagcgtccg ggcctggacg 8340 cgccgggcct ccaccaccta ccccacgtca cccacacgcc cttagcgtcc tctcctaacc 8400 ccgaggtcca cctgccacga ctgacgtgac cgaaacttct gaccttcacc cacgtcctcc 8460 ttggacgctg tcgactctgg tcccgcgcgc ccgtctacgc ggtccagcgg tcgtttggcc 8520 gcacgcacgc ggggccgcgc gggtcggggc ccgctcgcgt ccctaccccc accttctccg 8580 caggggggcc caaagctccg aacgcatccg ggagaccggc cgtcgtgaag ctggagggga 8640 gagggccccg tccccgtttc actgccattt caagccccga gagcccctct cgacgcgcgg 8700 acctctcggc tcgccgcctc ttcgcggtcc cctttcgcag ccatcgaggg aggacccgtc 8760 tcggctgggg cccttttaga gcctcgcgag ggaagaacgc cggacctccg cgcgggggtg 8820 gacgggcggc gggcgcttca actcccccaa tcattccgcc cccgaggccg gccgcctccg 8880 tcgctcaccc accacctcct cccgcgcgtt gccgcccttc gtcgggggcc tgacggctcc 8940 ctccgggcgc ccccgtggcc gctgcggcca aaggaaccgc tacgacacct ttcagcagag 9000 agcgccgggg gcgcggaagg agctccggcc cggtgaccgg aacccgactc cgcccctgcg 9060 cgccgacagc cctttccgcc tcttctaacc ctcccgtgcc tttggatgcc tgaggaagga 9120 gatgtagggg gtaagcgagg tcgtcgggag ccgacttcgc gtcgccctct ccctccctct 9180 ttttccgtgt tccgcggccc ctacccctcg tcggcccttt agtgggtggg ggaagagccc 9240 gagaggagag ccaaaccgtg gtagtgccgt gactgaccct atccagctaa gaacccacca 9300 caaacagaac cacggagtcg gcaccttggg ggtccgtttt ttctccctct tttcgaggcc 9360 cgcctactcc gaaaaatttt ataacaacaa cgataataac ccacaaaaaa taacccctga 9420 tctcggtgtc taccgacccc cacctcccct caaccctttt cgagtaagac gaaaaaacct 9480 ccatcaagaa ctcaaggtat gacagttacc caacggtgtc aacccgaccg gagaagaatg 9540 tcagacaccc ggagttaaag gggtggaaaa cctgaaacgg tgtcgagatg tcacgactct 9600 gagagccgga acctttacct ggatacactc gcccccactc ttccctcagg accgacataa 9660 aagtaacaag gtggaggtaa gacggaaagg ggaggggtct accgtactag ttgtaactgt 9720 actgacctct cttctccagc aacctagagg gtatagggtc gtcgaaacga gggcagagac 9780 gtggatcttt ggtctggaag tgaatgtacc cgttcaagag gtaactggga gtcatgggac 9840 cacggtcgac gatgggtctt ccgtattagt tataacactc acgtccgtag aacgttcccc 9900 agtgaagggg tcgaagttgg tgtcggagta ggtcgcagtg gagacggagg gggttgggtg 9960 accggtgtcc tggggaccca cacacgtggt acagggtctg ggtcggactg gacctggtgg 10020 acatgagagg cggtggcgga ggaggaggaa taagaccgac acgtcctctg gagatggtcc 10080 tgggaagacg caaggacagt cgtcggtggt ggaggtggag aaggagagac cggatgggtg 10140 gtggaggaag gataggtagg gggttcggtc ggtgcctggg tccagagaag ggttactagg 10200 gtctgatagg acctaagaaa ggtagagtca cggtctctct ggatgtacca tgtcgaccgg 10260 gtctggcatt cgggaaaggg acgggtgacc tgtgggacgc ccacggggga ggtgagtgag 10320 gtgagagatg ttaggcattg aaatgggacc ccccggggtc acgaccccac tggcctggtc 10380 cccggtcacc tccgtcgctc cctggggccg acggaccatc gtcgagtcgt cgtcgtcgtc 10440 ggcggcggcg gcggcggata ttgggtgtgg tggacggtga cgccgggtaa gactccggag 10500 cgttcatggg gttgtctggg tcgttctgcg gccacgtgct ctccgggatg ggcacgggtc 10560 gtcttccgac gctggccgcc aagagggcga gactgctcga ctgtgccgtg taggcttagg 10620 tgtgacccgt attcgggaag gtcacagcct agacgtacgc gttgaagtcg gcgtcactgg 10680 tggagtggtg ggtataggcg tgggtgtggc cactcttcgg gaagcggaca ctgatgacac 10740 cggctttcaa acgggcctca ctactctcct tcgcggtgtg gttctaggtg gactctgtct 10800 ttctcgcctt ttcgtcacgg gggagacgta gccacggtcg ggggagatgt cggaggacga 10860 gacccccgca cgtcggaccc ccatgggaca cgtcgtcatt gtcgtcgtca gaaccgcctc 10920 ccggcgagcg gggaacgagg agagcctggg cctgtggaac tctactctga gtccgactat 10980 gtggtcgagg gtttccaggg cctccgggaa acaggtgacc tcgacgtgtt gtttgtgatg 11040 gtgggaaagg acagggagag agggaaacaa cccgtttccc gaaaccacct cgatcgtgac 11100 gggggaaagg tggatcttcg tccaagaagg attttgaatc gggtaagatc agagagaatc 11160 cactcaactg atagttgggt tccgtttccc ctccgagtct tcctccacca cacccctggg 11220 gaccggttct cccgactcca gactgggacg aaatttccca acaaactgat ccaaaacgat 11280 ggggtgaagg ggaataaaac tgggtagtgt ccaaaaactg ggacctacag tctcaactag 11340 attctgcaaa agatgttatc caaccctcta cgactaggga agttcacccc tgtcgttttt 11400 ctgttcgttt tgactacacg tgaaataccg aaccctgact aaaccccctg taacatgtca 11460 ctcacttcat atcggaaata cggtgtgaga caccgggatt ttaccactta gtctcgtata 11520 gatcaacaga gttgggaact tcgttataca taatatttga gtctcttgtc ttcacgttac 11580 actaccctcc ttgtatcgtt atagacgagg aaaagctcaa caaactcttt acatccgata 11640 aaaaagtcac atataggtga gtctaaaaca cataaaaact acatgtgaca agagatttaa 11700 gacttagaaa ccctttttta catttcgtaa atactagagt ctccaattga ataaattccc 11760 cctacatgta tataagagac tttgatccta cgtacgttaa cacaaccttc acaggaacca 11820 cggaacacac tacatctgtt acaatgttcc agacgtacat ttacccaacg gaataatacc 11880 tcttttttta gtgagggact caaatcatac cgacatataa agacggataa ttataaacct 11940 taaaaaaaat ctttcatata aaaacatacg aaacaaaaca ctgaattttc acaatggaaa 12000 catcagttta aagtctattc ttacatgtat tacaatggcc tcgactaaac aaaccagtaa 12060 tcgagaatta tcaacacttt tttatttaga taagattgcg ttttggtgat tgacttcaag 12120 tctattacct accaaacact gatatcacat ttatttatga aaagttgtta taaaaacaac 12180 gtctttagta aagactttat gaatgaccca cccttaattt gtcagtaagt cagagacacc 12240 cttataaaaa atttttgtcg tgattcgtgg tcacttttac gaaactggtt tggtaccaga 12300 ggtctagaag aaacgatcgg acacctgtgg ttggggtttc gtccgaggta agtattagtt 12360 tgtgatcaca agacccctaa agggggtacg taatcacatt ttcacccctc cgcaacaaaa 12420 ctgagtaaca aggcaacaga gattgtcgga tatcgaagag agacgaggac tcacccgagg 12480 ccttttattt atgaatgttt gttcacgggt gagcctctgt tgtgtaaatg tcagcgaaag 12540 tcttgggact ggtcccagat cttgagtctg ctctacaccg aaacaccttt cacaccaccg 12600 caccagttcg acctttactg aaagtcgaag gtcctaatca gagtactggt gtcttttgaa 12660 aaacttttcg tgatagtaga gaagtctagc ttttacgggg gtctgcgacg actactgtcg 12720 tacttaccca acagtttcct taatggggtc ctgagtaaag agaggttgga agtgaagggt 12780 taactaatgg ggataaacta tcttagtaac tagacggttt ccaaaccacc cagatcttca 12840 ctgctagttt catgagtcga gtaatctatt ctatccacgg agttctttta gagtttctat 12900 tggatttgat ttatccggtt atatcaggag gtaccatgac ctatttccaa acgtttctta 12960 tatgacatcc caagtaaagt gacgttcaga aaacatcacc aaaattttat atttaagtgg 13020 tttttaatca attaaatcgg tgtttcattt gtctgctacg gaaacacttc aatagtagaa 13080 atgacatttt agacccggat ttttagtaaa ttcaagtggg tgaagaccta ggaatgtgtt 13140 tacattgtac aacgacgtcg caggtgacaa atcgactgta gacttttagg gaaactgata 13200 aacgggaagt cgtgacaatt ctgagggagt ctgagttgga cataaagtct tattgtctac 13260 taatgtcgat gagacctttg gtggaaaacg ggaatggtcg tgatcttaaa ctctaggtta 13320 aacacctccc ttacttacgg aaagaagaca tagagaagag gtagggataa agttcctaca 13380 gcttagagag ataagataat gatgctttgt tctcaaaagt cttgaacaaa gtataaaaaa 13440 atcactgacc acaaaagggt aatcaaggat aaagggtcga acaaccgcat tatagtagga 13500 acgaacaggt tgaaaccatt catattctgt tacggtgtaa aactattaat gcactaaaat 13560 ttcttatgaa gggaggatgg ttctaaagta atataatttt atatgggttt aaaacattct 13620 atataaacag aacggtttaa gattaaaatc tcctaaaagt tagttctatt agaattgtta 13680 atgaatgctt cgtcatctga ttttcagtag agtttttatt ttatcttcta taaaactact 13740 gtcgttttaa ccaatgtatt agtgaaagtg ggactgcacc cgaaccactc catcgtaatt 13800 gtgtgtatgg tattccttgt ggtgtagagt cgtaaaagag tctcggttga aacaccgaaa 13860 atgatcatct aaagttgtac actccagtca tagaaattag gctaaaacga gagacgaatt 13920 ttacaagtcc cacgaagaac gtgcagagta aaaaatgtaa cgagttcttt atttcgtatc 13980 tttttacaga agaagattag aacatgtatg tgaaaacctc ttcttaagga atttctaagc 14040 atcacgaaaa ctctataaag ttaagtataa tttttaccca actattatgg atgtgttccg 14100 aatgttcaaa agtatttgga ccgataaatt aaagtaatag ggtcgacgat tattctaatt 14160 ccgtttaaca a 14171 <210> 6 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2297489 forward primer <400> 6 gcctacgcaa gcctcgaa 18 <210> 7 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2297489 reverse primer <400> 7 aggtcgccag caaacagg 18 <210> 8 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2297488 forward primer <400> 8 gagctaccga cgctttccc 19 <210> 9 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2297488 reverse primer <400> 9 gggcaggggc aaagtga 17 <210> 10 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs61865882 forward primer <400> 10 tttctccata ataaggcaac ccat 24 <210> 11 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs61865882 reverse primer <400> 11 tgaaactagg atgcatgcaa ttg 23 <210> 12 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2295814 forward primer <400> 12 tctgggggca ttttcgatc 19 <210> 13 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2295814 reverse primer <400> 13 ggcgtggtca agctggaa 18 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2297489 probe FAM-TAMRA <400> 14 cgcctcttcc acccccatcc 20 <210> 15 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2297489 probe TET-TAMRA <400> 15 cctcttccac cgccatccct g 21 <210> 16 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2297488 probe FAM-TAMRA <400> 16 ctctccccaa gagccccgaa ctt 23 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2297488 probe TET-TAMRA <400> 17 ctctccccga gagccccgaa 20 <210> 18 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs61865882 FAM-TAMRA <400> 18 ttgtaacatt gtccacatca cacaaggc 28 <210> 19 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs61865882 TET-TAMRA <400> 19 tgtaacattg tctacatcac acaaggcacc 30 <210> 20 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2295814 probe FAM-TAMRA <400> 20 tgcttttcaa aaagttttct atggtcatga gac 33 <210> 21 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> rs2295814 probe TET-TAMRA <400> 21 tgcttttcaa aaagttttct gtggtcatga 30

Claims (14)

1. EGR2 유전자의 일부를 구성하는 서열목록 제 1 서열, 제 2 서열, 제 3 서열 또는 제 4 서열의 폴리뉴클레오타이드에 있어서, 각 11번째 위치하는 단일뉴클레오타이드 다형성(single nucleotide polymorphism: SNP)을 포함하는 10개 이상의 연속 염기로 구성되는 양극성 장애 진단용 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드.
   
2. EGR2 유전자의 일부를 구성하는 서열목록 제 1 서열, 제 2 서열, 제 3 서열 및 제 4 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 둘 이상의 폴리뉴클레오타이드에 있어서, 각 11번째 위치하는 SNP를 포함하는 10개 이상의 연속 염기 세트로 구성되는 양극성 장애 진단용 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드.
   
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 서열목록 제 1 서열의 SNP는 C 또는 G, 제 2 서열의 SNP는 A 또는 G, 제 3 서열의 SNP는 C 또는 T, 및 제 4 서열의 SNP는 A 또는 G인 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드.
   
4. 제 3 항에 있어서, 상기 서열목록 제 1 서열의 SNP는 G, 제 2 서열의 SNP는 A, 제 3 서열의 SNP는 C, 및 제 4 서열의 SNP는 A인 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드.
   
5. 제 3 항에 있어서, 상기 서열목록 제 1 서열의 SNP는 C, 제 2 서열의 SNP는G, 제 3 서열의 SNP는 T, 및 제 4 서열의 SNP는 G인 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드.
   
6. 제 2 항에 있어서, 상기 선택되는 둘 이상의 폴리뉴클레오타이드는 서열목록 제 1 서열 내지 제 4 서열로 구성되는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드.
   
7. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 10개 이상의 연속 염기는 10 내지 100개의 연속 염기인 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오타이드 또는 그의 상보적 폴리뉴클레오타이드.
   
8. 제 1 항 또는 제 2 항의 폴리뉴클레오타이드, 그에 의해 인코딩되는 폴리펩타이드 또는 그의 cDNA를 포함하는 양극성 장애 진단용 마이크로어레이.
   
9. 제 8 항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 아미노-실란, 폴리-L-라이신 및 알데하이드로 구성된 군으로부터 선택되는 활성기가 코팅된 기판에 고정되는 것을 특징으로 하는 마이크로어레이.
   
10. 제 9 항에 있어서, 상기 기판은 실리콘웨이퍼, 유리, 석영, 금속 및 플라스틱으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 마이크로어레이.
    
11. 제 8 항의 마이크로어레이를 포함하는 양극성 장애 진단용 키트.
    
12. 다음의 단계를 포함하는 양극성 장애의 진단방법:
    (a) 피검체로부터 EGR2 유전자의 일부를 포함하는 핵산 시료를 분리하는 단계; 및
    (b) 상기 핵산 시료로부터 서열목록 제 1 서열, 제 2 서열, 제 3 서열 및 제 4 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드의 각 11번째 염기인 SNP 서열을 결정하는 단계.
    
13. 제 12 항에 있어서, 상기 서열목록 제 1 서열의 SNP는 G, 제 2 서열의 SNP는 A, 제 3 서열의 SNP는 C, 및 제 4 서열의 SNP는 A인 경우가 정상 상태보다 증가된 경우 양극성 장애로 진단하는 단계를 추가적으로 포함하는 진단방법.
    
14. 제 12 항에 있어서, 상기 서열목록 제 1 서열의 SNP는 C, 제 2 서열의 SNP는G, 제 3 서열의 SNP는 T, 및 제 4 서열의 SNP는 G인 경우가 정상 상태보다 감소된 경우 양극성 장애로 진단하는 단계를 추가적으로 포함하는 진단방법.

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